ES2711176T3 - Celdillas con líquido compuesto que se pueden transportar - Google Patents

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Abstract

Un cartucho (1) de un solo uso, en donde: en el cartucho (1) se distinguen numerosos orificios ciegos (2), en donde en cada orificio ciego se distingue una abertura, en donde al menos uno de los numerosos orificios ciegos (2) contiene dos líquidos mutuamente inmiscibles (3, 4), los cuales son inmiscibles con agua, en donde uno de los dos líquidos mutuamente inmiscibles (3, 4) tiene una gravedad específica mayor que la del agua y el otro de los dos líquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad específica menor que la del agua.

Description

DESCRIPCION
Celdillas con Ifquido compuesto que se pueden transportar
Antecedentes de la invencion
Los metodos actuales de procesamiento bioqmmico, tipicamente realizados en pocillos macroscopicos de placas multipocillo, tienen una serie de inconvenientes que se encaran mediante el uso de celdillas con lfquido compuesto, o CLC. Las CLC se describen en las solicitudes provisionales de los EE. UU. con n.os de serie 61/344,434, presentada el 22 de julio de 2010, 61/470,515, presentada el 1 de abril de 2011, y 61/470,520, presentada el 1 de abril de 2011, y la solicitud de patente de los EE. UU. n.° 13/147,679, presentada el 3 de agosto de 2011. Las CLC tienen en consideracion que los protocolos bioqmmicos, tales como la amplificacion de acidos nucleicos, se realicen con cantidades mucho mas pequenas de reactivos de las que senan necesarias para el procesamiento en una placa multipocillo estandar. El uso de las CLC tambien facilita el procesamiento, ya que las CLC se pueden desplazar, combinar y dividir con relativa facilidad.
En la patente de los EE.UU. n.° 013/0236377 A1 se describe un aparato para realizar una reaccion en una gotita y un metodo para utilizarla, con el fin de procesar una muestra biologica o qmmica en la gotita. Este aparato descrito incluye un compartimento de procesamiento, un miembro para alimentacion con un canal para la gotita. La descripcion describe el atrapamiento de una gotita de medio celular por debajo de una contraccion en el canal de alimentacion de la gotita de una micromatriz, desde donde la gotita se dispensa en el compartimento de procesamiento y donde se mezcla con una matriz 3D que atrapa las celulas en la gotita. Por encima del medio se deposita una fase de un lfquido que es inmiscible con el medio en el compartimento de procesamiento.
Compendio
Se describen dispositivos, sistemas y metodos para las CLC.
Breve descripcion de los dibujos
En la figura 1 se muestra esquematicamente un cartucho en el que se distinguen numerosos orificios ciegos.
En la figura 2 se muestra esquematicamente un corte transversal del cartucho vado de la figura 1.
En la figura 3 se muestra esquematicamente un corte transversal del cartucho de la figura 1, con aceites y reactivos encerrados hermeticamente en cada orificio ciego, e incluye un primer plano de un orificio.
En la figura 4 se muestra esquematicamente una placa hecha de numerosos cartuchos tales como el mostrado en la figura 1, que se muestra sin cierre protector por claridad.
En la figura 5 se muestra esquematicamente la placa de la figura 4 con cierres protectores que cubren los orificios ciegos.
En la figura 6 se describe una realizacion de un sistema de la invencion. El aceite A y el aceite B estan colocados en un conducto, que esta abierto en la parte superior y en la inferior. Se puede cerrar cualquiera de las dos aberturas. El conducto puede tener la forma de un cono truncado. El aceite B tiene mayor densidad que el aceite A y los aceites son inmiscibles. Se puede anadir una muestra al conducto. La muestra tiene una densidad intermedia entre la densidad del aceite A y la densidad del aceite B. Ademas, la muestra es sustancialmente inmiscible tanto con el aceite A como con el aceite B. La muestra, el aceite A y el aceite B se pueden anadir al conducto en cualquier orden.
En la figura 7 se describe un metodo para dispensar la muestra desde el sistema. El aceite B se dispensa desde el sistema a traves de la abertura inferior del conducto. Un volumen de la muestra se dispensa desde el sistema a traves de la abertura inferior del conducto. Esto se puede conseguir mediante la aplicacion de presion positiva en la abertura superior del conducto. El aceite B se devuelve al conducto. Esto se puede llevar a cabo con la aplicacion de presion negativa en la parte superior del conducto, mientras que la parte inferior del conducto se pone en contacto con el aceite B.
Observese que las figuras 6 y 7 muestran que cada menisco es convexo, a saber, que se abomba hacia arriba hasta el maximo central, como sena el caso de un aceite tfpico en un recipiente de polipropileno. Si el recipiente y/o el lfquido se constituyeran de manera diferente y tuvieran propiedades de humectacion relativas diferentes, el menisco podna ser concavo, a saber, abombado hacia abajo hasta un mmimo en el centro, como sena el caso para muchos aceites en un recipiente que tiene una superficie interna de politetrafluoroetileno.
Descripcion detallada
Las CLC estan formadas en terminos generales por una combinacion de tres lfquidos sustancial y mutuamente inmiscibles que tienen tres densidades diferentes. En el fondo se encuentra un lfquido de vehfculo, el mas denso de los tres, y en la parte superior se encuentra un lfquido de encapsulacion, el menos denso. Entre el lfquido de vehfculo y el lfquido de encapsulacion se encuentra el lfquido que esta contenido en la CLC, tfpicamente acuoso, que puede ser, por ejemplo, una muestra biologica o un reactivo, tampon u otro elemento prescrito de un protocolo bioqmmico. Esta disposicion general detres Kquidos mutuamente inmiscibles puede aplicarse ventajosamente en otras situaciones que no sean la manipulacion para el uso en un protocolo bioqmmico, por ejemplo, la conservacion en un orificio ciego en un cartucho que se puede transportar, o la conservacion en, y dispensacion desde, un dispositivo que tiene un orificio perforado, p. ej., un conducto con los extremos abiertos.
En la figura 1 se muestra esquematicamente un cartucho 1 en el que se distinguen numerosos orificios ciegos. Los orificios ciegos son colineales, dispuestos en una lmea a lo largo de la longitud del cartucho 1. Un primer orificio ciego 2 esta colocado en un extremo del cartucho 1. En la figura 2 se muestra el corte transversal del mismo cartucho 1. Tal y como se muestra, los orificios estan vados. En la figura 3 se muestra el mismo corte transversal del mismo cartucho 1 que la figura 2, pero en este caso los orificios se muestran llenos del lfquido. En algunas realizaciones, uno o varios orificios contendran tres lfquidos que tienen tres densidades o gravedades espedficas diferentes, y los tres lfquidos son mutuamente inmiscibles. En el fondo del orificio 2 se encuentra un lfquido 3 de alta densidad que se muestra con un rayado inclinado, por ejemplo, Fluorinert FC-40 (aceite de fluorocarburo) que tiene una densidad de aproximadamente 1,9 g/cm3. Encima del lfquido de alta densidad 3 esta un lfquido 4 de densidad baja mutuamente inmiscible que se muestra con un rayado con la inclinacion contraria, por ejemplo fenilmetilpolisiloxano (aceite de silicona) que tiene una densidad de aproximadamente 0,92 g/cm3. Entre estos dos aceites se encuentra un elemento 5 acuoso que tiene una densidad de aproximadamente 1,0 g/cm3. Ambos aceites y el elemento acuoso son sustancial y mutuamente inmiscibles, lo que da al contenido de cada orificio muchas de las funcionalidades de una CLC.
