ES2685833T3 - Una prueba diagnóstica de infecciones por Streptococcus agalactiae - Google Patents

Una prueba diagnóstica de infecciones por Streptococcus agalactiae Download PDF

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ES2685833T3
ES2685833T3 ES14722388.7T ES14722388T ES2685833T3 ES 2685833 T3 ES2685833 T3 ES 2685833T3 ES 14722388 T ES14722388 T ES 14722388T ES 2685833 T3 ES2685833 T3 ES 2685833T3
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Monika Brzychczy-Wloch
Sabina GÓRSKA
Ewa BRZOZOWSKA
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Jagiellonian University
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Abstract

Un método para detectar infección en pacientes con cepas de Streptococcus agalactiae, caracterizado en que una muestra del paciente se comprueba para la presencia de la proteína que contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre: Seq. Id. No. 1, Seq. Id. No. 3, Seq. Id. No. 4 y los epítopos contenidos en las mismas o de anticuerpos específicos para dicha proteína, en donde la presencia de dicha proteína o de tales anticuerpos indica infección del paciente con cepas de Streptococcus agalactiae.

Description

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DESCRIPCION
Una prueba diagnóstica de infecciones por Streptococcus agalactiae
El objeto de la invención es una prueba diagnóstica que permite la confirmación de infecciones por Streptococcus agalactiae en mujeres embarazadas. Utiliza una reacción específica de proteínas inmunorreactivas obtenidas de aislados clínicos de Streptococcus agalactiae con anticuerpos presentes en el suero de pacientes.
Streptococcus agalactiae (estreptococo del grupo B, EGB), clasificado como serogrupo B de estreptococos, puede colonizar el aparato digestivo inferior, el ano y la vagina sin producir ningún síntoma de infección. Se confirmó que EGB está presente en la vagina o el recto en aproximadamente el 10-30% de las mujeres embarazadas. La colonización puede ser transitoria, crónica o intermitente. Sin embargo, la presencia de estreptococos del grupo B en la vagina en el embarazo es un factor de riesgo significativo para el desarrollo de infecciones en los recién nacidos. Las infecciones intrauterinas se pueden producir en el curso del embarazo o bien a través de infección ascendente o debido a la aspiración de líquido amniótico infectado por el feto. Podrían inducir muerte fetal, neumonía neonatal, o septicemia. La colonización de un recién nacido también se puede producir durante el parto, pero en tales casos, con frecuencia solo hay colonización asintomática de la piel y membranas mucosas más que desarrollo de infección [1, 2, 3]. Según la Regulación del Ministro de Salud del 23 de septiembre de 2010 respecto a los estándares de conducta y procedimientos médicos mientras se proporcionan servicios de asistencia sanitaria que están dentro del ámbito del cuidado perinatal ejercido sobre mujeres durante embarazo fisiológico, parto fisiológico, puerperio y cuidado del lactante, todas las mujeres embarazadas se deben cribar para la presencia de estreptococos beta hemolíticos en el periodo entre las semanas 33 y 37 de gestación en frotis recogidos del vestíbulo de la vulva y el área anal [4]. La confirmación de la presencia de EGB es una indicación para la implementación de profilaxis antibiótica perinatal en la mujer afectada según las recomendaciones de la Sociedad Ginecológica Polaca de 2008 [5]. Además, a las mujeres embarazadas que desarrollaron una infección del aparato urinario con EGB o el análisis bacteriológico de su orina mostrara un resultado positivo para Streptococcus agalactiae, con un número igual a al menos 1x104 (ufc/ml, es decir, unidades formadoras de colinas) (la denominada bacteriuria asintomática) se les debe dar profilaxis antibiótica perinatal porque estas mujeres habitualmente muestran una colonización vaginal masiva con EGB, que aumenta significativamente el riesgo de desarrollo de septicemia neonatal temprana [1, 2, 5]. La solución propuesta, sin embargo, no es eficaz por completo, ya que no limita el desarrollo de infecciones en neonatos prematuros y no protege del desarrollo de infecciones posteriores que se desarrollan entre 7 días y 3 meses de edad. Además, cada vez con más frecuencia, el problema de las infecciones de etiología de EGB afecta a otros grupos de pacientes, especialmente pacientes inmunocomprometidos o geriátricos [1,2, 6].
