ES2667295T3

ES2667295T3 - Métodos y composiciones para la liquidación de tumores

Info

Publication number: ES2667295T3
Application number: ES10842519.0T
Authority: ES
Inventors: Michael Har-Noy
Original assignee: Immunovative Therapies Ltd
Current assignee: Immunovative Therapies Ltd
Priority date: 2009-12-15
Filing date: 2010-12-15
Publication date: 2018-05-10
Anticipated expiration: 2030-12-15
Also published as: IL220386B; WO2011084451A2; US20140178334A1; US20220273784A1; EP2512502B1; PT2512502T; CN102740874A; EP2512502A4; JP6278597B2; US20110142887A1; US20160206718A1; JP2018090605A; DK2512502T3; CA2786585C; JP2013514365A; JP6553219B2; CN105457020A; WO2011084451A3; JP2016121164A; PL2512502T3

Abstract

Una composición terapéutica para uso en la liquidación de un cáncer metastásico progresivo en estadio IV resistente a al menos un ciclo de quimioterapia, la composición comprende células Th1 alogénicas conjugadas con microperlas recubiertas de anticuerpo monoclonal anti-CD3/anti-CD28, en donde la composición es para la administración a un paciente de acuerdo con el siguiente régimen: a) tres o más inyecciones intradérmicas a una dosis de entre 1 x 107 a 4 x 107 células con no menos de 2 días de diferencia y no más de 8 días de diferencia, b) entre 2 días y 8 días después de la finalización de la etapa a), una inyección intratumoral de 1 x 107 a 6 x 7 células dentro de una hora de la ablación del tumor, y c) dentro de los 8 días de la ablación, una o más infusiones intravenosas a una dosis de 1 x 107 a 1 x 108 células con no menos de dos días de diferencia, en donde, la administración de la composición da como resultado un aumento en el tamaño del tumor que se vuelve hipodenso y oscuro en comparación con el valor inicial previo al tratamiento como se muestra en la tomografía computarizada a los 30 días.

Description

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Se utiliza la técnica mínimamente invasiva de crioablación percutánea guiada por imagen (a través de la piel) o crioablación o ablación con alcohol (utilizada mejor para la ablación de lesiones palpables). Las lesiones tumorales elegibles para la ablación pueden residir, por ejemplo, en el hígado, piel, cabeza/cuello, ganglios linfáticos, páncreas, huesos, suprarrenales, vejiga, tracto gastrointestinal o riñon y se ubicarán en una localización dentro de aquellos órganos que permiten un acceso percutáneo seguro utilizando una guía de imagen por CT o ultrasonido cuando sea necesario.

El procedimiento de ablación da como resultado la liberación de grandes cantidades de restos tumorales en un microentorno tumoral que sirve como una fuente de antígenos tumorales específicos del paciente. Normalmente, las células en el cuerpo mueren por un proceso natural conocido como apoptosis que ocurre como consecuencia continua de la renovación celular. El sistema inmune se programa para que no responda a las células apoptóticas, evitando así la autoinmunidad. La muerte celular necrótica como resultado de la ablación, sin embargo, puede enganchar células inmunes al sitio tumoral y los contenidos internos de las células proporcionan señales “eat me” a las células inmunes que responden. Sin embargo, los potentes efectos adyuvantes de las células Th1 activadas pueden superar los efectos normales de la muerte celular apoptótica que no estimulan una respuesta inmune. Por esta razón, cualquier método que cause la muerte de las células tumorales puede utilizarse en combinación con la composición de células Th1 alogénicas activadas preferidas.

Los antígenos se presentan al sistema inmune mediante una red de células especializadas que se conocen como células presentadoras de antígenos profesionales (APCs) o células dendríticas (DCs). Las DCs son responsables de inducir inmunidad a patógenos o tumores al presentar antígenos a células T naïve, que dan como resultado la diferenciación de las células T en células T efectoras y de memoria específicas para los antígenos. Las células T efectoras, principalmente las células T citolíticas CD8+ (CTL), son capaces de destruir las células que expresan los antígenos. Las células T de memoria proporcionan protección inmune frente a la recurrencia o la reinfección. La diferenciación de las DCs en las potentes APCs se desencadena por estímulos moleculares que se liberan como resultado de la alteración del tejido y una respuesta inflamatoria local.

