ES2687286T3

ES2687286T3 - Métodos y composiciones para tratar la leucemia

Info

Publication number: ES2687286T3
Application number: ES14754927.3T
Authority: ES
Inventors: Sheng-Yung Liu; Wu-Che Wen; Chih-Ming Chen
Original assignee: Golden Biotechnology Corp
Current assignee: Golden Biotechnology Corp
Priority date: 2013-02-20
Filing date: 2014-02-20
Publication date: 2018-10-24
Anticipated expiration: 2034-02-20
Also published as: DK2958558T3; EP2958558A2; US20150025135A1; TW201446240A; ZA201506330B; AU2014218938A1; EP2958558B1; BR112015019924A2; EP2958558A4; CN108309961A; KR102054038B1; JP2016509058A; WO2014130619A3; AU2014218938B2; WO2014130619A2; TWI597061B; MX2015010728A; CA2901745A1; HK1255453A1; PL2958558T3

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura: en donde cada X e Y es independientemente oxígeno, NR5 o azufre; R es un hidrógeno o C(>= O)alquilo C1-C8; cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente un hidrógeno, metilo opcionalmente sustituido o (CH2)m- CH3; R4 es NR5R6, OR5, OC(>=O)R7, C(>=O)OR5, C(>=O)R5, C(>=O)NR5R6, halógeno, lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo, glucosilo, en donde la lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo y glucosilo están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados entre NR5R6, OR5, OC(>=O)R7, C(>=O)OR5, C(>=O)R5, C(>=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8 y haloalquilo C1-C8; cada R5 y R6 es independientemente un hidrógeno o alquilo C1-C8; R7 es un alquilo C1-C8, OR5 o NR5R6; m >= 1-12; y n >= 1-12; o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptablespara su uso en el tratamiento o la reducción del riesgo de leucemia en un paciente.

Description

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DESCRIPCION

Métodos y composiciones para tratar la leucemia Antecedentes de la invención

La leucemia es un tipo de cáncer de la sangre o médula ósea caracterizado por un aumento anormal de glóbulos blancos inmaduros llamados "blastos". Leucemia es un término amplio que abarca un espectro de enfermedades. A su vez, forma parte del grupo aún más amplio de enfermedades que afectan la sangre, la médula ósea y el sistema linfático, que se conocen como neoplasmas hematológicos.

Clínica y patológicamente, la leucemia se subdivide en una variedad de grandes grupos. La primera división es entre sus formas agudas y crónicas. La leucemia aguda es una familia de enfermedades graves relacionadas con un diagnóstico original de leucemia. Las formas de leucemia aguda incluyen: leucemia mieloide aguda, leucemia aguda eritroide, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T, leucemia/linfoma de linfocitos T en adultos, leucemia/linfoma linfoblástico agudo de precursores T y crisis blástica de leucemia mielógena crónica. La leucemia crónica es un aumento de glóbulos blancos anormales. Se diferencia de la leucemia aguda, y se clasifica como mielógena o linfocítica. La leucemia crónica puede referirse a: leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de tricoleucocitos. Además, las enfermedades se subdividen según el tipo de célula sanguínea afectada. Esta división divide las leucemias en leucemias linfoblásticas o linfocíticas y leucemias mieloides o mielógenas.

Geethangili et al., Review of Pharmacological Effects of Antrodia camphorata and Its Bioactive Compounds, Evidence- Based Complementary And Alternative Medicine vol. 2011: 1-17 (2011), describe los efectos farmacológicos de determinados extractos crudos de Antrodia camphorata que presentan actividad citotóxica contra células de leucemia murina P-388. Sin embargo, Geethangili et al. no describen ni dan a conocer los compuestos de la presente descripción para utilizar en el tratamiento o reducción del riesgo de leucemia en un paciente. De hecho, Geethangili et al. describen además ácidos zhankuicos A y C aislados de los extractos de Antrodia camphorata y no los análogos de un compuesto de ciclohexenona descritos en la presente memoria, que presentan actividad citotóxica contra células de leucemia murina P-388.

