ES2755361T3 - Composición inmunogénica - Google Patents
Composición inmunogénica Download PDFInfo
- Publication number
- ES2755361T3 ES2755361T3 ES10746311T ES10746311T ES2755361T3 ES 2755361 T3 ES2755361 T3 ES 2755361T3 ES 10746311 T ES10746311 T ES 10746311T ES 10746311 T ES10746311 T ES 10746311T ES 2755361 T3 ES2755361 T3 ES 2755361T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- antigen
- particle
- plga
- immunogenic composition
- adjuvant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 143
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 143
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 143
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims abstract description 123
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 121
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 121
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 claims abstract description 103
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 225
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 18
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 84
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 53
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 53
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 34
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 28
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 24
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 18
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 18
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 17
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 17
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 16
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 description 14
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 14
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 12
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 11
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 11
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 11
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 7
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 6
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical group CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 5
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 5
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 5
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- IEJIGPNLZYLLBP-UHFFFAOYSA-N dimethyl carbonate Chemical compound COC(=O)OC IEJIGPNLZYLLBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 4
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 3
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 3
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 3
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 2,2,5,8-tetramethyl-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound C1CC(C)(C)OC2=C1C(C)=C(O)C=C2C MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N Diethyl carbonate Chemical compound CCOC(=O)OCC OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 2
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002844 continuous effect Effects 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N hexamethyldisilazane Chemical compound C[Si](C)(C)N[Si](C)(C)C FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N isopropanol acetate Natural products CC(C)OC(C)=O JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940011051 isopropyl acetate Drugs 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 2
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 2
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- WBHHMMIMDMUBKC-QJWNTBNXSA-M ricinoleate Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C/CCCCCCCC([O-])=O WBHHMMIMDMUBKC-QJWNTBNXSA-M 0.000 description 2
- 229940066675 ricinoleate Drugs 0.000 description 2
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012974 tin catalyst Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241001428800 Cell fusing agent virus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 206010019771 Hepatitis F Diseases 0.000 description 1
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241001662443 Phemeranthus parviflorus Species 0.000 description 1
- 229920000436 Poly(lactide-co-glycolide)-block-poly(ethylene glycol)-block-poly(lactide-co-glycolide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001273 Polyhydroxy acid Polymers 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000011195 Profilin Human genes 0.000 description 1
- 108050001408 Profilin Proteins 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000005233 alkylalcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N ammonium lauryl sulfate Chemical compound [NH4+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940063953 ammonium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- QSKWJTXWJJOJFP-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethoxyethane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCOCC QSKWJTXWJJOJFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N dipropylene glycol Chemical compound OCCCOCCCO SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M sodium;octadecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 238000013269 sustained drug release Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N tin(2+) Chemical compound [Sn+2] IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004350 tyrosine-rich amelogenin polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000009834 vaporization Methods 0.000 description 1
- 230000008016 vaporization Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6025—Nucleotides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Composición inmunogénica que comprende como ingrediente eficaz un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante compuesta por un polímero anfifílico cuyo segmento hidrófobo es un ácido poli(láctico-co-glicólico), y el segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición inmunogénica
SECTOR TÉCNICO
La presente invención se refiere a una composición inmunogénica que comprende como un ingrediente eficaz un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante compuesta por uno o varios polímeros anfifílicos.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
Para mejorar la capacidad de activación inmunitaria de un antígeno, se utiliza un adyuvante junto con el antígeno. Aunque se sabe que el adyuvante completo de Freund (CFA (“Complete Freund Adjuvant”)) tiene un excelente efecto como adyuvante, el CFA está compuesto por bacterias muertas y una emulsión de aceite y, por lo tanto, tiene fuertes efectos secundarios, tales como una fuerte reacción inflamatoria y formación de hinchazón ulcerosa (granuloma) en el sitio de administración. Por lo tanto, no está permitida la utilización de CFA para humanos en vista de la seguridad. Los adyuvantes cuya administración a humanos está permitida son limitados. Entre los ejemplos de adyuvantes cuya administración a humanos está permitida se incluyen adyuvantes de hidróxido de aluminio, pero sus capacidades de activación inmunológica no son necesariamente suficientes y, por lo tanto, deben administrarse repetidamente para permitir la adquisición de inmunidad. Por lo tanto, se ha exigido el desarrollo de una composición inmunogénica utilizando un adyuvante eficaz y fuerte, composición que pueda utilizarse para humanos.
Para el desarrollo de un nuevo adyuvante destinado a conseguir una capacidad elevada de activación inmunológica, se ha intentado un procedimiento en el que se encapsula un antígeno en una micropartícula. Se ha informado que la administración de un antígeno en micropartículas mejora las reacciones inmunológicas, tales como la producción de anticuerpos, en comparación con el caso de la administración de un antígeno solo, pero el efecto de su administración no es necesariamente elevado, y solo se ha informado de un efecto casi al mismo nivel que en el caso del adyuvante de hidróxido de aluminio mencionado anteriormente. Se considera que esto se debe a la dificultad en la encapsulación eficaz de las moléculas de antígeno hidrófilas, tales como las proteínas, en las micropartículas estudiadas hasta ahora, tales como micropartículas que comprenden copolímeros de ácido poliláctico-ácido poliglicólico hidrófobos, a la vez que se mantienen las estructuras de las moléculas de antígeno (Documento no de patente 1)
En los últimos años, se ha informado de una nueva tecnología de micropartículas (documentos de patente 1 y 2), que utiliza un polímero anfifílico y permite la encapsulación altamente eficaz de una proteína de alto peso molecular. Aunque esta nueva micropartícula se ha estudiado por su rendimiento sostenido de liberación de fármacos, no se ha estudiado en absoluto su función adyuvante en los casos en los que un antígeno está encapsulado en ella. Además, en términos del mecanismo por el cual una micropartícula que contiene un antígeno funciona como un adyuvante, se cree que son importantes la función para la liberación sostenida de la molécula de antígeno, así como el mecanismo por el cual la micropartícula que contiene un antígeno se incorpora en su totalidad en un inmunocito y libera el antígeno en la célula, y se cree además que la función de liberación del fármaco desde la partícula y el rendimiento como adyuvante no están necesariamente correlacionados entre sí. Por lo tanto, es difícil inferir la función adyuvante a partir del rendimiento de liberación sostenida de la partícula, y no se ha conseguido hasta ahora un adyuvante eficaz que tenga un rendimiento mucho mejor que los adyuvantes de aluminio, mediante las tecnologías convencionales que utilizan micropartículas, a pesar de la demanda de su desarrollo.
DOCUMENTOS DE LA TÉCNICA ANTERIOR
Documentos de patente
[Documento de patente 1] WO2006/095668
[Documento de patente 2 ] JP 2008-088158 A
Documentos no de patente
[Documento no de patente 1] Advanced drug delivery reviews, 2005, vol. 57, págs. 391-410
La publicación de Yang, Ya-Wun et al.: “The effect of poly(D,L-lactide-co-glycolide) microparticles with polyelectrolyte self-assembled multilayer surfaces on the cross-presentation of exogenous antigens”, Biomaterials, vol. 29, n.° 16, junio de 2008, páginas 2516-2526 se refiere a un sistema de administración de partículas con superficie manipulada para antígenos exógenos que utilizan micropartículas de poli(D,L-lactida-co-glicólido) (PLGA) encapsuladas por fisisorción de capas múltiples de polielectrolitos de carga opuesta, que incluyen polietilenimina (PEI) y sulfato de dextrano.
La publicación de Wischke et al.: “Poly(l:C) coated PLGA microparticles induce dendritic cell maturation”,
International Journal of Pharmaceutics, vol. 365, núm. 1-2, 5 de enero de 2009, páginas 61-68 se refiere a micropartículas de ácido poli(D,L-láctico-co-glicólico) [PLGA] que adicionalmente portan una señal específica de maduración con recubrimiento de superficie frente a células dendríticas humanas. Por lo tanto, un ligando del receptor de tipo Toll (TLR) 3 se unió eficazmente en un intento de una sola capa o en múltiples capas a la superficie de micropartículas de PLGA modificadas con dietilaminoetil dextrano.
La publicación de Garinot et al.: “PEGylated PLGA-based nanoparticles targeting M cells for oral vaccination”, Journal of Controlled Release, vol. 120, n.° 3, 31 de julio de 2007, páginas 195-204 se refiere a nanopartículas basadas en PLGA PEGiladas que muestran moléculas RGD en su superficie diseñadas para atacar células M humanas.
CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN PROBLEMAS A RESOLVER POR LA INVENCIÓN
La presente invención tiene como objetivo el dar a conocer una composición inmunogénica que muestre una capacidad elevada de activación inmunológica incluso con una pequeña cantidad de antígeno y/o un pequeño número de dosis.
MEDIOS PARA RESOLVER LOS PROBLEMAS
Con el fin de resolver los problemas descritos anteriormente, los presentes inventores estudiaron un procedimiento mediante el cual se puede inducir un elevado nivel de activación inmune utilizando una pequeña cantidad de antígeno y con un pequeño número de dosis del mismo y, como resultado, descubrieron que un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante tiene una capacidad elevada de activación inmune in vivo. Es decir, la presente invención tiene la siguiente constitución. (1) Una composición inmunogénica que comprende como ingrediente efectivo un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante compuesta por uno o varios polímeros anfifílicos cuyo segmento hidrófobo es un ácido poli(láctico-co-glicólico), y el segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario.
(2) La composición inmunogénica, según el punto (1), que comprende como ingrediente eficaz una partícula compuesta por el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante asociadas entre sí.
(3) La composición inmunogénica, según los puntos (1) o (2), en la que la micropartícula adyuvante tiene una parte hidrófila en el interior de la misma, estando compuesta la parte hidrófila por un segmento hidrófilo del polímero anfifílico, y tiene una capa externa compuesta por una parte hidrófoba constituida por el segmento hidrófobo del polímero anfifílico.
(4) La composición inmunogénica, según el punto (1), en la que el polisacárido refractario es dextrano.
(5) La composición inmunogénica, según cualquiera de los puntos (1) a (4), que comprende además un modificador de superficie unido al ácido poli(láctico-co-glicólico) de la micropartícula adyuvante.
(6) La composición inmunogénica, según cualquiera de los puntos (1) a (5), en la que el tamaño promedio de partícula del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o la partícula compuesta por el complejo de micropartículas de antígeno-adyuvante asociado entre sí es de 0,1 a 50 pm.
(7) La composición inmunogénica, según cualquiera de los puntos (1) a (6), que comprende además una sustancia activadora inmunológica.
(8) La composición inmunogénica, según el punto (7), en la que la sustancia inmunoactivadora es un ácido nucleico. (9) La composición inmunogénica, según los puntos (7) u (8), en la que la sustancia inmunoactivadora es CpG. EFECTO DE LA INVENCIÓN
Mediante la presente invención, se da a conocer una composición inmunogénica con la que es posible una activación inmune in vivo más fuerte que antes.
DESCRIPCIÓN BREVE DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra la evaluación inmunológica 1 de composiciones inmunogénicas que contienen OVA.
La figura 2 muestra la evaluación inmunológica (IgG total) de composiciones inmunogénicas que contienen CEA. La figura 3 muestra la evaluación inmunológica (IgG2a) de composiciones inmunogénicas que contienen CEA. La figura 4 muestra la evaluación inmunológica 2 de composiciones inmunogénicas que contienen OVA. La figura 5 muestra la evaluación inmunológica 3 de composiciones inmunogénicas que contienen OVA. La figura 6 muestra la evaluación inmunológica de composiciones inmunogénicas que contienen proteínas estructurales de VHC.
La figura 7 muestra la evaluación inmunológica 2 de composiciones inmunogénicas que contienen CEA. La figura 8 muestra la evaluación inmunológica 3 de composiciones inmunogénicas que contienen CEA. La figura 9 muestra la evaluación inmunológica 4 de composiciones inmunogénicas que contienen OVA. La figura 10 muestra la evaluación inmunológica 4 de composiciones inmunogénicas que contienen CEA.
La figura 11 muestra la evaluación inmunológica (proporción IgG2a/IgG1) de composiciones inmunogénicas que contienen CEA.
MEJOR MODO DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a una composición inmunogénica que comprende un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante compuesta por uno o varios polímeros anfifílicos cuyo segmento hidrófobo es un ácido poli(láctico-co-glicólico), y el segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario, según la reivindicación 1.
En primer lugar, se describe el polímero anfifílico que constituye la micropartícula adyuvante. Ser “anfifílico” significa que se conservan las propiedades tanto de hidrofilicidad como de hidrofobicidad. Cuando la solubilidad de una determinada parte en agua es mayor que la de otras partes, se dice que la parte es hidrófila. Preferentemente, la parte hidrófila es soluble en agua, pero incluso en los casos en los que la parte tiene poca solubilidad en agua, es suficiente si la solubilidad en agua es mayor que la de otras partes. Cuando la solubilidad de una determinada parte en agua es menor que la de otras partes, se dice que el segmento es hidrófobo. Preferentemente, la parte hidrófoba es insoluble en agua, pero incluso en los casos en que la parte es soluble en agua, es suficiente si la solubilidad en agua es menor que la de otras partes.
