ES2694153T3 - Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Un anticuerpo aislado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente a ErbB3, en el que el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno comprende: (a) una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 322; y (b) una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 330.

Description

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DESCRIPCION
Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a anticuerpos y fragmentos de union a antfgeno de los mismos que son especfficos para ErbB3 humano.
Antecedentes
ErbB3 (tambien conocido como HER3) es un miembro de la familia ErbB/HER de receptores tirosina cinasa (RTK). otros miembros de esta familia incluyen EGFR (tambien conocido como ErbBI o HER1), ErbB2 (tambien conocidos como HER2 o Neu) y HER4. Los receptores ErbB regulan la proliferacion, supervivencia y diferenciacion celular activando cascadas de senalizacion intracelular que dan lugar a alteraciones en la expresion genica.
Los receptores ErbB se activan por la formacion de homo- o heterodfmeros. Por ejemplo, cuando ErbB3 se coexpresa con ErbB2, se forma un complejo de senalizacion heterodimerico activo. La formacion de dfmero ErbB3 se promueve por la union de su ligando. La neuregulina 1 (NRG1) es el ligando principal para ErbB3 que promueve la homo- o heterodimerizacion del receptor.
Se ha descubierto que ErbB3 se sobreexpresa en diversos tipos de cancer, incluyendo cancer de mama, gastrointestinal y pancreatico. Los anticuerpos anti-ErbB3 han demostrado inhibir el crecimiento de varias lfneas celulares de tumor humano en modelos de xenoinjerto de raton. Los anticuerpos anti-ErbB3 se mencionan en, por ejemplo, el documento US 5 480 968; el documento US 5 968 511; el documento US 2004/0197332; el documento US 7 332 580; el documento US 7 705 130; y el documento US 7 846 440. No obstante, existe la necesidad en la tecnica de antagonistas de ErbB3 novedosos, tales como anticuerpos anti-ErbB3, para el tratamiento del cancer y otros trastornos relacionados.
El documento WO 2007/077028 divulga protefnas de union que se unen a HER-3 y polinucleotidos que codifican las mismas. Tambien se proporcionan vectores de expresion, celulas hospedadoras que comprenden los mismos y la produccion de la protefna de union. Se proporcionan ademas composiciones y metodos para diagnosticar y tratar enfermedades asociadas con la transduccion de senales mediada por HER-3 y/o su ligando.
El documento WO 2008/100624 divulga una clase novedosa de anticuerpos monoclonales que se unen al receptor ErbB3 e inhiben diversas funciones de ErbB3.
El documento WO 2011/044311 divulga anticuerpos especfficos para HER3, preferiblemente anticuerpos completamente humanos o humanizados y partes de union a antfgeno de los mismos. Tambien se divulgan moleculas de acido nucleico que codifican los anticuerpos, asf como metodos de uso, junto con composiciones farmaceuticas y metodos de uso de los anticuerpos y composiciones para el tratamiento y diagnositco de trastornos oncogenicos hiperproliferativos patologicos asociados con expresion aberrante de HER3 o HER2, incluyendo activacion aberrante de cada uno de estos receptores.
El documento WO 2010/108127 tambien proporciona anticuerpos anti-HER, incluyendo anticuerpos anti-HER multiespecfficos, composiciones que comprenden estos anticuerpos y metodos de uso de estos anticuerpos. Se proporcionan anticuerpos multiespecfficos contra EGFR/HER3 que son menos toxicos que los antagonistas de EGFR tradicionales.
Breve sumario de la invencion
La presente invencion proporciona anticuerpos como se define en las reivindicaciones que se unen a ErbB3 humano. Los anticuerpos de la invencion son utiles, entre otras cosas, para inhibir la senalizacion mediada por ErbB3 y para tratar enfermedades y trastornos causados por o relacionados con la actividad y/o senalizacion de ErbB3.
Los anticuerpos de la presente invencion bloquean la interaccion entre ErbB3 y un ligando de ErbB3 (por ejemplo, NRG1 y/o NRG2). Los anticuerpos tambien poseen propiedades biologicas adicionales tales como, por ejemplo, induccion de la internalizacion de ErbB3 en la superficie celular, inhibicion del crecimiento tumoral estimulado por NRG1 in vitro, y/o inhibicion del crecimiento tumoral in vivo.
Los anticuerpos de la invencion pueden ser de longitud completa (por ejemplo, un anticuerpo IgG1 o IgG4) o pueden comprender unicamente una parte de union a antfgeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F(ab')2 o scFv) y pueden modificarse para afectar a la funcionalidad, por ejemplo, para eliminar las funciones efectoras residuales (Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933).
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Especfficamente, la presente invencion proporciona un anticuerpo aislado o fragmento de union a antfgeno del mismo, que se une especfficamente a ErbB3, en el que el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno comprende:
(a) una region variable de cadena pesada (HCVR) que tiene la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 322; y
(b) una region variable de cadena ligera (LCVR) que tiene la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 330.
En este documento se describen anticuerpos o fragmentos de union a antfgeno que comprenden una region variable de cadena pesada (HCVR) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322, 338, 354, 370, 386, 402, 418, 434, 450, 466 y 482, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia.
En este documento se describen anticuerpos o fragmentos de union a antfgeno que comprenden una region variable de cadena ligera (LCVR) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474 y 490, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia.
En este documento tambien se describen anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden un par de secuencias de HCVR y LCVR (HCVR/LCVR) seleccionadas del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330, 338/346, 354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, 450/458, 466/474 y 482/490.
En este documento se describen anticuerpos o fragmentos de union a antfgeno que comprenden un dominio CDR3 de cadena pesada (HCDR3) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328, 344,
360, 376, 392, 408, 424, 440, 456, 472 y 488, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al
menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia; y un dominio CDR3 de cadena ligera (LCDR3) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336, 352,
368, 384, 400, 416, 432, 448, 464, 480 y 496, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al
menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia.
El anticuerpo o parte de union a antfgeno de un anticuerpo puede comprender un par de secuencias de aminoacidos de HCDR3/LCDR3 seleccionado del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 88/96, 104/112, 120/128, 136/144, 152/160, 168/176, 184/192, 200/208, 216/224, 232/240, 248/256, 264/272, 280/288, 296/304, 312/320, 328/336, 344/352, 360/368, 376/384, 392/400, 408/416, 424/432, 440/448, 456/464, 472/480 y 488/496.
Tambien se divulgan en este documento anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden ademas un dominio CDR1 de cadena pesada (HCDR1) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324, 340, 356, 372, 388, 404, 420, 436, 452, 468 y 484, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia; un dominio CDR2 de cadena pesada (HCDR2) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326, 342, 358, 374, 390, 406, 422, 438, 454, 470 y 486, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia; un dominio CDR1 de cadena ligera (LCDR1) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332, 348, 364, 380, 396, 412, 428, 444, 460, 476 y 492, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia; y un dominio CDR2 de cadena ligera (LCDR2) que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334, 350, 366, 382, 398, 414, 430, 446, 462, 478 y 494, o una secuencia sustancialmente similar de la misma que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia.
Determinados anticuerpos ejemplares no limitantes y fragmentos de union a antfgeno descritos en este documento comprenden dominios HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3, respectivamente, que tienen las secuencia de aminoacidos seleccionadas del grupo que consiste en: las SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16 (por ejemplo, H4H2084P); 20-22-24-28-30-32 (por ejemplo, H4H2092P); 36-38-40-44-46-48 (por ejemplo, H4H2094P); 52-54-56-60-62-64 (por ejemplo, H4H2098P); 68-70-72-76-78-80 (por ejemplo, H4H2102P); 84-86-88-92-94-96 (por ejemplo, H4H2108P); 100-102-104-108-110-112 (por ejemplo, H4H2111P); 116-118-120-124-126-128 (por ejemplo, H4H2114P); 132-134136-140-142-144 (por ejemplo, H4H2132P); 148-150-152-156-158-160 (por ejemplo, H4H2138P); 164-166-168-172174-176 (por ejemplo, H4H2140P); 180-182-184-188-190-192 (por ejemplo, H4H2143P); 196-198-200-204-206-208 (por ejemplo, H4H2146P); 212-214-216-220-222-224 (por ejemplo, H4H2147P); 228-230-232-236-238-240 (por
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H2M1821N)
H2M1827N);
H2M1829N); 404-406-408-412-414-416 (por ejemplo H2M1943N); 436-438-440-444-446-448 (por ejemplo H2M1937N); 468-470-472-476-478-480 (por ejemplo, H1M1940N).
H4H2154P); 292-294-296-300-302-304 (por ejemplo H1M1819N); 324-326-328-332-334-336 (por ejemplo H2M1824N); 356-358-360-364-366-368 (por ejemplo H1M1828N); 388-390-392-396-398-400 (por ejemplo H2M1930N); 420-422-424-428-430-432 (por ejemplo H2M1936N); 452-454-456-460-462-464 (por ejemplo H2M1938N); y 484-486-488-492-494-496 (por ejemplo
ejemplo, H4H2148P); 244-246-248-252-254-256 (por ejemplo, H4H2151P); 260-262-264-268-270-272 (por ejemplo 276-278-280-284-286-288 (por ejemplo,
308-310-312-316-318-320 (por ejemplo,
340-342-344-348-350-352 (por ejemplo 372-374-376-380-382-384 (por ejemplo
En este documento se describen anticuerpos o fragmentos de union a antfgeno que se unen especfficamente a ErbB3, en los que el anticuerpo o fragmento comprende los dominios CDR de cadena pesada y ligera contenidos dentro de las secuencias de cadena pesada y ligera seleccionadas del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330, 338/346, 354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, 450/458, 466/474 y 482/490. Los metodos y tecnicas para identificar las CDR dentro de las secuencias de aminoacido de HCVR y LCVR son bien conocidas en la tecnica y pueden usarse para identificar las CDR dentro de las secuencias de aminoacidos de HCVR y/o LCVR especfficas divulgadas en este documento. Las convenciones ejemplares que pueden usarse para identificar los lfmites de las CDR incluyen, por ejemplo, la definicion de Kabat, la definicion de Chothia y la definicion de AbM. En terminos generales, la definicion de Kabat se basa en la variabilidad de secuencia, la definicion de Chothia se basa en la ubicacion de las regiones de bucles estructurales y la definicion de AbM es un compendio entre las estrategias de Kabat y Chothia. Vease, por ejemplo, Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al- Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); y Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989). Tambien estan disponibles bases de datos publicas para identificar las secuencias de CDR dentro de un anticuerpo.
En otro aspecto, la invencion proporciona moleculas de acido nucleico que codifican anticuerpos anti-ErbB3 o fragmentos de los mismos de la invencion. Los vectores de expresion recombinante que portan los acidos nucleicos de la invencion, y celulas hospedadoras en que se han introducido dichos vectores, tambien estan abarcados por la invencion, asf como metodos de produccion de los anticuerpos por cultivo de las celulas hospedadoras en condiciones que permiten la produccion de los anticuerpos y recuperar los anticuerpos producidos.
En este documento se describen anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden un HCVR codificado por una secuencia de acido nucleico seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 241, 257, 273, 289, 305, 321, 337, 353, 369, 385, 401, 417, 433, 449, 465 y 481, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma.
En este documento tambien se describen anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden un LCVR codificado por una secuencia de acido nucleico seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217, 233, 249, 265, 281, 297, 313, 329, 345, 361, 377, 393, 409, 425, 441, 457, 473 y 489, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma.
En este documento tambien se describen anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden un dominio HCDR3 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, 151, 167, 183, 199, 215, 231, 247, 263, 279, 295, 311, 327, 343, 359, 375, 391, 407, 423, 439, 455, 471 y 478, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma; y un dominio LCDR3 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143, 159, 175, 191, 207, 223, 239, 255, 271, 287, 303, 319, 335, 351, 367, 383, 399, 415, 431, 447, 463, 479 y 495, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma.
Tambien se describen en este documento anticuerpos o fragmentos de los mismos que comprenden ademas un dominio HCDR1 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 115, 131, 147, 163, 179, 195, 211, 227, 243, 259, 275, 291, 307, 323, 339, 355, 371, 387, 403, 419, 435, 451, 467 y 483 o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma; un dominio HCDR2 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, 149, 165, 181, 197, 213, 229, 245, 261, 277, 293, 309, 325, 341, 357, 373, 389, 405, 421, 437, 453, 469 y 485, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma; un dominio LCDR1 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475 y 491, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la
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misma; y un dominio LCDR2 codificado por una secuencia de nucleotidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 157, 173, 189, 205, 221, 237, 253, 269, 285, 301, 317, 333, 349, 365, 381, 397, 413, 429, 445, 461, 477 y 493, o una secuencia sustancialmente identica que tiene al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % de homologfa de la misma.
El anticuerpo o fragmento del mismo puede comprender las secuencias CDR de cadena pesada y ligera condificadas por las secuencias de acido nucleico de las SEQ ID NO: SEQ ID NO: 1 y 9 (por ejemplo, H4H2084P), 17 y 25 (por ejemplo, H4H2092P), 33 y 41 (por ejemplo, H4H2094P), 49 y 57 (por ejemplo, H4H2098P), 65 y 73 (por ejemplo, H4H2102P), 81 y 89 (por ejemplo, H4H2108P), 97 y 105 (por ejemplo, H4H2111P), 113 y 121 (por ejemplo, H4H2114P), 129 y 137 (por ejemplo, H4H2132P), 145 y 153 (por ejemplo, H4H2138P), 161 y 169 (por ejemplo,
H4H2140P), 177 y 185 (por ejemplo, H4H2143P), 193 y 201 (por ejemplo, H4H2146P), 209 y 217 (por ejemplo,
H4H2147P), 225 y 233 (por ejemplo, H4H2148P), 241 y 249 (por ejemplo, H4H2151P), 257 y 265 (por ejemplo,
H4H2153P), 273 y 281 (por ejemplo, H4H2154P), 289 y 297 (por ejemplo, H4H2290P), 305 y 313 (por ejemplo,
H1M1819N), 321 y 329 (por ejemplo, H2M1821N), 337 y 345 (por ejemplo, H2M1824N), 353 y 361 (por ejemplo,
H2M1827N), 369 y 377 (por ejemplo, H1M1828N), 385 y 393 (por ejemplo, H2M1829N), 401 y 409 (por ejemplo,
H2M1930N), 417 y 425 (por ejemplo, H2M1934N), 433 y 441 (por ejemplo, H2M1936N), 449 y 457 (por ejemplo,
H2M1937N), 465 y 473 (por ejemplo, H2M1938N) o 481 y 489 (por ejemplo, H1M1940N).
La presente invencion incluye anticuerpos anti-ErbB3 que tienen un patron de glucosilacion modificado. En algunas aplicaciones, puede ser util la modificacion para retirar sitios de glucosilacion indeseables, o un anticuerpo que carezca de un resto de fucosa presente en la cadena de oligosacarido, por ejemplo, para aumentar la funcion de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) (vease, Shield et al., (2002) JBC 277:26733). En otras aplicaciones, puede hacerse modificacion de la galactosilacion para modificar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC).
En otro aspecto, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un anticuerpo humano recombinante o fragmento del mismo como se define en las reivindicaciones, que se une especfficamente a ErbB3 y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. En un aspecto relacionado, en este documento se describe una composicion que es una combinacion de un inhibidor de ErbB3 y un segundo agente terapeutico. El inhibidor de ErbB3 puede ser un anticuerpo o fragmento del mismo. El segundo agente terapeutico puede ser cualquier agente que se combine de forma ventajosa con un inhibidor de ErbB3. Los agentes ejemplares que pueden combinarse de forma ventajosa con un inhibidor de ErbB3 incluyen, sin limitacion, otros agentes que inhiben la actividad ErbB3 (incluyendo otros anticuerpos o fragmentos de union a antfgeno de los mismos, inhibidores peptfdicos, antagonistas de molecula pequena, etc.) y/o agentes que interfieren con la senalizacion anterior o posterior de ErbB3.
En este documento se describen metodos para inhibir la actividad ErbB3 usando un anticuerpo anti-ErbB3 o parte de union a antfgeno de un anticuerpo de la invencion, en los que los metodos terapeuticos comprenden administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo de la invencion. El trastorno tratado puede ser cualquier enfermedad o afeccion que se mejore, mitigue, inhiba o prevenga por eliminacion, inhibicion o reduccion de la actividad ErbB3. El anticuerpo anti-ErbB3 o fragmento de anticuerpo de la invencion puede funcionar bloqueando la interaccion entre ErbB3 y un companero de union a ErbB3 (por ejemplo, neuregulina-1) o inhibiendo de otro modo la actividad de senalizacion de ErbB3.
Especfficamente, la invencion proporciona un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno, o una composicion farmaceutica como se define en las reivindicaciones, para su uso en un metodo de inhibicion del crecimiento tumoral en un sujeto afectado con un tumor.
La invencion tambien proporciona el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno como se define en las reivindicaciones, para su uso en un metodo de inhibicion o atenuacion del crecimiento tumoral en un sujeto, en el que el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo se administra en combinacion con un segundo agente terapeutico, en el que el segundo agente terapeutico es un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo que se une especfficamente a EGFR o HER2.
Otras realizaciones llegaran a ser evidentes a partir de la revision de la consiguiente descripcion detallada.
Descripcion detallada
Definiciones
Las expresiones "ErbB3" y "fragmento de ErbB3," como se usan en este documento se refieren a la protefna ErbB3 humana o fragmento salvo que se especifique de una especie no humana (por ejemplo, "ErbB3 de raton," "fragmento de ErbB3 de raton," "ErbB3 de mono," "fragmento de ErbB3 de mono," etc.). El dominio extracelular de ErbB3 humano tiene la secuencia de aminoacidos mostrada en, por ejemplo, los aminoacidos 1-613 de las SEQ ID NO: 497-499.
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La expresion "ligando de ErbB3," como se usa en este documento, significa una protefna que puede unirse al dominio extracelular de la protefna ErbB3 humana para transmitir una senal biologica in vivo. La expresion "ligando de ErbB3" incluye neuregulina-1 (NRG1) y neuregulina-2 (NRG2).
El termino "anticuerpo", como se usa en este documento, pretende hacer referencia a moleculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptfdicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, asf como multfmeros de las mismas (por ejemplo IgM). Cada cadena pesada comprende una region variable de cadena pesada (abreviada en este documento como HCVR o Vh) y una region constante de cadena pesada. La region constante de cadena pesada comprende tres dominios, Ch1, Ch2 y Ch3. Cada cadena ligera comprende una region variable de cadena ligera (abreviada en este documento como LCVR o VL) y una region constante de cadena ligera. La region constante de cadena ligera comprende un dominio (Cl1). Las regiones Vh y Vl pueden subdividirse ademas en regiones de hipervariabilidad, llamadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que estan mas conservadas, llamadas regiones flanqueantes (FR). Cada Vh y Vl esta compuesta de tres CDR y de cuatro FR, dispuestas del extremo amino al extremo carboxi en el siguiente orden: FR1, cDr1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. En diferentes realizaciones de la invencion, las FR del anticuerpo anti-ErbB3 (o parte de union a antfgeno del mismo) pueden ser identicas a las secuencias de la lfnea germinal humana, o pueden estar modificarse de forma natural o artificial. Una secuencia consenso de aminoacidos se puede definir basandose en un analisis paralelo de dos o mas CDR.
El termino "anticuerpo," como se usa en este documento, tambien incluye fragmentos de union a antfgeno de moleculas de anticuerpo completas. Las expresiones "parte de union a antfgeno" de un anticuerpo, "fragmento de union a antfgeno" de un anticuerpo, y similares, como se usan en este documento, incluye cualquier polipeptido o glucoprotefna de origen natural, enzimaticamente obtenible, sintetica o geneticamente modificada que se una especfficamente a un antfgeno para formar un complejo. Los fragmentos de union a antfgeno de un anticuerpo pueden obtenerse, por ejemplo, de moleculas de anticuerpo completas usando cualquier tecnica convencional adecuada tal como digestion proteolftica o tecnicas de ingenierfa genetica recombinantes que implica la manipulacion y expresion de ADN que codifica dominios variables de anticuerpo y opcionalmente constantes. Dicho ADN se conoce y/o esta disponible facilmente de, por ejemplo, fuentes comerciales, colecciones de ADN (incluyendo, por ejemplo, colecciones de anticuerpos en fagos) o puede sintetizarse. El ADN puede secuenciarse y manipularse qufmicamente o usando tecnicas de biologfa molecular, por ejemplo, para disponer uno o mas dominios variables y/o constantes en una configuracion adecuada, o para introducir codones, crear restos de cistefna, modificar, anadir o eliminar aminoacidos, etc.
Los ejemplos no limitantes de fragmentos de union a antfgeno incluyen: (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moleculas Fv de cadena sencilla (scFv); (vi) fragmentos dAb; y (vii) unidades de reconocimiento mfnimas que consisten en los restos de aminoacidos que imitan la region hipervariable de un anticuerpo (por ejemplo, una region determinante de complementariedad (CDR) aislada, tal como un peptido CDR3) o un peptido FR3-CDR3-FR4 restringido. Otras moleculas genomanipuladas, tales como anticuerpos especfficos de dominio, anticuerpos de un dominio, anticuerpos de dominio eliminado, anticuerpos quimericos, anticuerpos de CDR injertada, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, minicuerpos, nanocuerpos (por ejemplo, nanocuerpos monovalentes, nanocuerpos bivalentes, etc.), agentes inmunofarmaceuticos modulares pequenos (SMIP) y dominios IgNAR variables de tiburon, tambien estan abarcados dentro de la expresion "fragmento de union a antfgeno," como se usa en este documento.
Un fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo comprendera tfpicamente al menos un dominio variable. El dominio variable puede ser de cualquier tamano o composicion de aminoacidos y generalmente comprendera al menos una CDR que esta adyacente a o en fase con una o mas secuencias flanqueantes. En fragmentos de union a antfgeno que tienen un dominio Vh asociado con un dominio Vl, los dominios Vh y Vl pueden situarse uno respecto al otro en cualquier disposicion adecuada. Por ejemplo, la region variable puede ser dimerica y contener los dfmeros Vh-Vh, Vh-Vl o Vl-Vl. Como alternativa, el fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo puede contener un dominio Vh o Vl monomerico.
Un fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo puede contener al menos un dominio variable unido covalentemente a al menos un dominio constante. Las configuraciones ejemplares no limitantes de dominios variables y constantes que pueden encontrarse dentro de un fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo incluyen: (i) Vh-Ch1; (ii) Vh-Ch2; (iii) Vh-Ch3; (iv) Vh-Ch1-Ch2; (v) Vh-Ch1-Ch2-Ch3; (vi) Vh-Ch2-Ch3; (vii) Vh-Cl; (viii) Vl-Ch1; (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-Ch3; (xi) Vl-Ch1-Ch2; (xii) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; y (xiv) Vl-Cl. En cualquier configuracion de dominios variables y constantes, incluyendo cualquiera de las configuraciones ejemplares enumeradas anteriormente, los dominios variables y constantes pueden estar unidos directamente entre sf o pueden estar unidos mediante una bisagra completa o parcial o region conectora. Una region de bisagra puede consistir en al menos 2 (por ejemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 o mas) aminoacidos que producen una union flexible o semiflexible entre dominios variables y/o constantes adyacentes en una unica molecula polipeptfdica. Ademas, un fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo puede comprender un homodfmero o heterodfmero (u otro multfmero) de cualquiera de las configuraciones de dominio variable y constante enumeradas anteriormente en asociacion no covalente entre sf y/o con uno o mas dominios Vh o Vl monomericos (por ejemplo, por uno o mas enlaces disulfuro).
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Como con las moleculas de anticuerpo completas, los fragmentos de union a antfgeno pueden ser monoespecfficos o multiespecfficos (por ejemplo, biespecfficos). Un fragmento de union a antfgeno multiespecffico de un anticuerpo tfpicamente comprendera al menos dos dominios variables diferentes, en los que cada dominio variable puede unirse especfficamente a un antfgeno diferente o a un epftopo diferente en el mismo antfgeno. Cualquier formato de anticuerpo multiespecffico, incluyendo los formatos de anticuerpo biespecffico ejemplares divulgados en este documento, puede adaptarse para su uso en el contexto de un fragmento de union a antfgeno de un anticuerpo de la presente invencion usando tecnicas rutinarias disponibles en el tecnica.
Los anticuerpos de la presente invencion pueden funcionar mediante citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) o citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos (ADCC). "Citotoxicidad dependiente de complemento" (CDC) se refiere a lisis de celulas que expresan antfgeno por un anticuerpo de la invencion en presencia del complemento. "Citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos" (ADCC) se refiere a una reaccion mediada por celulas, en que celulas citotoxicas no especfficas que expresan receptores de Fc (FcR) (por ejemplo, linfocitos citolfticos naturales (NK), neutrofilos y macrofagos) reconocen el anticuerpo unido en una celula diana y de ese modo da lugar a la lisis de la celula diana. La CDC y la ADCC pueden medirse usando ensayos que son bien conocidos y estan disponibles en la tecnica. (Veanse, por ejemplo, los documentos US 5500362 y 5821337 y Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). La region constante de un anticuerpo es importante en la capacidad de un anticuerpo de fijar el complemento y mediar la citotoxicidad dependiente de celulas. Por tanto, el isotipo de un anticuerpo puede seleccionarse basandose en si se desea que el anticuerpo medie la citotoxicidad.
La expresion "anticuerpo humano", como se usa en este documento, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la lfnea germinal humana. Los anticuerpo humanos pueden incluir restos de aminoacido no codificados por secuencias de inmunoglobulinas de la lfnea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagenesis aleatoria o especffica de sitio in vitro o por mutacion somatica in vivo), por ejemplo, en las CDR y en particular CDR3. Sin embargo, la expresion "anticuerpo humano", como se usa en este documento, no pretende incluir anticuerpos en que las secuencias CDR derivadas de la lfnea germinal de otra especie de mamffero, tal como un raton, se han injertado en secuencias flanqueantes humanas.
La expresion "anticuerpo humano recombinante", como se usa en este documento, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que estan preparados, expresados, creados o aislados por medios recombinantes, tales como anticuerpos expresados usando un vector de expresion recombinante transfectado en una celula hospedadora (descrito a continuacion adicionalmente), anticuerpos aislados de una coleccion de anticuerpos humanos combinatorios, recombinantes (descrito a continuacion adicionalmente), anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un raton) que es transgenico para genes de inmunoglobulina humana (vease, por ejemplo, Taylor et al., (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implica el corte y empalme de secuencias genicas de inmunoglobulina humana a otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la lfnea germinal humana. En determinados aspectos, sin embargo, dichos anticuerpos humanos recombinantes se someten a mutagenesis in vitro (o, cuando se usa un animal transgenico para las secuencias de Ig humana, mutagenesis somatica in vivo) y, por tanto, las secuencias de aminoacidos de las regiones Vh y Vl de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivan de, y estan relacionadas con, las secuencias Vh y Vl de la lfnea germinal humana, no pueden existir de forma natural dentro del repertorio de la lfnea germinal de anticuerpos humanos in vivo.
Los anticuerpos humanos pueden existir en dos formas que estan asociadas con heterogeneidad de bisagra. En una forma, una molecula de inmunoglobulina comprende una construccion de cuatro cadenas estable de aproximadamente 150-160 kDa en que los dfmeros se mantienen juntos por un enlace disulfuro de la cadena pesada intercatenario. En una segunda forma, los dfmeros no estan unidos mediante enlaces disulfuro intercatenarios y se forma una molecula de aproximadamente 75-80 kDa compuesta de una cadena ligera y pesada acopladas covalentemente (semianticuerpo). Estas formas han sido extremadamente diffciles de separar, incluso despues de purificacion por afinidad.
La frecuencia de aparicion de la segunda forma en diversos isotipos de IgG intacta se debe a, aunque sin limitacion, diferencias estructurales asociadas con el isotipo de la region bisagra del anticuerpo. Una sustitucion de un unico aminoacido en la region de bisagra de la bisagra de IgG4 humana puede reducir significativamente la aparicion de la segunda forma (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) hasta niveles tfpicamente observados usando una bisagra de IgG1 humana. La presente invencion abarca anticuerpos que tienen una o mas mutaciones en la region de bisagra, Ch2 o Ch3 que puede ser deseable, por ejemplo, en la produccion, para mejorar el rendimiento de la forma de anticuerpo deseada.
Un "anticuerpo aislado," como se usa en este documento, significa un anticuerpo que se ha identificado y separado y/o recuperado de al menos un componente de su entorno natural. Por ejemplo, un anticuerpo que se ha separado o retirado de al menos un componente de un organismo, o de un tejido o celula en que existe de forma natural el anticuerpo o se produce de forma natural, es un "anticuerpo aislado" para los fines de la presente invencion. Un
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anticuerpo aislado tambien incluye un anticuerpo in situ dentro de una celula recombinante. Los anticuerpos aislados son anticuerpos que se han sometido a al menos una etapa de purificacion o aislamiento. De acuerdo con determinadas realizaciones, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o agentes qufmicos.
La expresion "se une especfficamente", o similares, significa que un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo forma un complejo con un antfgeno que es relativamente estable en condiciones fisiologicas. Los metodos para determinar si un anticuerpo se une especfficamente a un antfgeno son bien conocidos en la tecnica e incluyen, por ejemplo, dialisis en equilibrio, resonancia de plasmon superficial, y similares. Por ejemplo, un anticuerpo que "se une especfficamente" a ErbB3 humano, como se usa en el contexto de la presente invencion, incluye anticuerpos que se unen a ErbB3 humano a parte del mismo con una Kd de menos de aproximadamente 1000 nM, menos de aproximadamente 500 nM, menos de aproximadamente 300 nM, menos de aproximadamente 200 nM, menos de aproximadamente 100 nM, menos de aproximadamente 90 nM, menos de aproximadamente 80 nM, menos de

aproximadamente 70 nM, menos de aproximadamente 60 nM, menos de aproximadamente 50 nM, menos de

aproximadamente 40 nM, menos de aproximadamente 30 nM, menos de aproximadamente 20 nM, menos de

