ES2842773T3 - Extracto de genciana sin genciopicrósido - Google Patents

Abstract

Un proceso para la preparación de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida, en el que la cantidad de genciopicrósido es menor que 0,5% de área, según lo determinado por UPLC y detección UV a 254 nm, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de (i) Extraer las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida con una mezcla de agua/disolvente orgánico para obtener, después de la filtración, un extracto que comprende genciopicrósido, seguido de (ii) Eliminar el disolvente orgánico para obtener un extracto acuoso, seguido de (iii) Hidrolizar el genciopicrósido en el extracto acuoso a genciopicral.

Description

DESCRIPCIÓN

Extracto de genciana sin genciopicrósido

La presente invención se refiere a extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. Además, se refiere a composiciones cosméticas que comprenden tal extracto Gentiana acaulis o Gentiana septemfida libre genciopicrósido, así como a mezclas de los mismos.

Es cada vez más importante que los seres humanos luzcan sanos, y una piel hermosa con arrugas limitadas siempre se percibe como un signo de buena salud. Hay muchos ingredientes cosméticos que afirman tener efectos cosméticos, pero algunos de ellos son difíciles de formular, poco solubles en preparaciones cosméticas, inestables durante el almacenamiento del producto cosmético final, o presentan signos de toxicidad o incluso generan reacciones alérgicas cuando se usan de forma regular.

En el proceso de envejecimiento, aparecen diversos signos en la piel como resultado de una modificación de la estructura cutánea y de la función cutánea.

Un signo característico del envejecimiento de la piel, independientemente de la etiología, es la pérdida de elasticidad como resultado de la producción reducida de colágeno y la degradación del colágeno existente. Los colágenos son proteínas estructurales fibrosas y un componente principal de la matriz extracelular del tejido conjuntivo. El colágeno contribuye a la resistencia y elasticidad de la piel humana, y su degradación conduce a cambios en el aspecto y/o función de la piel, tales como arrugas, incluyendo arrugas superficiales finas, y arrugas profundas gruesas, líneas, hendiduras, protuberancias, poros agrandados, cicatrización, descamación, pérdida de elasticidad de la piel, flacidez (incluyendo la hinchazón en el área de los ojos y la papada), pérdida de firmeza de la piel, propiedades de barrera comprometidas, decoloración (incluyendo las ojeras), manchas, palidez, pigmentación moteada, manchas de la edad, pecas, queratosis, diferenciación anormal, hiperqueratinización, elastosis, telangiectasia, y otros cambios histológicos en el estrato córneo, dermis, epidermis, sistema vascular de la piel. Además, existe una tendencia continua en la técnica de proporcionar ingredientes para el cuidado de la piel de origen natural para su aplicación a la piel.

De este modo, existe una necesidad continua de ingredientes naturales y extractos de plantas naturales que tengan beneficios cosméticos, particularmente en lo que respecta al envejecimiento de la piel, que sean fáciles de formular, y seguros para el usuario final.

En la técnica anterior se ha descrito que los extractos de genciana, tales como, por ejemplo, los extractos de Gentiana acaulis, tienen efectos beneficiosos sobre la piel (documento FR2990350). Estos extractos de genciana, sin embargo, contienen cantidades significativas de genciopicrósido (CAS No. 20831-76-9), un glucósido secoiridoide del que se ha dado a conocer que tiene efectos mutagénicos, clastogénicos y dañinos para el ADN (K. Mustafayeva et al. /J. Nat. Prod. 2010, 73, 99-103). Por lo tanto, debido a problemas de seguridad, los extractos de genciana no se encuentran todavía en los productos cosméticos comerciales, y existe una necesidad continua de un extracto de genciana que no contenga genciopicrósido y que al mismo tiempo proporcione efectos cosméticos beneficiosos.

Los presentes inventores han encontrado ahora una manera de proporcionar extractos de genciana libres de genciopicrósido que todavía exhiben excelentes beneficios cosméticos.

Así, en una primera realización, la presente invención se refiere a un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida que está sustancialmente libre de genciopicrósido.

En otra realización, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida que está sustancialmente libre de genciopicrósido, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de

(i) Extraer las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida con una mezcla de agua/disolvente orgánico para obtener, después de la filtración de las partes aéreas, un extracto que comprende genciopicrósido, seguido de

(ii) Eliminar el disolvente orgánico para obtener un extracto acuoso, seguido de

(iii) Hidrolizar el genciopicrósido en el extracto acuoso a genciopicral.

Gentiana acaulis (genciana sin tallo) es una especie de planta con flores perteneciente a la familia de las gentianaceae, originaria del centro y sur de Europa, desde el este de España hasta los Balcanes, que crece especialmente en regiones montañosas, tales como los Alpes, Cevennes y Pirineos, a alturas de 800 - 3.000 metros.

Es una planta perenne, que crece hasta 2 cm de altura y 10 cm o más de anchura. Las hojas son siempre verdes, de 2 a 3,5 cm de largo, en una roseta basal, formando grupos. Las flores terminales en forma de trompeta son azules con gargantas longitudinales manchadas de color verde oliva. Crecen en un pedúnculo muy corto, de 3 a 6 cm de largo. El tallo de la flor a menudo no tiene hojas o tiene 1 o 2 pares de hojas. Le gusta el sol pleno, es totalmente resistente, y florece a finales de primavera y en verano. Esta planta, como otras de su género, se valora en el cultivo por el azul intenso inusualmente puro de sus flores.

Gentiana septemfida (genciana crestada o genciana de verano) es una especie de planta con flores de la familia Gentianaceae, originaria del Cáucaso y Turquía. Es una planta herbácea perenne de crecimiento bajo que alcanza entre 15 y 20 cm de alto por 30 cm de ancho, con hasta ocho flores de color azul brillante en forma de trompeta en verano, con interiores rayados. Requiere un suelo rico y húmedo y pleno sol.

