ES2664992T3 - Polinucleótido monocatenario modificado - Google Patents

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ES2664992T3 ES11845160.8T ES11845160T ES2664992T3 ES 2664992 T3 ES2664992 T3 ES 2664992T3 ES 11845160 T ES11845160 T ES 11845160T ES 2664992 T3 ES2664992 T3 ES 2664992T3
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Yasuhide Hirota
Makiko Nakayama
Mika Ikeda
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Abstract

Un polinucleótido o sal del mismo, comprendiendo el polinucleótido un polinucleótido con una hebra de sentido directo correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo y que tiene una estructura representada por la siguiente fórmula, en la que el extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante un enlazador a través de enlaces fosfodiéster: **(Ver fórmula)** en la que p representa un número entero de 0 a 4, q representa un número entero de 4 a 10, L5 representa un enlace simple o -O-, L6 representa -(C>=O)-NH- o -NH-(C>=O)- partiendo del enlace con (CH2)p, L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para, y a condición de que si L5 es -O-, entonces, p representa un número entero de 1 a 4.

Description

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DESCRIPCION
Polinucleótido monocatenario modificado Campo técnico
La presente invención se refiere a un polinucleótido monocatenario que tiene un efecto interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica, al uso del polinucleótido, a un procedimiento para producir el polinucleótido, a una composición farmacéutica que comprende el polinucleótido, etc.
Técnica antecedente
Los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en las células, tejidos o individuos incluyen un enfoque en el que ARN bicatenario se introduce en las células, tejidos o individuos. Mediante esta introducción de ARN bicatenario, el ARNm que tiene homología con la secuencia se degrada, de forma que la expresión del gen diana queda inhibida. Este efecto se denomina "interferencia de ARN" o "ARNi". La interferencia de ARN se notificó inicialmente en C. elegans (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 1) y posteriormente también se ha notificado en plantas (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 2).
Se ha notificado que el ARN bicatenario que consiste en hebras de 21 nucleótidos de sentido directo y de sentido contrario que tienen un saliente de 2 nucleótidos en el extremo 3' (ARN interferente pequeño: ARNip) tiene un efecto de interferencia del ARN en células de vertebrados cultivadas (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 3). El ARNip se considera de utilidad para la identificación de funciones génicas, cribado de cepas celulares adecuadas para la producción de sustancias útiles, regulación de genes implicados en enfermedades, etc., pero, sin embargo, de manera característica, se degrada fácilmente con RNasa (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 4).
Se ha notificado que un polinucleótido bicatenario que tiene unidades de nucleótidos de ADN y 2'-OMeARN combinadas alternativamente, en lugar de los ARN que constituyen el ARNip, es resistente a la ARNasa y tiene un efecto de interferencia del ARN (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 1).
Se han realizado algunos informes sobre la modificación de los extremos 5' de las hebras de sentido directo y sentido contrario en el ARNip. Se ha notificado que el ARNip que tiene un grupo 6-aminohexilfosfato en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario o de sentido contrario tiene un efecto inhibidor frente a la expresión del ARNm diana (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 5). Por otra parte, se ha notificado que el ARNip que tiene un grupo 6-aminohexilfosfato en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario no tiene actividad inhibidora contra la expresión del ARNm diana (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 6). También se ha notificado que el ARNip que tiene un grupo 3-aminohexilfosfato en el extremo 5' de la hebra de sentido directo tiene un efecto inhibidor frente a la expresión del ARNm diana, mientras que el ARNip que tiene un grupo 3-aminohexilfosfato en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario no tiene actividad inhibidora contra la expresión del ARNm diana (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 7). Se ha notificado que la actividad inhibitoria contra la expresión del ARNm diana se observa más baja en el ARNip que tiene el grupo 6-aminohexilfosfato o el grupo 3-aminopropilfosfato en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario que en el ARNip sin modificar, pero no se pierde por completo. (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 8.
Se ha notificado que el ARNip que tiene fluoresceína en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario o de sentido contrario tiene también un efecto inhibidor frente a la expresión del ARNm diana (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9). Se ha notificado que los ARNip que tienen una estructura de esteroide o lípido en el extremo 5' de la hebra de sentido directo o de sentido contrario, el ARNip que tiene estructura de esteroide o lípido en el extremo 5' de la hebra de sentido detectado tiene actividad inhibidora contra la expresión del ARNm diana (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 8). Se ha notificado que, cuando el ARNip tiene un derivado de orto-nitrobencilo, que se puede eliminar por irradiación UV, en el extremo 5' de la hebra de sentido contrario, su actividad inhibidora contra la expresión del ARNm diana se puede controlar usando la irradiación UV (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 10).
El ARNip cuyo extremo 3' de la hebra de sentido directo y el extremo 5' de la hebra de sentido contrario están unidas mediante un bucle que consiste en aproximadamente 4 unidades de nucleótidos forma un polinucleótido monocatenario denominado ARN en horquilla corto (ARNsh). Se ha demostrado que el ARNsh que tiene un resto en el tallo de 19 pb en el resto del tallo tiene menor actividad que un ARNip de 19 pb que tiene la misma secuencia de nucleótidos que el anterior (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9). Aunque el ARNsh que comprende el tallo de 19 pb y el bucle que tiene dos nucleótidos se sustituya por un enlazador no nucleotídico tal como unidades de propil fosfato se sintetizó y examinó para determinar su actividad inhibitoria frente a la expresión del ARNm diana, no se observó mejora en la actividad, en comparación con el ARNsh sin modificar (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9). Un ejemplo que utiliza un derivado de orto-nitrobencilo se ha notificado como ARNip en el que el extremo 3' de la hebra de sentido directo y el extremo 5' de la hebra de sentido contrario están unidas mediante un enlazador no nucleotídico (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 8). Este ARNip de 19 pb cuyas hebras de sentido directo y de sentido contrario están unidas mediante el derivado de orto-nitrobencilo tiene una actividad inhibitoria más baja contra la expresión del ARNm que el ARNip sin modificar. Además, las células cultivadas transfectadas con este ARNip fueron irradiadas con UV durante 10 minutos y se examinaron para detectar la
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actividad inhibidora del ARNip contra la expresión del ARNm diana. Como resultado, la actividad inhibidora del ARNip contra la expresión del ARNm diana fue más baja que la del ARNip sin modificar. Un polinucleótido monocatenario que tenga una estructura en la cual el extremo 5' de la hebra de sentido contrario y el extremo 3' de la hebra de sentido directo estén unidas mediante un enlazador que contiene un grupo fenilo para formar una estructura fosfodiéster en cada uno de estos extremos no se conoce aún. El documento EP2233573 analiza el con del ARN de interferencia en cremallera (ARNzi).
El análisis mediante rayos X de un complejo de una hebra de sentido contrario con la proteína Argonauta (Ago) conocida por participar en la actividad de ARNi ha mostrado que el grupo fosfato del extremo 5' de la hebra de sentido contrario y sus nucleótidos vecinos están fuertemente unidos al dominio PIWI de Ago (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 11). Se ha notificado que tras la introducción de ARNip químicamente sintetizado en células, tanto la hebras de sentido directo como la de sentido contrario quedan fosforiladas en su extremo 5' (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 12). En células humanas, se ha notificado que la ARN quinasa hClp1 es la responsable de la fosforilación en 5' del ARNip (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 13). Cuando el ARNip con el extremo 5' fosforilado y el ARNip que tiene un extremo 5' no fosforilado se introducen por separado en células, y se comparan sus actividades de aRní, no se aprecia ninguna diferencia en la actividad entre las mismas, lo que indica que el ARNip que tiene un extremo 5' no fosforilado se somete fácilmente a fosforilación en las células (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9).
En el caso de usar el ARNsh en el que el extremo 3' de la hebra de sentido directo y el extremo 5' de la hebra de sentido contrario están unidas por un bucle, este ARNsh está escindido intracelularmente mediante la proteína Dicer o una endonucleasa para formar una hebra de sentido contrario que tiene un grupo fosfato en su extremo 5' (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9). No se puede esperar que el ARNsh que comprende un tallo de 19 pb y un bucle que tiene dos nucleótidos sustituidos por unidades de propilfosfato experimente escisión mediante Dicer o endonucleasa intracelulares, porque las unidades de propilfosfato son resistentes a nucleasa (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 9). Como alternativa, se puede esperar que el ARNsh que comprende un tallo de 19 pb y un bucle que tiene un derivado de orto-nitrobencilo forme una hebra de sentido contrario que tenga un grupo fosfato en el extremo 5' mediante irradiación UV. Dicha irradiación UV, sin embargo, es difícil de aplicar a organismos vivos debido a las posibles reacciones adversas y debido a la dificultad de aplicar irradiación UV en el interior de un organismo vivo (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 8). Un polinucleótido monocatenario que comprenda un tallo de 19 pb o menos y un bucle que tenga un enlazador no nucleotídico solo, que se escinde intracelularmente mediante Dicer o endonucleasa sin irradiación UV para formar una hebra de sentido contrario que tenga un grupo fosfato en el extremo 5', no se conoce aún.