El diagnóstico rápido de infecciones producidas por EGB aseguraría la implementación inmediata de terapia de antibióticos, pero actualmente, en el mercado, no hay prueba diagnóstica que permita la confirmación de infección causada por Streptococcus agalactiae.
Hasta ahora, los métodos tradicionalmente empleados de diagnóstico de Streptococcus agalactiae se han basado principalmente en el método de cultivo seguido por características fenotípicas (bioquímicas), serológicas o moleculares de los microorganismos aislados y cultivados. Los resultados obtenidos de estos métodos están disponibles después de varias horas como muy pronto, en el caso de PCR, o después de varios días cuando se trata de métodos convencionales de cultivo [1, 2, 5].
La invención desarrollada se refiere a una nueva prueba diagnóstica que permite la confirmación de infecciones por EGB en mujeres embarazadas, que utiliza una reacción específica de proteínas muy inmunorreactivas obtenidas de aislados de Streptococcus agalactiae con anticuerpos presentes en el suero de pacientes. La prueba innovadora se caracteriza por un tiempo de ensayo relativamente corto, alta sensibilidad y especificidad. Esta prueba es una alternativa a las soluciones actualmente usadas, tal como análisis bacteriológicos para carga de estreptococos del grupo B, basada en el método de cultivo, que constituye el llamado “criterio de referencia” que se caracteriza por baja sensibilidad y un largo tiempo (hasta varios días) que se debe esperar para el resultado y técnicas de biología molecular, incluyendo el método de PCR en tiempo real, que permite obtener el resultado rápidamente aunque es muy caro y requiere equipo especializado.
Todas las mujeres embarazadas son el grupo diana de nuestra prueba. El método desarrollado es adecuado para la aplicación en todos los laboratorios analíticos y/o microbiológicos ya que no requiere el uso de ningún equipo especial. Es posible extender la aplicación de este ensayo para detectar infecciones de etiología por EGB en otros grupos de pacientes (por ejemplo, neonatos, pacientes ambulatorios, pacientes de hospital) y en otros materiales clínicos (por ejemplo, plasma, líquido cefalorraquídeo).
Un ejemplo de una prueba conocida, el documento WO2009122388A1, es una prueba basada en el análisis del ácido nucleico de cepas de Streptococcus agalactiae aisladas de sangre, garganta, glándulas mamarias, nariz, o vagina de mujeres. En la prueba presente, la secuencia del marcador es un gen de EGB llamado ssrA
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Otra solución similar se describe en el documento US20040009574A1. La solución se refiere a la identificación de una secuencia de nucleótidos que codifica proteínas responsables para la síntesis de polisacáridos capsulares que son específicos para cepas de Streptococcus agalactiae.
El documento US8137673B2 se dirige a la proteína y su secuencia de nucleótidos como un potencial portador de vacuna y un marcador diagnóstico para los grupos A y B de cepas de Streptococcus. La proteína de unión a fibronectina I es la proteína marcadora.
Otras potenciales proteínas marcadoras en infecciones por Streptococcus agalactiae pueden ser diferentes polipéptidos descritos en los documentos US7262024B2 y uS20120141521A1.
Una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: Seq. No. 1, Seq. No. 2, Seq. No. 3, Seq. No. 4 y los epítopos contenidos en las mismas se ha aislado favorablemente de una cepa de Streptococcus agalactiae, especialmente procedente de una muestra de sangre, orina, frotis vaginales, ano, oído, boca, contenidos bronquiales o líquido cefalorraquídeo obtenida de un paciente infectado con este patógeno.
