ES2845281B2 - Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos - Google Patents

Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos Download PDF

Info

Publication number
ES2845281B2
ES2845281B2 ES202031248A ES202031248A ES2845281B2 ES 2845281 B2 ES2845281 B2 ES 2845281B2 ES 202031248 A ES202031248 A ES 202031248A ES 202031248 A ES202031248 A ES 202031248A ES 2845281 B2 ES2845281 B2 ES 2845281B2
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
formulation
amb
weight
cyclodextrin
dry powder
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES202031248A
Other languages
English (en)
Other versions
ES2845281A1 (es
Inventor
López Dolores Remedios Serrano
Pablo Tomero Esther De
Durán Juan José Torrado
PAPANTONAKIS Mª PALOMA BALLESTEROS
Fernández Francisco Bolás
Anne Marie Healy
Sandrine Marchand
AYUELA Mª AUXILIADORA DEA
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universidad Complutense de Madrid
CEU Cardinal Herrera University
French National Institute Of Health And Medical Res Inserm
Poitiers Univ Hospital
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite de Poitiers
College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth near Dublin
Original Assignee
Universidad Complutense de Madrid
CEU Cardinal Herrera University
French National Institute Of Health And Medical Res Inserm
Poitiers Univ Hospital
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite de Poitiers
College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth near Dublin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidad Complutense de Madrid, CEU Cardinal Herrera University, French National Institute Of Health And Medical Res Inserm, Poitiers Univ Hospital, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Universite de Poitiers, College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth near Dublin filed Critical Universidad Complutense de Madrid
Priority to ES202031248A priority Critical patent/ES2845281B2/es
Publication of ES2845281A1 publication Critical patent/ES2845281A1/es
Priority to EP21905870.8A priority patent/EP4265259A1/en
Priority to PCT/ES2021/070885 priority patent/WO2022129661A1/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2845281B2 publication Critical patent/ES2845281B2/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0075—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a dry powder inhaler [DPI], e.g. comprising micronized drug mixed with lactose carrier particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

