ES2719692T3

ES2719692T3 - Método para la obtención de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos a partir de fases lipoides

Info

Publication number: ES2719692T3
Application number: ES15726612T
Authority: ES
Inventors: Ulrich Dietz; Steffen Hruschka
Original assignee: Nanoscience For Life & Co KG GmbH; GEA Westfalia Separator Group GmbH
Current assignee: Nanoscience For Life & Co KG GmbH; GEA Westfalia Separator Group GmbH
Priority date: 2014-06-04
Filing date: 2015-06-03
Publication date: 2019-07-12
Anticipated expiration: 2035-06-03
Also published as: TR201904856T4; ZA201700028B; CA2949907A1; DE102014210662A1; BR112016028484A2; US10239906B2; RU2016151685A; CN106459119B; WO2015185675A1; AR100741A1; AU2015270482A1; US20170121360A1; EP3152219B1; EP3152219A1; CN106459119A; RU2016151685A3; DK3152219T3; PL3152219T3; HUE042430T2

Abstract

Un procedimiento para la separación con hidrólisis limitada de glucoglicerolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de: A1) suministro de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO3 2-), hidrógeno-carbonato (HCO3-), metasilicato (SiO3 2-), ortosilicato (SiO4 4-), disilicato (Si2O5 2-), trisilicato (Si3O7 2-), acetato (CH3COO-), borato (BO3 3-) y/o tartrato (C4H4O6 2-), C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa, D1) y separación de la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y obtención de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos.

Description

DESCRIPCIÓN

Método para la obtención de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos a partir de fases lipoides

[0001] La presente invención se refiere a un dispositivo para separar glucoglicerolípidos y también glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos o glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos.

Antecedentes de la invención

[0002] Glucolípidos, glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y fosfolípidos son lípidos biogénicos, que existen como componentes de la membrana en casi todos los sistemas biológicos y como tales poseen propiedades anfifílicas, es decir, un grupo de cabeza hidrofílico y un grupo de cola hidrofóbico o lipoide. La existencia ubicuitaria de glucolípidos, glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y fosfolípidos prácticamente en todos los seres vivientes explica también que los extractos lipídicos obtenidos de estos seres vivientes (por ejemplo, aceites vegetales o aceites animales) contengan también inevitablemente glucolípidos y fosfolípidos.

Sus propiedades anfifílicas le otorgan a los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos un significado especial en la solubilización de moléculas hidrofílicas en fases lipídicas, como por ejemplo, aceites.

Los glucolípidos, glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y glicofosfolípidos, debido a sus propiedades anfifílicas son excelentes bioemulsionantes con un alto rendimiento de emulsión. Pero esto explica también por qué tales lípidos no se pueden separar, o sólo en una proporción reducida, con los procedimientos de extracción acuosos estándar. Pero los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, debido a su aptitud como bioemulsionantes y biotensioactivos, tienen un enorme potencial económico. En la aplicación práctica esto se refiere especialmente al uso como agentes de limpieza para eliminar residuos oleosos o grasosos. Los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos son adecuados también para la emulsificación de principios activos lipofílicos, tales como, por ejemplo, para formulaciones farmacéuticas o agentes fitosanitarios, ya que pueden lograr una mejor captación de estos principios activos por el organismo objetivo. Además existen pruebas de los efectos inmunomoduladores de diversos glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, que son parte integrante de las membranas celulares humanas. Además, a algunos glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos se les asignan también propiedades antibacterianas y fungicidas. Las propiedades emulsionantes de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos producen también una mejor interacción de los componentes lipofílicos e hidrofílicos en los productos de panadería.

[0003] Por otro lado, los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos, debido justamente a esta propiedad, tienen un enorme potencial económico como bioemulsionantes. En la aplicación práctica esto se refiere especialmente al uso como agentes de limpieza para eliminar residuos oleosos o grasosos.

[0004] Por consiguiente, la obtención de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos a partir de fracciones lipídicas biogénicas o aceites es económicamente de interés, porque tienen múltiples usos en la industria alimentaria y sobre todo en los productos de panadería y los dulces.

[0005] Si bien se puede partir de la base de que prácticamente en todas las fases lipoides, que se pueden obtener de materiales biogénicos, existen glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de tipos diferentes, en la literatura científica existen sólo muy pocas investigaciones al respecto. En especial no quedan muy claras las composiciones en las fases lipoides de este tipo así como los efectos de estos compuestos sobre la solubilización de otros compuestos, que también están disueltos allí.

[0006] Los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos, a pesar de su carácter anfifílico tienen una fuerte afinidad por las fracciones lipídicas debido a sus largos restos de ácidos grasos. Por eso la distribución en medios de extracción acuosos del estado de la técnica es sólo reducida. En cambio se lograron extracciones líquidas exitosamente con mezclas de solventes orgánicos. Aquí es decisivo el uso de alcoholes para lograr la separación con gran eficiencia. A escala de laboratorio se logra la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos mediante cromatografía con extracción subsiguiente de los glucolípidos adsorbidos con solvente. Tales procedimientos de adsorción, sin embargo, no son adecuados por motivos económicos y ecológicos para una escala industrial. La patente US6953849 describe la extracción de glucoglicerolípidos a partir de aceite de germen de arroz por medio de vapor de agua caliente. De esta manera, se escinden restos de azúcar, por medio de lo cual se pueden separar partes de estos compuestos con la fracción de vapor de agua. Es desventajoso aquí, por ejemplo, con un tratamiento de este tipo de aceites comestibles, que con las temperaturas de vapor aquí usadas y la duración de esta exposición al vapor pueden producirse en mayor cantidad ácidos grasos trans en el aceite comestible, por lo que los aceites comestibles obtenidos de este modo pueden ser dañinos para la salud. Además, se conocen en el estado de la técnica métodos enzimáticos para la eliminación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de las fases lipídicas. De esta manera, sin embargo se modifican los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos en su estructura, lo que limita fuertemente el aprovechamiento posterior de la fracción glicolipídica separada o la hace inútil para otras aplicaciones. Por consiguiente, no existe hasta ahora ningún procedimiento con el cual sea posible lograr una obtención continua y cuidadosa de grandes cantidades glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos biogénicos.

[0007] En las fases lipoides, las que como tales tienen que ser separadas de subproductos por medio de un ^{procedimiento de refinación, no es necesaria} per se ^{la separación de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, ya}que estos en general, como compuestos lipofílicos no polares no llevan a una limitación relevante de la calidad (color, olor, transparencia) de las fases lipoides refinadas en caso de que permanezcan, siempre que se trate de proporciones pequeñas. Es inconveniente, sin embargo, su fuerte capacidad de ligadura con agua, iones de metales y metales alcalinotérreos, cuya presencia en una fase lipoide refinada, por ejemplo, un aceite vegetal, no se desea. También es problemática una depleción de las sustancias arriba mencionadas con respecto a su fase lipoide, la que está fuertemente cargada con glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, con las técnicas convencionales.

[0008] De acuerdo con el estado de la técnica, las fases lipoides son sometidas en general a un así llamado ^{procedimiento de desgomado} (degumming) ^{con el objetivo de una refinación técnica, para trasferir los compuestos}hidratables a una fase acuosa o para producir una agregación a través de una saponificación de ácidos grasos, por medio de la cual los compuestos disueltos o agregados se pueden separar con procedimientos para la separación de fases. Por medio de estos procedimientos se separa la parte más grande de fosfolípidos hidratables y una parte de fosfolípidos no hidratables. Los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos son degradados de esta manera parcialmente por una hidrólisis y son retirados con la fracción fosfolipídica. En fases lipoides, que fueron purificadas de acuerdo con procedimientos de desgomado estándar, se puede lograr por medio de un mezclado intensivo de una fase acuosa, según el contenido de compuestos glicolipídicos, una emulsión, la que sólo permite parcialmente, o ya no permite, una separación de fases subsiguiente por medio de una fuerza centrífuga. Se pudo demostrar que una etapa de purificación siguiente bajo condiciones normales (temperatura ambiente y presión normal) ya sea con una lejía alcalina o un ácido (ácido cítrico o ácido fosfórico) aún después de un mezclado intensivo, no puede llevar a una eliminación relevante de otros glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, cuando se produce a continuación una nueva separación por medio de un separador.

[0009] De las propiedades conocidas de los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos se puede suponer de todos modos que se produce una ligadura de agua a los grupos OH de los restos de azúcar, por lo que también cantidades muy pequeñas de agua pueden ser ligadas sin formación de micelas. Mediante los mismos mecanismos se ligan iones de metales y de metales alcalinotérreos. Pero debe suponerse, que los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos con más y complejas unidades de azúcar pueden ligar más agua y iones metálicos y más complejos. Debe suponerse además que también los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en una fase lipoide tienden a formar estructuras micelares. En tanto el agua y los iones metálicos estén ligados a restos de azúcar se evita una separación de estas sustancias por un medio acuoso en gran parte porque los restos de ácidos grasos no polares largos dificultan una introducción de agua en estas estructuras y por las fuerzas electrostáticas alternadas con los grupos OH de los restos de azúcar evitan un “enjuague” de los iones. Esto aclara porqué según el estado de la técnica era necesario hasta ahora retirar la fracción de los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos por medio de hidrólisis química o enzimática o un procedimiento de destilación, por medio de lo cual se puede reducir entonces también el contenido de una fase lipoide de agua aún ligada así como de iones de metal o de metales alcalinotérreos a la medida necesaria. Por eso es tan sorprendente, que los compuestos de sal fuertemente hidrofílicos, los que en la forma de aplicación de acuerdo con la invención se presentan con una cubierta de agua, produzcan una hidrofilización de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, lo que posibilita una separación en un medio acuoso. Además se mostró en forma inesperada y sorprendente, que los galactosildiglicéridos separados eran compuestos, que debido a su equilibrio hidrofílico—lipofílico tenían una alta afinidad por el medio lipoide, en el cual se encontraban. Por ello, es muy probable que, mediante la incorporación de la sales disueltas de forma acuosa y la incorporación de agua realizada, se permite una reunión de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos como estructuras micelares, con lo cual se pueden separar por medio de una separación por gravedad de una fase lipoide. Sin embargo, esto no explica por completo el aumento considerable inesperado del rendimiento de extracción del procedimiento según la invención al usar una incorporación en el mezclador intensivo de los medios acuosos según la invención.

Los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, que fueron obtenidos a partir de fases lipoides por procesos extractivos, presentan en general estructuras y composiciones muy diferentes. Frecuentemente se encuentran unidas a otras estructuras a través de interacciones hidrofóbicas o hidrofílicas, para las cuales sirvieron como “solubilizantes” en la fase lipoide. Esto podría explicar por qué partes de la fracción de glucolípidos sólo se pueden separar por solventes orgánicos de estructuras a las cuales están unidos electrostáticamente o se realiza una separación de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos junto con las estructuras unidas electrostáticamente. De esta manera, también se podría aclarar por qué en algunas fases de extracción ricas en glucolípidos de acuerdo con la invención se pudo encontrar un gran número de compuestos aún no aclarados. Uno de estos compuestos no glucolípidos, que pueden ser separados de acuerdo con la invención, son, por ejemplo, ésteres de forbol.

[0010] De los aspectos antes mencionados, es tanto más sorprendente que con el mezclado intensivo de las soluciones salinas de acuerdo con la invención es posible separar las fracciones de glucolípidos contenidas en las fases lipoides ya con una sola etapa de extracción acuosa o en las fases lipoides que presentan un gran contenido de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, se pueden retirar estos con pocas etapas de extracción, en comparación con lo que sería el caso con una adición energéticamente reducida de las soluciones acuosas en las fases lipoides. Como otro efecto inesperado se mostró que la extracción de la fracción de glucolípidos da por resultado una reducción especialmente ventajosa de la capacidad de ligación de agua y electrólitos en la fase lipoide así tratada. Además, como un efecto especialmente ventajoso en las separaciones realizadas subsiguientemente de las fases lipoides con medios acuosos, no se forma prácticamente espuma. También se mostró sorprendentemente que soluciones acuosas de compuestos de guanidina o amidina, que se mezclan con una fase lipoide tratada de acuerdo con la invención se pueden separar de ésta mucho mejor por medio de una separación por centrifugación, cuando esto se realiza a continuación de una separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de acuerdo con la invención con un mezclado intensivo de las soluciones de sal.

[0011] En el estado de la técnica, se divulga, por ejemplo, en la WO 2012/109642 A1, la separación de lípidos de los aceites por medio de una solución de cloruro de sodio. Independientemente de las propiedades corrosivas indeseadas de las sales cloruro, como por ejemplo, cloruro de sodio, que ataca y corroe los dispositivos de procesamiento, los inventores pudieron demostrar, que sólo una elección especial de aniones, como se divulga aquí, se puede usar para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de acuerdo con la invención, y aniones como por ejemplo, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, nitrito, sulfato, fosfato y muchos otros, no pueden lograr el objeto de acuerdo con la invención.

El documento EP 2 735 605 A1 describe la separación de ramnolípidos por extracción por medio de un solvente orgánico. En este procedimiento, los ramnolípidos son transferidos de una fase acuosa a una fase orgánica y no se separan de una fase lipoide. Además no se usan sales para la separación.

[0012] Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar un dispositivo y un procedimiento para la separación de glucoglicerolípidos o glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, la cual contiene, entre otros, glucoglicerolípidos y acilglicéridos o que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos.

[0013] Este objeto se logra de acuerdo con la invención por la enseñanza técnica de las reivindicaciones independientes. Otras formas de realización ventajosas de la invención resultan de las reivindicaciones secundarias, de la descripción, las figuras y los ejemplos.

Descripción

[0014] Sorprendentemente se halló ahora que es posible, con soluciones acuosas, que contienen al menos una sal bien soluble en agua a 20 °C, la que en la disociación en agua forma iones carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-), y las que con el mezclado intensivo se pusieron en contacto con una fase lipoide, transferir los glucoglicerolípidos a un medio acuoso y mantener durante esto su integridad química y estructural. “Bien soluble en agua”, significa en este contexto preferentemente una solubilidad de al menos 30 g/L en agua a 20 °C. El mezclado de una solución con los compuestos arriba mencionados para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos pudo realizarse por medio de un dispositivo de agitación. Se mostró entonces que dependiendo de la duración de la agitación, sin calentamiento o con un reducido calentamiento de la suspensión o emulsión, se produce una separación de fases espontánea, donde en la fase acuosa se encuentran disueltas sustancias precipitadas. Mientras que después de la separación de una fase lipoide así tratada, mediante un nuevo mezclado con agitación de una solución acuosa con los compuestos arriba mencionados prácticamente no se pueden separar más las sustancias precipitadas, sorprendentemente por medio de un mezclado intensivo de las fases lipoides así pretratadas con soluciones de los compuestos arriba mencionados, se puede lograr una importante separación de las sustancias precipitadas en la fase acuosa. Con una repetición de una agitación intensiva de una solución con los compuestos arriba mencionados en la fase lipoide pretratada de esta manera no se pudieron separar prácticamente ningún no triglicérido. Cuando la fase lipoide así pretratada se mezcló nuevamente con agua intensivamente, no se formó una emulsión o sólo una emulsión muy reducida de las fases lipoides. Por consiguiente se pudo demostrar por primera vez que por medio de un mezclado intensivo de una solución acuosa de los compuestos arriba mencionados en fases lipoides, en las cuales ya se realizó una amplia extracción de fosfolípidos hidratables y ácidos grasos libres, se separaron cantidades significativas de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos que quedaron allí y se pueden separar por medio de procedimientos de centrifugación.

Además se demostró en forma completamente inesperada que en las fracciones acuosas que contienen glucoglicerolípidos obtenidas con un mezclado intensivo con sales, las cuales tienen una solubilidad en agua a 20 °C de preferentemente al menos 30 g/L y que en la disociación en agua forman iones carbonato (CO³²-), hidrógenocarbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-), no se produce una separación conjunta relevante de triacilglicéridos, como se observó en los análisis de cromatografía de capa delgada. Esto es tanto más sorprendente por cuanto con la fracción que contiene glucoglicerolípidos así separada, por medio de la adición de agua se puede preparar una emulsión estable no oleosa, la que presenta una capacidad de emulsificación muy grande en comparación con una fase de triacilglicéridos purificada. De esta manera se puede proporcionar por primera vez un procedimiento de separación acuosa, con el cual se puede lograr una separación casi completa de glucoglicerolípidos no hidrolizados de las fases lipoides.

[0015] La combinación de acuerdo con la invención de las fases acuosas con sales disueltas en las mismas con un mezclado intensivo, que provoca una separación de los glucoglicerolípidos, que están unidos electrostáticamente a otras estructuras, se puede lograr también por medio de un mezclado más reducido, pero que se realiza a temperatura más elevada de la fase lipoide. De esta manera se conduce sin embargo a una degradación hidrolítica rápida de los glucoglicerolípidos, lo que no se desea para la obtención y el aprovechamiento de esta fracción.

Mediante el uso del mezclado intensivo de acuerdo con la invención de las sales disueltas se pueden separar casi todos los glucoglicerolípidos que se encuentran en una fase lipoide, sin que para ello sea necesario un aumento de la temperatura de la fase lipoide. De esta manera, se logra la obtención de glucoglicerolípidos no modificados estructuralmente.

[0016] Como según la enseñanza técnica de esta invención, tiempos de contacto prolongados de los glucoglicerolípidos a separar con los medios acuosos favorecen una hidrólisis y por lo tanto deben esperarse mayores costos de procesamiento, la forma de realización especialmente preferida para la reunión de la fase acuosa y la fase lipoide, es el uso de un mezclador intensivo, que puede realizar en poco tiempo un mezclado intensivo. De la enseñanza técnica también se puede observar que en el marco de un mezclado intensivo como éste puede producirse una inclusión de aire o gases (por ejemplo, por procesos de segregación), lo que lleva entonces a una formación de emulsión muy estable, lo que evita en gran parte una separación de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, ya que no es posible una separación de fases de una emulsión que contiene aire/gas por centrifugación. Debe suponerse que los glucoglicerolípidos aportan también a la formación de interfases estables entre una fase gaseosa y una fase líquida, ya que no se puede observar, o sólo se observa en medida reducida, una formación de una emulsión de este tipo después de la separación de la fracción de glucolípidos. Para aprovechar entonces el efecto especialmente ventajoso que tiene un procedimiento de mezclado intensivo con las soluciones de sales acuosas de acuerdo con la invención sobre la capacidad de separación de los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos, sin tener que prescindir de una mezcla de glucolípidos que se puede aprovechar, en lo posible libre de hidrólisis, con un desarrollo del proceso al mismo tiempo económico, la presente solicitud está dirigida al uso de un dispositivo de separación, que garantice tanto durante el mezclado intensivo de las fases lipoides y las soluciones acuosas de acuerdo con la invención como también durante el procedimiento de separación de fases subsiguiente una exclusión de una introducción de aire o una formación de gases.

[0017] Por lo tanto, es especialmente ventajoso que el mezclado intensivo de acuerdo con la invención de las soluciones acuosas en una fase lipoide se realice excluyendo una inclusión de aire/gases.

Además, es especialmente ventajoso que un separador separe las mezclas de acuerdo con la invención compuestas por una fase lipoide y una solución acuosa de acuerdo con la invención, excluyendo una inclusión de aire/gas.

[0018] La presente invención se refiere a un dispositivo para la separación de glucoglicerolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, donde el dispositivo comprende un mezclador intensivo para el alojamiento de la fase lipoide, una cavidad con una tubería de alimentación al mezclador intensivo para el alojamiento de una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que tiene una solubilidad en agua a 20 °C de al menos 30 g/L y la que en la disociación en agua forma iones carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-) así como una centrífuga con una tubería de alimentación al mezclador intensivo.

[0019] La fase acuosa contiene también naturalmente cationes, de modo que la presente invención se refiere a un dispositivo para separar glucoglicerolípidos de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, en donde el dispositivo posee un mezclador intensivo para captar la fase lipoide, una cavidad para la alimentación en el mezclador intensivo para la captación de una fase acuosa que contiene cationes y aniones de al menos una sal, que en agua a 20 °C posee una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con la disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-), así como que comprende una centrífuga con alimentación en el mezclador intensivo.

[0020] Si la fase lipoide contuviera aparte de los glucoglicerolípidos también glucoesfingolípidos, entonces estos podrían ser separados junto con los glucoglicerolípidos de la fase lipoide, sin que se requiriera otro dispositivo para ello. En tal caso, la presente invención se refiere a un dispositivo para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y acilglicéridos, donde el dispositivo comprende un mezclador intensivo para el alojamiento de la fase lipoide, una cavidad con una tubería de alimentación al mezclador intensivo para el alojamiento de una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que tiene una solubilidad en agua a 20 °C de al menos 30 g/L y con una disociación en agua forma iones carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³- ) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-), así como una centrífuga con una tubería de alimentación al mezclador intensivo.

[0021] De modo correspondiente, la invención se refiere a un dispositivo para separar glucoglicerolípios y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y acilglicéridos, en donde el dispositivo comprende un mezclador intensivo para la captación de la fase lipoide, una cavidad con alimentación al mezclador intensivo para la captación de una fase acuosa que contiene cationes y aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con la asociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-), así como una centrífuga con alimentación al mezclador intensivo.

Mezcla y homogeneización

[0022] Como lo muestra la enseñanza técnica de esta solicitud, la eficiencia del procedimiento para la separación de glucoglicerolípidos de una fase lipoide también depende de cuán completamente se ha mezclado esta última con los compuestos disueltos en la fase acuosa. Como la provisión de las soluciones de sal acuosas de acuerdo con la invención puede ser suficiente ya con una relación equimolar con los glucoglicerolípidos, para extraer a estos últimos de la fase lipoide y para realizar el proceso de separación en forma técnicamente sencilla, es suficiente la adición de una cantidad reducida de agua que contiene los compuestos de acuerdo con la invención. Como los líquidos a mezclar presentan propiedades muy contrapuestas (hidrófilos - hidrófobos) para la preparación de interfases en lo posible grandes entre ambos líquidos se requiere un gran despliegue de energía. Según el estado de la técnica, se encuentran a disposición para ello diversas técnicas: procedimientos de mezclado dinámicos, que se basan en corrientes laminares o turbulentas de los componentes de la mezcla, o procedimientos estáticos, en los cuales se producen gradientes de presión/tensión locales, que llevan a una formación de interfases. De la literatura se conoce que el número crítico de Weber en las corrientes de extensión y de corte laminares y las corrientes de mezcla depende de la relación de viscosidad A entre la fase dispersa y la fase continua para gotas individuales. De aquí se sigue que en las fases lipoides comúnmente altamente viscosas no es adecuada una mezcla que se base en una corriente laminar. En las corrientes turbulentas el avance de la corriente se realiza en forma inconstante, aparentemente irregular, casual y caótica, por lo tanto no se puede predecir una resolución temporal y local. En base al modelo de Kolmogorov (1949) se desarrollaron diferentes modelos, para simular las interacciones de las interfases en las corrientes turbulentas en gotas individuales [Rodríguez-Rodríguez et al., 2006; Gordillo et al., 2006] y para describir colectivamente [Hinze, 1955; Davies, 1985; Vankova et al., 2007]. Los modelos se diferencian principalmente en los aparatos y sistemas de sustancias para los que se desarrollaron, y se asocian en la suposición sobre la corriente turbulenta. La variación del mecanismo de ruptura se alcanzó mediante el ajuste determinado de diferentes números de Reynolds, viscosidades de las fases, densidades de las fases, tensiones de las interfases y proporciones de las fases dispersas. Como con el modelo de Kolmogorov sólo se puede predecir qué gota ya no se puede romper, pero no cuán pequeñas son las gotas al romperse, sólo se puede calcular con este modelo un tamaño de partícula superior.