Tzong-Huei Lee et al., A New Cytotoxic Agent From Solid-State Fermented Mycelium of Antrodia camphorata, Planta Medica 73(13): 1412-1415 (2007), describe un compuesto de ciclohexanona que presenta citotoxicidad activa contra determinados tipos de cáncer de mama, cáncer de hígado, estirpes celulares de cáncer de próstata pero no estirpes celulares de leucemia.

El documento EP 2 329 816 A1 describe un compuesto MMH01, aislado de los extractos de Antrodia camphorata, para inhibir el crecimiento de las células cancerosas de la leucemia humana (U937). Sin embargo, MMH01 no es un análogo de un compuesto de ciclohexenona de la presente descripción.

Hseu You-Cheng et al., Induction of apoptosis by Antrodia camphorata in human premyelocytic leukemia HL-60 cells, Nutrition And Cancer 48(2): 189-197 (2004), describen que determinados caldos de cultvo fermentados de A. camphorata tienen capacidad para provocar apoptosis en células humanas HL-60 cultivadas de leucemia premielocítica. Sin embargo, Hseu You-Cheng et al. no describen ni dan a conocer el uso de un determinado compuesto de ciclohexenona para tratar o reducir el riesgo de leucemia en un paciente.

Compendio de la invención

En un aspecto proporcionado en la presente memoria es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura:

imagen1

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno, NR5 o azufre;

R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C-i-Cs;

cada R1, R2 y R3 es independientemente un hidrógeno, metilo opcionalmente sustituido o (CH2)m-CH3;

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R4 es NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NRsR6, halógeno, lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1- Ca, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo, glucosilo, en donde la lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo y glucosilo están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados entre NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8,

cicloalquilo C3-C8y haloalquilo C3-C8;

cada R5 y R6 es independientemente un hidrógeno o alquilo C1-C8;

R7 es un alquilo C1-C8, OR5 o NR5R6; m = 1-12; y

n = 1-12; o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento o reducción del riesgo de leucemia en un paciente.

Breve descripción de los dibujos

Las nuevas características de la invención se exponen con particularidad en las reivindicaciones adjuntas. Se obtendrá una mejor comprensión de las características y ventajas de la presente invención haciendo referencia a la siguiente descripción detallada que expone realizaciones ilustrativas, en las que se utilizan los principios de la invención y los dibujos adjuntos de los cuales:

La FIG. 1 muestra ejemplos de resultados del compuesto 1 que estimula la fosforilación de ERK en las estirpes celulares HepG2, A549 y H838. A las estirpes celulares HepG2, A549 y H838 se les privó de suero durante la noche y se expusieron a las concentraciones indicadas de compuesto 1 durante 1 h. Todos los lisados celulares se inmunotransfirieron a continuación con un anticuerpo fosfo-ERK1/2 y se volvieron a sondar con un anticuerpo contra p-actina. Se sondó una membrana duplicada con un anticuerpo ERK1/2 completo. El nivel de expresión relativa de p-ERK1/2 contra p-actina se cuantificó por densitometría. Los experimentos se realizaron por triplicado.

Las FIG. 2A-C muestran resultados efectivos ilustrativos del tratamiento de Ras que inhibe el compuesto 1 del ejemplo en estirpes de células cancerosas. (2A) Las células A549 y H838 se calentaron con diferentes concentraciones de compuesto 1 y se cultivaron en suero (SBF al 10%) o sin suero (sin SBF) durante 24 h. (2B) H838, (2C) las células HepG2 y K562 se trataron con diferentes concentraciones de compuesto 1 y se cultivaron sin suero (sin FBS) durante 24 h. Todos los lisados celulares se inmunotransfirieron a continuación con un anticuerpo Ras. Una membrana duplicada se sondó con un anticuerpo GAPDH. El nivel de expresión relativa de Ras sin transformar a trasformada se cuantificó por densitometría. Los experimentos se realizaron tres veces. Las barras representan la media ± SEM. * P <0,05, ** P <0,01.