El termino “sustancialmente libre de”, como se usa aquí, se refiere a concentraciones de menos de 0,5%. Preferiblemente, la concentración de genciopicrósido es menor que 0,1%, más preferiblemente menor que 0,01%, lo más preferible menor que 0,001%. En particular, el extracto ya no contiene genciopicrósido detectable (todo el % dado para la concentración de genciopicrósido en el extracto es el % de área medido por UPLC (columna: columna de fase inversa C-18, eluyente: agua/acetonitrilo) y detección UV a 254 nm).

En todas las realizaciones de la presente invención, los extractos preferiblemente también están sustancialmente libres de genciopicral, que se elimina del extracto acuoso obtenido en (iii) en una etapa de extracción posterior (iv).

En todas las realizaciones según la presente invención, la concentración de genciopicral en el extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida según la presente invención es menor que 0,5%, lo más preferible menor que 0,1%, tal como en particular menor que 0,01%. La extracción se realiza hasta que el extracto ya no contiene genciopicral detectable (todos los % proporcionados para la concentración de genciopicral en el extracto son % de área medidos por UPLC (columna: columna de fase inversa C-18, eluyente: agua/acetonitrilo) y detección UV a 254 nm).

Preferiblemente, el disolvente orgánico utilizado para la extracción de las partes aéreas se selecciona del grupo que consiste en alcoholes de C¹-C⁶, más preferiblemente de metanol, etanol e isopropanol, así como mezclas de los mismos. Lo más preferible, el disolvente orgánico es etanol.

En todas las realizaciones de la presente invención, la cantidad de agua en la mezcla de agua/disolvente orgánico se selecciona preferiblemente en el intervalo de 10-50% en peso, más preferiblemente en el intervalo de 30-50% en peso, tal como lo más preferible en el intervalo de 35 a 45% en peso, basado en el peso total de la mezcla de disolventes.

La cantidad de mezcla de agua/disolvente orgánico utilizada para la extracción de las partes aéreas se selecciona preferiblemente en el intervalo de 1 a 50% en peso, preferiblemente en el intervalo de 5 a 30% en peso, lo más preferible en el intervalo de 5 a 15% en peso, tal como en el intervalo de 10 a 12% en peso, basado en el peso de las partes aéreas.

En una realización preferida, la mezcla de agua/disolvente orgánico contiene una cantidad eficaz de carbón activo, preferiblemente en una cantidad de 5-20% (p/p) basado en las partes de plantas secas utilizadas, más preferiblemente en una cantidad de 10-25% (p/p).

En una realización preferida, las partes aéreas se cortan antes de la extracción.

En el caso del uso de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida (para obtener un extracto de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida), las partes secas de la planta se mezclan antes de la extracción. Alternativamente, los extractos respectivos se pueden preparar individualmente y mezclar después de la preparación para obtener el extracto que consiste en Gentiana acaulis y Gentiana septemfida.

La extracción de las partes aéreas se realiza preferiblemente a una temperatura seleccionada en el intervalo de 30-60°C, preferiblemente en el intervalo de 45-55°C, lo más preferible a alrededor de 50°C durante un período de 1 a 5 h, preferiblemente de 1,5 a 3 h. Lo más preferido, la extracción se lleva a cabo durante 2 h a 50°C.

La hidrólisis de genciopicrósido a genciopicral en el extracto acuoso se realiza preferiblemente usando una pglucosidasa (EC 3.2.1.21), más preferiblemente una p-glucosidasa unida a una fase sólida tal como una resina activada con epoxi, en particular una resina metacrílica/estireno activada con epoxi. Tales resinas están, por ejemplo, comercialmente disponibles con el nombre comercial Purolite. La hidrólisis se realiza preferiblemente hasta que la concentración de genciopicrósido esté dentro de los límites descritos anteriormente, preferiblemente sin embargo hasta que ya no sea detectable genciopicrósido por UPLC.

La extracción de genciopicral se realiza preferiblemente utilizando un disolvente orgánico. Los disolventes orgánicos adecuados para la extracción de genciopicral pueden ser seleccionados fácilmente por un experto en la técnica, y abarcan éteres tales como éter dietílico o éter terc-butílico, cetonas tales como acetona, disolventes de éster tales como acetato de etilo, disolventes halogenados tales como cloroformo y diclorometano, así como disolventes de hidrocarburos aromáticos tales como tolueno y benceno. Sin embargo, un disolvente adecuado particular para la eliminación del genciopicral es el acetato de etilo, ya que tiene la ventaja de eliminar selectivamente el genciopicral sin eliminar los otros ingredientes activos (en particular los flavonoides) necesarios para lograr los efectos cosméticos deseados.

La eliminación (evaporación) de los disolventes se puede realizar mediante métodos estándar en la técnica, por ejemplo, por evaporación en un dispositivo Rotavap a 50°C y atmósfera de 50 mbares.

En una realización preferida, los procedimientos según la presente invención contienen además una etapa (ii-1) que sigue a la etapa (ii), etapa la cual consiste en tratar un extracto acuoso concentrado obtenido en (ii) con etanol puro (es decir, ETOH abs.) para precipitar azúcares y/o proteínas, seguido de filtración y evaporación del etanol. Preferiblemente, la precipitación tiene lugar durante 1 h a 36 h, más preferiblemente durante 12 h-30 h, lo más preferible durante 18-28 h. La cantidad de etanol en esta etapa es preferiblemente alrededor de 2 a 8 veces la cantidad del extracto acuoso, preferiblemente alrededor de 4 a 6 veces. La cantidad de etanol usada para la precipitación es preferiblemente al menos 2 veces la cantidad del extracto acuoso, más preferiblemente la cantidad se selecciona de 4 a 6 veces la cantidad del extracto acuoso.

