ES2768649T3 - Preparaciones para tratar un cáncer positivo para GD2 - Google Patents

Abstract

Una preparación para tratar el neuroblastoma en un paciente humano que tiene dicho neuroblastoma, en donde: (a) la preparación comprende un anticuerpo monoclonal producido en células CHO, y que comprende la cadena ligera de la SEQ ID NO: 3 y la cadena pesada de la SEQ ID NO: 4 (ch14.18/CHO); (b) la preparación se debe administrar al paciente sin la administración concomitante de IL-2 en el mismo ciclo de tratamiento; (c) el anticuerpo ch14.18/CHO se administra al paciente como una infusión continua durante 24 horas al día durante 10 días consecutivos por ciclo; y (d) el anticuerpo ch14.18/CHO se debe administrar en una dosis diaria de 5 a 15 mg/m2/día y en una dosis total de 50 a 150 mg/m2/ciclo.

Description

DESCRIPCIÓN

Preparaciones para tratar un cáncer positivo para GD2

Campo de la invención

La presente descripción se refiere a preparaciones y métodos para tratar un cáncer positivo para GD2 administrando una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 a un paciente, en donde el paciente no se trata de forma concomitante con interleuquina-2 (IL-2). En particular, la invención se refiere a preparaciones y métodos para tratar un cáncer positivo para GD2 por administración de una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado a un paciente, en donde el paciente no se trata de forma concomitante con interleuquina-2 (IL-2), y en ciertas realizaciones tampoco se trata con factor estimulador de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) y/o una o más de otras citoquinas. Además, la descripción se refiere a preparaciones y métodos para el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde se administra una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 al paciente como una infusión continua durante uno o más días, sin administración concomitante de IL-2. La descripción se refiere además a preparaciones y métodos para tratar un cáncer positivo para GD2 en un paciente administrando una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 al paciente sin administración concomitante de IL-2, y en donde uno o más periodos de tratamiento con el anticuerpo son precedidos, acompañados y/o seguidos por uno o más periodos de tratamiento con un retinoide. La descripción también se refiere a preparaciones y métodos para tratar un cáncer positivo para GD2 por administración de una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 como una infusión continua durante 24 horas al día a un paciente, en donde el paciente no se trata de forma concomitante con interleuquina-2 (IL-2), y en donde uno o más periodos de tratamiento con el anticuerpo pueden ser precedidos, acompañados y/o seguidos por uno o más periodos de tratamiento con un retinoide.

Antecedentes de la invención

El neuroblastoma, después del cáncer cerebral, es el cáncer sólido más frecuente en niños menores de cinco años. En el neuroblastoma de alto riesgo, más de la mitad de los pacientes que reciben terapia estándar tienen una recaída y finalmente mueren a causa de la enfermedad. El 90% de los casos ocurre entre los cero a seis años de edad. La incidencia mundial en los países industrializados es de alrededor de 2000 casos por año.

Se están usando cada vez más los anticuerpos monoclonales contra antígenos específicos en oncología. El modo de acción completamente diferente en comparación con las terapias citotóxicas los ha convertido en una ventaja valiosa, como lo muestran los precursores como trastuzumab, cetuximab, bevacizumab, rituximab y otros. El disialogangliósido GD2 es un glicoesfingolípido expresado principalmente en la superficie celular. La expresión de GD2 en tejidos normales es rara y está limitada principalmente al sistema nervioso central (SNC), nervios periféricos y melanocitos. En las células cancerosas, GD2 se expresa de manera uniforme en neuroblastomas y la mayoría de los melanomas y en un grado variable en los sarcomas de huesos y tejidos blandos, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de células renales y tumores cerebrales (Navid et al., Curr Cáncer Drug Targets 2010; 10: 200-209). Debido a la expresión relativamente selectiva de tumor combinado con su presencia en la superficie celular, GD2 representa un objetivo prometedor para la inmunoterapia del cáncer basada en anticuerpos.

Por consiguiente, varios anticuerpos anti-GD2 son objeto de investigación preclínica o clínica en neuroblastoma, melanoma y otros cánceres relacionados con GD2.

APN311 es una formulación del anticuerpo anti-GD2 monoclonal quimérico ch14.18 producido de forma recombinante en células de ovario de hámster chino (CHO), que es la línea celular de mamífero estándar para la producción de anticuerpos disponibles en el mercado. En un estudio clínico de fase I en pacientes con neuroblastoma recurrente/refractario, se lograron remisiones con este anticuerpo como agente único. En 2006, la Sociedad Internacional Europea de Oncología Pediátrica - Neuroblastoma (SIOPEN) inició un ensayo de fase III que comprendía el tratamiento con APN311 y actualmente está investigando los efectos sobre la supervivencia libre de eventos y global relacionada con el tratamiento con APN311 junto con isotretinoína, es decir, ácido cis-retinoico (cis-RA), con o sin IL-2 s.c. En un estudio comparable de EE.UU. que usaba un paquete de tratamiento de 4 fármacos, en concreto un anticuerpo relacionado producido en células de hibridoma murino SP2/0 junto con interleuquina-2 (IL-2 o IL2) i.v., factor estimulador de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) e isotretinoína, es interesante que se observó mejora de la supervivencia en niños con neuroblastoma en remisión completa después de terapias iniciales y sin evidencia de enfermedad.

APN301 es una formulación de una inmunocitoquina que comprende un anticuerpo anti-GD2 humanizado (hu14.18) e IL-2 como una proteína de fusión. La parte de anticuerpo se une específicamente al antígeno GD2 que se expresa fuertemente en el neuroblastoma y varios otros cánceres. La IL-2 es una citoquina que recluta múltiples tipos de células efectoras del sistema inmunitario. En pacientes con neuroblastoma, APN301 está diseñado para localizar células tumorales positivas para GD2 a través del componente de anticuerpo. La IL-2 fusionada estimula el sistema inmunitario del paciente contra el tumor por activación tanto de células NK como T, mientras que la parte Fc del anticuerpo está diseñada para producir la muerte de las células tumorales por citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). La inmunocitoquina ha mostrado actividad en un estudio clínico de fase II en niños con neuroblastoma recurrente/refractario (Shusterman et al.; JCO 201028(33):4969-75) y también se ensayó en un estudio de fase I/II en melanoma maligno en fase terminal, mostrando activación inmunitaria.

Otros anticuerpos anti-GD2 en investigación o desarrollo son, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal 3F8 (murino en fase II, así como humanizado en fase I), y 8B6 (específico para GD2 O-acetilado, preclínico). Además, los anticuerpos antiidiotípicos tales como, p. ej., 4B5, 1A7 y A1G4 se han investigado como potenciales vacunas tumorales, sin embargo, parece que su desarrollo se ha abandonado. El documento WO 2008/049643 también describe anticuerpos antiidiotípicos, que imitan epítopos de GD2, es decir, mimótopos de GD2.

Otra versión del anticuerpo anti-GD2 14.18 es hu14.18K322A como se describe en el documento WO2005/070967, que tiene una mutación puntual en la región Fc con el fin de reducir la CDC, pero mantiene la ADCC, p. ej., por la expresión en una línea celular adecuada para mejorar la ADCC, tal como YB2/0. Se considera que la reducción en la CDC da como resultado una reducción del dolor asociado con el tratamiento con anticuerpos.

La actividad antitumoral de los anticuerpos en general se produce a través de la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC o fijación del complemento) o a través de la citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpos (ADCC). Estas dos actividades se conocen en la técnica como "funciones efectoras" y son mediadas por anticuerpos, en particular de la clase IgG. Todas las subclases de IgG, excepto IgG4 (IgG1, IgG2, IgG3) median la ADCC y la fijación del complemento en cierta medida, siendo la IgG1 e IgG3 las más potentes para ambas actividades. Se cree que la ADCC ocurre cuando los receptores de Fc en los linfocitos citolíticos naturales (NK) y/u otras células del sistema inmunitario portadoras de receptores de Fc (células efectoras) se unen a la región Fc de los anticuerpos unidos al antígeno en la superficie de una célula. La unión al receptor de Fc le indica a la célula efectora que mate a la célula objetivo. Se cree que la CDC ocurre por múltiples mecanismos; un mecanismo se inicia cuando un anticuerpo se une a un antígeno en la superficie de una célula. Una vez que se forma el complejo antígeno-anticuerpo, se cree que la molécula C1q se une al complejo antígeno-anticuerpo. Después C1q se escinde para iniciar una cascada de activación enzimática y escisión de otras proteínas del complemento, que después se unen a la superficie celular objetivo y facilitan su muerte, por ejemplo, a través de lisis celular y/o ingestión por macrófagos.

Se cree que la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) tiene una función importante en la inmunoterapia. Desafortunadamente, la ADCC a menudo está deprimida en pacientes con cáncer. Se considera que las citoquinas aumentan la ADCC por activación directa de células inmunitarias o por incremento de antígenos asociados a tumores (TAA) en las células tumorales. Por ejemplo, la aldesleukina (IL-2) produce la activación de linfocitos citolíticos naturales (NK), generación de linfocitos citolíticos activados por linfoquinas (LAK) y aumenta la ADCC. La aldesleukina (IL-2) ha sido eficaz para inducir respuestas antitumorales medibles en pacientes con carcinoma de células renales y melanoma. Además, se ha mostrado que el GM-CSF tanto in vitro como in vivo mejora la inmunidad antitumoral por la activación directa de monocitos, macrófagos, células dendríticas y citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC), y activación indirecta de células T a través de TNF, interferón e interleuquina 1 (IL-1). Se considera que el GM-CSF mejora las funciones de las células críticas para la activación inmunitaria contra células tumorales, solo o con otras citoquinas o anticuerpos monoclonales.

Por lo tanto, en ensayos clínicos actuales que investigan anticuerpos anti-GD2, en particular ch14.18, el tratamiento con anticuerpos se combina con el tratamiento con citoquinas (y tratamiento con retinoides), en especial con IL-2 y/o GM-CSF. Por consiguiente, el estado de la técnica enseña que es ventajoso administrar citoquinas a pacientes con cáncer positivo para GD-2, en particular en combinación con el tratamiento con anticuerpos anti-GD2.

Se han realizado ensayos clínicos anteriores descritos en el estado de la técnica con un anticuerpo anti-GD2 sin tratamiento concomitante con IL-2 y/o cualquier otra citoquina, para investigar los efectos generales, efectos adversos y las dosis del anticuerpo como base para la investigación adicional. Sin embargo, el estado de la técnica enseña claramente a tratar finalmente pacientes con un anticuerpo anti-GD2 en combinación con al menos una citoquina, en especial IL-2. Por consiguiente, cualquier régimen de tratamiento usado actualmente con un anticuerpo anti-GD2 comprende al menos una citoquina, en particular IL-2, también en combinación con GM-CSF. Véase sobre esto Ladenstein (2013) MABS 5 (5): 801-809; y Yu (2010); NEJM 363 (14): 1324-1334.

El estado de la técnica también describe la administración del anticuerpo anti-GD2 14/18/CHO en una infusión continua, pero en combinación con la administración de IL-2: véase Lode (2013); J. Immunother. Cáncer 1 (Sup. 1): P244

En cambio, un aspecto clave de la invención es que dichos pacientes se pueden tratar con un anticuerpo anti-GD2 sin IL-2, en especial sin ningún tratamiento con citoquinas.

El tratamiento con una o más citoquinas en combinación con el anticuerpo puede tener efectos secundarios graves, tales como, p. ej., fiebre, reacciones alérgicas, hipotensión, síndrome de fuga capilar, etc., que incluso pueden conducir a la muerte. El tratamiento con citoquinas que lo acompaña incluso potencia los acontecimientos adversos del tratamiento con anticuerpos, p. ej., dolor, puesto que hay una sinergia en los acontecimientos adversos de ambos fármacos. Sin embargo, con las preparaciones y métodos de la presente descripción, se puede omitir completamente cualquier citoquina(s), dando como resultado efectos adversos sustancialmente reducidos del tratamiento con el anticuerpo.

Resumen de la descripción y de la invención.

Se describen en la presente memoria preparaciones que comprenden un anticuerpo anti-GD2 para usar en el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado se administra al paciente sin la administración concomitante de IL-2, y en donde se trata un cáncer positivo para GD2.

También se describen preparaciones y métodos para el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado se administra al paciente como una infusión continua durante 24 horas al día, sin la administración concomitante de IL-2.

Se describen además preparaciones y métodos para el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado se administra al paciente sin la administración concomitante de IL-2, y en donde el uno o más periodos de tratamiento con anti-GD2 están precedidos, acompañados y/o seguidos por uno o más periodos de tratamiento con un retinoide. en ciertos aspectos, el paciente no se trata con GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas, en especial no dentro del mismo ciclo de tratamiento.

La invención se refiere a un régimen específico que produce menos efectos secundarios. En la presente descripción, se describirán varios aspectos que van más allá del alcance de la invención en sí, pero proporcionan, solos o en combinación, parámetros útiles para operar la invención. La propia invención está definida por las reivindicaciones adjuntas.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra las curvas de Kaplan-Meier de los datos de supervivencia libre de eventos (EFS, Figura 1A) y supervivencia global (OS, Figura 1B) (en porcentaje a lo largo del tiempo) de 328 pacientes con neuroblastoma tratados con APN311 e isotretinoína, pero sin IL-2 (en rojo) y pacientes tratados con APN311 e isotretinoína e IL-2 (en azul).

La Figura 2 muestra la comparación de los datos de EFS (en porcentaje a lo largo del tiempo) de 128 pacientes del Ejemplo 2 que tuvieron una respuesta completa (RC) al inicio del tratamiento (Figura 2A, el diagrama de la derecha) con los datos de EFS (en porcentaje a lo largo del tiempo) de Yu et al. 2010, New England Journal of Medicine 363:1324-1334 (Figura 2A, el diagrama de la izquierda, que también comprende datos de pacientes con respuesta completa). La figura 2B muestra una superposición de gráficos para comparar.

La Figura 3 muestra la comparación de los datos de OS (en porcentaje a lo largo del tiempo) de 128 pacientes del Ejemplo 2 que tuvieron una respuesta completa (RC) al inicio del tratamiento (Figura 3A, el diagrama a la derecha) con los datos de OS (en porcentaje a lo largo del tiempo) de Yu et al. 2010 (Figura 3A, el diagrama de la izquierda). La Figura 3B muestra una superposición de gráficos para comparar.

Las Figuras 4 y 5 muestran tablas de resumen de las toxicidades (Figura 4: todos los grados de toxicidad frente a grado 3 y 4 solamente; Figura 5: todos los grados de toxicidad para cada ciclo de tratamiento) observados en porcentaje del total de pacientes evaluados tratados en los programas respectivos con y sin IL-2.

Las Figuras 6 y 7 muestran los gráficos respectivos de toxicidades (Figura 6: todos los grados de toxicidad; Figura 7: solo grados 3 y 4) observados en todos los ciclos de tratamiento en porcentaje del total de pacientes evaluados tratados en los programas respectivos con y sin IL-2.

Las Figuras 8 y 9 muestran gráficos de toxicidades de todos los grados por ciclo de tratamiento en porcentaje del total de pacientes evaluados tratados en los respectivos programas con IL-2 (Figura 9) y sin IL-2 (Figura 8).

