ES2702374T3 - Lípido novedoso - Google Patents

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ES2702374T3
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Makoto Koizumi
Yoshiyuki Onishi
Takako Niwa
Masakazu Tamura
Yuji Kasuya
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Abstract

Un lípido catiónico representado por la fórmula general (Ia) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables:**Fórmula** en la que cada uno de R1 y R2 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α, un grupo alquenilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α, un grupo alquinilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α, o un grupo cicloalquilo C3-C7 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α o R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros junto con el átomo de nitrógeno unido a los mismos, en el que el anillo heterocíclico opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α y que opcionalmente contiene uno o más átomos seleccionados entre un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un átomo de azufre, además del átomo de nitrógeno unido a R1 y R2, como átomos que constituyen el anillo heterocíclico; R8 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes α; o R1 y R8 juntos representan el grupo -(CH2)q-; el grupo de sustituyentes α representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo hidroxi, un grupo sulfanilo, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alquilamino C1-C6 y un grupo alcanoilo C1-C7; L1 representa un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1 o un grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1; L2 representa, independientemente de L1, un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo (alcoxi C10-C24)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo (alquenil C10-C24)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1, un grupo (alquinil C3-C24 )oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1 o un grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alcoxi C1-C10)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1; el grupo de sustituyentes ß1 representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7, un grupo alcanoiloxi C1-C7, un grupo alcoxialcoxi C3-C7, un grupo (alcoxi C1- C6)carbonilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carboxilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carbamoílo y un grupo (alquilamino C1- C6)carboxilo; Q representa un grupo representado por la siguiente fórmula (II):**Fórmula** cuando cada uno de L1 y L2 tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1 y el grupo de sustituyentes ß1 es un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7 o un grupo alcanoiloxi C1-C7, el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1 en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes ß1 en L2 opcionalmente se unen entre sí para formar una estructura cíclica; k representa 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7;

Description

DESCRIPCIÓN
Lípido novedoso
Campo técnico
La presente invención se refiere a un novedoso lípido catiónico, un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica, una partícula lipídica que comprende el lípido catiónico, una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende la partícula lipídica junto con un ácido nucleico, una composición farmacéutica que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico como principio activo, y un procedimiento de tratamiento que utiliza la composición farmacéutica.
Antecedentes de la técnica
Los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en las células, tejidos o individuos incluyen un enfoque en el que ARN bicatenario se introduce en las células, tejidos o individuos. Mediante esta introducción de ARN bicatenario, el ARNm que tiene homología con la secuencia se degrada, de forma que la expresión del gen diana queda inhibida. Este efecto se denomina "interferencia de ARN" o "ARNi". La interferencia de ARN se notificó inicialmente C. elegans por ejemplo, la Referencia no de patente 1) y posteriormente también se ha notificado en plantas (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 2).
Se ha notificado que el ARN bicatenario que consiste en hebras de 21 nucleótidos de sentido directo y de sentido contrario que tienen un saliente de 2 nucleótidos en el extremo 3' (ARN interferente pequeño: ARNip) tiene un efecto de interferencia del ARN en células de vertebrados cultivadas (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 3). El ARNip se considera de utilidad para la identificación de funciones génicas, cribado de líneas celulares adecuadas para la producción de sustancias útiles, regulación de genes implicados en enfermedades, etc., pero, de manera característica, se degrada fácilmente con RNasa (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 4).
Puesto que un polinucleótido bicatenario tal como ARNip o ARNip modificado es una molécula que tiene un peso molecular de aproximadamente 13.000, solubilidad en agua, y carga eléctrica, se utiliza de forma general una técnica de administración tal como un reactivo de transfección para permitir que polinucleótido bicatenario permee una membrana celular (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 5). Particularmente, los liposomas se utilizan ampliamente en la administración de moléculas de ácido nucleico mediante la encapsulación de una molécula de ácido nucleico tal como un ADN plásmido en un liposoma para formar una partícula lipídica de ácido nucleico (véase por ejemplo, la Referencia no de patente 6). Además, se ha notificado que un liposoma que contiene un lípido catiónico es capaz de suministrar ARNip a células, mediante la formación de una partícula lipídica de ácido nucleico por mezclado con el ARNip (véase, por ejemplo, la Referencia de patente 1). El lípido catiónico, sin embargo, es un componente no biológico. A este respecto, se ha solicitado un lípido catiónico que se pueda usar a baja concentración. Un derivado de ácido dimetilaminovalérico (Referencia de patente 1), un derivado de ácido dimetilaminobutírico (Referencia de patente 2), un derivado de dimetilaminoetilcarbonato (Referencia de patente 3), o similares se conocen como el lípido catiónico.
Los presentes inventores han llevado a cabo esmerados estudios para obtener una partícula lipídica que consiste en un lípido catiónico que pueda encapsular en su interior una molécula de ácido nucleico tal como un polinucleótido bicatenario (por ejemplo, ARNip), ADN, o un oligonucleótido de sentido contrario y se puede usar a baja concentración. Como resultado, los presentes inventores han completado la presente invención descubriendo un novedoso lípido catiónico y han descubierto además una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende el novedoso lípido catiónico que puede encapsular en su interior una molécula de ácido nucleico, que se puede usar a baja concentración, y permite un elevado nivel de administración a las células.
Listado de citas
Referencias de patente
Referencia de patente 1: Publicación internacional n.° WO 2012/108397
Referencia de patente 2: Publicación internacional n.° WO 2012/054365
Referencia de patente 3: Publicación internacional n.° WO 2010/054405
Referencias no de patente
Referencia no de patente 1: Nature, 1998, Vol. 391, p. 806-811
Referencia no de patente 2: Science, 1999, Vol. 286, p. 950-952
Referencia no de patente 3: Nature, 2001, Vol. 411, p. 494-498
Referencia no de patente 4: Clinical Chemistry, 2002, Vol. 48, p. 1647-1653
Referencia no de patente 5: Journal of Medicinal Chemistry, 2010, Vol. 57, p. 7887-7901
Referencia no de patente 6: Gene Therapy 1999, Vol. 6, p. 271-281
Sumario de la invención
Problema técnico
Un objeto de la presente invención es proporcionar un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica. Otro objeto de la presente invención es proporcionar un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica junto con un lípido anfipático, un esterol, y un lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar una partícula lipídica que comprende el lípido catiónico. Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende la partícula lipídica y adicionalmente un ácido nucleico.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionan una composición farmacéutica que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico como principio activo.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un procedimiento de tratamiento que utiliza la composición farmacéutica.
Solución al problema
Específicamente, la presente invención proporciona:
(1) Un lípido catiónico representado por la fórmula general (Ia) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable:
[Fórmula 1]
Figure imgf000003_0001
en el que
cada uno de R1 y R2 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquenilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquinilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o un grupo cicloalquilo C3-C7 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros con el átomo de nitrógeno unido a los mismos, en el que el anillo heterocíclico opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a y que opcionalmente contiene uno o más átomos seleccionados entre un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un átomo de azufre, además del átomo de nitrógeno unido a R1 y R2, como átomos que constituyen el anillo heterocíclico;
R8 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; el grupo de sustituyentes a representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo hidroxi, un grupo sulfanilo, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alquilamino C1-C6 y un grupo alcanoilo C1-C7;
L1 representa un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C1o)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1; L2 representa, independientemente de L1, un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquil C rC 1oMQ)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alcoxi C10-C24)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquenil C10-C24)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquinil C3-C24)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C rC 1oMQ)k-(alcoxi C1-C10) metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes (31;
el grupo de sustituyentes p1 representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7, un grupo alcanoiloxi C1-C7, un grupo alcoxialcoxi C3-C7, un grupo (alcoxi C1-C6)carbonilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carboxilo, un grupo (alcoxi C1-C6) carbamoílo y un grupo (alquilamino C1-C6}carboxilo;
Q representa un grupo representado por la siguiente fórmula (II):
[Fórmula 2]
Figure imgf000004_0001
cuando cada uno de L1 y L2 tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 y el grupo de sustituyentes p1 es un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7 o un grupo alcanoiloxi C1-C7, el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 en L2 opcionalmente se unen entre sí para formar una estructura cíclica;
k representa 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7;
m representa 0 o 1;
p representa 0, 1 o 2;
q representa 1,2, 3 o 4 y
r representa 0, 1,2 o 3,
siempre que p r sea 2 o más o q r sea 2 o más;
(2) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
(3) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que cada uno de R1 y R2 are es independientemente un grupo alquilo C1-C3;
(4) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que tanto R1 como R2 son grupos metilo;
(5) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina, piperidina, azepano, dihidropirrol, dihidropiridina, tetrahidropiridina, piperazina, morfolina, dihidrooxazol o dihidrotiazol que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, junto con el átomo de nitrógeno al que está unido;
(6) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina, piperidina o morfolina que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, junto con el átomo de nitrógeno al que está unido;
(7) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina o morfolina junto con el átomo de nitrógeno al que está unido;
(8) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; p q es 2, 3 o 4 y R2 es un grupo alquilo C1-C3 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
(9) El lípido catiónico de acuerdo con (8) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R2 es un grupo alquilo C1-C3;
(10) El lípido catiónico de acuerdo con (8) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R2 es un grupo metilo;
(11) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (10) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L1 es un grupo alquilo C17-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 , un grupo alquenilo C17-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C4)-(Q)k-(alquilo C4-C9) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 y k es 1, 2 o 3;
(12) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (10) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L1 es un grupo heptadecenilo, un grupo octadecenilo, un grupo nonadecenilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo o un grupo nonadecatrienilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1;
(13) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (10) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L1 es un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo o un grupo cis-6,9,12octadecatrienilo (grupo linolenilo);
(14) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (13) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L2 es un grupo alquilo C10-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquil C1-C4)-(Q)k-(alquilo C4-C9) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C1o)-(Q)k-(alcoxi C1-C1o)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 y k es 1, 2 o 3;
(15) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (13) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L2 es un grupo decilo, un grupo decenilo, un grupo undecilo, un grupo undecenilo, un grupo dodecilo, un grupo dodecenilo, un grupo decadienilo, un grupo undecadienilo, un grupo dodecadienilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo, un grupo nonadecatrienilo, un grupo deciloximetilo, un grupo deceniloximetilo, un grupo undeciloximetilo, un grupo undeceniloximetilo, un grupo dodeciloximetilo, un grupo dodeceniloximetilo, un grupo decadieniloximetilo, un grupo undecadieniloximetilo, un grupo dodecadieniloximetilo, un grupo heptadecadieniloximetilo, un grupo octadecadieniloximetilo, un grupo nonadecadieniloximetilo, un grupo heptadecatrieniloximetilo, un grupo octadecatrieniloximetilo o un grupo nonadecatrieniloximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1;
(16) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (13) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que L2 es un grupo decilo, un grupo cis-7-decenilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo, un grupo cis-6,9,12-octadecatrienilo (grupo linolenilo), un grupo deciloximetilo, un grupo cis-7-deceniloximetilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo cis-9-octadeceniloximetilo (grupo oleiloximetilo), un grupo cis-8,11-heptadecadieniloximetilo, un grupo cis-9,12-octadecadieniloximetilo (grupo linoleiloximetilo), un grupo cis-10,13-nonadecadieniloximetilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrieniloximetilo (grupo linoleniloximetilo);
(17) El lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (16) o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, en el que m es 0;
(18) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que tanto R1 como R2 son grupos metilo; R8 es un átomo de hidrógeno; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p r es 2; y m es 0;
(19) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 2 ; q es 2 ; r es 0; y m es 0;
(20) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 1 ; q es 2 o 3; r es 1; y m es 0;
(21) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 0; q es 3 o 4; r es 2; y m es 0;
(22) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 3]
Figure imgf000006_0001
(23) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 4]
Figure imgf000006_0002
(24) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
Figure imgf000006_0003
(25) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
Figure imgf000006_0004
(26) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
Figure imgf000006_0005
(27) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 8]
Figure imgf000007_0001
(28) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 9]
Figure imgf000007_0002
(29) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 10]
Figure imgf000007_0003
(30) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 11]
Figure imgf000007_0004
(31) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 12]
Figure imgf000007_0005
(32) El lípido catiónico de acuerdo con (1) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el que el lípido catiónico está representado por la fórmula:
[Fórmula 13]
Figure imgf000008_0001
(33) Una partícula lipídica comprende al menos un lípido catiónico de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (32); (34) La partícula lipídica de acuerdo con (33), que además comprende una agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica;
(35) La partícula lipídica de acuerdo con (34), en la que la agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica es un PEG-lípido;
(36) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA) o metoxipolietilenglicol 1,2-dimiristoil-sn-glicerol;
(37) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA);
(38) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dipalmitiloxipropil-3-amina (PEG-C-DPA) o 1,2-dipalmitoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol;
(39) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dipalmitiloxipropil-3-amina (PEG-C-DPA);
(40) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-diesteariloxipropil-3-amina (PEG-C-DSA) o metoxipolietilenglicol 1,2-diestearoil-sn-glicerol;
(41) La partícula lipídica de acuerdo con (35), en la que el PEG-lípido es N-[metoxipoli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-diesteariloxipropil-3-amina (PEG-C-DSA);
(42) La partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de (35) a (41), en la que el PEG tiene un peso molecular de 1.000 a 5.000;
(43) La partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de (35) a (41), en la que el PEG tiene un peso molecular de 1.800 a 2.200;
(44) La partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de (33) a (43), que además comprende un esterol;
(45) La partícula lipídica de acuerdo con (44), en la que el esterol es colesterol;
(46) La partícula lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones (33) a (45), que además comprende un lípido anfipático;
(47) La partícula lipídica de acuerdo con (46), en la que el lípido anfipático es al menos uno cualquiera seleccionado entre diestearoil-fosfatidilcolina (DSPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), 1 -palmitoil-2-oleoilfosfatidilcolina (POPC), dioleoilfosfatidiletanolamina (Do PE) y esfingomielina (SM); (48) La partícula lipídica de acuerdo con (46), en la que el lípido anfipático es diestearoilfosfatidilcolina (DSPC) o dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC);
(49) La partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos (46) a (48), en la que la composición lipídica del lípido anfipático, el esterol, el lípido catiónico, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica supone el 25% o menos del lípido anfipático, 15% o más del esterol, de 20% al 70% del lípido catiónico, y de 1% al 10% del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, en términos de cantidad molar;
(50) La partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos (46) a (48), en la que la composición lipídica del lípido anfipático, el esterol, el lípido catiónico, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica supone el 15% o menos del lípido anfipático, 32% o más del esterol, de 45% al 65% del lípido catiónico, y de 1,5% al 3% del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, en términos de cantidad molar;
(51) Una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende una partícula lipídica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos (33) a (50) y un ácido nucleico;
(52) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con el punto (51), en la que el ácido nucleico es uno cualquiera seleccionado entre el grupo que consiste de un ADN monocatenario, un ARN monocatenario, un polinucleótido monocatenario de un ADN y un ARN mezclado entre sí, un ADN bicatenario, un ARN bicatenario, un polinucleótido híbrido de ADN-ARN, y dos polinucleótidos de ADN y ARN mezclados entre sí;
(53) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con el punto (51), en la que el ácido nucleico es un polinucleótido monocatenario o bicatenario que tiene un efecto de interferencia del a RN;
(54) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con el punto (51), en la que el ácido nucleico es un ARN monocatenario;
(55) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (54), en la que la relación entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) es de 2,0 a 9,0;
(56) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (54), en la que la relación entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) es de 3,0 a 9,0;
(57) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (56), en la que el tamaño promedio de partícula es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 300 nm;
(58) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (56), en la que el tamaño promedio de partícula es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 200 nm;
(59) La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (56), en la que el tamaño promedio de partícula es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 100 nm;
(60) Una composición farmacéutica que comprende una partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (59) como principio activo;
(61) La composición farmacéutica de acuerdo con el punto (60), en la que la composición farmacéutica está prevista para el tratamiento o prevención de una enfermedad derivada de la expresión de un gen diana;
(62) La composición farmacéutica de acuerdo con el punto (60), en la que la enfermedad derivada de la expresión del gen diana es cáncer, enfermedad hepática, enfermedad de la vesícula, fibrosis, anemia, o enfermedad genética;
(63) Un procedimiento para inhibir la expresión de un gen diana, que comprende administrar una partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (59) a un mamífero;
(64) Un procedimiento para tratar o prevenir una enfermedad derivada de la expresión de un gen diana, que comprende administrar una partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con uno cualquiera del punto (51) al (59) a un mamífero;
(65) El procedimiento de acuerdo con el punto (64), en el que la enfermedad derivada de la expresión de un gen diana es cáncer; y
(66) Un lípido catiónico representado por la fórmula general (I):
[Fórmula 14]
Figure imgf000009_0001
en el que
cada uno de R1 y R2 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquenilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquinilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o un grupo cicloalquilo C3-C7 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros con el átomo de nitrógeno unido a los mismos, en el que el anillo heterocíclico opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a y que opcionalmente contiene uno o más átomos seleccionados entre un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un átomo de azufre, además del átomo de nitrógeno unido a R1 y R2, como átomos que constituyen el anillo heterocíclico; cada uno de R3 y R4 independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o R3 y R4 forman un anillo de hidrocarburo de 3 a 10 miembros junto con el átomo de carbono al que está unido o R1 forma un anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros junto con el átomo de nitrógeno unido a R1,
R3 y el átomo de carbono unido a R3, en el que el anillo heterocíclico opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a y que opcionalmente contiene uno o más átomos seleccionados entre un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un átomo de azufre, además del átomo de nitrógeno unido a R1, como átomos que constituyen el anillo heterocíclico;
cada uno de R2 y R4 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquenilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o un grupo alquinilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
cada uno de R5 y R6 independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3;
R7 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
el grupo de sustituyentes a representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo hidroxi, un grupo sulfanilo, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alquilamino C1-C6 y un grupo alcanoilo C1-C7;
cada uno de L1 y L2 independientemente representa un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, o un grupo (alquil C1-C1o)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p;
grupo de sustituyentes p representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo hidroxi, un grupo sulfanilo, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7, un grupo alcanoiloxi C1-C7, un grupo alcoxialcoxi C3-C7, un grupo alcoxicarbonilo C1-C6, un grupo alcoxicarboxilo C1-C6, un grupo alcoxicarbamoílo C1-C6 y un grupo alquilaminocarboxilo C1-C6;
Q representa un grupo representado por la siguiente fórmula (II):
[Fórmula 15]
Figure imgf000010_0001
cuando cada uno de L1 y L2 tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p y el grupo de sustituyentes p es un grupo sulfanilo, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7 o un grupo alcanoiloxi C1-C7, el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L2 opcionalmente se unen entre sí para formar una estructura cíclica;
k representa un número entero de 1 a 7;
m representa un número entero de 0 o 1 y
n representa un número entero de 3 a 6.
Efectos ventajosos de la invención
La presente invención puede proporcionar un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica.
La presente invención también puede proporcionar un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica junto con un lípido anfipático, un esterol, y un lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica.
La presente invención puede proporcionar además una partícula lipídica que comprende el lípido catiónico.
La presente invención puede proporcionar además una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende la partícula lipídica y además un ácido nucleico.
La presente invención puede proporcionar además una composición farmacéutica que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico como principio activo.
La presente invención puede proporcionar además un procedimiento para tratar una enfermedad usando la composición farmacéutica.
Breve descripción de los dibujos
[Figura 1] La Figura 1 es un diagrama que resume un procedimiento para producir un intermedio (A5) para su uso en la síntesis de un lípido catiónico representado por la fórmula (I).
[Figura 2] La Figura 2 es un diagrama que resume un procedimiento B para su uso en la síntesis del lípido catiónico representado por la fórmula (I).
[Figura 3] La Figura 3 es un diagrama que resume un procedimiento C para su uso en la síntesis del lípido catiónico representado por la fórmula (I).
[Figura 4] La Figura 4 es un diagrama que muestra la estructura de cada ácido nucleico que tiene una estructura bicatenaria entre los ácidos nucleicos que constituyen partículas lipídicas de ácido nucleico. En el diagrama, las secuencias superiores representan secuencias de sentido directo, y las secuencias inferiores representan secuencias de sentido contrario. Para los símbolos, el cuadrado sin rellenar (□) representa un ARN, el círculo relleno ( • ) representa un ADN, y el círculo sin rellenar (o) representa un 2'-O-metil ARN. La línea entre los símbolos representa un enlace fosfodiéster entre los nucleósidos. En el diagrama, p representa -P(=O)(OH)-. Cuando p está unido, un átomo de hidrógeno del grupo hidroxi final del polinucleótido se elimina. Cuando el extremo del polinucleótido no está unido, el extremo 3' o 5' del ARN, el a Dn , o el 2'-O-metil ARN es un grupo OH. X representa un compuesto que modifica el extremo 5' de una hebra de sentido contrario descrito en el párrafo "3-4-2. Polinucleótido bicatenario modificado" de la memoria descriptiva. "enlazador" significa un polinucleótido enlazador descrito en el párrafo "3-4-3. Polinucleótido monocatenario modificado" de la memoria descriptiva.
[Figura 5] La Figura 5 es un diagrama que muestra la actividad inhibidora de la expresión de PLK-1 mostrada, en tumor, por una partícula lipídica de ácido nucleico que tiene un compuesto del Ejemplo 19, 45, o 54 del Ejemplo de ensayo 10.
[Figura 6] La Figura 6 es un diagrama que muestra que una partícula lipídica de ácido nucleico que contiene un compuesto del Ejemplo 8 en el Ejemplo de ensayo 11 fomenta la expresión del ARNm. Los recuadros superiores representan imágenes de núcleos teñidos con Hoechst, y los recuadros inferiores representan imágenes de mCherry.
Descripción de las realizaciones
A partir de ahora en el presente documento, las realizaciones la presente invención se describirán detalladamente.
1. Lípido catiónico
El lípido catiónico desvelado en la presente memoria descriptiva se puede usar solo y se puede usar junto con una sustancia adicional. Por ejemplo, el lípido catiónico se puede usar como un componente que constituye una partícula lipídica y se puede usar como un componente que constituye una partícula lipídica de ácido nucleico.
1 - 1. Definición de grupo
En la presente invención, el "lípido catiónico" es un lípido, en el que algunas moléculas tienen una carga neta positiva de acuerdo con la pKa del lípido a un pH seleccionado tal como pH fisiológico. El lípido catiónico de la presente invención es un lípido que puede ionizarse (lípido ionizable) y difiere de un lípido catiónico en que tiene una amina cuaternaria, que es un lípido, en el que todas las moléculas tienen una carga neta positiva a cualquier pH (por ejemplo, cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODAC)).
El "grupo alquilo C1-C6" en las definiciones de R1, R2, R3, R4, R7, R8, el grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo n-butilo, un grupo sec-butilo, un grupo ferc-butilo, un grupo n-pentilo, un grupo isopentilo, un grupo 2-metilbutilo, un grupo neopentilo, un grupo 1 -etilpropilo, un grupo n-hexilo, un grupo 4-metilpentilo, un grupo 3-metilpentilo, un grupo 2-metilpentilo, un grupo 1 -metilpentilo, un grupo 3,3-dimetilbutilo, un grupo 2,2-dimetilbutilo, un grupo 1,1 -dimetilbutilo, un grupo 1,2-dimetilbutilo, un grupo 1,3-dimetilbutilo, un grupo 2,3-dimetilbutilo y un grupo 2-etilbutilo. Preferentemente, el grupo alquilo C1-C6 es un grupo alquilo C1-C4, más preferentemente un grupo alquilo C1-C3.
El "grupo alquilo C1-C3" en las definiciones de R1, R2, R3, R5, y R6 se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene de 1 a 3 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo y un grupo isopropilo. Preferentemente, el grupo C1-C3 es un grupo metilo.
El "grupo alquenilo C2-C6" en las definiciones de R1, R2 y R4 se refiere a un grupo alquenilo lineal o ramificado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo vinilo, un grupo 1-propenilo, un grupo 2- propenilo, un grupo isopropenilo, un grupo 1-metil-2-propenilo, un grupo 2-metil-2-propenilo, un grupo 1 -butenilo, un grupo 2-butenilo, un grupo 3-butenilo, un grupo 2-metil-1-propenilo, un grupo 1-pentenilo, un grupo 4-pentenilo, un grupo 1-metil-4-pentenilo y un grupo 5-hexenilo.
El "grupo C2-C6 alquinilo" en las definiciones de R1, R2 y R4 se refiere a un grupo alquinilo lineal o ramificado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono. Ejemplos del mismo puede incluir un grupo etinilo, un grupo 1 -propinilo, un grupo 2-propinilo, un grupo 1 -metil-2-propinilo, un grupo 1 -butinilo, un grupo 2-butinilo, un grupo 3-butinilo, un grupo 1-pentinilo, un grupo 4-pentinilo, un grupo 1-metil-4-pentinilo y un grupo 5-hexinilo.
El "grupo cicloalquilo C3-C7" en las definiciones de R1 y R2 se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo ciclopropilo, un grupo ciclobutilo, un grupo ciclopentilo, un grupo ciclohexilo y un grupo cicloheptilo.
El "anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros" en las definiciones de R1, R2 y R3 se refieren a un grupo heterocíclico monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros saturado o parcialmente insaturado que contiene al menos un átomo de nitrógeno y opcionalmente contiene además uno o más átomos seleccionados entre el grupo que consiste en un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno. Ejemplos del mismo pueden incluir azetidina, pirrolidina, piperidina, azepano, dihidropirrol, dihidropiridina, tetrahidropiridina, piperazina, morfolina, dihidrooxazol y dihidrotiazol. El anillo heterocíclico formado por R1 y R2 junto con el átomo de nitrógeno unido a los mismos es preferentemente azetidina, pirrolidina o morfolina. El anillo heterocíclico formado por R1 junto con el átomo de nitrógeno unido a R1, R3, y el átomo de carbono unido a R3 es preferentemente azetidina, pirrolidina, piperidina o morfolina.
El "anillo de hidrocarburo de 3 a 10 miembros" en las definiciones de R3 y R4 se refiere a un grupo de anillo de hidrocarburo saturado que tiene de 3 a 10 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo ciclopropilo, un grupo ciclobutilo, un grupo ciclopentilo, un grupo ciclohexilo, un grupo cicloheptilo, un grupo ciclooctilo, un grupo ciclononilo y un grupo ciclodecanilo.
El "átomo de halógeno" en las definiciones del grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p es un átomo de flúor, un átomo de cloro, un átomo de bromo o un átomo de yodo y preferentemente es un átomo de flúor.
El "grupo alquilo C1-C6 halogenado" en las definiciones del grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que uno o dos átomos de hidrógeno en el "grupo alquilo C1-C6" descrito anteriormente se sustituyen con el "átomo de halógeno" descrito anteriormente. Ejemplos de los mismos incluyen un grupo fluorometilo, un grupo clorometilo, un grupo 1 -fluoroetilo, un grupo 1 -cloroetilo, un grupo 2-fluoroetilo y un grupo 1,2-difluoropropilo. El grupo alquilo C1-C6 halogenado es preferentemente un grupo alquilo C1-C4 halogenado, más preferentemente un grupo alquilo C1-C3 halogenado.
El "grupo alcoxi C1-C6" en las definiciones del grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alquilo C1-C6" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno. Ejemplos de los mismos incluyen un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi, un grupo n-butoxi, un grupo s-butoxi, un grupo ferc-butoxi y un grupo n-pentoxi. El grupo alcoxi C1-C6 es preferentemente un grupo alcoxi C1-C4, más preferentemente un grupo alcoxi C1-C2.
El "grupo alquilsulfanilo C1-C6" en las definiciones del grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alquilo C1-C6" descrito anteriormente está unido a un átomo de azufre. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metilsulfanilo, un grupo etilsulfanilo, un grupo n-propilsulfanilo, un grupo n-butilsulfanilo, un grupo s-butilsulfanilo, un grupo ferc-butilsulfanilo y un grupo n-pentilsulfanilo. El grupo C1-C6 alquilsulfanilo es preferentemente un grupo alquilsulfanilo C1-C4, más preferentemente un grupo alquilsulfanilo C1-C2.
El "grupo alquilamino C1-C6" en la definición del grupo de sustituyentes a se refiere a un grupo en el que "grupo alquilo C1-C6" descrito anteriormente está unido a un átomo de nitrógeno. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metilamino, un grupo etilamino, un grupo n-propilamino, un grupo n-butilamino, un grupo s-butilamino, un grupo ferc-butilamino, un grupo n-pentilamino, un grupo n-hexilamino, un grupo N,N-dimetilamino, un grupo N,N-dietilamino, un grupo N,N-din-propilamino, un N,N-diisopropilamino, un grupo N,N-di-n-butilamino, un grupo N,N-diisobutilamino, un grupo N,N-di-s-butilamino y un grupo N,N-di-ferc-butilamino. El grupo alquilamino C1-C6 es preferentemente un grupo alquilamino C1-C4, más preferentemente un grupo alquilamino C1-C2.
El "grupo alcanoilo C1-C7" en las definiciones del grupo de sustituyentes a y el grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo alcanoilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo formilo, un grupo acetilo, un grupo propionilo, un grupo butirilo, un grupo isobutirilo, un grupo pentanoilo, un grupo pivaloilo, un grupo valerilo, un grupo isovalerilo, un grupo hexanoilo y un grupo heptanoilo.
El "grupo alcanoiloxi C1-C7" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alcanoilo C1-C7" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo formiloxi, un grupo acetiloxi, un grupo propioniloxi, un grupo butiriloxi, un grupo isobutiriloxi, un grupo pentanoiloxi, un grupo pivaloiloxi, un grupo valeriloxi, un grupo isovaleriloxi, un grupo hexanoiloxi y un grupo heptanoiloxi.
El "grupo alcoxialcoxi C3-C7" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que uno o dos átomos de carbono de un alcano lineal, ramificado o cíclico que tiene de 3 a 7 átomos de carbono se sustituyen con un átomo de oxígeno y el grupo resultante se une además con un átomo de oxígeno (excepto para peróxido). Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metoximetoxi, un grupo etoximetoxi, un grupo etoxietoxi, un grupo 2-tetrahidrofuranoiloxi y un grupo 2-tetrahidropiraniloxi.
El "grupo (alcoxi C1-C6)carbonilo" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alcoxi C1-C6" descrito anteriormente está unido a un grupo carbonilo. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metoxicarbonilo, un grupo etoxicarbonilo, un grupo propoxicarbonilo, un grupo isopropoxicarbonilo, un grupo butoxicarbonilo, un grupo isobutoxicarbonilo, un grupo sec-butoxicarbonilo, un grupo ferc-butoxicarbonilo, un grupo pentiloxicarbonilo y un grupo hexiloxicarbonilo.
El "grupo (alcoxi C1-C6)carboxilo" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alcoxi C1-C6" descrito anteriormente está unido a un grupo carboxilo. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metoxicarboxilo, un grupo etoxicarboxilo, un grupo propoxicarboxilo, un grupo isopropoxicarboxilo, un grupo butoxicarboxilo, un grupo isobutoxicarboxilo, un grupo sec-butoxicarboxilo, un grupo ferc-butoxicarboxilo, un grupo pentiloxicarboxilo y un grupo hexiloxicarboxilo.
El "grupo alcoxi (C1-C6)carbamoílo" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alcoxi C1-C6" descrito anteriormente está unido a un grupo carbamoílo. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metoxicarbamoílo, un grupo etoxicarbamoílo, un grupo propoxicarbamoílo, un grupo isopropoxicarbamoílo, un grupo butoxicarbamoílo, un grupo isobutoxicarbamoílo, un grupo sec-butoxicarbamoílo, un grupo ferc-butoxicarbamoílo, un grupo pentiloxicarbamoílo y un grupo hexiloxicarbamoílo.
El "grupo (alquilamino C1-C6)carboxilo" en la definición del grupo de sustituyentes p se refiere a un grupo en el que el "grupo alquilamino C1-C6" descrito anteriormente está unido a un grupo carboxilo. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo metilaminocarboxilo, un grupo etilaminocarboxilo, un grupo n-propilaminocarboxilo, un grupo nbutilaminocarboxilo, un grupo s-butilaminocarboxilo, un grupo ferc-butilaminocarboxilo, un grupo npentilaminocarboxilo, un grupo n-hexilaminocarboxilo, un grupo N,N-dimetilaminocarboxilo, un grupo N,N-dietilaminocarboxilo, un grupo N,N-di-n-propilaminocarboxilo, un grupo N,N-diisopropilaminocarboxilo, un grupo N,N-di-n-butilaminocarboxilo, un grupo N,N-diisobutilaminocarboxilo, un grupo N,N-di-s-butilaminocarboxilo y un grupo N,N-di-ferc-butilaminocarboxilo.
El "grupo alquilo C10-C24" en las definiciones de L1 y L2 se refiere a un grupo alquilo lineal que tiene de 10 a 24 átomos de carbono. Ejemplos del mismo pueden incluir un grupo decilo, un grupo undecilo, un grupo dodecilo, un grupo tridecilo, un grupo tetradecilo, un grupo pentadecilo, un grupo hexadecilo, un grupo heptadecilo, un grupo octadecilo, un grupo nonadecilo, un grupo icosilo, un grupo henicosilo, un grupo docosilo, un grupo tricosilo y un grupo tetracosilo. El "grupo alquilo C10-C24" representado por L1 es preferentemente un grupo heptadecilo, un grupo octadecilo o un grupo nonadecilo. El "grupo alquilo C10-C24" representado por L2 es preferentemente un grupo decilo, un grupo undecilo o un grupo dodecilo.
El "grupo alquenilo C10-C24" en las definiciones de L1 y L2 se refiere a un grupo alquenilo lineal que tiene de 10 a 24 átomos de carbono. El "grupo alquenilo C10-C24" en la presente solicitud incluye uno cualquiera de un grupo alcadienilo C10-C24, un grupo alcatrienilo C10-C24 y un grupo alcatetraenilo C10-C24. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo decenilo, un grupo undecenilo, un grupo dodecenilo, un grupo tridecenilo, un grupo tetradecenilo, un grupo pentadecenilo, un grupo hexadecenilo, un grupo heptadecenilo, un grupo octadecenilo, un grupo nonadecenilo, un grupo icosenilo, un grupo henicosenilo, un grupo docosenilo, un grupo tricosenilo, un grupo tetracosenilo, un grupo decadienilo, un grupo undecadienilo, un grupo dodecadienilo, un grupo tridecadienilo, un grupo tetradecadienilo, un grupo pentadecadienilo, un grupo hexadecadienilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo icosadienilo, un grupo henicosadienilo, un grupo docosadienilo, un grupo tricosadienilo, un grupo tetracosadienilo, un grupo decatrienilo, un grupo undecatrienilo, un grupo dodecatrienilo, un grupo tridecatrienilo, un grupo tetradecatrienilo, un grupo pentadecatrienilo, un grupo hexadecatrienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo, un grupo nonadecatrienilo, un grupo icosatrienilo, un grupo henicosatrienilo, un grupo docosatrienilo, un grupo tricosatrienilo y un grupo tetracosatrienilo. El "grupo alquenilo C10-C24" representado por L1 es preferentemente un grupo heptadecenilo, un grupo octadecenilo, un grupo nonadecenilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo o un grupo nonadecatrienilo. L1 es preferentemente un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrienilo (grupo linolenilo). El "grupo alquenilo C10-C24" representado por L2 es preferentemente un grupo decenilo, un grupo undecenilo, un grupo dodecenilo, un grupo heptadecenilo, un grupo octadecenilo, un grupo decadienilo, un grupo undecadienilo, un grupo dodecadienilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo o un grupo nonadecatrienilo. L2 es preferentemente un grupo cis-7-decenilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrienilo (grupo linolenilo).
El "grupo alquinilo C3-C24" en las definiciones de L1 y L2 se refiere a un grupo alquinilo lineal que tiene de 3 a 24 átomos de carbono. El "grupo alquinilo C3-C24" en la presente solicitud incluye uno cualquiera de un grupo alcadiinilo C3-C24, un grupo C3-C24 y un grupo alcatetrainilo C3-C24. El grupo alquinilo C3-C24 es, por ejemplo, un grupo propinilo, un grupo butinilo, un grupo pentinilo, un grupo hexinilo, un grupo heptinilo, un grupo octinilo, un grupo noninilo, un grupo decinilo, un grupo undecinilo, un grupo dodecinilo, un grupo tridecinilo, un grupo tetradecinilo, un grupo pentadecinilo, un grupo hexadecinilo, un grupo heptadecinilo, un grupo octadecinilo, un grupo nonadecinilo, un grupo icosinilo, un grupo henicosinilo, un grupo docosinilo, un grupo tricosinilo o un grupo tetracosinilo y preferentemente es un grupo decinilo.
El "grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alquilo C1-C10)" en las definiciones de L1 y L2 es, por ejemplo, un grupo representado por una cualquiera de las siguientes fórmulas estructurales:
[Fórmula 16]
Figure imgf000014_0001
El "grupo (alcoxi C10-C24) metilo" en la definición de L2 se refiere a un grupo en el que el "grupo alquilo C10-C24" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno que también está unido a un grupo metilo. Los ejemplos del mismo pueden incluir un grupo deciloximetilo, un grupo undeciloximetilo, un grupo dodeciloximetilo, un grupo trideciloximetilo, un grupo tetradeciloximetilo, un grupo pentadeciloximetilo, un grupo hexadeciloximetilo, un grupo heptadeciloximetilo, un grupo octadeciloximetilo, un grupo nonadeciloximetilo, un grupo icosiloximetilo, un grupo henicosiloximetilo, un grupo docosiloximetilo, un grupo tricosiloximetilo y un grupo tetracosiloximetilo. El "grupo (alcoxi C10-C24)metilo" es preferentemente un grupo deciloximetilo, un grupo undeciloximetilo o un grupo dodeciloximetilo.
El "grupo (alquenil C10-C24)oximetilo" en la definición de L2 se refiere a un grupo en el que el "grupo alquenilo C10-C24" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno que también está unido a un grupo metilo. El "grupo (alquenil C10-C24)oximetilo" en la presente solicitud incluye uno cualquiera de un grupo (alcadienil C10-C24)oximetilo, un grupo (alcatrienil C10-C24)oximetilo y un grupo (alcatetraenil C10-C24)oximetilo. Ejemplos de los mismos pueden incluir un grupo deceniloximetilo, un grupo undeceniloximetilo, un grupo dodeceniloximetilo, un grupo trideceniloximetilo, un grupo tetradeceniloximetilo, un grupo pentadeceniloximetilo, un grupo hexadeceniloximetilo, un grupo heptadeceniloximetilo, un grupo octadeceniloximetilo, un grupo nonadeceniloximetilo, un grupo icoseniloximetilo, un grupo henicoseniloximetilo, un grupo docoseniloximetilo, un grupo tricoseniloximetilo, un grupo tetracoseniloximetilo, un grupo decadieniloximetilo, un grupo undecadieniloximetilo, un grupo dodecadieniloximetilo, un grupo tridecadieniloximetilo, un grupo tetradecadieniloximetilo, un grupo pentadecadieniloximetilo, un grupo hexadecadieniloximetilo, un grupo heptadecadieniloximetilo, un grupo octadecadieniloximetilo, un grupo nonadecadieniloximetilo, un grupo icosadieniloximetilo, un grupo henicosadieniloximetilo, un grupo docosadieniloximetilo, un grupo tricosadieniloximetilo, un grupo tetracosadieniloximetilo, un grupo decatrieniloximetilo, un grupo undecatrieniloximetilo, un grupo dodecatrieniloximetilo, un grupo tridecatrieniloximetilo, un grupo tetradecatrieniloximetilo, un grupo pentadecatrieniloximetilo, un grupo hexadecatrieniloximetilo, un grupo heptadecatrieniloximetilo, un grupo octadecatrieniloximetilo, un grupo nonadecatrieniloximetilo, un grupo icosatrieniloximetilo, un grupo henicosatrieniloximetilo, un grupo docosatrieniloximetilo, un grupo tricosatrieniloximetilo y un grupo tetracosatrieniloximetilo. El "grupo (alquenil Cio-C24)oximetilo" es preferentemente un grupo deceniloximetilo, un grupo undeceniloximetilo, un grupo dodeceniloximetilo, un grupo heptadeceniloximetilo, un grupo octadeceniloximetilo, un grupo decadieniloximetilo, un grupo undecadieniloximetilo, un grupo dodecadieniloximetilo, un grupo heptadecadieniloximetilo, un grupo octadecadieniloximetilo, un grupo nonadecadieniloximetilo, un grupo heptadecatrieniloximetilo, un grupo octadecatrieniloximetilo o un grupo nonadecatrieniloximetilo, más preferentemente un grupo cis-7-deceniloximetilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo cis-9-octadeceniloximetilo (grupo oleiloximetilo), un grupo cis-8,11-heptadecadieniloximetilo, un grupo cis-9,12-octadecadieniloximetilo (grupo linoleiloximetilo), un grupo cis-10,13-nonadecadieniloximetilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrieniloximetilo (grupo linoleniloximetilo).
El "grupo (alquinil C3-C24)oximetilo" en la definición de L2 se refiere a un grupo en el que el "grupo alquinilo C3-C24" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno que también está unido a un grupo metilo. El "grupo (alquinil C3-C24)oximetilo" en la presente solicitud incluye uno cualquiera de un grupo (alcadiinil C3-C24)oximetilo, un grupo (alcatriinil C3-C24)oximetilo y un grupo (alcatetrainil C3-C24)oximetilo. El "grupo (alquinil C3-C24)oximetilo" es, por ejemplo, un grupo propiniloximetilo, un grupo butiniloximetilo, un grupo pentiniloximetilo, un grupo hexiniloximetilo, un grupo heptiniloximetilo, un grupo octiniloximetilo, un grupo noniniloximetilo, un grupo deciniloximetilo, un grupo undeciniloximetilo, un grupo dodeciniloximetilo, un grupo trideciniloximetilo, un grupo tetradeciniloximetilo, un grupo pentadeciniloximetilo, un grupo hexadeciniloximetilo, un grupo heptadeciniloximetilo, un grupo octadeciniloximetilo, un grupo nonadeciniloximetilo, un grupo icosiniloximetilo, un grupo henicosiniloximetilo, un grupo docosiniloximetilo, un grupo tricosiniloximetilo o un grupo tetracosiniloximetilo y es preferentemente un grupo deciniloximetilo.
El "grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alquil C1-C10) oximetilo" en la definición de L2 se refiere a un grupo en el que el "grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alquilo C1-C10)" descrito anteriormente está unido a un átomo de oxígeno que también está unido a un grupo metilo.
Cuando cada uno de L1 y L2 tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L2 se unen entre sí para formar una estructura cíclica, el grupo de sustituyentes p es preferentemente un grupo alcanoiloxi C2-C6, más preferentemente un grupo propioniloxi. Más específicamente, el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p en L2 se unen entre sí para formar un grupo -OCOCH2CH2COO-.
El grupo de sustituyentes p en la presente solicitud es preferentemente el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7, un grupo alcanoiloxi C1-C7, un grupo alcoxialcoxi C3-C7, un grupo (alcoxi C1-C6)carbonilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carboxilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carbamoílo y un grupo (alquilamin C1-C6)carboxilo (grupo de sustituyentes p1), más preferentemente un grupo alcanoiloxi C2-C5, más preferentemente un grupo acetiloxi o un grupo propioniloxi, de forma particularmente preferente un grupo acetiloxi.