Los presentes inventores han llevado a cabo esmerados estudios para obtener un polinucleótido que tenga un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica y, en consecuencia, han completado la presente invención descubriendo un polinucleótido monocatenario que tiene un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica, que se deriva de un polinucleótido bicatenario que comprende una hebra de sentido directo correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de nucleótidos complementaria del polinucleótido con hebra de sentido directo, y tiene una estructura en la que el extremo 5' de la hebra de sentido contrario y el extremo 3' de la hebra de sentido directo están unidas mediante un enlazador que contiene un grupo fenilo para formar una estructura fosfodiéster en cada uno de estos extremos.
Referencia
Referencias de patente
Referencia de patente 1: Publicación Internacional n.° WO 2010/001909 Referencias no de patente
Referencia no de patente 1: Nature, 1998, Vol. 391, págs. 806-811 Referencia no de patente 2: Science, 1999, Vol. 286, págs. 950-952 Referencia no de patente 3: Nature, 2001, Vol. 411, págs. 494-498 Referencia no de patente 4: Clinical Chemistry, 2002, Vol. 48, págs. 1647-1653 Referencia no de patente 5: Molecular Cell, 2002, Vol. 10, págs. 537-548 Referencia no de patente 6: Nucleic Acids Research, 2003, Vol. 31, págs. 2705-2716 Referencia no de patente 7: Molecular Cell, 2002, Vol. 10, págs. 549-561 Referencia no de patente 8: Oligonucleotides, 2007, Vol. 17, págs. 35-43
Referencia no de patente 9: Antisense Nucleic Acid Drug Development, 2003, Vol. 13, págs. 83-105 Referencia no de patente 10: Biochimica Biophysica Acta, 2006, Vol. 1758, págs. 394-403 Referencia no de patente 11: Nature, 2005, Vol. 434, págs. 663-666 Referencia no de patente 12: Cell, 2001, Vol. 107, págs. 309-321 Referencia no de patente 13: Nature, 2007, Vol. 447, págs. 222-226
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Sumario de la invención
Problemas que va a resolver la invención
Un objeto de la presente invención es proporcionar un polinucleótido que tiene un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un polinucleótido que sea resistente a ARNasa y que tenga un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un procedimiento para inhibir la expresión génica usando el polinucleótido.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprende el polinucleótido.
Medios para resolver los problemas Específicamente, la presente invención consiste en:
(1) Un polinucleótido o una sal del mismo, comprendiendo el polinucleótido un polinucleótido con una hebra de sentido directo que correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo y que tiene una estructura representada por la siguiente fórmula, en la que el extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante un enlazador a través de enlaces fosfodiéster:
[Fórmula 2]
imagen1
p representa un número entero de 0 a 4, q representa un número entero de 4 a 10,
L2 3 4 5 representa un enlace simple o -O-,
L6 representa -(C=O)-NH- o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con (CH2)p,
L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para, y a condición de que L5 sea -O-, entonces, p representa un número entero de 1 a 4.
(2) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1), en el que la suma de p y q es un número entero de 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero de 8 o mayor.
(3) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1), en el que p es 0 o 2, q es un número entero de 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que q es 6 u 8 más preferentemente en el que q es 8.
(4) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1), en el que p es 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para.
(5) Un polinucleótido o una sal del mismo, comprendiendo el polinucleótido un polinucleótido con una hebra de sentido directo que correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo, en
el que el extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra
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en sentido directo están unidos mediante un enlazador para formar una estructura fosfodiéster en cualquiera de dichos extremos, teniendo el enlazador una estructura representada por la siguiente fórmula:
[Fórmula 1]
imagen2
en la que
el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5' de la hebra de sentido contrario para formar una estructura fosfodiéster;
uno cualquiera de R1, R2, y R3 representa una estructura representada mediante la siguiente fórmula:
L1- (CH2)m-L2-L3- (CH2CH20)n1- (CH2)n2-0^
en la que
m representa un número entero de 0 a 4, n1 representa un número entero de 0 a 4, n2 representa 0 o un número entero de 2 a 10,
L1 representa un enlace simple o -O-,
L2 representa un enlace simple o -CH(-NH-L4-R)-,
L3 representa un enlace simple, -(C=O)-NH-, o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con L2, a condición de que L3 no sea un enlace simple, entonces n2 representa un número entero de 2 a 10, a condición de que se cada L1 y L2 sean un enlace simple, m es 1, y cada uno de n1 y n2 es 0, entonces L3- O^ representa -CH(COOH)NH-(resto de aminoácido)j-Ser,
-CH(COOH)NH-(resto de aminoácido)j-Thr,
-CH(NH2)CO-(resto de aminoácido)j-Ser, o -CH(NH2)CO-(resto de aminoácido)j-Thr, en la que
el resto del grupo hidroxi de esta serina o treonina está unido al grupo fosfato del extremo 3' del
polinucleótido con hebra en sentido directo, y el grupo amino de la serina o treonina puede estar
adicionalmente sustituido por un grupo acilo, j representa un número entero de 0 a 2,
L4 representa un enlace simple, un grupo metileno, un grupo polimetileno que tiene de 2 a 4 átomos de carbono, o la estructura -(C=O)-CH2-CH2-(C=O)-O- en la que un grupo carbonilo de la estructura -(C=O)-CH2- CH2-(C=O)-O- está unido al grupo amino del extremo izquierdo de la fórmula estructural para formar la estructura -NH-(C=O) -CH2-CH2-(C=O) -O- y
R representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo de
hidrocarburo saturado o insaturado-carbonilo que tiene de 2 a 30 átomos de carbono, o un grupo
hidrocarbonoxicarbonilo saturado o insaturado que tiene de 2 a 30 átomos de carbono; y los dos restantes de R1, R2, y R3 representan, cada uno de ellos independientemente, un grupo seleccionado entre el grupo que consiste en un átomo de hidrógeno,
un grupo alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener un sustituyente, un grupo alcoxi que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener un sustituyente, un átomo de halógeno,
un grupo alquilcarbonilamino que tiene un grupo alquilo que tiene de 1 a 9 átomos de carbono, y
un grupo alquilcarbonilo que contiene un grupo alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener
un sustituyente; 6 7 8 9 10
(6) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (5), en el que cada R1 y R3 es un átomo de hidrógeno;
(7) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (6), en el que cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es - (C=O)-NH-, y la suma de m y n2 es un número entero de 3 o mayor, preferentemente 8 o mayor;
(8) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (6), en el que cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es - (C=O)-NH-, m es 0 o 2, y n2 es un número entero de 6 o mayor, preferentemente 6 u 8, más preferentemente 8;
(9) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (5), en el que cada R1 y R3 es un átomo de hidrógeno, cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es -(C=O)-NH-, m es 2, y n2 es 8;
(10) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1) to (9), en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (II), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (III), y el
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polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (d):
5 (y-p) ?-y-'k--3 ' (II)
y
5’-p-(y-p) 9-^-3’ (ni),
(a) y representa un ARN, p representa un 2'-OMeARN, y cada A y u representa un ADN;
(b) t y u representan, de forma idéntica o diferente, cualquier número entero de 0 a 5;
(c) (Y-P)9-Y en el polinucleótido representado mediante la fórmula (II) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
(d) (Y-P)9-Y en la fórmula (II) y p-(Y-p)9 en la fórmula (III) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre sí;
(11) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1) to (9), en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (IV), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (V), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (d):
5 1 - (a-p) 3-ai:,-V-3 ’ (IV)
y
5’ -6,- (a-p) í-Uu-3’ (V) ,
(a) a y p representan, de forma diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, 8 y A representan, de forma idéntica o diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, y u representa, de manera idéntica o diferente, cualquier nucleótido seleccionado entre un ADN, un ARN, y un 2'-OMeARN;
(b) p representa un número entero de 0 o 1, t es 0 cuando p es 0 y representa cualquier número entero de 0 a 5 cuando p es 1, s representa cualquier número entero de 0 o 1, y u representa cualquier número entero de 0 a 5;
(c) (a-p)9-ap en el polinucleótido representado mediante la fórmula (IV) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
(d) (a-p)9 en la fórmula (IV) y (a-p)9 en la fórmula (V) tienen secuencia de nucleótidos complementarias entre sí;
(12) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (1) to (9), en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (VI), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (VII), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (d):
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y
5 ’ -So-(a-p)8-(a-p)-ou-3' (Vil),
(a) a y p representan, de forma diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, 8 y A representan, de forma idéntica o diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, y u representa, de manera idéntica o diferente, cualquier nucleótido seleccionado entre un ADN, un ARN, y un 2'-OMeARN;
(b) p representa un número entero de 0 o 1, t es 0 cuando p es 0 y representa cualquier número entero de 0 a 5 cuando p es 1, s representa cualquier número entero de 0 o 1, y u representa cualquier número entero de 0 a 5;
(c) p-(a-p)8-ap en el polinucleótido representado mediante la fórmula (VI) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
(d) (a-p)8 en la fórmula (VI) y (a-p)8 en la fórmula (VII) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre sí;
(13) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (11) o (12), en el que a es un ADN, y p es un 2'- OMeARN;
(14) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de (10) a (13), en el que At y Uu son, de manera idéntica o diferente, cualquiera de: ADN que tienen una base timina, una base adenina, o una base guanina; o 2'-OMeARN que tienen una base uracilo, una base adenina, o una base guanina;
(15) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (10) a (14), en el que t es 0, y u es
2;