El polímero anfifílico significa un polímero que tiene, como molécula completa, la anfifilicidad mencionada anteriormente. El polímero significa que la molécula tiene una estructura molecular en la que el segmento hidrófilo o el segmento hidrófobo del polímero anfifílico, o ambos, están constituidos por una estructura o estructuras en las que se repiten unidades mínimas (monómeros). El polímero anfifílico de la presente invención puede tener una estructura que tenga un segmento o segmentos hidrófilos y un segmento o segmentos hidrófobos, y puede ser un polímero de bloques lineal que tenga un segmento o segmentos hidrófilos y un segmento o segmentos hidrófobos unidos entre sí; un polímero ramificado que tenga una ramificación o ramificaciones en las que existen uno o ambos de un segmento o segmentos hidrófilos y un segmento o segmentos hidrófilos; o un polímero de injerto en el que se injertan múltiples segmentos hidrófobos en un segmento hidrófilo o se injertan varios segmentos hidrófilos en un segmento hidrófobo. Preferentemente, el polímero anfifílico de la presente invención es un polímero que tiene un segmento hidrófilo, de la manera más preferente, un polímero de bloques lineal que tiene uno de cada de un segmento hidrófilo y un segmento hidrófobo, o un polímero de injerto que tiene múltiples segmentos hidrófobos injertados en un segmento de cadena principal hidrófilo.
El polímero anfifílico que constituye la composición inmunogénica puede ser un conjunto de diferentes tipos de polímeros anfifílicos compuestos de polímeros constituyentes que tienen diferentes partes hidrofílicas y/o partes hidrofílicas, o un conjunto de polímeros anfifílicos que tienen los mismos polímeros constituyentes pero que tienen varios tipos de patrones de unión, siempre que el polímero anfifílico tenga propiedades como micropartícula adyuvante. En vistas de conseguir un rendimiento estable y una mejora de la productividad, preferentemente, el polímero anfifílico es un conjunto de un pequeño número de tipos de polímeros anfifílicos, más preferentemente, un conjunto principalmente de no más de 2 tipos de polímeros anfifílicos y, aún más preferentemente, está constituido principalmente por un solo tipo de polímero anfifílico.
En la presente invención, el segmento hidrófobo del polímero anfifílico es un ácido poli(láctico-co-glicólico) que es un polímero biocompatible que no tiene un efecto severamente adverso tras la administración a un cuerpo vivo. En la presente memoria descriptiva, la biocompatibilidad significa que la LD50 en el caso de la administración oral del polímero a ratas no es inferior a 2.000 mg/kg. Además, la proporción de composición de (ácido láctico/ácido glicólico) del ácido poli(láctico-co-glicólico) (% molar/mol) no está restringida, siempre que se alcance el propósito de la presente invención y, preferentemente, la proporción es de 100/0 a 30/70, más preferentemente, de 60/40-40/60.
El segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario que es un polímero biocompatible, tal como en el caso del segmento hidrófobo. Además, para dar una capacidad adyuvante persistente a la micropartícula adyuvante compuesta por un polímero anfifílico, preferentemente, el segmento es un polisacárido refractario que no se descomponga fácilmente en un cuerpo o célula viva de un mamífero o ave. Ejemplos particulares de los polisacáridos biocompatibles y refractarios son celulosa, quitina, quitosano, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurónico, pululano y dextrano. Preferentemente, el polímero anfifílico es un polímero de injerto que tiene múltiples segmentos hidrófobos injertados en una cadena principal de segmento hidrófilo. Además, el segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario y, más preferentemente, el polisacárido refractario es dextrano.
Preferentemente, el polímero anfifílico tiene inmiscibilidad con el agua como polímero completo, en vista de la capacidad de encapsulación de antígenos y la persistencia tras la administración a un cuerpo vivo.
El peso molecular promedio del segmento hidrófilo del polímero anfifílico no está restringido y, en el caso de un polímero de bloques en el que un segmento o segmentos hidrófilos y un segmento o segmentos hidrófilos están unidos linealmente entre sí, preferentemente, el peso molecular promedio es de 1.000 a 50.000, más preferentemente, de 2.000 a 15.000. En la presente memoria descriptiva, el término “bloque” significa una parte en una molécula de polímero, parte que está compuesta por no menos de 5 unidades de monómero y diferente de la
otra u otras partes adyacentes, en términos de la estructura química o la configuración. Un polímero constituido por, como mínimo, dos bloques unidos linealmente entre sí se denomina polímero de bloques. Cada bloque que constituye el polímero de bloques puede ser un polímero aleatorio, alternante o en gradiente compuesto por no menos de 2 tipos de unidades de monómero. En la presente invención, preferentemente, el polímero de bloques está constituido por uno de cada polímero que forma un segmento hidrófilo y un polihidroxiácido.
En el caso de un polímero de injerto que tiene un segmento o segmentos hidrófobos injertados en una cadena principal del segmento hidrófilo, el peso molecular promedio del segmento hidrófilo es, preferentemente, de 1.000 a 100.000, más preferentemente, de 2.000 a 50.000, aún más preferentemente, de 10.000 a 40.000. Preferentemente, el número de cadenas de injerto es de 2 a 50. El número de cadenas de injerto se puede calcular basándose en la proporción entre la cadena principal del segmento hidrófilo y la cadena principal del segmento hidrófobo; el peso molecular promedio del segmento hidrófobo; y el peso molecular promedio de la cadena principal del segmento hidrófilo utilizado; que se obtienen por medición de RMN de 123H.
La proporción preferente de pesos moleculares promedio entre el segmento hidrófobo y el segmento hidrófilo varía dependiendo del polímero anfifílico y, en el caso de un polímero de bloques en el que un segmento o segmentos hidrófobos y un segmento o segmentos hidrófilos están unidos linealmente entre sí, la proporción de pesos moleculares promedio entre el o los segmentos hidrófilos y el o los segmentos hidrófobos es, preferentemente, no menor que 1:1, más preferentemente, no menor que 1:2, aún más preferentemente, no menor que 1:4, de manera especialmente preferente, no menor que 1:4 y no mayor que 1:25.
Preferentemente, en el caso de un polímero de injerto que tiene varios segmentos hidrófobos injertados en una cadena principal de segmento hidrófilo, la proporción de pesos moleculares promedio entre la parte de cadena principal del segmento hidrófilo y todas las cadenas de injerto de segmento hidrófobo no es inferior a 1:3 y el peso molecular promedio de cada cadena de injerto es de 2.500 a 40.000. Más preferentemente, la proporción de pesos moleculares promedio general no es inferior a 1:5 y el peso molecular promedio de cada cadena de injerto es de 5.000 a 40.000.
Debe observarse que el peso molecular promedio mencionado anteriormente es un peso molecular promedio en número, a menos que se especifique lo contrario. El peso molecular promedio en número es un peso molecular promedio calculado sin ponderar por el tamaño molecular, y los pesos moleculares promedio en número del polímero anfifílico y los polímeros que constituyen los segmentos hidrófilos del polímero anfifílico se pueden calcular como pesos moleculares en términos de poliestireno y pululano medidos por cromatografía de permeación en gel (GPC (“Gel Permeation Chromatography”)). Además, el peso molecular promedio del poli(hidroxiácido) se puede calcular mediante medición por resonancia magnética nuclear (RMN), basándose en la proporción entre el valor de integración de pico de los residuos terminales y el valor de integración de los demás picos.
El polímero anfifílico utilizado en la presente invención se puede sintetizar mediante un procedimiento conocido, y entre los ejemplos del procedimiento se incluyen un procedimiento en el que se añade un polímero de ácido poli(láctico-co-glicólico) a un polisacárido refractario para utilizarse como un segmento hidrófilo y se lleva a cabo la reacción de condensación con la mezcla resultante para producir un polímero anfifílico; un procedimiento en el que los monómeros activados de ácido láctico y glicólico se añaden a un polisacárido refractario para utilizarse como segmento hidrófilo y se lleva a cabo la reacción de polimerización con la mezcla resultante para producir un polímero anfifílico; y un procedimiento en el que, por el contrario, los monómeros para constituir un segmento hidrófilo se añaden a un segmento hidrófobo que es un polímero de ácido poli(láctico-co-glicólico) y se lleva a cabo la reacción de polimerización con la mezcla resultante para producir un polímero anfifílico.
Por ejemplo, un polímero anfifílico constituido por polietilenglicol y poli(hidroxiácido), que no está dentro del alcance de las reivindicaciones, se puede producir mediante un procedimiento en el que se añaden monómeros de hidroxiácido activados al polietilenglicol en presencia de un catalizador de estaño, y la reacción de polimerización se lleva a cabo con la mezcla resultante para la introducción del poli(hidroxiácido), produciendo de este modo un polímero de bloques anfifílico [Journal of Controlled Release, 71, págs. 203-211 (2001)].
Por ejemplo, un polímero anfifílico de tipo injerto constituido por un polisacárido refractario y una cadena o cadenas de injerto de ácido poli(láctico-co-glicólico) se pueden producir tal como se describe en (1), (2) o (3) a continuación:
(1) un procedimiento en el que, en presencia de un catalizador de estaño, se añaden monómeros hidroxiácido activados a un polisacárido refractario y se lleva a cabo una reacción de polimerización, introduciendo de este modo poli(hidroxiácido), para producir un polímero anfifílico de tipo injerto [Macromolecules, 31, págs. 1032-1039 (1998)]; (2) un procedimiento en el que los grupos hidroxilo desprotegidos en una parte de un polisacárido refractario en el que la mayoría de sus grupos hidroxilo están protegidos por sustituyentes son activados por una base, y se añaden monómeros hidroxiácido activados para introducir una cadena o cadenas de injerto compuestas por poli(hidroxiácido), seguido de la eliminación final de los grupos protectores, produciendo de este modo un polímero anfifílico de tipo injerto [Polymer, 44, págs. 3927-3933, (2003)]; y
(3) un procedimiento en el que se lleva a cabo la reacción de condensación de un copolímero de poli(hidroxiácido) con un polisacárido refractario utilizando un agente deshidratante y/o un agente activador de grupos funcionales,
produciendo de este modo un polímero anfifílico de tipo injerto [Macromolecules 33, págs. 3680-3685 (2000)].
Se describe a continuación la micropartícula adyuvante. La micropartícula adyuvante es una micropartícula que tiene una capacidad adyuvante, y la capacidad adyuvante significa una capacidad con la que se puede provocar una respuesta inmune tras la administración de un antígeno a un cuerpo vivo a un nivel más elevado que en el caso de la administración del antígeno solo. Además, en la presente invención, la micropartícula adyuvante es una micropartícula compuesta por un polímero anfifílico, y un antígeno se encapsula en la micropartícula adyuvante para formar un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante, que es un ingrediente eficaz de la composición inmunogénica de la presente invención.
La estructura de la micropartícula adyuvante no está restringida, y es preferente una estructura en la que el segmento hidrófilo del polímero anfifílico está incluido en la micropartícula adyuvante y el segmento hidrófobo del polímero anfifílico está contenido como una capa externa, en vista del mantenimiento estable del antígeno encapsulado. El procedimiento de producción de una micropartícula adyuvante que tiene dicha estructura no está restringido, y entre los ejemplos del procedimiento de producción se incluyen un procedimiento que comprende: (a) la etapa de mezclar un disolvente acuoso A con un disolvente orgánico B inmiscible en agua en el que se disuelve un polímero anfifílico para formar una emulsión de fase inversa; y (b) la etapa de eliminar el disolvente de la emulsión de fase inversa para obtener una micropartícula adyuvante. En este proceso, mediante la inclusión de un antígeno en el disolvente acuoso A, se puede constituir un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante en el que el antígeno está encapsulado. Las etapas (a) y (b) se describen a continuación.
Como el disolvente acuoso A en la etapa (a), se utiliza agua o una solución acuosa que contiene un componente soluble en agua. Entre los ejemplos del componente soluble en agua se incluyen sales inorgánicas, azúcares, sales orgánicas y aminoácidos.
Preferentemente, el disolvente orgánico B inmiscible en agua en la etapa (a) es un disolvente en el que el ácido poli(láctico-co-glicólico) del polímero anfifílico es soluble y el polisacárido refractario que constituye el segmento hidrófilo es poco soluble o insoluble y, preferentemente, el disolvente se puede eliminar por vaporización mediante liofilización. La solubilidad en agua del disolvente orgánico B inmiscible en agua es, preferentemente, no más de 30 g (disolvente orgánico inmiscible en agua B)/100 ml (agua). Entre los ejemplos particulares del disolvente orgánico B inmiscible en agua se incluyen acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo, carbonato de dimetilo, carbonato de dietilo, cloruro de metileno y cloroformo.
La proporción entre el disolvente orgánico inmiscible en agua B y el disolvente acuoso A es de 1.000:1 a 1:1, preferentemente, de 100:1 a 1:1. La concentración del polímero anfifílico en el disolvente orgánico B inmiscible en agua varía dependiendo de los tipos del disolvente orgánico B inmiscible en agua y el polímero anfifílico, y la concentración es del 0,01 al 90 % (p/p), preferentemente, del 0,1 al 50 % (p/p), más preferentemente, del 1 al 20 % (p/p).
En la etapa (a), en el proceso de formación de una emulsión de fase inversa con un disolvente acuoso A y un disolvente orgánico B inmiscible en agua en el que se disuelve un polímero anfifílico, se puede formar la emulsión de fase inversa utilizando, dependiendo del propósito farmacéutico, un disolvente orgánico inmiscible en agua B en el que se disuelven dos o más tipos de polímeros anfifílicos.