Las Figuras 10 a 15 muestran gráficos de toxicidades observadas en el respectivo ciclo de tratamiento (Figura 10: ciclo 1, Figura 11: ciclo 2, Figura 12: ciclo 3, Figura 13: ciclo 4, Figura 14: ciclo 5, Figura 15: ciclo 6) en porcentaje del total de pacientes evaluados tratados en los respectivos programas con y sin IL-2.

La Figura 16 muestra resultados de un ensayo de citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) (puntos azules, Figura 16A) y un análisis de sangre completa (puntos rojos, WBT, Figura 16B) de muestras de sangre de un paciente con neuroblastoma durante el tratamiento con un anticuerpo anti-GD2, pero sin tratamiento con IL-2 y ácido cisretinioco. Los puntos morados y grises son partes alícuotas de muestras de pacientes tratadas con un anticuerpo anti­ id para la diferenciación de cualquier potencial lisis no específica (es decir, lisis de células objetivo que no es mediada por el anticuerpo). Las barras naranjas indican los periodos de tratamiento con el anticuerpo.

La Figura 17 muestra resultados de un ensayo de citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) (puntos azules, Figura 17A) y un análisis de sangre completa (puntos rojos, WBT, Figura 17B) de muestras de sangre de un paciente con neuroblastoma durante el tratamiento con un anticuerpo anti-GD2 y con una dosis habitual de IL-2 y tratamiento con ácido cis-retinioco. Los puntos morados y grises son partes alícuotas de muestras de pacientes tratadas con un anticuerpo anti-id para la diferenciación de cualquier potencial lisis no específica (es decir, lisis de células diana que no es mediada por el anticuerpo). Las barras naranjas indican los periodos de tratamiento con el anticuerpo, los triángulos verdes los periodos de tratamiento con IL-2 y los asteriscos azules claros los periodos de tratamiento con ácido cis-retinioco.

Descripción detallada de la invención

Sorprendentemente, ha resultado que el tratamiento con una o más citoquinas en combinación con un anticuerpo anti-GD2 y un retinoide no proporciona ningún beneficio clínico frente al tratamiento con el anticuerpo anti-GD2 y un retinoide, pero sin IL-2, o sin IL-2 y sin GM-CSF, o incluso sin ninguna citoquina. Además, ha resultado que un programa de tratamiento sin IL-2 u otras citoquinas combinado con la infusión continua de una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 es muy ventajoso, en particular en relación con la reducción de los efectos secundarios, especialmente el dolor.

En la presente memoria se describe una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 (también denominada preparación de anticuerpo) para usar en el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente sin la administración concomitante de IL-2, y donde se trata un cáncer positivo para GD2 en el paciente.

El anticuerpo anti-GD2 se puede usar en la preparación de un medicamento para los métodos que se especifican en la presente memoria.

Como se describe en la presente memoria, el anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente como una infusión continua durante 24 horas al día, durante uno o más días. También se puede tratar al paciente una o más veces con un retinoide que precede, acompaña y/o sigue a la administración del anticuerpo anti-GD2. El anticuerpo anti-GD2 puede ser un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado.

El término "paciente", como se usa en la presente memoria, significará un sujeto humano que padece un cáncer positivo para GD2. El término "tratamiento" o "tratar" como se usa en la presente memoria significará que se administra un fármaco o tratamiento al paciente que lo necesita.

La expresión "se trata un cáncer positivo para GD2 en el paciente" significará que se alcanza un efecto terapéutico como se define con más detalle más adelante, en dicho paciente.

Las expresiones "tratado de forma concomitante con"" o "administración concomitante" como se usan en la presente memoria significarán que un tratamiento (p. ej., con un anticuerpo anti-GD2 y/o una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2, denominado tratamiento con anticuerpo) es precedido, acompañado y/o seguido por otro o más tratamientos (tal como p. ej. tratamiento con uno o más analgésicos, y/o uno o más de otros fármacos o tratamientos), en particular dentro del mismo ciclo de tratamiento y/o dentro del mismo tiempo de tratamiento general (p. ej. en el que se administra el anticuerpo anti-GD2). El periodo de tratamiento de un tratamiento concomitante se puede superponer o no con el otro periodo de tratamiento (p. ej., el periodo de tratamiento con anticuerpo), parcial o totalmente. Por consiguiente, el periodo de tratamiento de un tratamiento concomitante (p. ej., el tratamiento analgésico) puede preceder, acompañar y/o seguir al periodo de tratamiento con el otro tratamiento (p. ej., el periodo de tratamiento con anticuerpo). En una realización, los periodos de tratamiento de tratamientos concomitantes están dentro del mismo ciclo de tratamiento.

Por consiguiente, las expresiones "no tratado de forma concomitante con", "sin administración concomitante" o "sin administrar de forma concomitante" como se usan en la presente memoria significarán que un tratamiento no es precedido, acompañado y/o seguido por el uno o más tratamientos, respectivamente. En una realización, las expresiones definidas antes significarán que no se trata a un paciente con dicho fármaco o tratamiento (es decir, que dicho fármaco o tratamiento no se administra a dicho paciente) dentro del mismo ciclo de tratamiento y/o dentro del mismo tiempo de tratamiento global. Por consiguiente, el periodo de tratamiento de dicho tratamiento no concomitante (p. ej., tratamiento con citoquinas) puede no solaparse con el otro periodo de tratamiento (p. ej., el periodo de tratamiento con anticuerpo), parcial o totalmente. Por ejemplo, el periodo de tratamiento de un tratamiento no concomitante puede no preceder, acompañar y/o seguir al periodo de tratamiento con el otro tratamiento (p. ej., el periodo de tratamiento con anticuerpo). Típicamente, los periodos de tratamiento de los tratamientos no concomitantes no están dentro del mismo ciclo de tratamiento. Sin embargo, un paciente que no se trata de forma concomitante con un fármaco o tratamiento (p. ej., una o más citoquinas) puede haber sido tratado con dicho fármaco o tratamiento (p. ej., una o más citoquinas) en ciclos de tratamiento previos y/o tiempos de tratamiento generales previos.

El término "citoquinas" como se usa en la presente memoria significará proteínas, péptidos o glucoproteínas que actúan como reguladores hormonales o moléculas de señalización en concentraciones de nanomolar a picomolar y ayudan a la señalización celular. En una realización, la una o más citoquinas se seleccionan de agentes inmunomoduladores, tales como, p. ej., interleuquinas y/o interferones. En una realización, la una o más citoquinas se seleccionan del grupo que consiste en IL-2, GM-CSF, factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF), IL-12 y/o IL-15. Normalmente, la una o más citoquinas no están fusionadas con un anticuerpo, en particular no con un anticuerpo anti-GD2.

El término "dosis reducida" o "dosis baja" como se usa en la presente memoria se refiere a una dosis del respectivo fármaco que es significativamente más baja, por ejemplo, al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60 %, 70%, 80%, 90% o 100% (o cualquier intervalo entre estas dosis) menor que la dosis habitual del mismo fármaco administrado en el mismo marco o similar, es decir, en el mismo grupo de pacientes o similar con el(los) mismo(s) tratamiento(s) o similar(es). La dosis habitual puede ser la dosis que se ha usado con frecuencia en el pasado y/o se usa principalmente en el mismo marco o similar, es decir, en el mismo grupo de pacientes o similar con el(los) mismo(s) tratamiento(s) o similar(es). La dosis se puede reducir reduciendo la dosis diaria, y/o reduciendo la frecuencia y/o duración de la administración. Por ejemplo, para una dosis reducida en 50%, el respectivo fármaco se puede administrar con la misma frecuencia o duración habituales, pero con solo la mitad de la dosis diaria habitual, o el respectivo fármaco se puede dar con la dosis diaria habitual, pero, p. ej., solo cada dos días, si normalmente se ha dado todos los días. En otro ejemplo, se puede dar 50% de la dosis diaria habitual cada dos días en lugar de la administración diaria habitual, dando como resultado, por lo tanto, una dosis reducida que es un 75% más baja que la dosis habitual. Por consiguiente, un experto en la técnica puede determinar fácilmente las dosis adecuadas y los programas de administración de acuerdo con la invención.

Un "periodo de tratamiento" con una preparación o tratamiento específico como se usa en la presente memoria significa el periodo de tiempo en el que dicha preparación o tratamiento específico se administra al paciente dentro de un ciclo de tratamiento, p. ej., el periodo de tiempo de días de tratamiento posteriores. Por ejemplo, si la preparación que comprende una citoquina normalmente se administra durante 5 días consecutivos, seguido de uno o más días sin administración de la preparación que comprende una citoquina, entonces el periodo de tratamiento con la preparación que comprende una citoquina comprende 5 días. En otro ejemplo, si la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 se administra de forma continua durante 24 h durante 10 días consecutivos, seguido de uno o más días sin administración de la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2, entonces el periodo de tratamiento con la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 comprende 10 días. En otro ejemplo, si la isotretinoína se administra dos veces al día durante 14 días, seguido de uno o más días sin administración de isotretinoína, entonces el periodo de tratamiento con isotretinoína comprende 14 días. Cualquiera de dichos periodos de tratamiento se puede repetir, solapar total o parcialmente con otros periodos de tratamiento con otros fármacos o tratamientos, y/o puede estar precedido y/o ser seguido de periodos sin tratamiento. Por ejemplo, un ciclo de tratamiento puede comprender dos periodos de tratamiento de 5 días con IL-2, el segundo de los cuales se solapa con un periodo de tratamiento de 10 días (o 14, 15 o 21 días) con ch14.18 (APN311), seguido de un periodo de tratamiento de 14 días con isotretinoína.

Los términos "combinado" o "combinación" tal como se usan en la presente memoria en relación con periodos de tratamiento significarán que dos o más periodos de tratamiento con los mismos y/o diferentes fármacos o tratamientos están comprendidos en un ciclo de tratamiento. Dichos dos o más periodos de tratamiento con diferentes fármacos o tratamientos se pueden solapar parcial o totalmente, o pueden no solaparse. Cualquiera de dichos periodos de tratamiento se puede combinar con (o separar por) uno o más intervalos sin tratamiento con los mismos y/o diferentes fármacos o tratamientos.

La expresión "ciclo de tratamiento", como se usa en la presente memoria, significa un curso de uno o más tratamientos o periodos de tratamiento que se repite en un programa regular, opcionalmente con periodos de descanso (sin tratamiento) entre ellos. Por ejemplo, un tratamiento administrado durante una semana seguido de tres semanas de descanso es un ciclo de tratamiento. En una realización, un ciclo de tratamiento comprende un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2. El ciclo de tratamiento que comprende un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 puede comprender además uno o más periodos de tratamiento con uno o más de otros fármacos o tratamientos (excepto tratamiento con citoquinas), tales como, p. ej., retinoides y/o analgésicos. Cualquiera de dichos periodos de tratamiento con uno o más fármacos o tratamientos dentro de un ciclo de tratamiento se pueden solapar total y/o parcialmente. Un ciclo de tratamiento también puede comprender uno o más periodos de tiempo sin ningún tratamiento. Los periodos de descanso pueden ser, p. ej., al menos 1 día, o 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13 o 14 días o más. Alternativamente o en combinación, los periodos de descanso pueden ser, p. ej., como máximo 8 semanas, 7 semanas, 6 semanas, 5 semanas, 4 semanas, 3 semanas, 2 semanas, 1 semana o menos. Cada tratamiento en un ciclo de tratamiento puede ser preferiblemente un tratamiento de acuerdo con el primer, segundo, tercer o cualquier aspecto combinado como se define en la breve descripción. El programa de tratamiento de acuerdo con la invención puede comprender 1 o más ciclos de tratamiento, en particular dos o más, o 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 o más ciclos de tratamiento.

Las expresiones "tiempo de tratamiento global" o "periodo de tratamiento global" como se usan en la presente memoria significarán el periodo de tratamiento continuo que comprende uno o más ciclos de tratamiento posteriores. Un ciclo de tratamiento se puede repetir, ya sea de forma idéntica o en una forma modificada, p. ej., con una dosis o posología diferente, o con uno o más tratamientos diferentes y/o adicionales (p. ej., con uno o más analgésicos distintos). El tiempo de tratamiento global puede comprender al menos 1, o 2 o más ciclos, p. ej., hasta 10 o hasta 20 o incluso más ciclos de tratamiento. En una realización, el tiempo de tratamiento global comprende 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 ciclos o más. Como se ha descrito antes, los ciclos de tratamiento pueden comprender periodos de tiempo sin tratamiento (intervalos en los que no se administra tratamiento al paciente, es decir sin anticuerpos, sin citoquinas y sin otro fármaco). Por lo tanto, como se usa en la presente memoria, el tiempo de tratamiento global también puede comprender dichos intervalos sin tratamiento dentro de un ciclo de tratamiento y/o entre ciclos de tratamiento. En una realización, un ciclo de tratamiento puede seguir directamente después del ciclo de tratamiento previo, es decir, sin periodo de tiempo entre ciclos de tratamiento. Sin embargo, el final de un ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tiempo sin tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo de tratamiento. Los tiempos de tratamiento globales de ejemplo son, p. ej., al menos 6 meses, 8 meses, 10 meses, 12 meses, 14 meses, 16 meses, 18 meses, 20 meses, 22 meses, 24 meses, 26 meses, 30 meses o más.

Si se da un intervalo en la presente memoria, dicho intervalo incluirá cualquier intervalo entre los intervalos dados (es decir, el límite inferior y superior del intervalo). Por ejemplo, si se da un intervalo de, p. ej., 1 a 5 días, este incluirá 1, 2, 3, 4 y 5 días. Lo mismo se aplica a cualesquiera otros intervalos, incluyendo, pero no limitado a otros periodos de tiempo (p. ej., tiempo de infusión en horas), cualquier intervalo de dosis (p. ej., por m2de área de superficie corporal, por kg de peso corporal, por día, por ciclo de tratamiento, etc.), velocidades de infusión, concentraciones, porcentajes, factores, proporciones y números.

El anticuerpo anti-GD2 o la preparación de anticuerpo se puede administrar a un paciente que lo necesite, es decir, un paciente con cáncer positivo para GD2. Un cáncer positivo para GD2 es un tipo de cáncer en el que se expresa GD2 en las células tumorales. Los cánceres positivos para GD2 son, por ejemplo, neuroblastoma, glioblastoma, meduloblastoma, astrocitoma, melanoma, cáncer de pulmón de células pequeñas, tumor desmoplásico de células pequeñas y redondas, osteosarcoma, rabdomiosarcoma y/u otros sarcomas de tejidos blandos. En una realización, se ha diagnosticado al paciente neuroblastoma, en particular neuroblastoma de alto riesgo. En algunos casos, se puede haber diagnosticado al paciente neuroblastoma en estadio 4 (según el Sistema Internacional de Estadificación del Neuroblastoma (INSS)). En otros casos, se puede haber diagnosticado al paciente enfermedad residual mínima. Incluso se puede haber diagnosticado al paciente como un paciente con respuesta completa, es decir, como un paciente que muestra una respuesta completa al tratamiento. En otros casos, se puede haber diagnosticado al paciente enfermedades recurrentes o refractarias, tales como neuroblastoma primario de alto riesgo refractario o recurrente, o enfermedad residual mínima en neuroblastoma de alto riesgo. El paciente puede haber sido tratado previamente o se puede tratar simultáneamente con una o más terapias diferentes, tales como p. ej. cirugía, quimioterapia, radiación, terapia mieloablativa, gammagrafía con metayodobencilguanidina (mIBG), terapia con vacunas, trasplante de células madre y/o tratamiento con retinoides (p. ej., con isotretinoína).

