ES2822200T3 - Material para purificación de sangre - Google Patents

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ES2822200T3 ES17848867T ES17848867T ES2822200T3 ES 2822200 T3 ES2822200 T3 ES 2822200T3 ES 17848867 T ES17848867 T ES 17848867T ES 17848867 T ES17848867 T ES 17848867T ES 2822200 T3 ES2822200 T3 ES 2822200T3
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Shungo Kanda
Hiroshi Takahashi
Naotoshi Tomita
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Toray Industries Inc
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Abstract

Un material para purificación de sangre, comprendiendo el material un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato, en donde el contenido del uno o más grupos amida es de 3,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua; y en donde el contenido del uno o más grupos amino es de 1,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua.

Description

DESCRIPCIÓN
Material para purificación de sangre
Campo técnico
La presente invención se refiere a un material para purificación de sangre.
Técnica anterior
En los últimos años se han producido avances en la tecnología de purificación de sangre, particularmente la tecnología de eliminación de factores humorales de la sangre, con fines de tratamiento de enfermedades inflamatorias o inmunosupresión pretrasplante.
En el documento de patente 1, se realiza un enfoque en el que se usa un material insoluble en agua como material para eliminar o inactivar citocinas que son un tipo de proteínas, en el que el material insoluble en agua, un enlace urea y un grupo amino; o un enlace urea, un grupo amida, y un grupo amino; o un grupo amida, un grupo amino, y un grupo hidroxilo se introducen en un sustrato compuesto por un material polimérico.
El documento de patente 2 divulga un material insoluble en agua en el que se introducen un grupo amida y un grupo amino adecuados para eliminar proteínas del grupo de alta movilidad. El documento de patente 2 informa que un contenido del grupo amino que es demasiado pequeño no proporciona el rendimiento de adsorción deseado, y un contenido del grupo amino que es demasiado grande deteriora la resistencia física del vehículo insoluble en agua y también tiende a reducir el rendimiento de adsorción, y por consiguiente, el contenido es preferiblemente de 0,03 pmol a 1 mmol, más preferiblemente de 0,1 pmol a 0,1 mmol, por 1 g de peso del vehículo insoluble en agua.
El documento de patente 3 divulga un material para purificación de sangre, en el que se utilizan fibras de 50 pm o menos. El documento de patente 3 informa que un contenido del grupo amino que es demasiado pequeño tiende a no expresar la función del grupo, y un contenido del grupo amino que es demasiado grande tiende a reducir la resistencia física de la estructura del tejido y, por consiguiente, el contenido es preferiblemente de 0,01 a 2,0 mol, más preferiblemente de 0,1 a 1,0 mol, por unidad de repetición del polímero.
En el documento de patente 4, en cuanto a una membrana de separación para riñones artificiales, se ha intentado aumentar la cantidad de adsorción de una LDL oxidada injertando un polímero hidrófilo que contiene un grupo amida y polietilenimina sobre la superficie de un sustrato.
Aquí, las citocinas se refieren a un grupo de proteínas que, a través de un estímulo tal como una infección o un traumatismo, se producen a partir de diversas células, tales como células inmunocompetentes, se liberan extracelularmente, y se dejan actuar. Se conocen muchas, incluyendo interferón-a, interferón-p, interferón-Y, interleucina-1p, interleucina-1 a interleucina-15, factor de necrosis tumoral a, factor de necrosis tumoral p, caja del grupo de alta movilidad 1, eritropoyetina, factores quimiotácticos de monocitos, y similares. Las citocinas se consideran originalmente sustancias que los organismos producen para la biofilaxis, pero se ha aclarado que un grupo de proteínas, tal como el factor de necrosis tumoral-p, interleucina-6, interleucina-8, y los factores quimiotácticos y activadores de los monocitos, cuando se producen en exceso, están implicados en el daño tisular y la patología en diversas enfermedades inflamatorias. Por ejemplo, existe un informe de que la administración de factor de necrosis tumoral-p a un animal induce choque séptico y, por consiguiente, es útil para mejorar la patología para inhibir la acción del factor de necrosis tumoral.
En el caso de la hipercitocinemia (por ejemplo, septicemia humana), en la que hay una alta concentración de citocinas libres en sangre, las concentraciones de interleucina-6 e interleucina-8 en sangre aumentan notablemente (documento no relacionado con patentes 1 y documento no relacionado con patentes 2), y se reconoce que las concentraciones de estas en sangre están correlacionadas con la patología y el pronóstico. Además, se señala que, en enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide, enfermedades alérgicas, y similares, la producción excesiva de interleucina-6 e interleucina-8 está implicada en la patología.
Por otro lado, para tratar las enfermedades inflamatorias mencionadas anteriormente mediante la inhibición de la acción de las citocinas, se ha intentado administrar a un organismo vivo una proteína, tal como una tipificada por un anticuerpo o un receptor soluble, que se une específicamente a una citocina diana para inhibir su acción; o una proteína, tal como un antagonista de receptor, que se une al receptor de una citocina de forma competitiva con la citocina.
En el documento no relacionado con patentes 3, se intenta eliminar las citocinas de la sangre con una terapia de purificación de sangre utilizando un riñón artificial.
Además, el interés reciente se ha centrado en un complejo plaquetario activado por leucocitos activados como una nueva sustancia causante de enfermedades inflamatorias. Se informa que los complejos plaquetarios activados por leucocitos activados tienen una mayor actividad quimiotáctica en los tejidos que presentan una reacción inflamatoria en comparación con los leucocitos activados en solitario, y liberan más sustancias histotóxicas, y que la interacción entre una plaqueta activada y un leucocito activado aumenta la liberación de sustancias histotóxicas por el leucocito activado (documento no relacionado con patentes 4).
Documentos de la técnica anterior
Documentos de patente
Documento de patente 1: JP 4591974 B2
Documento de patente 2: JP 5824873 B2
Documento de patente 3: JP 5293599 B2
Documento de patente 4: JP 4534486 B2
Documentos no relacionados con patentes
Documento no relacionado con patentes 1: Oda et al., Cytokine, 29, 169-175 (2005)
Documento no relacionado con patentes 2: Hack et al., INFECT. IMMUN., 60, 2835-2842 (1992) Documento no relacionado con patentes 3: Hirasawa et al., MOL. MED., 14, 257-263 (2008)
Documento no relacionado con patentes 4: Zarbock et al., J. Clin. Invest., 116, 3211-3219 (2006)
Sumario de la invención
Problema a resolver por la invención
Sin embargo, existe el problema de que los materiales insolubles en agua convencionales que tienen un grupo amida y un grupo amino introducido en los mismos contienen una cantidad menor del grupo amida por 1 g del material insoluble en agua, y que el contenido del grupo amino tampoco es suficiente para expresar el rendimiento de purificación de sangre. El documento de patente 1 no informa un contenido del grupo amida ni un contenido del grupo amino adecuado para eliminar citocinas. Los documentos de patente 2 y 3 no tienen una descripción relacionada con el contenido del grupo amida, no divulgan ningún ejemplo que tenga un grupo amida introducido en los Ejemplos, e informa que la introducción de una cantidad mayor de un grupo amino de 1 mmol por 1 g de un material insoluble en agua reduce el rendimiento de eliminación de citocinas. Además, no se hace mención de complejos plaquetarios activados por leucocitos activados, y menos aún de una tecnología relacionada con la eliminación de complejos plaquetarios activados por leucocitos activados.
El documento de patente 4 divulga una membrana de separación en la que un polímero hidrófilo que contiene un grupo amida y un polímero catiónico se inmovilizan en la superficie de un sustrato mediante reticulación de rayos y, pero el grupo amino y el grupo amida no están unidos covalentemente en la membrana de separación, y en la actualidad no se expresa un rendimiento de purificación de sangre suficiente. Además, estos documentos no divulgan ni sugieren que el aumento del contenido del grupo amida y del grupo amino sea eficaz para mejorar el rendimiento de purificación de sangre. Además, no se hace mención de complejos plaquetarios activados por leucocitos activados, y menos aún de una tecnología relacionada con la eliminación de complejos plaquetarios activados por leucocitos activados. También existe el problema de que preparar una gran cantidad de proteína para la administración in vivo es muy costoso, y que si una proteína a administrar es una sustancia extraña para los organismos, puede inducir una inmunorreacción perjudicial para los pacientes.
Como se menciona en el documento no relacionado con patentes 3, se señala que una terapia de purificación de sangre que usa un riñón artificial da como resultado una eliminación insuficiente de citocinas. Además, los riñones artificiales generalmente no pueden eliminar los componentes de los corpúsculos sanguíneos y, por lo tanto, es difícil eliminar los complejos plaquetarios activados por leucocitos activados.
En estas circunstancias, existe una demanda de un material que pueda eliminar no solo citocinas sino también complejos plaquetarios activados por leucocitos activados en aplicaciones de purificación de sangre.
En vista de estas, un objetivo de la presente invención es proporcionar un material para purificación de sangre que pueda eliminar citocinas y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados.
Medios para resolver los problemas
La presente invención proporciona los siguientes puntos (1) a (9).
(1) Un material para purificación de sangre, comprendiendo el material un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato, en el que el contenido del uno o más grupos amida es de 3,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua; y en el que el contenido del uno o más grupos amino es de 1,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua.
(2) El material para purificación de sangre, de acuerdo con el punto (1), en el que el ligando que tiene la estructura representada por la Fórmula (I) a continuación está unido al sustrato:
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(en la que X es un grupo amino; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato).
(3) El material para purificación de sangre, de acuerdo con el punto (1) o (2), en el que el ligando tiene un grupo fenilo, y el ligando que tiene la estructura representada por la Fórmula (II) a continuación se une al sustrato:
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(en la que X es un grupo amino; A es un enlazador; B es un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato); y en el que el contenido del grupo fenilo es más de 0 mmol y no más de 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua. (4) El material para purificación de sangre, de acuerdo con el punto (2) o (3), en el que X es un grupo amino derivado de una poliamina.
(5) El material para purificación de sangre, de acuerdo con el punto (3) o (4), en el que A es un enlace amida o un enlace urea.
(6) El material para purificación de sangre, de acuerdo con uno cualquiera del punto (1) a (5), en el que el sustrato es un poliestireno o una polisulfona, o un derivado de los mismos.
(7) El material para purificación de sangre, de acuerdo con uno cualquiera del punto (1) a (6), en el que el material se encuentra en forma de fibras o partículas.
(8) El material para purificación de sangre, de acuerdo con uno cualquiera del punto (1) a (7), en el que el material está en forma de un tejido de punto que tiene una relación de apertura del 0,1 al 30,0 %.
(9) Aparato para purificación de sangre, comprendiendo el aparato el material para purificación de sangre, de acuerdo con uno cualquiera del punto (1) a (8).
El material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención puede eliminar citocinas y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados, de manera que el material puede usarse como vehículo para la purificación de sangre.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 es una vista que muestra las porciones de apertura y las porciones sin apertura en el material para purificación de sangre en forma de tejido de punto.
La figura 2 es una vista esquemática de un circuito y un dispositivo usados en una prueba de medición de pérdida de presión.
Modo para realizar la invención
La presente invención se describirá ahora en detalle.
El material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención está caracterizado por que comprende un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato, en el que el contenido del uno o más grupos amida es de 3,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua; y en el que el contenido del uno o más grupos amino es de 1,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua.
El término "ligando" significa una estructura química contenida en un material insoluble en agua para proporcionar un rendimiento de purificación de sangre.
El término "sustrato" significa un material en el que se puede inmovilizar un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino mediante modificación química y que es insoluble en agua después de la inmovilización del ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino. Por ejemplo, el sustrato es un material polimérico que tiene, en las estructuras de repetición, un grupo funcional reactivo con un carbocatión, tal como un anillo aromático o un grupo hidroxilo, y puede ser: un material polimérico sintético tal como un compuesto poli(vinílico aromático) (por ejemplo, poliestireno), un poliéster (por ejemplo, tereftalato de polietileno, tereftalato de polibutileno), polisulfona, o alcohol polivinílico; un material polimérico natural tal como celulosa, colágeno, quitina, quitosano, o dextrano; o un derivado en el que se imparte un grupo alquilo, un grupo halógeno, un grupo alquilo halogenado, un grupo acetal, un grupo éter, o similares, al material polimérico sintético o al material polimérico natural. Ejemplos de derivados de poliestireno incluyen poli(p-clorometilestireno), poli(a-metilestireno), poli(p-metilestireno), poli(p-tercbutoxiestireno), poli(p-acetoxiestireno), y poli(p-(1-etoxietoxi)estireno). Aunque la composición de cada uno de estos materiales poliméricos no se limita a uno en particular, se pueden usar homopolímeros o copolímeros entre los polímeros mencionados anteriormente, o se pueden mezclar físicamente y usar una pluralidad de los materiales poliméricos mencionados anteriormente. En particular, para la purificación de sangre, son preferibles materiales que no tengan un grupo hidroxilo: compuestos poli(vinílicos aromáticos) (por ejemplo, poliestireno) o derivados de los mismos; poliésteres (por ejemplo, tereftalato de polietileno y tereftalato de polibutileno) o derivados de los mismos; y polisulfona o derivados de la misma. Los materiales más preferibles son poliestireno o polisulfona o derivados de los mismos; en otras palabras, poliestireno o derivados del mismo, o polisulfona o derivados de la misma. Entre estos, los poliestirenos o derivados de los mismos son aún más preferidos porque tienen muchos anillos aromáticos por unidad de peso y experimentan fácilmente la introducción de un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino.
El material polimérico usado para el sustrato puede tener una estructura reticulada para expresar insolubilidad en agua después de la inmovilización del ligando. No hay limitación para la estructura reticulada. Un material preferible es, por ejemplo, un material polimérico en el que se introduce una estructura reticulada mediante la copolimerización de un monómero bifuncional tal como divinilbenceno, o un material polimérico en el que se introduce una estructura reticulada haciendo reaccionar un reticulante tal como aldehido con un grupo funcional tal como un anillo aromático o un grupo hidroxilo en el material polimérico. A la luz de la fácil obtención, un material más preferible es un material polimérico en el que se introduce una estructura reticulada haciendo reaccionar un compuesto bifuncional con un grupo funcional tal como un anillo aromático o un grupo hidroxilo en el material polimérico, y usar formaldehído como reticulante es aún más preferible.