DESCRIPCIÓN
Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos
SECTOR DE LA TÉCNICA
La presente invención se encuadra en el campo técnico de la fabricación de preparaciones farmacéuticas. De forma más concreta, se refiere a la preparación y obtención de formulaciones de composiciones farmacéuticas de anfotericina B.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La anfotericina B (AmB) es el fármaco que se utiliza actualmente comogold-standarden el tratamiento de infecciones fúngicas pulmonares y leishmaniosis debido a su amplio espectro de actividad y baja resistencia. Actualmente, la anfotericina B solo se comercializa como polvo liofilizado para reconstitución extemporánea antes de administración intravenosa. Sin embargo, su uso se asocia con efectos adversos como fiebre, escalofríos, náuseas y vómitos y, más significativamente, con nefrotoxicidad.
Para disminuir esta toxicidad, se han propuesto anteriormente formulaciones lipídicas de anfotericina B como alternativa al tratamiento clásico. Estas formulaciones permiten una dosificación más alta y, con ello, un aumento del índice terapéutico.
En la mayoría de los casos, estas formulaciones basadas en lípidos se administran por vía intravenosa. Normalmente, estas formulaciones lipídicas de AmB se comercializan en forma de polvo liofilizado para reconstitución inmediata antes de su administración intravenosa (AmBisome® y Abelcet®, por ejemplo).
Sin embargo, es deseable disponer de una formulación de AmB administrable por vía inhalatoria, ya que permite una rápida acción de los fármacos siendo útil, en particular, para la administración local de fármacos que actúan sobre las vías respiratorias inferiores
De hecho, la mayoría de los ensayos clínicos sobre administración de AmB están enfocados en la seguridad y eficacia de formulaciones lipídicas de AmB inhaladas comerciales.
Los medicamentos inhalados se pueden administrar utilizando inhaladores de dosis medida (conocidos como pMDIs por sus siglas en inglés) como aerosoles y nebulizadores; o inhaladores de polvo seco (DPIs, por sus siglas en inglés). Cada uno de ellos requiere una estrategia de formulación para asegurar el éxito de la liberación del fármaco en el pulmón. Pero, entre todos ellos, los DPIs presentan ventajas como la consistencia de la dosis administrada a las vías respiratorias, una buena eficacia de deposición, facilidad de administración y estabilidad de la formulación. En la mayoría de los casos, su uso está destinado a la administración mediante aerosoles.
Una de las limitaciones de las formulaciones de DPI es que el flujo inspiratorio del paciente determina la eficacia de la inhalación y la deposición del fármaco en los pulmones (De Pablo, E, Fernández-García R, Ballesteros MP, Torrado JJ, Serrano D.R.Nebulised antibiotherapy: conventional versus nanotechnology based approaches, is targeting at a nano scale a difficult subject?Annals of Translational Medicine, 2017 5(22): p. 1-16.). Por lo tanto, es posible que los medicamentos no se administren con éxito en pacientes que padecen infecciones pulmonares de hongos o parásitos graves, con una capacidad pulmonar muy disminuida o pacientes con falta de coordinación mano-respiración. En este sentido, sería de gran ventaja una formulación DPI versátil que pudiera ser tanto administrado como un DPI como fácilmente reconstituido en agua seguido de nebulización; especialmente para población pediátrica y geriátrica o pacientes con dificultades para lograr una inspiración profunda (Vartiainen, V., et al.,Pulmonary administraron of a dry powder formulation of the antifibrotic drug tilorone reduces silica-induced lung fibrosis in mice.Int J Pharm, 2018.544(1):p. 121-128). La última estrategia basada en la reconstitución del polvo en agua para nebulización, podría ser útil en aquellos pacientes que requieren ajuste de dosis como, por ejemplo, en el caso de tratamientos profilácticos o infecciones graves (Rijnders, B.J., et al.,Aerosolized liposomal amphotericin B for the prevention of invasive pulmonary aspergillosis during prolonged neutropenia: a randomized, placebo-controlledtrial.Clin Infect Dis, 2008. 46(9): p. 1401-8; Paranjpe, M. and C.C. Muller-Goymann,Nanoparticle-mediated pulmonary drug delivery: a review.Int J Mol Sci, 2014. 15(4): p. 5852-73).
Por otra parte, la experiencia de antibióticos inhalados diseñados para administración parenteral muestra que pueden causar irritación bronquial debido al uso de excipientes no fisiológicos en su composición. Además, no sólo hay una necesidad clínica de antifúngicos DPI sino también de formulaciones para DPI que combinen antifúngicos y broncodilatadores.