En algunas realizaciones uno o varios orificios se pueden dejar totalmente vados, mientras que otros incluyen uno o varios lfquidos, p. ej., aceites. En algunas realizaciones, algunos orificios o todos los orificios pueden incluir solo los dos aceites, antes de la adicion de un elemento acuoso. Los orificios restantes pueden contener ambos aceites y los elementos acuosos que contienen los reactivos necesarios para llevar a cabo un protocolo bioqmmico, por ejemplo, un ensayo para detectar la presencia de un agente biologico concreto, o los reactivos necesarios para amplificar acidos nucleicos por PCR. En cualquier caso, un cartucho sellado hermeticamente (tal y como se explica mas abajo) puede estar equipado con una cantidad del tamano de la CLC de los reactivos necesarios incluidos en uno o mas orificios. Ya que la cantidad de reactivo que se necesita es tan pequena, el coste de tal cartucho se puede mantener bajo. La presencia de dos aceites mutuamente inmiscibles que rodean una solucion acuosa tambien da estabilidad a la solucion acuosa, ya que los elementos acuosos estan encapsulados de manera segura en el equivalente de una CLC inmovilizada.
En algunas realizaciones, algunos o todos los componentes acuosos o reactivos estan en seco, p. ej., liofilizados, para mejorar la estabilidad y el transporte.
En las figuras 4 y 5 se muestran una serie de cartuchos, como los que se muestran en las figuras 1 a 3, ensamblados entre sf para generar una unica placa 6. Cada fila de orificios corresponde a un solo cartucho. La placa puede estar hecha de cartuchos anteriormente independientes que se han fijado unos a otros, o la placa puede ser una sola pieza formada mtegramente (en tal realizacion, la descripcion en la presente memoria de las caractenstica de un cartucho tambien se aplica a una fila o seccion de una placa unitaria o formada mtegramente). En la figura 5 se muestra la placa sellada hermeticamente. El primer orificio en cada cartucho esta sellado hermeticamente con una pelmula 7 retirable. En esta realizacion, la pelmula 7 esta disenada para que el usuario la abra con la mano, y las muestras se han de insertar en la primera fila de orificios, a saber, el primer orificio de cada cartucho. El resto de los orificios estan cubiertos con un unico cierre protector 8. En este caso, el cierre protector 8 es una pelmula perforable. Cuando se utiliza un cartucho 1 o una placa 6, un sistema de manipulacion de lfquidos puede acceder a los lfquidos que estan dentro de los orificios mediante la perforacion del cierre protector 8. Las posiciones de los orificios por debajo de la pelmula 7 y del cierre protector 8 se muestran con lmeas de puntos. Aunque el primer orificio se muestra en un extremo de la placa/cartucho, se podna colocar en cualquier lugar. Cualquier orificio podna ser designado el orificio en el que se recibira una muestra o se le podna considerar el «primer» orificio. El cierre protector puede ser de cualquier material idoneo, p. ej., lamina metalica o pelmula polimerica o combinaciones de los mismos.
Un cartucho de un solo uso puede incluir un cierre protector y delimitar numerosos orificios ciegos colineales, en donde en cada orificio ciego se distingue una abertura, en donde al menos uno de los muchos orificios ciegos contiene dos lfquidos mutuamente inmiscibles, los cuales son inmiscibles con agua, en donde uno de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad espedfica mayor que la del agua y el otro de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad espedfica menor que la del agua. El cierre protector puede cubrir la abertura definida por el al menos un orificio ciego, con lo que se hace que el interior del orificio ciego sea sustancialmente estanco a los lfquidos a los dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
En algunas realizaciones, los orificios ciegos contienen los dos mismos lfquidos mutuamente inmiscibles. En algunas realizaciones, al menos un orificio ciego contiene solo los dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
En algunas realizaciones, el cartucho puede tener un primer orificio ciego que (a) esta colocado en un extremo de la lmea de los numerosos orificios ciegos, y (b) esta sellado hermeticamente con una porcion del cierre protector adaptado para ser retirado a mano por un usuario humano, con lo que se queda expuesta la abertura del primer orificio ciego. En algunas realizaciones, el primer orificio ciego contiene solo dos lfquidos mutuamente inmiscibles. En algunas realizaciones, al menos uno de los numerosos orificios ciegos que no son el primer orificio ciego contiene un reactivo que esta en una solucion acuosa, en donde el reactivo es un elemento de un protocolo bioqmmico predeterminado. En algunas realizaciones, todos los reactivos necesarios para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado estan contenidos por separado en los numerosos orificios ciegos que no son el primer orificio ciego. En algunas realizaciones, el protocolo biologico predeterminado es la amplificacion de acidos nucleicos por PCR. En algunas realizaciones, al menos una porcion del cierre protector es una pelfcula perforable que cierra la abertura definida por al menos un orificio ciego. Optativamente, uno o varios de tales reactivos estan secos, y algunos orificios pueden estar vados para permitir su mezcla o la eliminacion de desechos.
En algunas realizaciones, la placa puede incluir numerosos cartuchos, en donde la placa esta formada por la conexion u otra integracion de numerosos cartuchos, en donde los cartuchos estan dispuestos en la placa de tal manera que cada uno de los numerosos orificios ciegos colineales es paralelo a los otros. Como alternativa, tal placa puede estar formada con los orificios ciegos en cualquier otra distribucion, p. ej., mediante el uso de cartuchos que tienen otras configuraciones. Tal y como se senalo, la placa tambien puede ser una pieza unitaria unica.
Una realizacion del sistema de la invencion puede incluir tal cartucho o placa; un receptor de cartucho o de placa dimensionado y conformado para acoplarse al cartucho o a la placa; un sistema de manipulacion de lfquidos capaz de perforar la pelfcula perforable que cierra cualquiera de los numerosos orificios ciegos mediante la insercion de un conducto de lfquidos dentro de cualquiera de los orificios ciegos cuando el cartucho se ha acoplado al receptor de cartuchos; y un controlador conectado operativamente al sistema de manipulacion de lfquidos. El controlador puede estar programado para, por ejemplo, hacer que el sistema de manipulacion de lfquidos: forme una celdilla con lfquido compuesto en uno de los orificios ciegos; y opere detras de la celdilla con lfquido compuesto y de los reactivos para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado.
En algunas realizaciones, el sistema incluye un termociclador. En algunas realizaciones, el sistema incluye una unidad de enfriamiento. En algunas realizaciones, el sistema incluye un modulo de excitacion y deteccion de la fluorescencia optica. En algunas realizaciones, el sistema incluye un tubo capilar. En algunas realizaciones, el sistema incluye un modulo de separacion por magnetismo.
Un metodo para llevar a cabo un protocolo bioqmmico puede incluir el suministro de un sistema para utilizar un cartucho o placa segun esta descrito mas arriba; la insercion del cartucho o de la placa en el receptor; el deposito de una muestra biologica en un primer orificio ciego (bien antes o bien despues de introducir el cartucho o placa en el receptor); la activacion del controlador de tal manera que el controlador haga que el sistema de manipulacion de lfquidos: forme una celdilla con lfquido compuesto que contiene una solucion acuosa de la muestra biologica, y opere despues de la celdilla con lfquido compuesto y los reactivos para llevar a cabo el protocolo biologico predeterminado en la muestra biologica.