El anticuerpo anti-GD2 usado en la presente memoria se une específicamente al antígeno GD2. GD2 es un disialogangliósido expresado en tumores de origen neuroectodérmico. El anticuerpo se puede seleccionar del grupo de anticuerpos recombinantes o artificiales, que incluyen monocatenarios, anticuerpos de mamífero, anticuerpos humanos o humanizados. Puede comprender o se puede seleccionar de partes constantes y/o variables de un anticuerpo, en particular seleccionar de Fc, similar a Fc, Fv, Fab, F(ab)2, Fab', F(ab')2, scFv, scfc, VHH. Sin embargo, cualquiera de dichos fragmentos de anticuerpo debe comprender la parte Fc que es responsable de la unión del complemento y, por lo tanto, puede mediar las funciones efectoras naturales (o in vivo). Preferiblemente, el anticuerpo comprende una cadena ligera y pesada de un anticuerpo. El anticuerpo puede comprender una o dos regiones de unión a antígeno, que pueden unirse al mismo o diferente antígeno, p. ej., GD2, que se puede unir específicamente. Los anticuerpos de la invención se pueden dirigir, p. ej., generar por inmunización contra los antígenos como se han definido antes. El anticuerpo anti-GD2 puede ser un anticuerpo contra GD2 humanizado o quimérico, p. ej., un anticuerpo humanizado o quimérico 14.18, 3F8 u 8B6, o un anticuerpo murino con la misma especificidad, o un fragmento de unión al antígeno de cualquiera de estos que media las funciones efectoras naturales. El anticuerpo anti-GD2 puede tener una o más modificaciones de aminoácidos, tales como, p. ej., una región Fc modificada. Por ejemplo, el anticuerpo podría ser hu14.18K322A. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico 14.18 codificado por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1 y/o 2, y/o por la de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y/o 4, o fragmentos u homólogos de los mismos. Para usar en la propia invención, el anticuerpo anti-GD2 es codificado por los aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y/o 4.

La expresión "fragmentos o sus homólogos" significará cualquiera de dichos fragmentos u homólogos de la secuencia respectiva que tenga la misma o similar actividad cualitativa nativa. Por ejemplo, los fragmentos u homólogos pueden tener al menos 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99% de actividad cualitativa nativa. Como otro caso, los fragmentos u homólogos pueden tener al menos 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99% de identidad de secuencia.

El anticuerpo anti-GD2 puede tener la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 1 (véase también el Ejemplo 1) y la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 2 (véase también el Ejemplo 1). Alternativamente, el anticuerpo puede ser el anticuerpo quimérico 14.18, que tiene la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 3 (véase también el Ejemplo 1) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 4 (véase también el Ejemplo 1). La masa molecular relativa del anticuerpo que comprende dos cadenas ligeras y dos pesadas puede ser de aproximadamente 150.000 Dalton. El anticuerpo anti-GD2 se puede expresar en células CHO, en células SP2/0 o en otras líneas celulares adecuadas, tales como, p. ej., HEK-293, MRC-5, Vero, PerC6 o NS0.

Como se describe en la presente memoria, el anticuerpo anti-GD2 puede ser dinutuximab, un anticuerpo quimérico 14.18 expresado en células SP2/0 (ch14.18/SP2/0). Sin embargo, para los fines de la invención, el anticuerpo que se usa es APN311, que es un anticuerpo quimérico 14.18 expresado en células CHO (ch14.18/CHO). Para los fines de la descripción, el anticuerpo anti-GD2 también puede ser un fragmento o un homólogo del anticuerpo codificado por las SEQ ID NO: 1,2, 3 y/o 4, con la misma o similar actividad cualitativa nativa.

Como se describe en la presente memoria, el anticuerpo anti-GD2 no está fusionado con ningún otro resto, y no es una inmunocitoquina; la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 no comprende una inmunocitoquina.

Además, el paciente no debe ser tratado de forma concomitante con una inmunocitoquina, en particular no dentro del mismo ciclo de tratamiento y/o dentro del mismo tiempo de tratamiento global que comprende el tratamiento con anticuerpo.

La preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 puede comprender además sales y WFI, y opcionalmente aminoácidos, en particular aminoácidos básicos, tales como, p. ej., histidina, arginina y/o lisina. La preparación puede comprender un anticuerpo anti-GD2, puede comprender además un tampón, p. ej., solución salina tamponada con fosfato, que comprende dichas sales y WFI. La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 puede comprender además agentes estabilizantes, conservantes y otros vehículos o excipientes. Por ejemplo, puede comprender un anticuerpo anti-GD2 (p. ej., ch14.18) y además comprende sacarosa, polisorbato 20, histidina y ácido clorhídrico. Una preparación preferida comprende el anticuerpo ch14.18/CHO, con 4.5 mg/ml de anticuerpo, 50 mg/ml de sacarosa, 0.1 mg/ml de polisorbato 20 y 3.1 mg/ml de histidina. La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede liofilizar. La disolución reconstituida puede tener un pH de 6 ± 0.5.

Alternativamente, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 comprende además sacarosa, L-arginina, monohidrato de ácido cítrico, polisorbato 20 y ácido clorhídrico. En dicho caso, la preparación puede comprender, por ejemplo, 4 mg/ml de anticuerpo anti-GD2, 20 mg/ml de sacarosa, 13.9 mg/ml de L-arginina, 2 mg/ml de polisorbato 20 y 2.1 mg/ml de monohidrato de ácido cítrico. Esta preparación se puede liofilizar y se puede reconstituir en 4 ml de cloruro de sodio al 0,9%, y la solución resultante tiene un pH de 5.5 (el pH se puede ajustar con ácido clorhídrico (HCL)). Las preparaciones no requieren necesariamente agentes estabilizantes, conservantes y otros excipientes. La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede añadir a una bolsa de infusión, p. ej., una bolsa de infusión que contiene solución salina normal, es decir, una solución fisiológica de NaCl (0.9%), opcionalmente con albúmina de suero humano (HAS, también denominada albúmina humana). En un ejemplo, la bolsa de infusión comprende solución salina normal y albúmina de suero humano al 0.25-5%, o cualquier intervalo entre estas concentraciones. En un ejemplo, la bolsa de infusión comprende un volumen final de 250 ml de NaCl al 0.9% y 5 ml de albúmina humana al 20%, o 100 ml de NaCl al 0.9% y 5 ml de albúmina humana al 20%, o 50 ml de NaCl al 0.9% y 2 ml de albúmina humana al 20%

El anticuerpo anti-GD2 o la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede administrar en dosis diarias de anticuerpo de 1 a 30 mg/m2, 1 a 35 mg/m2, 1 a 50 mg/m2, o 1 a 60 mg/m2, p. ej., 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 7.5, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 17.5, 18, 19, 20, 25, 30, 32, 35, 40, 45, 50 o 60 mg/m2 o cualquier intervalo entre estas dosis. Como se describe en la presente memoria, el anticuerpo anti-GD2 o la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra en dosis diarias de anticuerpo de 7, 7.5, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 17.5, 18, 19, 20, 25, 30, 32 o 35 mg/m2 o cualquier intervalo entre estas dosis. Por ejemplo, una dosis diaria de 10 mg/m2 significa que el paciente recibe 10 mg de anticuerpo anti-GD2 por m2 de superficie corporal al día. Como se usa en la presente memoria, una dosis (p. ej. dada en mg o microgramo) se refiere a la dosis del principio activo, es decir, a la cantidad de principio activo en la preparación. Por ejemplo, la dosis dada se puede referir a la cantidad de anticuerpo anti-GD2 en la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2, o la citoquina en la preparación que comprende la citoquina, o la morfina u otro analgésico en la preparación que comprende morfina u otros analgésicos etc. Como se especifica en el ejemplo anterior, una dosis diaria de 10 mg/m2 significa que el paciente recibe 10 mg de anticuerpo anti-GD2 (opcionalmente contenido en un cierto volumen de la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2) por m2 de superficie corporal al día. Como se usa en la presente memoria, una dosis dada por m2 significa por m2 de área de superficie corporal (BSA) del paciente. Como se usa en la presente memoria, una dosis dada por kg, significa por kg de peso corporal del paciente.

Se describe en la presente memoria, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 que se administra en dosis diarias de 1 a 15, 1 a 20, 1 a 25, 1 a 30, o 1 a 35 mg/m2, o cualquier intervalo entre estas dosis diarias; o en dosis diarias de menos de 50, 40, 30 o 25 mg/m2; o en dosis diarias de hasta 7, 10, 15, 17.5 o 20 mg/m2; o en una dosis de 15, 17.5, 20 o 25 mg/m2/día durante 4 días. Por ejemplo, la preparación de anticuerpo se puede administrar en una dosis de 50 mg/m2/día durante 4 días. El anticuerpo anti-GD2 se puede administrar en una dosis de 10, 20, 25, 50, 60, 65, 68, 70, 75, 80, 100, 120, 150, 200, 210, 250 o 300 mg/m2/ciclo o cualquier intervalo entre estas dosis. La dosis total por paciente por ciclo de tratamiento se puede definir como la dosis global predeterminada del paciente.

La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede administrar como una infusión intravenosa a lo largo de 5 horas o más al día, p. ej., 5.75 horas o más al día, 8 horas o más al día, 10 horas o más al día, o hasta 20 h al día, o hasta 24 h al día, o cualquier intervalo entre estos periodos de tiempo, p. ej., durante 4 o 5 días o más. Sin embargo, como se usa en la invención, la preparación se administra como una infusión intravenosa continua a lo largo de 24 h al día, normalmente hasta que se haya administrado la dosis global predeterminada del paciente.

Dicha administración continua puede durar uno o más días, p. ej., 4, 5, 10, 14, 15, o hasta 21 o más días.

Normalmente, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra durante un periodo de tratamiento hasta que se alcanza un cierto efecto terapéutico. El efecto terapéutico puede ser un aumento en la respuesta inmunitaria contra el tumor, según se determina, por ejemplo, por un aumento en los biomarcadores del sistema inmunitario (p. ej., parámetros sanguíneos, tales como recuentos de linfocitos y/o número de células NK; y/o citoquinas).

Alternativamente, el efecto terapéutico puede ser una reducción en los marcadores tumorales (p. ej., catecolaminas). Se puede determinar otro efecto terapéutico por métodos tales como la gammagrafía con metayodobencilguanidina (mIBG), imágenes por resonancia magnética (MRI) o tomografía computarizada de rayos X (CT) y/o histología de médula ósea (evaluada por aspirado o biopsia con trefina), y/o ensayos de CDC y/o WBT.

Preferiblemente, el efecto terapéutico se define como enfermedad estable (es decir, sin aumento adicional de lesiones, tejido y/o tamaño tumoral), respuesta parcial (es decir, reducción de lesiones, tejido y/o tamaño tumoral), y/o respuesta completa (es decir, remisión completa de todas las lesiones y tejido tumoral.

La respuesta completa (RC) se puede definir además como sigue:

- Desaparición completa de toda enfermedad medible y evaluable,

- sin nuevas lesiones,

- sin síntomas relacionados con la enfermedad, y/o

- sin evidencia de enfermedad evaluable, incluyendo p. ej., normalización de marcadores y/u otros valores de laboratorio anormales.

En algunos casos, todas las lesiones y sitios medibles, evaluables y no evaluables se deben valorar usando la misma técnica que el valor inicial.

La respuesta parcial (RP) se puede definir además como sigue:

- Se aplica solo a pacientes con al menos una lesión medible.

- Disminución mayor o igual a 50% por debajo del nivel inicial en la suma de productos de diámetros perpendiculares de todas las lesiones medibles.

- Sin progresión de enfermedad evaluable.

- Sin nuevas lesiones.

Típicamente, todas las lesiones y sitios medibles y evaluables se deben valorar usando las mismas técnicas que el valor inicial.

La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede administrar como se describe en los documentos WO2013189516 o WO2013189554. Por ejemplo, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede administrar como infusión intravenosa continua durante 24 horas al día. Por consiguiente, la presente descripción se refiere a una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 para usar en el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente como una infusión continua durante uno o más días y durante uno, dos o más ciclos de tratamiento, sin la administración concomitante de IL-2. La presente descripción se refiere a una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 para usar en el tratamiento de un cáncer positivo para GD2 en un paciente, en donde la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente como una infusión continua sin la administración concomitante de IL-2, y en donde el anticuerpo anti-GD2 no es un anticuerpo 14G2a, o en donde el anticuerpo anti-GD2 es un anticuerpo anti-GD2 quimérico o humanizado.

La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede administrar durante 4, 5, 10, 14, 15 o 21 días consecutivos o cualquier intervalo entre estos periodos. La preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 también se puede administrar durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 o más días consecutivos. Típicamente, se administra a lo largo de todo el ciclo de tratamiento, p. ej., durante 35 días. Preferiblemente, la preparación se administra como una infusión intravenosa continua durante el tiempo de tratamiento global, p. ej., a lo largo de 5 ciclos de tratamiento con 35 días cada uno, es decir, a lo largo de 180 días en total. La dosis diaria de anticuerpo se puede reducir en consecuencia, de modo que se administra la dosis predeterminada del paciente de anticuerpo. Por ejemplo, si la dosis predeterminada del paciente de anticuerpo es de 100 mg/m2/ciclo, y el tiempo de tratamiento global comprende 5 ciclos, la dosis de anticuerpo por tiempo de tratamiento global es 500 mg/m2. En este caso, la preparación se administra a lo largo de 180 días, es decir, en 2.77 mg/m2/día. Como es el caso de la invención, la preparación se puede administrar como una infusión intravenosa continua a lo largo de un periodo de tiempo de 24 horas al día. Para dicha infusión continua, se puede usar una minibomba osmótica.

Por ejemplo, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra como infusión intravenosa continua durante 24 horas al día durante 4, 5, 10, 14, 15 o 21 días consecutivos o cualquier intervalo entre estos periodos, en dosis diarias, como se ha especificado antes (p. ej., 7, 10, 15, 17.5, 20 o 25 mg/m2/día), p. ej., 15, 17.5, 20 o 25 mg/m2/día durante 4 días, 20 mg/m2/día durante 5 días, 10 mg/m2/día durante 10 días, 15 mg/m2/día durante 10 días, 7 mg/m2/día durante 14 días, 15 mg/m2/día durante 14 días, 10 mg/m2/día durante 15 días, 7 mg/m2/día durante 21 días, o 10 mg/m2/día durante 21 días o cualquier intervalo entre estas dosis. Por lo tanto, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 normalmente no se administra como infusión intravenosa continua durante 5 días en una dosis diaria de 40 mg/m2 Además, una infusión intravenosa continua de la preparación durante 5 días, es decir, no como una infusión de 120 horas, no es típica. Normalmente, la preparación se administra durante más de 5 días, tal como 6 días o más.