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(16) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (11) a (14), en el que p y t son 0, s es 1, y u es 2;
(17) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (11) a (14), en el que p y t son 0, s es 0 o 1, u es 2, y U2 es un ADN o un 2'-OMeARN;
(18) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (9), en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (VIII), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (IX), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (c):
5’-(a-p)g-3' (VIII)
y
5r-p-(a-p)9-(a-p)-3’ (IX),
(a) a es un ADN, y p es un 2'-OMeARN;
(b) p-(a-p)g en el polinucleótido representado mediante la fórmula (IX) tiene una secuencia de nucleótidos complementaria a la del gen diana; y
(c) (a-p)g en la fórmula (VIII) y (a-p)g en la fórmula (IX) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre sí;
(19) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (10) a (18), en el que cualquiera o todos los restos 2'-OMeARN 1 a 4 están sustituidos por un ENA o una 2',4'-BNA/LNA;
(20) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (10) a (19), en el que cualquiera o todos los restos de ADN 1 a 4 están sustituidos por un ARN, un ENA o una 2',4'-BNA/LnA;
(21) El polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (20), en el que los nucleótidos están unidos entre sí mediante un enlace fosfodiéster o un enlace fosforotioato;
(22) Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (1) to (21) como principio activo.
(23) La composición farmacéutica de acuerdo con (22), en la que la composición farmacéutica es para el tratamiento de una enfermedad derivada de la expresión génica;
(24) un polinucleótido o sal del mismo seleccionado de (1) a (21) para su uso en la inhibición de la expresión de un gen diana en un mamífero;
(25) Un compuesto representado por la fórmula (X) o una sal del mismo:
[Fórmula 3]
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en la que Tr representa un grupo protector del grupo hidroxi; p representa un número entero de 0 a 4; x representa un número entero de 4 a 10; L5 representa un enlace simple o -O-; L6 representa -(C=O)-NH- o -NH- (C=O)- partiendo del enlace con (CH2V; y L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para; y se caracteriza en que el compuesto no es
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donde n es 4, 6 u 8;
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donde n es 3, 5 o 7;
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donde n es 3, 5 o 7; o
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donde n es 3, 5 o 7.
(26) El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con (25), en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo, un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, un grupo pixilo, un grupo tritilo, un grupo levulinilo, o un grupo bis(trimetilsililoxi)(ciclohexiloxi)sililo;
(27) El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con (25), en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, la suma de p y q es un número entero de 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH- , y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero de 8 o mayor;
(28) El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con (25), en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es un número entero de 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y
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L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que q es 6 u 8;
(29) El compuesto o una sal del mismo de acuerdo con (25), en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo;
(30) Un procedimiento para producir un compuesto representado mediante la fórmula (XI), siendo el compuesto un polinucleótido que comprende un polinucleótido con una hebra de sentido directo que correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo, en la que el extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante X por enlaces fosfodiéster:
[Fórmula 4]

O O

,11 II 1

HO-W2’-0-P—O—X—P-O—W^-V-OH (XI)

OH OH
en la que W2' representa un polinucleótido con hebra en sentido directo sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3'; W1'-Y' representa un polinucleótido con hebra en sentido contrario sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3'; y X representa la fórmula (XII):
[Fórmula 5]
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en la que p representa un número entero de 0 a 4; x representa un número entero de 4 a 10; L5 representa un enlace simple o -O-; L6 representa -(C=O)-NH- o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con (CH2)p; L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para; a condición de que L5 sea -O-, entonces, p representa un número entero de 1 a 4; y el grupo metileno del extremo está unido al extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo para formar un enlace fosfodiéster; y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario para formar un enlace fosfodiéster, comprendiendo el procedimiento las etapas de:
(i) hacer reaccionar el grupo hidroxi de un compuesto representado por la fórmula Tr-O-X-H [en la que Tr representa un grupo protector del grupo hidroxi, -(CH2)q- en X está unido a Tr-O- y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al hidrógeno] con un compuesto representada por la fórmula (XIII):
[Fórmula 6]
o la fórmula (XIV):
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[Fórmula 7]
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[en la que R4 representa un grupo a 2-cianoetilo, un grupo metilo, un grupo metanosulfoniletilo, un grupo 2,2,2-tricloroetilo, o un grupo 4-clorofenilmetilo, y R5 representa un grupo morfolino, un grupo diisopropilamino, un grupo dietilamino, o un grupo dimetilamino] para producir un compuesto representado por la fórmula (XV):
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[Fórmula 8]
R5
/
Tr-O-X-P.
O—R4
(XV)
(ii) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (i) con un compuesto representado por la fórmula HO- W1-Y-CPG [en la que W1-Y representa un polinucleótido con hebra en sentido contrario protegido sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3', y CPG representa un soporte polimérico que tiene un enlazador capaz de unirse al polinucleótido] según un procedimiento de fosforamidita y posteriormente producir un resto representado por la fórmula Tr1-O-W2-O-P(=O) (OR4)-O-[en la que Tr1 representa un grupo protector del grupo hidroxi, y W2 representa un polinucleótido con hebra en sentido directo protegido sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3'] según un procedimiento de fosforamidita para producir un compuesto representado por la fórmula (XVI):
[Fórmula 9]
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; y
(iii) escindir el compuesto obtenido en la etapa (ii) del CPG y eliminar el grupo protector;
(31) El procedimiento de acuerdo con (30), en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo, un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, un grupo pixilo, un grupo tritilo, un grupo levulinilo, o un grupo bis(trimetilsililoxi)(ciclohexiloxi)sililo;
(32) El procedimiento de acuerdo con (30), en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, la suma de p y q es un número entero de 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero de 8 o mayor;
(33) El procedimiento de acuerdo con (30), en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es un número entero de 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para preferentemente en la que q es 6 u 8, más preferentemente en la que q es 8;
(34) El procedimiento de acuerdo con (30), en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en la que cada Tr y Tr1 es un grupo 4,4'- dimetoxitritilo;
(35) El procedimiento de acuerdo con uno cualquiera de (30) a (34), en el que R4 es un grupo 2-cianoetilo, un grupo metilo, un grupo metanosulfoniletilo, un grupo 2,2,2-tricloroetilo, o un grupo 4-clorofenilmetilo, y R5 es un grupo morfolino, un grupo diisopropilamino, un grupo dietilamino, o un grupo dimetilamino, preferentemente en el que R4 es un grupo 2-cianoetilo o un grupo metilo, y R5 es un grupo morfolino o un grupo diisopropilamino;
(36) El procedimiento de acuerdo con uno cualquiera de (30) a (34), en el que el compuesto representada por la
fórmula (XIII) es cloro(morfolino)metoxifosdina, cloro(morfolino)cianoetoxifosdina,
cloro(diisopropilamino)metoxifosdina, o cloro(diisopropilamino)cianoetoxifosdina;
(37) El procedimiento de acuerdo con uno cualquiera de (30) a (34), en el que el compuesto representado por la fórmula (XIV) es bis(diisopropilamino)cianoetoxifosdina;
(38) Un polinucleótido seleccionado entre los siguientes, o una sal del mismo: HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-
Um1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Am1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p- Gp-Um1p-Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Tp-Um1t-H (HS-005), HO-Cp-Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp- Gm1p-Cp-UrT|1p-Ap-Um1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p-Ap-Um1p-Ap-Gm1p-Cp-Am1p-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-gm1p-Tp-Cm1p-
Tp-Gm1p-Tp-Um1t-H (HS-006), HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Am1p-X- P(=O) (OH)-O-Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Ts-Um1t-H (HS- 005s), o, HO-Cp-Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp-Gm1p-Cp-Um1p-Ap-Um1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p- Ap-Um1p-Ap-Gm1p-Cp-Am1p-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Tp-Cm1p-Tp-Gm1p-Ts-Um1(-H (HS-006s)
en los que cada uno de Ap, Gp, Cp, Tp, Ts, Am1p, Gm1p, Cm1p, Um1p, y Um1t representa un nucleósido o un nucleótido que tiene una estructura representada por la siguiente fórmula:
[Fórmula 10]
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la secuencia en dirección cadena arriba de X representa un polinucleótido con hebra en sentido directo correspondiente a un gen diana; la secuencia en dirección cadena abajo de X representa un polinucleótido que tiene un polinucleótido con hebra en sentido contrario que tiene una secuencia de nucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra en sentido directo; X representa un enlazador que tiene una estructura representada por la fórmula (XVII):
[Fórmula 11]
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el grupo metileno del extremo está unido al extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo para formar un enlace fosfodiéster; y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario para formar un enlace fosfodiéster;
(39) Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (38) como principio activo;
(40) La composición farmacéutica de acuerdo con (39), en la que la composición farmacéutica está dirigida all tratamiento de una enfermedad derivada de la expresión del gen Hsp47, preferentemente fibrosis;
(41) Un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con (38) para su uso en la inhibición de la expresión del gen Hsp47, en un mamífero;
(42) Un reactivo que comprende un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (21) o (38).