Las Figuras 3A-C presentan resultados efectivos ilustrativos del compuesto 1 que inhibe la actividad de prenilación de farnesiltransferasa in vitro y compite con FPP dentro de las células. (3A) Estructura química del compuesto 1 y FPP. (3B) Células H838 estimuladas con compuesto 1 o FPP como se indica durante 24 h. Todos los lisados celulares se inmunotransfirieron a continuación con un anticuerpo Ras. Una membrana duplicada se sondó con un anticuerpo GAPDH. El nivel de expresión relativa de Ras sin trasformar a transformada se cuantificó por densitometría. Los experimentos se realizaron tres veces. (3C) SDS-PAGE de H-Ras-GST marcada con fluorescencia después de la prenilación con NBD-FPP mediada por FTasa. El recuadro inferior muestra el mismo gel teñido con azul de Coomassie.

Las FIG. 4A-D muestran la estructura modelo de FTasa humana en el complejo con el compuesto 1, sustrato L739 derivado de CIFM, 750 peptidomimético y FPP. (4A) Viñetas en cinta de FTasa complejada con el compuesto 1. (4B) Unión simultánea del compuesto 1 (verde) y FPP (violeta) a FTasa. (4C) Viñetas en cinta de FTasa complejada con antroquinonol. Los supuestos enlaces de hidrógeno están representados por líneas discontinuas. (4D) Viñetas en cinta de FTasa complejada con el compuesto 1 y L739,750 derivados de CIFM.

Las FIG. 5A-C muestran resultados efectivos ilustrativos de la actividad autofágica que provoca el compuesto 1 en las células H838. Las células H838 se trataron con diferentes concentraciones de compuesto 1 y se cultivaron sin suero. (5A) Las células se recogieron 0, 24 y 48 h después de los tratamientos y se sometieron a inmunotransferencia con anticuerpo Beclin-1. (5B) Todos los lisados celulares se prepararon 24 h después de los tratamientos y se sometieron a inmunotransferencia con un anticuerpo LC3B. Una membrana duplicada se sondó con un anticuerpo GAPDH. El nivel de expresión relativa de LC3B-1 a LC3B-II se cuantificó por densitometría. (5C) La distribución de LC3B endógena en autofagosomas se detectó por microscopia confocal. Los experimentos se realizaron tres veces. Las barras representan la media ± SEM. * P <0,05, ** P <0,01

La FIG. 6 muestra una correlación ilustrativa entre la actividad citotóxica del compuesto 1 con los contenidos de proteína de Ras y EGFR en estirpes celulares de cáncer. Todos los lisados celulares se resolvieron por SDS-PAGE y se inmunotransfirieron con un anticuerpo Ras. Las membranas duplicadas se sondaron con un anticuerpo contra EGFR o GAPDH. Los experimentos se realizaron tres veces.

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La FIG. 7 muestra un ejemplo de diagrama esquemático que ilustra el mecanismo de acción propuesto del compuesto 1. Las líneas acabadas en puntas de flecha indican activación y aumento, mientras que las que acaban en topes perpendiculares indican inhibición y disminución. Un color gris con un círculo punteado indica moléculas que no han sido validadas. Los bordes discontinuos indican interacciones que no han sido validadas. "P" indica fosforilación.

Descripción detallada de la invención

Las proteínas Ras son pequeñas GTPasas que parecen estar involucradas en múltiples vías de señalización, lo que conduce a efectos complejos y divergentes. La activación de las proteínas Ras está regulada por modificación tras la traducción, que incluye la prenilación de Ras mediada por FTasa. La prenilación es esencial para la función normal y la actividad transformante de la superfamilia de proteínas Ras. Por lo tanto, los agentes que bloquean la prenilación de Ras se han desarrollado para interferir con la proliferación y la supervivencia de las células cancerosas. El compuesto 1 a modo de ejemplo descrito en la presente memoria es un nuevo derivado de quinona farnesilado, aislado de Antrodia camphorata. Los estudios de acoplamiento demostraron que la cola de farnesil isoprenoide del compuesto 1 se inserta en la cavidad central de la subunidad p de la FTasa similar al grupo farnesilo de FPP (véase la FIG. 5). Los ensayos de inhibición de FTasa pusieron de manifiesto que el compuesto 1 inhibía FTasa en función de la dosis in vitro (véase el ejemplo 10). Además, la relación de Ras sin procesar a procesadas aumentó después de la administración del compuesto 1 (véase la FIG. 2). Todos estos datos respaldan que el compuesto ejemplar 1 y similares interactúan con FTasa para evitar la transformación de Ras dentro de las células cancerosas.

