ES2695302T3

ES2695302T3 - Novedosos inhibidores de DGAT2

Info

Publication number: ES2695302T3
Application number: ES14809734T
Authority: ES
Inventors: Nicholas Paul Camp; Manisha Naik
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2013-11-25
Filing date: 2014-11-19
Publication date: 2019-01-03
Anticipated expiration: 2034-11-19
Also published as: KR20160072252A; CR20160216A; AR098394A1; JP2016539115A; DOP2016000120A; CN105764889A; EP3074381A1; EA201690847A1; US20150148358A1; WO2015077299A1; CL2016001172A1; IL245245A0; PE20161099A1; EP3074381B1; AU2014353109B2; MA39048A1; AP2016009230A0; CN105764889B; NZ719444A; MA39048B1

Abstract

Un compuesto de Fórmula:**Fórmula** en la que R es H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Description

DESCRIPCION

Novedosos inhibidores de DGAT2

La presente invencion esta dirigida a novedosos compuestos utiles para inhibir la diacilglicerol O-aciltransferasa 2 (DGAT2), que pueden proporcionar terapias utiles para el tratamiento de niveles elevados de trigliceridos y enfermedades cardiovasculares que incluyen dislipidemia y aterosclerosis. La presente invencion esta dirigida tambien a un procedimiento de preparacion de los compuestos novedosos.

El nivel promedio de trigliceridos en los seres humanos, especialmente en las poblaciones del hemisferio occidental, ha aumentado a un ritmo alarmante en los ultimos 30 anos. El aumento en los niveles de trigliceridos, o hipercolesterolemia, se ha asociado con una serie de riesgos de enfermedades, incluyendo un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares, como dislipidemia y aterosclerosis. El aumento en los niveles de trigliceridos ha coincidido tambien con un dramatico aumento en la obesidad, la resistencia a la insulina, la diabetes tipo 2 , la esteatosis hepatica y la enfermedad hepatica no alcoholica (NAFLD). Debido a que los niveles elevados de trigliceridos estan implicados en una diversidad de enfermedades y afecciones, el control de la produccion y/o del nivel de trigliceridos puede proporcionar un tratamiento viable para la enfermedad metabolica.

La diacilglicerol O-aciltransferasa 2 (DGAT2) se expresa en muchos tejidos; sin embargo, se expresa principalmente en el hngado y en el tejido adiposo blanco. Esta implicada, junto con la DGAT1, en la ultima etapa para la smtesis de trigliceridos. La inhibicion de la actividad de DGAT2 que conduce a una reduccion en los niveles de trigliceridos suprimira el colesterol de lipoprotemas de baja densidad (LDL-c) mediante el control de la produccion a traves de la secrecion de ApoB o la deposicion de esas partmulas. Ambos mecanismos estan validados farmacologicamente en seres humanos. La limitacion de la secrecion de partmulas de apolipoprotema B (ApoB) reduce la produccion de LDL-c. Por lo tanto, la atenuacion de la actividad de DGAT2 tiene un impacto favorable sobre los niveles de trigliceridos, LDL-c, ApoB, y la concentracion de lipoprotemas ricas en trigliceridos en la circulacion y la lipogenesis en el hngado.

El documento WO2013/150416 divulga ciertos derivados de compuestos de purina, pirimidina y pirazina como inhibidores de la DGAT2 y su uso en el tratamiento de enfermedades asociadas a la actividad de la DGAT2.

Existe una necesidad de medicamentos adicionales para los tratamientos de hipercolesterolemia y enfermedades cardiovasculares, como dislipidemia y aterosclerosis. Los procedimientos de tratamiento actuales, que incluyen dieta, cambios en el estilo de vida y/o terapia con estatinas, pueden no reducir suficientemente los niveles de LDL-c para todos los pacientes con riesgo de enfermedades cardiovasculares. Ademas, hay un subconjunto de pacientes que son intolerantes o se vuelven intolerantes a la terapia con estatinas. La presente invencion aborda una o mas de estas necesidades proporcionando compuestos y procedimientos de tratamiento alternativos, que pueden ser adecuados para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares.

La presente invencion proporciona un compuesto segun la Formula I

en la que R es H o -CH³o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

En una forma, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I en la que R es H o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra forma, la presente invencion proporciona un compuesto de Formula I en la que R es -CH³o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

La presente divulgacion proporciona un procedimiento para el tratamiento de un paciente que necesita tratamiento para enfermedades cardiovasculares. El procedimiento comprende administrar al paciente un compuesto segun la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, el compuesto administrado, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto administrado, o sal farmaceuticamente del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

En otra forma, la presente descripcion proporciona un procedimiento para el tratamiento de un paciente que necesita tratamiento para la dislipidemia. El procedimiento comprende administrar al paciente un compuesto de la presente invencion segun la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, el compuesto administrado, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto administrado o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

En todavfa otra forma, la presente divulgacion proporciona un procedimiento para el tratamiento de un paciente que necesita tratamiento para la aterosclerosis. El procedimiento comprende administrar al paciente un compuesto segun la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, el compuesto administrado, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto administrado, o sal farmaceuticamente del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

En una forma, la presente divulgacion proporciona un procedimiento para el tratamiento de un paciente que necesita tratamiento para la hipertrigliceridemia. El procedimiento comprende administrar al paciente un compuesto segun la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, el compuesto administrado, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto administrado, o sal farmaceuticamente del mismo, es un compuesto de Formula 1 en la que R es -CH³.

La presente invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos uno de un vehuculo o excipiente farmaceuticamente aceptable.

Dichas composiciones farmaceuticas y dichos procedimientos de preparacion de las composiciones son conocidos en la tecnica (consultese, por ejemplo, Remington; The Science and Practice of Pharmacy, D.B. Troy, Editor, 21a Edicion, Lippinncott, Williams & Wilkins, 2006).

La presente divulgacion proporciona un procedimiento para el tratamiento de un paciente que necesita tratamiento para enfermedad cardiovascular, dislipidemia, aterosclerosis o hipertrigliceridemia. El procedimiento comprende administrar al paciente una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun la Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una realizacion, la composicion farmaceutica administrada comprende un compuesto de formula I en la que R es H o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion, el compuesto administrado o la composicion farmaceutica comprende un compuesto de Formula I en la que R es -CH³, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente invencion proporciona un compuesto de la invencion para su uso en terapia. En una realizacion, el compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³. En una realizacion, el compuesto de la invencion es para su uso en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares. El compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. De manera alternativa, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

En una realizacion, el compuesto de la invencion es para su uso en el tratamiento de la dislipidemia. El compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. De manera alternativa, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³. En otra realizacion, el compuesto de la invencion es para su uso en el tratamiento de la aterosclerosis. El compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. De manera alternativa, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

En otra realizacion, el compuesto de la invencion es para su uso en el tratamiento de la hipertrigliceridemia. El compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. De manera alternativa, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH³.