aproximadamente 10 nM, menos de aproximadamente 5 nM, menos de aproximadamente 4 nM, menos de
aproximadamente 3 nM, menos de aproximadamente 2 nM, menos de aproximadamente 1 nM o menos de aproximadamente 0,5 nM, medida en un ensayo de resonancia de plasmon superficial. (Vease, por ejemplo, el ejemplo 3, en este documento. Un anticuerpo aislado que se une especfficamente a ErbB3 humano puede tener, sin embargo, reactividad cruzada con otros antfgenos, tales como moleculas ErbB3 de otras especies (no humanas).
Un anticuerpo "neutralizante" o "bloqueante", como se usa en este documento, pretende hacer referencia a un anticuerpo cuya union a ErbB3: (i) impide la interaccion entre ErbB3 o un fragmento de ErbB3 y un ligando de ErbB3 (por ejemplo, neuregulina-1), y/o (ii) provoca la inhibicion de al menos una funcion biologica de ErbB3. La inhibicion causada por un anticuerpo neutralizante o bloqueante de ErbB3 no tiene que ser completa siempre que sea detectable usando un ensayo apropiado. Los ensayos ejemplares para detectar la inhibicion de ErbB3 se describen este documento.
Los anticuerpos anti-ErbB3 divulgados en este documento pueden comprender una o mas sustituciones, inserciones y/o eliminaciones de aminoacido en las regiones flanqueantes y/o CDR de los dominios variables de cadena pesada y ligera en comparacion con las secuencias correspondientes de la lfnea germinal de las que se obtuvieron los anticuerpos. Dichas mutaciones pueden averiguarse facilmente comparando las secuencias de aminoacidos divulgadas en este documento con secuencias de la lfnea germinal disponibles en, por ejemplo, bases de datos de secuencias de anticuerpos publicas. En este documento se describen anticuerpos y fragmentos de union a antfgeno de los mismos, que se obtienen de cualquiera de las secuencias de aminoacidos divulgadas en este documento, en las que uno o mas aminoacidos dentro de una o mas regiones flanqueantes y/o CDR estan mutados en el resto o restos correspondientes de la secuencia de la lfnea germinal de la que se obtuvo el anticuerpo, o en el resto o restos correspondientes de otra secuencia de la lfnea germinal humana, o en una sustitucion de aminoacido conservativa del resto o restos de la lfnea germinal correspondientes (dichos cambios de secuencia se mencionan en este documento colectivamente como "mutaciones de la lfnea germinal"). Un experto en la materia, partiendo con las secuencias de la region variable de cadena pesada y ligera divulgadas en este documento, puede producir facilmente numerosos anticuerpos y fragmentos de union a antfgeno que comprenden una o mas mutaciones de la lfnea germinal individuales o combinaciones de las mismas. Todos los restos flanqueantes y/o CDR dentro de los dominios Vh y/o Vl pueden mutarse de nuevo a los restos encontrados en la secuencia de la lfnea germinal humana de la que se obtuvo el anticuerpo. Como alternativa, pueden mutarse unicamente determinados restos de nuevo a la secuencia de la lfnea germinal original, por ejemplo, unicamente los restos mutados encontrados dentro de los primeros 8 aminoacidos de FR1 o dentro de los ultimos 8 aminoacidos de FR4, o unicamente los restos mutados encontrados dentro de CDR1, CDR2 o CDR3. Uno o mas de los restos flanqueantes y/o CDR pueden mutarse al resto o restos correspondientes de una secuencia de la lfnea germinal diferente (es decir, una secuencia de la lfnea germinal que es diferente de la secuencia de la lfnea germinal de la que se obtuvo originalmente el anticuerpo). Ademas, los anticuerpos pueden contener cualquier combinacion de dos o mas mutaciones de la lfnea germinal dentro de las regiones flanqueantes y/o CDR, por ejemplo, en las que determinados restos individuales se mutan al resto correspondiente de una secuencia de la lfnea germinal particular mientras que otros determinados restos que difieren de la secuencia de la lfnea germinal original se mantienen o se mutan en el resto correspondiente de una secuencia de la lfnea germinal diferente. Una vez obtenidos, los anticuerpo y fragmentos de union a antfgeno que contienen una o mas mutaciones de la lfnea germinal pueden ensayarse facilmente para una o mas propiedades deseadas tales como, especificidad de union mejorada, afinidad de union aumentada, propiedades biologicas antagonista o agonistas mejoradas o potenciadas (segun pueda ser el caso), inmunogenicidad reducida, etc.
Tambien se describen en este documento variantes de cualquiera de las secuencias de aminoacidos de HCVR, LCVR y/o CDR divulgadas en este documento que tienen una o mas sustituciones conservativas. Por ejemplo, en este documento se describen anticuerpos anti-ErbB3 que tienen secuencias de aminoacidos de HCVR, LCVR y/o CDR con, por ejemplo, 10 o menos, 8 o menos, 6 o menos, 4 o menos, etc. sustituciones de aminoacidos conservativas respecto a cualquiera de las secuencias de aminoacidos de HCVR, LCVR y/o CDR divulgadas en este documento.
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La expresion "resonancia de plasmon superficial", como se usa en este documento, se refiere a un fenomeno optico que permite el analisis de interacciones en tiempo real por deteccion de alteraciones en concentraciones de protefna dentro de una matriz biodetectora, por ejemplo, usando el sistema BIAcore™ (Biacore Life Sciences division de GE Healthcare, Piscataway, NJ).
El termino "Kd", como se usa en este documento, pretende hacer referencia a la constante de disociacion en equilibrio de una interaccion particular de anticuerpo-antfgeno.
El termino "epftopo" se refiere a un determinante antigenico que interactua con un sitio de union a antfgeno especffico en la region variable de una molecula de anticuerpo conocida como paratopo. Un unico antfgeno puede tener mas de un epftopo. Por tanto, diferentes anticuerpos pueden unirse a diferentes areas en un antfgeno o puede tener diferentes efectos biologicos. Los epftopos pueden ser conformacionales o lineales. Un epftopo conformacional se produce yuxtaponiendo espacialmente aminoacidos de diferentes segmentos de la cadena polipeptfdica lineal. Un epftopo lineal es uno producido por restos de aminoacido adyacentes en una cadena polipeptfdica. En determinadas circunstancias, un epftopo puede incluir restos de sacaridos, grupos fosforilo o grupos sulfonilo en el antfgeno.
La expresion "identidad sustancial" o "sustancialmente identico", cuando hace referencia a un acido nucleico o fragmento del mismo, indica que, cuando se alinean de forma optima con inserciones o eliminaciones de nucleotidos apropiadas con otro acido nucleico (o su hebra complementaria), existe identidad de secuencia de nucleotidos en al menos aproximadamente un 95 %, y mas preferiblemente al menos aproximadamente un 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de las bases nucleotfdicas, medida por cualquier algoritmo bien conocido de identidad de secuencia, tal como FASTA, BLAST o Gap, como se analiza a continuacion. Una molecula de acido nucleico que tiene identidad sustancial con una molecula de acido nucleico de referencia puede codificar, en determinados casos, un polipeptido que tiene la misma secuencia de aminoacidos o sustancialmente similar que el polipeptido codificado por la molecula de acido nucleico de referencia.
Aplicada a polipeptidos, la expresion "similitud sustancial" o "sustancialmente similar" significa que dos secuencias peptfdicas, cuando se alinean de forma optima, tal como mediante los programas GAP o BESTFIT usando ponderaciones de hueco por defecto, comparten al menos un 95 % de identidad de secuencia, incluso mas preferentemente al menos un 98 % o 99 % de identidad de secuencia. Preferiblemente, las posiciones de los restos que no son identicas difieren en sustituciones de aminoacidos conservativas. Una "sustitucion de aminoacido conservativa" es una en que un resto de aminoacido esta sustituido por otro resto de aminoacido que tiene una cadena lateral (grupo R) con propiedades qufmicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad). En general, una sustitucion de aminoacido conservativa no cambiara sustancialmente las propiedades funcionales de una protefna. En casos donde dos o mas secuencias de aminoacidos difieren entre sf por sustituciones conservativas, el porcentaje de identidad de secuencia o grado de similitud puede ajustarse a la alza para corregir la naturaleza conservativa de la sustitucion. Los medios para hacer este ajuste son bien conocidos para los expertos en la materia. Vease, por ejemplo, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Los ejemplos de grupos de aminoacidos que tienen cadenas laterales con propiedades qufmicas similares incluyen (1) cadenas laterales alifaticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; (2) cadenas laterales de hidroxilo-alifaticas: serina y treonina; (3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; (4) cadenas laterales aromaticas: fenilalanina, tirosina y triptofano; (5) cadenas laterales basicas: lisina, arginina e histidina; (6) cadenas laterales acidas: aspartato y glutamato, y (7) cadenas laterales que contienen azufre que son cistefna y metionina. Los grupos de sustitucion de aminoacido conservativa son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato y asparagina-glutamina. Como alternativa, un remplazo conservativo es cualquier cambio que tenga un valor positivo en la matriz de probabilidad logarftmica PAM250 divulgada en Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445. Un remplazo "moderadamente conservativo" es cualquiera cambio que tenga un valor no negativo en la matriz de probabilidad logarftmica PAM250.
La similitud de secuencia para polipeptidos, que tambien se menciona como identidad de secuencia, se mide tfpicamente usando un programa informatico de analisis de secuencias. El programa informatico de analisis de protefnas acopla secuencias similares usando medidas de similitud asignadas a diversas sustituciones, eliminaciones y otras modificaciones, incluyendo sustituciones de aminoacidos conservativas. Por ejemplo, el programa informatico GCG contiene programas tales como Gap y Bestfit que pueden usarse con parametros por defecto para determinar la homologfa de secuencia o la identidad de secuencia entre polipeptidos muy relacionados, tales como polipeptidos homologos de diferentes especies de organismos o entre una protefna de tipo silvestre y una mutefna de la misma. Vease, por ejemplo, GCG Version 6.1. Las secuencias polipeptfdicas tambien pueden compararse usando FASTA usando parametros por defecto o recomendados, un programa en GCG Version 6.1. FASTA (por ejemplo, FASTA2 y FASTA3) proporciona alineaciones y porcentajes de identidad de secuencia de las regiones del mejor solapamiento entre las secuencias de consulta y de busqueda (Pearson (2000) supra). Otro algoritmo preferido cuando se compara una secuencia de la invencion con una base de datos que contiene una gran cantidad de secuencias de diferentes organismos es el programa informatico BLAST, especialmente BLASTP o TBLASTN, usando parametros por defecto. Vease, por ejemplo, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 y Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402.
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Caracterfsticas biologicas de los anticuerpos
Los anticuerpos de la presente invencion bloquean la interaccion entre ErbB3 y su ligando neuregulina-1 (NRG1). Como se usa en este documento, la expresion "bloquea la interaccion entre ErbB3 y NRG1" significa que, en un ensayo en que puede detectarse y/o cuantificarse la interaccion ffsica entre ErbB3 y NRG1, la adicion de un anticuerpo de la invencion reduce la interaccion entre ErbB3 y NRG1 en al menos un 50 %. Un ensayo ejemplar no limitante que puede usarse para determinar si un anticuerpo bloquea la interaccion entre ErbB3 humano y nRG1 se ilustra en el ejemplo 4, en este documento. En este ejemplo, los anticuerpos se mezclan con la protefna ErbB3, y despues la mezcla de anticuerpo/ErbB3 se aplica a una superficie recubierta con protefna NRG1. Despues de eliminar por lavado las moleculas no unidas, se mide la cantidad de ErbB3 unido a la superficie recubierta con NRG1. Usando cantidades variables de anticuerpo en este formato de ensayo, puede calcularse la cantidad de anticuerpo necesaria para bloquear un 50 % de ErbB3 aNRG1 y expresarse como un valor de CI50. La presente divulgacion incluye anticuerpos anti-ErbB3 que muestran una CI50 de menos de aproximadamente 600 pM cuando se ensayan en un ensayo de union de ErbB3/NRG1 como se describe anteriormente, o un ensayo sustancialmente similar. Por ejemplo, la divulgacion incluye anticuerpos anti-ErbB3 que muestran una CI50 de menos de aproximadamente 600, 500, 400, 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 18, 16, 14, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1 pM cuando se ensayan en un ensayo de union de ErbB3/NRG1 como se describe anteriormente, o un ensayo sustancialmente similar.
Como alternativa, se puede determinar si un anticuerpo bloquea la interaccion entre ErbB3 y NRG1 usando un formato de ensayo basado en celulas que detecta cambios en la senalizacion celular inducida por NRG1. Los formatos de ensayo ejemplares de este tipo se ilustran en los ejemplos 6 y 8, en este documento. En estos ejemplos, se mide el grado de fosforilacion de la cinasa Akt y/o ErbB3 en celulas despues de tratamiento con NRG1 en presencia de cantidades variables de anticuerpo anti-ErbB3. En estos formatos de ensayo, el porcentaje de inhibicion de la fosforilacion de Akt y/o ErbB3 causado por la presencia de un anticuerpo anti-ErbB3 sirve como indicador del grado al que el anticuerpo bloquea la interaccion entre ErbB3 y NRG1. La presente invencion incluye anticuerpos que inhiben la fosforilacion de Akt o ErbB3 en al menos un 60 % cuando se ensayan en un ensayo de fosforilacion de Akt o ErbB3 como se describe anteriormente, o un ensayo sustancialmente similar. Por ejemplo, la invencion incluye anticuerpos anti-ErbB3 que inhiben la fosforilacion de Akt o ErbB3 en al menos aproximadamente un 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 100 % cuando se ensayan en un ensayo de fosforilacion de Akt o ErbB3 como se describe anteriormente, o un ensayo sustancialmente similar.
Los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion tambien muestran las siguientes propiedades: (1) la capacidad la inducir la internalizacion de ErbB3 expresado en superficie (vease, por ejemplo, el ejemplo 5, en este documento); (2) la capacidad de inhibir el crecimiento de celulas tumorales estimulado por NRG1 in vitro, en solitario o en combinacion con inhibicion de EGFR (vease, por ejemplo, el ejemplo 7, en este documento); y (3) la capacidad de inhibir el crecimiento tumoral en animales (vease, por ejemplo, el ejemplo 9, en este documento).
Cartografiado de epftopos y tecnologfas relacionadas
La protefna ErbB3, como todos los miembros de la familia de ErbB/HER, contiene cuatro dominios extracelulares, mencionados como "dominio I", "dominio II", "dominio III", y "dominio IV". El dominio I es la secuencia de aminoacidos representada por los aminoacidos 1 a 190 de la SEQ ID NO:498; El dominio II es la secuencia de aminoacidos representada por los aminoacidos 191 a 308 de la SEQ ID NO:498; El dominio III es la secuencia de aminoacidos representada por los aminoacidos 309 a 499 de la SEQ ID NO:498; y el dominio IV es la secuencia de aminoacidos representada por los aminoacidos 500 a 624 de la SEQ ID NO:498.
La presente invencion proporciona anticuerpos anti-ErbB3 que interaction con un epftopo encontrado dentro del dominio III del dominio extracelular de ErbB3. El epftopo o epftopos pueden consistir de una o mas secuencias contiguas de 3 o mas (por ejemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o mas) aminoacidos ubicados dentro del dominio III de ErbB3. Como alternativa, el epftopo puede consistir en una pluralidad de aminoacidos no contiguos (o secuencias de aminoacidos) ubicadas dentro del dominio III de ErbB3. Se proporcionan anticuerpos anti-ErbB3 que interaction con uno o mas aminoacidos ubicados dentro de los siguientes segmentos de aminoacidos del dominio III: aminoacidos 345-367 de la SEQ ID NO:498, aminoacidos 423-439 de la SEQ ID NO:498; y aminoacidos 451-463 de la SEQ ID NO:498. La presente invencion proporciona anticuerpos anti-ErbB3 que interaction con al menos un aminoacido dentro de cada uno de los segmentos de aminoacidos del dominio III mencionados anteriormente (es decir, dentro de cada uno de los aminoacidos 345-367, 423-439 y 451-463 de la SEQ ID NO:498).
Diversas tecnicas conocidas para los expertos en la materia pueden usarse para determinar si un anticuerpo "interactua con uno o mas aminoacidos" dentro de un polipeptido o protefna. Las tecnicas ejemplares incluyen, por ejemplo, ensayo de bloqueo cruzado rutinario tal como el descrito en Antibodies, Harlow y Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY), analisis mutacional de barrido con alanina, analisis de transferencias de peptidos (Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463), y analisis de escision de peptidos. Ademas, pueden emplearse metodos tales como escision de epftopos, extraccion de epftopos y modificacion qufmica de antfgenos (Tomer, 2000,
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Protein Science 9:487-496). Otro metodo que puede usarse para identificar los aminoacidos dentro de un polipeptido con que interactua un anticuerpo es el intercambio de hidrogeno/deuterio detectado por espectrometrfa de masas. (Vease,porejemplo, el ejemplo 11 en este documento). En terminos generales, el metodo de intercambio de hidrogeno/deuterio implica el marcaje con deuterio de la protefna de interes, seguido por union del anticuerpo a la protefna marcada con deuterio. A continuacion, el complejo de protefna/anticuerpo se transfiere a agua para permitir que se produzca el intercambio de hidrogeno-deuterio en todos los restos excepto en los restos protegidos por el anticuerpo (que permanecen marcados con deuterio). Despues de la disociacion del anticuerpo, la protefna diana se somete a escision con proteasa y analisis de espectrometrfa de masas, revelando de ese modo los restos marcados con deuterio que corresponden a los aminoacidos especfficos con que interactua el anticuerpo. Vease, por ejemplo, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen y Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A.
Tambien se describen en este documento anticuerpos anti-ErbB3 que se unen al mismo epftopo que cualquiera de los anticuerpos ejemplares especfficos descritos en este documento (por ejemplo, H1M1819N, H2M1821N, H2M1824N, H2M1827N, H1M1828N, H2M1829N, H2M1930N, H2M1934N, H2M1938N, H1M1940N, etc.). Asimismo, la presente divulgacion tambien incluye anticuerpos anti-ErbB3 que compiten por la union a ErbB3 o un fragmento de ErbB3 con cualquiera de los anticuerpos ejemplares especfficos descritos en este documento (por ejemplo, H1M1819N, H2M1821N, H2M1824N, H2M1827N, H1M1828N, H2M1829N, H2M1930N, H2M1934N, H2M1938N, H1M1940N, etc.).
Se puede determinar facilmente si un anticuerpo se une al mismo epftopo que, o compite por la union con, un anticuerpo anti-ErbB3 de referencia usando metodos rutinarios conocidos en la tecnica. Por ejemplo, para determinar si un anticuerpo de ensayo se une al mismo epftopo que un anticuerpo anti-ErbB3 de referencia de la invencion, se permite que el anticuerpo de referencia se una a una protefna o peptido ErbB3 en condiciones de saturacion. A continuacion, se evalua la capacidad de un anticuerpo de ensayo de unirse a la molecula ErbB3. Si el anticuerpo de ensayo puede unirse a ErbB3 despues de union por saturacion con el anticuerpo anti-ErbB3 de referencia, puede concluirse que el anticuerpo de ensayo se une a un epftopo diferente del anticuerpo anti-ErbB3 de referencia. Por otro lado, si el anticuerpo de ensayo no puede unirse a la molecula ErbB3 despues de la union por saturacion con el anticuerpo anti-ErbB3 de referencia, entonces el anticuerpo de ensayo puede unirse al mismo epftopo que el epftopo al que se une el anticuerpo anti-ErbB3 de referencia de la invencion. Entonces puede realizarse experimentacion rutinaria adicional (por ejemplo, mutacion de peptidos y analisis de union) para confirmar si la ausencia observada de union del anticuerpo de ensayo se debe, de hecho, a la union al mismo epftopo que el anticuerpo de referencia o si el bloqueo esterico (u otro fenomeno) es responsable de la ausencia de la union observada. Los experimentos de este tipo pueden realizarse usando ELISA, RIA, Biacore, citometrfa de flujo o cualquier otro ensayo cuantitativo o cualitativo de union de anticuerpos disponible en la tecnica. Dos anticuerpos pueden unirse al mismo epftopo (o solapando) si, por ejemplo, un exceso de factor 1, 5, 10, 20 o 100 de un anticuerpo inhibe la union del otro en al menos un 50 %, pero preferiblemente un 75 %, 90 % o incluso un 99 % medida en un ensayo de union competitiva (vease, por ejemplo, Junghans et al., Cancer Res. 1990:50:1495-1502). Como alternativa, se considera que dos anticuerpos se unen al mismo epftopo si esencialmente todas las mutaciones de aminoacido en el antfgeno que reducen o eliminan la union de un anticuerpo reducen o eliminan la union del otro. Se considera que dos anticuerpos tienen "epftopos solapantes" si unicamente un subconjunto de las mutaciones de aminoacido que reducen o eliminan la union de un anticuerpo reducen o eliminan la union del otro.
Para determinar si un anticuerpo compite por la union con un anticuerpo anti-ErbB3 de referencia, se realiza la metodologfa de union descrita anteriormente en dos orientaciones: En una primera orientacion, se permite que el anticuerpo de referencia se una a una molecula ErbB3 en condiciones de saturacion seguido por evaluacion de la union del anticuerpo de ensayo a la molecula ErbB3. En una segunda orientacion, se permite que el anticuerpo de ensayo se una a una molecula ErbB3 en condiciones de saturacion seguido por evaluacion del anticuerpo de referencia a la molecula ErbB3. Si, en ambas orientaciones, unicamente el primer anticuerpo (de saturacion) puede unirse a la molecula ErbB3, entonces se concluye que el anticuerpo de ensayo y el anticuerpo de referencia compiten por la union a ErbB3. Como apreciara un experto en la materia, un anticuerpo que compite por la union con un anticuerpo de referencia puede que no se una necesariamente al mismo epftopo que el anticuerpo de referencia, sino que puede bloquear estericamente la union del anticuerpo de referencia mediante la union a un epftopo solapante o adyacente.
Preparacion de anticuerpos humanos
Los metodos para generar anticuerpos monoclonales, incluyendo anticuerpos monoclonales completamente humanos son conocidos en la tecnica. Cualquiera de dichos metodos conocidos puede usarse en el contexto de la presente invencion para preparar anticuerpos humanos que se unan especfficamente a ErbB3 humano.
Usando la tecnologfa VELOCIMMUNE™ o cualquier otro metodo conocido para generar anticuerpos monoclonales, inicialmente se afslan anticuerpos quimericos de alta afinidad contra ErbB3 que tienen una region variable humana y una region constante de raton. Como en la siguiente seccion experimental, los anticuerpos se caracterizan y seleccionan para las caracterfsticas deseables, incluyendo la afinidad, selectividad, epftopo, etc. Las regiones constantes de raton se remplazan con una region constante humana deseada para generar el anticuerpo completamente humano de la invencion, por ejemplo, IgG1 o IgG4 de tipo silvestre o modificada. Aunque la region
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constante seleccionada puede variar de acuerdo con el uso especffico, las caracterfsticas de union a antfgeno de alta afinidad y especificidad de diana residen en la region variable.
Bioequivalentes
Los anticuerpos anti-ErbB3 y fragmentos de anticuerpos descritos en este documento abarcan protefnas que tienen secuencias de aminoacidos que varfan de las de los anticuerpos descritos, pero que retienen la capacidad de unirse a ErbB3. Dichos anticuerpos variantes y fragmentos de anticuerpo comprenden una o mas adiciones, eliminaciones o sustituciones de aminoacidos cuando se comparan con la secuencia precursora, pero muestran actividad biologica que es esencialmente equivalente a la de los anticuerpos descritos. Asimismo, las secuencias de ADN que codifican el anticuerpo anti-ErbB3 descritas en este documento abarcan secuencias que comprenden una o mas adiciones, eliminaciones o sustituciones de nucleotidos en comparacion con la secuencia divulgada, pero que codifican un anticuerpo anti-ErbB3 o fragmento de anticuerpo que es esencialmente bioequivalente a un anticuerpo anti-ErbB3 o fragmento de anticuerpo. Los ejemplos de dichas secuencias variantes de aminoacido y ADN se analizan anteriormente.
Dos protefnas de union a antfgeno o anticuerpos se consideran bioequivalentes si, por ejemplo, son equivalentes farmaceuticos o alternativas farmaceuticas cuya tasa y grado de absorcion no muestran una diferencia significativa cuando se administran a la misma dosis molar en condiciones experimentales similares, en una sola dosis o en multiples dosis. Algunos anticuerpos se consideraran equivalentes o alternativas farmaceuticas si son equivalentes en el grado de su absorcion, pero no en su tasa de absorcion y aun pueden considerarse bioequivalentes porque dichas diferencias en la tasa de absorcion son intencionadas y se reflejan en el marcaje, no son esenciales para obtener las concentraciones eficaces del farmaco en el organismo en, por ejemplo, uso cronico, y se consideran medicamente insignificantes para el producto farmacologico particular estudiado.
Dos protefnas de union a antfgeno pueden ser bioequivalentes si no hay diferencias clfnicamente importantes en su seguridad, pureza y potencia.
Dos protefnas de union a antfgeno pueden ser bioequivalentes si un paciente puede cambiarse una o mas veces entre el producto de referencia y el producto biologico sin un aumento esperado en el riesgo de efectos adversos, incluyendo un cambio clfnicamente significativo en la inmunogenicidad, o eficacia disminuida en comparacion con tratamiento continuado sin dicho cambio.
Dos protefnas de union a antfgeno pueden ser bioequivalentes si ambas actuan por un mecanismo o mecanismos comunes de accion para la afeccion o afecciones de uso, en la medida en que dichos mecanismos sean conocidos.
La bioequivalencia puede demostrarse por metodos in vivo e in vitro. Las medidas de bioequivalencia incluyen, por ejemplo, (a) un ensayo in vivo en seres humanos u otros mamfferos, en que se mide la concentracion del anticuerpo o sus metabolitos en sangre, plasma, suero u otro lfquido biologico como una funcion del tiempo; (b) un ensayo in vitro que sea correlacionado con y es razonablemente predictivo de datos de biodisponibilidad in vivo en seres humanos; (c) un ensayo in vivo en seres humanos u otros mamfferos en que se mide el efecto farmacologico agudo apropiado del anticuerpo (o su diana) como una funcion del tiempo; y (d) en un ensayo clfnico bien controlado que establece la seguridad, eficacia o biodisponibilidad o bioequivalencia de un anticuerpo.
Las variantes bioequivalentes de anticuerpos anti-ErbB3 de la invencion pueden construirse, por ejemplo, generando diversas sustituciones de restos o secuencias o eliminando restos terminales o internos o secuencias no necesarias para la actividad biologica. Por ejemplo, los restos de cistefna no esenciales para la actividad biologica pueden eliminarse o remplazarse con otros aminoacidos para evitar la formacion de puentes disulfuro intramoleculares innecesarios o incorrectos tras la renaturalizacion. En otros contextos, los anticuerpos bioequivalentes pueden incluir variantes de anticuerpo anti-ErbB3 que comprenden cambios de aminoacido que modifican las caracterfsticas de glucosilacion de los anticuerpos, por ejemplo, mutaciones que eliminan o retiran la glucosilacion.
Selectividad de especie y reactividad cruzada de especie
De acuerdo con determinados aspectos de la divulgacion, los anticuerpos anti-ErbB3 se unen a ErbB3 humano, pero no a ErbB3 de otras especies. La presente divulgacion tambien incluye anticuerpos anti-ErbB3 que se unen a ErbB3 humano y a ErbB3 de una o mas especies no humanas. Por ejemplo, los anticuerpos anti-ErbB3 pueden unirse a ErbB3 humano y pueden unirse o no unirse, segun pueda ser el caso, a uno o mas de ErbB3 de raton, rata, cobaya, hamster, jerbo, cerdo, gato, perro, conejo, cabra, oveja, vaca, caballo, camello, macaco cangrejero, titf, macaco de la India o chimpance.
Inmunoconjugados
La invencion abarca anticuerpos monoclonales anti-ErbB3 conjugados con un resto terapeutico ("inmunoconjugado"), tal como una citotoxina, un farmaco quimioterapeutico, un inmunodepresor o un radioisotopo. Los agentes citotoxicos incluyen cualquier agente que sea perjudicial para las celulas. Los ejemplos de agentes
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citotoxicos adecuados y agentes quimioterapeuticos para formar inmunoconjugados son conocidos en la tecnica, (vease, por ejemplo, el documento WO 05/103081).
Anticuerpos multiespecfficos
Los anticuerpos de la presente invencion pueden ser monoespecfficos, biespecfficos o multiespecfficos. Los anticuerpos multiespecfficos pueden ser especfficos para diferentes epftopos de un polipeptido diana o pueden contener dominios de union a antfgeno especfficos para mas de un polipeptido diana. Vease, por ejemplo, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244. Los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion pueden unirse a o coexpresarse con otra molecula funcional, por ejemplo, otro peptido o protefna. Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento del mismo puede unirse de forma funcional (por ejemplo, por acoplamiento qufmico, fusion genetica, asociacion no covalente u otra manera) a una o mas entidades moleculares diferentes, tales como otro anticuerpo o fragmento de anticuerpo para producir un anticuerpo biespecffico o multiespecffico con una segunda especificidad de union. Por ejemplo, la presente invencion incluye anticuerpos biespecfficos en los que un brazo de una inmunoglobulina es especffico para ErbB3 humano o un fragmento del mismo, y el otro brazo de la inmunoglobulina es especffico para una segunda diana terapeutica (por ejemplo, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/HER2, ErbB4, VEGF o Ang2) o esta conjugado a un resto terapeutico.
Un formato de anticuerpo biespecffico ejemplar que puede usarse en el contexto de la presente invencion implica el uso de un primer dominio CH3 de inmunoglobulina (Ig) y un segundo dominio CH3 de Ig, en el que el primer y el segundo dominio CH3 de Ig difieren entre sf en al menos un aminoacido, y en el que al menos una diferencia de aminoacido reduce la union del anticuerpo biespecffico a protefna A en comparacion con un anticuerpo biespecffico que carece de la diferencia de aminoacido. En una realizacion, el primer dominio Ch3 de Ig se une a protefna A y el segundo dominio Ch3 de Ig contiene una mutacion que reduce o anula la union a protefna A tal como una modificacion H95R (por numeracion de exones IMGT; H435R por numeracion EU). El segundo Ch3 puede comprender ademas una modificacion Y96F (por IMGT; Y436F por EU). Modificaciones adicionales que pueden encontrarse dentro del segundo Ch3 incluyen: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M y V82I (por IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M y V422I por EU) en el caso de anticuerpos IgG1; N44S, K52N y V82I (IMGT; N384S, K392N y V422I por EU) en el caso de anticuerpos IgG2; y Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q y V82I (por IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q y V422I por EU) en el caso de anticuerpos IgG4.
Formulacion terapeutica y administracion
La invencion proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden los anticuerpos anti-ErbB3 o fragmentos de union a antfgeno de los mismos de la presente invencion. Las composiciones farmaceuticas de la invencion se formulan con vehfculos, excipientes y otros agentes adecuados que proporcionan una transferencia, suministro, tolerancia y similares mejoradas. Puede encontrarse una multitud de formulaciones apropiadas en el formulario conocido para todos los qufmicos farmaceuticos: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Estas formulaciones incluyen, por ejemplo, polvos, pastas, pomadas, gelatinas, ceras, aceites, lfpidos, lfpidos (cationicos o anionicos) que contienen vesfculas (tales como LIPOFECTIN™), conjugados de ADN, pastas de absorcion anhidras, emulsiones de grasa en agua y agua en grasa, emulsiones de Carbowax (polietilenglicoles de diversas masas moleculares), geles semisolidos y mezclas semisolidas que contiene Carbowax. Vease tambien, Powell et al., "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
