ES2692805T3 - Dispositivo de análisis de una muestra biológica - Google Patents

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Jean Berthier
Anne-Gaëlle BOURDAT
Jérome VENTOSA
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Abstract

Dispositivo de análisis de una muestra biológica que comprende unas especies biológicas (3), comprendiendo dicho dispositivo: - una caja que comprende al menos una abertura, - un canal de inyección (14) dispuesto en dicha caja y por el cual se puede inyectar dicha muestra biológica en forma de un fluido, - un canal de evacuación (15) dispuesto en dicha caja, - una cámara (13) en la que desemboca el canal de inyección (14) y el canal de evacuación (15), - un filtro (16) que separa dicha cámara en dos espacios distintos a fin de definir un primer espacio (130) en el que desemboca dicho canal de inyección (14) y un segundo espacio (131) en el que desemboca dicho canal de evacuación (15), presentando dicho filtro (16) una porosidad adecuada para la separación a efectuar, - una superficie de apoyo rugosa (17) que presenta un parámetro de rugosidad de superficie adecuada para realizar una lisis mecánica de dichas especies biológicas (3), estando dispuesta dicha superficie de apoyo en dicho primer espacio (130) y comprendiendo dicho filtro al menos una parte que presenta una deformabilidad elástica suficiente para alcanzar dicha superficie de apoyo rugosa de la cámara (13) durante el ejercicio de una fuerza de apoyo, - una membrana (18) flexible dispuesta en el lado opuesto de la superficie de apoyo rugosa (17) con respecto al filtro (16) y que obtura la abertura realizada a través de la caja.

Description

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DESCRIPCION
Dispositivo de analisis de una muestra biologica Campo tecnico de la invencion
La presente invencion se refiere a un dispositivo de analisis de una muestra biologica que comprende especies biologicas. Este dispositivo de analisis permite, en particular, realizar una concentracion y una purificacion de las especies biologicas presentes en la muestra, una lisis de estas especies para extraer el material biologico a analizar, despues una separacion de este material biologico y una reaccion de amplificacion para la deteccion de un patogeno en la muestra.
Estado de la tecnica
La deteccion de patogenos en una muestra biologica se realiza frecuentemente empleando un material pesado y poco adecuado, en particular para un analisis rapido sobre el terreno. La deteccion necesita en particular una etapa de lisis de las especies biologicas contenidas en la muestra para triturar dichas especies, despues de las etapas de concentracion y de purificacion.
En el estado de la tecnica, se conocen unos dispositivos que permiten realizar las etapas de concentracion, de purificacion y de lisis mecanica. La solicitud de patente WO2015/181743A1 describe en particular tal dispositivo. En este, la lisis mecanica se realiza por cizallamiento entre dos paredes, teniendo una de las dos paredes una superficie de apoyo rugosa. Tal dispositivo permite esencialmente realizar la trituracion y no es adecuado para realizar un analisis mas completo de una muestra biologica.
Existen, por otro lado, soluciones que permiten realizar una deteccion de la presencia de patogeno por amplificacion y deteccion por colorimetria o turbiedad o medicion del pH. Tales soluciones se describen, por ejemplo, en las publicaciones siguientes:
- “Visual detection of isothermal nucleic acid amplification using pH-sensitive dyes”, Nathan A. Tanner et al. - BioTechniques, Vol. 58, n° 2, febrero de 2015, p. 59-68.
- “Colorimetric detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by using hydroxy naphthol blue”, Motoki Goto et al. - BioTechniques, Vol. 46, n° 3, marzo de 2009, p. 167-172.
- “Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay for Rapid Detection of Common Strains of Escherichia coli”, Hill J, Beriwal S, Chandra I, et al. - Journal of Clinical Microbiology. 2008;46(8):2800-2804. doi:10.1128/JCM.00152-08.
- “Visual Detection of Norovirus Genogroup II by Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification with Hydroxynaphthol Blue Dye”, Jianming, Ziqian Xu, Kai Nie, Xiong Ding, Li Guan, Ji Wang, Yuying Xian, Xiyang Wu, Xuejun Ma - Food and Environmental Virology, septiembre de 2014, Volumen 6, publicacion 3, p. 196-201.
