ES2773376T3 - Amidas de ácidos grasos, composiciones y procedimientos de uso - Google Patents

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Michael R Jirousek
Jean E Bemis
Chi B Vu
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Abstract

Un compuesto de Fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal, enantiómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que Z es **(Ver fórmula)** cada r es independientemente 2, 3 o 7; cada s es independientemente 3, 5 o 6; cada t es independientemente 0 o 1; cada v es independientemente 1, 2 o 6; R1 y R2 son independientemente -H, -D, alquilo -C1-C4, -halógeno, -OH, -C(O) alquilo C1-C4, -O-arilo, - O-bencilo, -OC(O) alquilo C1-C4, alqueno -C2-C3, -C2-C3 alquino, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1- C3)2, -NH(C(O) alquilo C1-C3), -N(C(O) alquilo C1-C3)2, -SH, -S(alquilo C1-C3), -S(O) alquilo C1-C3 o - S(O)2 alquilo C1-C3; R3 es H; y R4 se selecciona del grupo que consiste en **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** en las que R es alquilo C1-C6 no sustituido lineal o ramificado; o un compuesto seleccionado de **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Amidas de ácidos grasos, composiciones y procedimientos de uso
El pescado azul de aguas frías, como el salmón, la trucha, el arenque y el atún son la fuente de los ácidos grasos omega-3 marinos de la dieta, siendo el ácido eicosapentaenoico (EPA) y el ácido docosahexaenoico (DHA) el principal omega-3 derivado marino. ácidos grasos. Los ácidos grasos omega-3 han demostrado previamente que mejoran la sensibilidad a la insulina y la tolerancia a la glucosa en hombres normoglucémicos y en individuos obesos. También se ha demostrado que los ácidos grasos omega-3 mejoran la resistencia a la insulina en pacientes obesos y no obesos con un fenotipo inflamatorio. Se ha demostrado que el metabolismo de los lípidos, la glucosa y la insulina mejora en sujetos hipertensos con sobrepeso mediante el tratamiento con ácidos grasos omega-3. También se ha demostrado que los ácidos grasos omega-3 (EPA/DHA) disminuyen los triglicéridos y reducen el riesgo de muerte súbita causada por arritmias cardíacas, además de mejorar la mortalidad en pacientes con riesgo de un evento cardiovascular. Los ácidos grasos Omega-3 también se han tomado como suplementos dietéticos como parte de la terapia utilizada para tratar la dislipidemia y las propiedades antiinflamatorias. Una mayor ingesta de ácidos grasos omega-3 reduce los niveles circulantes de TNF-a e IL-6, dos de las citocinas que aumentan notablemente durante los procesos de inflamación (Chapkin et al, Prostaglandins, Leukot Essent Fatty Acids 2009, 81, p. 187 -191; Duda et al, Cardiovasc Res 2009, 84, p. 33-41). Además, se ha demostrado que una mayor ingesta de ácidos grasos omega-3 aumenta los niveles de la citocina antiinflamatoria IL-10 bien caracterizada (Bradley et al, Obesity (Silver Spring) 2008, 16, p. 938-944). Un estudio reciente (Wang et al, Molecular Pharmaceutics 2010,7, p. 2185-2193) ha demostrado que el DHA también puede inducir el gen diana Nrf2 y Nrf2 Hemo-oxigenasa 1 (HO-1) y esta vía podría jugar un papel significativo en la supresión de la inflamación mediada por LPS. Varios estudios ahora han indicado que el DHA podría desempeñar un papel importante en el cáncer (para revisiones, consulte: Gleissman, H. et al Experimental Cell Research 2010, 316, p. 1365-73; Bougnoux, P. et al Progress in Lipid Research 2010, 49, p. 76-86; Spencer, L. et al, Eur. J. Cancer 2009, 45, p.
2077-86; Serini, S. et al Apoptosis 2009, 14, p. 135-152; Browever, Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids 2008, 79, p. 97-99). Por ejemplo, el DHA pudo inducir la inhibición del crecimiento dependiente de p53 de los carcinomas de colon y pulmón transformados (Kikawa et al, J. of Cancer Science and Therapy, 2011, 3, p.
1-4). También se ha demostrado que el DHA previene la metástasis de células de cáncer de mama al hueso en un modelo de ratón que utiliza células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 (Mandal et al, Biochem. & Biophys. Res. Communications 2010, 402, p. 602-607).
El estrés oxidativo crónico y la inflamación ahora se han relacionado con el desarrollo y la progresión de una serie de enfermedades debilitantes. Algunas de estas enfermedades incluyen insuficiencia renal, insuficiencia cardíaca, aterosclerosis, osteoporosis, cáncer, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfermedad de Parkinson y enfermedad de Alzheimer. La activación de la vía Nrf2 para resolver este estrés oxidativo crónico y la inflamación parece ser un nuevo enfoque terapéutico particularmente prometedor (para una revisión, consulte Gozzelino, R. et al. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2010, 50, p. 323 -54). Por ejemplo, ahora se ha demostrado que los activadores de molécula pequeña de Nrf2 son efectivos en el modelo de ratón de nefrotoxicidad inducida por cisplatino (Aleksunes et al, J. Pharmacology & Experimental Therapeutics 2010, 335, p. 2-12), el modelo de ratón transgénico Tg19959 de la enfermedad de Alzheimer (Dumont et al, J. Neurochem. 2009, 109, p. 502-12), el modelo de ratón para EPOC (Sussan, TE et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2009, 106, p. 250 -5), y el modelo de tumor de mama murino 4T1 (Ling, X. et al Cancer Res. 2007, 67, p. 4210-8). Datos recientes sugieren que DHA y EPA pueden mitigar potencialmente la progresión de muchas enfermedades en las cuales el estrés oxidativo representa una causa subyacente común (Gao et al, J. Biological Chem. 2007, 282, número 4, p. 2529-37; Wang et al., Mol. Pharmaceutics 2010, 7, número 6, p. 2185-2193). La forma oxidada de los ácidos grasos omega-3 puede presumiblemente reaccionar directamente con Keap1, un regulador negativo de Nrf2, para inducir la expresión del gen Nrf2.
Hay muchas aminas que se pueden acoplar covalentemente con ácidos grasos omega-3 para producir amidas de ácidos grasos con actividad biológica mejorada. Las amidas de ácido graso descritas en la presente memoria se han diseñado para ser estables en el plasma. Sin embargo, en tejidos diana, las enzimas intracelulares hidrolizarán las amidas de ácidos grasos en los componentes individuales, es decir, el ácido graso omega-3 y el resto amina. En algunas realizaciones, ciertos restos de aminas no muestran necesariamente ninguna actividad biológica significativa. Sin embargo, cuando estas aminas se acoplan a un ácido graso omega-3, las amidas de ácido graso resultantes se pueden administrar a los tejidos diana de manera más eficiente para producir un efecto biológico que no se puede replicar administrando el ácido graso individualmente o en combinación no covalente con la porción de amina. En algunas realizaciones, ciertas aminas "PEGiladas" se usan para formar amidas de ácidos grasos. La "PEGilación" es una técnica común de incorporar cadenas de polietilenglicol (PEG) en una molécula para mejorar su hidrofobicidad y perfil farmacocinético (Veronese et al Drug Discovery Today 2005, 10, p. 1451­ 8). Cuando los ácidos grasos omega-3 se acoplan a una amina "PEGilada", las amidas de ácidos grasos resultantes pueden tener un mejor tiempo circulatorio y un perfil farmacocinético, además de entregarse a los tejidos diana de manera más eficiente que el ácido correspondiente. En algunas realizaciones, el componente de amina en sí mismo muestra una actividad biológica significativa. Cuando estas aminas biológicamente activas se acoplan a un ácido graso omega-3, las amidas de ácido graso resultantes producirán un efecto biológico que no se puede replicar administrando los componentes individuales o una combinación no covalente de los componentes individuales. En algunos casos, la actividad biológica puede ser sinérgica. En otros casos, los efectos secundarios de las aminas biológicamente activas pueden reducirse ya que los componentes individuales de las amidas de ácidos grasos solo se liberan dentro de los tejidos diana por hidrólisis que involucra varias enzimas intracelulares. Ejemplos no limitantes de componentes de amina biológicamente activos son cistamina, cisteamina, glucosamina, dexpramipexol, sapropterina, cisteína N-acilada, pencillamina, trietilentetramina, 4-aminopiridina, fingolimod y pramipexol.
La cisteamina se ha usado ampliamente para tratar la cistinosis nefropática, un trastorno de almacenamiento lisosómico genético huérfano caracterizado por una acumulación masiva de cistina cristalina dentro de las células. Se ha demostrado que el tratamiento de fibroblastos cistinóticos nefropáticos con cisteamina reduce significativamente el exceso de cistina presente en estas células (para una revisión, consulte Gahl et al N. Engl. J. Med. 2002, 347, p. 111-121). También se ha encontrado que la cistamina, la forma disulfuro de la cisteamina, es útil para reducir el nivel de cistina en los fibroblastos cistinóticos nefropáticos (Thoene et al. Proc. Roy. Soc. Med.
1977, 70, Suppl. 3, p. 37-40). Además, se ha encontrado que la cisteamina y la cistamina son neuroprotectoras en el modelo de ratón YAC128 de la enfermedad de Huntington (Van Raamsdonk et al. J. Neurochem. 2005, 95, p.
210-220). Los derivados de amida de ácido graso que consisten en un ácido graso omega-3 que ha sido covalentemente utilizado como cistamina o cisteamina pueden tener un efecto antiinflamatorio y neuroprotector adicional que no puede replicarse administrando los componentes individuales o la combinación de los componentes individuales.
La glucosamina se ha utilizado clínicamente para reducir los síntomas debilitantes de la osteoartritis. En términos de mecanismo de acción, las propiedades antiinflamatorias de la glucosamina pueden atribuirse en parte a la inhibición de la síntesis de prostaglandina E2 (PGE2) a través de la reducción de COX-2 (Kapor et al J. Rheumatology 2012, 39, p.635- 644). Además, el tratamiento con glucosamina también puede regular la expresión génica de la hemo-oxigenasa (HO-1), un mecanismo celular protector importante hacia especies reactivas de oxígeno (Valvasan et al Rheumatology 2008, 47, p. 31-35). Los derivados de ácido graso/amida de glucosamina, creados mediante la unión covalente de un ácido graso omega-3 a la glucosamina a través de un grupo enlazador de amina, pueden tener actividad sinérgica a lo largo de la vía PGE2 y la vía antioxidante Nrf2.
El dexpramipexol es un compuesto soluble en agua de bajo peso molecular que recientemente se ha demostrado que es clínicamente efectivo en el tratamiento de la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) (Cudkowicz et al. Nat. Med.
2011, 17, p. 1652-1657). En un ensayo de fase 2, los pacientes con ELA tratados con Dexpramipexol mostraron una disminución de la progresión de los síntomas relacionada con la dosis, así como un mayor tiempo de supervivencia. Los estudios preliminares sobre el mecanismo de acción parecen indicar que el dexpramipexol puede prevenir la generación mitocondrial de ROS y, por lo tanto, imparte algunos efectos neuroprotectores (Ferrari-Toninelli et al BMC Pharmacology 2010, 10, p. 1-6). Debido a este efecto antioxidante y neuroprotector, un derivado de amida covalente entre un ácido graso omega-3 y el dexpramipexol puede tener un efecto sinérgico que no puede duplicarse administrando los componentes individuales o una combinación de los componentes.
La fenilcetonuria (PKU) es un trastorno metabólico que resulta de la falta de enzimas que se necesitan para convertir la fenilalanina en tirosina. Si no se trata, la acumulación excesiva de fenilalanina puede provocar retraso mental, impedimentos del habla, convulsiones y anomalías de comportamiento. Los niños con PKU a menudo necesitan suplementos con DHA para la función cognitiva y el desarrollo. En pacientes con PKU, se ha demostrado que el tratamiento con sapropterina es efectivo para reducir el nivel de fenilalanina en la sangre. Una sapropterina amida de ácido graso puede permitir un suministro más efectivo de sapropterina al hígado donde se expresa un alto nivel de fenilalanina hidroxilasa. Además, con las ácidos grasos sapropterina amidas, el DHA también se puede administrar de manera más efectiva a las células para mejorar la función cognitiva y el desarrollo.
La 4-aminopiridina y el fingolimod son compuestos que contienen amina que se ha encontrado que son útiles en el tratamiento de la esclerosis múltiple remitente recurrente. Un conjugado de ácido graso omega-3 covalente de 4-aminopiridina o fingolimod tendrá efectos antiinflamatorios y neuroprotectores adicionales que no se pueden replicar administrando los componentes individuales o la combinación de los componentes. La cisteína N-acilada, la tiopronina y la penicilamina son algunos compuestos que contienen tiol que se han utilizado clínicamente para tratar la enfermedad de Wilson, la cistinuria y para diluir el moco espeso presente en pacientes con fibrosis quística. Los derivados de amida de ácido graso que contienen estos compuestos de tiol permitirán una mejor selección de tejidos como diana y reducirán los efectos secundarios.
El documento de patente US 2011/082210 A1 divulga derivados de fibrato de ácido graso y su uso en el tratamiento de enfermedades metabólicas. El documento de patente US 2011/172240 A1 divulga derivados de fumarato de ácido graso y su uso en el tratamiento del cáncer, trastornos metabólicos y trastornos neurodegenerativos. McCaughan et al. (Bioorganic and Medical Chemistry Letters 2008, 18(5):1716-1719) divulga ((((carboxamido)etil)disulfanil)etil)carboxamidas para su uso en el tratamiento de la cistinosis nefropática.
Sumario de la invención
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas.