Los valores IC50 de compuesto 1 en las estirpes celulares cancerosas descritas en la presente memoria se ha demostrado que se correlacionan con la expresión de Ras y el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). Los datos descritos en la presente memoria sugieren que el contenido de proteína de Ras y EGFR, más que la presencia de mutaciones en los genes Ras y EGFR, es el principal determinante de la citotoxicidad inducida por antroquinonol en células cancerosas.

El modelado molecular y los métodos basados en el acoplamiento se usaron para demostrar la posibilidad de interacción entre GGTasa-1 y el compuesto 1. Los estudios previos pusieron de manifiesto que el compuesto 1 activa la actividad antitumoral mediante varias moléculas de señalización incluidas AMPK, PI3K y mTOR (véase, p. ej., Kumar V. B., et al., Mutat. Res. 10 Feb. 2011; 707 (1-2): 42-5229; Yu C-C, et al., The Journal de nutritional biochemistry 23 (8): 900-907; Chiang P-C, et al., Biochemical Pharmacology 79 (2): 162-171). En la presente memoria, en algunas realizaciones se proporcionan ejemplos de compuestos de ciclohexenona (p. ej., compuesto 1) que inhiben la transformación de Ras por inhibición de la actividad de FTasa. Las posibles vías de señalización que contribuyen a la actividad antitumoral mediada por el compuesto 1 se resumen en la FIG. 7. La ruta Ras-PI3K-Akt-mTOR, que está relacionada con la proliferación, motilidad, metabolismo y diferenciación, se inhibe en respuesta al tratamiento del compuesto 1. Otras moléculas de señalización clave, tales como ERK1/2 y AMPK, se indujeron en respuesta al tratamiento del compuesto 1. Varios estudios han encontrado que ERK1/2 y AMPK están implicados en diferentes aspectos de muerte celular apopóptica y autofágica. Se deduce que múltiples vías de señalización se activan simultáneamente en respuesta a la estimulación del compuesto 1. Por lo tanto, en algunas realizaciones, los compuestos de ciclohexenona proporcionados en la presente memoria (p. ej., el compuesto 1) favorecen los efectos anticancerosos regulando la interferencia en una red de señalización compleja que da como resultado apoptosis y autofagia.

La inhibición de la actividad preniltransferasa suprime la prenilación de múltiples moléculas de señalización, interfiriendo con la señalización aguas abajo. Ras es una proteína de señalización fundamental en una red compleja que regula varios aspectos del crecimiento celular normal y la transformación maligna. La activación de mutaciones en Ras, especialmente K-Ras, se produce con frecuencia en cánceres humanos. Por lo tanto, elegir como objetivo a Ras es una estrategia prometedora para tratar el cáncer. Basándose en la caracterización bioquímica y el análisis de acoplamiento molecular, los compuestos de ciclohexenona proporcionados en la presente memoria (p. ej., el compuesto 1) inhiben la transformación de Ras mediante la inhibición de la enzima farnesiltransferasa, dando finalmente como resultado la muerte celular.