Las DCs que procesan los antígenos tumorales contenidos en los materiales engullidos pueden programarse para madurar en presencia de señales de peligro inflamatorias, es decir, bajo condiciones Th1, de una manera que pueda promover el desarrollo de la inmunidad Th1 específica para los antígenos engullidos. Al combinar la muerte tumoral patológica o natural por métodos de ablación o quimioterapia con administración intratumoral de la composición terapéutica, conteniendo preferiblemente células Th1 alogénicas activadas que producen señales de peligro inflamatorias, se pueden crear las condiciones para la inmunidad específica del tumor Th1. La combinación de antígenos tumorales expuestos en presencia de señales de peligro inflamatorias dentro del cuerpo se denomina método de vacuna in-situ.

También dentro del alcance de esta invención está el desarrollo de chips u obleas que están incrustadas con los componentes claves de la composición terapéutica: (a) un antígeno extraño; (b) una molécula que causa maduración de la DC; y (c) citoquinas inflamatorias. Por ejemplo, una oblea incrustada con aloantígenos y CD40L implantada con citoquinas incrustadas o exógenas, tales como GM-CSF y/o IFN-gamma entraría dentro del alcance de esta invención.

Las DCs inmaduras que engloban los antígenos tumorales pueden procesar antígenos tumorales en presencia de señales inflamatorias y después madurar, diferenciarse y migrar a los nódulos linfáticos que drenan donde pueden sensibilizar las células T inmunes a la inmunidad Th1, incluyendo células T citolíticas (CTL) que son capaces de buscar específicamente y destruir los tumores donde quiera que residan en el cuerpo. Para que este proceso ocurra correctamente, las células dendríticas inmaduras que toman antígenos tumorales deben procesar los antígenos dentro de un entorno altamente inflamatorio. El tipo de entorno inflamatorio que es necesario para impulsar la maduración de las células dendríticas para sensibilizar para la inmunidad Th1 no se produce de forma natural y no se produce como resultado del proceso de ablación solo y requiere, por lo tanto, un adyuvante.

Para proporcionar un adyuvante para dirigir la maduración correcta de DC, la composición terapéutica que preferiblemente incluye las células Th1 alogénicas activadas descritas aquí se puede administrar en el centro necrótico de la lesión tumoral ablacionada, preferiblemente en 1 h después del procedimiento de ablación. Las células inmune alogénicas se pueden activar en el momento de la inyección mediante la unión de microperlas recubiertas con anticuerpos monoclonales CD3/CD28. Estas células inmunes producen grandes cantidades de citoquinas inflamatorias y expresan moléculas superficiales (por ejemplo, CD40L) que se sabe que provocan la maduración de las células dendríticas y promueven el desarrollo de la inmunidad antitumoral Th1. Además, dado que los pacientes serán inmunes a los aloantígenos debido a las inyecciones de sensibilización intradérmicas previas, la administración intratumoral puede provocar una potente respuesta de memoria de las células Th1 para rechazar estas células alogénicas. Todos estos factores sirven como un adyuvante al promover la maduración de DC para sensibilizar para la inmunidad Th1 específica antitumoral. El momento de la inyección intratumoral puede alterarse para mejorar el efecto terapéutico. El efecto adyuvante de las células Th1 alogénicas de memoria activadas se optimiza cuando las células se administran al mismo tiempo que las células dendríticas entran en la lesión tumoral ablacionada. Como se sabe que la ola de células dendríticas que entra en los tejidos dañados ocurre aproximadamente 3 días después del acto de ablación, se prefiere que las células alogénicas se administren también 3 días después del procedimiento de ablación. Esta inyección intratumoral puede ser adicional a la 7

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de prednisona) dentro de los 30 días posteriores al primer día del tratamiento farmacológico del estudio, enfermedad autoinmune activa concomitante (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad tiroidea autoinmune, uveítis), tratamiento previo con vacuna experimental contra el cáncer (por ejemplo, terapia de células dendríticas, vacuna de choque térmico), terapia inmunosupresora, incluyendo: ciclosporina, globulina antitimocítica,

o tacrolimus dentro de los 3 meses posteriores a la entrada del estudio, historial de reacciones de transfusiones de sangre, infección bacteriana o viral progresiva, enfermedad cardiaca de naturaleza sintomática o fracción de eyección cardiaca < 45%, enfermedad pulmonar sintomática o FEV1, FVC, y DLCO ≤ 50% predicho, historial de positividad de HIV o AIDS (se permitió la positividad de HBV y/o HCV). La mayoría de los pacientes tuvieron ingesta inadecuada de calorias y líquidos en el momento de la acumulación y no fueron excluídos por esta razón.

