ES2672247T3 - Inmunoterapia basada en liposomas - Google Patents

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Marta VIVES PI
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Institut Catala de Nanociencia i Nanotecnologia ICN2
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Fundacio Institut dInvestigacio en Ciencies de la Salut Germans Trias i Pujol IGTP
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Abstract

Un liposoma que encapsula un autoantígeno, en el que (i) el liposoma tiene un tamaño comprendido entre 500 y 15000 nm; y (ii) la membrana del liposoma comprende fosfatidilserina (PS) en una cantidad comprendida entre el 10 y 40 % en peso con respecto a la composición total de membrana liposómica.

Description

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En una realización la membrana de liposomas comprende PC en una cantidad comprendida entre el 10 y el 40 % en peso con respecto a la composición liposómica total de membrana . En otra realización la membrana de liposoma comprende PC en una cantidad comprendida entre el 12 y el 40 % en peso con respecto a la composición liposómica total de membrana . En realizaciones adicionales, la PS de membrana está comprendida entre el 15 y el
5 37 %, o entre el 20 y el 35 %, o entre el 22 y el 33 %, o entre el 25 y el 32 %, o entre el 26 y el 31 %, o entre el 27 y el 30% en peso con respecto a la composición liposómica total de membrana , por ejemplo 27 %, 28 %, 29 % o 30 %.
La cantidad de CHOL puede estar comprendida entre el 13 y el 53 % en peso con respecto a la composición
10 liposómica total de membrana . En una realización, la membrana del liposoma comprende CHOL en una cantidad comprendida entre el 20 y el 50 % en peso con respecto a la composición liposómica total de membrana . En realizaciones adicionales, CHOL de membrana está comprendido preferentemente entre el 27 y el 46 %, o entre el 30 y el 44 %, o entre el 33 y el 42 %, o entre el 36 y el 40 % en peso con respecto a la composición liposómica total de membrana , por ejemplo 36 %, 37 %, 38 %, 39 % o 40 %.
15 La proporción de los diferentes lípidos contenidos en la membrana del liposoma debe equilibrarse para obtener un liposoma con propiedades físicas y químicas apropiadas con respecto a estabilidad, permeabilidad y morfología. En general, la membrana liposómica puede comprender PS, PC y CHOL en una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre el 0,6:0,6:0,7 y 1,5:1,5:1,8. El término “relación” se entiende en el sentido habitual como la
20 magnitud de cantidades relativas entre sí. Específicamente, la relación de dos cantidades indica cuántas veces la primera cantidad (X) está contenida en la segunda cantidad (Y), y se expresa como X:Y. La expresión “relación molar” se usa cuando la magnitud referida es la molaridad. Como alternativa, la relación puede expresarse como “relación en peso” cuando la magnitud referida es peso. Aquí, se proporcionan intervalos de relaciones molares para los tres lípidos particulares (PS, PC y CHOL). En una realización, la membrana comprende una relación molar
25 PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,7:0,7:0,8 y -1,4:1,4:1,6. En otra realización, la membrana comprende una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,8:0,8:0,9 y 1,2:1,2:1,5. En otra realización, la membrana comprende una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,9:0,9:1 y 1,1:1,1:1,4. En una realización preferida, la membrana comprende una relación molar PS:PC:CHOL que es aproximadamente 1:1:1,33.
30 Como se ha mencionado anteriormente, el liposoma de la invención encapsula un autoantígeno. El término “autoantígeno” se refiere a una proteína o complejo de proteínas normal que es reconocido por el sistema inmune de pacientes que padecen una enfermedad autoinmune específica. Estos antígenos no deberían, en condiciones normales, ser la diana del sistema inmunitario, pero, debido principalmente a factores genéticos y ambientales, la tolerancia inmunológica normal se ha perdido en estos pacientes para dicho antígeno. En ciertas realizaciones, el
35 liposoma encapsula autoantígenos adicionales asociados con la misma enfermedad autoinmune. Por ejemplo, el liposoma puede encapsular dos, tres, cuatro o cinco autoantígenos, preferentemente asociados con T1D.
En algunas realizaciones, la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 50:1 y 2:1. En otra realización, la
40 relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 30:1 y 3:1. En otra realización más, la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 20:1 y 3:1. En otra realización más, la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está
45 comprendida entre 15:1 y 3:1. En otra realización más, la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 12:1 y
3:1. En otra realización, la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos se selecciona del grupo que consiste en: 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1 y 4:1.