El objeto de la invención es un método para detectar infección en un paciente con cepas de Streptococcus agalactiae, caracterizado en que una muestra del paciente se comprueba para la presencia de la proteína que contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de: Seq. Id. No. 1, Seq. Id. No. 2, Seq. Id. No. 3, Seq. Id. No. 4 y los epítopos contenidos en las mismas o de anticuerpos específicos para dicha proteína. La presencia de dicha proteína o de tales anticuerpos indica infección con cepas de Streptococcus agalactiae del paciente. Preferiblemente, la prueba se lleva a cabo usando métodos inmunoquímicos conocidos, especialmente inmunotransferencia o ELISA. Preferiblemente, se usa suero humano como la muestra de prueba, especialmente en una dilución de 500-10.000 veces.
Un objeto adicional de la invención es un uso de un kit que comprende la proteína como se ha definido anteriormente o anticuerpos específicos para dicha proteína para la detección de infección con cepas de Streptococcus agalactiae.
En la investigación sobre la identificación de proteínas inmunorreactivas que pertenecen a cepas de Streptococcus agalactiae, que producen infecciones en seres humanos, las proteínas de secuencias de aminoácidos marcadas con los números de identificación de NRID1, NRID2, NRID3 y NRID4 (Fig. 1) eran muy inmunorreactivas solo con sueros de individuos que experimentaron infección por EGB y portadores de bacterias Streptococcus agalactiae. No se observó reactividad similar para sueros de no portadores de estas cepas bacterianas.
El método revelado es una solución para el diagnóstico rápido, sensible y específico de infección causada por Streptococcus agalactiae. El enfoque en la prueba desarrollada es el uso de secuencias de aminoácidos muy inmunorreactivas (NRID1, NRID2, NRID3, NRID4) que pertenecen a proteínas de cepas de Streptococcus agalactiae, que son las proteínas sobre las que se produce la inducción de anticuerpos naturales durante el proceso de infección y cuyas secuencias pueden servir como marcadores para la identificación de estas infecciones en seres humanos. El uso de las secuencias de NRID1, NRID2, NRID3 y NRID4 no solo está limitado a la prueba diagnóstica misma, sino también, debido a sus propiedades inmunógenas, se pueden usar como portadores para vacunas contra infecciones por EGB. Los epítopos de las secuencias de NRID1, NRID2, NRID3 y NRID4 se pueden usar además para generar anticuerpos monoclonales muy específicos y para desarrollar una prueba diagnóstica incluso más rápida e igualmente precisa.
El método según la invención comprende métodos inmunoquímicos tal como inmunotransferencia, pero no está solo restringido a este método y puede incluir otras técnicas, tal como enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA).
Para explicar la esencia de la invención mejor, la descripción se ha suplementado con las figuras adjuntas y los ejemplos presentados posteriormente.
La figura 1 muestra las secuencias de aminoácidos de las proteínas inmunorreactivas de Streptococcus agalactiae.
La figura 2 muestra los resultados de un inmunoensayo de una reacción de anticuerpos de suero humano obtenidos de una mujer embarazada infectada con EGB (SB8) con proteínas de cepas de Streptococcus agalactiae, considerando la división en los grupos estudiados.
Ejemplo 1. La identificación de secuencias de aminoácidos muy inmunorreactivas que pertenecen a cepas de Streptococcus agalactiae
Las cepas clínicas de Streptococcus agalactiae se dividieron en cuatro grupos (Tabla 1):
Grupo 1 - cepas aisladas de la orina de neonatos con síntomas de infección del aparato urinario (14, 15, 18, 21, 27, 47, 54, 55, 56, 57)
Grupo 2 - cepas aisladas de la orina de pacientes adultos con síntomas de infección del aparato urinario (305167, 309192, d11, d12, d88, d96, d122, d147, d165)
Grupo 3 - cepas aisladas de sangre, oído o boca de neonatos con septicemia (4, 12, 13, 25, 26, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 42, 43, 44, 50, 52, 53)
5 Grupo 4 - cepas de la carga de neonatos y mujeres embarazadas sin síntomas de infección con EGB y otras cepas de EGB (1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 36, 39, 45, 46, 48, 49, 51, 58, 59, 60)
Tabla 1. Características de los aislados clínicos de Streptococcus agalactiae divididos en grupos de prueba (grupo 1, 10 grupo 2, grupo 3) y un grupo control (grupo 4).