[0023] La cavitación se produce en líquidos por la formación de burbujas, las que luego colapsan. En general se diferencia entre los tres tipos de cavitación, cavitación por vapor (cavitación dura), cavitación por gas (cavitación blanda) y pseudocavitación [Riedel, 1973]. En la cavitación dura se forman las burbujas por la disminución de la presión estática bajo presión de vapor, por lo que el fluido se evapora parcialmente y se forman burbujas de vapor. En la cavitación blanda, por la disminución de la presión estática disminuye la solubilidad de los gases, de modo que estos forman burbujas. Cuando en un líquido se encuentran ya burbujas, la disminución de la presión lleva al crecimiento de estas burbujas, lo que se denomina pseudocavitación. Tan pronto aumenta nuevamente la presión sobre la presión de vapor, se produce una condensación instantánea del líquido y por lo tanto en el caso extremo, el colapso de las burbujas, lo que lleva a fuertes oscilaciones de presión. No se ha aclarado aún hasta ahora qué tensiones resultan de la cavitación y qué mecanismo lleva por lo tanto a la ruptura de las gotas. Por lo tanto se encuentran a disposición diversos métodos que posibilitan una inclusión de mezcla intensiva, pero para el mezclado de las fases fluidas de acuerdo con la invención no es posible ni un cálculo ni una suposición sobre la efectividad de tales procedimientos para la capacidad de extracción de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos disueltos y por lo tanto sólo se puede explicar empíricamente.

[0024] Los procedimientos que son adecuados para la generación de interfases entre dos fluidos pueden ser subdivididos en los cuatro grupos superiores de sistemas de rotor-estator, alta presión, ultrasonido y membrana [Schubert, 2005]. La variante más sencilla de un sistema de rotor-estator es el agitador en un recipiente. Otros desarrollos de los sistemas de rotor-estator son las máquinas de dispersión de corona dentada y molinos coloidales, que se caracterizan porque posibilitan solicitaciones claramente definidas. Una desventaja de los sistemas de rotorestator es que la energía es introducida frecuentemente en forma fuertemente no homogénea, lo que lleva a amplias distribuciones de tamaño de gotas o tiempos de proceso prolongados. Además frecuentemente sólo se pueden realizar aplicaciones de energía específicas muy bajas. Los homogeneizadores de alta presión son usados especialmente, cuando se requieren aplicaciones de energía específicas muy altas. Los homogeneizadores de alta presión están compuestos sustancialmente por una bomba de alta presión y una unidad de trituración. Como bombas de alta presión se usan comúnmente bombas de émbolo, las que generan una presión de homogeneización de entre 50 y 10.000 bar. La unidad de trituración puede estar compuesta por válvulas o diafragmas, a través de los cuales se presionan los fluidos sobre los que se aplica presión. Las tensiones así generadas entre los fluidos son responsables de una formación de gotas y una deformación y trituración de las gotas. Los efectos resultantes sobre estas propiedades son determinados por las propiedades de las sustancias de los fluidos (tales como viscosidades de las fases, formación de las interfases, actividad del material tensioactivo) así como del gradiente de presión y de la geometría del aparato de trituración. La deformación y la ruptura son determinadas generalmente por la relación de viscosidad A entre las fases dispersas y las fases continuas [Walstra, 1998; Kaufmann, 2002; Aguilar et al., 2004]. Especialmente para relaciones de viscosidad A más altas, la corriente de extensión en la entrada de la válvula es ventajosa, ya que las tensiones resultantes de la turbulencia y la cavitación actúan mejor en los filamentos y por lo tanto se pueden formar gotas finas con una aplicación de energía en lo posible reducida.

[0025] En las membranas y los sistemas microestructurados se usan generalmente fases fluidas premezcladas en las cuales se rompen las gotas por el paso a través de los poros, con lo cual se puede lograr una distribución de tamaño de gotas aún más estrecha que con los aparatos de homogeneización de alta presión, pero hasta ahora no se han logrado grandes corrientes de volumen a costos factibles.

[0026] Del estado de la técnica se conocen, por lo tanto, diversos procedimientos y dispositivos que posibilitan un mezclado intensivo de fluidos. Como el resultado de la mezcla depende de una gran cantidad de parámetros que influyen, no se puede predecir el resultado de la mezcla y los efectos ligados a ella sobre las interacciones químicas y físicas de los compuestos allí contenidos. Fue por lo tanto sorprendente que con una herramienta de dispersión de corona dentada se pudiera extraer una cantidad mucho mayor de glucoglicerolípidos de una fase lipoide que por medio de un sistema de rotor. Esta clara diferencia sólo se pudo lograr de todos modos por la exclusión de una formación de burbujas de aire/gas.

[0027] Por lo tanto, también es un objeto de esta invención, proporcionar un sistema de mezclado y separador, con el cual se pueda realizar, sin inclusión de aire/gas, un mezclado intensivo con hidrólisis limitada o libre de hidrólisis de las soluciones de sal acuosas con una fase lipoide. Como mezcladores intensivos adecuados se pueden mencionar sobre todo aquellos mezcladores intensivos que trabajan según el principio de homogeneización de alta presión o de rotor-estator.

[0028] La fase acuosa en la que se encuentran las sales o aniones arriba indicados en forma disuelta se encuentra alojada en una cavidad o un recipiente de almacenamiento que está unido con una tubería de alimentación con el mezclador intensivo, de modo que a través de esta tubería de alimentación se puede introducir una cantidad definida o un volumen definido de la fase acuosa en el mezclador intensivo.

[0029] En el mezclador intensivo se produce entonces un mezclado intensivo de la fase lipoide y la fase acuosa. El mezclado intensivo se produce a presión atmosférica y una temperatura en el rango de 10 °C a 90 °C, preferentemente 15 °C a 70 °C, con mayor preferencia, 20 °C a 60 °C y con mayor preferencia, aún 25 °C a 50 °C. Por lo tanto el mezclado y preferentemente el mezclado intensivo se realiza a una temperatura baja de preferentemente menos de 70 °C, con mayor preferencia, de menos de 65 °C, con mayor preferencia, aún de menos de 60 °C, con mayor preferencia, de menos 55 °C, con mayor preferencia, aún de menos de 50 °C, con mayor preferencia, todavía de menos de 45 °C. No se requiere gas protector, subpresión o sobrepresión o incluso exclusión de luz ni durante el mezclado ni durante el procesamiento subsiguiente. Las bajas temperaturas durante el mezclado como también en la separación subsiguiente, por ejemplo, por medio de centrifugación y el procesamiento subsiguiente hacen que no se produzca una hidrólisis. Por lo tanto la presente invención está dirigida también a un procedimiento libre de hidrólisis o al menos con hidrólisis limitada para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de la fase lipoide.

[0030] Por “libre de hidrólisis”, se entiende una hidrólisis de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en la fase lipoide de menos de 1,0 % en peso, preferentemente de menos de 0,5% en peso.

[0031] Por “con hidrólisis limitada”, se entiende una hidrólisis de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en la fase lipoide de menos de 10,0% en peso, preferentemente de menos de 5,0% en peso, con mayor preferencia, de menos de 3,0% en peso. Naturalmente esta separación cuidadosa de la fracción de acuerdo con la invención, que contiene los glucoglicerolípidos o los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos garantiza también que los otros componentes de la fase lipoide, como por ejemplo, los glucolípidos, fosfolípidos y triacilglicéridos, diacilglicéridos y monoacilglicéridos no sean hidrolizados.

[0032] Por lo tanto, se prefiere especialmente que todo el procedimiento de acuerdo con la invención, preferentemente incluyendo las etapas opcionales se realice a temperaturas en el rango de 10 °C a 90 °C, preferentemente 13 °C a 80 °C, preferentemente 15 °C a 70 °C, con mayor preferencia, 18 °C a 65 °C, con mayor preferencia, 20 °C a 60 °C, con mayor preferencia, 22 °C a 55 °C y en especial preferentemente 25 °C a 50 °C o 25 °C a 45 °C.

[0033] La fase lipoide y la fase acuosa, mezcladas intensivamente, son llevadas luego a una centrífuga y se separan en una fase acuosa rica en glucoglicerolípidos a separar y una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos. La fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos son separadas entonces una de otra. Por “mezclado intensivo”, se entiende un mezclado mecánico/físico con un mezclador intensivo o un mezclado de tal modo que la fase lipoide y la fase acuosa forman una emulsión o dispersión homogénea.

[0034] En una forma de realización preferida, la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos puede reunirse nuevamente con una fase acuosa, que contiene al menos un compuesto que presenta al menos un grupo amidino y/o al menos un grupo guanidino y se mezcla nuevamente, en caso de que la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos contenga ácidos grasos o ácidos carboxílicos, los cuales tienen que ser separados.

[0035] La fase acuosa que contiene al menos un compuesto, que presenta al menos un grupo amidino y/o al menos un grupo guanidino, es alimentada desde un recipiente de almacenamiento o una cavidad, que está unida con una tubería de alimentación. Después del mezclado se realiza nuevamente la transferencia de la mezcla a una centrífuga, donde la fase acuosa (es decir, la fase rica en ácidos grasos o rica en ácidos carboxílicos) es dividida y separada de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos (es decir, la fase pobre en ácidos grasos o pobre en ácidos carboxílicos), para obtener otra fase lipoide pobre en ácidos carboxílicos y pobre en glucoglicerolípidos.

[0036] El dispositivo (representado esquemáticamente) de acuerdo con la Fig. 3 presenta un recipiente de alojamiento 1 para el alojamiento de la fase acuosa o de la solución de sal de las sales descritas en la presente. Del recipiente de alojamiento 1 lleva una tubería de alimentación 2 (en la cual está conectada aquí una bomba 14) a un recipiente 3. Este recipiente 3 está diseñado preferentemente como recipiente buffer de presión constante. Para ello el recipiente 3 puede presentar un retorno de derrame 4 que sirve para que en caso de sobrepasarse un nivel de derrame, retorne el líquido del recipiente 2 al recipiente de alojamiento 1. El recipiente 3 presenta además una tubería de salida 5 (preferentemente en su extremo inferior), en la cual está conectada una válvula 6. Con la válvula 6 se puede controlar el caudal de volumen en la tubería de salida 5. La tubería de salida desemboca en un mezclador 7. Al mezclador 7 llega además una tubería de alimentación 8, en la cual puede estar conectada una bomba 13. Por la tubería de alimentación 8 puede conducirse otra fase, preferentemente la fase que contiene lipoides (lípidos) al mezclador 7.

El mezclador 7 presenta además una tubería de salida 9, que desemboca en una entrada de una centrífuga 10. En el mezclador 7 se mezclan las dos fases alimentadas.

En la centrífuga 10 se realiza una separación por centrifugación en dos fases de diferente densidad, las que por medio de dos salidas 11 y 12 salen de la centrífuga.

El mezclador 7 puede ser diseñado de diversas maneras. Así, se puede usar un mezclador estático o un mezclador dinámico. También son adecuadas formas especiales como un mezclador de alto corte o un nanorreactor.

También es posible utilizar la propia centrífuga como mezclador. En este caso la fase lipoide y la solución de sal (solución acuosa) son conducidas por tuberías de alimentación separadas a la centrífuga, donde se realiza -por ejemplo, en un distribuidor 15 del tambor de la centrífuga- el mezclado de las dos fases. Tales distribuidores son conocidos y sirven para el traspaso del producto alimentado al tambor giratorio.

Como centrífuga se usa preferentemente un separador con eje giratorio vertical que está diseñado para separar dos fases líquidas de densidad diferente.

[0037] El dispositivo también puede estar diseñado para ser operado bajo una presión p, que es mayor que la presión atmosférica. Preferentemente vale: 1 bar < p < 10 bar. La presión de salida en las salidas 11 y 12 debería ser mayor que la presión de entrada en la tubería de alimentación a la centrífuga. Debe evitarse preferentemente una entrada de aire en la alimentación, para evitar que en el mezclador y/o en el tambor de la centrífuga se forme una emulsión en una medida inconveniente.

Se pudo demostrar que con este dispositivo se puede evitar una formación de una emulsión, lo que tiene como consecuencia que por un lado la fracción separada que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos pueda separarse mejor, ya que se realiza una mejor separación de fases y por otro lado, el empobrecimiento de la fase lipoide es más completa que con un sistema de mezclado y separación, que no evita la exclusión de una inclusión de aire/gas de acuerdo con la invención. Para la realización de la obtención técnica de una fracción con hidrólisis limitada y especialmente pura de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de la fase lipoide es por lo tanto especialmente adecuado el dispositivo de acuerdo con la presente invención.

[0038] Estos dispositivos de acuerdo con la presente invención están ideados para la realización del procedimiento de acuerdo con la invención descrito a continuación.

Por ello, la presente invención también se refiere a un procedimiento para la separación con baja hidrólisis de glucoglicerolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

A1) suministro de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos,

B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que con disociación en agua forma carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiÜ³²-), ortosilicato (SiÜ⁴⁴-), disilicato (Si²Ü⁵²-), trisilicato (Si³Ü⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa,

D1) y separación de la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y obtención de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos.

[0039] La o las sales usadas están compuestas naturalmente no sólo por aniones, sino también por cationes, de modo que la presente invención también se refiere a un procedimiento para la separación con baja hidrólisis de glucoglicerolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene cationes y aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa,

[0040] Según la invención, en los procedimientos revelados en la presente, se llevan a cabo las etapas de procedimiento A1) a D1) también en la serie indicada A1) => B1) => C1) => D1) o, si se añaden etapas de procedimiento adicionales como, por ejemplo, las etapas A2), A2'), D2) y E1), el orden es como se indica en la presente y la etapa D2) sigue a la etapa D1), la etapa E1) sigue a la etapa D1) o si está presente la etapa D2), sigue la etapa E1) a la etapa D2) y la etapa A2) sigue a la etapa A1) o alternativamente a la etapa A2), puede seguir la etapa A2') a la etapa A1).

Así, resultan las siguientes secuencias de etapas posibles:

A1) => B1) => C1) => D1)

A1) => B1) => C1) => D1) => D2)

A1) => B1) => C1) => D1) => E1)

A1) => B1) => C1) => D1) => D2) => E1)

A1) => A2) => B1) => C1) => D1)

A1) => A2) => B1) => C1) => D1) => D2)

A1) => A2) => B1) => C1) => D1) => E1)

A1) => A2) => B1) => C1) => D1) => D2) => E1)

A1) => A2') => B1) => C1) => D1)

A1) => A2') => B1) => C1) => D1) => D2)

A1) => A2') => B1) => C1) => D1) => E1)

A1) => A2') => B1) => C1) => D1) => D2) => E1)

[0041] Si la fase lipoide, además de los glucoglicerolípidos, también contiene glucoesfingolípidos, entonces se pueden separar junto con los glucoglicerolípidos de la fase lipoide. En tal caso, el procedimiento según la invención se configura de la siguiente manera:

[0042] Procedimientos para la separación con baja hidrólisis de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

A1) suministro de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y acilglicéridos, B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiÜ³²-), ortosilicato (SiÜ⁴⁴-), disilicato (Si²Ü⁵²-), trisilicato (Si³Ü⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa,

D1) y separación de la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y/o glucoesfingoípidos y obtención de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y/o pobre en glucoesfingolípidos.

[0043] De modo correspondiente, la presente invención se refiere a un procedimiento para la separación con baja hidrólisis de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

A1) suministro de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y acilglicéridos, B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene cationes y aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa,

[0044] Como catión de la sal o como cationes de la mezcla de sales, se prefieren los siguientes: Na⁺, K⁺, Li⁺, Mg²⁺, Ca²⁺, Ti²⁺, Ti⁴⁺, Co²⁺, Co³⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Sn²⁺y/o Sn⁴⁺. En especial, se prefieren Na⁺y K⁺.

[0045] Como acilglicéridos se designan monoacilglicéridos, diacilglicéridos y triacilglicéridos. Como triacilglicéridos se designan compuestos, en los que tres radicales acilo (Ay, Ay', Ay'') están unidos a través de un enlace éster con glicerina. Una fórmula general para triacilglicéridos se muestra abajo. De modo correspondiente, en los diacilglicéridos hay ligados dos radicales acilo (Ay, Ay') a través de un enlace éster con glicerina y en los monoacilglicéridos, hay ligado un radical acilo (Ay) a través de un enlace éster con glicerina.

[0046] Por glucoglicerolípidos se entienden compuestos en los que dos radicales acilo (Ay, Ay') están unidos a través de un enlace éster con glicerina y en el tercer grupo hidroxi (o bien el tercer átomo de oxígeno) de la glicerina, está ligado un sacárido preferentemente a través del átomo de carbono anomérico. Una fórmula general para glucoglicerolípidos se muestra abajo.

[0047] Según la invención, los acilglicéridos no se convierten en la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y quedan en la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos. La expresión “fase rica en glucoglicerolípidos” se refiere así a la fracción de la fase lipoide usada, que está compuesta por glucoglicerolípidos o en donde los glucoglicerolípidos están enriquecidos. De modo correspondiente, la expresión “fase pobre en glucoglicerolípidos” se refiere a la fracción de la fase lipoide usada, en donde los glucoglicerolípidos se reducen o de la que se separaron los glucoglicerolípidos. Siempre que la fase lipoide usada también contenga glucoesfingolípidos además de los glucoglicerolípidos, la expresión “fase pobre en glucoglicerolípidos” designa correspondientemente la fracción de la fase lipoide usada, en donde los glucoesfingolípidos y los glucoglicerolípidos se redujeron o eliminaron y la expresión “fase rica en glucoglicerolípidos” designa así a la fracción de la fase lipoide usada, que está compuesta por glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos o en donde los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos están enriquecidos.

[0048] Los glucolípidos designan, por el contrario, sustancias en las que un radical acilo (Ay) está unido con un grupo hidroxi de un sacárido y preferentemente con el grupo hidroxi en el átomo de carbono anomérico del sacárido. Una fórmula general para glucolípidos y glucoglicerolípidos se muestra a continuación.

[0049] La designación “sacárido” representa un radical de azúcar, en donde en el caso del radical de azúcar se puede tratar de un monosacárido, oligosacárido o polisacárido. En el caso de los radicales acilo (Ay, Ay' y Ay'') se trata preferentemente de radicales de ácidos grasos. Los lípidos y radicales de ácidos grasos se tratan más abajo con mayor detalle.

[0050] Los glucoesfingolípidos están compuestos por un radical de sacárido, que está ligado con un radical de ceramida. La denominación “Alk” representa un radical alquilo y preferentemente un radical alquilo de cadena larga con más de 10 átomos de carbono. Si en el caso del radical de sacárido se trata de galactosa, entonces se designan estas monoglucosilceramidas como cerebrosidas. Un ejemplo se muestra a continuación:

[0051] A continuación, se muestran como ejemplo de un glucolípido un diglucosil—lípido y como ejemplo de un glucoglicerolípido, un monoglucosilglicerolípido.

[0052] Los procedimientos según la invención son particularmente apropiados para separar los glucoglicerolípidos o mezclas de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de las fases lipoides. Si las fases lipoides contienen además de los glucoglicerolípidos o además de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos otros glucolípidos y/o glucofosfolípidos, entonces se pueden separar sobre todo los glucolípidos, pero también los glucofosfolípidos y en especial los glucofosfolípidos neutros junto con los glucoglicerolípidos o los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de las fases lipoides. En especial, los procedimientos según la invención son apropiados para separar monoglucosilesfingolípidos, diglucosilesfingolípidos, triglucosilesfingolípidos, tetraglucosilesfingolípidos, pentaglucosilesfingolípidos, monoacilmonoglucosil-esfingolípidos, monoacildiglucosilesfingolípidos, monoaciltriglucosilesfingolípidos, monoaciltetraglucosilesfingolípidos, monoacilpentaglucosilesfingolípidos, diacildiglucosilesfingolípidos, diaciltriglucosilesfingolípidos, diaciltetraglucosilesfingolípidos, diacilpentaglucosilesfingolípidos, triaciltriglucosilesfingolípidos, triaciltetraglucosil-esfingolípidos, triacilpentaglucosilesfingolípidos, tetraaciltetraglucosilesfingolípidos, tetraacilpentaglucosilesfingolípidos, pentaacilpentaglucosilesfingolípidos, monoglucosilglicerolípidos, diglucosilglicerolípidos, triglucosilglicerolípidos, tetraglucosil-glicerolípidos, pentaglucosilglicerolípidos, hexaglucosilglicerolípidos, heptaglucosil-glicerolípidos, octaglucosilglicerolípidos, nonaglucosilglicerolípidos, decaglucosilglicero-lípidos, monoacildiglucosilglicerolípidos, monoaciltriglucosilglicerolípidos, mono-aciltetraglucosilglicerolípidos, monoacilpentaglucosilglicerolípidos, monoacilhexa-glucosilglicerolípidos, monoacilheptaglucosilglicerolípidos, monoaciloctaglucosil-glicerolípidos, monoacilnonaglucosilglicerolípidos, monoacildecaglucosilglicerolípidos, diaciltriglucosilglicerolípidos, diaciltetraglucosilglicerolípidos, diacilpentaglucosil-glicerolípidos, diacilhexaglucosilglicerolípidos, diacilheptaglucosilglicerolípidos, diaciloctaglucosilglicerolípidos, diacilnonaglucosilglicerolípidos, diacildecaglucosilglicerolípidos, triaciltetraglucosilglicerolípidos, triacilpentaglucosilglicerolípidos, triacilhexaglucosilglicerolípidos, triacilheptaglucosilglicerolípidos, triaciloctaglucosil-glicerolípidos, triacilnonaglucosilglicerolípidos, triacildecaglucosilglicerolípidos, tetraacilpentaglucosilglicerolípidos, tetraacilhexaglucosilglicerolípidos, tetraacilheptaglucosilglicerolípidos, tetraaciloctaglucosilglicerolípidos, tetraacilnona-glucosilglicerolípidos, tetraacildecaglucosilglicerolípidos, pentaacilhexaglucosil-glicerolípidos, pentaacilheptaglucosilglicerolípidos, pentaaciloctaglucosilglicerolípidos, pentaacilnonaglucosilglicerolípidos, pentaacildecaglucosilglicerolípidos, hexaacilheptaglucosilglicerolípidos, hexaaciloctaglucosilglicerolípidos, hexaacilnonaglucosil-glicerolípidos, hexaacildecaglucosilglicerolípidos, heptaaciloctaglucosilglicerolípidos, heptaacilnonaglucosilglicerolípidos, heptaacildecaglucosilglicerolípidos, octaacil-nonaglucosilglicerolípidos, octaacildecaglucosilglicerolípidos y/o nonaacildeca-glucosilglicerolípidos de la fase lipoide.

[0053] Era muy sorprendente que con los procedimientos según la invención se pudieran convertir los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos más bien lipoides en la fase acusa. En el caso de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos lipofílicos, se trata da compuestos que no se pueden convertir o sólo se pueden convertir mal por una extracción con agua o compuestos hidrófilicos en la fase acuosa. El término “mal” significa en este contexto que por etapa de extracción con agua sólo se pueden separar menos del 10% en peso de la cantidad total de glucoglicerolípidos o glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de la fase lipoide. Por ello, también se prefiere que los glucoglicerolípidos no contengan grupos carboxilato, sulfato, sulfonato o fosfato. Asimismo, se prefiere que los glucoesfingolípidos no contengan grupos carboxilato, sulfato, sulfonato o fosfato.