Sin embargo, no existe un dispositivo que permita realizar un analisis global y completo de una muestra biologica y que sea:
- facilmente transportable,
- facil de usar,
- fiable,
- poco costoso.
El objetivo de la invencion es proponer un dispositivo de analisis de una muestra biologica que permita cumplir estos diferentes objetivos.
Descripcion de la invencion
Este objetivo se alcanza mediante un dispositivo de analisis de una muestra biologica que comprende especies biologicas, comprendiendo dicho dispositivo:
- una caja que comprende al menos una abertura,
- un canal de inyeccion dispuesto en dicha caja y por el cual se puede inyectar dicha muestra biologica en forma de un fluido,
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- un canal de evacuacion dispuesto en dicha caja,
- una camara en la que desemboca el canal de inyeccion y el canal de evacuacion,
- un filtro que separa dicha camara en dos espacios distintos, a fin de definir un primer espacio en el que desemboca dicho canal de inyeccion y un segundo espacio en el que desemboca dicho canal de evacuacion, presentando dicho filtro una porosidad adecuada para la separacion a efectuar,
- una superficie de apoyo rugosa que presenta un parametro de rugosidad de superficie adecuada para realizar una lisis mecanica de dichas especies biologicas, estando dispuesta dicha superficie de apoyo en dicho primer espacio, comprendiendo dicho filtro al menos una parte que presenta una deformabilidad elastica suficiente para alcanzar dicha superficie de apoyo rugosa durante el ejercicio de una fuerza de apoyo,
- una membrana flexible dispuesta en el lado opuesto de la superficie de apoyo rugosa con respecto al filtro y que obtura la abertura realizada a traves de la caja.
Con respecto al estado de la tecnica, se comprende en particular que la arquitectura del dispositivo permite disociar las funciones de separacion y de lisis mecanica. Esto presenta, en particular, la ventaja de poder asegurar una de las dos etapas, sin efectuar obligatoriamente la otra. Y esto permite tambien modificar las caracteristicas del filtro independientemente de las caracteristicas de la superficie de apoyo rugosa para efectuar la lisis.
Ademas, la arquitectura del dispositivo permitira ventajosamente realizar la separacion en la camara, manteniendo en la camara al mismo tiempo los contaminantes (en el primer espacio de la camara) y el material biologico a estudiar (en el segundo espacio de la camara).
Segun una particularidad, la membrana se realiza de un material transparente. Esto permitira, en particular, realizar una deteccion visualizando el contenido de la camara a traves de la membrana.
Segun otra particularidad, la caja comprende al menos una pared realizada de un material transparente.
Segun otra particularidad, el dispositivo comprende unos medios de calentamiento dispuestos para calentar la camara a una temperatura determinada.
Segun otra particularidad, la caja comprende una pared inferior, una pared lateral y una pared superior.
Segun otra particularidad, el canal de inyeccion y el canal de evacuacion se realizan, por ejemplo, a traves de dicha pared superior de la caja.
Segun otra particularidad, dicha abertura obturada por la membrana se realiza, por ejemplo, a traves de la pared superior de la caja.
Segun otra particularidad, la superficie de apoyo rugosa presenta un parametro de rugosidad de superficie media comprendido, por ejemplo, entre 0,1 pm y 10 pm.
Segun otra particularidad, el filtro presenta unos poros que tienen un diametro medio comprendido, por ejemplo, entre 0,2 pm y 0,5 pm.
La invencion se refiere tambien a un procedimiento de analisis de una muestra biologica, realizada con la ayuda del dispositivo tal como se ha descrito anteriormente, comprendiendo este procedimiento asi al menos las etapas siguientes:
- la inyeccion de una muestra que contiene unas especies biologicas en el primer espacio de la camara del dispositivo por el canal de inyeccion,
- realizacion de una lisis mecanica de las especies biologicas presentes en la camara por trituracion contra la superficie de apoyo rugosa a fin de liberar un material biologico a analizar,
- separacion del material biologico con respecto a los contaminantes por filtracion a traves del filtro haciendo pasar el material biologico en el segundo espacio de la camara y manteniendo unos contaminantes en el primer espacio,
- amplificacion del material biologico por calentamiento de la camara a una temperatura determinada,
- analisis del material biologico obtenido despues de la amplificacion.