La presente divulgacion incluye tambien el uso de un compuesto segun la Formula I en la fabricacion de un medicamento para tratar una o mas de entre: hipertrigliceridemia, enfermedad cardiovascular, dislipidemia y aterosclerosis. En una realizacion, el compuesto o sal farmaceuticamente aceptable del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es H. En otra realizacion, el compuesto o sal farmaceuticamente del mismo es un compuesto de Formula I en la que R es -CH3.

La presente invencion proporciona un procedimiento para la preparacion de un compuesto de Formula 2 a continuacion:

en la que R es H o -CH³y R1 es un grupo protector. El procedimiento comprende hacer reaccionar un compuesto de Formula 3

con un compuesto de Formula 4 a continuacion:

La preparacion puede comprender ademas la etapa de eliminar el grupo protector, R1, de Formula 2 para proporcionar el compuesto de Formula I.

Los ejemplos de diversas funcionalidades protectoras de amino incluyen: carbamatos tales como carbamato de alquilo C^{1 - 5}, carbamato de cicloalquilo C^{3 -6}, preferiblemente un carbamato de t-butilo, (BOC) o carbamato de bencilo (CBZ); amidas como alquilamida C^{1 -3}haloalquilamida C^{1 - 3}, formamida o acetamida cloroacetamida, trifluoroacetamida; y bencil aminas. Pueden encontrarse ejemplos adicionales de funcionalidades protectoras de amino, procedimientos de preparacion de los sustituyentes amino protegidos, y procedimientos de desproteccion de los sustituyentes amino en "Protecting Groups in Organic Synthesis", 3a Ed. Greene, T.W., Wuts, P.G.M., Eds., John Wiley and Sons, Nueva York, 1999. Las personas expertas en la tecnica reconoceran que, ademas del sustituyente amino protegido, pueden usarse otros grupos funcionales que pueden convertirse facilmente en el grupo amino. Dichos grupos funcionales, preparaciones y transformaciones de estos grupos pueden encontrarse en "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" de Larock. R.C, Wiley VCH, 1999 y en " March's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms and Structure" Smith, M.B., y March, J., Wiley-Interscience, 6a ed. 2007.

La expresion "sal farmaceuticamente aceptable", como se usa en la presente memoria, se refiere a una sal de un compuesto de la invencion que se considera aceptable para el uso clmico y/o veterinario. Las sales farmaceuticamente aceptables y la metodologfa comun para la preparacion de las mismas son bien conocidas en la tecnica. Veanse, por ejemplo, P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 66, N° 1, Enero de 1977.

Como se usa en la presente memoria, la expresion "cantidad efectiva" de un compuesto de Formula I se refiere a una cantidad, es decir, una dosis, que es eficaz en el tratamiento de un trastorno, tal como enfermedad cardiovascular, dislipidemia, aterosclerosis o hipertrigliceridemia. El especialista en diagnostico, como una persona experta en la materia, puede determinar facilmente una cantidad eficaz mediante el uso de tecnicas convencionales y observando los resultados obtenidos en circunstancias analogas. En la determinacion de una cantidad o dosis efectiva de un compuesto de Formula I, se consideran una serie de factores, que incluyen, pero no se limitan a, cuales de los compuestos de Formula I se administraran; la administracion conjunta de otros agentes, si se usa; la especie de mairnfero; su tamano, edad y salud general; el grado de implicacion o la gravedad del trastorno; la respuesta del paciente individual; el modo de administracion; las caractensticas de biodisponibilidad de la preparacion administrada; el regimen de dosis seleccionado; el uso de otros medicamentos concomitantes; y otras circunstancias relevantes.

Como se usan en la presente memoria, los terminos "tratando", "tratar" o "tratamiento" incluyen restringir, ralentizar, detener, reducir o revertir la progresion o la gravedad de un smtoma, trastorno, afeccion o enfermedad existente.

Como se usa en la presente memoria, el termino "paciente" se refiere a un mamffero, preferiblemente un ser humano o mamffero de comparMa, tal como un perro o un gato.

Quimica General

Como se usa en la presente memoria, los siguientes terminos tienen los significados indicados: "DCM" se refiere a diclorometano; "Et2O "se refiere a dietileter; "DMF" se refiere a dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfoxido; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EtOH" se refiere a etanol; "h "se refiere a hora; "m" se refiere a minutos; "MeOH” se refiere a metanol; "MS" se refiere a espectroscopfa de masas; "RT" se refiere a temperatura ambiente; "THF" se refiere a tetrahidrofurano.

A menos que se indique lo contrario, los compuestos ilustrados en la presente memoria se nombran y se numeran usando Accelrys Draw 4.0.

El Esquema 1 ilustra una smtesis general de los compuestos de Formula I y 2.

En general, la sulfonamida, compuesto 1, puede convertirse en el derivado de fenol, compuesto 2, usando nitrito de sodio y acido sulfurico. La reaccion del compuesto 2 con 4,6-dicloro-2-metilpirimidina, compuesto 3, proporciona el compuesto de eter 4.

Siguiendo el Procedimiento A, el cloruro sustituyente del compuesto 4 puede convertirse en el grupo ciano, para el compuesto 5, usando cianuro de zinc y un catalizador de paladio. El grupo ciano en el compuesto 5 puede reducirse al grupo amino en el compuesto 6 usando un catalizador de paladio y gas hidrogeno. La reaccion del compuesto de amina 6 con 2,5-dicloropirimidina, compuesto 7, proporciona compuestos de Formula I, en la que R puede ser H o un grupo metilo.

De manera alternativa segun el Procedimiento B, el nitrogeno de la sulfonamida del compuesto 4 puede protegerse con grupos protectores de nitrogeno conocidos para proporcionar el compuesto 8. El cloruro sustituyente del compuesto 8 puede convertirse en el grupo ciano, en el compuesto 9, usando cianuro de zinc y un catalizador de paladio. El grupo ciano en el compuesto 9 puede reducirse al grupo amino en el compuesto 10 usando un catalizador de paladio y gas hidrogeno. La reaccion del compuesto de amina 10 con 2,5-dicloropirimidina, compuesto 7, y la desproteccion simultanea (o posterior) del nitrogeno proporciona compuestos de Formula I, en la que R puede ser H o un grupo metilo.