La invención se basa en parte en el descubrimiento de amidas de ácidos grasos y sus efectos demostrados para
lograr un tratamiento mejorado que no puede lograrse administrando los componentes individuales (es decir, ácido
graso y amina) o en combinación no covalente. Las amidas de ácidos grasos y las composiciones que las contienen
son útiles en el tratamiento y prevención de enfermedades y trastornos asociados con la inflamación. Por ejemplo,
las amidas de ácido graso descritas en la presente memoria descriptiva son útiles en el tratamiento de
enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide, psoriasis, lupus eritematoso sistémico, enfermedades
inflamatorias del intestino (incluyendo colitis y enfermedad de Crohn), enfermedades respiratorias como asma,
fibrosis quística, EPOC y enfermedades neurodegenerativas como la esclerosis múltiple, la enfermedad de
Huntington, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, la esclerosis
lateral amiotrófica (ELA) y la distrofia muscular.
En un aspecto, se describen compuestos de Fórmula I:
Figure imgf000004_0001
Fórmula I
y sales, enantiómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos;
en la que
Z es
Figure imgf000004_0002
cada r es independientemente 2, 3 o 7;
cada s es independientemente 3, 5 o 6;
cada t es independientemente 0 o 1;
cada v es independientemente 1, 2 o 6;
R1 y R2 son independientemente -H, -D, alquilo -C1-C4 , -halógeno, -OH, -C(O) alquilo C1-C4 , -O-arilo, -O-bencilo, -OC(O) alquilo C1-C4 , alqueno -C2-C3 , alquino -C2-C3 , -C(O) alquilo C1-C4, -NH2 , -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2, -NH(C(O) alquilo C1-C3), -N(C(O) alquilo C1-C3)2, -SH, -S(alquilo C1-C3 ), -S(O) alquilo C1-C3 , -S(O)2 a C1-C3;
R3 es H; y
R4 se selecciona de:
Figure imgf000004_0003
y
R es alquilo -C1-C6 lineal o ramificado.
En otro aspecto, se describen los compuestos
Figure imgf000005_0001
En la Fórmula I, uno cualquiera o más de H pueden estar sustituidos con un deuterio.
En la presente memoria también se describen compuestos de la invención para su uso en procedimientos de tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias o enfermedades neurodegenerativas mediante la administración a un paciente que lo necesita de una cantidad eficaz de un compuesto de la invención.
La invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de una amida de ácido graso y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones son útiles para tratar o prevenir una enfermedad autoinmune, enfermedad respiratoria o enfermedades neurodegenerativas. La invención incluye una amida de ácido graso proporcionada como una sal, enantiómero, estereoisómero o mezclas de los mismos farmacéuticamente aceptables.
Los detalles de la invención se exponen en la descripción adjunta a continuación. Aunque los procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria se pueden usar en la práctica o prueba de la presente invención, ahora se describen procedimientos y materiales ilustrativos. Otras características, objetos y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción y de las reivindicaciones. A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece la presente invención.
Descripción detallada de la invención
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas.
Los trastornos metabólicos son una amplia variedad de trastornos médicos que interfieren con el metabolismo de un sujeto. El metabolismo es el proceso que utiliza el cuerpo de un sujeto para transformar los alimentos en energía. El metabolismo en un sujeto con un trastorno metabólico se ve afectado de alguna manera. Las enfermedades autoinmunes surgen de una respuesta inmune hiperactiva del cuerpo contra los tejidos normalmente presentes en el cuerpo. Las enfermedades neurodegenerativas resultan del deterioro de las neuronas o de las vainas de mielina, lo que eventualmente conduciría a una variedad de disfunciones relacionadas con el SNC. Las amidas de ácidos grasos poseen la capacidad de tratar o prevenir enfermedades autoinmunes, respiratorias o neurodegenerativas.
Definiciones
Las siguientes definiciones se usan en relación con las amidas de ácidos grasos:
El término "y/o" se usa en la presente memoria para significar "y" u "o" a menos que se indique lo contrario.
A menos que se defina específicamente lo contrario, el término "arilo" se refiere a grupos de hidrocarburos aromáticos cíclicos que tienen 1 a 2 anillos aromáticos, que incluyen grupos monocíclicos o bicíclicos tales como fenilo, bifenilo o naftilo. Cuando contiene dos anillos aromáticos (bicíclicos, etc.), los anillos aromáticos del grupo arilo pueden unirse en un solo punto (por ejemplo, bifenilo) o fusionarse (por ejemplo, naftilo). El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, por ejemplo, 1 a 5 sustituyentes, en cualquier punto de unión. Los sustituyentes pueden estar ellos mismos opcionalmente sustituidos. Se entiende que cualquiera de los hidrógenos sustituibles en un arilo puede estar sustituido con halógeno, alquilo C1-C3 , hidroxilo, alcoxi y grupos ciano.
"Alquilo C1-C3" se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene 1-3 átomos de carbono. Los ejemplos de un grupo alquilo C1-C3 incluyen metilo, etilo, propilo e isopropilo.
"Alquilo C1-C4" se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene 1-4 átomos de carbono. Los ejemplos de un grupo alquilo C1-C4 incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo y ferc-butilo.
"Alquilo C1-C5" se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene 1-5 átomos de carbono. Los ejemplos de un grupo alquilo C1-C5 incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo y tere-butilo, isopentilo y neopentilo.
"Alquilo C1-C6" se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene 1-6 átomos de carbono. Los ejemplos de un grupo alquilo C1-C6 incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, isopentilo y neopentilo. Se entiende que cualquiera de los hidrógenos sustituibles en un alquilo C1-C6 puede estar sustituido con grupos halógeno, hidroxilo, alcoxi y ciano.
El término "cicloalquilo" se refiere a un hidrocarburo cíclico que contiene 3-6 átomos de carbono. Los ejemplos de un grupo cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Se entiende que cualquiera de los hidrógenos sustituibles en un cicloalquilo puede estar sustituido con halógeno, alquilo C1-C3 , hidroxilo, alcoxi y grupos ciano.
El término "heterociclo", como se usa en la presente memoria descriptiva, se refiere a un hidrocarburo cíclico que contiene 3-6 átomos en el que al menos uno de los átomos es un O, N o S. Los ejemplos de heterociclos incluyen, aziridina, oxirano, tiirano, azetidina, oxetano, tietano, pirrolidina, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, piperidina, tetrahidropirano, tiano, imidazolidina, oxazolidina, tiazolidina, dioxolano, ditiolano, piperazina, oxazina, ditiano y dioxano. Se entiende que cualquiera de los hidrógenos sustituibles en un heterociclo puede estar sustituido con halógeno, alquilo C1-C3 , hidroxilo, alcoxi y grupos ciano.
El término "heteroarilo" como se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a una estructura de anillo monocíclico o bicíclico que tiene de 5 a 12 átomos en el anillo en el que uno o más de los átomos del anillo es un heteroátomo, por ejemplo, N, O o S y en el que uno o más anillos de la estructura del anillo bicíclico es aromático. Algunos ejemplos de heteroarilo son piridilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, indolilo, tetrazolilo, benzofurilo, xantenos y dihidroindol. Se entiende que cualquiera de los hidrógenos sustituibles en un heteroarilo puede estar sustituido con halógeno, alquilo C1-C3 , hidroxilo, alcoxi y grupos ciano.
La expresión "cualquiera de las cadenas laterales de los aminoácidos de origen natural" como se usa en la presente memoria descriptiva significa una cadena lateral de cualquiera de los siguientes aminoácidos: Isoleucina, Alanina, Leucina, Asparagina, Lisina, Aspartato, Metionina, Cisteína, Fenilalanina, Glutamato, Treonina, Glutamina, Triptófano, Glicina, Valina, Prolina, Arginina, Serina, Histidina y Tirosina.
El término "ácido graso" como se usa en la presente memoria descriptiva significa un ácido graso omega-3 y ácidos grasos que se metabolizan in vivo a ácidos grasos omega-3. Ejemplos de ácidos grasos son ácido aii-cis-7,10,13-hexadecatrienoico, ácido a-linolénico (ALA o ácido aii-cis-9,12,15-octadecatrienoico), ácido estearidónico (STD o ácido aii-cis-6,9,12,15-octadecatetraenoico), ácido eicosatrienoico (ETE o ácido aii-cis-11,14,17-eicosatrienoico), ácido eicosatetraenoico (ETA o ácido aii-cis-8,11,14,17-eicosatetraenoico), ácido eicosapentaenoico (EPA o ácido aii-cis-5,8,11,14,17-eicosapentaenoico), ácido docosapentaenoico (DPA, ácido clupanodónico o ácido aii-cis-7,10,13,16,19-docosapentaenoico), ácido docosahexaenoico (DHA o ácido aii-cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico), ácido tetracosapentaenoico (ácido aii-cis-9,12,15,18,21-docosahexaenoico) o ácido tetracosahexaenoico (ácido nisínico o ácido aii-cis-6,9,12,15,18,21-tetracosenoico).
Un "sujeto" es un mamífero, por ejemplo, un humano, un ratón, una rata, un conejillo de indias, un perro, un gato, un caballo, una vaca, un cerdo o un primate no humano, como un mono, chimpancé, babuino o rhesus, y los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente en la presente memoria descriptiva.
La invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de una amida de ácido graso y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención incluye una amida de ácido graso proporcionada como una sal, enantiómeros, estereoisómeros farmacéuticamente aceptables o mezclas de los mismos.
Las "sales farmacéuticamente aceptables" representativas incluyen, por ejemplo, sales solubles e insolubles en agua, tales como el acetato, amsonato (4,4-diaminostilbeno-2, 2-disulfonato), bencenosulfonato, benzonato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, butirato, calcio, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, clavulariado, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fiunarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexafluorofosfato, hidrobromhidrato de bromhidrato de hidroxibromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, magnesio, malato, maleato, mandelato, mesilato, bromuro de metilo, nitrato de metilo, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amonio de W-metilglucamina, 3-hidroxi-2naftoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato (1,1-metano-bis-2-hidroxi-3-naftoato, einbonato), pantotenato, fosfato/difosfato, picrato, poligalacturonato, propionato, p-toluenosulfonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, sulfosalicilato, suramato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro y sales de valerato.
El término "enfermedad metabólica" como se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a trastornos, enfermedades y síndromes que implican dislipidemia, y los términos trastorno metabólico, enfermedad metabólica y síndrome metabólico se usan indistintamente en la presente memoria descriptiva.
Una "cantidad eficaz" cuando se usa en relación con una amida de ácido graso es una cantidad eficaz para tratar o prevenir una enfermedad metabólica.
El término "vehículo", como se usa en la presente memoria, abarca vehículos, excipientes y diluyentes y significa un material, composición o vehículo, tal como una carga líquida o sólida, diluyente, excipiente, solvente o material de encapsulación, involucrado en transportar o transportar un agente farmacéutico de un órgano, o parte del cuerpo, a otro órgano, o parte del cuerpo.
El término "tratar', con respecto a un sujeto, se refiere a mejorar al menos un síntoma del trastorno del sujeto. El tratamiento puede ser curar, mejorar o al menos mejorar parcialmente el trastorno.
El término "trastorno" se usa en la presente memoria para significar, y se usa indistintamente con los términos enfermedad, afección o enfermedad, a menos que se indique lo contrario.
El término "administrar", "administrar" o "administración" como se usa en la presente memoria se refiere a administrar directamente un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o una composición a un sujeto, o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o composición para el sujeto, que puede formar una cantidad equivalente de compuesto activo dentro del cuerpo del sujeto.
Las siguientes abreviaturas se usan en la presente memoria descriptiva y tienen las definiciones indicadas: Boc y BOC son ferc-butoxicarbonilo, Boc2Ü es dicarbonato de di-ferc-butilo, CDI es 1,1'-carbonildiimidazol, DCC es N,N'-diciclohexilcarbodiimida, DIEA es N,N-diisopropiletilamina, DMAP es 4-dimetilaminopiridina, DOSS es dioctil sulfosuccinato de sodio, EDC y EDCI son clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida, EtOAc es acetato de etilo, cada hora, HATU es 2-(7-aza-1H benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-hexafluorofosfato de tetrametiluronio, HPMC es hidroxipropilmetilcelulosa, la oxona es peroximonosulfato de potasio, Pd/C es paladio sobre carbono, TFA es ácido trifluoroacético, TGPS es tocoferol propilenglicol succinato, THF es tetrahidrofurano y TNF es factor de necrosis tumoral.
Compuestos
Por consiguiente, en un aspecto, una amida de ácido graso de acuerdo con la Fórmula I es.
En algunas realizaciones, los ácidos grasos se seleccionan del grupo que consiste en ácido all-cis-7,10,13-hexadecatrienoico, ácido a-linolénico, ácido estearidónico, ácido eicosatrienoico, ácido eicosatetraenoico, ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico, ácido docosahexaenoico (DHA), ácido tetracosapentaenoico, ácido tetracosahexaenoico y ácido lipoico. En otras realizaciones, el ácido graso se selecciona de ácido eicosapentaenoico, ácido docosahexaenoico y ácido lipoico. En otras realizaciones, el ácido graso se selecciona de ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexaenoico. En algunas realizaciones, la hidrólisis es enzimática. En otro aspecto, la presente invención proporciona amidas de ácidos grasos de acuerdo con la Fórmula I:
Figure imgf000007_0001
Fórmula I
y sales, enantiómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de las mismas;
en la que m, e, r, s, t, v, z, R1, R2 , R3 , R4 , son como se definieron anteriormente para la Fórmula I,
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000007_0002
y r es 2.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000008_0001
y r es 3.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000008_0002
y r es 7.
En otras realizaciones, Z es
Figure imgf000008_0003
y s es 3.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000008_0004
y s es 5.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000008_0005
y s es 6.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0001
y v es 1.
En otras realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0002
y v es 2.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0003
y v es 6.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0004
y s es 3.