Ventajas de la invención
La presente invención ha proporcionado un polinucleótido que tiene un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica. La presente invención también ha proporcionado un polinucleótido que es resistente a al menos una enzima seleccionada entre ARNasa, fosfatasa, y exonucleasa, y tiene un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica. La presente invención ha proporcionado además un polinucleótido que es resistente a ARNasa, fosfatasa, y exonucleasa, y tiene un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica. La presente invención ha proporcionado además un polinucleótido que tiene un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica sin la necesidad de la etapa de producir por separado un polinucleótido con hebra en sentido directo y un polinucleótido con hebra en sentido contrario y sin la necesidad del complicado procedimiento de mezclar con precisión estas hebras en las mismas cantidades para formar un duplete. La presente invención permite el análisis funcional de varios genes usando el
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polinucleótido, y proporciona una composición farmacéutica que comprende el polinucleótido.
La presente invención también ha proporcionado un compuesto intermedio sintético de utilidad para obtener el polinucleótido. La presente invención ha proporcionado además un procedimiento para producir el polinucleótido.
Breve descripción de los dibujos
[Figura 1] La Figura 1 es un diagrama que muestra el detalle de la etapa A-1.
[Figure 2] La Figura 2 es un diagrama que muestra los detalles de los Procedimientos C y D.
[Figure 3] La Figura 3 es un diagrama que muestra los detalles de los Procedimientos E y F.
[Figura 4] La Figura 4 es un diagrama que muestra el detalle del Procedimiento G.
[Figura 5] La Figura 5 es un diagrama que muestra las estructuras de los compuestos descritos en los Ejemplos de referencia 3 a 14, 17, y de 21 a 23.
[Figura 6] La Figura 6 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen de la p-catenina humana (a partir de ahora en el presente documento, los ejemplos de combinaciones de polinucleótidos como hebras de sentido directo y de sentido contrario se mostrará en cada diagrama; para los símbolos, el círculo relleno (•) representa un aDn, y el círculo sin rellenar (O) representa un 2'-O-metil ARN. La línea entre el círculo relleno y el círculo sin rellenar representa un enlace fosfodiéster entre los nucleósidos. En el diagrama, p representa -P(=O) (OH)-. Cuando p está unido, un átomo de hidrógeno del grupo hidroxi final del polinucleótido se elimina. Cuando el extremo del polinucleótido no está unido, el extremo 3' o 5' del ADN o del 2'-O-metil ARN es un grupo OH. n representa el número de átomos de carbono. Lo mismo se aplica para las Figuras 7 y 11. La secuencia de nucleótidos de cada polinucleótido también se muestra en el diagrama.
[Figura 7] La Figura 7 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen de la p-catenina humana.
[Figure 8] La Figura 8 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
[Figure 9] La Figura 9 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
[Figura 10] La Figura 10 es un diagrama que muestra las estructuras de los compuestos descritos en los Ejemplos de referencia 24 a 31.
[Figura 11] La Figura 11 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen de la p-catenina humana.
[Figure 12] La Figura 12 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
[Figura 13] La Figura 13 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen de la p-catenina humana. Para los símbolos, el cuadrado sin rellenar (□) representa un ARN, el círculo relleno (•) representa un ADN, y el círculo sin rellenar (o) representa un 2'-O-metil ARN. La línea entre los nucleósidos representa un enlace fosfodiéster. En el diagrama, p representa -P(=O) (OH)-. Cuando p está unido, un átomo de hidrógeno del grupo hidroxi final del polinucleótido se elimina. Cuando el extremo del polinucleótido no está unido, el extremo 3' o 5' del ARN, el ADN, o el 2'-O-metil ARN es un grupo OH. n representa el número de átomos de carbono. Lo mismo se aplica para las Figuras 15, 16, y 19. La secuencia de nucleótidos de cada polinucleótido también se muestra en el diagrama.
[Figure 14] La Figura 14 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
[Figura 15] La Figura 15 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen PKR de ratón. [Figura 16] La Figura 16 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen Hsp47 humano. En el diagrama, s representa un enlace fosforotioato.
[Figure 17] La Figura 17 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real. La barra sin rellenar representa una concentración de polinucleótido de 0,1 nM. La barra rellena representa una concentración de polinucleótido de 1 nM. Lo mismo se aplica para las Figuras 18 y 20.
[Figure 18] La Figura 18 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
[Figura 19] La Figura 19 es un diagrama que muestra polinucleótidos correspondientes al gen Hsp47 humano. [Figure 20] La Figura 20 es un diagrama que muestra las actividades de inhibición génica de los polinucleótidos analizados mediante PCR en tiempo real.
Descripción de las realizaciones
1. Descripción de términos
En la presente memoria descriptiva, el "gen diana" no está especialmente limitado a condición de que sea ARN de células, tejidos, o individuos, en el que o en los que esté gen se introduce (a partir de ahora en el presente documento, se pueden denominar como "receptores"). El gen diana puede ser ARNm que se traduce a una proteína o puede ser aRn no codificante que no se traduce a una proteína. Los ejemplos de ARN no codificante incluyen aRn funcional, por ejemplo, una región no traducida de ARNm, ARNt, ARNr, ARN no codificante análogo a ARN (ARNnc análogo a ARNm), ARN no codificante largo (ARNnc largo), ARN nuclear pequeño (ARNnp), ARN nucleolar
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pequeño (ARNsno), y microARN (miARN). Específicamente, el gen diana puede ser endógeno para los receptores de la introducción, o puede ser exógeno e introducirse en el mismo mediante un enfoque tal como una transferencia génica. Puede también ser un gen presente en un cromosoma o en un gen extracromosómico. Los ejemplos del gen exógeno incluyen, aunque no de forma limitativa, los derivados de virus, bacterias, hongos, y protozoos, que puede infectar los receptores. La función del gen puede ser conocida o desconocida.