En una realización, la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 es APN311 y se administra en una dosis de 10 mg/m2/día durante 10 días. En una realización, la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 es APN311 y se administra en una dosis de 10 mg/m2/día durante 10 días consecutivos durante 1, 2, 3, 4, 5 o 6 o más ciclos de tratamientos.

De acuerdo con la presente descripción, el paciente no se trata de forma concomitante con IL-2, y en algunos casos ni con IL-2 ni GM-CSF, o en otros casos con ninguna citoquina. Por consiguiente, la expresión "el paciente no se trata de forma concomitante con IL-2, GM-CSF y/u otra citoquina" comprende los programas de tratamiento respectivos como se ha descrito antes, es decir, sin IL-2, sin IL-2 y sin GM-CSF, y/o sin ninguna citoquina. En algunos casos, el paciente no se trata de forma concomitante con IL-2, GM-CSF y/u otra citoquina dentro del mismo ciclo de tratamiento. En otros casos, el paciente no se trata de forma concomitante con IL-2, GM-CSF y/u otra citoquina dentro del mismo tiempo de tratamiento general. Sin embargo, el paciente puede haber sido tratado con IL-2, GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas en uno o más ciclos de tratamiento y/o periodos de tratamiento globales previos. Sin embargo, el paciente también puede no haber sido tratado con IL-2, GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas en uno o más ciclos de tratamiento y/o periodos de tratamiento globales previos. En dichos casos, el periodo de tratamiento con anticuerpo no está precedido, acompañado y/o seguido de uno o más periodos de tratamiento con IL-2, GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas, es decir la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente sin la administración concomitante de IL-2, GM-CSF, y/o una o más de otras citoquinas. Se describe en la presente memoria, que el periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 no está acompañado por uno o más periodos de tratamiento con una citoquina (o una preparación que comprende una o más citoquinas), en particular no dentro del mismo ciclo de tratamiento y/o dentro de el mismo tiempo de tratamiento global (que comprende el tratamiento con anticuerpo). Por ejemplo, el paciente no se trata de forma concomitante con factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF), GM-CSF, IL-2, IL-12 y/o IL-15. Así, por ejemplo, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente sin la administración concomitante de IL-2, o sin la administración concomitante de GM-CSF, o ambos, o cualquier otra citoquina. Por ejemplo, no se administra al paciente IL-2 y/o GM-CSF (o una preparación que comprende IL-2 y/o GM-CSF) dentro del mismo ciclo de tratamiento que comprende el(los) periodo(s) de tratamiento con anticuerpo.

El periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 puede estar precedido, acompañado y/o seguido de uno o más periodos de tratamiento con un retinoide (o una preparación que comprende un retinoide). Se describe en la presente memoria, que el uno o más periodos de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 es/son seguidos de uno o más periodos de tratamiento con un retinoide. Dichos uno o más periodos de tratamiento con un retinoide pueden seguir dentro del mismo uno o más ciclos de tratamiento que comprenden uno o más periodos de tratamiento con anticuerpo, o posteriormente, es decir, después del final del uno o más ciclos de tratamiento que comprenden uno o más periodos de tratamiento con anticuerpo, en particular, después del final del último ciclo de tratamiento que comprende uno o más periodos de tratamiento con anticuerpo, es decir, al final del tiempo de tratamiento global con el anticuerpo. Por consiguiente, se describe en la presente memoria que hay un periodo de tiempo entre el periodo de tratamiento con anticuerpo y el periodo de tratamiento con retinoide que puede ser un periodo de tiempo sin tratamiento, o puede comprender uno o más periodos de tratamiento con uno o más de otros fármacos o tratamientos.

Se describe en la presente memoria, que el uno o más periodos de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 es/son seguidos de uno o más periodos de tratamiento con un retinoide dentro del mismo ciclo de tratamiento. Por ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender al menos un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 y al menos un periodo de tratamiento con un retinoide. El ciclo de tratamiento puede comprender además uno o más periodos de tiempo sin tratamiento. Por ejemplo, el ciclo de tratamiento comprende al menos un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 seguido de al menos un periodo de tratamiento con un retinoide. Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender al menos un periodo de tiempo sin tratamiento entre el al menos un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 y el último un periodo de tratamiento con un retinoide.

El retinoide puede ser un ácido retinoico (RA), p. ej., isotretinoína (cis-RA), o un retinoide de primera generación (p. ej., retinol, retinal, tretinoína (ácido retinoico, Retin-A), isotretinoína y alitretinoína), un retinoide de segunda generación (p. ej., etretinato y su metabolito acitretina), y/o un retinoide de tercera generación (p. ej., tazaroteno, bexaroteno y adapaleno). El retinoide también puede ser un derivado de retinoide, en particular un derivado de retinoide sintético, tal como p. ej. fenretinida. El uno o más periodos de tratamiento anteriores o siguientes con un retinoide puede ser un periodo de tratamiento sin administración de anticuerpo y/o IL-2 (u otra citoquina).

Cualquiera de dichos periodos de tratamiento se puede repetir. A cualquiera de dichos periodos de tratamiento le puede seguir un intervalo sin tratamiento, ya sea con el mismo y/o con diferentes fármacos o tratamientos. El intervalo descrito en la presente memoria puede ser un intervalo sin ningún tratamiento. El intervalo descrito en la presente memoria es sin administración de la misma preparación o tratamiento, sin embargo, se pueden administrar otras preparaciones o tratamientos durante el intervalo.

Además, el tratamiento de acuerdo con la presente descripción puede estar precedido y/o acompañado de un tratamiento con uno o más analgésicos (o una preparación que comprende uno o más analgésicos), tales como, p. ej., fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE, p. ej., indometacina), y/o uno o más opioides, y/o uno o más de otros analgésicos, o cualquier combinación de los mismos. El analgésico descrito en la presente memoria es un opioide, p. ej., morfina y/o derivados de la morfina, tal como p. ej. hidromorfona. Otros opioides son, por ejemplo, tramadol, petidina, codeína, piritramida, levometadona, así como fentanilo, alfentanilo, remifentanilo y sufentanilo.

Como se ha descrito antes, normalmente se ha administrado un anticuerpo anti-GD2 a un paciente en combinación con una o más citoquinas (en las dosis habituales), en especial IL-2 y/o GM-CSF. Sin embargo, la combinación del tratamiento con anticuerpo con el tratamiento habitual con citoquinas ha potenciado los efectos secundarios del tratamiento con anticuerpo, en particular el dolor. Por lo tanto, era necesario el tratamiento con uno o más analgésicos, en especial morfina. Sorprendentemente, ahora ha resultado que el tratamiento con anticuerpo anti-GD2 es eficiente incluso sin el tratamiento con citoquinas. Por consiguiente, mediante la omisión total de cualquier tratamiento con citoquinas, el efecto secundario del dolor (y otros efectos secundarios) se puede reducir significativamente y, por lo tanto, también se puede reducir la administración de morfina y/u otros analgésicos. Con las preparaciones y métodos de la invención, se puede reducir la dosis, cambiar la ruta de administración (p. ej., de infusión intravenosa a oral), reducir la duración del(los) periodo(s) de tratamiento analgésico y/o cambiar el tipo de preparación de uno o más analgésicos Por lo tanto, la presente descripción permite incluso un tratamiento ambulatorio, al menos durante una parte del ciclo de tratamiento, de pacientes en tratamiento con una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2.

Con la administración descrita en la presente memoria de un anticuerpo anti-GD2 sin la administración concomitante de IL-2, GM-CSF y/u otra citoquina, los efectos secundarios se reducen sustancialmente en comparación con un programa de tratamiento que comprende tratamiento concomitante con IL-2, GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas. En particular, el efecto secundario del dolor se reduce sustancialmente en comparación con un programa de tratamiento que comprende el tratamiento concomitante con IL-2, GM-CSF y/o una o más de otras citoquinas.

Por consiguiente, la dosis del uno o más analgésicos, en especial morfina, se puede reducir dentro del tiempo de tratamiento global, dentro de un ciclo de tratamiento, durante el periodo de tratamiento con anticuerpo dentro de un ciclo de tratamiento, desde un día de tratamiento con anticuerpo hasta el siguiente día de tratamiento con anticuerpo dentro de un ciclo de tratamiento, y/o de un ciclo de tratamiento al siguiente.

La dosis de analgésicos se puede reducir más mediante una infusión a largo plazo del anticuerpo anti-GD2, p. ej., como infusión i.v. continua a lo largo de 24 h al día, como se describe en los documentos WO2013189516 y WO2013189554, y como se describe en la presente memoria. Por lo tanto, la dosis analgésica se puede reducir sustancialmente en un programa de tratamiento de la invención sin IL-2, y en ciertas realizaciones también sin GM-CSF, y posiblemente sin ninguna otra citoquina, en combinación con una infusión continua del anticuerpo. La expresión "sin otra citoquina" o "sin citoquina", como se usa en la presente memoria, significa que no se usa IL-2 ni GM-CSF, y tampoco otra citoquina, es decir, no se usa citoquina en absoluto en el respectivo programa de tratamiento y/o durante el tiempo de tratamiento definido, p. ej., dentro del mismo ciclo de tratamiento y/o dentro del mismo tiempo de tratamiento global. Por consiguiente, se describe en la presente memoria que no se usa IL-2. Se describe en la presente memoria que no se usa IL-2 ni GM-CSF. Se describe en la presente memoria que no se usa citoquina. Por lo tanto, la expresión "sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin GM-CSF, y en ciertas realizaciones sin otra citoquina" significará las respectivas realizaciones como se ha descrito antes, en concreto, tratamientos (p. ej., periodos de tratamiento, ciclos de tratamiento y/o tiempos de tratamiento globales) sin IL-2, sin IL-2 y sin GM-CSf , y/o sin ninguna citoquina.

El uno o más analgésicos se pueden administrar por vía oral. El uno o más analgésicos también se pueden administrar como infusión intravenosa, en especial como infusión intravenosa continua durante 24 horas por día. El periodo de tratamiento con uno o más analgésicos puede preceder y/o acompañar el periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2.

El uno o más analgésicos se pueden seleccionar de análogos de GABA tales como, p. ej., gabapentina. Por consiguiente, el paciente se puede tratar con gabapentina, p. ej., tres días antes del comienzo del periodo de tratamiento con anticuerpo.

Las siguientes dosis y ejemplos de tratamiento con analgésico son dosis habituales que se pueden reducir como se describe en la presente memoria. Normalmente, en este contexto la gabapentina se administra por vía oral en una dosis de 10 mg/kg/dosis una, dos o tres veces al día. La gabapentina se puede administrar en una dosis de hasta 300 mg/kg/dosis. La gabapentina está disponible y se puede administrar como solución oral que contiene 250 mg/5 ml de gabapentina, o en cápsulas (100 mg, 300 mg y 400 mg). El tratamiento con gabapentina se puede administrar en lugar de o además del tratamiento con morfina y/u otros analgésicos. Además, el paciente se puede tratar con paracetamol (10 a 15 mg/kg/dosis, cada 4 horas o cuatro veces al día, por vía oral o intravenosa), ibuprofeno (5 a 10 mg/kg/dosis por vía oral cada 6 a 12 horas), metamizol (10 a 15 mg/kg/dosis por vía oral cada 4 horas), difenhidramina (0.5 a 1 mg/kg/dosis por vía oral o intravenosa), y/o indometacina (p. ej., 0.3 a 0.5 mg/kg/dosis, o 25 o 50 mg/dosis, por vía oral o intravenosa cada 6 horas). Dicho tratamiento con paracetamol, ibuprofeno, metamizol y/o indometacina se puede administrar en lugar de además del tratamiento con morfina y/o gabapentina y/u otros analgésicos.

En algunos casos, la morfina se usa como analgésico, opcionalmente en combinación con uno o más de otros analgésicos. Como ejemplo, en la tabla 1 se dan algunas dosis habituales de morfina administradas antes y/o durante un periodo de tratamiento con una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2. En este ejemplo de dosis habituales, se administra ch14.18/CHO (APN311) como una infusión de 8 horas al día en 5 días subsiguientes en una dosis de 20 mg/m2/día y por lo tanto, 100 mg/m2/ciclo, y se administra IL-2 por vía s.c. en 6 MUI/m2/día durante 5 días consecutivos dos veces por ciclo (es decir, 60 MUI/m2/ciclo), durante 5 ciclos, y se administra hidrocloruro de morfina cada día de tratamiento con anticuerpo (es decir, cada día de un ciclo de tratamiento en el que se administra al paciente la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2) en una dosis en bolo de 0.05 mg/kg/h durante 2 horas antes de comenzar la infusión de APN311, con una velocidad de infusión de 0.03 mg/kg/h durante 8 horas durante la infusión de APN311, y con una velocidad de infusión de intervalo de 0.01 mg/kg/h durante 14 horas el primer día de tratamiento con APN311, y durante 4 horas en días de tratamiento subsiguientes, si es tolerada (con un intervalo de 10 horas sin tratamiento con morfina). La dosis se aumentaba (p. ej. aumento de la velocidad de infusión durante la infusión de anticuerpo) y/o se administraban dosis adicionales en bolo según fuera necesario. Por consiguiente, la dosis de morfina prescrita era de al menos 0.38 mg/kg por día, al menos 2 mg/kg por ciclo de tratamiento (que comprende 5 días de tratamiento con anticuerpo) y al menos 10 mg/kg por tiempo de tratamiento global (que comprende tres ciclos).

Tabla 1: Programa de infusión de morfina

Preparar 10 mg de morfina en 40 ml de glucosa al 5% (0.25 mg = 1 ml)

En otro ejemplo de dosis habituales, se administra APN311 como una infusión de 8 horas al día en 5 días subsiguientes durante 3 ciclos en una dosis de 10, 20 y 30 mg/m2/día y 50, 100, 150 mg/m2/ciclo, y se administra IL-2 por vía s.c. en 6 MUI/m2/día durante 5 días consecutivos dos veces por ciclo (es decir, 60 MUI/m2/ciclo) y se administra hidrocloruro de morfina cada día de tratamiento con anticuerpo en una dosis en bolo de 0.5 -1.0 mg/kg/dosis (justo antes del inicio de la infusión del anticuerpo), y con una velocidad de infusión continua de 0.05 mg/kg/hora durante la infusión de APN311. La dosis se aumenta (p. ej., aumento en la velocidad de infusión durante la infusión de anticuerpo) y/o se administran dosis adicionales en bolo según sea necesario. Por consiguiente, la dosis de morfina prescrita (o dosis de morfina habitual) es de al menos 0,9 mg/kg por día, al menos 4.5 mg/kg por ciclo de tratamiento (que comprende 5 días de tratamiento con anticuerpo), y al menos 13.5 mg/kg para el tiempo de tratamiento global (que comprende tres ciclos de tratamiento).

En otros ejemplos de tratamiento habitual con ch14.18 y una o más citoquinas, la morfina se ha administrado en velocidades de infusión de hasta 1.2 mg/kg/h a lo largo de 24 horas.