El término "material insoluble en agua" es un material insoluble en el agua. Aquí, ser insoluble en agua significa que el peso en seco de un material insoluble en agua cambia en un 1 % o menos entre antes y después de que el material se ponga en agua. Este cambio de peso en seco es una relación entre el peso en seco de un contenido sólido y el peso en seco de un material insoluble en agua que aún no se ha sumergido en agua, en la que el material se sumerge, durante una hora, en una cantidad de 37 °C, agua que es nueve veces mayor que el peso en seco del material, a continuación se extrae el material con pinzas y similares, el agua restante se seca al vacío a 50 °C o menos, y el contenido sólido se excluye. Un material que no se hace insoluble presenta el riesgo de aumentar la cantidad de eluato cuando el material se usa realmente, lo que no es preferible desde el punto de vista de la seguridad.
El término "peso en seco" significa el peso de un sólido en estado seco. Aquí, un sólido en estado seco significa un sólido en un estado en el que la cantidad de componente líquido contenido en el sólido es del 1 % en peso o menos. Cuando se mide el peso de un sólido y a continuación se seca por calentamiento a 80 °C a presión atmosférica durante 24 horas, y la reducción de peso del sólido restante en comparación con el peso del sólido antes del secado es del 1 % en peso o menos, el sólido se considera en estado seco.
El término "material para purificación de sangre" significa un material que incluye al menos un material insoluble en agua como parte del material para purificación de sangre, e incluye un material compuesto por un material insoluble en agua en solitario y un material en el que un material insoluble en agua se fija o se mezcla con un material de refuerzo adecuado. La operación de fijación o mezcla se puede realizar antes o después de que el material tenga una forma.
La estructura química del material de refuerzo no está particularmente limitada, y los ejemplos de materiales de refuerzo incluyen un material polimérico que no tiene un anillo aromático o un grupo hidroxilo en la estructura de repetición, por ejemplo, homopolímeros o copolímeros de poliamida, poliacrilonitrilo, polietileno, polipropileno, nylon, polimetilmetacrilato o politetrafluoroetileno; o materiales obtenidos mezclando físicamente los homopolímeros y/o los copolímeros descritos anteriormente; y similares. Entre estos, se prefieren el polietileno y el polipropileno.
El término "grupo amida" significa un enlace amida incluido en un ligando, puede ser cualquier enlace amida de una amida primaria, amida secundaria, y amida terciaria, y es preferiblemente una amida secundaria. Al menos uno de los grupos amida incluidos en un ligando está preferiblemente unido covalentemente a un sustrato mediante un grupo alquileno. Ejemplos de grupos alquileno preferidos incluyen un grupo metileno, un grupo etileno, un grupo propileno, y similares, y es más preferible un grupo metileno.
El término "grupo amino" significa una estructura química que tiene una o más aminas como estructura parcial, y los ejemplos de grupos amino incluyen grupos amino derivados de amoniaco; grupos amino derivados de aminas primarias tales como aminometano, aminoetano, aminopropano, aminobutano, aminopentano, aminohexano, aminoheptano, aminooctano y aminododecano; grupos amino derivados de aminas secundarias tales como dimetilamina, dietilamina, dipropilamina, feniletilamina, monometilaminohexano y 3-amino-1-propeno; grupos amino derivados de aminas terciarias tales como trietilamina, fenildietilamina y aminodifenilmetano; y grupos amino derivados de compuestos que tienen una pluralidad de grupos amino (en lo sucesivo en el presente documento denominados poliaminas), tales como etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina, dipropilenotriamina, polietilenimina (que tiene un peso molecular promedio en peso de 500 a 100000), N-metil-2,2'-diaminodietilamina, N-acetiletilendiamina, y 1,2-bis(2-aminoetoxietano). Entre estos, los grupos amino derivados de poliaminas que tienen una alta movilidad molecular son adecuados para la purificación de sangre porque dichos grupos amino entran fácilmente en contacto con los componentes sanguíneos, pero si los grupos amino tienen un gran peso molecular, los grupos amino tienen un gran impedimento estérico y reducen el rendimiento de purificación de sangre. Por lo tanto, es preferible que la poliamina contenga de 2 a 7 grupos amino y que toda la poliamina tenga una estructura de cadena lineal. Por ejemplo, grupos amino derivados de etilendiamina, dietilendiamina, trietilendiamina, dietilentriamina, trietilentriamina, tetraetilentriamina, trietilentetramina, tetraetilentetramina, pentaetilentetramina, tetraetilenpentamina, pentaetilenpentamina, hexaetilenpentamina, pentaetilenhexamina, hexaetilenhexamina, heptaetilenhexamina, hexaetilenheptamina, heptaetilenheptamina, u octaetilenheptamina son preferibles. Grupos amino derivados de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina, pentaetilenhexamina, o polietilenimina son preferibles. Grupos amino derivados de tetraetilenpentamina son más preferibles. Además, los grupos amino son más preferiblemente grupos amino derivados de aminas primarias o secundarias.
El número de átomos de carbono por un átomo de nitrógeno del grupo amino incluido en un ligando es preferiblemente 18 o menos, más preferiblemente 14 o menos, aún más preferiblemente 8 o menos, considerando la nucleofilicidad y el impedimento estérico que afectan a una relación de reacción. A este respecto, el átomo de nitrógeno del grupo amino está preferiblemente sustituido con un grupo alquilo. La estructura del grupo alquilo puede ser un grupo hidrocarbonado que tiene una estructura de cadena lineal, ramificada o cíclica. Entre otras, la estructura es preferiblemente un grupo alquilo de cadena lineal tal como un grupo metilo, grupo etilo, grupo propilo, grupo butilo, grupo pentilo, grupo hexilo, grupo heptilo o grupo octilo, y más preferiblemente un grupo metilo, grupo etilo, o grupo propilo.
El contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua es de 3,0 a 7,0 mmol a la luz del rendimiento de la eliminación de factores humorales de la sangre y el límite de la relación de sustitución con respecto a los anillos aromáticos. El contenido del uno o más grupos amida es preferiblemente de 4,0 a 7,0 mmol, más preferiblemente de 5,0 a 7,0 mmol. Cualquier límite inferior preferible puede combinarse con cualquier límite superior preferible.
El contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua es de 1,0 a 7,0 mmol porque el contenido que es demasiado bajo reduce el rendimiento, y el contenido que es demasiado alto reduce la eficiencia de reacción de introducción. El contenido es preferiblemente de 1,0 a 5,0 mmol, más preferiblemente de 2,0 a 4,0 mmol. Cualquier límite inferior preferible puede combinarse con cualquier límite superior preferible. A este respecto, el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua y el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua se puede combinar de cualquier modo. Por ejemplo, es preferible que el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 3,0 a 7,0 mmol, y el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 1,0 a 5,0 mmol. Es más preferible que el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 4,0 a 7,0 mmol, y el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco de agua del material insoluble sea de 2,0 a 4,0 mmol.
El término "ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino" significa un ligando en el que el uno o más grupos amida y el uno o más grupos amino están unidos covalentemente mediante un grupo alquileno. Un grupo amida controla la densidad electrónica de un grupo amino y, por lo tanto, el grupo alquileno tiene preferiblemente una estructura de hidrocarburo saturado que tiene 5 o menos átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquileno incluyen un grupo pentileno, un grupo butileno, un grupo propileno, un grupo etileno, y un grupo metileno. Es más preferible un grupo metileno. Además, el ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino es preferiblemente tal que el lado del grupo amida se une a un sustrato. No existe ninguna limitación particular para el grupo funcional incluido que no sea el grupo amida y el grupo amino, y el ligando puede contener, por ejemplo, un grupo fenilo (el grupo fenilo puede tener un sustituyente tal como un átomo de halógeno, un grupo alquilo halogenado, y un grupo alquilo C1-C5 de cadena lineal). En este caso, el grupo fenilo se une preferiblemente a un grupo amino mediante el enlazador mencionado a continuación.
El término "material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato" es sinónimo de un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino y un sustrato están unidos, y abarca tanto un vehículo insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino se une directamente a un sustrato; y un vehículo insoluble en agua en el que el ligando se une indirectamente a un sustrato mediante un espaciador tal como un grupo alquileno.
La Tabla 1 muestra ejemplos de modos de estructuras resultantes de la unión de un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino a un sustrato, y las Tablas 2-1 a 2-7 muestran ejemplos de modos preferibles de estructuras resultantes de la unión de un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino a un sustrato, aunque dichos modos no se limitan a estos ejemplos.
T l 11
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En la Tabla 1,1 representa un número entero de 0 a 5, m representa un número entero de 0 a 5, X representa un grupo amino, A representa un enlazador, B representa un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, C representa un átomo de hidrógeno o átomo de halógeno, y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato.
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En la Tabla 2-1 a 2-7, PEI representa una polietilenimina que tiene un peso molecular promedio en peso de 600 a 100000, y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato.
Ejemplos de modos preferibles de estructuras resultantes de la unión de un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino a un sustrato en un vehículo insoluble en agua incluyen una estructura representada por la siguiente Fórmula (I):
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(en la que X es un grupo amino; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato). X es preferiblemente un grupo amino derivado de una poliamina, y más preferiblemente un grupo amino derivado de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina, pentaetilenhexamina, o polietilenimina.
En la Tabla 3 se muestran ejemplos específicos de estructuras representadas por la Fórmula (I) mencionada anteriormente, pero las estructuras no se limitan a estos ejemplos.
T l 1
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En la Tabla 3, PEI representa una polietilenimina que tiene un peso molecular promedio en peso de 600 a 100000, y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato.
Además, una estructura representada por la siguiente Fórmula (II), en otras palabras, un ligando que tiene un grupo o grupos fenilo además de uno o más grupos amida y uno o más grupos amino puede unirse a un sustrato, y es más preferible debido a que la unión de la estructura puede inhibir aún más la adhesión plaquetaria.
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(en la que X es un grupo amino; A es un enlazador; B es un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato).
X es preferiblemente un grupo amino derivado de una poliamina, y más preferiblemente un grupo amino derivado de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina, pentaetilenhexamina, o polietilenimina.
A es preferiblemente un enlace amida o enlace urea.
B es preferiblemente un átomo de hidrógeno o un átomo de cloro.
Es preferible que X sea un grupo amino derivado de una poliamina, A sea un enlace amida o enlace urea, y B sea un átomo de hidrógeno o un átomo de cloro.
En las Tablas 4-1 a 4-6 se muestran ejemplos específicos de estructuras representadas por la Fórmula (II) mencionada anteriormente, pero dichas estructuras no se limitan a estos ejemplos.
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En las Tablas 4-1 a 4-6, PEI representa una polietilenimina que tiene un peso molecular promedio en peso de 600 a 100000, y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato.
El contenido del grupo fenilo que es demasiado pequeño no expresa el efecto de suprimir la adhesión plaquetaria, y el contenido que es demasiado grande reduce la capacidad de eliminación de factores humorales de la sangre. Por lo tanto, el contenido del grupo fenilo es preferiblemente más de 0 mmol y no más de 7,0 mmol, preferiblemente de 0,01 a 7,0 mmol, más preferiblemente de 0,01 a 3,0 mmol, aún más preferiblemente de 0,02 a 2,0 mmol, aún más preferiblemente de 0,02 a 1,0 mmol, por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua. Cualquier límite inferior preferible puede combinarse con cualquier límite superior preferible. A este respecto, el contenido del uno o más grupos fenilo, el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua, y el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua puede combinarse de cualquier modo. Por ejemplo, es preferible que el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 3,0 a 7,0 mmol, el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 1,0 a 5,0 mmol, y el contenido del uno o más grupos fenilo por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea más de 0 y no más de 7,0 mmol. Es más preferible que el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 4,0 a 7,0 mmol, el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 2,0 a 4,0 mmol, y el contenido del uno o más grupos fenilo por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 0,01 a 7,0 mmol. Es particularmente preferible que el contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 5,0 a 7,0 mmol, el contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 2,0 a 4,0 mmol, y el contenido del uno o más grupos fenilo por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua sea de 0,01 a 3,0 mmol/g.
El término "átomo de halógeno" significa un átomo de flúor, un átomo de cloro, un átomo de bromo, o un átomo de yodo.
El término "grupo fenilo" significa un grupo fenilo derivado de un benceno sin sustituir o un compuesto de benceno sustituido. Ejemplos de grupos fenilo incluyen benceno, fluorobenceno, clorobenceno, bromobenceno, 1,2-difluorobenceno, 1,2-diclorobenceno, 1,2-bromobenceno, 1,3-difluorobenceno, 1,3-diclorobenceno, 1,3-dibromobenceno, 1,4-difluorobenceno, 1,4-diclorobenceno, 1,4-dibromobenceno, y similares. Con el fin de controlar la carga eléctrica del grupo amino, son preferibles grupos fenilo derivados de bencenos halogenados que tienen un grupo aceptor de electrones impartido a los mismos. Entre otros, son preferibles los grupos clorofenilo derivados de clorobenceno. El grupo aceptor de electrones está preferiblemente unido en la posición para a la luz de la estructura de resonancia y, en particular, un grupo fenilo derivado de clorobenceno es preferiblemente un grupo p-clorofenilo en el que un enlazador y un átomo de cloro están sustituidos en la posición para.
El término "enlazador" significa un enlace químico entre el grupo amino mencionado anteriormente y el grupo fenilo mencionado anteriormente. Ejemplos de enlazadores incluyen enlaces químicos eléctricamente neutros tales como un enlace amida, un enlace urea, un enlace éter, o un enlace éster. Es preferible un enlace amida o un enlace urea.
La forma del material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención no se limita a una en particular, y es preferiblemente una forma de fibra o una forma de partícula, más preferiblemente una forma de fibra. Además, entre las formas de fibra son preferibles los manojos de hilo, hilo, malla, tejido de punto y tela tejida que se procesan a partir de fibra, y son más preferibles manojos de hilo, tejido de punto y tela tejida, considerando el área superficial grande y la resistencia a la trayectoria de flujo pequeña.
El diámetro de un solo hilo de la fibra puede tener cualquier valor, y es preferiblemente de 3 a 200 pm, más preferiblemente de 5 a 50 pm, aún más preferiblemente de 10 a 40 pm, con miras a mejorar el área de contacto y mantener la resistencia del material. Cualquier límite inferior preferible puede combinarse con cualquier límite superior preferible.
El término "diámetro de un solo hilo" significa un promedio de diámetros de hilos individuales de una fibra, en la que se toman aleatoriamente diez muestras de piezas pequeñas de la fibra, cada muestra se fotografía usando un electromicroscopio de barrido con una relación de aumento de 1000x a 3000x, y el valor del diámetro se mide en 10 puntos en cada fotografía (100 puntos en total).