El lípido catiónico de la presente invención puede convertirse en una "sal farmacológicamente aceptable" mediante un procedimiento habitual. Ejemplos preferentes de dichas sales pueden incluir: sales metálicas incluyendo sales de metales alcalinos tales como una sal de sodio, una sal de potasio y una sal de litio, sales de metales alcalinotérreos, tales como una sal de calcio y una sal de magnesio, una sal de aluminio, una sal de hierro, una sal de cinc, una sal de cobre, una sal de níquel y una sal de cobalto; sales de amina incluyendo sales inorgánicas tales como sal de amonio y sales orgánicas tales como una sal de t-octilamina, una sal de dibencilamina, una sal de morfolina, una sal de glucosamina, una sal de éster alquílico de fenilglicina, una sal de etilendiamina, una sal de N-metilglucamina, una sal de guanidina, una sal de dietilamina, una sal de trietilamina, una sal de diciclohexilamina, una sal de N,N'-dibenciletilendiamina, una sal de cloroprocaína, una sal de procaína, una sal de dietanolamina, una sal de N-bencilfenetilamina, una sal de piperazina, una sal de tetrametilamonio y una sal de tris(hidroximetil)aminometano; sales de ácidos inorgánicos tales como un hidrohaluro (por ejemplo, un fluorhidrato, un clorhidrato, un bromhidrato y un yodhidrato), un nitrato, un perclorato, un sulfato y un fosfato; sales de ácidos orgánicos tales como alcanosulfonatos inferiores (por ejemplo, un metanosulfonato, un trifluorometanosulfonato y un etanosulfonato), arilsulfonatos (por ejemplo, un bencenosulfonato y un p-toluenosulfonato), un acetato, un malato, un fumarato, un succinato, un citrato, un tartrato, un oxalato y un maleato; y sales de aminoácidos tales como una sal de glicina, una sal de lisina, una sal de arginina, una sal de ornitina, un glutamato y un aspartato.
El lípido catiónico de la presente invención puede existir también en forma de un hidrato o un solvato. La presente invención abarca incluso dicho hidrato o solvato.
El lípido catiónico de la presente invención puede tener un estereoisómero, un isómero geométrico o un atropoisómero. La presente invención abarca incluso estos isómeros y mezclas de isómeros arbitrarios a cualquier relación arbitraria, a menos que se indique otra cosa.
1-2. Ejemplo específico de lípido catiónico
Ejemplos específicos del lípido catiónico de la presente invención pueden incluir los compuestos de 1-1 a 1-481 descritos a continuación en la tabla 1 y los compuestos de 2-1 a 2-570 descritos a continuación en la tabla 2. En las tablas 1 y 2, "C17-1" representa un grupo cis-8-heptadecenilo; "C18-1" representa un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo); "C17-2" representa un grupo cis,cis-8,11-heptadecadienilo; "Lin" representa un grupo cis,cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo); "C19-2" representa un grupo cis,cis-10,13-nonadecadienilo; "C17-31" representa un grupo cis,cis,cis-5,8,11-heptadecatrienilo; "C17-32" representa un grupo cis,cis,cis-8,11,14-heptadecatrienilo; "C17-33" representa un grupo 7-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]heptilo; "C17-A" representa un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo; "C17-H" representa un grupo (R)-11-hexeniloxi-cis-8-heptadecenilo; "C17-OH" representa un grupo (R)-11-hidroxi-cis-8-heptadecenilo; "C17-T" representa un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo; "C17-T2" representa un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-furan-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo; "Me" representa un grupo metilo; "Et" representa un grupo etilo; "Pr" representa un grupo propilo; "C10" representa un grupo decilo; "C11" representa un grupo undecilo; "C12" representa un grupo dodecilo; "C13" representa un grupo tridecilo; "C14" representa un grupo tetradecilo; "C15" representa un grupo pentadecilo; "C16" representa un grupo hexadecilo; "C17" representa un grupo heptadecilo; "C18" representa un grupo octadecilo; "C19" representa un grupo nonadecilo; "C20" representa un grupo icosilo; "C21" representa un grupo henicosilo; "C22" representa un grupo docosilo; "C23" representa un grupo tricosilo; "C24" representa un grupo tetracosilo; "C10-1" representa un grupo cis-7-decenilo; "C10-2" representa un grupo 7-decinilo; "C17-O-Su-O-C17" representa un grupo en que los grupos (R)-11-hidroxi-cis-8-heptadecenilo se reticulan mediante ácido succínico; y "-" representa un enlace sencillo.
(Tabla 1)
[Fórmula 18]
Figure imgf000016_0001
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3
1-1 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C10 H
1-2 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C11 H
1-3 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C12 H
1-4 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C13 H
1-5 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C14 H
1-6 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C15 H
1-7 Me Me 0 -(CH2)3- C16 C16 H
1-8 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C10 H
1-9 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C11 H
1-10 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C12 H
1-11 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C13 H
1-12 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C14 H
1-13 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C15 H
1-14 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C16 H
1-15 Me Me 0 -(CH2)3- C17 C17 H
1-16 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H
1-17 Me Et 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H
1-18 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H
1-19 Et Et 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 1-20 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 1-21 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 1-22 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 1-23 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-1 C10 H 1-24 Me Me 0 -(CH2)4- C17-1 C10 H 1-25 Me Me 0 -(CH2)5- C17-1 C10 H 1-26 Me Me 1 -(CH2)3- C17-1 C10 H 1-27 Me Me 1 -(CH2)4- C17-1 C10 H 1-28 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C10 Me 1-29 Me Et 0 -(CH2)3- C17-1 C10 Me 1-30 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C10 Et 1-31 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-32 Me Et 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-33 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-34 Et Et 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-35 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-36 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-37 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-38 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-1 C10-1 H 1-39 Me Me 0 -(CH2)4- C17-1 C10-1 H 1-40 Me Me 0 -(CH2)5- C17-1 C10-1 H 1-41 Me Me 1 -(CH2)3- C17-1 C10-1 H 1-42 Me Me 1 -(CH2)4- C17-1 C10-1 H
(continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-43 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C11 H 1-44 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C12 H 1-45 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C13 H 1-46 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C14 H 1-47 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C15 H 1-48 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C16 H 1-49 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C17 H 1-50 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-51 Me Et 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-52 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-53 Et Et 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-54 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-55 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-56 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-57 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-1 C17-1 H 1-58 Me Me 0 -(CH2)4- C17-1 C17-1 H 1-59 Me Me 0 -(CH2)5- C17-1 C17-1 H 1-60 Me Me 1 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 1-61 Me Me 1 -(CH2)4- C17-1 C17-1 H 1-62 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 Me 1-63 Me Et 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 Me 1-64 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 Et 1-65 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C18 H 1-66 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C19 H 1-67 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C20 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-68 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C21 H 1-69 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C22 H 1-70 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C23 H 1-71 Me Me 0 -(CH2)3- C17-1 C24 H 1-72 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-73 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-74 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-75 Et Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-76 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-77 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-78 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-79 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-2 C10 H 1-80 Me Me 0 -(CH2)4- C17-2 C10 H 1-81 Me Me 0 -(CH2)5- C17-2 C10 H 1-82 Me Me 1 -(CH2)3- C17-2 C10 H 1-83 Me Me 1 -(CH2)4- C17-2 C10 H 1-84 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C10 Me 1-85 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10 Me 1-86 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C10 Et 1-87 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-88 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-89 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-90 Et Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-91 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-92 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-93 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-94 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-2 C10-1 H 1-95 Me Me 0 -(CH2)4- C17-2 C10-1 H 1-96 Me Me 0 -(CH2)5- C17-2 C10-1 H 1-97 Me Me 1 -(CH2)3- C17-2 C10-1 H 1-98 Me Me 1 -(CH2)4- C17-2 C10-1 H 1-99 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-100 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-101 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-102 Et Et 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-103 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-104 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-105 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-106 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-2 C10-2 H 1-107 Me Me 0 -(CH2)4- C17-2 C10-2 H 1-108 Me Me 0 -(CH2)5- C17-2 C10-2 H 1-109 Me Me 1 -(CH2)3- C17-2 C10-2 H 1-110 Me Me 1 -(CH2)4- C17-2 C10-2 H 1-111 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C11 H 1-112 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C12 H 1-113 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C13 H 1-114 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C14 H 1-115 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C15 H 1-116 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C16 H 1-117 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C17 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-118 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-119 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-120 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-121 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-122 Me Et 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-123 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-124 Et Et 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-125 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-126 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-127 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-128 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-2 C17-2 H 1-129 Me Me 0 -(CH2)4- C17-2 C17-2 H 1-130 Me Me 0 -(CH2)5- C17-2 C17-2 H 1-131 Me Me 1 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 1-132 Me Me 1 -(CH2)4- C17-2 C17-2 H 1-133 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C18 H 1-134 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C19 H 1-135 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C20 H 1-136 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C21 H 1-137 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C22 H 1-138 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C23 H 1-139 Me Me 0 -(CH2)3- C17-2 C24 H 1-140 Me Me 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-141 Me Et 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-142 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-143 Et Et 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-144 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-145 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-146 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-147 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-31 C10 H 1-148 Me Me 0 -(CH2)4- C17-31 C10 H 1-149 Me Me 0 -(CH2)5- C17-31 C10 H 1-150 Me Me 1 -(CH2)3- C17-31 C10 H 1-151 Me Me 1 -(CH2)4- C17-31 C10 H 1-152 Me Me 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-153 Me Et 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-154 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-155 Et Et 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-156 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-157 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-158 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-159 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-31 C17-31 H 1-160 Me Me 0 -(CH2)4- C17-31 C17-31 H 1-161 Me Me 0 -(CH2)5- C17-31 C17-31 H 1-162 Me Me 1 -(CH2)3- C17-31 C17-31 H 1-163 Me Me 1 -(CH2)4- C17-31 C17-31 H 1-164 Me Me 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-165 Me Et 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-166 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-167 Et Et 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-168 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-169 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-170 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-171 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-32 C10 H 1-172 Me Me 0 -(CH2)4- C17-32 C10 H 1-173 Me Me 0 -(CH2)5- C17-32 C10 H 1-174 Me Me 1 -(CH2)3- C17-32 C10 H 1-175 Me Me 1 -(CH2)4- C17-32 C10 H 1-176 Me Me 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-177 Me Et 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-178 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-179 Et Et 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-180 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-181 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-182 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-183 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-32 C17-32 H 1-184 Me Me 0 -(CH2)4- C17-32 C17-32 H 1-185 Me Me 0 -(CH2)5- C17-32 C17-32 H 1-186 Me Me 1 -(CH2)3- C17-32 C17-32 H 1-187 Me Me 1 -(CH2)4- C17-32 C17-32 H 1-188 Me Me 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-189 Me Et 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-190 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-191 Et Et 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-192 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-193 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-194 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-195 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-33 C10 H 1-196 Me Me 0 -(CH2)4- C17-33 C10 H 1-197 Me Me 0 -(CH2)5- C17-33 C10 H 1-198 Me Me 1 -(CH2)3- C17-33 C10 H 1-199 Me Me 1 -(CH2)4- C17-33 C10 H 1-200 Me Me 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-201 Me Et 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-202 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-203 Et Et 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-204 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-205 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-206 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-207 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-33 C17-33 H 1-208 Me Me 0 -(CH2)4- C17-33 C17-33 H 1-209 Me Me 0 -(CH2)5- C17-33 C17-33 H 1-210 Me Me 1 -(CH2)3- C17-33 C17-33 H 1-211 Me Me 1 -(CH2)4- C17-33 C17-33 H 1-212 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-213 Me Et 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-214 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-215 Et Et 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-216 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-217 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-A C10 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-218 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-219 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-A C10 H 1-220 Me Me 0 -(CH2)4- C17-A C10 H 1-221 Me Me 0 -(CH2)5- C17-A C10 H 1-222 Me Me 1 -(CH2)3- C17-A C10 H 1-223 Me Me 1 -(CH2)4- C17-A C10 H 1-224 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C11 H 1-225 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C12 H 1-226 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C13 H 1-227 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C14 H 1-228 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C15 H 1-229 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C16 H 1-230 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C17 H 1-231 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C17-1 H 1-232 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C17-2 H 1-233 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-234 Me Et 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-235 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-236 Et Et 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-237 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-238 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-239 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-240 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-A C17-A H 1-241 Me Me 0 -(CH2)4- C17-A C17-A H 1-242 Me Me 0 -(CH2)5- C17-A C17-A H 1-243 Me Me 1 -(CH2)3- C17-A C17-A H 1-244 Me Me 1 -(CH2)4- C17-A C17-A H 1-245 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C18 H 1-246 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C18-1 H 1-247 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C19 H 1-248 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C19-2 H 1-249 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C20 H 1-250 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C21 H 1-251 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C22 H 1-252 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C23 H 1-253 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A C24 H 1-254 Me Me 0 -(CH2)3- C17-A Lin H 1-255 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-256 Me Et 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-257 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-258 Et Et 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-259 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-260 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-261 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-262 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-H C10 H 1-263 Me Me 0 -(CH2)4- C17-H C10 H 1-264 Me Me 0 -(CH2)5- C17-H C10 H 1-265 Me Me 1 -(CH2)3- C17-H C10 H 1-266 Me Me 1 -(CH2)4- C17-H C10 H 1-267 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C11 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-268 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C12 H 1-269 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C13 H 1-270 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C14 H 1-271 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C15 H 1-272 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C16 H 1-273 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C17 H 1-274 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C17-1 H 1-275 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C17-2 H 1-276 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-277 Me Et 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-278 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-279 Et Et 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-280 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-281 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-282 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-283 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-H C17-H H 1-284 Me Me 0 -(CH2)4- C17-H C17-H H 1-285 Me Me 0 -(CH2)5- C17-H C17-H H 1-286 Me Me 1 -(CH2)3- C17-H C17-H H 1-287 Me Me 1 -(CH2)4- C17-H C17-H H 1-288 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C18 H 1-289 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C18-1 H 1-290 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C19 H 1-291 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C19-2 H 1-292 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C20 H 1-293 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C21 H 1-294 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C22 H 1-295 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C23 H 1-296 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H C24 H 1-297 Me Me 0 -(CH2)3- C17-H Lin H 1-298 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C10 H 1-299 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C11 H 1-300 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C12 H 1-301 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C13 H 1-302 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C14 H 1-303 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C15 H 1-304 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C16 H 1-305 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C17 H 1-306 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C17-1 H 1-307 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C17-2 H 1-308 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C17-OH H 1-309 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C18 H 1-310 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C18-1 H 1-311 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C19 H 1-312 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C19-2 H 1-313 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C20 H 1-314 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C21 H 1-315 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C22 H 1-316 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C23 H 1-317 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH C24 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-318 Me Me 0 -(CH2)3- C17-OH Lin H 1-319 Me Me 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-320 Me Me 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-321 Me Me 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-322 Me Et 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-323 Me Et 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-324 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-325 Et Et 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-326 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-327 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-328 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-329 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-O-Su -O-C17 H 1-330 Me Me 0 -(CH2)4- C17-O-Su -O-C17 H 1-331 Me Me 0 -(CH2)5- C17-O-Su -O-C17 H 1-332 Me Me 1 -(CH2)3- C17-O-Su -O-C17 H 1-333 Me Me 1 -(CH2)4- C17-O-Su -O-C17 H 1-334 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-335 Me Et 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-336 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-337 Et Et 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-338 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-339 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-340 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-341 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-T C10 H 1-342 Me Me 0 -(CH2)4- C17-T C10 H 1-343 Me Me 0 -(CH2)5- C17-T C10 H 1-344 Me Me 1 -(CH2)3- C17-T C10 H 1-345 Me Me 1 -(CH2)4- C17-T C10 H 1-346 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C11 H 1-347 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C12 H 1-348 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C13 H 1-349 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C14 H 1-350 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C15 H 1-351 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C16 H 1-352 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C17 H 1-353 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C17-1 H 1-354 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C17-2 H 1-355 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-356 Me Et 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-357 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-358 Et Et 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-359 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-360 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-361 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-362 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-T C17-T H 1-363 Me Me 0 -(CH2)4- C17-T C17-T H 1-364 Me Me 0 -(CH2)5- C17-T C17-T H 1-365 Me Me 1 -(CH2)3- C17-T C17-T H 1-366 Me Me 1 -(CH2)4- C17-T C17-T H 1-367 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C18 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-368 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C18-1 H 1-369 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C19 H 1-370 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C19-2 H 1-371 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C20 H 1-372 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C21 H 1-373 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C22 H 1-374 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C23 H 1-375 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T C24 H 1-376 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T Lin H 1-377 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-378 Me Et 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-379 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-380 Et Et 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-381 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-382 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-383 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-384 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-T2 C10 H 1-385 Me Me 0 -(CH2)4- C17-T2 C10 H 1-386 Me Me 0 -(CH2)5- C17-T2 C10 H 1-387 Me Me 1 -(CH2)3- C17-T2 C10 H 1-388 Me Me 1 -(CH2)4- C17-T2 C10 H 1-389 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C11 H 1-390 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C12 H 1-391 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C13 H 1-392 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C14 H 1-393 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C15 H 1-394 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C16 H 1-395 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C17 H 1-396 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-1 H 1-397 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-2 H 1-398 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-399 Me Et 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-400 Me Pr 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-401 Et Et 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-402 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-403 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-404 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-405 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C17-T2 C17-T2 H 1-406 Me Me 0 -(CH2)4- C17-T2 C17-T2 H 1-407 Me Me 0 -(CH2)5- C17-T2 C17-T2 H 1-408 Me Me 1 -(CH2)3- C17-T2 C17-T2 H 1-409 Me Me 1 -(CH2)4- C17-T2 C17-T2 H 1-410 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C18 H 1-411 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C18-1 H 1-412 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C19 H 1-413 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C19-2 H 1-414 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C20 H 1-415 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C21 H 1-416 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C22 H 1-417 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C23 H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-418 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 C24 H 1-419 Me Me 0 -(CH2)3- C17-T2 Lin H 1-420 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C10 H 1-421 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C11 H 1-422 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C12 H 1-423 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C13 H 1-424 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C14 H 1-425 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C15 H 1-426 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C16 H 1-427 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C17 H 1-428 Me Me 0 -(CH2)3- C18 C18 H 1-429 Me Me 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-430 Me Et 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-431 Me Pr 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-432 Et Et 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-433 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-434 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-435 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-436 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C18-1 C18-1 H 1-437 Me Me 0 -(CH2)4- C18-1 C18-1 H 1-438 Me Me 0 -(CH2)5- C18-1 C18-1 H 1-439 Me Me 1 -(CH2)3- C18-1 C18-1 H 1-440 Me Me 1 -(CH2)4- C18-1 C18-1 H 1-441 Me Me 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 Me 1-442 Me Et 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 Me 1-443 Me Me 0 -(CH2)3- C18-1 C18-1 Et 1-444 Me Me 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-445 Me Et 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-446 Me Pr 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-447 Et Et 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-448 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-449 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-450 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-451 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- C19-2 C10 H 1-452 Me Me 0 -(CH2)4- C19-2 C10 H 1-453 Me Me 0 -(CH2)5- C19-2 C10 H 1-454 Me Me 1 -(CH2)3- C19-2 C10 H 1-455 Me Me 1 -(CH2)4- C19-2 C10 H 1-456 Me Me 0 -(CH2)3- C19-2 C10 Me 1-457 Me Et 0 -(CH2)3- C19-2 C10 Me 1-458 Me Me 0 -(CH2)3- C19-2 C10 Et 1-459 Me Me 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-460 Me Et 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-461 Me Pr 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-462 Et Et 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-463 -(CH2)3- 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-464 -(CH2)4- 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-465 -(CH2)2O(CH2)2- 1 -(CH2)3- Lin C10 H 1-466 Me Me 1 -(CH2)4- Lin C10 H 1-467 Me Me 0 -(CH2)3- Lin Lin H (continuación)
Compuesto R1 R2 m Z L1 L2 R3 1-468 Me Et 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-469 Me Pr 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-470 Et Et 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-471 -(CH2)3- 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-472 -(CH2)4- 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-473 -(CH2)2O(CH2)2- 0 -(CH2)3- Lin Lin H 1-474 Me Me 0 -CH2CH(CH3)CH2- Lin Lin H 1-475 Me Me 0 -(CH2)4- Lin Lin H 1-476 Me Me 0 -(CH2)5- Lin Lin H 1-477 Me Me 1 -(CH2)3- Lin Lin H 1-478 Me Me 1 -(CH2)4- Lin Lin H 1-479 Me Me 0 -(CH2)3- Lin Lin Me 1-480 Me Et 0 -(CH2)3- Lin Lin Me 1-481 Me Me 0 -(CH2)3- Lin Lin Et
(Tabla 2)
[Fórmula 19]
(continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-1 Me 0 2 0 - C17-1 C10 H 2-2 Me 0 3 0 - C17-1 C10 H 2-3 Me 0 4 0 - C17-1 C10 H 2-4 Me 1 2 0 - C17-1 C10 H 2-5 Me 1 3 0 - C17-1 C10 H 2-6 Me 2 2 0 - C17-1 C10 H 2-7 Me 0 2 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-8 Me 0 3 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-9 Me 0 4 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-10 Me 1 1 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-11 Me 1 2 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-12 Me 1 3 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-13 Me 2 2 0 -CH2- C17-1 C10 H 2-14 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-15 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-16 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-17 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-18 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-19 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-20 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-1 C10 H 2-21 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-22 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-23 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-24 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-25 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-26 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-27 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-1 C10 H 2-28 Me 1 3 0 - C17-1 C10 Me 2-29 Me 2 2 0 - C17-1 C10 Me 2-30 Me 1 3 0 -CH2- C17-1 C10 Me 2-31 Me 0 2 0 - C17-1 C17-1 H 2-32 Me 0 3 0 - C17-1 C17-1 H 2-33 Me 0 4 0 - C17-1 C17-1 H 2-34 Me 1 2 0 - C17-1 C17-1 H 2-35 Me 1 3 0 - C17-1 C17-1 H 2-36 Me 2 2 0 - C17-1 C17-1 H 2-37 Me 0 2 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-38 Me 0 3 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-39 Me 0 4 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-40 Me 1 1 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-41 Me 1 2 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-42 Me 1 3 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-43 Me 2 2 0 -CH2- C17-1 C17-1 H 2-44 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-45 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-46 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-47 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-48 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-49 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H 2-50 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-1 C17-1 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-51 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-52 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-53 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-54 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-55 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-56 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-57 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-1 C17-1 H 2-58 Me 1 3 0 - C17-1 C17-1 Me 2-59 Me 2 2 0 - C17-1 C17-1 Me 2-60 Me 1 3 0 -CH2- C17-1 C17-1 Me 2-61 Me 0 2 0 - C17-2 C10 H 2-62 Me 0 3 0 - C17-2 C10 H 2-63 Me 0 4 0 - C17-2 C10 H 2-64 Me 1 2 0 - C17-2 C10 H 2-65 Me 1 3 0 - C17-2 C10 H 2-66 Me 2 2 0 - C17-2 C10 H 2-67 Me 0 2 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-68 Me 0 3 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-69 Me 0 4 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-70 Me 1 1 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-71 Me 1 2 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-72 Me 1 3 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-73 Me 2 2 0 -CH2- C17-2 C10 H 2-74 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-75 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-76 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-77 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-78 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-79 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-80 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-2 C10 H 2-81 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-82 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-83 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-84 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-85 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-86 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-87 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-2 C10 H 2-88 Me 1 3 0 - C17-2 C10 Me 2-89 Me 2 2 0 - C17-2 C10 Me 2-90 Me 1 3 0 -CH2- C17-2 C10 Me 2-91 Me 0 2 0 - C17-2 C17-2 H 2-92 Me 0 3 0 - C17-2 C17-2 H 2-93 Me 0 4 0 - C17-2 C17-2 H 2-94 Me 1 2 0 - C17-2 C17-2 H 2-95 Me 1 3 0 - C17-2 C17-2 H 2-96 Me 2 2 0 - C17-2 C17-2 H 2-97 Me 0 2 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-98 Me 0 3 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-99 Me 0 4 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-100 Me 1 1 0 -CH2- C17-2 C17-2 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-101 Me 1 2 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-102 Me 1 3 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-103 Me 2 2 0 -CH2- C17-2 C17-2 H 2-104 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-105 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-106 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-107 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-108 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-109 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-110 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-2 C17-2 H 2-111 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-112 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-113 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-114 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-115 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-116 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-117 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-2 C17-2 H 2-118 Me 1 3 0 - C17-2 C17-2 Me 2-119 Me 2 2 0 - C17-2 C17-2 Me 2-120 Me 1 3 0 -CH2- C17-2 C17-2 Me 2-121 Me 0 2 0 - C17-A C10 H 2-122 Me 0 3 0 - C17-A C10 H 2-123 Me 0 4 0 - C17-A C10 H 2-124 Me 1 2 0 - C17-A C10 H 2-125 Me 1 3 0 - C17-A C10 H 2-126 Me 2 2 0 - C17-A C10 H 2-127 Me 0 2 0 -CH2- C17-A C10 H 2-128 Me 0 3 0 -CH2- C17-A C10 H 2-129 Me 0 4 0 -CH2- C17-A C10 H 2-130 Me 1 1 0 -CH2- C17-A C10 H 2-131 Me 1 2 0 -CH2- C17-A C10 H 2-132 Me 1 3 0 -CH2- C17-A C10 H 2-133 Me 2 2 0 -CH2- C17-A C10 H 2-134 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-135 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-136 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-137 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-138 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-139 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-140 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-A C10 H 2-141 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-142 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-143 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-144 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-145 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-146 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-147 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-A C10 H 2-148 Me 1 3 0 - C17-A C10 Me 2-149 Me 2 2 0 - C17-A C10 Me 2-150 Me 1 3 0 -CH2- C17-A C10 Me (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-151 Me 0 2 0 - C17-A C17-A H 2-152 Me 0 3 0 - C17-A C17-A H 2-153 Me 0 4 0 - C17-A C17-A H 2-154 Me 1 2 0 - C17-A C17-A H 2-155 Me 1 3 0 - C17-A C17-A H 2-156 Me 2 2 0 - C17-A C17-A H 2-157 Me 0 2 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-158 Me 0 3 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-159 Me 0 4 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-160 Me 1 1 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-161 Me 1 2 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-162 Me 1 3 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-163 Me 2 2 0 -CH2- C17-A C17-A H 2-164 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-165 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-166 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-167 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-168 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-169 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-170 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-A C17-A H 2-171 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-172 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-173 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-174 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-175 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-176 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-177 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-A C17-A H 2-178 Me 1 3 0 - C17-A C17-A Me 2-179 Me 2 2 0 - C17-A C17-A Me 2-180 Me 1 3 0 -CH2- C17-A C17-A Me 2-181 Me 0 2 0 - C17-H C10 H 2-182 Me 0 3 0 - C17-H C10 H 2-183 Me 0 4 0 - C17-H C10 H 2-184 Me 1 2 0 - C17-H C10 H 2-185 Me 1 3 0 - C17-H C10 H 2-186 Me 2 2 0 - C17-H C10 H 2-187 Me 0 2 0 -CH2- C17-H C10 H 2-188 Me 0 3 0 -CH2- C17-H C10 H 2-189 Me 0 4 0 -CH2- C17-H C10 H 2-190 Me 1 1 0 -CH2- C17-H C10 H 2-191 Me 1 2 0 -CH2- C17-H C10 H 2-192 Me 1 3 0 -CH2- C17-H C10 H 2-193 Me 2 2 0 -CH2- C17-H C10 H 2-194 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-195 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-196 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-197 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-198 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-199 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-H C10 H 2-200 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-H C10 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-201 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-202 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-203 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-204 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-205 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-206 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-207 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-H C10 H 2-208 Me 1 3 0 - C17-H C10 Me 2-209 Me 2 2 0 - C17-H C10 Me 2-210 Me 1 3 0 -CH2- C17-H C10 Me 2-211 Me 0 2 0 - C17-H C17-H H 2-212 Me 0 3 0 - C17-H C17-H H 2-213 Me 0 4 0 - C17-H C17-H H 2-214 Me 1 2 0 - C17-H C17-H H 2-215 Me 1 3 0 - C17-H C17-H H 2-216 Me 2 2 0 - C17-H C17-H H 2-217 Me 0 2 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-218 Me 0 3 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-219 Me 0 4 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-220 Me 1 1 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-221 Me 1 2 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-222 Me 1 3 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-223 Me 2 2 0 -CH2- C17-H C17-H H 2-224 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-225 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-226 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-227 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-228 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-229 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-230 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-H C17-H H 2-231 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-232 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-233 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-234 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-235 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-236 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-237 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-H C17-H H 2-238 Me 1 3 0 - C17-H C17-H Me 2-239 Me 2 2 0 - C17-H C17-H Me 2-240 Me 1 3 0 -CH2- C17-H C17-H Me 2-241 Me 0 2 0 - C17-T C10 H 2-242 Me 0 3 0 - C17-T C10 H 2-243 Me 0 4 0 - C17-T C10 H 2-244 Me 1 2 0 - C17-T C10 H 2-245 Me 1 3 0 - C17-T C10 H 2-246 Me 2 2 0 - C17-T C10 H 2-247 Me 0 2 0 -CH2- C17-T C10 H 2-248 Me 0 3 0 -CH2- C17-T C10 H 2-249 Me 0 4 0 -CH2- C17-T C10 H 2-250 Me 1 1 0 -CH2- C17-T C10 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-251 Me 1 2 0 -CH2- C17-T C10 H 2-252 Me 1 3 0 -CH2- C17-T C10 H 2-253 Me 2 2 0 -CH2- C17-T C10 H 2-254 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-255 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-256 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-257 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-258 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-259 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-260 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-T C10 H 2-261 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-262 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-263 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-264 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-265 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-266 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-267 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-T C10 H 2-268 Me 1 3 0 - C17-T C10 Me 2-269 Me 2 2 0 - C17-T C10 Me 2-270 Me 1 3 0 -CH2- C17-T C10 Me 2-271 Me 0 2 0 - C17-T C17-T H 2-272 Me 0 3 0 - C17-T C17-T H 2-273 Me 0 4 0 - C17-T C17-T H 2-274 Me 1 2 0 - C17-T C17-T H 2-275 Me 1 3 0 - C17-T C17-T H 2-276 Me 2 2 0 - C17-T C17-T H 2-277 Me 0 2 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-278 Me 0 3 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-279 Me 0 4 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-280 Me 1 1 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-281 Me 1 2 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-282 Me 1 3 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-283 Me 2 2 0 -CH2- C17-T C17-T H 2-284 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-285 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-286 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-287 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-288 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-289 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-290 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17-T C17-T H 2-291 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-292 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-293 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-294 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-295 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-296 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-297 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17-T C17-T H 2-298 Me 1 3 0 - C17-T C17-T Me 2-299 Me 2 2 0 - C17-T C17-T Me 2-300 Me 1 3 0 -CH2- C17-T C17-T Me (continuación)
Figure imgf000033_0001
(continuación)
Figure imgf000034_0001
2-361 Me 0 2 0 - Lin Lin H
2-362 Me 0 3 0 - Lin Lin H
2-363 Me 0 4 0 - Lin Lin H
2-364 Me 1 2 0 - Lin Lin H
2-365 Me 1 3 0 - Lin Lin H
2-366 Me 2 2 0 - Lin Lin H
2-367 Me 0 2 0 -CH2- Lin Lin H
2-368 Me 0 3 0 -CH2- Lin Lin H
2-369 Me 0 4 0 -CH2- Lin Lin H
2-370 Me 1 1 0 -CH2- Lin Lin H
2-371 Me 1 2 0 -CH2- Lin Lin H
2-372 Me 1 3 0 -CH2- Lin Lin H
2-373 Me 2 2 0 -CH2- Lin Lin H
2-374 Me 0 2 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-375 Me 0 3 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-376 Me 0 4 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-377 Me 1 1 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-378 Me 1 2 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-379 Me 1 3 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-380 Me 2 2 0 -(CH2)2- Lin Lin H
2-381 Me 0 2 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-382 Me 0 3 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-383 Me 0 4 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-384 Me 1 1 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-385 Me 1 2 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-386 Me 1 3 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-387 Me 2 2 0 -(CH2)3- Lin Lin H
2-388 Me 1 3 0 - Lin Lin Me 2-389 Me 2 2 0 - Lin Lin Me 2-390 Me 1 3 0 -CH2- Lin Lin Me 2-391 Me 0 2 0 - C16 C10 H
2-392 Me 0 3 0 - C16 C10 H
2-393 Me 0 4 0 - C16 C10 H
2-394 Me 1 2 0 - C16 C10 H
2-395 Me 1 3 0 - C16 C10 H
2-396 Me 2 2 0 - C16 C10 H
2-397 Me 0 2 0 -CH2- C16 C10 H
2-398 Me 0 3 0 -CH2- C16 C10 H
2-399 Me 0 4 0 -CH2- C16 C10 H
2-400 Me 1 1 0 -CH2- C16 C10 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-401 Me 1 2 0 -CH2- C16 C10 H 2-402 Me 1 3 0 -CH2- C16 C10 H 2-403 Me 2 2 0 -CH2- C16 C10 H 2-404 Me 0 2 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-405 Me 0 3 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-406 Me 0 4 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-407 Me 1 1 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-408 Me 1 2 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-409 Me 1 3 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-410 Me 2 2 0 -(CH2)2- C16 C10 H 2-411 Me 0 2 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-412 Me 0 3 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-413 Me 0 4 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-414 Me 1 1 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-415 Me 1 2 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-416 Me 1 3 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-417 Me 2 2 0 -(CH2)3- C16 C10 H 2-418 Me 1 3 0 - C16 C10 Me 2-419 Me 2 2 0 - C16 C10 Me 2-420 Me 1 3 0 -CH2- C16 C10 Me 2-421 Me 0 2 0 - C16 C16 H 2-422 Me 0 3 0 - C16 C16 H 2-423 Me 0 4 0 - C16 C16 H 2-424 Me 1 2 0 - C16 C16 H 2-425 Me 1 3 0 - C16 C16 H 2-426 Me 2 2 0 - C16 C16 H 2-427 Me 0 2 0 -CH2- C16 C16 H 2-428 Me 0 3 0 -CH2- C16 C16 H 2-429 Me 0 4 0 -CH2- C16 C16 H 2-430 Me 1 1 0 -CH2- C16 C16 H 2-431 Me 1 2 0 -CH2- C16 C16 H 2-432 Me 1 3 0 -CH2- C16 C16 H 2-433 Me 2 2 0 -CH2- C16 C16 H 2-434 Me 0 2 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-435 Me 0 3 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-436 Me 0 4 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-437 Me 1 1 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-438 Me 1 2 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-439 Me 1 3 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-440 Me 2 2 0 -(CH2)2- C16 C16 H 2-441 Me 0 2 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-442 Me 0 3 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-443 Me 0 4 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-444 Me 1 1 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-445 Me 1 2 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-446 Me 1 3 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-447 Me 2 2 0 -(CH2)3- C16 C16 H 2-448 Me 1 3 0 - C16 C16 Me 2-449 Me 2 2 0 - C16 C16 Me 2-450 Me 1 3 0 -CH2- C16 C16 Me (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-451 Me 0 2 0 - C17 C10 H 2-452 Me 0 3 0 - C17 C10 H 2-453 Me 0 4 0 - C17 C10 H 2-454 Me 1 2 0 - C17 C10 H 2-455 Me 1 3 0 - C17 C10 H 2-456 Me 2 2 0 - C17 C10 H 2-457 Me 0 2 0 -CH2- C17 C10 H 2-458 Me 0 3 0 -CH2- C17 C10 H 2-459 Me 0 4 0 -CH2- C17 C10 H 2-460 Me 1 1 0 -CH2- C17 C10 H 2-461 Me 1 2 0 -CH2- C17 C10 H 2-462 Me 1 3 0 -CH2- C17 C10 H 2-463 Me 2 2 0 -CH2- C17 C10 H 2-464 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-465 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-466 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-467 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-468 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-469 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-470 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17 C10 H 2-471 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-472 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-473 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-474 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-475 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-476 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-477 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17 C10 H 2-478 Me 1 3 0 - C17 C10 Me 2-479 Me 2 2 0 - C17 C10 Me 2-480 Me 1 3 0 -CH2- C17 C10 Me 2-481 Me 0 2 0 - C17 C17 H 2-482 Me 0 3 0 - C17 C17 H 2-483 Me 0 4 0 - C17 C17 H 2-484 Me 1 2 0 - C17 C17 H 2-485 Me 1 3 0 - C17 C17 H 2-486 Me 2 2 0 - C17 C17 H 2-487 Me 0 2 0 -CH2- C17 C17 H 2-488 Me 0 3 0 -CH2- C17 C17 H 2-489 Me 0 4 0 -CH2- C17 C17 H 2-490 Me 1 1 0 -CH2- C17 C17 H 2-491 Me 1 2 0 -CH2- C17 C17 H 2-492 Me 1 3 0 -CH2- C17 C17 H 2-493 Me 2 2 0 -CH2- C17 C17 H 2-494 Me 0 2 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-495 Me 0 3 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-496 Me 0 4 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-497 Me 1 1 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-498 Me 1 2 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-499 Me 1 3 0 -(CH2)2- C17 C17 H 2-500 Me 2 2 0 -(CH2)2- C17 C17 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-501 Me 0 2 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-502 Me 0 3 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-503 Me 0 4 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-504 Me 1 1 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-505 Me 1 2 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-506 Me 1 3 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-507 Me 2 2 0 -(CH2)3- C17 C17 H 2-508 Me 1 3 0 - C17 C17 Me 2-509 Me 2 2 0 - C17 C17 Me 2-510 Me 1 3 0 -CH2- C17 C17 Me 2-511 Me 0 2 0 - C18 C10 H 2-512 Me 0 3 0 - C18 C10 H 2-513 Me 0 4 0 - C18 C10 H 2-514 Me 1 2 0 - C18 C10 H 2-515 Me 1 3 0 - C18 C10 H 2-516 Me 2 2 0 - C18 C10 H 2-517 Me 0 2 0 -CH2- C18 C10 H 2-518 Me 0 3 0 -CH2- C18 C10 H 2-519 Me 0 4 0 -CH2- C18 C10 H 2-520 Me 1 1 0 -CH2- C18 C10 H 2-521 Me 1 2 0 -CH2- C18 C10 H 2-522 Me 1 3 0 -CH2- C18 C10 H 2-523 Me 2 2 0 -CH2- C18 C10 H 2-524 Me 0 2 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-525 Me 0 3 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-526 Me 0 4 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-527 Me 1 1 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-528 Me 1 2 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-529 Me 1 3 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-530 Me 2 2 0 -(CH2)2- C18 C10 H 2-531 Me 0 2 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-532 Me 0 3 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-533 Me 0 4 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-534 Me 1 1 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-535 Me 1 2 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-536 Me 1 3 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-537 Me 2 2 0 -(CH2)3- C18 C10 H 2-538 Me 1 3 0 - C18 C10 Me 2-539 Me 2 2 0 - C18 C10 Me 2-540 Me 1 3 0 -CH2- C18 C10 Me 2-541 Me 0 2 0 - C18 C18 H 2-542 Me 0 3 0 - C18 C18 H 2-543 Me 0 4 0 - C18 C18 H 2-544 Me 1 2 0 - C18 C18 H 2-545 Me 1 3 0 - C18 C18 H 2-546 Me 2 2 0 - C18 C18 H 2-547 Me 0 2 0 -CH2- C18 C18 H 2-548 Me 0 3 0 -CH2- C18 C18 H 2-549 Me 0 4 0 -CH2- C18 C18 H 2-550 Me 1 1 0 -CH2- C18 C18 H (continuación)
Compuesto R2 p q m Z L1 L2 R3 2-551 Me 1 2 0 -CH2- C18 C18 H 2-552 Me 1 3 0 -CH2- C18 C18 H 2-553 Me 2 2 0 -CH2- C18 C18 H 2-554 Me 0 2 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-555 Me 0 3 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-556 Me 0 4 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-557 Me 1 1 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-558 Me 1 2 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-559 Me 1 3 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-560 Me 2 2 0 -(CH2)2- C18 C18 H 2-561 Me 0 2 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-562 Me 0 3 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-563 Me 0 4 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-564 Me 1 1 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-565 Me 1 2 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-566 Me 1 3 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-567 Me 2 2 0 -(CH2)3- C18 C18 H 2-568 Me 1 3 0 - C18 C18 Me 2-569 Me 2 2 0 - C18 C18 Me 2-570 Me 1 3 0 -CH2- C18 C18 Me
1-3. Procedimiento para producir un lípido catiónico
El lípido catiónico de la presente invención puede producirse mediante la aplicación de diversos procedimientos de síntesis conocidos en la técnica. Los procedimientos de síntesis conocidos en la técnica incluyen aquellos descritos en "Comprehensive Organic Transformations (2a ed.)", Wiley-VCH, 1999, "Comprehensive Organic Synthesis", Pergamon Press, 1991, etc. Dependiendo de la clase de grupo funcional usado, la protección de un material de partida o de un intermedio con un grupo protector adecuado o la reacción después de sustituir con un grupo funcional que puede convertirse fácilmente en el grupo funcional de interés puede ser eficaz para la producción. Dicho grupo funcional incluye un grupo hidroxi, un grupo carboxilo, un grupo amino, enlaces múltiples y similares. La protección y desprotección del grupo funcional o la derivación al grupo funcional puede llevarse a cabo por un procedimiento conocido en la técnica. El procedimiento conocido en la técnica incluye "Protective Groups in Organic Synthesis (4a ed.)", Wiley-Interscience, 2006, etc.
El procedimiento para producir el lípido catiónico (I) de la presente invención, que se resume en las figuras 1 a 3, se mostrará a continuación. Sin embargo, el procedimiento de producción no está limitado a los procedimientos descritos a continuación.
En las fórmulas, Cada uno de G1, G2, G3, G4 y G5 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un sustituyente seleccionado entre el grupo de sustituyentes p o un sustituyente que puede servir como un precursor o forma sintética protegida químicamente aceptable para inducir cualquier sustituyente del grupo de sustituyentes p.
cada uno de p1 y p2 independientemente representa un número entero de 0 a 21.
Cada uno de G6, G7, G10, G11 y G12 independientemente representa un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p, un grupo (alquilo C1-C10)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tienen uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p o un sustituyente que puede servir como un precursor o forma sintética protegida aceptable químicamente para inducir cualquiera de estos sustituyentes.
G8 representa un sustituyente representado por la siguiente fórmula estructural o un sustituyente que puede servir como un precursor o forma sintética protegida aceptable químicamente para inducir el sustituyente:
[Fórmula 20]
Figure imgf000039_0001
G9 no está particularmente limitado siempre que pueda usarse generalmente como un grupo protector para un grupo carboxilo. Los ejemplos de los mismos incluyen un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo isobutilo, un grupo sec-butilo, un grupo tere-butilo, un grupo bencilo, un grupo pnitrobencilo, un grupo o-nitrobencilo y un grupo p-metoxibencilo.
1-3-1. Procedimiento A
El procedimiento A se resume en la figura 1.
1-3-1-1. Etapa A-1
La etapa A-1 es la etapa de producir un compuesto alquino interno (A3) que tiene un grupo hidroxi a partir de un compuesto alquino terminal (A1) que tiene un grupo hidroxi y un compuesto alquilo (A2) que tiene un sustituyente saliente.
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos de los mismos incluyen disolventes hidrocarburo aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido y halogenados. Se prefieren los disolventes polares apróticos tales como disolventes de amida y sulfóxido y es más preferida la N,N-dimetilformamida (DMF).
Los ejemplos del reactivo usado incluyen los compuestos de metales de transición. Se prefieren compuestos de cobre y es más preferido el yoduro de cobre (I).