[0054] Así, la presente invención se refiere en especial a procedimientos para separar glucoglicerolípidos, en donde en el caso de los glucoglicerolípidos se trata de glucoglicerolípidos lipofílicos con un índice de lipofilicidad GL de 1,0 < GL < 6,0, en donde el índice de lipofilicidad GL se calcula según la siguiente fórmula:

[0055] Allí, la “suma de los átomos de carbono del radical acilo” significa la suma de todos los átomos de carbono de todos los radicales acilo. Dos radicales acilo (Ay y Ay’) se hallan en el radical glicerina y uno o varios otros radicales acilo se pueden hallar en los radicales de sacárido. Pero también es posible que en otro radical acilo se halle otro radical acilo. En el caso de los radicales acilo, también se cuenta el átomo de carbono del carbonilo.

La “suma de los grupos hidroxi y amino” significa todos los grupos hidroxi y los grupos amino en la molécula, incluyendo los grupos hidroxi y amino, que se hallan en un radical acilo. A modo de ejemplo, el siguiente diglucosilglicerolípido, en donde R es un radical alquilo con 16 átomos de carbono, posee un índice de lipofilicidad GL de 4,9.

[0056] Siempre que en la fase lipoide también estén presentes glucoesfingolípidos, la presente invención se refiere preferentemente a procedimientos para separar glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, en donde en el caso de los glucoesfingolípidos se trata de glucoesfingolípidos lipofílicos con un índice de lipofilicidad SL de 1,0 < SL < 7,0, en donde el índice de lipofilicidad SL se calcula según la siguiente fórmula:

[0057] Allí, la “suma de los átomos de carbono del radical ceramida” es la suma de todos los átomos de carbono en el radical ceramida, incluyendo los átomos de carbono del radical acilo en el radical ceramida. En caso de que estén ligados otros radicales acilo a los radicales sacáridos o a un radical acilo en el radical ceramida, los átomos de carbono de este radical acilo se añaden a la suma de los átomos de carbono del radical ceramida. En el caso de los radicales acilo, también se cuenta el átomo de carbono del carbonilo como también en el radical ceramida el átomo de carbono de amida. La “suma de los grupos hidroxi y amino y amida” implica todos los grupos hidroxi, grupos amino y grupos amida en la molécula, incluyendo los grupos hidroxi y amino, que se hallan en un radical acilo. Como grupo hidroxi se designa el grupo -OH, como grupo amino, el grupo -NH²y como grupo amida, el grupo -NH-CO-o el grupo -CO-NH-. A modo de ejemplo, el siguiente glucosfingolípido, en donde R es un radical alquenilo con 15 átomos de carbono, presenta un índice de lipofilicidad de 4,7.

[0058] Alternativamente al índice de lipofiMcidad, también se puede usar la escala de lipofiMcidad de HLB, que se muestra en la Figura 2 y dentro del rango de 0 a 20 en el rango inferior, se localizan las sustancias lipofílicas, en el rango superior, las sustancias hidrofílicas y en el rango alrededor de 10 las sustancias equianfifílicas (igualmente lipofílicas que hidrofílicas) y está pensada en especial para emulsionantes.

[0059] Como los procedimientos según la invención sirven para la separación de glucoglicerolípidos de fases lipoides, se prefiere que los procedimientos según la invención para la separación de glucoglicerolípidos según la etapa D1) comprendan la siguiente etapa D2):

D2) obtención de los glucoglicerolípidos de la fase acuosa separada.

[0060] Para el caso de que la fase lipoide contenga, además de los glucoglicerolípidos también glucoesfingolípidos, se prefiere que los procedimientos según la invención para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos según la etapa D1) comprendan la siguiente etapa D2):

D2) obtención de los glucoglicerolípidos y de los glucoesfingolípidos de la fase acuosa separada.

Para el caso de que la fase lipoide contenga además de los glucoglicerolípidos o además de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos también otros glucolípidos y/o glucofosfolípidos, se prefiere que los procedimientos según la invención para la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos según la etapa D1) también comprendan la siguiente etapa D2):

D2) obtención de los glucoglicerolípidos y glucolípidos y/o glucofosfolípidos u obtención de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y glucolípidos y/o glucofosfolípidos y de la fase acuosa separada.

En virtud de su múltiple idoneidad como biotensioactivos, es un objeto de la presente invención aislar de las fases lipoides glucoglicerolípidos o mezclas que contienen glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos, e incorporar otros usos. Según la composición y los componentes de la fase lipoide, que está compuesta en su parte preponderante (preferentemente > 80% en peso) de acilglicéridos y en especial de triacilglicéridos, se pueden separar de la fase lipoide fracciones que contienen glucofosfolípidos o fracciones que contienen glucoesfingolípidos o fracciones que contienen esterilglicósidos o fracciones que contienen glucofosfolípidos y glucoesfingolípidos o fracciones que contienen glucofosfolípidos y esterilglicósidos o fracciones que contienen glucoesfingolípidos y esterilglicósidos o fracciones que contienen glucofosfolípidos y esterilglicósidos y glucoesfingolípidos y los glucofosfolípidos, glucoesfingolípidos, esterilglicósidos o las mezclas de las sustancias previamente mencionadas se obtienen de estas fracciones. Así, la presente invención se refiere también a la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos, fases acuosas ricas en esterilglicósidos, así como la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos, asequible u obtenida de acuerdo con los procedimientos aquí revelados.

[0061] El término glucofosfolípidos designa un glicerofosfolípido, en donde al grupo fosfato está ligado un radical sacárido como, por ejemplo, en el caso del fosfatidilinositol.

[0062] En el caso de la nomenclatura previamente mencionada, por ejemplo, “monoaciltetraglucosilglicerolípidos” implica que un radical acilo se halla en uno de los 4 radicales sacáridos. En este caso, el radical acilo se halla preferentemente no en un radical sacárido, en el que está el radical diacilglicerina. En caso de que, entre los radicales sacáridos haya un aminoazúcar, el radical acilo también se puede hallar en el grupo amino del aminoazúcar. Así, la expresión “triacilhexaglucosilglicerolípidos” designa un hexasacárido, en donde en tres grupos hidroxi del hexasacárido se halla un radical acilo. En el caso de los radicales acilo, naturalmente se puede tratar de diferentes radicales acilo. No es necesario y, además, más bien la excepción de que se trata de radicales acilo iguales. También los radicales acilo en el radical glicerina mayormente no son idénticos y además, por lo general, son otros radicales acilo que los radicales acilo, que están ligados directamente con los radicales sacárido. En el ejemplo previamente mencionado, el glucoglicerolípido está compuesto por un radical diacilglicerina y un hexasacárido, en donde al hexasacárido están ligados otros tres radicales acilo. Aquí se prefiere que no haya más de un radical acilo por radical sacárido y que en el radical sacárido no se halle ningún radical acilo, al que está ligado el radical diacilglicerina. Si en el hexesacárido se hallan aminoazúcares, entonces al grupo amino del aminoazúcar puede estar ligado el radical acilo.

[0063] Además, bajo el término de glucoglicerolípidos también entran aquellos que llevan en el radical glicerina en vez de un radical acilo un radical alquilo, radical alquenilo o radical alquinilo y aquellos que, en el radical glicerina en vez de ambos radicales acilo, tienen dos radicales seleccionados del grupo compuesto por radical alquilo, radical alquenilo y radical alquinilo. Estos compuestos se pueden representar por medio de las siguientes fórmulas generales, en donde Alk y Alk' son cada uno, de modo independiente entre sí, un radical alquilo, radical alquenilo o radical alquinilo:

[0064] Así, la presente invención se refiere preferentemente a procedimientos para separar glucosildiacilglicerinas, glucosilacilalquilglicerinas y glucosildialquilglicerinas de una fase lipoide y con mayor preferencia, monoglucosilesfingolípidos, diglucosilesfingolípidos, triglucosilesfingolípidos, tetraglucosilesfingolípidos, pentaglucosilesfingolípidos, monoglucosilglicerolípidos, diglucosilglicerolípidos, triglucosilglicerolípidos, tetraglucosilglicerolípidos, pentaglucosilglicerolípidos, hexaglucosilglicerolípidos, heptaglucosilglicerolípidos, monoacildiglucosilglicerolípidos, monoaciltriglucosilglicerolípidos, monoaciltetraglucosilglicerolípidos, monoacilpentaglucosilglicerolípidos, monoacilhexaglucosilglicerolípidos y monoacilheptaglucosilglicerolípidos.

[0065] En el caso de los radicales acilo, se trata preferentemente de radicales acilo de ácidos grasos y en el caso de los radicales Alk, preferentemente de radicales alquilo, radicales alquenilo o radicales alquinilo de ácidos grasos. En este caso, la expresión “radical alquenilo” se refiere no sólo a radicales monoolefínicos, sino también a radicales di-, tri- y poliolefínicos, así como radicales carbonados con al menos un enlace doble y al menos un enlace triple. La expresión “radical alquinilo” comprende radicales carbonados con uno, dos, tres o más enlaces triples.

[0066] Los ejemplos de radicales acilo preferidos son:

dodecanoílo, hexadecanoílo, octadecanoílo, eicosanoílo, docosanoílo, tetracosanoílo, cis-9-tetradecenoílo, cis-9-hexadecenoílo, cis-6-octadecenoílo, cis-9-octadecenoílo, cis-11-octadecenoílo, cis-9-eicosenoílo, cis-11-eicosenoílo, cis-13-docosenoílo, cis-15-tetracosenoílo, 9,12-octadecadienoílo, 6,9,12-octadecatrienoílo, 8,11,14-eicosatrienoílo, 5,8,11,14-eicosatetraenoílo, 7,10,13,16-docosatetraenoílo, 4,7,10,13,16-docosapentaenoílo, 9,12,15-octadecatrienoílo, 6,9,12,15-octadecatetraenoílo, 8,11,14,17-eicosatetraenoílo, 5,8,11,14,17-eicosapentaenoílo, 7,10,13,16,19-docosapentaenoílo, 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoílo, 5,8,11-eicosatrienoílo, 1,2-ditiolan-3-pentanoílo, 6,8-ditianoctanoílo, docosaheptadecanoílo, eleostearoílo, calendoílo, catalpoílo, taxoleoílo, pinolenoílo, esciadonoílo, retinoílo, 14-metilpentadecanoílo, pristanoílo, fitanoílo, 11,12-metilenoctadecanoílo, 9,10-metilenhexadecanoílo, 9,10-epoxistearoílo, 9,10-epoxioctadec-12-enoílo, 6 -octadecinoílo, t11-octadecen-9-inoílo, 9-octadecinoílo, 6-octadecen-9-inoílo, t10-heptadecen-8-inoílo, 9-octadecen-12-inoílo, t7,t11-octadecadien-9-inoílo, t8,t10-octadecadien-12-inoílo, 5,8,11,14-eicosatetrainoílo, 2 -hidroxitetracosanoílo, 2-hidroxi-15-tetracosenoílo, 12-hidroxi-9-octadecenoil y 14-hidroxi-11-eicosenoílo.

[0067] Como radicales alquilo, radicales alquenilo o radicales alquinilo se prefieren en especial los radicales carbonados (es decir, sin el grupo COOH) de los siguientes ácidos: ácido hexanoico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido tetradecanoico, ácido hexadecanoico, ácido heptadecanoico, ácido octadecanoico, ácido eicosanoico, ácido docosanoico, ácido tetracosanoico, ácido cis-9-tetradecenoico, ácido cis-9-hexadecenoico, ácido cis-6-octadecenoico, ácido cis-9-octadecenoico, ácido cis-11-octadecenoico, ácido cis-9-eicosenoico, ácido cis-11-eicosenoico, ácido cis-13-docosenoico, ácido cis-15-tetracosenoico, ácido t9-octadecenoico, ácido t11-octadecenoico, ácido t3-hexadecenoico, ácido 9,12-octadecadienoico, ácido 6,9,12-octadecatrienoico, ácido 8,11,14-eicosatrienoico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraenoico, ácido 7,10,13,16-docosatetraenoico, ácido 4,7,10,13,16-docosapentaenoico, ácido 9,12,15-octadecatrienoico, ácido 6,9,12,15-octadecatetraenoico, ácido 8,11,14,17-eicosatetraenoico, ácido 5,8,11,14,17-eicosapentaenoico, ácido 7,10,13,16,19-docosapentaenoico, ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico, ácido 5,8,11-eicosatrienoico, ácido 9c11t13t-eleoesteárico, ácido 8t10t12c-calendulárico, ácido 9c11t13c-catalpínico, ácido 4,7,9,11,13,16,19-docosaheptadecanoico, ácido taxoleico, ácido pinolénico, ácido esciadónico, ácido 6-octadecínico, ácido t11-octadecen-9-ínico, ácido 9-octadecínico, ácido 6-octadecen-9-ínico, ácido t10-heptadecen-8-ínico, ácido 9-octadecen-12-ínico, ácido t7,t11-octadecadien-9-ínico, ácido t8,t10-octadecadien-12-ínico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraínico, ácido retinoico, ácido isopalmítico, ácido pristánico, ácido fitánico, ácido 11,12-metilenoctadecanoico, ácido 9,10-metilen-hexadecanoico, ácido coronárico, ácido (R,S)-lipoico, ácido (S)-lipónico, ácido (R)-lipónico, ácido 6,8(metilsulfanil)-octanoico, ácido 4,6-bis(metilsulfanil)-hexanoico, ácido 2,4-bis(metilsulfanil)-butanoico, ácido 1,2-ditiolan-carboxílico, ácido (R,S)-6,8-ditian-octanoico, ácido (S)-6,8-ditian-octanoico, ácido tarírico, ácido santálbico, ácido estearínico, ácido 6,9-octadecenínico, ácido pirúlico, ácido crepénico, ácido heisterínico, ácido t8,t10-octadecadien-12-inoico, ETYA, ácido cerebrónico, ácido hidroxinervónico, ácido ricinoleico, ácido lesquerolínico, ácido brassilínico y ácido tapsínico.

[0068] Otro aspecto de la presente invención se dirige a las sustancias separadas, de modo que la presente invención también se refiere a las mezclas que contienen los glucoglicerolípidos o los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos o los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y los glucolípidos y/o los glucofosfolípidos. Estas mezclas de sustancias de distintos glucoglicerolípidos o de distintos glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos o de distintos glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y glucolípidos y/o glucofosfolípidos se pueden obtener de acuerdo con los procedimientos según la invención y en especial por extracción de la fase acuosa separada.

[0069] Los glucoglicerolípidos y siempre que estén presentes en la fase lipoide, los glucoesfingolípidos se obtienen de la fase lipoide por mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-) seguido de preferentemente mezcla intensiva de ambas fases y separación de la fase preferentemente por centrifugación. La expresión “de al menos una sal”, como se usa en la presente, ha de indicar que naturalmente se pueden usar también varias sales, por ejemplo, mezclas de sales. En este caso, se pueden usar sales de aniones iguales y cationes diferentes como, por ejemplo, acetato de sodio y acetato de potasio, como también sales de cationes iguales y aniones diferentes tales como, por ejemplo, hidrógeno-carbonato de sodio y silicato de sodio. De hecho, también se pueden usar mezclas de sales de distintos cationes y distintos aniones tales como, por ejemplo, carbonato de sodio y tartrato de potasio. Por el contrario, no es usual el uso de sales con distintos aniones y/o distintos cationes en una sal como, por ejemplo, carbonato de sodio y potasio.

[0070] Como sales que forman los aniones previamente mencionados en agua, son apropiados, preferentemente Na²CO³, K²CO³, NaHCO³, KHCO³, Na²SiO^{3 ,}K²SiO³, Na⁴SiO⁴, K⁴SiO⁴, Na²Si²O^{5 ,}K²Si²O⁵, Na²Si³O^{7 ,}K²Si³O⁷, NaOOCCH³, KOOCCH³, Cu(OOCCH³)², Na²C⁴H⁴O⁶, K²C⁴H⁴O⁶, Na³BO³y K³BO³. Estas sales se añaden respecto de los glucoglicerolípidos al menos en cantidades estequiométricas. Siempre que estén contenidos además de glucoglicerolípidos también glucoesfingolípidos en la fase lipoide, se añaden estas sales respecto de la cantidad total de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos al menos en cantidades estequiométricas. Además, se debería usar por lo menos un exceso de 0,2 a 1,0 equivalentes molares. Un exceso de 1,0 equivalentes molares equivale a un exceso del 100%. Se prefiere, en general, un exceso de 1,0 equivalente molar a 10,0 equivalentes molares, también se prefieren 2,0 equivalentes molares a 9,0 equivalentes molares, con mayor preferencia, 3,0 equivalentes molares a 8,0 equivalentes molares, con mayor preferencia aún 4,0 equivalentes molares a 7,0 equivalentes molares.

[0071] Según la invención, los glucoglicerolípidos y, siempre que estén presentes en la fase lipoide, los glucoesfingolípidos de una fase lipoide y no de una fase acuosa por medio de las sales aquí reveladas se convierten en la fase acuosa y se pueden separar por separación de la fase acuosa de la fase lipoide y luego se pueden obtener de la fase acuosa. En el procedimiento según la invención, las sustancias por separar se hallan siempre en una fase lipoides. Esta fase lipoide se mezcla con una solución acuosa de una o varias sales, que forman como aniones en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-) y los glucoglicerolípidos y, siempre que existan, los glucoesfingolípidos se convierten por medio de este anión o por medio de estos aniones en la fase acuosa. En esta etapa de extracción no se usa preferentemente ningún solvente orgánico. Así, también se puede excluir el uso adicional de solventes orgánicos.

Además, los inventores ensayaron un sinnúmero de sales con distintos aniones y según la invención, sólo los aniones aquí revelados están en condiciones de convertir los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos en la fase acuosa. Los aniones tales como, por ejemplo, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, nitrilo, nitruro, sulfato, sulfito, sulfuro, fosfato y muchos otros no están en condiciones de ello y, por eso, no se pueden usar según la invención.

[0072] En una forma de realización preferida de la presente invención, la fase acuosa añadida en la etapa B1) contiene los aniones antes mencionados en forma de sus sales de sodio.

[0073] En una forma de realización preferida de la presente invención, la fase acuosa añadida en la etapa B1) no contiene, además de los aniones antes mencionados, salvo iones cloruro y/o bromuro, ningún otro anión.

[0074] Por ello, se prefiere según la invención que la fase acuosa añadida en la etapa B1) aparte de carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-) no contenga otros aniones, es decir, ningún fosfato, ningún yoduro, ningún fluoruro, ningún nitrito, ningún nitrato, ningún hidrógeno-fosfato, ningún dihidrógenofosfato y ningún cianuro. Como cationes, la fase acuosa contiene preferentemente Na⁺, K⁺, Li⁺, Mg²⁺, Ca²⁺, Ti²⁺, Ti⁴⁺, Co²⁺, Co³⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Sn²⁺y/o Sn⁴⁺y con preferencia especial, sólo Na⁺y/o K⁺.

[0075] Sin embargo, el experto es consciente de que, según la fuente y la calidad del agua usada para la preparación de la fase acuosa añadida en la etapa B1) como también en la etapa A2) o la etapa A2') o la etapa E1), puede haber impurezas inevitables en forma de otros cationes y/o aniones.

[0076] Además, se prefiere cuando en la fase acuosa añadida están presentes uno o varios de los siguientes cationes: Li⁺, Mg²⁺, Ca²⁺, Ti²⁺, Ti⁴⁺, Co²⁺, Co³⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Sn²⁺o Sn⁴⁺. Por ello, con preferencia, en la etapa B1), la fase lipoide se mezcla con una fase acuosa, que contiene cationes de una sal que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y forma con disociación en agua iones Li⁺, Mg²⁺, Ca²⁺, Ti²⁺, Ti⁴⁺, Co²⁺, Co³⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Sn²⁺o Sn⁴⁺. Naturalmente, se entiende de hecho que estas fases acuosas también contienen aniones respecto de los cationes previamente mencionados como, por ejemplo, sulfato, bromuro, acetato. La adición de iones hierro debería evitarse.

[0077] Las sales apropiadas que se pueden añadir a la fase acuosa por agregar son, por ejemplo: LiOAc, LiBr, MgBr², CaBr², Mg(OAc)², Ca(OAc)², MgCO3, CaCO3, Ti(OAc)², Ti(OAc)4, Ni(OAc)², TiBr², TiBr4, CoBr², CoBr3, CuBr², Cu(OAc)², ZnBr², Zn(OAc)², Sn(OAc)², SnBr², Sn(OAc)²o SnBr4.

El uso de sales de cloruro como, por ejemplo, NaCl se debería evitar, porque las sales de cloruro presentan de modo conocido un comportamiento corrosivo y atacan el dispositivo de procesamiento que está fabricado preferentemente de acero. Así, se debe evitar el uso de sales de cloruro como, por ejemplo, LiCl, MgCl², CaCl², NaCl, TiCl², TiCl4, CoCl², CoCl3, NiCl², CuCl², KCl, ZnCl², SnCl²y SnCL. Con preferencia, se excluye el uso de sales de cloruro según la invención.

[0078] La fase acuosa para añadir en la etapa B1) tiene preferentemente un valor de pH en el rango de 7,0 a 13,5, con mayor preferencia, de 7,5 a 12,0, con mayor preferencia aún, de 8,0 a 11,0. El valor del pH, en caso de ser necesario, se puede regular por medio de adición de, por ejemplo, ácido acético. El valor del pH depende naturalmente también de la sal añadida. Al usar metasilicato (MS), el valor del pH está preferentemente en el rango de 12,0 a 13,5, preferentemente de 12,5 a 13,5.

Al usar carbonato (carbonato de sodio: NC), el valor del pH está preferentemente en el rango de 10,0 a 12,0, preferentemente de 10,5 a 11,5.

Al usar acetato (Ac; acetato de sodio: NAc), el valor del pH está preferentemente en el rango de 7,0 a 9,0, preferentemente de 7,5 a 8,5.

Al usar hidrógeno-carbonato (HC; hidrógeno-carbonato de sodio: NHC), el valor del pH está preferentemente en el rango de 7,0 a 9,0, preferentemente de 7,5 a 8,5.

[0079] La fase acuosa para añadir en la etapa E1) tiene preferentemente un valor del pH en el rango de 10,0 a 14,0, con mayor preferencia, de 11,0 a 13,7, con mayor preferencia, de 12,0 a 13,5. El valor del pH se puede regular, en caso de ser necesario, por medio de adición de, por ejemplo, ácido acético.

[0080] La adición de la fase acuosa a la fase lipoide se produce preferentemente a temperatura ambiente o a una temperatura en el rango de 10 °C a 50 °C.

[0081] La mezcla tiene lugar a presión atmosférica y una temperatura en el rango de 10 °C a 90 °C, con preferencia, de 15 °C a 70 °C, con mayor preferencia, 20 °C a 60 °C y con preferencia especial, 25 °C a 50 °C. La separación de la fase acuosa después de la mezcla se produce preferentemente a presión atmosférica y una temperatura en el rango de 10 °C a 90 °C, con preferencia de 15 °C a 70 °C, con mayor preferencia, de 20 °C a 60 °C y con preferencia especial, de 25 °C a 50 °C.

[0082] Dado que se puede producir la separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de fases lipoides según la invención, en las que por las razones antes mencionadas también pueden estar contenidos también los compuestos fácilmente solubles en agua hidratables, puede resultar de interés separar estos compuestos. Para ello, antes de la adición de la fase acuosa designada en los párrafos anteriores de acuerdo con la etapa B1), después de la etapa A1) puede seguir la siguiente etapa A2):

A2) mezcla de la fase lipoide con agua como fase acuosa, posterior mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa y separación de la fase acuosa.