Se evaluaron 42 pacientes. La edad media fue 60,2 años (intervalo 50-89 años) con 40% de hombres y 60% de mujeres. Los pacientes se pretrataron en gran medida con un promedio de 2,7 líneas previas de quimioterapia y un promedio de 7 cursos por línea. El 45% tuvieron radioterapia previa y el 90% tuvieron excisión quirúrgica previa de las lesiones tumorales. Los pacientes también tuvieron altas cargas tumorales con un promedio de 22 lesiones metastásicas por paciente. La muestra más común fue el cáncer de mama (42%) seguido por el cáncer colorrectal (19%) e incluyendo también ovario, sarcoma, carcinoma de células escamosas, pulmón, vejiga/uréter, páncreas, melanoma y cánceres metastásicos esofágicos.

Inyecciones intradérmicas

Se administraron inyecciones intradérmicas del medicamento que contiene las células Th1 alogénicas conjugadas con microperlas recubiertas de CD3/CD28 a dosis entre 1 x 107 a 4 x 107 células. Las células se suspendieron en un tampón de formulación que contiene PlasmaLyteA y un 1% de albúmina sérica humana a una densidad de 1 x 107 células por ml. Entre una y cuatro inyecciones de 1 ml se administraron a la vez en diferentes lugares (parte superior del brazo, parte superior del muslo y abdomen). Las inyecciones intradérmicas se administraron a una frecuencia tan alta como cada dos días o tan baja como cada 9 días, pero preferiblemente una inyección cada semana durante un mínimo de 3 semanas.

Inyecciones intratumorales

La inyección intratumoral del medicamente se produce en el centro necrótico de un tumor ablacionado, una hora después de la ablación pero puede estar dentro de la semana de la ablación. Se administró la inyección intratumoral de 1 x 107 a 6 x 107 células del medicamento preferido. Si existían tumores múltiples, solo se ablacionó un tumor. En algunos casos se repitió el procedimiento de ablación.

Infusiones Intravenosas, Intraperitoneales, Intrapleurales, Intravenosas, Epidurales

Se administraron infusiones intravenosas, intraperitoneales, intrapleurales, intravenosas del medicamento, a dosis que varían desde 1 x 107 a 1 x 109 células, con 1 x 108 células la dosis habitual. La infusión del medicamento en la cavidad peritoneal se puede utilizar para tratar carcinomatosis y la ascitis maligna. De manera similar, la infusión intrapleural puede tratar derrames pleurales malignos y las inyecciones epidurales pueden tratar tumores malignos en el espacio cerebro espinal. Estas infusiones se repitieron según fue necesario hasta que el tumor fue completamente erradicado.

La primera etapa del protocolo se llama etapa de “sensibilización”. La etapa de sensibilización consiste en tres o más inyecciones intradérmicas del medicamento a dosis que varían desde 1 x 107 a 4 x 107 células administradas con al menos 2 días de separación y preferiblemente no más de 8 días de separación. Los pacientes se observaron durante al menos 30 minutos después de la inyección para cualquier efecto adverso.

La segunda etapa del método se llama etapa de “vacunación in-situ”. Esta etapa se realizó entre los dos días y los ocho días después de la finalización de la etapa de sensibilización. Este procedimiento implica la ablación de una lesión tumoral seleccionada seguida una hora después por una inyección intratumoral de 1 x 107 a 6 x 107 dosis de medicamento. Alternativamente, los pacientes con ascitis maligna fueron elegibles para la infusión intraperitoneal con o sin crioablación del tumor y los pacientes con lesiones palpables fueron elegibles para ablación con alcohol con o sin crioablación. Los pacientes con carcinomatosis peritoneal recibieron una dosis de 1 x 108 a 1 x 109 células del medicamento preferido por via intraperitoneal.

Un método utilizado para crioablación fue el uso de un CryoCare-28 Percutaneous Probe System (Endocare, CA, USA). Este sistema utiliza el efecto Joule-Thomsom para enfriar el final de una criosonda en un sistema cerrado. De acuerdo con el coeficiente de gas y la dimensión de la boquilla, diferentes elementos gaseosos generan diferentes sucesos de intercambio térmico en el área próxima a la boquilla. El gas argón se utiliza para enfriar (-187ºC), y el helio se utiliza para calentar (67ºC).