Ejemplos de la estructura en sección transversal de la fibra incluyen un solo hilo compuesto por un tipo de polímero o una fibra compuesta de tipo núcleo en envoltura, tipo isla-mar, o tipo lado a lado. Son preferibles las fibras compuestas, en las que se usa un material de refuerzo para el componente del núcleo, y se usa una aleación de un sustrato y un material de refuerzo para el componente de envoltura a la luz de mantener la resistencia del material en la purificación de sangre; son preferibles las fibras compuestas del tipo isla-mar de múltiples núcleos, en las que se utiliza tereftalato de polietileno para el componente de mar a la luz de las propiedades de hilado; y son preferibles las fibras compuestas del tipo isla-mar, en las que se utiliza un material de refuerzo para el componente de isla y una aleación de un sustrato y un material de refuerzo para el componente de mar. Además, es preferible que el material de refuerzo sea polipropileno y el sustrato sea poliestireno o un derivado del mismo.
Entre los materiales para la purificación de sangre en las formas mencionadas anteriormente, se pueden producir tejido de punto, fieltro y malla mediante un método conocido utilizando fibras como materia prima. Ejemplos de métodos de producción de fieltro incluyen un método húmedo, un método de cardado, un método de tendido al aire, un método de unión por hilado, y un método de fusión por soplado. Ejemplos de métodos para producir tejido de punto y malla incluyen un método de tejido liso y un método de tricotaje circular. En particular, el tejido de punto producido mediante un método de tricotaje circular es preferible a la luz de un mayor peso de carga por unidad de volumen y carga en un aparato para purificación de sangre.
Aquí, la relación de apertura del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto es preferiblemente del 0,1 al 30,0 %, más preferiblemente del 1,0 al 30,0 %, particularmente, preferiblemente del 7,0 al 15,0 %, ya que el tejido de punto cuya relación de apertura es demasiado grande hace que la fibra se deshaga, complica la trayectoria de flujo, y genera una pérdida de presión en la purificación de la sangre, y ya que el tejido cuya relación de apertura es demasiado pequeña se obstruye con componentes de proteínas y de los corpúsculos sanguíneos en la sangre, aumenta la presión y, por lo tanto, no es adecuado para la purificación de sangre. El límite inferior de la relación de apertura es preferiblemente del 0,1 % o más, más preferiblemente del 1 % o más, particularmente preferiblemente del 7,0 % o más. El límite superior de la relación de apertura es preferiblemente del 30,0 % o menos, más preferiblemente del 15,0 % o menos. Cualquier límite inferior preferible puede combinarse con cualquier límite superior preferible.
El término "pérdida de presión" significa una diferencia de presión entre una presión aplicada a la sangre para hacer pasar la sangre perpendicularmente a través del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto, y una presión aplicada a la sangre que ha pasado a través del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto. Específicamente, se permite que la sangre fluya a través del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto, se miden cada una de la presión de entrada y la presión de salida, y un valor obtenido al restar el valor de la presión de salida del valor de la presión de entrada es la pérdida de presión.
La purificación de sangre plantea la preocupación de que la generación de una pérdida de presión pueda aumentar la presión en la purificación de sangre y, por esta razón, el valor de pérdida de presión es preferiblemente 50 mmHg o menos, más preferiblemente 30 mmHg o menos, particularmente preferiblemente 10 mmHg o menos, en el que el valor de pérdida de presión se obtiene restando el valor de presión de salida del valor de presión de entrada, en el que se permite que la sangre pase a 100 ml/min a través del aparato para purificación de sangre que se carga con el material para purificación de sangre en forma de una tela de punto.
La pérdida de presión del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto se puede medir laminando capas del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto y permitiendo que sangre simulada pase a través del laminado perpendicularmente. A este respecto, la sangre simulada se refiere a una solución ajustada para tener la misma velocidad de cizallamiento que la sangre humana, y los ejemplos de sangre simulada incluyen una solución acuosa de glicerina al 50 % en peso. A continuación se describirá un método de medición específico. En primer lugar, se laminan capas del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto en un recipiente que tiene una entrada y una salida en la parte superior e inferior. El material para purificación de sangre en forma de tejido de punto se ajusta para que tenga una densidad de carga de 0,30 g/cm3 en el recipiente. A continuación, se permite que la sangre simulada pase a través del recipiente a un caudal dado, y se miden la presión de entrada y la presión de salida. A continuación, se puede determinar una pérdida de presión restando el valor de presión de salida del valor de presión de entrada. El caudal (ml/min) de sangre simulada en la medición se ajusta basándose en 100 ml/min por 145 cm3 de volumen del recipiente, teniendo en cuenta la práctica clínica de la purificación de sangre. Con un recipiente que tiene un volumen de, por ejemplo, 5 cm3, se realiza una medición con el caudal ajustado a 100 ml/min/145 cm3x 5 cm3 = 3,4 ml/min. En la figura 2 se muestra una vista esquemática de un circuito y un dispositivo utilizados en una prueba de medición de pérdida de presión. En la figura 2, la sangre simulada o la sangre humana 5 que está lista para pasar a través de una columna 4 se succiona utilizando una bomba 10 y se deja pasar a través de la columna 4. En este momento, se utilizan un dispositivo de medición de presión de entrada 8 y un dispositivo de medición de presión de salida 9 para medir las presiones respectivas para determinar así una pérdida de presión. La sangre simulada o la sangre humana 5 que está lista para pasar a través de la columna se mantiene en un baño de agua a temperatura constante 11 a una temperatura constante de 37 °C. Además, un baño de agua a temperatura constante 11 se mantiene a temperatura constante usando un calentador 12. Para un circuito 7, se puede usar un circuito de sangre disponible comercialmente.
La densidad de carga significa un peso en seco (g) del material para purificación de sangre en forma de un tejido de punto por unidad de volumen (cm3) del material para purificación de sangre en forma de un tejido de punto cargado en un recipiente. Por ejemplo, 1 g de peso en seco del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto cargado en un recipiente que tiene un volumen de 1 cm3 tiene una densidad de carga de 1 g/cm3.
La relación de apertura significa una relación de las porciones de apertura con respecto a la suma de las porciones de apertura (3 en la figura 1) y las porciones sin apertura (2 en la figura 1) en el material para purificación de sangre en forma de un tejido de punto, y es un valor obtenido por procesamiento de imágenes. Específicamente, la relación de apertura se calcula utilizando los siguientes procedimientos.
1. El material para purificación de sangre en forma de tejido de punto se fotografía con un microscopio óptico con una relación de aumento de 10x.
2. Se inicia un software de edición de imágenes (por ejemplo, "Photoshop Elements 14" disponible en Adobe Inc.) y se realizan las siguientes operaciones en este orden.
(1) Se abre un archivo de una imagen fotografiada con un microscopio óptico.
(2) Una parte cuya relación de apertura debe determinarse se recorta a 512 píxeles x 512 píxeles (262144 píxeles).
(3) Utilizando iluminación para el ajuste de la imagen, se realizan correcciones en las porciones de apertura y las porciones sin apertura que muestran las porciones del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto en la imagen ("Aclarar sombra" y "Contraste de tonos medios" en Sombra/Resaltar se ajustan al 100 % respectivamente; el "Contraste" en "Brillo/Contraste" se ajusta a 100; y el "Brillo" se ajusta a 10). (4) Si las partes de las porciones de apertura y las porciones del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto (porciones sin apertura) no están corregidas, las partes no corregidas de las porciones de apertura y las partes no corregidas de las porciones del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto se pintan en blanco y negro respectivamente usando la herramienta Pincel en el menú de dibujo. (5) La imagen se binariza corrigiendo el tono de color en el filtro en dos gradaciones. El valor se corrige en comparación con la imagen que aún no se ha corregido en dos gradaciones. Las porciones negras y las porciones blancas se hacen como las porciones de apertura y las porciones del material para purificación de sangre en forma de tejido de punto (porciones sin apertura), respectivamente.
(6) Se abre el histograma de la ventana y la relación entre las porciones negras y las porciones completas se considera una relación de apertura (%).
El término "Purificación de sangre" significa un estado en el que se ha eliminado al menos un componente sanguíneo por separación de la sangre mediante al menos una operación de adsorción, diálisis o inactivación usando un material para purificación de sangre.
El término "Componentes sanguíneos" se refiere a componentes que constituyen la sangre, y ejemplos de los mismos incluyen factores humorales en la sangre y células en la sangre. Los componentes sanguíneos que se eliminarán por separación de la sangre mediante purificación de sangre no se limitan a componentes particulares. Es preferible que se eliminen los factores humorales de la sangre, y es más preferible que los factores humorales de la sangre y las células de la sangre se eliminen simultáneamente.
El modo de purificación de la sangre de los componentes sanguíneos no se limita a uno en particular, y en la purificación de la sangre de factores humorales de la sangre, los factores humorales se eliminan preferiblemente de la sangre mediante interacción electrostática o unión de hidrógeno con el uno o más grupos amida y el uno o más grupos amino en el vehículo insoluble en agua incluido en el material para purificación de sangre y por interacción hidrófoba con el sustrato. Además, en la purificación de la sangre de las células de la sangre, las células se eliminan preferiblemente por interacción electrostática con el uno o más grupos amino porque las células de la sangre generalmente tienen carga eléctrica negativa.
Los "factores humorales en sangre" significan componentes contenidos en la sangre. Ejemplos específicos de factores humorales incluyen: metales tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, manganeso, hierro y cobalto, e iones de los mismos; fósforo e iones del mismo; proteínas tales como urea, (p2-microglobulina, citocinas, IgE, e IgG; células tales como eritrocitos, linfocitos, granulocitos, monocitos y plaquetas; polisacáridos tales como lipopolisacáridos (LPS); virus tal como virus de influenza y virus del VIH; y bacterias tales como Staphylococcus aureus. Entre estos, los metales que tienen una estructura que interactúa con el uno o más grupos amida y el uno o más grupos amino e iones de los metales, fósforo e iones de los mismos, proteínas tales como urea y citocinas, y polisacáridos, son preferibles generalmente como sujetos de purificación de sangre. Además, las citocinas son más preferibles con el fin de tratar enfermedades inflamatorias.
El término "Células en la sangre" significa células contenidas en la sangre, y los ejemplos de células incluyen componentes leucocitarios tales como granulocitos, monocitos, neutrófilos y eosinófilos; eritrocitos; y plaquetas. Los componentes leucocitarios se eliminan preferiblemente con el fin de tratar enfermedades inflamatorias. Entre estos, los complejos plaquetarios activados por leucocitos activados se eliminan preferiblemente, y los leucocitos activados y los complejos plaquetarios activados por leucocitos activados se eliminan de manera particularmente preferida.
El término "leucocitos activados" significa leucocitos que son causados por citocinas, LPS, y similares, para liberar citocinas, oxígeno activo o similares, y los ejemplos de leucocitos activados incluyen granulocitos activados y monocitos activados. El grado de activación puede determinarse midiendo la cantidad de oxígeno activado liberado por los leucocitos activados o midiendo la expresión de antígenos de superficie mediante citometría de flujo y similares.
El término "plaquetas activadas" significa plaquetas que son causadas por citocinas, LPS, y similares, para liberar citocinas, oxígeno activo, o similares.
El término "complejos plaquetarios activados por leucocitos activados" no se limita a los particulares en la medida en que son complejos en los que un leucocito activado y una plaqueta activada están unidos entre sí, y ejemplos de los mismos incluyen complejos plaquetarios activados por granulocitos activados y complejos plaquetarios activados por monocitos activados. Para el tratamiento de pacientes con una enfermedad inflamatoria, se considera necesario eliminar los complejos plaquetarios activados por leucocitos activados que se consideran directamente relacionados con la patología a través de la fagocitosis en los propios tejidos y la liberación de citocinas.
"Citocinas" se refiere a un grupo de proteínas que, a través de un estímulo tal como una infección o un traumatismo, se producen a partir de diversas células, tales como células inmunocompetentes, se liberan extracelularmente, y se dejan actuar, y ejemplos de citocinas incluyen interferón-a, interferón-p, interferón-Y, interleucina-1 a interleucina-15, factor de necrosis tumoral a, factor de necrosis tumoral p, caja del grupo de alta movilidad 1, eritropoyetina y factores quimiotácticos de monocitos.
El material para purificación de sangre de acuerdo con la presente realización se usa preferiblemente para la eliminación de citocinas, más preferiblemente se usa para la eliminación de interleucina-1p, interleucina-6, interleucina-8, o la caja del grupo de alta movilidad 1. Además, el material para purificación de sangre de acuerdo con la presente realización se usa más preferiblemente para la eliminación de citocinas y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados, aún más preferiblemente se usa para la eliminación de citocinas, leucocitos activados y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados, aún más preferiblemente se usa para la eliminación de citocinas seleccionadas del grupo que consiste en interleucina-1p, interleucina-6, interleucina-8 y la caja del grupo de alta movilidad 1, y para la eliminación de leucocitos activados y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados.
El término "enfermedad inflamatoria" se refiere colectivamente a una enfermedad que inicia una reacción inflamatoria en el cuerpo, y una enfermedad inflamatoria que puede tratarse no se limita a una en particular. Ejemplos de enfermedades inflamatorias incluyen lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide maligna, esclerosis múltiple, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, hepatitis inducida por fármacos, hepatitis alcohólica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, septicemia (por ejemplo, septicemia derivada de bacterias gramnegativas, septicemia derivada de bacterias grampositivas, septicemia con cultivo negativo, una septicemia fúngica), gripe, síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), lesión pulmonar aguda (LPA), pancreatitis, fibrosis pulmonar idiopática (FPI), enteritis inflamatoria (por ejemplo, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn), transfusión de una preparación sanguínea, trasplante de órganos, daño por reperfusión causado por trasplante de órganos, colecistitis, colangitis, o incompatibilidad de grupos sanguíneos del recién nacido, y similares. Entre las enfermedades inflamatorias, los sujetos preferibles son los de hepatitis inducida por fármacos, hepatitis alcohólica, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, septicemia (por ejemplo, septicemia derivada de bacterias gramnegativas, septicemia derivada de bacterias grampositivas, septicemia con cultivo negativo, y septicemia fúngica), gripe, síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), lesión pulmonar aguda (LPA), pancreatitis, y neumonía intersticial idiopática (IPG), que provocan la liberación de agentes causales en la sangre y particularmente puede esperarse que sean tratados eficazmente con purificación de sangre; y los sujetos más preferibles en particular son los de septicemia (por ejemplo, septicemia derivada de bacterias gramnegativas, septicemia derivada de bacterias grampositivas, septicemia con cultivo negativo, y septicemia fúngica), gripe, síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), lesión pulmonar aguda (LPA), fibrosis pulmonar idiopática (FPl), que son difíciles de tratar con fármacos en solitario y en los que están implicadas tanto citocinas como plaquetas activadas por leucocitos activados.