En una realización preferida, el o los extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención están estandarizados en el contenido de flavonoides calculado como isorientina. Los principales compuestos químicos activos del extracto consisten en: iridoides y seco-iridoides: swertiamarina, swerósido, gelidósido, triflorósido, y flavonoides: iso-orientina, iso-vitexina, isoorientin-4’-O-glucósido e iso-saponarina.

En una realización particular ventajosa, el contenido de flavonoides en el extracto según la presente invención está en el intervalo de 1 a 6% en peso, preferiblemente en el intervalo de 2 a 5% en peso, basado en el extracto seco.

El o los extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención se pueden utilizar como extracto acuoso o en forma seca (polvo).

En una realización preferida particular, el extracto de Gentiana libre de genciopicrósido según la presente invención es un extracto de una mezcla de las partes aéreas de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida. Más preferiblemente, la mezcla consiste en una relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida comprendida entre 5/95 masa/masa y 50/50 masa/masa, incluso más preferiblemente, la relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 10/90 masa/masa y 30/70 masa/masa, lo más preferible, la relación de partes aéreas de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 15/85 masa/masa y 25/75 masa/masa.

Sorprendentemente, se ha encontrado que el uso del extracto de Gentiana acaulis y/o el extracto de Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención todavía exhibe los efectos cosméticos beneficiosos, más particularmente con respecto a los efectos anti-envejecimiento.

De este modo, la invención también se refiere a composiciones cosméticas que comprenden tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. Además, se refiere al uso cosmético de una composición que comprende tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. También se refiere a un método de tratamiento cosmético, comprendiendo dicho método aplicar tópicamente sobre la piel de un individuo que busca tal tratamiento una composición cosmética que comprende tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido.

La expresión “composición cosmética”, como se usa aquí, se refiere a cualquier sustancia o preparación destinada a ponerse en contacto con cualquier parte de las superficies externas del cuerpo humano (es decir, la epidermis, el sistema capilar, las uñas, los labios, y los genitales externos), o con los dientes y las membranas mucosas de la cavidad oral, con el fin exclusiva o principalmente de limpiarlos, perfumarlos, modificar su aspecto, protegerlos, mantenerlos en buen estado, o corregir los olores corporales, salvo que dicha limpieza, perfumado, protección, cambio, conservación, o corrección tenga como único fin tratar o prevenir enfermedades.

Preferiblemente, en todas las realizaciones de la presente invención, la composición cosmética según la presente invención comprende entre 0,001 y 20% en peso de un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, un extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos (basado en la materia seca). Más preferiblemente, la composición cosmética comprende entre 0,01 y 10% en peso, incluso más preferiblemente, comprende entre 0,01 y 5% en peso, de un extracto de Gentiana acaulis, extracto de Gentiana septemfida, o mezcla de los mismos.

Según la presente invención, el extracto de Gentiana acaulis, el extracto Gentiana septemfida, o mezclas de los mismos, se pueden utilizar como tales o en forma encapsulada, por ejemplo en forma liposomal. Los liposomas se forman preferiblemente con lecitinas, con o sin adición de esteroles o fitoesteroles. La encapsulación de los ingredientes activos puede realizarse sola o junto con otros ingredientes activos. Otras realizaciones incluyen cápsulas sólidas o semisólidas destinadas a proteger el extracto de Gentiana acaulis, el extracto de Gentiana septemfida, o la mezcla de los mismos, de la degradación o para el suministro controlado. Las tecnologías de encapsulación adecuadas se describen, por ejemplo, en los documentos WO 0180823, WO 9903450, WO 9317784 o en Fragrance Journal (2001), 29(2), 83-90.

La composición cosmética preferida según la presente invención es una composición tópica, más preferiblemente comprende además un vehículo cosmético convencional, incluso más preferiblemente, es una preparación para el cuidado de la piel (cara y cuerpo), una preparación decorativa, una preparación de protección contra la luz, o una preparación funcional.

Ejemplos de preparaciones para el cuidado de la piel son, en particular, cremas faciales, aceites corporales, lociones corporales, geles corporales, cremas de tratamiento, ungüentos protectores de la piel, preparaciones para el afeitado, tales como espumas o geles de afeitar, geles hidratantes, pulverizaciones hidratantes, pulverizaciones corporales revitalizantes, geles para la celulitis, hidratantes faciales y/o corporales, limpiadores faciales y/o corporales, y mascarillas faciales. Los más preferidos son los productos para el cuidado facial.

Las composiciones cosméticas tópicas preferidas según la invención son preparaciones para el cuidado de la piel, o preparaciones funcionales.

Ejemplos de preparaciones decorativas son, en particular, barras de labios, sombras de ojos, máscaras, formulaciones de maquillaje secas y húmedas, coloretes, polvos, y/o bronceadores.

Ejemplos de preparaciones funcionales son composiciones cosméticas que contienen otros ingredientes activos tales como hormonas, vitaminas, extractos de vegetales y/o frutas, ingredientes anti-envejecimiento, y/o ingredientes antimicrobianos (antibacterianos o antifúngicos), sin limitarse a ellos.

La composición cosmética para uso según la invención puede estar en forma de un líquido, loción, loción espesa, gel, crema, leche, ungüento, pasta, polvo, maquillaje, o una barrita de tubo sólida, y opcionalmente se puede envasar como un aerosol, y se puede proporcionar en forma de una mus tal como una mus en aerosol, una espuma o espumas de pulverización, pulverizaciones, barritas, un gel, un emplasto, un polvo, un limpiador, un jabón, o aerosoles o toallitas. Las composiciones tópicas preferidas comprenden una crema, una emulsión, un gel, un ungüento, una loción, una tintura, un espray, una mus, una composición limpiadora o espuma.

En otra realización, la composición cosmética para uso según la presente invención se caracteriza por que además comprende al menos un agente de filtrado de UV, y/o un hidratante, y/o un agente anti-envejecimiento, y/o un agente de tono de piel, y un vehículo cosmético convencional.