Segun una particularidad, el procedimiento puede comprender tambien una etapa de aclarado y de purificacion de las especies biologicas presentes en la camara, realizada previamente a la etapa de lisis mecanica.
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Segun otra particularidad, la etapa de analisis se realiza, por ejemplo, por colorimetria, medicion electroquimica, medicion de turbiedad o fluorescencia.
Breve descripcion de las figuras
Otras caracteristicas y ventajas apareceran a partir de la descripcion detallada siguiente, realizada con respecto a los dibujos anexos, en los que:
- las figuras 1A y 1B representan, de manera esquematica, respectivamente en vista por arriba y en vista de lado, el dispositivo de analisis de una muestra biologica segun la invencion,
- las figuras 2A a 2E ilustran las diferentes etapas de un metodo de analisis y de deteccion realizada gracias al dispositivo de la invencion.
Descripcion detallada de al menos un modo de realizacion
El dispositivo de la invencion esta destinado al analisis de una muestra biologica. Esta muestra biologica se presenta, por ejemplo, en forma de un fluido que contiene especies biologicas que contienen un material biologico a estudiar. Por especies biologicas se entienden, en particular, unos microorganismos, unas celulas, unas esporas, etc. Por material biologico a estudiar se entiende, por ejemplo, unas moleculas de acido nucleico (ARN, ADN) procedentes de una celula, unas proteinas, unos lipopolisacaridos (LPS), unos acidos lipoteicoicos (LTA), etc.
Por fluido se entiende, en particular, un liquido, un gas, etc. El liquido podra presentar diferentes grados de viscosidad y podra, por ejemplo, presentarse en forma de una pasta o de un gel.
De manera ventajosa, la invencion presenta la particularidad de poder efectuar, en un mismo dispositivo, al mismo tiempo:
- una purificacion y una concentracion de las especies biologicas presentes en la muestra biologica,
- una lisis mecanica de las especies biologicas presentes en la muestra para extraer un material biologico a estudiar,
- una separacion entre el material biologico a estudiar y unos contaminantes presentes, y
- una deteccion de la presencia de patogeno en el material biologico que se ha separado.
A continuacion en la descripcion, los terminos “inferior”, “superior”, “arriba” y “abajo” empleados deben entenderse tomando como referencia un eje principal que es vertical.
A continuacion en la descripcion, los terminos “externo”, “exterior”, “interno”, “interior”, deben comprenderse tomando como referencia la camara del dispositivo que se describira a continuacion.
El dispositivo 1 comprende una caja. La caja comprende una pared inferior 10, una pared lateral 11 y una pared superior 12. Todas las paredes de la caja se realizaran preferiblemente de un mismo material. Este material sera apto, en particular, para poder sufrir un calentamiento en un intervalo de temperatura comprendido entre 20°C y 100°C. Preferiblemente, algunas paredes de la caja, al menos su pared lateral 11, se realizaran de un material transparente. Preferiblemente, el material empleado sera un plastico, por ejemplo de tipo PMMA (poli(metacrilato de metilo)).
El dispositivo 1 comprende una camara 13 dispuesta en la caja. Esta camara representa el sitio en el que se efectuan al mismo tiempo la purificacion/concentracion, la lisis mecanica, la separacion y eventualmente la deteccion en las especies biologicas. La camara 13 se cierra hacia abajo por la pared inferior de la caja.
El dispositivo comprende un canal de inyeccion 14 para inyectar en el cualquier tipo de fluido, por ejemplo con la ayuda de una pipeta. El canal de inyeccion comprende una entrada dispuesta, por ejemplo, a traves de la pared superior 12 de la caja y una salida que desemboca en dicha camara 13. La entrada del canal de inyeccion 14 esta dispuesta, por ejemplo, verticalmente y su salida desemboca, por ejemplo, horizontalmente en la camara 13. La entrada del canal de inyeccion se ensancha, por ejemplo, para aplicar el cono de una pipeta o se adaptara al tipo de dispositivo empleado para inyectar el fluido en el dispositivo. A titulo de ejemplo, se tratara de una entrada que presenta una punta de tipo luer para conectar una jeringa.