Cuando fue necesario, la lesión tumoral objetivo planificada se identificó y localizó bajo una guía de imágenes de CT. Se creó un campo esteril y se administró anestesia local en el sitio de inserción de la sonda planificado. Se insertó una sonda guía por vía percutánea y se verificó por CT que estaba dentro de la lesión tumoral objetivo. Se realizaron uno o dos ciclos de congelación-descongelación. Se utilizó una sola sonda de 2-o 5-mm de acuerdo con

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el tamaño del tumor objetivo. El tiempo de congelación fue aproximadamente de 15-20 minutos dependiendo de la consecución de una “bola de hielo”, visible en CT. El deshielo se logró mediante la entrada de helio durante un periodo equivalente al tiempo de congelación antes de que se iniciase un segundo proceso de congelación (cuando se utilizó). El procedimiento solo requiere la ablación de una muestra de la lesión tumoral y no requiere una ablación tumoral completa con márgenes libres de tumor.

La lesión ablacionada se dejó enfriar durante aproximadamente de 10 minutos a 1 hora después del ciclo de congelación antes de la inyección del medicamento preferido.

La etapa final del método que es la etapa de estimulación inmune se realizó en el mismo día de la crioablación hasta dentro de los ocho días siguientes al procedimiento de crioablación. Esta etapa consiste en una o más infusiones intravenosas del medicamento a dosis que variaban desde 1 x 107 hasta 1 x 108 células administradas con no menos de dos días de diferencia. La mayoría de los pacientes recibieron infusiones intravenosas mensuales como inyecciones de refuerzo.

Respuesta

Los pacientes tratados por el método de esta invención se evaluaron por CT después de aproximadamente 30 días a partir del último tratamiento. En una CT sin contraste intravenoso, un tumor es normalmente de una densidad intermedia. El tumor, los vasos sanguíneos, los músculos, y los ganglios linfáticos pueden tener la misma densidad. Después de la administración intravenosa (IV) de medio de contraste iodado, los tumores aumentan en varios grados: los Paragangliomas, que son muy musculares, se intensifican intensamente, mientras que los carcinomas de células escamosas, que son más celulares, no se intensifican intensamente, o poco o nada. Los focos de necrosis o hemorragia previa son oscuros (hipodensos) en CT. Al carecer de suministro de sangre, los focos de necrosis no mejoran después de la administración del contraste.

En un tratamiento exitoso, la tomografía computarizada a los 30 días indicó hinchazón (aumento en tamaño) de todas las lesiones tumorales que se vuelven hipodensas (oscuras) en comparación con el valor inicial. La apariencia del tumor más grande en CT aparece con manchas heterogéneas con puntos de baja densidad en comparación con quistes homogéneos de baja densidad o un tumor progresivo con un área de necrosis central y bordes de avance viables. La apariencia heterogénea de baja densidad indica que los tumores se han licuado.

Resultados:

La Figura 1 muestra la vista coronal de un paciente con cáncer colorrectal metastásico de 89yo que presentó enfermedad metastásica en el hígado en Junio del 2009 y se trató con líneas de quimioterapia de FOLFOX y FOLFIRI y FOLFIRI con avastina. Estaba avanzando y se volvió resistente a la quimioterapia en Junio del 2010 y presentó 11 lesiones metastásicas en el hígado en Septiembre del 2010. El paciente se sometió a 3 dosis intradérmicas semanales de 1 x 107 del medicamento descrito aquí, y una semana después se sometió a un procedimiento de crioablación de una de las metastásis hepáticas y una infusión intratumoral del medicamento preferido el día 21 y una infusión intravenosa IV el día 28 de 1 x 109 células.

La Figura 1 muestra la apariencia inicial de una porción seleccionada de las lesiones metastásicas en el hígado. Después de 60 días los tumores se vuelven más grandes y más hipodensos, consistente con una respuesta de licuefacción. A los 90 días los tumores mantienen el tamaño más grande, pero pierden la hipodensidad presumiblemente debido a la reabsorción del agua. Después, se administró al paciente una infusión intravenosa de refuerzo el día 95 y se tomó otra imagen CT el día 120. La imagen muestra la devolución de la hiperdensidad así como el aumento de tamaño. Para demostrar que esto era de hecho una licuefacción y no solo un tumor progresivo, el tumor se sometió a biopsia y se evaluó por un patólogo. Como se muestra en la Figura 2, la biopsia indica grandes áreas de necrosis coagulativa y fibrosis consistentes con la licuefacción tumoral inmune mediada.

Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a realizaciones preferidas, los expertos en la técnica reconocerán que se pueden hacer cambios en la forma y el detalle sin apartarse del espíritu y el alcance de la invención.

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Claims

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