[0083] Así, un aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento que después de la etapa A1) y antes de la etapa B1), comprende la siguiente etapa A2):

[0084] En lugar de agua como fase acuosa o fase acuosa neutra, también se puede usar una fase acuosa ácida que, por ejemplo, contiene ácido cítrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido fórmico o ácido oxálico. Por ello, otra posible variante de la presente invención se refiere a un procedimiento que comprende después de la etapa A1) y antes de la etapa B1), la siguiente etapa A2'):

A2') mezcla de la fase lipoide con una solución acuosa de ácido carboxílico o una solución acuosa de un ácido inorgánico con un valor de pH de entre 3,0 a 5,0 como fase acuosa, posterior mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa y separación de la fase acuosa.

[0085] Como ácidos inorgánicos, son apropiados, por ejemplo, ácido fosfórico, ácido sulfúrico como también ácido clorhídrico. En algunas formas de realización de la presente invención, puede ser ventajoso y así preferido realizar como primera etapa, después del suministro de una fase lipoide que contiene acilglicéridos, glucolípidos, glucoglicerolípidos, glucofosfolípidos, fosfolípidos y ácidos grasos libres, la etapa A2) o A2'). Esto rige en especial para fases lipoides, que contienen particularmente muchos fosfolípidos además de acilglicéridos, glucolípidos, glucoglicerolípidos, glucofosfolípidos y que se pueden separar bien por medio de una etapa A2) o A2'). Después de mezclar la fase lipoide con una fase acuosa en forma de agua destilada o bien de un ácido débil, la fase acuosa resultante se separa de la fase lipoide y se puede descartar o juntar para el posterior uso. Con ello, se pueden separar sustancias hidrofílicas tales como sales, pero también fosfolípidos fácilmente hidratables (por ejemplo, fosfatidilcolina, también denominada lecitina) o glucolípidos con grupos carboxilato, sulfato y/o sulfonato. Los ácidos grasos, glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos no se separan en absoluto o sólo se separan en menor medida.

Mediante la separación de compuestos hidratables de una fase lipoide se permite la obtención de una forma más pura de glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos, lo cual facilita de forma esencial la ulterior elaboración de la fracción separada de los glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos. Por ello, las etapas de procedimiento A1) y A2) son formas de realización de particular preferencia de obtener una forma más pura de glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos con las etapas de procedimiento B1) y B2) según la invención. Así, la presente invención se refiere también a mezclas que contienen glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos, esterilglucósidos o combinaciones de las sustancias previamente mencionadas tales como, por ejemplo, glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos o glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y esterilglucósidos, que se pueden obtener de acuerdo con uno de los procedimientos como se revelan en la presente.

Con las etapas de procedimiento según A), A1) y A2), sin embargo, además de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, tampoco se eliminan otros compuestos no hidratables como ácidos grasos libres o ácidos carboxílicos de las fases lipoides. En el caso de una separación de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos según las etapas de procedimiento B), B1) y B2), se puede producir la separación conjunta de ácidos grasos libres y fosfolípidos o bien glucofosfolípidos, lo cual perjudica desfavorablemente la calidad de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos separados. Se podía mostrar que en especial la separación conjunta de ácidos grasos libres, ácidos carboxílicos y fosfolípidos se puede controlar mediante una selección apropiada de parámetros de proceso. Esto atañe en especial a la regulación del valor del pH de las soluciones salinas acuosas descritas. Así se pudo mostrar que, también con un alto contenido de ácidos grasos libres en la fase lipoide, las separaciones realizadas con las etapas de procedimiento B), B1) y B2) de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos contenidos, el contenido de los ácidos grasos libres y fosfolípidos o glucofosfolípidos esencialmente queda sin cambios, cuando el valor del pH de la solución acuosa se regulaba a un nivel neutro. Con ello, es posible primeramente la obtención de una fracción particularmente ventajosa y pura de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos con un procedimiento de separación acuoso, de modo que es una forma de realización de particular preferencia de las etapas de procedimiento B), B1) y B2) con soluciones acuosas de los aniones o sales aquí mencionados con un valor de pH neutro o cercano al rango neutro.

[0086] Las fases lipoides, que se pueden tratar con los dispositivos y procedimientos según la invención para obtener una fracción con hidrólisis limitada y pura de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, son en algunas aplicaciones técnicas también mezclas que son en sí de interés económico. Esto se refiere en especial a aceites vegetales. Ahora se pudo mostrar por primera vez que la separación de glucoglicerolípidos y glucofosfolípidos actúa de modo relevante sobre el posterior procesamiento de estas fases lipoides. Así se pudo mostrar hasta ahora sin ningún procedimiento de extracción acuoso un agotamiento de ácidos grasos libres de fases lipoides, que se componen en un >90% en peso, con preferencia en >95% en peso y con mayor preferencia, en >98% en peso de triacilgliceroles, a valores de < 0,1% en peso.

[0087] Sorprendentemente se pudo hallar ahora que mediante una extracción realizada según las etapas B1) a D1) a continuación de la extracción acuosa de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos con una solución acuosa de compuestos guanidino o amidino es posible una separación prácticamente completa de ácidos grasos y fosfolípidos aún restantes en una mezcla de alcanos o triglicéridos. Tal reducción de ácidos grasos y fosfolípidos no se pudo lograr con los mismos compuestos de amidino o guanidino, que se pusieron en contacto a continuación de un procedimiento clásico del estado de la técnica con la mezcla de alcanos o triglicéridos. Por ello, la combinación de una extracción acuosa según la invención de acuerdo con las etapas B1) a D1) y la extracción acuosa adicional con un compuesto de amidino o guanidino representa un procedimiento particularmente ventajoso para lograr una reducción óptima de ácidos grasos y fosfolípidos.

Al mismo tiempo, se puede permitir así otra reducción extremadamente ventajosa de la fase lipoide tratada con los dispositivos y procedimientos según la invención, de modo que la invención también se refiere a la obtención de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos altamente refinada.

Con ello, se pueden obtener mezclas de triglicéridos y alcanos que presentan contenidos residuales de ácidos grasos libres y fosfolípidos, que están claramente por debajo de los requerimientos actuales DIN de, por ejemplo, la calidad de los combustibles biogénicos como, por ejemplo, biodiésel. Esto rige también para los valores máximos de metales alcalinotérreos y iones metálicos que, sin embargo, están reducidos ya después del procedimiento de extracción de acuerdo con las etapas B1) a D1). Del mismo modo es posible otra reducción por extracción acuosa adicional con un compuesto de amidino o guanidina.

[0088] Una forma de realización preferida en especial de la presente invención se refiere por ello a procedimientos que después de la etapa D1) comprenden la siguiente etapa E1):

E1) mezcla de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos con una fase acuosa que contiene al menos un compuesto que presenta al menos un grupo amidino y/o al menos un grupo guanidino, posterior mezcla de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y de la fase acuosa y separación de la fase acuosa.

[0089] Siempre que el procedimiento según la invención comprenda la etapa D2), una forma de realización de especial preferencia de la presente invención se refiere a procedimientos que comprenden después de la etapa D2) la siguiente etapa E1):

E1) mezcla de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos con una fase acuosa, que contiene al menos un compuesto que presenta al menos un grupo amidino y/o al menos un grupo guanidino, posterior mezcla de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y de la fase acuosa y separación de la fase acuosa.

[0090] Los ejemplos de compuestos apropiados con al menos un grupo guanidino (también denominados compuestos de guanidino) y/o con al menos un grupo amidino (también denominados compuestos de amidino) se revelan detalladamente en la solicitud de patente internacional WO 2011160857 A2. Como grupo guanidino, se designa el radical químico H²N-C(NH)-NH— , así como sus formas cíclicas y como grupo amidino, el radical químico H²N-C(NH)-, así como sus formas cíclicas (ver ejemplo de abajo). Se prefieren compuestos de guanidino que presentan adicionalmente al grupo guanidino al menos un grupo carboxilato (-COOH). Además, se prefiere cuando los grupos carboxilato están separados en la molécula por al menos un átomo de carbono del grupo guanidino. También se prefieren compuestos de amidino que presentan además del grupo amidino al menos un grupo carboxilato (-COOH). También se prefiere cuando los grupos carboxilato están separados por al menos un átomo de carbono del grupo amidino en la molécula.

[0091] Estos compuestos de guanidino y compuestos de amidino tienen preferentemente un coeficiente de distribución K^owentre n-octanol y agua de menos de 6,3 (K^ow< 6,3).

[0092] Se prefieren en especial los derivados de arginina. Los derivados de arginina se definen como compuestos que presentan un grupo guanidino y un grupo carboxilato o un grupo amidino y un grupo carboxilato, en donde el grupo guanidino y el grupo carboxilato o el grupo amidino y el grupo carboxilato se separan por al menos un átomo de carbono, es decir, se halla al menos uno de los siguientes grupos entre el grupo guanidino o el grupo amidino y el carboxilato: -CH²-, -CHR-, -CRR'-, en donde R y R' representan, de modo independiente entre sí, cualquier radical químico. Naturalmente, la distancia entre el grupo guanidino y el grupo carboxilato o el grupo amidino y el grupo carboxilato también puede ser de más de un átomo de carbono, por ejemplo, en los siguientes grupos -(CH²)ⁿ-, -(CHR)ⁿ-, -(CRR')ⁿ-, con n = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9, como es el caso, por ejemplo, del ácido amidinopropiónico, ácido amidinobutírico, ácido guanidinopropiónico o ácido guanidinobutírico. Los compuestos con más de un grupo guanidino y más de un grupo carboxilato son, por ejemplo, oligoarginina y poliarginina.

[0093] A continuación, se muestran ejemplos de compuestos preferidos con un grupo guanidino o un grupo amidino y un grupo carboxilato.

[0094] Los derivados preferidos de arginina son compuestos de la siguiente fórmula general (I) o (II)

en donde

R , R , R y R son, de modo independiente entre sí: -H, -OH, -CH=CH², -CH²-CH=CH², -C(CH³)=CH², -CH=CH-CH³, -C ²H⁴-CH=CH², -CH³, -C ²H⁵, -C ³H⁷, -CH(CH³)², -C ⁴H⁹, -CH²-CH(CH³)², -CH(CH³)-C²H^5,-C(CH³)³, -C ⁵H^{1 I}, —CH(CH³)—C³H⁷, —CH²—CH(CH³)—C²H⁵, -CH(CH³)-CH(CH³)², -C(CH³)²-C ²H⁵, -CH²-C(CH³)³, -CH(C²H⁵)², -C ²H⁴-CH(CH³)², -C ⁶H¹³, -C ⁷H¹⁵, ciclo-C³H⁵, ciclo-C⁴H⁷, ciclo-C⁵H⁹, ciclo-C⁶H^{i i}, —PO³H², -PO³H-, -PO^{32 -}, -NO², -CECH, -C EC-CH³, -CH²-C ECH, -C ²H⁴-C ECH, -CH²-C EC-CH³,

o R' y R' ' forman juntos uno de los siguientes grupos: -CH²-CH²-, -CO-CH²-, -CH²-CO-, -CH=CH-, -CO-CH=CH-, -CH=CH-CO-, -CO-CH²-CH²-, -CH²-CH²-CO-, -CH²-CO-CH²- o -CH²-CH²-CH²-;

X representa -NH-, -NR” ” -, -O -, -S -, -CH²-, -C ²H⁴-, -C ³H⁶-, -C ⁴H⁸- o -C ⁵H¹⁰- o representa una cadena hidrocarbonada C1 a C5, que puede estar sustituida con uno o varios de los siguientes radicales: -F, -Cl, -OH, -OCH³, -OC²H⁵, -NH², -NHCH³, -NH(C²H⁵), -N(CH³)², -N(C²H⁵)², -SH, -NO ², -PO³H², -PO ³H- , -PO ³²- , -CH³, -C ²H⁵, -CH=CH², -C ECH, -COOH, -COOCH³, -COOC²H⁵, -COCH³, -COC²H⁵, -O-COCH³, -O-COC²H⁵, -CN, -CF³, -C ²F⁵, -OCF³, -OC²F⁵;

L es un sustituyente hidrofílico seleccionado del grupo compuesto por:

-NH², -OH, -PO ³H², -PO ³H- , -PO ³²- , -OPO³H², -OPO³H- , -OPO³²- , -COOH, -COO- , -CO-NH², -NH³⁺, -NH-CO-NH², -N(CH³)³⁺, -N(C²H⁵)³⁺, -N(C³H⁷)³⁺, -NH(CH³)²⁺, -NH(C²H⁵)²⁺, -NH(C³H⁷)²⁺, -NHCH³, -NHC²H⁵, -NHC³H⁷,

-NH²CH³⁺, -NH ²C²H⁵⁺, -NH ²C³H⁷⁺, -SO³H, -SO³- , -SO ²NH², -CO-COOH,

-O-CO-NH ², -C(NH)-NH², -NH-C(NH)-NH², -NH-CS-NH², -NH-COOH,

[0095] La etapa de procedimiento E1) es apropiada en especial para obtener otras fases lipoides elaboradas pobres en glicolípidos y ácido carboxílico, que presentan al mismo tiempo sólo mínimas cantidades residuales de potasio, fósforo, hierro, calcio, ácidos grasos libres, glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos. Así, otro aspecto de la presente invención se refiere a fases lipoides pobres en glucolípidos y ácidos carboxílicos que se obtienen según un procedimiento de acuerdo con la invención.

[0096] La etapa E1) también se puede llevar a cabo como etapa A2) en vez de la etapa de lavado con agua o de la etapa de lavado con una solución acuosa de ácido carboxílico o una solución acuosa de ácido fosfórico o como etapa A3) después de una etapa de lavado con agua [etapa A2)] o como etapa A3) después de una etapa de lavado con solución acuosa de ácido carboxílico o con una solución acuosa de ácido fosfórico, solución de ácido sulfúrico o solución de ácido clorhídrico [etapa A2')]. El uso de la etapa E1) es particularmente ventajosa en especial después de la etapa A2) realizada inicialmente, ya que, con ello, se pueden separar por completo los ácidos incorporados para la obtención de una fracción particularmente ventajosa pobre en fosfolípidos e hidrólisis de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en condiciones particularmente protectoras, de modo que con ello se puede obtener al mismo tiempo, en condiciones particularmente protectoras, una fase lipoide pobre en ácido carboxílico.

Por ello, según la invención se prefiere realizar una etapa A2) o A2') para eliminar los componentes fácilmente solubles en agua de la fase lipoide, es decir, sustancias con un valor de HLB de preferentemente >18, con preferencia, >16, con mayor preferencia, >15 y luego realizar la etapa B1) siguiente para obtener una fase acuosa con un grado de pureza posiblemente alto de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos obtenibles.

[0097] Siempre que se desee seguir separando glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en aquellos con grupos cargados como, por ejemplo, fosfato, sulfonato, sulfato y aquellos sin grupo cargado (también, por ejemplo, sin fosfato, sulfonato, sulfato), preferentemente se lleva a cabo la etapa B1) por medio de una fase acuosa que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-) o trisilicato (Si³O⁷²-) y luego se extrae la fase acuosa obtenida, que contiene los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos por medio de solventes orgánicos apropiados como, por ejemplo, éter dimetílico o cloroformo. Dado el caso, puede ser de ayuda emplear adicionalmente solventes más polares para la separación como, por ejemplo, metanol. En esta ulterior etapa de separación, los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos se quedan con grupos cargados como, por ejemplo, grupos fosfato, grupos sulfonato o grupos sulfato en la fase acuosa y los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos sin grupos iónicos pasan a la fase orgánica.

Si, por el contrario, se desea separar ya de las fases lipoides una fracción con un porcentaje posiblemente alto de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos sin grupos iónicos, se realiza preferentemente antes de la etapa B1) una etapa de lavado por medio de agua [etapa A2)] o solución de ácido [etapa A2')].

[0098] Según la invención, se pueden obtener preferentemente los siguientes glucoglicerolípidos de una fase lipoide:

1 -acil-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2 diacil-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2 diacil-3-O-(a-D-galactosil1-6)-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2—diacil—3—O—(acil1 —6)—p—D—galactosil—sn—glicerol

[0099] Los radicales R, R1 y R2 representan en este caso los radicales carbonados de ácidos grasos, en donde las fórmulas RCOOH, R1COOH y R2COOH definen los correspondientes ácidos grasos. En especial, se prefieren los radicales de ácidos grasos (RCOO-, R1COO- y R2COO-) con 14 a 24 átomos de carbono, con preferencia, de 16 a 22 átomos de carbono y con mayor preferencia, de 18 a 20 átomos de carbono. Además, se prefieren radicales de ácidos grasos con un número par de átomos de carbono.

[0100] Los ejemplos de glucoglicerolípidos obtenibles según la invención de fases lipoides sin grupos iónicos son, por ejemplo,

1-hexadecanil-2-((2'-a-glucosil)-p-glucosil)-3-p-xilosil-sn-glicerol

1,2 di-(9Z,12Z,15Z-octadecatrienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2-dioctadecanoil-3-O-(6-deoxi-6-amino-a-D-glucosil)-sn-glicerol

1 -(3Z,6Z, 9Z, 12Z, 15Z-octadecapentaenoil)-2-(6Z, 9Z, 12Z, 15Z-octadecatetraenoil)-3-O-(6'-O-a-D-galactosil-p-D-galactosil)-sn-glicerol

1-

(3Z,6Z,9Z,12Z,15Z-octadecapentaenoil)-2-(6Z,9Z,12Z,15Z-octadecatetraenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2-di-(3Z,6Z,9Z,12Z,15Z-octadecapentaenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1-(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoil)-2-(9Z,12Z,15Z-octadecatrienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1 -(9Z, 12Z, 15Z-octadecatrienoil)-2-(6Z,9Z, 12Z, 15Z-octadecatetraenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1 -(9Z, 12Z-octadecadienoil)-2-(15R-[9Z, 12Z-octadecadienoiloxi]-9Z, 12Z-octadecadienoil)-3-(a-D-galactosil-1-6-p-D-galactosil)-sn-glicerol

1 -(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoil)-2-(6Z,9Z, 12Z, 15Z-octadecatetraenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1 -(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoil)-2-(7Z, 10Z, 13Z-hexadecatrienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1-(7Z,10Z,13Z-hexadecatrienoil)-2-(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1 -(9Z, 12Z, 15Z-octadecatrienoil)-2-(7Z, 10Z, 13Z-hexadecatrienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2-di-(6Z,9Z,12Z,15Z-octadecatetraenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2 di-(9Z-octadecenoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1-octadecanoil-2-(9Z,12Z-octadecadienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1,2-di-(9Z,12Z-octadecadienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1-(9Z,12Z-octadecadienoil)-2-(9Z,12Z,15Z-octadecatrienoil)-3-O-p-D-galactosilsn-glicerol

1-hexadecanoil-2-(9Z-octadeceno¡l)-3-O-p-D-galactos¡l-sn-glicerol

1-hexadecanoil-2-(9Z,12Z-octadecadienoil)-3-O-p-D-galactosil-sn-glicerol

1-(9S, 13S-12-oxo-11, 15Z-f¡tod¡eno¡l)-2-(7Z, 10Z, 13Z-hexadecatrienoil)-3-O-(P-D-galactosil)-sn-glicerol

1-O-(1'S,2'S,3'R,4'R,5'S-tetrah¡drox¡c¡clopent¡l)-2-(9-met¡lpentadecano¡l)-3-(10-met¡l-hexadecan¡l)-sn-gl¡cerol

[0101] Los ejemplos de glucoglicerolípidos obtenibles según la invención de fases lipoides con grupos iónicos (como, por ejemplo, fosfato, sulfato, sulfonato) son, por ejemplo:

1,2-d¡ac¡l-3-(6-sulfo-a-D-qu¡novos¡l)-sn-gl¡cerol

3—O—[6'—O—( 1 '',2M—diacil—3M—fosfo—sn—glicerol)—a—D—glucopi ranosil]—1,2—

diacil-sn-glicerol

1,2-diacil-3-[6''-(sn-glicero-1-fosfo-)-a-D-kojibiosil]-sn-glicerol

6-O -(3 -fosfocholine-2 -amino-1 -fosfo-1 ,3 -propanediol)-a-D-glucopiranosil-(1'->3)-1,2-hexadecanoil-glicerol

1-(5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoil)-2-(13Z-hexadecenoil)-3-(6'-sulfo-a-D-quinovosil)-sn-glicerol

,2—diacil—3—(6 -O-fosfocolin-a-D-glucosil)-sn-glicerol

-HSO3-Gal-a1-6-Man-p1-2-Glc-a1-1-[2,3-di-O-fitanil-sn-glicerol]-6-[fosfo-2,

-di-O-fitanil-sn-glicerol]

1-O-[6''-sulfo-a-D-Manosil —1 ''—2'—a—D—Glucosil]—sn—2,3—di—O—fitanilglicerol

1-O-[3'''-sulfo-p-D-Galactosil-1'''-6''-a-D-Mannosil-1''-2'-a-D-Glucosil]-sn-2,

3—di—O—fitanilglicerol

2-HSO3-Mana1-2Glca1-1-[2,3-di-O-fitanil-sn-glicerol]—6-[fosfo-2,3-di-O-fitanil-sn-glicerol]

1-hexadecanoil-2-(9Z-hexadecenoil)-3-(6'-sulfo-a-D-quinovosil)-sn-glicerol

1-(9Z-hexadeceno¡l)-3-(6'-sulfo-a-D-quinovos¡l)-sn-gl¡cerol

1-(11Z-hexadeceno¡l)-3-(6'-sulfo-a-D-quinovos¡l)-sn-gl¡cerol

1-(13Z-hexadecenoil)-3-(6'-sulfo-a-D-quinovos¡l)-sn-gl¡cerol

[0102] Los compuestos previamente mencionados son ejemplos de glucoglicerolípidos que están contenidos en la fase lipoide. Según la invención, se obtienen con preferencia glucoglicerolípidos sin grupos iónicos de la fase lipoide. La expresión fase lipoide designa, por ello, el material de partida o educto que se trata según las etapas A1), B1), C1) y D1) o según las etapas A1), A2), B1), C1) y D1) o según las etapas A1), A2'), B1), C1) y D1). Resulta una fase acuosa que también se designa como fase acuosa separada, de la que se pueden obtener los glucoglicerolípidos separados y, siempre que estén presentes en las fases lipoides, los glucoesfingolípidos, glucolípidos y/o glucofosfolípidos de acuerdo con la etapa D2). Esta obtención de una fracción con hidrólisis limitada de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos se produce preferentemente por extracción de la fase acuosa obtenida después de las etapas D1) o D2) con solventes como, por ejemplo, cloroformo, cloruro de metileno y/o metanol. Además, se obtiene la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos, que en virtud de las etapas A1), B1), C1) y D1) previamente mencionadas opcionalmente combinadas con la etapa A2) o A2'), se redujo claramente en los contenidos de potasio, hierro, calcio, glucoglicerolípidos y, siempre que estén presentes en el educto, en glucoesfingolípidos, glucolípidos y/o glucofosfolípidos. Como fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos se designa la fase lipoide inmediatamente después de la etapa D1). Esta fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos representa ya una fase lipoide refinada y se puede volver a elaborar después de la etapa E1), a fin de obtener una fase lipoide muy refinada pobre en glucoglicerolípidos. La fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos bien refinada obtenida según la etapa E1) se denomina fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y ácido carboxílico o para la mejor diferenciación de la fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos según la etapa D1) como fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos posteriormente elaborada.