En la etapa (a), para ayudar a la formación de una emulsión de fase inversa y para formar una emulsión uniforme y fina de fase inversa, se puede añadir un aditivo. Preferentemente, el aditivo es un compuesto seleccionado entre alcoholes alquílicos C3-C6, alquilaminas C3-C6 y ácidos alquilcarboxílicos C3-C6. La estructura de cada cadena de alquilo en estos aditivos no está restringida, y la cadena de alquilo puede tener una estructura lineal o una estructura ramificada, y puede ser un alquilo saturado o un alquilo insaturado. En la presente invención, de manera especialmente preferente, el aditivo es terc-butanol, iso-propanol o pentanol.
En la etapa (b), el procedimiento de eliminación del disolvente de la emulsión de fase inversa no está restringido, y entre los ejemplos del mismo se incluyen calentamiento, secado a presión reducida, diálisis, liofilización, centrifugación, filtración y reprecipitación y combinaciones de los mismos. Entre los procedimientos de eliminación del disolvente de la emulsión de fase inversa, es preferente la liofilización, dado que provoca menos cambio estructural debido a la fusión de partículas en la emulsión de fase inversa, o similares. Las condiciones y el aparato para la liofilización son aquellos que permiten la inclusión de un proceso de congelación y una etapa de secado a presión reducida, y el proceso de liofilización comprende, de manera especialmente preferente, congelación previa, secado primario a presión reducida a baja temperatura y secado secundario a presión reducida, que se llevan a cabo convencionalmente en la liofilización. Por ejemplo, en los casos en los que se va a obtener una dispersión de un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante en un disolvente inmiscible en agua, la emulsión de fase inversa se enfría/congela hasta no más de los puntos de fusión del disolvente acuoso A y el disolvente orgánico B inmiscible en agua, y posteriormente se seca a presión reducida, para obtener micropartículas adyuvantes liofilizadas. La temperatura para la congelación previa se puede determinar experimentalmente, según sea apropiado, dependiendo de la composición del disolvente y, preferentemente, no es más de -20 °C. El grado de reducción de la presión durante el proceso de secado se puede determinar también, según sea apropiado, dependiendo de la composición
del disolvente y, preferentemente, no es más de 3.000 Pa, más preferentemente no más de 500 Pa, en vistas del acortamiento del tiempo de secado. La liofilización se lleva a cabo preferentemente utilizando un liofilizador para su utilización en laboratorio que tiene una trampa fría y se puede conectar a una bomba de vacío, o un liofilizador de tipo bandejas utilizado para la producción de productos farmacéuticos o similares. Después de la congelación previa con nitrógeno líquido, un medio de enfriamiento o similar, el secado a presión reducida se puede llevar a cabo con enfriamiento o a temperatura ambiente utilizando un dispositivo de vacío tal como una bomba de vacío.
El tipo de antígeno encapsulado en la micropartícula adyuvante no está restringido, y puede ser un péptido, proteína, glucoproteína, glucolípido, lípido, carbohidrato, ácido nucleico o polisacárido; o un virus, célula bacteriana, sustancia alergénica, tejido o célula que los comprende. Entre los ejemplos particulares de los mismos se incluyen antígenos derivados de polen, antígenos derivados del virus de la hepatitis A, antígenos derivados del virus de la hepatitis B, antígenos derivados del virus de la hepatitis C, antígenos derivados del virus de la hepatitis D, antígenos derivados del virus de la hepatitis E, antígenos derivados del virus de la hepatitis F, antígenos derivados del virus VIH, antígenos derivados del virus de la gripe, antígenos derivados del virus del herpes (HSV-1, HSV-2), antígenos derivados del ántrax, antígenos derivados de la clamidia, antígenos derivados del neumococo, antígenos derivados del virus de la encefalitis japonesa, antígenos derivados del virus del sarampión, antígenos derivados del virus de la rubéola, antígenos derivados del Clostridium tetani, antígenos derivados del virus de la varicela, antígenos derivados del virus del SARS, antígenos derivados del virus EB, antígenos derivados del virus del papiloma, antígenos derivados del virus Helicobacter pylori, antígenos derivados del virus de la rabia, antígenos derivados del virus del Nilo Occidental, antígenos derivados de hantavirus, antígenos derivados de Streptococcus, antígenos derivados de Staphylococcus, antígenos derivados de Bordetella pertussis, antígenos derivados de Mycobacterium tuberculosis, antígenos derivados de Plasmodium, antígenos derivados de poliovirus, antígenos derivados de diversas infecciones zoonóticas, antígenos cancerosos y antígenos derivados de diversas alergias alimentarias.
No es necesario que el antígeno encapsulado sea un solo antígeno. En vistas de la aplicación de la presente invención, se puede inducir una respuesta inmune contra células cancerosas, bacterias, virus o similares que estén constituidos por diversos constituyentes. En estos casos, el antígeno puede ser varios tipos de proteínas o similares que pueden provocar respuestas inmunes, o una mezcla de sustancias cuyos tipos no se pueden especificar. Además, la inclusión de varios tipos de antígenos para inducir positivamente respuestas inmunes contra los diversos tipos de antígenos es uno de los modos de utilización de la composición inmunogénica de la presente invención. Preferentemente, se encapsula en la micropartícula adyuvante no menos de 3 tipos, más preferentemente, un tipo único de uno o varios antígenos.
El complejo de micropartículas antígeno-adyuvante en la presente invención puede cambiar la capacidad de retención del antígeno dependiendo del tipo o tipos de polímeros que constituyen la micropartícula adyuvante y el procedimiento de preparación. El mecanismo por el cual el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante proporciona la inmunogenicidad en la presente invención puede incluir diversos procesos, tales como un proceso en el que el antígeno liberado de la micropartícula adyuvante se reconoce por las células inmunocompetentes, y un proceso en el que la misma micropartícula adyuvante se reconoce por las células inmunocompetentes. Se puede obtener también un efecto excelente por el efecto sinérgico de estos procesos.
El tipo de respuesta inmune inducida por el proceso en el cual el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante hace que las células inmunocompetentes reconozcan al antígeno, varía dependiendo del tipo de proceso, y se puede seleccionar un proceso preferente dependiendo del tipo de respuesta inmune a inducir y el sitio de administración. Es decir, el antígeno no necesita necesariamente ser liberado del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante, y el modo con el que se consigue la inmunogenicidad óptima de interés, se lleva a cabo mediante la optimización dependiendo del antígeno y el tipo de respuesta inmune a activar en un procedimiento preferente de utilización de los mismos. Sin embargo, en los casos en los que el antígeno se libera extremadamente rápido del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante, no se puede obtener una acción de activación inmunológica continua a largo plazo, que es una propiedad excelente de la presente invención, de modo que, preferentemente, no menos del 10 % del antígeno en el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante se retiene todavía en el cuerpo vivo como el complejo una semana después de la administración y, más preferentemente, no menos del 50 % del antígeno todavía está encapsulado una semana después de la administración. Estos comportamientos de liberación se pueden confirmar, tal como se muestra en los ejemplos, mediante una evaluación in vitro que imita el entorno in vivo.
El complejo de micropartículas antígeno-adyuvante consigue un buen efecto como un componente eficaz de la composición inmunogénica de la presente invención incluso en un estado de partículas en el que el complejo está asociado. En la presente memoria descriptiva, el término “asociación” significa que dos o más partículas están unidas por una fuerza entre partículas o por medio de otra sustancia, para formar un agregado. La fuerza entre partículas no está restringida, y entre sus ejemplos se incluyen la interacción hidrófoba, el enlace de hidrógeno, las fuerzas de van der Waals y similares. La asociación no está restringida al estado en el que las micropartículas están en contacto entre sí, y una sustancia que tiene afinidad por las micropartículas puede existir entre las micropartículas, o las micropartículas se pueden dispersar en una matriz. Como la sustancia que tiene afinidad por las micropartículas, o la matriz, es preferente un polímero, y es más preferente un polímero anfifílico cuya parte hidrófoba sea poli(hidroxiácido) y que tenga el mismo constituyente que el de la micropartícula adyuvante. Entre los
ejemplos particulares de los mismos se incluyen polímeros anfifílicos, cada uno compuesto por un esqueleto de polisacárido y una cadena o cadenas de injerto de poli(hidroxiácido), polímeros de bloque cada uno compuesto por polietilenglicol y poli(hidroxiácido) y poli(hidroxiácido).
La asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante puede estar en un estado en el que los complejos se vuelven a aislar en su utilización, o puede estar en un estado en el que no se vuelven a aislar en su utilización. Cabe señalar que, incluso en los casos en los que la forma de la partícula formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante se encuentra en un estado en el que no se puede conocer la asociación del complejo, se considera que la partícula se ha formado por asociación del complejo siempre que el proceso de producción de la partícula comprenda una etapa de asociar el complejo.
La etapa de asociar los complejos no está restringida, y entre los ejemplos particulares de la misma se incluyen una etapa de introducir el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o una dispersión de complejo de micropartículas antígeno-adyuvante en una fase líquida C que contiene un modificador de superficie para eliminar el medio disperso, provocando de este modo la asociación. Esta etapa se describe a continuación.
En los casos en los que el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante se dispersa en un medio disperso para preparar una dispersión del complejo, el medio disperso no está restringido, y en los casos en los que la micropartícula adyuvante tiene una parte hidrófila en el interior del mismo, la parte hidrófila está compuesta por un segmento hidrófilo de un polímero anfifílico, y tiene una capa externa que comprende una parte hidrófoba compuesta por un segmento hidrófobo de un polímero anfifílico, preferentemente, el medio disperso es un disolvente en el que es soluble el ácido poli(láctico-co-glicólico) del polímero anfifílico y el polisacárido refractario que constituye el segmento hidrófilo es sustancialmente insoluble, con el fin de proteger la estructura de la micropartícula adyuvante. En este caso, el disolvente puede ser un disolvente orgánico inmiscible en agua o un disolvente orgánico miscible en agua. Entre los ejemplos particulares del disolvente en el que es soluble el ácido poli(láctico-co-glicólico) del polímero anfifílico y el polisacárido refractario que constituye el segmento hidrófilo es sustancialmente insoluble se incluyen acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo, carbonato de dimetilo, carbonato de dietilo, cloruro de metileno, cloroformo, dioxano, tolueno y xileno.
Preferentemente, la fase líquida C es aquella en la que es soluble un modificador de superficie y tiene un punto de ebullición más elevado que el medio disperso. La fase líquida C puede ser cualquiera entre un disolvente acuoso, un disolvente orgánico inmiscible en agua y disolvente orgánico miscible en agua. Como disolvente acuoso, es preferente agua o una solución acuosa que contenga un componente soluble en agua, y entre los ejemplos del componente soluble en agua se incluyen sales inorgánicas, azúcares, sales orgánicas y aminoácidos. Entre los ejemplos del disolvente orgánico inmiscible en agua se incluyen aceite de silicona, aceite de sésamo, aceite de soja, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de coco, aceite de linaza, aceite mineral, aceite de ricino, aceite de ricino hidrogenado, parafina líquida, n-hexano, n-heptano, glicerol y ácido oleico. Entre los ejemplos del disolvente orgánico miscible en agua se incluyen glicerina, acetona, etanol, ácido acético, dipropilenglicol, trietanolamina y trietilenglicol. Entre estos, en la presente invención, la fase líquida C es, preferentemente, un disolvente acuoso o un disolvente orgánico miscible en agua. En los casos en los que la fase líquida C sea un disolvente acuoso y el medio disperso sea un disolvente orgánico inmiscible en agua, la suspensión obtenida de un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante está en la forma de la denominada emulsión sólido en aceite en agua (S/O/W) y, en los casos en que la fase líquida C es un disolvente orgánico inmiscible en agua o un disolvente orgánico miscible en agua, e inmiscible en el medio disperso, la suspensión está en forma de una emulsión sólido en aceite en aceite (S/O1/O2).
Preferentemente, el modificador de superficie es un compuesto que estabiliza la interfase agua-aceite de la emulsión S/O/W o la interfase aceite-aceite de la emulsión S/O1/O2, compuesto que tiene una propiedad para mejorar la estabilidad coloidal de la partícula formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. En la presente memoria descriptiva, la mejora de la estabilidad coloidal significa la prevención o el retraso de la agregación, en el disolvente, de las partículas formadas por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. El modificador de superficie puede ser un agente único o una mezcla de diversos agentes.
Preferentemente, el modificador de superficie utilizado en la presente invención es un polímero hidrófilo o un compuesto anfifílico.
Preferentemente, el polímero hidrófilo como modificador de superficie es polietilenglicol, polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, polietilenimina, ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poli-1,3-dioxolano, polímero de 2-metacriloiloxietilfosforilcolina, poli-1,3,6-trioxano, poliaminoácido, péptido, proteína o polisacárido de azúcares, o un análogo de cualquiera de estos. Entre los ejemplos del análogo del polímero hidrófilo se incluyen, pero no están limitados a, surfactantes preparados a partir de polímeros hidrófilos mediante, por ejemplo, modificación parcial de grupos hidrófobos, tales como alquilos de cadena larga.
Preferentemente, el análogo de polietilenglicol como modificador de superficie es “Pluronic” (marca registrada de BASF) comercialmente disponible de BASF, o equivalentes del mismo.