En algunas realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0005
y s es 5.
En otras realizaciones, Z es
Figure imgf000009_0006
y s es 6.
En algunas realizaciones, r es 2 y s es 6.
En algunas realizaciones, r es 3 y s es 5.
En algunas realizaciones, t es 1.
En algunas realizaciones, R3 es H y R4 es
Figure imgf000010_0001
En algunas realizaciones, R3 es H y R4 es
En algunas realizaciones,
Figure imgf000010_0002
Figure imgf000010_0003
En algunas realizaciones, R3 es H y R4 es
Figure imgf000010_0004
En la Fórmula I, uno cualquiera o más de H pueden estar sustituidos con un deuterio.
Se divulgan además los siguientes compuestos:
Figure imgf000010_0005
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-formamidoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-1);
Figure imgf000010_0006
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-2);
Figure imgf000010_0007
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-(2,3-dihidroxipropanamido)etil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-3);
Figure imgf000010_0008
Ácido 4-((2-((2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-4 oxobutanoico (I-4);
Figure imgf000011_0001
Acido 5-((2-((2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-5-oxopentanoico (I-5);
Figure imgf000011_0002
Ácido (2R,3R)-4-((2-((2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-2,3-dihidroxi-4-oxobutanoico (I-6);
Figure imgf000011_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroxihexanamido)etil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-7);
Figure imgf000011_0004
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-formamidoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-8);
Figure imgf000011_0005
(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-9);
Figure imgf000011_0006
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-(2,3-dihidroxipropanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-10);
Figure imgf000011_0007
Ácido 4-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-4-oxobutanoico (I-
Figure imgf000012_0001
Ácido 5-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-5-oxopentanoico (I-12);
Figure imgf000012_0002
Ácido (2R,3R)-2,3-dihidroxi-4-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)amino)-4-oxobutanoico (I-13);
Figure imgf000012_0003
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroxihexanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-14);
Figure imgf000012_0004
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-((S)-2-aminopropanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-15);
Figure imgf000012_0005
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-16);
Figure imgf000012_0006
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-17);
Figure imgf000012_0007
N-(2-((2-((5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)benzamida (I-18);
Figure imgf000013_0001
N-(2-((2-((5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)tiazole-2-carboxamida (I-19);
Figure imgf000013_0002
etil (2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)etil)disulfanil)etil)carbamate (I-20);
Figure imgf000013_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-21);
Figure imgf000013_0004
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-22);
Figure imgf000013_0005
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-oxo-2-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-23);
Figure imgf000013_0006
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-24);
Figure imgf000013_0007
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-3-metil-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)butan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-25);
Figure imgf000014_0001
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-4-metil-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)pentan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-26);
Figure imgf000014_0002
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(3-oxo-3-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-27);
Figure imgf000014_0003
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-oxo-2-(((R)-6-(propilammo)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-28);
Figure imgf000014_0004
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((S)-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-29);
Figure imgf000014_0005
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((S)-3-metil-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)butan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-30);
Figure imgf000015_0001
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((S)-4-metil-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)pentan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-31);
Figure imgf000015_0002
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(3-oxo-3-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-32);
Figure imgf000015_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((R)-2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)-N-propildocosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-33);
Figure imgf000015_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-(((R)-2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)amino)-2-oxoetil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-34);
Figure imgf000015_0005
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-((S)-5-((5Z, 8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-6-oxo-6-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-35);
Figure imgf000016_0001
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-36);
Figure imgf000016_0002
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-37);
Figure imgf000016_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-2-oxoetil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-38);
Figure imgf000016_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((2S)-1-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-1-oxopropan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-39);
Figure imgf000016_0005
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((2S)-1-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-40);
Figure imgf000017_0001
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((2S)-1-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il)docosa-4,7,l0,13,16,19-hexanamida (I-41);
Figure imgf000017_0002
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((2S)-1-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-42);
Figure imgf000017_0003
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((2S)-1-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-43);
Figure imgf000017_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((5S)-6-(((6R)-6-((1R,2S)-1,2-dihidroxipropil)-4-oxo-4,4a,5,6,7,8-hexahidropteridin-2-il)amino)-5-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-6-oxohexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-44);
Figure imgf000017_0005
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-oxo-2-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)etil)docosa-4,7,10,l3,16,19-hexanamida (I-45);
Figure imgf000018_0001
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(3-oxo-3-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)propil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-46);
Figure imgf000018_0002
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)propan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-47);
Figure imgf000018_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-3-metil-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)butan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-48);
Figure imgf000018_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-4-metil-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)pentan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-49);
Figure imgf000019_0001
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-((S)-5-((5Z, 8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-50);
Figure imgf000019_0002
(4Z,7Z, 10Z,13Z, 16Z,19Z)-N-(2-(2-metoxietoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-51);
Figure imgf000019_0003
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-52);
Figure imgf000019_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-53);
Figure imgf000019_0005
(4Z,7Z, 10Z, 13Z,16Z, 19Z)-N-(2-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-54);
Figure imgf000019_0006
(4Z,7Z, 10Z, 13Z,16Z, 19Z)-N-(2-(2-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-55);
Figure imgf000019_0007
(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-metoxietoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-56);
Figure imgf000019_0008
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-57);
Figure imgf000020_0001
(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-58);
Figure imgf000020_0002
(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-59);
Figure imgf000020_0003
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-60).
Figure imgf000020_0004
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-((S)-1 -oxo-1 -(piridin-4-ilamino)propan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-61);
Figure imgf000020_0005
(4Z,7Z, 10Z, 13Z,16Z, 19Z)-N-((S)-6-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-1 -oxo-1 -(piridin-4-ilamino)hexan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-62);
Figure imgf000020_0006
(4Z,7Z, 10Z, 13Z,16Z, 19Z)-N-((S)-5-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-6-oxo-6-(piridin-4-ilamino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-63);
Figure imgf000021_0001
(4Z,4'Z, 7Z,7'Z, 10Z, 10'Z, 13Z, 13'Z, 16Z, 16'Z, 19Z, 19,Z)-N,N,-((S)-6-oxo-6-(piridin-4-ilamino)hexano-1,5-diil)bis(docosa-4,7,10,l3,16,19-hexanamida) (I-64);
Figure imgf000021_0002
(5Z,5'Z,8Z,8'Z,11Z,11'Z,14Z,14'Z,17Z,17'Z)-N,N'-((S)-6-oxo-6-(piridin-4-ilamino)hexano-1,5-diil)bis(icosa-5,8,11,14,17-pentanamida) (I-65);
Figure imgf000021_0003
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-(2-mercaptoetil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-66);
Figure imgf000021_0004
(5Z,8Z, 11Z,14Z,17Z)-N-(2-mercaptoetil)icosa-5,8,11,14,17-pentanamida (I-67)
Figure imgf000021_0005
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-((S)-1 -((2-mercaptoetil)amino)-1-oxopropan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-68);
Figure imgf000021_0006
(4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-(2-((R)-2-acetamido-3-mercaptopropanamido)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-69);
Figure imgf000022_0001
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)butan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-74);
Figure imgf000023_0001
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)butan-2-il)amino)-2-oxoetil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-75);
Figure imgf000023_0002
(4Z,4'Z,7Z,7'Z,10Z,10'Z,13Z,13'Z,16Z,16'Z,19Z,19'Z)-N,N'-((S)-6-((1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)butan-2-il)amino)-6-oxohexano-1,5-diil)bis(docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida) (I-76);
Figure imgf000023_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-1-((1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)utan-2-il)amino)-6-((5Z, 8Z, 11 Z,14Z, 17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-1 -oxohexan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-77);
Figure imgf000024_0001
(5Z,5'Z,8Z,8'Z,11Z,11'Z,14Z,14'Z,17Z,17'Z)-N,N'-((S)-6-((1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)butan-2-il)amino)-6-oxohexano-1,5-diil)bis(icosa-5,8,11,14,17-pentanamida) (I-78);
Figure imgf000024_0002
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-6-((1-hidroxi-2-(hidroximetil)-4-(4-octilfenil)butan-2-il)amino)-5-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentanamido)-6-oxohexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-79);
Figure imgf000024_0003
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-((2-am¡noet¡l)amino)et¡l)am¡no)et¡l)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanam¡da (I-80);
Figure imgf000024_0004
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-1-((2-((2-((2-aminoetil)amino)etil)amino)etil)amino)-1-oxopropan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida (I-81).
Figure imgf000025_0001
(4Z,4'Z, 7Z,7'Z, 10Z, 10'Z, 13Z, 13Z, 16Z,16'Z, 19Z, 19'Z)-N,N'-((S)-6-oxo-6-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)hexano-1,5-diil)bis(docosa-4,7,10,13,l6,19-hexanamida) (I-82)
Procedimientos de uso de amidas de ácidos grasos
En la invención también se proporciona un compuesto de la invención para su uso en un procedimiento para inhibir, prevenir o tratar la inflamación o una enfermedad inflamatoria en un sujeto, seleccionándose la enfermedad inflamatoria de una enfermedad autoinmune, una enfermedad respiratoria inflamatoria, o una enfermedad neurodegenerativa. Los ejemplos de tales enfermedades incluyen, pero no se limitan a: artritis reumatoide, asma, síndrome de dificultad respiratoria del adulto, enfermedad obstructiva crónica de las vías respiratorias y fibrosis quística; psoriasis, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica y encefalitis viral o autoinmune.
En algunas realizaciones, al sujeto se le administra una cantidad eficaz de una amida de ácidos grasos.
Las amidas de ácidos grasos se pueden administrar cada una en cantidades suficientes para tratar o prevenir una enfermedad metabólica o prevenir el desarrollo de la misma en sujetos.
La administración de las amidas de ácidos grasos se puede lograr mediante cualquier modo de administración para agentes terapéuticos. Estos modos incluyen la administración sistémica o local, como los modos de administración oral, nasal, parenteral, transdérmica, subcutánea, vaginal, bucal, rectal o tópica.
Dependiendo del modo de administración previsto, las composiciones pueden estar en forma sólida, semisólida o líquida, tal como, por ejemplo, inyectables, comprimidos, supositorios, píldoras, cápsulas de liberación prolongada, elixires, tinturas, emulsiones., jarabes, polvos, líquidos, suspensiones o similares, a veces en dosis unitarias y consistentes con las prácticas farmacéuticas convencionales. Del mismo modo, también se pueden administrar en forma intravenosa (tanto en bolo como en infusión), intraperitoneal, subcutánea o intramuscular, todos utilizando formas bien conocidas por los expertos en las técnicas farmacéuticas.
Las composiciones farmacéuticas ilustrativas son comprimidos y cápsulas de gelatina que comprenden una amida de ácidos grasos y un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como: a) un diluyente, por ejemplo, agua purificada, aceites de triglicéridos, tales como aceite vegetal hidrogenado o parcialmente hidrogenado, o mezclas de los mismos, aceite de maíz, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de cártamo, aceites de pescado, como EPA o DHA, o sus ésteres o triglicéridos o mezclas de los mismos, ácidos grasos omega-3 o derivados de los mismos, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa, sodio, sacarina, glucosa y/o glicina; b) un lubricante, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio, oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y/o polietilenglicol; para comprimidos también; c) un aglutinante, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, carbonato de magnesio, azúcares naturales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas como acacia, tragacanto o sodio alginato, ceras y/o polivinilpirrolidona, si se desea; d) un desintegrante, por ejemplo, almidones, agar, metilcelulosa, bentonita, goma de xantano, ácido algínico o su sal de sodio, o mezclas efervescentes; e) absorbente, colorante, saborizante y edulcorante; f) un agente emulsionante o dispersante, como Tween 80, Labrasol, HPMC, DOSS, caproyl 909, labrafac, labrafil, peceol, transcutol, capmul m Cm , capmul PG-12, captex 355, gelucire, vitamina E TGPS u otro emulsionante aceptable; y/o g) un agente que mejora la absorción del compuesto tal como ciclodextrina, hidroxipropilciclodextrina, PEG400, PEG200.
Las composiciones líquidas, particularmente inyectables, pueden prepararse, por ejemplo, mediante disolución, dispersión. Por ejemplo, la amida de ácidos grasos se disuelve o se mezcla con un solvente farmacéuticamente aceptable tal como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, etanol y similares, para formar así una solución o suspensión isotónica inyectable. Las proteínas como la albúmina, las partículas de quilomicrón o las proteínas del suero se pueden usar para solubilizar las amidas de ácidos grasos.
Las amidas de ácidos grasos también se pueden formular como un supositorio que se puede preparar a partir de emulsiones o suspensiones grasas; usando polialquilenglicoles tales como propilenglicol, como el vehículo.
Las amidas de ácidos grasos también se pueden administrar en forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas se pueden formar a partir de una variedad de fosfolípidos, que contienen colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas. En algunas realizaciones, una película de componentes lipídicos se hidrata con una solución acuosa de fármaco para formar una capa lipídica que encapsula el fármaco, como se describe en la Patente de Estados Unidos N.° 5,262,564.
Las amidas de ácidos grasos también pueden administrarse mediante el uso de anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los que se acoplan las amidas de ácidos grasos. Las amidas de ácidos grasos también se pueden acoplar con polímeros solubles como portadores de fármacos dirigibles. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilapanamidafenol o polietilenoxidopolilisina sustituida con residuos de palmitoilo. Además, los conjugados de amida de ácidos grasos se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, caprolactona de poliepsilon, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y reticulados o copolímeros de bloques anfipáticos de hidrogeles. En una realización, las amidas de ácidos grasos no están unidas covalentemente a un polímero, por ejemplo, un polímero de ácido policarboxílico o un poliacrilato.