En otro ejemplo más de dosis habituales, se administra ch14.18/Sp2/0 en una dosis de 25 mg/m2/día en cuatro días consecutivos. Cada dosis de ch14.18/Sp2/0 se puede infundir por vía i.v. a lo largo de 5.75 o más (puede extenderse hasta 20 h), o 10 horas o más (puede extenderse hasta 20 h), empezando en 1,25 mg/m2/h x 0.5 h, después 2.5 mg/m2/h x 0.5 h, y opcionalmente aumentando más la velocidad de infusión a 3.75 mg/m2/h x 0.5 h, y después a 5 mg/m2/h para la dosis restante, si se tolera. La IL-2 se administra cada segundo ciclo (p. ej., ciclos 2 y 4) como una infusión i.v. continua a lo largo de 4 días (96 h) en 3 MUI/m2/día en la semana 1 del ciclo de tratamiento y en 4.5 MUI/m2/día en la semana 2 del ciclo de tratamiento (es decir, 30 MUI/m2/ciclo). GM-CSF se administra por vía s.c. en una dosis diaria de 250 mcg/m2. Cada ciclo de tratamiento comienza el día 0, y el día 0 de un ciclo de tratamiento es el primer día de tratamiento con la citoquina respectiva. El tiempo de tratamiento global puede comprender 1, 2, 3, 4 o 5 o más ciclos de tratamiento. Las tablas 2, 3 y 4 muestran ejemplos de programas de tratamiento habituales.

Tabla 2: Esquema para la administración habitual de 5 ciclos de ch14.18/Sp2/0, citoquinas e isotretinoína (ácido retinoico o rA).

En dicho ejemplo de dosis habituales, el tratamiento con ch14.18/SP2/0 se administra cada 28 días en 25 mg/m2/día x 4 días durante los 5 ciclos; GM-CSF en 250 microgramos/m2/día durante 14 días; Aldesleukina (IL-2) en 3 MUI/m2/día durante la primera semana, y en 4.5 MUI/m2/día durante la segunda semana.

Tabla 3: Esquema de tratamiento para ciclos con GM-CSF

Nota: Como variación del esquema de tratamiento anterior, el tratamiento con RA se inicia el día 11 del primer ciclo, pero de acuerdo con el esquema el día 10 del tercer y quinto ciclo. Por consiguiente, en la variación del esquema de tratamiento anterior, el día 24 del primer ciclo de tratamiento es también el último día del tratamiento con RA del primer ciclo.

En dicho ejemplo de dosis habituales, se administra GM-CSF en 250 microgramos/m2/día como inyección subcutánea (muy recomendado) o i.v. como una infusión de 2 horas diarias desde el día 0 hasta el 13 (diariamente con la infusión de ch14.18/SP2/0 y durante 3 días antes y 7 días después del tratamiento con anticuerpo).

Tabla 4: Esquema de tratamiento para ciclos con Aldesleukina (IL-2)

Los días 28-31 de los ciclos de aldesleukina no se administra tratamiento. El día 32, se inicia el siguiente ciclo de tratamiento (con GM-CSF) (día 32 = día 0 del siguiente ciclo).

Como un ejemplo de dosis habituales, la aldesleukina (interleuquina-2, IL-2) se puede administrar en una dosis de 3 MUI/m2/día por infusión continua (usando una bomba de infusión ambulatoria CADd® o una bomba de infusión similar) durante 4 días (los días 0 - 3) durante la primera semana de cada ciclo. Durante la segunda semana de cada ciclo, la aldesleukina (IL-2) se puede administrar en 4.5 MUI/m2/día durante 4 días (los días 7 a 10, con la infusión de ch14.18/SP2/0). La aldesleukina se puede infundir de forma continua por vía i.v. a lo largo de 96 horas a través de un catéter mediante una bomba de infusión ambulatoria en dextrosa al 5% en agua (puede contener 0.1% de seroalbúmina humana si es necesario), dependiendo el volumen total de la bomba.

Se puede añadir un sexto ciclo de tratamiento con 14 días sin tratamiento (comenzando el día 24 del quinto ciclo, que es el día 0 del sexto ciclo) seguido de 14 días de administración de isotretinoína solamente.

En un ejemplo de dosis habituales en este contexto (es decir, con los tratamientos descritos antes), la hidroxicina (1 mg/kg; dosis máxima 50 mg) o la difenhidramina (0.5-1.0 mg/kg; dosis máxima 50 mg) se dan por vía i.v. a lo largo de 10 minutos para comenzar 20 minutos antes de la infusión de ch14.18/SP2/0; el acetaminofeno (10 mg/kg; dosis máxima 650 mg) se da por vía oral 20 minutos antes de la infusión de ch14.18/SP2/0; y/o se da una dosis de carga de sulfato de morfina de 50 mcg/kg inmediatamente antes de la administración de ch14.18/SP2/0 y después se continúa con goteo de sulfato de morfina con una velocidad de infusión de 20-50 microgramos/kg/h para continuar durante dos horas después de completar la infusión de ch14.18/SP2/0. Además, se pueden usar otros narcóticos tales como hidromorfona o fentanilo. Alternativamente, se puede usar infusión de lidocaína junto con un bolo i.v. de morfina, si es necesario. A continuación se muestran las pautas de administración para la infusión de lidocaína:

Administración de lidocaína (en dosis habituales):

a. Administrar bolo i.v. de lidocaína de 2 mg/kg en 50 cc de solución salina normal (NS) a lo largo de 30 minutos antes del inicio de la infusión de ch14.18/SP2/0.

b. Al comienzo de la infusión de ch14.18/SP2/0, iniciar la infusión de lidocaína i.v. en 1 mg/kg/h y continuar hasta dos horas después de completar la infusión de ch14.18/SP2/0.

C. Se puede administrar bolo de morfina i.v. de 25-50 microgramos/kg cada 2 h, si es necesario.

En dicho ejemplo de dosis habituales, también se puede considerar la administración de gabapentina con dosis de carga de morfina, y dar infusión/bolo de morfina según sea necesario; se puede empezar con gabapentina 10 mg/kg/día y ajustar la dosis hasta 30-60 mg/kg/día dependiendo de la respuesta clínica.

En dicho ejemplo de dosis habituales, las dosis de hidroxizina (o difenhidramina) y acetaminofeno se pueden repetir cada 6 h, si es necesario; por vía i.v. o v.o.

En dicho ejemplo de dosis habituales, se pueden administrar dosis adicionales de morfina durante la infusión de ch14.18/SP2/0 para tratar el dolor neuropático seguido de un aumento en la velocidad de infusión de sulfato de morfina, pero los pacientes deben ser controlados de cerca. Si los pacientes no pueden tolerar la morfina (p. ej., picazón), se puede sustituir la morfina por fentanilo o hidromorfona. Alternativamente, se puede usar infusión de lidocaína junto con bolo i.v. de morfina, si es necesario.

La expresión "dosis de morfina" como se usa en la presente memoria se refiere a la cantidad de morfina (en mg o mcg) por kg de peso corporal del paciente. Por consiguiente, si se refiere a una dosis diaria de morfina, es la cantidad de morfina (en mg o mcg) por kg de peso corporal del paciente al día, o si se refiere a una dosis de morfina por hora, es la cantidad de morfina (en mg o mcg) por kg de peso corporal del paciente por hora (o velocidad de infusión de morfina), o si se refiere a una dosis de morfina por ciclo de tratamiento, es la cantidad de morfina (en mg o mcg) por kg de peso corporal del paciente por ciclo de tratamiento, o si se refiere a una dosis de morfina por tiempo de tratamiento global, es la cantidad de morfina (en mg o mcg) por kg de peso corporal del paciente por tratamiento global.

La morfina y/u otros analgésicos se pueden administrar en una dosis diaria habitual, pero con una frecuencia reducida de administración, p. ej., solo cada dos días, si normalmente se ha administrado cada día. En otro ejemplo, en el que la morfina y/u otros analgésicos se han administrado normalmente como infusión i.v. continua a lo largo de varios días, se puede reducir el tiempo de infusión al día (lo que da como resultado una infusión no continua) o se reduce la duración total de la infusión continua, es decir, el número de días de infusión continua.

La dosis diaria de uno o más analgésicos en uno o más días de tratamiento con anticuerpo (es decir, un día de un ciclo de tratamiento en el que se administra la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 al paciente) en un ciclo de tratamiento de acuerdo con el la descripción (sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin IL-2 y sin GM-CSF, y en ciertas realizaciones sin tratamiento con citoquinas) puede ser inferior a la dosis diaria habitual administrada en uno o más días de tratamiento con anticuerpo en un ciclo de tratamiento habitual (con tratamiento habitual de citoquinas).

En particular, la dosis diaria de uno o más analgésicos en uno o más días de tratamiento con analgésicos (es decir, un día de un ciclo de tratamiento en el que se administran uno o más analgésicos, p. ej., morfina, al paciente, que también pueden ser días antes de después de la administración de anticuerpo) en un ciclo de tratamiento de acuerdo con la invención (sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin IL-2 y sin GM-CSF, y en ciertas realizaciones sin tratamiento con citoquinas) típicamente es menor que la dosis diaria habitual administrada en uno o más días de tratamiento con analgésicos en un ciclo de tratamiento habitual (con el tratamiento habitual con citoquinas).

La dosis (p. ej., la dosis diaria) de uno o más analgésicos (p. ej., morfina) se puede reducir con el tiempo, p. ej., dentro del tiempo de tratamiento global, dentro de un ciclo de tratamiento, durante el periodo de tratamiento con anticuerpo dentro de un ciclo de tratamiento, desde un día de tratamiento con anticuerpo o analgésicos al siguiente día de tratamiento con anticuerpo o analgésicos dentro de un ciclo de tratamiento, y/o de un ciclo de tratamiento al siguiente. Además, la dosis de analgésicos, en particular la dosis de morfina, se puede reducir continuamente dentro de un ciclo de tratamiento, durante el periodo de tratamiento con anticuerpo dentro de un ciclo de tratamiento, y/o de un día de tratamiento con anticuerpo o analgésico/morfina al siguiente día de tratamiento con anticuerpo o analgésico/morfina dentro de un ciclo de tratamiento.

También la dosis diaria de morfina administrada durante uno o más días de administración del anticuerpo en un programa de infusión sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin GM-CSF (y sin IL-2), y posiblemente también sin otra citoquina de acuerdo con la invención, y/o la dosis de morfina de todos los días de tratamiento con anticuerpo o morfina puede ser menor que la dosis diaria de morfina durante la administración del anticuerpo con las dosis habituales de una o más citoquinas. Por ejemplo, la dosis diaria de morfina o la dosis de morfina por ciclo administrada en un programa de infusión de anticuerpos sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin GM-CSF, y posiblemente sin citoquina puede ser 90% o menos, 80% o menos, 70% o menos, 60% o menos, o 50% o menos, o 40% o menos, o 30% o menos, o 20% o menos, o 10% o menos de la dosis de morfina administrada o prescrita para un programa de infusión de anticuerpo con las dosis habituales de citoquinas. Así, por ejemplo, la dosis diaria de morfina administrada durante uno o más días de infusión intravenosa continua del anticuerpo sin IL-2, y posiblemente también sin GM-CSF, y posiblemente también sin otra citoquina de acuerdo con la invención y/o de todos los días de tratamiento con anticuerpo o morfina, puede ser menor de 0.9, 0.72, 0.48, 0.38, 0.4375 y/o 0.205 mg/kg/día.

En algunos casos, la morfina se puede administrar solo durante algunos, pero no todos, los días en los que se administra el anticuerpo, p. ej., solo en los primeros 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días de administración de anticuerpo sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y en ciertos casos sin otra citoquina. En otros casos, no se puede administrar morfina en uno o más días de administración del anticuerpo, o incluso dentro del ciclo de tratamiento completo, o solo en algunos pero no en todos los ciclos de tratamiento.

La velocidad de infusión de la morfina, es decir, la cantidad de morfina por kg de peso corporal del paciente (o dosis de morfina) por hora, administrada durante una o más horas o días de la infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin GM-CSF, y posiblemente sin otra citoquina de acuerdo con la invención y/o de todas las horas o días de tratamiento con morfina, puede ser menor que la velocidad de infusión de morfina convencional prescrita para un programa con las dosis habituales de citoquinas, y/o menor que la velocidad de infusión de morfina en los ejemplos con las dosis habituales de citoquinas descritas antes.

Por ejemplo, la velocidad de infusión de morfina administrada durante uno o más días de infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y posiblemente sin otra citoquina de acuerdo con la invención y/o de todos los días de tratamiento con anticuerpo o morfina, puede ser menor que 50, 40, 30, 20, 10 y/o 5 mcg/kg/h, y/o menor que cualquier intervalo entre estas velocidades de infusión. Como otro ejemplo, la velocidad de infusión de morfina administrada durante uno o más días de infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y posiblemente sin otra citoquina de acuerdo con la invención y/o de todos los días de tratamiento con anticuerpo o morfina, puede ser menor 50 mcg/kg/h en el primero y, opcionalmente, cualquier ciclo de tratamiento siguiente, menor que 40 mcg/kg/h en el segundo y opcionalmente cualquier ciclo de tratamiento siguiente, menor que 30 mcg/kg/h en el tercer y opcionalmente cualquier ciclo de tratamiento siguiente, menor que 20 mcg/kg/h en el cuarto y opcionalmente cualquier ciclo de tratamiento siguiente y/o menor que 10 mcg/kg/h en el quinto y opcionalmente cualquier ciclo de tratamiento siguiente.

Como otro ejemplo más, la dosis de morfina por ciclo de tratamiento administrado durante uno o más ciclos de tratamiento que comprenden la infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y en ciertas realizaciones sin GM-CSF, y posiblemente sin ninguna citoquina de acuerdo con la invención, puede ser menor que la dosis de morfina por ciclo de tratamiento en un programa de infusión con el tratamiento habitual con citoquinas, p. ej., 90%, 80%, 70% o menos en el primer ciclo de tratamiento; 80%, 70%, 60% o menos en el segundo ciclo de tratamiento; 60%, 50%, 40% o menos en el tercer ciclo de tratamiento; 45%, 35%, 25% o menos en el cuarto ciclo de tratamiento; y/o 30%, 20%, 10% o menos en el quinto ciclo de tratamiento. Como un ejemplo adicional, la dosis de morfina por ciclo de tratamiento del segundo y cualquier ciclo de tratamiento siguiente, administrada durante uno o más ciclos de tratamiento que comprenden la infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y posiblemente sin otra citoquina de acuerdo con la invención, puede ser menor que la dosis de morfina por ciclo de tratamiento en un programa de infusión de anticuerpo con las dosis habituales de citoquinas. La dosis de morfina de dicho ciclo de tratamiento y cualquier ciclo de tratamiento siguiente, y/o del tiempo de tratamiento global podría ser incluso menor que la dosis de morfina por ciclo de tratamiento en un programa de infusión habitual. Por ejemplo, la dosis de morfina por ciclo de tratamiento administrado durante uno o más ciclos de tratamiento que comprenden la infusión intravenosa del anticuerpo sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y posiblemente sin otra citoquina de acuerdo con la invención, podría ser menor que 7.2, 4.8, 4.5, 2, 1.75 y/o 0.82 mg/kg/ciclo, o menor que cualquier intervalo entre estas dosis.