Preferentemente, el poliaminoácido como modificador de la superficie es ácido poliaspártico o ácido poliglutámico, o análogos de los mismos. Son más preferentes los análogos preparados introduciendo alquilo de cadena larga a una parte de ácido poliaspártico o ácido poliglutámico.
Entre los ejemplos del péptido como modificador de superficie se incluyen péptidos básicos, y la proteína como modificador de superficie es preferentemente gelatina, caseína o albúmina en vista del aumento de la capacidad de dispersión. Entre los ejemplos preferentes de la proteína también se incluyen anticuerpos.
El azúcar como modificador de superficie es preferentemente un monosacárido, oligosacárido o polisacárido. El polisacárido es, preferentemente, celulosa, quitina, quitosano, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurónico, pululano o dextrano y, de manera especialmente preferente, es pululano portador de colesterol, en vistas de la mejora de la capacidad de dispersión de la partícula. Es preferente un análogo cualquiera de celulosa, quitina, quitosano, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurónico, pululano y dextrano.
De manera especialmente preferente, el péptido, proteína o azúcar como modificador de la superficie es un análogo preparado mediante, por ejemplo, modificación parcial de grupos hidrófobos tales como alquilos de cadena larga, o un análogo preparado modificando el polímero hidrófilo o compuesto anfifílico mencionado anteriormente.
Entre los ejemplos del compuesto anfifílico como modificador de superficie se incluyen lípidos y surfactantes. Entre los ejemplos preferentes de surfactantes se incluyen surfactantes no iónicos tales como copolímeros de polioxietilen polipropilenglicol, ésteres de ácido graso de sacarosa, ésteres de ácido graso de polietilenglicol, monoéster de ácido graso de polioxietilen sorbitano, diéster de ácido graso de polioxietilen sorbitano, monoéster de ácido graso de polioxietilen glicerol, diéster de ácido graso de polioxietilen glicerol, éster de ácido graso de poliglicerol, ricinoleato de polioxietileno y ricinoleato hidrogenado de polioxietileno; sulfatos de alquilo tales como laurilsulfato de sodio, laurilsulfato de amonio y estearil sulfato de sodio; y lecitina
La proporción de volumen entre el medio disperso en el que se dispersa el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante y la fase líquida C es 1.000:1 a 1:1.000, preferentemente, de 100:1 a 1:100. El número de asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante obtenido varía dependiendo de esta proporción de volumen y, a medida que aumenta la proporción de la fase lipídica C, se obtiene una dispersión en agua de partículas producidas por asociación de un mayor número de complejos de micropartículas antígeno-adyuvante, mientras que, a medida que disminuye la proporción de la fase lipídica C, disminuye el número de asociación. En los casos en los que la proporción de la fase líquida C es menor que una proporción de solución de 1: 4, la mayoría de las partículas en la dispersión en agua están constituidas por un único complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. De este modo, controlando la proporción de volumen de la fase líquida C en la serie de procesos para la producción de la partícula formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante, se pueden preparar selectivamente el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante y la partícula formada por asociación del complejo.
Cuando el medio disperso que contiene el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante se mezcla con la fase líquida C, se puede utilizar, según sea necesario, un dispositivo de agitación, tal como un agitador magnético, agitador de turbina, homogeneizador, un aparato de emulsión de membrana equipado con una membrana porosa, o similares.
La fase líquida C puede contener, además del modificador de superficie, diversos aditivos tales como un tampón, antioxidante, sal, polímero y/o azúcar dependiendo del propósito farmacéutico. Además, el medio disperso en el que se dispersará el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante puede contener varios aditivos solubles en el medio disperso, tales como un compuesto ácido, compuesto básico, polímero anfifílico y/o polímero biodegradable, con el fin de controlar la velocidad de liberación del antígeno encapsulado mediante degradación o desintegración del complejo.
Además, se puede llevar a cabo una operación de emulsificación de la emulsión de sólido en aceite en agua (S/O/W) o emulsión de sólido en aceite en aceite (S/O1/O2) formadas con el fin de producir una partícula más fina formada por asociación de los complejos de micropartículas antígeno-adyuvante. El procedimiento de emulsificación no está restringido, siempre que se pueda preparar una emulsión estable de este modo, y entre sus ejemplos se incluyen procedimientos por agitación y procedimientos que utilizan un homogeneizador de presión elevada, un homomezclador de alta velocidad o similares.
En los casos en los que el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante se dispersa una vez en el medio disperso, y la dispersión obtenida se añade a la fase líquida C que contiene el modificador de superficie, una suspensión de la partícula formada por asociación de la micropartícula adyuvante deseada se puede obtener mediante la eliminación del medio disperso. El procedimiento de eliminación del medio disperso no está restringido, y entre sus ejemplos se incluyen evaporación de disolvente, diálisis, liofilización, centrifugación, filtración y reprecipitación, entre los cuales es especialmente preferente la evaporación del disolvente y la liofilización. En los casos en los que se utilizó un disolvente acuoso como la fase líquida C, en esta etapa se puede obtener una dispersión acuosa de la partícula formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante.
En una realización preferente, el modificador de superficie está unido al complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o la partícula formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. En la presente memoria descriptiva, la unión puede ser un enlace no covalente o un enlace covalente. El enlace no covalente es preferentemente una interacción hidrófoba, y también puede ser una interacción electrostática, enlace de hidrógeno o fuerza de van der Waals, o una combinación de estos enlaces. En el enlace no covalente, el poli(hidroxiácido) de la micropartícula que contiene un polímero anfifílico se une preferentemente a la parte hidrófoba del modificador de superficie mediante una interacción hidrófoba y, en este caso, el medio disperso para el complejo de micropartícula antígeno-adyuvante en la dispersión de micropartículas es, preferentemente, agua, tampón, solución salina fisiológica, solución modificadora de superficie acuosa o disolvente hidrófilo.
El tamaño promedio de partícula del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o las partículas formadas por asociación del complejo es preferentemente de 0,1 a 50 pm, más preferentemente de 0,1 a 10 pm. En particular, el tamaño de partícula promedio del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante es, preferentemente, de 0,1 a 1 pm, más preferentemente de 0,1 a 0,5 pm, y el tamaño de partícula promedio del complejo de micropartículas de antígeno-adyuvante es, preferentemente, de 0,1 a 50 pm, más preferentemente, de 0,1 a 10 pm, aún más preferentemente, de 1 a 10 pm. El tamaño de partícula promedio del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o la partícula formada por asociación del complejo se puede medir directamente utilizando análisis de imagen con un microscopio electrónico de barrido (SEM (“Scanning Electron Microscope”): por ejemplo, S-4800 fabricado por Hitachi, Ltd).
La composición inmunogénica en la presente invención es una composición que puede inducir una respuesta inmune en un cuerpo vivo, y contiene el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante como una sustancia inmunogénica. El tipo de respuesta inmune inducida por la composición inmunogénica no está restringido. Entre los ejemplos del tipo de respuesta inmune a inducir se incluyen la respuesta inmune Th1 y la respuesta inmune Th2, y se sabe que una de estas respuestas inmunes se induce predominantemente dependiendo del antígeno, el sitio de administración y el tipo de procedimiento de administración. La presente invención puede inducir ambas respuestas inmunes Th1 y Th2. La respuesta inmune Th1 se puede inducir efectivamente por el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante de la presente invención que tiene un tamaño de partícula pequeño, o la partícula formada por asociación de los complejos, tal como se muestra en los ejemplos. Los grados de la respuesta inmune Th1 y la respuesta inmune Th2 se pueden evaluar mediante varios procedimientos conocidos. Por ejemplo, en el caso del ratón, se sabe que la cantidad de producción del anticuerpo IgG2a es un índice para la respuesta inmune Th1. Además, como índices para la respuesta inmune Th2, se conocen el anticuerpo IgG1 y la cantidad total de anticuerpos IgG.
La composición inmunogénica de la presente invención contiene, como ingrediente eficaz, el complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o la partícula formada por asociación del complejo y, por lo tanto, tiene una capacidad adyuvante, pero mediante la inclusión adicional de una sustancia inmunoactivadora, se puede conseguir una mayor capacidad de activación inmunológica. La sustancia activadora del sistema inmunitario puede estar contenida en el exterior de la micropartícula adyuvante o encapsulada en la misma y, preferentemente, la sustancia está encapsulada en la micropartícula adyuvante. La sustancia activadora del sistema inmunitario no está restringida siempre que pueda funcionar como una sustancia activadora del sistema inmunitario, y entre sus ejemplos se incluyen aceites, sales de aluminio, sales de calcio, polímeros formadores de gel, citocinas activadoras del sistema inmunitario y ligandos del receptor TLR, entre los cuales son preferentes las citocinas activadoras del sistema inmunitario y los ligandos del receptor TLR.
Entre los ejemplos de las citocinas que activan el sistema inmunitario se incluyen interleucina 12, interferón a, interleucina 18, TNFa, interleucina 6, NO, interferón y e interferón p.
Entre los ejemplos de los ligandos del receptor TLR se incluyen lipoproteínas; ARN de doble cadena tales como poli I:C y poli I:CLC; flagelina; ARN monocatenarios; CpG; profilina MPL; QS21; y TDM, entre los cuales son preferentes los ácidos nucleicos, tales como los ARN bicatenarios, los ARN monocatenarios y CpG y, es más preferente el CpG. En la presente memoria descriptiva, el CpG significa ADN de motivo CpG (citosina-guanina) no metilado que existen en virus, bacterias y similares (ver la Solicitud de Patente PCT traducida japonesa abierta al público n.° 2001-503254). Se informan varias secuencias efectivas como motivos CpG, y el tipo de secuencia no está restringido siempre que tenga una capacidad de activación inmunológica, y la secuencia se puede preparar utilizando un análogo de base o se puede seleccionar de diversos tipos de productos modificados.
En los casos en los que la composición inmunogénica de la presente invención se utiliza como una composición farmacéutica o una vacuna, pueden estar contenidos diversos aditivos farmacéuticamente útiles además del polímero anfifílico, la sustancia activa hidrófila, el modificador de superficie y el medio disperso. Entre los ejemplos de los aditivos que se pueden añadir se incluyen tampones, antioxidantes, sales, polímeros y azúcares.
El procedimiento de inducción de una respuesta inmune utilizando la composición inmunogénica de la presente invención no está restringido, y la composición inmunogénica se puede administrar a un cuerpo vivo o ponerse en
contacto con células inmunocompetentes eliminadas al exterior de un cuerpo vivo. El procedimiento de administración de la composición inmunogénica a un cuerpo vivo no está restringido, y entre sus ejemplos se incluyen administración subcutánea, administración intradérmica, administración intramuscular, administración transnasal, administración pulmonar, administración oral, administración sublingual, administración intravaginal, administración intraperitoneal y administración a los ganglios linfáticos, entre las cuales son preferentes la administración intradérmica y la administración subcutánea.
En términos de la cantidad de la composición inmunogénica de la presente invención que se utilizará tras la inducción de la respuesta inmune, la cantidad necesaria del antígeno requerida para la inducción de la reacción inmune de interés se establece apropiadamente dependiendo del tipo de antígeno, procedimiento de administración y número de dosis. Por ejemplo, en los casos en los que la composición inmunogénica de la presente invención se administra por vía subcutánea al ser humano para inducir la respuesta inmune, se administran de 0,01 a 1.000 pg por dosis del antígeno, antígeno que está contenido en la composición inmunogénica. El número de dosis también se puede establecer de manera apropiada de manera similar a la dosis, y la respuesta inmune se puede inducir de 1 a 10 veces de administración, dado que la composición inmunogénica de la presente invención tiene la acción de inducir una respuesta inmune de manera continua.
El cuerpo vivo al que se administra la composición inmunogénica puede ser un ser humano o un animal no humano, y el cuerpo vivo es preferentemente ser humano; o cerdo, vaca, ave, oveja, caballo, burro, cabra o camello, perro, gato, hurón, conejo, mono, rata, ratón o conejillo de indias, que se cría como ganado, animal de compañía o animal de experimentación.
EJEMPLOS
Se describen ejemplos a continuación, pero la presente invención no queda limitada por estos ejemplos.
Ejemplo 1. Síntesis de Dextrano-ácido poli(láctico-co-glicólico) (PLGA)
(1-1) Síntesis de TMS-Dextrano
Se añadió dextrano (Nacalai Tesque; grado especial según los estándares de Nacalai; peso molecular promedio en número, 13.000; 5,0 g) a formamida (100 ml), y la mezcla resultante se calentó a 80 °C. A esta solución, se le añadió gota a gota 1,1,1,3,3,3-hexametildisilazano (100 ml) durante 20 minutos. Posteriormente, la mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la solución de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se separaron dos capas entre sí con un embudo separador. La capa superior se concentró a presión reducida, y se añadió metanol (300 ml) a la misma, seguido de filtración y secado de los sólidos obtenidos, para obtener TMS-dextrano (compuesto (1)) (11,4 g) como sólidos blancos.
Mediante el mismo procedimiento, se prepararon los compuestos (2) y (3) utilizando dextrano (fabricado por Sigma; peso molecular promedio, no más de 1.500); se prepararon los compuestos (4) y (5) utilizando dextrano (fabricado por SERVA; peso molecular promedio, no más de 5.000); se preparó el compuesto (6) utilizando dextrano (el mismo reactivo que el utilizado para la preparación del compuesto (1)); y se prepararon los compuestos (7), (8) y (9) utilizando dextrano (fabricado por Nacalai Tesque; peso molecular promedio, 40.000).