La leucemia es un cáncer maligno de la médula ósea y la sangre. Se caracteriza por el crecimiento incontrolado de las células sanguíneas. La leucemia aguda es una enfermedad que progresa rápidamente y que da como resultado la acumulación masiva de células inmaduras y sin función en la médula y la sangre. La médula a menudo ya no puede producir suficientes glóbulos rojos y blancos normales y plaquetas. La anemia, una insuficiencia de glóbulos rojos, se desarrolla en prácticamente todos los pacientes con leucemia. La falta de glóbulos blancos normales afecta la capacidad del cuerpo para combatir infecciones. Una escasez de plaquetas produce hematomas y hemorragia fácil. Por otro lado, la leucemia crónica evoluciona más lentamente y conduce a una proliferación no regulada y, por lo tanto, a una marcada sobreexpansión de un espectro de células maduras (diferenciadas).

En algunas realizaciones, se proporcionan en la presente memoria compuestos de ciclohexenona para tratar o reducir el riesgo de un paciente con leucemia administrando un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria al paciente (p. ej., una persona). Los compuestos de ciclohexenona proporcionan utilidad terapéutica a un paciente que está siendo tratado por leucemia (véanse los ejemplos 1-13). Los compuestos de ciclohexenona, en algunas realizaciones, se obtienen de extractos de productos naturales y proporcionan pocas complicaciones y/o efectos

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secundarios. En algunas realizaciones, esta invención proporciona el potencial terapéutico y profiláctico de compuestos de ciclohexenona ilustrativos (p. ej., el compuesto 1) para tratar o reducir el riesgo de leucemia.

En algunas realizaciones, se proporciona una composición farmacéutica para uso en el tratamiento o reducción del riesgo de leucemia en un paciente, comprendiendo la composición una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura:

imagen2

en donde cada X e Y independientemente es oxígeno, NR5 o azufre;

R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C1-C8;

cada R1, R2 y R3 independientemente es un hidrógeno, metilo opcionalmente sustituido o (CH2)m-CH3;

R4 es NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, halógeno, lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1- C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo y glucosilo, en donde la lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo, y glucosilo están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados de NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8,

cicloalquilo C3-C8y haloalquilo C1-C8;

cada uno de R5 y R6 es independientemente un hidrógeno o alquilo C1-C8;

R7 es un alquilo C1-C8, OR5 o NR5R6; m = 1-12; y

n = 1-12; o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables.

En algunas realizaciones, la leucemia es una leucemia aguda tal como una leucemia mieloide aguda, leucemia eritroide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T, leucemia/linfoma de linfocitos T en adultos, leucemia/linfoma linfoblástica aguda de precursores T o crisis blástica de leucemia mielógena crónica. En algunas realizaciones, la leucemia es leucemia crónica tal como una leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de tricoleucocitos. En determinadas realizaciones, la leucemia crónica es una leucemia mielógena crónica. En algunas realizaciones, el paciente es un ser humano. Véanse los ejemplos 2-13.

En algunas realizaciones, el compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura

imagen3

se prepara por síntesis o semisíntesis a partir de cualquier material de partida adecuado. En otras realizaciones, el compuesto de ciclohexenona se prepara por fermentación o similar. Por ejemplo, los compuestos 1, y 3-7 se aíslan de extractos en disolventes orgánicos. Los compuestos a modo de ejemplo no limitados se ilustran a continuación.

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Claims

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REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura:

imagen1

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno, NR5 o azufre;

R es un hidrógeno o C(= O)alquilo C1-C8;

cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente un hidrógeno, metilo opcionalmente sustituido o (CH2)m- CH3;

R4 es NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, halógeno, lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo, glucosilo, en donde la lactona de 5 o 6 eslabones, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo y glucosilo están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados entre NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)Or5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8 y haloalquilo C1-C8;

cada R5 y R6 es independientemente un hidrógeno o alquilo C1-C8;