50 En una realización, el liposoma tiene un tamaño comprendido entre 500 y 10000 nm, la membrana del liposoma comprende del 20 al 35 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,7:0,7:0,8 y 1,4:1,4:1,6, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 50:1 y 3:1.
55 En una realización, el liposoma tiene un tamaño comprendido entre 700 y 7000 nm, la membrana del liposoma comprende del 22 al 33 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,8:0,8:0,9 y 1,2:1,2:1,5, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 20:1 y 3:1.
60 En otra realización, el liposoma tiene un tamaño comprendido entre 800 y 5000 nm, la membrana del liposoma comprende del 25 al 32 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CH que está comprendida entre 0,9:0,9:1 y
1,1:1,1:1,4, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 15:1 y 3:1.
En otra realización, el liposoma tiene un tamaño comprendido entre 900 y 3000 nm, la membrana del liposoma
5 comprende el 30 % en peso de PS, 30 % en peso de PS y 40 % en peso de CH, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 12:1 y 3:1, preferentemente, la relación en peso se selecciona del grupo que consiste en: 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1 y 4:1.
10 En otra realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 800 y 5000 nm, la membrana del liposoma comprende del 25 al 32 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CH que está comprendida entre 0,9:0,9:1 y 1,1:1,1:1,4, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 15:1 y 3:1. En otra realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 900 y 3000 nm, la membrana del liposoma
15 comprende el 30 % en peso de PS, el 30 % en peso de PS y el 40 % en peso de CH, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 12:1 y 3:1, preferentemente, la relación en peso se selecciona del grupo que consiste en: 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1 y 4:1. En una realización preferida el liposoma tiene morfología MVV, 1000 nm, la membrana del liposoma comprende el 30 % en peso de PS, el 30 % en peso de PS y el 40 % en peso
20 de CH, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 12:1 y 3:1, preferentemente, la relación en peso se selecciona del grupo que consiste en: 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1 y 4:1.
El autoantígeno o los autoantígenos encapsulados están asociados con una enfermedad autoinmune específica. En
25 ciertas realizaciones, el autoantígeno o los autoantígenos están asociados con una enfermedad autoinmune seleccionada del grupo que consiste en T1D, lupus eritematoso, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Addison, enfermedad celíaca, dermatomiositis, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave, anemia perniciosa, artritis reactiva, anemia hemolítica autoinmune, neutropenia autoinmune, enfermedad de Graves, psoriasis, artritis psoriásica y síndrome de Sjogren. En una realización particular el liposoma encapsula un autoantígeno asociado con
30 T1D. Autoantígenos no limitantes que se sabe que están asociados con T1D son la insulina, la proinsulina, la proteína tirosina fosfatasa (IA2, también conocida como antígeno de células de islotes 512), el glutamato descarboxilasa (GAD), la cromogranina y la proteína relacionada con la subunidad catalítica de glucosa-6-fosfatasa de islotes (IGRP) (Roep BO, Peakman M. Cold Spring Harb Perspect Med, 2012, vol. 2(4):a007781. oi: 10,1101/cshperspect.a007781.). Así, en una realización el liposoma de la invención encapsula un autoantígeno
35 seleccionado del grupo que consiste en insulina, proinsulina, IA2, GAD, cromogranina e IGRP.
Además, en el sentido de la presente invención, no es necesario que el autoantígeno que se encapsula en el liposoma sea la proteína antigénica completa. De hecho, se han aislado y reportado regiones específicas de las proteínas relevantes como particularmente antigénicas. Por lo tanto, en ciertas realizaciones el liposoma encapsula 40 un autoantígeno que es un péptido antigénico, particularmente un péptido antigénico asociado con T1D, por ejemplo, péptidos antigénicos derivados de insulina, proinsulina, IA2, GAD, cromogranina e IGRP. Por ejemplo, los péptido definidos por SEQ ID NO: 1 (21 aa, GIVDQCCTSICSLYQLENYCN) derivado de la cadena A de insulina y SEQ ID NO: 2 (30 aa, FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPMS) derivado de la cadena B de insulina, se han desvelado como particularmente autoantígenos en T1D. Por lo tanto, en una realización el liposoma encapsula un autoantígeno
45 asociado con T1D y deriva de insulina, preferentemente seleccionada de los péptidos con SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2. En una realización particular el liposoma encapsula los péptidos con SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.