La dosis de anticuerpo administrada a un paciente puede variar dependiendo de la edad y el tamano del paciente, la enfermedad diana, las condiciones, la via de administracion y similares. La dosis preferida se calcula tfpicamente de acuerdo con el peso corporal o el area superficial del cuerpo. Cuando un anticuerpo de la presente invencion se usa para tratar una afeccion o enfermedad asociada con la actividad ErbB3 en un paciente adulto, puede ser ventajoso administrar de forma intravenosa el anticuerpo de la presente invencion normalmente en una unica dosis de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal, mas preferiblemente de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 7, de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 5 o de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal. Dependiendo de la gravedad de la afeccion, la frecuencia y la duracion del tratamiento, pueden ajustarse. Las dosificaciones eficaces y posologfas para administrar anticuerpos anti-ErbB3 pueden determinarse empfricamente; por ejemplo, puede controlarse el progreso del paciente por evaluacion periodica, y ajustarse la dosis en consecuencia. Ademas, pueden realizarse aumentos entre especies de dosificaciones usando metodos bien conocidos en la tecnica (por ejemplo, Mordenti et al., 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351).
Se conocen diversos sistemas de suministro y pueden usarse para administrar la composiciones farmaceuticas de la invencion, por ejemplo, encapsulacion en liposomas, micropartfculas, microcapsulas, celulas recombinantes capaces de expresar los virus mutantes, endocitosis mediada por receptor (vease, por ejemplo, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Los metodos de introduccion incluyen, aunque sin limitacion, via intradermica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutanea, intranasal, epidural y oral. La composicion puede administrarse por cualquier via conveniente, por ejemplo, por infusion o inyeccion en bolo, por absorcion a traves del revestimiento epitelial o mucocutaneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.) y puede administrarse junto con otros agentes biologicamente activos. La administracion puede ser sistemica o local.
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Una composicion farmaceutica de la presente invencion puede suministrarse por via subcutanea o intravenosa con una aguja y una jeringa convencionales. Ademas, con respecto al suministro subcutaneo, un dispositivo de suministro de pluma ya tiene aplicaciones en el suministro de una composicion farmaceutica de la presente invencion. Dicho dispositivo de suministro de pluma puede ser reutilizable o desechable. Un dispositivo de suministro de pluma reutilizable generalmente utiliza un cartucho remplazable que contiene una composicion farmaceutica. Una vez que se ha administrado toda la composicion farmaceutica dentro del cartucho y que el cartucho esta vacfo, el cartucho vacfo puede desecharse facilmente y remplazarse con un nuevo cartucho que contiene la composicion farmaceutica. El dispositivo de suministro de pluma entonces puede reutilizarse. En un dispositivo de suministro de pluma desechable, no hay un cartucho remplazable. En su lugar, el dispositivo de suministro de pluma desechable viene prellenado con la composicion farmaceutica mantenida en un deposito dentro del dispositivo. Una vez que el deposito se vacfa de la composicion farmaceutica, el dispositivo completo se desecha.
Numerosos dispositivos de suministro de pluma y autoinyector reutilizables tienen aplicaciones en el suministro subcutaneo de una composicion farmaceutica de la presente invencion. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitacion, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, RU), DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Suiza), pluma HUMALOG MIX 75/25™, pluma HUMALOG™, pluma HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly y Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II y III (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), pluma BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OpTiPEN STARLET™ y OpTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Alemania), por nombrar solo algunos. Los ejemplos de dispositivos de suministro de pluma desechables que tienen aplicaciones en suministro subcutaneo de una composicion farmaceutica de la presente invencion incluyen, aunque sin limitacion, la pluma SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), el FLEXPEN™ (Novo Nordisk) y el KWIKPEN™ (Eli Lilly), el autoinyector SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), el PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Alemania), el EPIPEN (Dey, L.P.), y la pluma HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park IL), por nombrar solo algunos.
En determinadas situaciones, la composicion farmaceutica puede suministrarse en un sistema de liberacion controlada. En una realizacion, puede usarse una bomba (vease Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). En otra realizacion, pueden usarse materiales polimericos; vease, Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. En otra realizacion mas, un sistema de liberacion controlada puede ubicarse en proximidad de la diana de la composicion, requiriendo, por tanto, unicamente una fraccion de la dosis sistemica, (vease, por ejemplo, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pag. 115-138). Otros sistemas de liberacion controlada se analizan en la revision por Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
Las preparaciones inyectables pueden incluir formas de dosificacion para inyeccion intravenosa, subcutanea, intracutanea e intramuscular, infusiones por goteo, etc. Estas preparaciones inyectables pueden prepararse por metodos conocidos para el publico. Por ejemplo, las preparaciones inyectables pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo, suspendiendo o emulsionando el anticuerpo o su sal, descrita anteriormente, en un medio acuoso esteril o un medio oleoso convencionalmente usado para inyecciones. Como medio acuoso para inyecciones, existen, por ejemplo, solucion salina fisiologica, una solucion isotonica que contiene glucosa y otros agentes auxiliares, etc., que puede usarse en combinacion con un agente solubilizante apropiado tal como un alcohol (por ejemplo, etanol), un polialcohol (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no ionico [por ejemplo, polisorbato 80, HCO- 50 (aducto de polioxietileno (50 mol) de aceite de ricino hidrogenado)], etc. Como medio oleaginoso, se emplean, por ejemplo, aceite de sesamo, aceite de soja, etc., que pueden usarse en combinacion con un agente solubilizante tal como benzoato de bencilo, alcohol bencflico, etc. La inyeccion asf preparada se llena preferiblemente en una ampolla apropiada.
De forma ventajosa, las composiciones farmaceuticas para uso oral o parenteral descritas anteriormente se preparan en formas de dosificacion en una dosis unitaria adecuada para ajustarse a una dosis de los ingredientes activos. Dichas formas de dosificacion en una dosis unitaria incluyen, por ejemplo, comprimidos, pfldoras, capsulas, inyecciones (ampollas), supositorios, etc. La cantidad del anticuerpo mencionado anteriormente contenida generalmente es de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg por forma de dosificacion en una dosis unitaria; especialmente en forma de inyeccion, Se prefiere que el anticuerpo mencionado anteriormente este contenido en aproximadamente 5 a aproximadamente 100 mg y en aproximadamente 10 a aproximadamente 250 mg para las otras formas de dosificacion.
Usos terapeuticos de los anticuerpos
Los anticuerpos de la invencion son utiles, entre otras cosas, para el tratamiento, prevencion y/o mejora de cualquier enfermedad o trastorno asociado con o mediado por la actividad ErbB3 o tratable por el bloqueo de la interaccion entre ErbB3 y un ligando de ErbB3 (por ejemplo, NRG1). Los anticuerpos y fragmentos de union a antfgeno de la presente invencion pueden usarse parar tratar, por ejemplo, tumores primarios y/o metastasicos que surgen en el cerebro y las meninges, la orofaringe, el arbol pulmonar y bronquial, el tracto gastrointestinal, el sistema reproductor masculino y femenino, el musculo, el hueso, la piel y anejos cutaneos, el tejido conjuntivo, el bazo, el sistema inmunitario, las celulas que forman la sangre y la medula osea, el hfgado y el sistema urinario, y organos sensitivos especiales tales como el ojo. En determinadas realizaciones, los anticuerpos y fragmentos de union a antfgeno de la
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invencion se usan para tratar uno o mas de los siguientes canceres: carcinoma de celulas renales, carcinoma pancreatico, cancer de mama, cancer de cabeza y cuello, cancer de prostata, gliomas malignos, osteosarcoma, cancer colorrectal, cancer gastrico (por ejemplo, cancer gastrico con amplificacion MET), mesotelioma maligno, mieloma multiple, cancer de ovario, cancer broncopulmonar microcftico, cancer broncopulmonar no microcftico (por ejemplo, cancer broncopulmonar no microcftico dependiente de EGFR), sarcoma sinovial, cancer de tiroides o melanoma.
Los anticuerpos de la presente invencion tambien pueden usarse para tratar un tumor que es resistente a, o ha llegado a ser resistente a, un tratamiento anti-EGFR o anti-HER2. Por ejemplo, la presente divulgacion proporciona metodos que comprenden (a) identificar a un paciente que tiene un tumor que es resistente, o ha llegado a ser resistente, a uno o mas de un anticuerpo anti-EGFR (por ejemplo, cetuximab), un inhibidor de molecula pequena de EGFR (por ejemplo, eriotinib), un anticuerpo anti-HER2 (por ejemplo, trastuzumab) y/o un inhibidor de molecula pequena de HER2; y (b) administrar al paciente un anticuerpo anti-ErbB3 de la presente invencion, en solitario o en combinacion con un anticuerpo anti-EGFR (por ejemplo, cetuximab), un inhibidor de molecula pequena de EGFR (por ejemplo, eriotinib), un anticuerpo anti-HER2 (por ejemplo, trastuzumab) y/o un inhibidor de molecula pequena de HER2. Se analizan tratamientos de combinacion en mas detalle a continuacion.
Tratamientos de combinacion
En este documento se describen regfmenes de administracion terapeutica que comprenden administrar un anticuerpo anti-ErbB3 de la presente invencion en combinacion con al menos un componente terapeuticamente activo adicional. Los ejemplos no limitantes de dichos componentes terapeuticamente activos adicionales incluyen otros antagonistas de ErbB3 (por ejemplo, un segundo anticuerpo anti-ErbB3 o inhibidor de molecula pequena de ErbB3), un antagonista de ErbB2/HER2 (por ejemplo anticuerpo anti-HER2 [por ejemplo, trastuzumab] o inhibidor de molecula pequena de la actividad HER2), un antagonista de ErbB4 (por ejemplo, anticuerpo anti-ErbB4 o inhibidor de molecula pequena de la actividad de ErbB4), un antagonista del receptor del factor de crecimiento epidermico (EGFR) (por ejemplo, anticuerpo anti-EGFR [por ejemplo, cetuximab o panitumumab] o inhibidor de molecula pequena de la actividad de EGFR [por ejemplo, erlotinib o gefitinib]), un antagonista de EGFRvIII (por ejemplo, un anticuerpo que se une especfficamente a EGFRvIII, un antagonista de VEGF (por ejemplo, un VEGF-Trap, vease, por ejemplo, el documento US 7087411 (tambien mencionado en este documento como "protefna de fusion inhibidora de VEGF"), anticuerpo anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab), un inhibidor de cinasa de molecula pequena del receptor de VEGF (por ejemplo, sunitinib, sorafenib o pazopanib), o un anticuerpo anti-DLL4 (por ejemplo, un anticuerpo anti-DLL4 divulgado en el documento US 2009/0142354 tal como REGN421), etc.). Otros agentes que pueden administrarse de forma beneficiosa en combinacion con los anticuerpos anti-ErbB3 de la invencion incluyen inhibidores de citocina, incluyendo inhibidores de citocina de molecula pequena y anticuerpos que se unen a citocinas tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18 o a sus receptores respectivos. La presente divulgacion tambien incluye combinaciones terapeuticas que comprenden cualquiera de los anticuerpos anti-ErbB3 mencionados en este documento y un inhibidor de uno o mas de VEGF, DLL4, EGFR o cualquiera de las citocinas mencionadas anteriormente, en las que el inhibidor es un aptamero, una molecula antisentido, una ribozima, una ARNip, un pepticuerpo, un nanocuerpo o un fragmento de anticuerpo (por ejemplo, fragmento Fab; fragmento F(ab')2; fragmento Fd; fragmento Fv; scFv; fragmento dAb; u otras moleculas genomanipuladas, tales como diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, minicuerpos y unidades de reconocimiento mfnimas). Los anticuerpos anti-ErbB3 de la invencion tambien pueden administrarse en combinacion con antivfricos, antibioticos, analgesicos, corticoesteroides y/o AINE. Los anticuerpos anti-ErbB3 de la invencion tambien pueden administrarse como parte de un regimen de tratamiento que tambien incluye tratamiento por radiacion y/o quimioterapia convencional. El componente o componentes terapeuticamente activos adicionales pueden administrarse antes de, simultaneamente con, o despues de la administracion de un anticuerpo anti-ErbB3 de la presente invencion; (para los fines de la presente divulgacion, dichos regfmenes de administracion se consideran la administracion de un anticuerpo anti-ErbB3 "en combinacion con" un componente terapeuticamente activo de la invencion).
Regfmenes de administracion
De acuerdo con determinadas realizaciones de la presente invencion, pueden administrarse multiples dosis de un anticuerpo anti-ErbB3 a un sujeto durante un curso de tiempo definido. Los metodos comprenden administrar secuencialmente a un sujeto multiples dosis de un anticuerpo anti-ErbB3. Como se usa en este documento, "administrar secuencialmente" significa que cada dosis de anticuerpo anti-ErbB3 se administra al sujeto en un diferente punto en el tiempo, por ejemplo, en diferentes dfas separados por un intervalo predeterminado (por ejemplo, horas, dfas, semanas o meses). Los metodos pueden comprender administrar secuencialmente al paciente una unica dosis inicial de un anticuerpo anti-ErbB3, seguida por una o mas dosis secundarias del anticuerpo anti- ErbB3, y opcionalmente seguidas por una o mas dosis terciarias del anticuerpo anti-ErbB3.
Las expresiones "dosis inicial", "dosis secundarias", y "dosis terciarias", se refieren a la secuencia temporal de administracion del anticuerpo anti-ErbB3. Por tanto, la "dosis inicial" es la dosis que se administra al inicio del regimen de tratamiento (tambien mencionada como la "dosis basal"); las "dosis secundarias" son las dosis que se administran despues de la dosis inicial; y las "dosis terciarias" son las dosis que se administran despues de las dosis
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secundarias. Las dosis iniciales, secundarias y terciarias pueden contener todas la misma cantidad de anticuerpo anti-ErbB3, pero generalmente pueden diferir entre si en terminos de frecuencia de administracion. En determinadas realizaciones, sin embargo, la cantidad de anticuerpo anti-ErbB3 contenida en las dosis iniciales, secundarias y/o terciarias varfan entre si (por ejemplo, ajustadas a la alza o a la baja segun lo apropiado) durante el curso de tratamiento. En determinadas realizaciones, se administran dos o mas (por ejemplo, 2, 3, 4 o 5) dosis al inicio del regimen de tratamiento como "dosis de carga" seguidas por dosis posteriores que se administran en una base menos frecuente (por ejemplo, "dosis de mantenimiento").
En una realizacion ejemplar de la presente invencion, cada dosis secundaria y/o terciaria se administra de 1 a 26 (por ejemplo, 1, 1/, 2, 2/, 3, 3/, 4, 41/2, 5, 51/2, 6, 61/2, 7, 71/2, 8, 81/2, 9, 9/, 10, 101/2, 11, 111/2, 12, 121/2, 13, 131/2, 14, 141/2, 15, 15/, 16, 16/, 17, / %, 18, 18/, 19, 19/, 20, 20/, 21, 21/, 22, 22/, 23, 23/, 24, 24/, 25, 25/, 26, 26/ o mas) semanas despues de la dosis inmediatamente anterior. La expresion "la dosis inmediatamente anterior", como se usa en este documento, significa, en una secuencia de administraciones multiples, la dosis de anticuerpo anti-ErbB3 que se administra a un paciente antes de la administracion de la siguiente dosis en la secuencia sin dosis intermedias.
Los metodos pueden comprender administrar a un paciente cualquier cantidad de dosis secundarias y/o terciarias de un anticuerpo anti-ErbB3. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, se administra unicamente una sola dosis secundaria al paciente. En otras realizaciones, se administran dos o mas (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o mas) dosis secundarias al paciente. Asimismo, en determinadas realizaciones, se administra unicamente una sola dosis terciaria al paciente. En otras realizaciones, se administran dos o mas (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o mas) dosis terciarias al paciente.
En realizaciones que implican multiples dosis secundarias, cada dosis secundaria puede administrarse a la misma frecuencia que las otras dosis secundarias. Por ejemplo, cada dosis secundaria puede administrarse al paciente de 1 a 2 semanas despues de la dosis inmediatamente anterior. Asimismo, en realizaciones que implican multiples dosis terciarias, cada dosis terciaria puede administrarse a la misma frecuencia que las otras dosis terciarias. Por ejemplo, cada dosis terciaria puede administrarse al paciente de 2 a 4 semanas despues de la dosis inmediatamente anterior. Como alternativa, la frecuencia a la que se administran las dosis secundarias y/o terciarias a un paciente puede variar sobre el curso del regimen de tratamiento. La frecuencia de administracion tambien puede ajustarse durante el curso de tratamiento por un medico dependiendo de las necesidades del paciente individual despues de examen clfnico.
Cualquiera de los anticuerpos anti-ErbB3 ejemplares divulgados en este documento puede usarse en el contexto de los regfmenes de administracion anteriores.
Usos de diagnostico de los anticuerpos
Los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion tambien pueden usarse para detectar y/o medir ErbB3 en una muestra, por ejemplo, con fines de diagnostico. Por ejemplo, un anticuerpos anti-ErbB3, o fragmento del mismo, puede usarse para diagnosticar una afeccion o enfermedad caracterizada por la expresion aberrante (por ejemplo, sobreexpresion, subexpresion, ausencia de expresion, etc.) de ErbB3. Los ensayos de diagnostico ejemplares para ErbB3 pueden comprender, por ejemplo, poner en contacto una muestra, obtenida de un paciente, con un anticuerpo anti-ErbB3 de la invencion, en los que el anticuerpo anti-ErbB3 se marca con un marcador detectable o molecula indicadora. Como alternativa, puede usarse un anticuerpo anti-ErbB3 no marcado en aplicaciones de diagnostico en combinacion con un anticuerpo secundario que esta marcado de forma detectable por si mismo. el marcado
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detectable o molecula indicadora puede ser un radioisotopo, tal como H, C, P, S o I; un resto fluorescente o quimioluminiscente tal como isotiocianato de fluorescefna o rodamina; o una enzima tal como una fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, peroxidasa de rabano rusticano o luciferasa. Los ensayos ejemplares especfficos que pueden usarse para detectar o medir ErbB3 en una muestra incluyen ensayo de inmunoadsorcion enzimatica (ELISA), radioinmunoensayo (RIA) y clasificacion celular activada por fluorescencia (FACS).
Las muestras que pueden usarse en ensayos de diagnostico de ErbB3 incluyen cualquier tejido o muestra de fluido que se puede obtener de un paciente que contiene cantidades detectables de protefna ErbB3 o fragmentos de la misma, en condiciones normales o patologicas. En general, los niveles de ErbB3 en una muestra particular obtenida de un paciente sano (por ejemplo, un paciente no afectado con una enfermedad o afeccion asociada con niveles o actividad anomalos de ErbB3) se mediran para estableces inicialmente un nivel basal, o patron de ErbB3. Este nivel basal de ErbB3 entonces puede compararse frente a los niveles de ErbB3 medidos en muestras obtenidas de individuos sospechosos de tener una enfermedad o afeccion relacionada con ErbB3.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se exponen para proporcionar a los expertos en la materia una divulgacion completa y descripcion de la manera en que preparar y usar los metodos y composiciones de la invencion, y no pretenden limitar el alcance de lo que los autores de la invencion consideran su invencion. Se han hecho esfuerzos por asegurar la precision con respecto a los numeros usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero deben
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tenerse en cuenta algunos errores experimentales y desviaciones. Salvo que se indique de otra manera, las partes son partes en peso, la masa molecular es la masa molecular promedio, la temperatura es en grados Celsius y la presion es en o cerca de atmosferica.
Ejemplo 1. Generacion de anticuerpos humanos contra ErbB3 humano
Se administro directamente un inmunogeno que comprende el ectodominio de ErbB3 humano, con un adyuvante para estimular la repuesta inmunitaria, a un raton VELOCIMMUNE® que comprende ADN que codifica las regiones variables de cadena pesada y cadena ligera kappa de inmunoglobulina humana. La respuesta inmunitaria de anticuerpo se controlo por un inmunoensayo especffico de ErbB3. Cuando se consiguio una respuesta inmunitaria deseada, se recogieron los esplenocitos y se fusionaron con celulas de mieloma de raton para conservar su viabilidad y formar lfneas celulares de hibridoma. Las lfneas celulares de hibridoma se cribaron y seleccionaron para identificar lfneas celulares que producen anticuerpos especfficos para ErbB3. Usando esta tecnica, se obtuvieron varios anticuerpos quimericos anti-ErbB3 (es decir, anticuerpos que poseen dominios variables humanos y dominios constantes de raton); los anticuerpos ejemplares generados de esta manera se denominaron del siguiente modo: H1M1819N, H2M1821N, H2M1824N, H2M1827N, H1M1828N, H2M1829N, H2M1930N, H2M1934N, H2M1936N, H2M1937N, H2M1938N y H1M1940N.
Los anticuerpos anti-ErbB3 tambien se aislaron directamente de linfocitos B positivos a antfgenos sin fusion a celulas de mieloma, como se describe en el documento US 2007/0280945A1. Usando este metodo, se obtuvieron varios anticuerpos anti-ErbB3 completamente humanos (es decir, anticuerpos que poseen dominios variables humanos y dominios constantes humanos); los anticuerpos ejemplares generados de esta manera se denominaron del siguiente modo: H4H2084P, H4H2092P, H4H2094P, H4H2098P, H4H2102P, H4H2108P, H4H2111P, H4H2114P, H4H2132P, H4H2138P, H4H2140P, H4H2143P, H4H2146P, H4H2147P, H4H2148P, H4H2151P, H4H2153P, H4H2154P y H4H2290P.
Determinadas propiedades biologicas de los anticuerpos anti-ErbB3 ejemplares generados de acuerdo con los metodos de este ejemplo se describen en detalle en los ejemplos expuestos a continuacion.
Ejemplo 2. Secuencias de aminoacidos de la region variable de cadena pesada y ligera
La tabla 1 expone las parejas de secuencias de aminoacidos de la region variable de cadena pesada y ligera de anticuerpos anti-ErbB3 seleccionados y sus identificadores de anticuerpo correspondientes.
Tabla 1
SEQ ID NO:
Denominacion de anticuerpo
HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
2084P
2 4 6 8 10 12 14 16
2092P
18 20 22 24 26 28 30 32
2094P
34 36 38 40 42 44 46 48
2098P
50 52 54 56 58 60 62 64
2102P
66 68 70 72 74 76 78 80
2108P
82 84 86 88 90 92 94 96
2111P
98 100 102 104 106 108 110 112
2114P
114 116 118 120 122 124 126 128
2132P
130 132 134 136 138 140 142 144
2138P
146 148 150 152 154 156 158 160
2140P
162 164 166 168 170 172 174 176
2143P
178 180 182 184 186 188 190 192
2146P
194 196 198 200 202 204 206 208
2147P
210 212 214 216 218 220 222 224
2148P
226 228 230 232 234 236 238 240
2151P
242 244 246 248 250 252 254 256
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SEQ ID NO:
Denominacion de anticuerpo
HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
2153P
258 260 262 264 266 268 270 272
2154P
274 276 278 280 282 284 286 288
2290P
290 292 294 296 298 300 302 304
1819N
306 308 310 312 314 316 318 320
1821N
322 324 326 328 330 332 334 336
1824N
338 340 342 344 346 348 350 352
1827N
354 356 358 360 362 364 366 368
1828N
370 372 374 376 378 380 382 384
1829N
386 388 390 392 394 396 398 400
1930N
402 404 406 408 410 412 414 416
1934N
418 420 422 424 426 428 430 432
1936N
434 436 438 440 442 444 446 448
1937N
450 452 454 456 458 460 462 464
1938N
466 468 470 472 474 476 478 480
1940N
482 484 486 488 490 492 494 496
Los anticuerpos se mencionan tfpicamente en este documento de acuerdo con la siguiente nomenclatura: prefijo Fc (por ejemplo, "H4H", "H1M", "H2M"), seguido por un identificador numerico (por ejemplo, "2084" como se muestra en la tabla 1), seguido por un sufijo "P" o "N". Por tanto, de acuerdo con esta nomenclatura, un anticuerpo puede mencionarse en este documento como, por ejemplo, "H4H2084P". Los prefijos H4H, H1M y H2M en las denominaciones de anticuerpo usadas en este documento indican la region Fc particular del anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo "H2M" tiene una Fc de IgG2 de raton, mientras que un anticuerpo "H4H" tiene una Fc de IgG4 humana. Como apreciara un experto en la materia, un anticuerpo H1M o H2M puede convertirse en un anticuerpo H4H, y viceversa, pero en cualquier caso, los dominios variables (incluyendo las CDR) - que se indican por los identificadores numericos mostrados en la tabla 1 - permaneceran iguales. Los sufijos P y N en las denominaciones de anticuerpo usadas en este documento se refieren a anticuerpos que tienen cadenas pesadas y ligeras con secuencias CDR identicas, pero con variaciones de secuencia en las regiones que estan fuera de las secuencias CDR (es decir, las regiones flanqueantes). Por tanto, las variantes P y N deun anticuerpo particular tienen secuencias CDR identicas dentro de sus regiones variables de cadena pesada y ligera, pero difieren entre si dentro de sus regiones flanqueantes.
Construcciones de control usadas en los siguientes ejemplos
Se incluyeron diversas construcciones de control (anticuerpos anti-ErbB3) en los siguientes experimentos con fines comparativos. Las construcciones de control se denominan de la siguiente manera: Control I: un anticuerpo anti- ErbB3 con dominios variables de cadena pesada y ligera que tienen las secuencias de aminoacidos de los dominios correspondientes de "Mab#6," como se expone en el documento US 7 846 440; Control II: un anticuerpo anti-ErbB3 humano con dominios variables de cadena pesada y ligera que tienen las secuencias de aminoacidos de los dominios correspondientes de "U1-59," como se expone en el documento US 7 705 130; y Control III: un anticuerpo anti-ErbB3 humano con dominios variables de cadena pesada y ligera que tienen las secuencias de aminoacidos de los dominios correspondientes de "U1-53," como se expone en el documento US 7 705 130.
Ejemplo 3. Afinidades de union y constantes cineticas obtenidas por resonancia de plasmones superficiales de anticuerpos Anti-ErbB3 monoclonales humanos
Las afinidades de union y constantes cineticas de anticuerpos anti-ErbB3 monoclonales humanos se determinaron por resonancia de plasmones superficiales a 25 °C y 37 °C (tablas 2-4). Las mediciones se realizaron en un instrumento Biacore 2000 o T100. Los anticuerpos, expresados con Fc de raton (prefijo H1M; H2M) o Fc de IgG4 humano (prefijo H4H), se capturaron en una superficie detectora anti-Fc de raton o anti-Fc humano (formato de captura de Mab) y se inyecto protefna soluble monomerica (ErbB3.mmh; SEQ ID NO: 497) o dimerica (ErbB3-hFc; SEQ ID NO: 498 o ErbB3-mFc; SEQ ID NO: 499) sobre la superficie. Las constantes de velocidad de asociacion (kg) y disociacion (kd) cineticas se determinaron procesando y ajustando los datos a un modelo de union 1:1 usando el
programa informatico de ajuste de curvas Scrubber 2.0. Las constantes en equilibrio de disociacion de union (Kd) y las semividas disociativas (ti/2) se calcularon a aprtir de las constantes de velocidad cineticas como: Kd (M) = kd/ka; y ti/2 (min) = (In2/(60*kd). Varios clones mostraron afinidad subnanomolar para la protefna ErbB3 monomerica (hErbB3.mmh).
5
_________Tabla 2: Afinidades de union por Biacore de mAb de hibridoma (H1M y H2M) a 25 °C_________
Union a 25 °C / Formato de captura de Mab
Anticuerpo
Analito ka (Ms'1) kd (s'1) Kd (Molar) t/2
H1M1819N
hErbB3.mmh 3,19E+05 3,22E-04 1,01E-09 36
hErbB3.hFc
4,80E+05 5,88E-05 1,22E-10 196
H2M1821N
hErbB3.mmh 2,29E+05 1,99E-04 8,67E-10 58
hErbB3.hFc
4,61E+05 1,90E-05 4,13E-11 608
H2M1824N
hErbB3.mmh 2,23E+05 4,56E-05 2,05E-10 254
hErbB3.hFc
4,31E+05 1,44E-06 3,34E-12 8026
H2M1827N
hErbB3.mmh 2,19E+05 8,96E-05 4,09E-10 129
hErbB3.hFc
4,39E+05 7,58E-06 1,73E-11 1524
H1M1828N
hErbB3.mmh 5,13E+05 2,65E-04 5,15E-10 44
hErbB3.hFc
1,56E+06 4,34E-05 2,79E-11 266
H2M1829N
hErbB3.mmh 2,30E+05 6,46E-05 2,81E-10 179
hErbB3.hFc
4,36E+05 8,61E-06 1,98E-11 1341
H2M1930N
hErbB3.mmh 1,96E+05 1,09E-04 5,59E-10 106
hErbB3.hFc
4,04E+05 8,27E-06 2,05E-11 1396
H2M1934N
hErbB3.mmh 1,68E+05 7,35E-05 4,38E-10 157
hErbB3.hFc
3,59E+05 7,97E-06 2,22E-11 1450
H2M1936N
hErbB3.mmh 4,32E+04 2,85E-04 6,59E-09 41
hErbB3.hFc
6,41E+04 6,97E-05 1,09E-09 166
H2M1937N
hErbB3.mmh 8,26E+04 5,63E-05 6,82E-10 205
hErbB3.hFc
1,10E+05 1,27E-05 1,16E-10 908
H2M1938N
hErbB3.mmh 2,41E+05 1,44E-04 5,99E-10 80
hErbB3.hFc
4,51E+05 1,36E-05 3,01E-11 851
H1M1940N
hErbB3.mmh 2,89E+05 1,38E-04 4,77E-10 84
hErbB3.hFc
4,60E+05 2,43E-05 5,29E-11 475
Control I
hErbB3.mmh 5,14E+04 2,15E-04 4,18E-09 54
hErbB3.hFc
4,63E+04 1,63E-05 3,51E-10 711
Control II
hErbB3.mmh 1,41E+05 3,24E-04 2,30E-09 36
hErbB3.hFc
1,53E+05 4,28E-05 2,80E-10 270
Control III
hErbB3.mmh 1,54E+06 3,15E-02 2,05E-08 0,4
hErbB3.hFc
3,78E+06 8,84E-05 2,34E-11 131
Tabla 3: Afinidades de union por Biacore de mAb de Fc humanos (H4H) a 25 °C
Union a 25 °C / Formato de captura de Mab
Analito ka (Ms-1) kd (s-1) Kd (Molar) T1/2
H4H1819N
hErbB3.mmh 8,10E+06 3,51E-04 4,35E-11 33
hErbB3.mFc
1,64E+07 1,54E-05 9,43E-13 748
H4H1821N
hErbB3.mmh 3,80E+06 1,92E-04 5,10E-11 60
hErbB3.mFc
1,22E+07 4,33E-06 3,55E-13 2665
H4H2084P
hErbB3.mmh 2,49E+06 5,96E-05 2,39E-11 179
hErbB3.mFc
3,83E+06 3,95E-06 1,03E-12 2695
H4H2092P
hErbB3.mmh 3,72E+06 1,03E-04 2,78E-11 103
hErbB3.mFc
5,16E+06 7,46E-06 1,45E-12 1429
H4H2094P
hErbB3.mmh 1,89E+06 1,37E-05 7,22E-12 780
hErbB3.mFc
3,03E+06 1,37E-06 4,52E-13 7779
H4H2098P
hErbB3.mmh 1,14E+06 7,89E-05 6,90E-11 135
hErbB3.mFc
2,21E+06 8,97E-06 4,06E-12 1188
H4H2102P
hErbB3.mmh 8,86E+05 4,88E-05 5,51E-11 218
hErbB3.mFc
1,58E+06 2,26E-06 1,43E-12 4721
H4H2108P
hErbB3.mmh 1,95E+06 8,13E-05 4,18E-11 131
hErbB3.mFc
2,96E+06 4,33E-06 1,46E-12 2458
H4H2111P
hErbB3.mmh 2,21E+06 1,18E-04 5,31E-11 91
hErbB3.mFc
3,50E+06 8,69E-06 2,49E-12 1225
H4H2114P
hErbB3.mmh 9,29E+05 9,88E-05 1,06E-10 108
hErbB3.mFc
1,48E+06 7,98E-06 5,41E-12 1335
H4H2132P
hErbB3.mmh 2,16E+06 3,81E-05 1,77E-11 279
hErbB3.mFc
3,49E+06 3,35E-06 9,58E-13 3183
H4H2138P
hErbB3.mmh 2,39E+06 5,01E-05 2,09E-11 213
hErbB3.mFc 3,71E+06 5,46E-06 1,47E-12 1952
H4H2140P
hErbB3.mmh 1,66E+06 3,27E-05 1,98E-11 326
hErbB3.mFc
2,51E+06 9,86E-07 3,93E-13 10797
H4H2143P
hErbB3.mmh 1,83E+06 9,73E-05 5,31E-11 109
hErbB3.mFc
2,86E+06 4,63E-06 1,75E-12 2302
H4H2146P
hErbB3.mmh 2,79E+06 3,46E-05 1,24E-11 308
hErbB3.mFc
4,54E+06 1,98E-06 4,35E-13 5392
H4H2147P
hErbB3.mmh 2,47E+06 1,08E-04 4,38E-11 98
hErbB3.mFc
3,33E+06 4,58E-06 1,50E-12 2325
H4H2148P
hErbB3.mmh 3,98E+06 3,47E-05 8,71E-12 307
hErbB3.mFc
5,91E+06 1,74E-06 2,95E-13 6110
H4H2151P
hErbB3.mmh 3,04E+06 2,86E-05 9,42E-12 372
hErbB3.mFc
4,48E+06 9,52E-07 2,13E-13 11186
5
10
15
20
25
Union a 25 °C / Formato de captura de Mab
Analito ka (Ms'1) kd (s'1) Kd (Molar) ti/2
H4H2153P
hErbB3.mmh 2,94E+06 3,43E-05 1,17E-11 311
hErbB3.mFc
3,67E+06 1,24E-06 3,37E-13 8603
H4H2154P
hErbB3.mmh 2,13E+06 3,73E-05 1,76E-11 285
hErbB3.mFc
3,25E+06 9,77E-07 3,00E-13 10901
H4H2290P
hErbB3.mmh 5,82E+05 6,72E-05 1,15E-10 159
hErbB3.mFc
8,00E+05 1,13E-05 1,40E-11 945
Tabla 4: Afinidades de union por Biacore de mAb seleccionados a 37 °C