Ademas de los sistemas en los que las muestras biologicas o reactivos estan almacenados en un orificio ciego, esta descripcion tambien da a conocer en algunas realizaciones, sistemas y metodos para el almacenamiento y dispensacion de una muestra desde un conducto tal como un orificio perforado. El conducto puede tener flujo en cualquier direccion y esta controlado por un controlador. En determinadas realizaciones, una muestra, tal como un reactivo o una biomolecula, esta suspendida entre dos lfquidos, tales como aceites. En determinadas realizaciones, se utiliza la muestra segun sea necesario y a continuacion se resuspende una vez que se dispensa el volumen de muestra que sea necesario. En determinadas realizaciones, si se necesitan numerosas unidades de la muestra, la muestra se puede resuspender despues de dispensar cada unidad, o despues de dispensar una serie de unidades, o despues de dispensar todas las unidades de muestra que sean necesarias.
Realizaciones ejemplares
En determinadas realizaciones, la invencion hace referencia a un sistema que incluye un conducto, una bomba, un primer lfquido (p. ej., lfquido A), un segundo lfquido (p. ej., lfquido B) y una muestra. En el conducto se pueden distinguir una abertura superior y una abertura inferior, y el conducto puede incluir una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior. El primer lfquido, la muestra, y el segundo lfquido pueden depositarse dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior. El primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra pueden ser sustancial y mutuamente inmiscibles. El primer lfquido puede ser menos denso que la muestra y la muestra puede ser menos densa que el segundo lfquido. La muestra se puede depositar entre el primer lfquido y el segundo lfquido, de tal manera que todo el area de la superficie de la muestra esta en contacto fuido solo con el primer lfquido, con el segundo lfquido o con la superficie interna del conducto. En algunas realizaciones, se puede configurar una bomba para que aplique presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa a una posicion del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema consiste esencialmente en un conducto, tal como un orificio perforado, un primer lfquido (p. ej., lfquido A), un segundo lfquido (p. ej., lfquido B) y una muestra, y, optativamente, una bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema incluye medios para sellartemporalmente o cerrartemporalmente la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema incluye un medio para sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra esta en una solucion acuosa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra incluye un reactivo. Los ejemplos de reactivos incluyen los que son utiles para la preparacion de perlas con secuencias, pirosecuenciacion, ligacion de acidos nucleicos y reaccion en cadena de la polimerasa. En determinadas realizaciones, el reactivo esta sobre una perla.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra incluye una biomolecula. Los ejemplos de biomoleculas incluyen (y sin limitacion) celulas, acidos nucleicos, protemas, enzimas, sangre, saliva y material organico. En determinadas realizaciones, la biomolecula esta sobre una perla.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra incluye mas de un reactivo, o mas de una biomolecula, o un reactivo y una biomolecula.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es inmiscible con el segundo lfquido.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es inmiscible con la muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es inmiscible con la muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido o el segundo lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde los aceites utilizados para generar fases inmiscibles, por ejemplo, el primer lfquido o el segundo lfquido, puede incluir, y sin limitarse a ellos, aceite de silicona, aceite de perfluorocarburo y aceite de perfluoropolieter.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde los valores tfpicos de densidad para los lfquidos implicados oscilan dentro de los valores de aproximadamente 1 300 a aproximadamente 2 000 kg/m3 para el segundo lfquido, de aproximadamente 700 a aproximadamente 990 kg/m3 para el primer lfquido, y de aproximadamente 900 a aproximadamente 1200 kg/m3 para la muestra. Un ejemplo de uno de tales conjuntos de lfquidos y densidades de funcionamiento se presenta en la presente memoria, pero no se limita a estos; el segundo lfquido es Fluorinert FC-40 (aceite de fluorocarburo) con una densidad de aproximadamente 1900 kg/m3; el primer lfquido es fenilmetilpolisiloxano (aceite de silicona) con una densidad de aproximadamente 920 kg/m3; y la muestra es una solucion acuosa de reactivos para PCR con una densidad de aproximadamente 1000 kg/m3.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es un aceite de amina perfluorada.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es una solucion de un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y un aditivo de polisorbato. Los aditivos tienen un numero de equilibrio hidrofilo-lipofilo en el margen de 2 a 8. El numero de equilibrio hidrofilo-lipofilo total combinado de los aditivos esta en el margen de 2 a 8. Los ejemplos de aditivos de polisorbato son monooleato de sorbitano, triestearato de sorbitano y polisorbato 20, pero no se limitan a ellos. Estos aditivos dentro del primer lfquido oscilan entre el 0,001% y el 10%.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra es una suspension de partfculas solidas en medio acuoso, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y el segundo lfquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la muestra es un medio acuoso en aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano, y el segundo lfquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta orientado sustancialmente en vertical.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta orientado en vertical.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto es un tubo capilar.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene la forma de un cono truncado.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene la forma de un cono truncado; y la abertura superior del conducto tiene un diametro interno que es mas grande que el diametro interno de la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto es una punta de pipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta hecho de un polfmero, ceramica o metal.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto incluye una superficie hidrofoba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto es un tubo capilar de polfmero, tal como un tubo capilar de politetrafluoroetileno (PTFE). En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto es desechable.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene un diametro interno que esta tfpicamente dentro de un margen de aproximadamente 10 pm a aproximadamente 10 mm de diametro.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el diametro interno del conducto es variable desde el fondo del conducto hasta la parte superior del conducto, a lo largo de la longitud del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene un grosorde la pared de al menos aproximadamente 10 pm o mas.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la forma interna del conducto puede ser (y no esta necesariamente limitada a ellos) un perfil que es redondo, conico, cuadrado, ovalado, rectangular, que tiene una superficie ondulada, que tiene al menos una superficie plana, o que tiene caractensticas que le mejoran la superficie.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la forma externa del conducto puede ser (y no esta necesariamente limitada a ellos) un perfil que es redondo, conico, cuadrado, ovalado, rectangular, que tiene una superficie ondulada, que tiene al menos una superficie plana, o que tiene caractensticas que le mejoran la superficie.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba es una bomba al vacfo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba es una perilla para pipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba es un medio para aplicar presion positiva.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba es un medio para aplicar presion negativa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba esta operativamente conectada a la parte superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde la bomba esta operativamente conectada a la parte inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema tambien incluye un controlador.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el controlador esta operativamente conectado a la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde numerosos conductos estan ensamblados unos con otros en un casete.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde numerosos conductos estan ensamblados unos con otros en una placa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema esta a aproximadamente 0 °C, aproximadamente 3 °C, aproximadamente 5 °C, aproximadamente 10 °C, aproximadamente 15 °C, aproximadamente 20 °C, aproximadamente 25 °C, aproximadamente 30 °C, aproximadamente 35 °C, aproximadamente 37 °C, aproximadamente 40 °C, o aproximadamente 45 °C.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los sistemas descritos en la presente memoria, en donde el sistema es una micropipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a un metodo para almacenar una muestra en un sistema, en donde el metodo incluye:
proporcionar un conducto, una bomba, un primer lfquido, un segundo lfquido y una muestra, en donde