Número de aislado de EGB
Serotipo Genes de la familia Alp Fenotipo de resistencia Tipo ST Material clínico Síntomas clínicos
Grupo 1 - Cepas de S. agalactiae aisladas de neonatos con síntomas de infección del aparato urinario
14
/5279/08 la épsilon - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
15
/5303/08 la épsilon - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
18
/13695/08 la épsilon - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
21
/13608/08 Ib bca - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
27
/9353/08 II rib - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
47
/306723 III alp2 - ST-23 Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
54
/1716/08 V alp2 - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
55
/1736/08 V alp2 cMLSb - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
56
/2992/08 V rib - - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
57
/13793/08 V alp3 cMLSb - Orina de recién nacido Bacteriuria (>105 ufc/ml)
Grupo 2 - Cepas de S. agalactiae aisladas de pacientes adultos con síntomas de infección del aparato urinario
289370
II rib - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
305167
Ia épsilon - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
309192
ii bca - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d11
V alp2 cMLSb - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d12
III rib - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d88
V alp2 - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d96
la épsilon - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d122
Ib bca - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d147
III rib cMLSb - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
d165
III alp2/3 - - Orina-paciente adulto Bacteriuria (>105 ufc/ml)
Grupo 3 - Cepas de S. agalactiae aisladas de neonatos con septicemia
4
/305245 II bca ST-106 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
12
/306735 la épsilon ST-23 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
13
/CM 169 la bca ST-220 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
25
/CM 47 ii rib cMLSb ermB ST-19 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)/muerte
34
/5886/09 iii rib ST-17 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)_______________
35
/3634/08 III rib ST-17 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
37
/L1-181 III rib ST-17 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
38
/4504/08 III rib ST-19 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
40
/W2/18 III alp2 ST-23 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
41
/CM 173 III bca cMLSb ermB ST-22 Frotis de boca de recién nacido Septicemia del recién nacido (EOD)/muerte
42
/CM 176 III rib ST-220 Frotis de boca de recién nacido Septicemia del recién nacido (EOD)/muerte
43
/CM 185 III rib ÍMLSb ST-410 Frotis de oído de recién nacido Septicemia del recién nacido (EOD)
44
/CM 28 III rib ST-286 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
50
/S1/4 V alp3 ST-1 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)/muerte
52
/3514/08 V rib ST220 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
53
/14030/08 V rib fenotipo M ST-638 Sangre venosa neonatal Septicemia del recién nacido (EOD)
Grupo 4 - Cepas de S. agalactiae de carga de recién nacidos y mujeres embarazadas sin síntomas de infección y otras cepas de EGB
1
/7/P/2a Ia épsilon - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
3
/28/0/3a iii rib - - Frotis anal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
5
/3/P/2a V alp3 cMLSb ermB - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
6
/10/P/3a II rib - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
7
/42/P/3a V alp2 - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
8
/9/0/2a Ib bca - - Frotis anal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
9
/14/P/3a V alp3 cMLSb ermB - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
10
/23/P/3a II rib fenotipo M mefA/E - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
11
/25/P/1a la épsilon - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Estado portador en embarazo
16
/13445/07 la épsilon - - Frotis de boca de recién nacido Colonización de neonato
17
/11277/08 la rib - - Frotis de oído de recién nacido Colonización de neonato
19
/2337/08 la épsilon - Frotis de boca de recién nacido Colonización de neonato
20
/5338/08 la - - - Frotis de boca de recién nacido Colonización de neonato
22
/D121 Ib épsilon - - Frotis cervical Inflamación
23
/2107/08 Ib bca - - Frotis de boca de recién nacido Colonización de neonato
24
/CM 184 Ib bca - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Colonización de neonato
28