Ejemplo 1

1-[4-[6-[[(5-cloropirimidin-2-il)amino]metil]-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida

El compuesto del Ejemplo 1 puede mediante el Procedimiento A o el Procedimiento B como se indica a continuacion.

Procedimiento A

Preparacion 1

1-(4-Hidroxifenil)-N-metil-metanosulfonamida

Se anadio acido sulfurico (2,5 ml, 44,9 mmol) a una suspension de 1-(4-aminofenil)-N-metil-metanosulfonamida (7,5 g, 37,5 mmol) en agua (56,2 ml) y la mezcla de reaccion se enfrio a 0°C. Lentamente, gota a gota, se anadio una solucion de nitrito de sodio (2,8 g; 41,2 mmol) en agua (37,5 ml) a esta suspension. La mezcla resultante se agito a 0°C durante 20 m, a continuacion, el bano de hielo se retiro y la reaccion se calento a 100°C. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente. La reaccion se detuvo con un exceso de agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc se combinaron, se lavaron con salmuera; se secaron sobre MgSO⁴; se filtraron; y el filtrado se concentro a presion reducida para dar el compuesto del tttulo como un solido de color naranja (6,2 g, 66%). MS (m/z): 219 (M+H²O).

Preparacion 2

1-[4-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida

Bajo atmosfera de nitrogeno, se anadio carbonato de potasio (26,4 g, 190,8 mmol) a una solucion de 1-(4-hidroxifenil)-N-metil-metanosulfonamida (19,2 g, 95,4 mmol) y 4,6-dicloro-2-metilpirimidina (15,6 g, 95,4 mmol) en DMSO (192,0 ml). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se vertio en 400 ml de hielo/agua (1:1 v/v) para inducir la precipitacion. La suspension resultante se agito durante 30 minutos. El solido se recogio; se lavo con agua; y se seco a presion reducida durante la noche para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color marron palido (27,7 g, 89%). MS (m/z): 328 (M+1).

Preparacion 3

1-[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida

Se burbujeo gas nitrogeno a traves de una solucion de 1 -[4-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-M)oxifenil]-N-metM-metanosulfonamida (26,6, 81,1 mmol) en DMF (266,0 ml) durante 15 minutos. Posteriormente, se anadieron cianuro de zinc (14,59 g, 121,2 mmol) y cloruro de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio (II) (6,76 g, 8,1 mmol). La suspension se calento a 150°C durante 6 horas mientras se mantema bajo una atmosfera de nitrogeno. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con agua (600 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos de EtOAc se combinaron. Los extractos combinados se lavaron secuencialmente con agua (500 ml) y a continuacion con salmuera (500 ml); se secaron sobre sulfato de sodio; se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida. El compuesto del tttulo se aislo usando cromatograffa en gel de sflice, eluyendo con hexano/EtOAc (1:1) para dar el compuesto del tttulo (18 g, 70%). MS (m/z): 319 (M+1).

Preparacion 3 alternativa

Se anadio, en porciones, carbonato de potasio (malla 325, 46,5 g, 329,9 mmoles;) a una mezcla de 1-(4-hidroxifenil)-N-metil-metanosulfonamida (40,0 g, 165,0 mmoles) y 6-cloro-2-metil-pirimidina-4-carbonitrilo (26,6 g, 173,2 mmoles;) en acetona (400,0 ml). La mezcla se agito durante 3 horas a 22°C. La suspension resultante se filtro y el solido se enjuago con acetona. El filtrado y el lavado se combinaron, (el solido se descarto). El filtrado se concentro para proporcionar un solido de color marron. El solido se suspendio en eter metil tert-butilico (120 ml) y se filtro. El solido se recogio y se mezclo con eter metil tert-butflico (80 ml) y a continuacion se filtro. El solido se enjuago con eter metil tert-butilico (80 ml) para dar un solido de color marron claro. Se seco en un horno de vado, 40°C, 50 mbar durante 8 h para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color marron claro, 52,4 g, 97% de rendimiento. MS (m/z): 319 (M+1).

Preparacion 4

1-[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida

En un reactor PARR, se combinaron paladio (3,6 g, 10% sobre carbon vegetal, 1-[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida (18 g, 56,5 mmol), EtOH (270 ml), EtOAc (270 ml) y trietilamina (31,5 ml). El reactor PARR se sello y se cargo con hidrogeno (400 psi), a continuacion, el reactor se agito a temperatura ambiente durante la noche. El reactor se abrio y el contenido se filtro a traves de CELITE®, la almohadilla CELITE® se lavo con EtOH (1.000 ml), el filtrado se recogio y el disolvente se evaporo para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color marron (11,1 g, 43%). EM (m/z): 323 (M+1)

Preparacion 4 alternativa

Se combino paladio (18,54 g, 10% sobre carbon), 1-[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]-N-metilmetanosulfonamida (46,34 g, 141,19 mmol), 1,4-dioxano (278 ml), EtOH (185 ml) y trietilamina (78,7 ml) en un reactor PARR. El reactor PARR se sello y se cargo con hidrogeno (400 psi). El reactor se agito a temperatura ambiente durante 4,5 h. El reactor se abrio y los contenidos se filtraron a traves de CELITE®. El filtrado se recogio y se evaporo para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo (23,8 g, 48%). MS (m/z): 323 (M+1). La almohadilla de CELITE® se lavo con una mezcla de 1,4-dioxano/MeOH (6 x 500 ml); el filtrado se recogio y el disolvente se evaporo para proporcionar una segunda cosecha del compuesto del tttulo como un solido de color amarillo (solido de color rosado, 48%). MS (m/z): 323 (M+1).

Ejemplo 1

Se anadio fluoruro de potasio (1,82 g, 31,33 mmol) a una solucion de 1-[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida (11,1 g, 24,10 mmol) y 2,5-dicloropirimidina (4,31 g, 28,92 mmol) en DMSO (111 ml). La mezcla de reaccion se calento a 120°C durante dos horas. Posteriormente, la mezcla se enfrio a temperatura ambiente; se anadio agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Los extractos organicos se combinaron; se lavaron secuencialmente con agua (300 ml) y a continuacion con salmuera (300 ml); se secaron sobre sulfato de sodio; se filtraron; y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un material bruto. El compuesto del tttulo se purifico usando cromatograffa en gel de sflice, eluyendo con un gradiente de hexano/EtOAc (1:1) a EtOAc (100%). Se recogieron las fracciones relevantes que conteman el compuesto del tttulo y las fracciones se concentraron. El material resultante se disolvio en THF (200 ml) y EtOAc (300 ml), a continuacion, se anadio SiliaMetS® Thiol (9,2 g) para eliminar las trazas de paladio. La mezcla se agito durante 2 horas a 55°C. La mezcla se filtro a 55°C; el filtrado se recogio; y el disolvente se evaporo para proporcionar un solido. El solido se trituro con EtOAc frio (20 ml); se recogio por filtracion; y se seco a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color blanco (8 g, 75%). MS (m/z): 435 (M+1).