Se usan como aditivos dos o más sales inorgánicas, bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos, alcóxidos de metales alcalinotérreos, bases orgánicas y similares. Se prefieren las sales inorgánicas y las bases inorgánicas y son más preferidos el yoduro de sodio y el carbonato de potasio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-1-2. Etapa A-2
La etapa A-2 es la etapa de producir un compuesto alquino interno (A4) que tiene un grupo formilo a partir de un compuesto alquino interno (A3) que tiene un grupo hidroxi.
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos de los mismos incluyen disolventes sulfóxido. Se prefiere el sulfóxido de dimetilo (DMSO).
Los ejemplos del reactivo usado incluyen complejos de trióxido de azufre-piridina y cloruro de ácido oxálico.
Se usan bases inorgánicas y bases orgánicas como aditivos. Se prefieren bases orgánicas y es más preferida trietilamina.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-1-3. Etapa A-3
La etapa A-3 es la etapa de producir un compuesto alquino interno (A5) que tiene un grupo carboxilo a partir del compuesto alquino interno (A4) que tiene un grupo formilo.
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes alcohólicos, amino y acuosos. Se prefieren los disolventes alcohólicos y es más preferido el alcohol ferc-butílico.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen agentes de oxidación inorgánicos tales como clorito sódico.
Se usan como aditivos sales inorgánicas, bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos y alcóxidos de metales alcalinotérreos. Se prefieren los fosfatos y son más preferidos los dihidrogenofosfatos de sodio.
El aditivo más usado es, por ejemplo, 2-metil-2-buteno.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2. Procedimiento B
El procedimiento B se resume en la figura 2.
1-3-2-1. Etapa B-1
La etapa B-1 es la etapa de producción de una amida de ácido N-metoxi carboxílico (B2) a partir de un ácido carboxílico (B1).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos de los mismos incluyen disolventes hidrocarburo aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido y halogenados. Se prefieren los disolventes hidrocarburo halogenados y es más preferido el diclorometano.
Los ejemplos del material secundario usado incluyen clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen agentes de condensación deshidratantes tales como carbodiimidas. Se prefiere clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida.
Como aditivos se usan bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos, alcóxidos de metales alcalinotérreos y bases orgánicas. Se prefieren bases orgánicas y es más preferida trietilamina. El aditivo más usado es un compuesto heterocíclico N-hidroxi como activador de condensación deshidratante. Se prefiere el 1-hidroxibenzoimidazol hidrato.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-2. Etapa B-2
La etapa B-2 es la etapa de producción de una cetona (B3) a partir de la amida de ácido N-metoxi carboxílico (B2).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo y sulfóxido. Se prefieren los disolventes éter tales como éter dietílico y tetrahidrofurano.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen reactivos de Grignard, reactivos de alquillitio y reactivos de alquilcinc. Se prefieren los reactivos de Grignard y los reactivos de alquillitio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 100°C, preferentemente de -30°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-3. Etapa B-3
La etapa B-3 es la etapa de producción de un alcohol (B4) a partir de la cetona (B3).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido, alcohol, amina y acuosos. Se prefieren los disolventes protónicos tales como disolventes alcohólicos y acuosos y es más preferida una solución acuosa de metanol o etanol.
Los ejemplos de los reactivos usados incluyen reactivos de boro y reactivos de aluminio usados habitualmente como agentes de reducción. Se prefiere el borohidruro sódico.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-4. Etapa B-4
La etapa B-4 es la etapa de producción de un alcohol (B4') que tiene un doble enlace en la molécula a partir del alcohol (B4) que tiene un triple enlace en la molécula.
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes éter, éster, amida, alcohol, amina y acuosos. Se prefieren los disolventes protónicos tales como disolventes alcohólicos y acuosos y son más preferidos metanol o etanol.
Los ejemplos del material secundario usado incluyen agentes reductores tales como hidrógeno gaseoso o donantes de hidrógeno. Se prefieren hidrógeno, borohidruro sódico y similares. Estos materiales secundarios se usan solos o en combinación de dos o más de los mismos.
Los ejemplos del catalizador usados incluyen compuestos de metales de transición. Se prefieren los metálicos de paladio soportados, compuestos de níquel y compuestos de cobalto y son más preferidos los de acetato de paladio y níquel (II) tetrahidrato soportados en polietilenimina.
En el caso de usar un compuesto de níquel, un compuesto de cobalto o similar como catalizador, como aditivos se usan bases orgánicas. Se prefiere la etilendiamina.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 80°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar y a continuación eliminando por destilación el disolvente. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-5. Etapa B-5
La etapa B-5 es la etapa de producción de un carbonato (B5) a partir del alcohol (B4).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido hidrocarburo halogenado y amina. Se prefieren disolventes polares inferiores tales como disolventes hidrocarburos halogenados y aromáticos y son más preferidos tolueno y diclorometano.
Los ejemplos del material secundario usado incluyen alcoholes y carbonatos activos tales como carbonato sustituido con p-nitrofenilo.
En el caso de usar un alcohol como el material secundario, algunos ejemplos del reactivo usado incluyen equivalentes fosgeno. Se prefieren difosgeno y trifosgeno.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 100°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-6. Etapa B-6
La etapa B-6 es la etapa de producción de un carbonato (B5') que tiene un doble enlace en la molécula a partir del carbonato (B5) que tiene un triple enlace en la molécula.
Esta etapa puede realizarse del mismo modo que en la etapa B-4.
1-3-2-7. Etapa B-7
La etapa B-7 es la etapa de producción de un aldehído (B7) a partir del alcohol (B6).
Se pueden usar varias reacciones generales de oxidación. En el caso se usar un sulfóxido como agente de oxidación, el disolvente usado es preferentemente dimetilsulfóxido.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen cloruro de oxalilo, ácido trifluoroacético, diciclohexilcarbodiimida y complejos de trióxido de azufre y piridina.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 80°C, preferentemente de 0°C a 60°C.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-2-8. Etapa B-8
La etapa B-8 es la etapa de producción un alcohol (B4) a partir del aldehido (B7).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo y sulfóxido. Se prefieren los disolventes éter tales como éter dietílico y tetrahidrofurano.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen reactivos de Grignard, reactivos de alquillitio y reactivos de alquilcinc. Se prefieren los reactivos de Grignard y los reactivos de alquillitio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 100°C, preferentemente de -30°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3. Procedimiento C
El procedimiento C se resume en la figura 3.
1-3-3-1. Etapa C-1
La etapa C-1 es la etapa de producción de un malonato monosustituido (C2) a partir de un malonato sin sustituir (C1).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido y alcohol. Se prefieren disolventes aromáticos tales como tolueno y xileno.
Los ejemplos del material secundario usado incluyen haluros de alquilo y sulfonatos de alquilo.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos, alcóxidos de metales alcalinotérreos y bases orgánicas. Se prefieren hidruro de sodio y metóxido de sodio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 200°C, preferentemente de 50°C a 150°C.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3-2. Etapa C-2
La etapa C-2 es la etapa de producción de un éster (C3) a partir del malonato monosustituido (C2).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éster, amida, nitrilo, sulfóxido y acuosos.
Se prefieren disolventes polares apróticos tales como disolventes amida y sulfóxido y es más preferido el sulfóxido de dimetilo (DMSO).
Los ejemplos del reactivo usado incluyen sales inorgánicas y bases inorgánicas. Se prefieren cloruro de litio y cianuro de sodio.
Los ejemplos del aditivo usado incluyen agua.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 80°C a 200°C, preferentemente de 120°C a 180°C.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3-3. Etapa C-3
La etapa C-3 es la etapa de producción de un cetoéster (C4) a partir del éster (C3).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos, éter, éster, amida, nitrilo y sulfóxido. Se prefieren disolventes aromáticos y son más preferidos los xilenos.
Los ejemplos del material secundario usado incluyen varios ésteres de ácido orgánico que tienen una estructura condensada con el mismo alcohol como material de partida.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos, alcóxidos de metales alcalinotérreos y bases orgánicas. Se prefiere el hidruro de sodio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 50°C a 200°C, preferentemente de 120°C a 180°C.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3-4. Etapa C-4
La etapa C-4 es la etapa de producción de una cetona (C5; compuesto correspondiente con B3) a partir del cetoéster (C4).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes éter, éster, amida, nitrilo, sulfóxido, alcohol y acuoso. Se prefieren los disolventes protónicos tales como disolventes alcohólicos y acuosos y es más preferida una solución acuosa de metanol o etanol.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen bases inorgánicas, alcóxidos de metales alcalinos y alcóxidos de metales alcalinotérreos. Se prefieren el hidróxido de sodio y el hidróxido de litio.
La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de 0°C a 120°C, preferentemente de 50°C a 100°C.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3-5. Etapa C-5
La etapa C-5 es la etapa de producción de un malonato disustituido (C6) a partir del malonato monosustituido (C2).
Esta etapa puede realizarse del mismo modo que en la etapa C-1.
1-3-3-6. Etapa C-6
La etapa C-6 es la etapa de producción de un éster (C7) a partir del malonato disustituido (C6).
Esta etapa puede realizarse del mismo modo que en la etapa C-2.
1-3-3-7. Etapa C-7
La etapa C-7 es la etapa de producción de un alcohol 2-substituido (C8) a partir del éster (C7).
El disolvente usado no está particularmente limitado siempre que el disolvente no inhiba la reacción y pueda disolver los materiales de partida en cierta medida. Los ejemplos del mismo incluyen disolventes aromáticos y éter. Se prefiere el tetrahidrofurano.
Los ejemplos del reactivo usado incluyen agentes de reducción generales tales como hidruro de aluminio y litio. La temperatura de reacción difiere dependiendo de los tipos de los materiales de partida, el disolvente, el reactivo y similares y habitualmente es de -78°C a 80°C, preferentemente de 0°C a temperatura ambiente.
Después de completarse la reacción, el compuesto de interés de esta reacción se recoge de la mezcla de reacción de acuerdo con un procedimiento habitual. El compuesto de interés se obtiene, por ejemplo, mediante: neutralización adecuada de la mezcla de reacción o eliminación de la materia insoluble, en caso de haberlos, por filtración; añadiendo después agua y un disolvente orgánico no miscible en agua tal como hexano o acetato de etilo; lavando después con agua, separando la capa orgánica que contiene el compuesto de interés; secando la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, sulfato sódico anhidro, bicarbonato de sodio anhidro o similar; y a continuación eliminar el disolvente por destilación. El compuesto de interés obtenido se vuelve a purificar, si es necesario, por un procedimiento habitual, por ejemplo, recristalización, reprecipitación o cromatografía.
1-3-3-8. Etapa C-8
La etapa C-8 es la etapa de producción de un carbonato (C9) a partir del alcohol 2-substituido (C8).
Esta etapa puede realizarse del mismo modo que en la etapa B-5.
2. Partícula lipídica
La partícula lipídica de la presente memoria descriptiva incluye una composición que tiene una estructura seleccionada entre un liposoma, un agregado lipídico en el que se agregan los lípidos y una micela. La estructura de la partícula lipídica no se limita a estos siempre que la partícula lipídica sea una composición que contenga un lípido. El liposoma tiene una estructura bicapa lipídica y tiene una fase acuosa en el interior. El liposoma se clasifica como un liposoma multilamelar, que tiene una estructura multicapa de bicapas lipídicas o un liposoma unilamelar, que tiene una bicapa. El liposoma de la presente invención incluye ambos liposomas.
La "partícula lipídica" de la presente invención incluye cualquier composición seleccionada entre los siguientes (a) a (c):
(a) una composición que comprende un lípido catiónico y una agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica,
(b) una composición que comprende un lípido catiónico, una agregación reductora de lípidos durante el formación de la partícula lipídica y un esterol, y
(c) una composición que comprende un lípido catiónico, una agregación reductor de lípidos durante la formación de la partícula lipídica, un esterol y un lípido anfipático.
En este contexto, el lípido catiónico es uno o dos de los distintos lípidos catiónicos descritos en el anterior párrafo "1. Lípido catiónico". Algunos ejemplos específicos del mismo pueden incluir uno o dos o más de los compuestos descritos en la Tabla 1 o 2.
Los ejemplos del lípido anfipático pueden incluir uno o dos o más de los descritos a continuación en el párrafo "2-1. Lípido anfipático".
Los ejemplos del esterol pueden incluir uno o dos o más de los descritos a continuación en el párrafo "2-2. Esterol". Los ejemplos de la agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica pueden incluir uno o dos o más de los descritos a continuación en el párrafo "2-3. Agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica".
2-1. Lípido anfipático
En la presente memoria descriptiva, el "lípido anfipático" se refiere a un lípido que tiene afinidad tanto por disolventes polares como no polares.
Los ejemplos del lípido anfipático pueden incluir lípidos descritos en "Liposomes: from physics to applications", capítulo 1. Chemistry of lipids and liposomes (publicado por Elsevier B. V. en 1993, autor: D. D. Lasic), etc. El lípido anfipático incluye, por ejemplo, fosfolípidos, glucolípidos, aminolípidos, esfingolípidos, glicoles y ácidos grasos saturados o insaturados, aunque el lípido anfipático de la presente invención no está limitado a ellos. En los párrafos 2-1-1 a 2-1-3 se describen algunos ejemplos de los mismos.
2-1-1. Fosfolípidos
Los fosfolípidos están divididos en general en glicerofosfolípidos y esfingofosfolípidos. Ejemplos habituales de glicerofosfolípidos incluyen fosfatidilcolinas (PC), fosfatidilserinas (PS), fosfatidilinositoles (PI), fosfatidilgliceroles (PG), fosfatidiletanolaminas (PE) y ácidos fosfatídicos (PA). Por otra parte, los ejemplos típicos de esfingofosfolípidos incluyen esfingomielina (SM). Por ejemplo, pueden enumerarse los lípidos descritos en los siguientes (a) a (g).
(a) Fosfatidilcolinas
Algunos ejemplos específicos de fosfatidilcolinas pueden incluir dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dilauroilfosfatidilcolina (DLPC), didecanoilfosfatidilcolina (DDPC), dioctanoilfosfatidilcolina (DOPC), dihexanoilfosfatidilcolina (DHPC), dibutirilfosfatidilcolina (DBPC), dielaidoilfosfatidilcolina (DEPC), dilinoleoilfosfatidilcolina, diaraquidonoilfosfatidilcolina, diicosenoilfosfatidilcolina, diheptanoilfosfatidilcolina, dicaproilfosfatidilcolina, diheptadecanoilfosfatidilcolina, dibehenoilfosfatidilcolina, eleoestearoilfosfatidilcolina, fosfatidilcolina de huevo hidrogenada (HEPC), fosfatidilcolina de soja hidrogenada (HSPC), 1 -palmitoil-2-araquidonoilfosfatidilcolina, 1 -palmitoil-2-oleoilfosfatidilcolina (POPC), 1 -palmitoil-2-linoleoilfosfatidilcolina, 1 -palmitoil-2-miristoilfosfatidilcolina, 1 -palmitoil-2-estearoilfosfatidilcolina, 1 -estearoil-2-palmitoilfosfatidilcolina, 1,2-dimiristoilamido-1,2-desoxifosfatidilcolina, 1 -miristoil-2-palmitoilfosfatidilcolina, 1 -miristoil-2-estearoilfosfatidilcolina, di-0-hexadecilfosfatidilcolina, trans-dielaidoilfosfatidilcolina, dipalmitelaidoil-fosfatidilcolina, n-octadecil-2-metilfosfatidilcolina, n-octadecilfosfatidilcolina, 1-laurilpropanodiol-3-fosfocolina, eritro-N-lignoceroilesfingofosfatidilcolina y palmitoil-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidilcolina. Algunos ejemplos preferidos pueden incluir DSPC, DPPC y DMPC.
(b) Fosfatidilserinas
Algunos ejemplos específicos de fosfatidilserinas incluyen diestearoilfosfatidilserina (DSPS), dimiristoilfosfatidilserina (DMPS), dilauroilfosfatidilserina (DLPS), dipalmitoilfosfatidilserina (DPPS), dioleoilfosfatidilserina (DOPS), lisofosfatidilserina, eleoestearoilfosfatidilserina y 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidilserina.
(c) Fosfatidilinositoles
Algunos ejemplos específicos de los fosfatidilinositoles incluyen dipalmitoilfosfatidilinositol (DPPI), diestearoilfosfatidilinositol (DSPI) y dilauroilfosfatidilinositol (DLPI).
(d) Fosfatidilgliceroles
Algunos ejemplos específicos de los fosfatidilgliceroles incluyen dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), diestearoilfosfatidilglicerol (DSPG), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dilauroilfosfatidilglicerol (DLPG), dimiristoilfosfatidilglicerol (DMPG), lisofosfatidilglicerol, fosfatidilglicerol de soja hidrogenado (HSPG), fosfatidilglicerol de huevo hidrogenado (HEPG) y cardiolipina (difosfatidilglicerol).
(e) Fosfatidiletanolaminas
Algunos ejemplos específicos de las fosfatidiletanolaminas incluyen dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), dilauroilfosfatidiletanolamina (DLPE), dimiristoilfosfatidiletanolamina (DMPE), didecanoilfosfatidiletanolamina (DDPE), N-glutarilfosfatidiletanolamina (NGPE), lisofosfatidiletanolamina, N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-il)-1,2-dioleoil-sn-fosfatidiletanolamina, eleoestearoilfosfatidiletanolamina, N-succinildioleoilfosfatidiletanolamina y 1-hexadecil-2-palmitoilglicerofosfatidiletanolamina. Algunos ejemplos preferidos de los mismos pueden incluir DOPE.
(f) Ácidos fosfatídicos
Algunos ejemplos específicos de los ácidos fosfatídicos incluyen ácido dipalmitoilfosfatídico (DPPA), ácido diestearoilfosfatídico (DSPA), ácido dimiristoilfosfatídico (DMPA) y ácido dioleilfosfatídico (DOPA).
(g) Esfinfofosfolípidos
Algunos ejemplos específicos de los esfingofosfolípidos incluyen esfingomielina (SM), dipalmitoilesfingomielina, diestearoilesfingomielina, ceramida ciliatina, ceramida fosforiletanolamina y ceramida fosforilglicerol. Algunos ejemplos preferidos de los mismos pueden incluir SM.
2-1-2. Glucolípidos
Los glucolípidos están divididos en general en gliceroglucolípidos y esfingoglucolípidos. Por ejemplo, pueden enumerarse los lípidos descritos en los siguientes (a) o (b).
(a) Gliceroglucolípidos
Algunos ejemplos específicos de gliceroglucolípidos incluyen diglicosil diglicérido, glucosil diglicérido, digalactosil diglicérido, galactosil diglicérido, sulfoxirribosil diglicérido, (1,3)-D-manosil (1,3)diglicérido, digalactosil glicérido, digalactosil dilauroil glicérido, digalactosil dimiristoil glicérido, digalactosil dipalmitoil glicérido, digalactosil diestearoil glicérido, galactosil glicérido, galactosil dilauroil glicérido, galactosil dimiristoil glicérido, galactosil dipalmitoil glicérido, galactosil diestearoil glicérido y digalactosil diacil glicerol.
(b) Esfingoglucolípidos
Algunos ejemplos específicos de los esfingoglucolípidos pueden incluir ceramida (cerebrósido), galactosil ceramida, lactosil ceramida, digalactosil ceramida, gangliósido GM1, gangliósido GM2, gangliósido GM3, sulfátido, ceramida oligohexóxido y globósido.
2-1-3. Ácidos grasos saturados o insaturados
Algunos ejemplos específicos de los ácidos grasos saturados y los ácidos grasos insaturados incluyen ácidos grados saturados o insaturados que tienen cada uno de 5 a 30 átomos de carbono, tales como ácido caprílico, ácido pelargónico, ácido cáprico, ácido undecilénico, ácido laúrico, ácido tridecilénico, ácido mistírico, ácido pentadecilénico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido nonadecilénico, ácido araquídico, ácido dodecenoico, ácido tetradecenoico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido eicosenoico, ácido erúcico y ácido docosapentaenoico.
2-2. Esterol
Algunos ejemplos específicos del esterol pueden incluir colesterol, ácido colesterol succínico, dihidrocolesterol, lanosterol, dihidrolanosterol, desmosterol, estigmasterol, sitosterol, campesterol, brasicasterol, zimosterol, ergosterol, , fucosterol, 22-cetosterol, 20-hidroxisterol, 7-hidroxicolesterol, 19-hidroxicolesterol, 22-hidroxicolesterol, 25-hidroxicolesterol, 7-deshidrocolesterol, 5a-colest-7-en-3p-ol, epicolesterol, deshidroergosterol, sulfato de colesterol, hemisuccinato de colesterol, ftalato de colesterol, fosfato de colesterol, valerato de colesterol, , 3p-[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]-colesterol, acetato de colesterol, oleato de colesterol, linoleato de colesterol, miristato de colesterol, palmitato de colesterol, araquidato de colesterol, coprostanol, éster de colesterol, fosforilcolina de colesterilo y 3,6,9-trioxaoctan-1-ol-colesteril-3e-ol. Algunos ejemplos preferidos de los mismos pueden incluir colesterol y hemisuccinato de colesterol, más preferentemente colesterol.
2-3. Agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica
Puede usarse un enlace lipídico con un polímero soluble en agua no iónico como la agregación reductora de lípidos durante la formación de la partícula lipídica.
El polímero soluble en agua no iónico se refiere a un polímero que no tiene un grupo disociable en un sitio distinto al extremo en un medio acuoso tal como agua o una solución tampón o un polímero derivado del polímero cuyo extremo es alcoxi. Los ejemplos de dicho polímero soluble en agua no iónico pueden incluir:
(1) un polímero de vinilo o iónico que tiene, como constituyente, una unidad monomérica tal como alcohol de vinilo, metil vinil éter, vinilpirrolidona, vinil oxazolidona, vinil metil oxazolidona, 2-vinilpiridina, 4-vinilpiridina, N-vinilsuccinimida, N-vinilformamida, N-vinil-N-metilformamida, N-vinilacetamida, N-vinil-N-metilacetamida, metacrilato de 2-hidroxietilo, acrilamida, metacrilamida, N,N-dimetilacrilamida, N-isopropilacrilamida, diacetona acrilamida, metilolacrilamida, acriloilmorfolina, acriloilpirrolidina, acriloilpiperidina, estireno, clorometilestireno, bromometilestireno, acetato de vinilo, metacrilato de metilo, acrilato de butilo, cianoacrilato de metilo, cianoacrilato de etilo, cianoacrilato de n-propilo, cianoacrilato de isopropilo, cianoacrilato de n-butil, cianoacrilato de isobutilo, cianoacrilato de ferc-butilo, metacrilato de glicidilo, etil vinil éter, n-propil vinil éter, isopropil vinil éter, n-butil vinil éter, isobutil vinil éter o ferc-butil vinil éter o un polímero derivado del polímero mediante alcoxilación de su extremo;
(2) un ácido poliamino no iónico que tiene, como constituyente, una unidad monomérica cualquiera seleccionada entre aminoácidos tales como glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, serina, treonina, asparagina y glutamina o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo;
(3) un polipéptido sintético no iónico que tiene, como constituyente, dos o más unidades monoméricas seleccionadas entre ácidos inorgánicos tales como glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, serina, treonina, asparagina y glutamina o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo;
(4) un poliéster no iónico que tiene, como constituyente, una unidad monomérica seleccionada entre un ácido glicólico y un ácido láctico o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo;
(5) un poliéter no iónico que tiene, como constituyente, una unidad monomérica entre glicoles tales como metilenglicol, etilenglicol, n-propilenglicol, isopropilenglicol e hidroxipropilenglicol o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo;
(6) un polímero natural no iónico que incluyen azúcares tales como dextrano, pectina y pululano o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo;
(7) un polímero natural modificado no iónico que incluye celulosas tales como metilcelulosa e hidroxipropilcelulosa o un polímero derivado del polímero mediante la alcoxilación de su extremo; y
(8) un polímero de bloque o un copolímero de injerto que tiene dos o más polímeros diferentes seleccionados entre los polímeros (1) a (7) den forma de unidades constituyentes o un copolímero derivado del copolímero mediante la alcoxilación de su extremo.
De estos polímeros solubles en agua no iónicos, se prefiere un poliéter no iónico, un poliéster no iónico un ácido poliamino no iónico o un polipéptido sintético no iónico o un polímero derivado de cualquiera de estos polímeros mediante la alcoxilación del extremo. Es más preferido un poliéter no iónico o un poliéster no iónico o un polímero derivado de cualquiera de estos polímeros mediante la alcoxilación del extremo. Es aún más preferido un poliéter no iónico o un poliéter monoalcoxi no iónico. Es particularmente preferido polietilenglicol o monometoxipolietilenglicol. El más preferido es monometoxipolietilenglicol.
El peso molecular promedio del polímero soluble en agua no iónico no está particularmente limitado y es preferentemente de 1000 a 12000, más preferentemente de 1000 a 5000, aún más preferentemente de 1800 a 2200.
Por ejemplo, puede usarse uno de los lípidos enumerados en los párrafos "2-1. Lípidos anfipáticos" y "2-2. Esterol" en el resto lipídico.
Algunos ejemplos específicos del lípido unidos con el polímero soluble en agua no iónico pueden incluir, pero sin limitación, monometoxipolietilenglicol unido a diacilglicerol, monometoxipolietilenglicol unido a fosfatidiletanolamina y monometoxipolietilenglicol unido a ceramida (patente de Estados Unidos n.° 5.885.613).
Más ejemplos específicos de los mismos pueden incluir 1,2-dilauroil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000048_0001
1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 22]
Figure imgf000048_0002
1,2-dipalmitoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 23]
Figure imgf000048_0003
1,2-diestearoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 24]
Figure imgf000049_0001
N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA; J. Controlled Release (2006) 112, págs. 280-290) representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000049_0002
N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dipalmitiloxipropil-3-amina (PEG-C-DPA; J. Controlled Release (2006) 112, págs. 280-290) representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000049_0003
N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-diesteariloxipropil-3-amina (PEG-C-DSA; J. Controlled Release (2006) 112, págs. 280-290) representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 27]
Figure imgf000049_0004
mPEG2000-1,2-di-0-miristil-sn3-carbomoilglicérido (PEG-DMG; descrito en el ejemplo 21 de WO2009/132131) representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 28]
Figure imgf000049_0005
mPEG2000-1,2-di-O-palmitil-sn3-carbomoilglicérido (PEG-DPG; descrito en el ejemplo 21 de WO2009/132131) representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 29]
Figure imgf000049_0006
y mPEG2000-1,2-di-O-estearil-sn3-carbomoilglicérido (PEG-DSG; descrito en el ejemplo 21 de WO2009/132131) representado por la siguiente fórmula:
[Fórmula 30]
Figure imgf000050_0001
todos los cuales tiene PEG con un peso molecular de aproximadamente 2000.
Algunos ejemplos preferidos de los mismos pueden incluir N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA) y 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol. Ejemplos más preferidos de los mismos pueden incluir N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA).
CHaO(CH2CH2O)n'CH2CH2O- en las fórmulas estructurales descritas anteriormente representa el polímero soluble en agua no iónico. Su peso molecular promedio no está particularmente limitado y es preferentemente de 1000 a 12000, más preferentemente de 1000 a 5000, aún más preferentemente de 1800 a 2200. n' representa un valor numérico estimado a partir del peso molecular medio del polímero soluble en agua no iónico y el número no está particularmente limitado y es preferentemente de 20 a 280, más preferentemente de 20 a 120, aún más preferentemente de 35 a 50.
También puede usarse PEG normal en lugar de o al mismo tiempo que el PEG-lípido descrito anteriormente siempre que el p Eg pueda evitar la agregación de las partículas lipídicas. El PEG puede eliminarse por diálisis antes de administración si la partícula lipídica es estable después de su producción.
2-4. Otros componentes de la partícula lipídica
La partícula lipídica de la presente invención puede contener una sustancia adicional siempre que la partícula lipídica mantenga su estructura. Un ejemplo de dicha partícula lipídica puede incluir una partícula lipídica que contiene uno o dos o más sustancias seleccionadas entre un oligómero de poliamida (véase la patente de los Estados Unidos n.° 6320017), un péptido, una proteína, y un detergente.
Un componente de la partícula lipídica de la presente invención puede estar unido con un ligando que tenga capacidad de direccionamiento hacia una molécula diana.
Los ejemplos de ligando pueden incluir: (1) una hormona, un factor de crecimiento, un fragmento de oligopéptido del mismo, o un compuesto de bajo peso molecular, que está unido a un receptor celular en particular expresado de forma dominante por una células a la que se desea administrar; y (2) un anticuerpo policlonal o monoclonal, o un fragmento adecuado del mismo (por ejemplo, un Fab o F(ab’)2), que se une específicamente a un epítopo antigénico que se encuentra de forma dominante en una célula diana.
2-5. Relación de composición de una partícula lipídica
El lípido catiónico de la partícula lipídica de acuerdo con la presente invención está contenido en de aproximadamente 20% a aproximadamente 80%, preferentemente aproximadamente de 20% a aproximadamente 70%, más preferentemente de aproximadamente 45% a aproximadamente 65%, en términos de cantidad molar con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. En lo que respecta a la cantidad molar del lípido catiónico usado en la presente invención, el límite inferior es preferentemente 20%, más preferentemente 45%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica, y el límite superior es preferentemente 80%, más preferentemente 70%, adicionalmente preferentemente 65%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. El lípido anfipático está contenido de aproximadamente un 0% a aproximadamente un 35%, preferentemente aproximadamente de 0% a aproximadamente 20%, más preferentemente de aproximadamente 5% a aproximadamente 15%, en términos de cantidad molar con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. En lo que respecta a la cantidad molar del lípido anfipático usado en la presente invención, el límite inferior es preferentemente 5% con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica, y el límite superior es preferentemente 35%, más preferentemente 20%, adicionalmente preferentemente 15%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. El esterol está contenido de aproximadamente un 0% a aproximadamente un 70%, preferentemente aproximadamente de 15% a aproximadamente 70%, más preferentemente de aproximadamente 15% a aproximadamente 35%, en términos de cantidad molar con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. En lo que respecta a la cantidad molar del esterol usado en la presente invención, el límite inferior es preferentemente 15% con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica, y el límite superior es preferentemente 70%, más preferentemente 35%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. El lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica está contenido de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 10%, preferentemente aproximadamente de 1% a aproximadamente 10%, más preferentemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 10%, especialmente preferentemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3%, en términos de cantidad molar con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica. En lo que respecta a la cantidad molar del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica de la presente invención, el límite inferior es preferentemente 0,5%, más preferentemente 1%, adicionalmente preferentemente 1,1%, aún más preferentemente 1,2%, aún más preferentemente 1,3%, especialmente preferentemente 1,4%, lo más preferentemente 1,5%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica, y el límite superior es preferentemente 10%, más preferentemente 5%, adicionalmente preferentemente 3%, con respecto a todos los lípidos presentes en la partícula lipídica.
Cuando el lípido anfipático, el esterol, el lípido catiónico, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica se usan en la partícula lipídica de la presente invención, la composición lipídica es preferentemente 20% o menos del lípido anfipático, 15% al 70% del esterol, de 20% al 70% del lípido catiónico, y de 1% al 10% del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, más preferentemente de 5% al 15% o menos del lípido anfipático, 15% al 40% o más del esterol, de 45% al 65% del lípido catiónico, y de 1,5% al 3% del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, en términos de cantidad molar.
Los ejemplos preferidos de la partícula lipídica de la presente invención pueden incluir una partícula lipídica que tenga cualquier relación seleccionada entre relaciones molares de lípido anfipático:esterol:lípido catiónico: lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica de 10:48:40:2, 10:38:50:2, 10:33:55:2, 10:28:60:2, 15:33:50:2, 10:48.5:40:1.5, y 10:47.5:40:2.5. Los ejemplos más preferidos de los mismos pueden incluir una partícula lipídica que tenga cualquier relación seleccionada entre relaciones molares de lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica de 10:38:50:2, 10:33:55:2, 10:28:60:2, y 15:33:50:2.
3. Partícula lipídica de ácido nucleico
La presente invención proporciona una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende la partícula lipídica descrita en el anterior párrafo "2. Partícula lipídica" y un ácido nucleico adicional. La expresión "partícula lipídica de ácido nucleico" significa un complejo de la partícula lipídica y un ácido nucleico. Un ejemplo de la partícula lipídica de ácido nucleico en el que la partícula lipídica está complejada con el ácido nucleico puede incluir una partícula lipídica de ácido nucleico que tiene una estructura donde un ácido nucleico está enterrado en la bicapa de un lípido. Un ejemplo de la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención puede incluir una composición que comprende el ácido nucleico, el lípido catiónico, el lípido anfipático, el esterol, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica.
La relación (N/P) entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) en la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención es preferentemente aproximadamente de 2,0 a 15,0, más preferentemente de aproximadamente 2,0 a 12,0, adicionalmente preferentemente de 2,0 a 9,0, aún más preferentemente de 3,0 a 9,0. El límite inferior de la relación N/P es preferentemente 2,0, más preferentemente 2,5, adicionalmente preferentemente 3,0, y el limite superior del mismo es preferentemente 15.0, más preferentemente 12,0, más preferentemente 9,0.
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención tiene un tamaño de partícula promedio de preferentemente aproximadamente 30 nm a aproximadamente 300 nm, más preferentemente de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 200 nm, adicionalmente preferentemente aproximadamente de 30 nm a aproximadamente 100 nm. El tamaño de partícula promedio se refiere a un tamaño de partícula promedio en volumen medido sobre la base del principio del procedimiento de dispersión de luz dinámica, o similar usando un aparato tal como un Potencial Zeta/Dimensionador de partículas NICOMP((TM)) 380ZLS (Particle Sizing Systems, LLC).
Un ácido nucleico que se degrada mediante nucleasa en condiciones habituales es resistente a la degradación por nucleasa en una solución acuosa, cuando está presente en la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención.
La partícula lipídica de ácido nucleico y un procedimiento de preparación de la misma se desvelan en las patentes de Estados Unidos números 5.753.613, 5.785.992, 5.705.385, 5.976.567, 5.981.501, 6.110.745, y 6.320.017, y en las publicaciones internacionales números WO 96/40964 y WO 07/012191.
En la presente memoria descriptiva, el término "ácido nucleico", "oligonucleótido", o "polinucleótido" se refiere a un polímero que contiene al menos dos desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos en cualquier forma de una hebra sencilla, una hebra doble, y una hebra triple.
Una secuencia de ácido nucleico específica también abarca, implícitamente, variantes modificadas conservativamente (por ejemplo, sustitutos de codones degenerados), alelos, ortólogos, SNP, y secuencias complementarias de los mismos, y secuencias especificadas de forma explícita, salvo que se especifique otra cosa.
el ADN puede estar en la forma de una hebra de sentido contrario, un ADN plásmido, una porción de ADN plásmido, un ADN concentrado de antemano, un producto de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), un vector (P1, PAC, BAC, YAC, o cromosoma artificial), un casete de expresión, una secuencia quimérica, un ADN cromosómico, o un derivado de estos grupos.
En la presente memoria descriptiva, el término "ácido nucleico" se utiliza para todos aquellos de un gen, un plásmido, un ADNc, un ARN mensajero (ARNm), y una molécula de ARN de interferencia (por ejemplo, un ARNip o ARNip expresado a partir de un plásmido).
3-1. Ácido nucleico que forma una partícula lipídica de ácido nucleico
El ácido nucleico que forma la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención puede incluir cualquier forma conocida para los expertos en la materia. Los ejemplos específicos de dicha forma de ácido nucleico puede incluir un ADN monocatenario, un ARN monocatenario, y un polinucleótido monocatenario de un ADN y un ARN mezclado con otros. Los ejemplos específicos de otras formas de ácido nucleico pueden incluir un polinucleótido bicatenario que consiste en un ADN bicatenario, un ARN bicatenario, un polinucleótido híbrido de ADN-ARN, o dos polinucleótidos de ADN y ARN mezclados entre sí.
3-2. Nucleósido o nucleótido
Cada nucleósido o nucleótido que constituye el ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención incluye tanto un nucleósido natural, como un nucleósido modificado o un nucleótido modificado preparado mediante modificación química. Los ejemplos del nucleósido o nucleótido modificado incluye un nucleósido o nucleótido modificado con azúcar, un nucleósido o nucleótido modificado con nucleobase, un nucleósido o nucleótido con la cadena principal modificada, y combinaciones de los mismos (véase por ejemplo, Nucleic Acid Research, 1997, Vol. 25, n.° 22, 4429-4443).
En la presente memoria descriptiva, el "nucleósido natural" se refiere a un 2'-desoxinucleósido tal como 2'-desoxiadenosina, 2'-desoxiguanosina, 2'-desoxicitidina, 2'-desoxi-5-metilcitidina, y timidina o un ribonucleósido tal como adenosina, guanosina, citidina, 5-metilcitidina, y uridina. Además, el "oligonucleótido" se refiere a un oligonucleótido constituido por un compuesto en el que el resto azúcar del nucleósido forma un éster con ácido fosfórico. En la presente memoria descriptiva, los términos "oligonucleótido" y "polinucleótido" se utilizan indistintamente.
En la presente memoria descriptiva, 2'-desoxiadenosina se puede denominar como A‘; 2'-desoxiguanosina se puede denominar como G‘; 2'-desoxicitidina se puede denominar como C‘; 2'-desoxi-5-metilcitidina se puede denominar como 5meC‘; timidina se puede denominar como T‘; 2'-desoxiuridina se puede denominar como U‘; adenosina se puede denominar como Art; guanosina se puede denominar como Grt; citidina se puede denominar como Crt; 5-metilcitidina se puede denominar como 5meCrt; y uridina se puede denominar como Urt. Además, en la presente memoria descriptiva, un nucleótido de 2'-desoxiadenosina se puede denominar como Ap; un nucleótido de 2'-desoxiguanosina se puede denominar como Gp; un nucleótido de 2'-desoxicitidina se puede denominar como Cp; un nucleótido de 2'-desoxi-5-metilcitidina se puede denominar como 5meCp; un nucleótido de timidina se puede denominar como Tp; un nucleótido de 2'-desoxiuridina se puede denominar como Up; un nucleótido de adenosina se puede denominar como Arp; un nucleótido de guanosina se puede denominar como Grp; un nucleótido de citidina se puede denominar como Crp; un nucleótido de 5-metilcitidina se puede denominar como 5meCrp; un nucleótido de uracilo se puede denominar como Urp.
En la presente memoria descriptiva, donde existe una forma de éster de fosforotioato en lugar de una forma de fosfoéster de un nucleótido, una contraparte de Ap se puede denominar como As; una contraparte de Gp se puede denominar como Gs; una contraparte de Cp se puede denominar como Cs; una contraparte de 5meCp se puede denominar como 5meCs; una contraparte de Tp se puede denominar como Ts; una contraparte de Up se puede denominar como Us; una contraparte de Arp se puede denominar como Ars; una contraparte de Grp se puede denominar como Grs; una contraparte de Crp se puede denominar como Crs; una contraparte de 5meCrp se puede denominar como 5meCrs; y una contraparte de Urp se puede denominar como Urs.
En la presente memoria descriptiva, la expresión "nucleósido modificado con azúcar" se refiere a un nucleósido modificado en su resto de azúcar. Los ejemplos del nucleósido modificado con azúcar incluyen 2'-O-metil nucleósido, 2'-O,4'-C-etilen nucleósido (ENA), y 2'-O,4'-C-metilen nucleótido (BNA/LNA).
En particular, los ejemplos de modificación 2'-O-metilo incluyen 2'-O-metil nucleósido y 2'-O-metil nucleótido: una contraparte de Art se puede denominar como Am1t; una contraparte de Grt se puede denominar como Gm1t; una contraparte de Crt se puede denominar como Cm1t; una contraparte de 5meCrt se puede denominar como 5meCm1t; una contraparte de Urt se puede denominar como Um1t; una contraparte de Arp se puede denominar como Am1p; una contraparte de Grp se puede denominar como Gm1p; una contraparte de Crp se puede denominar como Cm1p; una contraparte de 5meCrp se puede denominar como 5meCm1p; una contraparte de Urp se puede denominar como Um1p; una contraparte de Ars se puede denominar como Am1s; una contraparte de G15 se puede denominar como Gm1s; una contraparte de Crs se puede denominar como Cm1s; una contraparte de 5meCs se puede denominar como 5meCm1s; y una contraparte de Urs se puede denominar como Um1s.
En el Listado de secuencias adjunto a la presente memoria descriptiva, "cm" en el elemento <223> de cada secuencia representa 2'-O-metilcitidina; "um" representa 2-O-metiluridina; y "gm" representa 2'-O-metilguanosina.
En la presente memoria descriptiva, la unidad nucleótido de 2'-O,4'-C-etileno y la "unidad ENA" se refieren a aquellos nucleósidos que tienen una ENA, y también se refieren a los nucleósidos y nucleótidos que tienen una unidad ENA: una contraparte de A‘ se puede denominar como A2t; una contraparte de Ap se puede denominar como Ae2p; una contraparte de As se puede denominar como Ae2s; una contraparte de G4 se puede denominar como G2t; una contraparte de Gp se puede denominar como Ge2p; una contraparte de Gs se puede denominar como Ge2s; una contraparte de 5meCt se puede denominar como C2t; una contraparte de 5meCp se puede denominar como Ce2p; una contraparte de 5meCs se puede denominar como Ce2s; una contraparte de T4 se puede denominar como T2t; una contraparte de Tp se puede denominar como Te2p; y una contraparte de Ts se puede denominar como Te2s.
En la presente memoria descriptiva, la unidad de nucleótido de 2'-O,4'-C-metileno y la "unidad 2',4'-BNA/LNA" se refieren a aquellos nucleósidos y nucleótidos que tienen un 2',4'-BNA/LNA y también se refieren a nucleósidos y nucleótidos que tienen una unidad 2',4'-BNA/LNA: una contraparte de A4 se puede denominar como A1t; una contraparte de Ap se puede denominar como Ae1p; una contraparte de As se puede denominar como Ae1s; una contraparte de G4 se puede denominar como G1t; una contraparte de Gp se puede denominar como Ge1p; una contraparte de Gs se puede denominar como Ge1s; una contraparte de 5meCt se puede denominar como C14; una contraparte de 5meCp se puede denominar como Ce1p; una contraparte de 5meCs se puede denominar como Ce1s; una contraparte de T4 se puede denominar como T14; una contraparte de Tp se puede denominar como Te1p; y una contraparte de Ts se puede denominar como Te1s.
A partir de ahora en el presente documento, se muestra la fórmula estructural de cada nucleótido.
[Fórmula 31]
Figure imgf000054_0001
Ċ
[ F ó r m u l a 32]
Figure imgf000055_0001
Ċ
[ F ó r m u l a 33]
Figure imgf000056_0001
Ċ
[ F ó r m u l a 34]
Figure imgf000057_0001
Ċ
[ F ó r m u l a 35]
Figure imgf000058_0001
[ F ó r m u l a 36]
Figure imgf000059_0001
3-3. Gen diana
En la presente memoria descriptiva, el "gen diana" no está especialmente limitado a condición de que sea ARN de células, tejidos, o individuos, en el que o en los que esté gen se introduce (a partir de ahora en el presente documento, se pueden denominar como "receptores"). El gen diana puede ser ARNm que se traduce a una proteína o puede ser a Rn no codificante que no se traduce a una proteína. Los ejemplos del ARN no codificante incluyen a Rn funcional, por ejemplo, una región no traducida de ARNm, ARNt, ARNr, ARN no codificante análogo a ARN (ARNnc análogo a ARNm), ARN no codificante largo (ARNnc largo), ARN nuclear pequeño (ARNnp), ARN nucleolar pequeño (ARNsno), y microARN (miARN). Específicamente, el gen diana puede ser endógeno para los receptores de la introducción, o puede ser exógeno e introducirse en el mismo mediante un enfoque tal como una transferencia génica. Puede también ser un gen presente en un cromosoma o en un gen extracromosómico. Los ejemplos del gen exógeno incluyen, pero sin limitación, los derivados de virus, bacterias, hongos, y protozoos, que puede infectar los receptores. La función del gen puede ser conocida o desconocida.