Por ello, sería deseable una formulación de anfotericina B que se pueda administrar por inhalación y esté libre de excipientes que causen irritación bronquial.
EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención describe formulaciones farmacéuticas de anfotericina B para el tratamiento y la profilaxis de infecciones pulmonares causadas por hongos o patógenos intracelulares como la leishmaniosis o la tuberculosis.
De forma más concreta, la invención se refiere a nuevas formulaciones farmacéuticas de anfotericina B (AmB) sin excipientes lipídicos para administración por vía pulmonar, así como a su método de preparación y sus aplicaciones.
En base a la necesidad clínica, se han desarrollado formulaciones adaptadas a la vía pulmonar conteniendo AmB. Opcionalmente, la AmB puede combinarse con otros fármacos antifúngicos (como el itraconazol) para incrementar su eficacia. También opcionalmente, las formulaciones pueden contener fármacos broncodilatadores (como el salbutamol). Se trata de formulaciones que se pueden administrar tanto en polvo seco (cuya administración es mucho más sencilla sin necesitar de la coordinación entre la respiración y la pulsación) como en forma de aerosoles administradas con un nebulizador previa reconstrucción en agua.
Un primer aspecto de la invención se refiere al desarrollo de micropartículas colapsadas sin excipientes lipídicos que presentan un tamaño geométrico y aerodinámico apto para la vía pulmonar (1 - 5 ^m) y con una carga de fármaco antifúngico superior al 25% del contenido total en peso del polvo seco del contenido total de la formulación.
En concreto, el método para la preparación de las formulaciones de la presente invención comprende las siguientes etapas:
a) Se prepara una disolución en medio acuoso de y-ciclodextrina y se ajusta el pH de dicha disolución entre 12 y 14.
b) A continuación se añade la AmB (en una cantidad entre el 5 - 40% del total del peso de la formulación) a la disolución de la etapa (a) en una relación peso AmB: y-ciclodextrina 1:1 y se agita constantemente hasta su completa disolución.
c) Se ajusta el pH de la mezcla de la etapa (b) a un valor entre 6 y 8, y se sonica si es necesario para conseguir una mezcla homogénea.
d) Se añade un monosacárido (como, por ejemplo, manosa, rafinosa o manitol) a la suspensión acuosa en una proporción entre el 5 y el 40% en peso del total (relación peso AmB: monosacárido de 1:1)
e) A continuación se incorpora un aminoácido (como la leucina o isoleucina) a la suspensión anterior en proporciones por debajo del 20% en peso del total de la formulación.
Para la preparación de la formulación en polvo seco para inhalación, se realizan también las siguientes etapas:
f) Se atomiza la suspensión acuosa mediante atomizador. El flujo de entrada de aire o nitrógeno puede variar entre 600 y 800 L/h, aunque preferiblemente se utiliza 742 L/h; la suspensión acuosa es bombeada a una velocidad entre 2 y 6 ml/min, preferiblemente a 2,5 ml/min; la temperatura de evaporación se mantiene por encima de 110°C, preferiblemente de 150°C; y la fuerza de aspiración por encima del 90%.
g) Tras la atomización se recoge el polvo atomizado del vaso colector.
Un segundo aspecto de la invención se refiere a la utilización de mono y oligosacáridos de bajo peso molecular como excipientes bioactivos para la vectorización del fármaco antifúngico hacia el epitelio pulmonar como, por ejemplo, ciclodextrinas y manosa.
Respecto a los oligosacáridos, es conocido que la ciclodextrina tiene la capacidad de difundir a través del moco producido en ciertas infecciones pulmonares y facilitar la desestabilización del biofilm formado por microorganismos. Estos defectos suelen ser temporales y reversibles, minimizando su toxicidad a nivel pulmonar. La proporción de ciclodextrina utilizada en la presente invención para la solubilización de ciertos antifúngicos como la AmB es inferior a la descrita anteriormente (WO2012042072). Un proporción baja de ciclodextrinas y AmB (por ejemplo, 1:1 en peso) permite que se establezca un equilibrio entre AmB solubilizada y agregada. Este equilibrio mejora el balance beneficio-riesgo a nivel pulmonar.