Los vehículos cosméticos convencionales comprenden excipientes o diluyentes usados convencionalmente en composiciones tópicas. Las cantidades necesarias de adyuvantes y aditivos cosméticos y dermatológicos pueden ser determinadas fácilmente por el experto, basándose en el producto deseado.

Con respecto al tipo de composición cosmética tópica y la preparación de las preparaciones cosméticas tópicas, así como a otros aditivos adecuados, se puede consultar la bibliografía pertinente, por ejemplo, a Novak G.A., Die kosmetischen Praparate - Band 2, Die kosmetischen Praparate - Rezeptur, Rohstoffe, wissenschaftliche Grundlagen (Verlag für Chem. Industrie H. Ziolkowski KG, Augsburg).

Preferiblemente, las composiciones cosméticas tópicas utilizadas en la presente invención se encuentran en forma de suspensión o dispersión en disolventes o sustancias grasas, o alternativamente en forma de emulsión o microemulsión (en particular de tipo O/W o W/O, tipo O/W/O o W/O/W), emulsiones de PET, emulsiones múltiples, emulsiones Pickering, hidrogeles, geles alcohólicos, lipogeles, disoluciones monofásicas o multifásicas, o una dispersión vesicular, y otras composiciones habituales, que también se pueden aplicar por bolígrafos, como máscaras o como pulverizaciones. Las emulsiones también pueden contener tensioactivo o tensioactivos aniónicos, no iónicos, catiónicos o anfóteros.

Las composiciones cosméticas tópicas utilizadas en la presente invención también pueden contener adyuvantes y aditivos cosméticos habituales, tales como conservantes/antioxidantes, sustancias grasas/aceites, agua, disolventes orgánicos, siliconas, espesantes, suavizantes, emulsionantes, protectores solares, agentes antiespumantes, hidratantes, fragancias, tensioactivos, cargas, agentes secuestrantes, polímeros aniónicos, catiónicos, no iónicos o anfóteros, o mezclas de los mismos, propelentes, agentes acidulantes o alcalinizantes, tintes, colorantes, pigmentos o nanopigmentos, por ejemplo los adecuados para proporcionar un efecto fotoprotector bloqueando físicamente la radiación ultravioleta, o cualquier otro ingrediente normalmente formulado en composiciones cosméticas tópicas. Las cantidades necesarias de adyuvantes y aditivos cosméticos y dermatológicos pueden ser escogidas fácilmente por un experto en este campo, basándose en el producto deseado, y se ilustrarán en los ejemplos, sin limitarse a ellos. Los adyuvantes y aditivos cosméticos habituales tales como emulsionantes, espesantes, ingredientes tensioactivos, y formadores de película pueden presentar sinergias que pueden ser determinadas por el experto en el campo con ensayos habituales, o con las consideraciones habituales con respecto a la formulación de la composición cosmética tópica.

Normalmente, las composiciones cosméticas tópicas también contienen ingredientes tensioactivos tales como emulsionantes, solubilizantes, y similares. Un emulsionante permite combinar de forma homogénea dos o más componentes inmiscibles. Además, el emulsionante actúa estabilizando la composición. Los solubilizantes que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero no se restringen a, PEG/PPG-18/18 dimeticona, aceite de ricino hidrogenado PEG-40, estearato de PEG-20, estearato de glicerilo PEG-30, y cocoato de glicerilo PEG-7. Los emulsionantes que se pueden usar en la presente invención para formar emulsiones/microemulsiones O/W, W/O, O/W/O o W/O/W incluyen oleato de sorbitán, sesquioleato de sorbitán, isoestearato de sorbitán, trioleato de sorbitán, diisoestearato de poliglicerilo-3, ésteres de poliglicerol de ácido oleico/isoesteárico, hexarricinolato de poliglicerilo-6, oleato de poliglicerilo-4, oleato de poliglicerilo-4/cocoato de propilenglicol PEG-8, oleamida DEA, miristato de TEA, estearato de TEA, estearato de magnesio, estearato de sodio, laurato de potasio, ricinoleato de potasio, cocoato de sodio, seboato de sodio, castorato de potasio, oleato de sodio, y mezclas de los mismos. Además, se pueden usar uno o más polímeros sintéticos como emulsionantes. Por ejemplo, copolímero de PVP eicoseno, polímero cruzado de acrilatos/acrilato de alquilo de C^10-30, copolímero de acrilatos/metacrilato de esteareth-20, copolímero de PEG-22/dodecilglicol, copolímero de PEG-45/dodecilglicol, y mezclas de los mismos. Los emulsionantes preferidos son copolímero de PVP eicoseno, polímero cruzado de acrilatos/acrilato de alquilo de C^10-30, isoestearato de sorbitán PEG-20, isoestearato de sorbitán, y mezclas de los mismos. El uno o más emulsionantes están presentes en una cantidad total de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 20% en peso del peso total de la composición cosmética tópica para uso en la presente invención. Preferiblemente, se usa alrededor de 0,1% en peso a alrededor de 10% en peso de emulsionantes.

La fase lipídica de las composiciones cosméticas tópicas puede escogerse ventajosamente de: aceites minerales y ceras minerales; aceites tales como triglicéridos de ácido caprínico o ácido caprílico y aceite de ricino; aceites o ceras y otros aceites naturales o sintéticos, en una realización preferida ésteres de ácidos grasos con alcoholes, por ejemplo isopropanol, propilenglicol, glicerina, o ésteres de alcoholes grasos con ácidos carboxílicos o ácidos grasos; alquilbenzoatos; y/o aceites de silicona tales como dimetilpolisiloxano, dietilpolisiloxano, difenilpolisiloxano, ciclometiconas, y mezclas de los mismos.