Los ejemplos de dicho gen diana puede incluir genes cuya expresión está específicamente aumentada y/o que estén específicamente mutados en pacientes que tengan una enfermedad en particular. Los ejemplos de enfermedades pueden incluir una enfermedad del sistema nervioso central (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia, y trastornos de la alimentación), enfermedad inflamatoria (por ejemplo, alergia, reumatismo, artrosis y lupus eritematoso), enfermedad cardiovascular (por ejemplo, hipertensión, cardiomegalia, angina de pecho, arteriosclerosis, e hipercolesterolemia), cáncer (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de ovario, cáncer prostático, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello de útero, cáncer colorrectal, cáncer de colon, y cáncer rectal), enfermedad respiratoria (por ejemplo, neumonía, bronquitis, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica), diabetes mellitus, retinopatía diabética, nefropatía diabética, anemia (por ejemplo, anemia asociada con enfermedad crónica y anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro), degeneración macular relacionada con la edad, enfermedad inmunitaria (por ejemplo, enfermedad de Crohn, dermatitis atópica, enfermedad autoinmunitaria, inmunodeficiencia, y leucemia), enfermedad del hígado/vesícula biliar (por ejemplo, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis hepática, hepatitis, insuficiencia hepática, colestasis, y cálculos), enfermedad gastrointestinal (por ejemplo, una úlcera, enteritis, e hipoabsorción), infección, adipositis, y fibrosis (fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, fibrosis renal, mielofibrosis, etc.). Los ejemplos de los genes causantes de estas enfermedades pueden incluir, aunque no de forma limitativa, proteína quinesina del huso (KSP), factor de crecimiento endotelial vascular, (VEGF), transtirretina (TTR), proproteína subtilisina convertasa/kexina tipo 9 (PCSK9), quinasa tipo polo (PLK), ApoB-100, subunidad M2 de la ribonucleótido reductasa (RRM2), clusterina, proteína de choque térmico 27 (Hsp27), survivina, factor de iniciación eucariota-4E (eIF-4E), molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1), la subunidad alfa del receptor de interleucina 4 (IL-4R-alfa), Factor XI, Factor VII, N-ras, H-ras, K-ras, bcl-2, bcl-xL, Her-1, Her-2, Her-3, Her-4, MDR-1, gen de la p-catenina humana, polipéptido 3 de secuencia DDX3 (DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp), unido a X), secuencia 1 del gen de la leucemia de células mieloides (MCL1), PKR (Eif2ak2), Hsp47 (Serpinhl), Hepcidina, proteína c activa (APC), transductor de la señal y activador de la transcripción (STAT3).
En la presente memoria descriptiva, el "nucleósido natural" se refiere a un 2'-desoxinucleósido tal como 2'- desoxiadenosina, 2'-desoxiguanosina, 2'-desoxicitidina, 2'-desoxi-5-metilcitidina, y timidina o un ribonucleósido tal como adenosina, guanosina, citidina, 5-metilcitidina, y uridina. Además, el "oligonucleótido" se refiere a un oligonucleótido constituido por un compuesto en el que el resto azúcar del nucleósido forma un éster con ácido fosfórico. En la presente memoria descriptiva, los términos "oligonucleótido" y "polinucleótido" se utilizan indistintamente.
En la presente memoria descriptiva, 2'-desoxiadenosina se puede denominar como A1; 2'-desoxiguanosina se puede denominar como G‘; 2'-desoxicitidina se puede denominar como C‘; 2'-desoxi-5-metilcitidina se puede denominar como 5meC‘; timidina se puede denominar como T‘; 2'-desoxiuridina se puede denominar como U‘; adenosina se puede denominar como Art; guanosina se puede denominar como Grt; citidina se puede denominar como Crt; 5- metilcitidina se puede denominar como 5meCrt; y uridina se puede denominar como Urt Además, en la presente memoria descriptiva, el nucleótido de 2'-desoxiadenosina se puede denominar como Ap; el nucleótido de 2'- desoxiguanosina se puede denominar como Gp; el nucleótido de 2'-desoxicitidina se puede denominar como Cp; el nucleótido de 2'-desoxi-5-metilcitidina se puede denominar como 5meCp; un nucleótido de timidina se puede denominar como Tp; un nucleótido de 2'-desoxiuridina se puede denominar como Up; nucleótido de adenosina se puede denominar como Arp; nucleótido de guanosina se puede denominar como Grp; nucleótido de citidina se puede denominar como Crp; nucleótido de 5-metilcitidina se puede denominar como 5meCrp; y un nucleótido de uracilo se puede denominar como Urp.
En la presente memoria descriptiva, donde existe una forma de éster de fosforotioato en lugar de una forma de fosfoéster de un nucleótido, una contraparte de Ap se puede denominar como As; una contraparte de Gp se puede denominar como Gs; una contraparte de Cp se puede denominar como Cs; una contraparte de 5meCp se puede denominar como 5meCs; una contraparte de Tp se puede denominar como Ts; una contraparte de Up se puede denominar como Us; una contraparte de Arp se puede denominar como Ars; una contraparte de Grp se puede denominar como Grs; una contraparte de Crp se puede denominar como Crs; una contraparte de 5meCrp se puede denominar como 5meCrs; y una contraparte de Urp se puede denominar como Urs.
En la presente memoria descriptiva, la expresión "nucleósido modificado con azúcar" se refiere a un nucleósido cuyo resto azúcar se ha modificado.
En particular, los ejemplos de modificación 2'-O-metilo incluyen 2'-O-metilnucleósido y 2'-O-metilnucleótido; una contraparte de Art se puede denominar como Am1t; una contraparte de Grt se puede denominar como Gm1t; una contraparte de Crt se puede denominar como Cm1t; una contraparte de 5meCrt se puede denominar como 5meCm1t; una contraparte de Urt se puede denominar como Um1t; una contraparte de Arp se puede denominar como Am1p; una contraparte de Grp se puede denominar como Gm1p; una contraparte de Crp se puede denominar como Cm1p; una
contraparte de 5meCrp se puede denominar como 5meCm1p; una contraparte de Urp se puede denominar como Um1p; una contraparte de Ars se puede denominar como Am1s; una contraparte de Gre se puede denominar como Gm1s; una contraparte de Crs se puede denominar como Cm1s; una contraparte de 5meCs se puede denominar como 5meCm1s; y una contraparte de Urs se puede denominar como Um1s.
5 En la presente memoria descriptiva, la unidad nucleótido de 2'-O,4'-C-etileno y la "unidad ENA" se refieren a aquellos nucleósidos que tienen una ENA, y también se refieren a los nucleósidos y nucleótidos que tienen una unidad ENA: una contraparte de A1 se puede denominar como A2t; una contraparte de Ap se puede denominar como Ae2p; una contraparte de As se puede denominar como Ae2s; una contraparte de Gt se puede denominar como G2t; una contraparte de Gp se puede denominar como Ge2p; una contraparte de Gs se puede denominar como Ge2s; una 10 contraparte de 5meCt se puede denominar como C2t; una contraparte de 5meCp se puede denominar como Ce2p; una
contraparte de 5meCs se puede denominar como Ce2s; una contraparte de Tt se puede denominar como T2t; una contraparte de Tp se puede denominar como Te2p; y una contraparte de Ts se puede denominar como Te2s.
En la presente memoria descriptiva, la unidad de nucleótido de 2'-O,4'-C-metileno y la "unidad 2',4'-BNA/LNA" se refieren a aquellos nucleósidos y nucleótidos que tienen un 2',4'-BNA/LNA y también se refieren a nucleósidos y 15 nucleótidos que tienen una unidad 2',4'-BNA/LNA: una contraparte de At se puede denominar como A1t; una contraparte de Ap se puede denominar como Ae1p; una contraparte de As se puede denominar como Ae1s; una contraparte de Gt se puede denominar como G1; una contraparte de Gp se puede denominar como Ge1p; una contraparte de Gs se puede denominar como Ge1s; una contraparte de 5meCt se puede denominar como C1t; una contraparte de 5meCp se puede denominar como Ce1p; una contraparte de 5meCs se puede denominar como Ce1s; 20 una contraparte de Tt se puede denominar como T1t; una contraparte de Tp se puede denominar como Te1p; y una contraparte de Ts se puede denominar como Te1s.
A partir de ahora en el presente documento, se muestra la fórmula estructural de cada nucleótido.
[Fórmula 12]

Claims (41)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un polinucleótido o sal del mismo, comprendiendo el polinucleótido un polinucleótido con una hebra de sentido directo correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo y que tiene una estructura representada por la siguiente fórmula, en la que el extremo 5’ del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3’ del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante un enlazador a través de enlaces fosfodiéster:
    [Fórmula 2]
    imagen1
    Po inuc eotido con hebra en sentido directo
    (CH2)
    Polinucleótido con hebra en sentido
    -5
    contrario
    en la que
    p representa un número entero de 0 a 4, q representa un número entero de 4 a 10,
    L5 representa un enlace simple o -O-,
    L6 representa -(C=O)-NH- o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con (CH2)p,
    L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para, y a condición de que si L5 es -O-, entonces, p representa un número entero de 1 a 4.
  2. 2. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la suma de p y q es un número entero igual a 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero igual a 8 o mayor.
  3. 3. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que p es 0 o 2, q es un número entero igual a 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que q es 6 u 8, más preferentemente en el que q es 8.
  4. 4. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que p es 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para.