Preparacion alternativa para el Ejemplo 1

Se combinaron 1-[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida (23,6 g, 67,3 mmol) y 2,5-dicloropirimidina (10,03 g, 67,3 mmol) en DMSO (236 ml). La mezcla se agito a 22°C durante 1 h. Se anadio fluoruro de potasio (5,14 g, 87,5 mmol). La mezcla de reaccion se calento a 120°C durante dos horas. Posteriormente, la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se vertio en agua/hielo (250 ml). Se anadio agua adicional (50 ml) y la mezcla se coloco en un bano de ultrasonidos durante 30 minutos. El material solido resultante se recogio. El solido se suspendio con agua (100 ml) y el solido se recogio para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo, 25,7 g, 82% de rendimiento. MS (m/z): 435 (M+1).

El compuesto se purifico por cromatograffa ultrarrapida (1.500 g de columna SiO2; eluyente: hexano/EtOAc 50:50 a 25:75; fracciones de 1 l, carga en DCM/MeOH 30:1, 600 ml). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron. El solido resultante se seco en un horno de vacfo, 45°C, 5 mbar durante 18 h para dar el compuesto del tftulo como un solido de color blanco, MS (m/z): 435 (M+1).

Procedimiento B

Preparacion 5

N-[[4-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]metilsulfonil]-N-metil-carbamato de tert-butilo

Se disolvio 1-[4-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]-N-metil-metanosulfonamida (2,41 g, 4,6 mmol) (vease la Preparacion 2) en DCM (10 ml) y se anadio N,N-dimetil-4-piridinamina (56,6 mg, 0,46 mmol). La solucion se enfrio a 0°C; se anadio tert-butoxicarbonil tert-butil carbonato (1,5 g, 6,8 mmol); y se agito durante una hora. La reaccion se detuvo con un exceso de 0,5 N HCl. La mezcla se extrajo con DCM. Los extractos de DCM se combinaron; se lavaron con salmuera; se secaron sobre sulfato de magnesio; se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar el compuesto del tftulo como un aceite de color naranja (3,03 g, 99,4%). MS (m/z): 428 (M+1).

Preparacion 6

N-[[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]metilsulfonil]-N-metil-carbamato de tert-butilo

En una atmosfera de nitrogeno, se combinaron N-[[4-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-M)oxifenil]metMsulfonM]-N-metM-carbamato de tert-butilo (2,24 g, 3,4 mmol), DMF (2 ml), tetrakis(trifenilfosfina)paladio (1,9 g, 1,7 mmol) y cianuro de zinc (2,0 g, 16,8 mmol). La mezcla se calento a 90°C y se agito durante 3 horas. La reaccion se detuvo con agua e hidroxido de sodio. La mezcla se extrajo con EtOAc; el extracto o los extractos de EtOAc se lavaron con salmuera; se secaron sobre sulfato de magnesio; se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar un residuo. El compuesto del tttulo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida usando 80 g de gel de sflice, y se eluyo con un gradiente del 0-55% de EtOAc en hexanos. Las fracciones relevantes se evaporaron para proporcionar el compuesto del tttulo como un aceite de color amarillo (1,2 g, 80,9%). MS (m/z): 419 (M+1).

Preparacion 7

N-[[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]metilsulfonil]-N-metil-carbamato de tert-butilo

Se combinaron N-[[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]metilsulfonil]-N-metil-carbamato de tert-butilo (400 mg, 0,96 mmol), trietilamina (290 mg, 2,9 mmol)), MeOH (20 ml) y EtOAc (20 ml) en un reactor PARR. Se anadio el 5% de paladio sobre carbon (203 mg, 0.096 mmol). El reactor PARR se sello y se presurizo con hidrogeno (345 kPa). El reactor se agito a temperatura ambiente durante 17 horas. El reactor se despresurizo y se abrio. Se anadio una cantidad adicional de paladio al 5% sobre carbon (200 mg, 0,094 mmol); se volvio a presurizar el reactor con hidrogeno (414 kPa) y el reactor se agito durante 17 horas adicionales mientras se mantema a temperatura ambiente. El reactor se despresurizo y se abrio. El contenido se filtro a traves de tierra de diatomeas y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar un residuo. Para purificar, se anadio tolueno y se concentro a presion reducida para proporcionar un residuo de color naranja-rojo. La adicion y la eliminacion de tolueno se repitio 3 veces para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color rosa (0,57 g, 98,8%, 70% de pureza). MS (m/z): 423 (M+1).

Ejemplo 1

Se anadio fluoruro de potasio (53,9 mg, 0,93 mmol) a una solucion de N-[[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]metilsulfonil]-N-metil-carbamato de tert-butilo (280 mg, 0,46 mmol) y 2,5-dicloropirimidina (69,1 mg, 0,46 mmol) en DMSO (10 ml). La mezcla se calento a 120°C y se agito a esa temperatura durante 17 horas. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y la reaccion se detuvo con agua. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc; el extracto o los extractos se combinaron; se secaron con sulfato de magnesio; se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar un residuo. El compuesto del tttulo se purifico usando cromatograffa sobre gel de sflice eluyendo con un gradiente de EtOAc en hexanos (0-100%). El compuesto del tttulo se purifico adicionalmente usando una segunda cromatograffa en gel de sflice eluyendo con un gradiente de 0-10% de MeOH en DCM. Las fracciones apropiadas se concentraron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo vttreo (90 mg, 44,6%). MS (m/z): 435 (M+1).

Ejemplo 2

1-{4-[(6-{[(5-cloropirimidina-2-il)amino]metil}-2-metilpirimidina-4-il)oxi]fenil}metanosulfonamida

El compuesto del Ejemplo 2 puede prepararse mediante el procedimiento indicado a continuacion.