Las sustancias grasas ejemplares que pueden incorporarse en la fase oleosa de la emulsión, microemulsión, oleogel, hidrodispersión o lipodispersión de la composición cosmética tópica de la presente invención se escogen ventajosamente de ésteres de ácidos alquilcarboxílicos lineales o ramificados, saturados y/o insaturados, con 3 a 30 átomos de carbono, y alcoholes saturados y/o insaturados, lineales y/o ramificados con 3 a 30 átomos de carbono, así como ésteres de ácidos carboxílicos aromáticos y de alcoholes saturados y/o insaturados, lineales o ramificados de 3-30 átomos de carbono. Dichos ésteres se pueden seleccionar ventajosamente de palmitato de octilo, cocoato de octilo, isoestearato de octilo, dodecilmiristato de octilo, isononanoato de cetearilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, estearato de isopropilo, oleato de isopropilo, estearato de n-butilo, laurato de n-hexilo, oleato de n-decilo, estearato de isooctilo, estearato de isononilo, isononanoato de isononilo, palmitato de 2-etilhexilo, laurato de 2-etilhexilo, estearato de 2-hexildecilo, palmitato de 2-octildodecilo, heptanoato de estearilo, oleato de oleilo, erucato de oleilo, oleato de erucilo, erucato de erucilo, estearato de tridecilo, trimelitato de tridecilo, así como mezclas sintéticas, semisintéticas o naturales de tales ésteres, por ejemplo aceite de jojoba.

Otros componentes grasos adecuados para uso en las composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención incluyen aceites polares tales como lecitinas y triglicéridos de ácidos grasos, a saber, ésteres de triglicerol de ácido carboxílico lineal o ramificado saturado y/o insaturado con 8 a 24 átomos de carbono, preferiblemente de 12 a 18 átomos de carbono, mientras que los triglicéridos de ácidos grasos se escogen preferiblemente de aceites sintéticos, semisintéticos o naturales (por ejemplo, cocoglicérido, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de soja, aceite de cacahuete, aceite de colza, aceite de almendras dulces, aceite de palma, aceite de coco, aceite de ricino, aceite de ricino hidrogenado, aceite de trigo, aceite de semilla de uva, aceite de nuez de macadamia, y otros); aceites apolares tales como hidrocarburos lineales y/o ramificados y ceras, por ejemplo aceites minerales, vaselina (petrolato); parafinas, escualano y escualeno, poliolefinas, poliisobutenos hidrogenados e isohexadecanos, las poliolefinas favorecidas son polidecenos; éteres de dialquilo tales como dicaprililéter; aceites de silicona lineales o cíclicos tales como preferiblemente ciclometiconas (octametilciclotetrasiloxano; cetildimeticona, hexametilciclotrisiloxano, polidimetilsiloxano, poli(metilfenilsiloxano), y mezclas de los mismos.

Otros componentes grasos que se pueden incorporar ventajosamente en composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención son isoeicosano; diheptanoato de neopentilglicol; dicaprilato/dicaprato de propilenglicol; succinato caprílico/cáprico/diglicerilo; caprilato/caprato de butilenglicol; lactato de alquilo de C^12-13; tartrato de dialquilo de C^12-13; triisoestearina; hexacaprilato/hexacaprato de dipentaeritritilo; monoisoestearato de propilenglicol; tricaprilina; dimetilisosorbida. Especialmente beneficioso es el uso de mezclas de benzoato de alquilo de C^12-15 e isoestearato de 2-etilhexilo, mezclas de benzoato de alquilo de C^12-15 e isononanoato de isotridecilo, así como mezclas de benzoato de alquilo de C^12-15, isoestearato de 2-etilhexilo e isononanoato de isotridecilo.

La fase oleosa de las composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención también puede contener ceras naturales vegetales o animales tales como cera de abeja, cera china, cera de abejorro y otras ceras de insectos, así como manteca de karité y manteca de cacao.

Puede incorporarse un agente hidratante en una composición cosmética tópica usada según la presente invención para mantener la hidratación o rehidratar la piel. Los hidratantes que evitan que el agua se evapore de la piel al proporcionar una capa protectora se denominan emolientes. Además, un emoliente proporciona un efecto suavizante o calmante sobre la superficie de la piel, y generalmente se considera seguro para uso tópico. Los emolientes preferidos incluyen aceites minerales, lanolina, vaselina, trigliceraldehídos cápricos/caprílicos, colesterol, siliconas tales como dimeticona, ciclometicona, aceite de almendras, aceite de jojoba, aceite de aguacate, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de girasol, aceite de coco y aceite de semilla de uva, manteca de cacao, aceite de oliva, extractos de aloe, ácidos grasos tales como oleico y esteárico, alcoholes grasos tales como cetilo y hexadecilo (ENJAY), adipato de diisopropilo, ésteres de hidroxibenzoato, ésteres de ácido benzoico de alcoholes de C^9-15, isononanoato de isononilo, éteres tales como polioxipropilen butil éteres y polioxipropilen cetil éteres, y benzoatos de alquilo de C^12-15, y mezclas de los mismos. Los emolientes más preferidos son los ésteres de hidroxibenzoato, aloe vera, benzoatos de alquilo de C^12-15, y mezclas de los mismos. Un emoliente está presente en una cantidad de alrededor de 1% en peso a alrededor de 20% en peso del peso total de la composición cosmética tópica. La cantidad preferida de emoliente es alrededor de 2% en peso a alrededor de 15% en peso, y lo más preferible alrededor de 4% en peso a alrededor de 10% en peso.