La dosis de morfina del tiempo de tratamiento global en un programa de infusión de acuerdo con la invención típicamente es menor que la dosis de morfina del tiempo de tratamiento global en un programa de infusión habitual, es decir, un programa de infusión de anticuerpo con la(s) dosis habitual(es) de citoquina(s). De hecho, puede ser 90% o menos, 80% o menos, 70% o menos, 60% o menos, 50% o menos, 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, 10% o menos de la dosis de morfina del tiempo de tratamiento global en un programa de infusión habitual, y/o menor que cualquier intervalo entre estas dosis.

Dicho en otros términos, la dosis de morfina del tratamiento global siguiendo el programa de infusión de acuerdo con la invención puede ser menor que 43.2, 28.8, 13.5, 10, 8.75 y/o 4.1 mg/kg/tiempo de tratamiento global, y/o menor que cualquier intervalo entre estas dosis.

Las dosis de morfina de referencia en los programas de infusión habituales, como se menciona en la presente memoria en comparación con las dosis de morfina en programas de infusión de acuerdo con la presente invención, se refieren a las dosis de morfina convencionales para dicho programa, o las dosis de morfina prescritas para dicho programa (p. ej. como se especifica en los protocolos de estudios clínicos). Las dosis de morfina de referencia mencionadas en la presente memoria se pueden referir a la dosis de morfina administrada el primer día de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 en un ciclo de tratamiento con un programa de infusión de anticuerpos de la invención y/o habitual, y se denomina "dosis de morfina inicial ".

Por consiguiente, la expresión "dosis de morfina de referencia" como se usa en la presente memoria comprenderá dosis de morfina de los programas de tratamiento distintos de aquellos según la presente descripción (p. ej., con tratamiento con citoquinas), y/o dosis de morfina iniciales (p. ej., de los programas de tratamiento con o sin tratamiento con citoquinas); y abarcará todos los ejemplos de dichas dosis de morfina mencionadas en la presente memoria en comparación con las otras dosis de morfina en programas de infusión de anticuerpos sin IL-2, y posiblemente sin IL-2 y sin GM-CSF, y posiblemente sin citoquina de acuerdo con la presente invención.

Por ejemplo, la dosis de morfina de referencia por hora de infusión, es decir, la velocidad de infusión de referencia, durante el periodo de administración del anticuerpo puede ser de 50 mcg/kg/h o 30 mcg/kg/h. También puede ser 50, 40, 30 y/o 20 mcg/kg/h. Dicho en otros términos, la dosis de morfina de referencia es 0.9, 0.72, 0.48, 0.38, 0.4375 y/o 0.205 mg/kg/día; o 7.2, 4.8, 4.5, 2, 1.75 y/o 0.82 mg/kg/ciclo; o 43.2, 28.8, 13.5, 10, 8.75, y/o 4.1 mg/kg/tiempo de tratamiento global.

La dosis de indometacina de referencia puede ser de 0.3 a 0.5 mg/kg/dosis, o 25 o 50 mg/dosis, por vía oral o intravenosa cada 6 horas.

Las dosis de morfina de referencia en los programas de infusión habituales (con tratamiento con citoquinas), como se ha mencionado antes en comparación con las dosis de morfina en los programas de infusión de la invención (sin tratamiento con citoquinas), se refieren a las dosis de morfina administradas realmente a los pacientes (p. ej. la media respectiva de las dosis de morfina administradas a todos los pacientes tratados de un grupo tratado en el mismo marco).

Las dosis de morfina en los programas de infusión de la invención, como se menciona en la presente memoria en comparación con las dosis de morfina en los programas de infusión habituales, se pueden referir a las dosis de morfina convencionales reducidas para dicho programa de la invención, o las dosis de morfina reducidas prescritas para dicho programa (p. ej., como se especifica en los protocolos de estudios clínicos). Al administrar el anticuerpo de acuerdo con la invención, sin IL-2, y posiblemente sin GM-CSF, y posiblemente sin ninguna citoquina en absoluto, la dosis de morfina se puede reducir a menos de 50 mcg/kg/h. En ciertos casos, la dosis de morfina por hora de infusión, es decir, la velocidad de infusión, durante una o más horas o días de la administración de la invención del anticuerpo puede ser incluso menor que 30 mcg/kg/h. Las dosis de morfina en programas de infusión de la invención, como se ha mencionado antes en comparación con las dosis de morfina en programas de infusión habituales, se refieren a las dosis de morfina administradas realmente a los pacientes (p. ej., la media respectiva de las dosis de morfina administradas a todos los pacientes tratados de un grupo tratado en el mismo marco).

En general, las dosis de analgésicos individuales pueden variar dependiendo de la tolerancia al dolor del paciente individual. La dosificación se puede adaptar para obtener una analgesia óptima.

El periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se puede combinar con uno o más periodos de tratamiento con un retinoide, uno o más periodos de tratamiento con un analgésico, uno o más periodos de tratamiento con otro fármaco o tratamiento (excepto tratamiento con citoquinas), y/o uno o más periodos de tratamiento sin tratamiento.

El periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 combinado con uno o más de dichos otros periodos de tratamiento representa un ciclo de tratamiento. Por consiguiente, un ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 y opcionalmente uno o más periodos de tratamiento con otros fármacos, agentes y/o tratamientos (excepto tratamiento con citoquinas). Cualquiera de dichos periodos de tratamiento dentro de un ciclo de tratamiento se puede solapar parcial y/o completamente, como se describe adicionalmente en la presente memoria.

Por ejemplo, un paciente que se tratas con el anticuerpo también se puede tratar con un retinoide (p. ej., isotretinoína), y opcionalmente morfina, y/o uno o más derivados de morfina, y/o uno o más analgésicos distintos. El periodo de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 puede no estar precedido y/o seguido y/o acompañado por un periodo de tratamiento con una o más citoquinas, y/o puede no estar acompañado por un periodo de tratamiento con morfina y/o uno o más analgésicos.

Un ciclo de tratamiento puede comprender de 28 a 49 días, p. ej., 28, 35, 42 o 49 días o cualquier intervalo entre estos periodos. El ciclo de tratamiento comienza el día en que el paciente recibe por primera vez cualquiera de los tratamientos comprendidos en dicho ciclo (se puede designar como día 0 o día 1), p. ej., la administración de una preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 y/o cualquier otro preparación o tratamiento (excepto tratamiento con citoquinas).

El periodo de tratamiento con el anticuerpo anti-GD2 puede estar precedido, acompañado y/o seguido de un periodo de tratamiento con un retinoide (p. ej., isotretinoína), directamente o con un intervalo de uno o más días sin tratamiento, p. ej., 1, 2, 3, 4 o 5 días sin tratamiento. El retinoide (p. ej., isotretinoína) normalmente se administra por vía oral dos veces al día en una dosis de 160 mg/m2/día (en dosis iguales, es decir, 2 x 80 mg/m2). Se administra típicamente durante 14 días, p. ej., desde el día 1 al día 14 de un ciclo de tratamiento, o desde el día 19 al día 32 del ciclo de tratamiento. Al periodo de tratamiento con el retinoide le puede seguir un intervalo de uno o más días sin tratamiento, p. ej., 1,2, 3, 4 o 5 días sin tratamiento.

Por ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 14 días con el retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 1 a 14 del ciclo de tratamiento, seguido de 7 días sin tratamiento (días 15-21 del ciclo de tratamiento), y un periodo de tratamiento de 5 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 20 mg/m2/día infundido a lo largo de 8 horas para administrar una dosis de 100 mg/m2/ciclo), p. ej. los días 22 a 26 del ciclo de tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 29, que es entonces el día 1 del siguiente ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 14 días con un retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 1 a 14 del ciclo de tratamiento, seguido de un periodo de tratamiento de 5 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 20 mg/m2/día infundido a lo largo de 8 horas para administrar una dosis de 100 mg/m2/ciclo), p. ej., los días 22 a 28 del ciclo de tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 29, que es entonces el día 1 del siguiente ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 10 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 10 o 15 mg/m2/día para administrar una dosis de 100 o 150 mg/m2/ciclo), p. ej., los días 8 a 17 del ciclo de tratamiento, y un periodo de tratamiento de 14 días con un retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 19 a 32 del ciclo de tratamiento, seguido de 3 días sin tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 36, que es el día 1 del segundo ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 14 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 7 o 15 mg/m2/día para administrar una dosis de 100 o 210 mg/m2/ciclo), p. ej., los días 8 a 21 del ciclo de tratamiento, y un periodo de tratamiento de 14 días con un retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 26 a 39 del ciclo de tratamiento, seguido de 3 días sin tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 43, que es entonces el día 1 del segundo ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 15 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 10 mg/m2/día para administrar una dosis de 150 mg/m2/ciclo), p. ej., los días 8 a 22 del ciclo de tratamiento, y un periodo de tratamiento de 14 días con un retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 26 a 39 del ciclo de tratamiento, seguido de 3 días sin tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 43, que es entonces el día 1 del segundo ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 21 días con el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., con 7 o 10 mg/m2/día para administrar una dosis de 150 o 210 mg/m2/ciclo), p. ej., los días 8 a 28 del ciclo de tratamiento, y un periodo de tratamiento de 14 días con un retinoide (p. ej., isotretinoína), p. ej., los días 33 a 46 del ciclo de tratamiento, seguido de 3 días sin tratamiento, antes de que comience el siguiente ciclo el día 50, que es entonces el día 1 del segundo ciclo de tratamiento.

Como otro ejemplo, el ciclo de tratamiento puede comprender un periodo de tratamiento de 4 días con la preparación que comprende el anticuerpo anti-GD2 (p. ej., ch14.18/SP2/0), por ejemplo administrada en una dosis de 25, 20, 17.5 o 15 mg/m2/día, p. ej., los días 3 a 6 de un ciclo de tratamiento de 24 días que comienza con el día 0, o los días 7 a 10 de un ciclo de tratamiento de 32 días que comienza con el día 0, p. ej., durante 5 ciclos; y un periodo de tratamiento con RA, p. ej., isotretinoína los días 10 a 23 de un ciclo de tratamiento que comienza con el día 0, o los días 14 a 27 de un ciclo de tratamiento que comienza con el día 0. En algunos casos, el programa de tratamiento puede ser como se especifica en la Tabla 2, 3 y/o 4, pero sin IL-2, y posiblemente sin IL-2 y sin GM-CSF, y en ciertas realizaciones sin dosis de citoquinas. Por consiguiente, el programa de tratamiento puede ser como se especifica en la Tabla 2, 3 y/o 4, pero sin citoquinas.

El ciclo de tratamiento se puede repetir, ya sea de forma idéntica o en una forma modificada, p. ej., con una dosis o programa diferente, o con diferentes tratamientos adicionales (p. ej., con uno o más analgésicos diferentes). Por lo tanto, el tiempo de tratamiento global (p. ej., el periodo de tiempo que comprende todos los ciclos de tratamiento subsiguientes, o el periodo de tratamiento continuo general) puede comprender al menos 1 o 2 o más ciclos, o 10 o más ciclos. De acuerdo con la presente descripción, la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 se administra al paciente en dos o más ciclos de tratamiento, como una infusión continua, y sin la administración concomitante de IL-2. En algunos casos, hay dicha infusión continua de la preparación sin la administración concomitante de IL-2 en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 ciclos, o más.

El tiempo de tratamiento global puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 ciclos o más. El tiempo de tratamiento global puede incluso comprender hasta 20 o más ciclos de tratamiento. Como se ha descrito antes, los ciclos de tratamiento pueden comprender periodos de tiempo sin tratamiento (intervalos en los que no se administra ningún tratamiento al paciente, es decir, sin anticuerpo, sin citoquina, sin otro fármaco). Por lo tanto, como se usa en la presente memoria, el tiempo de tratamiento global también puede comprender dichos intervalos sin tratamiento dentro de los ciclos de tratamiento.

Por ejemplo, el ciclo de tratamiento de 35, 42 o 49 días como se ha especificado antes se puede repetir al menos 4 o 5 veces, de modo que el periodo de tratamiento continuo global comprende al menos 5 o 6 ciclos de tratamiento.

El efecto del tratamiento con anticuerpo sin una o más citoquinas se puede determinar por un ensayo de citólisis dependiente del complemento (CDC) o un análisis de sangre completa (WBT). El WBT es un ensayo en el que las células objetivo o los componentes objetivo (es decir, células, liposomas u otros compartimentos similares a células que se van a lisar) se ponen en contacto con sangre completa del paciente adecuadamente anticoagulada. El ensayo de CDC puede ser, p. ej., un ensayo de CDC convencional como se conoce en la técnica (p. ej., como se describe en Indusogie et al., J Immunol 2000; 164(8):4178-84; Zeng et al. Molecular Immunology 2005; 42(11):1311-9; o en WO2005/070967). El ensayo de CDC y/o el WBT se puede hacer con células objetivo positivas para GD2, tales como las líneas celulares tumorales del cáncer positivo para GD2 que se va a tratar. Por ejemplo, si el paciente que se va a tratar padece neuroblastoma, la línea celular puede ser una línea celular de neuroblastoma, tal como, p. ej., células de neuroblastoma humano LAN-1. En otro ejemplo, si el paciente que se va a tratar padece melanoma, la línea celular puede ser una línea celular de melanoma, tal como, p. ej., células de melanoma humano M21. En otro ejemplo más, las células objetivo del ensayo CDC y/o el WBT son células tumorales obtenidas del paciente, es decir, células tumorales autólogas del paciente. El componente objetivo del ensayo de CDC y/o WBT puede ser un liposoma que presenta GD2 en la superficie. Las células objetivo o los componentes objetivo están marcados con un componente de señalización, p. ej., con un componente radiactivo, tal como 51Cr, o con un componente fluorescente, tal como calceína. El componente de señalización está comprendido por la célula objetivo o componente objetivo, es decir, está dentro de la célula objetivo o componente objetivo (p. ej. un liposoma empaquetado con el componente de señalización y que presenta GD2 en la superficie), y es liberado tras la lisis de la célula objetivo o componente objetivo. Por lo tanto, el componente de señalización proporciona la lectura del ensayo. Las células o componentes objetivo cargados con el compuesto de señalización se ponen en contacto con la sangre completa, suero o plasma en una cierta proporción. La sangre completa, plasma o suero se pueden diluir para la CDC o WBT, p. ej., en una proporción de 1:2 o superior, p. ej., 1:4, 1:5 o 1:10, o cualquier intervalo entre estas proporciones antes de añadirlos a la muestra. Sin embargo, también se pueden añadir a la muestra sin diluir. La concentración final de la sangre completa, plasma o suero en la muestra de CDC o WBT puede estar, p. ej., en el intervalo de 10 a 50%. La lisis de la célula objetivo o componente objetivo se puede medir por la liberación de dicho componente de señalización mediante un contador de centelleo o espectrofotometría. Por ejemplo, la lisis de la célula objetivo o componente objetivo se puede medir determinando la cantidad de 51Cr liberada en el líquido sobrenadante por un contador de centelleo. El porcentaje de lisis se puede determinar mediante la siguiente ecuación: 100 x (liberación experimental - liberación espontánea)/(liberación máxima - liberación espontánea).