(1-2) Síntesis de Dextrano-PLGA (compuestos (12)-(23))
Se secaron el compuesto (1) (0,5 g) y terc-butóxido de potasio (35 mg) con calor a presión reducida durante 2 horas, y se añadió tetrahidrofurano (10 ml) a los mismos, seguido de agitación de la mezcla resultante durante 1,5 horas a temperatura ambiente. A esta solución, se añadió gota a gota una solución de (DL)-lactida (0,56 g) y glicólido (0,45 g) en tetrahidrofurano (15 ml), y la mezcla resultante se agitó durante 5 minutos, seguido de la adición de 2 gotas de ácido acético para detener la reacción. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y se llevó a cabo una purificación por reprecipitación con el sistema cloroformo-metanol y el sistema cloroformo-éter dietílico, para obtener sólidos blancos, que posteriormente se disolvieron en cloroformo (9 ml). A la solución resultante, se añadió ácido trifluoroacético (1,0 ml), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente a presión reducida y el residuo se disolvió en cloroformo (10 ml), seguido de la adición de la solución resultante a éter dietílico que se había enfriado preliminarmente a 0 °C y se filtró el producto obtenido, para obtener dextrano-PLGA como sólidos blancos (compuesto (12)). Mediante el mismo procedimiento, se sintetizó el compuesto (13) con (DL)-lactida (0,78 g) y glicólido (0,63 g); se sintetizó el compuesto (14) con (DL)-lactida (1,12 g) y glicólido (0,9 g); se sintetizó el compuesto (15) con (DL)-lactida (1,67 g) y glicólido (1,35 g).
Además, se sintetizó el compuesto (16) utilizando el compuesto (2) con (DL)-lactida (0,56 g) y glicólido (0,45 g); se sintetizó el compuesto (17) utilizando el compuesto (3) con (DL)-lactida (0,67 g) y glicólido (0,54 g); se sintetizó el compuesto (18) utilizando el compuesto (4) con (DL)-lactida (0,78 g) y glicólido (0,63 g); se sintetizó el compuesto (19) utilizando el compuesto (5) con (DL)-lactida (0,89 g) y glicólido (0,72 g); se sintetizó el compuesto (20) utilizando el compuesto (6) con (DL)-lactida (0,78 g) y glicólido (0,63 g); se sintetizó el compuesto (21) utilizando el compuesto
(7) con (DL)-lactida (0,78 g) y glicólido (0,63 g); se sintetizó el compuesto (22) utilizando el compuesto (8) con (DL)-lactida (1,12 g) y glicólido (0,9 g); y se sintetizó el compuesto (23) utilizando el compuesto (9) con (DL)-lactida (1,12 g) y glicólido (0,9 g).
Se determinaron el peso molecular promedio en peso y el peso molecular promedio en número de cada uno de los polímeros de los compuestos (12) a (15) mediante medición GPC (columna: fabricada por Tosoh Corporation, TSK-gel a -5000 x 2, disolvente DMF; detector: RI; estándar: pululano). El peso molecular promedio en número y el número de cadenas de injerto de los compuestos (12) a (23) se determinaron por medición de RMN de 1H (tabla 1).
[Tabla 1]
T l 1: R l v l i n lím r D x- -PL A r r
_____ _____ ______ ______
Ejemplo de referencia 2. Síntesis de PEG-PLGA (compuestos (10), (11))
Se mezclaron éter monometílico de polietilenglicol (NIPPON OIL & FATS CO., LTD.; SUNBRIGHT MEH-20H; peso molecular promedio en número, 5.128; Mw/Mn = 1,02), (DL)-lactida y glicólido en las cantidades de alimentación que se muestran en la tabla 2, y la mezcla resultante se calentó a 140 °C. Después de agitar la mezcla durante 20 minutos, se añadió octilato de estaño (II) (al 0,05 % en peso con respecto al éter monometílico de polietilenglicol) a la mezcla, y la mezcla resultante se agitó a 180 °C durante 3 horas. El líquido de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se disolvió en cloroformo (de modo que la concentración pasó a ser, aproximadamente, 100 mg/ml), seguido de una purificación mediante reprecipitación con éter dietílico que se había enfriado con anterioridad a 0 °C. Los sólidos obtenidos se filtraron y se secaron a presión reducida, para obtener un polímero PEG-PLGA como sólidos blancos o marrón claro. El peso molecular promedio en número del polímero se determinó mediante RMN de 1H (tabla 2).
[Tabla 2]
-
____ ____
Ejemplo 3. Preparación de complejos de micropartículas antígeno-adyuvante utilizando polímeros Dex-g-PLGA (Partículas Dex-g-PLGA (1)-(28))
Se disolvieron en 100 pl de carbonato de dimetilo, 5 mg de dextrano-ácido poli(láctico-co-glicólico) (PLGA) (compuestos (12)-(23)) en el ejemplo 1, para preparar una solución de polímero de 50 mg/ml. A esta solución de polímero, se añadieron 20 pl de terc-butanol y 50 pl del antígeno encapsulado ((OVA (ovoalbúmina) (Sigma) o CEA (antígeno carcinoembrionario) (COSMO BIO Co., Ltd.)) y/o la sustancia inmunoactivadora (CpG) que se muestra en la tabla 3 se añadió a la concentración o concentraciones descritas, y la mezcla resultante se agitó con un mezclador vórtex, para producir una emulsión de fase inversa. Como el Cpg, se utilizó 5'-gggggggCGACGATCGTCAgG-3' (letras minúsculas representan bases modificadas con fosforotioato) (síntesis por contrato de Sigma-Genosys). La emulsión de fase inversa se sometió a congelación previa con nitrógeno líquido, y se liofilizó utilizando un liofilizador (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) a una temperatura de enfriamiento de la trampa de -45 °C a un nivel de vacío de 20 Pa durante 24 horas. Los sólidos obtenidos se dispersaron en el medio de dispersión en la cantidad mostrada en la tabla 3, para preparar una suspensión S/O. La suspensión S/O se añadió gota a gota a 2 ml de una solución acuosa que contenía Pluronic F-68 al 10 %, y la mezcla resultante se agitó/emulsionó mediante el
procedimiento de agitación descrito en la tabla 3, para preparar una emulsión S/O/W. A partir de la emulsión S/O/W, el disolvente orgánico inmiscible en agua se eliminó por evaporación del disolvente, para proporcionar una dispersión de complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. La dispersión se sometió a congelación previa con nitrógeno líquido, y se liofilizó utilizando un liofilizador (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) a una temperatura de enfriamiento de la trampa de -45 °C a un nivel de vacío de 20 Pa durante 24 horas, para obtener polvo seco de un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante (tamaño de partícula promedio, 0,4 pm) y una partícula (tamaño de partícula promedio, 5 a 40 pm) formada por asociación del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. El resultado del cálculo del tamaño promedio de partícula de la partícula obtenida por observación con un microscopio electrónico de barrido (SEM: S-4800 fabricado por Hitachi, Ltd.) se muestra en la tabla 3.
[Tabla 3]
T l : R m ñ rí l r m i rí l D x- -PL A
_____ _____
Ejemplo de referencia 4. Preparación de complejos de micropartículas antígeno-adyuvante utilizando polímeros PEG-PLGA (partículas PEG-PLGA (1) a (4))
Se disolvieron en 100 pl de carbonato de dimetilo, 5 mg del polímero PEG-PLGA preparado en el ejemplo 2 (compuesto (10) u (11)), para preparar 50 mg/ml de solución de polímero. A esta solución de polímero, se añadieron 20 pl de terc-butanol, y se añadieron a la mezcla resultante 50 pl de la solución que contenía antígeno mostrada en la tabla 4, seguido de agitación de la mezcla, para producir una solución de emulsión de fase inversa. La solución de emulsión de fase inversa se sometió a congelación previa con nitrógeno líquido y se liofilizó utilizando un liofilizador (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) a una temperatura de enfriamiento de la trampa de -45 °C a un nivel de vacío de 20 Pa durante 24 horas. Los sólidos obtenidos se dispersaron en acetato de etilo en la cantidad mostrada en la tabla 4, para preparar una suspensión de S/O. La suspensión de S/O se añadió gota a gota a 2 ml de una solución acuosa que contenía Pluronic F-68 al 10 %, y la mezcla resultante se agitó/emulsionó con un mezclador vórtex, para preparar una emulsión de S/O/W. A partir de la emulsión S/O/W, se eliminó el disolvente orgánico inmiscible en agua mediante evaporación del disolvente, para proporcionar una dispersión de complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. La dispersión se sometió a congelación previa con nitrógeno líquido, y se liofilizó utilizando un liofilizador (Ey ELA, FREEZE DRYER FD-1000) a una temperatura de enfriamiento de la trampa de -45 °C a un nivel de vacío de 20 Pa durante 24 horas, para obtener polvo seco de un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante. Se muestra en la tabla 4 el resultado del cálculo del tamaño de partícula promedio del complejo de micropartículas antígeno-adyuvante mediante observación con un microscopio electrónico de barrido (Se M: S-4800 fabricado por Hitachi, Ltd).
[Tabla 4]
T l 4: R m ñ rí l r m i l rí l PE -PL A
____ ____
Ejemplo comparativo 1. Preparación de partículas de homopolímero PLGA que contienen antígeno (partículas de PLGA (1) y (2))
Se prepararon partículas de PLGA que contenían un antígeno utilizando una tecnología conocida (International Journal of Pharmaceutics, 2007, vol. 334, págs. 137-148). En 15 ml de cloruro de metileno, se disolvieron 200 mg de PLGA (fabricado por SIGMA; peso molecular promedio, 40.000-75.000), para preparar una solución de PLGA de 13,3 mg/ml. A 2 ml de la solución de polímero, se añadieron 100 pl de solución acuosa de OVA de 5 mg/ml con agitación a 19.000 rpm (con un homogeneizador fabricado por Polytron), y la agitación se llevó a cabo de la misma manera durante 5 minutos, para producir una solución W/O. La solución W/O se añadió a 20 ml de solución acuosa de alcohol polivinílico al 1 % con agitación a 19.000 rpm, y se llevó a cabo la agitación de la misma manera durante 5 minutos, para producir una solución W/O/W. La solución W/O/W se agitó a 200 rpm durante 12 horas y, posteriormente, se sometió a congelación previa con nitrógeno líquido, seguido de liofilización utilizando un liofilizador (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) a una temperatura de enfriamiento de la trampa de -45 °C a un nivel de vacío de 20 Pa durante 12 horas, para obtener una partícula de PLGA que contenía un antígeno. La partícula obtenida se observó con un microscopio electrónico de barrido (SEM: S-4800 fabricado por Hitachi, Ltd.) para calcular el tamaño promedio de partícula, y se reveló que el tamaño promedio de partícula era de 2 pm. Además, la partícula de PLGA (2) se preparó utilizando una solución acuosa de CEA (0,25 mg/ml) y el tamaño promedio de
partícula se calculó de la misma manera con SEM. Se reveló que el tamaño promedio de partícula era de 2 pm. Ejemplo 5. Medición de las tasas de encapsulación de antígeno y capacidades de retención de antígeno de complejos de micropartículas CEA-adyuvante y partículas asociadas de los mismos
<Procedimiento>
Se dispusieron en un tubo Eppendorf de 1,5 ml, 20 mg de cada uno de los complejos de micropartículas adyuvantes y sus partículas asociadas (denominadas en lo sucesivo partículas encapsuladoras de CEA) preparadas mediante los procedimientos de los ejemplos 3 y 4, y se disolvieron en 1 ml de tampón A (PBS suplementado con albúmina de suero bovino al 0,1 %, Pluronic F-68 al 0,1 % y azida de sodio al 0,02 %), seguido de separación en partículas (precipitado) y sobrenadante por centrifugación a 18.000 x g durante 10 minutos. El sobrenadante se recogió en otro tubo, y las partículas se resuspendieron en 1 ml de un tampón, seguido de llevar a cabo la separación nuevamente en partículas y sobrenadante por centrifugación en las condiciones anteriores. Esta operación de lavado se repitió una vez más (un total de tres veces de centrifugación), y la concentración de CEA del sobrenadante recogido por cada vez de centrifugación se midió utilizando un kit ELISA (fabricado por Hope Laboratories, TM-201).
A partir de la cantidad de CEA alimentada tras la preparación de la partícula (respecto a un peso de la partícula encapsuladora de CEA de 20 mg), se restó el total de las cantidades de CEA en los sobrenadantes obtenidos durante las tres veces de centrifugación, y se calculó la tasa de encapsulación según la siguiente ecuación.