/13640/07 II bca - ST-10 Contenido bronquial de neonato Neumonía
29
/14041/07 II rib - - Frotis de boca de recién nacido Colonización de neonato
30
/14191/07 II bca - Frotis de oído de recién nacido Colonización de neonato
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/2341/08 II rib - - Frotis de boca de recién nacido Colonización neonato de
32
/D120 II épsilon fenotipo M mefA/E - Frotis vaginal Inflamación
33
/D126 II épsilon - - Frotis vaginal Inflamación
36
/13723/07 III rib - ST-358 Frotis de oído de recién nacido Colonización neonato de
39
/D136 III épsilon - - Frotis vaginal Inflamación
45
/3A-012 III rib - ST-447 Frotis vaginal - Mujer embarazada Colonización neonato de
46
/CM49 III rib - ST-148 Frotis vaginal - Mujer embarazada Colonización neonato de
48
/CM 87 III rib - ST-19 Frotis de oído de recién nacido Colonización neonato de
49
/CM 3 IV épsilon - - Frotis vaginal - Mujer embarazada Colonización neonato de
51
/D156 V épsilon - - Frotis vaginal Inflamación
58
/104112 III alp2 - - ATCC Cepa de referencia
59
/2134 II rib - - DSM Cepa de referencia
60
/10511 V rib - - ATCC Cepa de referencia
Las cepas de Streptococcus agalactiae se cultivaron en medio sólido BHI en condiciones aerobias durante 24 h a 37°C. La masa celular después de centrifugación se suspendió en PBS a una concentración de A600 = 1,0. Después de la centrifugación el precipitado se resuspendió en tampón Tris (60 mM, pH 6,8) que contenía SDS al 2%. Las muestras se sonicaron después durante 5 minutos. El sobrenadante de proteína obtenido después de la centrifugación se precipitó con 3 volúmenes de etanol al 95% durante la noche a 4°C. Las muestras se centrifugaron y el precipitado se disolvió en agua. El método de ensayo BCA (llamado ensayo del ácido bicinconínico) [7] sirvió para determinar la concentración de las proteínas aisladas.
Electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes en presencia de SDS según Laemmli [8].
La separación electroforética de proteínas se llevó a cabo según el método descrito por Laemmli (1970) [7] en gel concentrador al 5% y gel separador al 12,5%, en tampón de electrodo pH 8,6. Las muestras (10 |jg) antes de la aplicación al gel (volumen máximo de 10 jl) se desnaturalizaron durante 5 minutos en un baño caliente hirviendo. La separación de proteínas se llevó a cabo durante aproximadamente 80 minutos, inicialmente al amperaje de 10 mA en cada placa con dimensiones de 83 x 73 x 0,75 mm, y 20 mA después de la entrada en el gel concentrador. La electroforesis se llevó a cabo en kit Mini PROTEAN® 3 Cell de Bio-Rad para electroforesis. Después de la electroforesis, los geles se tiñeron durante 30 minutos en azul brillante de Coomassie R-250 al 0,1% (v/v) en metanol al 40% (v/v) y ácido acético al 10% (v/v).
Inmunotransferencia [9]
El gel después de la electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes en presencia de SDS se transfirió a tampón Tris/Gly con metanol al 10% (v/v) de pH 8,3 (tampón de transferencia) durante 15 minutos. La membrana, Immobilon-P (PVDF por Millipore), se empapó durante 15 segundos en MeOH al 100%, 2 minutos en agua Milli-Q y 2 minutos en tampón de transferencia. La transferencia se realizó durante 1 h a 100 V usando el kit de Bio- Rad. Después de la transferencia la membrana se tiñó con rojo Ponceau S y después el exceso de colorante se destiñó en agua Milli-Q. La inmunotransferencia se realizó con proteínas unidas en una membrana de Immobilon-P hidrofóbica. Los sitios libres en la membrana se bloquearon con seroalbúmina bovina (BSA) al 1% en tampón Tris/HCl pH 7,5 que contenía NaCl 50 mM y Tween-20 al 0,05% (tampón TBS-T) durante 1 h a 37°C. El exceso de BSA se lavó con tBs- T, 1 x 15 minutos y 2 veces durante 5 minutos. Posteriormente, la reacción se realizó con 24 sueros humanos (incluyendo 16 sueros que venían de mujeres embarazadas con carga de EGB y pacientes con infección; 8 sueros constituyeron control y venían de mujeres embarazadas que no eran portadoras de EGB), diluidos en el intervalo de 500-10.000 veces en TBS-T con BSA al 1% durante 2 h a 37°C con agitación. El exceso de anticuerpos no unidos se lavó con TBS-T. La siguiente fase del experimento fue la reacción con anticuerpos marcados con enzima -fosfatasa alcalina- en TBS-T durante 1 h a 37°C suplementado con suero de cabra al 5% (v/v). El exceso de conjugado se lavó con TBS-T (1 x 15 minutos, 4 veces durante 5 minutos). La imagen se desarrolló usando sustratos para fosfatasa alcalina: NBT (nitrotetrazol), BCIP (fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo) en tampón TBS con la adición de iones Mg2+, pH 9,5. Después de obtener la imagen (después de aproximadamente 15-20 segundos) la reacción se terminó transfiriendo la membrana a agua Milli-Q.