el conducto tiene una abertura superior, una abertura inferior y una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido es sustancialmente inmiscible con el segundo lfquido;
el primer lfquido es sustancialmente inmiscible con la muestra;
el segundo lfquido es sustancialmente inmiscible con la muestra;
el primer lfquido es menos denso que la muestra;
la muestra es menos densa que el segundo lfquido; y
la bomba esta configurada para aplicar presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa en una localizacion del conducto; y
cargar en el conducto, en cualquier orden, el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra, de tal manera que el primer lfquido, la muestra y el segundo lfquido estan depositados dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior, y la muestra esta depositada entre el primer lfquido y el segundo lfquido de tal manera que toda el area de la superficie de la muestra este en contacto fluido solo con el primer lfquido, el segundo lfquido o la superficie interna del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema consiste esencialmente en un conducto, una bomba, un primer lfquido (p. ej., lfquido A), un segundo lfquido (p. ej., lfquido B) y una muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema incluye un medio para sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que ademas incluye la etapa de:
sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura inferior del conducto antes de cargar el primer lfquido, el segundo lfquido o la muestra en el conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema incluye un medio para sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluye la etapa de:
sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura superior del conducto antes de cargar el primer Ifquido, el segundo lfquido o la muestra en el conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido se carga en el conducto antes que la muestra o que el segundo lfquido.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra se carga en el conducto antes que el primer lfquido o que el segundo lfquido.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto antes que el primer lfquido o que la muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra se carga en el conducto a traves de la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquier de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la etapa de cargar el primer lfquido, el segundo lfquido o la muestra en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto incluye la aplicacion de presion negativa a la abertura superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra esta en una solucion acuosa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra incluye un reactivo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra incluye una biomolecula. Los ejemplos de biomoleculas incluyen (y no se limitan a ellos) celulas, acidos nucleicos, protemas, enzimas, sangre, saliva y material organico.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es inmiscible con el segundo lfquido.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es inmiscible con la muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es inmiscible con la muestra.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido o el segundo lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es un aceite.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde los aceites utilizados para generar las fases inmiscibles, por ejemplo, el primer lfquido o el segundo lfquido, pueden incluir, y no se limitan a ellos, aceite de silicona, aceite de perfluorocarburo y aceite de perfluoropolieter. En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde los valores tfpicos de densidad para los lfquidos implicados oscilan dentro de los valores de aproximadamente 1 300 a aproximadamente 2 000 kg/m3 para el segundo lfquido, de aproximadamente 700 a aproximadamente 990 kg/m3 para el primer lfquido, y de aproximadamente 900 a aproximadamente 1200 kg/m3 para la muestra. Un ejemplo de tal conjunto de Kquidos y densidades de funcionamiento se presenta en la presente memoria, pero no se limita a ellos; el segundo Kquido es Fluorinert FC-40 (aceite de fluorocarburo) con una densidad de aproximadamente 1900 kg/m3; el primer Kquido es fenilmetilpolisiloxano (aceite de silicona) con una densidad de aproximadamente 920 kg/m3; y la muestra es una solucion acuosa de reactivos para PCR con una densidad de aproximadamente 1000 kg/m3.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido es un aceite de amina perfluorada.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido es una solucion de aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y un aditivo de polisorbato. Los aditivos tienen un numero de equilibrio hidrofilo-lipofilo en el margen de 2 a 8. El numero de equilibrio hidrofilolipofilo total combinado de los aditivos esta en el margen de 2 a 8. Los ejemplos de aditivos de polisorbato son monooleato de sorbitano, triestearato de sorbitano y polisorbato 20, pero no se limitan a ellos. Estos aditivos dentro del primer lfquido oscilan entre el 0,001% y el 10%.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra es una suspension de partfculas solidas en medio acuoso, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano, y el segundo lfquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la muestra es un medio acuoso en aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y el segundo lfquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta orientado sustancialmente en vertical.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta orientado en vertical.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es un tubo capilar.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta en forma de un cono truncado.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta en forma de un cono truncado; y la abertura superior del conducto tiene un diametro interno que es mayor que el diametro interno de la abertura inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es una punta de pipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto esta hecho de un polfmero, ceramica o metal.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto incluye una superficie hidrofoba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es un tubo capilar de polfmero, tal como un tubo capilar de material de PTFE.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es desechable.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene un diametro interno que esta tfpicamente dentro de un margen de aproximadamente 10 pm a aproximadamente 10 mm de diametro.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el diametro interno del conducto es variable desde la parte inferior del conducto hasta la parte superior del conducto, a lo largo de la longitud del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto tiene un grosorde pared de al menos aproximadamente 10 pm o mas.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la forma interna del conducto puede ser (y sin estar necesariamente limitada a ellos) un perfil que es redondo, conico, cuadrado, ovalado, rectangular, que tiene una superficie ondulada, que tiene al menos una superficie plana, o que tiene caractensticas que le mejoran la superficie.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la forma externa del conducto puede ser (y sin estar necesariamente limitada a ellos) un perfil que es redondo, conico, cuadrado, ovalado, rectangular, que tiene una superficie ondulada, que tiene al menos una superficie plana, o que tiene caractensticas que le mejoran la superficie.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba es una bomba de vado.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba es una perilla para pipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba es un medio para aplicar presion positiva.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba es un medio para aplicar presion negativa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba esta conectada operativamente a la parte superior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde la bomba esta conectada operativamente a la parte inferior del conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema ademas incluye un controlador.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el controlador esta conectado operativamente a la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde numerosos conductos estan ensamblados unos con otros en un casete.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde numerosos conductos estan ensamblados unos con otros en una placa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluye la etapa de almacenar la muestra en el sistema durante un periodo de tiempo.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer periodo de tiempo es del orden de minutos, dfas, meses o anos.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluyen la etapa de almacenar la muestra en el sistema a una temperatura de aproximadamente 0 °C, aproximadamente 3 °C, aproximadamente 5 °C, aproximadamente 10 °C, aproximadamente 15 °C, aproximadamente 20 °C, aproximadamente 25 °C, aproximadamente 30 °C, aproximadamente 35 °C, aproximadamente 37 °C, aproximadamente 40 °C o aproximadamente 45 °C.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluyen la etapa de almacenar la muestra en el sistema durante un periodo de tiempo a una temperatura de aproximadamente 0 °C, aproximadamente 3 °C, aproximadamente 5 °C, aproximadamente 10 °C, aproximadamente 15 °C, aproximadamente 20 °C, aproximadamente 25 °C, aproximadamente 30 °C, aproximadamente 35 °C, aproximadamente 37 °C, aproximadamente 40 °C o aproximadamente 45 °C.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema esta sobre un instrumento.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema es una micropipeta.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a un metodo para dispensar una muestra de uno cualquiera de los sistemas mencionados mas arriba, que incluye la etapa de