El dispositivo comprende un canal de evacuacion 15 cuya entrada comunica con el espacio formado por la camara 13 y la salida comunica con el exterior por una abertura realizada, por ejemplo, a traves de la pared superior de la caja. Por este canal de evacuacion 15, se evacuan unos fluidos inyectados. Su entrada esta dispuesta, por ejemplo, horizontalmente y su salida verticalmente. La camara 13 esta dispuesta entre el canal de inyeccion 14 y el canal de
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evacuacion 15.
Hacia arriba, la camara 13 esta cerrada por una membrana 18 flexible y estirable, preferiblemente transparente. La pared superior 12 de la caja del dispositivo comprende asi una abertura que esta recubierta, de manera hermetica, por dicha membrana 18. Dicha membrana esta asi anclada en la caja mediante cualquier solucion de fijacion adecuada, por ejemplo por encolado. Esta membrana 18 estara compuesta, por ejemplo, de una pelicula, por ejemplo de tipo MicroAmp, 3M (marcas depositadas), de grosor, de dimensiones y de constitucion adecuadas para deformarse de manera elastica, con respecto a sus puntos de anclaje, en particular hasta el fondo de la camara 13.
Mediante el termino “transparente”, se entiende que el material empleado es al menos parcialmente transparente a la luz visible, a fin de dejar pasar al menos un 80% de esta luz. Se debe comprender asi que sera suficientemente transparente para ver en el interior de la camara 13, al menos el segundo espacio situado por encima del filtro.
El dispositivo comprende un filtro 16 dispuesto en dicha camara 13 y que separa dicha camara 13 en dos espacios. Los dos espacios estan, por ejemplo, superpuestos y designan asi el espacio inferior 130 situado debajo del filtro y espacio superior 131 situado por encima del filtro. Este filtro 16 se realiza preferiblemente en todo o en parte en forma de una pelicula flexible y delgada, estirada en el espacio formado por la camara a fin de permitir el paso de un espacio al otro solo por los poros del filtro 16. La pelicula presenta una deformabilidad elastica que le permite estirarse durante el ejercicio de una fuerza de apoyo en una direccion sustancialmente vertical, teniendo esta deformabilidad un nivel suficiente para alcanzar la superficie inferior de la camara 13. El filtro 16 presenta un diametro medio de poros comprendido entre 0,2 pm y 50 pm, por ejemplo comprendido entre 0,2 pm y 1 pm para la separacion de microorganismos. El diametro de los poros es adecuado, por supuesto, para asegurar una separacion entre los contaminantes y el material biologico a estudiar. Despues de la etapa de lisis y de la separacion por el filtro 16, el material biologico a estudiar permanece por encima del filtro 16, en el espacio superior 131 de la camara, mientras que los contaminantes permanecen por debajo del filtro, en el espacio inferior 130 de la camara. El filtro 16 estara, por ejemplo, compuesto de una pelicula de grosor, de dimensiones y de constitucion adecuados para deformarse hasta el fondo de la camara 13 con respecto a sus puntos de anclaje. Segun un modo de realizacion particular, el filtro se podra realizar tambien de un material transparente, por ejemplo con las mismas caracteristicas de transparencia que la membrana.