Resultados
Como resultado de los experimentos realizados se obtuvo la imagen de las proteínas inmunógenas de cepas de Streptococcus agalactiae. Las imágenes de proteínas reactivas de las cepas ensayadas se diferenciaban entre sí, y un análisis más detallado reveló la correlación entre el material clínico y la reactividad con los sueros. Se ha encontrado que todas las cepas aisladas de la orina de neonatos (14, 15, 18, 21, 27, 47, 54, 55, 56, 57) y de orina de pacientes

Claims (3)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un método para detectar infección en pacientes con cepas de Streptococcus agalactiae, caracterizado en que una muestra del paciente se comprueba para la presencia de la proteína que contiene una secuencia de
    5 aminoácidos seleccionada de entre: Seq. Id. No. 1, Seq. Id. No. 3, Seq. Id. No. 4 y los epítopos contenidos en
    las mismas o de anticuerpos específicos para dicha proteína, en donde la presencia de dicha proteína o de tales anticuerpos indica infección del paciente con cepas de Streptococcus agalactiae.
  2. 2. El método según la reivindicación 1, en donde la prueba se lleva a cabo usando métodos inmunoquímicos
    10 conocidos, especialmente inmunotransferencia o ELISA.
  3. 3. El método según la reivindicación 1, en donde se usa una muestra de prueba de suero humano, especialmente en una dilución de 500-10.000 veces.
    15 4. Un uso de un kit que comprende la proteína que contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre:
    Seq. Id. No. 1, Seq. Id. No. 3, Seq. Id. No. 4 y los epítopos contenidos en las mismas o de anticuerpos específicos para dicha proteína para la detección in vitro de infección con cepas de Streptococcus agalactiae.
    Scq. Id No 1
    MSTSFENKAT
    RTVFNQKFGE
    GQDWKLTAEV
    AELTVKD GE A
    EEQLVGSKAG
    DDELAKDIDD
    EIVELPEEMV
    QADADKRVKT
    LLSADMLKHD
    NRGIITFTIS
    EALYENALNL
    VTKPEVKLGD
    AQGDTWIDF
    QTVDVNVTFP
    EVETLDELKA
    HDEVHRAMNE
    NLVTEAIAAA
    IAMKKAVDVI
    QDEIKPALDQ
    VLPKAYEAAV
    YKDLSVEVDA
    VGSVDGVEFD
    EDYQAEDLAG
    KYRKELESAK
    FMGNMQRQGI
    EGFEATDEEI
    TSSATVK
    AFNKVKKDLN
    AELGLDWAQ
    SKEVSDEEVD
    GGKGDNFSLE
    KDAKFVTTTH
    EIAFDDAVEG
    SPEMYFQLTG
    EKEITDLASE
    VPGFRKGHMP
    PKIDWSMEK
    AKVERERNNL
    LGSGQFIPGF
    EVKTKEVPAL
    AATELAVANA
    TTEEDLHKQY
    YNMEADQVRG
    Seq. Id. No. 2
    MSIITDVYAR
    LRDGDKSRYG
    PNKGKLGANA
    NGGSHSDAPI