  5. 5. Un polinucleótido o sal del mismo, comprendiendo el polinucleótido un polinucleótido con una hebra de sentido directo que correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo, en el que el extremo 5’ del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3’ del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante un enlazador para formar una estructura fosfodiéster en cualquiera de dichos extremos, teniendo el enlazador una estructura representada por la siguiente fórmula:
    [Fórmula 1]
    imagen2
    en la que
    el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5’ de la hebra de sentido contrario para formar una estructura fosfodiéster;
    uno cualquiera de R1, R2, y R3 representa una estructura representada mediante la siguiente fórmula:
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    L1-(CH2)m-L2-LMCH2CH2o)ni-(CH2)n2-0->
    en la que
    m representa un número entero de 0 a 4, n1 representa un número entero de 0 a 4, n2 representa 0 o un número entero de 2 a 10,
    L1 representa un enlace simple o -O-,
    L2 representa un enlace simple o -CH(-NH-L4-R)-,
    L3 representa un enlace simple, -(C=O)-NH-, o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con L2, a condición de que si L3 no es un enlace simple, entonces n2 representa un número entero de 2 a 10, a condición de que si se cada uno de L1 y L2 sea un enlace simple, m es 1, y cada uno de n1 y n2 es 0, entonces L3-O^ representa -CH(COOH)NH-(resto de aminoácido)j-Ser,
    -CH(COOH)NH-(resto de aminoácido)j-Thr,
    -CH(NH2)CO-(resto de aminoácido)j-Ser, o -CH(NH2)CO-(resto de aminoácido)j-Thr, en la que
    el resto del grupo hidroxi de esta serina o treonina está unido al grupo fosfato del extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo, y el grupo amino de la serina o treonina puede estar adicionalmente sustituido por un grupo acilo, j representa un número entero de 0 a 2,
    L4 representa un enlace simple, un grupo metileno, un grupo polimetileno que tiene de 2 a 4 átomos de carbono, o la estructura -(C=O)-CH2-CH2-(C=O)-O- en la que un grupo carbonilo de la estructura -(C=O)-CH2-CH2-(C=O)- O- está unido al grupo amino del extremo izquierdo de la fórmula estructural para formar la estructura -NH-(C=O) -CH2-CH2-(C=O)-O-, y
    R representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo de hidrocarburo saturado o insaturado-carbonilo que tiene de 2 a 30 átomos de carbono, o un grupo hidrocarbonoxicarbonilo saturado o insaturado que tiene de 2 a 30 átomos de carbono; y
    los dos restantes de R1, R2, y R3 representan, cada uno de ellos independientemente, un grupo seleccionado entre el grupo que consiste en un átomo de hidrógeno,
    un grupo alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener un sustituyente, un grupo alcoxi que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener un sustituyente, un átomo de halógeno,
    un grupo alquilcarbonilamino que tiene un grupo alquilo que tiene de 1 a 9 átomos de carbono, y
    un grupo alquilcarbonilo que contiene un grupo alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono que puede tener un
    sustituyente.
  6. 6. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, en el que cada R1 y R3 es un átomo de hidrógeno.
  7. 7. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en el que cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es -(C=O)-NH-, y la suma de m y n2 es un número entero igual a 3 o mayor, preferentemente 8 o mayor.
  8. 8. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en el que cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es -(C=O)-NH-, m es 0 o 2, y n2 es un número entero igual a 6 o mayor, preferentemente 6 u 8, más preferentemente 8.
  9. 9. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, en el que cada R1 y R3 es un átomo de hidrógeno, cada L1 y L2 es un enlace simple, L3 es -(C=O)-NH-, m es 2, y n2 es 8.
  10. 10. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste en un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (II), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (III), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (d):
    5'-(y-P)9-y-Xt-3’ (ii)
    y
    imagen3
    (a) y representa un ARN, p representa un 2'-OMeARN, y cada A y u representa un ADN;
    (b) t y u representan, de forma idéntica o diferente, cualquier número entero de 0 a 5;
    (c) (Y-P)9-Y en el polinucleótido representado mediante la fórmula (II) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
    (d) (Y-P)9-Y en la fórmula (II) y p-(Y-p)9 en la fórmula (III) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre
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    si.
  11. 11. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (IV), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (V), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (d):
    S'-ía-píg-Op-^-S' (IV)
    y
    5'“5S~(a-P)9-du-3' (V),
    (a) a y p representan, de forma diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, 8 y A representan, de forma idéntica o diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, y u representa, de manera idéntica o diferente, cualquier nucleótido seleccionado entre un ADN, un ARN, y un 2'-oMeARN;
    (b) p representa un número entero de 0 o 1, t es 0 cuando p es 0 y representa cualquier número entero de 0 a 5 cuando p es 1, s representa cualquier número entero de 0 o 1, y u representa cualquier número entero de 0 a 5;
    (c) (a-p)g-ap en el polinucleótido representado mediante la fórmula (IV) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
    (d) (a-p)g en la fórmula (IV) y (a-p)g en la fórmula (V) tienen secuencia de nucleótidos complementarias entre sí.
  12. 12. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (VI), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (VII), y el polinucleótido tiene además los siguientes características de (a) a (d):
    imagen4
    y
    imagen5
    (a) a y p representan, de forma diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, 8 y A representan, de forma idéntica o diferente, un ADN o un 2'-OMeARN, y u representa, de manera idéntica o diferente, cualquier nucleótido seleccionado entre un ADN, un ARN, y un 2'-OMeARN;
    (b) p representa un número entero de 0 o 1, t es 0 cuando p es 0 y representa cualquier número entero de 0 a 5 cuando p es 1, s representa cualquier número entero de 0 o 1, y u representa cualquier número entero de 0 a 5;
    (c) p-(a-p)8-ap en el polinucleótido representado mediante la fórmula (VI) tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a la del gen diana; y
    (d) (a-p)8 en la fórmula (VI) y (a-p)8 en la fórmula (VII) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre sí.
  13. 13. El polinucleótido o la sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 11 o 12, en el que a es un ADN, y p es un 2'-OMeARN.
  14. 14. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en el que At y Uu son, de manera idéntica o diferente, cualquiera de: ADN que tienen una base timina, una base adenina, o una base guanina; o 2'-OMeARN que tienen una base uracilo, una base adenina, o una base guanina.
  15. 15. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, en el que es t es 0, y u es 2.
  16. 16. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que p y t son 0, s es 1, y u es 2.
  17. 17. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que p y t son 0, s es 0 o 1, u es 2, y U2 es un ADN o un 2'-OMeARN.
  18. 18. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el polinucleótido con hebra en sentido directo consiste de un polinucleótido representado mediante la siguiente fórmula (VIII), el polinucleótido con hebra en sentido contrario consiste de un polinucleótido representa mediante la siguiente fórmula (IX), y el polinucleótido tiene además las siguientes características de (a) a (c):
    5 ’ -(a-p)9-3 T (VIII)
    5
    10
    15
    20
    25
    y
    5'-p-(a-p)9-(a-p)-3’ (IX),
    (a) a es un ADN, y p es un 2'-OMeARN;
    (b) p-(a-p)g en el polinucleótido representado mediante la fórmula (IX) tiene una secuencia de nucleótidos complementaria a la del gen diana; y
    (c) (a-p)g en la fórmula (VIII) y (a-p)g en la fórmula (IX) tienen secuencias de nucleótidos complementarias entre sí.
  19. 19. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 18, en el que cualquiera o todos los 1 a 4 restos 2'-OMeARN están sustituidos por un ENA o una 2',4'-BNA/LNA.
  20. 20. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 19, en el que cualquiera o todos los de 1 a 4 restos de ADN están sustituidos por un ARN, un ENA o un 2',4'-BNA/LNA.
  21. 21. El polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, en el que los nucleótidos están unidos entre sí mediante un enlace fosfodiéster o fosforotioato.
  22. 22. Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 como principio activo.
  23. 23. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 22, en el que la composición farmacéutica está dirigida al tratamiento de una enfermedad derivada de la expresión génica.
  24. 24. Un polinucleótido o sal del mismo seleccionado de las reivindicaciones 1 a 21 para su uso en la inhibición de la expresión de un gen diana en un mamífero.