Preparacion 8

(4-hidroxifenil)metanosulfonamida

La preparacion 8 se prepara esencialmente mediante la Preparacion 1, Procedimiento A. MS (m/z): 205 (M+H²O).

Preparacion 9

2-metil-6-oxo-1H-pirimidin-4-carboxilato de etilo

Se anadio sal de clorhidrato de acetamida (13,9 g, 147 mmol) a una solucion de but-2-inedioato de dietilo (25 g, 147 mmol) en acetonitrilo (100 ml); a continuacion, lentamente, gota a gota, se anadio trietilamina (22,5 ml, 162 mmol) a la mezcla. La mezcla se calento a 80°C y se agito durante 12 horas. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con MeOH (50 ml). El compuesto del tttulo se purifico usando cromatograffa en gel de sflice eluyendo con un gradiente de MeOH en DCM (0-10%). Las fracciones apropiadas se combinaron y los disolventes se eliminaron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color marron (7,4 g, 27,5%). MS (m/z): 183 (M+1).

Preparacion 10

2-metil-6-oxo-1H-pirimidin-4-carboxamida

Se disolvio 2-metil-6-oxo-1H-pirimidin-4-carboxilato de etilo (7,26 g, 39,9 mmol) en una solucion de amomaco en MeOH (70 ml, 7 N) y la mezcla se agito durante 17 horas a temperatura ambiente. Los disolventes se eliminaron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color negro (5,7 g, 93,4%). MS (m/z): 154 (M+1).

Preparacion 11

6-cloro-2-metil-pirimidin-4-carbonitrilo

Se combino 2-metil-6-oxo-1H-pirimidina-4-carboxamida (46 g, 140 mmol) con cloruro de fosforilo (32,5 ml, 349 mmol); la mezcla se calento a 100°C y se agito durante 17 horas. El exceso de cloruro de fosforilo se elimino a presion reducida para proporcionar una suspension espesa negra. La suspension se anadio lentamente a agua (700 ml) y la mezcla se filtro a traves de CELITE®. El filtrado se extrajo con Et2O. Los extractos se combinaron; se secaron sobre sulfato de magnesio; los disolventes volatiles se eliminaron del filtrado bajo presion reducida para proporcionar un solido de color negro. El compuesto del tttulo se purifico usando cromatograffa ultrarrapida en columna de gel de sflice eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM (0-10%). Las fracciones apropiadas se combinaron y los disolventes se eliminaron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo (2,5 g, 12%). MS (m/z): 154 (M+1).

Preparacion 12

[4-(6-ciano-2-metil-pirimidin-4-il)oxifenil]metanosulfonamida

Se disolvio 6-cloro-2-metilpirimidina-4-carbonitrilo (628 mg, 4,1 mmol) en DMF (15 ml) a TA bajo una atmosfera de nitrogeno. Se anadieron (4-hidroxifenil)metanosulfonamida (859 mg, 4,1 mmol) y carbonato de potasio (1,13 g, 8,2 mmol) a la solucion. Se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se vertio en una solucion de salmuera y se extrajo con EtOAc. Los extractos se combinaron; se secaron sobre sulfato de magnesio; se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida para proporcionar el compuesto del tttulo (80% de pureza, 1,5 g, 96,4%). MS (m/z): 305 (M+1).

Preparacion alternativa 12

Se combinaron (4-hidroxifenil)metanosulfonamida (55 g, 269,1 mmol) y 6-cloro-2-metilpirimidina-4-carbonitrilo (45,5 g, 296 mmol) en acetonitrilo (605 ml) a 22°C. La mezcla se coloco en un bano de ultrasonidos durante 5 minutos y se agito a 22°C durante 10 minutos. Se anadio carbonato de potasio (malla 325) (75,9 g, 538,2 mmol) a la solucion y se agito a 22°C durante 4 horas. La mezcla se filtro y el solido se enjuago con acetonitrilo (3 x 150 ml). Los filtrados se concentraron para dar un solido de color marron. El solido se suspendio en eter metil tertbutilico (200 ml) y el solido se recogio. El solido se enjuago con eter metil tert-butflico y agua (2 x 200 ml). El solido se recogio y el solido humedo se seco en un horno de vacfo, 15 mbar, 45°C para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido, 67,21 g, 79% de rendimiento, EM (m/z): 305 (M+1).

Preparacion 13

[4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil] metanosulfonamida

La preparacion 13 se prepara esencialmente mediante el procedimiento de la Preparacion 7 (o 4). MS (m/z): 309 (M+1).

Se combinaron trietilamina (117,83 ml) y paladio al 10% en carbon (20,10 g) a una solucion de [4-(6-ciano-2-metilpirimidin-4-il)oxifenil]metanosulfonamida (67 g, 211,35 mmoles) en una mezcla de 1,4-dioxano (469 ml) y EtOH (201 ml; 159,05 g) en un reactor PARR. La mezcla se mantuvo a 22°C. El reactor se sello y se presurizo con hidrogeno (400 PSI). El reactor se agito durante 18 h mientras se mantema a 22°C. A continuacion, el reactor se abrio y los solidos se filtraron. El residuo solido se enjuago con MeOH (1 l), una mezcla de dioxano/MeOH 1:1 (1 l) y MeOH (3 x 1 l). El filtrado se recogio y se concentro para proporcionar un solido. El solido se recogio y se seco en un horno de vacfo (45°C, 15 mbar) para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo, 62,41 g, 77% de rendimiento. MS (m/z): 309 (M+1).

Ejemplo 2

El Ejemplo 2 se prepara esencialmente mediante la etapa final en el Procedimiento A para el Ejemplo 1 anterior. MS (m/z): 421 (M+1).

Preparacion alternativa para el Ejemplo 2.