    AVGDEGGFAP
    DAERKVYDYG
    DGWKALTERL
    LTETFEAIEM
    RTDRIAKYNQ
    EVLDSRGNPT
    GLGTQKAVDN
    ILGVSIAVAR
    AFQEFMIMPV
    KFEGTEDGVE
    KFEGEGGAVR
    GGRVQLVGDD
    AKEAGYTAVV
    LLRIEDQLGE
    LEVEVYTESG
    VNNVIAEAII
    AAADYLEVPL
    GAPTFKEALR
    TILKAIEAAG
    TAAEQIDYLE
    FFVTNTDYLA
    SHRSGETEDS
    VAQYKGIKSF
    AFGRGMVPSG
    GYDVRDQQAI
    YSYLGGFNTK
    WGAEVFHALK
    YEAGENGIMI
    ELVNKYPIIT
    RGIKEEAANS
    TIADIAVATN
    YNLKK
    ASTGEHEAVE
    DRAMIALDGT
    VLPTPMMNII
    KILKERGLET
    GFDCASSEFY
    IEDGMDENDW
    ILIKVNQIGT
    AGQIKTGSLS
    Seq. Id. No. 3
    MAYKTIYPYT
    QLHKVADLLR
    KFLKPVPLES
    TMLLKHASIC
    AGVCLTGSER
    IFFARLYNAG
    TLAPLSSAGA
    TKANPIYNQE
    KKVAAQTETG
    LVFTPNSD
    NEVLHEFDNI
    KDRDKYAEVM
    PNGEAYYLKQ
    PASAQAFEDL
    GGASIAAEAG
    QVCTSSKRFI
    KDDVLKQIKL
    IFGPVASTYK
    MTFINSGWTS
    SDSDLEQSLD
    TKDMGKLFTE
    AVGVLLAVEP
    VREAGAPEGA
    KNLKKSSMEL
    VMADKYDEFV
    AVDHGAEVVF
    VDTEEEAIAL
    LPELPFGGIK
    IAHALYKTWR
    AQGEVDLCAD
    WNFPFYQIMR
    FKNIFASYDQ
    GGNDAFLILD
    NMWETFKSA
    GNDTIDHPGN
    ANDSSYGLGS
    NSGYGRELSQ
    KEDNVEERQN
    IADYYADNGQ
    VFAPNFIVGN
    VSNLISDPRV
    DADFDLLSKT
    KWGDPMDSET
    FVMPTVLTNI
    TVFSSDPEHA
    LGFDAFVNEH
    Seq. Id. No. 4
    MAKEKYDRSK
    A SIDA APEER
    QMDGA1LWA
    ELVEMEIRDL
    EYIPEPERDT
    IKEDIQKAVV
    GSINPHTRFK
    GTEMVMPGDN
    PHVNIGTIGH
    ERGIT1NTAH
    STDGPMPQTR
    LSEYDFPGDD
    DKPLLLPVED
    TGVEMFRKQL
    GEVYILSKEE
    VTEEVELIHP
    VDHGKTTLTA
    VEYETEKRHY
    EHILLSRQVG
    LPVIQGSALK
    VFSITGRGTV
    DEGLAGDNVG
    GGRHTPFFNN
    IAVEQGTTFS
    AITTVLARRL
    AHIDAPGHAD
    VKHLIVFMNK
    ALEGDEKYED
    ASGRIDRGTV
    VLLRGVQRDE
    YRPQFYFRTT
    IREGGRTVGS
    PTSVNQPKDY
    YVKNMITGAA
    VDLVDDEELL
    IIMELMSTVD
    RVNDEVEIVG
    IERGQVLAKP
    DVTGSIELPA
    GIVSEIEA
    Fig. 1
    Grupo 1 - Cepas de S. agalactiae aisladas de neonatos con síntomas de infección del aparato urinario
    imagen1
    Grupo 2 - Cepas de S. agalactiae aisladas de pacientes adultos con síntomas de infección del aparato urinario
    imagen2
    Grupo 3 - Cepas de S. agalactiae aisladas de neonatos con septicemia
    imagen3
    imagen4
    Fig. 2
ES14722388.7T 2013-06-28 2014-03-28 Una prueba diagnóstica de infecciones por Streptococcus agalactiae Active ES2685833T3 (es)

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