dispensar el segundo lfquido desde el conducto a traves de la abertura inferior; y
dispensar un volumen de la muestra desde el conducto a traves de la abertura inferior.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluyen la etapa de dispensar el primer lfquido desde el conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion negativa al conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensan desde el conducto por la aplicacion de presion positiva al conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion presion negativa a la abertura inferior del conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion positiva a la abertura superior del conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluye la etapa de recargar el segundo lfquido en el conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a uno cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se recarga en el conducto a traves de la abertura inferior.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se recarga en el conducto por la aplicacion de presion negativa a la abertura superior del conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el segundo lfquido se recarga en el conducto por la aplicacion de presion positiva a la abertura inferior del conducto mediante la bomba.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el volumen de la muestra dispensada desde el conducto es de aproximadamente 10 nl a aproximadamente 20 Ml.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el volumen de la muestra dispensada desde el conducto es de aproximadamente 10 nl, aproximadamente 20 nl, aproximadamente 30 nl, aproximadamente 40 nl, aproximadamente 50 nl, aproximadamente 60 nl, aproximadamente 70 nl, aproximadamente 80 nl, aproximadamente 90 nl, aproximadamente 100 nl, aproximadamente 200 nl, aproximadamente 300 nl, aproximadamente 400 nl, aproximadamente 500 nl, aproximadamente 600 nl, aproximadamente 700 nl, aproximadamente 800 nl, aproximadamente 900 nl, 1 Ml, aproximadamente 2 Ml, aproximadamente 3 Ml, aproximadamente 4 Ml, aproximadamente 5 Ml, aproximadamente 6 Ml, aproximadamente 7 Ml, aproximadamente 8 Ml, aproximadamente 9 Ml, aproximadamente 10 Ml, aproximadamente 11 Ml, aproximadamente 12 Ml, aproximadamente 13 Ml, aproximadamente 14 Ml, aproximadamente 15 Ml, aproximadamente 16 Ml, aproximadamente 17 Ml, aproximadamente 18 Ml, aproximadamente 19 Ml, o aproximadamente 20 Ml.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el volumen de la muestra dispensada desde el conducto es un volumen predeterminado.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el sistema incluye un volumen muerto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el volumen muerto es de aproximadamente 10 nl a aproximadamente 200 nl.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a uno cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el volumen muerto es de aproximadamente 10 nl, aproximadamente 20 nl, aproximadamente 30 nl, aproximadamente 40 nl, aproximadamente 50 nl, aproximadamente 60 nl, aproximadamente 70 nl, aproximadamente 80 nl, aproximadamente 90 nl, aproximadamente 100 nl, aproximadamente 110 nl, aproximadamente 120 nl, aproximadamente 130 nl, aproximadamente 140 nl, aproximadamente 150 nl, aproximadamente 160 nl, aproximadamente 170 nl, aproximadamente 180 nl, aproximadamente 190 nl, o aproximadamente 200 nl.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde las etapas estan automatizadas.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde las etapas estan automatizadas y controladas por el controlador.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, que tambien incluye la etapa de limpiar o descontaminar el conducto.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto se limpia o descontamina con un limpiador.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable; y el limpiador es vapor.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable; y el limpiador es lejfa.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable; y el limpiador incluye una enzima.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el conducto es reutilizable; y el limpiador incluye una enzima de digestion de ADN.
En determinadas realizaciones, la invencion se refiere a cualquiera de los metodos descritos en la presente memoria, en donde el limpiador incluye lejfa, una base, un detergente, un desinfectante de superficies, un detergente suave, un acido suave o un desinfectante.
Sin perjuicio de las reivindicaciones, la invencion tambien se refiere a las siguientes clausulas:
1. Un cartucho de un solo uso, en donde:
en el cartucho se distinguen numerosos orificios ciegos, en donde en cada orificio ciego se distingue una abertura, en donde al menos uno de los numerosos orificios ciegos contiene dos lfquidos mutuamente inmiscibles, los cuales son inmiscibles con agua, en donde uno de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad espedfica mayor que la del agua y en donde el otro de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad espedfica menor que la del agua.
2. El cartucho de acuerdo con la clausula 1, que comprende ademas un cierre protector que cubre la abertura definida por los numerosos orificios ciegos, con lo que se hace que el interior de los orificios ciegos sea sustancialmente estanco para los dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
3. El cartucho de acuerdo con la clausula 2, en donde un primer orificio ciego esta sellado hermeticamente con una porcion del cierre protector adaptado para ser retirado por un usuario humano a mano, con lo que expone la abertura del primer orificio ciego.
4. El cartucho de acuerdo con cualquiera de las clausulas 2 o 3, en donde al menos una porcion del cierre protector es una pelfcula perforable que cierra la abertura definida poral menos un orificio ciego.
5. El cartucho de acuerdo con cualquiera de las clausulas 1 a 4, en donde los numerosos orificios ciegos son colineales.
6. El cartucho de acuerdo con cualquiera de las clausulas 1 a 5, en donde todos los orificios ciegos contienen al menos los mismos dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
7. El cartucho de acuerdo con cualquiera de las clausulas 1 a 6, en donde al menos un orificio ciego contiene solo los dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
8. El cartucho de acuerdo con cualquiera de las clausulas 1 a 7, en donde un primer orificio ciego contiene solo los dos lfquidos mutuamente inmiscibles.
9. El cartucho de acuerdo con la clausula 8, en donde al menos uno de los numerosos orificios ciegos que no son el primer orificio ciego contiene un reactivo que esta en una solucion acuosa, en donde el reactivo es un elemento de un protocolo bioqmmico predeterminado.
10. El cartucho de acuerdo con la clausula 9, en donde todos los reactivos necesarios para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado estan contenidos por separado en los numerosos orificios ciegos que no son el primer orificio ciego.
11. El cartucho de acuerdo con la clausula 10, en donde el protocolo biologico predeterminado es la amplificacion de acidos nucleicos por PCR.
12. Una placa multipocillo que consiste en numerosos cartuchos, en donde cada cartucho esta de acuerdo con cualquiera de las clausulas 1 a 11, en donde la placa esta mtegramente formada por los numerosos cartuchos, en donde los cartuchos estan dispuestos en la placa de tal forma que cada serie de orificios ciegos colineales es paralela a las otras.
13. Un sistema que comprende:
un cartucho de acuerdo con la clausula 9;
un receptor de cartuchos dimensionado y conformado para acoplarse al cartucho;
un sistema de manipulacion de lfquidos capaz de perforar la pelfcula perforable que cierra cualquiera de los numerosos orificios ciegos mediante la insercion de un conducto de lfquido en cualquiera de los orificios ciegos cuando el cartucho se ha acoplado al receptor de cartuchos; y
un controlador conectado operativamente al sistema de manipulacion de lfquidos, en donde el controlador esta programado para hacer que el sistema de manipulacion de lfquidos:
forme una celdilla con lfquido compuesto en uno de los orificios ciegos; y
opere tras la celdilla con lfquido compuesto y los reactivos para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado.
14. El sistema de acuerdo con la clausula 13, que comprende ademas un termociclador.
15. El sistema de acuerdo con la clausula 13, que comprende ademas una unidad de enfriamiento.
16. El sistema de acuerdo con la clausula 13, que comprende ademas un modulo de excitacion y deteccion de la fluorescencia optica.
17. El sistema de acuerdo con la clausula 13, en donde el conducto de lfquido comprende un tubo capilar.
18. El sistema de acuerdo con la clausula 13, en donde el conducto de lfquido comprende un modulo de separacion por magnetismo.
19. Un metodo para llevar a cabo un protocolo bioqmmico que comprende:
proporcionar un sistema de acuerdo con la clausula 13;
depositar una muestra biologica en el primer orificio ciego;
introducir el cartucho en el receptor de cartuchos;
activar el controlador de tal modo que el controlador haga que el sistema de manipulacion de lfquidos:
forme una celdilla con lfquido compuesto que contiene una solucion acuosa de la muestra biologica; y
opere tras la celdilla con lfquido compuesto y los reactivos para llevar a cabo el protocolo biologico predeterminado en la muestra biologica.