Union a 37 °C / Formato de captura de Mab
Analito ka (Ms'1) kd (s'1) Kd (Molar) T1/2
H4H1819N
hErbB3.mmh 1,21E+07 1,56E-03 1,29E-10 7
hErbB3.mFc
3,68E+07 5,62E-05 1,53E-12 206
H4H1821N
hErbB3.mmh 6,49E+06 1,08E-03 1,67E-10 11
hErbB3.mFc
1,87E+07 3,55E-05 1,89E-12 326
Control I
hErbB3.mmh 1,58E+05 5,48E-04 3,47E-09 21
hErbB3.mFc
2,60E+05 1,01E-04 3,90E-10 114
Control II
hErbB3.mmh 3,23E+05 1,34E-03 4,13E-09 9
hErbB3.mFc
1,44E+06 1,37E-04 9,50E-11 84
Control III
hErbB3.mmh 3,40E+06 7,90E-02 2,40E-08 0,1
hErbB3.mFc
1,05E+07 1,77E-04 1,68E-11 65
Como se muestra en las tablas 2-4, muchos de los anticuerpos ejemplares ensayados en este ejemplo mostraron union de alta afinidad a ErbB3 que era superior o equivalente a las afinidades de union de los anticuerpos de control ensayados. Cabe destacar que, varios de los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion mostraron afinidad subnanomolar para la protefna ErbB3 monomerica (hErbB3.mmh).
Ejemplo 4. Los anticuerpos anti-ErbB3 bloquean la union de neuregulina 1b a ErbB3 humano
Para caracterizar adicionalmente los mAb anti-hErbB3 de la presente invencion, se examino su capacidad de bloquear la union del ligando mediante ELISA. Se recubrieron placas con neuregulina 1b (1 pg/ml) durante una noche y despues se incubaron los anticuerpos (0-50 nM) (1 h, 25 °C) con ErbB3-hFc 50 pM (SeQ ID NO: 498; para hibridomas) o ErbB3-mFc 50 pM (SEQ ID NO: 499; para anticuerpos hlgG4) y despues se anadieron a placas recubiertas y se permitio que se incubaran durante 1 h adicional a 25 °C. Las placas se lavaron y se detecto ErbB3 no secuestrado (unido a placa) con un poli anti-Fc conjugado con peroxidasa de rabano rusticano (HRP). Las placas se revelaron con TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina) y se neutralizaron con acido sulfurico antes de leer la absorbancia a 450 nm en un lector de placa Victor X5. El analisis de los datos uso un modelo de respuesta a dosis sigmoideo dentro del programa informatico Prism™. El valor de CI50 calculado, definido como el 50 % de la concentracion de anticuerpo requerido para conseguir el bloqueo maximo, se uso como indicador de la potencia de bloqueo. El bloqueo maximo para cada anticuerpo se calculo cogiendo la diferencia en la absorbancia de anticuerpo de cero a 50 nM en la curva de inhibicion, dividio por la diferencia en la absorbancia de ErbB3 de 50 pM a cero en la curva de dosis. Los resultados se muestran en las tablas 5 y 6.
Tabla 5: Valores de CI50 para mAb de hibridoma anti-ErbB3 (H1M y H2M)
Anticuerpo
CI50(M) Bloqueo maximo (%)
H1M1819N
3,15E-11 92
H2M1821N
2,85E-11 96
H2M1824N
2,51E-11 99
Anticuerpo
CI50(M) Bloqueo maximo (%)
H2M1827N
2,29E-11 98
H1M1828N
3,00E-11 95
H2M1829N
2,38E-11 98
H2M1930N
2,22E-11 87
H2M1934N
2,61E-11 80
H2M1936N
5,27E-10 91
H2M1937N
4,40E-11 95
H2M1938N
2,49E-11 85
H1M1940N
5,30E-10 80
Tabla 6: Valores de CI50 para mAb de Fc ^ humano Anti-ErbB3 (H4H)
Anticuerpo
CI50(M) Bloqueo maximo (%)
H4H1819N
2,00E-11 99
H4H1821N
1,80E-11 99
H4H2084P
8,73E-11 95
H4H2092P
5,94E-11 100
H4H2094P
9,00E-11 92
H4H2098P
1,35E-10 95
H4H2102P
1,86E-10 90
H4H2108P
1,16E-10 91
H4H2111P
4,97E-11 92
H4H2114P
1,63E-10 91
H4H2132P
9,57E-11 94
H4H2138P
1,06E-10 96
H4H2140P
9,46E-11 83
H4H2143P
8,35E-11 92
H4H2146P
1,77E-10 83
H4H2147P
5,06E-11 99
H4H2148P
5,08E-11 100
H4H2151P
7,51E-11 85
H4H2153P
7,40E-11 82
H4H2154P
9,01E-11 91
H4H2290P
6,64E-11 99
Control I
5,74E-10 98
Control III
8,32E-11 96
Como se muestra en las tablas 5 y 6, varios anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion mostraron potente 5 bloqueo y ternna valores de CI50 que estaban en la parte inferior teorica (25 pM) del ensayo.
Ejemplo 5. Los mAb anti-ErbB3 internalizan de forma eficaz ErbB3 de superficie celular
Para determinar si los mAb anti-ErbB3 internalizan de forma eficaz ErbB3 unido a superficie celular, se incubaron celulas MCF-7 con anticuerpo anti-ErbB3 seleccionado (10 pg/ml) durante 30 minutos en hielo, se lavaron y despues 5 se tineron con un Fab anti-humano conjugado con Dylight 488 (10 pg/ml) durante 30 minutos en hielo. Los tubos despues se lavaron y dividieron entre una incubacion en hielo y 37 °C durante 1 hora. Despues de la incubacion, todos los tubos se colocaron en hielo y se anadio un anticuerpo inactivador Dylight 488 (50 pg/ml). Las soluciones se incubaron 1 hora adicional en hielo. Se midieron las senales fluorescentes usando un citometro de flujo Accuri.
10 Como medida relativa de la cantidad de ErbB3 que se internalizo tras la union del anticuerpo y la posterior incubacion a 37 °C, se calculo la intensidad fluorescente media (MFI) internalizada de la siguiente manera:
MFI internalizada = MFI total - MFI superficial______________________________________
donde:_____________________________________________________________________
MFI superficial = (MFI total - MFI de muestra inactivada) / QE_________________________
_y_________________________________________________________________________
QE = 1 - [MFI de muestra inactivada a 4 °C / MFI de muestra no inactivada a 4 °C1________
El calculo de QE (eficacia de inactivacion) supone que no se produce internalizacion a 4 °C. La tabla 7 muestra que 15 todos los anticuerpos ensayados inducen internalizacion de hER3.
Tabla 7: Internalizacion de HER3 inducida por anticuerpo a 37 °C
Anticuerpo
MFI total media±D.T. MFI superficial media±D.T. MFI internalizada media±D.T. % internalizado media±D.T.
H4H1819N
39 233±9261 22 663±5026 16 570±5329 42±7
H4H1821N
32 351±5658 11 607±4781 20 744±4993 64±14
Control I
19 004±5903 11 598±6602 7406±1776 42±20
Control II
41 517±5696 23 540±11 994 17 977±6299 45±21
Control III
27 349±5310 8010±729 19 338±5934 69±8
Ejemplo 6. Inhibicion de fosforilacion de Akt dependiente de NRG1 por anticuerpos anti-ErbB3
20
Se ensayaron anticuerpos anti-ErbB3 para su capacidad de inhibir la fosforilacion de Akt en celulas de cancer de prostata DU145. La union de NRG1 a ErbB3 provoca la fosforilacion de ErbB3, que da lugar al reclutamiento y activacion de la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3-K). La PI3-K activada fosforila y activa la cinasa Akt. Por tanto, la fosforilacion de Akt es un marcador posterior de la activacion del receptor ErbB3. Las celulas DU145 se sembraron 25 en placas de 96 pocillos y despues se privaron de suero en medio que contenfa FBS al 1 % durante una noche. Las celulas despues se estimularon con NRG1 0,5 nM (R&D Systems) durante 30 min en presencia de 0,5 pg/ml de protefna de control Fc humana o diversos anticuerpos anti-ErbB3 a concentraciones de 0,01, 0,1 o 0,5 pg/ml. Cada concentracion de anticuerpo se ensayo por triplicado. Las celulas se lisaron y se determinaron los niveles relativos de Akt fosforilada usando un kit de ELISA basado en celulas de fosfo-Akt (R&D Systems), de acuerdo con las 30 instrucciones del fabricante. El porcentaje promedio de inhibicion de fosforilacion de Akt para cada anticuerpo anti- ErbB3 frente al grupo de control de Fc se muestra en la tabla 8.
Tabla 8: Inhibicion de fosforilacion de Akt por anticuerpos anti-ErbB3
Anticuerpo
Porcentaje de inhibicion de fosforilacion de Akt
0,01 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
0,1 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3 0,5 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
H1M1819N
29 72 75
H2M1821N
11 68 73
H2M1824N
25 63 74
H2M1827N
16 73 75
H1M1828N
22 66 75
H2M1829N
22 74 74
H2M1930N
39 64 66
Anticuerpo
Porcentaje de inhibicion de fosforilacion de Akt
0,01 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
0,1 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3 0,5 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
H2M1934N
20 56 67
H2M1936N
6 30 67
H2M1937N
-13 41 71
H2M1938N
40 63 74
H1M1940N
13 50 68
Control I
-1 46 60
Control II
4 7 51
Control III
3 45 55
Este ejemplo ilustra que varios de los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion mostraban bloqueo mas potente de la fosforilacion de Akt que los anticuerpos anti-ErbB3 de control. Por ejemplo, los anticuerpos H1M1819N, H2M1821N, H2M1824N, H2M1827N, H1M1828N, H2M1829N, H2M1930N y H2M1938N inhibfan la fosforilacion de 5 Akt en al menos un 60 % a la dosis de 0,1 pg/ml, mientras que ninguno de los anticuerpos contra ErbB3 de control consegufa una inhibicion mayor de un 46 % a esa dosis.
Ejemplo 7. Inhibicion del crecimiento de celulas tumorales por anticuerpos anti-ErbB3
10 Se ensayaron anticuerpos anti-ErbB3 seleccionados para su capacidad de inhibir el crecimiento de celulas de carcinoma epidermoide A431 cuando se usaban en combinacion con bloqueo de EGFR. Se incubaron celulas A431 en placas de 96 pocillos en medio que contenfa FBS al 0,5 % y se estimularon con neuregulina-1 (NRG1) 1 nM en presencia de un anticuerpo anti-EGFR (1 pg/ml), un anticuerpo anti-ErbB3 (1 pg/ml) o anticuerpo anti-EGFR (1 pg/ml) mas anticuerpo anti-ErbB3 a 0,05, 0,25 o 1,0 pg/ml. El ligando (NRG1) y los anticuerpos de bloqueo (EGFR
15 y ErbB3) se anadieron a las 0, 24 y 48 horas durante el experimento de 72 horas. El cambio relativo en el numero de celulas viables desde el inicio del tratamiento hasta que se alcanzo el punto temporal de 72 horas se determino usando metodos convencionales (kit de ensayo de proliferacion celular; Promega). El porcentaje promedio de disminucion en el crecimiento celular para cada anticuerpo anti-ErbB3 frente a un grupo de control de isotipos se muestra en la tabla 9.
20
Tabla 9: Inhibicion del crecimiento celular de A431 por anticuerpos anti-ErbB3
Anticuerpo
Porcentaje de disminucion en el crecimiento de celulas A431
1,0 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
anticuerpo anti-EGFR + 0,05 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3 anticuerpo anti-EGFR + 0,25 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3 anticuerpo anti-EGFR + 1,0 pg/ml de anticuerpo contra ErbB3
H1M1819N
34 61 78 91
H2M1821N
16 35 62 85
H2M1824N
33 45 68 85
H2M1827N
15 53 75 84
H1M1828N
30 55 73 85
H2M1829N
31 53 76 89
H2M1930N
3 23 36 39
H2M1934N
-3 24 30 28
H2M1938N
5 37 56 60
H1M1940N
-4 19 20 19
Control I
19 31 37 56
Control III
7 22 21 32
5
10
15
20
25
30
Este ejemplo ilustra que varios de los anticuerpos anti-ErbB3 de la presente invencion mostraban inhibicion mas potente del crecimiento de celulas A431 que los anticuerpos anti-ErbB3 de control. Por ejemplo, los anticuerpos H1M1819N, H2M1821N, H2M1824N, H2M1827N, H1M1828N y H2M1829N inhibfan el crecimiento celular en al menos un 60 % a la dosis de 0,25 pg/ml cuando se combinaban con anticuerpo anti-EGFR, mientras que los anticuerpos de control I y III inhibfan el crecimiento tumoral en unicamente un 37 % y un 21 %, respectivamente, en estas condiciones experimentales.
Ejemplo 8. Inhibicion de la fosforilacion de ErbB3 y Akt por anticuerpos anti-ErbB3
Se ensayaron anticuerpos anti-ErbB3 seleccionados para su capacidad de inhibir la fosforilacion estimulada por NRG1 de ErbB3 y Akt en celulas de carcinoma epidermoide A431 y celulas de mama MCF7. En el primer experimento, se sembraron celulas A431 en placas de 6 pocillos y se incubaron en medio completo durante una noche. Las celulas despues se privaron de suero (FBS al 0,5 %) durante 1 h y se estimularon con NRG1 1 nM (R&D Systems) durante 30 minutos en presencia de 5,0 pg/ml de anticuerpo de control de isotipo o anticuerpo anti-ErbB3 a 0,05, 0,25 o 5,0 pg/ml. Las celulas se lisaron y se realizaron transferencias de Western usando anticuerpos contra ErbB3 y Akt, asf como sus forma fosforiladas usando metodos convencionales. Las relaciones de ErbB3 o Akt fosforilado a ErbB3 o Akt total se calcularon y usaron para determinar el porcentaje de inhibicion de fosforilacion de Akt o ErbB3 para cada uno de los anticuerpos anti-ErbB3 respecto al control de isotipo. Los resultados para la inhibicion de la fosforilacion de ErbB3 o AKT en celulas A431 se muestran en las tablas 10 y 11, respectivamente.
T abla 10: Porcentaje de inhibicion de la fosforilacion de ErbB3 en celulas A431
Anticuerpo
0,05 pg/ml 0,25 pg/ml 5,0 pg/ml
H4H1819N
98 105 107
H4H1821N
63 113 120
Control I
-11 14 72
Control III
-30 -9 -57
T abla 11: Porcentaje de inhibicion de la fosforilacion de ^ Akt en celulas A431
Anticuerpo
0,05 pg/ml 0,25 pg/ml 5,0 pg/ml
H4H1819N
84 104 113
H4H1821N
67 106 117
Control I
32 47 75
Control III
43 51 58
En un experimento similar, se sembraron celulas MCF7 en placas de 6 pocillos y se incubaron en medio completo durante 2 dfas. Las celulas entonces se privaron de suero (FBS al 0,5 %) durante 1 h y despues se estimularon con NRG1 (R&D Systems) 1 nM durante 30 minutos en presencia de 5,0 pg/ml de anticuerpo de control de isotipo o anticuerpo anti-ErbB3 a 0,05, 0,25, 1,0 o 5,0 pg/ml. Se realizaron transferencias de Western y analisis de datos de una manera similar para aquellos experimentos realizados con celulas A431. Los resultados para la inhibicion de la fosforilacion de ErbB3 o AKT en celulas MCF7 se muestran en las tablas 12 y 13, respectivamente.
T abla 12: Porcentaje de inhibicion de la fosforilacion de ErbB3 en celulas MCF7
Anticuerpo
0,05 pg/ml 0,25 pg/ml 1,0 pg/ml 5,0 pg/ml
H4H1819N
37 79 92 96
H4H1821N
57 92 96 97
Control I
0 17 44 81
Control III
4 12 60 61
Tabla 13: Porcentaje de inhibicion de la fosforilacion de Akt en celulas MCF7
Anticuerpo
0,05 pg/ml 0,25 pg/ml 1,0 pg/ml 5,0 pg/ml
H4H1819N
13 36 80 90
H4H1821N
17 69 82 89
5
10
15
20
25
Anticuerpo
0,05 pg/ml 0,25 pg/ml 1,0 pg/ml 5,0 pg/ml
Control I
21 29 34 46
Control III
35 28 29 35
Este ejemplo ilustra que los anticuerpos anti-ErbB3 representatives de la invencion mostraban capacidad superior de inhibir la fosforilacion de ErbB3 y Akt en comparacion con anticuerpos de control en la mayorfa de las condiciones experimentales ensayadas. En celulas A431, por ejemplo, H4H1819N y H4H1821N inhibfan completamente la fosforilacion tanto de ErbB3 como de Akt a 0,25 pg/ml mientras que los anticuerpos de control nunca consegufan inhibicion completa, incluso a 5,0 pg/ml. Asimismo, en celulas MCF7, H4H1819N y H4H1821N a 1,0 pg/ml inhibfan la fosforilacion de ErbB3 y Akt a un grado mayor que los anticuerpos anti-ErbB3 de control incluso a 5,0 pg/ml.
Ejemplo 9. Inhibicion del crecimiento tumoral por anticuerpos anti-ErbB3
Se ensayaron anticuerpos anti-ErbB3 seleccionados para su capacidad de inhibir el crecimiento de xenoinjertos de tumor humano en ratones inmunocomprometidos. En resumen, se implantaron por via subcutanea 1-5 x 106 celulas de carcinoma epidermoide humano a431 o celulas de cancer broncopulmonar no microcftico humano A549 (ATCC) en el flanco de ratones SCID de 6-8 semana de edad (Taconic, Hudson, NY). Despues de que los tumores alcanzaran un volumen promedio de 100-150 mm3, los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos para su tratamiento (n = 6 ratones por grupo). En el primer experimento, a los ratones que albergaban tumores A431 se les administro Fc humano (SEQ ID NO: 500, 12,5 mg/kg) o anticuerpo anti-ErbB3 (0,5 o 12,5 mg/kg). Todos los anticuerpos se administraron mediante inyeccion subcutanea dos veces por semana durante aproximadamente 3 semanas. Los volumenes de los tumores se midieron dos veces por semana durante el transcurso del experimento y se determinaron los pesos de los tumores tras escision de los tumores al concluir el experimento. El tamano promedio de tumor respecto al grupo tratado con Fc, asf como los pesos de los tumores finales se calcularon para cada grupo. Los resultados se resumen en la tabla 14.
Tabla 14: Inhibicion del crecimiento de tumores A431 en ratones SCID (mAb de hibridoma - H1M y H2M)
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± D.T.) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor Peso promedio del tumor (g) % de disminucion promedio en el peso del tumor
hFc ctrl (12,5)
860 ± 358 - 0,778 ± 0,268 -
H1M1819N (0,5)
355±178 59 0,520 ± 0,155 33
H2M1821N (0,5)
280±131 67 0,428 ± 0,209 45
H2M1827N (0,5)
246 ± 71 71 0,432 ± 0,152 45
H2M1829N (0,5)
392 ± 265 54 0,480 ± 0,283 38
Control I (0,5)
862±199 0 0,815 ± 0,190 -5
Control I (12,5)
299±139 65 0,438 ± 0,217 44
En un experimento similar, usando anticuerpos seleccionados en el formato de IgG4 humana se produjeron resultados similares, como se resumen en la tabla 15.
Tabla 15: Inhibicion del crecimiento de tumores A431 en ratones SCID (Fc mAb humanos - H4H)
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± D.T.) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor Peso promedio del tumor (g) % de disminucion promedio en el peso del tumor
hFc ctrl (12,5)
797 ± 65 - 1,31 ± 0,142 -
H4H1819N (0,5)
161 ± 69 80 0,453 ± 0,010 65
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± D.T.) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor Peso promedio del tumor (g) % de disminucion promedio en el peso del tumor
H4H1819N (12,5)
110 ± 47 86 0,458 ± 0,108 65
H4H1821N (0,5)
148 ± 73 81 0,482 ± 0,058 63
H4H1821N (12,5)
74 ± 100 91 0,392 ± 0,117 70
Control I (0,5)
675 ± 228 15 0,928 ± 0,215 29
Control I (12,5)
95 ± 51 88 0,361 ± 0,063 72
Control III (0,5)
409 ± 254 49 0,687 ± 0,269 48
Control III (12,5)
219 ±129 73 0,545 ± 0,096 58
En experimentos similares, se determino el efecto de diversos anticuerpos anti-ErbB3 sobre el crecimiento de xenoinjertos de tumor A549, como se resumen en la tabla 16.
5 Tabla 16: Inhibicion del crecimiento de tumores A549 en ratones SCID
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± D.T.) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor Peso promedio del tumor (g) % de disminucion promedio en el peso del tumor
hFc ctrl (12,5)
727±184 - 1,27 ± 0,332 -
H4H1821N (0,2)
366 ± 90 50 0,811 ± 0,145 37
H4H1821N (0,5)
347 ± 52 52 0,820 ± 0,245 36
H4H1821N (2,5)
346±106 52 0,783 ± 0,175 39
Control I (0,5)
719±230 1 1,328 ± 0,363 -3,78
Control I (2,5)
614±177 15 0,985 ± 0,198 23
Como se muestra en este ejemplo, los anticuerpos H4H1819N y H4H1821N inhibieron cada uno significativamente el crecimiento de tumores in vivo a un grado que era superior, o equivalente al grado de inhibicion de crecimiento tumoral observado con la administracion de los anticuerpos anti-ErbB3 de control ensayados.
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Ejemplo 10. Inhibicion del crecimiento tumoral por anticuerpos anti-ErbB3 en combinacion con agentes que bloquean otros miembros de la familia de ErbB
Se ensayo el efecto de un tratamiento de combinacion con H4H1821N mas un anticuerpo anti-EGFR inhibidor ("mAb 15 anti-EGFR") sobre el crecimiento de xenoinjertos de tumor humano. En resumen, se implantaron por via subcutanea 2 x 106 celulas de carcinoma hipofarfngeo humano FaDu (ATCC) en el flanco de ratones SCID de 6-8 semanas de edad (Taconic, Hudson, NY). Despues de que los tumores alcanzaran un volumen promedio de 150-200 mm3, los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos para su tratamiento (n = 6 ratones por grupo). A los ratones se les administro protefna de control Fc humana (12,5 mg/kg), H4H1821N (2,5 mg/kg), mAb anti-EGFR (10 mg/kg) o la 20 combinacion de H4H1821N mas mAb anti-EGFR (2,5 + 10 mg/kg). Todos los anticuerpos se administraron mediante inyeccion subcutanea dos veces por semana. Los volumenes de los tumores se midieron dos veces por semana
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durante el transcurso del experimento y se determinaron los pesos de los tumores tras escision de los tumores al concluir el experimento. Los promedios (media ± desviacion tfpica) del crecimiento de los tumores desde el inicio del tratamiento y los pesos de los tumores se calcularon para cada grupo de tratamiento. El porcentaje de disminucion del crecimiento de los tumores y el peso de los tumores se calculo a partir de la comparacion con el grupo de control de Fc. Los resultados se muestran en la tabla 17.
Tabla 17: Inhibicion del crecimiento de xenoinjertos de tumor FaDu en ratones SCID
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± D.T.) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor Peso promedio del tumor (g) % de disminucion promedio en el peso del tumor
hFc control (12,5)
1099±186 - 0,993 ± 0,176 -
H4H1821N (2,5)
284±175 74 0,522 ± 0,177 47
mAb anti-EGFR (10)
55 ± 115 95 0,215 ± 0,120 78
H4H1821N + mAb anti-EGFR (2,5 + 10)
-199 ± 38 118 0,024 ± 0,020 98
En un experimento similar, se ensayo el efecto de un tratamiento de combinacion con H4H1821N mas el anticuerpo anti-HER2 inhibidor clon 4D5v8 como se describe en Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-4289 (19927 sobre el crecimiento de xenoinjertos de tumor humano. En resumen, se implantaron por via subcutanea 1 x 107 celulas de cancer de mama humano BT474 (ATCC) en el flanco de ratones atfmicos nCr de 6-8 semanas de edad (Taconic, Hudson, NY). Despues de que los tumores alcanzaran un volumen promedio de 150-200 mm3, los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos para su tratamiento (n = 5 ratones por grupo). A los ratones se les administro protema de control Fc humana (25 mg/kg), H4H1821N (12,5 mg/kg), 4D5v8 (12,5 mg/kg) o la combinacion de H4H1821N mas 4D5v8 (12,5 + 12,5 mg/kg). Todos los anticuerpos se administraron mediante inyeccion subcutanea dos veces por semana. Los volumenes de los tumores se midieron dos veces por semana durante el transcurso del experimento. El promedio (media ± desviacion tfpica) del crecimiento de los tumores desde el inicio del tratamiento se calculo para cada grupo de tratamiento. El porcentaje de disminucion del crecimiento de los tumores se calculo a partir de la comparacion con el grupo de control de Fc. Los resultados se muestran en la tabla 18.
Tabla 18: Inhibicion del crecimiento de xenoinjertos de tumor BT474 en ratones atfmicos
Anticuerpo (mg/kg)
Crecimiento de tumor en mm3 desde el inicio del tratamiento (media ± DT)) % de disminucion promedio en el crecimiento del tumor
hFc control (25)
194 ± 39 -
H4H1821N (12,5)
137 ± 65 29
4D5v8 (12,5)
34 ± 121 82
H4H1821N + 4D5v8 (12,5 + 12,5)
-79 ± 39 141
Este ejemplo ilustra que el
tratamiento combinado con H4H1821N mas anticuerpos anti-EGFR o anti-HER2
proporciona inhibicion mas potente del crecimiento del tumor que los tratamientos con agentes individuales. En ambos xenoinjertos de tumor FaDu y BT474, los tratamientos de combinacion, pero no los agentes individuales, causaron que el tamano promedio del tumor disminuyera (regresion tumoral).
Ejemplo 11. Cartografiado de epftopos de la union de H4H1821N a ErbB3 por intercambio de H/D
Se realizaron experimentos para determinar los restos de aminoacido de ErbB3 con que interactua H4H1821N. Para este fin, se realizo cartografiado de epftopos de intercambio de H/D. Se expone una descripcion general del metodo de intercambio de H/D en, por ejemplo, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; y Engen y Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A.
Para cartografiar el epftopo o epftopos de union del anticuerpo H4H1821N en ErbB3 mediante intercambio de H/D, se uso una construccion recombinante que consistfa en el dominio extracelular de hErbB3 (aminoacidos 1-613 de la SEQ ID NO: 498) con una marca myc-myc/hexahistidina en el extremo C ("hErbB3-mmH"). En primer lugar se desglucosilo hErbB3-mmH con PNGasa F (New England BioLabs) en condiciones naturales. El anticuerpo
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H4H1821N se unio covalentemente a microesferas de agarosa de N-hidroxisuccinimida (NHS) (GE Lifescience).
En el experimento de "solucion activa/microesferas inactivas" (intercambio activo en solucion seguido por
intercambio inactivo en microesferas), el ligando (hErbB3-mmH desglucosilado) se deutero durante 5 min o 10 min en tampon PBS preparado con D2O, y despues se unio a microesferas de H4H1821N mediante una incubacion de 2 min. Las microesferas unidas a ErbB3 se lavaron con tampon acuoso PBS (preparado con H2O) y se incubaron durante la mitad del tiempo de intercambio activo en tampon PBS. Despues del intercambio inactivo, el ErbB3 unido se eluyo de las microesferas con una solucion de TFA de bajo pH enfriada en hielo. El ErbB3 eluido entonces se digirio con pepsina inmovilizada (Thermo Scientific) durante 5 min. Los peptidos resultantes se desalaron usando puntas de pipeta cromatograficas ZipTip® y se analizaron inmediatamente por espectrometrfa de masas (EM) con ionizacion por desorcion con laser asistido por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF) UltrafleXtreme.
En el experimento de "solucion activa/microesferas inactivas" (intercambio activo en solucion seguido por
intercambio inactivo en microesferas), en primer se unio ErbB3 a microesferas de H4H1821N y despues se
incubaron durante 5 min o 10 min en D2O para el intercambio activo. La siguiente etapas (intercambio inactivo,
digestion con pepsina y analisis EM) se realizaron como se describe para el procedimiento de "solucion activa/microesferas inactivas". Los valores centroides o las relaciones de masa a carga promedio (m/z) de todos los peptidos detectados se calcularon y compararon entre estos dos conjuntos de experimentos.
Los resultados se resumen en la tabla 19 que proporciona una comparacion de los valores centroides m/z para todos los peptidos detectados identificados por cromatograffa de lfquidos-ionizacion por desorcion con laser asistido por matriz (CL-MALDI) EM despues del intercambio de H/D y el procedimiento de digestion peptfdica. Aunque la mayorfa de los peptidos pepticos observados daban valores centroides similares para ambos experimentos de solucion activa/microesferas inactivas y microesferas activas/microesferas inactivas, tres segmentos correspondientes a los restos 345-367, 423-439 y 451-463 del dominio extracelular de ErbB3 (SEQ ID NO: 498) tenfan valores centroide delta (A) mayores o igual a 0,20 m/z tanto en el experimento de "5 min de intercambio activo/2,5 min de intercambio inactivo" (experimento I) como en el experimento de "10 min de intercambio activo/5 min de intercambio inactivo " (experimento II). Para los fines del presente ejemplo, una diferencia positiva (A) de al menos 0,20 m/z en ambos experimentos indica aminoacidos protegidos por la union del anticuerpo. Los segmentos que cumplen este criterio se indican por texto en negrita y un asterisco (*) en la tabla 19.
Tabla 19: Union de H4H1821N a hErbB3-mmH
Experimento I 5 min de intercambio activo/2,5 min de intercambio inactivo Experimento II 10 min de intercambio activo/5 min de intercambio inactivo
Restos (de la SEQ ID NO: 498)
Solucion activa/microesferas inactivas Microesferas activas/microesferas inactivas A Solucion activa/microesferas inactivas Microesferas activas/microesferas inactivas A
46-57
1287,52 1287,41 0,11 1287,58 1287,64 -0,06
58-63
844,97 844,97 0,00 845,04 844,99 0,06
58-66
1102,34 1102,25 0,09 1102,25 1102,30 -0,05
58-67
1265,65 1265,60 0,05 1265,57 1265,50 0,07
58-69
1477,84 1477,77 0,07 1477,79 1477,79 0,01
59-69
1364,46 1364,48 0,02 1364,39 1364,42 -0,03
61-69
1050,70 1050,67 0,03 1050,75 1050,68 0,07
75-96
2509,35 2509,27 0,08 2509,21 2509,21 0,01
76-96
2362,11 2362,09 0,01 2362,11 2361,97 0,14
84-96
1526,22 1526,05 0,16 1526,09 1526,08 0,01
84-98
1710,14 1710,11 0,03 1710,17 1710,07 0,11
84-99
1857,37 1857,34 0,03 1857,39 1857,33 0,06
86-96
1270,52 1270,50 0,02 1270,50 1270,45 0,05
100-114
1750,75 1750,60 0,15 1750,85 1750,75 0,11
100-114
1766,52 1766,55 0,03 1766,63 1766,47 0,16
100-120
2476,03 2475,80 0,23 2476,04 2475,96 0,08
Experimento I 5 min de intercambio activo/2,5 min de intercambio inactivo Experimento II 10 min de intercambio activo/5 min de intercambio inactivo
Restos (de la SEQ ID NO: 498)
Solucion activa/microesferas inactivas Microesferas activas/microesferas inactivas A Solucion activa/microesferas inactivas Microesferas activas/microesferas inactivas A
103-117
1789,63 1789,48 0,14 1789,69 1789,44 0,24
112-120
1142,00 1141,95 0,05 1142,01 1142,06 -0,05
144-154
1431,72 1431,72 0,00 1431,76 1431,67 0,08
345-365
2328,64 2328,64 0,00 2328,57 2328,64 -0,07
345-367*
2542,60 2542,34 0,26 2542,67 2542,47 0,20
366-378
1568,81 1568,70 0,11 1568,88 1568,78 0,10
368-373
807,97 807,95 0,02 807,94 807,88 0,06
368-376
1079,25 1079,30 0,04 1079,38 1079,30 0,08
368-377
1242,49 1242,40 0,09 1242,48 1242,43 0,05
368-378
1355,82 1355,68 0,14 1355,70 1355,73 -0,03
368-379
1469,55 1469,56 0,01 1469,63 1469,57 0,06
368-380
1583,09 1583,10 0,01 1583,04 1583,03 0,01
369-378
1208,29 1208,25 0,03 1208,33 1208,30 0,03
397-408
1295,45 1295,47 0,01 1295,41 1295,36 0,05
397-411
1643,12 1643,04 0,08 1643,03 1642,98 0,05
397-412
1756,26 1756,08 0,18 1756,18 1756,04 0,14
405-411
857,06 856,97 0,09 857,09 857,02 0,07
423-435
1434,94 1434,82 0,11 1434,96 1434,78 0,18
423-436*
1598,08 1597,89 0,20 1598,27 1598,06 0,21
424-439*
1812,55 1812,27 0,28 1812,76 1812,37 0,39
423-439*
1869,57 1869,29 0,28 1869,79 1869,41 0,38
424-435
1377,85 1377,69 0,16 1378,16 1377,93 0,22
424-436*
1541,12 1540,90 0,21 1541,20 1541,00 0,20
425-439*
1665,29 1665,04 0,26 1665,55 1665,22 0,33
451-463*
1585,74 1585,51 0,23 1585,77 1585,53 0,24
618-641
2828,04 2827,98 0,06 2827,98 2827,89 0,10
621-629
989,16 989,14 0,02 989,27 989,28 -0,01
621-641
2498,60 2498,59 0,01 2498,65 2498,53 0,12
Los resultados de intercambio de H/D resumidos en la tabla 19 indican que las tres regiones correspondientes a los aminoacidos 345-367, 423-439 y 451-463 de la SEQ ID NO: 498 estan protegidos del intercambio inactivo completo por la union de H4H1821N a ErbB3 despues del intercambio activo. De forma significativa, las tres regiones estan 5 ubicadas dentro del dominio III del dominio extracelular de ErbB3. Por lo tanto, este ejemplo sugiere que el anticuerpo H4H1821N se une a un epftopo discontinuo dentro del dominio III del dominio extracelular de ErbB3 humano que consiste en tres segmentos de aminoacidos o provoca de otro modo la proteccion de estos restos del intercambio de H/D (por ejemplo, mediante cambio conformacional o efectos alostericos tras la union del anticuerpo).
10 Ejemplo 12. Ensayo cifnico de un anticuerpo anti-ErbB3 en combinacion con erlotinib o cetuximab en pacientes con cancer colorrectal avanzado (CRC), cancer broncopulmonar no microcftico (NSCLS) o cancer
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de cabeza y cuello (SCCHN)
Se realiza un ensayo clfnico con el anticuerpo anti-ErbB3 ejemplar H4H1821N en pacientes con cancer colorrectal avanzado (CRC), cancer broncopulmonar no microcftico (nSclC) o cancer de cabeza y cuello (SCCHN). El ensayo se divide en dos fases: una fase de aumento de dosis y una fase de expansion de seguridad. En la fase de aumento de dosis, a todos los pacientes se les administra inicialmente H4H1821N por via intravenosa (IV) a una dosis de 3, 10 o 20 mg/kg. Despues de la dosis inicial de H4H1821N, el regimen de tratamiento se modifica basandose en el tipo de cancer: los pacientes con NSCLC empiezan un regimen de 150 mg de erlotinib una vez al dfa en combinacion con H4H1821N a 3, 10 o 20 mg/kg IV, una vez cada 14 dfas; los pacientes con CRC y SCCHN empiezan un regimen de cetuximab a 250 mg/m2 IV una vez a la semana en combinacion con H4H1821N a 3, 10 o 20 mg/kg IV, una vez cada 14 dfas. En la fase de expansion de seguridad, los pacientes con NSCLS reciben H4H1821N (a la dosis de fase 2 recomendada) IV una vez cada 14 dfas en combinacion con 150 mg de erlotinib una vez al dfa; los paciente con CRC y SCCHN reciben H4H1821N (a la dosis de fase 2 recomendada) IV una vez cada 14 dfas en combinacion con cetuximab a 250 mg/m2 IV una vez a la semana.
Se espera que el tratamiento de combinacion que comprende el anticuerpo anti-ErbB3 H4H1821N y erlotinib y cetuximab proporcione mejoras clfnicas observables en pacientes con NSCLC, CRC y/o SCCHN a un mayor grado que el monotratamiento con erlotinib o cetuximab en solitario.
LISTADO DE SECUENCIAS
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos
<130> 6550A-WO
<140> Por asignar
<141> Presentado en este documento
<150> 61/541 312 <151> 30/09/2011
<150> 61/557 460 <151> 09/11/2011
<150> 61/614 565 <151> 23/03/2012
<160> 500
<170> FastSEQ para Windows Version 4.0
<210> 1 <211> 366 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 1
cagqtgcagc
tcctgtgtag
ecaggcaagg
acagactccg
ctgcaaatga
t.cattggaac
tcctca
<210>2
<211> 122
tggtggagtc tgggggaggc qtgutccagt ctgggaagtc c:gtctggatt\ caccttcagt. aattatggca tgcactgggt ggctgqagtg ggtggcacgt atatggtttg atggaactaa tgaagggccg attcaccctg tccagagaca gtfcccaagaa acagcctgag agccgaggac acggctgtct atttctgtgc tagaccacta tgttatggac gtctggggcc aagggaccac
cctgagactc 60 crcgccagact 120 taaatactac 180 cacgctgtat 240 gagagaagag 300 ggtcacegtc 360 366
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 2
5ln i/3i Gin 1
Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Ser Gly Lys 5 10 15
jVS g