Se anadio 2,5-dicloropirimidina (24,76 g, 162,9 mmoles) a una solucion de [4-[6-(aminometil)-2-metil-pirimidin-4-il]oxifenil]metanosulfonamida (62 g, 162,9 mmoles; 62,00 g) en dimetilsulfoxido (620 ml) a 22°C. La mezcla se agito durante 5 min y se anadio fluoruro de potasio (10,51 g, 179,1 mmoles). La mezcla se calento a 120°C durante 2 h; a continuacion, se enfrio a 22°C. La mezcla se vertio en agua helada (1,2 l) y la suspension se filtro. El solido se recogio y se mezclo en agua (100 ml) y a continuacion el solido se recogio. Este solido se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida (columna de 1500 g; eluyente: DCM/MeOH 100:0 a 95:5; fracciones de 1 l, se cargo en DCM/MeOH 80:20 (500 ml). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron para proporcionar un solido. El solido se suspendio en alcohol isopropilico (250 ml), la suspension resultante se coloco en un bano de ultrasonidos durante 5 minutos. El solido se recogio y se enjuago con alcohol isopropilico para obtener un solido de color amarillo palido. El solido se suspendio de nuevo en alcohol isopropilico (600 ml) y la suspension se coloco en un bano de ultrasonidos durante 5 minutos. La suspension de alcohol se concentro mediante un rotavapor a 80°C. El solido se recogio y se seco en vado (0,5 mbar, 22°C) durante 1 h. El solido se anadio a EtOH (600 ml) y la mezcla se coloco en un bano de ultrasonidos durante 5 minutos. La mezcla se concentro mediante un rotavapor a 60°C. El solido de color amarillo se recogio y se seco en vado 0,5 mbar, 22°C durante 1 h.

El solido se suspendio en EtOH (680,2 ml). La suspension resultante se calento a 95°C y se anadio dimetilsulfoxido (331,1 ml) para proporcionar una solucion de color amarillo claro. El agua se elimino con EtOH (680 ml) destilando el disolvente usando un aparato dean-stark/condensador de reflujo bajo una atmosfera de nitrogeno. Puede anadirse EtOH adicional (680 ml) al azeotropo del agua restante. A continuacion, se anadio agua (421,8 ml) y la mezcla se agito durante 30 minutos a 95°C. La mezcla se enfrio a 22°C y se agito durante 18 h. La suspension se filtro. El solido se recogio y se enjuago con agua (2 x 100 ml). El solido se seco en vado (10 mbar, 40°C, 18 h) para proporcionar el compuesto del tttulo como un solido de color amarillo, 41,3 g, rendimiento del 61%, MS (m/z): 421 (M+1).

Biologia general

La enfermedad vascular aterosclerotica sigue siendo una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en las sociedades industriales. Uno de los factores de riesgo bien conocidos para esa enfermedad es una alta concentracion de colesterol de lipoprotema de baja densidad (LDL) en la circulacion. A pesar de la disponibilidad de multiples clases de agentes terapeuticos que reducen el colesterol LDL, incluyendo la principal clase terapeutica, las estatinas, la incidencia de los eventos cardiovasculares importantes sigue siendo alta en los pacientes con enfermedad coronaria (CHD). Ademas, hay un subconjunto de pacientes que son intolerantes a la terapia mas efectiva, las estatinas (Gotto, A.M., y Moon, J.E., Nature Rev. Cardiol., (2013) 10:560-570) Los compuestos de esa clase reducen el colesterol LDL, principalmente mediante la regulacion al alza del receptor de LDL y la posterior recaptacion de LDL en el dgado. Un procedimiento alternativo, y potencialmente igualmente eficaz, sena la disminucion de la secrecion de lipoprotemas de muy baja densidad (VLDL), que eventualmente se convierten en LDL en la circulacion. Se ha demostrado que dos nuevas clases de agentes terapeuticos, inhibidor de la protema de transferencia de trigliceridos microsomicos (MTP), lomitapida, e inhibidor de la smtesis de ApoB, mipomersen, que reducen ambos la secrecion de VLDL, reducen el colesterol LDL. Sin embargo, cada uno de esos agentes esta asociado con eventos adversos, lo que limita su utilidad. En particular, la terapia con lomitapida se asocia con un aumento de 8 veces en el contenido de grasa hepatica. Por el contrario, la inhibicion de DGAT2 reducira la produccion de trigliceridos en el tngado, lo que a su vez conducira a la reduccion de la secrecion de VLDL y a la posterior disminucion del colesterol LDL. Ademas, la declaracion cientifica de la American Heart Association respalda el establecimiento de los trigliceridos elevados como diana terapeutica como medio para reducir el riesgo cardiovascular residual (Miller, M. et al, Circulation (2011) 123:2292-2333. La inhibicion de DGAT2 disminuira los trigliceridos circulantes y, de esta manera, proporcionara proteccion adicional contra los eventos cardiovasculares.

Ensayo bioquimico de diacilglicerol aciltransferasa 2 (DGAT2)

La actividad inhibidora in vitro de los compuestos contra la DGAT2 humana se evaluo en este ensayo. El ensayo uso DGAT2 humana recombinante con un marcador FLAG en el extremo amino, expresada en celulas SF9 de insecto modificadas geneticamente, y purificada mediante cromatograffa de afinidad.

La DGAT2 cataliza la transferencia de un resto acilo desde la acil-Coenzima A al diacilglicerol, para formar triacilglicerol. En esta realizacion particular del ensayo, el oleato se uso como el resto acilo transferido. Para facilitar la miscibilidad de todos los componentes lipfdicos, todos los lfpidos usados en el ensayo conteman un resto oleilo como el unico grupo acilo.

Antes del inicio del ensayo, se preparo una mezcla de dioleoil glicerol (DOG) y dioleoil fosfatidilcolina (DOPC) a una relacion molar de 3:7. Se mezclo la cantidad apropiada de DOPC y DOG disuelto en cloroformo en un tubo de ensayo de vidrio de borosilicato. El disolvente se evaporo bajo una corriente de argon para formar una pelmula de lfpidos. Posteriormente, el tubo de ensayo se coloco bajo vacm (<1 Torr) durante 2 horas para eliminar el disolvente residual. Se anadio la cantidad apropiada de tampon que contema TrisHCl (pH 7,5, 150 mM) y sacarosa (250 mM) para conseguir una concentracion 20 mM de lfpido total. Se garantizo la suspension completa de la pelmula de lfpidos mediante agitacion vigorosa. El contenido del tubo se sonico en un sonicador con bano de agua bajo condiciones de onda estacionaria hasta que la suspension paso de turbia a translucida, para garantizar la conversion de los liposomas en vesmulas unilamelares pequenas (SUV).

El compuesto de ensayo se preparo disolviendolo y diluyendolo en serie en incrementos semi-logantmicos en DMSO. Para cada concentracion, se realizo una etapa de dilucion de 10 veces de la solucion del compuesto en DMSO en un tampon que contema TrisHCl (pH 7,5, 150 mM) y sacarosa (250 mM).