Los hidratantes que se unen al agua y la retienen en la superficie de la piel se denominan humectantes. Se pueden incorporar humectantes adecuados en una composición cosmética tópica de la presente invención, tales como glicerina, polipropilenglicol, polietilenglicol, ácido láctico, ácido pirrolidincarboxílico, urea, fosfolípidos, colágeno, elastina, ceramidas, lecitina, sorbitol, PEG-4, y mezclas de los mismos. Los hidratantes adecuados adicionales son hidratantes poliméricos de la familia de polisacáridos solubles en agua y/o hinchables y/o que gelifican con el agua tales como ácido hialurónico, quitosano y/o un polisacárido rico en fucosa que está disponible, por ejemplo, como Fucogel®1000 (número CAS 178463-23-5) por SOLABIA S. Uno o más humectantes están opcionalmente presentes en alrededor de 0,5% en peso a alrededor de 8% en peso en una composición cosmética tópica de la presente invención, preferiblemente alrededor de 1% en peso a alrededor de 5% en peso.

La fase acuosa de las composiciones cosméticas tópicas preferidas para uso en la presente invención puede contener los aditivos cosméticos habituales tales como alcoholes, especialmente alcoholes inferiores, preferiblemente etanol y/o isopropanol, dioles o polioles inferiores y sus éteres, preferiblemente propilenglicol, glicerina, etilenglicol, éter monoetílico o éter monobutílico de etilenglicol, éter monometílico o monoetílico o monobutílico de propilenglicol, éter monometílico o monoetílico de dietilenglicol, y productos análogos, polímeros, estabilizadores de espuma; electrolitos, y especialmente uno o más espesantes. Sin embargo, preferiblemente las composiciones cosméticas tópicas para uso en la presente invención están libres de etanol, más preferiblemente están libres de alcoholes, y lo más preferible están libres de disolventes orgánicos, ya que tales compuestos pueden causar irritación de la piel.

Los espesantes que pueden usarse en composiciones cosméticas tópicas para uso en la presente invención para ayudar a hacer que la consistencia de un producto sea adecuada incluyen carbómero, dióxido de silicio, silicatos de magnesio y/o aluminio, cera de abejas, ácido esteárico, polisacáridos de alcohol estearílico y sus derivados tales como goma de xantano, hidroxipropilcelulosa, poliacrilamidas, polímeros cruzados de acrilato, preferiblemente un carbómero, tal como carbopole® de tipo 980, 981, 1382, 2984, 5984, solos o mezclas de los mismos.

Agentes neutralizantes adecuados que se pueden incluir en la composición cosmética tópica de la presente invención para neutralizar componentes tales como por ejemplo un emulsionante o un mejorador/estabilizador de espuma incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos alcalinos tales como hidróxido de sodio y potasio; bases orgánicas tales como dietanolamina (DEA), trietanolamina (TEA), aminometilpropanol, y mezclas de los mismos; aminoácidos tales como arginina y lisina, y cualquier combinación de cualquiera de los anteriores. El agente neutralizante puede estar presente en una cantidad de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 8% en peso en la composición cosmética tópica de la presente invención, preferiblemente 1% en peso a alrededor de 5% en peso.

La adición de electrolitos a la composición cosmética tópica para uso según la presente invención puede ser necesaria para cambiar el comportamiento de un emulsionante hidrófobo. De este modo, las emulsiones/microemulsiones para uso según esta invención pueden contener preferiblemente electrolitos de una o varias sales que incluyen aniones tales como cloruro, sulfatos, carbonato, borato y aluminato, sin estar limitado a ellos. Otros electrolitos adecuados pueden estar basados en aniones orgánicos tales como, pero sin limitarse a, lactato, acetato, benzoato, propionato, tartrato y citrato. Como cationes, se seleccionan preferiblemente amonio, alquilamonio, metales alcalinos o alcalinotérreos, iones de magnesio, hierro o cinc. Las sales especialmente preferidas son cloruro de potasio y sodio, sulfato de magnesio, sulfato de cinc, y mezclas de los mismos. Los electrolitos pueden estar presentes en una cantidad de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 8% en peso en la composición cosmética tópica de la presente invención.

También es un objeto de la presente invención proporcionar una composición cosmética que comprende un extracto de Gentiana acaulis, un extracto de Gentiana septemfida, o una mezcla de los mismos, y un vehículo cosmético convencional. El vehículo cosmético preferido para la presente invención es glicerina.

La presente invención también se refiere al uso de una composición cosmética como se describe anteriormente para la aplicación cosmética a la piel de un ser humano. La aplicación cosmética es preferiblemente tópica, y se realiza mediante la aplicación al menos una vez al día, por ejemplo, dos o tres veces al día en la piel, preferiblemente en la cara.

La aplicación cosmética según la presente invención se selecciona de combatir el envejecimiento cutáneo y en particular la aparición de arrugas, incluyendo inhibir la inflamación de las células cutáneas, retardar el envejecimiento, estimular la síntesis de proteínas por las células de la dermis y la epidermis, proteger las células cutáneas frente al estrés oxidativo, estimular la síntesis de glicosaminoglicanos por las células de la dermis, inhibir la colagenasa y/o elastasa en las células de la piel. Más particularmente, se selecciona de la inducción de la síntesis de colágeno IV, aumento de la producción de hialuronano, disminución de la caspasa-3, inducción de citocinas proinflamatorias.

Además, la presente invención se refiere a un método de tratamiento cosmético, comprendiendo dicho método aplicar tópicamente sobre la piel de un individuo que busca dicho tratamiento una composición cosmética que comprende un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, un extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos como se define en todas las realizaciones anteriores de la invención.

La expresión “una cantidad eficaz” se refiere a una cantidad necesaria para obtener un efecto fisiológico. El efecto fisiológico se puede lograr mediante una dosis de aplicación o mediante aplicaciones repetidas. La dosis administrada puede variar, por supuesto, dependiendo de factores conocidos, tales como la frecuencia del tratamiento y el efecto deseado, y se puede ajustar por un experto en la técnica.