Los ejemplos de dicho gen diana puede incluir genes cuya expresión está específicamente aumentada y/o que estén específicamente mutados en pacientes que tengan una enfermedad en particular. Los ejemplos de enfermedades pueden incluir una enfermedad del sistema nervioso central (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia, y trastornos de la alimentación), enfermedad inflamatoria (por ejemplo, alergia, reumatismo, artrosis y lupus eritematoso), enfermedad cardiovascular (por ejemplo, hipertensión, cardiomegalia, angina de pecho, arteriosclerosis, e hipercolesterolemia), cáncer (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de ovario, cáncer prostático, cáncer gástrico, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello de útero, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer pancreático, y melanoma maligno), enfermedad respiratoria (por ejemplo, neumonía, bronquitis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, y fibrosis pulmonar), diabetes mellitus, retinopatía diabética, nefropatía diabética, anemia (por ejemplo, anemia asociada con enfermedad crónica y anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro), degeneración macular relacionada con la edad, enfermedad inmunitaria (por ejemplo, enfermedad de Crohn, dermatitis atópica, enfermedad autoinmunitaria, inmunodeficiencia, y leucemia), enfermedad del hígado/vesícula biliar (por ejemplo, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis hepática, hepatitis, insuficiencia hepática, colestasis, y cálculos), enfermedad gastrointestinal (por ejemplo, úlcera, enteritis, e hipoabsorción), infección, adiposidad, y fibrosis (por ejemplo, fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, fibrosis renal y mielofibrosis). Los ejemplos de los genes causantes de estas enfermedades pueden incluir, pero sin limitación, proteína quinesina del huso (KSP), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), transtirretina (TTR), proproteína subtilisina convertasa/kexina tipo 9 (PCSK9), quinasa 1 (PLK-1), ApoB-100, subunidad M2 de la ribonucleótido reductasa (RRM2), clusterina, proteína de choque térmico 27 (Hsp27), survivina, factor de iniciación eucariota-4E (eIF-4E), molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1), la subunidad alfa del receptor de interleucina 4 (IL-4Ralfa), Factor XI, Factor VII, N-ras, H-ras, K-ras, bcl-2, bcl-xL, Her-1, Her-2, Her-3, Her-4, MDR-1, gen de la p-catenina humana, polipéptido 3 de secuencia DDX3 (DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp), unido a X), secuencia 1 del gen de la leucemia de células mieloides (MCL1), PKR (Eif2ak2), Hsp47 (Serpinhl), Hepcidina, proteína c activa (APC), transductor de la señal y activador de la transcripción (STAT3), colágeno, de tipo I, alfa 1 (Col1A1).
3-4. Polinucleótido bicatenario
Cuando el ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención es un ácido nucleico que tiene un efecto de interferencia de ARN sobre un gen diana, el ácido nucleico no está limitado por su estructura y la modificación química siempre que haya un efecto de interferencia de ARN. Los ejemplos de los mismos pueden incluir un ARNip (véase, por ejemplo, el documento WO2002/044321 y Current Opinion in Chemical Biology 570-579), AtuRNAi que consiste en un polinucleótido que contiene ARN y 2'-OMeARN alternativamente unidos (véase por ejemplo el documento WO2004/015107), un polinucleótido bicatenario en el que las hebras de sentido directo y de sentido contrario de los polinucleótidos que contienen ADN y 2'-OMeARN unidos alternativamente forman una doble cadena según el emparejamiento de bases de Watson-Crick entre diferentes tipos de ácidos nucleicos (véase, por ejemplo, el documento WO2010/001909), que se describe a continuación en el párrafo 3-4-1, un ácido nucleico que consiste en un polinucleótido modificado en el extremo (véase, por ejemplo, el documento WO2010/052715), que se describe a continuación en el párrafo 3-4-2, y un polinucleótido monocatenario en el que el extremo 5' de un polinucleótido con hebra en sentido contrario y el extremo 3' de un polinucleótido con hebra de sentido directo están unidos entre sí mediante un enlazador para formar una sola hebra, que adicionalmente forma intramolecularmente una estructura bicatenaria según el emparejamiento de bases de Watson-Crick (véase, por ejemplo, el documento WO2012/074038), que se describe más adelante en el párrafo 3-4-3.
En la Figura 4 se muestran las estructuras de estos polinucleótidos.
En la presente memoria descriptiva, la expresión "tener una secuencia de nucleótidos idéntica a la de un gen diana" se refiere a tener una secuencia idéntica a al menos una parte de la secuencia de nucleótidos del gen diana. Esto incluye una secuencia completamente idéntica y también incluye una secuencia sustancialmente idéntica a condición de que el polinucleótido resultante tenga un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto de inhibición de la expresión génica sobre el gen diana.
La expresión "tener una secuencia de nucleótidos complementaria de la del gen diana" se refiere a tener una secuencia complementaria con al menos una parte de la secuencia de nucleótidos del gen diana. Esto incluye una secuencia completamente complementaria y también incluye una secuencia sustancialmente idéntica a condición de que el polinucleótido resultante tenga un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto de una inhibición de la expresión génica sobre el gen diana. Cuando se sabe que el gen diana tiene SNP o similares, una secuencia que tenga estas variaciones también se incluye como secuencia de nucleótidos idéntica. En la presente memoria descriptiva, un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria de la de un gen diana y tiene un efecto de interferencia de a Rn y/o un efecto de inhibición de la expresión génica sobre el gen diana se denomina como un polinucleótido contra el gen diana.
La secuencia de nucleótidos del ácido nucleico contenido en la partícula de ácido nucleico de la presente invención no está especialmente limitada siempre que tenga un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica sobre el gen diana. Por ejemplo, la secuencia de nucleótidos se puede determinar estableciendo las secuencias de las hebras de sentido directo y de sentido contrario sobre la base de una secuencia con predicción de tener un efecto de interferencia del ARN sobre el gen diana mediante el uso de un programa informático (por ejemplo, GENETYX(R): fabricado por GENETYX CORPORATION), y también se puede determinar confirmando adicionalmente el efecto de interferencia del ARN y/o un efecto de inhibición de la expresión génica sobre el gen diana de un polinucleótido preparado sobre la base de la secuencia seleccionada.
Las respectivas longitudes de cadena de las hebras de sentido directo y de sentido contrario del polinucleótido bicatenario que tienen un efecto de interferencia de ARN pueden tener cualquier longitud desde 10 nucleótidos a la longitud completa del marco de lectura abierto (ORF) del gen diana, con la condición de que el polinucleótido resultante tenga un efecto de interferencia de ARN y/o un efecto inhibidor de la expresión génica. Las longitudes de cadena respectivas de las hebras de sentido directo y de sentido contrario son, preferentemente, cualquier longitud desde 18 nucleótidos a la longitud completa del marco de lectura abierto (ORF) del gen diana, más preferentemente de 10 a 100 nucleótidos, adicionalmente preferentemente de 15 a 30 nucleótidos.
En el caso de usar un polinucleótido bicatenario con hebras de sentido directo y de sentido contrario de polinucleótidos que tienen ADN y 2'-OMeARN unidos alternativamente según el emparejamiento de bases de Watson-Crick entre diferentes tipos de ácidos nucleicos(documento WO2010/001909) de forma que el polinucleótido bicatenario tenga un efecto de interferencia del ARN, la longitud de la cadena de la hebra de sentido directo tiene preferentemente de 18 a 21 nucleótidos, más preferentemente 18 o 19 nucleótidos. La longitud de la cadena de la hebra de sentido contrario tiene preferentemente de 19 a 21 nucleótidos, más preferentemente 21 nucleótidos. Este polinucleótido no tiene que tener una estructura bicatenaria en su conjunto, y también incluye la parte que se solapa parcialmente en los extremos 5' y/o 3'. El extremo solapante tiene de 1 a 5 nucleótidos, preferentemente de 1 a 3 nucleótidos, más preferentemente 2 nucleótidos. Los ejemplos más preferibles del polinucleótido incluyen un polinucleótido que tiene una estructura donde el extremo 3' del polinucleótido con hebra en sentido contrario solapa en 2 nucleótidos (estructura solapante), y que tiene 18 pares de bases.
3-4-1. Polinucleótidos que contienen ADN y 2'-OMeARN alternativamente unidos
Un ejemplo del ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención puede incluir un polinucleótido bicatenario en el que las hebras de sentido directo y sentido contrario de los polinucleótidos que contienen ADN y 2'-OMeARN alternativamente unidos están unidos mediante emparejamiento de bases de Watson-Crick entre diferentes tipos de ácidos nucleicos.
Los ejemplos específicos de dichos polinucleótidos bicatenarios incluyen
un polinucleótido bicatenario constituido por una hebra de sentido directo CT-169 descrita en el Ejemplo 51 del documento WO2010/001909: HO-GP-Cm1P-AP-Cm1P-AP-Am1P-GP-Am1P-AP-Um1P-GP-Gm1P-AP-Um1P-CP-Am1P-CP-Am1t-H (SEQ ID NO:1 del Listado de secuencias) y
una hebra de sentido contrario CT-157 descrita en el Ejemplo 45 del mismo:
HO-P(=O)(OH)
Um1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Tp-Cm1p-Tp-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:2 del Listado de secuencias); y
un polinucleótido bicatenario constituido por una hebra de sentido directo CT-103 descrita en el Ejemplo 20 del documento WO2010/001909: HO-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Am1p-Gp-Am1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-A‘-H (SEQ ID NO:3 del Listado de secuencias) y una hebra de sentido contrario CT-157 descrita en el Ejemplo 45 del mismo:
HO-P(=O)(OH)-O-Um1P-TP-Gm1P-TP-Gm1P-AP-Um1P-CP-Cm1P-AP-Um1P-TP-Cm1P-TP-Um1P-GP-Um1P-GP-Cm1P-TP-Um1t-H (SEQ ID NO:2 del Listado de secuencias).
3-4-2. Polinucleótido bicatenario modificado
En el caso de utilizar un ácido nucleico que tenga un efecto de interferencia de ARN como el ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico, otro ejemplo del mismo puede incluir un ácido nucleico modificado en el extremo de su polinucleótido siempre que el ácido nucleico tenga el efecto de interferencia del ARN. Los ejemplos de los mismos pueden incluir un polinucleótido bicatenario derivado de un polinucleótido bicatenario que tiene un efecto de interferencia del a Rn (por ejemplo, ARNip, AtuRNAi, o un polinucleótido bicatenario en el que las hebras de sentido directo y de sentido contrario de los polinucleótidos que tienen ADN y 2'-OMeARN unidos alternativamente según el emparejamiento de bases de Watson-Crick entre diferentes tipos de ácidos nucleicos (véase por ejemplo, el documento WO2010/001909)), y modificado en 5' con arilfosfato en el grupo fosfato del extremo 5' de su hebra de sentido contrario (véase por ejemplo, el documento WO2010/052715).
Los ejemplos específicos de dicho polinucleótido bicatenario modificado incluyen
un polinucleótido bicatenario modificado constituido por una hebra de sentido directo CT-169 descrita en el Ejemplo 1 del documento WO2010/052715:
HO-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Am1p-Gp-Am1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Am1p-Cp-Am1t-H (SEQ ID NO:1 del Listado de secuencias) y una hebra de sentido contrario que tenga un cualquiera de las secuencias seleccionadas entre las (1) a (3) siguientes:
(1) una hebra de sentido contrario CT-292 descrita en el Ejemplo 17 del mismo:
X-P(=O)(OH)-O-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Tp-Cm1p-Tp-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:4 del Listado de secuencias) en la que
X se representa por la siguiente fórmula:
[Fórmula 37]
Figure imgf000062_0001
(2) una hebra de sentido contrario CT-315 descrita en el Ejemplo 26 del mismo:
X-P(=O)(OH)-O-Um1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Tp-Cm1p-Tp-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:5 del Listado de secuencias) en la que
X se representa por la siguiente fórmula:
[Fórmula 38]
Figure imgf000062_0002
y
(3) una hebra de sentido contrario CT-387 descrita en el Ejemplo 83 del mismo:
X-P(=O)(OH)-O-Um1p.Tp.Gm1p.Tp.Gm1p.Ap.Um1p.Cp.Cm1p.Ap.Um1p.Tp.Cm1p.Tp.Um1p.Gp.Um1p.Gp.Cm1p.Tp-um1t.H (SEQ ID NO:6 del Listado de secuencias) en la que
X se representa por la siguiente fórmula:
[Fórmula 39]
Figure imgf000062_0003
3-4-3. Polinucleótido monocatenario modificado
El ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico también incluye un polinucleótido que tiene un polinucleótido con hebra de sentido directo contra el gen diana y un polinucleótido con hebra de sentido contrario que tiene una secuencia de nucleótidos complementaria del polinucleótido con hebra de sentido directo y tiene una estructura monocatenaria donde el extremo 5' del polinucleótido con hebra de sentido contrario y el extremo 3' del polinucleótido con hebra de sentido directo están unidos entre sí mediante una estructura fosfodiéster formada mediante un enlazado siempre que el polinucleótido tenga un efecto de interferencia del ARN (véase por ejemplo, el documento WO2012/074038).
Los ejemplos específicos de dicho compuesto pueden incluir:
un polinucleótido CT-454 descrito en el Ejemplo 12 del documento WO2012/074038: HO-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Am1p-Gp-Am1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-X-P(=O)(OH)-O-Um1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Tp-Cm1p-Tp-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:7 (región de la hebra de sentido directo) y la SEQ ID NO:8 (región de la hebra de sentido contrario) del Listado de secuencias);
un polinucleótido HS-005 descrito en el Ejemplo 28 del mismo: HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Gp-Um1p-Gp-Cm'|p-Tp-Am'|p-X-P(=OXOH)-O-Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:9 (región de la hebra de sentido directo) y la SEQ ID NO:10 (región de la hebra de sentido contrario) del Listado de secuencias);
un polinucleótido HS-006 descrito en el Ejemplo 29 del mismo: HO-Cp-Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp-Gm1p-Cp-Um1p-Ap-Um1p-X-P(=O)(OH)-O-Um'|p-Ap-Um1p-Ap-Gm1p-Cp-Am1p-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1pTp-Cm1p-Tp-Gm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:11 (región de la hebra de sentido directo) y la SEQ ID NO:12 (región de la hebra de sentido contrario) del Listado de secuencias);
un polinucleótido HS-005s descrito en el Ejemplo 30 del mismo: HO-Cp-Gm1p-Ap-Gm1p-Ap-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Gp-Um1p-Gp-Cm'|p-Tp-Am1p-X-P(=O)(OH)-O-Um1p-Tp-Am1p-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Um1p-Cp-Um1p-Cp-Gm1p-Tps-Um1t-H (SEQ ID NO:13 (región de la hebra de sentido directo) y la SEQ ID NO:14 (región de la hebra de sentido contrario) del Listado de secuencias);
y un polinucleótido HS-006s descrito en el Ejemplo 31 del mismo: HO-Cp-Am1p-Gp-Am1p-Cp-Am1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Gp-Gm1p-Tp-Gm1p-Cp-Um'|p-Ap-Um1p-X-P(=O)(OH)-O-Um1p-Ap-Um1p-Ap-Gm1p-Cp-Am1p-Cp-Cm1p-Cp-Am1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Tp-Cm1p-Tp-Gm1p-Tps-Um1t-H (SEQ ID NO:15 (región de la hebra de sentido directo) y la SEQ ID NO:16 (región de la hebra de sentido contrario) del Listado de secuencias), en la que X se representa por la siguiente fórmula:
[Fórmula 40]
Figure imgf000063_0001
El grupo metileno terminal de X se une al extremo 3' del polinucleótido con hebra de sentido directo para formar un enlace fosfodiéster, y el átomo de oxígeno unido al grupo fenilo se une al extremo 5' del polinucleótido con hebra de sentido contrario para formar un enlace fosfodiéster.
3- 4-3. ARN monocatenario
El ácido nucleico contenido en la partícula lipídica de ácido nucleico puede ser cualquier ARN monocatenario sin limitaciones concretas y también incluye un ARNm que se traduce en una proteína. Para mejorar la eficacia de la traducción, su secuencia también puede incluir una estructura de protección (por ejemplo, m7GpppG) o un sitio de entrada del ribosoma interno (IRES) en el extremo 5' y/o una cola PoliA en el extremo 3'-. Además, la región 3' y/o 5' no traducida puede contener una secuencia que contribuye a la estabilización de una proteína, o una secuencia que promueve la traducción.
El ARN monocatenario se puede producir mediante una reacción de transcripción en in vitro a partir de un ADN que tenga una secuencia de nucleótidos deseada. Las enzimas, soluciones tampón, y una mezcla de nucleósido-5'-trifosfato (adenosina-5'-trifosfato (ATP), guanosina-5'-trifosfato (GTP), citidina-5'-trifosfato (CTP), y uridina-5'-trifosfato (UTP)) necesaria para la transcripción in vitro están comercialmente disponibles (AmpliScribe T7 High Yield Transcription Kit (Epicentre), mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra Kit (Life Technologies, Inc.), etc.). El ADN utilizado para producir el ARN monocatenario es un ADN clonado y, por ejemplo, se usa un ADN plásmido, o un fragmento de ADN.
Para mejorar la estabilidad y obtener adicionalmente un ARNm que tienen inmunogenicidad reducida, se puede introducir un nucleótido modificado en el ARNm mediante el uso de un nucleósido-5'-trifosfato junto con un nucleósido-5'-trifosfato no modificado en la reacción de transcripción in vitro (Kormann, M. (2011) Nature Biotechnology 29, 154-157.). Los ejemplos del uridina-5'-trifosfato modificado pueden incluir 2-tiouridina-5'-trifosfato, 4- tiouridina-5'-trifosfato, 4'-tiouridina-5'-trifosfato, y pseudouridina-5'-trifosfato. Los ejemplos del citidina-5'-trifosfato modificado utilizados puede incluir 5-metilcitidina-5'-trifosfato y 4-tiocitidina-5'-trifosfato. El uridina-5'-trifosfato modificado y el citidina-5'-trifosfato modificado se pueden usar al mismo tiempo que los nucleósido-5'-trifosfatos modificados.
La relación entre el uridina-5'-trifosfato no modificado y el uridina-5'-trifosfato modificado es preferentemente de 50 al 95% del uridina-5'-trifosfato no modificado y de 5 al 50% del uridina-5'-trifosfato modificado, más preferentemente del 70 al 95% del uridina-5'-trifosfato no modificado y del 5 al 30% del uridina-5'-trifosfato modificado. La relación entre el citidina-5'-trifosfato no modificado y el citidina-5'-trifosfato modificado es preferentemente de 50 al 95% del citidina-5'-trifosfato no modificado y del 5 al 50% del citidina-5'-trifosfato modificado, más preferentemente del 70 al 95% del citidina-5'-trifosfato no modificado y del 5 al 30% del citidina-5'-trifosfato modificado.
El ARN monocatenario que contiene el nucleótido modificado (o el nucleósido modificado) obtenido mediante la reacción de transcripción in vitro usando el nucleósido-5'-trifosfato modificado se puede hidrolizar completamente con nucleasa (si es necesario, que también se puede desfosforilar con fosfatasa) y analizarse usando, por ejemplo, cromatografía en capa fina (TLC) o cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), para determinar el contenido del nucleótido modificado y un nucleótido no modificado (o el contenido del nucleósido no modificado y un nucleósido no modificado).
La relación entre la uridina no modificada y la uridina modificada es preferentemente de 50 al 95% de la uridina no modificado y del 5 al 50% de la uridina modificada, más preferentemente de 70 al 95% de la uridina no modificado y de 5 al 30% de la uridina modificada. La relación entre la citidina no modificado y la citidina modificada es preferentemente de 50 al 95% de la citidina no modificada y de 5 al 50% de la citidina modificada, más preferentemente de 70 al 95% de la citidina no modificada y de 5 al 30% de la citidina modificada.
El ARN monocatenario se utiliza para tratar una enfermedad o suministrar una proteína beneficiosa. El ARN monocatenario se suministra a un órgano responsable de la enfermedad mediante la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención y se transporta adicionalmente al interior del citoplasma. Cuando el ARN monocatenario codifica una proteína, el ARN monocatenario se traduce a una proteína del citoplasma de forma que dicha proteína proporciona la curación de la enfermedad.
Una diana del tratamiento de la enfermedad puede ser la ausencia de una proteína debido a una mutación génica o una disminución del suministro de la proteína. Incluso si la proteína está presente, la mutación de su gen produce la mutación de la proteína, y esta variante de proteína puede tener funciones más débiles que las de la proteína natural, en algunos casos. Para dicha deleción o deficiencia de la proteína, se puede usar un ARN monocatenario que codifica la proteína se puede usar para proporcionar la curación de la enfermedad. Los ejemplos de la enfermedad que se puede usar el ARN monocatenario puede incluir una enfermedad causada por un defecto genético (enfermedad genética), y una enfermedad causada por la ausencia de un proteína en el organismo debido a una insuficiencia del órgano.
Los ejemplos de la enfermedad causada por un defecto genético (enfermedad genética)(el nombre del gen está indicado entre paréntesis) puede incluir una enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo Ia (glucosa-6-fosfatasa), enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo Ib (glucosa-6-fosfato translocasa), enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo III (amilo-1,6-glucosidasa), enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo IV (amilo-1,4^-1,6 transglucosilasa), enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo VI (fosforilasa hepática), enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo IX, enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo VIII (fosforilasa quinasa hepática), deficiencia de a1-antitripsina (a1-antitripsina), hemocromatosis congénita, deficiencia en hepcidina (hepcidina), hemofilia A y B (factores de coagulación VIII y IX, respectivamente), deficiencia congénita en anticoagulantes (proteína C, inactivador de los factores de coagulación Va y VIIIa), púrpura trombocitopénica trombótica (ADAMTS13), trombocitopenia amegacariocítica congénita, y deficiencia en trombopoyetina (trombopoyetina). Los ejemplos de la enfermedad causada por la ausencia de una proteína en el organismo debido a un fallo en un órgano pueden incluir la hormona del crecimiento de eritropoyetina (EPO) (somatotropina o hGH).
3-5. Procedimiento para producir la partícula lipídica de ácido nucleico
El procedimiento para producir la partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención no está especialmente limitada siempre que la partícula lipídica de ácido nucleico se puede producir según el procedimiento. La partícula lipídica de ácido nucleico se puede producir, por ejemplo, según un procedimiento tal como un procedimiento de película fina, un procedimiento de evaporación en fase invertida, un procedimiento de inyección de metanol, un procedimiento de inyección de éter, un procedimiento de deshidratación-rehidratación, un procedimiento de diálisis con detergentes, un procedimiento de hidratación, o un procedimiento de congelación-descongelación. Más concretamente, la partícula lipídica de ácido nucleico se puede producir por el procedimiento de inyección con metanol descrito a continuación.
Los materiales hidrófobos tales como el lípido catiónico, el lípido anfipático, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica se disolvieron en 50 al 90% de etanol. Por otra parte, los materiales hidrófilos tales como el ácido nucleico se disuelven en una solución tamponada de pH 3 a 6.
La solución de los lípidos en etanol y la solución acuosa del ácido nucleico se mezclan en una relación en volumen de 1:20 a 1:1 para formar una partícula lipídica y para formar una partícula lipídica de ácido nucleico mediante la interacción electrostática entre el ácido nucleico cargado negativamente y el lípido catiónico cargado positivamente. Como resultado, se obtiene una dispersión de la partícula lipídica de ácido nucleico en bruto.
En otro aspecto, la solución de los lípidos en etanol se mezcla con una solución tamponada exenta del ácido nucleico para formar una partícula lipídica. Después, la partícula lipídica se puede mezclar con la solución acuosa del ácido nucleico para formar una partícula lipídica de ácido nucleico.
Posteriormente, el etanol y los ácidos nucleicos libres contenidos en la dispersión de la partícula lipídica de ácido nucleico en bruto se eliminan por un procedimiento tal como ultrafiltración o diálisis para obtener una partícula lipídica de ácido nucleico estable.
Los ejemplos de dicha partícula lipídica de ácido nucleico pueden incluir una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende los componentes en cualquier relación molar seleccionada entre el grupo que consiste de lo siguiente (a) a (g):
(a) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:48:40:2,
(b) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:38:50:2,
(c) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:33:55:2,
(d) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:28:60:2,
(e) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 15:33:50:2,
(f) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico: lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:48.5:40:1.5, y
(g) lípido anfipático:esterol:lípido catiónico:lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica = 10:47.5:40:2.5.
La relación (N/P) entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) en la partícula lipídica de ácido nucleico es preferentemente aproximadamente de 2,0 a 15,0, más preferentemente de aproximadamente 2,0 a 12,0, más preferentemente, 2,0 al 9,0, aún más preferentemente de 3,0 a 9,0. El límite inferior de la relación N/P es preferentemente 2,0, más preferentemente 2,5, adicionalmente preferentemente 3,0, y el limite superior del mismo es preferentemente 15.0, más preferentemente 12,0, más preferentemente 9,0.
4. Composición farmacéutica que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede usar en un producto farmacéutico siempre que la partícula lipídica de ácido nucleico tenga un efecto de interferencia del ARN y/o un efecto inhibidor de genes de un gen diana.
El producto farmacéutico no está especialmente limitado siempre que el producto farmacéutico sea para el tratamiento o prevención de una enfermedad derivada de la expresión de un gen diana. Los ejemplos preferidos de los mismos incluyen productos farmacéuticos para tratar o prevenir una enfermedad del sistema nervioso central (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia, y trastornos de la alimentación), enfermedad inflamatoria (por ejemplo, alergia, reumatismo, artrosis y lupus eritematoso), enfermedad cardiovascular (por ejemplo, hipertensión, cardiomegalia, angina de pecho, arteriosclerosis, e hipercolesterolemia), cáncer (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de ovario, cáncer prostático, cáncer gástrico, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello de útero, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer pancreático, y melanoma maligno), enfermedad respiratoria (por ejemplo, neumonía, bronquitis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, y fibrosis pulmonar), diabetes mellitus, retinopatía diabética, nefropatía diabética, anemia (por ejemplo, anemia asociada con una enfermedad crónica, anemia con deficiencia de hierro resistente al tratamiento con hierro, y anemia por cáncer), degeneración macular relacionada con la edad, enfermedad inmunitaria (por ejemplo, enfermedad de Crohn, dermatitis atópica, enfermedad autoinmunitaria, inmunodeficiencia, y leucemia), enfermedad del hígado/vesícula biliar (por ejemplo, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis hepática, hepatitis, insuficiencia hepática, colestasis, y cálculos), enfermedad gastrointestinal (por ejemplo, úlcera, enteritis, e hipoabsorción), infección, adiposidad, y fibrosis (por ejemplo, fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, fibrosis renal y mielofibrosis). El producto farmacéutico es más preferentemente para el tratamiento o la prevención de un cáncer (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de ovario, cáncer prostático, cáncer gástrico, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello de útero, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer pancreático, y melanoma maligno), enfermedad respiratoria (por ejemplo, neumonía, bronquitis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, y fibrosis pulmonar), y/o enfermedad del hígado/vesícula biliar (por ejemplo, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis hepática, hepatitis, insuficiencia hepática, colestasis, y cálculos). El producto farmacéutico es adicionalmente preferentemente para el tratamiento o la prevención de cáncer (cáncer de colon, cáncer de recto, y cáncer de hígado), anemia (por ejemplo, anemia asociada con una enfermedad crónica, anemia con deficiencia de hierro resistente al tratamiento con hierro, y anemia por cáncer), enfermedad del hígado (esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis hepática, y hepatitis), enfermedad de la vesícula (colestasis), y fibrosis (fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, y fibrosis renal).
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede usar en un producto farmacéutico siempre que el ARN monocatenario se utiliza para tratar una enfermedad o suministrar una proteína beneficiosa. Los ejemplos de este caso se han mostrado en el párrafo 3-4-3.
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede administrar tanto sola como en una mezcla con un transportador fisiológicamente aceptable seleccionado de acuerdo con una vía de administración y una práctica farmacéutica convencional.
En general, se utiliza una solución salina convencional como transportador farmacéuticamente aceptable.
Otros transportadores preferidos incluyen, por ejemplo, agua, agua tamponada, soluciones salinas al 0,4% y glicina al 0,3% y también incluyen albúminas, lipoproteínas, y glicoproteínas tales como globulinas para mejorar la estabilidad.
Los transportadores farmacéuticos se añaden por lo general después de la formación de partículas. Por lo tanto, tras la formación de la partícula, la partícula se puede diluir en un transportador farmacéuticamente aceptable tal como una solución salina convencional.
La partícula de una formulación farmacéutica puede tener un intervalo de concentración muy amplio. Específicamente, la concentración es inferior a aproximadamente 0,05%, habitualmente de aproximadamente 2 al 5%, o de al menos aproximadamente 2 al 5% a aproximadamente 10 al 30%, del peso, y está seleccionado principalmente a partir del volumen, viscosidad, o similar de un líquido de acuerdo con un modo de administración seleccionado. Por ejemplo, la concentración puede estar elevada de forma que una carga del líquido asociado con el tratamiento se puede disminuir. Esto es especialmente deseable para pacientes con insuficiencia cardíaca congestiva relacionada con aterosclerosis o hipertensión severa. Como alternativa, una partícula constituida por un lípido irritante se puede diluir hasta una concentración baja, que puede reducir la inflamación en el sitio de administración.
Normalmente, la concentración del ácido nucleico en in la partícula lipídica de ácido nucleico es aproximadamente de 1 al 20%, más preferentemente de aproximadamente 3 al 10%.
La composición farmacéutica de la presente invención se puede esterilizar mediante una técnica de esterilización bien conocida. Una solución acuosa se puede envasar para su uso o se puede filtrar y criodesecar en condiciones asépticas. La preparación criodesecada se combina con una solución acuosa aséptica antes de la administración. La composición puede contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables necesarias para aproximarse a un estado fisiológico, por ejemplo, un agente de ajuste del pH y un agente tamponante (por ejemplo, acetato sódico, lactato de sodio, cloruro sódico, cloruro de potasio y cloruro de calcio) y un regulador osmótico.
Además, la suspensión de partículas puede contener un agente protector de lípidos que protege los lípidos e los radicales libres y del daño por peroxidación de lípidos durante el almacenamiento. Se prefiere un inactivador de radicales libres lipófilo tal como alfa tocoferol y un agente quelante específico de iones soluble en agua tal como ferrioxamina.
Otros ejemplos del uso de la partícula lipídica de ácido nucleico incluyen, pero sin limitación, geles, aceites, y emulsiones. La partícula lipídica de ácido nucleico se puede también incorporar a una amplia gama de formas de dosificación locales. Por ejemplo, la suspensión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico se puede formular y administrar como una crema local, pasta, pomada, gel, loción, o similares.
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención también proporciona un procedimiento para transferir un ácido nucleico (por ejemplo, plasmídico o ARNip) a una célula. El procedimiento se lleva a cabo in vitro o in vivo formando en primer lugar la partícula como se ha descrito anteriormente y poniendo después en contacto la partícula con una célula durante un tiempo suficiente para administrar el ácido nucleico a la célula.
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede adsorber en prácticamente todos los tipos de célula con los que se mezcla la partícula lipídica de ácido nucleico, o se pone en contacto. Una vez que la partícula lipídica de ácido nucleico se ha adsorbido en la misma, la partícula puede experimentar cualquiera de los siguientes eventos: la partícula experimenta endocitosis mediante el resto celular; la membrana celular está sustituida por el lípido; y la partícula se fusiona con la célula.
La administración o la recaptación del resto de ácido nucleico de la partícula se produce mediante una cualquiera de dichas rutas. Particularmente, cuando se produce la fusión, la membrana de la partícula se incorpora a la membrana celular de forma que el contenido de la partícula se combina con el fluido intracelular.
La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención es útil para el tratamiento o prevención de todos los signos, enfermedades, o síntomas implicados o que son sensibles al nivel de expresión de un gen diana en células o tejidos. La enfermedad a tratar o prevenir no está especialmente limitada siempre que sea una enfermedad derivada de la expresión de un gen diana. La enfermedad es preferentemente cáncer, anemia, enfermedad hepática, enfermedad de la vesícula, fibrosis, o enfermedad genética. La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede administrar a un mamífero (preferentemente un ser humano) que lo necesita.
La presente invención proporciona un procedimiento para inhibir o regular negativamente la expresión de un gen diana en una célula o tejido. Cuando el gen diana es un gen que no codifica ARN que no se traduce a una proteína, la presente invención proporciona también un procedimiento para inhibir o regular negativamente la expresión de un a Rn no codificante y además regular positivamente, en algunos casos, regular negativamente la expresión de un gen implicado en el ARN no codificante.
Ejemplos
En lo sucesivo en el presente documento, la presente invención se describirá más específicamente con referencia a los ejemplos, ejemplos de referencia y ejemplos de ensayo. Sin embargo, la presente invención no pretende limitarse a los mismos. En los ejemplos siguientes, se realizaron procedimientos de ingeniería genética por los procedimientos descritos en "Molecular Cloning" [Sambrook, J., Fritsch, E. F. y Maniatis, T., publicado en 1989 por Cold Spring Harbor Laboratory Press] o de acuerdo con las instrucciones de los reactivos disponibles en el mercado o los kits usados, a menos que se indique otra cosa.
(Ejemplo de referencia 1)
Carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo
A una solución de diisopropiletilamina (0,50 g, 3,8 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,12 g, 0,95 mmol) en diclorometano (61 ml), se le añadió (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ol (0,50 g, 0,95 mmol), descrito en los ejemplos 1 y 7 de WO2010042877, y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,38 g, 1,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 5 horas. La materia volátil se eliminó a presión reducida y se eliminó por filtración un sólido formado por la adición de acetato de etilo. El disolvente de la solución obtenida se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés (0,61 g, 93%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,21 - 1,44 (36H, m), 1,59 - 1,73 (4H, m), 2,00 - 2,09 (8H, m), 2,77 (4H, t, J = 6,8 Hz), 4,77 - 4,85 (1H, m), 5,28 - 5,42 (8H, m), 7,38 (2H, d, J = 9,3 Hz), 8,28 (2H, d, J = 9,3 Hz).
(Ejemplo de referencia 2)
Carbonato de 2-(dimetilamino)etil(6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo
A una solución de carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo (0,20 g, 0,29 mmol) obtenido en el ejemplo de referencia 1,2-dimetilaminoetanol (0,26 g, 2,9 mmol), y diisopropiletilamina (0,15 g, 1.2 mmol) en diclorometano (10 ml), se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,14 g, 1,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (100 mg, 54%). Este compuesto es un compuesto descrito en una tabla de WO2010/054405.
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,20 - 1,40 (36H, m), 1,45 - 1,65 (4H, m), 1,96 - 2,08 (8H, m), 2,28 (6H, s), 2,60 (2H, t, J = 5,9 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,8 Hz), 4,21 (2H, t, J = 5,9 Hz), 4,64 - 4,71, 1H, m), 5,27 - 5,42 (8H, m). EM (EN+) m/z 644 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 644,6012 (3,0 mDa).
(Ejemplo 1)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo (compuesto ejemplar 1­ 467)
A una solución de carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo (0,20 g, 0,29 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 1, 3-dimetilamino-1-propanol (0,30 g, 2,9 mmol) y diisopropiletilamina (0,15 g, 1,2 mmol) en diclorometano (10 ml), se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,14 g, 1,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (100 mg, 53%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,20 - 1,40 (36H, m), 1,45 - 1,65 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,3, 7.3 Hz), 1,95 - 2,10 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,8 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,3 Hz), 4,63 - 4,73, 1H, m), 5,27 - 5,43 (8H, m).
EM (EN+) m/z 658 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 658,6164 (2,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 3) (6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ona
A una solución de linoleato de metilo (30,0 g, 101 mmol) en xileno (55 ml), se le añadió una suspensión de hidruro sódico (5,05 g, 63%, 132 mmol), lavado con anterioridad con hexano en xileno (10 ml), durante 10 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a 150°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite.
A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (413 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (102 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 100°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (23,0 g, 91%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,6 Hz), 1,24 - 1,40 (28H, m), 1,51 - 1,60 (4H, m), 2,01 - 2,09 (8H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 5,29 - 5,43 (8H, m).
(Ejemplo de referencia 4)
(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ol
A una solución de (6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ona (23,0 g, 46,1 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 3 en metanol (187 ml) y tetrahidrofurano (187 ml), se le añadió borohidruro sódico (1,74 g, 46,1 mmol) y después se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 80 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con una solución mezcla de hexano-acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro.
El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (22,2 g, 96%).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,24 - 1,48 (36H, m), 2,01 - 2,09 (8H, m), 2,77 (4H, t, J = 6,3 Hz), 3,55 - 3,62 (1H, m), 5,29 - 5,43 (8H, m).
(Ejemplo de referencia 5)
Carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo
A una solución de diisopropiletilamina (0,20 g, 1,5 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,38 mmol) en diclorometano (25 ml), se le añadió (6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ol (0,19 g, 0,38 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 4, y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,15 g, 0,77 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. La materia volátil se eliminó a presión reducida y el sólido formado por la adición de hexano se eliminó por filtración. El disolvente de la solución obtenida se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés (0,12 g, 47%).
(Ejemplo 2)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo (compuesto ejemplar 1­ 118)
A una solución de carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo (0,03 g, 0,05 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 5, 3-dimetilamino-1-propanol (0,05 g, 0,5 mmol) y diisopropiletilamina (0,03 g, 0,2 mmol) en diclorometano (6 ml), se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,02 g, 0,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4 días. Se añadió más 3-dimetilamino-1-propanol (0,1 g, 1 mmol) a la misma y la mezcla se hizo reaccionar durante otros 2 días. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (10 mg, 31%).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,6 Hz), 1,22 - 1,42 (34H, m), 1,48 - 1,65 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,98 - 2,10 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,18 (2H, t, 6,6 Hz), 4,64 -4,73 (1H, m), 5,37 - 5,43 (8H, m).
EM (EN+) m/z 630 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 630,5839 (1,4 mDa).
(Ejemplo 3)
Carbonato de 4-(dimetilamino)butil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo (compuesto ejemplar 1­ 129)
A una solución de carbonato de 4-nitrofenil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo (0,12 g, 0,18 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 5, 4-dimetilamino-1-butanol (0,22 g, 1,8 mmol) y diisopropiletilamina (0,10 g, 0,72 mmol) en diclorometano (10 ml), se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,09 g, 0,72 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (30 mg, 26%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 6,6 Hz), 1,21 - 1,42 (34H, m), 1,47 - 1,64 (6H, m), 1,71 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,99 - 2,09 (8H, m), 2,21 (6H, s), 2,27 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,14 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,63 - 4,72 (1H, m), 5,28 - 5,43 (8H, m).
EM (EN+) m/z 644 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 644,6008 (2,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 6)
(9Z,26Z)-pentatriaconta-9,26-dien-18-ona
A una solución de oleato de metilo (10,0 g, 33,4 mmol) en xileno (18 ml), se le añadió durante 5 minutos una suspensión de hidruro sódico (1,65 g, 63%, 43,4 mmol), lavada con anterioridad con hexano en xileno (3 ml), y después la mezcla se hizo reaccionar a 150°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (135 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (33 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 100°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida, seguido por la formación de un sólido con un disolvente de acetona-hexano. Después de eliminar el sólido por filtración, el disolvente se eliminó por destilación de la solución resultante a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (7,50 g, 89%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 6: 0,89 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,21 - 1,36 (40H, m), 1,52 - 1,60 (4H, m), 1,97 - 2,04 (8H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,6 Hz), 5,30 - 5,39 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 7)
(9Z,26Z)-pentatriaconta-9,26-dien-18-ol
A una solución de (9Z,26Z)-pentatriaconta-9,26-dien-18-ona (5,0 g, 9,9 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 6, en metanol (40 ml) y tetrahidrofurano (40 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,38 g, 9,9 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 80 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (4,5 g, 90%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 6: 0,89 (6H, t, J = 6,6 Hz), 1,21 - 1,37 (48H, m), 1,37 - 1,49 (4H, m), 1,97 - 2,06 (8H, m), 3,55 - 3,62 (1H, m), 5,31 - 5,40 (4H, m).
(Ejemplo 4)
Carbonato de 3-dimetilaminopropil(9Z,26Z)-pentatriaconta-9,26-dien-18-ilo (compuesto ejemplar 1-50)
A una solución de (9Z,26Z)-pentatriaconta-9,26-dien-18-ol (0,25 g, 0,50 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 7, y piridina (0,25 g, 3,1 mmol) en tolueno (5,0 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,10 g, 0,34 mmol) en tolueno (0,74 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 100 minutos, se le añadió 3-dimetilamino-1-propanol (0,54 g, 5,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (296 mg, 94%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 6: 0,86 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,36 (44H, m), 1,50 - 1,59 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,8, 7,3 Hz), 1,97 -2,04 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,65 -4,72 (1H, m), 5,33 -5,37 (4H, m). EM (EN+) m/z 634 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 634,6169 (3,1 mDa).
(Ejemplo de referencia 8)
(3Z,6Z,9Z,26Z,29Z,32Z)-pentatriaconta-3,6,9,26,29,32-hexaen-18-ona
A una solución de a-linolenato de metilo (10,0 g, 33,4 mmol) en xileno (18 ml), se le añadió durante 5 minutos una suspensión de hidruro sódico (1,65 g, 63%, 43,4 mmol), lavada con anterioridad con hexano en xileno (3 ml) y después la mezcla se hizo reaccionar a 150°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (135 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (33 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 100°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida, seguido por la formación de un sólido con un disolvente de acetona-hexano. Después de eliminar el sólido por filtración, el disolvente se eliminó por destilación de la solución resultante a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (6,10 g, 74%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 6: 0,98 (6H, t, J = 7,6 Hz), 1,22 - 1,40 (16H, m), 1,52 - 1,60 (4H, m), 2,00 - 2,19 (8H, m), 2,39 (4H, t, J = 7,6 Hz), 2,74 - 2,83 (8H, m), 5,28 - 5,43 (12H, m).
(Ejemplo de referencia 9)
(3Z,6Z,9Z,26Z,29Z,32Z)-pentatriaconta-3,6,9,26,29,32-hexaen-18-ol
A una solución de (3Z,6Z,9Z,26Z,29Z,32Z)-pentatriaconta-3,6,9,26,29,32-hexaen-18-ona (5,0 g, 10,1 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 8, en metanol (41 ml) y tetrahidrofurano (41 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,38 g, 10 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 80 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (4,0 g, 79%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,98 (6H, t, J = 7,6 Hz), 1,24 - 1,48 (24H, m), 2,00 - 2,20 (8H, m), 2,75 - 2,84 (8H, m), 3,55 - 3,61 (1H, m), 5,29 - 5,43 (12H, m).