Las suspensiones de SUV y la solucion de compuesto se mezclaron con otros componentes del ensayo para lograr la siguiente concentracion de ingredientes individuales: TrisHCl (pH 7,5, 150 mM), sacarosa (250 mM), MgCh (5 mM,), ditiotreitol (DTT) (0,5 mM), oleoil coenzima A (oleoil-CoA) (12 j M), 1-¹⁴C oleoil coenzima A (oleil-CoA-¹⁴C) (8 |jM), dioleoil glicerol (DOG) (0,6 mM) y dioleoil fosfatidilcolina (DOPC) (1,4 mM), protema DGAT2 (0,5 nM), DMSO (1%, v/v), con una concentracion del compuesto de ensayo comprendida de un intervalo de 1 nM a 100 j M, en 30 j l de volumen total. La reaccion se incubo durante 1 hora a TA (aproximadamente 21°C) en pocillos individuales de una placa de 384 pocillos. Despues de 1 hora, la reaccion se detuvo anadiendo 23 j l de solucion de parada que contema una mezcla de isopropanol:EtOH:heptano:agua DI:NaOH 1 N (59:12,5:15:11:2,5, en volumen). Se anadieron 42 j l de Microscint E y a continuacion la mezcla se incubo durante la noche para extraer el triglicerido en la capa de disolvente organico que contema centellante. La radioactividad se midio usando un instrumento Perkin-Elmer TopCount. Se establecio una medicion de base para la reaccion repitiendo el procedimiento anterior, pero sin incluir la enzima o el compuesto de ensayo en la mezcla de reaccion. El grado de inhibicion de DGAT2 se calculo midiendo la radioactividad a 10 concentraciones diferentes para cada compuesto. El IC⁵⁰se determino para cada compuesto usando un ajuste de curva logfstica de 4 parametros. La media geometrica para los valores IC⁵⁰calculados para los Ejemplos 1 y 2 se enumeran en la Tabla 1. Los datos enumerados en la Tabla 1 demuestran que ambos Ejemplos 1 y 2 inhiben la DGAT2 humana en un ensayo de tampon in vitro.

Tabla 1

Ensayo de diacilglicerol aciltransferasa 2 (DGAT2) basado en celulas

En este ensayo se valuo la actividad inhibidora de los compuestos contra la DGAT2 humana en un entorno celular. Este ensayo uso una lmea celular de hepatoma humano, HepG2, como fuente de actividad aciltransferasa.

La lmea celular HepG2 es un modelo usado comunmente para reacciones metabolicas que ocurren en los hepatocitos humanos in vivo. La smtesis de trigliceridos en esta lmea celular fue seguida por una medicion de la incorporacion de oleato marcado isotopicamente a la triolema (un triglicerido con 3 restos oleflicos).

Las celulas HepG2 se dispensaron en una microplaca de 96 pocillos, que se habfa recubierto previamente con Poly-D-lisina, en una cantidad de 50.000 celulas/pocillo en 100 j l de Medio Mmimo Esencial (MEM) con 10% de Suero Fetal Bovino (FBS). Las celulas se incubaron durante 16 horas a 37°C. El medio de cultivo celular se remplazo con MEM que contema 2% de albumina de suero bovino. El compuesto de ensayo se disolvio en DMSO al 0,5% y se prepararon diluciones en serie en incrementos semi-logantmicos. El compuesto de ensayo diluido en serie se anadio a pocillos separados. Se incubo durante 0,5 horas a 37°C. A continuacion, el medio de cultivo celular se remplazo por un medio de la misma composicion, pero que inclma 50 pM ¹³CO^{i 8}-oleato y 300 pM de hidropropil-p-ciclodextrina. Se incubo durante 4 horas adicionales a 37°C. El medio de cultivo celular se descarto volteando la microplaca, drenando de esta manera los pocillos y a continuacion absorbiendo cualquier medio residual de los pocillos con una toalla de papel. La microplaca se seco a temperatura ambiente (~21°C) durante 10 min. Se anadieron alfcuotas de 125 pl de disolvente (alcohol isopropflico:tetrahidrofurano:metanol:cloroformo, en una proporcion de 90:10:2,5:2,5 v/v), un estandar interno para fosfatidilcolina (PC) y un estandar interno para triacilglicerol (TG) a cada pocillo. La placa se sello y se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se transfirieron alfcuotas de 100 pl de la fase superior de cada pocillo a unos pocillos de una placa de pocillos profundos (2 ml por pocillo). El contenido de los pozos se analizo usando un analisis de espectrometna de masas. Ambos trioleinas se midieron con un solo resto ¹³CO-^{i 8}-oleato y POPC usando un procedimiento de cromatograffa lfquida/espectroscopfa de masas (LC/MS). El grado de incorporacion de un unico resto ¹³CO-^{i 8}-oleato en triolema, normalizado a la concentracion de 1 -palmitoil-2-oleoil-fosfatidilcolina (POPC) se uso como una medida de la actividad de DGAT2.

Se determino el valor IC⁵⁰para cada compuesto, usando un ajuste de curva logfstica de 4 parametros. La media geometrica para los valores IC⁵⁰calculados para los Ejemplos 1 y 2 se enumeran en la Tabla 2 a continuacion. Los datos enumerados en la Tabla 2 demuestran que ambos Ejemplos 1 y 2 inhiben la DGAT2 humana en un ensayo basado en celulas.

Tabla 2

Ensayo farmacodinamico in vivo

Este ensayo midio la potencia de los compuestos mediante la medicion de la reduccion de trigliceridos en plasma en ratones tratados con los compuestos de ensayo en comparacion con los animales de control tratados solo con la solucion de vehmulo. En este ensayo, se usaron ratones C57BL6 macho (de 10 a 11 semanas de edad, cada uno de aproximadamente 22 g de peso).

Los trigliceridos sintetizados en el Imgado se secretan a la circulacion como un componente de la lipoprotema de muy baja densidad (VLDL). Para prevenir la degradacion de los trigliceridos en circulacion por la Lipoprotema Lipasa (LPL), este ensayo usa una inyeccion IV de un detergente, tiloxapol, que inhibe la actividad de la LPL. Debido a que otra enzima, DGAT1, participa en la smtesis de los trigliceridos hepaticos, en este ensayo se usa tambien una dosis saturante de un inhibidor de DGAT1 ({trans-4-[4-(4-amino-7,7-dimetil-7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazin-6-il)fenil]ciclohexil}acetato de sodio, convencion de nomenclatura IUPAC ACDLABS, vease Dow et al. Bioorg. Y Med. Chem., (2011) 21(20), 6122-6128).