[Ecuación 1]
Cantidad alimentada de CEA (ng) — Cantidad total de CEA en los sobrenadantes (ng)
Tasa de encapsulación (%) x 100 Cantidad alimentada de CEA (ng)
En términos de medición de la capacidad de liberación del antígeno, las partículas después de las tres veces de lavado se suspendieron/dispersaron en 1,2 ml de tampón A. Una parte de este líquido (40 pl) se transfirió a otro tubo, y la centrifugación se llevó a cabo a 18.000 x g durante 10 minutos para precipitar las partículas, seguido de la recolección de 30 pl del sobrenadante en otro tubo (muestra de 0 horas). La suspensión de partículas restante se mezcló suavemente por inversión en un tubo Eppendorf de 1,5 ml colocado en una incubadora a 37 °C utilizando un rotador a una velocidad de 6 rpm. A partir de este líquido, se recogieron alícuotas de una pequeña cantidad (40 pl) con el tiempo, y el sobrenadante se separó por centrifugación de la misma manera que se ha descrito anteriormente. La concentración de CEA en la muestra de sobrenadante recogida en cada punto temporal se midió mediante el procedimiento ELISA descrito anteriormente, y la tasa de liberación (%) se calculó según la siguiente ecuación. [Ecuación 2]
concentración de CEA en sobrenadante (m l) x 1,2 (m l) x 100 Velocidad de liberación (%)
Cantidad de CEA encapsulada en 20 m g de partículas de CEA ng <Resultados>
Las tasas de encapsulación de antígeno de las partículas encapsuladoras de CEA fueron tal como se muestran en la tabla 5, y se reveló que el antígeno estaba encapsulado en cualquiera de las partículas encapsuladoras de CEA a una tasa elevada. La capacidad de retención para el antígeno fue baja en la partícula Dex-g-PLGA (7) que tenía cadenas de injerto hidrófobas cortas, en la que el 67,3 % del antígeno encapsulado se liberó en una semana. Por otro lado, a medida que aumentaba la longitud de la cadena de injerto hidrófoba, aumentaba la capacidad de retención para el antígeno. En las partículas de Dex-g-PLGA que tenían cadenas de injerto hidrófobas largas, aproximadamente, el 90 % del antígeno alimentado todavía estaba encapsulado incluso después de una semana. También en la partícula PEG-PLGA, solo se liberó aproximadamente el 4 % del antígeno en una semana, lo que muestra una elevada capacidad de retención de antígeno.
[Tabla 5]
Tabla 5: Tasas de enca sulación ca acidades de retención antí eno de artículas enca suladoras de CEA
Ejemplo 6. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene OVA a ratones (1)
<Procedimiento>
Entre las partículas asociadas con el complejo de micropartículas OVA-adyuvante (denominadas en lo sucesivo partículas asociadas encapsuladoras de OVA) y de los complejos de micropartículas OVA-adyuvante (denominadas en lo sucesivo partículas encapsuladoras de OVA) preparadas en los ejemplos 3 y 4, se suspendieron/dispersaron en 3 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) 40 mg (50 pg en términos de la cantidad alimentada de antígeno) de cada una de
partículas asociadas encapsuladoras de OVA que tenían cadenas hidrófobas de diferentes longitudes (partículas Dex-g-PLGA (2), (3) y (4));
una partícula asociada encapsuladora de OVA y una partícula encapsuladora de OVA que tenía tamaños de partícula diferentes de los de la partícula Dex-g-PLGA (3) (partículas Dex-g-PLGA (5) y (6)); y
una partícula PEG-PLGA (3);
seguido de centrifugación a 80 x g durante 5 minutos para precipitar la partícula y transferir el sobrenadante a otro tubo. El sobrenadante se centrifugó nuevamente a 80 x g durante 5 minutos para precipitar la partícula restante, y el sobrenadante resultante se eliminó. Los precipitados obtenidos en la primera centrifugación y la segunda centrifugación se combinaron y redispersaron en 1 ml de PBS, seguido de la repetición 3 veces de la misma operación de centrifugación, eliminando de este modo el antígeno que no estaba encapsulado en la partícula. El precipitado se redispersó finalmente en 150 pl de PBS, para proporcionar un líquido para la administración. Este líquido se administró por vía subcutánea mediante inyección única en la espalda de ratones Balb/C machos (Japan SLC, Inc.) con 9 semanas de edad. Se llevó a cabo la administración, por inyección única, de la partícula de PLGA producida en el ejemplo comparativo 1 o la solución de antígeno (50 pl) sola, como un ejemplo comparativo; o una solución preparada mezclando 50 pl de la solución de antígeno con 50 pl del adyuvante “ Alumbre Imject “ (fabricado por Thermo Scientific, denominado también en lo sucesivo alumbre), como un ejemplo de referencia. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 4 ratones individuales, y se muestran en la figura 1 los valores promedio de los títulos de anticuerpos.
Después de la administración, los ratones se mantuvieron en un entorno en el que los ratones pueden tomar libremente comida y agua, mientras se recolecta sangre de la vena de la cola con el tiempo. A la sangre recolectada, se añadió heparina a una concentración final de 3,3 UI/ml, y se llevó a cabo centrifugación a 5.000 rpm durante 5 minutos para recolectar plasma sanguíneo, seguido de medición del título de anticuerpos contra OVA en el plasma sanguíneo.
El título de anticuerpos se midió por el siguiente procedimiento. En una microplaca de 96 pocillos (MaxiSorp, fabricada por Nunc), se colocaron 100 pl de una solución de PBS que contenía 1 pg/ml de OVA, y la placa se dejó reposar a 4 °C durante toda la noche. La solución se desechó, y se colocaron 400 pl de PBS suplementado con BSA (“Bovine Serum Albumin”, Albúmina de Suero Bovino) al 0,5 % en la placa, seguido de llevar a cabo bloqueo a temperatura ambiente durante 2 horas. Los pocillos se lavaron una vez con 400 pl de un líquido de lavado (PBS suplementado con Tween 20 al 0,05 %) y se colocaron 100 pl de una muestra de plasma sanguíneo que se había diluido de 1.000 a 100.000 veces con un líquido de dilución (PBS suplementado con BSA al 0,25 % y Tween 20 al 0,05 %) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 40 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron en cada pocillo 100 pl de anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con HRP (“Horse Radish Peroxidase”, peroxidasa de rábano) (Zymed) (diluido 10.000 veces con el líquido de dilución) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 20 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron 100 pl de un líquido colorante (tampón de acetato/citrato de sodio 0,1 M (pH 4,5) que contenía peróxido de hidrógeno al 0,006 % y 0,2 mg/ml de tetrametilbencidina) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 10 minutos con agitación. La reacción se detuvo mediante la adición de 100 pl de ácido sulfúrico 1 N, y se midió la absorbancia a 450 nm utilizando un lector de microplacas. Como muestra estándar, se midió al mismo tiempo un anticuerpo monoclonal anti-OVA diluido en serie (HYB 094-05, fabricado por Antibody Shop) para proporcionar una curva de calibración, y se calculó la cantidad de anticuerpo en cada muestra como una concentración en peso (ng/ml).
<Resultados>
El cambio en el valor promedio del título de anticuerpos anti-OVA en plasma sanguíneo con el tiempo se muestra en la figura 1. La partícula encapsuladora de OVA y las partículas asociadas encapsuladoras de OVA que utilizan Dex-g-PLGA (partículas Dex-g-PLGA (2), (3), (4), (5) y (6)), y la partícula encapsuladora de OVA que utiliza PEG-PLGA (partícula PEG-PLGA (3)) mostraron un efecto continuo de aumento del título de anticuerpos durante no
menos de 6 semanas, mostrando valores mucho más elevados que los casos de administración de la partícula PLGA o el antígeno solo en los ejemplos comparativos y el caso de administración del antígeno alumbre en el ejemplo de referencia. La partícula Dex-g-PLGA (6), que tiene un tamaño de partícula pequeño, mostró una tendencia a tener el mayor efecto de aumento del título de anticuerpos.
Ejemplo 7. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene CEA a ratones
<Procedimiento>
Se evaluaron los complejos de micropartículas de CEA-adyuvante (denominados en lo sucesivo partículas encapsuladoras de CEA) y partículas asociadas de los mismos (denominadas en lo sucesivo partículas asociadas encapsuladoras de CEA) preparados mediante los procedimientos de los ejemplos 3 y 4 mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 6. La dosis por individuo fue de 1 mg (5 pg en términos del antígeno), y esta dosis se administró mediante inyección única. Como las partículas encapsuladoras de CEA y las partículas asociadas encapsuladoras de CEA, se evaluaron las partículas de Dex-g-PLGA (8), (9) y (10), que tenían cadenas de injerto hidrófobas de diferentes longitudes; las partículas Dex-g-PLGA (11) y (12), que se prepararon utilizando el compuesto (4) como en el caso de la partícula Dex-g-PLGA (9) y tenían diferentes tamaños de partícula; la partícula Dex-g-PLGA (13), que se preparó incorporando el antígeno y 25 pg de CpG en la partícula Dex-g-PLGA (9); y la partícula PEG-PLGA (4). Además, se administraron mediante inyección única 50 pl de una solución acuosa que contenía 5 pg del antígeno, como ejemplo comparativo; y una mezcla de 50 pl de una solución acuosa que contenía 5 pg del antígeno y 50 pl de alumbre, como un ejemplo de referencia. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 4 ratones individuales, y se muestran en la figura 2 y la figura 3 los valores promedio para los respectivos grupos.
El título de anticuerpos contra CEA se midió mediante el siguiente procedimiento. En una microplaca de 96 pocillos (MaxiSorp, fabricada por Nunc), se colocaron 100 pl de una solución de PBS que contenía 1 pg/ml de proteína CEA, y la placa se dejó reposar a 4 °C durante la noche. La solución se desechó, y se colocaron 400 pl de PBS suplementado con BSA al 0,5 % en la placa, seguido de bloqueo a temperatura ambiente durante 2 horas. Los pocillos se lavaron una vez con 400 pl de un líquido de lavado (PBS suplementado con Tween 20 al 0,05 %) y se colocaron 100 pl de una muestra de plasma sanguíneo que se había diluido de 1.000 a 100.000 veces con un líquido de dilución (PBS suplementado con BSA al 0,25 % y Tween 20 al 0,05 %) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 40 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron en cada pocillo 100 pl de anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con HRP (peroxidasa de rábano) (Zymed) (diluido 10.000 veces con el líquido de dilución) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 20 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron 100 pl de un líquido colorante (tampón de acetato/citrato de sodio 0,1 M (pH 4,5) que contenía peróxido de hidrógeno al 0,006 % y 0,2 mg/ml de tetrametilbencidina) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 10 minutos con agitación. La reacción se detuvo mediante la adición de 100 pl de ácido sulfúrico 1 N, y se midió la absorbancia a 450 nm utilizando un lector de microplacas. Como muestra patrón, se midió al mismo tiempo un anticuerpo monoclonal anti-CEA diluido en serie (MA1-5308, fabricado por Affinity Bioreagents) para proporcionar una curva de calibración, y la cantidad de anticuerpo en cada muestra se calculó como una concentración por peso (ng/ml). Para la medición del título de anticuerpos IgG2a, se utilizó un anticuerpo anti-IgG2a de ratón marcado con HRP (A90-107P, fabricado por Bethyl) en lugar del anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con HRP, y se utilizó como muestra de referencia una muestra de plasma sanguíneo de un solo ratón individual cuyo título de anticuerpos había aumentado. Las muestras preparadas mediante dilución en serie de esta muestra se utilizaron como patrones para preparar una curva de calibración. El título de anticuerpos correspondiente a la muestra diluida 64.000 veces se representó como 1 U.
<Resultados>
Las partículas encapsuladoras de CEA y las partículas asociadas encapsuladoras CEA utilizando Dex-g-PLGA (las partículas Dex-g-PLGA (8), (9), (10), (11) y (12), y la partícula PEG-PLGA (4)) mostraron un aumento continuo en el título de anticuerpos durante, aproximadamente, 6 semanas. Entre estas, la partícula encapsuladora de CEA que tenía un tamaño de partícula pequeño (partícula Dex-g-PLGA (12)) mostró el mayor efecto de aumento del título de anticuerpos. Además, la partícula Dex-g-PLGA (13) que contenía CpG junto con el antígeno mostró un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos que la partícula Dex-g-PLGA (9) (figura 2).
Se confirmó un aumento continuo en el título de anticuerpos anti-IgG2a para las partículas Dex-g-PLGA (8), (9), (10), (11) y (12), y la partícula PEG-PLGA (4). La partícula Dex-g-PLGA (13) preparada incorporando el antígeno y CpG en la partícula Dex-g-PLGA (9) mostró un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos que la partícula Dex-g-PLGA (9). Por otro lado, en el ejemplo de referencia en el que se administró la mezcla del antígeno y el alumbre, se observó un aumento continuo en el título de anticuerpos, pero el efecto fue más débil que en el caso de las otras partículas de Dex-g-PLGA. Se confirmó que la composición inmunogénica de la presente invención activó la inmunidad mediada por células, para la cual se sabe que el aumento en el título de IgG2a de ratón es un índice, de manera continua durante un tiempo prolongado (figura 3).
Ejemplo 8. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene OVA a ratones (2) <Procedimiento>
Utilizando un polímero Dex-g-PLGA preparado mediante el mismo procedimiento que en el caso del compuesto (4) en el ejemplo 1, se evaluó una partícula preparada mediante el mismo procedimiento que en el caso de la partícula Dex-g-PLGA (3) en el ejemplo 3 (la partícula Dex-g-PLGA (A)) mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 6. La dosis por individuo fue de 16 mg (20 pg en términos de la cantidad de OVA encapsulado), y esta dosis se administró por inyección única. Además, como ejemplo de referencia, una solución preparada mezclando 50 pl de una solución acuosa que contenía 20 pg del antígeno OVA y 50 pl de alumbre se administró mediante inyección, una vez o tres veces a intervalos de 1 semana. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 2 ratones individuales, y los valores promedio de los títulos de anticuerpos se representan en la figura 4 como valores medidos de la absorbancia a 450 nm.