La administración inyectable parenteral se usa generalmente para inyecciones e infusiones subcutáneas, intramusculares o intravenosas. Los inyectables pueden prepararse en formas convencionales, ya sea como soluciones o suspensiones líquidas o formas sólidas adecuadas para disolverse en líquido antes de la inyección.
Las composiciones se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos convencionales de mezcla, granulación o revestimiento, respectivamente, y las presentes composiciones farmacéuticas pueden contener de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 80%, de aproximadamente 5% a aproximadamente 60%, o de aproximadamente 1% a aproximadamente el 20% de la amida de ácidos grasos se conjuga en peso o volumen.
El régimen de dosificación que utiliza la amida de ácidos grasos se selecciona de acuerdo con una variedad de factores que incluyen tipo, especie, edad, peso, sexo y condición médica del paciente; la severidad de la afección a ser tratada; la vía de administración; la función renal o hepática del paciente; y el conjugado de amida de ácidos grasos particular empleado. Un médico o veterinario de experiencia ordinaria en la técnica puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz del medicamento requerida para prevenir, contrarrestar o detener el progreso de la afección.
Las cantidades eficaces de la presente invención, cuando se usan para los efectos indicados, varían de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 5,000 mg de las amidas de ácidos grasos por día. Las composiciones para uso in vivo o in vitro pueden contener aproximadamente 20, 50, 75, 100, 150, 250, 500, 750, 1000, 1250, 2500, 3500 o 5000 mg de la amida de ácidos grasos. En una realización, las composiciones están en forma de un comprimido que puede marcarse. Los niveles plasmáticos efectivos de la amida de ácidos grasos pueden variar de aproximadamente 5 ng/ml a 5000 ng/ml por día. Las dosis apropiadas de las amidas de ácidos grasos se pueden determinar como se establece en Goodman, L. S.; Gilman, A. The Pharmacological Basis of Therapeutics, 5a ed.; MacMillan: Nueva York, 1975, pp. 201-226.
Las amidas de ácidos grasos se pueden administrar en una dosis diaria única, o la dosis diaria total se puede administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día. Además, las amidas de ácidos grasos pueden administrarse en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o mediante vías transdérmicas, utilizando aquellas formas de parches cutáneos transdérmicos bien conocidos por los expertos en la técnica. Para administrarse en forma de un sistema de administración transdérmica, la administración de la dosis puede ser continua en lugar de intermitente a lo largo del régimen Otras preparaciones tópicas ilustrativas incluyen cremas, pomadas, lociones, aerosoles y geles, en las que la concentración del conjugado de amida de ácidos grasos varía de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 15%, p/p o p/v.
Terapias de Combinación
Las amidas de ácidos grasos también se pueden administrar con otros agentes terapéuticos tales como agentes reductores del colesterol, fibratos e hipolipidémicos, inhibidores de DPP-IV como agentes antidiabéticos, agentes antidiabéticos, agentes antiepilépticos, agentes antiglaucoma, agentes antihipertensivos, agentes antiinflamatorios, inhibidores de TNF-a, agentes antidepresivos, agentes anticancerígenos, agentes inmunosupresores, agentes para tratar la osteoporosis y agentes para tratar la esclerosis múltiple. En algunas realizaciones, la amida de ácidos grasos se puede administrar conjuntamente con el otro agente terapéutico. En algunas realizaciones, la amida de ácidos grasos se puede administrar antes que el otro agente terapéutico. En algunas realizaciones, la amida de ácidos grasos se puede administrar después del otro agente terapéutico.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente reductor del colesterol. Ejemplos de agentes reductores del colesterol son atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina, ezetimiba y la combinación de ezetimiba/simvastatina (Vytorin®).
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente fibrato o hipolipidémico. Los ejemplos de fibratos o agentes hipolipidémicos son acifran, acipimox, beclobrato, bezafibrato, binifibrato, ciprofibrato, clofibrato, colesevelam, gemfibrozil, fenofibrato, melinamida, niacina, y ronafibrato.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un inhibidor de DPP-IV como agente antidiabético. Ejemplos de inhibidores de DPP-IV como agentes antidiabéticos son sitagliptina, saxagliptina, vildagliptina, linagliptina, dutogliptina, gemigliptina y alogliptina.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antidiabético. Ejemplos de agentes antidiabéticos son acarbosa, epalrestat, exenatida, glimepirida, liraglutida, metformina, miglitol, mitiglinida, nateglinida, pioglitazona, pramlintida, repaglinida, rosiglitazona, tolrestato, troglitazona y voglibosa.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antiepiléptico. Los ejemplos de agentes antiepilépticos incluyen gabapentina, pregabalina.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antiglaucoma. Los ejemplos de agentes antiglaucoma incluyen apraclonidina, befunolol, bimatroprost, brimonidina, brinzolamida, dapiprazol, dorzolamida, latanoprost, levobunolol, tafluprost, travoprost y éster isopropílico de unoprostona.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antihipertensivo. Los ejemplos de agentes antihipertensivos incluyen alacepril, alfuzosina, aliskiren, besilato de amlodipina, amosulalol, aranidipina, arotinolol HCl, azelnidipina, clorhidrato de bamidipina, clorhidrato de benazepril, clorhidrato de benidipina, betaxolo1HCl, bevantolol HCl, fumarato de bisoprolol, bopindolol, bosentán, budralazina, bunazosina HCl, candesartán cilexetilo, captopril, carvedilol, celiprolol HCl, cicletanina, cilazapril, cinildipina, clevidipina, delapril, dilevalol, mesilato de doxazosina, efonidipina, maleato de enalapril, enalaprilat, eplerenona, eprosartán, felodipina, mesilato de Fenoldopam, fosinopril sódico, sulfato de guanadrel, imidapril HCl, irbesartán, isradipina, ketanserina, lacidipino, lercanidipino, lisinopril, losartán, clorhidrato de manidipina, clorhidrato de mebefradil, moxonidina, nebivolol, nilvadipina, nipradilol, nisoldipina, olmesartán medoxomilo, perindopril, pinacidil, quinapril, ramipril, rilmedidina, espirapril HCl, telmisartán, temocarpil, terazosina HCl, tertatolol HCl, tiamenidina HCl, clorhidrato de tilisolol, trandolapril, treprostinil sódico, trimazosin HCl, valsartán, y zofenopril cálcico.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antiinflamatorio. Ejemplos de agentes antiinflamatorios incluyen celecoxib, rofecoxib, ibuprofeno, naproxeno, indometacina, ácido salicílico, salsalato, ácido 5-aminosalicílico, dimetilfumarato, fumarato de monometilo, metotrexato, predisona, prednisolona, abatecept, aceclofenaco, AF-2259, alefacept, alefacept sódico, ampiroxicam, amtolmetin guacil, arformoterol, bambuterol, bardoxolona metilo, butibufeno, cankinumab, ciclesonida, deflazacort, doxofillina, dexibuprofeno, droxicam, etodolac, flunoxaprofeno, propionato de fluticasona, fumarato de fomoterol, golimumab, indacaterol, interferón-gamma, isofezolaco, isoxicam, lobenzarit sódico, lomoxicam, loxoprofeno sódico, lumiracoxib, mabuterol HCl, nabumetona, nepafenac, nimesulida, oxaprozina, bromuro de oxitropio, piroxicam cinamato, rimexolona, sivelestat, tenoxicam, zaltoprofeno, fisalamine y osalazina.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un inhibidor de TNF-a. Los ejemplos de inhibidores de TNF-a incluyen infliximab, adalimumab, certolizumab, golimumab y etanercept.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente antidepresivo. Los ejemplos de agentes antidepresivos incluyen bupropión HCl, citalopram, desvenlafaxina, fluoxetina HCl, maleato de fluvoxamina, metapramina, milnaciprano, mirtazapina, moclobemida, nefazodona, paroxetina, pivagabina, reboxetina, setiptilina, sertralina HCl, tianeptina sódica, toloxatona y venlafaxina.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente anticancerígeno. Ejemplos de agentes anticancerígenos incluyen abarelix, alemtuzumab, alitretinoína, amrubicina HCl, amsacrina, anastrozol, arglabina, azacitidina, belotecán, bevacizumab, bexaroteno, bicalutamida, bisantreno HCl, bortezomib, mesilato de camostato, capecitabina, catumaxomab, cetuximab, cladribina, clofarabina, ocfosfato de citarabina, dasatinib, acetato de degarelix, denileukin diftitox, doxetaxel, doxifluridina, enocitabina, epirubicina HCl, erlotinib, exemestano, fosfato de fludarabina, flutamida, formestano, fotemustina, fulvestrant, geftimib, gemcitabina HCl, gemtuzumab ozogamicina, ibritumomab tiuxetan, idarubicina HCl, mesilato de imatibib, interferón gamma-1a, interleucina-2, imotecán, INCB18424, ixabepilona, lapatinib, lenalidomida, letrazol, lonidamina, mitoxantrona HCl, nelarabina, nedaplatina, nilutamida, nimotuzumab, OCT-43, ofatumumab, oxaliplatino, paclitaxal, panitumumab, pazopanib, pegaspargasa, pemetrexed, pentostatina, pirarrubicina, pralatrexato, raltitrexed, ranimustina, ridaforolimus, SKI-2053R, sobuzoxano, sorafenib, sunitinib, talaporfina sódica, tamibaroteno, tasonermina, temoporfina, temozolomida, temsirolimus, topotecán HCl, toremifeno, tosimomab, trabectedina, valrubicin, vinorelbina, vorinostat y zinostatina estimalamer.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente inmunosupresor. Los ejemplos de agentes inmunosupresores incluyen ciclosporina, everolimus, gusperimus, mizoribina, muromonab-CD3, micofenolato sódico, micofenolato mofeti, pimecrolimus, tacrolimus.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente para tratar la osteoporosis. Los ejemplos de agentes para tratar la osteoporosis incluyen alendronato de sodio, ácido ibandrónico, ácido incadrónico, raloxifeno HCl, risdronato de sodio, ranelato de estroncio.
En algunas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente para tratar la esclerosis múltiple. Los ejemplos de agentes para tratar la esclerosis múltiple incluyen dimetilfumarato, monometilfumarato, fingolimod, teriflunomida, laquinimod, cladribina, interferón beta-1a, betaserón, acetato de glatímero, natalizumab.
Procedimientos de fabricación
Los ejemplos de vías sintéticas útiles para preparar conjugados de ácidos grasos de Fórmula I se exponen en los ejemplos a continuación y se generalizan en los Esquemas 1-6.
Esquema 1
Figure imgf000028_0001
A
en el que r, s, R3 y R4 son como se definieron anteriormente.
Un ácido graso de fórmula general A se puede acoplar directamente con una amina de fórmula general B usando cualquier reactivo de acoplamiento de amida estándar como EDCI, HATU o DCC, en un solvente orgánico como CH2Cl2 o acetonitrilo. Una gran variedad de aminas de fórmula B está disponible comercialmente.
Figure imgf000028_0002
en el que r, s y m son como se definieron anteriormente.
Un ácido graso de fórmula general A se puede acoplar directamente con una amina de fórmula general D usando cualquier reactivo de acoplamiento de amida estándar como EDCI, HATU o DCC, en un solvente orgánico como CH2Cl2 o acetonitrilo. Varias de estas poliéter aminas (en las que m es 1, 2, 3, 4, 5 y 6) están disponibles comercialmente. Para aquellos expertos en la técnica, en lugar de la amina D, las aminas primarias como las que se muestran a continuación (todas disponibles comercialmente) se pueden usar para la misma reacción de acoplamiento de amida:
Figure imgf000028_0003
Esquema 3
Figure imgf000029_0001
en el que e, r y s son como se definieron anteriormente.
La amina F disponible comercialmente puede acoplarse con un aminoácido protegido con BOC de fórmula G usando EDC o HATU para proporcionar una amida intermedia. El grupo protector BOC se puede eliminar mediante tratamiento con ácido como t Fa o HCl para proporcionar compuestos de fórmula genera1H. Esta amina se puede acoplar con un ácido graso de fórmula general A para obtener compuestos de fórmula general I. Para aquellos expertos en la técnica, cualquier otra amina tal como las mostradas en el Esquema 3 se pueden usar para la misma secuencia de reacciones.
Figure imgf000029_0002
en el que r y s son como se definieron anteriormente.
La amina J comercialmente disponible se trata con un reactivo tal como anhídrido BOC para obtener el derivado K protegido con BOC. Una aminación reductora usando propilamina en presencia de triacetoxiborohidruro de sodio o cianoborohidruro de sodio proporciona el compuesto L, una diamina intermedia con protección diferencial. El intermedio L se puede acoplar con un ácido graso de fórmula A en presencia de HATU y una amina terciaria como DIEA o Et3N, seguido de tratamiento con HCl para proporcionar el compuesto M.
Esquema 5
Fmoc
Figure imgf000029_0003
en el que e, r y s son como se definieron anteriormente.
Para aquellos expertos en la técnica, este esquema ilustra el uso del grupo protector diferencial para permitir la reacción de acoplamiento de amida en uno de los dos sitios amino. La amina L protegida con BOC puede tratarse con un reactivo como FMOC-Cl de acuerdo con los procedimientos descritos en los Grupos de protección de Greene en síntesis orgánica, Wiley, 3a edición. El compuesto protegido con Fmoc resultante puede tratarse con ácidos tales como TFA o HCl para proporcionar el compuesto N. El compuesto N puede acoplarse con un ácido graso de fórmula A , seguido de tratamiento con una base tal como morfolina o dietilamina para obtener compuestos de fórmula general O. Para aquellos expertos en la técnica, el compuesto N también puede someterse a la misma secuencia de reacción descrita en el Esquema 3 usando el aminoácido protegido con BOC de fórmula G para obtener finalmente los compuestos de fórmula general P.
Esquema 6
Figure imgf000030_0001
en el que r y s son como se definieron anteriormente.