El término "adsorción" significa un estado en el que los factores humorales en la sangre se adhieren al material para purificación de sangre y no pueden liberarse fácilmente del material. Específicamente, la adsorción se refiere a un estado en el que los factores humorales en la sangre se adhieren al material para purificación de sangre a través de una fuerza intermolecular, tal como interacción electrostática, interacción hidrófoba, unión de hidrógeno, y la fuerza de van der Waals, aunque el modo de adsorción no se limita a los mismos.
El material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención se usa preferiblemente como un vehículo que se carga en un aparato para la purificación de sangre. En los casos en los que un aparato para purificación de sangre que usa el material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención se usa para la terapia de purificación de sangre como una columna para la circulación extracorpórea, se puede permitir que la sangre extraída del cuerpo pase directamente a través de la columna, o la columna se puede usar en combinación con una membrana de separación de plasma sanguíneo, y similares.
El aparato para purificación de sangre sólo necesita tener la forma de un recipiente que tenga una entrada y una salida para la sangre. Ejemplos del aparato incluyen un recipiente en forma de poste cilíndrico o un recipiente en forma de columna rectangular tal como un poste triangular, un poste cuadrado, un poste hexagonal o un poste octagonal. Los recipientes preferidos son un recipiente en el que se puede cargar un vehículo para la adsorción de componentes sanguíneos en forma de laminado, un recipiente en el que se puede cargar un vehículo para la adsorción de componentes sanguíneos en forma de rollo cilíndrico, y un recipiente cilíndrico de manera que se permita que la sangre fluya hacia el recipiente desde la periferia del cilindro y salga del recipiente.
El material para purificación de sangre se puede producir usando un método, por ejemplo, pero sin limitación, el siguiente método de producción.
Cuando se mezclan un material insoluble en agua que comprende un polímero y un material de refuerzo que comprende un polímero, se obtiene una mezcla de materiales del sustrato y el material de refuerzo, de tal manera que el sustrato y el material de refuerzo se calientan a una temperatura de transición vítrea o superior, se amasan (por ejemplo, se amasan por fusión utilizando una extrusora de amasado biaxial), y se adhieren entre sí (por ejemplo, mediante unión por contacto con una máquina de prensado o mediante hilado por fusión para proporcionar una estructura de isla-mar), o de tal manera que el sustrato se disuelve en un buen disolvente, el material de refuerzo se recubre con la solución de sustrato, y solo se evapora el disolvente. A continuación, la unión del sustrato y el ligando que están incluidos en la mezcla de materiales del sustrato y el material de refuerzo, que se obtiene mediante la operación mencionada anteriormente, se puede lograr una mezcla del material insoluble en agua que comprende un polímero y el material de refuerzo que comprende un polímero.
En cuanto a la producción de un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato, por ejemplo, se produce un sustrato unido con cloruro de carbamoílo añadiendo un sustrato a una solución de un ácido de Lewis (por ejemplo, cloruro de aluminio (III)) y cloruro de carbamoílo que tiene un grupo alquilo halogenado (por ejemplo, cloruro de N,N-bis(2-cloroetil carbamoílo) disuelto en un disolvente no polar (por ejemplo, diclorometano) y agitando el resultante. A continuación, el sustrato reaccionado se saca y se añade a una solución de un compuesto de amina (por ejemplo, tetraetilenpentaamina) disuelto en dimetilsulfóxido, por lo que se puede producir el material insoluble en agua.
El sustrato a utilizar puede ser cualquiera disponible comercialmente. A este respecto, el sustrato es preferiblemente uno formado en fibra, más preferiblemente una fibra que contiene poliestireno o un derivado del mismo. El poliestireno, o un derivado del mismo, se puede producir mediante un método conocido o un método similar. El material de refuerzo a utilizar puede ser cualquiera disponible comercialmente, y es preferiblemente polietileno o polipropileno.
Entre los materiales para la purificación de sangre representados por la Fórmula (II) mencionada anteriormente, se puede producir una forma amidametilada-aminada-fenilada (II-a) en la que A es un enlace urea o un enlace amida, por ejemplo, por reacción entre una forma amidametilada-aminada representada por la Fórmula (I) mencionada anteriormente y un derivado de benceno (III), como se muestra en el Esquema 1.
Figure imgf000026_0001
(en el que, cuando A es un enlace urea, A' representa un grupo isocianato; cuando A es un enlace amida, A' representa un grupo cloruro de ácido; y los otros símbolos son sinónimos de las definiciones mencionadas anteriormente).
El derivado de benceno (III) a utilizar para la reacción puede ser cualquiera disponible comercialmente.
Ejemplos de disolventes de reacción incluyen N,N-dimetilformamida, éter dietílico, dioxano, tetrahidrofurano y dimetilsulfóxido, y es preferible N,N-dimetilformamida o dimetilsulfóxido.
La temperatura de reacción es preferiblemente de 10 a 90 °C, más preferiblemente de 30 a 60 °C.
El tiempo de reacción es preferiblemente de 1 a 24 horas.
Una forma amidametilada-aminada representada por la Fórmula (I) mencionada anteriormente se puede producir, por ejemplo, por reacción entre una forma amida-metilada halogenada (V) y un derivado de amina (IV), como se muestra en el Esquema 2.
Figure imgf000026_0002
(en el que X y la línea ondulada son sinónimos de las definiciones mencionadas anteriormente).
El derivado de amina (IV) a usar para la reacción puede ser cualquiera disponible comercialmente.
Ejemplos de disolventes de reacción incluyen N,N-dimetilformamida, éter dietílico, dioxano, tetrahidrofurano y dimetilsulfóxido, y es preferible dimetilsulfóxido.
Ejemplos de catalizadores incluyen bases orgánicas tales como trietilamina o 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano; y bases inorgánicas tales como hidróxido de sodio. Se prefieren bases orgánicas tal como trietilamina.
La concentración de un catalizador en la solución de reacción es preferiblemente de 50 a 1000 mM, más preferiblemente de 300 a 700 mM.
La cantidad de líquido de reacción es preferiblemente de 5 a 1000 ml, más preferiblemente de 50 a 500 ml, con respecto a 1 g de la forma amida-metilada halogenada (V).
La temperatura de reacción es preferiblemente de 15 a 80 °C, más preferiblemente de 40 a 60 °C.
El tiempo de reacción es preferiblemente de 30 minutos a 24 horas, preferiblemente de 1 a 8 horas.
La forma amida-metilada halogenada (V) se puede producir, por ejemplo, introduciendo N-metilol-a-cloroacetamida (VI) en un sustrato (VII), como se muestra en el Esquema 3.
Figure imgf000027_0001
(en el que la línea ondulada es sinónimo de la definición mencionada anteriormente).
El sustrato (VII) y N-metilol-a-cloroacetamida (VI) pueden ser cada uno cualquiera disponible comercialmente. A este respecto, el sustrato (VII) es preferiblemente uno formado en fibra, más preferiblemente una fibra que contiene poliestireno o un derivado del mismo.
Ejemplos de disolventes de reacción incluyen nitrobenceno, nitropropano, clorobenceno, tolueno y xileno. Es preferible nitrobenceno o nitropropano.
Ejemplos de catalizadores incluyen ácidos de Lewis tales como ácido sulfúrico, ácido clorhídrico, ácido nítrico, aluminio halogenado (III) (por ejemplo, cloruro de aluminio (III)) y hierro halogenado (III) (por ejemplo, cloruro férrico (III)). Es preferible ácido sulfúrico o cloruro férrico (III).
La concentración de un catalizador en la solución de reacción es preferiblemente del 5 al 80 % en peso, más preferiblemente del 30 al 70 % en peso.
La temperatura de reacción es preferiblemente de 0 a 90 °C, más preferiblemente de 5 a 40 °C.
El tiempo de reacción es preferiblemente de 1 minuto a 120 horas, más preferiblemente de 5 minutos a 24 horas. Además, se puede añadir una solución en la que se disuelve paraformaldehído en la solución de reacción antes de añadir el sustrato (VII) a la solución de reacción. El disolvente en el que se disuelve el paraformaldehído no se limita a ninguno, y preferiblemente tiene la misma composición de disolvente que la de la solución de reacción. El tiempo desde la adición de una solución de paraformaldehído hasta la adición del sustrato (VII) es preferiblemente de 1 a 30 minutos, más preferiblemente de 1 a 5 minutos.
El contenido del grupo amino del material insoluble en agua incluido en el material para purificación de sangre se puede determinar en una etapa en la que solo se extrae el material insoluble en agua permitiendo que el material de refuerzo contenido en el material para purificación de sangre se disuelva en un disolvente en el que solo se puede disolver el material de refuerzo, se seca el material insoluble en agua, se mide el peso en seco, se intercambia iónicamente el grupo amino en el material insoluble en agua con ácido clorhídrico, y el material resultante se somete a valoración en retroceso con una solución acuosa de hidróxido de sodio. Se mide el peso del sólido y a continuación se seca calentando a 80 °C a presión atmosférica durante 24 horas. Se considera que el sólido está en un estado seco cuando el sólido restante experimenta una reducción de peso del 1 % en peso o menos en comparación con el peso del sólido antes del secado. Cuando la reducción de peso es superior al 1 % en peso, la etapa en la que el sólido se seca calentando a 80 °C a presión atmosférica durante 24 horas se puede repetir hasta que la reducción de peso sea inferior al 1 % en peso, de manera que el sólido pueda estar en estado seco. El material para purificación de sangre que no contiene material de refuerzo no requiere una operación para disolver un material de refuerzo en un disolvente.
El contenido del grupo amida del material insoluble en agua incluido en el material para purificación de sangre se puede determinar en una etapa en la que solo se extrae el material insoluble en agua permitiendo que el material de refuerzo contenido en el material para purificación de sangre se disuelva en un disolvente en el que solo se puede disolver el material de refuerzo, se seca el material insoluble en agua, se mide el peso en seco, se calientan el uno o más grupos amino en el material insoluble en agua en ácido clorhídrico a hidrolizar, el grupo amino generado se intercambia iónicamente con ácido clorhídrico, y el material resultante se somete a valoración en retroceso con una solución acuosa de hidróxido de sodio. El material para purificación de sangre que no contiene material de refuerzo no requiere una operación para disolver un material de refuerzo en un disolvente.
El contenido del grupo fenilo del material insoluble en agua incluido en el material para purificación de sangre se puede determinar en una etapa en la que solo se extrae el material insoluble en agua permitiendo que el material de refuerzo contenido en el material para purificación de sangre se disuelva en un disolvente en el que solo se puede disolver el material de refuerzo, se seca el material insoluble en agua, se mide el peso en seco, el grupo amino en el material insoluble en agua se calienta en ácido clorhídrico a hidrolizar, la cantidad del compuesto derivado del grupo fenilo contenido en el ácido clorhídrico se mide mediante 1H RMN, y la concentración del compuesto en el ácido clorhídrico se mide usando una curva de calibración hecha usando un patrón interno. El material para purificación de sangre que no contiene material de refuerzo no requiere una operación para disolver un material de refuerzo en un disolvente.
Además, la presente invención está caracterizada por que proporciona un aparato para purificación de sangre que incluye el material para purificación de sangre mencionado anteriormente.
El término "aparato para purificación de sangre" se refiere a un producto por el cual la sangre circula hacia y desde el exterior del cuerpo y en el que al menos una parte del producto incluye un material médico destinado a eliminar productos de desecho y sustancias nocivas de la sangre. Ejemplos del aparato incluyen un módulo para un riñón artificial, una columna de circulación extracorpórea, y similares.
Además, el aparato para purificación de sangre que incluye el material para purificación de sangre se puede usar de forma adecuada en aplicaciones de tratamiento de enfermedades inflamatorias. Cuando el aparato para purificación de sangre se utiliza para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, es preferible un método de circulación extracorpórea en el que el aparato para purificación de sangre que incluye el material para purificación de sangre se conecta con un paciente a través de un circuito sanguíneo, y el fluido corporal extraído del paciente se deja pasar a través de una columna de circulación extracorpórea de acuerdo con la presente invención, y se devuelve al paciente. El tiempo de procesamiento del fluido corporal y similares es preferiblemente continuo, más preferiblemente 4 horas o más, aún más preferiblemente 24 horas o más, a la luz de la inhibición de la inflamación que se induce adicionalmente por componentes sanguíneos.
El aparato para purificación de sangre que incluye el material para purificación de sangre puede usarse junto con otro método de procesamiento de fluidos corporales u otro aparato médico. Ejemplos de otros métodos de procesamiento de fluidos corporales y aparatos médicos incluyen intercambio de plasma, diálisis peritoneal, separadores de plasma, hemofiltros, corazones y pulmones artificiales, y ECMO.
Ejemplos de métodos para evaluar el rendimiento de purificación de sangre del material para purificación de sangre incluyen un método en el que las citocinas se disuelven en suero fetal bovino (en lo sucesivo en el presente documento denominado FBS), el material para purificación de sangre se impregna con el FBS, la cantidad de reducción en la concentración de citocinas en el FBS se evalúa después de la impregnación, y se calcula la tasa de adsorción. Como se describe en los documentos no relacionados con patentes 1 y 2, una citocina es una sustancia que se elimina preferiblemente de la sangre para mejorar una patología. Por lo tanto, se puede juzgar que el rendimiento de la purificación de sangre es mayor a medida que la cantidad de reducción en la concentración se hace mayor por la impregnación. Ejemplos de citocinas incluyen interleucina-1p, interleucina-6, interleucina-8, proteína del grupo de alta movilidad 1, y factor de necrosis tumoral p. La interleucina-6 y la interleucina-8 son más preferibles en vista de ser biomarcadores típicos en la práctica del tratamiento de enfermedades inflamatorias.
Además, ejemplos de métodos para evaluar el rendimiento de purificación de sangre del material para purificación de sangre incluyen un método en el que se evalúa una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un monocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Ejemplos de métodos para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un monocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados incluyen un método en el que se carga un recipiente que tiene una entrada y una salida con el material para purificación de sangre, un líquido que contiene un granulocito activado, un monocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados se deja pasar a través del recipiente, y la tasa de eliminación se calcula a partir de un cambio entre la concentración en la entrada y en la salida.