(Ejemplo 5)
Carbonato de 3-dimetilaminopropil(3Z,6Z,9Z,26Z,29Z,32Z)-pentatriaconta-3,6,9,26,29,32-hexaen-18-ilo (compuesto ejemplar 1-176)
A una solución de (3Z,6Z,9Z,26Z,29Z,32Z)-pentatriaconta-3,6,9,26,29,32-hexaen-18-ol (0,25 g, 0,50 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 9 y piridina (0,25 g, 3,1 mmol) en tolueno (5,0 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,10 g, 0,34 mmol) en tolueno (0,75 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 100 minutos, se le añadió 3-dimetilamino-1-propanol (0,55 g, 5,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (274 mg, 87%, mezcla isomérica).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,98 (6H, t, J = 7,6 Hz), 1,24 - 1,39 (20H, m), 1,49 - 1,62 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 2,00 - 2,19 (8H, m), 2,22, (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,74 - 2,84 (8H, m), 4,17 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m), 5,28 -5,44 (12H, m).
EM (EN+) m/z 626 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 626,5512 (-0,5 mDa).
(Ejemplo de referencia 10)
(6Z,9Z,12Z,23Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,12,23,26,29-hexaen-18-ona
A una solución de Y-linolenato de metilo (5,00 g, 17,1 mmol) en xileno (9 ml), se le añadió durante 5 minutos una suspensión de hidruro sódico (0,85 g, 63%, 22,2 mmol), lavada con anterioridad con hexano en xileno (1,5 ml) y después la mezcla se hizo reaccionar a 150°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (69 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (17 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 100°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida, seguido por la formación de un sólido con un disolvente de acetonahexano. Después de eliminar el sólido por filtración, el disolvente se eliminó por destilación de la solución resultante a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (3,80 g, 90%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,86 -0,91 (6H, m), 1,23 - 1,42 (16H, m), 1,55 - 1,63 (4H, m), 1,98 -2,20 (8H, m), 2,39 (4H, t, J = 7,6 Hz), 2,78 - 2,83 (8H, m), 5,25 - 5,44 (12H, m).
(Ejemplo de referencia 11)
(6Z,9Z,12Z,23Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,12,23,26,29-hexaen-18-ol
A una solución de (6Z,9Z,12Z,23Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,12,23,26,29-hexaen-18-ona (3,0 g, 6,1 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 10, en metanol (25 ml) y tetrahidrofurano (25 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,23 g, 6,1 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 80 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (2,1 g, 70%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,86 -0,91 (6H, m), 1,24 - 1,50 (24H, m), 1,99 -2,21 (8H, m), 2,78 -2,84 (8H, m), 3,55 - 3,62 (1H, m), 5,28 -5,44 (12H, m).
(Ejemplo 6)
Carbonato de 3-dimetilaminopropil(6Z,9Z,12Z,23Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,12,23,26,29-hexaen-18-ilo (compuesto ejemplar 1-152)
A una solución de (6Z,9Z,12Z,23Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,12,23,26,29-hexaen-18-ol (0,25 g, 0,50 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 11 y piridina (0,25 g, 3,1 mmol) en tolueno (5,0 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,10 g, 0,34 mmol) en tolueno (0,75 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 100 minutos, se le añadió 3-dimetilamino-1-propanol (0,55 g, 5,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (240 mg, 76%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,86 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,42 (20H, m), 1,51 - 1,63 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 1,99 -2,19 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,78 -2,83 (8H, m), 4,17 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,72 (1H, m), 5,30 -5,45 (12H, m).
EM (EN+) m/z 626 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 626,5515 (0,3 mDa).
(Ejemplo de referencia 12)
Di-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilpropanodioato de dimetilo
A una solución de malonato de dimetilo (13,5 g, 102 mmol) en tolueno (500 ml), se le añadió durante 5 minutos una suspensión de hidruro sódico (5,17 g, 63%, 136 mmol), lavada con anterioridad con hexano en tolueno (6 ml). Después de agitar a 80°C durante 30 minutos, se le añadió metanosulfonato de (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilo (compuesto descrito en el ejemplo 1 de WO2009/132131, 23,4 g, 67,9 mmol) y la mezcla se agitó a 100°C durante 4 horas y se agitó a 120°C durante 2 horas. Después de tratar con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico, la mezcla de reacción se sometió a extracción y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (9,71 g).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,90 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,07 - 1,16 (4H, m), 1,21 - 1,40 (32H, m), 1,82 - 1,89 (4H, m), 2,01 - 2,08 (8H, m), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 3,71 (6H, s), 5,29 - 5,43 (8H, m).
También se obtuvo un subproducto de (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilpropanodioato de dimetilo en forma de un líquido incoloro (8,50 g).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,21 - 1,37 (18H, m), 1,81 - 1,90 (2H, m), 1,96 - 2,05 (4H, m), 2,74 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,32 (1H, t, J = 7,4 Hz), 3,70 (6H, s), 5,25 - 5,39 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 13)
(11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -il]icosa-11 -dienoato de metilo
A una solución de di-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-ilpropanodioato de dimetilo (5,00 g, 7,95 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 12 y agua (2,15 g, 119 mmol) en dimetilsulfóxido (39,5 ml), se le añadió cloruro de litio (1,01 g, 23,9 mmol). Después de agitar a 150°C durante 5 horas, se añadieron agua (2,15 g, 119 mmol) y cloruro de litio (1,01 g, 23,9 mmol). La mezcla se hizo reaccionar a 160°C durante 5 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (3,00 g, 66%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,20 -1,47 (38H, m), 1,55 - 1,64 (2H, m), 2,01 - 2,09 (8H, m), 2,28 - 2,37 (1H, m), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 3,67 (3H, s), 5,29 - 5,46 (8H, m).
(Ejemplo de referencia 14)
(11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -il]icosa-11,14-dien-1 -ol
A una solución de (11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il]icosa-11-dienoato de metilo (3,00 g, 5,25 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 13 en tetrahidrofurano (40 ml), se le añadió hidruro de litio y aluminio (0,400 g, 10,5 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se trató con agua (0,4 ml), una solución acuosa al 15% de hidróxido sódico (0,4 ml) y agua (1,2 ml) y se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,00 g, 35%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,24 - 1,44 (38H, m), 1,97 - 2,09 (9H, m), 2,78 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,15 (2H, t, J = 6,3 Hz), 5,29 - 5,43 (8H, m).
(Ejemplo 7)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il]icosa-11,14-dien-1-ilo (compuesto ejemplar 1-477)
Una solución de (11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il]icosa-11,14-dien-1-ol (0,15 g, 0,28 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 14 y piridina (0,14 g, 1,8 mmol) en tolueno (0,6 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,06 g, 0,19 mmol) en tolueno (0,24 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 2 horas, la mezcla de reacción se calentó a 10°C, se agitó durante 30 minutos y se enfrió de nuevo a 0°C. Se le añadió 3-dimetilamino 1-propanol (0,30 g, 2,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (130 mg, 70%).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,21 - 1,40 (40H, m), 1,62 - 1,69 (1H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 - 2,09 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,78 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,03 (2H, d, J = 5,9 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 5,29 - 5,43 (8H, m). EM (EN+) m/z 672 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 672,6309 (1,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 15)
(9Z,12Z)-N-metoxi-N-metiloctadeca-9,12-dienamida
A una solución de ácido linoleico (10,0 g, 35,7 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (6,56 g, 71,3 mmol) en diclorometano (250 ml), se le añadió 1-hidroxibenzoimidazol hidrato (10,9 g, 71,3 mmol), trietilamina (7,22 g, 71,3 mmol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (13,7 g, 71,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (11,4 g, 99%).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,24 - 1,40 (14H, m), 1,63 (2H, quint, J = 7,4 Hz), 2,00 - 2,09 (4H, m), 2,41 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,18 (3H, s), 3,68 (3H, s), 5,29 - 5,43 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 16)
(19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ona
Una solución de (9Z,12Z)-N-metoxi-N-metiloctadeca-9,12-dienamida (11,4 g, 35,2 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 15, en tetrahidrofurano (157 ml) se enfrió a 15°C en un baño de agua. Una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en tetrahidrofurano (52,9 ml, 52,9 mmol) se añadió gota a gota a la misma durante 20 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (14,3 g, 99%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,20 - 1,40 (28H, m), 1,50 - 1,60 (4H, m), 2,00 - 2,09 (4H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 5,28 - 5,42 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 17)
(19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11 -ol
A una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ona (14,3 g, 35,2 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 16, en metanol (106 ml) y tetrahidrofurano (106 ml), se le añadió borohidruro sódico (1,33 g, 35,2 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 70 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (13,5 g, 95%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,47 (40H, m), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,54 - 3,62 (1H, m), 5,29 - 5,42 (4H, m).
(Ejemplo 8)
Carbonato de 3-dimetilaminopropil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-72)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,15 g, 0,37 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,18 g, 2,3 mmol) en tolueno (0,8 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,07 g, 0,25 mmol) en tolueno (0,31 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 1 hora, la mezcla de reacción se calentó a 10°C, se agitó durante 20 minutos y se enfrió de nuevo a 0°C. Se le añadió 3-dimetilamino 1-propanol (0,40 g, 3,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (100 mg, 51%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,22 - 1,39 (32H, m), 1,49 - 1,62 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,72 (1H, m), 5,29 -5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 536 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 536,5038 (-0,5 mDa).
(Ejemplo 9)
Carbonato de (1-metilpiperidin-3-il)metil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-72)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,26 g, 0,64 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,32 g, 4,0 mmol) en tolueno (7,4 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,13 g, 0,44 mmol) en tolueno (0,9 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma (1-metil-3-piperidil)metanol (0,87 g, 6,7 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (360 mg, 55%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,85 -0,91 (6H, m), 1,21 - 1,39 (32H, m), 1,49 - 1,76 (9H, m), 1,86 - 1,92 (1H, m), 1,96 - 2,07 (5H, m), 2,26 (3H, s), 2,74 (1H, d, J = 10,5 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,8 Hz), 2,85 (1H, d, J = 10,5 Hz), 3,94 (1H, dt, J = 3,2, 7,3 Hz), 4,06 (1H, ddd, J = 3,2, 5,9, 10,7 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m), 5,29 -5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 562 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 562,5196 (-0,3 mDa).
(Ejemplo 10)
Carbonato de 1-metilpiperidin-4-il(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-66)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,300 g, 0,738 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,368 g, 4,65 mmol) en tolueno (7,4 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,151 g, 0,509 mmol) en tolueno (1,1 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 4-hidroxi-1 -metilpiperidina (0,892 g, 7,75 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (249 mg, 62%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,20 - 1,40 (32H, m), 1,49 - 1,62 (4H, m), 1,73 - 1,84 (2H, m), 1,92 - 2,01 (2H, m), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,16 - 2,25 (2H, m), 2,28 (3H, s), 2,65 - 2,73 (2H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,57 - 4,66 (1H, m), 4,64 - 4,73 (1H, m), 5,28 - 5,43 (4H, m).
EM (EN+) m/z 548 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 548,5042 (-0,1 mDa).
(Ejemplo 11)
Carbonato de (1-metilpirrolidin-3-il)metil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-71)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,300 g, 0,738 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,368 g, 4,65 mmol) en tolueno (7,4 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,151 g, 0,509 mmol) en tolueno (1,1 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma (1-metilpirrolidin-3-il)metanol (0,892 g, 7,75 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (234 mg, 58%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 -0,91 (6H, m), 1,20 - 1,40 (32H, m), 1,45 - 1,64 (5H, m), 1,95 -2,07 (5H, m), 2,30 (1H, dd, J = 5,5, 9,4 Hz), 2,34 (3H, s), 2,51 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,23 - 2,62 (1H, m), 2,65 (1H, dd, J = 7,8, 9,0 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,3 Hz), 4,03 (1H, ddd, J = 2,0, 7,8, 9,8 Hz), 4,07 (1H, ddd, J = 2,0, 7,0, 10,6 Hz), 4,68 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz), 5,29 -5,43 (4H, m).
EM (EN+) m/z 548 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 548,5050 (0,7 mDa).
(Ejemplo 12)
Carbamato de 1-metilpirrolidin-3-il(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-64)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,150 g, 0,369 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,184 g, 2,32 mmol) en tolueno (3,7 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,0755 g, 0,254 mmol) en tolueno (0,55 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 1 -metil-3-pirrolidinol (0,392 g, 3,87 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (99,9 mg, 50%).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,22 - 1,40 (32H, m), 1,47 - 1,60 (4H, m), 1,92 (1H, dddd, J = 2,7, 6,3, 7,4, 13,7 Hz), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,28 (1H, dddd, J = 6,3, 7,4, 7,8, 13,7 Hz), 2,36 (3H, s), 2,41 (1H, ddd, J = 6,3, 7,8, 9,0 Hz), 2,67 (1H, dd, J = 2,7, 10,9 Hz), 2,73 (1H, ddd, J = 6,3, 7,4, 9,0 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,82 (1H, dd, J = 5,9, 10,9 Hz), 4,67 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz), 5,08 (1H, ddt, J = 5,9, 7,8, 2,7 Hz), 5,28 - 5,43 (4H, m). EM (EN+) m/z 534 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 534,4891 (0,5 mDa).
(Ejemplo 13)
Carbonato de 2-(1-metilpirrolidin-2-il)etil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-75)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,200 g, 0,492 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,245 g, 3,10 mmol) en tolueno (5 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,101 g, 0,339 mmol) en tolueno (0,74 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 1-metil-2-pirrolidinametanol (0,667 g, 5,16 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (98,5 mg, 36%).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,22 - 1,40 (32H, m), 1,44 - 1,85 (8H, m), 1,92 -2,18 (8H, m), 2,32 (3H, s), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,06 (1H, ddd, J = 2,3, 8,2, 8,6 Hz), 4,11 -4,26 (2H, m), 4,65 - 4,72 (1H, m), 5,29 - 5,43 (4H, m).
EM (EN+) m/z 562 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 562,5203 (0,4 mDa).
(Ejemplo 14)
Carbonato de (1-metilpiperidin-4-il)metil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 2-73)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,200 g, 0,492 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,245 g, 3,10 mmol) en tolueno (5 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,101 g, 0,339 mmol) en tolueno (0,74 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 4-hidroximetil-1 -metilpiperidina (0,667 g, 5,16 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (21,7 mg, 8%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,39 (28H, m), 1,49 - 1,61 (6H, m), 1,63 - 1,71 (1H, m), 1,74 (2H, d, J = 14,1 Hz), 1,91 (2H, t, J = 11,7 Hz), 2,00 - 2,03 (4H, m), 2,27 (3H, s), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,86 (2H, d, J = 11,7 Hz), 3,98 (2H, d, J = 6,6 Hz), 4,64 -4,71 (1H, m), 5,29 -5,43 (4H, m).
EM (EN+) m/z 562 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 562,5204 (0,5 mDa).
(Ejemplo de referencia 18)
(21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-13-ol
A una solución de (9Z,12Z)-N-metoxi-N-metiloctacosa-9,12-dienamida (0,50 g, 1,5 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 15 en tetrahidrofurano (6,9 ml), se le añadió gota a gota una solución de bromuro de n-dodecil magnesio 1 N en éter dietílico (4,6 ml, 4,6 mmol) durante 3 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener una mezcla que contenía una presunta cetona intermedia (0,93 g). A una solución de esta mezcla de cetona en metanol (4,6 ml) y tetrahidrofurano (4,6 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,06 g, 1,5 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,59 g, 89%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 6,8 Hz), 0,90 (3H, t, J = 6,8 Hz), 1,22 - 1,48 (44H, m), 2,02 -2,08 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,55 - 3,62 (1H, m), 5,30 - 5,42 (4H, m).
(Ejemplo 15)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-13-ilo (compuesto ejemplar 1-112)
Una solución de (21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-13-ol (0,15 g, 0,35 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 18 y piridina (0,17 g, 2,2 mmol) en tolueno (3,4 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,07 g, 0,24 mmol) en tolueno (0,5 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0°C durante 2 horas, se añadió a la misma 3-dimetilamino 1-propanol (0,37 g, 3,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (177 mg, 91%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,21 - 1,40 (36H, m), 1,49 - 1,63 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,78 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,72 (1H, m), 5,29 -5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 564 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 564,5359 (0,3 mDa).
(Ejemplo de referencia 19)
(19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ona
A una solución de (9Z,12Z)-N-metoxi-N-metil-octacosa-9,12-dienamida (1,00 g, 3,09 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 15 en tetrahidrofurano (6,2 ml), se le añadió gota a gota una solución de cloruro de (decin-7-inil)magnesio 0,5 N en tetrahidrofurano (12,4 ml, 6,20 mmol) durante 3 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,03 g, 83%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,11 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,23 - 1,61 (24H, m), 2,01 -2,08 (4H, m), 2,11 -2,19 (4H, m), 2,36 -2,41 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,8 Hz), 5,29 -5,42 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 20)
(19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ol
A una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ona (1,0 g, 2,56 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 19 en metanol (7,7 ml) y tetrahidrofurano (7,7 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,097 g, 2,6 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,78 g, 75%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,11 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,24 - 1,52 (28H, m), 2,02 -2,08 (4H, m), 2,11 -2,19 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,55 -3,62 (1H, m), 5,30 - 5,42 (4H, m).
(Ejemplo 16)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ilo (compuesto ejemplar 1-99)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ol (0,15 g, 0,37 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 20 y piridina (0,19 g, 2,4 mmol) en tolueno (3,7 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,076 g, 0,26 mmol) en tolueno (0,5 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0°C durante 2 horas, se añadió a la misma 3-dimetilamino 1-propanol (0,40 g, 3,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (183 mg, 93%). RMN 1H (500 MHz, CDCls) 6: 0,89 (3H, t, J = 6,6 Hz), 1,11 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,23 - 1,64 (28H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,10 - 2,19 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 -4,71 (1H, m), 5,29 -5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 532 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 532,4739 (0,9 mDa).
(Ejemplo de referencia 21)
(3Z,19Z,22Z)-octacosa-3,19,22-trien-11-ol
A acetato de níquel (II) tetrahidrato (0,24 g, 0,97 mmol), se le añadió etanol (12 ml) en atmósfera de hidrógeno gaseoso y se añadió una solución de borohidruro sódico (0,037 g, 0,97 mmol) en etanol (6 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos, se añadió etilendiamina (0,23 g, 3,9 mmol) y la mezcla se volvió a agitar durante 15 minutos. Posteriormente, se añadió a la misma una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-3-in-11-ol (0,39 g, 0,97 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 20 en etanol (6 ml) durante 1 minuto y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5,5 horas en atmósfera de hidrógeno. La mezcla de reacción se diluyó con una solución al 20% de acetato de etilo en hexano y se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,37 g, 95%).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 6: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 0,95 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,23 - 1,48 (28H, m), 1,99 -2,08 (8H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,55 - 3,61 (1H, m), 5,29 - 5,42 (6H, m).
(Ejemplo 17)
Carbamato de 3-(dimetilamino)propil(3Z,19Z,22Z)-octacosa-3,19,22-trien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-87)
Una solución de (3Z,19Z,22Z)-octacosa-3,19,22-trien-11-ol (0,15 g, 0,37 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 21 y piridina (0,19 g, 2,4 mmol) en tolueno (3,7 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,075 g, 0,26 mmol) en tolueno (0,5 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0°C durante 2 horas, se añadió a la misma 3-dimetilamino 1-propanol (0,40 g, 3,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (136 mg, 69%). RMN 1H (500 MHz, CDCh) 6: 0,89 (3H, t, J = 6,6 Hz), 0,95 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,22 - 1,40 (24H, m), 1,49 - 1,64 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 1,97 - 2,08 (8H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,17 (2H, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m), 5,27 -5,43 (6H, m).
EM (EN+) m/z 534 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 534,4891 (0,5 mDa).
(Ejemplo 18)
Carbamato de 4-(dimetilamino)butil(11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il]icosa-11,14-dien-1-ilo (compuesto ejemplar 1-478)
Una solución de (11Z,14Z)-2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il]icosa-11,14-dien-1-ol (0,15 g, 0,28 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 14 y piridina (0,14 g, 1,8 mmol) en tolueno (0,6 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,06 g, 0,19 mmol) en tolueno (0,24 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 2 horas, la mezcla de reacción se calentó a 10°C, se agitó durante 30 minutos y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 4-dimetilamino 1-butanol (0,35 g, 2,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (80 mg, 42%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 6: 0,86 - 0,92 (6H, m), 1,20 - 1,40 (40H, m), 1,50 - 1,59 (2H, m), 1,63 - 1,74 (3H, m), 2,01 - 2,09 (8H, m), 2,21 (6H, s), 2,28 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,78 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,02 (2H, d, J = 5,9 Hz), 4,14 (2H, t, J = 6,6 Hz), 5,29 -5,43 (8H, m).
EM (EN+) m/z 686 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 686,6461 (1,0 mDa).
(Ejemplo de referencia 22)
Octacosan-11-ol
A una solución de octadecanal (0,62 g) en tetrahidrofurano (2,3 ml), se le añadió una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en éter dietílico (4,6 ml, 4,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 20 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un sólido ceroso de color blanco (0,34 g, 36%).
(Ejemplo 19)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propiloctacosan-11-ilo (compuesto ejemplar 1-8)
Una solución de octacosan-11-ol (0,11 g, 0,27 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 22 y piridina (0,13 g, 1,7 mmol) en tolueno (2,7 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,055 g, 0,18 mmol) en tolueno (0,40 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0°C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,29 g, 2,8 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (114 mg, 79%). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,35 (46H, m), 1,48 - 1,64 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,17 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,72 (1H, m).
EM (EN+) m/z 540 [M+H]+
HRMS (EN+)m/z 540,5344 (-1,2 mDa).
(Ejemplo de referencia 23)
(Z)-N-metoxi-N-metiloctadec-9-enamida
A una solución de ácido oleico (10,3 g, 36,3 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (7,08 g, 72,6 mmol) en diclorometano (250 ml), se le añadió 1-hidroxibenzoimidazol hidrato (11,1 g, 72,6 mmol), trietilamina (7,34 g, 72,6 mmol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (13,9 g, 72,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (12,1 g, 99%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,22 - 1,37 (20H, m), 1,63 (2H, quint, J = 7,3 Hz), 1,97 - 2,04 (4H, m), 2,41 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,18 (3H, s), 3,68 (3H, s), 5,31 - 5,38 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 24)
(Z)-octacos-19-en-11-ona
A una solución de (Z)-N-metoxi-N-metiloctadec-9-enamida (0,50 g, 1,5 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 23, en tetrahidrofurano (7,7 ml), se le añadió una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en tetrahidrofurano (3,1 ml, 3,1 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora y posteriormente a 60°C durante 30 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la materia volátil se eliminó a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,59 g, 93%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,90 (6H, m), 1,20 - 1,36 (34H, m), 1,52 - 1,60 (4H, m), 1,98 -2,04 (4H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,3 Hz), 5,32 - 5,38 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 25)
(Z)-octacos-19-en-11 -ol
A una solución de (Z)-octacosa-19-en-11-ona (0,59 g, 1,4 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 24, en metanol (4,3 ml) y tetrahidrofurano (4,3 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,054 g, 1,4 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 60 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,45 g, 77%).
(Ejemplo 20)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z)-octacos-19-en-11-ilo (compuesto ejemplar 1-16)
Una solución de (Z)-octacosa-19-en-11-ol (0,45 g, 1,1 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 25 y piridina (0,55 g, 6,9 mmol) en tolueno (11 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,23 g, 6,9 mmol) en tolueno (1,7 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (1,2 g, 12 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (530 mg, 89%).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,88 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,21 - 1,37 (38H, m), 1,49 - 1,62 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 1,97 - 2,04 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 - 4,71 (1H, m), 5,32 -5,37 (2H, m).
EM (EN+) m/z 538 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 538,5193 (-0,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 26)
Octadeca-9,12,15-triin-1 -ol
A una solución de 9-decin-1-ol (5,15 g, 33,4 mmol) y 1-bromoocta-2,5-diina (compuesto conocido, 6,18 g, 33,4 mmol) en N,N-dimetilformamida (66 ml), se le añadió yoduro de sodio (5,56 g, 37,1 mmol), carbonato potásico (10,2 g, 74,1 mmol) y yoduro de cobre (I) (7,06 g, 37,1 mmol) en ese orden y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. La materia no soluble se eliminó a través de celite. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con un disolvente mezclado de hexano y acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (8,40, 97%).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: ,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,24 - 1,42 (10H, m), 1,48 (2H, tt, J = 7,1, 7,6 Hz), 1,57 (2H, tt, J = 6,6, 7,1 Hz), 2,12 - 2,21 (4H, m), 3,14 (2H, s), 3,14 (2H, s), 3,64 (2H, t, J = 6,6 Hz).
(Ejemplo de referencia 27)
Ácido octadeca-9,12,15-triiónico
A una solución de octadeca-9,12,15-triin-1-ol (8,40 g, 32,5 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 26 y trietilamina (16,4 g, 163 mmol) en dimetilsulfóxido (97 ml), se le añadió trióxido de azufre-piridina (12,9 g, 81,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y el líquido de color pardo obtenido se disolvió en alcohol ferc-butílico (130 ml) y 2-metil-2-buteno (18 ml). A la solución, se le añadió gota a gota una solución de dihidrogenofosfato de sodio dihidrato (11,2 g, 71,5 mmol) y clorito sódico (6,47 g, 71,5 mmol) en agua (130 ml) durante 5 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 50 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se sometió a extracción con un disolvente mezclado de hexano-acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un sólido de color amarillo (6,13 g, 69%). RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 1,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,27 - 1,41 (6H, m), 1,48 (2H, tt, J = 7,1, 7,3 Hz), 1,64 (2H, tt, J = 7,1, 7,6 Hz), 2,12 - 2,20 (4H, m), 2,35 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,14 (4H, s).
(Ejemplo de referencia 28)
N-metoxi-N-metiloctadeca-9,12,15-triinamida
A una solución de ácido octadeca-9,12,15-triinoico (5,13 g, 18,8 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 27 y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (3,67 g, 37,7 mmol) en diclorometano (132 ml), se le añadió 1-hidroxibenzoimidazol hidrato (5,77 g, 37,7 mmol), trietilamina (3,81 g, 37,7 mmol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (7,22 g, 37,7 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (4,00 g, 67%). RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 1,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,29 -1,41 (6H, m), 1,48 (2H, tt, J = 7,1, 7,3 Hz), 1,63 (2H, quint, J = 7,3 Hz), 2,11 -2,20 (4H, m), 2,41 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,14 (4H, s), 3,18 (3H, s), 3,68 (3H, s).
(Ejemplo de referencia 29)
Octacosa-19,22,25-triin-11-ona
A una solución de N-metoxi-N-metiloctadec-9,12,15-triinamida (1,00 g, 3,17 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 28, en tetrahidrofurano (15 ml), se le añadió una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en tetrahidrofurano (6,34 ml, 6,34 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora y posteriormente a 60°C durante 30 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la materia volátil se eliminó a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,40 g, 32%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,20 - 1,39 (20H, m), 1,47 (2H, tt, J = 7,1, 7,3 Hz), 1,51 -1,59 (4H, m), 2,12 -2,20 (4H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,6 Hz), 3,14 (4H, s).
(Ejemplo de referencia 30)
Octacosa-19,22,25-triin-11-ol
A una solución de octacosa-19,22,25-triin-11-ona (0,40 g, 1,0 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 29, en metanol (3,0 ml) y tetrahidrofurano (3,0 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,038 g, 1,0 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 60 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,25 g, 62%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,21 - 1,52 (30H, m), 2,12 -2,20 (4H, m), 3,14 (2H, s), 3,14 (2H, s), 3,55 -3,60 (1H, m).
(Ejemplo de referencia 31)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propiloctacosa-19,22,25-triin-11 -ilo
Una solución de octacosa-19,22,25-triin-11-ol (0,25 g, 0,63 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 30 y piridina (0,31 g, 4,0 mmol) en tolueno (6,2 ml) se enfrió a 0°C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,13 g, 0,43 mmol) en tolueno (0,9 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0°C durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0°C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,68 g, 6,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,22 g, 66%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,12 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,20 - 1,60 (30H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 2,11- 2,20 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,14 (4H, s), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m).
(Ejemplo 21)
Carbamato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22Z,25Z)-octacosa-19,22,25-trien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-164)
A acetato de níquel (II) tetrahidrato (0,104 g, 0,417 mmol), se le añadió etanol (5,0 ml) en atmósfera de gas hidrógeno y se añadió una solución de borohidruro sódico (0,015 g, 0,417 mmol) en etanol (2,5 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos, se añadió etilendiamina (0,100 g, 1,67 mmol) y la mezcla se volvió a agitar durante 15 minutos. Posteriormente, se añadió a la misma una solución de carbamato de 3-(dimetilamino)propiloctacosa-19,22,25-triin-11-ilo (0,220 g, 0,417 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 31, en etanol (2,5 ml) se añadió durante 1 minuto y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno. La mezcla de reacción se diluyó con una solución de hexano y se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro. RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,88 (3H, t, J = 6,8 Hz), 0,98 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,20 - 1,39 (26H, m), 1,49 - 1,62 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 1,99 -2,11 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,78 -2,83 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 - 4,71 (1H, m), 5,28 - 5,43 (6H, m).
EM (EN+) m/z 534 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 534,4885 (-0,1 mDa).
(Ejemplo de referencia 32)
(9Z,12R)-12-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}octadec-9-enoato de metilo
A una solución de ricinolato de metilo (16,7 g, 53,4 mmol) e imidazol (7,28 g, 107 mmol) en N,N-dimetilformamida (53,4 ml), se le añadió cloruro de ferc-butil(dimetil)silano (12,1 g, 80,2 mmol) durante 2 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (23,2 g, 99%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,03 - 0,06 (6H, m), 0,86 - 0,90 (12H, m), 1,22 - 1,45 (18H, m), 1,62 (2H, tt, J = 6,8, 7,6 Hz), 2,01 (2H, c, J = 6,6 Hz), 2,18 (2H, t, J = 5,9 Hz), 2,30 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,65 (1H, quint, J = 5,9 Hz), 3,67 (3H, s), 5,33 -5,45 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 33)
(5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7,24-dien-16-ona
A una solución de (9Z,12R)-12-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}octadec-9-enoato de metilo (12 g, 28,1 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 32, en xileno (15 ml), se le añadió una suspensión de hidruro sódico (1,37 g, 64%, 36,6 mmol), lavado con anterioridad con hexano en xileno (5 ml),durante 5 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a 150°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con hexano. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (120 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (28 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 90°C durante 5,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con hexano. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (7,24 g, 67%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,03 - 0,06 (12H, m), 0,86 - 0,90 (24H, m), 1,21 - 1,45 (36H, m), 1,51 - 1,59 (4H, m), 2,01 (4H, c, J = 6,6 Hz), 2,18 (4H, t, J = 5,9 Hz), 2,38 (4H, t, J = 7,6 Hz), 3,65 (2H, quint, J = 5,9 Hz), 5,32 - 5,46 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 34)
(5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7,24-dien-16-ol
A una solución de (5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7.24- dien-16-ona (5,5 g, 7,2 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 33, en metanol (22 ml) y tetrahidrofurano (22 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,27 g, 7,2 mmol) durante 2 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la materia volátil se eliminó a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (5,0 g, 91%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,03 - 0,05 (12H, m), 0,86 - 0,90 (24H, m), 1,22 - 1,47 (44H, m), 2,01 (4H, c, J = 6,6 Hz), 2,18 (4H, t, J = 5,9 Hz), 3,55 - 3,61 (1H, m), 3,65 (2H, quint, J = 5,9 Hz), 5,34 - 5,46 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 35)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7,24-dien-16-ilo
A una solución de (5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7.24- dien-16-ol (1,00 g, 1,31 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 34 y piridina (0,651 g, 8,23 mmol) en tolueno (13,1 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,268 g, 0,690 mmol) en tolueno (1,96 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (1,42 g, 13,7 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,15 g, 98%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,03 - 0,05 (12H, m), 0,88 (6H, t, J = 6,8 Hz), 0,89 (18H, s), 1,21 - 1,46 (40H, m), 1,49 -1,62 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,8, 7,3 Hz), 2,01 (4H, c, J = 6,6 Hz), 2,18 (4H, t, J = 5,9 Hz), 2,22 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,65 (2H, quint, J = 5,9 Hz), 4,17 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m), 5,33 -5,46 (4H, m).
(Ejemplo 22)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(7R,9Z,26Z,29R)-7,29-dihidroxipentatriaconta-9,26-dien-18-ilo (compuesto ejemplar 1-308)
A carbonato de 3-(dimetilamino)propil(5R,7Z,24Z,27R)-5,27-dihexil-2,2,3,3,29,29,30,30-octametil-4,28-dioxa-3,29-disilahentriaconta-7,24-dien-16-ilo (1,15 g, 1,29 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 35, se le añadió una solución de fluoruro de tetra-n-butilamonio 1 N en tetrahidrofurano (19,3 ml, 19,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,56 g, 65%).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 8: 0,88 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,23 - 1,38 (36H, m), 1,40 - 1,50 (4H, m), 1,50 - 1,62 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,8, 7,3 Hz), 2,04 (4H, c, J = 7,1 Hz), 2,21 (4H, t, J = 7,1 Hz), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,57 - 3,64 (2H, m), 4,17 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,65 - 4,71 (1H, m), 5,37 - 5,44 (1H, m), 5,54 - 5,58 (1H, m).
(Ejemplo 23)
Diacetato de (7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(Dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)pentatriaconta-9,26-dieno-7,29-diilo (compuesto ejemplar 1-233)
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(7R,9Z,26Z,29R)-7,29-dihidroxipentatriaconta-9,26-dien-18-ilo (0,15 g, 0,23 mmol), obtenido en el ejemplo 22 y piridina (0,36 g, 4,5 mmol) en diclorometano (4,5 ml), se le añadió cloruro de ácido acético (0,18 g, 2,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (155 mg, 92%).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,38 (40H, m), 1,49 - 1,63 (8H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 1,98 - 2,05 (10H, m), 2,22 (6H, s), 2,24 - 2,33 (4H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,3 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,71 (1H, m), 4,87 (2H, quint, J = 6,3 Hz), 5,29 - 5,36 (2H, m), 5,44 - 5,50 (2H, m).
EM (EN+) m/z 750 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 750,6247 (-0,1 mDa).
(Ejemplo 24)
3-(dimetilamino)propilcarbonato de (7R,9Z,26Z,29R)-7,29-dihexil-2,5-dioxo-1,6-dioxaciclononacosa-9,26-dien-18-ilo (compuesto ejemplar 1-319)
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(7R,9Z,26Z,29R)-7,29-dihidroxipentatriaconta-9,26-dien-18-ilo (1,19 g, 1,72 mmol), obtenido en el ejemplo 22 y piridina (1,13 g, 14,3 mmol) en diclorometano (40 ml), se le añadió gota a gota una solución de cloruro de ácido succínico (0,186 g, 1,20 mmol) en diclorometano (13 ml) durante 1,5 horas y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (20 mg, 1%).
RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8: 0,88 (6H, t, J = 6,6 Hz), 1,21 - 1,39 (40H, m), 1,51 - 1,63 (8H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,3 Hz), 1,98 - 2,07 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,32 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,60 (4H, s), 4,17 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,68 (1H, quint, J = 6,1 Hz), 4,86 - 4,92 (2H, m), 5,29 - 5,36 (2H, m), 5,43 - 5,50 (2H, m). EM (EN+) m/z 748 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 748,6091 (0,0 mDa).
(Ejemplo de referencia 36)
(11Z,14Z)-N-metoxi-N-metilicosa-11,14-dienamida
A una solución de (11Z,14Z)-icosa-11,14-dienoato (compuesto 3 descrito en Chem. Lett. 1998, 2, 175, 4,45 g, 14,4 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (2,87 g, 28,9 mmol) en diclorometano (71 ml), se le añadió 1 -hidroxibenzoimidazol hidrato (3,90 g, 28,9 mmol), trietilamina (2,95 g, 28,9 mmol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (5,53 g, 28,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para finalizar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después se sometió el residuo a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (5,00 g, 99%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,24 - 1,40 (18H, m), 1,62 (2H, quint, J = 7,4 Hz), 2,02 - 2,07 (4H, m), 2,41 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,18 (3H, s), 3,68 (3H, s), 5,29 - 5,43 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 37)
(21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-11-ol
A una solución de (11Z,14Z)-N-metoxi-N-metilicosa-11,14-dienamida (0,50 g, 1,4 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 36, en tetrahidrofurano (6,3 ml), se le añadió gota a gota una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en éter dietílico (4,3 ml, 4,3 mmol) durante 3 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice. A una solución del aceite obtenido en metanol (5,4 ml) y tetrahidrofurano (5,4 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,05 g, 1,3 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener una mezcla que contenía el compuesto de interés.
(Ejemplo 25)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-444)
A una solución de (21Z,24Z)-triaconta-21,24-dien-11-ol (0,15 g, 0,35 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 37 y piridina (0,17 g, 2,18 mmol) en tolueno (0,7 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,07 g, 0,25 mmol) en tolueno (0,29 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadió 3-dimetilamino 1-propanol (0,37 g, 3,6 mmol) a la misma y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (100 mg, 51%). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,21 - 1,40 (36H, m), 1,49 - 1,61 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,6 Hz), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,65 -4,72 (1H, m), 5,29 -5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 564 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 564,5352 (-0,4 mDa).
(Ejemplo 26)
3-(pirrolidin-1-il)propilcarbonato de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-77)
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,200 g, 0,492 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,245 g, 3,10 mmol) en tolueno (4,9 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,101 g, 0,339 mmol) en tolueno (0,74 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-(pirrolidin-1-il)propan-1-ol (0,667 g, 5,16 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (127 mg, 46 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 6,7 Hz), 0,89 (3H, t, J = 6,7 Hz), 1,20 - 1,40 (32H, m), 1,48 - 1,64 (4H, m), 1,74 -1,81 (4H, m), 1,90 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,45 - 2,54 (4H, m), 2,53 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,19 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,70 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz), 5,28 - 5,43 (4H, m).
EM (EN+) m/z 562 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 562,5203 (0,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 38)
(19Z,22R)-22-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}octacos-19-en-11-ona
A una solución de (9Z,12R)-12-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}octadec-9-enoato de metilo (2,00 g, 4,69 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 32 y undecanoato de metilo (2,82 g, 14,1 mmol) en xileno (20 ml), se le añadió durante 5 minutos una suspensión de hidruro sódico (0,879 g, 64%, 23,4 mmol) lavado con antelación con hexano en xileno (8 ml) y después la mezcla se hizo reaccionar a 150 °C durante 6,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (94 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (23 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 90 °C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con hexano. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (3,41 g, que contenía impurezas).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,03 - 0,05 (6H, m), 0,85 - 0,91 (15H, m), 1,21 - 1,44 (36H, m), 1,50 - 1,60 (4H, m), 1,97 -2,04 (2H, m), 2,18 (2H, t, J = 6,3 Hz), 2,38 (4H, t, J = 7,4 Hz), 3,61 - 3,68 (1H, m), 5,33 -5,46 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 39)
(19Z,22R)-22-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}octacos-19-en-11-ol
A una solución de la mezcla que contenía (19Z,22R)-22-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxiloctacos-19-en-11-ona (3,41 g)) obtenida en el ejemplo de referencia 38 en metanol (24 ml) y tetrahidrofurano (24 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,30 g, 8,0 mmol) durante 2 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante I , 5 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la materia volátil se eliminó a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (3,54 g, que contenía impurezas).
(Ejemplo de referencia 40)
3-(dimetilamino)propilcarbonato de (19Z,22R)-22-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}octacos-19-en-11-ilo
Una solución de la mezcla que contenía (19Z,22R)-22-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}octacos-19-en-11-ol (3,54 g) obtenida en el ejemplo de referencia 39 y piridina (4,00 g, 50,6 mmol) en tolueno (78,8 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y a la misma se añadió durante 2 minutos una solución de trifosgeno (1,62 g, 5,45 mmol) en tolueno (11,8 ml). Después de agitar a 0 °C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (8,81 g, 85,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (2,58 g, que contenía impurezas).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,03 - 0,06 (6H, m), 0,85 - 0,91 (15H, m), 1,23 - 1,64 (40H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 1,97 -2,04 (2H, m), 2,15 -2,20 (2H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,61 -3,68 (1H, m), 4,17 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,69 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz), 5,32 - 5,46 (2H, m).
(Ejemplo 27)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ilo (compuesto ejemplar 1-298)
A la mezcla que contenía 3-(dimetilamino)propilcarbonato de (19Z,22R)-22-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxiloctacos-19-en-11-ilo (2,58 g,) obtenida en el ejemplo de referencia 40, se le añadió una solución de fluoruro de tetra-n-butilamonio 1 N en tetrahidrofurano (23,2 ml, 23,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para terminar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,500 g).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,88 (3H, t, J = 6,7 Hz), 0,89 (3H, t, J = 6,7 Hz), 1,20 - 1,38 (28H, m), 1,40 - 1,62 (8H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 2,01 - 2,08 (2H, m), 2,18 - 2,23 (2H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,61 (1H, tt, J = 5,3, 5,9 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,69 (1H, tt, J = 5,5, 6,3 Hz), 5,36 - 5,45 (1H, m), 5,52 - 5,60 (1H, m). EM (EN+) m/z 554 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 554,5146 (-0,2 mDa).
(Ejemplo 28)
Acetato de (7R,9Z)-18-({[3-(dimetilamino)propiloxi]carbonil}oxi)octacos-9-en-7-ilo (compuesto ejemplar 1-212)
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ilo (0,20 g, 0,36 mmol) obtenida en el ejemplo 27 y piridina (0,57 g, 7,2 mmol) en diclorometano (7,2 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,28 g, 3,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (42 mg, 20%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 6,7 Hz), 0,89 (3H, t, J = 6,7 Hz), 1,20 - 1,37 (32H, m), 1,48 - 1,61 (4H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 1,97 - 2,02 (2H, m), 2,03 (3H, s), 2,22 (6H, s), 2,28 (2H, dd, J = 6,3, 7,0 Hz), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,69 (1H, tt, J = 5,5, 6,3 Hz), 4,87 (1H, quint, J = 6,3 Hz), 5,32 (1H, dtt, J = I I , 0, 1,6, 7,0 Hz), 5,47 (dtt, J = 11,0, 1,6, 7,0 Hz).
EM (EN+) m/z 596 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 596,5269 (1,5 mDa).
(Ejemplo de referencia 41)
1.15- bis[2-({2-[(2-etilcidopropil)metil]cidopropil}metil)cidopropil]pentadecan-8-ona
A una solución de 8-[2-({2-[(2-etNddopropN)metN]ddopropN}iTietN)ddopropN]odanoato de metilo (intermedio del compuesto 6 descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, l3 , 1037, 1,50 g, 4,48 mmol) en xileno (6,0 ml), se le añadió durante 2 minutos una suspensión de hidruro sódico (0,219 g, 64%, 5,83 mmol), lavado con anterioridad con hexano en xileno (0,7 ml) y después la mezcla se hizo reaccionar a 150 °C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con hexano. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un aceite. A este aceite, se le añadió tetrahidrofurano (22,4 ml) y una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (5,4 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a 90 °C durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se trató con agua y se sometió a extracción con una solución mezclada de hexano y acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,294 g, 23%).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: (-0,32) -(-0,17) (6H, m), 0,57 - 1,61 (60H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,4 Hz).
(Ejemplo de referencia 42)
1.15- bis[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]pentadecan-8-ol
A una solución de 1,15-bis[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]pentadecan-8-ona (0,29 g, 0,51 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 41 en metanol (1,5 ml) y tetrahidrofurano (1,5 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,019 g, 0,51 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 90 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,23 g, 78 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: (-0,32) -(-0,16) (6H, m), 0,57 - 1,60 (64H, m), 3,54 - 3,63 (1H, m).