Ser Leu Ary Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25

Gly Met His Trp Val Arg Gin Thr Pro Gly 35 40

Ala Arg lie Trp Phe Asp Gly Thr Asn Lys 50 55
30
ly Leu Glu Trp Vaj
Tyr Tyr Thr Asp 60
Ser Vai
Lys Gly Arg 65
Leu Gin Met
Ala Arg Glu
Gly Gin Gly 115
Phe
Thr Leu 70 Ser Arg Asp Ser
Aw-: *
Ser 05 Leu Arq Ala Glu As p 90
Glu 100
Ser Leu Glu Leu Asp 105 His
Thr
Thr
Val Thr Val 120 Ser Ser
Thr Ala Val T
?yr Val Met
Thr
Leu Tv 80
Tyr
95 Cy;
Asp HO
Val Tri
<210>3 <211> 24 <212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 3
ggattcacct tcagtaatta tggc 24
<210>4 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly 1 5
<210>5 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 5
atatggtttg atggaactaa taaa 24 <210>6
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
<211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400>6
lie Trp Fhe Asp Gly Thr Asn Lys
1 5
<210>7 <211> 45 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 7
gcgagagaag agtcattgga actagaccac tatgttatgg acgtc 45
<210>8 <211> 15 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 8
Ala Arg Glu Glu Ser Leu Glu Leu Asp His Tyr Val Met Asp Val
15 10 15
<210>9 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 9
qccatccaga
atcacttgcc
gggaaagccc
aggtt.cagcg
gaqgat.Lttg
gggaccaagg
tgacccaqtc tccatccccc ctqtctqcat gggcaagtca ggacattaga gatgatttag ctaacctcct gatctatgct gcatccaqtt gcagtggatc tggcacagat ttcactctca caacttatta ctgtctacaa gattacaatt tggagatcaa acga
ctqtaqqaqa
gctggtttca
tacaaagfgq
ccatcagcag
atccgctcac
caqaqtcacc 60 gcagaaaccc 120 qgtcccatca 180 cctgcagcct 240 tttcggcgga 300 324
<210> 10 <211>108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala
Tie Gin Met Thr Gin Pro
1 Asp
A v r\LxJ V3.1 Th r E, Tie Thr Cys Arg
Leu
Gly Trp 20 Phe Gin Gin Lys Pro
?yr
Ala 35 Ala Ser Ser Leu Gin 40 Ser
Ser
50 Gly Ser Gly Thr Asp 55 Phe Thr
65 Glu
Asp Phe Ala Thr 70 Tyr Tyr Cys
Thr
Phe Gly Gly 85 Giy Thr Lys Val
100
Ser
Ser
Leu Ser Ala Ser Val Gly
10 1 c
Ala
Ser Gin Asp Tie Arg Asp Asp
25
30
Gly
Lys Ala Fro Asn Leu Leu lie
45
Gly
Val Pro Ser Arg ph,0 Ser
Gly
60
Leu
Thr I le Ser Ser Leu Gin Pro
75 80
Leu
Gin Asp Tyr Asn Tyr Pro
Leu
90 95
Glu
He Lys Arg
105
<210> 11 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 11
caggacatta gagatgat 18
<210> 12 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 12
imagen1
<210> 13 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 13
gctgcatcc 9
<210> 14 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala Ser 1
<210> 15 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 15
ctacaagatt acaattatcc gctcact 27
<210> 16 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 16
Leu Gin Asp Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 17 <211>357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 17
gaggtgcaqc
tcctgtgcag
ccagggaagg
acaggccctg
ctacaaatga
ggggatcaag
cggtggagtc tgggggagqt gtggtaeggc ctggggggtc cctgagactc CO cctctggatt cacctttgaa gattatggca tgaattgggt ccgccaagtt 120 ggctggagtq ggtctctggt actaattgga atggtggtat cacaggttat 100 tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctatat 240 acagtcfcgag agccgaggac acggccttgt atcactgtgc gagagatagc 300 atgcttttga tatctggggc caaggqacaa tggtcaccgt ctcttca 357
<210> 18 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 18
5
10
15
20
25
30
35
40
<31 y Gly
•*, C
Asp Tyr Trp Val Ser Val
Leu Tyr
80
His Cys 95
<31n Gly
<210> 19 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 19
ggattcacct ttgaagatta tggc 24
<210> 20 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
Glu
Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro
%
5 10
Ser
Leu Arcj Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe '3i J
20 25 30
Gly
Met Asn Trp Val Arq Gin Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Ser
Gly Thr Asn Trp Asn Gly Gly lie Thr Gly Tyr Thr Gly
50 55 60
Lys
Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
65
70 7 5
Leu
G r n Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
85 90
Ala
Arg Asp Ser Gly Asp Gin Asp Ala Phe Asp lie Trp Gly
100 105 110
Thr
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<220>
<223> Sintetico <400> 20
Gly Plie Thr Phe Glu Asp Tyr Gly
1 5
<210> 21 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 21
actaattgga atggtggtat caca 24
<210> 22 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Thr Asn Trp Asn Gly Gly lie Thr 1 5
<210> 23 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 23
gcgagagata gcggggatca agatgctttt gatatc 36
<210> 24 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 24
Ala Arg Asp Ser Gly Asp Gin Asp 1 ' 5*
Ala Phe Asp life 10
<210> 25 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 25
gacatccagt
atcacttgct
gggaaagccc
agattcagcg
gaagattttg
gggaccaagg
tgacccagtc
gggceagtca
ctaaactcct
gr.agt.ggatn
caacttatta
tggagatcaa
tccatccttc
ggacattagc
gatctatgct
tgggacagaa
ctqtcaacag
acga
ctgtct.gr.at
agttatttag
gcatccactt
tfccactctca
cttgatagtt
ctgtaggaga cagagtcacc 60 cctggtatca gcaaaaacca 120 tccaaagtgg ggtcccatca 180 caat.cagcaa cctgcagcct: 240 accctctctc tttcggcgga 300
324
<210> 26 <211> 103 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 26
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
5 10 15
Asp
Arg Val Thr He Thr Cys Trp Ala Ser Gin Asp Tie Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu
Ala Tip Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35* 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Thr Phe Gin Ser Gly Va 1 Pro Ser Arq Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser c* l y Thr G1U Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Leu Gin Pro
65
70 *7 c t v» 80
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asp Ser Tyr Pro Leu
90 95
Ser
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
100
10S
<210> 27 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 27
caggacatta gcagttat 18
<210> 28 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 28
Gin Asp lie Ser Ser Tyr 1 5
<210> 29 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 29 gctgcatcc 9
<210> 30 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 30
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala Ser 1
<210> 31 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 31
caacragcttg atagttaccc tctctct 27
<210> 32 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 32
Gin Gin Leu Asp Ser Tyr Pro Leu Ser 1 5
<210> 33 <211> 369 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 33
gaggtgcagc tcctgtgcag acaggaaaaq gtctr.cgcga caaatgaaca acaat tcgtc gtctv. eg e c
tggtqgagtc
cctctggatt
gtctgqaqtq
egggeegatt
gcctqagagc
cggacgacta
tgqqqqaggc ttgqtacagc caccttragt agctacgaca qgtctcaqct attggtcctq cacc.atc.tcc agagat.gatg cggggacacg gctgtctatt ccttggtctu gacgtctggg
ctqqqgqgtc cctqaqactc 60 tgcactgggt ccgccaagca 120 ctggtgacac atactatcca 180 ccaagaactc ettgtatett. 240 actgtgcaag agagggggtc 300 gccaaggaac cacggtcacc 360
369
<210> 34 <211> 123 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 34
5
10
15
20
25
30
35
40
Glu
Val Gin Leu
1
Ser
Leu Arg Leu
Asp
Met His 20 Trp
S©r
Ala 35 lie Gly
Gly
50 Arg Phe Thr
65
Gin
Met Asn Ser
Arg
G i u Gly Val
Trp
Gl y Gin 100 Gly
Val
Glu Ser Gly
5
Ser
Cys Ala Ala
Val
Arg Gin Ala
Pro
Ala Gly 40 Asp
Tie
Ser 55 Arg Asp
Leu
70 Arg Ala Gly
85
Thr
lie Arg Pro
Thr
Thr
Val
Thr
115
Gly
Gly 10 Leu Val
Ser 25
Gly Phe Thr
Thr
b 1 V Lys Giy
Thr
Tyr Tyr Fro 60
Asp
Ala Lys 75 Asn
Asp
Thr 90 Ala Val
Asp 105
I\zp Tyr Phe
Val
Ser Ala
120
Gin
Pro Gly 15 Gly
Phe
Ser 30 Ser Tyr
Leu 45
Glu Trp Val
Val
Ser Ala Met
Ser
Leu Tyr Leu 80
Tyr
Tyr
Cys 95 Ala
Gly
Leu Asp Va 1
1 10
<210> 35 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 35
ggattcacct ttagtagcta cgac 24
<210> 36 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 36
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp 1 5
<210> 37 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 37
attggtcctg ctggtgacac a 21
<210> 38 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Gly Prc Ala Gly Asp Th 1 5
<210> 39 <211> 51 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 39
gcaagagagg gggtcacaat tcgtccggac gactactttg gtctggacgt c 51
<210> 40 <211> 17 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 40
Ala Arg Glu Gly Val Thr lie Arg Pro Asp Asp Tyr Phe Gly Leu Asp 15 10 15
Val
<210> 41 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 41
gacatccaqt
tyacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgct
gggccagtca gggcattagc gattat.ttag ccrggtatca gaaaaaacca 120
gggaaagccc
cccagctcct gatctatgct gcaaccactt tgcaaagtgg qgtcccatct 180
aggttcagcg
gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg
caacttatta ctgtcaacag cttaat.actt acccactcac tttcggcgga 300
ggaaccaagg
tggagatcaa acga 324
<210> 42 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 42
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
j 10 ■*
Asp
Arq Val Thr lie Thr Cys Trp Ala Ser Gin Gly lie Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gin Leu Leu lie
35 40 45
Tyr
Ala Ala Thr Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Pile Ser Gly
50 C C J 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asn Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
100 105
<210> 43 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 43
cagggcatta gcgattat 18
<210> 44 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 44
Gin Gly lie Ser Asp Tyr
1 5
<210> 45 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 45
gctgcaacc 9
<210> 46 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 46
Ala Ala Thr
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 47 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 47
caacagctta atacttaccc actcact
<210> 48 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 48
27
Gin Gin Leu Asn Thr Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 49 <211> 360 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 49
caggtgcagc
tggtggagtc tgggggagac gtggtceagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag
cgtctggatt caccrttcagt aqctttggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg
ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg ttgaaatraa taaataccat 180
gcagactccg
tgaaqggccg attcaccatc tccagagacg attccaaqaa caeggtatat 240
ctgcaaatga
acagcctgag agcc.gaggac acggctgtgt atractgtgc gagagactgg 300
aacgacggcjg
actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 50 <211> 120 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 50
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gly Arg 15
Ser Phe Trp Val Se r Val
Val Tyr
80
Tyr Cys
qc;
Gly Gin
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 51
ggattcacct tcagtagctt tggc 24
<210> 52 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly
1 5
<210> 53 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 53
atatggtatg ttgaaattaa taaa 24
<210> 54 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 54
Gin
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Giy Gly Val Val G1 n Pro
1
5 10
Ser
Leu Arg Leu Ser Cy s Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
Ser
20 25 30
Gly
Met Hi;: Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Ala
Val He Trp Tyr Val Glu lie A sr) Lys Tvr His Aila Asp
50 55 60
Lys
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys A.sn Thr
65
70 75
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90
Ala
Arg Asp Trp Asn Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51 <211> 24 <212>ADN
5
10
15
20
25
30
35
40
45
lie Trp Tyr Val Glu lie Asn Ly 1 5
<210> 55 <211> 39 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 55
gcgagagact ggaacgacgg ggactacggt atggacgtc 39
<210> 56 <211> 13 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 56
Ala Arg Asp Trp Asn Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10*
<210> 57 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 57
gaoatccagt atcacttgct gggaaagccc aggttcaqcq ggagattttg gggaccaagc
<210> 58 <211> 108 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 58
imagen2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Leu Thr Gin Pro
1 Asp
Arg Val Thr 5 lie Thr Cys Trp
Leu
Ala Trp 20 Tyr Gin Gin Lys Ala
Tyr
Ala 35 Ala Ser Thr Leu Gin 40 Thr
Sor
50 Gly Ser Gly Thr Glu 55 Phe Thr
65 Gly
Asp Phe Ala Thr 70 Tyr His Cys
Thr
Phe Gly Gin 85 Gly Thr Ly.? Tj-.r.
10
Ala Sej 25
60
J‘J
Ala
Ser Val 15 Gly
lie
Ser 30 Ser Phe
Arg 45
Leu Leu Tie
Arg
Phe Ser Gly
Ser
Leu Gin Pro 80
Ser
Tyr Pro 95 Tyr
100
105
<210> 59 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 59
cagggcatta gcagtttt 18
<210> 60 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 60
Gin Gly lie Ser Ser Phe 1 5
<210> 61 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 61
gctgcatcc 9
<210> 62 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 62
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala Ser 1
<210> 63 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 63
caacagctta atagttaccc gtacact 27
<210> 64 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 64
Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Tvr Thr 1 5
<210> 65 <211> 369 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 65
gaggtgcagc tcctgtgcag acaggaaaag gactccgtaa caaatgagca gcagttcgt.c gtctccgcc
<210> 66 <211> 123 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 66
tggtggagtc t.qqqqqaqgc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 cctctggatt caccttcagt aactacgaca tacactgggt ccgccaagct 120 gtctggagtg ggtctcagct attggtcctg ctggtgacac atactattca 180 agggccgatt caccat.ctcc agagaagatg ccaagaactc cttgtatctt 240 gcctgagagc cgggqacacg gctgtttatt actgtgcaag cqaqgggata 300 cggacgacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
369
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
1
5 10 15*
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp
He his Trp Val Are Gin Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser
Axa lie Gly Pro Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val I.ys
50 55 60
Gly
Arg Phe Thr He Ser Arg Glu A sp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
€5
70 ”7 5 80
Gin
Met Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser
Giu Gly lie Ala Val Arg Pro Asp Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
?rp
Gly Gin i>ly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 67 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 67
ggattcacct tcagtaacta cgac 24
<210> 68 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 68
Gly Phe Till ?iie Ser Asn Tyr Asp 1 5
<210> 69 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 69
attggtcctg ctggtgacac a 21
<210> 70 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 70
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen3
<210> 71 <211> 51 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 71
gcaagcgagg ggatagcagt tcgtccggac gactactacg gtatggacgt c 51
<210> 72 <211> 17 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 72
Ala Ser Glu Gly lie Ala Val Arg Pro Asp Asp Tvr Tyr Gly Met Asp
15 10 15
Val
<210> 73 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 73
gacatccaut atcacttgct qggaaagccc aggttcagcg gaagattttg ggganrraagg
tgacccaqtc tccatccttc ctgtctgcat gggccagtca ggaoattacc agttatttag ctaagctcct qatctatgct qcatccactt gcagtggatc t.gggacagaa t.t.cactctca cagcttatta ctgtcaacag cttaatagtt tggagatcaa acga
ctgtaggaqa cagagtcacc 80 cctggtatca gaaaaaacca 120 tqcaaagtgg gqtcccatca 180 caatcagcag cctgcagcct 240 acccgctcac tttcggcgga 300
324
<210> 74 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 74
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Gin I.eu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
3 10 15
Asp
Arg Val Thr Tie Thr cys Trp Ala Ser Gin Asp Tie Thr Ser Tyr
20 25 30
Leu
Ala Tip Tyr Gir. Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Ary Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser bl y Thr Glu Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Phe Ala Ala Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr
Phe (’] M G1 y Gly Thr Lys Val Asp He Lys Ary
100 105
<210> 75 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 75
caggacatta ccagttat 18
<210> 76 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 76
Gin Asp lie Thr Ser Tyr 1 5
<210> 77 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 77 gctgcatcc 9
<210> 78 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 78
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala 3er 1
<210> 79 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 79
caacagctta atagttaccc gctcact 27
<210> 80 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 80
Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 81 <211> 381 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 81
gaggtgcagc
tcctgtgcaa
ccagqgaagg
gcagactccg
ctgcaaatga
actaatatgg
accacggtca
tgttggagtc cctctggat t gcctggagtg tgaagggccg acagcctgag ttcggggagt ocgtcrccgc
tgggggagac
cagtttcagt
ggtctcaggt
gttcaccatc
agccgaggac
tgttatggag
ttggtacagc
agtgatgcca
attagtggta
tccagaqaca
acggccgt.at
qacaaeggta
ctggggggtc tgaactgggt gtggtggtaa 11 cecaagag attattgtgc tqgacgtctg
cctgagactc
ccgccaggct
cacatactac
cacgctgtct
gaaagagggt
gqgccaaggg
80 120 1 80 240 300 360 381
<210> 82 <211> 127 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 82
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu 1
Val Gin Leu Leu s Glu Ser Gly Gly Asp 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Gly
Ser
Leu Arg Leu 20 Ser Pwe ^1 ** Al3 Thr Ser 25 Gly Phe Ser Phe Ser 30 Ser Asp
Ala
Met Asn 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val
Ser
Gly 50 He ggr Gly Ser Gly 55 Gly Asn Thr Tyr Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Lys
Gly Arg Phe Thr lie 70 Ser Arg Asp lie Ser 75 Lys Ser Thr Leu Sex 80
Leu
Gin Met noli Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr rr;,y x yr 95 Cys
Ala
Lys Glu Gly 100 Thr Asn Met Val Arg 105 Gly Val Val Met Glu 110 Asp Asn
Gly
Met Asp 115 Val Trp Gly Gin Gly 120 Thr Thr Val Thr Val 125 Ser Ala
<210> 83 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 83
ggattcagtt ttagtagtga tgcc 24
<210> 84 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 84
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asp Ala 1 5
<210> 85 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 85
attagtggta gtggtggtaa caca 24
<210> 86 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 86
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Ser Gly Ser Gly Gly A:;n Thr 1 5
<210> 87 <211> 60 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 87
gcgaaagagg gtactaatat ggttcgggga gttgttatgg aggacaacgg tatggacgtc 60
<210> 88 <211> 20 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 88
Ala Lys Glu Gly Thr Asn Met Val Arg Gly Val Val