También es conocido que la combinación de AmB con monosacáridos, como la manosa, tiene un doble efecto: por un lado, actúa como agente quimiotáctico atrayendo patógenos celulares y, por otro lado, interviene en la regulación de la inmunidad celular al ser capaz de interaccionar con receptores localizados en la superficie de macrófagos activándose la respuesta inmunitaria capaz de interaccionar con receptores localizados en la superficie de macrófagos, activándose la respuesta inmunitaria y promoviéndose la erradicación de organismos patógenos (Brown, G.D.,Dectin-1: a signalling non-TLR pattern-recognition receptor.Nat Rev Immunol, 2006.
6(1): p. 33-43). Por tanto, las formulaciones de la presente invención pueden ser de utilidad para el tratamiento contra patógenos intracelulares que se encuentren localizados a nivel de los macrófagos, como la tuberculosis o leishmaniosis (Pinto, M.R., E. Barreto-Bergter, and C.P. Taborda,Glycoconjugates and polysaccharides of fungal cell wall and activation of immune system.Braz J Microbiol, 2008. 39(2): p. 195 208).
Un tercer aspecto de la invención se refiere a la combinación de AmB con aminoácidos, como la leucina, en bajas proporciones (< 20 %) como facilitadores del flujo de partículas a nivel del tracto respiratorio (Focaroli, S., et al.,A Design of Experiment (DoE) approach to optimise spray drying process conditions for the production of trehalose/leucine formulations with application in pulmonary delivery.Int J Pharm, 2019. 562: p. 228-240; Molina, C., et al.,Agglomerated novel spray-dried lactoseleucine tailored as a carrier to enhance the aerosolization performance of salbutamol sulfate from DPI formulations.Drug Deliv Transl Res, 2018. 8(6): p. 1769-1780), confiriendo así a las partículas una morfología colapsada con carácter antiadherente permitiendo una mejor deposición pulmonar y una menor susceptibilidad a la humedad, prolongando su estabilidad fisicoquímica (Mah, P.T., et al.,The use of hydrophobic amino acids in protecting spray dried trehalose formulations against moisture-induced changes.Eur J Pharm Biopharm, 2019. 144: p. 139-153). Además, la combinación de mañosa y leucina en la formulación tiene capacidad protectora frente a los glóbulos rojos, lo cual es muy importante para fármacos hemolíticos como la AmB.
Un cuarto aspecto de la invención se refiere al desarrollo de formulaciones pulmonares mediante atomización con alta versatilidad, que pueden administrarse tanto como inhaladores en polvo seco como aresoles con baja susceptibilidad al caudal de aire inspirado por el paciente. Las micropartículas colapsadas desarrolladas en estado sólido presentan una buena deposición pulmonar a distintos flujos de aire inspiratorio (entre 60 y 30 L/min). Además, pueden reconstituirse en agua, dando lugar a un tamaño óptimo en suspensión pudiendo ser aerosolizadas manteniendo una correcta desposición en el tracto respiratorio. Además, la desposiciónin vivotras administración pulmonar ha demostrado tiempos más prolongados de las micropartículas en el pulmón y, por consiguiente, un mejor efecto terapéutico.
Un quinto aspecto de la invención es la combinación de AmB con otros fármacos antifúngicos o broncodilatadores. En función de los excipientes utilizados y las condiciones empleadas para su fabricación, las micropartículas pueden contener más de un fármaco antifúngico, como el itraconazol, pudiendo incrementar su eficacia. Se ha conseguido cargar hasta un 40% de fármacos dentro de las micropartículas manteniendo un buen perfil de deposición pulmonarin vitro.De la misma forma, la combinación con fármacos broncodilatadores, como el salbutamol, también es factible, manteniéndose una buena deposición de las partículas a nivel pulmonar.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
Para complementar la descripción que se está realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las características de la invención, se acompaña como parte integrante de dicha descripción, un juego de dibujos en donde con carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo siguiente:
Figura 1. Actividadin vitroantifúngica frente aCandida ssp.Clave: Diferencias estadísticas significativas (p<0,05) enC. albicans, C. parasilopsisyC. glabrataestán expresadas mediante *, # y &, respectivamente, en comparación con los discos comerciales de Neosensitab® de AmB.
Figura 2. Estudio de la captación por macrógafos: captación de micropartículas de AmB en presencia de macrófagos utilizando una concentración de AmB de 1,56 ^g/ml tras 1 ,4 y 24 h de exposición.