R7 es un alquilo C1-C8, OR5 o NR5R6;

m = 1-12; y n = 1-12; o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptablespara su uso en el tratamiento o la reducción del riesgo de leucemia en un paciente.
2. La composición para el uso de la reivindicación 1, en la que la leucemia es una leucemia aguda.
3. La composición para el uso de la reivindicación 1, en la que la leucemia es leucemia crónica.
4. La composición para el uso de la reivindicación 2, en la que la leucemia aguda es una leucemia mieloide aguda, leucemia eritroide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T, leucemia/linfoma de linfocitos T en adultos, leucemia/linfoma linfoblástico agudo de precursores T o crisis blástica de leucemia mielógena crónica.
5. La composición para el uso de la reivindicación 3, en la que la leucemia crónica es una leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de tricoleucocitos.
6. La composición para el uso de la reivindicación 5, en la que la leucemia crónica es una leucemia mielógena crónica.
7. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho compuesto de ciclohexenona, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, se usa por vía oral, parenteral, intravenosa, o inyectable.
8. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho paciente es humano.
9. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que R es un hidrógeno, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5 o C(=O)CH3.
10. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo u octilo.
11. La composición para el uso de la reivindicación 10, en la que cada uno de R1 y R2 independientemente es un hidrógeno o metilo.
12. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R4es C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), lactona, arilo o glucosilo de 5 o 6 eslabones, en donde la lactona, arilo y glucosilo de 5 o 6 eslabones están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados de NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8y

haloalquilo C1-C8.
13. La composición para su uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que R4 es alquilo C1-C8 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5,

5 C(=O)NR5R6, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquenilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8 y haloalquilo C1-C8.
14. La composición para el uso de la reivindicación 13, en donde R4 es CH2CH=C(CH3)2.
15. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho compuesto es

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imagen2

imagen3

Compuesto í (pM) 0 0,5 2,5 5 10 50

mwmtrmt

:-í:;íje.y.:

pliegue 1,0 1,4 1,4 1,4 1,9 Qr9

Compuesto 1 (p.M) 0 0,5 2,5 5 10 50

pliegue 10 1,1 1,0 1,5 1,7 1,4

H838

Compuesto 1 te M)

pERK1/2

ERK1/2

GAPDH

pliegue 1,0 1,6

HepG2

pERK1/2 |................................................

[TOIX-l/rS I ...".ÉL ' Í'H:,v: <...■* - L. iL: L. L...:.., . ■: . . ^ J'l

t~L PV l\ í íZ |v ■........: :

Actina [

A549

pERK1/2[

ERK1/2

Actina [

imagen4

GAPDH[

pliegue 1r0 1,2 1r2 1,0 1,2 2,9

pliegue

F1G. 2A-C

A549

HB38

Ein transformar

Ras

— transformado

GQo

GAPDH iifi'n ^üfnncffln-

FiG 2 B

H338

Compuesto 1 0 5 10 15 20

]4__E¡n

+- trc

m transformar

transformado

GAPDH

V ÉBB

toa ■■■- ■ ■

Compuesto t (llM)

FiG. 2 C

HepG2

K5G2

Compuesto I f a....5....ID...15 0 5 10. 15

Ras

GAPDH E

imagen5

pliegue 1,0 1,1 2,3 1,1 1,3 1,4

pliegue 1,0

FIG, 3A-Í

FÍG.3 A

iíp^_X

*6*6

FPP

Compuesto

FIG. 3 B

H838

Antroq, (uM)

FPP(liM)

Ein transformar

Ras

transformado

GAPDH

FIG. 3C

Fiase

Fiase

H-RasS3T

Antroq, (¿iM)

H-Ftascsr-F

t-H-Ras"*T

imagen6

FIG, 5A-0

imagen7

imagen8

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FfG. t>

Ras

EGFFt

GAPDH

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IC,

y *

AS ^

Antroq”(^M} ^ v

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(V*

v4* te' o' V o?'

GAPDH 04 0 9 06 0 3 °.3 05 °.5 1ñ 0 5

GAPDH 03 0Z 0 2 °'1 °'1 ü'3 01 1'4 15

Mutación -

de Ras

FíG 7

imagen11

Peso corporal £%)

imagen12

Volumen tumoral (mm3)

F1G.9

THP-1

3500

imagen13

0 5 10 15 Z0 25 30

Dia

4^

NJ

Vehículo Compuesto 1

Peso de la masa tumoral (g)

O O M JV

~C5 UT C3 U*i O U1 Q

imagen14