La presente invención también se refiere a un método como se describe anteriormente, en el que se aplica de alrededor de 0,2 mg a alrededor de 200 mg de un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos, como se define en todas las realizaciones anteriores de la invención, por centímetro cuadrado de piel por día.

La utilidad de los agentes para combatir el envejecimiento de la piel se puede determinar mediante métodos conocidos en la técnica.

La invención se ilustra adicionalmente mediante los Ejemplos que siguen, sin limitarse a ellos.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Composición para el cuidado de la piel

El pH de la formulación se ajusta a alrededor de pH 6,5.

Ejemplo 2: Preparación de un extracto de genciana libre de genciopicrósido/genciopicral:

a- Preparación de la enzima unida en fase sólida (etapa conocida por la bibliografía)

La enzima p-glucosidasa (EC 3.2.1.21) (100 mg) se incubó con 15,4 mg de glucosa disuelta en 82 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) a temperatura ambiente durante 1 hora.

La resina Purolite ECR 8214F se mezcla por separado con 30 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) durante 5 minutos, y después se filtra (etapa de lavado).

Después, la resina filtrada se añadió a la disolución amortiguadora que contenía la enzima a 25°C, y se mezcló suavemente durante 24 horas. Después de 24 horas, la disolución se filtró, y la resina resultante se lavó con 60 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) y dos veces con 60 ml de agua desionizada. Después, la resina se mezcló en 80 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75), y se añadió 1 ml de BSA (bis(trimetilsilil)acetamida). La suspensión se mezcló suavemente durante 24 horas. Después de 24 horas, la resina se filtró y se lavó dos veces con 100 ml de agua desionizada.

La disolución amortiguadora es una mezcla de 14,4 ml de disolución de KH²PO⁴ (68 g/500 ml) y 86,6 ml de disolución de K²HPO⁴ (87,1 g/500 ml).

b- Preparación del extracto de genciana libre de genciopicrósido: transformación del genciopicrósido en genciopicral en el extracto de genciana.

b-1) Un extracto de 50 g de las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de plantas alpinas raras de la especie Gentiana (Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida) se preparó como sigue: las plantas secas cortadas se extrajeron dos veces con 10 veces (p/p) de etanol al 60% (con carbón activo) durante 2 horas a 50°C. A continuación, el extracto se filtró y se concentró en un dispositivo Rotavapor a 50°C y una atmósfera de 50 mbares para obtener una disolución acuosa concentrada. A este concentrado se le añadió etanol puro (5 veces la cantidad en peso de la disolución acuosa) para precipitar azúcares y proteínas; después, tras la filtración, el etanol se eliminó una vez más en un dispositivo Rotavapor dando como resultado alrededor de 54 g de extracto acuoso que comprende alrededor de 36% (% de área) de genciopicrósido (determinado por UPLC: columna de fase inversa C18, eluyente: agua/acetonitrilo, detección: 254 nm) que se usó en la etapa b-2) subsiguiente:

b-2) La disolución acuosa obtenida como se describe en b-1) se colocó en un matraz a 28°C (baño), y la enzima (5 g) preparada en la etapa a) (polvo blanco) se añadió para extraer la disolución. La reacción se realizó durante unos días, y se siguió mediante UPLC. Se controló de cerca el porcentaje de transformación del genciopicrósido. Si fue necesario, se añadió una cantidad suplementaria de enzima unida. Cuando el genciopicrósido se transformó completamente en genciopicral, la reacción se terminó mediante filtración y posterior lavado de la resina filtrada con 50 ml de agua desionizada. La disolución de lavado se recogió junto con la disolución principal.

La fase sólida unida con la enzima se lavó y se secó (liofilizó) para reutilizarla.

c- Eliminación del genciopicral.

La disolución obtenida en la etapa b-2) (100 ml) se extrajo dos veces con una cantidad igual de acetato de etilo (100 ml). Después, se separaron las fases orgánica y acuosa. La disolución acuosa se analizó mediante UPLC: columna de fase inversa C18, eluyente: agua/acetonitrilo, detección: 254 nm) para determinar si el genciopicral se eliminó por completo. Si fue necesario, se realizó una tercera extracción con 100 ml de acetato de etilo. La fase acuosa obtenida se destiló a vacío para eliminar las trazas restantes de acetato de etilo. La disolución acuosa finalmente obtenida se puede utilizar para formulación directamente o para fabricación de extracto seco.

Los estudios se realizaron con los extractos de genciana individual o como mezclas de ambas plantas en una relación de Gentiana acaulis/Gentiana septemfida, 15/85 masa/masa o 25/75 masa/masa.

Ejemplo 3: Efecto de un extracto de genciana sobre la producción de hialuronano:

Se usó extracto de genciana (Gentiana acaulis/Gentiana septemfida, 25/75 m/m).

Se sembraron fibroblastos humanos normales (NHF) P2 1 a 5000 células/pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos (Nunclon) en MEM FCS al 10% (Pan Biotech). Después de tres días de crecimiento, se añadió la disolución de extracto de genciana en medio sin FCS, y se incubaron las células durante tres días más. El hialuronano segregado en el medio de crecimiento se midió usando un kit de ensayo de hialuronano (K-1200, Echelon, Salt Lake City, Utah).

En comparación con las células no tratadas, mostramos un aumento del 26 ± 4,9% en la producción de hialuronano con extracto de genciana al 0,001%, y TGFbeta1 (10 ng/ml), que sirvió como control positivo, se estimuló en un 45,6 ± 1,1%.

Ejemplo 4: Efecto de un extracto de genciana sobre la reparación de CPD (dímero de ciclobutano pirimidina):

Se sembraron un promedio de 400000 células en placas de 6 pocillos. Después de una noche de incubación en medio de crecimiento, las células se lavaron dos veces con PBS, se recubrieron con 1 ml de PBS, y se irradiaron con 20 mJ/cm2 de UVB. Posteriormente, las células se incubaron con medio de crecimiento y extracto de genciana. En puntos de tiempo definidos, las células se tripsinizaron, y el ADN se aisló usando un kit de aislamiento de ADN de Qiagen. Se colocaron 200 ng de ADN en placas de ELISA, y los CPDs se detectaron usando un anticuerpo biotinilado anti-CPD de Kamiya a una dilución 1:2000. El extracto consiste en Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m.