Figura 3.Perfil farmacocinético tras la administración intratraqueal de 5 mg/kg de la formulación F1 de AmB comparada con la formulación comercial AmBiosme®. Clave: -- ■ -- Concentración de AmBisome® en plasma tras ser administrada por vía intravenosa, - ^ - Concentración de AmB en tejido epitelial pulmonar y - ■ -Concentración de AmB en plasma.
A continuación se proporciona una lista de los distintos elementos representados en las figuras que se integran en la invención:
F1: Formulación de AmB que contiene una proporción de AmB: y-ciclodextrina:manosa en peso 1:1:1 (29,8%:29,8%:29,8%) y un 10,4 % de leucina.
REALIZACIÓN PREFERENTE DE LA INVENCIÓN
La presente invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos, los cuales no pretenden ser limitativos de su alcance.
Ejemplo 1.
Este ejemplo se refiere a la preparación de la formulación de AmB siguiendo el método descrito en la invención.
Se prepara una disolución en medio acuoso de y-ciclodextrina y se ajusta el pH de dicha disolución entre 12 y 14. A continuación se añade la AmB (en una cantidad equivalente en peso al de la ciclodextrina (ratio 1:1) y se agita constantemente hasta su completa dispersión. Se ajusta el pH de la mezcla de la etapa (b) a un valor entre 6 y 8, y se sonica durante 10 min en un baño de agua. Se añade manosa a la suspensión acuosa en una proporción AmB:y-ciclodextrina:manosa de 1:1:1 (en peso) para la formulación descrita como F1. A continuación se incorpora un aminoácido (como la leucina) a la suspensión anterior en proporciones por debajo del 20% en peso del total de la formulación, en particular en un 10.4% para la F1.
La suspensión obtenida se atomiza en un Mini Büchi.B191 (Büchi Labortechnik AG, Switzerland) usando un ciclón de alta eficiencia, fijando la temperatura de entrada en 130 - 170°C, el caudal de pulverización en 2 - 6 mL/min (tasa de pulverización 5-15%), el caudal de nitrógeno en 500 - 800 NL/h y la fuerza del aspirador en un 85 - 100 %. Una vez atomizada la disolución, las partículas se recogen en un colector.
Ejemplo 2.
En este ejemplo se muestra el efecto del tipo de monosacárido en las micropartículas colapsadas obtenidas.
La sustitución de manosa por rafinosa dio lugar a micropartículas con un tamaño geométrico superior (5-10 ^m).
Ejemplo 3.
En este ejemplo se prueba la actividad antifúngicain vitrode la formulación de AmB.
Se prueba la actividad antifúngica de la formulación de AmB atomizadas descritas en el ejemplo 1 contra tres cepas diferentes deCandida spp. (Candida spp., Candida albicans; CECT 1394,Candida Glabrata60750 yCandida Parassilopsis57744). La actividad antifúngica se prueba por ensayo de difusión en agar (Ruiz, H.K. et al.Int, J. Pharm,2014. 473(1-2): p. 148-57).
Los diámetros de la zona de inhibición se miden en puntos donde hay una inhibición completa de crecimiento de levadura. Los aislados se clasifican en susceptibles a AmB (S) cuando la zona de inhibición es mayor de 15 mm, resistentes (R) si la zona de inhibición es menor de 10 mm e intermedios (I) si la zona de inhibición está entre 11 y 14 mm. En la Figura 1, se observa que las tres cepas deCandidaprobadas son susceptibles a la formulación F1 con un halo de inhibición mayor de 15 mm. F1 muestra una mayor eficacia significativa (p<0,05) que los discos de AmB comerciales Neo-Sansitabs® contraC. albicansyC. parapsilosis.
Ejemplo 4.
En este ejemplo se estudia la captación por macrófagos de la AmB de la formulación de la invención.
Se crecen células de línea J774 (línea celular similar a monocitos murinos) en MEM(Mínimum Essential Médium)desarrollado por Eagle en presencia de FBS(Fetal Bovine Serum),100 UI/mL de penicilina G y 100 jg /m L de estreptomicina en matraz de 25 mL a 37°C y atmósfera humidificada 5% CO<2>/aire. Las células J774 (100 j l equivalente a 5x105 células/ml) se incuban a 37°C con 100 j l de cada formulación de AmB antes de ser reconstituidas con agua desionizada y diluidas a varas concentraciones, entre 25 y 0,195 jg/m l). Después de varios tiempos de incubación (1,4 y 24 h), el sobrenadante se elimina y se lava toda la placa con medio macrófago frío (RPMI). La lisis celular se lleva a cabo con 250 j l de Triton 1% en PBS seguido de 30 minutos bajo agitación leve. Después, se transfieren 100 j l a otra placa de 96 pocillos y se incorporan 100 |jl de metanol para solubilizar la AmB y precipitar los restos celulares. La placa se centrifuga durante 10 minutos a 2500 rpm. Finalmente, se recoge el sobrenadante y se analiza por HPLC.