15 10
Gly Met Asp Val
20
<210> 89 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 89
gacatccaga atcacttgtc
QpdddcivjCCC
aggttcagcg gaagattttg gggaccaagg
<210> 90 <211> 108 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 90

tgacccagtc gccatcttcc gtgtctgcat etgtgggaga cagagtcacc 60

gggcgagtca gggt.attagc gactacttaa cctggtatca gcagaaacca 120

ctaaactcct qatetatgct gcatccagtt tqcaaagtgg gqtcccatcc ISO

gccqtggctc t.gggacagat ttcactctca ccatcagcac cotgcagcct 240

caacttacta ttgtcaacaq qctaacagtt tcccgctcac tttcqqcqga 300

tggagatcaa acga 324
Met Glu Asp Asm
15
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen4
<210> 91 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 91
cagggtatta gcgactac 18
<210> 92 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 92
imagen5
<210> 93 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 93
gctgcatcc 9
<210> 94 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 94
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala 3er 1
<210> 95 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 95
caacaggcta acagtttccc gctcact 27
<210> 96 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 96
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5
<210> 97 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 97
caggtgcagc
tcctgtgcag
ccaggcaagg
gcagactccg
ctggaaatga
qqtqaccccg
tggtggagtc tgggggaggc gt.ggtccagc cgtctggatt caccttcaat aactatggca ggctggcgtg ggtggcagtt atgtggtata tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acagcctgag agt.cgaggac acggctatat atgcttttga tatctggggc caagggacaa
ctgggaggtc crtgagactc 60 tgcactgqgt ccgccagqct 120 gtgaaagfcca taaatactat 180 attccaagaa cacgctqtat 240 attactgtgc gagagatctc 300 tqqtcaccgt ctcttca 357
<210> 98 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 98
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin
Val Gin Leu Val Glu Sex' Gly Gly Gly val Val Gin Pro Gly Arg
r, -i 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asri Tyr
20 25 30
Gly
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Val
35 40 45
Ala
Val Met Trp Tyr Ser Glu Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lyr.
Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65
70 75 80
Leu
Glu Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Tie Tyr Tyr Cys
85 90* 95
Ala
Arg Asp Leu Gly Asp Pro Asp Ala Phe Tie Trp Gly Gin Gly
100 105 HO
Thr
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 99 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 99
ggattcacct tcaataacta tggc 24
<210> 100 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 100
■he Asn Asn Tyr Gly
<210> 101 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
Gly Phe Thr i 1
<400> 101
atgtggtata gtgaaagtca taaa 24
<210> 102 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 102
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Met Tip Tyr Sei Glu Ser His Lys
1 5
<210> 103 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 103
gcgagagatc tcggtgaccc cgatgctttt gatatc 36
<210> 104 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 104
Aia Arg Asp Leu Giy Asp Pro Asp Ala Phe Asp Tie 15 10
<210> 105 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 105
gacatccagt
atcacttgct
gggaaagccc
aggttcagcg
gaagattttg
gggaccaagg
tgacccagtc
gggecagtca
ctaagetcct
gcagtggatc
caacttatta
cggagatcaa
tccat ccttc gggcattagc gatttatggt tgggacagaa ctgtcaacag acga
ctgtctgcat ctgtagqaga cagaqtcacc agttatttag sctggtatca geaaaaacca gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca ttcactctca caatcagcag cctgcagcct. cttaataqtt accctctcac cttcggcqga
GO
120
180
240
300
324
<210> 106 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
He Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Va 1 Giy
1
5 10 15
Asp
Arg Val Thr lie Thr Cys Trp Ala Ser Gin Gly He Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin G1 n Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35’ 40 45
Tyr
Gly Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Th r G1 u Pile Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Pile Ala Thr Tyr Tyr Cys Glii Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Till
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
100 105
<210> 107 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 107
cagggcatta gcagttat 18
<210> 108 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 108
Gin Gly Tie Ser Ser Tyr 1 5
<210> 109 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 109 ggtgcatcc 9
<210> 110 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 110
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen6
<210> 111 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 111
caacagctta atagttaccc tctcacc 27
<210> 112 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 112
Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Th
1 5
<210> 113 <211>375 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 113
caggtgcagc
tccfcgtgcag
ccaggcaagg
tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc cctct.ggatt cacctt.cagt agctatggca ggctqgagtg ggtggcaggt atgtcatatg
ctgggagqtc cctgagactc tgcactgggt ccgccaggct atggaaqtag taaatactat
60
120
180
gaagactccg
otgcaaatga
gactacgttg
tqaagggccg attcaccatc aoagcctgag agttgaggac agtacgcaga ctcctactac
gtcaccgtct ccgcc
tccagagaca
acggctgtgt.
ggtatggacg
attccaagaa cacgctgaat 240 attactgtge gaaagaaagg 300 tctggggcca agggaccacg 360
375
<210> 114 <211> 125 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glr: i
Vdi Gin Leu Val 5 Glu Ser Gly
Ser
Leu Arg Leu on c. *J Ser Cys Ala Ala
Gly
Met 15 i s 35 Trp Val Arg Gin Ala 40
Ala
Gly 50 Met. Ser Tyr Asp Gly 55 Ser
Lys 65
Gly Arg Phe Thr Tie 70 Ser Arg
Leu
Gin Met Asn Ser p c. Leu Arg Val
Ala
Lys Glu Arg ICO O -J Asp Tyr Val Glu
Asp
Val Tire 115 Gly Gin Gly Thr Thr 120
G ly-
Gly Val Val Gin Pro Gly Arg
10 1 C X J
Se r
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
25
30
Pro
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
45
Ser
Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Va 1
60
Asp
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
*7 c • 80
Glu
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
90 95
Tyr
Val Asp Ser Tyr Tyr Gly Met
105
110
V a i
Thr Val Ser Ala
125
<210> 115 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 115
ggattcacct tcagtagcta tggc 24
<210> 116 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 116
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1
<210> 117 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 117
atgtcatatg atggaagtag taaa 24
<210> 118 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 118
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Met Ser Tyr Asp Giy Ser Ser Lys 1 5
<210> 119 <211> 54 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 119
gcgaaagaaa gggactacgt tgagtacgta gactcctact acggtatgga cgtc 54
<210> 120 <211> 18 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 120
Ala Lys Glu Arg Asp Tyr Val Glu Tyr Val Asp Ser Tyr Tyr Gly Met
15 10 15
Asp Val
<210> 121 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 121
gccatccaga
cgacccaytc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc GO
atcacttgcc
gggcaagtca qggcattaga aatgatttag qctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc
ctaaggtcct aatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca ISO
aggttcagcg
gcagtggatc tggaacagtt ttcactctca ccatcagcag octgcagcct 240
gaagattttg
caacttatta ctgtctacaa gattacaatt acccqctcac tttcggcgga 300
gggaecaagg
tggagatcaa acga 324
<210> 122 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala
He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser
Ala
i
5 10
Asp
Arq Va 1 Thr lie Thr Cys Arq Ala Ser Gin Gly He
20 25
Leu
Giy Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
35 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Gly Val Pro Ser Arq
50 55 €0
Ser
Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr lie
Ser
Ser
65
70 75
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Asp Tyr Ann
85 90
Thr
Phe G 1 y Gly Gly Thr Lys Val Glu Tie Lys Arg
100 105
Ser Val Glv
Aru Asn Asp 30
Val Leu He
Phe Ser Glv
Leu Gin Pro 80
Tyr Pro Leu 95
<210> 123 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 123
cagggcatta gaaatgat 18
<210> 124 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 124
imagen7
<210> 125 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 125 gctgcatcc 9
<210> 126 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 126
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala 3ei
<210> 127 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 127
ctacaagatt acaattaccc gctcact 27
<210> 128 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 128
Leu Gin Asp Tyr Asr, Tyr Pro Leu Thr 1 * 5
<210> 129 <211> 375 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 129
gaggtgcagc
tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc ctggggggtc cct.gagactc 60
tcctgtgcag
cctctggatt cacctttgat gattatggca tgagctqqgt ccgccaattt 120
ccagggaagg
ggctggagtg ggtctctagt attgatggaa atggtggt.aa cacaggttat 180
tcagactctg
tgaagggccg attcaccatc tccaqagaca acgccaaaaa ctccctgcat 240
ctgcaaatga
acagtctyag agccgaggac acggocttgt atcactgtgc gagagatccc 300
gattatgatt-
ccgtttgggg gaattatcgt ccotttgact artggggeca gggaaccctg 360
gtcaccgtct
cctca 376
<210> 130 <211> 125 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Vai Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai
1
5 10
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Pile Thr
20 25
Gly
Met Ser Trp vai Arg Gin Phe Pro Gly Lys
Gly
35 40
Ser
Ser
lie Asp Gly Asn Gly Gly Asn Thr Gl y Tyr
50 55 60
Lys
Gly Arg Phe Thr He o6r A to Asp Asn Ala
Lys
65
70 75
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
85 90
Ala
Arg Asp Pro Asp Tyr Asp Ser Vai Trp Gly Asn
100 105
Asp
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Va l Thr Vai Ser
115 120
Arg Pro Gly Gly
15
Phe Asp Asp Tyr
30
Leu Glu Trp Vai 45
Ser Asp Ser Vai
Asn Ser Leu Kis
00
Leu Tyr His Cys 95
Tyr Arg Pro Phe 110
Ser
125
<210> 131 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 131
ggattcacct ttgatgatta tggc 24
<210> 132 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 132
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly 1 5
<210> 133 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 133
attgatggaa atggtggtaa caca 24
<210> 134 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 134
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 135 <211> 54 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 135
gcgagagatc ccgattatga ttccgtttgg gggaattatc gtccctttga ctac 54
<210> 136 <211> 18 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 136
Ala Arg Asn Pro Asp Tyr Asp Ser Val Trp Gly Asn Tyr Arg Pro Phe 1*5* 10 15
Asp Tyr
<210> 137 <211> 342 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 137
gatatt.gtga
tgactcagtc tccagactcc crggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaaetgca
agtccagcca gagtgtttta tccagctcca acgataacaa ctacttagct 120
tggttccagc
agaaaccagq acagcctcct aacctactca tttactgggc atccacccgg 180
gattccgggg
tccctgaccg attcagtgcc agcgggtctg ggacagattt caccctcgcc 240
atcagcagcc
tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcaccaata t tatagtLct 300
cctccgacgt
tcggccaagg gaccaaggtg gagatcaaac ga 342
<210> 138 <211> 114 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 138
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
I Le Val ?*tet Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Va 1 Ser Leu Gly
1
5 10 •J c 1 J
Glu
Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys Ser Ser Glri Ser Val Leu Ser Ser
20 25 30
Ser
Asn Asp Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin
35* 40 45
Pro
Pro
Asn Leu Leu Tie Tyr ?rp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro
Asp Arg Phe Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala
65
70 -»C. * vf 80
lie
Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gin
85 90 95
Tyr
Tyr
Ser Pec Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys V al Glu lie
100 105 110
Lys
Arg
<210> 139 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 139
cagagtgttt tatccagctc caacgataac aactac 36
<210> 140 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 140
Gin Ser Val Leu Ser Ser Ser Asn Asp Asn Asn Tyr 15 10
<210> 141 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 141 tgggcatcc 9
<210> 142 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 142
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen8
<210> 143 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 143
caccaatatt atagttctcc tccgacg 27
<210> 144 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 144
His Gin Tyr Tyr Ser Ser Pro Pro Thr 1 5
<210> 145 <211> 372 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 145
caggtgcagc
acctgcactg
cagcacccag
tacaacccgt
tccctgacac
agtgacgtgg
accgtctctt
tgcaggagtc qyycccaqga ctgytgaaqc tctctggtgg ctcr.at.taac agtggtggtt ggaagggcct ggaqtqyatl gggtacatct ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag tgacctctgt. gactgccgeg gacacggccg atacaggtct ggttgatggt tttgatgtct ca
cttcacagac
cctgtccctc 60
attactggag
ctggatccgc 120
cttacagtgg
gaataccaac 180
acacgtctaa
gaaccagttc 240
tgtattactg
tgcgagagac 300
ggggccaagg
aacaatggtc 360
372
<210> 146 <211> 124 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 146
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin
Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
Gin
1
5 1 J •: c 4.
Thr
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly 3er lie A Ser Gly
2G 25 30
Gly
Tyr Tyr Trp Ser Trp lie .Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp
Tie Gly Tyr He Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu
Lys Ser Arg Val Thr Tie Ser Val Asp Thr Ser T\#c* uy— Asn Gin Phe
65
70 7 C « >J 80
Ser
Leu Thr Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
05 90 95
Cys
Ala Arg Asp Ser Asp Val Asp Thr Gly Leu Val Asp Gly Plie Asp
100 105 110
Val
Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 147 <211> 30 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 147
ggtggctcca ttaacagtgg tggttattac 30
<210> 148 <211> 10 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 148
Gly Gly Ser Tie Asn Ser Gly Gly Tyr Tyr 15 10
<210> 149 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 149
atctcttaca gtgggaatac c 21
<210> 150 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 150
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 151 <211> 48 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 151
gcgagagaca gtgacgtgga tacaggtctg gttgatggtt ttgatgtc 48
<210> 152 <211> 16 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 152
Ala Arg Asp Ser Asp Val Asp Thr Gly Leu Val Asp Gly Phe Asp Va
1 5 * 10 16
<210> 153 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 153
gatattqtqa atcact.tgcc gggaaagccc agqt tcagcg gaggattttg gugaccaagg
<210> 154 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 154

tqacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

gggcgagtca gggtgttagc agctggttag cctggtatxa gcagaaacca 120

ccaagctcct gatttataet acatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

gcagtggatc tgggacagat ttcagtetca ccat cagcag cctgcagcct 240

caacttacta ttgtcaacag tctaacagtt ttccattcac tttcggccct 300

tggagatcaa a 321
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
He Val Met Thr Gin Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Va 1 Gly
1
5 10 15
Asp
Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Val Ser Ser Tip
20 25 30
Leu
Ala Tip Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35 40 45
Tyr
Thr Thr Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Pile Ser Gly
50 55 60
Sei
Gly Ser Gl y Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Ser Phe Pro Piie
85 90 95
Thr
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Tie Lys
IOC
105
<210> 155 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 155
cagggtgtta gcagctgg 18
<210> 156 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 156
Gin Gly Val Ser Ser Trp
1 5
<210> 157 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 157 actacatcc 9
<210> 158 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 158
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen9
<210> 159 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 159
caacagtcta acagttttcc attcact 27
<210> 160 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 160
Gin Gin Ser Asn Sar Phe Pro Phe Thr 1 5
<210> 161 <211> 372 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 161
gaggtgcagc: tcctgtgcaq acaggaaaag ggctccgtqa caaatacaca atagcagctc accgtetcct
<210> 162 <211> 124 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 162
tggtggagtc tgggggaggc tfcggtacagc ctggggggtc cctaagactc 60 cctctggatt ctccgtcagt tactacgaca tqcactgggt ccqccaagtt 120 gtctggagtg ggtctcagct attggtcctg caggtgacac atattaccca 1H0 agggccgatt caccatctcc agagaagatg ccacgaactc cttatatctt 240 gcctgggagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agagggggct 300 gtccggacga ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 ca 372
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly L«r. U Val Gin Pro Gly Gly
1
5 10 15
Ser
lieu Arq Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Val Ser Tyr Tyr
20 25 30
Asp
Met Kis Trp Val Arg Gin Val Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser
Ala lie Gly Pro A1 a Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly' Ser Val Lys
55 60
Gly
Arq Phe Thr lie Ser Arg Glu Asp Ala Thr Asn Ser Leu Tyr Leu
6S
70 75 80
Gin
lie His Ser Leu Gly Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arq
Glu Gly Ala lie Ala Ala Arg Pro Asp Asp Tyr Tyr Gly' Met Asp
100 105 110
Val
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 163 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 163
ggattctccg tcagttacta cgac 24
<210> 164 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 164
Gly Phe Ser Val Ser Tyr Tyr Asp 1 5
<210> 165 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 165
attggtcctg caggtgacac a 21
<210> 166 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 166
5
10
15
20
25
30
35
40
45
lie Giy Pro Aid Gly Asp Thi 1 * 5
<210> 167 <211> 54 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 167
gcaagagagg gggctatagc agctcgtccg gacgactact acggtatgga cgtc 54
<210> 168 <211> 18 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 168
Ala A rg Glu Gly Ala Tie Ala Ala Arg Pra Asp Asp Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15
Asp Val
<210> 169 <211> 324 <212> ADN <213> Secuencia
<220>
<223> Sintetico <400> 169
gacatccagt. atcacttgct gggaaagccc agg ttc agccj gaagattttg gggaccaagg
<210> 170 <211> 108 <212> PRT <213> Secuencia
<220>
<223> Sintetico <400> 170
artificial

tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

gggccagtca ggacattagc agttatttag cctggtatca geaaaaacca 120

ctaagctcet gat.ctat.gct gcatecactt tgcaaagt.gg ggtcceatca 180

gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240

caacttatta ctgtcaacaa cttaatagtt acccgctcac tttcggcgga 300

tggagatcaa acga 324
artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Gin Leu Thr Gin *• Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
C 10 15
Asp
Arg Val Thr Tie Thr Cys Trp Ala Ser Gin 7\ s p Tie Ser Ser Tyr
20 25 30
T.eu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lyr, Ala Pro Lys Leu Leu Tie
35 40 45
Tyr
Ala Ala Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro
€5
70 75 80
G1 u
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr
Plie Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
100 105
<210> 171 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 171
caggacatta gcagttat 18
<210> 172 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 172
imagen10
<210> 173 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 173
gctgcatcc 9
<210> 174 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 174
Ala Ala Ser 1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 175 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 175
caacaactta atagttaccc gctcact 27
<210> 176 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 176
Gin Gin Leu Asrs Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 177 <211> 363 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 177
gaggtgcagc
tggtggagtc tgggggagqc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc GO
tcctgtgcag
cctctggatt cacctttggt gattatgcca tgcactgggt ccggcaaget 120
ccagggaagq
gcctggagtq ggtctcaggt attaatttga atagtggcac cataggctat 180
gcggactctg
tgaagggceg at.tcaccat.t t.caagagaca acgccaagaa ctccctgtat. 2-10
ctgcaaatga
acagt-ctgag agctgaqgac acggccttct at tactgtgc aaaagatata 300
gacggctact tea
atcactacgc tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 363
<210> 178 <211> 121 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 178
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gl u
Val Gin Leu Val Glu Ser Giy Giy Giy Leu Val Gin Pro Giy Arg
1
10
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Giy Phe Thr Phe Giy Asp Tyr
20 25 30
Ala
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Giy Lys Giy Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser
Giv He Asn Leu Asn Ser Glv Thr He Giy Tyr Ala Asp Ser Val
50 60
Lys
Giy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65
70 7 5 30
Lsu
Gin Met Asr* Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe 1 r Tyr Cys
85 30 95
Ala
Lys Asp lie Asp Glv Tyr Tyr His m. , y. 1 jr -■ Ala Met Asp Ya 1 Trp Giy
100 105 110
Gin
Giy Thr Thr Val Thr V al Ssr Ser
115 120
<210> 179 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 179
ggattcacct ttggtgatta tgcc 24
<210> 180 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 180
Giy Phe Thr Phe Giy Asp Tyr Ala 1 5
<210> 181 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 181
attaatttga atagtggcac cata 24
<210> 182 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 182
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Asn Leu Asr. Ser Gly Thr lie 1 5
<210> 183 <211> 42 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 183
gcaaaagata tagacggcta ctatcactac gctatggacg tc 42
<210> 184 <211> 14 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 184
Ala Lys Asp lie Asp Gly Tyr Tyr His Tyr Ala Met Asp Val
1 5 10
<210> 185 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 185
gacatccagt atcacttgct qggaaagccc aggttcageg gaagatfcttg gggaecaagcj
imagen11
<210> 186 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 186
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp 1
Val Val Met Thr 5 Gin Ser Pro Ser Phe 10
Asp
Arg Val Thr 20 lie Thr Cys Trp Ala 25 Ser
Leu
Ala Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Gly Lys
Tyr
Asp 50 Ala Ser Thr Leu Glu 55 Ser Gly Val
Ser 65
Gly Ser 'oiy Thr G1 u 70 Phe Thr Leu Thr
Glu
Asp Phe Ala Thr 85 Tyr Tyr Cys Gin Gin SO
i Lx
Phe Gly Gly ICO Gly Thr Lys Val Glu 105 He
Leu Ser Ala Ser Val Gly 5
Gin Gly lie Ser Ser Tyr 30
Ala Pro Lys Leu Leu lie 45
Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
lie Ser Asn Leu Gin Pro 75 80
Val Asn Ser Tyr Pro Leu
95
Lys Arg
<210> 187 <211> 18 <212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 187
cagggcatta gcagttat 18
<210> 188 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 188
Gin Gly Tie Ser Ser Tyr 1 5
<210> 189 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 189
gatgcatcc 9
<210> 190 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 190
Asp Ala 3ei
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 191 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 191
caacaggtta atagttaccc tctcact 27
<210> 192 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 192
Gin Gin Val Asn Ser Tyr Pro Leu Th 1 5
<210> 193 <211> 354 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 193
naggtgcagc
tggtggagtr; tgggggaggr. gtggtccagc efcgggaggtc cct.gagscte 60
tcctqtgcag
cgtctqgatt caccttcatt aactatggca tacattqqgt ccgccagqgt 120
ccaggcaagg
ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa tgaatggtat 180
gcagactccq
tgaagggccg act caecatc tccagagaca attccaagaa caeggtgtat 240
ctggaaatqa
agccgaggac acggctgtgt a t r.actgtgc gagagaagaa 300
gaggactaeg
gtatggacgt ctggggteaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 194 <211> 118 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 194
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin 1
Val Gin Leu Val e. Glu Ser
Ser
Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala
bl y
He His 35 Trp Val Arg Gin
Ala
Val 50 lie Trp Tyr Asp Gly 5d
Lys 65
Gly Arg Phe Thr lie 70 Ser
Leu
Glu Met Asn Lys 85 Leu Arg
Ala
Arg Glu Glu 100 Glu Asp Tyr
Thr
Val Thr 115 Val Ser Ser
<210> 195 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 195
ggattcacct tcattaacta tggc 24
<210> 196 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
Gly
Gly
Gly 10 Val Val Gin Pro Giy 15 Arg
Ala
Ser 25 Gly Phe Thr Phe He 30 As ri Tyr
Gly 40
Pro Gly Lys Giy Leu 45 Glu Trp Val
Ser
Asn Glu Trp Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Arg
Asp Asn Ser 75 Lys Asn Thr Val Tyr 80
Ala
Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Gly
Met 105 Asp Val Trp Gly Gin 110 Gly Thr
<220>
<223> Sintetico <400> 196
Gly Phe Thr ?he lie Asn Tyr Glv 1 5
<210> 197 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 197
atatggtatg atggaagtaa tgaa 24
<210> 198 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 198
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Trp Tyi Asp Gly 3er Asn Glu 1 5
<210> 199 <211> 33 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 199
gcgagagaag aagaggacta cggtatggac gtc 33
<210> 200 <211> 11 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 200
Ala Ary Glu Glu Glu Asp Tyr Gly Mel Asp Val 15 10
<210> 201 <211> 339 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 201
gacatccaga atcaactgca tygtaccagc gaatccgggg atcagcagcc cctccgacgt
<210> 202 <211> 113 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 202

tgacccagtc tccagactcc cfcggctgtgt ctctqggcqa gaggqccgcc 60

agtccagcca gagtgtctta t.aoatctcca acaataacaa ctacttagct 120

agaaaccagg acagccgcct aagctcctca tttactqqgc atccacccgg 180

tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240

tgcaggctga agatgtggct atttattact gtcaacaata Ltatagttct 300

tcggccaagg gaccaaagtg gatatcaaa 339
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Met. Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1
c a 10 15
Glu
Ala Ala Tie Asn Cys Lys Ser Ser Gin Ser V<5 1 Leu Tvr i yr Tie
20 25 30
Ser
Asn Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro CjI y Gin
35 40 45
Pro
Pro
Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65
70 75 80
He
Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala lie Tyr Tyr Cys Giri Gin
ft 5 90 95
Tyr
Tyr
Ser ser Pro Pro Thr Phe Gl y Gin Gly Thr Lys Val Asp He
ICQ 105 110
Lys
<210> 203 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 203
cagagtgttt tatacatctc caacaataac aactac 36
<210> 204 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 204
Gin Ser Val Leu Tyr lie Ser Asr. Asn Asn Asn Tyr 15 10
<210> 205 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 205 tgggcatcc 9
<210> 206 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 206
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen12
<210> 207 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 207
caacaatatt atagttctcc tccgacg 27
<210> 208 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 208
Gin Gin Tyr Tyr Ser 3er Pro Pro Thr 1 5
<210> 209 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 209
caggtgcagc
tqqtqqagtc tgqqggaggc ttgqttaagc ctqqagggtc cctqaqactc 60
tcctgtgcag
cctctggatt caccttcagt gacttcaaca tqggctggat ccgccaggct 120
ccci gggaagg
ggctggagtg ggtttcaeac attagtggta gtggtaatgt catttactac 180
geagactctg
tgaagggccg attcgccatc tccaggqaca otcactqtat 240
etgcaagtga
acagcctgag agce.gaggac aOQgocgtgt attactgtgc gagagatatc 300
ggtgactccg
atgcgtttga tatctggggc caagggacaa tggtcaccgt ctcttca 357
<210> 210 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 210
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin 1
Val Gin Leu Val 5 Glu Ser Gly
Ser
Leu Ax Q Leu 20 Ser Cy S Ala Ala
Asn
Met Gly 35 Tip I le Arg Gin Ala 40
Sex
His 50 lie Ser Gly Ser Gly 55 Asr
r.ys 65
Gly Arg Phe Ala Tie 70 Ser Arg
Leu
Gin Val Asr. Ser 85 Leu Arg Ala
Ala
Arg Asp Tie 100 Gly Asp Ser Asp
Thr
Met Val 115 Thr Val Ser Ser
Gly
Gly 10 Leu Val Lys Pro Gly 15
Gly
Ser 25
Gly Phe Thr Phe Ser 30 Asp Phe
Pro
Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp U, 1 Val
Val
He Tyr Tyr 60 Ala Asp Ser
Val
Asp
Asn Gly 75 Lys Asn Ser Leu Tyr 80
Glu
Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Ala
Phe Asp Tie Trp Gly Gin Gly
105 110
<210> 211 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 211
ggattcacct tcagtgactt caac 24
<210> 212 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 212
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Asr: 1 5
<210> 213 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 213
attagtggta gtggtaatgt catt 24
<210> 214 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 214
5
10
15
20
25
30
35
40
45
xle Ser Gly 3ex Gly Asn Val lie
1 5
<210> 215 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 215
gcgagagata tcggtgactc cgatgcgttt gatatc 36
<210> 216 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 216
Ala Arq Asp lie Gly Asp Ser Asp Ala Phe Asp lie

1 5 10
<210> 217 <211>324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 217
gacatccagt atcacttgct qggaaagccc aggttcagcg gaagatgttg gggaccaagg
<210> 218 <211> 108 <212> PRT <213> Secuencia artificial

tgacocagtc tccat.ccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagf.cacc 60

qqqccagtca qgacattagc aqttatttag cctgqtatca gcaaaaacca 120

ctaagctcct qatctatggt qcatccactt tqqaaaqtyg gqtcccatca 180

gcagtggatc t.gggacagaa t.tcactctca caatcagcag cctgcagcct 240

caacttatta ctgtcaacag cttaatactt acccgctcac tttcggcgga 300

tggagatcaa acga 324
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Girt Leu Thr Gin Ser Pro Set- Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
X
5 10 15
Asp
Arg Val Thr He Thr Cys Trp Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Cl n Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Tie
35* 40 45
Tyr
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Sei
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 *7 c; 80
Glu
Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asn Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr
Phe Gly Gly' Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
1 GO
LOS
<210> 219 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 219
caggacatta gcagttat 18
<210> 220 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 220
Gin Asp Tie Sex Ser Tyr 1 5
<210> 221 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 221 ggtgcatcc 9
<210> 222 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 222
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gly Ala 3er 1
<210> 223 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 223
caacagctta atacttaccc gctcact 27
<210> 224 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 224
Gin Gin Leu Asn Thr Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 225 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 225
gaqgtgcaqc
tcctgtgcag
ccagggaagg
acggactcta
ctgcaaatga
qatgactgga
tqqtqgagtc tqqqqqaggc ttgqtacatc ctqqcaqgtc cetctggatt tacctttgat. gattatgcca tgcactgggt. gcctqqagtq ggtctcaggt actagttqqa atagtgttat tgaggggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa acagtctgaa acctgaggac acqgcctttt attactgtgc actaccttga ctactqqqqc saqggaaccc tqgtcaccgt
cctqagactc
ccggeaatct
caaacactct
ctccctgtat
aaaqqatgaq
ctcctca
60
120
160
240
300
357
<210> 226 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 226
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Arg
1
5 10 15
Sex-
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser G1 y Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala
Met His Trp Val Arg Gin Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly lie Ser Trp Asn Ser Val He Lya His Ser Thr Asp Ssr V ai
50 55 60
Arg
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
f c.
70 75 80
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Pro Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala
Lys Asp Glu Asp Asp Trp Asn Tvr Leu Asp Tyr Trp Gly Gin G ly
100 105 110
Thr
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 227 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 227
ggatttacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 228 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 228
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 229 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 229
attagttgga atagtgttat caaa 24
<210> 230 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 230
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 231 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 231
gcaaaggatg aggatgactg gaactacctt gactac 36
<210> 232 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 232