20. El metodo de acuerdo con la clausula 19, en donde el protocolo biologico predeterminado esta disenado para llevar a cabo uno de (a) preparacion de la coleccion de secuencias, (b) secuenciacion de acidos nucleicos, (c) PCR, (d) PCR digital y (e) qpCR.
21. Un sistema que comprende un conducto, una bomba, un primer lfquido, un segundo lfquido y una muestra, en donde:
se distinguen en el conducto una abertura superior y una abertura inferior, y el conducto incluye una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, la muestra y el segundo lfquido estan dispuestos dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra son sustancial y mutuamente inmiscibles;
el primer lfquido es menos denso que la muestra y la muestra es menos densa que el segundo lfquido;
la muestra esta dispuesta entre el primer lfquido y el segundo lfquido de tal manera que todo el area de la superficie de la muestra esta en contacto fluido solo con el primer lfquido, el segundo lfquido o la superficie interna del conducto; y
la bomba esta configurada para aplicar presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa a una localizacion del conducto.
22. El sistema de acuerdo con la clausula 21, en donde el sistema comprende ademas un medio para sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura inferior del conducto.
23. El sistema de acuerdo con la clausula 21 o 22, en donde el sistema comprende ademas un medio para sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura superior del conducto.
24. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 23, en donde la muestra esta en una solucion acuosa.
25. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 24, en donde la muestra comprende un reactivo. 26. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 25, en donde la muestra comprende una biomolecula.
27. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 25, en donde la muestra comprende una celula, un acido nucleico, una protema, una enzima, sangre, saliva o un material organico.
28. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 27, en donde el primer lfquido es inmiscible con el segundo lfquido.
29. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 28, en donde el primer lfquido es inmiscible con la muestra.
30. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 29, en donde el segundo lfquido es inmiscible con la muestra.
31. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 30, en donde el primer lfquido o el segundo lfquido es un aceite.
32. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 30, en donde el primer lfquido es un aceite.
33. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 30, en donde el segundo lfquido es un aceite.
34. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 30, en donde el primer lfquido o el segundo lfquido es un aceite de silicona, un aceite de perfluorocarburo o un aceite de perfluoropolieter.
35. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 34, en donde la densidad del segundo lfquido es de aproximadamente 1300 a aproximadamente 2000 kg/m3.
36. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 35, en donde la densidad del primer lfquido es de aproximadamente 700 a aproximadamente 990 kg/m3.
37. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 36, en donde la densidad de la muestra es de aproximadamente 900 a aproximadamente 1200 kg/m3.
38. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 37, en donde el segundo lfquido es un aceite de fluorocarburo con una densidad de aproximadamente 1900 kg/m3.
39. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 38, en donde el primer lfquido es fenilmetilpolisiloxano.
40. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 39, en donde la muestra es una solucion con base acuosa de reactivos de PCR con una densidad de aproximadamente 1000 kg/m3.
41. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 37, en donde el segundo lfquido es un aceite de amina perfluorada.
42. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 38, en donde el primer lfquido es una solucion de aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y un aditivo de polisorbato.
43. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 37, en donde la muestra es una suspension de partfculas solidas en medio acuoso, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y el segundo ifquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
44. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 37, en donde la muestra es un medio acuoso en aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano, el primer lfquido es un aceite con una base de fenilmetilpolisiloxano y el segundo lfquido es un aceite con una base de fluorocarburo.
45. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 44, en donde el conducto esta orientado sustancial en vertical.
46. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 44, en donde el conducto esta orientado en vertical.
47. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 46, en donde el conducto es un tubo capilar.
48. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 46, en donde el conducto esta en forma de un cono truncado.
49. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 46, en donde el conducto esta en forma de un cono truncado; y la abertura superior del conducto tiene un diametro interno que es mayor que el diametro interno de la abertura inferior del conducto.
50. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 46, en donde el conducto es una punta de pipeta. 51. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 50, en donde el conducto esta hecho de un polfmero, ceramica o metal.
52. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 51, en donde el conducto comprende una superficie hidrofoba.
53. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 50, en donde el conducto es un tubo capilar de polfmero, tal como un tubo capilar de politetrafluoroetileno (PTFE).
54. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 53, en donde el conducto es desechable.
55. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 53, en donde el conducto es reutilizable.
56. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba es una bomba de vado. 57. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba es una perilla para pipeta.
58. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba es un medio para aplicar presion positiva.
59. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba es un medio para aplicar presion negativa.
60. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba esta conectada operativamente a la abertura superior del conducto.
61. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 55, en donde la bomba esta conectada operativamente a la parte inferior del conducto.
62. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 61, en donde el sistema ademas comprende un controlador.
63. El sistema de acuerdo con la clausula 62, en donde el controlador esta conectado operativamente a la bomba. 64. El sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 63, en donde numerosos conductos estan ensamblados unos con otros en una placa.
65. Un metodo para dispensar la muestra desde el sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 64, que comprende la etapa de
dispensar el segundo lfquido desde el conducto a traves de la abertura inferior; y
dispensar un volumen de la muestra desde el conducto a traves de la abertura inferior.
66. El metodo de acuerdo con la clausula 65, que comprende ademas la etapa de dispensar el primer lfquido desde el conducto.
67. El metodo de acuerdo con la clausula 65 o 66, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion negativa al conducto mediante la bomba.
68. El metodo de acuerdo con la clausula 65 o 66, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion positiva al conducto mediante la bomba.
69. El metodo de acuerdo con la clausula 65 o 66, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion negativa a la abertura inferior del conducto mediante la bomba.
70. El metodo de acuerdo con la clausula 65 o 66, en donde el primer lfquido, la muestra o el segundo lfquido se dispensa desde el conducto por la aplicacion de presion positiva a la abertura superior del conducto mediante la bomba.
71. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 45 a 70, que comprende ademas la etapa de recargar el segundo lfquido en el conducto.
72. El metodo de acuerdo con la clausula 71, en donde el segundo Kquido se recarga en el conducto a traves de la abertura inferior.
73. El metodo de acuerdo con la clausula 71, en donde el segundo lfquido se recarga en el conducto por la aplicacion de presion negativa a la abertura superior del conducto mediante la bomba.
74. El metodo de acuerdo con la clausula 71, en donde el segundo lfquido se recarga en el conducto por la aplicacion de presion positiva a la abertura inferior del conducto mediante la bomba.
75. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 65 a 74, en donde el volumen de la muestra dispensada desde el conducto es de aproximadamente 10 nl a aproximadamente 20 pl.
76. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 65 a 75, en donde el volumen de la muestra dispensada desde el conducto es un volumen predeterminado.
77. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 65 a 76, en donde las etapas estan automatizadas.
78. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 65 a 76, en donde las etapas estan automatizadas y controladas por el controlador.
79. Un metodo para almacenar una muestra en un sistema, en donde el metodo comprende:
suministrar un conducto, una bomba, un primer lfquido, un segundo lfquido y una muestra, en donde
se distinguen en el conducto una abertura superior y una abertura inferior, y el conducto incluye una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra son sustancial y mutuamente inmiscibles;
el primer lfquido es menos denso que la muestra y la muestra es menos densa que el segundo lfquido; y la bomba esta configurada para aplicar presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa a una localizacion del conducto; y
cagar en el conducto, en cualquier orden, el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra, de tal manera que el primer lfquido, la muestra y el segundo lfquido estan dispuestos dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior, y la muestra esta dispuesta entre el primer lfquido y el segundo lfquido de tal manera que todo el area de la superficie esta en contacto fluido solo con el primer lfquido, el segundo lfquido o la superficie interna del conducto.