Se puede considerar que una tasa de eliminación del 6 % o más es una eliminación significativa en el sentido de que un granulocito activado, un monocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados y un complejo plaquetario activado por monocitos activados son células e implican la dispersión de la medición de la tasa de eliminación.
La concentración de un complejo plaquetario activado por leucocitos activados se puede medir, por ejemplo, de tal manera que un reactivo de detección de activación que esté unido específicamente a una plaqueta activada (un reactivo de unión a plaquetas activadas) y un reactivo de detección de activación que está unido específicamente a un leucocito activado (un reactivo de detección de leucocitos activados/un reactivo de detección de granulocitos activados/un reactivo de detección de monocitos activados) se permite que reaccionen con la fracción de leucocitos derivada de sangre periférica, y se mide la fracción del corpúsculo sanguíneo unido a ambos reactivos.
Un reactivo de detección de plaquetas activadas no se une a un leucocito desactivado ni a un leucocito activado y tiene la capacidad de unirse con una plaqueta activada, y la plaqueta activada se detecta usando CD62P (ficha técnica del anticuerpo anti-CD62P humano (P-selectina), BioLegend.) conocido como un marcador de superficie celular específico para una plaqueta activada. Un reactivo de detección de leucocitos activados no se une a una plaqueta desactivada ni a un leucocito activado y tiene la capacidad de unirse con un leucocito activado, y los ejemplos del reactivo de detección incluyen un anticuerpo específico para un componente leucocitario deseado y un anticuerpo contra un marcador de superficie celular común a un componente leucocitario deseado. Como reactivo de detección para un granulocito activado y un monocito activado, por ejemplo, puede usarse un anticuerpo anti-CD11b. Entre estos, el uso de un anticuerpo anti-CD11b activado que puede detectar específicamente una conformación activada hace posible detectar específicamente un granulocito activado y un monocito activado (ficha técnica del anticuerpo anti-CD11b (activado) humano, BioLegend). Puede usarse un anticuerpo anti-CD45 para detectar leucocitos, puede usarse un anticuerpo anti-CD66b en una célula CD45 positiva para detectar granulocitos, y puede usarse un anticuerpo anti-CD 14 en una célula CD45 positiva para detectar monocitos. Para detectar linfocitos, se pueden utilizar un anticuerpo anti-CD4 y un anticuerpo anti-CD8, y también es posible que una población celular obtenida restando células CD66b positivas y células CD14 positivas de células c D45 positivas se considere como linfocitos.
Los reactivos de detección mencionados anteriormente tienen preferiblemente un índice impartido a los mismos para verificar la unión. Se puede seleccionar cualquier índice de acuerdo con un método de detección adoptado. Se utiliza un citómetro de flujo para la medición desde un punto de vista de fácil operación o cuantitativo, en cuyo caso, un reactivo de detección está marcado con fluorescencia. El marcador fluorescente no se limita a uno en particular y, por ejemplo, se puede adoptar el marcaje con FITC (isotiocianato de fluoresceína) o PE (R-ficoeritrina). El reactivo de detección de leucocitos activado y el reactivo de detección de plaquetas activado están marcados con diferentes sustancias fluorescentes. Estos reactivos de detección marcados se pueden producir mediante un método convencional, y también están disponibles comercialmente.
La reacción entre una fracción de leucocitos y un reactivo de detección se ajusta de forma adecuada de acuerdo con el reactivo de detección adoptado. Cuando el reactivo de detección es un anticuerpo, el reactivo sólo debe someterse a una inmunorreacción habitual. El complejo plaquetario activado por leucocitos activados y el líquido de reacción del reactivo de detección no se limitan a unos en particular y, si se desea, pueden contener azida de sodio o formaldehído en una cantidad eficaz para inhibir la activación de los componentes celulares durante la reacción de detección. La temperatura de reacción no está limitada en particular y es preferiblemente de aproximadamente 4 °C con vistas a inhibir la activación de los componentes celulares.
Ejemplos
El material para purificación de sangre de acuerdo con la presente invención se describirá ahora específicamente con referencia a los Ejemplos, pero la presente invención no se limita a estos ejemplos.
En los ejemplos, % p significa % en peso. M representa mol/l, y mM representa mmol/l. A menos que se especifique de otro modo, el peso de un tejido de punto, un material para purificación de sangre, o un material insoluble en agua es un peso en seco. Una fineza total se refiere a un peso (gramo) por 10000 m de fibra, y se indica como dtex. Se realizó una medición de pH en la valoración ácido-base sumergiendo el electrodo de un medidor de pH de sobremesa, F-74BW (con un electrodo ToupH estándar, 9615S-10D) fabricado por Horiba, Ltd. en una solución a 25 °C. Antes de la medición, se realizó una calibración utilizando una solución estándar de fosfato neutro (una solución acuosa de fosfato monopotásico (3,40 g/l), fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) y una solución estándar de ftalato (una solución acuosa de hidrogenoftalato de potasio (10,21 g/l), fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Se utilizó un espectrofotómetro ultravioleta y visible (UV-1280) fabricado por Shimadzu Corporation para medir la absorbancia a temperatura ambiente. Antes de la medición de la absorbancia, se realizó una medición en blanco preliminarmente y se restaron los picos en el fondo. Se midió un espectro de absorción infrarroja de reflexión total utilizando un FT-IR Nicolet iS5 (con un accesorio iD5 Diamond ATR) fabricado por Thermo Fisher Scientific Inc. Antes de la medición de la espectroscopía infrarroja, se realizó una medición en blanco preliminarmente y se restaron los picos en el fondo.
(Preparación de la Fibra A)
Se obtuvo una fibra compuesta isla-mar de 16 islas descrita en la descripción del documento de patente 1 (JP 4591974 B2) (en lo sucesivo en el presente documento denominada Fibra A) utilizando los siguientes componentes.
Componente de isla: polipropileno
Componente de mar (relación en peso): poliestireno:polipropileno = 92:8
Relación de compuesto (relación en peso): componente de isla:componente de mar = 50:50
Fineza total: 160 dtex
Diámetro de hilo individual: 20 pm
(Preparación de la Fibra B)
Se obtuvo una fibra compuesta isla-mar de 32 islas descrita en la descripción del documento de patente 3 (JP 5293599 B2), en la que las islas eran adicionalmente compuestos núcleo-envoltura, (en lo sucesivo en el presente documento denominada Fibra B) utilizando los siguientes componentes en condiciones de fabricación de hilo, incluida una velocidad de hilado de 800 m/minuto.
Componente del núcleo de la isla: polipropileno
Componente de la envoltura de la isla: poliestireno y polipropileno amasados en una relación del 90 % en peso y del 10 % en peso respectivamente
Componente de mar: "copoliéster cuya unidad de repetición principal es una unidad de tereftalato de etileno y que contiene el 3 % en peso de ácido 5-sulfoisoftálico de sodio como componente de copolimerización" (en lo sucesivo en el presente documento denominado PETIFA)
Relación de compuesto (relación en peso): componente del núcleo de la isla:componente de la envoltura de la isla:componente de mar = 41,5:33,5:25
Fineza total: 200 dtex
(Preparación del Tejido de punto A)
Como se describe en la descripción del documento de patente 1, se usó la Fibra A para preparar un tejido tricotado circularmente A que tenía un peso en seco de 0,0081 g/cm2 y una densidad aparente de 0,37 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto A).
(Preparación del Tejido de punto B)
La Fibra B se hizo en un tricotaje circular usando una máquina de tricotaje circular (nombre de la máquina: una máquina de tricotaje circular, MR-1, fabricada por Maruzen Sangyo Co., Ltd.), y se impregnó adicionalmente con una solución acuosa al 3 % en peso de hidróxido de sodio a 95 °C durante ocho horas para hidrolizar PETIFA del componente de mar. A continuación, el tejido se lavó con agua hasta que el tejido fue neutro. Posteriormente, el tejido se secó para preparar un tejido tricotado circularmente B cuya fibra núcleo-envoltura tenía un diámetro de hilo individual de 4,5 pm y que tenía un peso en seco de 0,0046 g/cm2 y una densidad aparente de 0,4 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto B).
(Preparación del Tejido de punto C)
Se usó la Fibra A y la escala de ajuste de densidad de una máquina de tricotaje circular (nombre de la máquina: una máquina de tricotaje circular, MR-1, fabricada por Maruzen Sangyo Co., Ltd.) se ajustó para preparar un tejido tricotado circularmente C que tenía un peso por cm2 de 0,0210 g/cm2 y una densidad aparente de 0,51 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto C). (Preparación del Tejido de punto D)
Se usó la Fibra A y la escala de ajuste de densidad de una máquina de tricotaje circular (nombre de la máquina: una máquina de tricotaje circular, MR-1, fabricada por Maruzen Sangyo Co., Ltd.) se ajustó para preparar un tejido tricotado circularmente D que tenía un peso por cm2 de 0,0153 g/cm2 y una densidad aparente de 0,42 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto D).
(Preparación del Tejido de punto E)
Se usó la Fibra A y la escala de ajuste de densidad de una máquina de tricotaje circular (nombre de la máquina: una máquina de tricotaje circular, MR-1, fabricada por Maruzen Sangyo Co., Ltd.) se ajustó para preparar un tejido tricotado circularmente E que tenía un peso por cm2 de 0,0063 g/cm2 y una densidad aparente de 0,28 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto E).
(Preparación del Tejido de punto E)
Se usó la Fibra A y la escala de ajuste de densidad de una máquina de tricotaje circular (nombre de la máquina: una máquina de tricotaje circular, MR-1, fabricada por Maruzen Sangyo Co., Ltd.) se ajustó para preparar un tejido tricotado circularmente F que tenía un peso por cm2 de 0,0039 g/cm2 y una densidad aparente de 0,22 g/cm3 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto F).
(Preparación del Material 1 para purificación de sangre)
Como se describe en la descripción del documento de patente 1 (JP 4591974 B2), se sumergieron 50 g de Tejido de punto A en una mezcla en solución de 50 g de N-metilol-a-cloroacetamida (en lo sucesivo en el presente documento denominada NMCA), 400 g de nitrobenceno, 400 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y 0,85 g de paraformaldehído (en lo sucesivo en el presente documento denominado PFA), y el resultante se dejó reaccionar a 4 °C durante una hora. La fibra reaccionada se sumergió en 5 l de 0 °C de hielo-agua para terminar la reacción, y a continuación se lavó con agua. El nitrobenceno unido a la fibra se eliminó por extracción con metanol para obtener un tejido de punto de poliestireno reticulado cloroacetamidametilado 1 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto AMPSt 1).
Se disolvió tetraetilenpentamina (en lo sucesivo en el presente documento denominada TEPA) en una cantidad de 1,5 g en 500 ml de dimetilsulfóxido (en lo sucesivo en el presente documento denominado DMSO). A la solución resultante, se le añadieron 20 g de Tejido de punto AMPSt 1 con agitación, y el resultante se dejó reaccionar a 25 °C durante seis horas. El Tejido de punto AMPSt 1 reaccionado se lavó con 500 ml de DMSO en un filtro de vidrio. Después del lavado, se añadieron 3,0 g de Tejido de punto AMPSt 1 a una solución 1,0 g de isocianato de p-clorofenilo disuelto en 150 ml de DMSO, y el resultante se dejó reaccionar a 25 °C durante una hora. Posteriormente, la fibra se lavó con DMSO y agua destilada, 60 ml cada vez, en un filtro de vidrio, y se lavó adicionalmente con agua destilada y una solución salina fisiológica, 3 l cada vez, para obtener un tejido de punto 1 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 1 para purificación de sangre). La existencia o ausencia de la unión de un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino al Material 1 para purificación de sangre se confirmó de acuerdo con si había algún pico derivado del grupo amida (1650 cm'1) y algún pico derivado del grupo amino (1540 cm-1) apareciendo en un espectro de absorción infrarrojo de reflexión total. La medición se realizó de tal manera que el Material 1 para purificación de sangre se dejó en reposo en un secador a 60 °C durante cuatro horas para que se secara y que el Material 1 seco se presionó contra el prisma de un espectrómetro infrarrojo.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 1 incluido en el Material 1 para purificación de sangre)
El contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 1 incluido en el Material 1 para purificación de sangre se determinó mediante valoración en retroceso ácido-base de la cantidad del grupo amino del Material insoluble en agua 1. En un matraz con forma de berenjena de 200 ml, se añadieron 5,0 g de Material 1 para purificación de sangre y 100 ml de tolueno, y el resultante se calentó a reflujo a 150 °C durante 24 horas para eliminar así el polipropileno que se había añadido como material de refuerzo. Después del calentamiento a reflujo, la solución se añadió rápidamente a 2 l de tolueno calentado a 100 °C y se lavó. Solo el componente insoluble se recogió mediante filtración a través de un filtro de papel, se lavó con metanol, y se dejó en reposo en un secador a 80 °C durante 48 horas para obtener el Material insoluble en agua 1. A continuación, en un recipiente de polipropileno, se añadieron 1,0 g de Material insoluble en agua 1 y 50 ml de una solución acuosa 6 M de hidróxido de sodio, el resultante se agitó durante 30 minutos, y el Material insoluble en agua 1 se recogió por filtración usando un filtro de papel. A continuación, a 50 ml de agua de intercambio iónico, se le añadió el Material insoluble en agua 1 filtrado, y el resultante se agitó durante 30 minutos y se filtró usando un filtro de papel. El Material insoluble en agua 1 se añadió a agua de intercambio iónico hasta que el agua de intercambio iónico con el Material insoluble en agua 1 añadido a la misma tuvo un pH de 7, y el resultante se filtró, cuya adición y filtración se repitieron para obtener el Material insoluble en agua 1 que se desaló. El Material insoluble en agua 1 desalado se dejó en reposo a 80 °C en condiciones de presión normal durante 48 horas, se añadieron 1,0 g del Material insoluble en agua 1 y 30 ml de ácido clorhídrico 0,1 M a un recipiente de polipropileno, y el resultante se agitó durante diez minutos. Después de la agitación, se extrajeron 5 ml de la solución en solitario y se transfirieron a un recipiente de polipropileno. A continuación, a la solución obtenida, se le añadieron gota a gota 0,1 ml de una solución acuosa 0,1 M de hidróxido de sodio. Después de la adición gota a gota, la mezcla resultante se agitó durante diez minutos, y el pH de la solución se midió. La misma operación de adición gota a gota, agitación de diez minutos, y medición del pH se repitió 100 veces. La cantidad de la solución acuosa de hidróxido de sodio añadida gota a gota hasta que el pH de la solución excedió 8,5 se consideró un título por 1 g. El contenido del uno o más grupos amino por 1 g de peso en seco del Material insoluble en agua 1 se calculó usando el título por 1 g y la siguiente Ecuación 1.