Otras proteínas o péptidos autoantigénicos que se asocian con enfermedades autoinmunes y pueden encapsularse en los liposomas de la invención son, por ejemplo, péptidos de mielina para esclerosis múltiple, tales como péptidos
50 derivados de glucoproteína de mielina de oligodendrocito (MOG), péptidos del receptor de acetilcolina para miastenia grave, transglutaminasa para enfermedad celíaca, tiroglobulina para tiroiditis autoinmune (Lernmark A. J. Clin Invest, 2001, vol. 108, p. 1091-1096). En una realización particular el liposoma de la invención encapsula un autoantígeno que es un péptido antigénico asociado con EM, por ejemplo, péptidos antigénicos derivados de MOG, tales como el péptido definido por SEQ ID NO: 3.
55 Los péptidos autoantigénicos contenidos en los liposomas de la invención, ventajosamente, son de un tamaño que permite la presentación directa de dichos antígenos por las moléculas de superficie del complejo mayor de histocompatibilidad. Por “presentación directa” se entiende que no se requiere procesamiento mayor de estos péptidos por parte de la célula presentadora de antígeno antes de presentación en superficie. En algunas
60 realizaciones el tamaño de los péptidos autoantigénicos en los liposomas de la invención está comprendido entre 5 y 100 aminoácidos, particularmente entre 5 y 70 aminoácidos, o entre 8 y 50 aminoácidos, o entre 8 y 35 aminoácidos,
o entre 8 y 30 aminoácidos. Dichos autoantígenos proporcionan ventajas con respecto a biodisponibilidad, eficacia
de la terapia basada en liposomas y facilidad de procesamiento (encapsulación de dichos péptidos pequeños es más fácil y más barata en comparación con proteínas completas o péptidos mayores).
En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 700 y 7000 nm, la membrana
5 del liposoma comprende del 22 al 33 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,8:0,8:0,9 y 1,2:1,2:1,5, el liposoma encapsula al menos un autoantígeno que está asociado con T1D, preferentemente un autoantígeno que es un péptido derivado de insulina, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 20:1 y 3:1.
10 En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 700 y 7000 nm, la membrana del liposoma comprende del 22 al 33 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,8:0,8:0,9 y 1,2:1,2:1,5, el al menos un autoantígeno es un péptido seleccionado de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad
15 total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 20:1 y 3:1.
En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 800 y 5000 nm, la membrana del liposoma comprende del 25 al 32 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,9:0,9:1 y 1,1:1,1:1,4, el al menos un autoantígeno es un péptido seleccionado de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID
20 NO: 2, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 15:1 y 3:1.
En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 800 y 5000 nm, la membrana del liposoma comprende del 25 al 32 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida
25 entre 0,9:0,9:1 y 1,1:1,1:1,4, el al menos un autoantígeno es el péptido con SEQ ID NO: 1, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 15:1 y 3:1.
En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 800 y 5000 nm, la membrana
30 del liposoma comprende del 25 al 32 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,9:0,9:1 y 1,1:1,1:1,4, el al menos un autoantígeno es el péptido con SEQ ID NO: 2, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 15:1 y 3:1.
35 En una realización, el liposoma tiene morfología MVV y un tamaño comprendido entre 700 y 7000 nm, la membrana del liposoma comprende del 22 al 33 % en peso de PS y una relación molar PS:PC:CHOL que está comprendida entre 0,8:0,8:0,9 y 1,2:1,2:1,5, el liposoma encapsula al menos un autoantígeno que está asociado con MS, preferentemente un autoantígeno que es un péptido derivado de MOG, tal como el péptido definido por SEQ ID NO: 3, y la relación en peso entre la cantidad total de lípido que forma la membrana del liposoma frente a la cantidad total
40 de autoantígeno o autoantígenos está comprendida entre 20:1 y 3:1.
Pueden usarse diversas metodologías bien conocidas por los expertos en la materia para preparar liposomas que encapsulen uno o más péptidos. Por ejemplo, los liposomas de la invención pueden formarse inmovilizando directamente el autoantígeno durante la formación del liposoma por el método de hidratación de película lipídica.