80. El metodo de acuerdo con la clausula 79, en donde el sistema es un sistema de acuerdo con cualquiera de las clausulas 21 a 64.
81. El metodo de acuerdo con la clausula 79 u 80, que comprende ademas la etapa de:
sellar temporalmente o cerrartemporalmente la abertura inferior del conducto antes de cargaren el conducto el primer lfquido, el segundo lfquido o la muestra.
82. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 81, que comprende ademas la etapa de:
sellar temporalmente o cerrar temporalmente la abertura superior del conducto antes de cargar en el conducto el primer lfquido, el segundo lfquido o la muestra.
83. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 82, en donde el primer lfquido se carga en el conducto antes que la muestra o el segundo lfquido.
84. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 82, en donde la muestra se carga en el conducto antes que el primer lfquido o el segundo lfquido.
85. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 82, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto antes que el primer lfquido o la muestra.
86. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 85, en donde el primer lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura superior del conducto.
87. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 85, en donde el primer lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
88. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 87, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura superior del conducto.
89. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 87, en donde el segundo lfquido se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
90. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 89, en donde la muestra se carga en el conducto a traves la abertura superior del conducto.
91. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 89, en donde la muestra se carga en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto.
92. El metodo de acuerdo con cualquiera de las clausulas 79 a 85, en donde la etapa de cargar el primer lfquido, el segundo lfquido o la muestra en el conducto a traves de la abertura inferior del conducto comprende la aplicacion de presion negativa a la abertura superior del conducto.
Aplicaciones
Procesamiento de las celdillas con lfquido compuesto
En una realizacion, la muestra se dispensa en una celdilla con lfquidos inmiscibles colocada sobre una superficie libre de un lfquido mutuamente inmiscible. La celdilla con lfquido compuesto resultante se puede transportar y/o se puede fusionar y/o se puede mezclar y/o realizar en ella un procesamiento bioqmmico.
En una realizacion, la muestra se dispensa en una celdilla con lfquidos inmiscibles colocada sobre una superficie libre de un lfquido mutuamente inmiscible con una caractenstica de estabilizacion mecanica.
En una realizacion, tras la dispensacion desde el conducto sobre una superficie libre, el segundo lfquido, la muestra y el primer lfquido generan una celdilla con lfquido compuesto.
En una realizacion, la muestra tiene perlas paramagneticas y tampon.
En una realizacion, la muestra contiene un tampon.
Los ejemplos de sistemas de celdillas con lfquido compuesto a los cuales los presentes sistemas y metodos se pueden adaptar se describen, por ejemplo, en la patente internacional en el marco PCT/IE2011/000040.
Secuenciacion
Muchas plataformas de secuenciacion de nueva generacion (NGS, por su nombre en ingles) requieren colecciones de ADN hechas de fragmentos de ADN dentro de un margen espedfico de longitudes de pares de bases. Ademas, estos fragmentos de ADN necesitan estar etiquetados con secuencias nucleotidicas espedficas (adaptadores) para permitir que las secuencias se amplifiquen por PCR y para permitir que los fragmentos de las colecciones se hibriden con la cubeta de lectura del secuenciador. Tambien se pueden anadir indices espedficos de secuencia a los fragmentos de ADN para identificar cada una de las muestras cuando se multiplexa la muestra dentro de una unica cubeta de lectura. La fragmentacion con etiquetado del ADN (el ADN se fragmenta y entonces se etiqueta con adaptadores) y la adicion de los adaptadores e indices habituales se consigue en dos reacciones biologicas por separado. Despues de estas reacciones, se limpia la coleccion de ADN para retirar el exceso de nucleotidos, enzimas, cebadores, sales y otros contaminantes. Por consiguiente, es complejo y muy laborioso el flujo de trabajo necesario para la fragmentacion con etiquetado del ADN, la purificacion de los fragmentos de ADN etiquetados, la adicion de los adaptadores e indices habituales, y la purificacion de la coleccion final producida. En una realizacion, los sistemas y los metodos arriba mencionados se pueden utilizar para automatizar la secuenciacion genetica.
Revestimiento de perlas para la secuenciacion genetica
La preparacion de perlas para la secuenciacion genetica es un procedimiento por el cual se revisten las perlas pequenas con una qmmica espedfica de la aplicacion. En una realizacion, el revestimiento de las perlas antes del cribado genetico se consigue mediante los sistemas y los metodos de la invencion.
Estos metodos dan a conocer una manera comoda de manipular y combinar volumenes de lfquido por debajo del orden de microlitros que en la actualidad no se puede lograr con el uso de las tecnicas convencionales, con lo que se reduce el volumen de la muestra inicial y se mejora la eficacia del revestimiento de las perlas al reducir el volumen de la reaccion. El procesamiento posterior por PCR y termociclador y secuenciacion genetica es espedfico de la aplicacion.
El uso de esta tecnologfa simplifica enormemente el procedimiento de recogida de estos volumenes deseados relativamente pequenos. El sistema facilita la retirada del volumen al 100% ya que la muestra biologica en procesamiento no incurre en ninguna perdida por pipeteo. Estas caractensticas hacen que la automatizacion del procedimiento bioqmmico sea mas facil de simplificar.
Seleccion portamano de las colecciones de ADN para la secuenciacion detipo NGS
Cada uno de los secuenciadores de nueva generacion tiene una longitud de lectura (en pares de bases) optima. Durante la construccion de la coleccion, el ADN se fragmenta en moleculas de ADN con un amplio abanico de longitudes en pares de bases. La seleccion portamanos se realiza en la actualidad con perlas paramagneticas en una placa de microtitulacion y es muy laborioso y adolece de ineficacias debido a errores de pipeteo y a que el usuario introduce variaciones en el protocolo. Los sistemas y los metodos de la invencion se pueden utilizar para la seleccion del tamano de las colecciones de ADN.
Purificacion del acido nucleico
Los sistemas y los metodos de la invencion se pueden utilizar para la purificacion y/o aislamiento de muestras antes y/o despues de la PCR.
Genotipado
Los sistemas y los metodos de la invencion se pueden utilizar para el almacenamiento y la dispensacion de los reactivos o las muestras para el genotipado.
Cribado de compuestos
Los sistemas y los metodos de la invencion se pueden utilizar para el almacenamiento y la dispensacion de los reactivos o las muestras para el cribado de los compuestos farmacologicos.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones concretas, pero no se debe considerar que limitan el alcance del tema en cuestion que se describe.