Se preparo una suspension del compuesto de ensayo (inhibidor de DGAT2) mezclado con el inhibidor de DGAT1 en un vehmulo adecuado, para asegurar la dosificacion de 10 ml/kg de suspension de compuesto y 3 mg/kg de dosis del inhibidor de DGAT1. En este conjunto de experimentos, el vehmulo es 1% de hidroxietilcelulosa, 0,25% de polisorbato 80 y 0,05% de antiespumante en agua purificada. Los ratones fueron sometidos a ayuno durante 4 horas antes del tratamiento. La suspension del compuesto de ensayo (inhibidor de DGAT2) se administro a los ratones de ensayo, mediante sonda, a 5 dosis comprendidas entre 0,1 y 10 mg/kg, junto con la dosis de 3 mg/kg del inhibidor de DGAT1. De manera similar, se administro solo vehmulo (10 ml/g) a un conjunto de ratones de control. Treinta minutos despues, se administro a cada raton, mediante inyeccion retroorbital, una dosis de 400 mg/kg de tiloxapol. Despues de 30 minutos adicionales, los ratones se sacrificaron con CO2.

La sangre se recogio a traves de una puncion cardfaca en un tubo que contema el anticoagulante EDTA. El plasma se recogio despues de la centrifugacion de la sangre a 3.000 g durante 10 minutos. Las muestras de plasma se congelaron en hielo seco hasta su analisis. Las muestras se descongelaron con hielo humedo. La concentracion de trigliceridos en el plasma se determino usando un analizador qmmico clmico automatizado. La reduccion en los trigliceridos totales en los ratones de ensayo se calculo con relacion a la concentracion de trigliceridos en los ratones de control. Los resultados para los Ejemplos 1 y 2 se enumeran a continuacion en la Tabla 3. Los datos en la Tabla 3 demuestran que los Ejemplos 1 y 2 reducen la concentracion de trigliceridos en plasma.

Tabla 3

Modelo de eficacia in vivo

Este ensayo midio la potencia de los compuestos mediante la medicion de la reduccion del colesterol de lipoprotemas de baja densidad (LDL-c), colesterol de lipoprotemas de muy baja densidad (VLDL-c) y trigliceridos (TG). En este ensayo, se usaron ratones machos, deficientes en receptores de LDL (29 semanas de edad, cada uno de aproximadamente 30 g de peso).

Los ratones deficientes en receptores de LDL se seleccionaron para ese ensayo para demostrar que cualquier reduccion medida de colesterol LDL se consiguio independientemente de la captacion de LDL mediada por el receptor de LDL en el hngado.

Los ratones se alimentaron con una dieta estandar de comida para ratones durante dos semanas antes de la administracion. Se preparo una solucion de ensayo para la alimentacion por sonda oral suspendiendo los compuestos en acacia a 0,3, 1 y 3 mg/ml. Los ratones se separaron en un grupo de ensayo y un grupo de control. Posteriormente, en el primer dfa de la tercera semana, los ratones en el grupo de ensayo recibieron dosis con la solucion de ensayo durante catorce dfas, BID. De manera similar, los ratones en el grupo de control recibieron dosis con solo el vehmulo sin ninguno de los compuestos de ensayo. Cuatro horas despues de la ultima dosis, los ratones se sacrificaron con CO2. La sangre se recogio inmediatamente mediante puncion cardfaca. El suero se aislo para medir los trigliceridos en suero, asf como el colesterol en fracciones de lipoprotemas individuales. Las fracciones de lipoprotemas se separaron mediante procedimientos de HPLC conocidos. La concentracion de colesterol asociada con cada fraccion de lipoprotema se determino mediante un procedimiento colorimetrico (Roche Cholesterol/HP Reagent 11875540), usando fracciones de lipoprotemas aisladas con concentraciones de colesterol conocidas como estandares. Los resultados obtenidos a la dosis mas alta, 30 mg/kg, BID, se expresaron como el porcentaje de cambio en comparacion con las concentraciones de LDL-c, VLDL-c y TG en suero en el grupo de ensayo con relacion a las de los ratones en el grupo de control. Los resultados para el Ejemplo 1 se enumeran en la Tabla 4. Los resultados demuestran que el Ejemplo 1 reduce las concentraciones de LDL-c, VLDL-c y TG en suero.

Tabla 4

Los resultados enumerados en la Tabla 5 demuestran que el Ejemplo 2 reduce tambien las concentraciones de LDL-c, VLDL-c y TG en suero. Para permitir la absorcion del Ejemplo 2 a la dosis de 30 mg/kg, ese compuesto se preparo como una mezcla seca 1:1 (p/p) con hidroxipropil metilcelulosa antes de la adicion al vehmulo de acacia.

Tabla 5

Un medico u otro personal medico podra determinar una cantidad efectiva del compuesto para el tratamiento de una persona que lo necesita. Las composiciones farmaceuticas preferentes pueden formularse como un comprimido o una capsula para la administracion oral. El comprimido o la capsula puede incluir un compuesto de la presente invencion en una cantidad eficaz para el tratamiento de un paciente que necesite tratamiento para enfermedad cardiovascular, dislipidemia, aterosclerosis o hipertrigliceridemia.

Los compuestos ejemplificados de la presente invencion pueden usarse solos o combinados con uno o mas agentes terapeuticos adicionales.

Los compuestos ejemplificados pueden combinarse con agentes terapeuticos adicionales usados para tratar enfermedades cardiovasculares, tales como: niacina, aspirina, estatinas, inhibidores de CETP y fibratos. Los ejemplos de estatinas incluyen atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina. Los ejemplos de fibratos incluyen bezafibrato, ciprofibrato, clofibrato, gemfibrozilo y fenofibrato.

Los compuestos ejemplificados y el agente o los agentes terapeuticos adicionales pueden administrarse juntos a traves de la misma ruta y dispositivo de administracion, tal como una unica pfldora, capsula o comprimido; o pueden administrarse por separado bien al mismo tiempo en dispositivos de administracion separados o bien secuencialmente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Formula:

en la que R es H o -CH³, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

2. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R es H, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

3. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R es -CH³, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

4. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos uno de entre un vehfculo o un excipiente farmaceuticamente aceptable.

5. Un procedimiento de preparacion de un compuesto de Formula:

en la que R es H o -CH³y

R1 es H o un grupo protector de nitrogeno, comprendiendo dicho procedimiento:

hacer reaccionar un compuesto de Formula 3

con un compuesto de Formula 4 a continuacion:

6. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en terapia.

7. Un compuesto para su uso segun la reivindicacion 6, en el que dicha terapia es el tratamiento de enfermedad cardiovascular, dislipidemia, aterosclerosis o hipertrigliceridemia.