45 En una realización, los liposomas de la invención se preparan por un procedimiento que comprende: (a) preparar una mezcla lipídica en un disolvente apropiado, por ejemplo, cloroformo, (b) retirar el disolvente, por ejemplo, mediante evaporación al vacío, (c) hidratar la mezcla lipídica con un tampón apropiado, por ejemplo solución salina tamponada con fosfato, que contiene al menos un autoantígeno, (d) opcionalmente retirar el péptido no
50 encapsulado, por ejemplo mediante centrifugación y (e) purificar u homogeneizar los liposomas resultantes, que contienen autoantígenos, por tamaño. Preferentemente, puede usarse la extrusión para homogeneizar liposomas por tamaño, es decir para producir liposomas que tengan un tamaño medio predeterminado haciendo pasar los liposomas, bajo presión, a través de poros de filtro de un tamaño definido, seleccionado. También puede usarse filtración de flujo tangencial para purificar y regularizar el tamaño de los liposomas, es decir, para producir una
55 población de liposomas que tengan menos impurezas, menor heterogeneidad de tamaño y una distribución más homogénea y uniforme de tamaño. Cuando el liposoma encapsula más de un autoantígeno, la etapa de hidratación
(c) se realiza en presencia de un tampón que contiene una mezcla de dichos autoantígenos en la proporción deseada. Dicha proporción tiene en cuenta la eficacia de encapsulación particular para cada autoantígeno.
60 En otra realización, la invención se refiere a un liposoma encapsula autoantígeno obtenido por el procedimiento descrito anteriormente.
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respectivamente (FIG.. 1). Con respecto al potencial zeta, ambos liposomas encapsulados presentan una carga de superficie negativa de -29,5 mV. El % de encapsulación fue de 44,63 ± 23,68 % para el péptido con SEQ ID NO: 1 y 88,48 ± 3,97 % para el péptido con SEQ ID NO: 2 (media ± DT). Los liposomas con PS que encapsulaban péptidos con SEQ ID NO: 3 tenían un diámetro medio de 942,2 nm y potencial zeta de -33,66 mV. La eficacia de
5 encapsulación para SEQ ID NO: 3 fue de 89,34 ± 4,69 %. Por análisis de cryo-TEM, se observó que la mayoría de los liposomas (vacíos o encapsulando péptido) son vesículas multivesiculares (MVV). Después del cocultivo, las DCs engulleron los liposomas con PS (FIG.. 2).
Las DCs tienen expresión reducida de moléculas coestimulantes y producen PGE2 después de la captura de los 10 liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina
La viabilidad de DCs después de cocultivo fue siempre similar a las DCs de control incluso después de un estímulo proinflamatorio (FIG. 3A) independientemente de la dosis (intervalo 100-2.000 mM, datos no mostrados).
15 La expresión de dos moléculas coestimulantes, CD40 y CD86, se evaluó en la superficie de DCs. (FIG. 3B). Se observó que la expresión de CD40 y CD86 en la membrana celular no aumenta después de la captura del liposoma, permaneciendo a niveles bajos. Después de la exposición a LPS, las DCs aumentan significativamente la expresión de CD40 y CD86 y las DCs cargadas con liposomas con PS aumentan significativamente CD86 (p<0,001) pero no CD40. Por el contrario, los liposomas con PSAB no aumentan significativamente la expresión de CD40 ni CD86 en
20 membrana.
Basándose en resultados previos (Pujol-Autonell, PLOS ONE 2013), se examinó la producción de PGE2 inducida por liposomas en DCs. La concentración de PGE2 se aumentó significativamente en el sobrenadante de DCs cocultivadas con liposomas (vacíos o cargados con péptidos de insulina) en comparación con iDCs (p<0,05) (FIG.
25 3C).
La alteración de DCs para estimular la proliferación de célulaslT autólogas después de la captura de liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina
30 Las DCs generadas a partir de progenitores de médula ósea de ratones NOD fueron > 80 % puras, basándose en la tinción con respecto al marcador de DC CD11c, y la viabilidad fue siempre > 90 %. La pureza y viabilidad de células T fueron siempre por encima del 90 % y 95 % respectivamente (datos no mostrados). Se observó que la captura de liposomas con PS-o PSAB por iDC no aumenta la proliferación de linfocitos T autólogos en comparación con iDC sola (FIG. 4). Después del estímulo por LPS, la proliferación de células T inducida por mDC fue mayor que la
35 proliferación inducida por iDC (p<0,05). Por el contrario, la proliferación de células T inducida por DC cargadas con liposoma con PS o PSAB no aumenta, incluso después del efecto de estos estímulos proinflamatorios. Los resultados indican que la proliferación de células T inducida por DC-liposomas con PS no aumenta, ni siquiera incluso después del efecto de estos estímulos proinflamatorios.