Contenido de grupo amino por 1 g de peso en seco de Material insoluble en agua (mmol/g) = {cantidad de líquido de ácido clorhídrico 0,1 M añadida (30 ml)/cantidad líquida de ácido clorhídrico extraída (5 ml)} x Título por 1 g (ml) x concentración de solución acuosa de hidróxido de sodio (0,1 M) ■■■ Ecuación 1
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 1 incluido en el Material 1 para purificación de sangre)
El contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 1 incluido en el Material 1 para purificación de sangre se determinó hidrolizando el grupo amida en el Material insoluble en agua 1 para generar así el grupo amino y midiendo la cantidad del grupo amino generado por valoración en retroceso ácido-base. El Material insoluble en agua 1 se obtuvo a partir del Material 1 para purificación de sangre de la misma manera que en la Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 1. A continuación, se añadieron 1,0 g del Material insoluble en agua 1 y 100 ml de ácido clorhídrico 6 M a un matraz con forma de berenjena de 200 ml y se calentaron a reflujo 130 °C durante 24 horas. Después del calentamiento a reflujo, el Material insoluble en agua 1 se recogió por filtración usando un filtro de papel para obtener el Material insoluble en agua 1 que se descompuso. A continuación, en un recipiente de polipropileno, se añadieron toda la cantidad del Material insoluble en agua 1 descompuesto resultante y 50 ml de una solución acuosa 6 M de hidróxido de sodio, el resultante se agitó durante 30 minutos, y se filtró usando un filtro de papel. A continuación, a 50 ml de agua de intercambio iónico, se le añadió el Material insoluble en agua 1 descompuesto filtrado, y el resultante se agitó durante 30 minutos y se filtró usando un filtro de papel. El Material insoluble en agua 1 se añadió a agua de intercambio iónico hasta que el agita de intercambio iónico con el Material insoluble en agua 1 añadido a la misma tuvo un pH de 7, y el resultante se filtró, cuya adición y filtración se repitieron, y el Material insoluble en agua 1 se dejó en reposo a 80 °C en condiciones de presión normal durante 48 horas. A continuación, se añadieron toda la cantidad del Material insoluble en agua 1 y 60 ml de ácido clorhídrico 0,1 M en un recipiente de polipropileno, seguido de agitación durante diez minutos. Después de la agitación, se extrajeron 5 ml de la solución en solitario y se transfirieron a un recipiente de polipropileno. A continuación, a la solución obtenida, se le añadieron gota a gota 0,1 ml de una solución acuosa 0,1 M de hidróxido de sodio. Después de la adición gota a gota, la mezcla resultante se agitó durante diez minutos, y el pH de la solución se midió. La misma operación de adición gota a gota, agitación de diez minutos, y medición del pH se repitió 100 veces. La cantidad de la solución acuosa de hidróxido de sodio añadida gota a gota hasta que el pH de la solución excedió 8,5 se consideró un título por 1 g. El contenido del uno o más grupos amida por 1 g de peso en seco del Material insoluble en agua 1 se calculó usando el título por 1 g y la siguiente Ecuación 2.
Contenido de grupo amida por 1 g de peso en seco de Material insoluble en agua (mmol/g) = {cantidad de líquido de ácido clorhídrico 0,1 M añadida (60 ml)/cantidad líquida de ácido clorhídrico extraída (5 ml)} x Título por 1 g (ml) x concentración de solución acuosa de hidróxido de sodio (0,1 M) ■■■ Ecuación 2
(Preparación del Material 2 para purificación de sangre)
Como se describe en la descripción del documento de patente 2 (JP 5824873 B2), se hicieron reaccionar 50 g de Tejido de punto A con una mezcla en solución de 50 g de NMCA, 400 g de nitrobenceno, 400 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y 0,85 g de PFA a 20 °C durante una hora. A continuación, la fibra se lavó con nitrobenceno y se puso en agua para terminar así la reacción. Posteriormente, la fibra se lavó de nuevo con agua caliente para obtener así un tejido de punto de poliestireno reticulado cloroacetamidametilado 2 (en lo sucesivo en el presente documento denominado Tejido de punto AMPSt 2).
Se disolvió TEPA en una cantidad de 0,9 g en 50 ml de dimetilsulfóxido y, a esta solución, se le añadió 1 g de Tejido de punto AMPSt 2 con agitación. La reacción se realizó a 25 °C durante seis horas. A continuación, el Tejido de punto AMPSt 2 se lavó en un filtro de vidrio usando 200 ml de N,N-dimetilformamida (en lo sucesivo en el presente documento denominada DMF), y se añadió a una solución de 1 g de isocianato de p-clorofenilo disuelto en 50 ml de DMF. El resultante se dejó reaccionar a 25 °C durante una hora. Posteriormente, el resultante se lavó con 200 ml de DMF y 200 ml de agua destilada en un filtro de vidrio para obtener el Tejido de punto 2 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 2 para purificación de sangre).
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 2 incluido en el Material 2 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 2 incluido en el Material 2 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 2 incluido en el Material 2 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 2 incluido en el Material 2 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 3 para purificación de sangre)
Se añadió NMCA en una cantidad de 2,3 g a una mezcla en solución de 31 g de nitrobenceno y 31 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y la mezcla resultante se agitó a 10 °C hasta que NMCA se disolvió en la solución, para obtener una solución de NMCA. A continuación, se añadieron 0,2 g de PFA a 2,0 g de nitrobenceno y 2,0 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y la mezcla resultante se agitó a 20 °C hasta que el PFA se disolvió en la solución, para obtener una solución de PFA. La solución de PFA en una cantidad de 4,2 g se enfrió a 5 °C y se mezcló con 64,3 g de la solución de NMCA, la mezcla resultante se agitó durante cinco minutos, y se añadió 1 g del Tejido de punto B a la mezcla a impregnar con la mezcla durante dos horas. El Tejido de punto B impregnado se sumergió en 200 ml de nitrobenceno a 0 °C para terminar así la reacción, y el nitrobenceno unido al Tejido se eliminó por extracción con metanol.
Se disolvieron TEPA en una cantidad de 0,16 g y trietilamina en una cantidad de 2,1 g en 51 g de DMSO y, a esta solución, se le añadió tal cual el Tejido de punto B obtenido después de la eliminación por extracción con metal. El Tejido se impregnó con la solución a 40 °C durante tres horas. El Tejido de punto se recogió en un filtro de vidrio por filtración, se lavó con 500 ml de DMSO, 3 l de agua destilada, y solución salina fisiológica para obtener el Tejido de punto 3, que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 3 para purificación de sangre).
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 3 incluido en el Material 3 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 3 incluido en el Material 3 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 3 incluido en el Material 3 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 3 incluido en el Material 3 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 4 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 4 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 4 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 3 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,25 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 4 incluido en el Material 4 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 4 incluido en el Material 4 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 4 incluido en el Material 4 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 4 incluido en el Material 4 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 5 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 5 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 5 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 3 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,82 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 5 incluido en el Material 5 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 5 incluido en el Material 5 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 5 incluido en el Material 5 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 5 incluido en el Material 5 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 6 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 6 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 6 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 3 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 3,28 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 6 incluido en el Material 6 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 6 incluido en el Material 6 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 6 incluido en el Material 6 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 6 incluido en el Material 6 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 7 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 7 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 7 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 3 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 8,2 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 7 incluido en el Material 7 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 7 incluido en el Material 7 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 7 incluido en el Material 7 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 7 incluido en el Material 7 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 8 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 8 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 8 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 3 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de NMCA se cambió a 4,6 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 8 incluido en el Material 8 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 8 incluido en el Material 8 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 8 incluido en el Material 8 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 8 incluido en el Material 8 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 9 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 9 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 9 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,25 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 9 incluido en el Material 9 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 9 incluido en el Material 9 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 9 incluido en el Material 9 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 9 incluido en el Material 9 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 10 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 10 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 10 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,82 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 10 incluido en el Material 10 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 10 incluido en el Material 10 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 10 incluido en el Material 10 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 10 incluido en el Material 10 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 11 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 11 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 11 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 3,3 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 11 incluido en el Material 11 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 11 incluido en el Material 11 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 11 incluido en el Material 11 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 11 incluido en el Material 11 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 12 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 12 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 12 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 8,2 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 12 incluido en el Material 12 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 12 incluido en el Material 12 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 12 incluido en el Material 12 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 12 incluido en el Material 12 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 13 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 13 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 13 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre, excepto que el tiempo durante el cual el Tejido de punto B se impregnó con una mezcla en solución de la solución de NMCA y la solución de PFA se cambió a cuatro horas y que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,08 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 13 incluido en el Material 13 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 13 incluido en el Material 13 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 13 incluido en el Material 13 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 13 incluido en el Material 13 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 14 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 14 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 14 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,12 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 14 incluido en el Material 14 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 14 incluido en el Material 14 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 14 incluido en el Material 14 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 14 incluido en el Material 14 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 15 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 15 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 15 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,41 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en las Tablas 5, 6, y 10.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en las Tablas 5, 6, y 10.
(Medición del contenido del grupo fenilo del Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre)
El Material insoluble en agua 15 incluido en el Material 15 para purificación de sangre no experimentó una reacción en la que se introdujera un grupo fenilo y, por consiguiente, el contenido del grupo fenilo se consideró como 0 mmol/g. (Medición de la relación de apertura del Material 15 para purificación de sangre)
La relación de apertura del Material 15 para purificación de sangre se calculó de acuerdo con el siguiente método. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
1. El Material 15 para purificación de sangre se fotografió usando un microscopio óptico con una relación de aumento de 10x.
2. Se inició un software de edición de imágenes (por ejemplo, "Photoshop Elements 14" disponible en Adobe Inc.) y se realizaron las siguientes operaciones en este orden.
(1) Se abrió un archivo de una imagen fotografiada con un microscopio óptico.
(2) Una parte cuya relación de apertura debe determinarse se recortó a 512 píxeles x 512 píxeles (262144 píxeles).
(3) Utilizando iluminación para el ajuste de la imagen, se hicieron correcciones en las porciones de apertura y las porciones del Material 15 para purificación de sangre en la imagen ("Aclarar sombra" y "Contraste de tonos medios" en Sombra/Resaltar se ajustaron al 100 %; el "Contraste" en "Brillo/Contraste" se ajustó a 100; y el "Brillo" se ajustó a 10).
(4) Si las partes de las porciones de apertura y las porciones del Material 15 para purificación de sangre no se corrigieron, las partes sin corregir de las porciones de apertura y las partes sin corregir de las porciones de Material 15 para purificación de sangre se pintaron en blanco y negro respectivamente usando la herramienta Pincel en el menú de dibujo.
(5) La imagen se binarizó corrigiendo el tono de color en el filtro en dos gradaciones. El valor se corrigió en comparación con la imagen que aún no se había corregido en dos gradaciones. Las porciones negras y las porciones blancas se hicieron como las porciones de apertura y las porciones del Material 15 para purificación de sangre, respectivamente.
(6) Se abrió el histograma de la ventana y la relación entre las porciones negras y las porciones completas se consideró una relación de apertura (%).
(Preparación del Material 16 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 16 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 16 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,82 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 16 incluido en el Material 16 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 16 incluido en el Material 16 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 16 incluido en el Material 16 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 16 incluido en el Material 16 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 17 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 17 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 17 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 1,64 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 17 incluido en el Material 17 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 17 incluido en el Material 17 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 17 incluido en el Material 17 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 17 incluido en el Material 17 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 18 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 18 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 18 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 8 para purificación de sangre, excepto que el tiempo durante el cual el Tejido de punto B se impregnó con una mezcla en solución de la solución de NMCA y la solución de PFA se cambió a 24 horas y que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,04 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 18 incluido en el Material 18 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 18 incluido en el Material 18 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 18 incluido en el Material 18 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 18 incluido en el Material 18 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 19 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 19 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 19 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 18 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,12 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 19 incluido en el Material 19 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 19 incluido en el Material 19 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 19 incluido en el Material 19 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 19 incluido en el Material 19 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 20 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 20 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 20 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 18 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,41 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 20 incluido en el Material 20 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 20 incluido en el Material 20 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 20 incluido en el Material 20 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 20 incluido en el Material 20 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 21 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 21 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 21 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 18 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,82 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 21 incluido en el Material 21 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 21 incluido en el Material 21 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 21 incluido en el Material 21 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 21 incluido en el Material 21 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 22 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 22 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 22 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 18 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 1,64 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 22 incluido en el Material 22 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 22 incluido en el Material 22 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 22 incluido en el Material 22 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 22 incluido en el Material 22 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Preparación del Material 23 para purificación de sangre)
Se añadió NMCA en una cantidad de 4,6 g a una mezcla en solución de 31 g de nitrobenceno y 31 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y la mezcla resultante se agitó a 10 °C hasta que NMCA se disolvió en la solución, para obtener una solución de NMCA. A continuación, se añadieron 0,2 g de PFA a una mezcla en solución de 2,0 g de nitrobenceno y 2,0 g de ácido sulfúrico al 98 % en peso, y la mezcla resultante se agitó a 20 °C hasta que el PFA se disolvió en la solución, para obtener una solución de PFA. La solución de PFA en una cantidad de 4,2 g se enfrió a 5 °C y se mezcló con 64,3 g de la solución de NMCA, la mezcla resultante se agitó durante cinco minutos, se añadió 1 g del Tejido de punto B a la mezcla a impregnar con la mezcla durante cuatro horas. El Tejido de punto B impregnado se sumergió en 200 ml de nitrobenceno a 0 °C para terminar así la reacción, y el nitrobenceno unido al Tejido se eliminó por extracción con metanol.
Se disolvieron TEPA en una cantidad de 0,24 g y trietilamina en una cantidad de 2,1 g en 51 g de DMSO y, a esta solución, se le añadió tal cual el Tejido de punto B obtenido después de la eliminación por extracción con metal. El Tejido se impregnó con la solución a 40 °C durante tres horas. El Tejido de punto se recogió en un filtro de vidrio por filtración, y se lavó con 500 ml de DMSO.
A 47 g de DMSO que se secó preliminarmente por deshidratación con 3 A de tamices moleculares activados, se le añadieron 0,075 g de isocianato de p-clorofenilo en una atmósfera de nitrógeno, la mezcla resultante se calentó a 30 °C, y toda la cantidad del Tejido de punto B lavado se impregnó con la mezcla durante una hora. El Tejido de punto se recogió en un filtro de vidrio por filtración para obtener el Tejido de punto 23 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 23 para purificación de sangre).