<Resultados>
Se muestra en la figura 4 el cambio en el anticuerpo anti-OVA en plasma sanguíneo con el tiempo. En el ejemplo de referencia en el que se administró una vez la mezcla de alumbre y el antígeno, apenas se observó un aumento en el título de anticuerpos. En el ejemplo de referencia en el que alumbre y el antígeno se administraron tres veces, se observó un fuerte aumento en el título de anticuerpos después de la tercera administración, pero el aumento fue transitorio y no se observó ningún aumento el día 35 y más tarde. En los ratones a los que se administró la composición inmunogénica de la presente invención (partícula Dex-g-PLGA (A)) mediante inyección única, se observó un aumento continuo a partir de dos semanas después de la administración, y se confirmó el aumento continuo en el título de anticuerpos hasta el día 56.
Ejemplo 9. Administración subcutánea de la composición inmunogénica que contiene OVA a ratones (3) <Procedimiento>
La evaluación se llevó a cabo mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 6. La dosis de la partícula asociada encapsuladora de OVA por individuo fue 10 mg (12,5 pg en términos de la cantidad alimentada de antígeno). Se administraron mediante inyección única una partícula preparada utilizando un polímero Dex-g-PLGA preparado mediante el mismo procedimiento que en el caso del compuesto (4) en el ejemplo 1, partícula que se preparó mediante el mismo procedimiento que en el caso de la partícula Dex-g-PLGA (3) en el ejemplo 3 (partícula Dex-g-PLGA (B)); una partícula preparada utilizando un polímero Dex-g-PLGA preparado mediante el mismo procedimiento que en el caso del compuesto (4) en el ejemplo 1, partícula que se preparó mediante la incorporación de CpG junto con OVA durante la preparación de la partícula Dex-g-PLGA (3) en el ejemplo 3, de modo que la dosis de CpG por individuo fue 6,25 pg (partícula Dex-g-PLGA (C)); o la partícula PEG-PLGA (1) o (2). Como ejemplo comparativo, se administraron 12,5 pg del antígeno y, como un ejemplo de referencia, se administró una mezcla de 12,5 pg del antígeno y 6,25 pg de CpG, mediante inyección única. Se recogió sangre 4 semanas después de la administración a intervalos de 1 semana, y el título de anticuerpos se midió mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 6. En cada condición, la administración se llevó a cabo para 2 ratones individuales, y se muestran en la figura 5 los valores promedio de los títulos de anticuerpos.
<Resultados>
Cualquiera de las partículas asociadas encapsuladoras de OVA (las partículas PEG-PLGA (1) y (2), y las partículas Dex-g-PLGA (B) y (C)) provocaron un aumento en el título de anticuerpos del animal al que se administró la partícula, durante no menos de 6 semanas después de la administración. Las partículas Dex-g-PLGA mostraron mayores capacidades de activación inmunológica que las partículas PEG-PLGA. Además, la partícula encapsuladora de OVA en la que se encapsuló CpG (partícula Dex-g-PLGA (C)) mostró un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos que la partícula encapsuladora de OVA que no contenía CpG (partícula Dex-g-PLGA (B)).
Ejemplo 10. Administración subcutánea de la composición inmunogénica que contiene proteínas estructurales de VHC a ratones
<Procedimiento>
Utilizando un polímero Dex-g-PLGA preparado mediante el mismo procedimiento que en el caso del compuesto (4) en el ejemplo 1, y utilizando el mismo procedimiento de preparación que en el caso de la partícula Dex-g-PLGA (3) en el ejemplo 3, se preparó una partícula Dex-g-PLGA (D) (denominada en lo sucesivo partícula asociada encapsuladora de VHC-E2), la partícula Dex-g-PLGA (D) que se formó mediante asociación de un complejo de micropartículas de proteína estructural de VHC-adyuvante que contenía una proteína estructural de VHC. Esta
partícula se administró mediante inyección única mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 6. Como la proteína estructural del VHC, se utilizó una proteína quimérica compuesta por la proteína E2 derivada de la cepa J6CF y la proteína Fc de IgG humana, proteína quimérica que se había preparado según el procedimiento descrito en la solicitud de patente japonesa número 2008-254338. La dosis por individuo fue de 80 mg (1,5 pg en términos del antígeno). Además, se administraron mediante inyección única una mezcla de 25 pg de CpG y la partícula Dex-g-PLGA (D), y una mezcla de 25 pg de CpG, 50 pl de alumbre y la partícula Dex-g-PLGA (D), respectivamente. Como ejemplo comparativo, se administraron 1,5 pg del antígeno solo y, como ejemplos de referencia, se administraron 100 pl de una solución acuosa que contenía 1,5 pg del antígeno y 25 pg de CpG, 100 pl de una solución acuosa que contenía 1,5 pg del antígeno y 50 pl de alumbre, y 100 pl de una solución acuosa que contenía 1,5 pg del antígeno, 50 pl de alumbre y 25 pg de CpG mediante inyección única, respectivamente. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 2 ratones individuales.
El título de anticuerpos contra la proteína estructural del VHC se midió mediante el siguiente procedimiento. En una microplaca de 96 pocillos (MaxiSorp, fabricada por Nunc), se colocaron 100 pl de una solución de PBS que contenía 0,5 pg/ml de proteína estructural de VHC, y la placa se dejó reposar a 4 °C durante la noche. La solución se desechó y se colocaron 400 pl de PBS suplementado con BSA al 0,5 % en cada pocillo, seguido de bloqueo a temperatura ambiente durante 2 horas. Los pocillos se lavaron una vez con 400 pl de un líquido de lavado (PBS suplementado con Tween 20 al 0,05 %) y se colocaron 100 pl de una muestra de plasma sanguíneo que se había diluido de 1.000 a 100.000 veces con un líquido de dilución (PBS suplementado con BSA al 0,25 % y Tween 20 al 0,05 %) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 40 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron en cada pocillo 100 pl de anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con HRP (peroxidasa de rábano) (Zymed) (diluido 10.000 veces con el líquido de dilución) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 20 minutos con agitación. Los pocillos se lavaron tres veces con el líquido de lavado, y se colocaron 100 pl de un líquido colorante (tampón de acetato/citrato de sodio 0,1 M (pH 4,5) que contenía peróxido de hidrógeno al 0,006 % y 0,2 mg/ml de tetrametilbencidina) en cada pocillo, seguido de permitir que la reacción prosiguiera a temperatura ambiente durante 10 minutos con agitación. La reacción se detuvo mediante la adición de 100 pl de ácido sulfúrico 1 N, y se midió la absorbancia a 450 nm utilizando un lector de microplacas. En la figura 6, los valores promedio de los títulos de anticuerpos se representan como valores medidos de la absorbancia a 450 nm.
<Resultados>
La partícula asociada encapsuladora de VHC-E2 (partícula Dex-g-PLGA (D)) mostró un efecto continuo de aumento del título de anticuerpos durante 7 semanas. Además, en el caso en el que la partícula asociada encapsuladora de VHC-E2 se mezcló con CpG, y en el caso en el que la partícula asociada encapsuladora de VHC-E2 se mezcló con CpG y alumbre, se obtuvo un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos en comparación con el caso en el que se administró la partícula asociada encapsuladora de VHC-E2 sola. En el ejemplo comparativo en el que se administró el antígeno solo, apenas se observó un aumento en el título de anticuerpos. En los ejemplos de referencia en los que se administró la mezcla del antígeno y el alumbre; mezcla del antígeno y CpG; o mezcla del antígeno, CpG y alumbre, el efecto de aumento del título de anticuerpos fue mayor que en el caso de la administración del antígeno solo, pero el efecto de aumento del título fue mucho menor que en el caso de la administración de la partícula asociada encapsuladora de VHC-E2.
Ejemplo 11. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene CEA a ratones (2)
<Procedimiento>
Se evaluaron partículas asociadas con el complejo de micropartículas CEA-adyuvante preparadas mediante los procedimientos de los ejemplos 3 y 4 (denominadas en lo sucesivo partículas asociadas encapsuladoras de CEA) mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7. La dosis por individuo fue de 400 pg (1 pg en términos del antígeno), y esta dosis se administró en la semana 0 y la semana 4. Como las partículas asociadas encapsuladoras de CEA, se evaluaron las partículas Dex-g-PLGA (14) y (15) que tenían cadenas hidrófilas de dextrano con un peso molecular de 1.500, las partículas Dex-g-PLGA (16) y (17) que tenían cadenas hidrófilas de dextrano con un peso molecular de 5.000, la partícula Dex-g-PLGA (18) que tenía cadenas hidrófilas de dextrano con un peso molecular de 175.000, y la partícula Dex-g-PLGA (19) que tenía cadenas hidrófilas de dextrano con un peso molecular de 40.000. En cada condición, se llevó a cabo la administración a 5 ratones individuales, y el valor promedio en cada grupo se muestra en la figura 7. El título de anticuerpos contra CEA se midió mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7.
<Resultados>
Las partículas asociadas encapsuladoras de CEA que utilizan Dex-g-PLGA (partículas Dex-g-PLGA (14), (15), (16), (17), (18) y (19)) mostraron un aumento continuo en el título de anticuerpos. Entre estas, las partículas asociadas encapsuladoras de CEA constituidas por dextrano que tenían un peso molecular de 175.000 y un peso molecular de 40.000 (partículas Dex-g-PLGA (18) y (19)) mostraron mayores efectos de aumento del título de anticuerpos que las
partículas asociadas encapsuladoras de CEA constituidas por cadenas hidrófilas de dextrano que tenían un peso molecular de 1.500 y un peso molecular de 5.000 (partículas Dex-g-PLGA (14), (15), (16) y (17)) (figura 7).
Ejemplo 12. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene CEA a ratones (3)
<Procedimiento>
Se evaluaron las partículas asociadas con el complejo de micropartículas CEA-adyuvante (denominadas en lo sucesivo partículas asociadas encapsuladoras de CEA) preparadas mediante los procedimientos de los ejemplos 3 y 4 mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7. La dosis por individuo fue de 400 pg (1 pg en términos del antígeno), y esta dosis se administró en la semana 0 y la semana 4. Como las partículas asociadas encapsuladoras de CEA, se evaluaron 3 tipos de partículas que se prepararon utilizando el mismo polímero pero que tenían diferentes tamaños de partícula (partícula Dex-g-PLGA (20) (tamaño de partícula, 0,4 pm), partícula Dex-g-PLGA (21) (tamaño de partícula, 5 pm) y partícula Dex-g-PLGA (tamaño de partícula, 40 pm)). En cada condición, la administración se llevó a cabo a 5 ratones individuales, y se muestra en la figura 8 el valor promedio en cada grupo. El título de anticuerpos contra CEA se midió mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7.
<Resultados>
La partícula encapsuladora CEA y las partículas asociadas encapsuladoras CEA utilizando Dex-g-PLGA (partículas Dex-g-PLGA (20), (21) y (22)) mostraron un aumento continuo en el título de anticuerpos. Entre estas, la partícula Dex-g-PLGA (20) que tenía un tamaño de partícula promedio de 0,4 pm mostró el mayor efecto de aumento del título de anticuerpos; la partícula Dex-g-PLGA (21) que tenía un tamaño promedio de partícula de 5 pm mostró el segundo mayor efecto de aumento del título de anticuerpos; y la partícula Dex-g-PLGA (22) que tenía un tamaño de partícula promedio de 40 pm mostró el efecto de aumento del título de anticuerpos más bajo (figura 8).
Ejemplo 13. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene OVA a ratones (4)
<Procedimiento>
La evaluación se llevó a cabo mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 9. La dosis por administración fue de 20 pg en términos de la cantidad de antígeno en todos los casos, y el antígeno se administró un total de 3 veces en la semana 0, semana 2 y semana 4. La evaluación se llevó a cabo por comparación entre el caso en el que se administró una mezcla de 20 pg de OVA y la partícula Dex-g-PLGA (24) que no contenía antígeno (16 mg en términos de la cantidad de polímero), el caso en el que se administró la partícula Dex-g-PLGA (23) que contenía 20 pg de OVA (16 mg en términos de la cantidad de polímero), el caso en el que se administró una mezcla de 20 pg de OVA y 50 pl de alumbre, y el caso en el que se administraron 20 pg de OVA y la partícula Dex-g-PLGA (24) que no contenía antígeno en diferentes sitios. El título de anticuerpos en sangre se midió mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 9. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 2 ratones individuales. La figura 9 muestra el valor promedio del título de anticuerpos.
<Resultados>
Todas las partículas mostraron el efecto de aumento del título de anticuerpos. La partícula asociada encapsuladora de OVA (partícula Dex-g-PLGA (23)) mostró un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos en comparación con el caso en el que se administró la mezcla de o Va y la partícula (partícula Dex-g-PLGA (24)) que no contenía el antígeno, y el caso en el que el OVA y la partícula Dex-g-PLGA (24) se administraron en diferentes sitios.