Ala Lys Asp Glut Asp Asp Trp Asn Tyr Leu Asp Tyr 15 10
<210> 233 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 233
gacatccaga atcacttgtc gggaaagccc aqat t caqcg gaagattttg qggaccaaag
<210> 234 <211> 108 <212> PRT <213> Secuencia artificial

tgacccagtc tccatettcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

gqgcqaqtca ggatattaac agctqqttag cctgqtatca gcagaaacca 120

ctaaacfccct gatctatact tcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

gcagtggqtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaq cctgcagcct 240

caacttacta ttgt.caacag tct-.gacagtt tcccattcac tttcggccct 300

tggatatcaa acqa 324
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1
5 10 15
Asp
Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp- He Asn Ser Trp
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin G1 n Lys Pro Gly Ly s Ala Pro Lys Leu Leu lie
35* 40 45
Tyr
Thr Ser Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asp Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg
100
105
<210> 235 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 235
caggatatta acagctgg 18
<210> 236 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 236
Gin Asp lie Asn 3er Trp 1 5
<210> 237 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 237 acttcatcc 9
<210> 238 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 238
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen13
<210> 239 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 239
caacagtctg acagtttccc attcact 27
<210> 240 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 240
Gin Gin Ser Asp Ser Phe Pro Phe Thr 1 5
<210> 241 <211> 366 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 241
caggtgcagc
tcetgtgcag
ccaggcaagg
tgqtqgagtc tgggqgaggc gtggtccagc cgtetggatt caccttrtagt aactatggca gqctqqagtq ggtggcacgt atatgqtatg
ctgggaggtc
tgcactgggt
atggaagtaa
gcagactecg tgaagggccq attcaccatc t.ccagagaca gttccaagaa
ctgcaaatqa acaqcciqag agccgagqac acggctgtgt gagcagaacc tggactat.ta ccctttagao gtctggggcc tcctca
attactgtgc
aagggaccac
cctgagactc
ccgccaggct
taagtactat
cacgctgtat
gagaqagggg
ggtcaccgtc
60
120
180
240
300
360
366
<210> 242 <211> 122 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 242
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg
1
5 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro G1 y Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala
Arg lie Tip Tyr Asp Gly Sgt Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys
Gly Arg Phe Thr Tie Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65
70 T C • J 80
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala V .31 Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala
Arg Glu Gly Glu Gin Asn Leu Asp Tyr Tyr Pro Leu Asp Val Trp
ICO 105 110
Gl y
Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 243 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 243
ggattcacct ttagtaacta tggc 24
<210> 244 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 244
Gly Phe Tnr Phe Ser Asn Tyr Gly 1 5
<210> 245 <211> 24
<212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 245
atatggtatg atggaagtaa taag 24
<210> 246 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 246
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 247 <211> 45 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 247
gcgagagagg gggagcagaa cctggactat taccctttag acgtc 45
<210> 248 <211> 15 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 248
Ala Arg Glu Gly Giu Gin Asn Leu Asp Tyr Tyr Fro Leu Asp Val 15 10 15
<210> 249 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 249
gacatcgtqa
tcjacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttgqaga cagagtcacc 60
atcacttgcc
gggcaagtca ggacattaga aatgatttag gctggtatca acagaaacca 120
qqqaaagccc
cfcaagetcct gatctatgct gcatceagtt tacaaaetgg ggtcccatca 180
aggttcagcg
gcagtgtatc tggcacagat fctcactctca ccatcagcag cntgcagcct 240
gaagattttg
caacttatta ctgtctaoaa gattacact t accctctcae t ttcggcgga 300
gggaccaagg
tggagatcaa a 321
<210> 250 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Set- Ala Ser Val Gly
1
5 10 15
Asp
.Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp He Arg Asn
Asp
20 25 30
Leu
Gly Tip Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie
35 40 45
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Thr Gly Val Pro Ser Arq Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Val Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 SO
Glu
Asp Phe Ala Titl Tyr Tyr Cys Leu Gin Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu
es 90 95
Thr
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys
too 105
<210> 251 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 251
caggacatta gaaatgat 18
<210> 252 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 252
Gin Asp lie Arg Asn Asp 1 5
<210> 253 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 253 gctgcatcc 9
<210> 254 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
Ala Ala Ser
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 255 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 255
ctacaagatt acacttaccc tctcact 27
<210> 256 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 256
Leu Gin Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Tiir 1 5
<210> 257 <211> 354 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 257
caggtgcagc t.cctgcaagg cctggactag
gcacagaagt atggaactga gaggatgctg
<210> 258 <211> 118 <212> PRT <213> Secuencia artificial
tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ct.ggggccte agt.gaaggtre 60 cttctggtta caccttcacc agatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 ggcttgagtg gatgggctgg atcagcgctt acqatggata cacaaacttt 180
tccagggcag attcaccatg accacagaca catccacqaa cacagcctac 240 ggggcctgag av.ctgacgac acggecgtgt atfcactgtgc gagagaggag 300 cttttgatat ctggggccaa gggacaatgg tcaccgtctc ttca 354
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin
Val Gin Leu V dl Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1
5 10 15
Ser
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Gly
lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro G1 y Leu Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly
Trp lie Ser Ala Tyr Asp Gly Tyr Thr Asn Phe Ala Gin Lys Phe
50 55 60
Gin
Gly Arg Phe Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65
70 7 ^ 90
•■let
Glu Leu Arg Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
95 90 95
Ala
Arg Glu Gin Glu Asp Ala Ala Phe Asp Tie Trp Gly Gin Gly Thr
100 105 110
Met
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 259 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 259
ggttacacct ttaccagata tggt 24
<210> 260 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 260
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Gly 1 5
<210> 261 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 261
atcagcgctt acgatggata caca 24
<210> 262 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 262
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 263 <211> 33 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 263
gcgagagagg aggaggatgc tgcttttgat atc 33
<210> 264 <211> 11 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 264
Ala Arq Glu Glu Glu Asp Ala Ala Phe Asp lie
15 10
<210> 265 <211> 342 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 265
gacatcytga atcaactgca tggtaccagc gaatccgggg
atcagcaqcc
cctcaoactt
<210> 266 <211> 114 <212> PRT <213> Secuencia artificial
tqacccagtc
tccagactcc ctagatgtgc ctctgggcya gagggccacc eo
agtccagcca
gagtatttta ttcggctcca acaataaaaa ctacttagct 120
agaaatcagg
acagcctcca aagotgctca tttactgggc atctacccgg ISO
tccctgaccg
attcagtqgc aqcqugtetg ggacaqattt cactctcacc 240
tgcagqctga
ayatgtqgca gtttattact gtcagcaata ttatagtact '300
tcggccaggg
gaccaagctg gagateaaac ga 342
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Asp Val Pro Leu Gly
1
5 10 15
Glu
Arg Ala Thr Tie Asn Pye 'I *“* Lys Ser Ser Gin Ser Tie Leu Phe Gly
20 25 30
Ser
Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin
35 40 45
Pro
Pro
Lys Leu Leu Tie Tyr Tip Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65
70 T S 80
lie
Ser Ser LtliU Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin
85 90 95
Tyr
Tyr
Ser Thr Pro His Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie
100 105 110
Lys
Arg
<210> 267 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 267
cagagtattt tattcggctc caacaataaa aactac 36
<210> 268 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 268
Gin Ser lie Leu Phe Gly Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 269 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 269 tgggcatct 9
<210> 270 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 270
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen14
<210> 271 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 271
cagcaatatt atagtactcc tcacact 27
<210> 272 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 272
Glr; Gin Tyr Tyr Ser Thr Pro His Thr 1 5
<210> 273 <211> 372 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 273
caggtgcagc
rgcaggagtc gggcceagga crgatt.aacc ctfcacagac cctgtccgtc GO
acctqcactg
tctctqytyg ctccatcagc aqtqqtqqtt attattggac ctggatacgc 120
cagcacccag
gaaagggcct ggagtggatt. gggtacatct. cttacagtgg gaacaccaac 1 BO
t.ataatccgt
ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag aracggetaa gaaccagttc 240
tccctqaagc
tqagctctqt qactgccgcg qacacggccq tctacttctg tgcgaqagac 300
aytgacqtqq
acacaqctat gyttqatqqt. attgatatct qqgyccaaqq qacaatqgtc 360
accgtctctt
ca 372
<210> 274 <211> 124 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Girt
Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Tie Asn Pro Ser Gin
1
5 10 15
Thr
Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Tie Ser Ser Gly
20 25 30
Gly
Tyr Tyr Trp Thr Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp
lie Gly Tyr He Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu
Lys Ser Arc? Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ala Lys Asn Gin Phe
65
70 7 C. * 80
Ser
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe
85 90 95
Cys
Ala A.rg Asp Ser Asp Val Asp Thr Ala Val Asp Gly lie Asp
100 105 110
lie
Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 275 <211> 30 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 275
ggtggctcca tcagcagtgg tggttattat 30
<210> 276 <211> 10 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 276
Gly Giy Ser lie Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr 15 10
<210> 277 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 277
atctcttaca gtgggaacac c 21
<210> 278 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 278
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 279 <211> 48 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 279
gcgagagaca gtgacgtgga cacagctatg gttgatggta ttgatatc 48
<210> 280 <211> 16 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 280
Ala Arg Asp Ser Asp Val Asp Thr Ala Met Val Asp Gly 15 10
imagen15
Asp Tie 15
<210> 281 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 281
gacatccaga
atcacttgtc
gggagagccc
aggttcagcg
gaagattttg
tgaeccagtc
gggcgagtca
ctaaactcct
gcagtggatc
caacttactt
tccatcttcc grgtetgcat ggatattaac agctggttag gatctatact. gcatccagtt.
ctgtaggaga cagagtcacc 60 cctggtatca gcagaaaccg 120 tacaaagtgg ggtcccatca 180
tgggacagat ttcactctca ccatcageag cctgcagcct 240 ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcqgccct 300
imagen16
<210> 282 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp 1 Asp
lie Gin Met Thr Gin Ser
Arg
Val Thr lie Thr Cys
Leu
Ala Trp 20 Tyr Gin Gin Lys
Tyr
Thr 35' Ala Ser Ser Leu Gin
Ser
50 Gly Ser Gly Thr Asp 55
65 Glu
Asp Phe Ala Thr 70 Tyr Phe
Thr
Phe Gly Pro 85 Gly Thr Lys

10 15

Arg Ala Ser Girt Asp lie Ser Ser Trr 25 30

Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu lie 40 45
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gl\ 60

Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Prc 75 80

Cyr> Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 90 95
100
<210> 283 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 283
caggatatta gcagctgg 18
<210> 284 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 284
Gin Asp lie Ser Ser Trp 1 5
<210> 285 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 285 actgcatcc 9
<210> 286 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 286
Thr Ala Ser
1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 287 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 287
caacaggcta acagtttccc attcact 27
<210> 288 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 288
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 289 <211> 369 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 289
gaggtgcagc
tcctgtgtag
ccagqaaaqy
gcagactccg
ctacaaatgc
accagctct.t
gtctcctca
tgttggagtc
cctctggatt
ggctqqagtq
tgaggggccg
acagtctyag
cotacttcta
tgggggaggc ttggtacagc caccttcagc agttttgcca gytctcagtc attagtqgta gttcaccatc tccagagaca agccgaggat acggccttat ctacggtatg gacgtctggg
cgggggggtc
tgagttgggt
gtggtggcag
attccctgaa
attactgtgt
gccaagggac
cctgagactc
cegccaggct.
cacaaatcac
cacggtgtat
gaaagcggag
carrggtcacc
60
120
180
240
300
360
369
<210> 290 <211> 123 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 290
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Va r Gin r pm licU Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
i
5 10 15
Ser
Leu Ary litiU Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala
Met Ser Trp val Ary Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser
Val lie Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asn His Ala Asp Ser V«i
50 C C J j 60
Ary
Gly Ary Phe Thr He Ser Ary Asp Asn Ser Leu Asn Thr Val Tyr
65
70 75 80
Leu
Glri Met His Ser Leu Ary Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr r*vs
85 90 95
Val
Lys Ala Glu Thr Ser Ser Ser Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Anp
Val
100 105 110
Trp
Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 291 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 291
ggattcacct tcagcagttt tgcc
24
<210> 292 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 292
<210> 293 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala 1 5
<400> 293
attagtggta gtggtggcag caca
24
<210> 294 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 295 <211> 48 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 295
gtgaaagcgg agaccagctc ttcctacttc tactacggta tggacgtc 48
<210> 296 <211> 16 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 296
Ser Ser Ser Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 10 15
<210> 297 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 297
Val Lys Ala Glu Thr 1 5
gacatccagt
atcacttgct
gggaaagtcc:
cggt-.t.cagcg
tgacccagtc
gggccagtca
ctaacctcct
gcagt.ggatc
tccatccttc ctgtctgcat ggacattagc agttatttag gatctatgqt gcatcctctt tgggacagaa ttcactctca
qaaqattttg caacttatta ctgtcaacag ttaaalaatt
accaagctgg agatcaaacg a
ctgtaqgaqa cagagtcacc 60 cctggtatca gcaaaaacca 120 tgcaacctqg ggtcccatca 180 caatcagcag cctgcagcct 240 accccacttt cggcqqaqqq 300
321
<210> 298 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin 1 ifA Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
5 10 15
Asp
Arg Va! Thr Tie Thr Cys Trp Ala Ser Gin Asp Tie Ser Ser Tyr
2C 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Asn Levi Leu lie
35 40 45
Tyr
Gly Ala Ser Ser Leu Gin Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Se r Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Tie Ser Ser Leu Glri Pro
65
70 7 5 80
o i U
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cya Gin Gin Le\? Asn Asn Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg
100 105
<210> 299 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 299
caggacatta gcagttat 18
<210> 300 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 300
<210> 301 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 301 ggtgcatcc 9
<210> 302 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
;ln Asp lie Ser Ser Tyr
1 5
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen17
<210> 303 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 303
caacagttaa ataattaccc cact 24
<210> 304 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 304
Gin Gin Leu Asr. Asn Tyr Pro Thr 1 5
<210> 305 <211> 363 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 305
gaagtgcagc
tcctgtgcag
ccagggaaqg
gcggactctg
ctgcaaatga
ctggatctag
tea
tggtggagtc tgggggaggt gtggtaoggc ctggggggtc cctctggatt cacctttgat gattatgeca tgcactqggt gcctggagtg ggtegeagge attagttgga atagtggtag tgaagggccg attcaccatt tccagagaca acgccaaaaa acagtctgcg agetagggae aeggeettgt attactgtgc actactacgg tttggacgtc tggggccaag ggaccacggt
cctgagactc
60
ccggcaagct
120
tatagactat
180
ctccctgtat
240
aaa agata 11
300
caccgtctcc
360
363
<210> 306 <211> 121 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arq Pro Gly
1
5 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp
2G 25 30
Ala
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ala
Gly He Ser Trp Asn Ser Gly Ser Tie Asp Tyr Ala Asp Ser
50* 55 60
Lys
ciy Arq Phe Thr Tie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu
65
70 7 ^ *
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
85 90 95
Ala
Lys Asp Tie Leu Asp Leu Asp Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gin
Giy Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
Gly Tyr Va 1 Val
Cys
Gly
<210> 307 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 307
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 308 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 308
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5
<210> 309 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 309
attagttgga atagtggtag tata 24
<210> 310 <211>8
<212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 310
O »<:
5
10
15
20
25
30
35
40
45
lie 3er Trp Asn 3er Gly Sfer Tie 1 5
<210> 311 <211> 42 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 311
gcaaaagata ttctggatct agactactac ggtttggacg tc 42
<210> 312 <211> 14 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 312
Ala Lys Asp lie Leu Asp Leu Asp Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 15 10
<210> 313 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 313
gacatccaga
ateacttgcc
gggaaagttc
cggttcagtg
gaagatfcttg
tgaccsagtc
gggcgagtca
ctaacctcct
gcagtggatc
ctagttatta
tccat:.cr.tcc ctgtctgcat etgtaggaga ggacattaqc agttatttag cctggtatca gatctatgat gcatcctctt tgcaatcagg tgggacagat ttcactctca ccctcagcag ctgtcaaaat tataacagtg ccccgtacac
cagagtcacc 60 qcagaaacca 120 ggtcccatct 180 cctgcagcct 240 ttttggccag 300
imagen18
<210> 314 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 314
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
5 10 c
Asp
Arg Val Thr Tie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu
Ax a Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Asn Leu Leu lie
35 40 45
Tyr
Asp Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Va 1 Pro Ser Arq Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly 3er Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 *7 r / J 80
Glu
Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gin Asn Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys
100
105
<210> 315 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 315
caggacatta gcagttat 18
<210> 316 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 316
Gin Asp lie Ser Ser Tyr
1 5
<210> 317 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 317 gatgcatcc 9
<210> 318 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 319 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 319
caaaattata acagtgcccc gtacact 27
<210> 320 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 320
imagen19
<210> 321 <211> 366 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 321
qaagtgcaac tcctgtgcag ccagggaagg gcggactctg cttcaaatga gactacggtg gettea
tggtggagtc tgggggagge ttggtacagc cctctggatt. cacctttgat gattatgeca gcctggagtg ggtctcaagt attagttgga tgaagggccg attcaccafct tccagagaca acagtctgaa acctgaggac aeggeettgt actaccttga tgcttttgat atctggggcc
ctggcaggtc tgcactgggt ataqtcjgtag acgccaagaa at tactgtac aagggaeaat
cctgagactc ccggcaagct cataggetat ttccctgtat aaaagatacc ggtcgccgtc
60
120
180
240
300
360
366
<210> 322 <211> 122 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 322
5
10
15
20
25
30
35
40
45
GIu Val Gin Leu Val Glu 1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys 2 0
Ala Met His Trp Val Arg 35
Ser Ser lie Ser Trp Asn
50
Lys Gly Arg Phe Thr lie 65 70
Leu Glri Met Asn Ser Leu
05
Thr Lys Asp Thr Asp Tyr
100
Gly Gin Gly Thr Met Val 115
<210> 323 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 323
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 324 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 324
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 325 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 325
attagttgga atagtggtag cata 24
<210> 326 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 326
Se-r
Gly Gly C"i Leu Val Gin Pro Gly Arg
10 15
Ala
Ala
Ser Gly Phe Thr Pne Asp Asp Tyr
25 30
Gin
Ala Pro Gly Lys G ]. y Leu Glu Trp Val
40 45
Ser
Gly Ser lie Gly Tyr Ala Asp Ser Val
55
60
Ser
Arq Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
75 80
Lys
Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr C y s
90 95
Gly
Asp Tyr Leu Asp Ala Phe Asp lie Trp
105 110
Ala
Val Ala Ser
120
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Ser Trp Asn Ser Gly Ser lie 1 5
<210> 327 <211> 45 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 327
acaaaagata ccgactacgg tgactacctt gatgcttttg atatc 45
<210> 328 <211> 15 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 328
Thx Lys Asp Thr Asp Tyr Gly Asp Tyr Leu Asp Ala Phe Asp He 1 5 10 15
<210> 329 <211> 339 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 329
qatattgtga
atcaactgra
tgutaccaqc
gaat.cogggg
atcagcagcc
cctccgacgt
tgacccagtc tccagactcc ctgqctqtgt agtccagcca gagtgtttta tacaactccg ctgaaacctgg acagcctcct aagctgctca tccct.garcg artc.agtggc agcgggtctg cgcaggctga ggatgtggca gtttattact tcggccaaqg gaccaaggtg gaaatcaaa
ctctgggcga
acaataagaa
tttactgggc
ggacagattt
gtcaccaata
gagqgccacc CO gtacttagct 120 atctacccgg 180 cactctcacc 240 ttatactact 300 339
<210> 330 <211> 113 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 330
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1
5 10 15
Glu
Arq Ala Thr lie As n Cys Lys Ser Ser Gin Ser Val Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser
Asp Asn Lys Lys Tyr Leu Ala Trp 1 y r Gin Gin Lys Pro Gly Gin
35 40 45
Pro
Pro
Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 80
Pro
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65
70 "5 30
lie
Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp '/ rX i Ala Val Tyr Tyr Cys His Gin
85 90 95
Tyr
Tyr
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly G1 n Gly Thr Lys Val Glu lie
100 105 110
Lvs
<210> 331 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 331
cagagtgttt tatacaactc cgacaataag aagtac 36
<210> 332 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 332
Gin Ser Val Leu Tyr Ar.n Ser Asp A;;n Lys Lys Tyr 15 10
<210> 333 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 333 tgggcatct 9
<210> 334 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 334
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 335 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 335
caccaatatt atactactcc tccgacg 27
<210> 336 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 336
His Gin Tyr Tyr Thr Thr Pro Fro Thr 1 5
<210> 337 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 337
qaggtycagc
tcctgtycaq
ocagggaagg
gcagactctg
ctgr.aaat.ga
ggggat.tgqg
tgqtggaytc cctctggatt ggctggagtg tyaagggccg aeagtctgag actacttcqa
tggqggaygt
cacctttgat
tgtctctggt
attcaccatc
agccg3ggac
tctctggggc
gtggtacggc
aattatggca
attaattgga
tccagagaca
acggcc.tcgt
cgtggcaccc
ctgqqggytc tqagctgggt atggtggtag acgccaaqaa attactgtgc tggtcactgt
cctqaqactc CO ccgccaagct 120 cacagattat 100 ctccctgtat 240 gagagatggt. 300 ctcctca 357
<210> 338 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 338
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gly
Tyr
Va 1
Val
Tyr
80
Cys
Gly
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 339
ggattcacct ttgatgatta tggc 24
<210> 340 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 340
Gly Pile Thr Phe Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 341 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 341
attaattgga atggtggtag caca 24
<210> 342 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 342
Glu 1
Val GJ n Leu Val 5 G1 u Ser Glv G1 y Gly 10 Val Va l Arg Pro Gly 15
Ser
Leu Arg Leu 20 Ser cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp
Gly
Met Ser 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Cys
Ser
Gly 50 Tie Asn Trp Asn Gly 55 Gly Ser Thr Asp Tyr 60 Ala Asp
Ser
Lys 65
Gly Arg Phe Thr He 70 Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu
Leu
Gin Met Ase Ser 85 Leu Arg A1 a Glu Asp 90 Thr Ala Ser Tyr Tyr 95
Ala Thr
Arg Leu Asp Val 115 Gly 100 Thr Gly Val Asp Ser Trp Ser Asp Tyr 105 Phe Asp Leu Trp Gly 110 Arg
<210> 339 <211> 24 <212> ADN
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Tie Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr 1 5
<210> 343 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 343
gcgagagatg gtggggattg ggactacttc gatctc 36
<210> 344 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 344
Ala Arg Asp 1
imagen20
Phe A.sp Leu 10
<210> 345 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 345
imagen21
ctccagggga aagagccacc £0 cctggtacca gcagaaacct 120 qqgccactgg tatcccagcc 180 ccatcacicag cct.gcagtet 240 ggccgctcac tttcgqcqga 300
321
<210> 346 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 346
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gl u
lie Val Met Thr Gin Ser Pro
1 Glu
Arq Ala Thr 5 Leu Ser Cys Arq
Leu
Ala Trp 20 Tyr Gin Gin Lys Pro
Tyr
Gly 35 Ala Ser Thr Arq Ala 40 Thr
Ser
50 Gly Ser Gly Thr Glu 55 Phe Thr
65 Glu
Asp Phe Ala Val 70 Tyr Phe Cys
Thr
Phe Gly Gly 85 Gly Thr Lys Val
100
Alct
Thr 10 Leu Ser Val Ser Pro 15 Gly
Ala 2b
Ser Glri Ser Val Ser 30 Ser Asn
Gly Gin Ala Pro Arq Leu Leu lie 45
Gly lie Pro Ala Arq Phe Ser Gly
60
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 75 80
Gin Glu 7yr Ann Asp Trp Pro Leu 90 95
Glu Tie Lys 105
<210> 347 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 347
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 348 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 348
Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5
<210> 349 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 349 ggagcatcc 9
<210> 350 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 350
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen22
<210> 351 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 351
caggagtata atgactggcc gctcact 27
<210> 352 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 352
Gin Giu Tyr Asn Asp Trp Pro Leu Thr 1 5
<210> 353 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 353
gaggtgcaac
tcctgtgcag
ccagggaagg
gcagactctg
ctgcaaatga
ggggattggg
tggtggagtc
cctctggatt
ggctggagtg
tgaagggccg
acagtctyaq
actacttcga
tgggggaggt gtggtacqgc cacct.ttgat gattatggca Lgtc.tctggt attagttqga attcaccatc tccagagaca agccgaggac acggccttgt tctctggggc cqtggcaccc
ctggggggtc cctgagactc tgagctgggt ccgccaagct atggtggtaa cacagattat acgccaagaa ctccctgtat atcactgtgc qagagatggt tggtcactgt ctcctca
60
120
180
240
300
357
<210> 354 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
Glu Val Gin 1
Leu Val C J Glu Ser Gly
Ser Leu Arg
L«5U Ser Cys Ala Ala
20
vil y
Met Ser 35 Trp Val Arg Gin Ala 40
Ser
Gly 50 lie Ser Trp Asn Gly 55 Gly
Lvs 65
Gly Arg Phe Thr Tie 70 Ser Arg
Leu
Gin Met Asrt Ser Leu 85 Arg Ala
Ala
Arg Asp Sly 100 Gly Asp Trp Asp
Thr
Leu Val 115 Thr Val Ser Ser
Gly
Gly 10 Val Val Arg Pro Gi y 15
Gly
Ser o r
Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr
Pro
Gly Lys Gly Leu 45 Glu Cys Val
Asn
Thr Asp Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Asp
Asn Ala 75 Lys Asn Ser Leu Tyr 80
Glu
Asp 90 Thr Ala Leu Tyr His 95 Cys
Tyr 105
Phe Asp Leu Trp Gly 110 Arq Gly
<210> 355 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 355
ggattcacct ttgatgatta tggc 24
<210> 356 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 356
Gly Phe Thr ?he Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 357 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 357
attagttgga atggtggtaa caca 24
<210> 358 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<400> 358
le Set Trp Asn Gly GJy Asn Thr 1 5
<210> 359 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 359
gcgagagatg gtggggattg ggactacttc gatctc 36
<210> 360 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 360
Ala Arg Asp Gly Gly Asp Trp Asp Tyr Phe Asp Leu 1 5 10
<210> 361 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 361
gaaatactga
ctctcctgca
ggccaggctc
aggttcagtg
gaagatttta
tgacgcagtc
qqgccagtca
ccaqgctcct
gcagtqqqtc
caatttatta
tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga gagtgttagt agcaacttag cctqgtacca catatatgga gcatccacca gggccactgg tgggacagag ttcactctta ccatcaqcao ctgt.caggaq tataatgact ggccgctcac
aagagccacc
gcagaaacct
tatcccagcc
cctgcaqtct
tttcggcgga
imagen23
60
120
180
240
300
321
<210> 362 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 362
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
lie Leu Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1
c J 10 15
Glu
ftrg Ala Thr Leu Ser Oys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Asn
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He
35 40 45
Tyr
Gi.V Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly
5o" 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin
Ser
65
70 75 80
vji. u
Asp Phe nia He Tyr Tyr Cys Gin Glu Tyr Asn Asp Txp Pro Leu
85 90 95
Thr
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vdl Glu lie Lys
ICO
105
<210> 363 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 363
cagagtgtta gtagcaac 18
<210> 364 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 364
Gin Ser Vai Ser Ser Asn 1 5
<210> 365 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 365 ggagcatcc 9
<210> 366 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 366
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gly Aia Ser 1
<210> 367 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 367
caggagtata atgactggcc gctcact 27
<210> 368 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 368
Gin Giu Tyr Asn Asp Trp Pro Leu Thr 1 5
<210> 369 <211> 363 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 369
gaagtgcaac
tcctgtgcag
ccagggaagq
geggactct.g
ctqcaaatgg
atggaagttg
tea
tggtggagtc
cctct.ggatt
gcctggagtg
tgaagggccg
acageotgag
acctctacgg
tggggoaggc ttggtacagc ctggcaggtc cacctttgat gattatgcca tgtactgggt ggtcteaggt attagttgga atagtggcag attcaccate tctagagaca acgccaagaa agetgaggae aeggeettgt attactgtgc tatggacgtc tgggqccaaa ggaceacggt
cetgagactc ccggcaagct cataggetat etccctgtat aagagatatg caccgtctcc
60
120
180
240
300
360
363
<210> 370 <211> 121 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
GlU
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly G1 y Leu Val Gin Pro Gly Arq
.1
5 10 15
Ser
Leu Arq Leu Ser Cys Ala Ala Ser G1 y Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala
Met Tyr Trp Val Arq Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gl U Trp Val
35 40 45
Ser
Gly lie Sei Trp Asn Ser Gly Ser lie Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 00
Lys
Gly Arq Phe Thr tie Ser Arq Asp Asm Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65
70 7 80
Leu
Gin Met Asp Ser Leu Arq Ala Glu Asp Thr Ala Le u Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala
Arq Asp Met Met Glu Val Asp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gin
Gly Thi- Thr Val Thr Val Ser Ser
llS 120
<210> 371 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 371
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 372 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 372
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5
<210> 373 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 373
attagttgga atagtggcag cata 24
<210> 374 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 374
5
10
15
20
25
30
35
40
45
lie Ser Trp Asri 3er Gly Ser Tie 1 5
<210> 375 <211> 42 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 375
gcaagagata tgatggaagt tgacctctac ggtatggacg tc 42
<210> 376 <211> 14 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 376
Ala Arg Asp Met Met Glu Val Asp Leu Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 377 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 377
gacatccaga atcacttgtc gggacagccc aqgttcageg gaagattttg
tgacccagtc tccatcttcc gtgtctqcat ctgtagqaqa eagagtcacq gggcgagtca ggatat.tagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca ctaaqttcct qatctatgaa acatccagtt tgcaaaqtgq gqtcccttca gcagtggatc tgggacagat tt.cattctca ccatcagtag ccrtgcagcct caacttacta ttgtcaacaa actgacagtt tcccgcacac ttttgqccaq
imagen24
60 120 180 ? 40 300 321
<210> 378 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Tie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
i
5 10 15
Asp
Arg Va 1 Thr lie Thr cy s Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Trp
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Phe Leu He
35 40 45
Tyr
Glu Thr Ser Ser Lee Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 5 5 60
Ser
Gly Ser G1 y Thr Asp Phe He Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 eo
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Asp Ser P>iC Pro His
8 ^ 90 95
Thr
The niv Gin Giy Thr Lys Leu Glu lie Arg
100 105
<210> 379 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 379
caggatatta gcagttgg 18
<210> 380 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 380
Gin Asp lie 3er Ser Trp 1 5
<210> 381 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 381 gaaacatcc 9
<210> 382 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 382
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen25
<210> 383 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 383
caacaaactg acagtttccc gcacact 27
<210> 384 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 384
Gin Gin Thi Asp Ser Phe Pro His Thr 1 5
<210> 385 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 385
gaggtgcagc
tcctgtgtag
ccagggaagg
gcdqactctq
ctgcaaatga
gqggattggg
tggtggagtc tgggggaggt gtggt.acggc cctctggatt caccttlgat gattatqgca ggctggagtg tgtctctggt- attaattgga
ctggggggtc
tgagctgggt
atggtggtag
cctgagactc
ccgccaagct
cacagattat
tgaaqqgccg altcactatc tccagaqaca acgccaaqaa ctccctgtat
acagtctgag agccgaggac acggccttgt atcactgfcgc actacttcga tctctggggc cgtggcaccc tqgtcactgt
gagagatggt
ctcctca
60
120
180
240
300
357
<210> 386 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu Val 1
Ser Leu Gly Met
Ser Gly
SO
Ly.r. Gly 65
Leu Gin Ala Arq Thr Leu
<210> 387 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 387
ggattcacct ttgatgatta tggc 24
<210> 388 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 388
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly 1 5
<210> 389 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 389
attaattgga atggtggtag caca 24
<210> 390 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 390
Gin
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arq Pro Gly Gly
5 10 15
Arq
Leu Ser Cys Val Ala Ser ■) r-, Gly Phe Thr Phe Asp on Asp Tyr
Ser
/. v; Tip Val Arq Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Cys Val
35
40 45
lie
Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
55 60
Arg
Phe Thr lie Ser Arg Asn A la Lyr. Asn Ser Leu Tyr
70 7 * 30
Met
A Ser Leu Arq Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys
85 90 95
Asp
Gly Gly Asp Trp Asp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 .105 110
Val
Thr Val Ser Ser
115
5
10
15
20
25
30
35
40
45
le Asn Trp Ass Gly Gly Sei Thr
1 5
<210> 391 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 391
gcgagagatg gtggggattg ggactacttc gatctc 36
<210> 392 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 392
Ala Arg Asp Gly Gly Asp Trp Asp Tyr Phe Asp Leu 1 5* 10
<210> 393 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 393
gaaatactga ctctcctgca ggccaggctc aggttcagtg qaagattt tg gggaccaagg
cgacgeagtc
gggccagtca
ccaggctcct
gcagtgggtc
eaaLttatta
tggagatcaa
tccagccacc
gagtgttagc
catatacqga
tgggacagag
elgtcaggag
a
ccgtctgtgt
agcaacttag
gcatccacca
ttcactctca
tataataact
ctccagggga sagagccacc 60 cctggtacca gcagaaacct 120 gqgccactgg tatcccagcc 180 ccatcagcag cct.gcagtct 240 ggccgctcac tttcggcqqa 300
321
<210> 394 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen26
<210> 395 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 395
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 396 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 396
Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5
<210> 397 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 397 ggagcatcc 9
<210> 398 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 398
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen27
<210> 399 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 399
caggagtata atgactggcc gctcact 27
<210> 400 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 400
Gin Glu Tyr Asn Asp Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 401 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 401
yaygtgcaac
tcctgtgtag
ccagggaaqq
gcagactcaq
ctgcagatga
ggtgactacg
tygtggagtc
cctctggatt
ggctqgaqtg
tgaagggccg
acagcctgag
actggttcga
tgggggaqgc ctggtcaagc ctgyggggtc cctyagactc 60 cacc.ttcagt agctataaca tgaact.gggt ccgccaggct 120 ggtctcattt ataagtggta gtagtaatta catacactac 180 attcaccatt tccagagaca acgccaagaa tgcactgtat 240 agccgaggac acggctgtat attactgtgc gagagacgac 300 cccctggggc cagggaaccc. tqgtcaccgt ctcctca 357
<210> 402 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly
1
5
Ser
Leu Arg U Ser Cys Val Aid
2G
Asn
Met Asn Trp Val Arg Gin Ala
35 4 0
Ser
Phe lie Ser Gly Ser Ser Asn
50 55
Lys
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg
65
70
Leu
Gin Met Asn Ser Ci C Leu Arg Ala
Ala
Arg Asp Asp O J Gly Asp Tyr Asp
100
Gly
Gly 10 Leu Val Lys Pro Gly 15
Gly
Ser 25
Gly Phe Thr Phe Ser 30 Ser Tyr
Pro
Gly Lys Gi y Leu 45 Glu Trp Val
Tyr
He His Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Asp
Asn Ala 75 Lys Asn Ala Leu Tyr 80
Glu
Asp 90 Thr Ala Val Tyr rA y r 95 Cys
Trp 105
Phe Asp Pro Trp Gly 110 Gin G1 y
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 403 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 403
ggattcacct tcagtagcta taac 24
<210> 404 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 404
Gly Phe Thr ?he Ser Ser Tyr Asn
1 5
<210> 405 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 405
ataagtggta gtagtaatta cata 24
<210> 406 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 406
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen28
<210> 407 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 407
gcgagagacg acggtgacta cgactggttc gacccc 36
<210> 408 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 408