Ejemplo 1
Una serie de camaras o pocillos, por ejemplo, de 1 a 384 camaras, se llenan con dos aceites inmiscibles de tal manera que un aceite se asienta en la parte superior del otro (vease la figura 1). En cada camara se distingue una abertura en la parte inferior. Las camaras se pueden ordenar en una placa de almacenamiento. El reactivo se anade a las camaras y descansa en la interfase entre los dos aceites, y forma lo que en algunos casos sera una celdilla con lfquido compuesto, o CLC (las celdillas con lfquido compuesto se describen en detalle en la patente de los EE. UU. n.° 8,465,707. De este modo, el reactivo se puede almacenar a temperatura ambiente durante largos periodos de tiempo sin que el reactivo se degrade con la congelacion y/o la descongelacion. Allf donde se necesite, el aceite inferior, el aceite B, se retira por presurizacion positiva de la camara que esta encima del aceite A y se obliga al aceite inferior a que salga por la parte inferior de la camara. A continuacion, el reactivo baja hasta la abertura y esta listo para ser dispensado (vease la figura 2). Con el uso del metodo de dispensacion por presion, se pueden crear gotitas y se pueden dispensar directamente desde la placa de almacenamiento en paralelo desde las numerosas camaras de la placa de almacenamiento. Las gotitas se pueden dispensar en otra CLC, placa de pocillos o cualquier camara o lfquido segun sea necesario. Una vez que se ha acabado la dispensacion, se puede devolver al almacenamiento al extraer una alfcuota del aceite B y suspender de nuevo el reactivo como una gotita entre el aceite B y el aceite A. No hay problemas con la contaminacion, ya que durante todo el procedimiento se utiliza es el mismo reactivo y, por lo tanto, se puede repetir cualquier numero de veces hasta que se agote el reactivo. La placa se puede cargar en cualquier momento, se puede descartar, o se puede limpiary reutilizar.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un cartucho (1) de un solo uso, en donde:
en el cartucho (1) se distinguen numerosos orificios ciegos (2), en donde en cada orificio ciego se distingue una abertura, en donde al menos uno de los numerosos orificios ciegos (2) contiene dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4), los cuales son inmiscibles con agua, en donde uno de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4) tiene una gravedad espedfica mayor que la del agua y el otro de los dos lfquidos mutuamente inmiscibles tiene una gravedad espedfica menor que la del agua.
2. El cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 1, que ademas comprende un cierre protector que (8) cubre la abertura definida por los numerosos orificios ciegos (2), con lo que se hace que el interior de los orificios ciegos (2) sean estancos para los dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4), preferiblemente en donde un primer orificio ciego (2) esta sellado hermeticamente con una porcion del cierre protector (8) adaptado para ser desgarrado con la mano de un usuario humano, con lo que se expone la abertura del primer orificio ciego (2).
3. El cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde al menos una porcion del cierre protector (8) es una pelfcula perforable que cierra la abertura definida por al menos un orificio ciego (2).
4. El cartucho (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, con uno o varios de lo siguiente: - en donde los muchos orificios ciegos (2) son colineales,
- en donde todos los orificios ciegos (2) contienen al menos los mismos dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4), - al menos un orificio ciego contiene solo los dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4),
- en donde un primer orificio ciego contiene solo los dos lfquidos mutuamente inmiscibles (3, 4).
5. El cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 4, en donde al menos uno de los muchos orificios ciegos (2) que no son el primer orificio ciego contiene un reactivo que esta en una solucion acuosa, en donde el reactivo es un elemento de un protocolo bioqmmico predeterminado.
6. El cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde todos los reactivos necesarios para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado estan contenidos por separado en los numerosos orificios ciegos (2) que no son el primer orificio ciego (2).
7. El cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 6, en donde el protocolo biologico predeterminado es la amplificacion de acidos nucleicos por PCR.
8. Una placa multipocillo (6), que consiste en numerosos cartuchos (1), en donde cada cartucho (1) esta de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la placa (6) esta formada mtegramente por los numerosos cartuchos (1), en donde los cartuchos (1) estan ordenados en la placa (6) detal manera que cada uno de los numerosos orificios ciegos colineales (2) esta paralelo a los otros.
9. Un sistema que comprende:
un cartucho (1) de acuerdo con la reivindicacion 5,
un receptor de cartuchos dimensionado y conformado para acoplarse con el cartucho (1);
un sistema de manipulacion de lfquidos capaz de perforar la pelfcula perforable que cierra cualquiera de los numerosos orificios ciegos (2) mediante la insercion de un conducto de lfquido en cualquiera de los orificios ciegos (2) cuando el cartucho (1) se ha acoplado con el receptor de cartuchos; y
un controlador conectado operativamente al sistema de manipulacion de lfquidos, en donde el controlador esta programado para hacer que el sistema de manipulacion de lfquidos:
forme una celdilla con lfquido compuesto en uno de los orificios ciegos (2); y
funcionetras la celdilla con lfquido compuesto y los reactivos para llevar a cabo el protocolo bioqmmico predeterminado.
10. El sistema de acuerdo con la reivindicacion 9, que ademas comprende uno de lo siguiente:
- un termociclador,
- una unidad de enfriamiento,
- un modulo de excitacion y deteccion de la fluorescencia optica,
- en donde el conducto de Ifquido comprende un tubo capilar,
- en donde el conducto de Ifquido comprende un modulo de separacion magnetica.
11. Un metodo para llevar a cabo un protocolo bioqmmico que comprende:
el suministro de un sistema de acuerdo con la reivindicacion 9,
el deposito de una muestra biologica en el primer orificio ciego;
la insercion del cartucho (1) en el receptor de cartuchos;
la activacion del controlador para que el controlador haga que el sistema de manipulacion de lfquidos:
forme una celdilla con lfquido compuesto que contiene una solucion acuosa de la muestra biologica; y
funcione tras la celdilla con lfquido compuesto y los reactivos a fin de llevar a cabo el protocolo biologico predeterminado sobre la muestra biologica.
12. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 11, en donde el protocolo biologico predeterminado se disena para llevar a cabo uno de (a) preparacion de la coleccion de ADN, (b) secuenciacion de acidos nucleicos, (c) PCR, (d) PCR digital, y (e) qPCR.
13. Un sistema que comprende un conducto, una bomba, un primer lfquido, un segundo lfquido y una muestra, en donde:
se distingue en el conducto una abertura superior y una abertura inferior, y el conducto incluye una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, la muestra y el segundo lfquido estan dispuestos dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra son mutuamente inmiscibles;
el primer lfquido es menos denso que la muestra y la muestra es menos densa que el segundo lfquido;
la muestra esta dispuesta entre el primer lfquido y el segundo lfquido de tal manera que todo el area de la superficie de la muestra esta en contacto fluido solo con el primer lfquido, el segundo lfquido, o la superficie interna del conducto; la bomba esta configurada para aplicar presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa en una posicion del conducto, y
un cartucho de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 anteriores.
14. Un metodo para dispensar la muestra desde el sistema de acuerdo con la reivindicacion 13, que comprende la etapa de
la dispensacion del segundo lfquido desde el conducto a traves de la abertura inferior; y
la dispensacion de un volumen de la muestra desde el conducto a traves de la abertura inferior.
15. Un metodo para almacenar una muestra en un sistema, en donde el metodo comprende:
suministrar un cartucho (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1 a 7, un conducto, una bomba, un primer lfquido, un segundo lfquido y una muestra, en donde
se distingue en el cartucho (1) una abertura superior y una abertura inferior, y el cartucho incluye una superficie interna dispuesta entre la abertura superior y la abertura inferior;
el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra son mutuamente inmiscibles; el primer lfquido es menos denso que la muestra y la muestra es menos densa que el segundo lfquido; y
la bomba esta configurada para aplicar presion positiva, presion negativa o ninguna presion externa en una posicion del conducto; y
cargar en el conducto, en cualquier orden, el primer lfquido, el segundo lfquido y la muestra, de tal forma que el primer lfquido, la muestra y el segundo lfquido estan dispuestos dentro del conducto entre la abertura superior y la abertura inferior y la muestra esta dispuesta entre el primer lfquido y el segundo lfquido, de tal forma que todo el area de la superficie de la muestra esta en contacto fluido solo con el primer lfquido, el segundo lfquido o la superficie interna del conducto.
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