[0103] Por ello, la presente invención también se refiere a fases lipoides pobres en glucoglicerolípidos y/o ácido carboxílico, compuestas preferentemente por al menos el 90% en peso de acilglicéridos, es decir, una mezcla de triacilglicéridos, diacilglicéridos y monoacilglicéridos con un contenido de K < 5 ppm, P < 5 ppm, con preferencia P < 4 ppm, con mayor preferencia, P < 3 ppm, con mayor preferencia, P < 2 ppm y con preferencia especial, P < 1 ppm, Fe < 5 ppm, con preferencia Fe < 4 ppm, con mayor preferencia, Fe < 3 ppm, con mayor preferencia, Fe < 2 ppm, con mayor preferencia, Fe < 1 ppm y con preferencia especial, Fe < 0,1 ppm, Ca < 5 ppm y ácidos grasos libres < 0,30% en peso, con preferencia < 0,26% en peso, con mayor preferencia, < 0,23% en peso, con mayor preferencia, < 0,21% en peso, con mayor preferencia, < 0,19% en peso, con mayor preferencia, < 0,17% en peso, con mayor preferencia, < 0,15% en peso y, con preferencia especial, < 0,13% en peso.

[0104] La presente invención se refiere, además, a una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y/o ácidos carboxílicos, compuesta preferentemente por al menos el 90% en peso de acilglicéridos, es decir, una mezcla de triacilglicéridos, diacilglicéridos y monoacilglicéridos con un contenido de P < 0,8 mg/kg, con preferencia P < 0,7 mg/kg, con preferencia P < 0,6 mg/kg, Fe < 0,015 mg/kg, con preferencia Fe < 0,013 mg/kg, con preferencia Fe < 0,011 mg/kg, con preferencia Fe < 0,009 mg/kg, Ca < 0,5 mg/kg, con preferencia Ca < 0,4 mg/kg, Mg < 0,12 mg/kg, con preferencia Mg < 0,11 mg/kg, con preferencia Mg < 0,10 mg/kg, Cr < 0,01 mg/kg, con preferencia Cr < 0,009 mg/kg, con preferencia Cr < 0,008 mg/kg, con preferencia Cr < 0,007 mg/kg, Zn < 0,01 mg/kg, con preferencia Zn < 0,009 mg/kg, con preferencia Zn < 0,008 mg/kg, con preferencia Zn < 0,007 mg/kg, Mn < 0,005 mg/kg, con preferencia Mn < 0,004 mg/kg, con preferencia Mn < 0,003 mg/kg y/o FFA < 0,3% en peso, con preferencia FFA < 0,28% en peso, con preferencia FFA < 0,26% en peso, con preferencia FFA < 0,24% en peso, con preferencia FFA < 0,22% en peso, con preferencia FFA < 0,20% en peso.

Además, la presente invención se refiere a fases lipoides pobres en glucoglicerolípidos compuestas por al menos el 90% en peso de acilglicéridos con un contenido de P < 1 ppm, Fe < 0,04 ppm, Ca < 0,4 ppm, Mg < 0,1 ppm, Pb < 0,02 ppm, Cu < 0,02 ppm, Cr < 0,02 ppm, Ni < 0,02 ppm, Cd < 0,02 ppm, Zn < 0,02 ppm y FFA < 0,3% en peso.

[0105] Las fases lipoides pobres en glucoglicerolípidos según la invención también se pueden obtener a partir de eductos en sí de baja calidad, es decir, fases lipoides. Por fases lipoides de baja calidad, se ha de entender que contienen hasta el 50% en peso de ácidos grasos libres y cantidades de K de entre 50 y 500 ppm, P de entre 100 y 1.500 ppm, Fe de entre 50 y 500 ppm y Ca de entre 50 y 500 ppm.

La expresión “ácidos grasos” se usa en este caso como sinónimo de la expresión “ácidos grasos libres”. La adición “libres” ha de significar que se trata de ácidos grasos no ligados, porque en la fase lipoide la parte preponderante de los componentes contiene ácidos grasos. Como ácidos grasos se designan ácidos monocarboxílicos alifáticos con al menos 8 átomos de carbono.

Como “ácidos carboxílicos” se designan ácidos con al menos un grupo carboxilato. Así, el ácido carboxílico también comprende ácidos grasos.

La expresión “fase lipoide”, como se usa en la presente, comprende mezclas de sustancias de origen biológico que también se pueden obtener de plantas, algas, animales y/o microorganismos y que presentan un contenido de agua de <10% y un contenido de sustancias lipofílicas que comprenden monoacilglicéridos, diacilglicéridos y/o triacilglicéridos de un total de >70% en peso o >75% en peso o >80% en peso o >85% en peso o >90% en peso o >95% en peso. Así, en el caso de las fases lipoides se puede tratar, por ejemplo, de extractos de plantas oleaginosas y microorganismos, tales como granos de colza, soja, camelina, jatrofa, palmeras, pero también de algas y microalgas, así como grasas y aceites animales.

Las fases lipoides tienen preferentemente un contenido de agua de <10% y una proporción de alcanos y/o compuestos aromáticos cíclicos y/o mono-/di-/triglicéridos (acilglicéridos) de >75%. En este caso, es irrelevante si en el caso de la fase lipoide se trata de una suspensión, una emulsión o un líquido coloidal.

Siempre que en el caso de las fases lipoides se trate de extractos o fases de extracción de sustancias lipoides de una separación o extracción previamente realizada, la fase lipoide también puede estar compuesta en una proporción de > 50% de solventes orgánicos o compuestos hidrocarbonados.

[0106] La expresión “fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos” sólo indica que las fases lipoides útiles contienen, además varias otras sustancias, también glucoglicerolípidos y acilglicéridos, pero por ningún motivo puede estar compuesta sólo por glucoglicerolípidos y acilglicéridos. Lo mismo rige para la expresión “fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos”. Esta designación sólo indica que las fases lipoides que se pueden usar según la invención contienen glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos, pero por ningún motivo están compuestas sólo por glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos. Algunas sustancias o clases de sustancias ilustrativas que aún pueden estar contenidas en las fases lipoides útiles son otros glucolípidos como glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, glucofosfolípidos, fosfolípidos, ácidos grasos libres, ésteres de ácidos grasos, esterilglicósidos y muchas otras sustancias.

[0107] Los acilglicéridos forman el componente principal de la fase lipoide eventualmente sin tener en cuenta los solventes orgánicos. Los acilglicéridos no se convierten o sólo lo hacen en menor medida por medio de los procedimientos según la invención (menos del 0,1% de todos los acilglicéridos existentes, preferentemente menos del 0,05% de todos los acilglicéridos existentes y, con preferencia especial, menos del 0,01% de todos los acilglicéridos existentes) en la fase acuosa y, así, tampoco se separan de la fase lipoide o lo hacen en menor medida junto con los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos.

[0108] Como componente natural de prácticamente todas las células en seres vivos vegetales y animales, se tienen en cuenta tanto fosfolípidos, glucolípidos, glucoglicerolípidos como también glucoesfingolípidos inevitablemente también en fases lipoides obtenidas de estos seres vivos o plantas (como, por ejemplo, aceites vegetales o aceites animales). En qué porcentaje este sea el caso, dependerá no sólo del tejido del que se extrajo, sino también del procedimiento de extracción. En la Tabla 1 se resumen composiciones de fases lipoides que se obtuvieron de diversas plantas útiles. Aquí ya se puede reconocer que, por lo general, los lípidos neutros conforman la proporción principal de las fases lipoides, pero la proporción de fosfolípidos y glucolípidos / glucoglicerolípidos / glucoesfingolípidos es extremadamente variable. Así la proporción de glucolípidos, glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos es del 0,2% en aceite de coco, más de aproximadamente el 2% en aceite de borraja y 6,3 - 7% en aceite de salvado de arroz hasta el 19,4 % en aceite de granos de palta.

[0109] Tabla 1: Contenido de lípidos sin grupos iónicos (NL), acilglicéridos (AG), fosfolípidos (PL) y glucolípidos junto con glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos (GL) en las semillas (S) o bien los aceites obtenidos de ellos de plantas seleccionadas. El contenido de AG, PL, así como GL se indica en porcentaje del aceite total. En el caso de semillas, en parte se indica adicionalmente cuán alto es la proporción porcentual de aceite (total) en comparación con la masa de las semillas.

[0110] Aún cuando los glicósidos de ácidos grasos arriba mencionados que comprenden lípidos de trehalosa, lípidos de manosileritritol, lípidos de celobiosa, ramnolípidos y soforolípidos, no son de animales o plantas, sino que son sintetizados de bacterias, hongos y levaduras y por lo tanto no existen como componente natural de aceites vegetales o animales, se necesitan para la formación de estos emulsionantes fuentes de carbohidratos. Una desventaja sustancial de los emulsionantes de origen natural (bioemulsionantes) con respecto a los emulsionantes sintetizados industrialmente son los costos de preparación hasta ahora más altos. En la biotecnología se usan por lo tanto para la obtención de los bioemulsionantes a gran escala como medios de cultivo los aceites vegetales fuentes de carbohidratos económicos (por ejemplo, aceite de girasol, aceite de colza, aceite de palma, aceite de jatrofa, aceite de ricino, etc.) pero también los productos de desecho resultantes de su obtención (por ejemplo, tortas de ^{cocos, tortas de soja, tortas de maní, stock de jabón o} “soap-stock", ^{salvado de colza, etc.). Igualmente se pueden}usar como fuentes de carbohidratos productos de desecho de la producción de alimentos de origen animal (por ej, sebo, aceite de pescado, suero). Así se originan fases lipoide, las que aparte de aceites vegetales o aceites animales también contienen bioemulsionantes del grupo de los glucolípidos formados por microorganismos.

[0111] Como aproximadamente 60% de los costos de elaboración en los bioemulsionantes se deben a los costos de la purificación después de la síntesis por los microorganismos, existe una necesidad de contar con procedimientos eficientes y económicos para la purificación de los lípidos de trehalosa, lípidos de mannosileritritol, lípidos de celobiosa, ramnolípidos y sopfrolípidos, pertenecientes a los glucolípidos, de la fase lipoide.

[0112] A las fases lipoides, en el sentido de la definición usada en la presente, se cuentan, entre otros, el aceite de aqaí, el aceite de acrocomia, aceite de almendra, aceite de babasú, aceite de grosella, aceite de semilla de borraja, aceite de colza, aceite de castaña de cajú, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de coriandro, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de crambe, aceite de lino, aceite de pepita de uva, aceite de nuez, otros aceites de nueces, aceite de cañamón, aceite de jatrofa, aceite de jojoba, aceite de nuez macadamia, aceite de semilla de mango, aceite de cardamina, aceite de mostaza, aceite de pezuña, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de pepita de palma, aceite de palmoleína, aceite de maní, aceite de pecan, aceite de piñones, aceite de pistacho, aceite de amapola, aceite de germen de arroz, aceite de cardo, aceite de camelia, aceite de sésamo, aceite de manteca de karité, aceite de soja, aceite de girasol, aceite de bogol, aceite de tsubaki, aceite de nuez, tipos de aceites "naturales" con composiciones de ácidos grasos modificadas a través de organismos modificados genéticamente ^{(GVO) o cultivos tradicionales, aceite de} Neochloris oleoabyans, ^{aceite de} Scenedesmus dimorphus, ^{aceite de} Euglena gracilis, ^{aceite de} Phaeodactilum tricornutum, ^{aceite de} Pleurochrysis carterae, ^{aceite de} Prymnesium parvum, ^{aceite de} tetraselmis chui, ^{aceite de} tetraselmis suecica, ^{aceite de} Isochrysis galbana, ^{aceite de} Nannochloropsis salina ^{, aceite de} Botryococcus braunii ^{, aceite de} Dunaliella tertiolecta ^{, aceite de} Nannochloris ^{, aceite de espirulina, aceite de} Chlorophyceae ^{, aceite de} Bacilliarophyta ^{, una mezcla de los aceites precedentes así}como aceites de origen animal (especialmente aceites de animales marinos) y biodiesel.

[0113] La fase lipoide proporcionada al comienzo del procedimiento de acuerdo con la invención para la separación de glucoglicerolípidos y, en tanto estén contenidos en la fase lipoide, de glucoesfingolípidos, glucolípidos y/o glicofosfolípidos, también puede ser denominada fase cruda lipoide y presenta aún un contenido comparativamente alto de sustancias secundarias, tales como iones metálicos, lípidos iónicos, ácidos grasos y dado el caso, otras sustancias (por ejemplo, residuos de agentes fitosanitarios, aceites esenciales). En el marco de la o de las etapas de extracción acuosas de acuerdo con la invención se modifica naturalmente la composición de la fase cruda lipoide. En consecuencia las fases lipoide, que quedan después de cada etapa de extracción acuosa, presentan otra composición diferente que la de la fase de partida correspondiente, ya que las sustancias, que pasan durante la extracción acuosa de la fase lipoide a la fase acuosa, son separadas junto con esta fase acuosa. Por el procedimiento de acuerdo con la invención se extraen de la fase lipoide aparte de los glucoglicerolípidos eventualmente junto con los glucoesfingolípidos, glucolípidos y/o glicofosfolípidos (en tanto estén presentes) sobre todo iones metálicos, lípidos iónicos y/o ácidos grasos libres por extracción acuosa de la fase lipoide. Esta extracción no tiene que referirse obligatoriamente a la etapa D1), sino que se realiza preferentemente también en la etapa A2) y A2') y sobre todo también en la etapa E1).

[0114] La fase acuosa obtenida de acuerdo con la invención, que contiene los glucoglicerolípidos o los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, puede ser separada adicionalmente. De acuerdo con la invención, las fases acuosas que se obtienen especialmente y preferentemente, que contienen glucoglicerolípidos y eventualmente glucoesfingolípidos, son aquellas que tienen una proporción de sólidos de preferentemente >40% en peso.

[0115] Se pudo demostrar que una extracción directa de los componentes sólidos lipofílicos del medio de extracción acuoso obtenido es posible por medio de solventes orgánicos. Así la mayor parte de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos disueltos en la fase acuosa, pueden ser separados directamente por ejemplo, por cloroformo. El resultado de la separación puede mejorarse adicionalmente por medio de la adición de una cantidad reducida de metanol, obteniendo una fase acuosa y orgánica transparente. Un resultado en principio igual se puede obtener cuando se retira primero la fase acuosa bajo condiciones no rigurosas y luego se disuelve el sólido en CHCl3, CHCb/MeOH o acetona. Los compuestos se pueden separar adicionalmente en fracciones adicionales y obtener por medio de procedimientos ya conocidos, tales como cromatografía de capa delgada.

[0116] La expresión “ácidos grasos”, como se usa en la presente, se refiere a ácidos grasos libres (también abreviados FFAs), es decir, ácidos grasos que está libres y están ligados de forma glicerídica (es decir, con glicerina) o glucosísica (es decir, con radicales de azúcar).

[0117] La expresión “ácidos grasos” comprende preferentemente los siguientes compuestos: ácido hexanoico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido tetradecanoico, ácido hexadecanoico, ácido heptadecanoico, ácido octadecanoico, ácido eicosanoico, ácido docosanoico, ácido tetracosanoico, ácido cis-9-tetradecenoico, ácido cis-9-hexadecenoico, ácido cis-6-octadecenoico, ácido cis-9-octadecenoico, ácido cis-11-octadecenoico, ácido cis-9-eicosenoico, ácido cis-11-eicosenoico, ácido cis-13-docosenoico, ácido cis-15-tetracosenoico, ácido t9-octadecenoico, ácido t11-octadecenoico, ácido t3-hexadecenoico, ácido 9,12-octadecadienoico, ácido 6,9,12-octadecatrienoico, ácido 8,11,14-eicosatrienoico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraenoico, ácido 7,10,13,16-docosatetraenoico, ácido 4,7,10,13,16-docosapentaenoico, ácido 9,12,15-octadecatrienoico, ácido 6,9,12,15-octadecatetraenoico, ácido 8,11,14,17-eicosatetraenoico, ácido 5,8,11,14,17-eicosapentaenoico, ácido 7,10,13,16,19-docosapentaenoico, ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico, ácido 5,8,11-eicosatrienoico, ácido 9c11t13t-eleoesteárico, ácido 8t10t12c-calendulárico, ácido 9c11t13c-catalpínico, ácido 4,7,9,11,13,16,19 docosaheptadecanoico, ácido taxoleico, ácido pinolénico, ácido esciadónico, ácido 6-octadecínico, ácido t11-octadecen-9-ínico, ácido 9-octadecínico, ácido 6-octadecen-9-ínico, ácido t10-heptadecen-8-ínico, ácido 9-octadecen-12-ínico, ácido t7,t11-octadecadien-9-ínico, ácido t8,t10-octadecadien-12-ínico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraínico, ácido retinoico, ácido isopalmítico, ácido pristánico, ácido titánico, ácido 11,12-metilenoctadecanoico, ácido 9,10-metilen-hexadecanoico, ácido coronárico, ácido (R,S)-lipoico, ácido (S)-lipónico, ácido (R)-lipónico, ácido 6,8(metilsulfanil)-octanoico, ácido 4,6-bis(metilsulfanil)-hexanoico, ácido 2,4-bis(metilsulfanil)-butanoico, ácido 1,2-ditiolan-carboxílico, ácido (R,S)-6,8-ditian-octanoico, ácido (S)-6,8-ditian-octanoico, ácido tarírico, ácido santálbico, ácido estearínico, ácido 6,9-octadecenínico, ácido pirúlico, ácido crepénico, ácido heisterínico, ácido t8,t10-octadecadien-12-inoico, ETYA, ácido cerebrónico, ácido hidroxinervónico, ácido ricinoleico, ácido lesquerolínico, ácido brassilínico y ácido tapsínico.

[0118] El término “acilglicéridos”, como se usa en la presente, describe compuestos en los que al menos un grupo hidroxi de un resto de glicerina está esterificado con un ácido graso. Entre los acilglicéridos se cuentan los monoacilglicéridos, en los que un grupo hidroxi de la glicerina está esterificado con un ácido graso, los diacilglicéridos, en los que dos grupos hidroxi de la glicerina están esterificados con un ácido graso cada uno, así como los triacilglicéridos, en los que todos los tres grupos hidroxi de la glicerina están esterificados con un ácido graso cada uno.

[0119] Por “glucolípido”, como se usa en la presente, se resumen compuestos en los que uno o varios radicales de monosacáridos están unidos a través de una unión glucosídica con un radical acilo hidrofóbico.

[0120] Los “glucoglicerolípidos” son compuestos en los que un radical sacárido está unido con un grupo hidroxi primario de glicerina y los dos otros grupos hidroxi de la glicerina están esterificados con radicales acilo lipofílicos y en especial radicales de ácidos grasos.

[0121] Los “glucoesfingolípidos” son compuestos en los que un radical sacárido está unido de forma glucosídica preferentemente con un esfingolípido.

[0122] Los “glucofosfatidilinositoles” son compuestos en los que los sacáridos están unidos de forma glucosídica con el grupo inositol de fosfatidilinositoles.

[0123] Los “fosfolípidos”, como se usan en la presente, son lípidos anfifílicos que contienen un grupo fosfato y pertenecen ya sea a los fosfoglicéridos o a los fosfosfingolípidos. Los “fosfoglicéridos” (también denominados glicerofosfolípidos o fosfoglicerolípidos) están compuestos por un diacilglicérido cuyo grupo hidroxi terminal restante está unido con un radical fosfato, que no está más modificado (ácido fosfatídico) o está esterificado con un alcohol. Los representantes más frecuentes del último grupo son fosfatidilcolinas (también denominadas lecitinas), fosfatidiletanolaminas y fosfatidilserinas. Los “fosfoesfingolípidos” comprenden lípidos con una estructura básica de esfingosina, con cuyo grupo C2-amino está unido un ácido graso a través de un enlace amida y cuyo grupo C1-hidroxi está unido con un grupo fosfato a través de un enlace de fosfoéster, en donde (como en el caso de los fosfolípidos) este grupo fosfato, a su vez, puede estar esterificado con un alcohol. Los términos “fosfolípidos” y “fosfátidos” se pueden usar de modo equivalente.

Glucoglicerolípidos neutros

[0124] Entre los glucoglicerolípidos neutros, se cuentan glucosildiacilglicerinas, glucosilacilalquilglicerinas, glucosildialquilglicerinas, así como glucoglicerolípidos, cuyo radical sacárido está acilado en la posición 6, 2 y/o 3. Además, en la posición 1 ó 2 del radical de glicerina, hay glucoglicerolípidos desacetilados, las así llamadas glucosilmonoacilglicerinas. En plantas, la galactosa es el radical de azúcar preponderante en glucoglicerolípidos, en donde los ejemplos prominentes son monogalactosildiacilglicerinas (MGDG, 1,2-di-O-acil-3-O-p-D-galactopiranosil-sn-glicerina) y digalactosildiacilglicerina (DGDG, 1,2-di-O-acil-3-O-(6'-O-a-D-galactopiranosilp-D-galactopiranosil)-sn-glicerina)), así como trigalactosildiacilglicerina y tetragalactosildiacilglicerina. En la mayoría de los angiospermas, el ácido linolénico (18:3n-3) tanto en MGDG como también en DGDG es el radical de ácido graso que se presenta casi exclusivamente en las posiciones 1 y 2 del radical de glicerina. En algunos angiospermas (Solanaceae, Brassicaceae y Chenopodiaceae), así como plantas inferiores, se produce, sin embargo, en la posición 2 del radical de glicerina con frecuencia un ácido trienoico (16:3 n-3) especial. MGDG y sus formas liso son muy importantes para el comportamiento de cocción de productos de harina de trigo y, con ello, tienen gran interés en la industria. En granos de avena, se pudieron comprobar los llamados DGDG-monoestólidos que contienen como ácidos grasos en la glicerina un ácido linoleico y contienen un ácido linoleico hidroxilado en la posición 15, en donde en el último, el grupo hidroxi está esterificado en la posición 15 con otro ácido linoleico. Análogamente a ello, hay DGDG-diestólidos, DGDG-triestólidos e incluso DGDG-tetraestólidos, en los que el primer ácido linoleico hidroxilado en la posición 15 en el radical de glicerina está esterificado con uno a otros tres ácidos linoleicos hidroxilados en la posición 15 antes de que se produzca la ulterior esterificación con ácido linoleico. Además, existen en las plantas glucoglicerolípidos con un radical de galactosa, que está acilado en la posición 6. Aunque, como ya se mencionó con anterioridad, la galactosa es el radical de azúcar preponderante en glucoglicerolípidos vegetales, también hay glucoglicerolípidos vegetales a base de glucosa como, por ejemplo, la 1,2-di-O-acil-3-O-l3-D-glucopiranosil-sn-glicerina de salvado de arroz. Incluso en animales, se pudieron comprobar monogalactosil-diacilglicerinas, digalactosildiacilglicerinas, monogalactosilacilalquilglicerinas, digalactosilacilalquiiglicerinas, así como glucosilacilalquilglicerinas.

Glucoglicerolípidos ácidos

[0125] Además de los glucoglicerolípidos neutros, también hay glucoglicerolípidos ácidos, cuya acidez se produce cuando se esterifica su radical sacárido con ácido sulfúrico o ácido sulfónico. También se habla de sulfoglucoglicerolípidos. Los ejemplos de ello son

Glucoesfingolípidos

[0126] Los glucoesfingolípidos son glucolípidos que contienen al menos un radical mono-, oligo- o polisacárido, que está ligado de forma glucosídica preferentemente a la espina dorsal de esfingoide.