Para el ensayo de CDC, los componentes citolíticos (o componentes efectores) son proporcionados por el suero o plasma adecuadamente anticoagulado obtenido del paciente o donante, que comprende los componentes del sistema del complemento. Para el WBT, los componentes citolíticos (o componentes efectores) son proporcionados por la sangre completa adecuadamente anticoagulada obtenida del paciente o donante que comprende los componentes del sistema del complemento, así como todos los componentes celulares, y también cualquier otro componente comprendido en la sangre completa que pueda ser relevante para la lisis de las células objetivo, así como la interacción de todos los componentes (p. ej., se sabe que la activación del complemento activa ciertas células efectoras tales como los granulocitos) Para la CDC y/o WBT, el suero, plasma o sangre completa se pueden añadir a las células objetivo o componentes objetivo en diferentes diluciones.

Además, una o más muestras del ensayo de CDC y/o WBT se pueden enriquecer con un anticuerpo anti-GD2 en diferentes concentraciones, p. ej., para la generación de una curva de referencia.

Se pueden añadir uno o más anticuerpos anti-GD2 anti-idiotípicos (anti-id) que reconocen el dominio variable de los anticuerpos anti-GD2 a una muestra para inhibir la lisis de células diana mediada por el anticuerpo, p. ej., como un control negativo o para probar la especificidad del ensayo y que la lisis de las células objetivo medida sin el anticuerpo anti-id es mediada por anticuerpos o depende de anticuerpos.

El mayor nivel de citólisis después de uno o más días iniciales de tratamiento con anticuerpo (en comparación con el nivel de citólisis antes del tratamiento con anticuerpo) se puede mantener durante todo el ciclo de tratamiento, o incluso durante el tiempo de tratamiento global, es decir, incluso durante periodos de tiempo, donde el paciente no se trata con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2, es decir, en los intervalos entre los periodos de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2 (si hay alguno, es decir, si el paciente no se trata de forma continua a lo largo de todo el tiempo de tratamiento global con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2).

El nivel de citólisis (nivel de lisis de células objetivo, p. ej., medido en un ensayo de CDC o WBT) de una muestra de sangre de un paciente tratado de acuerdo con la presente descripción, puede ser mayor en comparación con el nivel de citólisis antes del primer periodo de tratamiento con la preparación que comprende el anticuerpo durante todo el periodo de tiempo que comienza desde el final del primer periodo de tratamiento con anticuerpo hasta el final del último ciclo de tratamiento, es decir, incluso entre los periodos de tiempo de tratamiento con anticuerpo. Dicho nivel de citólisis puede ser al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 100%, o cualquier intervalo entre estos niveles, durante todo el periodo de tiempo que comienza desde el final del primer periodo de tratamiento con anticuerpo hasta el final del último ciclo de tratamiento. Después del primer, segundo, tercer, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, y/o décimo periodo de tratamiento con el anticuerpo anti-GD2, el nivel de citólisis puede ser al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 100%, o cualquier intervalo entre estos niveles. En otro aspecto, el nivel de citólisis antes del segundo, tercer, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno y/o décimo periodo de tratamiento con el anticuerpo anti-GD2 puede ser al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 100%, o cualquier intervalo entre estos niveles.

Ejemplos

Ejemplo 1: Secuencias de APN311 y datos relacionados

Datos de secuencia de APN311

Tabla 5: Peso molecular (MW) y pI (calculado)

1) Calculado por http://web.expasy.org/compute pi/

2) Debido al peso molecular de los colorantes, deben esperarse desplazamientos a pesos moleculares ligeramente mayores para 2D-DIGE

Secuencia de nucleótidos (ADNc, incluido líder)

"TAG" funciona como un "codón de parada" y por lo tanto no se traduce en la secuencia de péptido.

Cadena ligera (SEQ ID NO: 1):

1 ATGCAA GCC CCA GCC CAC CTT CTC TTC CTC CTG CTA CTC TGG CTC CCA GAT ACC ACT CCA

61 GAAATAGTG ATG ACG CAG TCT CCA GCC ACC CTG TCT GTG TCT CCA GGG GAA AGA GCC ACC

121 CTCTCC TGC AGA TCT AGT CAG AGT CTTGTA CAC CGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG

181 TAC CTG CAG AAG CCA GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATT CAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT

241 TCT GGG GTC CCA GAC AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACA CTC AAG ATC

301 AGC AGA GTG GAG GCT GAG GAT CTG GGA GTT TAT TTC TGT TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT

361 CCGCTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG GAG CTG AAA CGA ACT GTG GCT GCA CCA TCT

421 GTCTTC ATC TTC CCG CCA TCT GAT GAG CAG TTG AAA TCT GGA ACT GCC TCT GTT GTG TGC

481 CTGCTG AAT AAC TTC TAT CCC AGA GAG GCC AAA GTA CAG TGG AAG GTG GAT AAC GCC CTC

541 CAATCG GGT AAC TCC CAG GAG AGT GTCACA GAG CAG GAC AGC AAG GAC AGC ACC TAC AGC

601 CTCAGCAGC ACC CTG ACG CTG AGC AAA GCA GAC TAC GAG AAA CAC AAA GTC TAC GCC TGC

661 GAAGTC ACC CAT CAG GGC CTG AGC TCG CCC GTC ACA AAG AGC TTC AAC AGG GGA GAG TGT

721 TAG

Cadena pesada (SEQ ID NO: 2):

1 ^{a t g}-CCA TCC ACC TGC ATC ■T-TT-■ATT-TTA' ATC CTC TCC CTA ACT ACA CCT CTC CAC TCT GAG

61 GTC CAA CTG CTG CAG TCT GGA CCT GAG CTG GAG AAG CCT GGC GCT TCA GTG ATG ATA TCC

121 TGC AAG GCT TCT GGT TCC TCA TTC ACT GGC TAC AAC ATG AAC TGG GTG AGG CAG AAC ATT

181 GGA AAG AGC CTT GAA TGG ATT GGA GCT ATT GAT CCT TAC TAT GGT GGA ACT AGC TAC AAC

241 CAG AAG TTC AAG GGC AGG GCC ACA TTG ACT GTA GAC AAA TCG TCC AGC ACA GCC TAC ATG

301 CAC CTC AAG AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCA GTC TAT TAC TGT GTA AGC GGA ATG GAG

361 TAC TGG GGT CAA GGA ACC TCA GTC ACC GTC TCC TCA GCC TCC ACC AAG GGC CCA TCG GTC

421 TTC CCC CTG GCA CCC TCC TCC AAG AGC ACC TCT GGG GGC ACA GCG GCC CTG GGC TGC CTG

481 GTC AAG GAC TAC TTC CCC GAA CCG GTG ACG GTG TCG TGG AAC TCA GGC GCC CTG ACC AGC

541 GGC GTG CAC ACC TTC CCG GCT GTC CTA CAG TCC TCA GGA CTC TAC TCC CTC AGC AGC GTG

601 GTG ACC GTG CCC TCC AGC AGC TTG GGC ACC CAG ACC TAC ATC TGC AAC GTG AAT CAC AAG

661 CCC AGC AAC ACC AAG GTG GAC AAG AGA GTT GAG CCC AAA TCT TGT GAC AAA ACT CAC ACA

721 TGC CCA CCG TGC CCA GCA CCT GAA CTC CTG GGG GGA CCG TCA GTC TTC CTC TTC CCC CCA

781 AAA CCC AAG GAC ACC CTC ATG ATC TCC CGG ACC CCT GAG GTC ACA TGC GTG GTG GTG GAC

841 GTG AGC CAC GAA GAC CCT GAG GTC AAG TTC AAC TGG TAC GTG GAC GGC GTG GAG GTG CAT

901 AAT GCC AAG ACA AAG CCG CGG GAG GAG CAG TAC AAC AGC ACG TAC CGT GTG GTC AGC GTC

961 CTC ACC GTC CTG CAC CAG GAC TGG CTG AAT GGC AAG GAG TAC AAG TGC AAG GTC TCC AAC

1021 AAA GCC CTC CCA GCC CCC ATC GAG AAA ACC ATC TCC AAA GCC AAA GGG CAG CCC CGA GAA

1081 CCA CAG GTG TAC ACC CTG CCC CCA TCC CGG GAG GAG ATG ACC AAG AAC CAG GTC AGC CTG

1141 ACC TGC CTG GTC AAA GGC TTC TAT CCC AGC GAC ATC GCC GTG GAG TGG GAG AGC AAT GGG

1201 CAG CCG GAG AAC AAC TAC AAG ACC ACG CCT CCC GTG CTG GAC TCC GAC GGC TCC TTC TTC

1261 CTC TAT AGC AAG CTC ACC GTG GAC AAG AGC AGG TGG CAG CAG GGG AAC GTC TTC TCA TGC

1321 TCC GTG ATG CAT GAG GCT CTG CAC AAC CAC TAC ACG CAG AAG AGC CTC TCC CTG TCC CCG

1381 GGT AAA

nucleótidos 1 a 60 (tachados): secuencia líder

último nucleótido (tachado): codón de parada.

Secuencia de péptido (incluido péptido señal)

El péptido señal se escinde durante el procesamiento postraduccional y ya no es parte de la proteína recombinante final.

Cadena ligera (SEQ ID NO: 3):

1 M­ -E- rAr - P - -A- -e - i r - i - -F - i r - i - i r - i r - -W- i r -1-1- - i ­ -1- -G

21 E I V M T Q s P A T L S V s P G E R A T

41 L S c R S S Q S L V H R N G N T Y L H W

61 Y L Q K P G Q S P K L L I H K V S N R F

81 S G V P D R F s G S G S G T D F T L K I

101 S R V E A E D L G V Y F C S Q S T H V P

121 P L T F G A G T K L E L K R T V A A P S

141 V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V c

161 L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L

181 Q S G N S Q E S V T E Q D s K D S T Y S

201 L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A c

221 E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E c

Cadena pesada (SEQ ID NO: 4):

1 M--G--S i- i -S i- i -F-- i - i r - i - i r -6 --V-- i - - i - -G--V-ü -6 --E

21 V Q L L Q S G P E L E K P G A S V M I S

41 C K A S G S S F T G Y N M N W V R Q N I

61 G K S L E w I G A I D P Y Y G G T S Y N

aminoácidos 1 a 20 (tachados): secuencia líder

Se han producido dos lotes conforme con las GMP del anticuerpo ch14.18/CHO (APN311). Estos dos lotes del medicamento que se han producido son el Lote T651204-A (que contiene 4.3 ml (4.6 mg/ml) de anticuerpo) y el Lote T900310-A (que contiene 4.5 ml (4.5 mg/ml) de anticuerpo. La preparación en masa del anticuerpo monoclonal APN311 se fabrica como un concentrado para la preparación de infusiones IV.

Tabla 6: Composición de la preparación APN311 final

Guía de preparación

El anticuerpo se debe preparar en condiciones estériles. Se debe extraer el volumen adecuado de anticuerpo ch14.18/CHO (APN311) de los viales. Se recomienda que la solución de anticuerpos se filtre (0.2 a 1.2 |jm) antes de inyección al paciente, ya sea usando un filtro en línea durante la infusión (como hacen algunos centros de manera rutinaria) o filtrando la solución con un filtro de partículas (p. ej., filtro Nr MF1830, Impromediform, Alemania). El volumen del anticuerpo se añade a una bolsa de infusión que contiene NaCl al 0.9% y seroalbúmina humana al 1% (HSA), p. ej., 100 ml de NaCl al 0.9% y 5 ml de seroalbúmina humana al 20%.

Cálculo de la cantidad de ch14.18/CHO (APN311) que se debe diluir

La cantidad de ch14.18/CHO (APN311) que se debe administrar se calcula como sigue:

Dosis: 10 mg/m2/día, día 8-17, como infusión de 24 h.

Ejemplo de cálculo: si un paciente tiene un área de superficie corporal (BSA) de 0.7, necesita 7 mg (10 x 0.7) por día, o 70 mg por diez días de tratamiento (un ciclo).

Ejemplo 2: Pacientes tratados con APN311 sin IL-2 (y sin otras citoquinas) en comparación con los datos de Yu et al.

2010, NEJM (citado antes)

Los datos que subyacen en este ejemplo se han generado en el Estudio de Neuroblastoma de Alto Riesgo 1.5 de SIOP-Europa (SIOpEN), número EudraCT 2006-001489-17. Los pacientes con neuroblastoma de alto riesgo después de terapia mieloablativa (MAT) y rescate de células madre autólogas (ASCR), y según sea el caso, también otros tratamientos tales como radiación, otras quimioterapias, cirugía, etc., han recibido hasta 5 ciclos de 20 mg/m2/día de ch14.18/CHO administrado como una infusión i.v. de 8 horas durante 5 días consecutivos (días 22 a 26 del ciclo de tratamiento) en ciclos de 28 días. Esto corresponde a una dosis total de 100 mg/m2/ciclo de ch14.18/CHO. cis-RA se ha administrado por vía oral dos veces al día en una dosis de 160 mg/m2/día los días 1 a 14 del ciclo de tratamiento (en dos dosis iguales por día, es decir, 2 x 80 mg/m2). En un grupo no se ha administrado IL-2 durante un ciclo de tratamiento y durante el tiempo de tratamiento global. Los pacientes del otro grupo recibieron IL-2 en una dosis de 6 x 106 UI/m2/día los días 15 a 19 y 22 a 26 de un ciclo de tratamiento. Los pacientes se trataron en 6 ciclos de tratamiento, en donde los ciclos de tratamiento 1 a 5 eran como se ha descrito antes, y el sexto ciclo de tratamiento comprendía el periodo de tratamiento solo con isotretinoína (sin anticuerpos y sin IL-2 administrados).

Se analizó la supervivencia libre de eventos y global. La EFS y OS también se analizaron en el subgrupo de pacientes que se presentaba como pacientes con respuesta completa al inicio del tratamiento con anticuerpos (no hay evidencia de tumor en ningún examen aplicado). Los datos de EFS y OS de este subgrupo se han comparado con los datos de EFS y OS de un programa de tratamiento con anticuerpos, IL-2 y GM-CSF e isotretinoína (cis-RA), como se describe en Yu et al. (NEJM 2010, citado antes), y se incluyen en la Tabla 7.

Los pacientes en Yu et al. se han tratado con ch14.18/Sp2/0 dado en una dosis de 25 mg/m2/día durante cuatro días consecutivos, cada dosis de ch14.18/Sp2/0 se infunde por vía i.v. durante 5.75 horas o 10 h (se puede haber extendido hasta 20 h para toxicidades anticipadas). La IL-2 se da cada segundo ciclo (p. ej., ciclos 2 y 4) como una infusión i.v. continua durante 4 días (96 h) en 3 MUI/m2/día en la semana 1 del ciclo de tratamiento y en 4.5 MUI/m2/día en la semana 2 del ciclo de tratamiento (es decir, 30 MUI/m2/ciclo). El GM-CSF se da por vía s.c. en una dosis diaria de 250 mcg/m2 durante 14 días (del día 0 al 13). El tiempo de tratamiento global comprende 5 ciclos de tratamiento. Véase también las Tablas 2, 3 y 4 para los respectivos programas de tratamiento. Las figuras de EFS y OS de Yu et al. que se representan aquí en las Figuras 2 y 3 para comparación incluyen solo los pacientes con respuesta completa al tratamiento descrito antes. Por lo tanto, solo se ha usado el subgrupo de pacientes con respuesta completa al tratamiento de la invención para la comparación directa.