La Figura 2 muestra captación de micropartículas de AmB en presencia de macrófagos utilizando una concentración de AmB de 1,56 jg /m l tras 1 ,4 y 24 h de exposición.
Ejemplo5.
En este ejemplo se muestra el efecto hemolítico de los excipientes de la formulación de AmB atomizada.
Se centrifuga sangre de personas sanas voluntarias contenida en tubos Vacutainer recubierto de EDTA a 1000 rpm durante 5 minutos y se marcan los niveles de plasma y hematocrito en el tubo. En el tubo se descarta el sobrenadante y tubo se rellena hasta el nivel de plasma marcado con disolución de NaCl 150 mM y se mezcla. Se centrifuga de nuevo el tubo (5 minutos a 1000 rpm) y se descarta de nuevo el sobrenadante. Las células rojas de la sangre (RBC, del inglésRed Blood Cells)se lavan dos veces con disolución de NaCl 150 mM. Después se descarta el sobrenadante y las RBCs se diluyen con PBS (tampón fosfato salino) a pH 7,4 hasta una concentración final del 4% (4,81 x 105 RBC/ml). Las RBCs diluidas se añaden en placas de 96 pocillos (180 jl/pocillo).
Para comparar el efecto de la leucina y la manosa en diferentes estados de agregación de la AmB, se preparan disoluciones de la-formulación de AmB y se colocan 20 j l de cada una de ellas en los pocillos. Para control positivo, se añaden también en un pocillo 20 ^l de disolución de Tritón X-100. Para control negativo, se añaden 20 ^l de PBS a pH = 7,4. Las placas se incuban a 37°C durante 1 hora. Después, se centrifugan a 2500 rpm durante 5 minutos para sedimentar eritrocitos. Los sobrenadantes (50 ^l) se transfieren a una placa transparente de 96 pocillos de fondo plano. Se mide la absorbancia (ABS) de los sobrenadantes usando un lector de placas (BioTek, ELx808) a 595 nm. El porcentaje de hemolisis se calcula mediante la ecuación:
Resultó que los excipientes (leucina y manosa) tienen un efecto protector en las RBCs solo cuando se usan en proporción 1:1 en peso, pero no de forma separada.
Ejemplo 6.
Se muestra la deposición pulmonar de la formulación de AmB.
Para determinar la deposición pulmonarin vitrode la formulación F1, se calcula el tamaño de partícula aerodinámico (MMDA) y la fracción de partículas (FPF) por debajo de las 5 y 3 ^m, de acuerdo a las especificaciones de laEuropean Pharmacopoeia 9.0 - Preparations por Inhalationpara dos condiciones diferentes: y 60 L/min durante 4 segundos y 30 L/min durante 8 segundos.
La formulación también se reconstituye en agua desionizada a 5 mg/ml para estudiar la deposición pulmonar durante nebulización durante 15 minutos a 25 L/min. También se realizan pruebas con AmBisome® (formulación liposomal liofilizada intravenosa) siendo incorporado en cápsulas para inhalación de polvo seco o siendo reconstituido en agua desionizada a la misma concentración.
Resultó que las formulación F1 atomizada muestra una buena deposición pulmonar a 60 L/min con un FPF < 5 ^m próximo al 80% y un MMAD por debajo de 3 ^m. A diferentes caudales de aire, F1 muestra un perfil consistente a los cambios del caudal de aire, exhibiendo una reducción importante del 25% en la FPF < 5 ^m a 25 y 30 L/min. La formulación comercial AmBisome® muestra un perfil de deposición muy diferente entre 60 L/min a partir de su liberación de una cápsula en un inhalador en polvo seco y nebulizada después de ser reconstituida en agua desionizada y nebulizada a 25 L/min.
Las micropartículas colapsadas de F1 en estado sólido presentan una buena deposición pulmonar a distintos flujos de aire inspiratorio (entre 60 y 30 L/min). Además, pueden reconstituirse en agua, dando lugar a un tamaño óptimo en suspensión pudiendo ser aerosolizadas manteniendo una buena deposición en el tracto respiratorio.
Ejemplo 7.
Este ejemplo se refiere al perfil farmacocinético de la formulación de AmB.
El perfil farmacocinético de la formulación de la presente invención, se determina utilizando ratas OFA 250/275 gr. A un primer grupo (G1) se le administró 5 mg /kg de AmBisome® por vía intravenosa; a los grupos G2 y G3 se les administró la formulación F1 en dosis de 5 mg/kg por vía intratraqueal. Se mantienen concentraciones en plasma por encima de 1 |jg/ml durante, al menos, 24 h; esto indica que una sola administración diaria sería suficiente para proporcionar efecto profiláctico o terapéutico frente aAspergillus spp.
Sin embargo, los niveles de AmB en plasma caen muy rápidamente después de administración intravenosa de AmBisome® (por debajo de 1 jg /m l a las 4 horas), lo cual explica la baja eficiencia de esta formulación cuando se administra por vía parenteral en pacientes críticos (Figura 3).