Para aquellos expertos en la técnica, el Esquema 6 ilustra el uso de grupos protectores para diferenciar una poliamina. El ácido graso de fórmula A se combina con etanolamina para obtener compuestos de fórmula general Q. El grupo alcohol puede oxidarse al aldehido correspondiente usando reactivos tales como dicromato de piridinio o reactivo de Dess-Martin para obtener compuestos de fórmula general R. La amina acilada de fórmula S se puede preparar usando los procedimientos descritos en Andruszkiewicz et al. Synthetic Commun. 2008, 38, 905-913. Los compuestos R y S pueden hacerse reaccionar en condiciones de aminación reductora usando borohidruro de sodio o cianoborohidruro de sodio para obtener compuestos de fórmula general T . El tratamiento de T con un reactivo de fluoruro eliminará selectivamente el grupo protector de sililo y el tratamiento con un ácido como TFA o HCl eliminará el grupo protector BOC restante para proporcionar compuestos de fórmula general U.
Ejemplos
La divulgación se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos.
Los siguientes ejemplos de compuestos sirven para ilustrar realizaciones adicionales de las amidas de ácidos grasos. Los ejemplos que no entran dentro del alcance de las reivindicaciones únicamente se proporcionan con fines ilustrativos.
Ejemplo 1
Efecto de los compuestos de la invención en fibroblastos cistinóticos
La cistinosis nefropática es un trastorno genético de almacenamiento lisosómico huérfano caracterizado por una acumulación masiva de cistina cristalina dentro de las células. Los individuos afectados desarrollan una tubulopatía renal proximal y progresan, si no reciben tratamiento, a insuficiencia renal terminal. Omran et al (Bioorg. Med. Chem. 2011, p. 3492) describieron un conveniente sistema in vitro para evaluar rápidamente compuestos que podrían agotar los niveles de cistina en fibroblastos cultivados. Se sembraron fibroblastos cistinóticos (línea celular GM00008, depósito de células Coriell) en una placa de 6 pocillos y se cultivaron en DMEM/FBS al 15% hasta confluencia. El compuesto de la invención se formuló en etanol al 100% a una concentración de 50 mM; antes de la adición a las células, los fármacos se diluyeron aún más en FBS al 100% y se sonicaron durante una hora. Las células se incubaron con fármaco durante 24 horas, luego se cosecharon mediante tripsinización. Las células se lavaron posteriormente en PBS y se suspendieron en una solución 3:1 de N-etilmaleimida 5,2 mM (Sigma) a ácido sulfosalicílico al 12% (Sigma) para derivatizar la cisteína libre y precipitar la proteína respectivamente. Para lisar las células, las muestras se congelaron a -80 grados Celsius, se descongelaron y se sonicaron dos veces durante 1 minuto. Los lisados se eliminaron de la proteína precipitada por centrifugación y las muestras se procesaron posteriormente para análisis LC-MS/MS.
La cuantificación de proteínas se realizó disolviendo la proteína precipitada en NaOH 0,25 M y Tris 1 M (pH 7,5), y la medición espectrofotométrica usando el procedimiento de Bradford.
El compuesto I-9 se evaluó en este ensayo de fibroblastos cistinóticos. El nivel de cistina en esta línea celular cistinótica se cuantificó por LC-MS/MS. Se observó un agotamiento de la cistina cuando los fibroblastos cistinóticos se trataron con 50 pM de compuesto I-9. El nivel de cistina se expresó como el porcentaje de control (POC). Usando este procedimiento, el compuesto I-9 mostró una reducción del 68% en el nivel de cistina a 50 pM, mientras que el compuesto de control cisteamina mostró una reducción del 45% en el nivel de cistina a 50 pM. El nivel de cistina se determinó de la siguiente manera: a los 50 pl de sobrenadante, se añadió acetonitrilo (400 pl) que contenía 200 ng/ml de patrón interno (cistina deuterada) y la mezcla se sometió a vórtice durante 1 minuto seguido de centrifugación durante 10 minutos. El sobrenadante se transfirió a un vial de LC limpio y se inyectaron 10 pl de la muestra en LC-MS/MS para la medición de la cistina.
Análisis LC-MS
La concentración de cistina se midió por LC-MS/MS. Se inyectaron 10 pl de la muestra en la columna (Luna, HILIC, 150*4.60 mm, 3 p Phenomenex). La cistina y la cistina deuterada se eluyeron de la columna mediante un gradiente gradual de 10% de fase móvil B a los 0 minutos, 10% de B a los 2,5 minutos, 50% de B a los 2,7 minutos y 10% de B a los 3 minutos. La fase móvil A contenía acetonitrilo/agua/acetato de amonio (20 mM) con ácido fórmico al 0,1% y la fase móvil B contenía acetonitrilo/acetato de amonio (20 mM) con ácido fórmico al 0,1%. El eluyente de la columna se inyectó directamente en un quad triple de Agilent, que se mantuvo en modo positivo por electropulverización. Los tiempos de retención para la cistina y el patrón interno (cistina deuterada) fue de 2,25 min. La cistina se monitoreó a través de la transición m/z 241,3-152 con un fragmentador de 75 y la energía de colisión de 7Ev y la cistina deuterada se monitoreó a través de la transición m/z 247,3-124,1 con un fragmentador 126 y una energía de colisión de 9eV. La columna se mantuvo a 25 °C.
Ejemplo 2
Efecto de los compuestos de la invención en un modelo genético de ratón que carece de cistinosina, la proteína defectuosa en la cistinosis nefropática.
La cistinosis nefropática es un trastorno de almacenamiento lisosómico genético huérfano caracterizado por una acumulación masiva de cistina cristalina dentro de las células. La acumulación de cisteína se debe a un transportador de cistina lisosomal defectuoso llamado cistinosina. Recientemente se ha descrito un modelo genético de ratón que carece de cistinosina (Cherqui et al. Molecular and Cellular Biology 2002, 22, p. 7622-7632). Se ha demostrado que los ratones que carecen de cistinosina tienen un aumento sustancial en el nivel de cistina en numerosos tejidos, incluyendo hígado, riñón, bazo, músculo, cerebro y corazón. Se ha demostrado que el tratamiento de ratones que carecen de cistinosina con cisteamina a 200 o 400 mg/kg por vía oral durante 7, 30 o 60 días reduce los niveles de cistina de todos los tejidos analizados, con el mayor efecto observado en el hígado y los riñones, después de 60 días. Los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva pueden evaluarse de manera similar por su capacidad para reducir los niveles de cistina en ciertos tejidos usando este modelo genético de ratón que carece de cistinosina.
Ejemplo 3
Efecto de los compuestos de la invención en el modelo de ratón YAC128 transgénico para la enfermedad de Huntington
Los ratones transgénicos con la enfermedad de Huntington que expresan huntingina humana altamente expandida (YAC128) y sus compañeros de camada de tipo salvaje se pueden usar para evaluar el efecto de los conjugados de ácido bis-graso que contienen cistamina en los niveles de transglutamina. Los ratones YAC de tres meses de edad se tratan con el conjugado deseado durante un período de dos semanas antes de ser sacrificados. Los ratones se asfixian con dióxido de carbono y los cerebros se eliminan inmediatamente, se separan en el cerebro anterior y posterior, se congelan en isopentano sobre hielo seco y se almacenan a -80 °C. Luego, los tejidos se procesan para medir la actividad de transglutaminasa, así como para evaluar la neuropatología estriatal de acuerdo con el procedimiento detallado descrito en Van Raamsdock, J. M. et al, J. Neurochemistry 2005, 95, p. 210-220. Los animales transgénicos que tienen 7 meses de edad también se pueden usar para evaluar las funciones motoras (como el tiempo en rotarod) cuando se administran con los compuestos de la presente invención durante un período de 4 meses.
Ejemplo 4
Efecto de las amidas de ácidos grasos sobre la secreción de ApoB en células HepG2
Las células HepG2 (ATCC) se siembran a 25.000 células por pocilio en placas de 96 pocilios recubiertas de colágeno en medios de crecimiento (DMEM con suero bovino fetal al 10%). Al día siguiente, las amidas de ácidos grasos se complejan con suero fetal bovino deficiente en lipoproteínas a la concentración apropiada. Luego se retira el medio de crecimiento y las células HepG2 se lavan una vez con PBS. El FBS deficiente en lipoproteínas con los conjugados de amida de ácidos grasos complejado se agrega a DMEM para una concentración final del 10%. Cada concentración de amida de ácidos grasos se prueba por triplicado. Las células se incuban durante 16 horas con la amida de ácidos grasos. Luego se agrega Alamar Blue® (Invitrogen) a los medios para determinar la viabilidad celular de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Dos horas después de la adición de Alamar Blue®, el medio se retira y se coloca en una placa negra de 96 pocillos. Luego se lee la placa a 550 nm/590 nm para determinar la viabilidad celular. Los medios se utilizan para determinar las concentraciones de ApoB usando kits ELISA (Mabtech AB). El porcentaje de inhibición de la secreción de ApoB se determina normalizando los datos a los pocillos tratados con vehículo. Para un compuesto dado, también se puede determinar una IC50 (concentración a la cual se inhibe el 50% de la secreción de ApoB) usando un modelo de curva de inhibición de ajuste de 4 parámetros (Graph Pad Prism®).
Ejemplo 5
Efecto de las amidas de ácidos grasos sobre los genes diana SREBP-1c
Las células HepG2 (ATCC) se siembran a 20.000 células por pocillo en placas de 96 pocillos. Después de adherirse durante la noche, se eliminan los medios de crecimiento (FBS al 10% en DMEM) y las células se privan de suero durante 24 horas en DMEM que contiene albúmina de suero bovino libre de ácidos grasos al 1% (BSA, Sigma). Las células se tratan luego con las amidas de ácidos grasos a una concentración final de 50 pM en BSA al 1% o 0,1 de oleato complejado a BSA libre de ácidos grasos en una relación molar de 5:1. Las células se incuban durante 6 horas y luego se lavan con PBS. El ARN se transcribió inversamente usando los reactivos de ADNc de células II de acuerdo con protocolos estándar (descritos en los protocolos de PCR en tiempo real de Applied Biosystem StepOne). La PCR en tiempo real de las transcripciones se puede realizar con ensayos Tagman para los tres genes específicos FASN (ácido graso sintasa), SCD (esteroil CoA desaturasa) y ApoA1 (apolipoproteína A1). En los tres casos, 18S-VIC® se utiliza como control de normalización.
Ejemplo 6
Efecto de las amidas de ácidos grasos en el modelo de rata Zucker fa/fa
Las ratas Zucker macho (HsdHlr:ZUCKER-Lepr~fa) entre 8-10 semanas de edad se compran en Harlan. Las ratas Zucker se mantienen con Teklad Global Rodent Diet (2018S) durante el período de aclimatación y durante la duración del estudio. Las ratas Zucker se pesan y se asignan aleatoriamente a los brazos de tratamiento de acuerdo con el peso corporal y los niveles de TG en plasma (n es 8). Los criterios de inclusión para el estudio incluyen peso corporal > 300 gramos y niveles de TG en plasma> 800 mg/dl. Las ratas se asignan aleatoriamente a los brazos de tratamiento en función de los pesos corporales antes de la dosis (día -1) y los niveles plasmáticos (alimentados) de triglicéridos. La dosificación se inicia el día 1 y continúa hasta el día 5. La dosificación es diaria (qd) por sonda oral (po) para todos los brazos de tratamiento. Los pesos corporales se miden para todas las ratas en los días 1 a 5. En el día 4, se recoge una muestra de sangre (alimentada) de cada rata, se procesa para plasma y se almacena a -80 °C. A las 8 p.m. del día 4, se retiran los alimentos de todas las ratas para iniciar el estado de ayuno. El día 5, las ratas se dosifican a las 8 am de acuerdo con el brazo de tratamiento. Dos horas después (10 a.m.) se extraen dos extracciones de sangre de cada rata y se procesan para plasma. Los niveles de triglicéridos se analizan luego mediante protocolos estándar utilizando kits disponibles comercialmente.
Ejemplo 7
Efecto de las amidas de ácidos grasos en el modelo de dislipidemia del Hámster Dorado Sirio
El hámster dorado sirio (cepa: HsdHan™: AURA, de Harlan Laboratories), de 5 a 6 semanas de edad, con un peso corporal de aproximadamente 80 g, se usa para el estudio. Los hámsteres se mantienen con una dieta alta en grasas D12492 (Research Diets, New Brunswick NJ) durante el período de aclimatación y durante todo el estudio. Los animales recibirán agua potable suplementada con 10% de fructosa (Sigma, suministrada por Catabasis) a partir del día 8 y continuarán durante todo el estudio. Los hámsteres serán aleatorizados a los brazos de tratamiento en función de los pesos corporales previos a la dosis (día -1) y los niveles plasmáticos (alimentados) de triglicéridos (TG). La dosificación se iniciará el día 1 y continuará hasta el día 28. La dosificación será diaria (qd) por sonda oral (po) para todos los brazos de tratamiento. El día 27, los hámsteres estarán en ayunas al comienzo del ciclo oscuro.
Los hámsteres se dosificarán a las 8 am el día 28 de acuerdo con el brazo de tratamiento. Dos horas después (10 a.m.) se recogerá una muestra de sangre de cada hámster, se procesará en plasma y se almacenará a -80 °C. Los niveles de triglicéridos y colesterol HDL se determinarán utilizando protocolos estándar y los kits disponibles comercialmente de Abcam, Cayman o Sigma-Aldrich.