Ala Arg Asp Asp Gly Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Pro 1*5 10
<210> 409 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 409
gaaattgtgt ctctcctgca cctggccagg gacaggttca cctgaagatt gggaccaago
<210> 410 <211> 107 <212> PRT <213> Secuencia artificial

tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt. ctccagggga aagagccacc 60

gggccagtca gagtgttagt agtagttact tagcctggta ccagcaaaaa 120

ctcccaggct cctcatctat. ggtacatcca gcagggccac tggcatccca 180

gtggcagtgg gcctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggaq 240

ttgcagtgta ttactgtcag cagtatgata actcatacac Ltttggccag 300

tggagatcaa a 321
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen29
<210> 411 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 411
cagagtgtta gtagtagtta c21
<210> 412 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 412
Gin Ser Val Ser 3er Ser Tyr 1 5
<210> 413 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 413 ggtacatcc 9
<210> 414 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 414
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen30
<210> 415 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 415
cagcagtatg ataactcata cact 24
<210> 416 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 416
Gin Gin Tyr Asp Asn Ser Tyr Thr 1 5
<210> 417 <211>357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 417
qaqgtqcaqc
tggtqcaqtc tggggqaqqc ctggtcaaqc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag
cctctggatt caccttcagt aacttt.aaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg
ggctggagtg agtctcattc at taqtagtc ttagtactta tacatactac 180
gcagactcag
tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
etgcaaatga
acagcctgag agccgaggac acguctgtgt attactgtgc gagagacgac 300
ggtgaccacg
actggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 367
<210> 418 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 418
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glu
Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1
5 10 1 C
Ssr
Leu Arq Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Asn
Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu ol U Trp Val
35 40 45
Ser
He Ser Ser Leu Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser w _ 1 Vai
50 55 60
Lys
Gjlv Arg Pile Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65
70 *7 5 80
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala
Arq Asp Asp Gly Asp His Asp Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gin Gly
100 105 110
Thr
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 419 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 419
ggattcacct tcagtaactt taac 24
<210> 420 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 420
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Asn 1 5
<210> 421 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 421
attagtagtc ttagtactta taca 24
<210> 422 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 422
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen31
<210> 423 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 423
gcgagagacg acggtgacca cgactggttc gacccc 36
<210> 424 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 424
Ala Arg Asp Asp Gly Asp His Asp Trp Phe Asp Pro 1 5 10
<210> 425 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 425
gaaattgtgfc ctctcctqca c c t gg c cagg gacagattca cctgaagatt gygaccaaqc
tgacgcagtc tccagacacc gggccagtca qagtgttaqt ctcccaggct cctcatctat gtggcagtgg qtctgggaca ttgcagtgta t.tactg-icaa tggagatcaa a
ctgtcfcttgt ctccagggga aagagccacc agcaactact tagcctqgta ccaacaaaaa agtgcatcca acagggccac tggcatccca gacttcactc tcaccatcag ccga<;tggag cagtatgata gttcatacac ttttggccag
60
120
180
240
300
321
<210> 426 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
GlU
lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1
5 10 15
Gl u
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr
Leu Ala Trp Tyr Gin Glr> Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
lie
Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Tie Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu
65
70 75 80
Pro
Glu Asp Phe Ala Val Tur 1 JI* Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Ser Tyr
85 90 95
Thr
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu Tie Lys
100 105
<210> 427 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 427
cagagtgtta gtagcaacta c
21
<210> 428 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 428
<210> 429 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 429 agtgcatcc 9
<210> 430 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
Gin Ser Val Ser Ser Asn Ty- 1 5
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ser Ala Ser 1
<210> 431 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 431
caacagtatg atagttcata cact 24
<210> 432 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 432
Gin Gin Tvr Asp Ser Ser Tyr Thr 1 5
<210> 433 <211> 363 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 433
gaaatgcagc
tcctgtgcag
ccaggqaaqg
gcggactctg
ctgctaatga
aactggaacg
tea
tggtagagtc tgggggaygc cetetggatt. caactttgat gcctcgagtg ggtctcaggt tgaagggccg attcaccatc acagtctgag acetgacqac cgttatcccc tatggacgtc
ttggtacagc aattatgcca attaqttqga tccagagaca tcggccttgt tggggccaag
ctgacagqtc
tacactgggt
atagtqgtaa
acgccaagaa
attactgtac
ggaccacggt
cctgaqactc
crggcaagct
cataggttat
ctccctgttt
aagaggatac
caccgtctcc
GO
120
180
240
300
360
363
<210> 434 <211> 121 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
SI a
Met Gin Leu Glu Giy Giy Giy Leu Val Gin Pro Asp Arg
1
5 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cy s Ala Ala Ser Gl y Phe Asn Phe rtSp Asn Tyr
20 25 30
Ala
He His Trp Val Arg Gin Ala Pro Giy Lys Giy Leu Glu Trp V al
35 40 45
Qor
Giy lie Cpr Trp Asn Qp >- Giy Asn lie Gl y Tyr A La Asp Ser Val
50 55 60
Lys
Giy Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65
70 75 80
Leu
Leu
Met Asn Ser Leu Arg Pro Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 S5
Thr
Arg Giy Tyr Asn Trp Asa Ala Leu Ser Pro Met Asp Val Trp Giy
100 105 110
Gin
Giy Thr T>h -r Val Thr Val Ser Ser
115 12G
<210> 435 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 435
ggattcaact ttgataatta tgcc 24
<210> 436 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 436
Giy Phe Asn Phe Asp Asn Tyr Ala l 5
<210> 437 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 437
attagttgga atagtggtaa cata 24
<210> 438 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 438
5
10
15
20
25
30
35
40
45
lie Sei Trp Asn Ser Gly Asn II 1 5
<210> 439 <211> 42 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 439
acaagaggat acaactggaa cgcgttatcc cctatggacg tc 42
<210> 440 <211> 14 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 440
Thr Arg Gly Tyr Asn Trp Asn Ala Leu Ser Pro Met Asp Val 15 10
<210> 441 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 441
gacatccaaa gtcacttgc.e ggtaaagtt c cggttcagtg gaagatgttg gggaccaagg
tgacccaytc gggcgagtca ctaaactcct gcagtggatc caagttatta tggaaatcaa
tccatcctcc
gggcattagc
gatctstgct
tgggacagat
ctgtcaaaac
a
ctgtctgcat
aattatttag
gcatccactt
tteactctca
tataacagtg
ctgtaqgyya cagagtcacc GO estggtatca gc.aaaaacet 120 tgcaatcagg ggtcccstct 100 ccatcagcag cctgcagcct 240 cccctatgac gttcggccaa 300
321
<210> 442 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 442
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
Tie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
5 10 15
Asp
Arg Val Thr Val Thr Oys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Tie
35 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Va 1 Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
SSJT
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Val Ala Ser Tyr Tyr Cys Gin Asn Tyr Asn Ser Ala Pro Met
85 SO 05
Tin
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys
100 105
<210> 443 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 443
cagggcatta gcaattat 18
<210> 444 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 444
Gin Gly Tie Ser Asn Tyr 1 5
<210> 445 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 445 gctgcatcc 9
<210> 446 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 446
Ala Ala Ser 1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 447 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 447
caaaactata acagtgcccc tatgacg 27
<210> 448 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 448
Gin Asn Tyr Asn Ser Ala Pro Met Thr
1 5
<210> 449 <211> 366 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 449
caggtgcagc
acctgcgctg
ccagggaagg
ccgtccctca
aagctgaggt
gcagctcgtc
tcctca
Uacaacaqtq ggac.gcagqa ctgttgaaqc tcfcatggtgg gtcctt.oagt t.cttact.act ggctggaatg gattggggaa atcaa.tcatc agagtcgagt caccatctca gtagacacgt ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt cggactggca cttctttgac tactggggcc
cttcgqaqac
ggagctggat
gtggaageac
ccaagaacca
sctgtgcgcg
agqqaaccct
cctgtcoctc
ccgceagccc
caactacaac
gtfcctcccta
agggggggta
ggtcaccgtc
60 120 180 2 40 300 360 366
<210> 450 <211> 122 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 450
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glr=
Val Gin Leu G1 n Gin lip Asp Ala Gly Leu Leu Lys Pro Sei- Glu
1
5 10 15
Thr
Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly niy Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr
Trp Ser Trp Tie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Tie
35 40 45
Gly
Glu Tie Asn His Arg Gly Ssr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser
Arg Val Thr Tie Ser Val A up Thr Ser Lys Asn Gl n Phe Ser Leu
65
70 *7 c. f 80
Lys
Leu Arq Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg
Gly Gly Val Ala Ala Arg Pro Asp Trp His Phe Phe Asp Tv r - > r Trp
100 105 110
Gly
Gin Gly Thr ! i Val Thr Val Ser Ser
115 12C
<210> 451 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 451
ggtgggtcct tcagttctta ctac
24
<210> 452 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 452
<210> 453 <211> 21 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
Gly Gly Ser Phe Ser Ser Tyr Tvr 1 5
<400> 453
atcaatcatc gtggaagcac c
21
<210> 454 <211>7 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 454
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen32
<210> 455 <211> 48 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 455
gcgcgagggg gggtagcagc tcgtccggac tggcacttct ttgactac 48
<210> 456 <211> 16 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 456
Ala Arg Gly Gly Val Ala Ala Arq Pro Asp Trp His Phe Phe Asp Tyr
15 10 15
<210> 457 <211> 321 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 457
gacatccaga
tgacccagtc tccatcctcc ctctctacct ctgtagqaqa cagagtcacc 60
atcacttgcc
gggcaagtca ggtcattcga aatgatttag gctggtttca gcagagacca 120
gggaaagccc
ctaagcgcct qatctatgct qcatccagtt tacaaagtga ggtcccatca 180
aqattcagcg
gcaatggatc tgggacagaa ttcactctca caatcaccag cctgcagcct 240
gaagattttg
caacttatta ctgtcttcag cataatagtt acccgctcac cttcggccaa 300
ggaacacgac
tggagattaa a 321
<210> 458 <211> 107 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 458
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Asp
lie Gin Mel Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
10 15
Asp
Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val He Arg Asn
Asp
2G 25 30
Leu
Gly Trp Phe Gin Gin Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arq Leu He
35 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Glu Val Pro Ser Ary Phe Ser Gly
50 C.C. J J 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu PLe Thr Leu Thr lie Thr Ser Leu Gin Pro
65
70 75 80
Glu
Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr
Pbe Gly Gin Gly Thr Ary Leu Glu Tie Lys
100 105
<210> 459 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 459
caggtcattc gaaatgat 18
<210> 460 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 460
Gin Val Ilf Ary Asa Asp 1 5
<210> 461 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 461 gctgcatcc 9
<210> 462 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 462
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala Ala Ser 1
<210> 463 <211> 27 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 463
cttcagcata atagttaccc gctcacc 27
<210> 464 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 464
Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 465 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 465
gaggtgeagc
tcctgtgcag
ccagggaagg
acagactctg
ctgoaaatga
gqqqatcaug
tggtggagte
tgggggaggt gfcggtacggc ctggggggtc cctgagactc 60
cctctggat t
cacctttgat gat tatggca tgagctgggt ccqccaagtt 120
ggctggagtg
ggtctctggt cttaattgga atggtggaat cacaggttat 180
tgaagggccg
attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
acagt.etgag
agcegaggac acggccttct atcactgtgc gcgagatagt 300
atqcttttga
tatatggggc oaqgggacaa tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 466 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly
1
5 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly
Met Ser Trp Val Arg Gin Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vat
35 40 45
Ser
Gly Leu Asn Trp Asn Gly Gly Tie Thr Gly Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys
Gly Arg Phe Thr Tie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65
70 7 ^ 30
Leu
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe Tyr His Cys
85 90 95
Ala
Arg Asp Ser Gly Asp Gin Asp Ala Phe Asp Tie Trp Gly Gin Gly
100 105 110
Thr
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 467 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico
<400> 467
ggattcacct ttgatgatta tggc 24
<210> 468 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 468
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly 1 5
<210> 469 <211> 24 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico
<400> 469
cttaattgga atggtggaat caca 24
<210> 470 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintetico <400> 470
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Leu Asn Trp Asn Gly Gly He Thr 1 5
<210> 471 <211> 36 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 471
gcgcgagata gtggggatca ggatgctttt gatata 36
<210> 472 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 472
Ala Arg Asp Sei Gly Asp Gin Asp Ala Phe Asp lie 1 5 10
<210> 473 <211> 318 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 473
caaat agtga
tgacqcagtc tccagccacc ctgtctgtat ctccagggga aagagccaec GO
ctctcctqca
gggccagtca qagtattact ccctacttag cctggtacea 120
ggccagactc
ccaggcccct catctatggt qtatccaccc qggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg
gcagtgggtc tgggacagag t.tcactctca ccatcagcag cet.gcagtct 240
gaagatfcttg accaagctgg
cagtttatta agatcaaa ctgtcaqcag tatgacaact ggtatacttt tggccaggqg 300 318
<210> 474 <211> 106 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintetico <400> 474
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gin
Tie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Tnr Leu Ser Val S^r* Pro Gly
1
5 10 1 ^ J.
SI u
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie .71^ r Pro Tyr
20 25 30
Leu
Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Thr Pro Arg Leu Leu He
35 40 45
Tyr
Gly Val Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arq PLe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Glu Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin
Ser
65
70 80
Glu
Asp Pile Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Trp Tyr Thr
85 90 95
“tie
Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys
100 105
<210> 475 <211> 18 <212> ADN
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cagagtatta ctccctac 18
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imagen33
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5
10
15
20
25
30
35
40
45
Gly Val 3er 1
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cagcagtatg acaactggta tact 24
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Gin Gin Tyr Asp Asn Tip Tyr Thr 1 5
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r.aggtgcagg
tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ct.gggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcqg
cctctgqatt caccLLcagt qactatggca tgcactgqgt ccgccaggct 120
ccaggcaagg
ggctggagtg ggtggcaatt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg
tgaaqggccq attcaccgtg tccagagaca attccaagaa cactctgtat 240
ctgcaattqg
acagcctgag acctgaggac gcggctgtct tttactgtigc gagagagggg 300
gcatttaact tcctca
tagactacta cgccatggac gtctggggcc aagggacaac ggtcaccgcc 360 366
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5
10
15
20
25
30
35
40
45
Glri
Val r. In Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Giy
1
5 10 15
Ser
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp
2G 25 30
G1 y
Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ala
He lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Lys
Giy Arg ?he Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65
70 75
Leu
Gln Leu Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Ala Ala Val Phe Tyr
bs 90 95
Ala
Arg Glu Gly Ala Phe Asn Leu Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Val
100 105 110
Gly
Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
Arg
Tyr
Val
T
8
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<210> 483 <211> 24 <212> ADN
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ggattcacct tcagtgacta tggc 24
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imagen35
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atatcatatg atggaagtaa taaa 24
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O k<
5
10
15
20
25
30
35
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45
le Ser Tyr Asp Gly 3er Asm Lys 1 5
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gcgagagagg gggcatttaa cttagactac tacgccatgg acgtc 45
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Ala Arg Glu Gly Ala Pha Asn Leu Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Val 15 10 15
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ctgtaggaga cagagtcacc 60 gttggtatca qcagaaacca 120 tacaaagtgg ggtcccatca 180 ccatcagcag cctgcagect 240 acccgctcac tttcggcgga 300
321
imagen36
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5
10
15
20
25
30
35
40
45
Ala
lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1
c 10 15
Asp
Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn
Asp
20 25 30
Leu
Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu He
35 40 45
Tyr
Ala Ala Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr I le Ser Ser Leu Glri P rC
65
70 75 80
Glu
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Asp Ser Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
?hr
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys
ICO
105
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caggacatta gaaatgat 18
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Gin Asp lie Ary Asn Asp
1 5
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5
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25
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35
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ctacaagatt ccaattaccc gctcact 27
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Gin Asp Ser Asn Tyr Pro Leu Thr
5
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Leu
1

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    REIVINDICACIONES
    1. Un anticuerpo aislado, o fragmento de union a antfgeno del mismo, que se une especfficamente a ErbB3, en el que el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno comprende: (a) una region variable de cadena pesada (HCVR) que tiene la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 322; y (b) una region variable de cadena ligera (LCVR) que tiene la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 330.
  2. 2. El anticuerpo de la reivindicacion 1 que es un anticuerpo humano que comprende una region constante de IgG1 humana.
  3. 3. El anticuerpo de la reivindicacion 1 que es un anticuerpo humano que comprende una region constante de IgG4 humana.
  4. 4. Una molecula de acido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la reivindicacion 1, o el anticuerpo de la reivindicacion 2 o 3.
  5. 5. Un vector de expresion recombinante que comprende la molecula de acido nucleico de la reivindicacion 4.
  6. 6. Una celula hospedadora que comprende el vector de expresion de la reivindicacion 5.
  7. 7. Un metodo de produccion de un anticuerpo anti-ErbB3 o fragmento de union a antfgeno del mismo de acuerdo con la reivindicacion 1, o anticuerpo de la reivindicacion 2 o 3, que comprende cultivar la celula hospedadora de la reivindicacion 6 en condiciones que permiten la produccion del anticuerpo o fragmento, y recuperar el anticuerpo o fragmento del mismo.
  8. 8. Una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la reivindicacion 1, o el anticuerpo de la reivindicacion 2 o 3, y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.
  9. 9. Un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la reivindicacion 1, o anticuerpo de la reivindicacion 2 o 3, o una composicion farmaceutica de la reivindicacion 8, para su uso en un metodo de inhibicion del crecimiento tumoral en un sujeto afectado con un tumor.
  10. 10. El anticuerpo, fragmento de union a antfgeno o composicion farmaceutica para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que el sujeto esta afectado con un tumor seleccionado del grupo que consiste en un tumor renal, un tumor pancreatico, un tumor de mama, un tumor de prostata, un tumor de colon, un tumor gastrico, un tumor de ovario, un tumor pulmonar y un tumor de piel.
  11. 11. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la reivindicacion 1, o el anticuerpo de la reivindicacion 2 o 3, para su uso en un metodo de inhibicion o atenuacion del crecimiento tumoral en un sujeto, en el que el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo se administra en combinacion con un segundo agente terapeutico, en el que el segundo agente terapeutico es un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo que se une especfficamente a EGFR o HER2.
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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH12012501157A1 (en) 2009-12-22 2012-10-29 Roche Glycart Ag Anti-her3 antibodies and uses thereof
PH12014500483A1 (en) 2011-09-30 2014-04-14 Regeneron Pharma Anti-erbb3 antibodies and uses thereof
US9273143B2 (en) 2011-09-30 2016-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising a combination of an anti-ErbB3 antibody and an anti-EGFR antibody
MX350957B (es) 2011-11-23 2017-09-27 Medimmune Llc Moleculas de union especificas para her3 y usos de las mismas.
US9725511B2 (en) 2012-11-08 2017-08-08 Hoffmann-La Roche Inc. Anti-HER3/HER4 antibodies binding to the beta-hairpin of HER3 and the beta-hairpin of HER4
CN105263523A (zh) * 2013-03-15 2016-01-20 米尔纳疗法公司 使用微rna和egfr-tki抑制剂的联合癌症治疗
WO2015048008A2 (en) 2013-09-24 2015-04-02 Medimmune, Llc Binding molecules specific for her3 and uses thereof
WO2015058108A1 (en) * 2013-10-17 2015-04-23 Sanford-Burnham Medical Research Institute Drug sensitivity biomarkers and methods of identifying and using drug sensitivity biomarkers
KR102127408B1 (ko) 2014-01-29 2020-06-29 삼성전자주식회사 항 Her3 scFv 단편 및 이를 포함하는 항 c-Met/항 Her3 이중 특이 항체
SMT202500020T1 (it) 2014-02-28 2025-03-12 Merus Nv Anticorpo che lega erbb-2 ed erbb-3
EP3786186A1 (en) 2014-02-28 2021-03-03 Merus N.V. Antibodies that bind egfr and erbb3
US10745490B2 (en) 2014-04-11 2020-08-18 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-ErbB antibodies and methods of use thereof
CN107106666A (zh) * 2014-07-17 2017-08-29 布莱恩·J·赫尔尼奇 用于基于免疫的治疗的免疫原性mhcii类肽的鉴定
CN110642952B (zh) * 2014-08-14 2021-05-25 上海生物制品研究所有限责任公司 抗her3抗体、其制法及其应用
WO2016038609A1 (en) * 2014-09-08 2016-03-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti-her3 antibodies and uses of same
WO2016038610A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for treating cancer resistant to a tyrosine kinase inhibitor (tki)
CA2992788A1 (en) * 2015-08-14 2017-02-23 Allergan, Inc. Heavy chain only antibodies to pdgf
WO2017069628A2 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Merus N.V. Binding molecules that inhibit cancer growth
KR101746152B1 (ko) * 2015-12-07 2017-06-13 주식회사 이수앱지스 ＥｒｂＢ3에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
CN108602890A (zh) * 2015-12-11 2018-09-28 瑞泽恩制药公司 用于减少或预防对egfr和/或erbb3阻滞剂具有抗性的肿瘤生长的方法
SG10201601719RA (en) 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
SG10201603721TA (en) 2016-05-10 2017-12-28 Agency Science Tech & Res Anti-CTLA-4 Antibodies
JP6729926B2 (ja) * 2016-05-12 2020-07-29 国立大学法人神戸大学 ＥｒｂＢ３活性化に伴うシグナルの伝達抑制物質及びそのスクリーニング方法
WO2018159582A1 (ja) 2017-02-28 2018-09-07 学校法人近畿大学 抗ｈｅｒ３抗体－薬物コンジュゲート投与によるｅｇｆｒ－ｔｋｉ抵抗性の非小細胞肺癌の治療方法
US11780925B2 (en) 2017-03-31 2023-10-10 Merus N.V. ErbB-2 and ErbB3 binding bispecific antibodies for use in the treatment of cells that have an NRG1 fusion gene
US12195551B2 (en) 2017-05-17 2025-01-14 Merus N.V. Combination of an ErbB-2/ErbB-3 bispecific antibody with endocrine therapy for breast cancer
SI3665198T1 (sl) 2017-08-09 2025-06-30 Merus N.V. Protitelesa, ki vežejo egfr in cmet
CN107860925B (zh) * 2017-11-03 2019-07-12 合肥瀚科迈博生物技术有限公司 用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒
WO2019185164A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Hummingbird Bioscience Holdings Pte. Ltd. Her3 antigen-binding molecules
CN112912109A (zh) 2018-09-20 2021-06-04 第一三共株式会社 通过施用抗her3抗体-药物缀合物治疗her3-突变的癌症
WO2020072937A1 (en) * 2018-10-04 2020-04-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antibodies against basement membrane zone adhesion proteins bp180 and bp230
EP4637821A1 (en) * 2022-12-23 2025-10-29 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Her3 radioimmunotherapy for the treatment of solid cancers
CN121219016A (zh) 2023-06-02 2025-12-26 第一三共株式会社 抗-her3抗体-药物缀合物和rasg12c抑制剂的组合

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
ES2191702T3 (es) 1994-03-17 2003-09-16 Merck Patent Gmbh Fv monocatenarios anti-egfr y anticuerpos anti-egfr.
US7060808B1 (en) 1995-06-07 2006-06-13 Imclone Systems Incorporated Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody
AU727082B2 (en) 1996-03-27 2000-11-30 Genentech Inc. ErbB3 antibodies
US5968511A (en) 1996-03-27 1999-10-19 Genentech, Inc. ErbB3 antibodies
ATE438720T1 (de) 1998-02-04 2009-08-15 Genentech Inc Verwendung des heregulins als epithelzellenwachstumsfaktor
US20010023241A1 (en) 1998-02-04 2001-09-20 Sliwkowski Mark X. Use of heregulin as a growth factor
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
EP1228766A1 (en) 2001-01-31 2002-08-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. PYK2 phosphorylation by HER3 induces tumor invasion
WO2002100348A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (egfr)
US7595378B2 (en) 2001-06-13 2009-09-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
CA2450793A1 (en) * 2001-06-20 2002-12-27 Prochon Biotech Ltd. Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
AU2002326531A1 (en) 2001-08-03 2003-02-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Monoclonal antibodies to activated erbb family members and methods of use thereof
EP1283053A1 (en) 2001-08-09 2003-02-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Inhibitors of HER3 activity
US7332580B2 (en) 2002-04-05 2008-02-19 The Regents Of The University Of California Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof
US7332585B2 (en) 2002-04-05 2008-02-19 The Regents Of The California University Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof
HUP0600340A3 (en) 2002-07-15 2011-06-28 Genentech Inc Methods for identifying tumors that are responsive to treatment with anti-erbb2 antibodies
US7291293B2 (en) 2003-02-28 2007-11-06 Northwestern University Vapor deposited electro-optic films self-assembled through hydrogen bonding
NZ621449A (en) * 2003-05-30 2015-07-31 Genentech Inc Treatment with anti-vegf antibodies
US8323987B2 (en) 2004-02-17 2012-12-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Modulation of epidermal growth factor heterodimer activity
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
ATE461220T1 (de) * 2005-11-12 2010-04-15 Lilly Co Eli Anti-egfr-antikörper
AR056857A1 (es) * 2005-12-30 2007-10-24 U3 Pharma Ag Anticuerpos dirigidos hacia her-3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-3) y sus usos
US7498142B2 (en) 2006-01-31 2009-03-03 Yeda Research And Development Co., Ltd. Methods of identifying combinations of antibodies with an improved anti-tumor activity and compositions and methods using the antibodies
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
NZ587107A (en) 2006-06-02 2012-05-25 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
SG178789A1 (en) * 2007-02-16 2012-03-29 Merrimack Pharmaceuticals Inc Antibodies against erbb3 and uses thereof
EP2138511A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. HER3 as a determinant for the prognosis of melanoma
WO2010019952A2 (en) * 2008-08-15 2010-02-18 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods, systems and products for predicting response of tumor cells to a therapeutic agent and treating a patient according to the predicted response
NZ593594A (en) * 2009-01-19 2013-08-30 Abbvie Inc Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
WO2010085845A1 (en) 2009-01-28 2010-08-05 The University Of Queensland Cancer therapy and/or diagnosis
SG10201402742YA (en) * 2009-03-20 2014-08-28 Genentech Inc Bispecific anti-her antibodies
WO2010127181A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Trellis Bioscience, Inc. Improved antibodies immunoreactive with heregulin-coupled her3
KR20120059568A (ko) 2009-08-21 2012-06-08 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. Ｅｒｂｂ３의 엑토도메인에 대한 항체 및 이의 용도
JP2013507378A (ja) * 2009-10-09 2013-03-04 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 抗ｈｅｒ３抗体の製造、特徴づけ及びその用途
EP2496600A1 (en) 2009-11-04 2012-09-12 Fabrus LLC Methods for affinity maturation-based antibody optimization
BR112012012160B1 (pt) 2009-11-13 2022-04-26 Amgen, Inc. Material e métodos para tratar ou prevenir doenças associadas ao her-3
PH12012501157A1 (en) * 2009-12-22 2012-10-29 Roche Glycart Ag Anti-her3 antibodies and uses thereof
EP2542582A4 (en) * 2010-03-02 2013-12-04 Abbvie Inc THERAPEUTIC PROTEINS LINKING TO DLL4
KR101798679B1 (ko) 2010-03-11 2017-11-16 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. ３중 음성 및 기저형 유방암 치료 시의 ｅｒｂｂ３ 저해제의 용도
US8481687B2 (en) * 2010-04-09 2013-07-09 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anti-ErbB3 antibodies
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
SG187908A1 (en) 2010-08-20 2013-03-28 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
PH12014500483A1 (en) * 2011-09-30 2014-04-14 Regeneron Pharma Anti-erbb3 antibodies and uses thereof
US9273143B2 (en) 2011-09-30 2016-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising a combination of an anti-ErbB3 antibody and an anti-EGFR antibody
TWI641619B (zh) 2012-06-25 2018-11-21 美商再生元醫藥公司 抗－ｅｇｆｒ抗體及其用途

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