El dispositivo comprende una superficie de apoyo rugosa 17 dispuesta sobre el fondo de la camara 13. Esta superficie de apoyo rugosa 17 se extiende sobre una parte mayoritaria del fondo de la camara. Comprende un parametro de rugosidad de superficie media comprendida entre 0,1 pm y 10 pm, preferiblemente comprendida entre 0,2 pm y 3 pm. Esta superficie de apoyo rugosa 17 esta destinada a permitir una lisis mecanica de las especies biologicas presentes en una muestra biologica colocada en el dispositivo. Preferiblemente, la lisis mecanica se realiza triturando dichas especies biologicas, por abrasion sobre dicha superficie de apoyo rugosa. La operacion de trituracion se lleva a cabo mediante un movimiento de friccion de las especies biologicas contra la superficie de apoyo rugosa, usando un elemento de trituracion adecuado. Este elemento sera, por ejemplo, una espatula 2 (vease la figura 2B) o una varilla, por ejemplo de material plastico o metalico. Este elemento se aplica desde el exterior de la camara 13 y su extremo se aplica contra la superficie externa de la membrana 18, a fin de estirar la membrana 18 y el filtro hacia el fondo de la camara y asi frotar las especies biologicas presentes en una muestra contra la superficie de apoyo rugosa.
El dispositivo comprendera, preferiblemente, unos medios para obturar el canal de inyeccion y el canal de evacuacion a fin de cerrar cualquier acceso a la camara y aislar el espacio interno de la camara con respecto al exterior. Estos medios estan, por ejemplo, formados de dos hojas 21 cuya posicion permite obturar o abrir cada canal 14, 15, o formados de adhesivos pegados sobre la entrada del canal de inyeccion y la salida del canal de evacuacion. Por su puesto, se podrian considerar otras soluciones.
Preferiblemente, la caja puede integrar unos medios de calentamiento del espacio interno de la camara, compuestos, por ejemplo, de al menos una resistencia 19 calentadora, como se representa en las figuras anexas. La resistencia se fija, por ejemplo, debajo de la pared inferior de la caja. Se proporcionara, por ejemplo, una fuente de alimentacion 20 para alimentar la resistencia 19. La fuente de alimentacion comprendera, por ejemplo, una o varias pilas electricas, que proporcionan suficientemente energia para calentar la camara a una temperatura comprendida en el intervalo definido anteriormente, es decir de 20°C a 100°C. Por supuesto, se podrian emplear otros medios de calentamiento, que comprenden por ejemplo una tinta conductora depositada por impresion o serigrafia debajo de la pared inferior de la caja.
Asi, para resumir, el dispositivo comprende la estructura “multicapas” siguiente:
- una superficie inferior de apoyo rugosa 17,
- un espacio inferior 130 de una camara 13 situada por encima de la superficie de apoyo rugosa 17,
- un filtro 16 flexible y estirable situado por encima del espacio inferior 130,
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- un espacio superior 131 de la camara 13 situado por encima del filtro 16,
- una membrana 18 flexible y estirable situada por encima del espacio superior 131, que contiene hermeticamente la camara y accesible desde el exterior del dispositivo.
Con la ayuda del dispositivo descrito anteriormente, de manera no limitativa, un procedimiento de lisis, de separacion y de deteccion comprendera por ejemplo las etapas siguientes:
- La muestra biologica liquida, que comprende unas especies biologicas 3, se inyecta en la camara 13 del dispositivo
1 con la ayuda de una pipeta, a traves del canal de inyeccion 14. A titulo de ejemplo, la muestra presenta un
volumen de 1 mililitro y contiene 105 bacterias por mililitro. La parte liquida de la muestra y todas las
particulas/moleculas que pasan a traves del filtro 16 se recuperan por el canal de evacuacion 16 y se apartan del analisis. Las bacterias se concentran entonces en el espacio inferior 130 de la camara 13. Unos contaminantes presentes en la muestra, demasiado gruesos para atravesar el filtro, pueden tambien permanecer en el espacio inferior 130 de la camara 13.
- Una vez que la muestra esta presente en la camara, se inyecta preferiblemente una solucion de lavado/aclarado de las especies biologicas 3 presentes con la ayuda de una pipeta a traves del canal de inyeccion 14, a fin de purificar las bacterias presentes en la muestra (figura 2A). Unos contaminantes 31, demasiado gruesos para atravesar el filtro 16 y no solubles, pueden tambien permanecer en el espacio 130.