Ejemplo 8
Efectos de los compuestos de la invención sobre los niveles de NF-kB en macrófagos RAW 264.7
Se sembraron células RAW 264.7 que expresaban de forma estable un indicador de luciferasa de impulsión de elemento de respuesta 3x NF-kB en placas de 96 pocilios en medio sin suero (Optimem) 18 horas antes de la aplicación del compuesto. Los compuestos de la invención se prepararon haciendo primero soluciones madre 100 mM en EtOH. Las soluciones madre se diluyeron luego 1:100 en FBS bajo en LPS (Gemini BenchMark 100-106), se mezclaron vigorosamente y se dejaron incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Luego se hicieron diluciones en serie 1:2 en f Bs suplementado con EtOH al 1%, se mezclaron vigorosamente y nuevamente se dejaron incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de agregar a las células informadoras RAW 264.7 (concentraciones finales: 10% de FBS, 100 uM de dilución de compuesto más alta, 0,1% EtOH) para un pretratamiento de 2 horas antes de la estimulación con LPS. Entonces, las células se estimularon con 200 ng/ml de LPS o control de vehículo durante 3 horas en presencia de los compuestos de la invención. Se dejó sin estimular un conjunto de seis vehículos con LPS para medir el piso de ensayo. Se añadió colorante de viabilidad AlamarBlue (Invitrogen) a las células simultáneamente con la administración de LPS (concentración final de AlamarBlue del 10%). Después del período de incubación de 3 horas con LPS, se midió la viabilidad celular leyendo fluorescencia (excitación 550 nm, emisión 595 nm) con un lector de placa Perkin Elmer Victor V. Luego se aspiró el medio celular de cada pocillo. La señal de luciferasa se desarrolló luego mediante la adición del reactivo Britelite Plus (Perkin Elmer). La actividad de luciferasa se midió con el lector de placas Perkin Elmer Victor V. La actividad de NF-kB se expresó como un porcentaje de los pocillos de control del vehículo (estimulados con LPS). Los compuestos se probaron a titulaciones de 6 puntos de dosis por triplicado para determinar los valores de IC50. La Tabla 1 resume los valores de IC50 para varias amidas de ácidos grasos en este ensayo indicador de luciferasa NF-kB. A (-) indica que el compuesto no mostró actividad inhibitoria hasta 200 pM. A (+) indica que el compuesto mostró actividad inhibitoria de menos de 200 pM. A (+ ) indica que el compuesto mostró actividad inhibitoria de menos de 50 pM.
Tabla 1. Resumen de los valores de IC 50 para las amidas de ácidos grasos en el ensayo indicador de luciferasa NF-kB
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Ejemplo 9
Efecto de las amidas de ácidos grasos sobre IL-ip
Se sembraron macrófagos RAW264.7 a una densidad de 100.000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos en DMEM suplementado con FBS al 10% y Penn/estrep. 16 horas después, se aspiró el medio y se reemplazó con 90 pl/pocillo de DMEM sin suero. Las amidas de ácidos grasos se criaron en EtOH al 100% a una concentración de 100 mM y luego se diluyeron 1:100 en FBS al 100% para una solución madre que consistía en un compuesto 1 mM y EtOH al 1%. Estas soluciones madre se diluyeron luego 1:10 en FBS suplementado con EtOH al 1% para generar 100 pm de la amida de ácidos grasos. Luego se añadieron 10 pl a las células RAW246.7 para generar concentraciones finales de 10 pM de la amida de ácidos grasos o 10 pM de cada DHA y MMF, junto con el control solo del vehículo. Los compuestos se dejaron incubar previamente durante 2 horas antes de la estimulación de 100 ng/ml de LPS (se añadieron 10 pl de 1 pg/ml de LPS a cada pocillo). Después de 3 horas de estimulación con LPS, las células se lavaron una vez en 1* PBS, se secaron por aspiración y se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido. Luego se aisló el ARN y se convirtió en ADNc usando el kit de Células a ADNc (Ambion) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Los niveles de transcripción de IL-1p se midieron luego usando conjuntos de ensayo de cebador/sonda Taqman (Applied Biosystems), normalizados a GAPDH usando el procedimiento deltaCt, y los datos expresados en relación con el control solo del vehículo. La Figura 1 resume los datos de expresión del gen IL-1p en el compuesto I-57 (la toxicidad celular se evaluó usando azul alamar como indicador, abreviado en la Figura como AB). Como se muestra en esta figura, tras la dosificación con el compuesto I-57, hubo una disminución en la expresión génica de la citocina inflamatoria IL-1p.
Ejemplo 10
Efecto de las amidas de ácidos grasos sobre el gen diana Hmoxl en macrófagos RAW
Se sembraron macrófagos RAW264.7 a una densidad de 100.000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos en DMEM suplementado con FBS al 10% y Penn/estrep. 16 horas después, se aspiró el medio y se reemplazó con 90 pl/pocillo de DMEM sin suero. Las amidas de ácidos grasos se criaron en EtOH al 100% a una concentración de 100 mM y luego se diluyeron 1:100 en FBS al 100% para una solución madre 20* que consta de compuesto 1 mM y EtOH al 1%. Las soluciones madre de ácido graso 20* de amida se diluyeron 1:2 en FBS suplementado con EtOH al 1% para una solución madre 500 pM 10x. Las soluciones madre 10* se diluyeron en serie 1:2 en FBS suplementado con EtOH al 1% y se añadieron 10 pl de cada dilución a las células RAW246.7 para generar concentraciones finales de 50, 25, 12,5, 6,25, 3,12 y 1,6 pM. Los compuestos se dejaron incubar previamente durante 2 horas antes de la estimulación de 100 ng/ml de LpS (se añaden 10 pl de 1 pg/ml de LPS a cada pocillo). Después de 3 horas de estimulación con LPS, las células se lavaron una vez en 1* PBS, se secaron por aspiración y se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido. Luego se aisló el ARN y se convirtió en ADNc usando el kit de Células a ADNc (Ambion) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Luego se midieron los niveles de transcripción usando kits de ensayo de cebador/sonda a B i Taqman, normalizados a GAPDH usando el procedimiento deltaCt, y los datos expresados en relación con el control solo del vehículo. La Figura 2 resume los datos de Hmox en el compuesto I-57 (la toxicidad celular se evaluó usando azul alamar como indicador, abreviado en la Figura como AB). Como se muestra en esta figura, tras la dosificación con el compuesto I-57, hubo una regulación positiva de la expresión del gen Hmox.
Ejemplo 11
Efecto de los conjugados de amidas de ácidos grasos en la rata diabética por estreptozotocina
Se usan ratas hembra Sprague-Dawley (8 semanas de edad, con un peso promedio de 150 g) para el estudio. La diabetes es inducida por una inyección única en la vena de la cola de estreptozotocina (STZ) en tampón de citrato de sodio 0,1 mol/l, pH 4,5. Luego se confirma la diabetes midiendo los niveles de glucosa en sangre a los dos y tres días después del tratamiento con STZ. Los animales diabéticos se clasifican como aquellos con glucosa en plasma superior a 16 nmol/l. Los animales diabéticos se dividen en el grupo de control del vehículo y el grupo de tratamiento (cada grupo tiene 12 animales). Todos los animales se alojan individualmente con un ciclo oscuro claro de 12 horas cada uno, con animales que tienen libre acceso a la comida y al agua. Para mantener el peso corporal y limitar la hiperglucemia, los animales diabéticos son tratados con 3 UI de insulina ultralente tres veces por semana por la tarde (aproximadamente de 3 a 4 pm). Para mantener el control glucémico a medida que los animales aumentan de peso, la dosis de insulina se incrementa a 5 UI en la semana 15. Los animales se dosifican con el vehículo o la amida de ácidos grasos durante un período de 28 semanas (los ejemplos de vehículos que se pueden usar incluyen combinaciones de solventes como el polietilenglicol y el propilenglicol, lípidos como el monooleato de glicerol y aceite de soja, y tensioactivos como el polisorbato 80 y el cremophor EL). La progresión de la enfermedad renal se puede evaluar mediante mediciones mensuales de la albúmina urinaria y las concentraciones plasmáticas de creatinina. Para las mediciones urinarias, las ratas se alojan en jaulas metabólicas de ratas durante 24 horas. La albúmina urinaria puede cuantificarse mediante un ensayo ELISA competitivo de acuerdo con los protocolos descritos en Degenhardt et al, Kidney International 2002, 61, p. 939-950. Las concentraciones plasmáticas de creatinina se pueden medir mediante el procedimiento de ácido pícrico Jaffé, utilizando el kit estándar de Sigma (Sigma cat # 555-A). Los análisis estadísticos se pueden realizar con SigmaStat para Windows V1.00. Los valores P pueden calcularse mediante un análisis de suma de intervalos de Mann-Whitney no paramétrico. En la semana 28, la dislipidemia también se puede evaluar midiendo los triglicéridos plasmáticos y el colesterol total. Estos lípidos plasmáticos se pueden medir mediante ensayos enzimáticos, colorimétricos, de punto final utilizando kits estandarizados disponibles comercialmente. El colesterol total se puede analizar con el kit Sigma (cat # 352) y los triglicéridos se pueden analizar con el kit Sigma (cat # 37, GOP Grinder).
Ejemplo 12
Efecto de las amidas de ácidos grasos en el modelo de ratón de nefrotoxicidad inducida por cisplatino
Para este estudio, se usan ratones C57BL/6 machos de 10 a 12 semanas de edad de aproximadamente 30 g de peso corporal. Después del período de aclimatación normal, los animales se mantienen con una dieta estándar y el agua está disponible de forma gratuita. Los ratones reciben una inyección intraperitoneal única del vehículo o cisplatino (20 mg/kg, a una concentración de 1 mg/ml en solución salina). Se utilizan diez animales por grupo de tratamiento. Para el grupo de tratamiento farmacológico, comenzando 24 horas antes de la inyección de cisplatino, los animales se dosifican con una amida de ácidos grasos (formulada en combinaciones de solventes como polietilenglicol y propilenglicol, lípidos como monooleato de glicerol y aceite de soja, y tensioactivos como polisorbato 80 y cremophor EL). La dosificación se continúa durante un período de 72 horas. En este punto, los animales se sacrifican y se recolectan sangre y tejidos renales. Se miden nitrógeno ureico en sangre (BUN) y creatinina. Los niveles de TNF-a en suero se pueden determinar usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) disponible en el mercado. Los tejidos se procesan para histología y aislamiento de ARN. La lesión tubular se puede evaluar en secciones teñidas con PAS utilizando una escala semicuantitativa descrita en "G. Ramesh y W. B. Reeves, Kidney International, 2004, 65, p. 490-498".
Compuestos
Los siguientes ejemplos de compuestos no limitantes sirven para ilustrar realizaciones adicionales de las amidas de ácidos grasos.
Ejemplo 13
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I-57):
Figure imgf000035_0001
En una ejecución típica, se tomó ácido (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-eicosa-5,8,11,14,17-pentaenoico (1 mmol) en 50 ml de CH2Cl2 junto con 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etanamina (1 mmol) y EDC (1,1 mmol). La mezcla de reacción resultante se agita a temperatura ambiente durante 6 h y luego se diluye con CH2Cl2 (100 ml). La capa orgánica se lava con NH4Cl acuoso saturado, salmuera, se seca (Na2SO4) y se concentra a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía (CH2Cl2 al 95%, MeOH al 5%) para proporcionar (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etil)icosa-58,11,14,17-pentaenamida. MS (EI) calculado para C27H45NO4 447,33; encontrado 448 (M 1).
Ejemplo 14
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (I-53):
Figure imgf000035_0002
Se usó el mismo procedimiento descrito en el ejemplo 13. (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-Docosa-4,7,10,13,16,19-ácido hexaenoico y 2-(2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)etoxi)etanamina se usaron como los materiales de partida apropiados para la etapa de acoplamiento de amida. MS (EI) calculado para C31H51NO5517,38; encontrado 518 [M+H]+. Ejemplo 15
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (I-2):
Figure imgf000035_0003
El material de partida, tere-butilo (2-((2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)etil)disulfanil)etil)carbamato se preparó de acuerdo con los procedimientos descritos en el documento de patente WO 2011/106688.
A la solución de tere-butilo (2-((2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)etil)disulfanil)etil)carbamato (10 g, 17,8 mmol) en 20 ml de EtOAc se añadió una solución de HCl 4 N en EtOAc (100 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió una solución acuosa saturada de Na2CO3 a la mezcla agitada para ajustar el pH a 8. La capa orgánica se separó y se evaporó a presión reducida para proporcionar 8,2 g de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-aminoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida. Rendimiento: 100%.
MS calculado para C26H42N2OS2 : 462,75; Encontrado: 463,5 [M+H]+.
Una mezcla de (4Z,7Z, 10Z, 13Z,16Z,19Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (8,2 g, 17,8 mmol) en CH2Cl2 (200 ml) se enfrió a 0 °C, y se añadieron anhídrido acético (2,2 g, 21,3 mmol) y trietilamina (5,4 g, 53,4 mmol). La mezcla de reacción resultante se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante un período de 30 minutos bajo N2. La capa orgánica se lavó luego con agua. NH4Cl (100 ml x 3), salmuera (100 ml x 3 ), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 5,7 g de (4Z,7Z,10Z,13Z, 16Z,19Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida. Rendimiento: 64%.
MS calculado para C28H44N2O2S2 : 504,8; encontrado: 505,2 [M+H]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 6 0,95-1,00 (t, J es 7,4 Hz, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,03-2,10 (m, 2H), 2,25-2,29 (m, 2H), 2,39­ 2,45 (m, 2H), 2,78-2,85 (m, 14H), 3,54-3,60 (m, 4H), 5,29-5,44 (m, 12H), 6,25 (s, 1H), 6,41 (s, 1H).
Ejemplo 16
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (1-9):
Figure imgf000036_0001
El material de partida, tere-butilo (2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido)etil)disulfanil)etil)carbamato se preparó de acuerdo con los procedimientos descritos en el documento de patente WO 2011/106688.