Claims (8)

REIVINDICACIONES
1. Formulación de anfotericina B (AmB) basada en micropartículas colapsadas para ser administrada por vía inhalatoria en forma de polvo seco, o en forma de aerosoles previa reconstrucción en agua, que comprende aminoácidos, oligosacáridos y monosacáridos como excipientes, caracterizada por que no contiene excipientes lipídicos, los oligosacáridos y monosacáridos son yciclodextrina y manosa en proporción AmB: y-ciclodextrina:manosa es 1:1:1; el aminoácido es leucina en proporción 10 -13 % en peso del total de la formulación; las micropartículas presentan un tamaño geométrico y aerodinámico apto para la vía pulmonar (1 - 5 ^m) con una carga de fármaco antifúngico superior al 25% en peso del polvo seco del contenido total de la formulación.
2. Método para la preparación de la formulación objeto de la reivindicación 1 que comprende las siguientes etapas:
a) Preparar una disolución en medio acuoso de y-ciclodextrina y ajustar el pH de dicha disolución entre 12 y 14.
b) Añadir a continuación anfotericina B (en una cantidad entre el 5 - 40% del total del peso de la formulación) a la disolución de la etapa (a) en una relación peso AmB: y-ciclodextrina entre 1:1 y agitar constantemente hasta su completa dispersión.
c) Ajustar el pH de la mezcla de la etapa (b) a un valor entre 6 y 8, y sonicar si es necesario para conseguir una mezcla homogénea.
d) Añadir el monosacárido a la suspensión acuosa en una relación peso AmB:
monosacárido de 1:1
e) Incorporar a continuación el aminoácido a la suspensión anterior en-una proporción del 10,4 % en peso del total de la formulación.
f) Atomizar la suspensión acuosa mediante atomizador para la preparación de la formulación en polvo seco.
g) Recoger el polvo atomizado del vaso colector
3. Método, según reivindicación 2, donde el antifúngico es anfotericina B (AmB) el monosacárido es manosa, y el aminoácido es leucina.
4. Método, según reivindicación 2, donde la etapa de atomización se lleva a cabo empleando un flujo de entrada de aire o nitrógeno entre 600 y 800 L/h, la suspensión acuosa es bombeada a una velocidad entre 2 y 6 ml/min, la temperatura de evaporación se mantiene por encima de 110°C, y la fuerza de aspiración por encima del 80%.
5. Método, según reivindicación 4, donde el caudal de aire o nitrógeno se mantiene en 742 L/h, la suspensión se bombea a 2,5 ml/min, la temperatura de evaporación se mantiene a 150°C y la fuerza de aspiración por encima del 90%.
6. Uso de la formulación reivindicada para la fabricación de un medicamento antifúngico de administración por inhalación.
7. Uso, según reivindicación 6, donde la administración se realiza mediante inhalador de polvo seco (DPI).
8. Uso, según reivindicación 7, donde la administración se realiza mediante aerosoles, previa reconstitución del polvo en agua.
ES202031248A 2020-12-15 2020-12-15 Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos Active ES2845281B2 (es)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES202031248A ES2845281B2 (es) 2020-12-15 2020-12-15 Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos
EP21905870.8A EP4265259A1 (en) 2020-12-15 2021-12-13 Amphotericin b formulations for inhalation based on collapsed microparticles containing carbohydrates and amino acids
PCT/ES2021/070885 WO2022129661A1 (es) 2020-12-15 2021-12-13 Formulaciones de anfotericina b para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES202031248A ES2845281B2 (es) 2020-12-15 2020-12-15 Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2845281A1 ES2845281A1 (es) 2021-07-26
ES2845281B2 true ES2845281B2 (es) 2024-10-22