Estos resultados en la tabla a continuación muestran un aumento del 40% de la reparación de CPD después de 4 horas con extracto de genciana al 0,1%.

Ejemplo 5: Efecto de un extracto de genciana sobre citocinas proinflamatorias y las MMP:

Material y método

Medida de citocinas y de las MMP

Se cultivaron queratinocitos humanos normales (NHK) P4 1 hasta subconfluencia en medio de crecimiento CnT-07 (CELLnTEC, Berna, Suiza). Después de la irradiación con 100 mJ/cm2 UVB con un simulador de luz solar (SOL500RF, Dr. Hoenle, Alemania), las células se incubaron nuevamente durante 24 h en CnT-07 que contiene 0,1% de extracto de Gentiana (Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m) o vehículo. Se recogió el sobrenadante del cultivo celular a lo largo del tiempo, y se congeló a -20C hasta que se midieron las citocinas y las MMP en un dispositivo Luminex100. Las medidas de Luminex100 se realizaron utilizando un kit multiplex hecho a medida (Panomics, Italia) según las instrucciones del fabricante.

Se encontró una inhibición de la liberación de citocinas proinflamatorias IL-1 b, IL-8, TNFa, MMP-1 como se destaca en la siguiente tabla

Tabla con resultados para el ejemplo 8: % de inhibición de la liberación de citocinas de células irradiadas con UVB tratadas con extracto de genciana al 0,1% en comparación con células irradiadas con UV, pero sin tratar.

Ejemplo 6: Reducción de la producción intracelular de especies reactivas de oxígeno por un extracto de Genciana:

Detección de especies reactivas de oxígeno (ROS)

La generación de ROS intracelulares se determinó utilizando la sonda específica de ROS H²DCF-DA (Molecular Probes). La oxidación de H²DCF-DA al producto fluorescente DCF sirve como indicador del grado general de estrés oxidativo intracelular.

Se sembraron fibroblastos humanos primarios a 5000 células/pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos en DMEM, FCS al 10%, Pen/Strep al 1%. Después de 24 h, se añadió el extracto de Gentiana (Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m) a la disolución, y las células se incubaron durante 72 h adicionales. Después del tratamiento con el compuesto, incubamos las células con H²DCF-DA (25 mM) y Hoechst 33258 (1 ug/ml) en HBSS/HEPES al 2,5% durante 45 min a 37°C en la oscuridad. Lavamos las células dos veces con HBSS/HEPES para eliminar cualquier H²DCF-DA que no ha sido internalizado, y las sometimos H²O² al 30%. La producción de ROS se midió en un lector de placas fluorescentes (SpectraMax GeminiXS) después de 30 min (a 520 nM), y se normalizó al contenido de ADN.

En este estudio mostramos, en comparación con células no tratadas, una reducción del 30% de la producción de ROS intracelular en las células tratadas con extracto de genciana al 0,05%.

Todos estos datos demuestran un efecto positivo sobre el fotoenvejecimiento y el antienvejecimiento in vitro.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para la preparación de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida, en el que la cantidad de genciopicrósido es menor que 0,5% de área, según lo determinado por UPLC y detección UV a 254 nm, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de

(i) Extraer las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida con una mezcla de agua/disolvente orgánico para obtener, después de la filtración, un extracto que comprende genciopicrósido, seguido de

(ii) Eliminar el disolvente orgánico para obtener un extracto acuoso, seguido de

(iii) Hidrolizar el genciopicrósido en el extracto acuoso a genciopicral.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que la extracción en la etapa (i) se realiza con una mezcla de agua/etanol.

3. El procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que la hidrólisis de genciopicrósido a genciopicral en la etapa (iii) se realiza con una p-glucosidasa, preferiblemente con una p-glucosidasa inmovilizada en una resina de estireno/metacrílico activada con epoxi.

4. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la hidrólisis se realiza hasta que la concentración de genciopicrósido es menor que 0,1% de área, más preferiblemente 0,01% de área, lo más preferible menor que 0,001% de área.

5. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, conteniendo dicho procedimiento una etapa (iv) que consiste en la eliminación del genciopicral del extracto acuoso obtenido en (iii) por extracción.

6. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que el genciopicral se elimina mediante extracción con un disolvente orgánico, preferiblemente con acetato de etilo.

7. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que una mezcla de partes aéreas de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida se utiliza en una relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida entre 5/95 masa/masa y 50/50 masa/masa.

8. El procedimiento según la reivindicación 7, en el que la relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 10/90 masa/masa y 30/70 masa/masa.

9. El procedimiento según la reivindicación 7, en el que la relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 15/85 masa/masa y 25/75 masa/masa.

10. Un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, obtenido mediante un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

11. Una composición cosmética que comprende un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libre de genciopicrósido según la reivindicación 10.

12. La composición cosmética según la reivindicación 11, en la que la composición comprende entre 0,001 y 20% en peso de materia seca de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida, basado en el peso total de la composición cosmética.

13. La composición cosmética según la reivindicación 11 o 12, en la que la composición comprende además glicerina.

14. Uso no terapéutico de una composición como se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, para aplicación cosmética a la piel de un ser humano.

15. Uso no terapéutico según la reivindicación 14, en el que la aplicación cosmética se selecciona de combatir el envejecimiento cutáneo caracterizado por la reducción de arrugas y/o la inducción de síntesis de colágeno.

16. Una composición como se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, para uso en la reducción de la producción de especies de oxígeno reactivas intracelulares.