[0127] La espina dorsal de esfingoide comprende en este caso preferentemente los siguientes aminoalcoholes: esfingosina (d18:1, también 4-esfingenina), dihidrosfingosina (d18:0, también esfinganina), C20-dihidroesfingosina (d20:0, también eicosaesfinganina), fitoesfingosina (t18:0, también 4-hidroxiesfinganina), C20-fitoesfingosina (t20:0, también 4-hidroxieicosaesfinganina), deshidrofitoesfingosina (t18:1, también 4-hidroxi-8-esfingenina), esfingadienina (d18:2, también 4,8-esfingadienina), así como sus análogos estructurales.

[0128] Si el grupo amino de la espina dorsal de esfingoide está ligado con un ácido graso, se habla de “ceramidas”. Glucoesfingolípidos neutros

[0129]

I) Mono-, oligo- y poliglucosilceramidas:

Análogamente a las definiciones enumeradas con anterioridad, las glucosilceramidas son glucolípidos que contienen al menos un radical de mono-, oligo- o polisacárido, que está ligado glucosídicamente con una ceramida. Las monoglucosilceramidas también se denominan “cerebrósidos”.

Las monoglucosilceramidas más frecuentes en los animales vertebrados son los galactocerebrósidos en los que un radical de galactosa está unido de forma glucosífica con una espina dorsal de esfingoide de esfingosina o dihidroesfingosina, que está unido con su grupo amino con un ácido graso no hidroxilado o hidroxilado en la posición 2 con un largo de cadena de 20 a 24 átomos de carbono. Asimismo se pudieron comprobar en animales vertebrados (sobre todos en sangre y bazo) y en invertebrados glucocerebrósidos que contienen como radical de sacárido glucosa en lugar de galactosa. En plantas, se presentan principalmente cerebrósidos en comparación con los galactocerebrósidos ya existentes que poseen glucosa como sacárido, en este caso se trata preferentemente de glucocerebrósidos cuya espina dorsal de esfingoide está compuesta por fitoesfingosina y está ligada con un ácido graso hidroxilado en la posición 2 (saturado o monoinsaturado) con un largo de cadena de 16 a 24 átomos de carbono. Los glucocerebrósidos con 4,8-esfingadienina como espina dorsal de esfingoide se comprobaron en fases lipoides que se extrajeron de porotos de soja o almendras. En euforbio, se comprobaron glucocerebrósidos con deshidrofitoesfingosina como espina dorsal de esfingoide y ácidos grasos hidroxilados de largo variable.

Galactocerebrósido (R=H) con ceramida de espina dorsal de dihidroesfingosina y ácido esteárico Además de las monoglucosilceramidas, también existe un sinnúmero de glucosilceramidas glucosiladas superiores. A las oligoglucosilceramidas neutras pertenecen las digalactosilceramidas, las lactosilceramidas, las triglucosilceramidas (antes denominadas globotriaosilceramidas), así como las tetraglucosilceramidas que se presentan en tejidos animales como también vegetales. A las tetraglucosilceramidas, pertenece la N-acetilgalactosaminil-galactosil-galactosil-glucosilceramida humana.

Sigue la tabla 2, en la que se representa una selección de glucoesfingolípidos neutro animales (mono-, oligo- y poliglucosilceramidas).

Tabla 2: Lista de glucoesfingolípidos neutros en mamíferos (fuente: Glucoscience III: Chemistry and Chemical Biology. Fraser-Reid, B.; Tatsuta, K.; Thiem, J. (Ed.), Springer Verlag, 2001, ISBN 3-540-67765-8)

JG ap C e p C

II) mono-, oligo- y poliglucosilesfingoides

Otro grupo de glucoesfingolípidos neutros son los glucosilesfingoides, en los que al menos un radical de sacárido está unido de forma glucosídica con una espina dorsal de esfingoide, pero esto en su grupo amino no un ácido graso. Por ello, se habla también de glucosilceramidas desacetiladas. Aquí pertenecen, por ejemplo, los O-esfingosilgalactósidos que se presentan en el cerebro de los vertebrados (antes también denominados psicosinas).

III) glucoesfingolípidos ácidos: glucoesfingolípidos, que poseen como grupo ácido un radical sulfato, un radical fosfato o un radical carboxilo. A ellos, también pertenecen los siguientes subgrupos:

IV) Sialoglicoesfingolípidos:

Glucuronoglicoesfingolípidos: Glucuronoglicosfingolípidos son esfingolípidos que contienen uno o varios radicales de ácido urónico.

V) Sulfoglicoesfingolípidos: esfingolípidos, que contienen uno o varios ásteres de sulfato en radicales de sacárido. En este caso, se trata, por lo general, de galactocerebrósidos, en donde la galactosa en la posición está esterificada con un grupo sulfato. En este radical sulfatado de galactosa, se pueden unir otros radicales de sacárido, en los que se trata preferentemente de radicales de glucosa. Un representante prominente es el 3-O-sulfogalactosilcerebrósido que se presenta en la cubierta de mielina de neuronas de mamíferos.

VI) Fosfoglicoesfingolípidos: fosfoglicosfingolípidos son esfingolípidos que contienen uno o varios grupos fosfomonoáster o fosfodiáster. Por lo general, se une una ceramida a través de su grupo hidroxi en la posición 1 con un fosfato de inositol. Se habla por ello en parte también de “inositol-fosforilceramidas”. En plantas, la espina dorsal de inositolfosfoceramida puede llevar otros radicales de N-acetilglucosamina, glucosamina, fucosa, glucurona, arabinosa, manosa o galactosa que pueden estar unidos con el átomo de carbono en la posición 2 y/o en la posición 6 del inositol.

VII) fosfonoglicosfingolípidos son esfingolípidos que preferentemente aparecen en invertebrados y que al menos se caracterizan por al menos un enlace de éster de ácido fosfónico.

[0130] Glucofosfatidilinositoles: los glucofosfatidilinositoles son glucolípidos en los que los sacáridos están unidos de forma glucosídica con el grupo inositol de fosfatidilinositoles. En este caso, comprenden tanto las correspondientes formas liso de los glucofosfatidilinositoles como también los glucofosfatidilinositoles con radicales sustituidos de glicerina o bien inositol, por ejemplo, por sustituciones de O-acilo, O-alquilo u O-alqu-1-en-1-ilo.

[0131] Ramnolípidos: Los ramnolípidos están compuesto por una o dos unidades de ramnosa que están unidos con un grupo hidroxi de un ácido graso hidroxilado que, a su vez, está esterificado con otro ácido graso hidroxilado, en donde los ácidos grasos poseen un largo de cadena de preferentemente 8 a 12 átomos de carbono, con mayor preferencia, sin embargo, de 10 átomos de carbono. Los ramnolípidos se forman preferentemente a partir de ^{bacterias del género} Pseudomonas, ^{que crecen en una fuente de hidrocarburo y que poseen propiedades}antifúngicas.

[0132] Soforolípidos: Los soforolípidos están compuestos por el disacárido soforosa (también 2-O-glucopiranosil-D-glucopiranosa), que está unida con el grupo hidroxi de un ácido graso hidroxilado, en donde el grupo hidroxi se une con el átomo de carbono terminal (posición n) o la posición inmediatamente anterior (posición n-1). La soforosa puede estar además acetilada en uno o ambos grupos hidroxi en la posición 6. Un subgrupo de soforolípidos son los soforolípidos lactónicos, en los que el grupo carboxilo del ácido graso hidroxilado está esterificado con el grupo hidroxi en la posición 4' de la subunidad de glucosa de soforosa. Los soforolípidos se forman y separan de levaduras ^{del género} Candida, ^{pero, con preferencia especial, de} Candida bombicola ^y Candida apicola.

[0133] En este sitio se ha de observar que también en plantas se pudieron comprobar algunos glucósidos de ácidos grasos en los que está unido un radical de sacárido con un ácido graso hidroxilado a través de una unión glucosídica entre dos grupos hidroxi. Un ejemplo de ello es, por ejemplo, el glucósido de ácido tuberónico de la planta de papa, en donde el ácido graso ácido tuberónico (ácido 12-hidroxi-jasmónico) está unido a través del grupo hidroxi en la posición 12 de forma glucosídica con el grupo hidroxi en la posición 1 de la glucosa.

[0134] Además de los glucósidos de ácido graso enumerados con anterioridad, en los que un radical de sacárido está unido con un ácido graso a través de una unión glucosídica entre dos grupos hidroxi, existen también glucósidos de ácido graso que se producen mediante un enlace de éster entre el radical de sacárido y un ácido graso. La siguiente fórmula estructural muestra un glucósido de ácido graso proveniente de cianobacterias.

[0135] Por ejemplo, en solanáceas existen glucósidos de ácido graso en los que un radical de glucosa o un radical de sacarosa está acilado en dos a cinco grupos hidroxi, en donde el largo de la cadena de los grupos acilo es preferentemente de 2 a 12 átomos de carbono. Los ejemplos comprenden 2,3-diacilglucosa, 1,2,3-triacliglucosa, 2,3,4-triacilglucosa, 2,3,4-triacilsacarosa, 2,3,6-triacilsacarosa, 2,3,1'-triacilsacarosa, 1,2,3,4-tetraacilglucosa, 2,3,4,6-tetraacilglucosa, 2,3,4,6-tetraacilsacarosa, 2,3,4,1-tetraacilsacarosa, 2,3,4,3-tetraacilsacarosa, 1,2,3,4,6-pentaacilglucose y 2,3,4,6,3-pentaacilsacarosa.

[0136] Lípidos de trehalosa: Los lípidos de trehalosa están compuestos por el disacárido trehalosa (1-aglucopiranosil-1-a-glucopiranósido o Glc(a1^1)Glc), que está ligado a través de enlaces de éster con al menos un ácido graso ramificado en la posición 2 e hidroxilado en la posición 3. Con preferencia, en el caso de estos ácidos grasos se trata de ácidos micólicos o sus derivados ácido corinomicólico o ácido nocardomicólico. Si sólo se esterifica el grupo hidroxi en la posición 6 de una de las dos unidades de glucosa de la trehalosa, se habla de monomicolatos. Pero si ambas unidades de glucosa de la trehalosa están esterificadas en su grupo hidroxi en la posición 6, entonces se habla de dimicolatos. Uno de los representantes más conocidos de los lípidos de trehalosa ^{es el llamado factor Cord (un 6-6'-dimicolato de trehalosa) de} Mycobacterium tuberculosis, ^{que parece ser}importante para la virulencia y la resistencia al principio activo de la bacteria. Más allá de ello, se conocen las formas poliaciladas de lípidos de trehalosa en las que más de dos radicales de ácidos grasos están unidos con la trehalosa (por ejemplo, triaciltrehalosas y pentaaciltrehalosas). En el caso de los lípidos de trehalosa, se trata a continuación de glucolípidos complejos que pueden contener radicales de ácidos grasos largos y, además, también complejos. Los lípidos de trehalosa aparecen preferentemente en bacterias de los géneros Mycobacterium, Rhodococcus y Corynebacterium, así como en hongos, algas y también en insectos.

[0137] Lipopolisacáridos: los lipopolisacáridos son glucolípidos bacterianos sumamente complejos que están compuestos por lípido A y un complejo de polisacáridos ligados a ellos que, a su vez, se puede subdividir en una región central y un polisacárido O-específico ligado. El lípido A es un glucósido de ácido graso de un disacárido de dos unidades de N-acetilglucosaminfosfato, en donde este disacárido está esterificado con varios radicales de ácidos grasos. En este caso, los ácidos grasos más frecuentes son ácido caproico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico y ácido esteárico. A través del grupo hidroxi en la posición 6 del segundo N-acetilglucosaminfosfato está ligado el lípido A con la región central del complejo de polisacáridos anexo.

[0138] Esterilglucósidos: En el caso de los esterilglucósidos se trata de esteróles que están unidos a través de un grupo hidroxi de forma glucosídica con al menos un radical de sacárido. Los esterilglcósidos se presentan en plantas, animales, hongos y también en algunas bacterias. En animales, existe, por ejemplo, el glucurónico de colesterol, en donde un radical de colesterol se une con un radical de ácido glucurónico. En las plantas, en el caso del radical de esterol se trata preferentemente de campesterol, stigmasterol, sitosterol, brassicasterol o dihidrositosterol y en el caso del radical de sacárido, se trata preferentemente de glucosa, galactosa, manosa, ácido glucurónico, xilosa, ramnosa o arabinosa. El radical de sacárido está unido en esterilglucósidos vegetales a través del grupo hidroxi en el C3 del anillo A del esterol con el esterol. En este primer radical de sacárido, pueden estar unidos otros radicales de sacárido a través de un enlace glucosídico 13-1,4 o un enlace glucosídico 13-1,6. Existen respecto de los esterilglucósidos acilados (ASGs), en los que un radical de sacárido está esterificado en su grupo hidroxi en la posición 6 con un ácido graso. En muchas plantas, se pudieron comprobar esterilglucósidos acilados en prácticamente todas las partes de las plantas en hasta el 0,125% en peso. Es particularmente alta la proporción de esterilglucósidos acilados y no acilados en aceite de palma y de soja. En la preparación de biodiésel, se trata una alta proporción de esterilglucósidos en relación con una peor filtrabilidad.

Descripción de las Figuras

[0139]

Fig. 1: Figura 1 muestra una típica imagen de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos separada de la fase acuosa (abajo) según la etapa B1) en un recipiente de muestra por medio de centrifugación.

Fig. 2 : muestra la escala de lipofilicidad HLB, en donde en el rango de 10 a 0 sube la lipofilia y en el rango de 10 a 20 aumenta la hidrofilia y en 10 están las sustancias igualmente lipofílicas como hidrofílicas, es decir, son equianfifílicas. A modo de ejemplo, se indica para distintos emulsionantes TWEEN y SPAN el valor según la escala de lipofilicidad HLB.

Fig. 3: Figura 3 muestra un dispositivo según la invención para la ejecución de los procedimientos descritos en la presente. 1 significa un recipiente de captación para la captación de la fase acuosa, que contiene las sales mencionadas, 2 representa un rendimiento, 3 representa un recipiente, 4 representa un retorno de desborde, 5 es una tubería de salida, 6 es una válvula, 7 es un mezclador, 8 es una tubería de entrada, 9 es una tubería de salida, 10 es una centrífuga, 11 y 12 son dos salidas de la centrífuga, 13 es una bomba, 14 es otra bomba y 15 es un distribuidor.

Ejemplos

Métodos

[0140] La efectividad de la técnica de acuerdo con la invención para la separación de una fracción rica en glucoglicerolípidos de la fase lipoide se puede comprobar por diversos métodos del estado de la técnica.

Viscosimetría

[0141] Se pudo demostrar que la separación de la fracción de glucolípidos reduce claramente la viscosidad de la fase lipoide purificada. Por lo tanto como efecto de acuerdo con la invención se considera una reducción de la viscosidad de la fase lipoide purificada en al menos 10%, con mayor preferencia, al menos 20% y con mayor preferencia, al menos 30%.

Capacidad de ligación a metales y metales alcalinotérreos

[0142] Los iones de metales alcalinotérreos y iones de metales no se distribuyen prácticamente en una fase lipídica apolar. Los restos de azúcar de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos pueden fijar tales iones a través de uniones de puente de hidrógeno, por lo que muchas fases lipoides, como por ejemplo, los aceites vegetales, están cargados con estos iones. La capacidad de unión de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos con respecto a iones de este tipo puede usarse por lo tanto para calcular el contenido de compuestos de azúcar. Con el procedimiento de acuerdo con la invención se logra preferentemente un empobrecimiento de la capacidad de ligación para los iones de metales alcalinotérreos y los iones de metales en un 80%, con mayor preferencia, en >90% y con mayor preferencia, aún en >95%.

[0143] Para el ensayo de las propiedades físico-químicas de la fracción separada que contiene glucoglicerolípidos, se pueden usar procedimientos conocidos, tales como, por ejemplo, cromatografía HLB, tensiometría y determinación de la concentración micelar crítica (CMC).

[0144] Para la determinación cualitativa de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos pueden usarse procedimientos tales como la espectroscopia de emisión atómica y la cromatografía de capa delgada. Mediante esta última se puede realizar una separación en diferentes clases de compuestos con una diferenciación subsiguiente de los restos de azúcares presentes. Una delimitación estrecha y clara de las bandas que se presentan indica una alta uniformidad de los compuestos que se encuentran allí, mientras que una ampliación y una delimitación no clara de las bandas indica una heterogeneidad de los compuestos y especialmente de los restos de azúcares y por lo tanto es adecuada para la determinación de que se realizó una hidrólisis.

[0145] Abreviaturas:

FFA ácidos grasos libres

ppm partes por millón

na no aplicable/ no probado

n. u. no investigado

rpm revoluciones por minuto

Ejemplo 1:

Obtención de una fracción de glucolípidos después del desgomado de un aceite a presión

[0146] Para determinar si después de realizado el desgomado de un aceite a presión o la separación de los ácidos grasos que aún quedan en la fase lipoide por medio de una solución acuosa que contiene compuestos de guanidina, un aceite crudo filtrado de una presión helicoidal de nueces de jatrofa almacenadas, que fue obtenida a una temperatura de 60 °C con los valores de salida: contenido total de fósforo 248 ppm, FFA 1,8 %, calcio 70 ppm, se refinó según el siguiente esquema:

a) adición de 3% de una solución 0,5-1,0 molar de NaOH

b) adición de 3% de una solución de ácido fosfórico al 75%

a1) aceite refinado según la etapa a) adición de 0,3% de una solución 0,6 molar de arginina

b1) aceite refinado según la etapa b) adición de 0,3% de una solución 0,6 molar de arginina.

[0147] Las etapas antes descritas de aceites refinados se trataron luego adicionalmente con las siguientes etapas: c) adición de 5% de una solución de metasilicato de sodio al 10%

d) adición de 4% de una solución de carbonato de potasio al 15%.

[0148] Para los ensayos se examinaron en cada caso 200 ml de cada etapa de refinación. La introducción de las soluciones acuosas se realizó por medio de una homogeneización con un Ultrathurrax a 24.000 revoluciones por minuto durante 3 minutos con un movimiento circular manual del recipiente de almacenamiento a temperatura ambiente. Las emulsiones resultantes fueron centrifugadas en una centrífuga de vaso de vidrio con 3.800 rpm durante 5 minutos. La separación de fases subsiguiente se realizó por decantación o extracción de la fase superior.

[0149] En las fases oleosas, se determinó el contenido de fósforo, ácidos grasos libres y calcio y en las fases acuosas de las etapas de refinación c) y d) la cantidad de sustancia seca. Para ello se realizó una extracción del agua por secado al vacío. Además se calculó la capacidad de captación de agua de los aceites a1) y b1) refinados previamente así como de las fases lipoides reducidas (a1) c); a1) d); b1) c); b1) d)) obtenidas después del procedimiento de acuerdo con la invención, introduciendo en la fase obtenida agua desionizada (1 ml en 50 ml) con un Ultrathurrax (20.000 revoluciones por minuto durante 2 minutos) y a continuación se separó con 4000 rpm en una centrífuga. La determinación del contenido de agua de los aceites se realizó según el procedimiento de Karl-Fischer. Las mezclas de sólidos secadas se disolvieron en cloroformo, a continuación se realizó la centrifugación con 5000 rpm durante 5 minutos. Separación de la fase de solvente, la que a continuación se retiró completamente por medio de un evaporador al vacío. Se disuelven 20 mg de la cantidad de sólidos así obtenidos en 1 L de agua desionizada. De estas soluciones se retiraron muestras y se determinó la tensión superficial con un tensiómetro (K 100, Krüss, Alemania).

Resultados:

[0150] Los procedimientos de desgomado condujeron a una amplia eliminación de fosfolípidos hidratables, ácidos grasos libres y una clara reducción de iones de metales alcalinotérreos. Por el mezclado intensivo de acuerdo con la invención de una solución acuosa de los compuestos de sal de acuerdo con la invención se pudieron transferir y eliminar cantidades relevantes de subproductos lipófilos al medio acuoso. Las cantidades de sustancias secas obtenidas eran bastantes mayores que la suma calculada de cantidades residuales separadas de fosfolípidos, ácidos grasos y metales alcalinotérreos. De la masa seca obtenida se pueden transferir glicerolípidos en un solvente orgánico y obtenerse a partir de éste. Los glicerolípidos presentan en agua propiedades tensioactivas excepcionalmente buenas.

Ejemplo 2:

^{[0151] La fracción oleosa después de sedimentación del líquido de prensado del fruto de la palmera} Accocromia ^conlos datos característicos: contenido de fósforo 128 ppm, FFA 2,6% en peso, calcio 48,8 mg por kg de fase lipoide fueron examinados con respecto a las fracciones de glucolípidos que se pueden separar.

[0152] Para ello se trataron previamente 200 ml de la fase lipoide de acuerdo con el siguiente procedimiento: a) introducir agitando 5% de agua pobre en iones con un agitador propulsor con 2500 rpm bajo calentamiento a 50 °C durante 90 minutos

b) adición de 3% de una solución de ácido cítrico, la que es homogeneizada por medio de un Ultrathurrax durante 5 minutos con 24.000 rpm. Mientras tanto calentamiento de la emulsión a aprox. 50 °C.

[0153] Las fases lipoides refinadas con las etapas antes mencionadas fueron tratadas adicionalmente después de la centrifugación con las siguientes etapas:

c) adición de 8% de una solución de acetato de cobre al 15%

d) adición de 4% de una solución de hidrógeno-carbonato de sodio al 20%.

[0154] Las fases acuosas de c) y d) son homogeneizadas por medio de un Ultrathurrax durante 5 minutos con 24.000 revoluciones por minuto. Mientras tanto, tiene lugar calentamiento de la emulsión a aprox. 50 °C.

[0155] Las emulsiones resultantes fueron centrifugadas en una centrífuga de vaso de vidrio con 4.000 rpm durante 5 minutos. La separación de fases subsiguiente se realizó por decantación o extracción de la fase lipoide superior. Las fases lipoides de la etapa de refinación c) y d) se someten nuevamente al mismo procedimiento de refinación y son denominadas c1) y d1). A continuación se tratan las fases lipoides c1) resultantes de aquí con el procedimiento d) y d1) con el procedimiento c) de igual modo.

[0156] En las fases lipoides se determinó el contenido de fósforo, ácidos grasos libres y calcio y en las fases acuosas de las etapas de refinación c) y d) las cantidades de sustancias secas, además para las muestras mencionadas en último término se realizó la determinación del valor HLB. El análisis se realiza con una columna de GPC con múltiples solventes Asahipak GF-310 HQ. De esta manera se pueden diferenciar los tensioactivos iónicos y no iónicos y pueden ser clasificados según su valor de HLB.

[0157] Se realizó una cromatografía de capa delgada con placas de Silica Gel G. La separación se realiza con una mezcla de cloroformo/acetona/agua (30/60/2). El desarrollo se realizó con un reactivo de naftil etilendiamina, por medio del cual se pueden representar en color los restos de azúcares de los glicerolípidos.