Este material se sometió a la misma secuencia de reacción descrita en el Ejemplo 15 para preparar (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5, 8,11,14,17-pentaenamida. Este derivado de ácido graso/cistamina, (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (12 g, 27,5 mmol), luego se sometió a las mismas condiciones de reacción descritas en el Ejemplo 15. El producto final se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 6,7 g de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-acetamidoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida. Rendimiento: 51%.
MS calculado para C26H42N2O2S2 : 478,8; encontrado: 479,3 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) 6 0,95-1,00 (t, J es 7,6 HZ,3 H), 1,68-1,76 (m, 2 H), 2,02 (s, 3 H), 2,04-2,15 (m, 4 H), 2,20-2,24 (m, 2 H), 2,80-2,85 (m, 12 H), 3,53-3,60 (m, 4 H), 5,30-5,42 (m, 10 H), 6,25 (s, 1 H), 6,48 (s, 1 H).
Ejemplo 17
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-(2,3-dihidroxipropanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I10):
Figure imgf000036_0002
El ácido glicérico estaba fácilmente disponible comercialmente como una solución acuosa. La sal de calcio del ácido glicérico se aisló de la siguiente manera: a una mezcla de ácido glicérico (20% en agua) (50 g, 94,33 mmol) en H2O (20 ml) se añadió Ca(OH) 2 (3,49 g, 47,16 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se liofilizó para proporcionar 11,8 g de la sal de calcio del ácido glicérico.
La sal de calcio del ácido glicérico (4,81 g, 38,53 mmol) se recogió en 100 ml de DMF junto con HOBt (6,5 g, 48,16 mmol), EDCI (9,23 g, 48,16 mmol), (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (14 g, 32.11 mmol) y DMAP (7.77 g, 64.22 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego se diluyó con acetato de etilo (500 ml) y se lavó con NH4Cl acuoso saturado (100 ml * 3) y salmuera (100 ml * 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 3,4 g de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-(2,3-dihidroxipropanamido)etil)disulfanil)etil)icosa- 5,8,11,14,17-pentaenamida. Rendimiento: 20%.
MS calculado para C27H44N2O4S2 : 524,7; encontrado: 525,3 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) ó 0,88-0,92 (t, J es 8 HZ,3 H), 1,60-1,67 (m, 2 H), 1,97-2,15 (m, 6 H), 2,70-2,89 (m, 13 H), 3,43-3,57 (m, 4 H), 3,78-3,83 (m, 2 H), 4,11-4,23 (m, 2 H), 5,23-5,36 (m, 10 H), 6,04 (s, 1 H), 7,31 (s, 1 H),
Ejemplo 18
Preparación de 4-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido)etil)disulfanil)etil)amino)-4-ácido oxobutanoico (I-11):
Figure imgf000037_0001
Una mezcla de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (14 g, 32,11 mmol) en CH2Cl2 (200 ml) se enfrió a 0 °C con agitación. Luego se añadieron anhídrido succínico (3,85 g, 38,53 mmol) y Et3N (9,72 g, 96,33 mmol). La mezcla de reacción resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 18 h. Luego se diluyó con CH2Cl2 (200 ml) y se acidificó con algo de HCl 1 N (50 ml). La capa acuosa se desechó y la capa orgánica se lavó con NH4Cl saturado (300 ml * 3), salmuera (300 ml * 3), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 7,6 g de 4-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido) ácido etil)disulfanil)etil)amino)-4-oxobutanoico. Rendimiento: 44%.
MS calculado para C28H44N2O4S2 : 536,7; encontrado: 537,1 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) ó 0,88-0,92 (t, J es 7,6 HZ,3 H), 1,62-1,68 (m, 2 H), 1,99-2,07 (m, 4 H), 2,13-2,17 (m, 2 H), 2,49-2,52 (m, 2 H), 2,62-2,64 (m, 2 H), 2,71-2,80 (m, 12 H), 3,47-3,52 (m, 4 H), 5,23-5,36 (m, 10 H), 6,13 (s, 1 H), 6,90 (s, 1 H).
Ejemplo 19
Preparación de 5-((2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido)etil)disulfanil)etil)amino)-5-ácido oxopentanoico (I-12):
Figure imgf000037_0002
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-Aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (14 g, 32.11 mmol) se sometió a las mismas condiciones de reacción detalladas en el Ejemplo 18, sustituyendo anhídrido glutárico por anhídrido succínico. El producto final resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice. Rendimiento: 30%.
MS calculado para C29H46N2O4S2 : 550,8; encontrado: 551,2 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCls) ó 0,88-0,92 (t, J es 7,6 HZ,3 H), 1,62-1,68 (m, 2 H), 1,89-2,07 (m, 6 H), 2,13-2,17 (m, 2 H), 2,26-2,29 (m, 2 H), 2,34-2,38 (m, 2 H), 2,72-2,79 (m, 12 H), 3,47-3,52 (m, 4 H), 5,23-5,34 (m, 10 H), 6,16 (s, 1 H), 6,60 (s, 1 H).
Ejemplo 20
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroxihexanamido)etil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I-14)
Figure imgf000038_0001
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-(2-((2-Aminoetil)disulfanil)etil)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida se sometió a las mismas condiciones de reacción detallado en el Ejemplo 17, sustituyendo ácido D-glucónico por ácido glicérico. MS calculado para C30H50N2O7S2 : 614.31; encontrado: 615 [M+H]+.
Ejemplo 21
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)propan-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexanamida
Figure imgf000038_0002
La sal de glucosamina-HCl de clorhidrato de (2R,3R,4R,5S,6R)-3-amino-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triol, 500 mg, 2,32 mmol) fue previamente agitado en 3 ml de CH2Cl2 y trietilamina (468 pl, 1,5 equivalentes). A continuación, se añadieron ácido N-Boc-L-alanina ((S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino)propanoico, 439 mg, 1,0 equivalentes) y EDC (672 mg, 1,5 equivalentes). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo N2 hasta su finalización. Al finalizar, la reacción cruda se filtró y se lavó con 2 ml de CH2Cb; el filtrado se secó a alto vacío para dar un sólido ceroso opaco. El sólido opaco se redisolvió en EtOAC caliente donde los subproductos de sal blanca permanecen sin disolver. La mezcla heterogénea se filtró, con EtOAc. El filtrado se recogió, se secó sobre Na2SO4 y se secó a alto vacío para dar ferc-butilo ((S)-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)propan-2-il)carbamato, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A ferc-butil ((S)-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)propan-2-il)carbamato, se añadieron 3 equivalentes de HCl 4N en dioxano y se agitó durante 30 minutos, seguido de azeótropo con EtOAc para dar la sal de glucosamina-HCl unida a (L)-alanina, clorhidrato de (S)-2-amino-N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)propanamida. La sal de glucosamina-HCl unida a (L)-alanina (605 mg, 2,11 mmol) se agitó previamente en 3 ml de CH2Cl2 y trietilamina (426 pl, 1,5 equivalentes). A continuación, se añadió ácido (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoico (623 mg, 0,90 equivalentes) y EDC (529 mg, 1,3 equivalentes) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente bajo N2 , hasta su finalización. Al finalizar, la reacción cruda se secó a alto vacío, luego se redisolvió en EtOAC. A continuación, se añadieron pentanos para formar una mezcla de pentano-EtOAc al 50% sobre la cual se rompen los productos derivados de la sal de la reacción. El producto bruto se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de elución, MeOH al 0-10% en CH2Cb). MS calculado para C31H48N2O7 : 560,72; encontrado 563,5 [M+Na]+.
Ejemplo 22
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-5-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido)-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexilo)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (I-50):
Figure imgf000039_0001
A una solución de(S)-bencil ferc-butil (6-amino-6-oxohexano-1,5-diil)dicarbamato (23 g, 60,52 mmol) en 150 ml de DMF se añadió sucesivamente Et3N (18,31 g, 181,28 mmol), HATU (37,90 g 99,73 mmol) y clorhidrato de glucosamina (14,33 g, 66,45 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se concentró a presión reducida para eliminar el DMF. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (elución en gradiente: CH2Ch/MeOH es 30:1 a 15:1) para proporcionar 27 g de bencil ferc-butil ((S)-6-oxo-6-(((2R3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexano-1,5-diil)dicarbamato (Rendimiento: 84%). MS calculado para C25H38N2O10: 540,58; encontrado: 541,2 [M+H]+.
A una solución de bencil ferc-butil ((S)-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexano-1,5-diil)dicarbamato (27 g, 49,9 mmol) en 300 ml de metanol se añadió 10% de Pd-C (3 g) y se introdujo gas H2. La suspensión se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm de H2 durante 18 h. La mezcla de reacción resultante se filtró a través de una almohadilla de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 20 g de ferc-butil ((S)-6-amino-1-oxo-1-((((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexan-2-il)carbamato (rendimiento: 99%) como un aceite amarillo. Este material se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. MS calculado para C17H32N3O8 : 406,45; encontrado: 407,1 [M+H]+.
A una solución de DHA (5,31 g, 16,21 mmol) en 100 ml de DMF se le añadió Et3N (2,23 g, 22,11 mmol), EDC (4,23 g, 22,11 mmol), luego ((S)-6-amino-1-oxo-1-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexan-2-ilo)carbamato(6,0 g, 14,74 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y luego se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de elución: CH2Ch: MeOH es 40:1 a 15:1) para proporcionar 2,8 g de ferc-butilo ((S)-6-((4Z,7Z, 10Z,13Z,16Z, 19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)-1 -oxo-1 -(((2R,3R,4R,5S,6R)-2.4.5- trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexan-2-il)carbamato (Rendimiento: 26%).
MS calculado para C39H862N3O9 : 716,9; encontrado: 717,1 [M+H]+.
Terc-butil ((S)-6-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)-1-oxo-1-((((2R,3R,4R,5S,6R)-2.4.5- trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexan-2-il)carbamato (2,8 g, 3,90 mmol) se recogieron en 20 ml de HCl 4N en acetato de etilo y se dejaron agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con 20 ml de acetato de etilo y se concentró a presión reducida para proporcionar la sal de HCl de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-5-amino-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida.
Se añadió Et3N (0,59 g, 5,85 mmol), HATU (2,22 g, 0,85 mmol) y la sal HCl de (4Z,7Z) a una solución del compuesto EPA (1,29 g, 4,29 mmol) en 50 ml de DMF, 10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((S)-5-amino-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (2,54 g, 3,90 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego, la mezcla de reacción se retiró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de elución: CH2Ch: MeOH es 50: 1 a 15: 1) para proporcionar 120 mg de (4Z,7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)-N-((S)-5-((5Z, 8Z,11Z,14Z,17Z)-icosa-5,8,11,14,17-pentaenamido)-6-oxo-6-(((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)hexil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (Rendimiento: 3,1%).
MS calculado para C54H83N3O8 : 902,25; encontrado: 884 [M-18]+.
1H RMN (400MHZ, CDCb) ó 0,86-0,93 (m, 6H), 1,20-1,35 (m, 7H), 1,51-1,58 (m, 3H), 1,99-2,26 (m, 12H), 2,76­ 2,81 (m, 18H), 2,95-2,98 (m, 3H), 3,47-3,59 (m, 3H), 4,39-4,42 (m, 2H), 4,57-4,59 (m, 1H), 4,90-4,91 (m, 1H), 5,26­ 5,39 (m, 22H), 6,41-6,42 (m, 1H), 7,59-7,61 (m, 1H), 7,72-7,73 (m, 1H), 7,81-7,83 (m, 11I).
Ejemplo 23
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (I-21):
Figure imgf000040_0001
Se agitó una mezcla del compuesto (R)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2,6-diamina (61 g, 351 mmol) en npropanol (800 ml) disponible comercialmente. a 95 °C bajo N2 durante 15 min. Luego se añadió gota a gota a temperatura ambiente una solución que contenía n-propil 4-metilbencenosulfonato (100 g, 467 mmol) y DIEA (80 ml) en 300 ml de n-propanol. La mezcla de reacción resultante se agitó a 95 °C durante 18 h. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se continuó agitando durante 4 h adicionales. El material precipitado se recogió por filtración y se lavó con alcohol de grado reactivo (120 ml), seguido de heptanos (100 ml). Los sólidos resultantes se secaron a alto vacío durante 2 horas y luego se recogieron en 50 ml de etanol y se enfriaron entre 0 y 5 °C. Con agitación continua, se añadió lentamente HCl concentrado (45 ml) a la reacción mientras se mantenía la temperatura entre 0 y 5 °C, y la mezcla se agitó durante 15 minutos adicionales. Se añadió metil t-butil éter (MTBE, 270 ml) a la mezcla, y se continuó la agitación durante 1,5 h adicionales a esta temperatura. La mezcla se filtró, se lavó dos veces con una solución de MTBE/etanol (2:1; 2 * 70 ml), y se secó a alto vacío a temperatura ambiente durante 18 h para proporcionar 38,5 g de la sal de diclorhidrato de (R)-N6-propil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2,6-diamina (Rendimiento: 51%). MS calculado para C10H17N3S: 211,11; encontrado: 212,1 [M+H]+.
La sal de diclorhidrato de (R)-N6-propil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2,6-diamina (12 g, 42,2 mmol) y Et3N (12,7 g, 126,6 mmol) se recogieron en 500 ml de MeOH. Luego se añadió gota a gota una solución de anhídrido de Boc (79,14 g, 0,665 mmol) en MeOH (70 ml) a temperatura ambiente durante un período de aproximadamente 1 h. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y luego se concentró a presión reducida. Luego se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (usando una mezcla de pentano/EtOAc) para proporcionar 6,3 g de (R)-tere-butil(2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (Rendimiento: 49%).