Family

ID=76949624

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES202031248A Active ES2845281B2 (es) 2020-12-15 2020-12-15 Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP4265259A1 (es)
ES (1) ES2845281B2 (es)
WO (1) WO2022129661A1 (es)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE287703T1 (de) * 1995-04-14 2005-02-15 Nektar Therapeutics Pulverförmige pharmazeutische formulierungen mit verbesserter dispergierbarkeit
CA2623256A1 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Nektar Therapeutics Receptacles and kits, such as for dry powder packaging
US20120128728A1 (en) * 2005-12-28 2012-05-24 Novartis Pharma Ag Compositions Comprising Amphotericin B
ES2387440B2 (es) 2010-09-27 2014-02-04 Universidad Complutense De Madrid Formulaciones topicas de anfotericina b y metodo de obtencion
CN110801433B (zh) * 2019-11-15 2021-05-04 江南大学 一种共载两性霉素b和阿霉素的靶向药物组合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP4265259A1 (en) 2023-10-25
ES2845281A1 (es) 2021-07-26
WO2022129661A1 (es) 2022-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2387749T3 (es) Aerosoles que comprenden fármacos nanoparticulados
ES2222294T3 (es) Formulacion optimizada de tobramicina para administracion en forma de aerosol.
US8715623B2 (en) Pulmonary delivery of aminoglycoside
CN111249260B (zh) 包含rpl554的液体吸入制剂
JP2774379B2 (ja) 医薬エアロゾール組成物ならびにそれらのウイルス疾患の治療および予防用途
US20120148635A1 (en) Gallium formulation for the treatment and prevention of infectious diseases
KR20140032450A (ko) 건조 분말 반코마이신 조성물 및 관련 방법
Yu et al. Optimization of inhalable liposomal powder formulations and evaluation of their in vitro drug delivery behavior in Calu-3 human lung epithelial cells
ES2355059T3 (es) Transferencia de principios activos controlada por campo magnético para la aerosolterapia.
CN111803471A (zh) 基于环糊精-金属有机骨架的呼吸道给药制剂
Cao et al. “Nano-in-micro” structured dry powder inhalers for pulmonary delivery: advances and challenges
Jin et al. RETRACTED: Pulmonary route of administration is instrumental in developing therapeutic interventions against respiratory diseases
ES2357607T3 (es) Composiciones intranasales.
US6187765B1 (en) Mometasone furoate suspensions for nebulization
Resnier et al. Challenges and successes using nanomedicines for aerosol delivery to the airways
Xing et al. Nano-strategies for improving the bioavailability of inhaled pharmaceutical formulations
ES2845281B2 (es) Formulaciones de antifúngicos para inhalación basadas en micropartículas colapsadas conteniendo carbohidratos y aminoácidos
ES2974900T3 (es) Formulación de suspensión mejorada de un corticoesteroide para administración por medio de inhalación
Bi et al. Liposomes as a carrier for pulmonary delivery of peptides and proteins
KR20050105490A (ko) 경폐 투여용 서방성 제제학적 조성물
Rawat et al. Nanotechnology-Based Drug Delivery Systems for the Treatment of Pulmonary Diseases
Giri et al. Chitosan-based nanoparticulate system for pulmonary drug delivery
Deka et al. Resperetory disease and need for efficient drug delivery system
Yan et al. Inhalable formulations in pharmacy: from basic research to clinical applications.
Singhvi et al. Microparticulate drug delivery systems for targeting respiratory diseases

Legal Events

Date Code Title Description
BA2A Patent application published

Ref document number: 2845281

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: A1

Effective date: 20210726

FG2A Definitive protection

Ref document number: 2845281

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: B2

Effective date: 20241022