Resultados:

[0158] La fase lipoide de un prensado de material de cáscara de pepita de palma presenta un alto contenido de subproductos no triglicéridos, que está compuesto en gran parte por glicerolglicéridos y esteroles y sólo una proporción reducida por fosfolípidos. También producen un enturbiamiento y alta viscosidad de la fase oleosa. Mediante un desgomado acuoso o ácido se redujeron sustancialmente los valores residuales para fósforo, ácidos grasos libres y iones de metales alcalinotérreos, pero las fases lipoides permanecieron aún altamente viscosas. Mediante la introducción intensiva de acuerdo con la invención de las soluciones acuosas de los compuestos de acuerdo con la invención se produjo una importante formación de emulsión con un aumento adicional de la viscosidad. Bajo la homogeneización en el mezclador de corte se volvió a fluidificar esta emulsión y por medio de centrifugación se puro separar en una fase lipoide levemente turbia y una masa semisólida blancuzca. La cantidad de separación en la primera etapa de separación era ampliamente independiente del procedimiento de desgomado realizado previamente y de la sal disuelta en las fases acuosas de acuerdo con la invención. Se demostró que aún con una segunda separación se podían separar cantidades relevantes de subproductos oleosos. Un nuevo mezclado intensivo de acuerdo con la invención de las sales con las soluciones acuosas, no dio prácticamente ninguna separación adicional de subproductos. Las cantidades de sólidos separadas en total están bastante por encima de la suma calculada de los fosfolípidos, ácidos grasos y iones metálicos también separados. Mediante una cromatografía de capa delgada se pudo excluir por un lado la separación conjunta de cantidades relevantes de triacilgliceroles. Por otro lado se pudieron determinar digalactosil— y monogalactosildiglicéridos así como esterilglicósidos. En el análisis de tensioactivos se mostró una determinación discreta con respecto a la existencia de tensioactivos iónicos con un valor de HLB de 13 y una clara determinación de tensioactivos no iónicos con un valor de HLB medio de 8 y 9 para la fase separada de c) y d).

Ejemplo 3

[0159] Una torta de prensado de semilla de lino se introdujo en una solución acuosa con un agregado de isopropanol al 5% y se homogeneizó con un mezclado de varilla. A continuación se agitó la masa tipo papilla durante 30 minutos a 50 °C. Luego sigue el agregado de una cantidad de triple de éter de petróleo. Después de una nueva homogeneización se realizó una separación de fases en la centrífuga. La fase orgánica separada (OP1) se reduce a la mitad de su volumen de partida por medio de un evaporador de vacío. Le siguen la adición de 5% en vol. de una mezcla de metanol-agua (95/5) a OP1, el mezclado de la solución y a continuación la separación de fases en la centrífuga. La fase de alcohol-agua levemente turbia se retira por pipeteado. La fase orgánica restante (OP2) se divide y las fracciones resultantes se proveen de las siguientes proporciones en volumen y concentraciones de las sustancias de acuerdo con la invención:

A) carbonato de potasio, B) dihidrógeno-carbonato de sodio, C) mezcla de metasilicato de sodio y potasio, D) acetato de calcio, E) acetato-tartrato de aluminio, F) borato de sodio, con las concentraciones de 3%, 10% y 15% y un agregado de volumen de 2%, 4% y 8%. A cada 100 ml de las fases orgánicas (OP2) se agregan las soluciones de acuerdo con la invención y se homogenizan con un Ultrathurrax a 24.000 revoluciones por minuto durante 30 segundos. Después de un tiempo de reposo de 3 minutos se realiza la separación de fases a 4.000 revoluciones por minuto durante un período de 10 minutos. A continuación se separa el sobrenadante (fase orgánica, OP3). La fase acuosa correspondiente (WP3) se mezcla intensivamente con 50 ml de n-heptano en cada caso, a continuación se realiza una separación de fases como se describió más arriba. La fase acuosa resultante (WP4) se seca con un evaporador de vacío y se pesa la cantidad de sustancia seca. De las sustancias secas de las mezclas con una adición de volumen de 10% se realizó para todas las sustancias examinadas un análisis del contenido de fósforo (análisis de absorción atómica) y nitrógeno (método de Kjeldahl). De cada mezcla se preparan de la sustancia seca cromatografías de capa delgada de acuerdo con el Ejemplo 2.

Resultados:

[0160] La mezcla de las fases orgánicas (OP2) con las soluciones acuosas de acuerdo con la invención A)-F) llevó a una formación importante de emulsión. Mediante centrifugación se pudo realizar una separación de fases obteniendo una fase acuosa (WP3) semisólida de color crema (a 2% en vol.) hasta líquida espesa (a 15% en vol.) y una fase orgánica (OP3) levemente a medianamente turbia. Después de la extracción de los di- y triacilglicéridos por medio de n-heptano de la WP3 y secado al vacío queda una masa altamente viscosa pegajosa amarronada. En ésta se encuentran sólo cantidades reducidas de compuestos que contienen nitrógeno (por ejemplo, esfingolípidos o proteínas) o compuestos que contienen fosfatos (por ejemplo, fosfolípidos). El análisis de cromatografía de capa delgada mostró en todas las muestras bandas, que correspondían a los digalactosil- y monogalactosildiglicéridos así como a los esterilglicósidos. De este modo se pudo demostrar que es posible una separación selectiva de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos de una fase lipoide de una fitoextracción con el procedimiento de acuerdo con la invención.

Ejemplo 4

^{[0161] Salvado de arroz (también} rice bran) ^{de un proceso estándar del procesamiento de arroz con un contenido de}aceite de 18% y una humedad de 35% se almacenó después de la obtención hasta la extracción de lípidos a -8 °C. Este material de partida se mezcló con 10% de agua y se agitó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se extrajo dos veces con n-hexano a 50 °C. La fase acuosa (WP1) se concentró por medio de un evaporador de vacío a una masa altamente viscosa. 100 g de ello fueron mezclados con 300 ml de una mezcla de cloroformo y acetona (80:20) y la fase orgánica (OP2) se separó mediante separación de fases por centrifugación. Cada 150 ml de la fase orgánica (OP2) se mezclaron, según la realización del ensayo con 20 ml en cada caso de A) carbonato de sodio, B) ortosilicato de sodio, C) acetato de cobre (Cu(OAc)²), D) tartrato de potasio o E) borato de potasio, las que se encontraban en cada caso como soluciones al 15% y se homogeneizaron con un Ultrathurrax durante 20 s. Después de un período de reposo de 60 segundos se realizó la separación de fases en una centrífuga a 5000 revoluciones por minuto durante 10 minutos. La fase orgánica (OP3) correspondiente se separó y la fase acuosa (WP3) correspondiente, que presentaba una consistencia altamente viscosa hasta semisólida, fue homogeneizada. De la fase acuosa homogeneizada (WP3) se separó en cada caso 1 ml como muestra, el resto se secó por medio de un evaporador de vacío y a continuación se pesó la cantidad de sustancia que quedó. La muestra separada se hidrolizó con metoxilato de sodio disuelto en metanol y a continuación se fraccionó por medio de cromatografía en gel de sílice. La fracción de glucosilceramida se disolvió en piridina y se agregó MTPA-Cl (cloruro a-metoxi-atrifluorometilfenilacético) a 0 °C. La solución se agitó y concentró durante 24 horas a temperatura ambiente. Después de una nueva purificación por medio de cromatografía en columna de gel de sílice con hexano/acetato de etilo (1:1) como medio de elución se obtuvo un sólido blanco después de retirar el medio de elución. Por medio de ESI-TOF-MS (espectroscopia de masas-tiempo de vuelo-electrospray) se realizó la determinación del éster de azúcar (m/z 1195,52 [M+H]⁺). Las fases orgánicas (OP3) fueron evaporadas completamente y los sólidos obtenidos fueron hidrolizados y procesados con el mismo procedimiento que se describió más arriba.

Resultados:

[0162] Con la extracción acuosa de OP2 pudieron separarse cantidades de sustancias de A) 8,4g, B) 11,7g, C) 10,2g, D) 9,9g, E) 10,1g. En las sustancias separadas, que estaban contenidas en las WP3 extraídas de OP2, se pueden determinar compuestos de azúcares después de la hidrólisis, de modo que se puede partir de la base de la presencia de diversos compuestos lipídicos que contienen azúcares (glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos). En las fases orgánica (OP3) no se pudo determinar prácticamente ningún compuesto de azúcares después de la hidrólisis, de modo que la separación de compuestos que contienen azúcares por la extracción acuosa con el procedimiento de acuerdo con la invención se realiza casi completamente.

Ejemplo 5:

[0163] Ensayo para la extracción y la obtención de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos a partir de extractos de plantas lipoides y su uso como auxiliar de panadería.

^{[0164] Pulpa de fruta prensada en frío de semillas de la palmera} Acrocomia ^{con una proporción de aceite de aprox.}

70% se diluye con una mezcla de acetona, diclorometano y hexano (relación 1:1:5) 1:1 y se mezcla bien mecánicamente. Después de esto se realizan dos etapas de extracción con una solución acuosa de arginina 0,4 molar con una adición en volumen de 4%. Le sigue la separación de fases por medio de centrifugación. Las fases lipoides se reúnen y se mezclan primero dos veces con una solución de carbonato de sodio al 10% con una adición en volumen de 4%, donde la primera adición se realiza con un agitador a 500 revoluciones por minuto durante 15 minutos y la segunda adición de una solución acuosa con una concentración y proporción en volumen idéntica se realiza con un Ultrathurrax a 18.000 revoluciones por minuto durante 5 minutos. La separación de fases se realiza por centrifugación con 5000 revoluciones por minuto durante 15 minutos. Las fases acuosas de las dos separaciones están compuestas en cada caso por una emulsión blanca viscosa. Las emulsiones se juntan y luego se secan por congelación. A continuación la masa secada por congelación se disuelve en una mezcla de cloroformo y metanol (5:1), seguido por una cromatografía en columna preparativa (Kieselgelmatrix 60). Luego se realiza la elución con acetona/cloroformo (5:1). El eluato se seca por medio de un evaporador de vacío. Se obtiene una masa seca de 56 g con una cantidad de partida de 800 g.

Con la fracción así obtenida que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos se realizan ensayos de horneado en formato pequeño de acuerdo con instrucciones estándar: formar una masa de 10 g de harina, 7% de levadura fresca, 2% de NaCl, 1 % de sacarosa, 0,002% de ácido ascórbico, agua, en la cual se disolvieron 30 mg de la masa, que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, con 1200 revoluciones por minuto a 20 °C durante 1 minuto. Luego se deja levar durante 40 minutos a 30 °C. Luego se hornea a 185 °C durante 10 minutos. A continuación se determina el volumen del producto horneado.

[0165] Para la comparación se realizaron ensayos de horneado bajo condiciones idénticas sin agregado de la masa que contenía glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y, para ello, con 0,3% de lecitina pura en polvo (Jean-Puetz, Alemania).

Resultados:

^{[0166] El jugo del prensado de la pulpa de la semilla de palmera del género} Acrocomia ^{representa una fase lipoide,}en la cual se encuentra una alta proporción de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, ceras, ácidos grasos libres y fibras. Por medio de un agregado de agua se obtiene una emulsión estable, la que no se puede romper por medio de medidas físicas. Se ha demostrado que es posible la separación de los ácidos grasos libres con solubilización simultánea de otras sustancias lipoides en solventes orgánicos por medio de una solución acuosa de arginina y que a continuación se puede separar una fracción que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos por medio de la extracción acuosa de acuerdo con la invención. Para ello, con la primera introducción de la solución con un mezclador intensivo se puede lograr una fuerte formación de una emulsión, la que condujo a un resultado de separación malo. Si se realizaba la introducción de la solución acuosa de acuerdo con la invención por un procedimiento de agitación con un mezclador propulsor, por medio de lo cual se evitaba la inclusión de aire, entonces se producía una clara formación de agregado, sin embargo, era posible una separación de fases. Después del empobrecimiento realizado de la fase lipoide, al repetir la introducción de la solución de sal de acuerdo con la invención usando un mezclador intensivo se produjo nuevamente una emulsión, la que se pudo separar esta vez por medio de una separación de fases centrífuga en una fase de aceite clara y una fase acuosas que contenía sólidos. De las fracciones reunidas de las fases acuosas separadas se pudo obtener después de la purificación preparativa una mezcla de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, que se pudo disolver fácilmente en agua. En los ensayos de horneado se pudo lograr un claro aumento del volumen del producto horneado en comparación con los resultados de horneado sin agregado de la masa que contenía glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos (+300%) y con respecto a un agregado de lecitina (+120%).

Ejemplo 6: Ensayos de la influencia de parámetros del proceso sobre la eficiencia de extracción y estabilidad de la hidrólisis de fracciones que contenían glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos

[0167] Aceite de camelina, obtenido por medio de una prensa helicoidal a 50 °C, se agitó intensivamente con 3% de agua desionizada durante 1 hora al 45%. A continuación se realizó la separación de la fase acuosa por medio de un separador. En cada caso 200 ml del aceite desgomado de agua (Aceite1) fueron agregados a 4% de una solución acuosa de hidrógeno-carbonato de potasio, metasilicato de sodio anhidro y acetato de calcio (en cada caso al 15%) y se homogeneizaron con un Ultrathurrax durante 5 minutos a 25.000 revoluciones por minuto. directamente a continuación se realizó una centrifugación a 5.000 revoluciones por minuto durante 10 minutos. Separación de la fase oleosa (Aceite2). Los residuos de aceite en la fase acuosa correspondiente (WP1) se retiran por medio de una adición de hexano y a continuación una nueva centrifugación y extracción de la fase orgánica. La fase acuosa (WP2) así obtenida tiene una consistencia altamente viscosa. La WP2 se agita y se fracciona en 2 partes de volumen iguales. En cada caso una fracción de volumen de la WP2 es sometida a secado al vacío, a continuación se determina el peso seco. En el aceite desgomado (Aceite1) así como en la fase oleosa (Aceite2) obtenida después de la extracción acuosa se realizaron ensayos de cromatografía en capa delgada. El aceite desgomado (Aceite1) mostró bandas claras y nítidamente delineadas, las que correspondían a los monogalactosildiglicéridos, digalactosildiglicéridos y los glucoesfingolípidos. En las fases oleosas (Aceite2), que fueron tratadas con las soluciones acuosas arriba mencionadas, prácticamente no se podían observan bandas. La segunda fracción de volumen de la WP2 se agitó intensivamente directamente después de la obtención con una mezcla de solventes (cloroformo/metanol/ácido acético, 90/8/2) y se separaron las fases orgánicas (OP1). Los solventes de las fases orgánicas obtenidas se retiraron por medio de secado al vacío y la sustancia seca que quedó de la fase orgánica (OP1), se disolvió en el eluyente para la cromatografía de capa delgada realizada a continuación. Los resultados de la cromatografía se determinaron con respecto a la presencia de bandas para los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos arriba mencionados y se analizó el ancho de las bandas. Los 100 ml de la fase de aceite 2 fueron homogeneizados con un Ultrathurrax junto con la solución de sal también usada previamente durante 5 minutos como se describió más arriba. A continuación se realiza como se describió anteriormente una separación de la fase acuosa y la determinación de la cantidad de sustancia seca de las fases acuosas.

[0168] Se realizaron diferentes modificaciones del ensayo en 100 ml de aceite cada vez con las soluciones acuosas de las sales arriba mencionadas de acuerdo con la invención. Para ello se variaron las temperaturas (35°, 55° y 75 °C) del proceso y la intensidad de la mezcla después del agregado de las soluciones acuosas de las sales arriba mencionadas de acuerdo con la invención. Además se usaron mezcladores con diferente intensidad de la introducción de la mezcla: A) Ultrathurrax 25.000 revoluciones por minuto, B) mezclador propulsor 2500 revoluciones por minuto, C) ultrasonido. Los procedimientos de mezclado se realizaron durante 5 minutos bajo control continuo de la temperatura.

[0169] En otra serie de ensayos se repitieron los ensayos con los mezcladores B) y C) para una duración del tratamiento de 10 y 20 minutos.

Resultados:

[0170] Con la introducción intensiva establecida en los ensayos previos de las soluciones acuosas con las sustancias de acuerdo con la invención se pudo demostrar en los ensayos de referencia realizados correspondientemente, que de esta manera se logra una separación casi completa de los glucoglicerolípidos y los glucoesfingolípidos. Además se demostró que en la cromatografía de capa delgada de las fracciones obtenidas de las fases acuosas (WP2) que las bandas aquí contenidas de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos estaban nítidamente delimitadas, es decir que no se produjo una hidrólisis relevante.

[0171] Las cantidades de sustancia seca separadas, que se obtuvieron después de una procedimiento de mezclado con un mezclador propulsor eran claramente más reducidas que las que se obtuvieron por un mezclado intensivo. Concordantemente se hallaron en el aceite así tratado aún cantidades reconocibles de glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos. Mediante un nuevo tratamiento, en el cual se realizó la introducción de las soluciones acuosas con un mezclador intensivo, se pudieron separar cantidades de sustancia seca, las que en la suma representaban con la separación realizada antes aproximadamente las cantidades de sustancia seca que se podrían separar con el mezclador intensivo.

[0172] Las bandas de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos en la separación cromatográfica de las sustancias obtenidas de la separación acuosa por medio de las soluciones de sal arriba mencionadas estaban presentes en todas las separaciones y con una duración del tratamiento de 5 minutos no mostraban un ensanchamiento, de modo que no se produjo una hidrólisis relevante. Mediante una prolongación del proceso de mezclado con el mezclador propulsor y se pudo aumentar la cantidad de sólidos extraíbles hasta la cantidad que se podría separar con un mezclado intensivo. Mientras que con una temperatura de mezclado de 35 °C sólo se observó con una duración de tratamiento de más de 10 minutos una indicación reducida de una hidrólisis de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos, se observaron ensanchamientos debido a hidrólisis de las bandas de los glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos usando temperaturas de tratamiento mayores ya después de 5 minutos y aumentaban cuando se seguía mezclando a esas temperaturas.

Ejemplo 7

[0173] Residuos de prensado de uvas fueron descompusieron en forma microbiana en un recipiente de fermentación bajo condiciones continuas de percolación y agregado de ácidos carboxílicos. Después de 7 días se tomó una muestra de 1 litro y se mezcló intensivamente con 1 litro de biodiesel (éster metílico C8 a C18). La mezcla se centrifugó y se separó la fase orgánica (OP1) muy turbia. Cada 100 ml de la fase orgánica (OP1) se mezclaron con 5 ml de hidrógeno-carbonato de magnesio o acetato de potasio (en cada caso solución acuosa al 10%) a 30 °C con un mezclador propulsor a 1000 revoluciones por minuto durante 7 minutos. Luego se realizó una centrifugación con 4.000 revoluciones por minuto durante 10 minutos. La fase orgánica (OP2) resultante se encuentra a continuación sólo levemente turbia, la fase acuosa (WP2) está compuesta por una masa semisólida de color crema. Después de una decantación cuidadosa de la fase orgánica (OP2) se vierte la fase acuosa (WP2) en 100 ml de cloroformo y se mezcla (OP3). Luego se agregan 2 ml de HCl 0,1 molar (en agua desionizada) a WP2 y se mezcla intensivamente. Luego se realiza la centrifugación y la extracción por pipeteado de la fase acuosa (WP3). Luego adición de 2 ml de una mezcla de metanol-agua (80:20). Mezclado y centrifugado de la mezcla. Después del pipeteado de la fase de metanol levemente turbia se retira el solvente de la fase orgánica (OP4) obtenida por medio de un evaporador de vacío y se pesa la sustancia seca. Se separan 5 |jg de aquí y se disuelven con una mezcla de cloroformo y metanol (90:10). A continuación coloca sobre una placa de cromatografía de capa delgada (Macherey Nagel, Alemania) y se desarrolla usando una mezcla de cloroformo:metanol:agua (70:28:2) como eluyente.

[0174] Desarrollo y coloración de las placas con un reactivo de anisaldehído (Sigma, Alemania) a 200 °C. Como referencia se aplicaron en forma separada concentrados sobre los mono- y diglucoglicerolípidos vegetales así como XX. Los compuestos separados que contenían azúcares pueden ser clasificados de acuerdo con la reacción de color que se produjo: glucoglicerolípidos - verde/azul verdoso, glucoesfingolípidos - azul, glicerofosfolípidos - gris o violeta, glicoglicerofosfolípidos hidrolizados - rojo intenso o violeta.

Resultados:

[0175] De una mezcla de sustancias lipoide, que fue transferida a una fase orgánica, se pudieron separar por medio del procedimiento de extracción acuosa de acuerdo con la invención cantidades relevantes de los lípidos aquí disueltos en una fase acuosa (con carbonato de magnesio 8 g y con acetato de potasio 7 g). Por medio de cromatografía de capa delgada se pudo identificar la presencia de ceramidas, esfingolípidos y glucoesfingolípidos así como de glucoglicerolípidos, donde para estos últimos se pudieron determinar tanto monoglucosilglicerolípidos como diglucosilglicerolípidos. Se observaron solo indicios de bandas que podrían corresponder a glicofosfolípidos.

[0176] La CMC (concentración crítica de formación de micelas) para ambos extractos fue de 55 mg/l. La tensión superficial calculada era de 28,1 mN/m.

Ejemplo 8: Etapas individuales

[0177] Para las etapas descritas a continuación se usaron 200 kg de fase lipoide (aceite de camelina prensada en frío).

Ejemplo 8A: Etapa A2') Tratamiento con solución de ácido cítrico:

[0178] La fase lipoide en el tanque de reserva se calienta a 60 °C y a continuación se mezcla con 0,1% en peso de ácido cítrico (al 33%, a temperatura ambiente) y se agita intensivamente durante 30 segundos y luego se agita durante 10 min a aprox. 100 a 150 rpm. A continuación se agrega 0,3% en peso de agua.

[0179] La mezcla de fase lipoide y ácido cítrico diluido se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un causal de 200 l/h la fase acuosa de la fase oleosa. La fase oleosa se transfiere para su procesamiento ulterior a otro tanque de reserva (tanque de reserva 2).

Ejemplo 8B: Etapa A2) Tratamiento con agua:

[0180] La fase lipoide en el tanque de reserva se calienta a 65 °C y a continuación se mezcla con 3% en peso de agua (a temperatura ambiente) y se agita intensivamente durante 30 segundos y luego se agita durante 10 min a aprox. 100 a 150 rpm.

[0181] La mezcla de fase lipoide y agua se bombea a continuación en el divisor-separador y así se separa con una caudal de 200 l/h la fase acuosa de la fase oleosa. La fase oleosa se transfiere para su procesamiento ulterior a otro tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 2).

Ejemplo 8C: Etapa B1) Tratamiento por medio de una solución de hidrógeno-carbonato de sodio / acetato de sodio:

[0182] La fase lipoide se lleva a una temperatura del proceso de 45 °C a 50 °C y se agrega un volumen suficiente de una solución al 8% de hidrógeno-carbonato de sodio / acetato de sodio. A continuación se agita intensivamente una fracción (A)) por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y luego se agita durante 10 min normalmente. Una segunda fracción se homogeneiza con el mezclador intensivo (B)) de acuerdo con la invención durante 2 minutos.

[0183] La mezcla de A) se bombea a continuación en un divisor-separador estándar y se separa así con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa de la fase oleosa. La fase oleosa se transfiere para su procesamiento ulterior a un tanque de almacenamiento.

[0184] La mezcla de B) se bombea a continuación en el divisor-separador de acuerdo con la Figura 3 y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa de la fase oleosa. La fase oleosa se transfiere para su procesamiento ulterior al tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 1).

Ejemplo 8D: Etapa E1) Tratamiento con solución de arginina

[0185] La fase lipoide se lleva a una temperatura del proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de una solución de arginina 0,6 M, de modo que se tienen 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres. A continuación se agita cuidadosamente durante 10 min.

[0186] La mezcla se bombea a continuación al divisor-separador y así se separa con un caudal de 200 l/h la fase acuosa de la fase oleosa. La fase oleosa se reúne.

Resultados:

[0187] La fase oleosa presentaba después de las etapas del procedimiento A2 una clara turbidez y después de A2') una leve turbidez y tenía en el análisis químico valores para: FFA 0,31%, contenido de H²O 0,55 %, contenido de hierro 0,23 ppm, contenido de fósforo 34 ppm después de A2) y para FFA 0,42%, contenido de H²O 0,30 %, hierro 0,15 ppm, fósforo 19,6 ppm después de A2').