- Una lisis mecanica de las especies biologicas 3 se lleva a cabo con la ayuda de una espatula 2. El extremo de la
espatula 2 se pone en contacto con la superficie externa de la membrana 18, despues se presiona sobre la
membrana 18 para estirarla hacia el interior de la camara 13, el extremo de la espatula 2 alcanza la superficie de apoyo rugosa 17 a fin de triturar las especies biologicas 3 contra la superficie de apoyo rugosa (figura 2B).
- Una vez efectuada la lisis mecanica, el espacio inferior de la camara comprende el material biologico 30 a estudiar, por ejemplo unas moleculas de ADN, y unos contaminantes 31 (figura 2C).
- Para efectuar la separacion entre el material biologico 30 a estudiar y los contaminantes 31, se inyecta una solucion liquida que contiene unos reactivos de amplificacion en la camara por el canal de inyeccion 14, para eluir el material biologico a estudiar. Una parte de la solucion liquida inyectada se lleva asi el material biologico 30 a estudiar, por ejemplo las moleculas de ADN, pasa a traves del filtro 16 y se reune con el espacio superior 131 de la camara. Los contaminantes 31, que presentan una estructura superior al diametro de los poros del filtro 16, permanecen en el espacio inferior 130 de la camara 13. Durante esta etapa, el canal de evacuacion 15 se obtura preferiblemente por una hoja 21 a fin de evitar cualquier evacuacion del material biologico 30 a estudiar (figura 2D).
- Una vez que se efectua la separacion entre los contaminantes 31 y el material biologico 30 a estudiar, se trata de realizar una reaccion de amplificacion del material biologico a fin de, por ejemplo, poder detectar la presencia de un patogeno en el material biologico 30 que se ha separado.
- La reaccion de amplificacion se lleva a cabo calentando el espacio interno de la camara 13, por ejemplo con la ayuda del sistema de resistencias 19 integrado a la caja. Durante la operacion de calentamiento, se cierra preferiblemente el canal de inyeccion 14 y el canal de evacuacion 15. La temperatura a la cual se calienta la camara 13 depende del tipo de reaccion de amplificacion utilizado. Podra tratarse de cualquier tipo de reaccion de amplificacion, por ejemplo LAMP (“Amplificacion isotermica mediada por bucle”), PCR (“reaccion de polimerizacion en cadena”), NASBA (“amplificacion basada en secuencias de acido nucleico”), RPA (“amplificacion polimerasa recombinasa”), etc. Para una amplificacion de tipo LAMP, el calentamiento se realiza a una temperatura ventajosamente comprendida entre 60°C y 65°C. Esta reaccion permite amplificar las moleculas del material biologico 30 a detectar, por ejemplo las moleculas de ADN. Durante el calentamiento, la membrana 18 se lleva a estirarse, por ejemplo, para crear una concavidad en la camara 13, aumentado asi el volumen de la camara (figura 2E).
- Durante la reaccion de amplificacion del material biologico, se trata de detectar si un patogeno esta presente. Para ello, es posible emplear diferentes metodos, como por ejemplo la colorimetria, la fluorescencia, la electroquimica, la pHmetria, la medicion de turbiedad. Se podria considerar cualquier otro metodo de deteccion. Para un metodo de deteccion de tipo pHmetria, se podrian integrar al dispositivo unos electrodos de deteccion de pH. Durante una deteccion por colorimetria o fluorescencia, la caracteristica transparente de la membrana 18 y/o de la caja del dispositivo, en particular a nivel de su pared lateral, presenta la ventaja de permitir una deteccion visual directa. Asi, observando el color de la muestra presente en la camara, es posible determinar si un patogeno esta presente o no.
El dispositivo de la invencion comprende asi numerosas ventajas, entre las cuales:
- Un dispositivo facilmente transportable, por ser ligero y poco voluminoso.
- Un dispositivo que permite realizar en una misma camara al mismo tiempo la concentracion/purificacion, la lisis, la
separacion, la amplificacion y la deteccion, formando asi un laboratorio en chip (“Lab On Chip”).
- Un dispositivo que no comprende ninguna pieza mecanica compleja para realizar la lisis mecanica.
5 - Un dispositivo que permite eventualmente una deteccion por colorimetria, solamente mirando a traves de las partes
transparentes del dispositivo.