  25. 25. Un compuesto representado por la fórmula (X) o una sal del mismo:
    [Fórmula 3]
    imagen6
    en la que Tr representa un grupo protector del grupo hidroxi; p representa un número entero de 0 a 4; q representa un número entero de 4 a 10; L5 representa un enlace simple o -O-; L6 representa -(C=O)-NH- o -NH- (C=O)- partiendo del enlace con (CH2V; y L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para; y se caracteriza en que el compuesto no es:
    imagen7
    en la que n es 4, 6 u 8;
    5
    imagen8
    en la que n es 3, 5 o 7;
    imagen9
    en la que n es 3, 5 o 7; o
    imagen10
  26. 26. El compuesto o sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 25, en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo, un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, un grupo pixilo, un grupo tritilo, un grupo levulinilo, o un grupo bis(trimetilsililoxi)(ciclohexiloxi)sililo.
    10 27. El compuesto o sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 25, en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un
    grupo 4,4'-dimetoxitritilo, la suma de p y q es un número entero igual a 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es - (C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero igual a 8 o mayor.
  27. 28. El compuesto o sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 25, en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es un número entero igual a 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)- NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que q es 6 u 8.
  28. 29. El compuesto o sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 25, en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que Tr es un grupo 4-metoxitritilo.
  29. 30. Un procedimiento de producción de un compuesto representado mediante la fórmula (XI), siendo el compuesto un polinucleótido que comprende un polinucleótido con una hebra de sentido directo que correspondiente a un gen diana, y un polinucleótido con una hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de polinucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra de sentido directo, en la que el extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo están unidos mediante X por enlaces fosfodiéster:
    [Fórmula 4]

    O O

    ,11 II „
    ho-w2,-o-p-o-x—P-O—W-V-OH (XI)

    OH OH
    en la que W2' representa un polinucleótido con hebra en sentido directo sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el
    extremo 3'; W1'-Y' representa un polinucleótido con hebra en sentido contrario sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3'; y X representa la fórmula (XII):
    [Fórmula 5]
    imagen11
    en la que p representa un número entero de 0 a 4; q representa un número entero de 4 a 10; L5 representa un enlace simple o -O-; L6 representa -(C=O)-NH- o -NH-(C=O)- partiendo del enlace con (CH2)p; L5 está unido al anillo de benceno en la posición meta o para; a condición de que si L5 es -O-, entonces, p representa un número entero de 1 a 4; y el grupo metileno del extremo está unido al extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo para formar un enlace fosfodiéster; y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario para formar un enlace fosfodiéster, comprendiendo el procedimiento las etapas de:
    (i) hacer reaccionar el grupo hidroxi de un compuesto representado por la fórmula Tr-O-X-H [en la que Tr representa un grupo protector del grupo hidroxi, -(CH2)q- en X está unido a Tr-O- y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al hidrógeno] con un compuesto representada por la fórmula (XIII):
    [Fórmula 6]
    imagen12
    o la fórmula (XIV):
    [Fórmula 7]
    imagen13
    [en la que R4 representa un grupo a 2-cianoetilo, un grupo metilo, un grupo metanosulfoniletilo, un grupo 2,2,2- tricloroetilo, o un grupo 4-clorofenilmetilo, y R5 representa un grupo morfolino, un grupo diisopropilamino, un
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    grupo dietilamino, o un grupo dimetilamino] para producir un compuesto representado por la fórmula (XV):
    [Fórmula 8]
    R5
    i
    Tr-OX-P,
    O—R4
    (XV)
    (ii) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (i) con un compuesto representado por la fórmula HO-W1- Y-CPG [en la que W1-Y representa un polinucleótido con hebra en sentido contrario protegido sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3', y CPG representa un soporte polimérico que tiene un enlazador capaz de unirse al polinucleótido] según un procedimiento de fosforamidita y posteriormente producir un resto representado por la fórmula Tr1-O-W2-O-P(=O)(OR4)-O-[en la que Tr1 representa un grupo protector del grupo hidroxi, y W2 representa un polinucleótido con hebra en sentido directo protegido sin grupos hidroxi en el extremo 5' y el extremo 3'] según un procedimiento de fosforamidita para producir un compuesto representado por la fórmula (XVI):
    [Fórmula 9]
    imagen14
    y
    (iii) escindir el compuesto obtenido en la etapa (ii) del CPG y eliminar el grupo protector.
  30. 31. El procedimiento según la reivindicación 30, en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo, un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, un grupo pixilo, un grupo tritilo, un grupo levulinilo, o un grupo bis(trimetilsililoxi)(ciclohexiloxi)sililo.
  31. 32. El procedimiento según la reivindicación 30, en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4-dimetoxitritilo, la suma de p y q es un número entero igual a 4 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que la suma de p y q es un número entero igual a 8 o mayor.
  32. 33. El procedimiento según la reivindicación 30, en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 0 o 2, q es un número entero igual a 6 o mayor, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que q es 6 u 8, más preferentemente en la que q es 8.
  33. 34. El procedimiento según la reivindicación 30, en el que Tr y Tr1 son, de manera idéntica o diferente, un grupo 4- metoxitritilo o un grupo 4,4'-dimetoxitritilo, p es 2, q es 8, L5 es un enlace simple, L6 es -(C=O)-NH-, y L5 está unido al anillo de benceno en la posición para, preferentemente en el que cada Tr y Tr1 es un grupo 4,4'-dimetoxitritilo.
  34. 35. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 34, en el que R4 es un grupo 2- cianoetilo, un grupo metilo, un grupo metanosulfoniletilo, un grupo 2,2,2-tricloroetilo, o un grupo 4-clorofenilmetilo, y R5 es un grupo morfolino, un grupo diisopropilamino, un grupo dietilamino, o un grupo dimetilamino, preferentemente en el que R4 es un grupo 2-cianoetilo o un grupo metilo, y R5 es un grupo morfolino o un grupo diisopropilamino.
  35. 36. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 34, en el que el compuesto representado por la fórmula (XIII) es cloro(morfolino)metoxifosdina, cloro(morfolino)cianoetoxifosdina, cloro(diisopropilamino)metoxifosdina, o cloro(diisopropilamino)cianoetoxifosdina.
  36. 37. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 34, en el que el compuesto representado por la fórmula (XIV) es bis (diisopropilamino)cianoetoxifosdina.
  37. 38. Un polinucleótido seleccionado entre los siguientes, o una sal del mismo: HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-
    Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Am1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p- Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Tp-Um1t-H (HS-005), HO-Cp-Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp-Gm1p-Cp- Um1p-Ap-Um1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p-Ap-Um1p-Ap-Gm1p-Cp-Am1p-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Tp-Cm1p-Tp-Gm1p-Tp-
    Um1t-H (HS-006), HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Am1p-X-P(=O) (OH)-O- Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Ts-Um1t-H (HS-005s), o, HO-Cp- Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp-Gm1p-Cp-Um1p-Ap-Um1p-X-P(=O) (OH)-O-Um1p-Ap-Um1p-Ap-GtT|1p-Cp-
    5
    10
    15
    Am1P-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Tp-Cm1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1t-Ts-Um1t-H (HS-006s), en el que cada Ap, Gp, Cp, Tp, Ts, Am1p, Gm1p, Cm1p, Um1p, y Um1t representa un nucleósido o un nucleótido que tiene una estructura representada por la siguiente fórmula:
    [Fórmula 10]
    imagen15
    la secuencia en dirección cadena arriba de X representa un polinucleótido con hebra en sentido directo correspondiente a un gen diana; la secuencia en dirección cadena abajo de X representa un polinucleótido que tiene un polinucleótido con hebra en sentido contrario que tiene una secuencia de nucleótidos complementaria de la del polinucleótido con hebra en sentido directo; X representa un enlazador que tiene una estructura representada por la fórmula (XVII):
    [Fórmula 11]
    imagen16
    el grupo metileno del extremo está unido al extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido directo para formar un enlace fosfodiéster; y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo está unido al extremo 5' del polinucleótido con hebra en sentido contrario para formar un enlace fosfodiéster.
  38. 39. Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido o sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 38 como principio activo.
  39. 40. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 39, en la que la composición farmacéutica es para el tratamiento de una enfermedad derivada de la expresión del gen Hsp47, preferentemente fibrosis.
  40. 41. Un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 38 para su uso en la inhibición de la expresión del gen Hsp47, en un mamífero.