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre)
El contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 23 incluido en el Material 23 para purificación de sangre se midió hidrolizando el enlazador incluido en el Material insoluble en agua 23 y cuantificando la p-cloroanilina eluida. A continuación se describirán los detalles.
Se cortaron cuatro láminas de 2 cm2 del Material insoluble en agua 23, las láminas se secaron y se midió el peso en seco. A continuación, se añadieron 4 ml de ácido clorhídrico 6 M y las cuatro láminas recortadas de Material a una botella de vidrio a presión, seguido de calentamiento a 110 °C durante 20 horas. Después de 20 horas, se extrajo 1 ml de la solución de la botella de vidrio a presión y se transfirió a un tubo de muestra. Al tubo de muestra, se le añadieron secuencialmente 12 ml de ácido clorhídrico 0,5 M que contenía 5 mg de nitrato de sodio, 12 ml de una solución acuosa de TWEEN20 al 0,5% en peso que contenía 36 mg de sulfamato de amonio, 12 ml de una solución acuosa de TWEEN20 al 0,5% en peso que contenía 8 mg de diclorhidrato de 1-naftiletilendiamina para colorear la mezcla resultante de rojo. Se midió la absorbancia de la solución de color rojo obtenida a 545 nm. Una solución acuosa que tenía una concentración conocida de p-cloroanilina se coloreó de la misma manera para preparar una curva de calibración, con la que se cuantificó la concentración de la p-cloroanilina en la solución después de la hidrólisis. Además, el contenido del grupo p-clorofenilo se calculó usando la Ecuación 3. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
Contenido del grupo p-clorofenilo (mmol/g) = Concentración de p-cloroanilina en solución después de la hidrólisis (mmol/ml) x Cantidad de solución después de la hidrólisis (4 ml) x Medición de la fuerza de dilución de la solución (37 veces)/peso en seco de Material insoluble en agua añadido (g) ■■■ Ecuación 3
(Preparación del Material 24 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 24 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 24 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió de 0,24 g a 0,36 g, y la cantidad añadida de isocianato de p-clorofenilo se cambió de 0,075 g a 1,5 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 24 incluido en el Material 24 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Preparación del Material 25 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 25 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 25 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 24 para purificación de sangre excepto que el isocianato de p-clorofenilo añadido se cambió a cloruro de p-clorobenzoílo. (Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre)
El contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 25 incluido en el Material 25 para purificación de sangre se midió hidrolizando el enlazador incluido en el Material insoluble en agua 25 y cuantificando el ácido pclorobenzoico eluido. A continuación se describirán los detalles.
Se cortaron cuatro láminas de 6 cm2 del Material insoluble en agua 25, las láminas se secaron y se midió el peso. A continuación, se añadieron 4 ml de ácido clorhídrico 6 M y las cuatro láminas recortadas de Material a una botella de vidrio a presión, seguido de calentamiento a 110 °C durante 20 horas. Después de 20 horas, se extrajo toda la cantidad de la solución de la botella de vidrio a presión y se transfirió a un tubo de muestra. El tubo de muestra se secó al vacío y se añadió una solución de cloroformo 5 mM disuelto en 1 ml de dimetilsulfóxido-d6 al tubo de muestra para disolver el residuo. La solución se midió mediante 1H RMN y el contenido del grupo p-clorofenilo se calculó usando la Ecuación 4 a partir de la relación entre el valor de la integral del pico derivado de ácido p-clorobenzoico (6 = 7,4 a 7,8 ppm) y el valor de la integral del pico derivado del cloroformo (6 = 7,3 ppm). Los resultados se muestran en la Tabla 6.
Contenido del grupo p-clorofenilo (mmol/g) = Concentración de cloroformo (5 mM) x (Valor de la integral del pico derivado de ácido p-clorobenzoico/Valor de la integral del pico derivado de cloroformo) x Número de protones derivados del anillo aromático de ácido p-clorobenzoico (4) x Cantidad de líquido de dimetilsulfóxidod6 (1 ml)/Peso del Material insoluble en agua 25 (g) ■■■ Ecuación 4
(Preparación del Material 26 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 26 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 26 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de isocianato de p-clorofenilo se cambió de 1,5 g a 0,02 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 26 incluido en el Material 26 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Preparación del Material 27 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 27 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 27 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de isocianato de p-clorofenilo se cambió de 1,5 g a 0,1 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 27 incluido en el Material 27 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Preparación del Material 28 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 28 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 28 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 24 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de isocianato de p-clorofenilo se cambió de 1,5 g a 0,5 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 28 incluido en el Material 28 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Preparación del Material 29 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 29 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 29 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió de 0,24 g a 0,56 g, y la cantidad añadida de isocianato de p-clorofenilo se cambió de 0,075 g a 2,5 g.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Medición del contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 23 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo p-clorofenilo del Material insoluble en agua 29 incluido en el Material 29 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Preparación del Material 30 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 30 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 30 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,82 ml de una solución acuosa 6 M de amoniaco.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 30 incluido en el Material 30 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 30 incluido en el Material 30 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 30 incluido en el Material 30 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 30 incluido en el Material 30 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Preparación del Material 31 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 31 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 31 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,44 g de dietilentriamina.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 31 incluido en el Material 31 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 31 incluido en el Material 31 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 31 incluido en el Material 31 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 31 incluido en el Material 31 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Preparación del Material 32 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 32 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 32 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 13 para purificación de sangre excepto que la cantidad añadida de TEPA se cambió a 0,50 g de polietilenimina (que tenía un peso molecular promedio en peso de 600).
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 32 incluido en el Material 32 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 32 incluido en el Material 32 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 32 incluido en el Material 32 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 32 incluido en el Material 32 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Preparación del Material 33 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 33 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 33 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 15 para purificación de sangre excepto que el tejido de punto usado se cambió del Tejido de punto A al Tejido de punto C.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 33 incluido en el Material 33 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 33 incluido en el Material 33 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 33 incluido en el Material 33 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 33 incluido en el Material 33 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición de la relación de apertura del Material 33 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 15 para purificación de sangre para calcular la relación de apertura del Material 33 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Preparación del Material 34 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 34 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 34 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 15 para purificación de sangre excepto que el tejido de punto usado se cambió del Tejido de punto A al Tejido de punto D.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 34 incluido en el Material 34 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 34 incluido en el Material 34 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 34 incluido en el Material 34 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 34 incluido en el Material 34 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición de la relación de apertura del Material 34 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 33 para purificación de sangre para calcular la relación de apertura del Material 34 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Preparación del Material 35 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 35 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 35 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 15 para purificación de sangre excepto que el tejido de punto usado se cambió del Tejido de punto A al Tejido de punto E.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 35 incluido en el Material 35 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 35 incluido en el Material 35 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 35 incluido en el Material 35 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 35 incluido en el Material 35 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición de la relación de apertura del Material 35 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 33 para purificación de sangre para calcular la relación de apertura del Material 35 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Preparación del Material 36 para purificación de sangre)
El Tejido de punto 36 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 36 para purificación de sangre) se obtuvo realizando la misma operación que para el Material 15 para purificación de sangre excepto que el tejido de punto usado se cambió del Tejido de punto A al Tejido de punto F.
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 36 incluido en el Material 36 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 36 incluido en el Material 36 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 36 incluido en el Material 36 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 36 incluido en el Material 36 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Medición de la relación de apertura del Material 36 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 33 para purificación de sangre para calcular la relación de apertura del Material 36 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Preparación del Material 37 para purificación de sangre)
Una mezcla en solución de 21 ml de nitrobenceno y 42 ml de ácido sulfúrico al 98 % en peso se enfrió a 5 °C, se añadieron 5,7 g de NMCA y se disolvió en la mezcla en solución, se añadió 1 l de nitrobenceno frío a la mezcla resultante y, a la mezcla obtenida, se le añadió con agitación suficiente una solución de 2 g de Udel polisulfona P3500 (un polímero que tenía un peso molecular promedio en peso de 30000) disuelta en 1 l de nitrobenceno. A continuación, la mezcla resultante se agitó adicionalmente a 5 °C durante tres horas. Posteriormente, la mezcla de reacción se puso en un gran exceso de metanol frío, y el precipitado se lavó bien con metanol y se secó para obtener 2 g de polisulfona amida-metilada.
En una solución de 1 g de polisulfona amida-metilada disuelta en 50 ml de DMF, 6 g de un tejido de punto que estaba compuesto por una fibra de polipropileno que tenía un diámetro de hilo individual de 1 pm y una fineza total de 97 dtex y tenía un peso en seco de 0,0095 g/cm2 y una densidad aparente de 0,33 g/cm3 se sumergieron durante cuatro horas. A continuación, el tejido de punto se deshidrató por centrifugación para obtener un tejido de punto de revestimiento.
Se disolvieron TEPA en una cantidad de 0,32 g y trietilamina en una cantidad de 2,1 g en 51 g de DMSO y, a esta solución, se le añadió el tejido de punto de revestimiento tal cual. El tejido se impregnó en la solución a 40 °C durante tres horas. El Tejido de punto se recogió en un filtro de vidrio por filtración, se lavó con 500 ml de DMSO, 3 l de agua destilada, y una solución salina fisiológica para obtener el Tejido de punto 37 que era un material para purificación de sangre (en lo sucesivo en el presente documento denominado Material 37 para purificación de sangre).
(Medición del contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 37 incluido en el Material 37 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amino del Material insoluble en agua 37 incluido en el Material 37 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 11.
(Medición del contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 37 incluido en el Material 37 para purificación de sangre)
Se realizó la misma operación que para el Material 1 para purificación de sangre para medir el contenido del grupo amida del Material insoluble en agua 37 incluido en el Material 37 para purificación de sangre. Los resultados se muestran en la Tabla 11.
(Ejemplo 1)
Para confirmar el rendimiento de purificación de sangre del Material 9 para purificación de sangre, el Material 9 para purificación de sangre se impregnó en una solución de citocinas durante un tiempo predeterminado y a continuación se extrajo, seguido de la medición de una reducción en la cantidad de citocinas en la solución entre antes y después de la impregnación. El método de medición se describirá a continuación.
El material 9 para purificación de sangre se cortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, y cuatro de los discos se pusieron en un recipiente de polipropileno. A este recipiente, se añadió suero fetal bovino (en lo sucesivo en el presente documento denominado FBS) preparado para tener la interleucina-6 (en lo sucesivo en el presente documento denominada IL-6) y la interleucina-8 (en lo sucesivo en el presente documento denominada IL-8), cada una con una concentración 2000 pg/ml, que son cada uno un tipo de citocina, para constituir 30 ml por 1 cm3 del Material para purificación de Sangre, y el resultante se mezcló por inversión en una incubadora a 37 °C durante dos horas, seguido de la medición de cada una de la IL-6 y la IL-8 en el FBS para la concentración por ELISA. La tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8 se calcularon a partir de la concentración de IL-6 y la concentración de IL-8 medidas antes de la mezcla por inversión, utilizando la siguiente Ecuación 5 y Ecuación 6. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
Tasa de adsorción de IL-6 del Material 1 para purificación de sangre (%) = 100 x {concentración de IL-6 medida antes de la mezcla por inversión (pg/ml)/concentración de IL-6 medida después de la mezcla por inversión (pg/ml)} ■■■ Ecuación 5
Tasa de adsorción de IL-8 del Material 1 para purificación de sangre (%) = 100 x {concentración de IL-8 medida antes de la mezcla por inversión (pg/ml)/concentración de IL-8 medida después de la mezcla por inversión (pg/ml)} ■■■ Ecuación 6
(Ejemplo 2)
Para el Material 10 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 3)
Para el Material 11 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 4)
Para el Material 14 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 5)
Para el Material 15 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 6)
Para el Material 16 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 7)
Para el Material 19 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 8)
Para el Material 20 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 9)
Para el Material 21 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo 10)
Para comprobar la tasa de adhesión plaquetaria del Material 15 para purificación de sangre, se extrajeron 50 ml de sangre de un voluntario sano para recoger heparina (concentración de heparina: 30 U/ml), seguido de la siguiente medición.
El material 15 para purificación de sangre se cortó en discos que tenían un diámetro de 8 mm, y seis de los discos se cargaron en un recipiente de polipropileno. Además, se añadieron LPS y heparina (en lo sucesivo en el presente documento denominada HP) a la sangre a 37 °C durante una hora (concentración de LPS: 70 EU/ml, concentración de HP), y la mezcla resultante se añadió al recipiente, seguido de la mezcla por inversión. Antes y después de que la sangre se pusiera en contacto con el Material para purificación de sangre, se midió el número de plaquetas usando un analizador secuencial de células sanguíneas multicanal, seguido del cálculo de la tasa de adhesión plaquetaria usando la siguiente Ecuación 7. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
Tasa de adhesión plaquetaria (%) = (Plaquetas en sangre medidas después de la prueba de adsorción plaquetaria)/(plaquetas en sangre medidas antes de la prueba de adsorción plaquetaria) ■■■ Ecuación 7 (Ejemplo 11)
Para el Material 23 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 23 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 12)
Para el Material 24 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 24 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 13)
Para el Material 25 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 25 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 14)
Para el Material 26 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 26 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 15)
Para el Material 27 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 27 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 16)
Para el Material 28 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 28 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 17)
Para el Material 29 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Además, para el Material 29 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 10 para calcular la tasa de adhesión plaquetaria. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
(Ejemplo 18)
Para el Material 30 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Ejemplo 19)
Para el Material 31 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Ejemplo 20)
Para el Material 32 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
(Ejemplo 21)
Para confirmar el rendimiento de purificación de sangre del Material 14 para purificación de sangre en más detalle, se midió una tasa de eliminación de cada uno de un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un complejo plaquetario activado por monocitos activados, un granulocito activado, y un monocito activado. El método de medición se describirá a continuación.