Tabla 7: Supervivencia libre de eventos (SLE) a 2 años y supervivencia global (SG) de pacientes con respuesta completa (RC) de APN311-302 en comparación con Yu et al. (NEJM 2010, citado antes) en porcentaje

Los resultados también se representan en las Figuras 1, 2 y 3 (también en comparación con Yu et al.) y en las Figuras 4 a 15 (para más detalles sobre toxicidades, es decir, efectos adversos o efectos secundarios observados). Según estos datos, la IL-2 no contribuye a la eficacia del tratamiento con anticuerpo anti-GD2. Sin embargo, el tratamiento concomitante con IL-2 aumenta sustancialmente los efectos secundarios y las toxicidades. El tratamiento con APN311+cis-RA de pacientes con respuesta completa al inicio de la inmunoterapia conduce a similares porcentajes de supervivencia global y libre de eventos a 2 años y curvas de supervivencia total similares a los encontrados en el grupo de ch14.18/SP2-0+IL2+GM-CSF+cis-RA del estudio de NEJM 2010 (Yu et al. 2010, citado antes).

Esto sugiere que no es necesaria la adición de IL2 ni de GM-CSF para lograr el nivel de eficacia del tratamiento de combinación como se describe en NEJM 2010.

Mejoran tanto la EFS como la OS para APN311+cis-RA (pacientes con respuesta completa al inicio de la inmunoterapia) en comparación con la EFS y OS de pacientes de NEJM 2010 que recibieron cis-RA solamente (EFS 2 años: 70% frente a 46%; OS 2 años: 81% frente a 75%; véase también la tabla 7). Esto indica la eficacia del agente único de APN311.

En una evaluación general de riesgo y beneficio, se concluye, por lo tanto, que APN311+cis-RA en pacientes con respuesta completa al inicio de la inmunoterapia puede ser incluso superior a la inmunoterapia de 4 componentes como se describe en NEJM 2010, en especial debido al perfil de efectos secundarios sustancialmente reducido y complejidad de tratamiento reducido debido a la omisión de IL2 y GM-CSF, y debido a la eficacia clínica similar en términos de EFS y OS.

Ejemplo 3: Ensayo de CDC y WBT de un paciente con neuroblastoma tratado con anticuerpo

Un paciente de neuroblastoma se ha tratado con APN311 en un programa de infusión continua, es decir, ha recibido el anticuerpo como una infusión continua durante 24 h al día durante 10 días consecutivos (los días 1-10 de un ciclo de tratamiento) en una dosis de 10 mg/m2/día durante 6 ciclos subsiguientes. Cada ciclo de tratamiento comprendía 35 días. Durante cada ciclo de tratamiento y durante el tiempo de tratamiento global de dichos 6 ciclos subsiguientes, el paciente solo ha recibido tratamiento con anticuerpo y no ha sido tratado con ninguna citoquina ni retinoide.

Se obtuvieron muestras de sangre de dicho paciente en los tiempos de medición indicados y se analizaron en un ensayo de CDC y WBT como se describe en los Ejemplos 4 y 5. Los resultados se representan en la Figura 16. La Figura 16 muestra que el tratamiento con anticuerpo sin ningún tratamiento con citoquinas produce niveles mayores de lisis de células tumorales. Estos niveles de lisis de células tumorales son comparables con los niveles de pacientes tratados con el anticuerpo y la IL-2 (en la Figura 17 se muestra un paciente representativo). El paciente representado en la Figura 17 se ha tratado con el mismo programa de tratamiento que el paciente mostrado en la Figura 16, pero además se ha tratado con IL-2 por vía s.c. en una dosis de 6 x 106 UI/m2/día en los días 1 a 5 y 8 a 12.

Como se puede ver especialmente en la Figura 16B, se mantiene un nivel mayor de lisis de células diana en el análisis de sangre completa (WBT) incluso durante periodos de tiempo dentro del tiempo de tratamiento global, donde el paciente no se trata con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2, es decir, en los intervalos entre los periodos de tratamiento con la preparación que comprende un anticuerpo anti-GD2.

Ejemplo 4: Método de ensayo de CDC

Principio para la CDC (citotoxicidad dependiente del complemento)

La inducción de citotoxicidad en células tumorales de suero o plasma humano normal en presencia de APN301 o APN311, o de suero o plasma de pacientes después de infusión de uno de estos anticuerpos, contra la línea celular de cáncer de neuroblastoma LAN-1 positivo para el antígeno GD2 (células objetivo) se determinó en un ensayo de liberación de 51Cromo. Las células objetivo se incubaron con Na251Cr(VI)O4, que permea la membrana celular y se une a proteínas citoplasmáticas en la forma reducida de Cr-III-valente, de modo que ya no se escapa de una célula intacta. Cuando estas células se lisan después de la incubación con suero o plasma y anticuerpos, o suero o plasma de pacientes, se libera la radiactividad en el líquido sobrenadante dependiendo de la capacidad de lisis en las muestras analizadas.

La lisis espontánea base y la lisis total (lisis celular máxima alcanzable o lisis celular objetivo máxima posible) por un tensioactivo se determinaron en cada experimento individual. Después de restar la lisis espontánea, se calculó la lisis inducida por las muestras analizadas como % de la lisis total.

Muestras de suero o plasma:

Se tomaron muestras de sangre completa de donantes humanos normales o de pacientes usando viales Vacutainer heparinizados para plasma o viales de coagulación de suero para suero. Los viales se centrifugaron a 2000 g durante 20 minutos. El plasma o suero sobrenadante se podía usar inmediatamente para el ensayo o almacenarse a -20°C (no se permite descongelar y volver a congelar).

Marcaje de células objetivo con 51Cr:

Se cultivaron células LAN-1 en RPMI 1640 con FCS inactivado por calor al 10%. El día anterior al ensayo se transfirieron a matraces nuevos y medio nuevo. El ensayo se llevó a cabo en una placa de cultivo celular de fondo plano de 96 pocillos, usando 4x104 células marcadas por pocillo con una actividad de 800 nCi 51Cr por pocillo. La cantidad necesaria de células se recogió de los matraces de cultivo, la suspensión se centrifugó y se volvió a suspender en 1 ml de PBS def. con EDTA al 0,1% y FCS al 1%. Se añadió el volumen calculado de la solución de 51Cr, las células se incubaron durante 90 minutos a 37°C y 5% de CO2 con rotación suave del tubo.

Después, la suspensión celular se lavó dos veces con medio de cultivo celular para eliminar la radiactividad del exterior de las células. Este medio contenía además 100 U/ml de penicilina G y 100 pg/ml de sulfato de estreptomicina. El sedimento de células marcadas después de las etapas de lavado se volvió a suspender a la concentración deseada de 4x105 células por ml.

Procedimiento del ensayo:

Para la evaluación de la capacidad citolítica de los anticuerpos, se pipeteó lo siguiente:

50 pl de las muestras (diluciones de anticuerpos)

100 pl de suero o plasma humano normal prediluido 1:4

100 pl de suspensión celular marcada con 51Cr (4x105 por ml)

Para la evaluación de la capacidad citolítica del plasma o suero de los pacientes, se pipeteó lo siguiente:

50 pl de medio

100 pl de plasma o suero de pacientes prediluido 1: 4

100 pl de suspensión celular marcada con 51Cr (4x105 por ml)

Las placas de ensayo para CDC se incubaron en una incubadora de CO2 a 37°C, 5% de CO2, durante 4 horas, o cuando se compara directamente con un WBT, durante 20 horas.

Además, una parte alícuota de cada muestra de sangre se preincubó con ganglidiomab, un anticuerpo monoclonal de ratón anti-ch14.18 (anticuerpo anti-idiotípico), y se procesó adicionalmente como se ha descrito antes. Se une específicamente al anticuerpo presente en la muestra de sangre después de la administración del anticuerpo al paciente. De este modo, el anticuerpo antiidiotípico inhibe la capacidad del anticuerpo para lisar las células tumorales objetivo en combinación con células sanguíneas (WBT) y/o componentes plasmáticos (CDC). La lisis residual se puede definir como un efecto no mediado por anticuerpos.

Después, los líquidos sobrenadantes de cada pocillo se recogen usando marcos de recogida con cartuchos de absorción y una prensa de recogida (skatron). Estos cartuchos empapados con los líquidos sobrenadantes celulares se transfieren a viales de recuento del contador gamma. La radiactividad, que es proporcional a la liberación de 51-cromo después de daño de las células objetivo marcadas, se mide a partir de todas las muestras y se expresa en cuentas por minuto (cpm). Los resultados se calculan como % de lisis restando las cpm de lisis espontánea de todos los valores de muestras y en relación con las cpm de la lisis máxima alcanzable con un tensioactivo que es 100%.

10Qx(cpm muestra menos cpm lisis espontánea)

cpm lisis máxima menos lisis espontánea =% de lisis de muestras

El método de ensayo de CDC descrito antes se ha usado para los resultados mostrados en la figura 16A.

Ejemplo 5: Método de WBT

Principio para WBT (análisis de sangre completa):

La inducción de citotoxicidad en células tumorales de sangre completa humana normal en presencia de APN301 o APN311, o de sangre completa de pacientes después de infusión de uno de estos anticuerpos, contra la línea celular de cáncer de neuroblastoma LAN-1 positivo para el antígeno GD2 (células objetivo) se determinó en un ensayo de liberación de 51Cromo.

Las células objetivo se incubaron con Na251Cr(VI)O4, que permea la membrana celular y se une a proteínas citoplasmáticas en la forma reducida de Cr-III-valente, de modo que ya no se escapa de una célula intacta. Cuando estas células se lisan después de la incubación con sangre completa y anticuerpos, o sangre completa de pacientes, se libera la radiactividad en el líquido sobrenadante dependiendo de la capacidad de lisis en las muestras analizadas.

La lisis de fondo espontánea y la lisis total (lisis máxima alcanzable o lisis celular objetivo máxima posible) por un tensioactivo se determinaron en cada experimento individual. Después de restar la lisis espontánea, se calculó la lisis inducida por las muestras analizadas como % de la lisis total.

Muestras de sangre:

Se tomaron muestras de sangre completa de donantes humanos normales o de pacientes usando viales Vacutainer heparinizados.

Marcaje de células objetivo con 51Cr:

Se cultivaron células LAN-1 en RPMI 1640 con FCS inactivado por calor al 10%. El día anterior al ensayo se transfirieron a matraces nuevos y medio nuevo. El ensayo se llevó a cabo en una placa de cultivo celular de fondo plano de 96 pocillos, usando 4x104 células marcadas por pocillo con una actividad de 800 nCi 51Cr por pocillo. La cantidad necesaria de células se recogió de los matraces de cultivo, la suspensión se centrifugó y se volvió a suspender en 1 ml de PBS def. con EDTA al 0,1% y FCS al 1%. Se añadió el volumen calculado de la solución de 1Cr, las células se incubaron durante 90 minutos a 37°C y 5% de CO2 con rotación suave del tubo.

Después, la suspensión celular se lavó dos veces con medio de cultivo celular para eliminar la radiactividad del exterior de las células. Este medio contenía además 100 U/ml de penicilina G y 100 pg/ml de sulfato de estreptomicina. El sedimento de células marcadas después de las etapas de lavado se volvió a suspender a la concentración deseada de 4x105 células por ml.

Procedimientos del ensayo:

Para la evaluación de la capacidad citolítica de los anticuerpos, se pipeteó lo siguiente:

50 pl de las muestras (diluciones de anticuerpos)

100 pl de sangre completa humana normal prediluida 1:2

100 pl de suspensión celular marcada con 51Cr (4x105 por ml)

Para la evaluación de la capacidad citolítica de la sangre completa de los pacientes, se pipeteó lo siguiente:

50 pl de medio

100 pl de sangre completa de pacientes prediluida 1:2

100 pl de suspensión celular marcada con 51Cr (4x105 por ml)

Las placas de ensayo se incuban en una incubadora con CO2 a 37°C, 5% de CO2, durante 20 horas.

Además, una parte alícuota de cada muestra de sangre se preincuba con ganglidiomab, un anticuerpo monoclonal de ratón anti-ch14.18 (anticuerpo anti-idiotípico), y se procesa adicionalmente como se ha descrito antes. Se une específicamente al anticuerpo presente en la muestra de sangre después de la administración del anticuerpo al paciente. De este modo, el anticuerpo antiidiotípico inhibe la capacidad del anticuerpo para lisar las células tumorales objetivo en combinación con células sanguíneas (WBT) y/o componentes plasmáticos (CDC). La lisis residual se puede definir como un efecto no mediado por anticuerpos.

Después, los líquidos sobrenadantes de cada pocillo se recogen usando marcos de recogida con cartuchos de absorción y una prensa de recogida (skatron). Estos cartuchos empapados con los líquidos sobrenadantes celulares se transfieren a viales de recuento del contador gamma. La radiactividad, que es proporcional a la liberación de 51-cromo después de un daño de las células objetivo marcadas, se mide a partir de todas las muestras y se expresa en cuentas por minuto (cpm). Los resultados se calculan como % de lisis restando las cpm de lisis espontánea de todos los valores de muestras y en relación con las cpm de la lisis máxima alcanzable con un tensioactivo que es 100%.

10Qx(cpm muestra menos cpm lisis espontánea)

cpm lisis máxima menos lisis espontánea =% de lisis de muestras

El método de WBT descrito antes se ha usado para los resultados mostrados en la figura 16B.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Una preparación para tratar el neuroblastoma en un paciente humano que tiene dicho neuroblastoma, en donde:

(a) la preparación comprende un anticuerpo monoclonal producido en células CHO, y que comprende la cadena ligera de la SEQ ID NO: 3 y la cadena pesada de la SEQ ID NO: 4 (ch14.18/CHO);

(b) la preparación se debe administrar al paciente sin la administración concomitante de IL-2 en el mismo ciclo de tratamiento;

(c) el anticuerpo ch14.18/CHO se administra al paciente como una infusión continua durante 24 horas al día durante 10 días consecutivos por ciclo; y

(d) el anticuerpo ch14.18/CHO se debe administrar en una dosis diaria de 5 a 15 mg/m2/día y en una dosis total de 50 a 150 mg/m2/ciclo.

2. La preparación para usar según la reivindicación 1, en donde el paciente se debe tratar una o más veces con un ácido retinoico antes, al mismo tiempo y/o después de la administración del anticuerpo ch14.18/CHO, en donde el ácido retinoico y el anticuerpo ch14.18/CHO se deben administrar en el mismo ciclo de tratamiento.

3. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la preparación se debe administrar al paciente en una dosis de 10 mg/m2/día durante 10 días consecutivos.

4. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo ch14.18/CHO se debe administrar al paciente durante dos o más ciclos de tratamiento.

5. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente no se trata de forma concomitante con GMCSF en el mismo ciclo de tratamiento.

6. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente no se trata de forma concomitante con una citoquina en el mismo ciclo de tratamiento.

7. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente no se trata con IL-2 y/o GMCSF y/o una citoquina en el curso de cualquiera de los ciclos de terapia consecutivos llevados a cabo como se define en las reivindicaciones precedentes.

8. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente padece un neuroblastoma de alto riesgo refractario primario o en recaída.

9. La preparación para usar según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente padece una enfermedad residual mínima en neuroblastoma de alto riesgo.