(Ejemplo 29)
3-dimetilaminopropilcarbonato de 1,15-bis[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]pentadecan-8-ilo (compuesto ejemplar 1-200)
Una solución de 1,15-bis[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]pentadecan-8-ol (0,13 g, 0,22 mmol) obtenida el ejemplo de referencia 42 y piridina (0,11 g, 1,4 mmol) en tolueno (2,2 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,046 g, 0,15 mmol) en tolueno (0,34 ml) durante 2 minutos. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 20 minutos, después se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 40 minutos y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,24 g, 2,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (150 mg, 94 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: (-0,32) -(-0,16) (6H, m), 0,56 - 1,66 (64H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,17 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,70 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz).
EM (EN+) m/z 710 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 710,6463 (1,2 mDa).
(Ejemplo de referencia 43)
8-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]-N-metoxi-N-metiloctanamida
A una solución de 8-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octanoato de metilo (compuesto 6 descrito en Bioorg. Med. chem. Lett. 2003, 13, 1037, 3,00 g, 9,36 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (1,83 g, 18,7 mmol) en diclorometano (65,5 ml), se le añadió 1-hidroxibenzoimidazol hidrato (2,87 g, 18,7 mmol), trietilamina (1,89 g, 18,7 mmol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (3,59 g, 18,7 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para terminar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (3,08 g, 91 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: (-0,32) -(-0,17) (3H, m), 0,57 - 1,56 (28H, m), 1,57 - 1,67 (2H, m), 2,41 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (3H, s), 3,68 (3H, s).
(Ejemplo de referencia 44)
1-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octadecan-8-ona
Una solución de 8-[2-({2-[(2-etilcidopropil)metil]cidopropil}metil)cidopropil]-N-metoxi-N-metiloctanamida (2,00 g, 5,50 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 43, en tetrahidrofurano (24,5 ml) se enfrió a 15 °C en un baño de agua. Una solución de n-decilmagnesio de bromuro 1 N en tetrahidrofurano (8,25 ml, 8,25 mmol) se añadió gota a gota a la misma durante 15 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,56 g, 64 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: (-0,32) -(-0,17) (3H, m), 0,57 - 1,62 (49H, m), 2,38 (4H, t, J = 7,4 Hz).
(Ejemplo de referencia 45)
1-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octadecan-8-ol
A una solución de 1-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octadecan-8-ona (1,56 g, 3,51 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 44 en metanol (10,5 ml) y tetrahidrofurano (10,5 ml), se le añadió borohidruro sódico (0,133 g, 3,51 mmol) y después la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 90 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,50 g, 96 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: (-0,32) -(-0,17) (3H, m), 0,57 - 1,56 (53H, m), 3,54 - 3,62 (1H, m).
(Ejemplo 30)
Carbonato de 3-dimetilaminopropil1-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octadecan-8-ilo (compuesto ejemplar 1-188)
Una solución de 1-[2-({2-[(2-etilciclopropil)metil]ciclopropil}metil)ciclopropil]octadecan-8-ol (0,25 g, 0,56 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 45 y piridina (0,28 g, 3,5 mmol) en tolueno (5,6 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,12 g, 0,39 mmol) en tolueno (0,84 ml) durante 2 minutos. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 20 minutos, después se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 40 minutos y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,61 g, 5,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (155 mg, 48 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: (-0,32) -(-0,16) (3H, m), 0,57 - 1,65 (53H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,67 (1H, tt, J = 5,5, 7,0 Hz).
EM (EN+) m/z 576 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 576,5367 (1,1 mDa).
(Ejemplo 31) Preparación de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Una solución lipídica que tiene una concentración de lípidos totales de 25 mM en etanol al 90 % con diestearoilfosfatidilcolina (1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DSPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 1, 2, 3, u 8 (a partir de ahora en el presente documento, denominado como LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominada como PEG-C-DMA) se prepararon con una relación molar de DSPC:Chol:LP:PEG-C-DMA = 20:48:30:2.
Un polinucleótido CT-157:
HO-P(=O)(OH)-O-Um1p-Tp-Gm1p-Tp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Cm1p-Ap-Um1p-Tp-Cm1p-Tp-Um1p-Gp-Um1p-Gp-Cm1p-Tp-Um1t-H (SEQ ID NO:2 del Listado de secuencias) (polinucleótido que contiene una secuencia complementaria de las posiciones de nucleótidos 3139-3157 del gen de la p-catenina humana (n.° de registro de GenBank NM_001904.3)) y un polinucleótido CT-169:
HO-Gp-Cm1p-Ap-Cm1p-Ap-Am1p-Gp-Am1p-Ap-Um1p-Gp-Gm1p-Ap-Um1p-Cp-Am1p-Cp-Am1t-H (SEQ ID NO:1 del Listado de secuencias) (que contiene una secuencia de las posiciones de nucleótido 3139-3156 del gen de la p-catenina humana (n.° de registro de GenBank NM_001904.3))
descrito en los Ejemplos 45 y 51 de la publicación internacional n.° WO 2010/001909 se sintetizaron con un sintetizador de ADN, se introdujeron en una cantidad de 300 pmol/tubo, y se secaron a presión reducida. 30 pl de un tampón de suspensión de ARNip (Qiagen N.V.) s añadieron a lo anterior, y la mezcla se calentó a 65 °C durante 1 minuto y después se dejó a temperatura ambiente durante 5 minutos para hibridación para obtener una solución 10 pM del polinucleótido bicatenario. Después, la concentración de la solución se ajustó a 1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) para obtener una solución de polinucleótido bicatenario. La solución lipídica y la solución de polinucleótido bicatenario se calentaron a 37 °C y se mezclaron (100 j l de cada). Posteriormente, 200 j l de una solución de tampón citrato, (tampón citrato 20 mM, NaCl 300 mM, pH 6,0) se añadió al anterior, y la mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de la partícula lipídica de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, m W c O: 100 KD, Spectra/Por) para eliminación del etanol y eliminación de los polinucleótidos bicatenarios no encapsulados mediante neutralización para obtener una dispersión purificada de una partícula lipídica de ácido nucleico con ARNip encapsulado que contiene el compuesto descrito en el Ejemplo 1, 2, 3, u 8. Las muestras de control usadas fueron el compuesto descrito en el Ejemplo de referencia 2 y el compuesto 1 descritos en el documento WO2012/054365.
(Ejemplo 32) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Se caracterizó la dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31. A continuación se describirá cada procedimiento de caracterización.
(1) Tamaño de partícula promedio
El tamaño de partícula del liposoma se midió con un Potencial Zeta/Dimensionador de partículas NICOMP((TM)) 380ZLS (Particle Sizing Systems, LLC). En las tablas, el tamaño de partícula promedio se indica por un tamaño de partícula promedio en volumen, y el valor numérico seguido por ± representa una desviación.
(2) Tasa de encapsulación del polinucleótido bicatenario
La tasa de encapsulación del polinucleótido bicatenario se midió con el kit de ensayo Quant-iT RiboGreen RNA (Invitrogen Corp.) según el documento adjunto.
Específicamente, el polinucleótido bicatenario en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se cuantificó en presencia y ausencia de un detergente Triton X-100 al 0,015 %, y el índice de encapsulación se calculó de acuerdo con la siguiente expresión:
{[Cantidad del polinucleótido bicatenario en presencia de
detergente] - [Cantidad del polinucleótido bicatenario en
ausencia del detergente]} / [Cantidad del polinucleótido
bicatenario en presencia del detergente]} x 100 (%)
(3) Relación entre el polinucleótido bicatenario y el lípido
La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se mezcló con acetonitrilo y cloroformo en una relación de 1:1:1 y se centrifugó a 15.000 rp, durante 2 minutos. Después, se recuperó la capa acuosa obtenida como una capa superior, seguido por la extracción del polinucleótido bicatenario. La cantidad del polinucleótido bicatenario en la muestra se midió mediante cromatografía de intercambio iónico (sistema: Agilent 1100 series, columna: TSKgel DEAE-2SW (2,6 x 150 mm) (Tosoh Corp), tampón A: 20 % de acetonitrilo, tampón B: 20 % de acetonitrilo y formiato de amonio 1,6 M, gradiente (%B): 30-55 % (0-20 min), caudal: 1 ml/min, temperatura: 40 °C, detección: 260 nm).
La cantidad de fosfolípido en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midió con un Phospholipid C-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) según el documento adjunto. Específicamente, el fosfolípido de la muestra se cuantificó en presencia de un detergente de Triton X-100 al 1 %.
Las cantidades de colesterol y de LP en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midieron por cromatografía en fase inversa (sistema: Agilent 1100 series, columna: columna de HPLC Chromolith Performance RP-18 protegida en sus extremos 100-3 monolítica (Merck), tampón A: ácido trifluoroacético al 0,01 %, tampón B: ácido trifluoroacético al 0,01 % y metanol, gradiente (%B): 87-92 % (0-10 min), caudal: 2 ml/min, temperatura: 50 °C, detección: 205 nm).
La cantidad total de lípidos se calculó a partir de la cantidad de fosfolípido y la relación de composición de los componentes lipídicos que constituyen el liposoma, y la relación entre el polinucleótido y el lípido se calculó a partir de la cantidad anteriormente mencionada del polinucleótido y la cantidad total de lípidos de acuerdo con la siguiente expresión:
[Concentración de polinucleótido bicatenario] /
[Concentración de lipidos totales] (p/p)
Los resultados se muestran en la Tabla 3.
(Tabla 3)
Nombre LP Tasa de encapsulación del Relación entre el polinucleótido y el ARNip Tamaño promedio polinucleótido (%) lipídico/lípido (p/p) de partícula (nm) Ejemplo de 89,0 0,104 139±50 Referencia 2
Ejemplo 1 94,3 0,109 183±41 Ejemplo 2 96,3 0,099 215±70 Ejemplo 3 98,6 0,099 187±31
La cantidad total de lípidos se calculó a partir de la cantidad del fosfolípido, la cantidad de colesterol y la cantidad de LP, y la relación de composición de los componentes lipídicos que constituyen el liposoma, y la relación entre el polinucleótido y el lípido se calculó a partir de la cantidad anteriormente mencionada del polinucleótido y la cantidad total de lípidos de acuerdo con la siguiente expresión:
[Concentración de polinucleótido bicatenario] / [Concentración de lípidos totales] (p/p)
Los resultados se muestran en la Tabla 4.
(Tabla 4)
Nombre LP Tasa de encapsulación del Relación entre el polinucleótido y el Tamaño promedio de polinucleótido (%) ARNip lipídico/lípido (p/p) partícula (nm) Compuesto 1 93,0 0,075 138±24 Ejemplo 8 96,4 0,072 157±46
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 300 nm.
(Ejemplo de ensayo 1)
Como se describe a continuación, la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana se comparó entre partículas lipídicas de ácido nucleico, preparadas cada una de ellas usando un lípido novedoso.
(1) Transfección
La concentración de una línea de células de cáncer colorrectal humano SW480 (derivada de adenocarcinoma colorrectal humano) se ajustó a 50.000 células/ml en un medio RPMI1640 (fabricado por Invitrogen Corp.) que contenía suero de feto bovino al 10 % (medio de cultivo). Después, la solución de cultivo resultante se inoculó a 100 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (fabricada por Corning Inc./Falcon) y se cultivó a 37 °C durante 1 día con CO2.al 5,0 %. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 se diluyó con un medio de cultivo para preparar una serie de dilución con concentraciones finales del polinucleótido bicatenario de 30, 3,0, 0,3, y 0,03 nM en el medio. Después, cada dilución se añadió a las células tras eliminar el sobrenadante del cultivo, y el cultivo se continuó adicionalmente durante 3 días. Esta operación se llevó a cabo a N = 3 para cada concentración.
(2) PCR en tiempo real
Un lisato y un ADNc para medición por PCR en tiempo real se prepararon a partir de las células transfectadas usando el kit TaqMan(R) Fast-Cells-to-Ct kit (Life Technologies, Inc./Ambion) de acuerdo con el manual de instrucciones. En la preparación del lisado, Se usó solución de lisis suplementadas con DNasa I. Las sondas de la PCR en tiempo real usadas fueron los ensayos de expresión génica TaqMan(R) (CTNNB1, sonda FAM) (Hs00355045_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) para el gen de la p-catenina humana y una sonda de un gen GAPDH humano como patrón interno (sonda VIC, Hs99999905_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.). 5 pl de TaqMan(R) Fast Advanced Master Mix, 2 pl de agua exenta de ARNasa, 0,5 pl de cada sonda, y 2 pl de la solución de ADNc preparada se añadieron a cada pocillo de una placa de PCR de 384 pocillos (fabricada por Applied Biosystems Inc.) para llevar la cantidad total hasta 10 pl, que se cargó a continuación en un sistema PCR en tiempo real ViiA(TM) 7 (fabricado por Applied Biosystems, Inc.) y se sometió a la PCR en las condiciones que se indican a continuación. La PCR en tiempo real se llevó a cabo a N = 4 para el ADNc preparado a partir del lisato. Activación inicial de la PCR: 95 °C durante 20 segundos
PCR: 95 °C durante 1 segundo
62 °C durante 20 segundos
Este ciclo de PCR se realizó repetidamente 40 veces.
(3) Análisis de la PCR en tiempo real
El análisis cuantitativo se llevó a cabo por el procedimiento AACt. Se determinó un valor (AACt) restando el ACt de una célula no tratada (= NC) a partir de la diferencia en el valor de Ct (ACt) entre la p-catenina humana y GAPDH humano de cada transfectante, y se calculó un valor relativo (RQ) respecto a NC de acuerdo con la siguiente expresión:
RQ = 2-ññCt
Cuando RQ = 1 se definió como una tasa de inhibición del 0 % y RQ = 0 se definió como la tasa de inhibición teórica del 100 %, el valor de la CI50 de la partícula lipídica de ácido nucleico se calculó con GraphPad PRISM (GraphPad Software Inc.). Como resultado, como se muestra en la Tabla 5, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto de Ejemplo 1, 2, o 3 mostró una fuerte actividad inhibidora de la expresión génica del gen de la pcatenina, en comparación con la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el lípido del Ejemplo de Referencia 2 usado como control. Estos resultados demostraron que los compuestos de los Ejemplos 1,2 y 3 son lípidos novedosos útiles para preparar partículas lipídicas de ácido nucleico que muestran fuerte actividad.
(Tabla 5)
Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Ejemplo de Referencia 2 >30
Ejemplo 1 3,5
Ejemplo 2 6,8
Ejemplo 3 0,44
(Ejemplo de ensayo 2)
Como se describe a continuación, la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana se comparó entre partículas lipídicas de ácido nucleico, preparadas cada una de ellas usando un lípido novedoso.
(1) Transfección
La concentración de una línea de células de cáncer hepático humano HepG2 (derivada de cáncer de hígado humano) se ajustó a 50000 células/ml en un medio DMEM (fabricado por Invitrogen Corp.) que contenía suero de feto bovino al 10 % (medio de cultivo). Después, la solución de cultivo resultante se inoculó a 100 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (fabricada por Corning Inc./Falcon) y se cultivó a 37 °C durante 1 día con CO2.al 5,0 %. La dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 se diluyó con un medio de cultivo para preparar una serie de dilución con concentraciones finales del polinucleótido bicatenario de 30, 3, 0,3, y 0,03 nM en el medio. Después, cada dilución se añadió a las células tras eliminar el sobrenadante del cultivo, y el cultivo se continuó adicionalmente durante 3 días. Esta operación se llevó a cabo a N = 3 para cada concentración.
(2) PCR en tiempo real
Un lisato y un ADNc para medición por PCR en tiempo real se prepararon a partir de las células transfectadas usando el kit TaqMan(R) Fast-Cells-to-Ct kit (Life Technologies, Inc./Ambion) de acuerdo con el manual de instrucciones. En la preparación del lisado, Se usó solución de lisis suplementadas con DNasa I. Las sondas de la PCR en tiempo real usadas fueron los ensayos de expresión génica TaqMan(R) (CTNNB1, sonda FAM) (Hs00355045_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) para el gen de la p-catenina humana y una sonda de un gen GAPDH humano como patrón interno (sonda VIC, Hs99999905_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.). 5 pl de TaqMan(R) Fast Advanced Master Mix, 2 pl de agua exenta de ARNasa, 0,5 pl de cada sonda, y 2 pl de la solución de ADNc preparada se añadieron a cada pocillo de una placa de PCR de 384 pocillos (fabricada por Applied Biosystems Inc.) para llevar la cantidad total hasta 10 pl, que se cargó a continuación en un sistema PCR en tiempo real ViiA(TM) 7 (fabricado por Applied Biosystems, Inc.) y se sometió a la PCR en las condiciones que se indican a continuación. La PCR en tiempo real se llevó a cabo a N = 4 para el ADNc preparado a partir del lisato. Activación inicial de la PCR: 95 °C durante 20 segundos
PCR: 95 °C durante 1 segundo
62 °C durante 20 segundos
Este ciclo de PCR se realizó repetidamente 40 veces.
(3) Análisis de la PCR en tiempo real
El análisis cuantitativo se llevó a cabo por el procedimiento AACt. Se determinó un valor (AACt) restando el ACt de una célula no tratada (= NC) a partir de la diferencia en el valor de Ct (ACt) entre la p-catenina humana y GAPDH humano de cada transfectante, y se calculó un valor relativo (RQ) respecto a NC de acuerdo con la siguiente expresión:
RQ = 2-ññCt
Cuando RQ = 1 se definió como una tasa de inhibición del 0 % y RQ = 0 se definió como la tasa de inhibición teórica del 100 %, el valor de la CI50 de la partícula lipídica de ácido nucleico se calculó con GraphPad PRISM (GraphPad Software Inc.). Como resultado, como se muestra en la Tabla 6, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto de Ejemplo 1, 2, o 3 mostró una fuerte actividad inhibidora de la expresión génica del gen de la pcatenina, en comparación con la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el lípido del Ejemplo de Referencia 2 usado como control. Estos resultados demostraron que los compuestos de los Ejemplos 1,2 y 3 son lípidos novedosos útiles para preparar partículas lipídicas de ácido nucleico que muestran fuerte actividad.
(Tabla 6)
Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Ejemplo de Referencia 2 >30
Ejemplo 1 0,38
________________________________________ (continuación)________________________________________ Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Ejemplo 2 0,47
Ejemplo 3 0,35
(Ejemplo de ensayo 3)
Como se describe a continuación, la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana se comparó entre partículas lipídicas de ácido nucleico, preparadas cada una de ellas usando un lípido novedoso.
(1) Transfección
La concentración de una línea de células de cáncer colorrectal humano SW480 (derivada de adenocarcinoma colorrectal humano) se ajustó a 50000 células/ml en medio RPMI1640 (fabricado por Invitrogen Corp.) que contenía suero de feto bovino al 10 % (medio de cultivo). Después, la solución de cultivo resultante se inoculó a 100 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (fabricada por Corning Inc./Falcon) y se cultivó a 37 °C durante 1 día con CO2.al 5,0 %. La dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 se diluyó con un medio de cultivo para preparar una serie de dilución con concentraciones finales del polinucleótido bicatenario de 30, 3, 0,3, y 0,03 nM en el medio. Después, cada dilución se añadió a las células tras eliminar el sobrenadante del cultivo, y el cultivo se continuó adicionalmente durante 4 horas. Esta operación se llevó a cabo a N = 3 para cada concentración.
(2) PCR en tiempo real
Un lisato y un ADNc para medición por PCR en tiempo real se prepararon a partir de las células transfectadas usando el kit TaqMan(R) Fast-Cells-to-Ct kit (Life Technologies, Inc./Ambion) de acuerdo con el manual de instrucciones. En la preparación del lisado, Se usó solución de lisis suplementadas con DNasa I. Las sondas de la PCR en tiempo real usadas fueron los ensayos de expresión génica TaqMan(R) (CTNNB1, sonda FAM) (Hs00355045_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) para el gen de la p-catenina humana y una sonda de un gen GAPDH humano como patrón interno (sonda VIC, Hs99999905_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.). 5 pl de TaqMan(R) Fast Advanced Master Mix, 2 pl de agua exenta de ARNasa, 0,5 pl de cada sonda, y 2 pl de la solución de ADNc preparada se añadieron a cada pocillo de una placa de PCR de 384 pocillos (fabricada por Applied Biosystems Inc.) para llevar la cantidad total hasta 10 pl, que se cargó a continuación en un sistema PCR en tiempo real ViiA(TM) 7 (fabricado por Applied Biosystems, Inc.) y se sometió a la PCR en las condiciones que se indican a continuación. La PCR en tiempo real se llevó a cabo a N = 4 para el ADNc preparado a partir del lisato. Activación inicial de la PCR: 95 °C durante 20 segundos
PCR: 95 °C durante 1 segundo
62 °C durante 20 segundos
Este ciclo de PCR se realizó repetidamente 40 veces.
(3) Análisis de la PCR en tiempo real
El análisis cuantitativo se llevó a cabo por el procedimiento AACt. Se determinó un valor (AACt) restando el ACt de una célula no tratada (= NC) a partir de la diferencia en el valor de Ct (ACt) entre la p-catenina humana y GAPDH humano de cada transfectante, y se calculó un valor relativo (RQ) respecto a NC de acuerdo con la siguiente expresión:
RQ = 2-ññCt
Cuando RQ = 1 se definió como una tasa de inhibición del 0 % y RQ = 0 se definió como la tasa de inhibición teórica del 100 %, el valor de la CI50 de la partícula lipídica de ácido nucleico se calculó con GraphPad PRISM (GraphPad Software Inc.). Como resultado, como se muestra en la Tabla 7, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto de Ejemplo 8 mostró una fuerte actividad inhibidora de la expresión génica del gen de la p-catenina, en comparación con la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto lípido 1 usado como control. Estos resultados demuestran que el compuesto del Ejemplo 8 es un lípido novedoso útil para preparar partículas lipídicas de ácido nucleico que presentan actividad intensa.
(Tabla 7)
Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Compuesto 1 >30
Ejemplo 8 8,3
(Ejemplo de ensayo 4)
Como se describe a continuación, la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana se comparó entre partículas lipídicas de ácido nucleico, preparadas cada una de ellas usando un lípido novedoso.
(1) Transfección
La concentración de una línea de células de cáncer de cuello de útero humano Hela (derivada de cáncer de cuello de útero humano) se ajustó a 50000 células/ml en un medio DMEM (fabricado por Invitrogen Corp.) que contenía suero de feto bovino al 10 % (medio de cultivo). Después, la solución de cultivo resultante se inoculó a 100 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (fabricada por Corning Inc./Falcon) y se cultivó a 37 °C durante 1 día con CO2.al 5,0 %. La dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 se diluyó con un medio de cultivo para preparar una serie de dilución con concentraciones finales del polinucleótido bicatenario de 30, 3, 0,3, y 0,03 nM en el medio. Después, cada dilución se añadió a las células tras eliminar el sobrenadante del cultivo, y el cultivo se continuó adicionalmente durante 4 horas. Esta operación se llevó a cabo a N = 3 para cada concentración.
(2) PCR en tiempo real
Un lisato y un ADNc para medición por PCR en tiempo real se prepararon a partir de las células transfectadas usando el kit TaqMan(R) Fast-Cells-to-Ct kit (Life Technologies, Inc./Ambion) de acuerdo con el manual de instrucciones. En la preparación del lisado, Se usó solución de lisis suplementadas con DNasa I. Las sondas de la PCR en tiempo real usadas fueron los ensayos de expresión génica TaqMan(R) (CTNNB1, sonda FAM) (Hs00355045_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) para el gen de la p-catenina humana y una sonda de un gen GAPDH humano como patrón interno (sonda VIC, Hs99999905_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.). 5 pl de TaqMan(R) Fast Advanced Master Mix, 2 pl de agua exenta de ARNasa, 0,5 pl de cada sonda, y 2 pl de la solución de ADNc preparada se añadieron a cada pocillo de una placa de PCR de 384 pocillos (fabricada por Applied Biosystems Inc.) para llevar la cantidad total hasta 10 pl, que se cargó a continuación en un sistema PCR en tiempo real ViiA(TM) 7 (fabricado por Applied Biosystems, Inc.) y se sometió a la PCR en las condiciones que se indican a continuación. La PCR en tiempo real se llevó a cabo a N = 4 para el ADNc preparado a partir del lisato. Activación inicial de la PCR: 95 °C durante 20 segundos
PCR: 95 °C durante 1 segundo
62 °C durante 20 segundos
Este ciclo de PCR se realizó repetidamente 40 veces.
(3) Análisis de la PCR en tiempo real
El análisis cuantitativo se llevó a cabo por el procedimiento AACt. Se determinó un valor (AACt) restando el ACt de una célula no tratada (= NC) a partir de la diferencia en el valor de Ct (ACt) entre la p-catenina humana y GAPDH humano de cada transfectante, y se calculó un valor relativo (RQ) respecto a NC de acuerdo con la siguiente expresión:
RQ = 2-ññCt
Cuando RQ = 1 se definió como una tasa de inhibición del 0 % y RQ = 0 se definió como la tasa de inhibición teórica del 100 %, el valor de la CI50 de la partícula lipídica de ácido nucleico se calculó con GraphPad PRISM (GraphPad Software Inc.). Como resultado, como se muestra en la Tabla 8, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto de Ejemplo 8 mostró una fuerte actividad inhibidora de la expresión génica del gen de la p-catenina, en comparación con la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto lípido 1 usado como control. Estos resultados demuestran que el compuesto del Ejemplo 8 es un lípido novedoso útil para preparar partículas lipídicas de ácido nucleico que presentan actividad intensa.
(Tabla 8)
Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Compuesto 1 20
Ejemplo 8 2,2
(Ejemplo de ensayo 5) Medición de la actividad inhibidora del crecimiento celular del compuesto del Ejemplo contra células Hep3B (célula de cáncer de hígado, humano)
El medio usado es MEM (fabricado por Invitrogen Corp.) (que contenía suero de feto bovino al 10 % (fabricado por HyClone Laboratories, Inc.), piruvato de sodio 1 mM (fabricado por Invitrogen Corp.), y 1 x aminoácidos no esenciales (fabricado por Invitrogen Corp.)). Las células de una línea de células de cáncer de hígado Hep3B que tenían una densidad dada se introdujeron (150 pl/pocillo) en una placa de 96 pocillos y posteriormente se cultivaron a 37 °C durante 24 horas con CO2 al 5 %. La dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 se añadió después a concentraciones finales de 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1, y 3 pM a cada pocillo, y las células se cultivaron posteriormente durante 72 horas (3 días). Tras cultivar durante 72 horas (3 días), se midió la actividad inhibidora del crecimiento celular del compuesto de cada Ejemplo se midió en un ensayo MTT. Específicamente, 20 pl de una solución MTT (5 mg/ml en suero salino tamponado con fosfato (PBS)) se añadieron adicionalmente a cada pocillo, y las células se cultivaron a 37 °C durante 4 horas con CO2 al 5 %. Tras eliminar el sobrenadante del cultivo, se añadió adicionalmente DMSO (150 pl) a cada pocillo, seguido por agitación durante 5 minutos. La absorbancia (540 nm) de la placa se leyó con un lector de placas (SpectraMax Plus384, fabricado por Molecular Devices Corporation). Se determinó la relación relativa entre el número de células vivas en el grupo de administración del compuesto y el número de células vivas en un grupo sin tratar. Después, se calculó la concentración CI50 para la cual se inhibió el 50 % del crecimiento de las células.
(Ejemplo de ensayo 6) Ensayo antitumoral in vivo del compuesto del Ejemplo
Tras aclimatación y la sensibilización de cada ratón atímico durante 1 semana, 1 x 107 células Hep3B cultivadas se trasplantaron de forma subcutánea en la región lateral del ratón atímico. Aproximadamente 2 semanas después del trasplante del tumor, los ratones se agruparon usando como índice el volumen tumoral, y se administró por vía intravenosa la dispersión que contenía la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 31 (administrada a una dosis tal como 1 o 3 mg/kg) dos o tres veces a la semana en la cola de cada ratón. Se administró PBS a un grupo del control. El tamaño del tumor se midió, y se observaron los cambios en el volumen tumoral.
En el caso de verificar una inactivación génica in vivo, un día después de la administración, se recogió una masa tumoral del ratón que tenía el cáncer, y se extrajo el ácido nucleico utilizando el reactivo de lisis QIAzol (fabricado por Qiagen N.V.) y cloroformo. Después, se purificó el ARN total utilizando el mini kit RNeasy (fabricado por Qiagen N.V.) de acuerdo con el protocolo adjunto. Este se usó para cuantificar el ARNm de la molécula diana mediante PCR Taqman.
(Ejemplo 33) Preparación de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Una solución lipídica que tiene una concentración total de lípidos de 26,8 mM en etanol con diestearoilfosfatidilcolina (1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DSPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 8 (a partir de ahora en el presente documento, denominado como LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominada como PEG-C-DMA) se prepararon con una relación molar descrita en la Tabla 9.
La concentración de un polinucleótido bicatenario descrito en Nature Biotechnology (2008) 26, 561-569 (siFVII: ARNip contra el Factor VII de ratón) se ajustó a 1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 10 mM, pH 4,0) que contenía etanol al 30 % para obtener una solución de polinucleótido bicatenario.
La solución lipídica, la solución de polinucleótido bicatenario, y una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) se calentaron a 37 °C. La solución lipídica se añadió gota a gota a la solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) y se mezcló con esta de tal manera que la solución volumétrica entre la solución lipídica y la solución de tampón citrato fue de 3:7 para obtener una dispersión de liposomas en bruto. Posteriormente, la dispersión de liposomas en bruto se añadió gota a gota a la solución del polinucleótido bicatenario y se mezcló con esta de tal manera que la relación (N/P) de los átomos de nitrógeno (N) derivados de LP a los átomos de fósforo (P) derivados del polinucleótido bicatenario fue de 3. La mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, MWCO: 100 KD, Spectra/Por) para la eliminación del etanol y la eliminación de los polinucleótidos bicatenarios no encapsulados neutralización para obtener una dispersión purificada de una partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el polinucleótido bicatenario y el lípido descrito en la Tabla 9.
(Tabla 9)
DSPC Chol LP PEG-C-DMA
Partícula 1 10 68 20 2
Partícula 2 10 58 30 2
Partícula 3 10 48 40 2
Partícula 4 10 43 45 2
Partícula 5 10 38 50 2
Partícula 6 10 33 55 2
Partícula 7 10 28 60 2
Partícula 8 10 18 70 2
Partícula 9 55 33 10 2
(continuación)
DSPC Chol LP PEG-C-DMA
Partícula 10 45 33 20 2
Partícula 11 35 33 30 2
Partícula 12 25 33 40 2
Partícula 13 20 33 45 2
Partícula 14 15 33 50 2
Partícula 15 10 33 55 2
Partícula 16 5 33 60 2
Partícula 17 0 33 65 2
Partícula 18 10 49,5 40 0,5
Partícula 19 10 49 40 1
Partícula 20 10 48,5 40 1,5
Partícula 21 10 48 40 2
Partícula 22 10 47,5 40 2,5
Partícula 23 10 47 40 3
Partícula 24 10 46,5 40 3,5
Partícula 25 10 46 40 4
Partícula 26 10 45 40 5
Partícula 27 10 40 40 10
(Ejemplo 34) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Se caracterizó la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 33. La caracterización se llevó a cabo mediante los procedimientos descritos en el Ejemplo 32, y el índice de encapsulación del polinucleótido en la partícula lipídica de ácido nucleico descrita en el Ejemplo 33, la relación en peso del polinucleótido al lípido, y el tamaño de partícula promedio se muestran en las Tablas 10, 11, y 12.
(Tabla 10)
Composición lipídica* Indice de encapsulación (%) ARNip/lípido (p/p)** Tamaño de partícula (nm) Partícula 1 10/68/20/2 96 0,044 133±23 Partícula 2 10/58/30/2 98 0,061 153±46 Partícula 3 10/48/40/2 98 0,083 127±20 Partícula 4 10/43/45/2 98 0,084 143±41 Partícula 5 10/38/50/2 98 0,094 133±27 Partícula 6 10/33/55/2 94 0,115 137±10 Partícula 7 10/28/60/2 81 0,117 184±39 Partícula 8 10/18/70/2 50 0,127 162±31 *Composición lipídica: DSPC/Chol/lP/PEG-C-DMA (relación molar)
**ARNip/lípido (p/p): relación en peso de polinucleótido a lípido
(Tabla 11)
Composición lipídica* Indice de encapsulación (%) ARNip/lípido (p/p)** Tamaño de partícula (nm)
Partícula 9 55/33/10/2 93 0,014 193±42 Partícula 10 45/33/20/2 93 0,022 206±77 Partícula 11 35/33/30/2 90 0,055 203±73 Partícula 12 25/33/40/2 93 0,084 177±59 Partícula 13 20/33/45/2 92 0,093 109±22
Partícula 14 15/33/50/2 92 0,073 111±20 Partícula 15 10/33/55/2 95 0,111 119±13
(continuación)
Composición lipídica* Indice de encapsulación (%) ARNip/lípido (p/p)** Tamaño de partícula (nm)
Partícula 16 5/33/60/2 95 0,136 135615 Partícula 17 0/33/65/2 91 0,160 124±25 *Composición lipídica: DSPC/Chol/lP/PEG-C-DMA (relación molar)
**ARNip/lípido (p/p): relación en peso de polinucleótido a lípido
(Tabla 12)
Composición lipídica* Indice de encapsulación (%) ARNip/lípido (p/p)** Tamaño de partícula (nm)
Partícula 18 10/49,5/40/0,5 97 0,096 349±222 Partícula 19 10/49/40/1 96 0,091 206±54 Partícula 20 10/48,5/40/1,5 97 0,098 140±54 Partícula 21 10/48/40/2 98 0,091 109±36 Partícula 22 10/47,5/40/2,5 99 0,090 140±19 Partícula 23 10/47/40/3 98 0,089 152±27 Partícula 24 10/46,5/40/3,5 98 0,084 131±52 Partícula 25 10/46/40/4 98 0,086 156±66 Partícula 26 10/45/40/5 94 0,083 79±27
Partícula 27 10/40/40/10 91 0,055 83±47 *Composición lipídica: DSPC/Chol/lP/PEG-C-DMA (relación molar)
**ARNip/lípido (p/p): relación en peso de polinucleótido a lípido
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 80 nm a aproximadamente 300 nm.
(Ejemplo de ensayo 7) medición de la proteína del Factor VII (FVII)
Se midió la proteína del Factor VII de acuerdo con el procedimiento descrito en Nature Biotechnology (2010) 28, 172-176. Ratones C57BL6/J (machos, 9 semanas de edad) se agruparon aleatoriamente (n = 4). La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 33 se inyectó por vía intravenosa a una dosis de 0,3 mg/kg en la cola de cada ratón. Un día después de la administración, se recogieron aproximadamente 50 pl de sangre de la vena de la cola, y se obtuvo plasma. Se midió la cantidad de proteína del Factor VII en el plasma obtenido utilizando el kit de ensayo Biophen FVII (fabricado por Aniara Corp.) de acuerdo con el protocolo adjunto.
Cuando la cantidad de FVII de las respectivas muestras de plasma recogidas en cantidades iguales de individuos en un grupo de administración PBS se definió como 100 %, la relación relativa (%) de la cantidad de FVII en una muestra de plasma de cada individuo se usó como el valor de medición (A). Se determinó un valor promedio (B) a partir de los valores de medición respectivos de los individuos en el grupo de administración PBS. La relación relativa del valor de medición (A) de cada individuo se determinó a partir de la expresión: A / B x 100 (%). El valor promedio de las relaciones relativas en el grupo de administración de cada partícula lipídica de ácido nucleico se muestra en las Tablas 13, 14, y 15. Como resultado, como se muestra en las Tablas 13, 14 y 15, las partículas 1 a 8, las partículas 12 a 17, las partículas 20 a 24, la partícula 26, y la partícula 27 como las partículas lipídicas de ácido nucleico preparadas en el Ejemplo 33 presentaron una intensa actividad inhibidora de FVII. Estos resultados demostraron que una partícula lipídica de ácido nucleico que tiene la composición lipídica que se encuentra en las partículas 1 a 8, las partículas 12 a 17, las partículas 20 a 24, la partícula 26, y la partícula 27 son útiles como partícula lipídica de ácido nucleico capaz de inhibir la expresión génica.
(Tabla 13)
Cantidad relativa de FVII (%)
PBS 100
Partícula 1 36
Partícula 2 <10
Partícula 3 <10
Partícula 4 20
(continuación)
Cantidad relativa de FVII (%)
Partícula 5 <10
Partícula 6 <10
Partícula 7 <10
Partícula 8 <10
(Tabla 14)
Cantidad relativa de FVII (%)
PBS 100
Partícula 10 Sin actividad
Partícula 11 Sin actividad
Partícula 12 79
Partícula 13 22
Partícula 14 <10
Partícula 15 26
Partícula 16 <10
Partícula 17 <10
(Tabla 15)
Cantidad relativa de FVII (%)
PBS 100
Partícula 18 Sin actividad
Partícula 19 Sin actividad
Partícula 20 <10
Partícula 21 <10
Partícula 22 <10
Partícula 23 <10
Partícula 24 27
Partícula 26 28
Partícula 27 49
(Ejemplo de referencia 46)
Carbonato de 3-bromopropil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo
Una solución de (19Z,22Z)-octacosa-19,22-dien-11-ol (0,55 g, 1,4 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 17 y piridina (0,67 g, 8,5 mmol) en tolueno (14 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,28 g, 0,93 mmol) en tolueno (2,0 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se le añadió 3-bromo-1-propanol (2,0 g, 14 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo-hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,32 g, 41 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 -0,91 (6H, m), 1,21 - 1,40 (32H, m), 1,52 -1,61 (4H, m), 2,01 -2,09 (4H, m), 2,23 (2H, quint, J = 6,3 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,49 (2H, t, J = 6,3 Hz), 4,27 (2H, t, J = 6,3 Hz), 4,66 - 4,73 (1H, m), 5,29 -5,44 (4H, m).
(Ejemplo 35)
Carbonato de 3-(azetidin-1-il)propil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (compuesto ejemplar 1-76)
A una solución de carbonato de 3-bromopropil(9Z,12Z)-octacosa-19,22-dien-11-ilo (0,16 g, 0,28 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 46 en tetrahidrofurano (8,0 ml), se le añadió azetidina (0,40 g, 7,0 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a 120 °C durante 50 minutos en condiciones de irradiación de microondas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilohexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (119 mg, 77 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,21 - 1,40 (32H, m), 1,47 - 1,61 (4H, m), 1,71 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 - 2,10 (m, 6H), 2,46 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,16 (4H, t, J = 6,6 Hz), 4,15 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,71 (1H, m), 5,28 - 5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 548 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 548,5044 (0,1 mDa).
(Ejemplo 36)
Carbonato de (1-metilpiperidin-3-il)metil(6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ilo (compuesto ejemplar 2-102)
Una solución de (6Z,9Z,26Z,29Z)-pentatriaconta-6,9,26,29-tetraen-18-ol (0,22 g, 0,44 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 4 y piridina (0,22 g, 2,8 mmol) en tolueno (4,4 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,090 g, 0,30 mmol) en tolueno (0,66 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió (1-metil-3-piperidil)metanol (0,60 g, 4,6 mmol) a la misma y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo-hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (201 mg, 70 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,89 (6H, m), 0,92 - 1,04 (1H, m), 1,21 - 1,40 (36H, m), 1,48 - 1,78 (8H, m), 1,85 -1,94 (1H, m), 1,96 -2,10 (9H, m), 2,26 (3H, s), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 2,72 -2,90 (2H, m), 3,94 (1H, dd, J = 7,4, 10,6 Hz), 4,05 (1H, dd, J = 5,5, 10,6 Hz), 4,64 -4,72 (1H, m), 5,28 -5,42 (8H, m).
EM (EN+) m/z 656 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 656,5981 (-0,1 mDa).
(Ejemplo 37)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octacos-19-en-11-ilo (compuesto ejemplar 1-334)
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ilo (0,21 g, 0,38 mmol) obtenida en el ejemplo 27 y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (0,079 g, 0,42 mmol) en diclorometano (3,8 ml), se le añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0,16 g, 1,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (210 mg, 87 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 -0,91 (6H, m), 1,22 - 1,85 (48H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,7, 7,4 Hz), 1,98 -2,06 (2H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,44 - 3,52 (1H, m), 3,57 - 3,72 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,64 - 4,75 (2H, m), 5,32 - 5,50 (2H, m).
EM (EN+) m/z 638 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 638,5723 (1,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 47)
(19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ona
A la (19Z,22R)-22-{[terc-butil(dimetil)silil]oxiloctacos-19-en-11-ona (2,0 g, 3,7 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 38, se le añadió una solución 1 M de fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de tratar con agua para terminar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (0,66 g). El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional.
(Ejemplo de referencia 48)
Acetato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo
A una solución de la mezcla que contenía (19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ona (0,33 g) obtenida en el ejemplo de referencia 47 y piridina (1,1 g, 14 mmol) en diclorometano (7,1 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,56 g, 7,1 mmol) gota a gota durante 1 minuto y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de tratar con agua para terminar la reacción, se llevó a cabo la extracción y la materia volátil se eliminó a presión reducida para obtener una mezcla líquida. Esta mezcla se disolvió en tetrahidrofurano (2,1 ml) y metanol (2,1 ml). A la solución, se le añadió borohidruro sódico (0,054 g, 1,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (0,33 g). El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional.
(Ejemplo 38)
Acetato de (7R,9Z)-18-({[(1-metilpiperidin-3-il)metoxi]carbonil}oxi)octacos-9-en-7-ilo (compuesto ejemplar 2-132)
Una solución de la mezcla que contenía acetato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo (0,33 g) obtenida en el ejemplo de referencia 48 y piridina (0,35 g, 4,5 mmol) en tolueno (7,1 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,14 g, 0,49 mmol) en tolueno (1,1 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 10 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 30 minutos y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se le añadió (1-metil-3-piperidil)metanol (0,96 g, 7,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 90 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (110 mg). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,86 - 0,91 (6H, m), 0,93 - 1,05 (1H, m), 1,17 - 1,38 (36H, m), 1,48 - 1,78 (8H, m), 1,85 - 1,94 (1H, m), 1,96 - 2,07 (6H, m), 2,24 - 2,34 (5H, m), 2,74 (1H, d, J = 10,5 Hz), 2,86 (1H, d, J = 10,5 Hz), 3,95 (1H, ddd, J = 2,7, 7,4, 10,2 Hz), 4,06 (1H, ddd, J = 2,7, 5,9, 10,2 Hz), 4,64 - 4,71 (1H, m), 4,87 (1H, quint, J = 6,3 Hz), 5,27 - 5,37 (1H, m), 5,43 - 5,51 (1H, m).
EM (EN+) m/z 622 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 622,5438 (2,8 mDa).
(Ejemplo de referencia 49)
Caproato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo
A una solución de la mezcla que contenía (19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ona (0,30 g) obtenida en el ejemplo de referencia 47 y piridina (1,1 g, 14 mmol) en diclorometano (7,1 ml), se le añadió anhídrido caproico (0,76 g, 3,5 mmol) gota a gota durante 1 minuto, después se añadió 4-(dimetilamino)piridina (0,01 g) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 90 minutos. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, se llevó a cabo la extracción y la materia volátil se eliminó a presión reducida para obtener una mezcla líquida. Esta mezcla se disolvió en tetrahidrofurano (2,1 ml) y metanol (2,1 ml). A la solución se le añadió borohidruro sódico (0,054 g, 1,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener un líquido que contenía el compuesto de interés (0,17 g). El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional.