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    REIVINDICACIONES
    1. Dispositivo de analisis de una muestra biologica que comprende unas especies biologicas (3), comprendiendo dicho dispositivo:
    - una caja que comprende al menos una abertura,
    - un canal de inyeccion (14) dispuesto en dicha caja y por el cual se puede inyectar dicha muestra biologica en forma de un fluido,
    - un canal de evacuacion (15) dispuesto en dicha caja,
    - una camara (13) en la que desemboca el canal de inyeccion (14) y el canal de evacuacion (15),
    - un filtro (16) que separa dicha camara en dos espacios distintos a fin de definir un primer espacio (130) en el que desemboca dicho canal de inyeccion (14) y un segundo espacio (131) en el que desemboca dicho canal de evacuacion (15), presentando dicho filtro (16) una porosidad adecuada para la separacion a efectuar,
    - una superficie de apoyo rugosa (17) que presenta un parametro de rugosidad de superficie adecuada para realizar una lisis mecanica de dichas especies biologicas (3), estando dispuesta dicha superficie de apoyo en dicho primer espacio (130) y comprendiendo dicho filtro al menos una parte que presenta una deformabilidad elastica suficiente para alcanzar dicha superficie de apoyo rugosa de la camara (13) durante el ejercicio de una fuerza de apoyo,
    - una membrana (18) flexible dispuesta en el lado opuesto de la superficie de apoyo rugosa (17) con respecto al filtro (16) y que obtura la abertura realizada a traves de la caja.
  2. 2. Dispositivo segun la reivindicacion 1, caracterizado por que la membrana (18) se realiza de un material transparente.
  3. 3. Dispositivo segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizado por que la caja comprende al menos una pared realizada de un material transparente.
  4. 4. Dispositivo segun una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que comprende unos medios de calentamiento dispuestos para calentar la camara (13) a una temperatura determinada.
  5. 5. Dispositivo segun una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que la caja comprende una pared inferior (10), una pared lateral (11) y una pared superior (12).
  6. 6. Dispositivo segun la reivindicacion 5, caracterizado por que el canal de inyeccion (14) y el canal de evacuacion, se realizan a traves de dicha pared superior de la caja.
  7. 7. Dispositivo segun la reivindicacion 5 o 6, caracterizado por que dicha abertura obturada por la membrana (18) se realiza a traves de la pared superior (12) de la caja.
  8. 8. Dispositivo segun una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado por que la superficie de apoyo rugosa presenta un parametro de rugosidad de superficie media comprendido entre 0,1 pm y 10 pm.
  9. 9. Dispositivo segun una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado por que el filtro presenta unos poros que tienen un diametro medio comprendido entre 0,2 pm y 0,5 pm.
  10. 10. Procedimiento de analisis de una muestra biologica, realizado con la ayuda del dispositivo definido en una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado por que comprende las etapas siguientes:
    - inyeccion de una muestra que contiene unas especies biologicas (3) en el primer espacio (130) de la camara (13) del dispositivo por el canal de inyeccion (14),
    - lisis mecanica de las especies biologicas presentes en la camara por trituracion contra la superficie de apoyo rugosa (17) a fin de liberar un material biologico (30) a analizar,
    - separacion del material biologico (30) con respecto a los contaminantes (31) por filtracion a traves del filtro (16) haciendo pasar el material biologico (30) en el segundo espacio (131) de la camara y manteniendo unos contaminantes en el primer espacio,
    - amplificacion del material biologico por calentamiento de la camara a una temperatura determinada,
    - analisis del material biologico obtenido despues de la amplificacion.
  11. 11. Procedimiento segun la reivindicacion 10, caracterizado por que comprende una etapa de aclarado y de purificacion de las especies biologicas presentes en la camara (13), realizada previamente a la etapa de lisis mecanica.
    5
  12. 12. Procedimiento segun la reivindicacion 10 u 11, caracterizado por que la etapa de analisis se realiza por colorimetria, medicion electroquimica, medicion de la turbiedad o fluorescencia.
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