  41. 42. Un reactivo que comprende un polinucleótido o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 o 38.
    imagen17
    imagen18
    00
    Cl
    R5
    V'
    Tr-O-X-H
    imagen19
    R5
    R5
    1
    Tí-O-X-P^
    O
    (23)
    HO-W^-O-P—O-X— P-O—W1 -r-OH
    I I
    OH OH
    Etapa G-3
    O
    O
    Etapa G-2
    Tr’-O-V^-O -P—O -X—P-O—W'-Y-CPG
    imagen20
    (24)
    £U
    imagen21
    Ejemplo de referencia 3 n=4 Ejemplo de referencia 4 n=6 Ejemplo de referencia 5 n=8 ;
    oo
    oo
    imagen22
    Ejemplo de referencias n=3 Ejemplo de referencia 7 n=5 Ejemplo de referencias n=7
    imagen23
    Ejemplo de referencia 9 n=3 Ejemplo de referencia 10 n=5 Ejemplo de referencia 11 n=7
    imagen24
    de referencia 12 n=3 de referencia 13 n=5 de referencia 14 n=7
    imagen25
    í
    K
    flj
    Ejemplo de referencia 17
    ■o/'sV'
    ,*>• a Ejemplo de referencia 23
    ¿ k
    AoSer<MMTr)-Gly.Tyr*0£í
    imagen26
    imagen27
    AMMMMm&MMbP'°^AT°
    *1
    I '•
    a
    H
    SU
    CT-169 5’ GCA CAA GAA UGG AUC ACA
    CT-157 UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U5’
    CT-437: n=4
    CT-ÍS5- n=6 s’GCA CAA GAA UGG AUC ACA
    CT-456: n=8 3’UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-446: n=3 CT-447: n=5 CT-448: n=7
    5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3' UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-449: n=3 CT-450: n=S CT-451: n=7
    5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3’UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-452: n=3 CT-453: n=5 CT-454: n=7
    y~
    >
    ^M*mP -<> 3-*-v wwwwwwwwkw* ° r
    CT-169 5’ GCA CAA GAA UGG AUC ACA
    CT-157 UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U5’
    CT-460
    5'GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3’ UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-461 5 ’ GCA CAA GAA UGG AUC ACA
    3’ UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-462: R3=Me CT-463: R*=H
    Cantidad relativa respect-o a KC
    imagen28
    [g einÉ-j]
    imagen29
    co
    co
    imagen30
    Ejemplo de referencia 24
    imagen31
    Ejemplo de referencia 25
    imagen32
    Ejemplo de referencia 26 Ejemplo de referencia 27
    imagen33
    Ejemplo de referencia 28
    Ejemplo de referencia 29
    Ejemplo de referencia 30
    Reference Example 31
    [Figura 10]
    CT-169
    CT-157
    5‘GCA CAA GAA UGG AUC ACA UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U5’
    4 i '■
    M
    tu
    CT-448: n=7 CT-465 n=9
    5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3' UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    i—1 i—1
    co
    c™6n_9
    5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3’UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    ¿6£££6£6it£i£<í£i£ov...=!j“
    cwwwrm7mw?m'‘-Xr°
    5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA 3’UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    CT-468; X= Single bond
    CT-489: X=-CHjCHr 5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA CT-470: X=-CHjO- 3’UT CGU GUT CTU ACC UAG TGT U
    nh, CT-471
    imagen34
    p "°^7™
    CT-10G 5’GCA CMGAAUGG AUCACAAUU CT-041 uu CGU GUU CUU ACC UAG UGü U5’
    CT-472 5’GCA CAA GAA UGG AUC ACA AUU 3’ UU CGU GUU CUU ACC UAG UGU U
    CT-001 5'GCA CAA GAA UGG AUC ACA ATT CT-005 rr CGU GUU CUU ACC UAG UGU U5’
    CT-473 5’GCA CAA GAA UGG AUC ACAA
    3’ UU CGU GUU CUU ACC UAG UGU U
    co
    -vi
    %
    L
    CA
    %
    L
    +e
    Cantidad relativa respecto a NC
    Tí
    H-
    %
    V
    c>
    í
    %
    o
    **
    to
    o
    V
    o
    o
    ’bo
    E3 □ □ a
    o o o o
    í3 b o Ij
    O CO ¡3 w 3 ~ =c
    PK-001
    PK-002
    5' GCUC GÜCUAÜGACAAGUAAUU
    GUCGAGCAGAUACUGUUCAUU 5'
    5' GCTCGUCUAUGACAAGTA
    PK-O09 3, utcgagcagaüactgtucatu
    co
    CD
    WWWWWWWWím?i»>^
    s
    HS-002
    HS-005
    HS-OOS
    HS-005S
    HS-OOSs
    UGAGACACAUGGGUGCUAUTT TTACUCUGUGUACCCACGAUA 5'
    4
    '■
    5' GAGACACAUGGGUGCUAUATT TTCUCUGUGUACCCACGAUAU 5'
    5' CGAGACACAUGGGUGCTA 3' UTGCUCUGUGÜACCCACGATU
    5' CAGACACATGGGT GCUAU
    3' UTGT CTGTGTACCCACGAÜAU
    5' CGAGACACAUGGGUGCTA 3' UTGCUCUGUGÜACCCACGATU
    5' CAGACACAT GGGTGCUAU
    3' UTGTCTGTGTACCCACGAUAU
    imagen35
    SÍHSP47C
    5' GGACAGGCCUCUACAACUATT TTCCUGUCCGGAGAUGUUGAU 5'
    HS-012
    5' C GACAGGCCUCUACAACU
    3' UTGCUGUCCGGAGAUGUTGAU
    imagen36
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013180038A1 (ja) 2012-05-26 2013-12-05 株式会社ボナック デリバリー機能を有する遺伝子発現制御用の一本鎖核酸分子
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
WO2015099122A1 (ja) 2013-12-26 2015-07-02 学校法人東京医科大学 遺伝子発現制御のための人工ミミックｍｉＲＮＡおよびその用途
CN106068324B (zh) * 2013-12-27 2020-12-29 株式会社博纳克 控制基因表达的人工匹配型miRNA及其用途
WO2016094342A1 (en) * 2014-12-08 2016-06-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Lipocationic polymers and uses thereof
KR20170098914A (ko) 2014-12-27 2017-08-30 가부시키가이샤 보낙 유전자 발현 제어를 위한 천연형 miRNA 및 그의 용도
WO2016158809A1 (ja) 2015-03-27 2016-10-06 株式会社ボナック デリバリー機能と遺伝子発現制御能を有する一本鎖核酸分子
EP3927717A4 (en) * 2019-02-19 2022-12-21 Pioneer Biolabs, LLC CONSTRUCTION OF GUIDED STRAND BANK AND RELATED METHODS OF USE
IL291251B1 (en) 2019-09-10 2026-02-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Oligonucleotide-galnac conjugate for targeted delivery to the liver and method for its production
EP4495240A1 (en) 2022-03-16 2025-01-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Sirna for suppressing expression of transferrin receptor-2
US20250188477A1 (en) 2022-03-16 2025-06-12 Daiichi Sankyo Company, Limited CHEMICALLY MODIFIED OLIGONUCLEOTIDE HAVING RNAi ACTIVITY
TW202528539A (zh) * 2023-09-20 2025-07-16 日商第一三共股份有限公司 抑制受磷蛋白之表現的siRNA

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2234563T5 (es) 1999-02-12 2018-01-17 Daiichi Sankyo Company, Limited Nuevos análogos de nucleósidos y oligonucleótidos
US7183319B2 (en) * 2000-07-26 2007-02-27 Patrick Anthony Riley Phenylethylamine derivatives and their use in the treatment of melanoma
AU2004266311B2 (en) 2001-05-18 2009-07-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
WO2004015075A2 (en) 2002-08-08 2004-02-19 Dharmacon, Inc. Short interfering rnas having a hairpin structure containing a non-nucleotide loop
JP4948163B2 (ja) * 2003-05-23 2012-06-06 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 化学修飾した低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を使用する遺伝子発現のＲＮＡ干渉仲介抑制
US9371348B2 (en) * 2006-11-27 2016-06-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Photocleavable oligonucleotide and uses thereof
EP2129680B1 (en) * 2007-03-21 2015-05-06 Brookhaven Science Associates, LLC Combined hairpin-antisense compositions and methods for modulating expression
CN101873852A (zh) * 2007-09-27 2010-10-27 锐视医药公司 治疗视黄醇相关性疾病的方法和化合物
US20100317714A1 (en) * 2007-11-29 2010-12-16 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd Complex molecule interfering the expression of target genes and its preparing methods
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
JP5464401B2 (ja) * 2009-02-24 2014-04-09 国立大学法人岐阜大学 オリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド誘導体を用いたオリゴヌクレオチド構築物、オリゴヌクレオチド誘導体を合成するための化合物及びオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
US20120220649A1 (en) 2009-10-30 2012-08-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Modified double-stranded polynucleotide
WO2011072082A2 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Nitto Denko Corporation Modulation of hsp47 expression

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