(Ejemplo 39)
Caproato de (7R,9Z)-18-({[3-(dimetilamino)propiloxi]carbonil}oxi)octacos-9-en-7-ilo (compuesto ejemplar 1-255)
Una solución de la mezcla que contenía caproato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo (0,17 g) obtenida en el ejemplo de referencia 49 y piridina (0,16 g, 2,0 mmol) en tolueno (3,3 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,067 g, 0,22 mmol) en tolueno (0,49 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 45 minutos y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,35 g, 3,4 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (150 mg). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,84 - 0,92 (9H, m), 1,20 - 1,38 (40H, m), 1,48 - 1,66 (8H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,97 - 2,04 (2H, m), 2,22 (6H, s), 2,27 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 -4,72 (1H, m), 4,88 (1H, quint, J = 6,3 Hz), 5,27 - 5,37 (1H, m), 5,42 -5,51 (1H, m). EM (EN+) m/z 652 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 652,5892 (1,2 mDa).
(Ejemplo 40)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-(tetrahidrofurano-2-iloxi)octacos-19-en-11-ilo (compuesto ejemplar 1-377)
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ilo (0,055 g, 0,099 mmol) obtenida en el ejemplo 27 y ácido p-toluenosulfónico hidrato (0,026 g, 0,14 mmol) en diclorometano (1,3 ml), se le añadió 2,3-dihidrofurano (0,044 g, 0,63 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (33 mg, 53 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 6: 0,82 - 0,88 (6H, m), 1,20 - 1,62 (48H, m), 1,74 - 2,05 (8H, m), 2,21 (6H, s), 2,33 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,51 -4,05 (3H, m), 4,15 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,62 -4,70 (1H, m), 5,28 -5,46 (3H, m).
EM (EN+) m/z 624 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 624,5574 (0,7 mDa).
(Ejemplo 41)
Dipropionato de (7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)pentatriaconta-9,26-dieno-7,29-diilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil(7R,9Z,26Z,29R)-7,29-dihidroxipentatriaconta-9,26-dien-18-ilo (0,35 g, 0,53 mmol) obtenida en el ejemplo 22 y piridina (0,83 g, 10,5 mmol) en diclorometano (5,3 ml), se le añadió cloruro de ácido propiónico (0,49 g, 5,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (260 mg, 64 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 6: 0,84 - 0,91 (6H, m), 1,13 (6H, t, J = 7,4 Hz), 1,22 - 1,39 (36H, m), 1,48 - 1,61 (8H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 (4H, dd, J = 6,6, 7,0 Hz), 2,22 (6H, s), 2,30 (4H, c, J = 7,4 Hz), 2,28 - 2,33 (4H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,72 (1H, m), 4,88 (2H, tt, J = 5,9, 6,6 Hz), 5,33 (2H, ttd, J = 1,2, 7,0, 10,9 Hz), 5,46 (2H, ttd, J = 1,2, 7,0, 10,9 Hz).
EM (EN+) m/z 778 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 778,6555 (-0,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 50)
(9Z,12R)-octadec-9-eno-1,12-diol
A una solución de hidruro de litio y aluminio (3,87 g, 102 mmol) en tetrahidrofurano (235 ml), se le añadió (9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-enoato de metilo (31,1 g, 78,4 mmol, compuesto conocido en las referencias (J. Org. Chem., 2001, 66, 22, 7487-7495)) gota a gota durante 50 minutos y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después de tratar con agua (4 ml), se le añadió acetato de etilo y los componentes sólidos se eliminaron por filtración. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (17,9 g, 62 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 6: 0,88 (3H, t, J = 6,6 Hz), 1,21 - 1,87 (22H, m), 1,98 - (2H, m), 2,20 - 2,40 (2H, m), 3,44 -3,52 (1H, m), 3,58 - 3,71 (3H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,64 - 4,74 (1H, m), 5,33 - 5,49 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 51)
Metanosulfonato de (9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-ilo
Una solución de (9Z,12R)-octadec-9-eno-1,12-diol (17,9 g, 48,6 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 50 y trietilamina (5,90 g, 58,3 mmol) en diclorometano (122 ml) se enfrió a 0 °C. Se le añadió cloruro de metanosulfonilo (6,68 g, 58,3 mmol) gota a gota durante 5 minutos y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un líquido de color amarillo que contenía el compuesto de interés.
(Ejemplo de referencia 52)
(7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-ol
A una solución del líquido que contenía metanosulfonato de (9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-ilo (21,6 g, 48,4 mmol, cantidad teórica) obtenida en el ejemplo de referencia 51 en éter dietílico (145 ml),se le añadió un complejo de bromuro de magnesio y éter dietílico (31,2 g, 121 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua enfriada con hielo, la mezcla de reacción se sometió a extracción con éter dietílico y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se disolvió en etanol (100 ml). A la solución, se le añadió una solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (80 ml) y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La material volátil se eliminó por destilación a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (14,1 g, 84 %).
(Ejemplo de referencia 53)
2- {[(7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-il]oxi}tetrahidro-2H-pirano
A una solución de (7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-ol (14,1 g, 40,6 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 52 y ácido p-toluenosulfónico hidrato (0,154 g, 0,81 mmol) en diclorometano (81,2 ml), se le añadió 3,4-dihidro-2H-pirano
(6,83 g, 81,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (15,1, 86%).
(Ejemplo de referencia 54)
(7R,9Z,28Z,31R)-7,31-Bis(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptatriaconta-9,28-dien-19-ol
Se sumergió magnesio seco (virutas, 0,42 g, 17,4 mmol) en tetrahidrofurano (3,0 ml). Se le añadió 1,2-dibromoetano
(3 gotas) y la mezcla se agitó vigorosamente. Después de que la solución se volviera negro-grisácea, se le añadió una solución de 2-{[(7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-il]oxi}tetrahidro-2H-pirano (5,00 g, 11,6 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 53, en tetrahidrofurano (8,5 ml) durante 1 hora y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. A esta solución, se le añadió formiato de etilo (0,47 g, 5,79 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua para terminar la reacción, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se disolvió en etanol (25 ml). A la solución, se le añadió una solución acuosa 5 N de hidróxido sódico (5 ml) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con agua y después se sometió a extracción
con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (2,10 g, 50 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,23 - 1,62 (52H, m), 1,66 - 1,89 (4H, m), 1,98 - (4H, m), 2,20 -2,41 (4H, m), 3,45 - 3,52 (2H, m), 3,54 - 3,71 (3H, m), 3,87 - 3,98 (2H, m), 4,64 - 4,75 (2H, m), 5,33 - 5,50 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 55)
3- (dimetilamino)propilo de (7R,9Z,28Z,31R)-7,31-Bis(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptatriaconta-9,28-dien-19-ilo
Una solución de (7R,9Z,28Z,31R)-7,31-bis(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptatriaconta-9,28-dien-19-ol (1,00 g, 1,36 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 54 y piridina (0,68 g, 8,6 mmol) en tolueno (13,6 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,279 g, 0,94 mmol) en tolueno (2,05 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1,5 horas y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (1,48 g, 14,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (1,00 g, 85 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 -0,91 (6H, m), 1,22 - 1,85 (56H, m), 1,79 - 1,88 (2H, m), 1,98 -2,06 (4H, m), 2,2 - 2,38 (12H, m), 3,44 - 3,52 (2H, m), 3,58 - 3,71 (2H, m), 3,87 - 3,97 (2H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,7 Hz), 4,64 - 4,74 (3H, m), 5,32 - 5,49 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 56)
3-(dimetilamino)propilcarbonato de (7R,9Z,28Z,31R)-7,31-dihidroxiheptatriaconta-9,28-dien-19-ilo
A una solución de 3-(dimetilamino)propilo de (7R,9Z,28Z,31R)-7,31-bis(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptatriaconta-9,28-dien-19-ilo (1,00 g, 1,16 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 55 en etanol (11,6 ml), se le añadió solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (5,79 ml, 11,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,68 g, 84 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,61 (48H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,18 - 2,24 (10H, m), 2,34 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,61 (2H, quint, J = 5,9 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,72 (1H, m), 5,36 - 5,44 (2H, m), 5,52 - 5,61 (2H, m).
(Ejemplo 42)
Acetato de (7R,9Z,28Z,31R)-19-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)heptatriaconta-9,28-dieno-7,31-diilo
A una solución de 3-(dimetilamino)propilcarbonato de (7R,9Z,28Z,31R)-7,31-dihidroxiheptatriaconta-9,28-dien-19-ilo (0,68 g, 0,98 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 56 y piridina (2,3 g, 29 mmol) en diclorometano (9,8 ml), se le añadió cloruro de acetilo (1,2 g, 15 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (523 mg, 69 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,20 - 1,38 (40H, m), 1,48 - 1,61 (8H, m), 1,85 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,98 - 2,08 (10H, m), 2,22 (6H, s), 2,29 (4H, dt, J = 6,3, 6,6 Hz), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,72 (1H, m), 4,87 (2H, quint, J = 6,3 Hz), 5,36 (1H, ttd, J = 1,2, 6,6, 10,9 Hz), 5,47 (1H, ttd, J = 1,2, 6,6, 10,9 Hz).
EM (EN+) m/z 778 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 778,6557 (-0,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 57)
(21Z,24R)-24-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}triacont-21-en-13-ona
A una solución de (9Z,12R)-12-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-N-metoxi-N-metiloctadec-9-enamida (0,80 g, 1,8 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 32 en éter dietílico (8,8 ml), se le añadió gota a gota una solución de n-dodecil bromuro de magnesio 1 N en éter dietílico (2,6 ml, 2,6 mmol) durante 1 minuto y después la mezcla se hizo reaccionar a durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,55 g, 55 %).
(Ejemplo de referencia 58)
(21Z,24R)-24-hidroxitriacont-21-en-13-ona
A la (21Z,24R)-24-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}triacont-21-en-13-ona (0,55 g, 0,97 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 57, se le añadió una solución de fluoruro de tetra-n-butilamonio 1 N en tetrahidrofurano (4,9 ml, 4,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con agua, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,23 g, 52 %).
(Ejemplo de referencia 59)
Acetato de (7R,9Z)-18-oxotriacont-9-en-7-ilo
A una solución de (21Z,24R)-24-hidroxitriacont-21-en-13-ona (0,23 g, 0,51 mmol) obtenida en el ejemplo de referencia 58 y piridina (0,81 g, 10 mmol) en diclorometano (5,1 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,40 g, 5,1 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,21 g, 84 %).
(Ejemplo de referencia 60)
Acetato de (7R,9Z)-18-hidroxitriacont-9-en-7-ilo
A una solución de acetato de (7R,9Z)-18-oxotriacont-9-en-7-ilo (0,21 g, 0,43 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 59, en tetrahidrofurano (1,3 ml) y metanol (1,3 ml), se le añadió borohidruro sódico (32 mg, 0,85 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un líquido de color amarillo que contenía el compuesto de interés.
(Ejemplo 43)
Acetato de (7R,9Z)-18-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)triacont-9-en-7-ilo
Una solución del líquido que contenía acetato de (7R,9Z)-18-hidroxitriacont-9-en-7-ilo (0,21 g, 0,42 mmol, cantidad teórica) obtenida en el ejemplo de referencia 60 y piridina (0,21 g, 2,7 mmol) en tolueno (4,2 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,087 g, 0,29 mmol) en tolueno (0,64 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1,5 horas y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,46 g, 4,5 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (111 mg, 42 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,23 - 1,35 (36H, m), 1,48 - 1,66 (6H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,97 - 2,05 (2H, m), 2,03 (3H, s), 2,22 (3H, s), 2,25 - 2,32 (2H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,72 (1H, m), 4,86 (1H, quint, J = 6,3 Hz), 5,28 - 5,51 (2H, m).
EM (EN+) m/z 624 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 624,5566 (-0,1 mDa).
(Ejemplo de referencia 61)
Butirato de (7R,9Z)-18-oxotriacont-9-en-7-ilo
A una solución de (19Z,22R)-22-hidroxioctacos-19-en-11-ona (0,34 g, 0,80 mmol), obtenida en el ejemplo de referencia 39 y piridina (1,3 g, 16 mmol) en diclorometano (8,0 ml), se le añadió cloruro de ácido butírico (0,86 g, 8,0 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,40 g, 100 %).
(Ejemplo de referencia 62)
Butirato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo
A una solución de butirato de (7R,9Z)-18-oxotriacont-9-en-7-ilo (0,40 g, 0,81 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 61, en tetrahidrofurano (2,4 ml) y metanol (2,4 ml), se le añadió borohidruro sódico (61 mg, 1,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida para obtener un líquido de color amarillo que contenía el compuesto de interés.
(Ejemplo 44)
Butirato de (7R,9Z)-18-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)octacos-9-en-7-ilo
Una solución del líquido que contenía butirato de (7R,9Z)-18-hidroxioctacos-9-en-7-ilo (0,40 g, 0,81 mmol, cantidad teórica), obtenido en el ejemplo de referencia 62 y piridina (0,40 g, 5,1 mmol) en tolueno (8,1 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,17 g, 0,56 mmol) en tolueno (1,2 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1,5 horas y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,88 g, 8,5 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (99 mg, 20 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,90 (6H, m), 0,94 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,21 - 1,39 (32H, m), 1,47 - 1,62 (6H, m), 1,65 (2H, sext, J = 7,4 Hz), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 (2H, c, J = 6,6 Hz), 2,22 (6H, s), 2,23 - 2,39 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 -4,72 (1H, m), 4,89 (2H, quint, J = 6,3 Hz), 5,28 - 5,50 (2H, m).
EM (EN+) m/z 624 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 624,5599 (3,2 mDa).
(Ejemplo de referencia 63)
Triacontan-11-ol
A una solución de icosanal (0,64 g, 2,2 mmol) en éter dietílico (11 ml), se le añadió gota a gota una solución de bromuro de n-decil magnesio 1 N en éter dietílico (3,2 ml, 3,2 mmol) durante 2 minutos y después la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,37 g, 39 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0), 1,20 - 1,33 (50H, m), 1,36 - 1,48 (4H, m), 3,54 - 3,62 (1H, a).
(Ejemplo 45)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil triacontan-11-ilo
A una solución de triacontan-11-ol (0,18 g, 0,41 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 63 y piridina (0,20 g, 2,6 mmol) en tolueno (4,1 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,084 g, 0,28 mmol) en tolueno (0,62 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,44 g, 4,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (185 mg, 79 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,84 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,16 - 1,32 (50H, m), 1,44 - 1,60 (4H, m), 1,82 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,19 (6H, s), 2,32 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,14 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,61 - 4,68 (1H, m).
EM (EN+) m/z 568 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 568,5663 (-0,6 mDa).
(Ejemplo 46)
Carbonato de (1-metilpiperidin-3-il)metil triacontan-11-ilo
A una solución de triacontan-11-ol (0,18 g, 0,41 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 63 y piridina (0,20 g, 2,6 mmol) en tolueno (4,1 ml), se le añadió una solución de trifosgeno (0,084 g, 0,28 mmol) en tolueno (0,62 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadió a la misma 1-metil-3-piperidinametanol (0,56 g, 4,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente.
Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (145 mg, 60 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,20 - 1,36 (50H, m), 1,48 - 1,77 (8H, m), 1,85 - 1,94 (1H, m), 1,95 - 2,07 (1H, m), 2,26 (3H, s), 2,75 (1H, d, J = 10,9 Hz), 2,86 (1H, d, J = 10,9 Hz), 3,94 (1H, dd, J = 7,4, 10,9 Hz), 4,06 (1H, dd, J = 5,9, 10,9 Hz), 4,64 -4,71 (1H, m).
EM (EN+) m/z 594 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 594,5827 (0,2 mDa).
(Ejemplo de referencia 64)
(6Z,9Z)-18-[2-(eteniloxi)etoxi]octadeca-6,9-dieno
A una solución de alcohol de linoleilo (3,90 g, 14,6 mmol), tosilvinil etilenglicol (4,76 g, 16,1 mmol) y sulfato de tetrabutilamonio (1,24 g, 3,66 mmol) en tolueno (23,4 ml), se le añadió una solución acuosa al 50% de hidróxido sódico (11,5 ml) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Se añadió a la misma tosivinil etilenglicol (2,00 g, 6,76 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 5 días y noches. La mezcla de reacción se diluyó con agua y después se sometió a extracción con éter dietílico y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (2,44, 50%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,25 - 1,40 (16H, m), 1,54 - 1,63 (2H, m), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,48 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,64 - 3,68 (2H, m), 3,81 - 3,85 (2H, m), 4,01 (1H, dd, J = 2,0, 7,0 Hz), 4,19 (1H, dd, J = 2,0, 14,1 Hz), 6,52 (1H, dd, J = 7,0, 14,1 Hz).
(Ejemplo de referencia 65)
2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]etanol
A una solución de (6Z,9Z)-18-[2-(eteniloxi)etoxi]octadeca-6,9-dieno (5,70 g, 17 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 64, en etanol (34 ml) y tetrahidrofurano (34 ml), se le añadió una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico (17 ml, 17 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y después se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (2,00 g, 38 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,40 (16H, m), 1,51 - 1,63 (2H, m), 1,95 (1H, t, J = 6,3 Hz), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,53 (2H, t, J = 4,3 Hz), 3,73 (2H, dt, J = 6,3, 4,3 Hz), 5,29 - 5,43 (4H, m).
(Ejemplo de referencia 66)
[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]acetaldehído
A una solución de 2-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]etanol (1,00 g, 3,2 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 65 y trietilamina (1,63 g, 16,1 mmol) en dimetilsulfóxido (6,4 ml), se le añadió un complejo de trióxido de azufre-piridina (1,54 g, 9,7 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y después se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida
se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,57 g, 57%).
RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8: 1,11 (3H, t, J = 6,8 Hz), 1,25 - 1,41 (16H, m), 1,59 - 1,67 (2H, m), 2,02 -2,08 (4H, m),
2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,53 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,06 (2H, s), 5,30 - 5,42 (4H, m), 9,74 - 9,75 (1H, m).
(Ejemplo de referencia 67)
(11Z,14Z)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]icosa-11,14-dien-2-ol
A una solución de [(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]acetaldehído (1,27 g, 4,1 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 66, en éter dietílico (12,4 ml), se le añadió bromuro de linoleil magnesio 0,5 N (14 ml, 7,0 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas y posteriormente a 60 °C durante 3 horas.
Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,48 g, 21 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,46 (34H, m), 1,52 - 1,61 (4H, m), 2,01 - 2,08 (8H, m), 2.31 (1H, d, J = 3,1 Hz), 2,77 (4H, t, J = 6,6 Hz), 3,23
Figure imgf000103_0001
(1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 - 3,51 (3H, m), 3,72 - 3,81 (1H, m), 5,29 - 5,43 (8H, m).
(Ejemplo 47)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil(11Z,14Z)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icosa-11,14-dien-2-ilo
Una solución de (11Z,14Z)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icosa-11,14-dien-2-ol (0,27 g, 0,48 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 67 y piridina (0,24 g, 3,0 mmol) en tolueno (4,8 ml) se enfrió a 0 °C en un baño
de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,099 g, 0,33 mmol) en tolueno (0,72 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1,5 horas y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,52 g, 5,1
mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto
de interés en forma de un líquido incoloro (330 mg, 24 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,88 - 0,94 (6H, m), 1,24 - 1,43 (34H, m), 1,52 - 1,67 (4H, m), 1,86 (2H, tt, J = 6,6, 7,4
Hz), 1,96 -2,11 (8H, m), 2,24 (6H, s), 2,38 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,79 (4H, t, J = 6,6 Hz), 3,38 - 3,54 (4H, m), 4,21 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,82 - 4,89 (1H, m), 5,31 - 5,45 (8H, m).
EM (EN+) m/z 688 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 688,6269 (2,5 mDa).
(Ejemplo de referencia 68)
10-{2-[(2-pentilciclopropil)metil]ciclopropil}-1-[(8-{2-[(2-pentilciclopropil)metil]ciclopropil}octil)oxi]decan-2-ol
A una solución de una solución de dietilcinc 1,1 N en hexano (7,3 ml, 7,7 mmol) en diclorometano (12 ml) enfriada a
0 °C, se le añadió cloroyodometano (1,7 g, 9,6 mmol) durante 10 minutos, después se añadió una solución de (11Z,14Z)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icosa-11,14-dien-2-ol (0,27 g, 0,48 mmol), obtenida en el ejemplo
de referencia 67 y cloroyodometano (1,0 g, 5,7 mmol) en diclorometano (7,0 ml) durante 40 minutos y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con diclorometano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,29 g, 98 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: (-0,32) -(-0,24) (4H, m), 0,57 - 0,84 (12H, m), 0,85 - 0,92 (6H, m), 0,97 - 1,62 (50H, m),
2.31 (1H, d, J = 3,1 Hz), 3,23 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 -3,52 (3H, m), 3,73 -3,80 (1H, m).
(Ejemplo 48)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil 10-{2-[(2-pentilciclopropil)metil]ciclopropil}-1-[(8-{2-[(2-pentilcidopropil)metil]cidopropil}octil)oxi]decan-2-ilo
Una solución de 10-{2-[(2-pentilciclopropil)metil]ciclopropil}-1-[(8-(2-[(2-pentilcidopropil)metil]cidopropil}octil)oxi]decan-2-ol (0,17 g, 0,28 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 68 y piridina (0,14 g, 1,7 mmol) en tolueno (2,8 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió a la misma una solución de trifosgeno (0,056 g, 0,19 mmol) en tolueno (0,42 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 1 hora, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,30 g, 2,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (135 mg, 66 %). RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: (-0,34) - (-0,23) (4H, m), 0,57 - 0,84 (12H, m), 0,86 - 0,92 (6H, m), 0,97 - 1,66 (50H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,35 - 3,53 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,80 -4,87 (1H, m).
EM (EN+) m/z 744 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 744,6876 (0,6 mDa).
(Ejemplo de referencia 69)
1 -[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]icosan-2-ol
A una solución de [(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]acetaldehído (0,22 g, 0,71 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 66 en tetrahidrofurano (2,9 ml), se le añadió cloruro de octadecil magnesio 0,5 N (3,0 ml, 1,5 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,13 g, 31 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,20 - 1,62 (52H, m), 2,01 - 2,08 (4H, m), 2,31 (1H, d, J = 3,1 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,23 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 - 3,55 (3H, m), 3,73 - 3,80 (1H, m), 5,29 - 5,42 (4H, m).
(Ejemplo 49)
Carbonato de 3-(dimetilaminopropil)1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icosan-2-ilo
Una solución de 1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icosan-2-ol (0,13 g, 0,22 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 69 y piridina (0,11 g, 1,4 mmol) en tolueno (2,2 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,045 g, 0,15 mmol) en tolueno (0,33 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 40 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,24 g, 2,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (86 mg, 56 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,41 (48H, m), 1,50 - 1,66 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,35 - 3,53 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,80 - 4,86 (1H, m), 5,29 - 5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 692 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 692,6588 (3,1 mDa).
(Ejemplo de referencia 70)
(11Z,14Z)-1-(octadeciloxi)icosa-11,14-dien-2-ol
A una solución de octadecan-1-iloxiacetaldehído (0,25 g, 0,80 mmol) en tetrahidrofurano (2,4 ml), se le añadió bromuro de linoleil magnesio 0,5 N (2,4 ml, 1,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,17 g, 38 %). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,88 - 0,94 (6H, m), 1,22 - 1,70 (52H, m), 2,04 -2,11 (4H, m), 2,35 (1H, d, J = 3,1 Hz), 2,80 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,26 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,42 - 3,58 (3H, m), 3,75 - 3,83 (1H, m), 5,32 - 5,45 (4H, m).
(Ejemplo 50)
Carbamato de 3-(dimetilaminopropil)(11Z,14Z)-1 -(octadeciloxi)icosa-11,14-dien-2-ilo
Una solución de (11Z,14Z)-1-(octadeciloxi)icosa-11,14-dien-2-ol (0,17 g, 0,30 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 70 y piridina (0,15 g, 1,9 mmol) en tolueno (3,0 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,062 g, 0,21 mmol) en tolueno (0,45 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,33 g, 3,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (53 mg, 25 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,21 - 1,40 (48H, m), 1,50 - 1,65 (4H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,01 - 2,09 (4H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,35 - 3,53 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,80 - 4,87 (1H, m), 5,29 - 5,42 (4H, m).
EM (EN+) m/z 692 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 692,6578 (2,1 mDa).
(Ejemplo de referencia 71)
(11Z,14R)-1 -(octadeciloxi)-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11 -en-2-ol
Se sumergió magnesio seco (virutas, 0,48 g, 19,8 mmol) en tetrahidrofurano (4,0 ml). Se le añadió 1,2-dibromoetano (3 gotas) y la mezcla se agitó vigorosamente. Después de que la solución se volviera negro-grisácea, se le añadió una solución de 2-{[(7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-il]oxi}tetrahidro-2H-pirano (5,70 g, 13,2 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 53, en tetrahidrofurano (18,5 ml) durante 40 minutos y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas.
Se añadió una alícuota de 7,5 ml de la solución de reactivo de Grignard obtenida a una solución de octadecan-1-iloxiacetaldehído (0,78 g, 2,5 mmol) en tetrahidrofurano (7,5 ml) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,61 g, 37 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,89 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,20 -2,40 (64H, m), 3,23 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 -3,56 (5H, m), 3,58 - 3,70 (1H, m), 3,73 - 3,81 (1H, m), 3,87 - 3,98 (1H, m), 4,64 - 4,74 (1H, m), 5,34 - 5,50 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 72)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-1-(octadeciloxi)-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11-en-2-ilo
Una solución de (11Z,14R)-1-(octadeciloxi)-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11-en-2-ol (0,61 g, 0,92 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 71 y piridina (0,46 g, 5,8 mmol) en tolueno (9,2 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,19 g, 0,63 mmol) en tolueno (1,4 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,99 g, 9,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,41 g, 56 %).
(Ejemplo de referencia 73)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-14-hidroxi-1-(octadeciloxi)icos-11-en-2-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-1-(octadeciloxi)-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11 -en-2-ilo (0,41 g, 0,52 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 72, en etanol (5,2 ml), se le añadió una solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (2,6 ml, 5,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,34 g, 92 %).
(Ejemplo 51)
Acetato de (7R,9Z)-19-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)-20-(octadeciloxi)icos-9-en-7-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-14-hidroxi-1-(octadeciloxi)icos-11-en-2-ilo (0,11 g, 0,16 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 73 y piridina (0,25 g, 3,1 mmol) en diclorometano (1,6 ml), se le añadió cloruro de ácido acético (0,12 g, 1,6 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (75 mg, 64 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,21 - 1,37 (50H, m), 1,50 - 1,66 (6H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,97 -2,06 (5H, m), 2,22 (6H, s), 2,25 -2,31 (2H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,35 -3,51 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,79 -4,91 (2H, m), 5,28 -5,36 (1H, m), 5,43 -5,51 (1H, m).
EM (EN+) m/z 752 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 752,6775 (3,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 74)
(11Z,14R)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11 -en-2-ol
Se sumergió magnesio seco (virutas, 0,24 g, 9,7 mmol) en tetrahidrofurano (3,0 ml). Se le añadió 1,2-dibromoetano (4 gotas) y la mezcla se agitó vigorosamente. Después de que la solución se volviera negro-grisácea, se le añadió una solución de 2-{[(7R,9Z)-18-bromooctadec-9-en-7-il]oxi}tetrahidro-2H-pirano (2,8 g, 6,5 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 53, en tetrahidrofurano (18,5 ml) durante 40 minutos y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente.
A la solución del reactivo de Grignard obtenido, se le añadió [(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxilacetaldehído (2,0 g, 6,5 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 66 y la mezcla se hizo reaccionar a 60 °C durante 2 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,27 g, 6 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 -0,92 (6H, m), 1,22 -2,40 (54H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,23 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 - 3,56 (5H, m), 3,58 - 3,72 (1H, m), 3,72 - 3,81 (1H, m), 3,86 - 3,98 (1H, m), 4,64 - 4,74 (1H, m), 5,28 -5,49 (6H, m).
(Ejemplo de referencia 75)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11-en-2-ilo
Una solución de (11Z,14R)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11-en-2-ol (0,27 g, 0,41 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 74 y piridina (0,20 g, 2,6 mmol) en tolueno (4,1 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,084 g, 0,28 mmol) en tolueno (0,61 ml) durante 2 minutos. Después de agitar a 0 °C durante 15 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,44 g, 4,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,16 g, 48 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,23 - 1,88 (50H, m), 1,98 - 2,09 (8H, m), 2,22 (6H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,35 - 3,52 (5H, m), 3,59 - 3,71 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,63 - 4,73 (1H, m), 4,80 - 4,87 (1H, m), 5,29 - 5,49 (6H, m).
(Ejemplo de referencia 76)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-14-hidroxi-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]icos-11 -en-2-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]-14-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)icos-11-en-2-ilo (0,16 g, 0,20 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 75, en etanol (0,98 ml), se le añadió una solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (0,49 ml, 0,98 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,08 g, 60 %).
(Ejemplo 52)
Acetato de (7R,9Z)-19-({[3-(dimetilamino)propoxi]carbonil}oxi)-20-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icos-9-en-7-ilo A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14R)-14-hidroxi-1-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]icos-11-en-2-ilo (0,08 g, 0,11 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 76 y piridina (0,37 g, 4,5 mmol) en diclorometano (2,3 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,18 g, 2,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (53 mg, 63 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 6: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,23 - 1,40 (36H, m), 1,50 - 1,64 (6H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,97 -2,09 (9H, m), 2,22 (6H, s), 2,25 -2,32 (2H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,35 -3,52 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,80 - 4,91 (2H, m), 5,28 - 5,51 (6H, m).
EM (EN+) m/z 748 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 748,6489 (3,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 77)
2-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}etanol
A una suspensión de hidruro sódico (64%, 2,97 g, 79,2 mmol) en N,N-dimetilformamida, se le añadió etilenglicol (5,25 g, 84,5 mmol) y la mezcla se agitó a 80 °C durante 45 minutos. Se añadió a la misma metanosulfonato de (9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-ilo (11,8 g, 26,4 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 51 y la mezcla se hizo reaccionar a 80 °C durante 2 horas. Después de tratar con agua, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (8,36 g, 77 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 6: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,62 (26H, m), 1,66 - 1,75 (1H, m), 1,78 - 1,87 (1H, m), 1.97 - 2,07 (3H, m), 2,23 (1H, t, J = 6,3 Hz), 2,26 - 2,41 (1H, m), 3,47 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,53 (2H, dd, J = 3,1, 5,1 Hz), 3,58 - 3,72 (1H, m), 3,87 - 3,98 (1H, m), 4,64 - 4,74 (1H, m), 5,33 - 5,49 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 78)
{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}acetaldehído
A una solución de 2-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}etanol (5,36 g, 13,0 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 77 y trietilamina (6,57 g, 65,0 mmol) en dimetilsulfóxido (26,0 ml), se le añadió un complejo de trióxido de azufre-piridina (5,17 g, 32,5 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y después se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (3,96 g, 74 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 6: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,23 - 1,67 (26H, m), 1,66 - 1,75 (1H, m), 1,78 - 1,86 (1H, m), 1.98 - 2,07 (3H, m), 2,20 - 2,41 (2H, m), 3,44 - 3,54 (3H, m), 3,55 - 3,71 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,06 (2H, s), 4,64 - 4,74 (1H, m), 5,32 - 5,49 (2H, m), 9,75 (1H, s).
(Ejemplo de referencia 79)
1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ol
A una solución de {[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}acetaldehído (0,40 g, 0,97 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 78, en tetrahidrofurano (2,9 ml), se le añadió cloruro de octadecil magnesio 0,5 N (2,4 ml, 1,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,24 g, 37 %).
(Ejemplo de referencia 80)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil 1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ilo
Una solución de 1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ol (0,24 g, 0,36 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 79 y piridina (0,18 g, 2,3 mmol) en tolueno (3,6 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,074 g, 0,25 mmol) en tolueno (0,54 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 10 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,39 g, 3,8 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,24 g, 84 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCls) 8: 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,21 - 1,75 (60H, m), 1,81 - 2,40 (8H, m), 2,22 (6H, s), 3,35 -3,53 (5H, m), 3,58 - 3,72 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 - 4,73 (1H, m), 4,80 - 4,87 (1H, m), 5,32 - 5,49 (2H, m).
(Ejemplo de referencia 81)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil 1-{[(9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil 1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ilo (0,24 g, 0,30 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 80, en etanol (3,0 ml), se le añadió una solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (1,5 ml, 3,0 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,16 g, 76 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,21 - 1,65 (54H, m), 1,84 (2H, dd, J = 6,6, 7,4 Hz), 2,05 (2H, c, J = 6.6 Hz), 2,18 - 2,24 (2H, m), 2,22 (6H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,35 - 3,52 (4H, m), 3,37 - 3,65 (1H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,83 (1H, quint, J = 5,9 Hz), 5,35 - 5,44 (1H, m), 5,52 - 5,61 (1H, m).
(Ejemplo 53)
Acetato de (20,23R)-2-metil-9-octadecil-7-oxo-6,8,11-trioxa-2-azanonacos-20-en-23-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil 1-{[(9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-il]oxi}icosan-2-ilo (0,16 g, 0,23 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 81 y piridina (0,36 g, 4,6 mmol) en diclorometano (2,3 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,18 g, 2,3 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (121 mg, 70 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,22 - 1,38 (50H, m), 1,49 - 1,65 (6H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6,6, 7,4 Hz), 1,97 -2,06 (5H, m), 2,22 (6H, s), 2,25 -2,32 (2H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 3,35 -3,53 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6.6 Hz), 4,79 -4,91 (2H, m), 5,28 -5,36 (1H, m), 5,43 -5,51 (1H, m).
EM (EN+) m/z 752 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 752,6802 (3,4 mDa).
(Ejemplo de referencia 82)
(11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosa-11,14-dien-2-ol
A una solución de {[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}acetaldehído (0,40 g, 0,97 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 78, en tetrahidrofurano (2,9 ml), se añadió bromuro de linoleil magnesio 0,5 N (2,9 ml, 1,5 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, la mezcla de reacción se sometió a extracción con acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido amarillo (0,37 g, 57%).
RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8: 0,85 - 0,92 (6H, m), 1,23 - 1,87 (48H, m), 1,98 - 2,40 (9H, m), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,23 (1H, dd, J = 8,2, 9,4 Hz), 3,39 - 3,52 (4H, m), 3,58 - 3,71 (1H, m), 3,73 - 3,80 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,64 -4,74 (1H, m), 5,29 -5,49 (6H, m).
(Ejemplo de referencia 83)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosa-11,14-dien-2-ilo
Una solución de (11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxi}icosa-11,14-dien-2-ol (0,37 g, 0,56 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 82 y piridina (0,28 g, 3,5 mmol) en tolueno (5,6 ml) se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se le añadió una solución de trifosgeno (0,11 g, 0,39 mmol) en tolueno (0,84 ml) durante 1 minuto. Después de agitar a 0 °C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora y se enfrió de nuevo a 0 °C. Se añadió a la misma 3-dimetilamino-1-propanol (0,61 g, 5,9 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,33 g, 75 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5: 0,85 - 0,92 (6 H, m), 1,23 - 1,75 (48H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6 ,6 , 7,4 Hz), 1,98 - 2,40 (8H, m), 2,22 (6 H, s), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,3 Hz), 3,35 - 3,53 (5H, m), 3,58 - 3,71 (1H, m), 3,87 - 3,97 (1H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,64 -4,74 (1H, m), 4,80 -4,87 (1H, m), 5,29 -5,48 (6 H, m).
(Ejemplo de referencia 84)
Carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-il]oxi}icosa-11,14-dien-2-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)octadec-9-en-1-il]oxilicosa-11,14-dien-2-ilo (0,33 g, 0,42 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 83, en etanol (4,2 ml), se le añadió una solución acuosa 2 N de ácido clorhídrico (2,1 ml, 4,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y acetato de etilo y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,29 g, 98 %).
(Ejemplo 54)
Acetato de (20,23R)-2-metil-9-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -il]-7-oxo-6,8,11 -trioxa-2-azanonacos-20-en-23-ilo
A una solución de carbonato de 3-(dimetilamino)propil (11Z,14Z)-1-{[(9Z,12R)-12-hidroxioctadec-9-en-1-il]oxi}icosa-11,14-dien-2-ilo (0,51 g, 0,72 mmol), obtenido en el ejemplo de referencia 84 y piridina (1,1 g, 14 mmol) en diclorometano (7,2 ml), se le añadió cloruro de acetilo (0,57 g, 7,2 mmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Después de tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, la mezcla de reacción se sometió a extracción con hexano y la capa orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y después el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener el compuesto de interés en forma de un líquido incoloro (0,42 g, 78 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 5: 0,85 - 0,92 (6 H, m), 1,23 - 1,40 (36H, m), 1,49 - 1,65 (6 H, m), 1,84 (2H, tt, J = 6 ,6 , 7,4 Hz), 1,98 - 2,08 (9H, m), 2,22 (6 H, s), 2,25 - 2,32 (2H, m), 2,36 (2H, t, J = 7,4 Hz), 2,77 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,35 - 3,53 (4H, m), 4,18 (2H, t, J = 6,6 Hz), 4,80 - 4,91 (2H, m), 5,28 - 5,51 (6 H, m).
EM (EN+) m/z 748 [M+H]+
HRMS (EN+) m/z 748,6476 (2,1 mDa).
(Ejemplo 55) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Se obtuvo una dispersión de una partícula lipídica de ácido nucleico que contenía el compuesto descrito en el Ejemplo de referencia 2, Ejemplo 41, Ejemplo 42, o Ejemplo 43 de la misma manera que en el Ejemplo 31. La dispersión que contiene la partícula lipídica de ácido nucleico se caracterizó mediante los siguientes procedimientos.
(1) Tamaño de partícula promedio
El tamaño de partícula del liposoma se midió con un Potencial Zeta/Dimensionador de partículas NICOMP((TM)) 380ZLS (Particle Sizing Systems, LLC). En las tablas, el tamaño de partícula promedio se indica por un tamaño de partícula promedio en volumen, y el valor numérico seguido por ± representa una desviación.
(2) Tasa de encapsulación del polinucleótido bicatenario
La tasa de encapsulación del polinucleótido bicatenario se midió con el kit de ensayo Quant-iT RiboGreen RNA (Invitrogen Corp.) según el documento adjunto.
Específicamente, el polinucleótido bicatenario en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se cuantificó en presencia y ausencia de un detergente Triton X-100 al 0,015 %, y el índice de encapsulación se calculó de acuerdo con la siguiente expresión:
{[Cantidad del polinucleótido bicatenario en presencia de
detergente] - [Cantidad del polinucleótido bicatenario en
ausencia del detergente]} / [Cantidad del polinucleótido
bicatenario en presencia del detergente]} x 100 (%)
(3) Relación entre el polinucleótido bicatenario y el lípido
Se midió la cantidad del polinucleótido bicatenario en una muestra de la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico en presencia de un detergente Triton X-100 al 5 % mediante cromatografía de intercambio iónico (sistema: Agilent 1100 series, columna: DNAPac PA200 (4 x 250 mm) (Thermo Fisher Scientific K.K.), tampón A: Tris 10 mM, perclorato de sodio 25 mM, y etanol al 20 %, pH 7,0, tampón B: Tris 10 mM, perclorato de sodio 250 mM, y etanol al 20 %, pH 7,0, gradiente (%B): 20-70 % (0-15 min), caudal: 0,5 ml/min, temperatura: 40 °C, detección: 260 nm).
La cantidad de fosfolípido en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midió con un Phospholipid C-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) según el documento adjunto. Específicamente, el fosfolípido de la muestra se cuantificó en presencia de un detergente de Triton X-100 al 1 %.
Las cantidades de colesterol y de LP en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midieron por cromatografía en fase inversa (sistema: Agilent 1100 series, columna: columna de HPLC Chromolith Performance RP-18 protegida en sus extremos 100-3 monolítica (Merck), tampón A: ácido trifluoroacético al 0,01 %, tampón B: ácido trifluoroacético al 0,01 % y metanol, gradiente (%B): 82-92 % (0-10 min), caudal: 2 ml/min, temperatura: 50 °C, detección: 205 nm).
La cantidad total de lípidos se calculó a partir de la cantidad del fosfolípido, la cantidad de colesterol y la cantidad de LP, y la relación de composición de los componentes lipídicos que constituyen el liposoma, y la relación entre el polinucleótido y el lípido se calculó a partir de la cantidad anteriormente mencionada del polinucleótido y la cantidad total de lípidos de acuerdo con la siguiente expresión:
[Concentración de polinucleótido bicatenario] /
[Concentración de lipidos totales] (p/p)
Los resultados se muestran en la Tabla 16.
(Tabla 16)
Nombre LP Tasa de encapsulación del Relación entre el polinucleótido Tamaño promedio de polinucleótido (%) y el ARNip lipídico/lípido (p/p) partícula (nm) Referencia 94 0,055 165 ± 11
Ejemplo 2
Ejemplo 41 97 0,101 158±40
Ejemplo 42 97 0,077 188±45
Ejemplo 43 97 0,075 174±31
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 200 nm.
(Ejemplo de ensayo 8)
Con los mismos procedimientos que en el Ejemplo de ensayo 3, se trataron células SW480 con cada uno 50 nM, 5 nM, 0,5 nM, y 0,05 nM de cada una de las partículas lipídicas de ácido nucleico preparadas usando un novedoso lípido, y se comparó la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana entre estas partículas.
Como resultado, como se muestra en la Tabla 17, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto de Ejemplo 41, 42, o 43 mostró una fuerte actividad inhibidora de la expresión génica del gen de la p-catenina, en comparación con la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el lípido del Ejemplo de Referencia 2 usado como control. Estos resultados demuestran que el compuesto del Ejemplo 8 es un lípido novedoso útil para preparar partículas lipídicas de ácido nucleico que presentan actividad intensa.
(Tabla 17)
Actividad inhibidora de la expresión del gen de la p-catenina humana CI50 (nM) Ejemplo de Referencia 2 >50
Ejemplo 41 2,6
Ejemplo 42 6,0
Ejemplo 43 24
(Ejemplo 56) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Una solución lipídica que tiene una concentración total de lípidos de 26,8 mM en etanol con diestearoilfosfatidilcolina (1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DSPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 23, o 28 (a partir de ahora en el presente documento, denominado como LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominada como PEG-C-DMA) se prepararon con una relación molar de DSPC:Chol:LP:PEG-C-DMA = 10:48:40:2.
La concentración de un polinucleótido bicatenario descrito en Nature Biotechnology (2008) 26, 561-569 (siFVII: ARNip contra el Factor VII de ratón) se ajustó a 1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 10 mM, pH 4,0) que contenía etanol al 30 % para obtener una solución de polinucleótido bicatenario.
La solución lipídica, la solución de polinucleótido bicatenario, y una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) se calentaron a 37 °C. La solución lipídica se añadió gota a gota a la solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) y se mezcló con esta de tal manera que la solución volumétrica entre la solución lipídica y la solución de tampón citrato fue de 3:7 para obtener una dispersión de liposomas en bruto. Posteriormente, la dispersión de liposomas en bruto se añadió gota a gota a la solución del polinucleótido bicatenario y se mezcló con esta de tal manera que la relación (N/P) de los átomos de nitrógeno (N) derivados de LP a los átomos de fósforo (P) derivados del polinucleótido bicatenario fue de 3. La mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, MWCO: 100 KD, Spectra/Por) para la eliminación del etanol y la eliminación de los polinucleótidos bicatenarios no encapsulados neutralización para obtener una dispersión purificada de una partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el polinucleótido bicatenario y el compuesto descrito en el Ejemplo 23 o 28.