Se cargaron discos, de 1 cm de diámetro, cortados del Material 14 para purificación de sangre para el Ejemplo 21 en forma de laminado en una columna cilíndrica que tenía una entrada de solución y una salida de solución en la parte superior e inferior (1 cm de diámetro interior x 1,2 cm de altura, 0,94 cm3 de volumen, 2 cm de diámetro exterior, hecha de policarbonato), para preparar así una columna que incluye el Material 14 para purificación de sangre para el Ejemplo 21. Se añadió LPS a la sangre de un voluntario humano sano para se convirtió en 70 EU/ml, la sangre resultante se agitó a 65 rpm a 37 °C durante 30 minutos, se dejó que la sangre activada pasara a través de la columna a un caudal de 0,63 ml/min, y se tomaron muestras de sangre en la entrada y salida de la columna. Suponiendo que la sangre fluyó hacia la columna en un punto de tiempo de 0 minutos, se extrajo una muestra a la salida de la columna cuando la sangre había pasado a través de la columna durante 3,5 a 6,5 minutos. Los antígenos de la superficie celular de las muestras obtenidas después de dejar pasar la sangre a través de la columna se tiñeron con un anticuerpo marcado con fluorescencia que se muestra en la Tabla 8, y a continuación las muestras se sometieron a hemólisis usando VersaLyse, se dejaron en reposo, se enfriaron en hielo, y se almacenaron en un lugar oscuro, seguido de la medición inmediata del número de células contenidas en cada muestra. A este respecto, se usó la solución de tinción de viabilidad 7-AAD (Biolegend) para discriminar las células vivas, y se usó el recuento de flujo (BECKMAN COULTER) para contar el número de células. Para la medición, se usó citometría de flujo (BD Cytometer Setup y Tracking Beads (Becton, Dickinson and Company)). Para el análisis, se utilizó el software BD FACS Diva Versión 6.1.3 (Becton, Dickinson and Company) o FLOWJO (disponible en Tomy Digital Biology Co., Ltd.). Se calcularon las concentraciones de un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un complejo plaquetario activado por monocitos activados, un granulocito activado, y un monocito activado, seguido del cálculo de las tasas de eliminación respectivas antes de la entrada y después de la salida de la columna, utilizando la siguiente Ecuación 8 a la Ecuación 11. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
Tasa de eliminación de granulocitos activados (%) = {(concentración de granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) - (concentración de granulocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración de granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ■■■ Ecuación 8
Tasa de eliminación del complejo plaquetario activado por granulocitos activados (%) = {(concentración del complejo plaquetario activado por granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) -(concentración del complejo plaquetario activado por granulocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración del complejo plaquetario activado por granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ■■■ Ecuación 9
Tasa de eliminación de monocitos activados (%) = {(concentración de monocitos activados en el lado de entrada de la columna) -(concentración de monocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración de monocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ■■■ Ecuación 10
Tasa de eliminación del complejo plaquetario activado por monocitos activados (%) = {(concentración del complejo plaquetario activado por monocitos activados en el lado de entrada de la columna) -(concentración del complejo plaquetario activado por monocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración del complejo plaquetario activado por monocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ■■■ Ecuación 11
(Ejemplo 22)
Para el Material 15 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 23)
Para el Material 16 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 24)
Para el Material 23 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 25)
Para el Material 24 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 26)
Para el Material 25 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 27)
Para el Material 26 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 28)
Para el Material 27 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 29)
Para el Material 28 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 30)
Para el Material 29 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de cada uno de un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
(Ejemplo 31)
Se usó sangre simulada para medir la pérdida de presión del Material 33 para purificación de sangre. Se cargaron discos, de 1 cm de diámetro, cortados del Material 33 para purificación de sangre en forma de laminado en una columna cilíndrica que tenía una entrada de solución y una salida de solución en la parte superior e inferior (1 cm de diámetro interior x 1,2 cm de altura, 0,94 cm3 de volumen, 2 cm de diámetro exterior, hecha de policarbonato), para preparar así una columna en la que los discos tuvieran una densidad aparente de 0,30 g/cm3 Se dejó pasar sangre simulada (una solución acuosa de glicerina al 50 % en peso) cuya temperatura se mantuvo a 37 °C (temperatura exterior) a través de cada columna a un caudal de 0,65 ml/min, seguido de la medición de la presión de entrada y la presión de salida de la columna. A este respecto, el caudal se ajustó de acuerdo con el cálculo: 100 ml/min/145 cm3x 0,94 cm3 = 0,65 ml/min. Un valor obtenido al restar el valor de presión de salida en un punto de tiempo de diez minutos después del inicio del paso de sangre del valor de presión de entrada en un punto de tiempo de diez minutos después del inicio del paso de sangre se calculó como una pérdida de presión arterial simulada. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Ejemplo 32)
Para el Material 34 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 31 para medir una pérdida de presión usando sangre simulada, seguido del cálculo de una pérdida de presión de sangre simulada. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Ejemplo 33)
Para el Material 15 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 31 para medir una pérdida de presión usando sangre simulada, seguido del cálculo de una pérdida de presión de sangre simulada. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Ejemplo 34)
Para el Material 35 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 31 para medir una pérdida de presión usando sangre simulada, seguido del cálculo de una pérdida de presión de sangre simulada. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Ejemplo 35)
Para el Material 36 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 31 para medir una pérdida de presión usando sangre simulada, seguido del cálculo de una pérdida de presión de sangre simulada. Los resultados se muestran en la Tabla 10.
(Ejemplo 36)
Para el Material 37 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 y el Ejemplo 21 para calcular la tasa de adsorción de IL-6, la tasa de adsorción de IL-8, y una tasa de eliminación de cada uno de un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un complejo plaquetario activado por monocitos activados, un granulocito activado, y un monocito activado. Los resultados se muestran en la Tabla 11.
(Ejemplo comparativo 1)
Para el Material 1 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 2)
Para el Material 2 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 3)
Para el Material 3 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 4)
Para el Material 4 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 5)
Para el Material 5 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 6)
Para el Material 6 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 7)
Para el Material 7 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 8)
Para el Material 8 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 9)
Para el Material 12 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 10)
Para el Material 13 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 11)
Para el Material 17 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 12)
Para el Material 18 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 13)
Para el Material 22 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 1 para calcular la tasa de adsorción de IL-6 y la tasa de adsorción de IL-8. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
(Ejemplo comparativo 14)
Para el Material 17 para purificación de sangre, se realizó la misma operación que en el Ejemplo 21 para calcular una tasa de eliminación de un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un complejo plaquetario activado por monocitos activados, un granulocito activado, y un monocito activado. Los resultados se muestran en la Tabla 9.
_____________________________________________ [Tabla 51_____________________________________________
Contenido del Contenido del Tasa de Tasa de grupo amida grupo amino adsorción de adsorción de (mmol/g) (mmol/g) IL-6 IL-8 Material 9 para
Ejemplo 1 purificación de 3,0 1,0 66 % 70 %
sangre
Material 10 para
Ejemplo 2 purificación de 3,0 4,3 80 % 80 %
sangre
Material 11 para
Ejemplo 3 purificación de 3,0 6,7 70 % 70 %
sangre
Material 14 para
Ejemplo 4 purificación de 4,7 1,1 80 % 97 %
sangre
Material 15 para
Ejemplo 5 purificación de 4,7 3,8 92 % 95 %
sangre
Material 16 para
Ejemplo 6 purificación de 4,7 6,1 80 % 88 %
sangre
Material 19 para
Ejemplo 7 purificación de 7,0 1,4 80 % 88 %
sangre
Material 20 para
Ejemplo 8 purificación de 7,0 4,9 80 % 97 %
sangre
Material 21 para
Ejemplo 9 purificación de 7,0 6,9 51 % 56 %
sangre
Ejemplo Material 1 para
comparativo 1 purificación de 1,5 2,3 2% 6%
sangre
Ejemplo Material 2 para
comparativo 2 purificación de 1,1 2,3 2% 6%
sangre
Ejemplo Material 3 para
purificación de 2,7 0,8 0% 5% comparativo 3 sangre
Material 4 para
Ejemplo
comparativo 4 purificación de 2,7 1,2 4% 8%
sangre
Ejemplo Material 5 para
purificación de 2,7 4,0 2% 6% comparativo 5 sangre
(continuación)
Contenido del Contenido del Tasa de Tasa de grupo amida grupo amino adsorción de adsorción de (mmol/g) (mmol/g) IL-6 IL-8 Material 6 para
Ejemplo
comparativo 6 purificación de 2,7 6,5 3 % 4%
sangre
Ejemplo Material 7 para
comparativo 7 purificación de 2,7 7,5 4% 13 % sangre
Ejemplo Material 8 para
purificación de 3,0 0,9 34 % 45 % comparativo 8 sangre
Material 12 para
Ejemplo
comparativo 9 purificación de 3,0 7,3 20 % 35 % sangre
Ejemplo Material 13 para
comparativo purificación de 4,7 0,6 35 % 55 % 10 sangre
Ejemplo Material 17 para
comparativo purificación de 4,7 7,2 12 % 33 % 11 sangre
Ejemplo Material 18 para
comparativo purificación de 7,0 0,9 38 % 42 % 12 sangre
Ejemplo Material 22 para
comparativo purificación de 7,0 7,9 18 % 0% 13 sangre
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 5 que el material para la purificación de sangre de acuerdo con la presente solicitud tiene un excelente rendimiento de purificación de sangre.
[Tabla 61
Contenido del Contenido del Contenido del Tasa de Tasa de Tasa de grupo amida grupo amino grupo fenilo adsorción adsorción adhesión (mmol/g) (mmol/g) (mmol/g) de IL-6 de IL-8 plaquetaria Material 15
Ejemplo para 4,7 3,8 0 92 % 95 % 83 % 10 purificación
de sangre
Material 23
Ejemplo para
4,7 3,8 0,02 92 % 95 % 78 % 11 purificación
de sangre
Material 24
Ejemplo para
12 purificación 4,7 3,8 1,0 92 % 95 % 75 % de sangre
Material 25
Ejemplo para
13 purificación 4,7 3,8 1,0 92 % 95 % 75 % de sangre
Material 26
Ejemplo para 4,7 3,8 0,01 93 % 96 % 79 % 14 purificación
de sangre
Material 27
Ejemplo para
4,7 3,8 005 94 % 97 % 79 % 15 purificación
de sangre
(continuación)
Contenido del Contenido del Contenido del Tasa de Tasa de Tasa de grupo amida grupo amino grupo fenilo adsorción adsorción adhesión (mmol/g) (mmol/g) (mmol/g) de IL-6 de IL-8 plaquetaria Material 28
Ejemplo para 4,7 3,8 0,3 93 % 95 % 75 % 16 purificación
de sangre
Material 29
Ejemplo para
17 purificación 4,7 3,8 2,5 91 % 93 % 72 % de sangre
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 6 que, de acuerdo con la presente solicitud, la introducción de uno o más grupos fenilo en el material para la purificación de sangre hace posible inhibir aún más la adhesión plaquetaria.
[Tabla 71
Contenido del grupo Contenido del grupo Tasa de Tasa de eliminación de IL- eliminación de IL-amida (mmol/g) amino (mmol/g) 6 8 Ejemplo Material 30 para
18 purificación de sangre 4,7 3,2 95 % 98 % Ejemplo Material 31 para
19 purificación de sangre 4,7 3,4 90 % 96 % Ejemplo Material 32 para
20 purificación de sangre 4,7 3,0 84 % 95 %
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 7 que el material para la purificación de sangre de acuerdo con la presente solicitud, cuya estructura del grupo amino puede variar, ejerce un excelente rendimiento de purificación de sangre.
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000055_0001
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 9 que el contenido del grupo amino y el contenido del grupo fenilo del material para purificación de sangre de acuerdo con la presente solicitud se pueden controlar para eliminar un granulocito activado, un complejo plaquetario activado por granulocitos activados, un monocito activado, y un complejo plaquetario activado por monocitos activados.
[Tabla 101
Contenido del Contenido del érdida de presión de grupo amida grupo amino Relación de P
sangre simulada (mmol/g) (mmol/g) apertura (mmHg) Ejemplo Material 33 para
31 purificación de sangre 4,7 3,7 0,1 % 45 Ejemplo Material 34 para
32 purificación de sangre 4,7 3,8 1,2 % 28 Ejemplo Material 15 para
33 purificación de sangre 4,7 3,8 8,3 % 3 Ejemplo Material 35 para
34 purificación de sangre 4,7 3,9 13,2 % 9 Ejemplo Material 36 para
35 purificación de sangre 4,7 4,0 30,0 % 19
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 10 que el material para purificación de sangre de acuerdo con la presente solicitud puede realizar la purificación de sangre con una baja pérdida de presión.
Figure imgf000057_0001
Resulta evidente a partir de los resultados de la Tabla 11 que el material para la purificación de sangre de acuerdo con la presente solicitud ejerce un excelente rendimiento de purificación de sangre independientemente del tipo de sustrato.
Aplicabilidad industrial
El material para la purificación de sangre de acuerdo con la presente invención puede usarse para la purificación de componentes sanguíneos en campos médicos, particularmente para la eliminación de citocinas y complejos plaquetarios activados por leucocitos activados.
Lista de signos de referencia
1. Material para purificación de sangre (tejido de punto)
2. Fibra (porciones negras)
3. Porciones de apertura (porciones blancas)
4. Columna
5. Sangre simulada o sangre humana que aún no ha pasado por la columna
6. Sangre simulada o sangre humana que ha pasado por la columna
7. Circuito
8. Dispositivo de medición de presión de entrada
9. Dispositivo de medición de presión de salida
10. Bomba
11. Baño de agua a temperatura constante
12. Calentador

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Un material para purificación de sangre, comprendiendo el material un material insoluble en agua en el que un ligando que tiene uno o más grupos amida y uno o más grupos amino está unido a un sustrato,
en donde el contenido del uno o más grupos amida es de 3,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua; y
en donde el contenido del uno o más grupos amino es de 1,0 a 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua.
2. El material para purificación de sangre, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el ligando que tiene la estructura representada por la Fórmula (I) a continuación está unido al sustrato:
Figure imgf000059_0001
(en la que X es un grupo amino; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato).
3. El material para purificación de sangre, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que el ligando tiene un grupo fenilo, y el ligando que tiene la estructura representada por la Fórmula (II) a continuación está unido al sustrato:
Figure imgf000059_0002
(en la que X es un grupo amino; A es un enlazador; B es un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno; y la línea ondulada representa una posición en la que el ligando está unido al sustrato); y
en donde el contenido del grupo fenilo es más de 0 mmol y no más de 7,0 mmol por 1 g de peso en seco del material insoluble en agua.
4. El material para purificación de sangre, de acuerdo con las reivindicaciones 2 o 3, en el que X es un grupo amino derivado de una poliamina.
5. El material para purificación de sangre, de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4, en el que A es un enlace amida o un enlace urea.
6. El material para purificación de sangre, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el sustrato es un poliestireno o una polisulfona, o un derivado de los mismos.
7. El material para purificación de sangre, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el material se encuentra en forma de fibras o partículas.
8. El material para purificación de sangre, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el material está en forma de un tejido de punto que tiene una relación de apertura del 0,1 al 30,0 %.
9. Aparato para purificación de sangre, comprendiendo el aparato el material para purificación de sangre de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
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