(R)-tere-butil (2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (4 g, 12,8 mmol) se recogió en 100 ml de CH2Cl2 junto con DHA (4 g, 12,2 mmol), Ha Tu (5,9 g, 15,4 mmol) y DIEA (4,96 g, 38,4 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Luego se diluyó con CH2Cl2 (100 ml) y se lavó con agua. HCl (5%, 3 * 200 ml) y salmuera (3 * 200 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/EtOAc) para proporcionar 5 g de tere-butilo ((R)-2-((4Z,7Z,10z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (Rendimiento: 66%).
MS calculado para C37H55N3O3S: 621,9; encontrado: 622,4 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCb) ó 0,87-0,91 (t, J es 7,4 HZ,3H), 0,94-0,99 (t, J es 7,4 HZ,3H), 1,47 (s, 9H), 1,52-1,63 (m, 2H), 1,82-2,11 (m, 4H), 2,40-2,48 (m, 4H), 2,72-2,77 (m, 20H), 3,00-3,10 (m, 2H), 5,27-5,45 (m, 12H) .
Se recogió tere-butil ((R)-2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)-4,5,67-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (2,1 g, 3,43 mmol) en 20 ml de HCl 4N en acetato de etilo y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 40 ml de acetato de etilo y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. NaHCO3 (3 * 30 ml) de salmuera (3 * 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 1,5 g de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-((R) 6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (Rendimiento: 85%).
MS calculado para C32H47N3OS: 521,8; encontrado: 522,3 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCb) 6 0,92-0,99 (m, 6H), 1,50-1,56 (m, 2H), 1,72-1,74 (m, 2H), 2,03-2,09 (m, 4H), 2,46­ 2,51 (m, 5H), 2,64-2,73 (m, 3H), 2,79-2,85 (m, 11H), 2,97-3,02 (m, 2H), 5,32-5,43 (m, 12H).
Ejemplo 24
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahdrobenzodtiazol-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I-22):
Figure imgf000041_0001
Se sometió (R)-ferc-butil (2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato(300 mg, 0,96 mmol) a la misma reacción condiciones detalladas en el Ejemplo 23, sustituyendo EPA por DHA. Después de la purificación preparativa por HPLC, 180 mg de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-ilo)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida.
MS calculado para C30H45N3OS: 495,33; encontrado: 496,3 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCb) 60,98-1,04 (m, 6H), 1,50-1,70 (s, 3H), 1,71-1,84 (m, 3H), 2,03-2,07 (m, 3H), 2,12-2,18 (m, 2H), 2,39-2,43 (t, J es 3,6 HZ,3H), 2,49-2,51 (m, 1H), 2,64-2,67 (t, J es 7,4 HZ,3H), 2,71-2,74 (m, 8H), 2,95­ 3,03 (m, 2H), 5,29-5,43 (m, 10H).
Ejemplo 25
Preparación de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(3-oxo-3-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (I-27):
Figure imgf000041_0002
A una suspensión de éster metílico de p-alanina (1,39 g, 10 mmol), EDC (2,88 g, 15 mmol), HOBt (2,03 g, 15 mmol) y Et3N (3,03 g, 30 mmol) en 30 ml de CH2Cl2 se añadió DHA (3,12 g, 9,5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se lavó luego con NH4Cl acuoso saturado (3 x 30 ml), salmuera (3 x 30 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/pentano) para proporcionar 3,2 g de metilo 3-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanoato (Rendimiento: 82%).
1H RMN (400 MHZ, CDCla) 60,95-0,99 (t, J es 7,6 HZ,3H), 2,03-2,11 (m, 2H), 2,21-2,25 (t, J es 7,6 HZ,2H), 2,37 -2.43 (m, 2H), 2,52-2,56 (t, J es 6,0 HZ,2H), 2,79-2,86 (m, 10H), 2,37-2,43 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 5,29-5,42 (m, 12H), 6,06 (s, 1H).
A una solución de metil 3-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanoato (0,7 g, 1,69 mmol) en 10 ml de THF se añadieron 10 ml de NaOH 5N. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se acidificó a un pH de 2 con HCl 6N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 532 mg de ácido 3-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanoico (Rendimiento: 80%).
1H RMN (400 MHZ, CDCla) 60,95-0,99 (t, J es 7,4 HZ,3H), 2,03-2,08 (m, 2H), 2,21-2,25 (t, J es 7,2 HZ,2H), 2,37 -2.43 (m, 2H), 2,58-2,62 (t, J es 5,4 HZ,2H), 2,79-2,90 (m, 10H), 3,52-3,54 (3, 2H), 5,29-5,43 (m, 12H), 6,08 (s, 1 H).
Ácido 3-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanoico (200 mg, 0,50 mmol) se recogió en 10 ml de CH2Cl2 junto con (R)-terc-butil (2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (156 mg, 0,50 mmol), HATU (229 mg, 0,60 mmol) y DIEA (194 mg, 1,50 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Luego se diluyó con CH2Cl2 (10 ml) y se lavó con agua. HCl (5%, 3 x 20 ml) y salmuera (3 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida.
El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc/pentano) para proporcionar 200 mg de ferc-butilo ((R)-2-(3-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (Rendimiento: 57%).
Se absorbió ferc-butil ((R)-2-(3-((4Z,7Z,10Z,13Z, 16Z, 19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)propanamido)-4.5.6.7- tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (200 mg, 0,29 mmol) en 10 ml de HCl 4N en EtOAc y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 10 ml de EtOAc y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 120 mg de (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(3-oxo-3-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propil)docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida (Rendimiento: 70%)
MS calculado para C35H52N4O2S: 592,9; encontrado: 593,4 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) ó 0,88-0,97 (m, 6H), 1,50-1,56 (m, 2H), 1,71-1,82 (m, 2H), 2,00-2,09 (m, 4H), 2,20­ 2,24 (m, 2H), 2,36-2,40 (m, 2H), 2,41-2,60 (m, 1H), 2,65-2,68 (m, 5H), 2,69-2,73 (m, 1H), 2,80-2,86 (m, 10H), 2,95­ 3,03 (m, 2H), 3,58-3,63 (m, 2H), 5,30-5,42 (m, 12H), 6,22-5,24 (m, 1H).
Ejemplo 26
Preparación de (4Z,4,Z,7Z,7,Z,10Z,10,Z,13Z,13,Z,16Z,16,Z,19Z,19,Z)-N,N,-((S)-6-oxo-6-(((R)-6-(propilamino)-4.5.6.7- tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)hexano-1,5-diil)bis(docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida) (I-82):
Figure imgf000042_0001
A una suspensión de diclorhidrato de éster metílico de L-lisina (2,33 g, 10 mmol), EDC (2,88 g, 15 mmol), HOBt (2,03 g, 15 mmol) y Et3N (3,03 g, 30 mmol) en 30 ml de CH2Cl2 se añadió DHA (3,12 g, 9,5 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se lavó con NH4Cl acuoso saturado (3 * 30 ml) y salmuera (3 * 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/EtOAc) para proporcionar 4,67 g de (S)-metil 2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)hexanoato (Rendimiento: 60%). 1H RMN (400 MHZ, CDCla) ó 0,95 -1,01 (m, 6H), 1,26 - 1,40 (m, 2H), 1,48 - 1,55 (m, 2H), 1,65 - 1,73 (m, 1H), 1,79 - 1,85 (m, 2H), 2,03 - 2,13 (m, 4H), 2,19 - 2,24 (m, 2H), 2,27 - 2,32 (m, 2H), 2,37 - 2,45 (m, 4H), 2,80 - 2,85 (m, 20H), 3,20 - 3,27 (m, 2H), 3,74 - 3,75 (d, J es 2,4 HZ,3H), 4,56 - 4,60 (m, 1H), 5,27 - 5,46 (m, 24H), 5,68 (s, 1H), 6,18 - 6,21 (d, J es 7,5 HZ,1H).
A la solución de (S)-metil 2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)hexanoato (2,5 g, 3,2 mmol) en 20 ml de THF se añadieron 50 ml de NaOH 5N. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se acidificó a un pH de 2 con HCl 6N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para proporcionar 2,22 g de ácido (S)-2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4, 7,10,13,16,19-hexaenamido)hexanoico (Rendimiento: 90%).
Ácido (S)-2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)hexanoico (500 mg, 0,70 mmol) se absorbió en 20 ml de CH2Cl2 junto con (R)-ferc-butil (2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (204 mg, 0,70 mmol), Ha TU (319 mg, 0,84 mmol) y DIEA (226 mg, 1,75 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Luego se diluyó con CH2Cl2 (20 ml) y se lavó con agua. HCl (5%, 3 * 40 ml) y salmuera (3 * 40 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (pentano/EtOAc) para proporcionar 300 mg de ferc-butil ((R)-2-((S)-2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z),19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido)hexanamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (Rendimiento: 72%)
Se absorbió ferc-butil ((R)-2-((S)-2,6-di((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19hexaenamido)hexanamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-6-il)(propil)carbamato (500 mg, 0,47 mmol) en 20 ml de HCl 4N en acetato de etilo y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 90 min. La mezcla de reacción se diluyó con 10 ml de acetato de etilo y se concentró a presión reducida para proporcionar 300 mg de (4Z,4'Z, 7Z,7'Z, 10Z, 10'Z, 13Z, 13'Z, 16Z, 16'Z, 19Z, 19'Z)-N,N'-((S)-6-oxo-6-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)hexano-1,5-diil)bis(docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamida) (Rendimiento: 70%).
MS calculado para C60H89N5O3S: 960,4; encontrado: 961,4 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) 6 0,94 - 0,99 (m, 9H), 1,40-1,46 (m, 2H), 1,50 - 1,54 (m, 2H), 1,61 - 1,67 (m, 2H), 1,74 - 1,86 (m, 2H), 1,90 -1,95 (m, 2H), 2,03 - 2,10 (m, 4H), 2,20 - 2,29 (m, 3H), 2,32 - 2,43 (m, 7H), 2,46 - 2,66 (m, 2H), 2,74 - 2,84 (m, 23H), 3,01 - 3,05 (m, 1H), 3,17 - 3,32 (m, 3H), 4,59 - 4,62 (m, 1H), 5,27 - 5,44 (m, 24H), 5,80 - 5,82 (m, 1H), 6,74 - 6,76 (m, 1H).
Ejemplo 27
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((S)-4-metil-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)pentan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I-31)
Figure imgf000043_0001
Se empleó el mismo procedimiento experimental descrito en el Ejemplo 25, usando éster metílico de L-leucina como material de partida apropiado.
MS calculado para C39H58N4O2S: 634,4; encontrado: 635,4 [M+H]+.
1H RMN (400 MHZ, CDCla) 6 0,86 - 1,01 (m, 12H), 1,47 - 1,55 (m, 2H), 1,57 - 1,69 (m, 2H), 1,71 - 1,80 (m, 2H), 2,04 - 2,13 (m, 4H), 2,23 - 2,29 (m, 3H), 2,33 - 2,40 (m, 3H), 2,65 - 2,69 (t, J es 13,8 HZ,3H), 2,82 - 2,87 (m, 10H), 2,96- 3,04 (m, 2H), 4,66 - 4,73 (m, 1H), 5,30 - 5,45 (m, 12H), 5,95 - 5,98 (d, J es 7,5 HZ,1H).
Ejemplo 28
Preparación de (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((S)-1-oxo-1-(((R)-6-(propilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]tiazol-2-il)amino)propan-2-il)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamida (I-29):
Figure imgf000043_0002
Se empleó el mismo procedimiento experimental descrito en el Ejemplo 25, usando éster metílico de L-alanina como material de partida apropiado.
MS calculado para C35H52N4O2S: 592,9; encontrado: 593,4 [M+H]+.
1H RMN (400MHZ,CDCl3)60.98-1.05(m,6H),1.46-1.49(d,Jes6.8HZ,3H),1.91-2.15(m,5H),2.34-2.46(m,5H),2.59-2.2.74(m,2H),2.81-2.88(m,10H),3.01-3.10(m,3H),3.20-3.53(m,2H),4.80-4.89(m,1H),5,27-5,43(m,12H),6,85-6,98(m,1H).

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula I:
Figure imgf000044_0001
Fórmula I
o una sal, enantiómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo;
en la que
Z es
Figure imgf000044_0002
cada r es independientemente 2, 3 o 7;
cada s es independientemente 3, 5 o 6;
cada t es independientemente 0 o 1;
cada v es independientemente 1, 2 o 6;
R1 y R2 son independientemente -H, -D, alquilo -C1-C4 , -halógeno, -OH, -C(O) alquilo C1-C4 , -O-arilo, -O-bencilo, -OC(O) alquilo C1-C4 , alqueno -C2-C3 , -C2-C3 alquino, -NH2 , -NH(alquilo C1-C3 ), -N(alquilo C1-C3)2, -NH(C(O) alquilo C1-C3 ), -N(C(O) alquilo C1-C3)2, -SH, -S(alquilo C1-C3 ), -S(O) alquilo C1-C3 o -S(O)2 alquilo C1-C3;
R3 es H; y
R4 se selecciona del grupo que consiste en
Figure imgf000044_0003
en las que
R es alquilo C1-C6 no sustituido lineal o ramificado; o
un compuesto seleccionado de
Figure imgf000044_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto según de la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0005
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es
Figure imgf000045_0006
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o la composición farmacéutica de la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias inflamatorias o enfermedades neurodegenerativas, preferentemente en el que la enfermedad autoinmune se selecciona de fibrosis quística, artritis reumatoide, psoriasis, lupus eritematoso sistémico y enfermedad inflamatoria intestinal, o en el que la enfermedad respiratoria inflamatoria se selecciona de asma, síndrome de dificultad respiratoria del adulto, enfermedad crónica obstructiva de las vías respiratorias, EPOC y fibrosis quística, o en el que la enfermedad neurodegenerativa se selecciona de esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, Enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y distrofia muscular.
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