Ejemplo 14. Administración subcutánea de composición inmunogénica que contiene CEA a ratones (4)
<Procedimiento>
La evaluación se llevó a cabo mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7. Solo en el caso en el que se administró una mezcla de CEA y alumbre, se llevó a cabo un total de 3 veces de administración en la semana 0, semana 2 y semana 4, y en los otros casos en los que se administraron las partículas encapsuladoras de CEA y las partículas asociadas encapsuladoras de CEA, se llevó a cabo una administración única en la semana 0. La evaluación se llevó a cabo por comparación entre partículas que se prepararon utilizando el mismo polímero pero que tenían diferentes tamaños de partícula: partícula Dex-g-PLGA (25) (tamaño de partícula, 0,4 pm; contenido de polímero, 4 mg; cantidad de administración de antígeno, 10 pg), partícula Dex-g-PLGA (26) (tamaño de partícula, 5 pm; contenido de polímero, 4 mg; cantidad de administración de antígeno, 10 pg), partícula Dex-g-PLGA (27) (tamaño de partícula, 40 pm; contenido de polímero, 4 mg; cantidad de administración de antígeno, 10 pg), y partícula Dex-g-PLGA (28) (tamaño de partícula, 0,4 pm; contenido de polímero, 4 mg; cantidad de administración de antígeno n, 1 pg). Además, en términos de la partícula Dex-g-PLGA (25), se hicieron comparaciones con los casos en los que se redujo la cantidad de administración a 1/10 (contenido de polímero, 400 pg; cantidad de administración de antígeno, 1 pg) o 1/100 (contenido de polímero, 40 pg; cantidad de administración de antígeno,
0,1 pg). Como ejemplo comparativo, se evaluó la partícula PLGA (2) preparada por encapsulación de CEA. En cada condición, la administración se llevó a cabo a 6 ratones individuales, y se midió el título de anticuerpos, IgG1 e IgG2a en sangre mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7. La figura 10 y la figura 11 muestran los valores promedio.
<Resultados>
Las partículas encapsuladoras de CEA (partículas Dex-g-PLGA (25) y (26)) que tenían un tamaño de partícula promedio de 0,4 pm y un tamaño de partícula promedio de 5 pm mostraron un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos en comparación con la partícula encapsuladora de CEA (partícula Dex-g-PLGA (27)) que tenía un tamaño promedio de partícula de 40 pm. Aunque la partícula Dex-g-PLGA (25) mostró un elevado efecto de aumento del título de anticuerpos, la reducción de la cantidad de administración a 1/10 o 1/100 dio como resultado una disminución del efecto de aumento del título de anticuerpos, y en el caso en el que la cantidad de administración de la partícula fue 1/100, solo se pudo obtener un bajo efecto de aumento del título de anticuerpos. La comparación entre la administración de la partícula Dex-g-PLGA (25) en una cantidad de 1/10 y la administración de la partícula Dex-g-PLGA (28), en ambas de las cuales la cantidad del antígeno administrado fue de 1 pg, mostró que la administración de una mayor cantidad de polímero da como resultado un mayor efecto de aumento del título de anticuerpos (figura 10).
Además, a la sangre en la semana 6, se midió el título de anticuerpos IgG2a mediante el mismo procedimiento que en el ejemplo 7, y se midió el título de anticuerpos IgG1 mediante el mismo procedimiento que en la medición del título de anticuerpos IgG2a utilizando un anticuerpo IgG1. Según la medición de la proporción entre estos, la administración de una mezcla de alumbre y el anticuerpo dio como resultado un valor bajo de IgG2a/IgG1, mientras que la administración de la partícula Dex-g-PLGA (25), (26) o (27) dio como resultado un valor elevado de IgG2a/IgG1, lo que muestra una tendencia a que un tamaño de partícula más pequeño dé como resultado un valor de IgG2a/IgG1 más elevado (figura 11).
APLICABILIDAD INDUSTRIAL
La composición inmunogénica de la presente invención se puede utilizar como una vacuna para terapia y/o profilaxis de enfermedades infecciosas, cáncer y similares.
Claims (9)
1. Composición inmunogénica que comprende como ingrediente eficaz un complejo de micropartículas antígeno-adyuvante que contiene un antígeno encapsulado en una micropartícula adyuvante compuesta por un polímero anfifílico cuyo segmento hidrófobo es un ácido poli(láctico-co-glicólico), y el segmento hidrófilo del polímero anfifílico es un polisacárido refractario.
2. Composición inmunogénica, según la reivindicación 1, que comprende como ingrediente eficaz una partícula compuesta por dicho complejo de micropartículas antígeno-adyuvante asociadas entre sí.
3. Composición inmunogénica, según la reivindicación 1 o 2, en la que dicha micropartícula adyuvante tiene una parte hidrófila en el interior de la misma, dicha parte hidrófila está compuesta por un segmento hidrófilo de dicho polímero anfifílico, y tiene una capa externa compuesta por una parte hidrófoba constituida por dicho segmento hidrófobo de dicho polímero anfifílico.
4. Composición inmunogénica, según la reivindicación 1, en la que dicho polisacárido refractario es dextrano.
5. Composición inmunogénica, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además un modificador de superficie unido a dicho ácido poli(láctico-co-glicólico) de dicha micropartícula adyuvante.
6. Composición inmunogénica, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el tamaño promedio de partícula de dicho complejo de micropartículas antígeno-adyuvante o dicha partícula compuesta de dicho complejo de micropartículas antígeno-adyuvante asociadas entre sí es de 0,1 a 50 pm.
7. Composición inmunogénica, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende además una sustancia inmunoactivadora como ingrediente eficaz.
8. Composición inmunogénica, según la reivindicación 7, en la que dicha sustancia inmunoactivadora es un ácido nucleico.
9. Composición inmunogénica, según la reivindicación 7 u 8, en la que dicha sustancia activadora inmunitaria es CpG.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009045555 | 2009-02-27 | ||
| PCT/JP2010/053055 WO2010098432A1 (ja) | 2009-02-27 | 2010-02-26 | 免疫原性組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2755361T3 true ES2755361T3 (es) | 2020-04-22 |
Family
ID=42665636
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10746311T Active ES2755361T3 (es) | 2009-02-27 | 2010-02-26 | Composición inmunogénica |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9056095B2 (es) |
| EP (1) | EP2402032B1 (es) |
| JP (1) | JP6008345B2 (es) |
| KR (1) | KR20110128284A (es) |
| CN (1) | CN102333541B (es) |
| AU (1) | AU2010218752B2 (es) |
| BR (1) | BRPI1005919B1 (es) |
| CA (1) | CA2753567C (es) |
| DK (1) | DK2402032T3 (es) |
| ES (1) | ES2755361T3 (es) |
| HU (1) | HUE046865T2 (es) |
| MX (1) | MX2011008923A (es) |
| PL (1) | PL2402032T3 (es) |
| PT (1) | PT2402032T (es) |
| WO (1) | WO2010098432A1 (es) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009156960A2 (en) | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Pfizer Inc. | Novel adjuvant compositions |
| ES2829819T3 (es) * | 2010-08-26 | 2021-06-02 | Toray Industries | Composición inmunogénica |
| JPWO2013085021A1 (ja) * | 2011-12-09 | 2015-04-27 | 株式会社林原 | 抗体産生増強用の組成物 |
| PT2897620T (pt) * | 2012-09-21 | 2020-09-03 | Intensity Therapeutics Inc | Método de tratamento de cancro |
| CN102988981B (zh) * | 2012-12-13 | 2015-03-04 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
| UA121200C2 (uk) | 2013-09-19 | 2020-04-27 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Ад'ювант на основі олії |
| EP3056208B1 (en) * | 2013-10-09 | 2021-08-18 | Toray Industries, Inc. | Immunopotentiator |
| EP3134118B1 (en) * | 2014-04-18 | 2020-01-22 | Auburn University | Particulate vaccine formulations for inducing innate and adaptive immunity |
| US10293044B2 (en) | 2014-04-18 | 2019-05-21 | Auburn University | Particulate formulations for improving feed conversion rate in a subject |
| EP4248992A3 (en) | 2015-01-16 | 2023-12-27 | Zoetis Services LLC | Foot-and-mouth disease vaccine |
| GB201918963D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Provost Fellows Scholars And Other Members Of Board Of Trinity College Dublin | Polymeric nanoparticles as vaccine adjuvants |
| CA3230661A1 (en) * | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Toray Industries, Inc. | Composition for enhancing immunogenicity |
| KR20240054289A (ko) | 2021-08-30 | 2024-04-25 | 도레이 카부시키가이샤 | 면역원성 증강용 조성물 |
| KR20240065074A (ko) | 2021-09-16 | 2024-05-14 | 도레이 카부시키가이샤 | 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약품 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4111403B2 (ja) | 1996-10-11 | 2008-07-02 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア | 免疫刺激ポリヌクレオチド／免疫調節分子複合体 |
| CN101137700B (zh) | 2005-03-09 | 2012-07-18 | 东丽株式会社 | 微粒及医药组合物 |
| JP2008088158A (ja) * | 2006-09-05 | 2008-04-17 | Toray Ind Inc | 親水性活性物質含有微粒子の製造方法 |
| JP2008254338A (ja) | 2007-04-05 | 2008-10-23 | Bridgestone Corp | タイヤの製造方法およびその装置 |
| JP5608087B2 (ja) | 2008-09-30 | 2014-10-15 | 東レ株式会社 | Ｃ型肝炎ウイルスのエンベロープタンパク質２に結合する抗体及びそれを用いたｃ型肝炎ウイルスの遺伝子型の同定方法 |
-
2010
- 2010-02-26 BR BRPI1005919-9A patent/BRPI1005919B1/pt active IP Right Grant
- 2010-02-26 HU HUE10746311A patent/HUE046865T2/hu unknown
- 2010-02-26 MX MX2011008923A patent/MX2011008923A/es active IP Right Grant
- 2010-02-26 CN CN201080009580.0A patent/CN102333541B/zh active Active
- 2010-02-26 US US13/202,336 patent/US9056095B2/en active Active
- 2010-02-26 DK DK10746311T patent/DK2402032T3/da active
- 2010-02-26 PL PL10746311T patent/PL2402032T3/pl unknown
- 2010-02-26 JP JP2010508657A patent/JP6008345B2/ja active Active
- 2010-02-26 EP EP10746311.9A patent/EP2402032B1/en active Active
- 2010-02-26 PT PT107463119T patent/PT2402032T/pt unknown
- 2010-02-26 AU AU2010218752A patent/AU2010218752B2/en not_active Ceased
- 2010-02-26 WO PCT/JP2010/053055 patent/WO2010098432A1/ja not_active Ceased
- 2010-02-26 CA CA2753567A patent/CA2753567C/en active Active
- 2010-02-26 KR KR1020117020493A patent/KR20110128284A/ko not_active Ceased
- 2010-02-26 ES ES10746311T patent/ES2755361T3/es active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL2402032T3 (pl) | 2020-03-31 |
| WO2010098432A1 (ja) | 2010-09-02 |
| EP2402032B1 (en) | 2019-08-14 |
| US20110300223A1 (en) | 2011-12-08 |
| JP6008345B2 (ja) | 2016-10-19 |
| AU2010218752B2 (en) | 2015-05-28 |
| CN102333541B (zh) | 2014-09-03 |
| CA2753567C (en) | 2019-12-31 |
| BRPI1005919B1 (pt) | 2021-06-22 |
| JPWO2010098432A1 (ja) | 2012-09-06 |
| HUE046865T2 (hu) | 2020-03-30 |
| US9056095B2 (en) | 2015-06-16 |
| AU2010218752A1 (en) | 2011-08-25 |
| EP2402032A1 (en) | 2012-01-04 |
| CA2753567A1 (en) | 2010-09-02 |
| DK2402032T3 (da) | 2019-11-04 |
| PT2402032T (pt) | 2019-11-19 |
| EP2402032A4 (en) | 2013-05-01 |
| CN102333541A (zh) | 2012-01-25 |
| BRPI1005919A2 (pt) | 2016-02-10 |
| MX2011008923A (es) | 2011-09-09 |
| KR20110128284A (ko) | 2011-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2402032B1 (en) | Immunogenic composition | |
| ES2829819T3 (es) | Composición inmunogénica | |
| Zhu et al. | Co-delivery of antigen and dual agonists by programmed mannose-targeted cationic lipid-hybrid polymersomes for enhanced vaccination | |
| Shakya et al. | Applications of polymeric adjuvants in studying autoimmune responses and vaccination against infectious diseases | |
| Fontana et al. | Delivery of therapeutics with nanoparticles: what's new in cancer immunotherapy? | |
| Courant et al. | Tailoring nanostructured lipid carriers for the delivery of protein antigens: Physicochemical properties versus immunogenicity studies | |
| Geary et al. | Diaminosulfide based polymer microparticles as cancer vaccine delivery systems | |
| Simón-Vázquez et al. | Polymeric nanostructure vaccines: applications and challenges | |
| CN117813113A (zh) | 免疫原性增强用组合物 | |
| KR20240054289A (ko) | 면역원성 증강용 조성물 | |
| KR20160060072A (ko) | 면역 부활화제 | |
| HK1203411A1 (en) | Inulin and inulin acetate formulations | |
| Courant et al. | Mathilde Menneteau, Patrice N Marche, Fabrice P. Navarro** corresponding author: fabrice. navarro@ cea. fr | |
| Cordeiro | Rational design of polymer-based nanosystems for an efficient targeting of the immune system | |
| Montjoy | Chemically-Modified Inulin as a Polymeric Vaccine Carrier | |
| TW202615065A (zh) | mRNA疫苗佐劑 |