La partícula lipídica de ácido nucleico obtenida se caracterizó mediante los procedimientos descritos en el Ejemplo 55, y el índice de encapsulación del polinucleótido en la partícula lipídica de ácido nucleico, la relación en peso del polinucleótido al lípido, y el tamaño de partícula promedio se muestran en la Tabla 18.
(Tabla 18)
Nombre LP Tasa de encapsulación del Relación entre el polinucleótido y el Tamaño promedio de polinucleótido (%) ARNip lipídico/lípido (p/p) partícula (nm) Ejemplo 23 99 0,076 219±49 Ejemplo 28 97 0,083 177±36
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 300 nm.
(Ejemplo de ensayo 9) medición de la proteína del Factor VII (FVII)
Con los mismos procedimientos que en el Ejemplo de ensayo 7, la intensidad de la actividad inhibidora de la expresión de la proteína del Factor VII se comparó entre partículas lipídicas de ácido nucleico, preparadas cada una de ellas usando un lípido novedoso. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada se inyectó por vía intravenosa a una dosis de 0,1 mg/kg en la cola de cada ratón. Un día y 6 días después de la administración, se recogieron aproximadamente 50 pl de sangre de la vena de la cola, y se obtuvo plasma.
En la Tabla 19 se muestran los resultados obtenidos 1 día y 6 días después de la administración. Como resultado, la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto del Ejemplo 23 o 28 presentó una fuerte actividad inhibidora de FVII. Estos resultados demostraron que la partícula lipídica de ácido nucleico que tiene el compuesto del Ejemplo 23 o 28 es útil como una partícula lipídica de ácido nucleico capaz de inhibir la expresión génica.
(Tabla 19)
Cantidad relativa de FVII (%)
1 día después 6 días después
PBS 100 100
Ejemplo 23 21 32
Ejemplo 28 45 57
(Ejemplo 57) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Una solución lipídica que tiene una concentración de lípidos de 6,5 mM en etanol con dipalmitoilfosfatidilcolina (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DPPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 19, 45, o 54 (a partir de ahora en el presente documento, denominado LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-distearoiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominado PEG-C-DSA) se prepararon en una relación molar de DPPC:Col:LP:PEG-C-DSA = 7:33.5:57:2,5.
La concentración de un polinucleótido bicatenario descrito en Journal Clinical Investigation (2009) 119, 661-673 (PLK1424-2/A: ARNip contra el PLK1 de ratón) se ajustó a 1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 10 mM, pH 4,0) que contenía etanol al 30 % para obtener una solución de polinucleótido bicatenario.
La solución lipídica, la solución de polinucleótido bicatenario, y una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) se calentaron a 37 °C. La solución lipídica se añadió gota a gota a la solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) y se mezcló con esta de tal manera que la solución volumétrica entre la solución lipídica y la solución de tampón citrato fue de 3:7 para obtener una dispersión de liposomas en bruto. Posteriormente, la dispersión de liposomas en bruto se añadió gota a gota a la solución del polinucleótido bicatenario y se mezcló con esta de tal manera que la relación (N/P) de los átomos de nitrógeno (N) derivados de LP a los átomos de fósforo (P) derivados del polinucleótido bicatenario fue de 3. La mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, MWCO: 100 KD, Spectra/Por) para la eliminación del etanol y la eliminación de los polinucleótidos bicatenarios no encapsulados neutralización para obtener una dispersión purificada de una partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el polinucleótido bicatenario y el compuesto descrito en el Ejemplo 19, 45 o 54.
La partícula lipídica de ácido nucleico obtenida se caracterizó mediante los procedimientos descritos en el Ejemplo 55, y el índice de encapsulación del polinucleótido en la partícula lipídica de ácido nucleico, la relación en peso del polinucleótido al lípido, y el tamaño de partícula promedio se muestran en la Tabla 20.
(Tabla 20)
Nombre LP Tasa de encapsulación del Relación entre el polinucleótido y el Tamaño promedio de polinucleótido (%) ARNip lipídico/lípido (p/p) partícula (nm) Ejemplo 19 97 0,095 103±16 Ejemplo 45 96 0,093 100±27 Ejemplo 54 98 0,078 127±29
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 50 nm a aproximadamente 150 nm.
(Ejemplo de ensayo 10)
Tras la aclimatación y la sensibilización de cada ratón atímico (CAnN.Cg-Foxn1[nu]/CrlCrlj[Foxn1nu/Foxn1nu]) durante 8 días, células Hep3B cultivadas humanas (1 x 107 células/ratón) se trasplantaron por vía subcutánea en la región lateral derecha del ratón. 19 días después del trasplante del tumor, los ratones se agruparon según el volumen tumoral como índice y, al día siguiente, la dispersión que contenía la partícula lipídica de ácido nucleico preparada en Ejemplo 57 se administró por vía intravenosa (administrada en dosis de 1 mg/kg y 3 mg/kg) en la cola de cada ratón. Se administró PBS a un grupo del control. El día después de la administración de la partícula lipídica de ácido nucleico, se recogió una masa tumoral del ratón que tenía el cáncer, y se extrajo el ácido nucleico utilizando el reactivo de lisis QIAzol (fabricado por Qiagen N.V.) y cloroformo. Después, se purificó el ARN total utilizando el mini kit QIAGNE RNeasy (fabricado por Qiagen N.V.) de acuerdo con el protocolo adjunto.
16 |jl del ARN purificado y 4 j l de la mezcla maestra SuperScript VILO (Life Technologies, Inc.) se mezclaron y usaron en una reacción a Ta en las condiciones dadas a continuación.
reacción a TA:
25 °C durante 10 min
42 °C durante 60 min
85 °C durante 5 min.
Las sondas de la PCR en tiempo real usadas fueron los ensayos de expresión génica TaqMan(R) (PLK-1, sonda FAM, Hs00153444_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) como sonda génica de PLK-1 humana y Ensayos para la expresión del gen TaqMan(R) (sonda VIC, Hs99999905_m1, fabricados por Applied Biosystems, Inc.) como sonda génica GAPDH como patrón interno. 5 j l de TaqMan(R) Fast Advanced Master Mix, 2,66 j l de agua exenta de ARNasa, 0,17 j l de cada sonda génica, y 2 j l de la solución de ADNc preparada se añadieron a cada pocillo de una placa de PCR de 384 pocillos (fabricada por Applied Biosystems, Inc.) para llevar la cantidad total hasta 10 jl, que se cargó a continuación en un sistema de PCR en tiempo real ViiA(TM) 7 (fabricado por Applied Biosystems, Inc.) y se sometió a la PCR en las condiciones dadas a continuación. La PCR en tiempo real se llevó a cabo a N = 4 para el ADNc preparado.
Activación inicial de la PCR: 95 °C durante 20 segundos
PCR: 95 °C durante 1 segundo
62 °C durante 20 segundos
Este ciclo de PCR se realizó repetidamente 40 veces.
El análisis cuantitativo se llevó a cabo por el procedimiento AACt. Se determinó un calor (AACt) restando ACt del grupo de administración de PBS de la diferencia en valor Ct (ACt) entre PLK-1 humano y GAPDH humano en los grupos de administración de cada partícula lipídica de ácido nucleico, y el valor relativo (RQ) respecto al grupo de administración de PBS, RQmáx, y RQmín se calcularon de acuerdo con las siguientes expresiones:
RQ = 2-ññCt
RQmáx = 2-95 %IC de AACt (95 %IC de AACt: el valor máximo del intervalo de confianza de 95 % de AACt) RQmín = 2-95 %IC de AACt (95 %IC de AACt: el valor mínimo del intervalo de confianza de 95 % de AACt)
(IC: intervalo de confianza)
En la Figura 5 se muestran los resultados. En el diagrama, las barras de error se calcularon de acuerdo con la siguiente expresión:
barras de error: RQmáx - RQ, - barras de error: RQ -RQmin)
Como resultado, como se muestra en la figura 5, la partícula lipídica de ácido nucleico que tiene el compuesto del Ejemplo 19, 45, o 54 presentó una fuerte actividad inhibidora de la expresión de PLK-1 en tumores. Estos resultados demostraron que la partícula lipídica de ácido nucleico que tiene el compuesto del Ejemplo 19, 45 o 54 es útil como una partícula lipídica de ácido nucleico capaz de inhibir la expresión génica.
(Ejemplo 58) Preparación de una partícula lipídica de ácido nucleico con ARNm encapsulado
Diestearoilfosfatidilcolina (1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DSPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 8 (a partir de ahora en el presente documento, denominado como LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominada como PEG-C-DMA) se prepararon con una relación molar de DSPC:Chol:LP:PEG-C-DMA = 10:48:40:2 en etanol para dar una concentración de lípidos totales de 10 mM. La solución lipídica obtenida se añadió gota a gota a una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) y se mezcló con la anterior de tal forma que la relación de volumen entre la solución lipídica y la solución de tampón citrato fue 3:7 para obtener una dispersión bruta de una partícula lipídica.
Por otra parte, la concentración de ARNm de mCherry (5meC, y ) (a partir de ahora en el presente documento, denominado como ARNm de mCherry, n.° de catálogo: L-6113, TriLink BioTechnologies, Inc.) o ARNm de luciferasa (5meC, y ) (a partir de ahora en el presente documento, denominado como ARNm de FLuc, n.° de catálogo: L-6107, TriLink BioTechnologies, se ajustó a 0,1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) que contenía etanol al 30 %.
Posteriormente, 790 pl de la dispersión de partículas lipídicas en bruto y 350 pl de la solución de ARNm se mezclaron de tal manera que la relación (N/P) del número de moléculas LP (N) al número de átomos de fósforo derivados de ARNm (P) tenía una relación molar N/P = 9,0. La mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, MWCO: 100 KD, Spectra/Por) para la eliminación del etanol topara obtener una dispersión purificada de partículas lipídicas de ácido nucleico que encapsulan ARNm que contiene el compuesto descrito en el Ejemplo 8.
(Ejemplo 59) Caracterización de partículas lipídicas de ácido nucleico que encapsulan ARNm
Se caracterizó la dispersión que contenía partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 58. A continuación se describirá cada procedimiento de caracterización.
(1) Tamaño de partícula promedio
El tamaño de partícula del liposoma se midió con un Potencial Zeta/Dimensionador de partículas NICOMP((TM)) 380ZLS (Particle Sizing Systems, LLC). En las tablas, el tamaño de partícula promedio se indica por un tamaño de partícula promedio en volumen, y el valor numérico seguido por ± representa una desviación.
(2) Índice de encapsulación del ARNm
Se midió el índice de encapsulación del ARNm utilizando el kit de ensayo del ARN Quant-iT RiboGreen RNA Assay kit (Invitrogen Corp.) de acuerdo con el documento adjunto.
Específicamente, el ARNm en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se cuantificó en presencia y ausencia de un detergente Triton X-100 al 0,015 % y se calculó el índice de encapsulación de acuerdo con la siguiente expresión:
{[Cantidad del ARNm en presencia del detergente] -
[Cantidad del ARNm en ausencia del detergente]} /
[Cantidad del ARNm en presencia del detergente]} x 100
(3) Relación de ARNm a lípidos
La cantidad de fosfolípido en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midió con un Phospholipid C-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) según el documento adjunto. Específicamente, el fosfolípido de la muestra se cuantificó en presencia de un detergente de Triton X-100 al 1 %.
Las cantidades de colesterol y de LP en la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se midieron por cromatografía en fase inversa (sistema: Agilent 1100 series, columna: columna de HPLC Chromolith Performance RP-18 protegida en sus extremos 100-3 monolítica (Merck), tampón A: ácido trifluoroacético al 0,01 %, tampón B: ácido trifluoroacético al 0,01 % y metanol, gradiente (%B): 82-92 % (0-10 min), caudal: 2 ml/min, temperatura: 50 °C, detección: 205 nm).
La cantidad total de lípidos se calculó a partir de la cantidad del fosfolípido, la cantidad de colesterol, y la cantidad de LP, y la relación de composición de los componentes lipídicos que constituyen el liposoma, y se calculó la relación del ARNm al lípido a partir de la "cantidad de ARNm en presencia del detergente" del párrafo anterior (2) de acuerdo con la siguiente expresión:
[concentración de ARNm en presencia del detergente] /
[Concentración total de lipidos] (p/p)
Los resultados se muestran en la Tabla 21.
(Tabla 21)
ARNm Índice de encapsulación del Relación de ARNm a lípido de Tamaño promedio de partícula ARNm (%) ARNm/lípido (p/p) (nm) mCherry 98 0,037 151±71
FLuc 98 0,038 145±56
Estos resultados mostraron que el ARNm se encapsuló en la partícula lipídica, y esta partícula lipídica del ácido nucleico tenía un tamaño de partícula promedio de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 200 nm.
(Ejemplo de ensayo 11)
Como se describe a continuación, se midió la expresión de mCherry utilizando una partícula lipídica de ácido nucleico preparada utilizando un novedoso lípido.
(1) Transfección
La concentración de una línea de células HuH-7 de un carcinoma hepatocelular humano se ajustó a 10.000 células/ml en un medio DMEM (fabricado por Invitrogen Corp.) que contenía suero de feto de bovino al 10 % (medio de cultivo). Después, la solución de cultivo resultante se inoculó a 100 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (fabricada por Corning Inc./Falcon) y se cultivó a 37 °C durante 1 día con CO2.al 5,0 %. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 58 se diluyó con un medio de cultivo para preparar una serie de dilución con concentraciones finales del ARNm de 2, 0,4, y 0,08 pg/ml en el medio. Después, cada dilución se añadió a las células tras eliminar el sobrenadante del cultivo, y el cultivo se continuó adicionalmente. Esta operación se llevó a cabo a N = 3 para cada concentración. Se cultivó un grupo de control solo con medio de cultivo.
(2) Observación fluorescente de mCherry
Un día después de la transfección, el medio de cultivo se eliminó, y 100 pl de 10 N Mildform (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) se añadieron a cada pocilio y se dejó a temperatura ambiente durante 10 minutos en la oscuridad. Tras lavar con Mildform 10 N con DPBS (DPBS de Dulbecco, Life Technologies, Inc.), 50 |jl de Hoechst 33342, trihidrocloruro, trihidrato (fabricado por Invitrogen Corp.) concentración ajustada a 20 jg/m l con DPBS se añadió a cada pocillo y se dejó a temperatura ambiente durante 1 hora en la oscuridad. Tras sustituir por DPBS, se observó la fluorescencia con un IN Cell Analyzer 6000 (GE Healthcare Japan Corp.). Las condiciones de medición fueron las siguientes: Hoechst; longitud de onda de excitación: 405 nm, longitud de onda de detección: 455 nm/50 nm (filtro de longitud de onda central/ancho de banda), y mCherry; longitud de onda de excitación: 561 nm, longitud de onda de detección: 605 nm/52 nm (filtro de longitud de onda central/ancho de banda).
En la Figura 6 se muestran los resultados. Los recuadros superiores de este diagrama representan imágenes de núcleos teñidos con Hoechst, y los recuadros inferiores representan imágenes de mCherry. Se descubrió que la partícula lipídica de ácido nucleico que tiene el compuesto del Ejemplo 8 fomentaba la expresión de mCherry. Estos resultados demostraron que la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto del Ejemplo 8 es útil como una partícula lipídica de ácido nucleico capaz de promover la expresión de ARNm.
(3) Medición del nivel de la expresión de la luciferasa
Seis horas después de la transfección, el nivel de expresión de la luciferasa se midió con un ensayo de gen indicador de la luciferasa, de alta sensibilidad (fabricado por F. Hoffmann-La Roche, Ltd.) de acuerdo con el documento adjunto. En la Tabla 22 se muestra un valor promedio de las unidades de luminiscencia relativa (ULR) a N = 3.
(Tabla 22)
Concentración de ARNm (jg/m l) ULR (1*105)
0 0
0,08 0,7
0,4 2,7
2,0 3,7
Como resultado, se descubrió que la partícula lipídica de ácido nucleico que tiene el compuesto del Ejemplo 8 fomentaba la expresión de FLuc. Estos resultados demostraron que la partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el compuesto del Ejemplo 8 es útil como una partícula lipídica de ácido nucleico capaz de promover la expresión de ARNm.
(Ejemplo 60) Preparación de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Diestearoilfosfatidilcolina (1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: a partir de ahora en el presente documento, denominada como DSPC, NOF CORPORATION), colesterol (a partir de ahora en el presente documento, denominado como Chol, Sigma-Aldrich, Inc.), el compuesto descrito en el Ejemplo 8 (a partir de ahora en el presente documento, denominado como LP), y N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (a partir de ahora en el presente documento, denominada como PEG-C-DMA) se prepararon con una relación molar de DSPC:Chol:LP:PEG-C-DMA = 10:48:40:2 en una solución lipídica que tiene una concentración total de lípido de 26,8 mM en etanol.
La concentración de un polinucleótido bicatenario descrito en Nature Biotechnology (2008) 26, 561-569 (siFVII: ARNip contra el Factor VII de ratón) se ajustó a 1 mg/ml con una solución de tampón citrato (tampón citrato 10 mM, pH 4,0) que contenía etanol al 30 % para obtener una solución de polinucleótido bicatenario.
La solución lipídica, la solución de polinucleótido bicatenario, y una solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) se calentaron a 37 °C. La solución lipídica se añadió gota a gota a la solución de tampón citrato (tampón citrato 20 mM, pH 4,0) y se mezcló con esta de tal manera que la solución volumétrica entre la solución lipídica y la solución de tampón citrato fue de 3:7 para obtener una dispersión de liposomas en bruto. Posteriormente, la dispersión de liposomas en bruto se añadió gota a gota a la solución del polinucleótido bicatenario y se mezcló con esta de tal manera que la relación (N/P) entre el número de moléculas de LP (N) y el número de átomos de fósforo (P) derivados del polinucleótido bicatenario se describe en la Tabla 23. La mezcla se incubó a 37 °C durante 30 minutos para obtener una dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico. La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico se dializó contra aproximadamente 100 ml de una solución de tampón fosfato (pH 7,4) durante de 12 a 18 horas (Float-A-Lyzer G2, MWCO: 100 KD, Spectra/Por) para la eliminación del etanol y la eliminación de los polinucleótidos bicatenarios no encapsulados neutralización para obtener una dispersión purificada de una partícula lipídica de ácido nucleico que contiene el polinucleótido bicatenario y el lípido descrito en el Ejemplo 8.
(Tabla 23)
Relación N/P
Partícula 28 2,0
Partícula 29 2,5
Partícula 30 3,0
Partícula 31 3,5
Partícula 32 4,0
Partícula 33 4,5
Partícula 34 5,0
Partícula 35 6,0
(Ejemplo 61) Caracterización de una partícula lipídica de ácido nucleico con polinucleótido bicatenario encapsulado
Se caracterizó la dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 60. La caracterización se llevó a cabo mediante los procedimientos descritos en el Ejemplo 32, y el índice de encapsulación del polinucleótido en la partícula lipídica de ácido nucleico descrita en el Ejemplo 60, la relación en peso del polinucleótido al lípido, y el tamaño de partícula promedio se muestran en la Tabla 24.
(Tabla 24)
Relación N/P* Indice de encapsulación (%) ARNip/lípido (p/p)** Tamaño de partícula (nm) Partícula 28 2,0 96 0,128 126±40 Partícula 29 2,5 97 0,099 134±9 Partícula 30 3,0 97 0,085 139±50 Partícula 31 3,5 98 0,066 147±39 Partícula 32 4,0 98 0,063 142±43 Partícula 33 4,5 98 0,057 141±23 Partícula 34 5,0 99 0,051 137±26 Partícula 35 6,0 99 0,037 151±38 *Relación N/P: relación entre el número de moléculas de LP (N) y el número de átomos de fósforo (P) derivados del polinucleótido bicatenario
**ARNip/lípido (p/p): relación en peso de polinucleótido a lípido
Estos resultados mostraron que el polinucleótido bicatenario quedó encapsulado en la partícula lipídica, y que esta partícula lipídica de ácido nucleico tuvo un tamaño de partículas promedio de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 200 nm.
(Ejemplo de ensayo 12) medición de la proteína del Factor VII (FVII)
Se midió la proteína del Factor VII de acuerdo con el procedimiento descrito en Nature Biotechnology (2010) 28, 172-176. Ratones C57BL6/J (machos, 9 semanas de edad) se agruparon aleatoriamente (n = 4). La dispersión de partículas lipídicas de ácido nucleico preparada en el Ejemplo 60 se inyectó por vía intravenosa a una dosis de 0,3 mg/kg en la cola de cada ratón. Un día después de la administración, se recogieron aproximadamente 50 pl de sangre de la vena de la cola, y se obtuvo plasma. Se midió la cantidad de proteína del Factor VII en el plasma obtenido utilizando el kit de ensayo Biophen FVII (fabricado por Aniara Corp.) de acuerdo con el protocolo adjunto.
Cuando la cantidad de FVII de las respectivas muestras de plasma recogidas en cantidades iguales de individuos en un grupo de administración PBS se definió como 100 %, la relación relativa (%) de la cantidad de FVII en una muestra de plasma de cada individuo se usó como el valor de medición (A). Se determinó un valor promedio (B) a partir de los valores de medición respectivos de los individuos en el grupo de administración PBS. La relación relativa del valor de medición (A) de cada individuo se determinó a partir de la expresión: A / B x 100 (%). El valor promedio de las relaciones relativas en el grupo de administración de cada partícula lipídica de ácido nucleico se muestra en la Tabla 25. Como resultado, como se muestra en la Tabla 25, las partículas 28 a 35 como las partículas lipídicas de ácido nucleico preparadas en el Ejemplo 60 presentaron una intensa actividad inhibidora de FVII. Estos resultados demostraron que una partícula lipídica de ácido nucleico que tiene la composición de lípido que se encuentra en las partículas 28 a 35 es útil como una partícula lipídica de ácido nucleico capaz de inhibir la expresión génica.
(Tabla 25)
Cantidad relativa de FVII (%)
PBS 100
Partícula 28 38
Partícula 29 11
Partícula 30 <10
Partícula 31 <10
Partícula 32 31
Partícula 33 <10
Partícula 34 <10
Partícula 35 <10
Aplicabilidad industrial
La presente invención puede proporcionar un novedoso lípido catiónico que forma una partícula lipídica junto con un lípido anfipático, un esterol, y un lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica.
La presente invención puede proporcionar también una partícula lipídica que comprende el lípido catiónico.
La presente invención puede proporcionar además una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende la partícula lipídica y además un ácido nucleico. La partícula lipídica de ácido nucleico de la presente invención se puede usar en una composición farmacéutica.
Texto libre del Listado de secuencias
SEQ ID NO:1: CT-169
SEQ ID NO:2: CT-157
SEQ ID NO:3: CT-103
SEQ ID NO:4: CT-292
SEQ ID NO:5: CT-315
SEQ ID NO:6: CT-387
SEQ ID NO:7: Región de la hebra de sentido directo de CT-454
SEQ ID NO:8: Región de la hebra de sentido contrario de CT-454
SEQ ID NO:9: Región de la hebra de sentido directo de HS-005
SEQ ID NO:10: Región de la hebra de sentido contrario de HS-005
SEQ ID NO:11: Región de la hebra de sentido directo de HS-006
SEQ ID NO:12: Región de la hebra de sentido contrario de HS-006
SEQ ID NO:13: Región de la hebra de sentido directo de HS-005s
SEQ ID NO:14: Región de la hebra de sentido contrario de HS-005s
SEQ ID NO:15: Región de la hebra de sentido directo de HS-006s
SEQ ID NO:16: Región de la hebra de sentido contrario de HS-006s

Claims (23)

REIVINDICACIONES
1. Un lípido catiónico representado por la fórmula general (la) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables:
[Fórmula 1]
Figure imgf000118_0001
en la que
cada uno de R1 y R2 independientemente representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquenilo
C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, un grupo alquinilo C2-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, o un grupo cicloalquilo C3-C7 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a o R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de 3 a 10 miembros junto con el átomo de nitrógeno unido a los mismos, en el que el anillo heterocíclico opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a y que opcionalmente contiene uno o más átomos seleccionados entre un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un átomo de azufre, además del átomo de nitrógeno unido a
R1 y R2, como átomos que constituyen el anillo heterocíclico;
R8 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
o R1 y R8 juntos representan el grupo -(CH2)q-;
el grupo de sustituyentes a representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo hidroxi, un grupo sulfanilo, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, un grupo alquilamino C1-C6 y un grupo alcanoilo C1-C7;
L1 representa un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C1o)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1;
L2 representa, independientemente de L1, un grupo alquilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquinilo C3-C24 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquil
C1-C1o)-(Q)k-(alquilo C1-C10) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alcoxi C10-C24)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquenil C10-C24)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquinil C3-C24 )oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil
C1-C10)-(Q)k-(alcoxi C1-C10)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1;
el grupo de sustituyentes p1 representa el grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo oxo, un grupo ciano, un grupo alquilo C1-C6, un grupo alquilo C1-C6 halogenado, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo
C1-C6, un grupo alcanoilo C1-C7, un grupo alcanoiloxi C1-C7, un grupo alcoxialcoxi C3-C7, un grupo (alcoxi C1-C6)carbonilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carboxilo, un grupo (alcoxi C1-C6)carbamoílo y un grupo (alquilamino C1-C6)carboxilo;
Q representa un grupo representado por la siguiente fórmula (II):
[Fórmula 2]
Figure imgf000118_0002
cuando cada uno de L1 y L2 tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 y el grupo de sustituyentes p1 es un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo alquilsulfanilo C1-C6, u grupo alcanoilo C1-C7 o un grupo alcanoiloxi C1-C7, el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo d sustituyentes p1 en L1 y el o los sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 en L2 opcionalmente se unen entre sí para formar una estructura cíclica;
k representa 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7;
m representa 0 o 1;
p representa 0, 1 o 2;
g representa 1, 2, 3 o 4; y
r representa 0, 1,2 o 3,
con la condición de que p+ r sea 2 o más o q r sea 2 o más.
2. El lípido catiónico de acuerdo con la reivindicación 1 o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que:
(a) cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo alquilo C1-C6 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a;
(b) cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo alquilo C1-C3;
(c) tanto R1 como R2 son grupos metilo;
(d) R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina, piperidina, azepano, dihidropirrol, dihidropiridina, tetrahidropiridina, piperazina, morfolina, dihidrooxazol o dihidrotiazol que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos;
(e) R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina, piperidina o morfolina que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos;
(f) R1 y R2 forman azetidina, pirrolidina o morfolina junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos; o (g) R1 y R8 juntos representan el grupo -(CH2)q-; p q es 2, 3 o 4; y R2 es un grupo alquilo C1-C3 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes a.
3. El lípido catiónico de acuerdo con la reivindicación 2(g) o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que R2 es un grupo alquilo C1-C3.
4. El lípido catiónico de acuerdo con la reivindicación 2(g) o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que R2 es un grupo metilo.
5. El lípido catiónico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que:
(a) L1 es un grupo alquilo C17-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C17-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C4)-(Q)k-(alquilo C4-C9) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1; y k es 1,2 o 3;
(b) L1 es un grupo heptadecenilo, un grupo octadecenilo, un grupo nonadecenilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo o un grupo nonadecatrienilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1; o
(c) L1 es un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrienilo (grupo linolenilo).
6. El lípido catiónico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que:
(a) L2 es un grupo alquilo C10-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo alquenilo C10-C19 que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquil C1-C4)-(Q)k-(alquilo C4-C9) que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alcoxi C10-C19}metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1, un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1 o un grupo (alquil C1-C10)-(Q)k-(alcoxi C1-C10)metilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1; y k es 1, 2 o 3;
(b) L2 es un grupo decilo, un grupo decenilo, un grupo undecilo, un grupo undecenilo, un grupo dodecilo, un grupo dodecenilo, un grupo decadienilo, un grupo undecadienilo, un grupo dodecadienilo, un grupo heptadecadienilo, un grupo octadecadienilo, un grupo nonadecadienilo, un grupo heptadecatrienilo, un grupo octadecatrienilo, un grupo nonadecatrienilo, un grupo deciloximetilo, un grupo deceniloximetilo, un grupo undeciloximetilo, un grupo undeceniloximetilo, un grupo dodeciloximetilo, un grupo dodeceniloximetilo, un grupo decadieniloximetilo, un grupo undecadieniloximetilo, un grupo dodecadieniloximetilo, un grupo heptadecadieniloximetilo, un grupo octadecadieniloximetilo, un grupo nonadecadieniloximetilo, un grupo heptadecatrieniloximetilo, un grupo octadecatrieniloximetilo o un grupo nonadecatrieniloximetilo que opcionalmente tiene uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo de sustituyentes p1; o
(c) L2 es un grupo decilo, un grupo cis-7-decenilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadecenilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadecenilo, un grupo cis-9-octadecenilo (grupo oleilo), un grupo cis-8,11-heptadecadienilo, un grupo cis-9,12-octadecadienilo (grupo linoleilo), un grupo cis-10,13-nonadecadienilo, un grupo cis-6,9,12-octadecatrienilo (grupo linolenilo), un grupo deciloximetilo, un grupo cis-7-deceniloximetilo, un grupo (R)-11-acetiloxi-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo (R)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-cis-8-heptadeceniloximetilo, un grupo cis-9-octadeceniloximetilo (grupo oleiloximetilo), un grupo cis-8,11-heptadecadieniloximetilo, un grupo cis-9,12-octadecadieniloximetilo (grupo linoleiloximetilo), un grupo cis-10,13-nonadecadieniloximetilo o un grupo cis-6,9,12-octadecatrieniloximetilo (grupo linoleniloximetilo).
7. El lípido catiónico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que m es 0.
8. El lípido catiónico de acuerdo con la reivindicación 1 o una de sus sales farmacológicamente aceptables, en el que:
(a) tanto R1 como R2 son grupos metilo; R8 es un átomo de hidrógeno; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p r es 2 ; y m es 0;
(b) R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo grupo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 2 ; q es 2 ; r es 0; y m es 0;
(c) R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan un grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo grupo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 1; q es 2 o 3; r es 1; y m es 0;
(d) R2 es un grupo metilo; R1 y R8 juntos representan el grupo -(CH2)q-; L1 es un grupo alquilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo alquenilo C17-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; L2 es un grupo alquilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo alquenilo C10-C19 opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi, un grupo (alcoxi C10-C19)metilo grupo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi o un grupo (alquenil C10-C19)oximetilo opcionalmente sustituido por un grupo acetiloxi; p es 0; q es 3 o 4; r es 2; y m es 0;
(e) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
Figure imgf000120_0001
(f) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 4]
Figure imgf000120_0002
(g) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula
[Fórmula 5]
Figure imgf000120_0003
(h) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 6]
Figure imgf000121_0001
(i) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 7]
Figure imgf000121_0002
(j) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 8]
Figure imgf000121_0003
(k) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula
[Fórmula 9]
Figure imgf000121_0004
(l) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 10]
Figure imgf000121_0005
(m) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula
[Fórmula 11]
Figure imgf000121_0006
(n) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula
[Fórmula 12]
Figure imgf000122_0001
o
(o) el lípido catiónico se representa mediante la fórmula:
[Fórmula 13]
Figure imgf000122_0002
9. Una partícula lipídica que comprende al menos un lípido catiónico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
10. La partícula lipídica de acuerdo con la reivindicación 9, que además comprende un lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica.
11. La partícula lipídica de acuerdo con la reivindicación 10, en la que el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica es un PEG-lípido.
12. La partícula lipídica de acuerdo con la reivindicación 11, en la que:
(a) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA) o 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol;
(b) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-C-DMA); (c) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dipalmitiloxipropil-3-amina (PEG-C-DpA) o 1.2- dipalmitoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol;
(d) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-dipalmitiloxipropil-3-amina (PEG-C-DPA); (e) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-diesteariloxipropil-3-amina (PEG-C-DSA) o 1.2- diestearoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol; o
(f) el PEG-lípido es N-[metoxi poli(etilenglicol)2000]carbamoil]-1,2-diesteariloxipropil-3-amina (PEG-C-DSA). 13. La partícula lipídica de acuerdo con la reivindicación 11 o la reivindicación 12, en la que el PEG tiene un peso molecular de 1.000 a 5.000; opcionalmente en la que el PEG tiene un peso molecular de 1800 a 2200.
14. La partícula lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, que comprende adicionalmente un esterol; opcionalmente en la que el esterol es colesterol.
15. La partícula lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, que comprende además un lípido anfipático; opcionalmente en el que el lípido anfipático es al menos uno cualquiera seleccionado entre diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), 1 -palmitoil-2-oleoilfosfatidilcolina (POPC), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), y esfingomielina (SM); y opcionalmente en la que el lípido anfipático es diestearoilfosfatidilcolina (DSPC) o dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC).
16. La partícula lipídica de acuerdo con la reivindicación 15, en la que:
(a) la composición lipídica del lípido anfipático, el esterol, el lípido catiónico, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica supone el 25 % o menos del lípido anfipático, 15 % o más del esterol, de 20 % al 70 % del lípido catiónico, y de 1 % al 10 % del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, en términos de cantidad molar; o
(b) la composición lipídica del lípido anfipático, el esterol, el lípido catiónico, y el lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica supone el 15 % o menos del lípido anfipático, 32 % o más del esterol, de 45 % al 65 % del lípido catiónico, y de 1,5 % al 3 % del lípido que reduce la agregación durante la formación de la partícula lipídica, en términos de cantidad molar.
17. Una partícula lipídica de ácido nucleico que comprende una partícula lipídica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16 y un ácido nucleico.
18. La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 17, en la que:
(a) el ácido nucleico es uno cualquiera seleccionado entre el grupo que consiste de un ADN monocatenario, un ARN monocatenario, un polinucleótido monocatenario de un ADN y un ARN mezclado entre sí, un ADN bicatenario, un ARN bicatenario, un polinucleótido híbrido de ADN-ARN, y dos polinucleótidos de ADN y ARN mezclados entre sí;
(b) el ácido nucleico es un polinucleótido monocatenario o bicatenario que tiene un efecto de interferencia del ARN; o
(c) el ácido nucleico es un ARN monocatenario.
19. La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, en la que:
(a) La relación (N/P) entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) es de 2,0 a 9,0; o
(b) La relación (N/P) entre el número de moléculas del lípido catiónico (N) y el número de átomos de fósforo derivados del ácido nucleico (P) es de 3,0 a 9,0.
20. La partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en la que:
(a) el tamaño de partícula promedio es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 300 nm;
(b) el tamaño de partícula promedio es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 200 nm; o
(c) el tamaño de partícula promedio es de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 100 nm.
21. Una composición farmacéutica que comprende una partícula lipídica de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20 como principio activo.
22. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 21, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad derivada de la expresión de un gen diana.
23. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 22, en la que la enfermedad derivada de la expresión de un gen diana es cáncer, enfermedad hepática, enfermedad de la vesícula, fibrosis, anemia, o enfermedad genética.
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Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
PL4023249T3 (pl) 2014-04-23 2025-03-10 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
MA42543A (fr) 2015-07-30 2018-06-06 Modernatx Inc Arn épitope peptidiques concatémériques
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP3365009A4 (en) * 2015-10-22 2019-07-03 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST HERPES SIMPLEX VIRUS
JP7384512B2 (ja) * 2015-10-22 2023-11-21 モデルナティエックス インコーポレイテッド 広域インフルエンザウイルスワクチン
WO2017070601A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
EP4011451A1 (en) 2015-10-22 2022-06-15 ModernaTX, Inc. Metapneumovirus mrna vaccines
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
EA201891000A1 (ru) * 2015-10-22 2018-12-28 МОДЕРНАТиЭкс, ИНК. Вакцина против респираторно-синцитиального вируса
AU2016341309A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Cancer vaccines
WO2017222016A1 (ja) * 2016-06-24 2017-12-28 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 カチオン性脂質
WO2018035387A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
EP4485466A3 (en) 2016-08-17 2025-04-02 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
AU2017357758B2 (en) * 2016-11-10 2023-11-16 Translate Bio, Inc. Improved process of preparing mRNA-loaded lipid nanoparticles
MA46766A (fr) 2016-11-11 2019-09-18 Modernatx Inc Vaccin antigrippal
WO2018170256A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
EP3595713A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS Vaccine
WO2018170245A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
WO2018191750A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 The Broad Institute Inc. Novel delivery of large payloads
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
WO2019135816A2 (en) 2017-10-23 2019-07-11 The Broad Institute, Inc. Novel nucleic acid modifiers
EP3710039A4 (en) 2017-11-13 2021-08-04 The Broad Institute, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF CANCER BY TARGETING THE CLEC2D-KLRB1 PATH
TWI894123B (zh) 2017-12-27 2025-08-21 日商武田藥品工業有限公司 含核酸之脂質奈米粒子及其用途
EP3746090A4 (en) 2018-01-29 2021-11-17 ModernaTX, Inc. RSV RNA Vaccines
KR102398295B1 (ko) 2018-03-09 2022-05-17 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 당원병 Ia형 치료약
US10968257B2 (en) 2018-04-03 2021-04-06 The Broad Institute, Inc. Target recognition motifs and uses thereof
KR102591743B1 (ko) * 2018-06-08 2023-10-19 후지필름 가부시키가이샤 화합물 또는 그 염 및 지질 입자
KR20210091120A (ko) 2018-08-29 2021-07-21 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 Mrna-로딩된 지질 나노입자를 제조하는 개선된 공정
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
WO2020061295A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
WO2020061457A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
TWI868080B (zh) 2018-10-18 2025-01-01 日商武田藥品工業股份有限公司 T細胞之活性化/增殖方法
CN118697900A (zh) 2019-01-31 2024-09-27 摩登纳特斯有限公司 制备脂质纳米颗粒的方法
US12070495B2 (en) 2019-03-15 2024-08-27 Modernatx, Inc. HIV RNA vaccines
US12534714B2 (en) 2019-03-18 2026-01-27 The Broad Institute, Inc. Type VII CRISPR proteins and systems
WO2020236972A2 (en) 2019-05-20 2020-11-26 The Broad Institute, Inc. Non-class i multi-component nucleic acid targeting systems
WO2020246581A1 (ja) 2019-06-07 2020-12-10 富士フイルム株式会社 脂質組成物
IL291251B1 (en) 2019-09-10 2026-02-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Oligonucleotide-galnac conjugate for targeted delivery to the liver and method for its production
US12297426B2 (en) 2019-10-01 2025-05-13 The Broad Institute, Inc. DNA damage response signature guided rational design of CRISPR-based systems and therapies
EP4059505B1 (en) 2019-11-15 2024-02-21 FUJIFILM Corporation Lipid composition
EP4059515A4 (en) * 2019-11-15 2024-02-14 Daiichi Sankyo Company, Limited Nucleic acid lipid particle vaccine encapsulating hpv mrna
JPWO2021117770A1 (es) * 2019-12-10 2021-06-17
JP2023508881A (ja) 2019-12-20 2023-03-06 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド Ｍｒｎａ担持脂質ナノ粒子を調製する改善されたプロセス
CN115427021A (zh) 2020-02-25 2022-12-02 翻译生物公司 制备负载mrna的脂质纳米颗粒的改进方法
IL297419B2 (en) 2020-04-22 2025-02-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
TWI907439B (zh) * 2020-06-11 2025-12-11 日商第一三共股份有限公司 核酸脂質粒子疫苗
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
US20240180954A1 (en) 2021-02-04 2024-06-06 Shionogi & Co., Ltd. Cationic lipid
CN117279888A (zh) * 2021-04-28 2023-12-22 富士胶片株式会社 化合物或其盐、脂质颗粒及药物组合物
WO2022244815A1 (ja) 2021-05-19 2022-11-24 第一三共株式会社 Ｈｐｖ感染症ワクチン
JPWO2022244801A1 (es) 2021-05-19 2022-11-24
KR20240009952A (ko) * 2021-05-19 2024-01-23 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 인플루엔자 바이러스 핵산 지질 입자 백신
CA3220372A1 (en) * 2021-05-28 2022-12-01 Marco A. Ciufolini Method for producing an ionizable lipid
JP2024521852A (ja) * 2021-05-28 2024-06-04 ナノベーション・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｍｃ３型脂質及び脂質ナノ粒子の調製におけるその使用
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4495240A1 (en) 2022-03-16 2025-01-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Sirna for suppressing expression of transferrin receptor-2
TW202415384A (zh) * 2022-06-24 2024-04-16 美國伊利諾大學理事會 雙性黴素b之複合醯胺衍生物於dsgpeg2k微胞中之調配物
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4606372A1 (en) 2022-10-18 2025-08-27 Tipton Corp. Taylor reactor and capsule particle manufacturing method
JP2025540278A (ja) 2022-12-09 2025-12-11 武田薬品工業株式会社 修飾免疫調節薬
CN115925563B (zh) * 2023-02-28 2023-05-16 清华大学 一种可用于靶向肺部递送核酸的脂质分子及其制备方法与应用
AU2024234895A1 (en) * 2023-03-13 2025-09-18 Fujifilm Corporation Compound or salt thereof, lipid composition, pharmaceutical composition, and delivery carrier
EP4687991A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
WO2024200820A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
AR132276A1 (es) 2023-04-07 2025-06-11 Takeda Pharmaceuticals Co Complejo de conjugación
WO2024236361A1 (en) 2023-05-15 2024-11-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
WO2024236504A1 (en) 2023-05-15 2024-11-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Sequences and methods for delivery of dna and rna
WO2025027116A1 (en) 2023-08-01 2025-02-06 Institut Curie Nanoparticles comprising nucleic acid sequences encoding cyclic gmp-amp synthase
WO2025133115A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising il-35
WO2025225716A1 (ja) * 2024-04-26 2025-10-30 第一三共株式会社 Ｓｆｔｓｖ核酸脂質粒子ワクチン
WO2025250808A1 (en) 2024-05-29 2025-12-04 The Brigham And Women’S Hospital, Inc. Anti-crispr delivery compositions and methods
WO2026000082A1 (en) * 2024-06-27 2026-01-02 Nanovation Therapeutics Inc. Ionizable lipids with modified head groups for the delivery of nucleic acids and other therapeutic agents
WO2026068705A1 (en) 2024-09-26 2026-04-02 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising non-glycosylated fc domains and uses thereof

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
EP1179340A3 (en) 1994-09-30 2003-05-07 INEX Pharmaceutical Corp. Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5976567A (en) 1995-06-07 1999-11-02 Inex Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US6110745A (en) 1997-07-24 2000-08-29 Inex Pharmaceuticals Corp. Preparation of lipid-nucleic acid particles using a solvent extraction and direct hydration method
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
CA2429814C (en) 2000-12-01 2014-02-18 Thomas Tuschl Rna interference mediating small rna molecules
DE60310944T3 (de) 2002-08-05 2017-08-03 Silence Therapeutics Gmbh Weitere neue formen von interferierende rns moleküle
CN101267805A (zh) 2005-07-27 2008-09-17 普洛体维生物治疗公司 制造脂质体的系统和方法
WO2009132131A1 (en) 2008-04-22 2009-10-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Amino lipid based improved lipid formulation
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
CA2740000C (en) 2008-10-09 2017-12-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
WO2010052715A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Devices and methods for local treatment of cardiovascular diseases
CN111808084A (zh) * 2008-11-10 2020-10-23 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的新型脂质和组合物
EP3485913A1 (en) * 2010-10-21 2019-05-22 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
WO2012074038A1 (ja) 2010-12-02 2012-06-07 第一三共株式会社 修飾１本鎖ポリヌクレオチド
WO2012108397A1 (ja) 2011-02-08 2012-08-16 第一三共株式会社 新規脂質
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
US10426737B2 (en) * 2013-12-19 2019-10-01 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents

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