Por el mezclado intensivo con un mezclador estándar en el marco de la etapa de procedimiento B1) se produjo una clara formación de una emulsión, la que estaba ligada a un aumento de la viscosidad. Una introducción en un divisor-separador estándar sólo fue posible por un aumento de la temperatura en el recipiente de presentación a 60 °C. La fase acuosa obtenida con el divisor-separador estándar tiene un color levemente amarillo y una estructura tipo crema.

La determinación de la cantidad de substancia seca de las fases acuosas dio valores de 2,3 kg para la separación después de la etapa del procedimiento A2) y 2,1 kg para la separación después de la etapa del procedimiento A2'). Para ello se mostró que aprox. 20% del residuo libre de agua correspondía a triacilglicéridos. Las fases oleosas eran claramente turbias.

[0188] Con el mezclador intensivo de acuerdo con la invención de acuerdo con la Figura 3, que se usó en el marco de la etapa del procedimiento B1), no se produjo prácticamente ninguna formación de emulsión de la fase lipoide. La introducción de la fase lipoide mezclada así sin inclusión de aire en el separador también fue posible sin problemas bajo condiciones de bajas temperaturas. Las fases acuosas obtenidas por el separador tenían un color blancuzco y una estructura lechosa.

La determinación de la cantidad de substancia seca de las fases acuosas dio valores de 2,1 kg para la separación después de la etapa del procedimiento A2) y 2,0 kg para la separación después de la etapa del procedimiento A2'). Las fases oleosas eran discretamente turbias.

En el análisis químico se determinaron los siguientes valores:

B1) con un mezclador/separador estándar: FFA 0,21%, contenido de H²O 0,65%, contenido de hierro 0,15 ppm, contenido de fósforo 20 ppm después de A2) y FFA 0,22%, contenido de H²O 0,52%, hierro 0,1 ppm, fósforo 15 ppm después de A2');

B1) con el mezclador/separador de acuerdo con la Figura 3: FFA 0,20%, contenido de H²O 0,35 %, contenido de hierro 0,14 ppm, contenido de fósforo 16 ppm después de A2) y FFA 0,18%, contenido de H²O 0,28%, hierro 0,1 ppm, fósforo 12 ppm después de A2').

Con la fase lipoide, que se obtuvo del procedimiento B1) con el sistema de mezclador/separador de acuerdo con la Figura 3, se realizó la etapa del procedimiento E1). La mezcla de la solución acuosa fue posible sin una formación de emulsión relevante. Las fases lipoides así tratadas pudieron ser separadas sin problema con el separador convencional a una fase oleosa clara y una fase acuosa turbia.

[0189] En el análisis químico se determinaron los siguientes valores:

Fase lipoide de la etapa del procedimiento A2): FFA 0,13%, contenido de H²O 0,25%, contenido de hierro 0,1 ppm, contenido de fósforo 5 ppm;

Fase lipoide de la etapa del procedimiento A2'): FFA 0,12%, contenido de H²O 0,20%, hierro 0,1 ppm, fósforo 3 ppm.

[0190] Todos los datos en porcentaje dados en la presente (%) se refieren a porcentajes en peso (% en peso) en tanto no se indique de otra manera.

Ejemplo 9: Procedimiento de dos etapas

Ejemplo 9A: Etapas B1) y E1)

[0191] 130 kg de aceite de colza (contenido de FFA 1,40%, contenido de H²O 0,17%, contenido de hierro 0,44 ppm, contenido de fósforo 65,0 ppm) se llenan en el tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 1).

[0192] A continuación se lleva el aceite crudo en el tanque de almacenamiento 1 a una temperatura del proceso de 45 °C y se mezcla con 3,9 kg de una solución al 10% de metasilicato de sodio. A continuación se agita por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos intensivamente y luego durante 10 min normalmente.

[0193] La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa sí con un caudal de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se reúne y se almacena hasta el uso ulterior. La fase oleosa A se lleva de nuevo al tanque de almacenamiento 1 para su procesamiento ulterior. 125 ml de la fase oleosa A se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,10%, contenido de H²O 0,15 %).

[0194] La fase oleosa A se lleva a una temperatura del proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de una solución de arginina de 0,6 M, de tal modo que se tienen 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y durante la adición no se produce una inclusión de aire. A continuación se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B y la fase oleosa B se recogen separadamente. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,1%, contenido de H²O 0,2 %).

Ejemplo 9B: Etapas B1) y E1)

[0195] 200 a 350 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,42%, contenido de H²O 0,03 %, contenido de hierro 0,42 ppm, contenido de fósforo 66,6 ppm) se llenan en el tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 1).

[0196] El aceite crudo se lleva a una temperatura del proceso de 45 °C a 50 °C y se agrega un volumen suficiente de una solución al 8% de hidrógenocarbonato de sodio. A continuación se agita intensivamente por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y luego se agita normalmente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en un divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recoge y se almacena hasta su uso ulterior. La fase oleosa A se transfiere nuevamente al tanque de almacenamiento 1 para su procesamiento ulterior. 125 ml de la fase oleosa A se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,31 %, contenido de H²O 0,30 %, contenido de hierro 0,15 ppm, contenido de fósforo 19,6 ppm).

[0197] La fase oleosa A se lleva a una temperatura del proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de una solución de arginina 0,6 M, de tal modo que se presentan 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y durante la adición no se produce una inclusión de aire. A continuación se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B y la fase oleosa C se recogen separadamente. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,13 %, contenido de H²O 0,41 %, contenido de hierro 0,09 ppm, contenido de fósforo 12,8 ppm).

Ejemplo 9C: Etapas B1) y E1)

[0198] 200 a 350 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,42%, contenido de H²O 0,01 %, contenido de hierro 0,42 ppm, contenido de fósforo 67,9 ppm) se llenaron en un tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 1).

[0199] El aceite crudo se lleva a una temperatura del proceso de 45 °C a 50 °C y se agrega un volumen suficiente de una solución al 8% de acetato de sodio. A continuación se agita intensivamente por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y luego se agita normalmente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recoge y se almacena hasta su uso ulterior. La fase oleosa A se transfiere para su procesamiento ulterior de nuevo al tanque de almacenamiento 1. 125 ml de la fase oleosa A se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,42%, contenido de H²O 0,55 %, contenido de hierro 0,23 ppm, contenido de fósforo 34 ppm).

[0200] La fase oleosa A se lleva a una temperatura del proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de una solución de arginina 0,6 M, de modo que se presentan 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y durante la adición no se produce una inclusión de aire.

[0201] A continuación se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B y la fase oleosa B se recogen separadamente. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,16%, contenido de H²O 0,45 %, contenido de hierro 0,1 ppm, contenido de fósforo 11,8 ppm). Ejemplo 9D: Etapas B1) y E1)

[0202] 200 a 350 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,43%, contenido de H²O 0,12 %, contenido de hierro 1,15 ppm, contenido de fósforo 57,4 ppm) se llenan en el tanque de almacenamiento (tanque de almacenamiento 1).

[0203] El aceite crudo se lleva a una temperatura del proceso de 45 °C a 50 °C y se agrega un volumen suficiente de una solución al 8% de carbonato de sodio. A continuación se agita intensivamente por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y luego se agita normalmente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y así se separa con un caudal de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recoge y se almacena hasta su uso ulterior. La fase oleosa A se transfiere nuevamente al tanque de almacenamiento 1 para su procesamiento ulterior. 125 ml de la fase oleosa A se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,26%, contenido de H²O 0,25 %, contenido de hierro 0,16 ppm, contenido de fósforo 18,75 ppm).

[0204] La fase oleosa A se lleva a una temperatura del proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de una solución de arginina 0,6 M, de tal modo que se presentan 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y durante la adición no se producen inclusiones de aire. A continuación se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea a continuación en el divisor-separador y se separa así con un caudal de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B y la fase oleosa B se recogen separadamente. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para el análisis químico (contenido de FFA 0,11%, contenido de H²O 0,32 %, contenido de hierro 0,11 ppm, contenido de fósforo 9,0 ppm).

[0205] La siguiente Tabla 3 describe el tipo y el aspecto de la fase lipoide reducida como también de la fase acuosa después de la separación por medio de centrifugación después de la Etapa B1) y antes de la Etapa E1) en la serie de ensayos con aceite de colza (contenido de FFA 0,43%, contenido de H²O 0,12 %, contenido de hierro 1,15 ppm, contenido de fósforo 57,4 ppm) de acuerdo con las instrucciones arriba mencionadas:

Ejemplo 10: Procedimiento en tres etapas

Ejemplo 10A: etapas A2) y B1) y E1)

[0206] 130 kg de aceite de colza (contenido de FFA 1,40%, contenido de H²O 0,17%, contenido de hierro 0,44 ppm, contenido de fósforo 65,0 ppm) se incorporan en el tanque de alimentación (tanque de depósito 1).

[0207] Luego se calienta la fase lipoide en el tanque de alimentación 1 hasta 50 °C a 55 °C y después se mezcla con 6 kg de agua y se agitó intensamente durante 30 segundos y después de ello, se agitó durante 10 min a aproximadamente 100 a 150 rpm. La mezcla de fase lipoide y agua se bombea luego en un divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recolecta y se almacena hasta el posterior uso. La fase oleosa A se pasa para el ulterior procesamiento a otro tanque de alimentación (tanque de alimentación 2). 125 ml de la fase oleosa A se usaron para análisis químico (contenido de FFA 1,05%, contenido de H²O 0,18 %).

[0208] 49 kg de la fase oleosa A así obtenida se llevaron a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se añadieron 1,5 kg de solución al 10% de metasilicato de sodio. Luego se agitó intensamente sin entrada de aire durante 30 segundos por medio de un mezclador Ystral y luego se agitó durante 10 min de modo normal sin entrada de aire.

[0209] La mezcla resultante se bombea luego en un divisor-separador y así se separó con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B se recolecta y se usa para la extracción de los glucoglicerolípidos separados. Por extracción mediante cloroformo se obtuvieron los glucoglucerolípidos de la fase acuosa B. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,13%, contenido de H²O 0,2 %).

[0210] La fase oleosa B se lleva a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de solución 0,6 M de arginina, de modo que haya 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y en la adición, no se produjera una entrada de aire. Luego se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa C de la fase oleosa C. La fase acuosa C y la fase oleosa C se recolectan por separado. 125 ml de la fase oleosa C se usaron para análisis químico. El contenido de ácidos grasos libres se pudo reducir al 0,14% en peso. Además, se redujo la cantidad de potasio, fósforo, hierro, así como calcio a menos de 5 ppm (K < 5 ppm, P < 5 ppm, Fe < 5 ppm, Ca < 5 ppm).

Ejemplo 10B: etapas A2') y B1) y E1)

[0211] Aproximadamente 200 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,5%, contenido de H²O 0,04%, contenido de hierro 0,63 ppm, contenido de fósforo 74,8 ppm) se incorporan en el tanque de alimentación (tanque de alimentación 1).

[0212] Luego se calienta la fase lipoide en el tanque de alimentación 1 hasta 40 °C a 60 °C y luego se mezcla con 0,1% en peso de ácido cítrico (al 33%, hasta temperatura ambiente) y se agita intensamente durante 30 segundos y luego durante 10 min a aproximadamente 100 a 150 rpm. Después se añade 0,3% en peso de agua.

[0213] La mezcla de fase lipoide y ácido cítrico diluido se bombea luego en el divisor-separador y luego se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recolecta y se almacena hasta el ulterior uso. La fase oleosa A se pasa para el posterior procesamiento a otro tanque de alimentación (tanque de alimentación 2). 125 ml de la fase oleosa A se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,48%, contenido de H²O 0,33 %, contenido de hierro 0,13 ppm, contenido de fósforo 15,9 ppm).

[0214] La fase oleosa A así obtenida se lleva a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se añade un volumen suficiente de solución al 8% de hidrógeno-carbonato de sodio, de modo que se logra un grado teórico de neutralización de los ácidos grasos libres del 90%. Luego se agita intensamente por medio de mezclador Ystral durante 30 segundos pero sin entrada de aire, es decir, sin entrada de gas, y luego se agita durante 10 min de modo normal pero sin ingreso de aire, es decir, sin incorporación de gas. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B.

La fase acuosa B se recolecta. En ella, se comprobaron esterilglucósidos por medio de DC. La fase oleosa B se vuelve a pasar para el ulterior procesamiento al tanque de alimentación 1. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,39%, contenido de H²O 0,41 %, contenido de hierro 0,06 ppm, contenido de fósforo 4,08 ppm).

[0215] La fase oleosa B se lleva a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de solución 0,6 M de arginina, de modo que haya 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y en la adición, y no se produce una entrada de aire. Luego se agita cuidadosamente durante 10 min. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se para con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa C de la fase oleosa C. La fase acuosa C y la fase oleosa C se recolectan por separado. 125 ml de la fase oleosa C se usaron para análisis químico. El contenido de ácidos grasos libres se pudo reducir al 0,15% en peso. Además, se redujo la cantidad de potasio y calcio por debajo de 0,5 ppm (K < 1 ppm; Ca < 1 ppm) y la cantidad de fósforo hasta 0,8 ppm y las cantidades de hierro se redujeron a 0,02 ppm.

Ejemplo 10C: Etapas A2') y B1) y E1)

[0216] Aproximadamente 250 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,42%, contenido de H²O 0,08%, contenido de hierro 0,43 ppm, contenido de fósforo 70 ppm) se incorporan en el tanque de alimentación (tanque de alimentación 1).

[0217] Luego se calienta la fase lipoide en el tanque de alimentación 1 hasta 50 °C a 55 °C y luego se mezcla con 0,1% en peso de ácido cítrico (al 33%, hasta temperatura ambiente) y se agita intensamente durante 30 segundos y luego durante 10 min a aproximadamente 100 a 150 rpm. Después se añade 0,3% en peso de agua.

[0218] La mezcla de fase lipoide y ácido cítrico diluido se bombea luego en el divisor-separador y luego se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recolecta y se almacena hasta el ulterior uso. La fase oleosa A se pasa para el posterior procesamiento a otro tanque de alimentación (tanque de alimentación 2). 125 ml de la fase oleosa A se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,4%, contenido de H²O 0,30%, contenido de hierro 0,13 ppm, contenido de fósforo 17 ppm).

[0219] La fase oleosa A así obtenida se lleva a una temperatura de proceso de 45 °C a 50 °C y se añade un volumen suficiente de solución al 8% de acetato de sodio, de modo que se logra un grado teórico de neutralización de ácidos grasos libres del 90%. Luego se agita intensamente por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y preferentemente sin incorporación de gas y luego se agita durante 10 min de modo normal y preferentemente sin incorporación de gas. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B.

En la fase acuosa B se comprobaron esterilglucósidos por medio de DC. La fase oleosa B se vuelve a pasar para el ulterior procesamiento al tanque de alimentación 1. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,37%, contenido de H²O 0,40, contenido de hierro 0,07 ppm, contenido de fósforo 6 ppm).

[0220] La fase oleosa B se lleva a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de solución 0,6 M de arginina, de modo que haya 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y en la adición, no se produjera una entrada de aire. Luego se agita cuidadosamente durante 10 min y se agita sin ingreso de aire. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa C de la fase oleosa C. La fase acuosa C y la fase oleosa C se recolectan por separado. 125 ml de la fase oleosa C se usaron para análisis químico. El contenido de ácidos grasos libres se pudo reducir hasta el 0,12% en peso. Además, se redujo la cantidad de potasio y de calcio hasta por debajo de 5 ppm (K < 5 ppm; Ca < 5 ppm) y la cantidad de fósforo se redujo hasta 1,1 ppm y las cantidades de hierro, hasta 0,05 ppm.

Ejemplo 10D: Etapas A2') y B1) y E1)

[0221] Aproximadamente 300 kg de aceite de colza (contenido de FFA 0,47%, contenido de H²O 0,04 %, contenido de hierro 0,53 ppm, contenido de fósforo 85,1 ppm) se incorporan en el tanque de alimentación (tanque de alimentación 1).

[0222] Luego se calienta la fase lipoide en el tanque de alimentación 1 hasta aproximadamente 70 °C y luego se mezcla con 0,1% en peso de ácido cítrico (al 33%, hasta temperatura ambiente) y se agita intensamente durante 30 segundos y luego durante 10 min a aproximadamente 100 a 150 rpm. Después se añade 0,3% en peso de agua.

[0223] La mezcla de fase lipoide y ácido cítrico diluido se bombea luego en el divisor-separador y luego se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa A de la fase oleosa A. La fase acuosa A se recolecta y se almacena hasta el ulterior uso. La fase oleosa A se pasa para el posterior procesamiento a otro tanque de alimentación (tanque de alimentación 2). 125 ml de la fase oleosa A se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,46%, contenido de H²O 0,53 %, contenido de hierro 0,13 ppm, contenido de fósforo 16,2 ppm).

[0224] La fase oleosa A así obtenida se lleva a una temperatura de proceso de 40 - 45 °C y se añade un volumen suficiente de solución al 8% de carbonato de sodio, de modo que se logra un grado teórico de neutralización de los ácidos grasos libres del 90%. Luego se agita intensamente por medio de un mezclador Ystral durante 30 segundos y preferentemente se agita sin ingreso de gas y luego se agitó preferentemente durante 10 min de modo normal sin entrada de gas. La mezcla resultante se bombea luego en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa B de la fase oleosa B. La fase acuosa B se recolecta y se usa para la extracción de los glucoglicerolípidos separados. Por extracción mediante cloroformo se obtuvieron los glucoglucerolípidos de la fase acuosa B. La fase oleosa B se vuelve a pasar para el ulterior procesamiento al tanque de alimentación 1. 125 ml de la fase oleosa B se usaron para análisis químico (contenido de FFA 0,24%, contenido de H²O 0,48 %, contenido de hierro 0,03 ppm, contenido de fósforo 2,25 ppm).

[0225] La fase oleosa B se lleva a una temperatura de proceso de 40 °C a 45 °C y se mezcla con un volumen de solución 0,6 M de arginina, de modo que haya 1,5 moles de arginina por mol de ácidos grasos libres y en la adición, no se produjera una entrada de aire. Luego se agita cuidadosamente durante 10 min y sin entrada de aire. La mezcla resultante se bombea luego anschlieliend sin entrada de aire en el divisor-separador y así se separa con un rendimiento de 200 l/h la fase acuosa C de la fase oleosa C. La fase acuosa C y la fase oleosa C se recolectan por separado. 125 ml de la fase oleosa C se usaron para análisis químico. El contenido de ácidos grasos libres se pudo reducir hasta el 0,10% en peso. Además, se redujo la cantidad de potasio y calcio hasta por debajo de 0,4 ppm (K < 0,4 ppm; Ca < 0,5 ppm) y la cantidad de fósforo se redujo hasta 0,8 ppm y las cantidades de hierro, hasta 0,02 ppm.

Ejemplo 10E:

[0226] De acuerdo con el Ejemplo 10D), se ensayó el aceite de colza como fase lipoide. Los datos son en mg por kg de fase lipoide además de FFA. En el caso de FFA, los datos son en % en peso. “Crudo” designa los valores de partida de la fase lipoide. A2') significa los valores después de la etapa A2'). B1) significan los valores después de la etapa B1). E1) significa los valores después de la etapa E1).

P F C M

Ejemplo 10F:

[0227] De acuerdo con el Ejemplo 10C), se ensayó el aceite de colza como fase lipoide. Los datos son en mg por kg de fase lipoide además de FfA. En el caso de FFA , los datos son en % en peso. “Crudo” designa valores de partida de la fase lipoide. A2') significa los valores después de la etapa A2'). B1) significa los valores después de la etapa B1). E1) significa los valores después de la etapa E1).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para la separación con hidrólisis limitada de glucoglicerolípidos de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y que forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógeno-carbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa,

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende después de la etapa D1) la siguiente etapa D2):

D2) obtención de los glucoglicerolípidos a partir de la fase separada acuosa rica en glucoglicerolípidos.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 que comprende después de la etapa D1) o, siempre que exista, después de la etapa D2), la siguiente etapa E1):

E1) agregar a la fase lipoide pobre en glicoglicerolípidos una fase acuosa que contiene al menos un compuesto que tiene al menos un grupo amidino y/o al menos un grupo guanidino, seguido de la mezcla de la fase pobre en glicoclicerolípidos lipoides y la fase acuosa y separar la fase acuosa.

4. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 3, en donde los glucoglicerolípidos son glucoglicerolípidos lipofílicos con un índice de lipofilicidad GL de 1,0 < GL < 6,0, en donde el índice de lipofilicidad GL se calcula según la siguiente fórmula:

5. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 4, en donde los glucoglicerolípidos son glucosildiacilgliceroles, glucosilacilalquilgliceroles y glucosildialquilgliceroles.

6. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 5 para obtener glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos con hidrólisis limitada de una fase lipoide, que contiene glucoglicerolípidos y glucoesfingolípidos y acilglicéridos, que comprende las etapas de:

A1) suministro de una fase lipoide que contiene glucoglicerolípidos, glucoesfingolípidos y acilglicéridos, B1) mezcla de la fase lipoide con una fase acuosa, que contiene aniones de al menos una sal, que posee en agua a 20 °C una solubilidad de al menos 30 g/L y forma con disociación en agua carbonato (CO³²-), hidrógenocarbonato (HCO³-), metasilicato (SiO³²-), ortosilicato (SiO⁴⁴-), disilicato (Si²O⁵²-), trisilicato (Si³O⁷²-), acetato (CH³COO-), borato (BO³³-) y/o tartrato (C⁴H⁴O⁶²-),

C1) mezcla de la fase lipoide y de la fase acuosa, y

D1) separación de la fase acuosa rica en glucoglicerolípidos y/o glucoesfingoípidos y obtención de una fase lipoide pobre en glucoglicerolípidos y/o pobre en glucoesfingolípidos.

7. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6, en donde los glucoesfingolípidos son glucoesfingolípidos lipofílicos con un índice de lipofilicidad SL de 1,0 < SL < 7,0, en donde el índice de lipofilicidad SL se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula:

8. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 7, en donde los glucoglicerolípidos no contienen grupos carboxilato, sulfato, sulfonato o fosfato.

9. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 8, en donde la fase lipoide en la etapa A1) también contiene esterilglucósidos, que se separan en la fase acuosa en la etapa D1).

10. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, en donde en la etapa B1) se añade en la fase lipoide una fase acuosa que contiene cationes de una sal que tiene una solubilidad de al menos 30 g/l en agua a 20°C y en la disociación en agua forma Mg2+, Ca2+, Ti2+, Ti4+, Co2+, Co3+, Ni2+, Cu2+, Zn2+, Sn2+ o Sn4+.

11. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que, si los fosfolípidos y/o los ácidos grasos están contenidos en la fase lipoide, se pueden obtener fases ricas en glicoglicerolípidos libres de fosfolípidos y/o ácidos grasos si el siguiendo el paso A2) o A2 ') se realiza después de la etapa A1) y antes de la etapa B1)

A2) agregar agua como fase acuosa a la fase lipoide, seguido de mezclar la fase lipoide y la fase acuosa y separar la fase acuosa,

o

A2') agregar una solución acuosa de ácido carboxílico o una solución acuosa de un ácido inorgánico que tiene un pH entre 3,0 y 5,0 como fase acuosa a la fase lipoide, seguido de la mezcla de la fase lipoide y la fase acuosa y separar la fase acuosa.

12. El método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la fase lipoide y la fase acuosa se mezclan intensivamente en la etapa C1) y/o A2) o A2').