40 Los liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina tratan eficazmente T1D en ratones prediabéticos NOD
Para evaluar la eficacia de liposomas en la prevención de T1D, se trataron ratones NOD con una única dosis de inmunoterapia durante el periodo prediabético (8 semanas de edad). Como se esperaba, los animales del grupo de control simulado desarrollaron diabetes a partir de las 13 semanas de edad y con una incidencia final del 81,3 % 45 (n=16) (FIG. 5A). El tratamiento con liposomas con PS vacíos dio como resultado una incidencia de enfermedad del 83,3 % (n=18) comenzando la enfermedad a las 15 semanas de edad. El tratamiento con liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina autoantigénicos dio como resultado una mejora de la enfermedad, con una incidencia del 50 % (n=12) comenzando también a las 15 semanas de edad. No se encontraron diferencias significativas en el peso corporal (FIG. 5B) de ratones que recibieron la inmunoterapia en comparación con un grupo
50 simulado o grupo tratado con liposomas vacíos.
La insulitis se reduce en ratones tratados con liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina
La insulitis se puntuó para 3-6 animales no diabéticos de cada grupo al final del periodo de seguimiento (30
55 semanas) para determinar cualquier efecto del tratamiento en infiltración de leucocitos en islotes (FIG. 6A). Como se esperaba, los animales del grupo simulado mostraron altas puntuaciones de insulitis (2,34 ± 0,18). Los ratones tratados con liposomas con PS vacíos mostraron un grado de insulitis similar (2,12 ± 0,46). La inmunoterapia con liposomas con PS que encapsulan péptidos de insulina presentó una reducción biológica, aunque no significativa, de la puntuación de insulitis (1,69 ± 0,58) en comparación con el grupo simulado. Además, el análisis del porcentaje de
60 islotes clasificados en cada una de las cinco categorías de infiltración mostró que en ratones tratados con inmunoterapia el 47 % de los islotes permanecieron sin insulitis o con periinsulitis mientras que en el grupo simulado y el grupo de liposomas con PS, el 26 % y el 34 % de los islotes no se destruyeron respectivamente (FIG. 6B).
Los liposomas con PS cargados con péptidos de insulina pueden revertir la diabetes en ratones NOD cuando se administran después de la aparición de la enfermedad
Los liposomas con PS cargados con péptidos de insulina invirtieron la diabetes en ratones NOD cuando se
5 administraron después de la aparición de la enfermedad (FIG. 8 A). Estos ratones sobrevivieron sin administración exógena de insulina alcanzando niveles normales de glucemia. Por el contrario, los ratones tratados con liposomas con PS vacíos no alcanzan normoglucemia (FIG. 8 B) a pesar de la administración continua de insulina.
Los liposomas con PS que encapsulan péptido MOG mejoran EAE
10 Se prepararon liposomas con PS que contenían péptido MOG (autoantígeno específico en MS). Estos liposomas, cuando se inyectaron i.p. en ratones inmunizados C57BL/6, evitaron el desarrollo de la enfermedad (FIG. 9). El tratamiento con liposomas cargados con péptido MOG indujo un aumento de células T reguladoras clásicas, una población de células implicada en el mantenimiento de tolerancia periférica, en el bazo de ratones inmunizados
15 (resultados no mostrados). Tanto los liposomas con PS como la encapsulación de péptido fueron críticos para el efecto terapéutico, ya que los liposomas vacíos no tuvieron ningún efecto. Por lo tanto, los liposomas con PS que encapsulan péptido MOG pueden mejorar EAE, posibilitando un primer ataque menos severo y una rápida recuperación del agravamiento. En consecuencia, los liposomas con PS que encapsulan péptidos MOG pueden ser útiles para el tratamiento de EM.
20 Seguimiento de liposomas después de la administración i.p.
Se detectó señal fluorescente de liposomas en diferentes órganos del sistema inmunitario. Como se esperaba, los liposomas se localizaron en los ganglios linfáticos pancreáticos, el bazo, el páncreas y los ganglios linfáticos 25 mediastinales o paratímicos (FIG. 7).
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