ES2845559T3 - Bacterias probióticas microencapsuladas en multicapa así como alimento y composiciones farmacéuticas que comprenden dichas bacterias - Google Patents

Bacterias probióticas microencapsuladas en multicapa así como alimento y composiciones farmacéuticas que comprenden dichas bacterias Download PDF

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Abstract

Bacterias probióticas recubiertas con un recubrimiento que comprende lípidos de origen vegetal, caracterizadas porque dicho recubrimiento es un recubrimiento multicapa que comprende al menos una primera capa de recubrimiento y una segunda capa de recubrimiento, en las que las capas de recubrimiento primera y segunda están elaboradas del mismo material de recubrimiento y en las que: - una primera capa de recubrimiento se forma sobre la superficie externa de las bacterias y una segunda capa de recubrimiento se forma sobre la superficie externa de dicha primera capa de recubrimiento, en las que dichas capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en un lípido de origen vegetal seleccionado del grupo que consiste en monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos saturados, poligliceroles esterificados con ácidos grasos saturados y ácidos grasos saturados libres y en las que: los recubrimientos primero y segundo se pulverizan sobre bacterias liofilizadas en sucesión, en las que entre dichos recubrimientos primero y segundo, se realiza una parada para permitir que la primera capa de recubrimiento enfríe y solidifique, y posteriormente se aplica la segunda capa de recubrimiento.

Description

DESCRIPCIÓN
Bacterias probióticas microencapsuladas en multicapa así como alimento y composiciones farmacéuticas que comprenden dichas bacterias
La presente invención se refiere a bacterias microencapsuladas en multicapa con actividad probiótica, preferiblemente bacterias lácticas y bifidobacterias, y al uso de las mismas para preparar un producto alimenticio, producto de tipo complemento, producto sanitario o composición farmacéutica o bebida a base de agua y/o frutas. En particular, la presente invención se refiere a un producto alimenticio seleccionado de entre agua, bebidas a base de agua y/o frutas, leche, leche entera fresca, leche semidesnatada, leche en polvo, queso, queso fresco, queso curado, queso rallado, mantequilla, margarina, yogur, nata, cremas a base de leche y chocolate, cremas para dulces, mermeladas y suspensiones oleosas que comprenden bacterias microencapsuladas en multicapa de la invención, preferiblemente bacterias lácticas y bifidobacterias microencapsuladas en multicapa con actividad probiótica.
Se conoce bien la presencia en el mercado de productos alimenticios tales como, por ejemplo, chocolate y yogur, o productos de tipo complemento tales como, por ejemplo, complementos o productos nutricionales en forma de una suspensión oleosa, que contienen todos bacterias probióticas. Sin embargo, dichos productos terminados presentan algunos inconvenientes que limitan su eficacia y uso.
Un primer inconveniente se refiere a la estabilidad de las bacterias presentes dentro de un producto terminado. En términos prácticos, las bacterias lácticas o bifidobacterias presentes, por ejemplo, en un producto alimenticio terminado, presentar una estabilidad baja o reducida. La estabilidad baja o reducida se debe al entorno en el que se encuentran las bacterias. La estabilidad baja o reducida, en general, provoca una disminución en la concentración de bacterias presentes el producto terminado con el tiempo. En términos prácticos, una concentración inicial dada de bacterias declarada a t0 para un producto terminado dado disminuye con el tiempo debido a la baja estabilidad de las propias bacterias dentro de dicho producto terminado.
Por tanto, la concentración inicial de bacterias presentes (a t(0), tiempo inicial de fabricación del producto terminado) en el producto terminado no corresponde, justo después de un determinado intervalo de tiempo relativamente breve después de la fecha de fabricación, a la concentración de bacterias declarada en la etiqueta, debido a la disminución en la concentración de bacterias que se produce a lo largo de dicho intervalo de tiempo.
Para aumentar la estabilidad, se ha propuesto recubrir o microencapsular (cubrir) las bacterias con un recubrimiento. Por ejemplo:
El documento WO 2010/103374 A2 describe una suspensión oleosa que contiene bacterias probióticas que son particularmente adecuadas para su uso pediátrico; el documento US 2012/021095 A1 describe un comprimido probiótico que comprende una parte interior, representada por un núcleo de chocolate que contiene bacterias probióticas recubiertas, y una parte exterior, representada por un recubrimiento exterior. El comprimido permite la administración de una carga alta y estable de bacterias probióticas a personas en edad pediátrica;
El documento WO 2010/138522 A2 describe la incrustación de microorganismos vivos o muertos y/o materiales bioactivos en una matriz de formulación seca protectora, en la que la formulación incluye el microorganismo o material bioactivo, un agente estabilizador de la formulación y un agente protector.
El documento WO 93/19162 A2 describe microesferas de ácidos grasos de disco rotatorio secadas de las cepas 301 y 302 de Enterococcus faecium que se usan como aditivo alimentario para animales para la potenciación del crecimiento y la mejora de la calidad de la canal.
El documento WO 2012/021432 A describe una cápsula de gel blanda que contiene bacterias probióticas microencapsuladas que se fabrica de tal manera que la cápsula de gel blanda es estable durante al menos aproximadamente 24 meses a temperatura ambiente.
Sin embargo, no existe en la actualidad ninguna tecnología de recubrimiento o microencapsulación o cubrimiento capaz de otorgar estabilidad a las bacterias independientemente de la naturaleza del producto terminado al que se añadan, las propiedades químicas y físicas del producto terminado, el contenido de agua presente en los ingredientes, los excipientes y aditivos usados para formular el producto terminado y el estado físico del producto terminado, que puede ser, por ejemplo, sólido, en forma de polvo o granular, líquido o en una suspensión.
Por tanto, sería deseable tener una tecnología para recubrir o microencapsular o cubrir las bacterias que permita preparar bacterias recubiertas o microencapsuladas (cubiertas) de tal manera que dichas bacterias recubiertas o microencapsuladas puedan usarse para preparar cualquier producto terminado independientemente de la naturaleza del producto terminado al que se añadan, las propiedades químicas y físicas del producto terminado, el contenido de agua presente en los ingredientes, los excipientes y aditivos usados para formular el producto terminado y el estado físico del producto terminado, que puede ser, por ejemplo, sólido, en forma de polvo o granular, líquido o en una suspensión.
Un segundo inconveniente se refiere a la naturaleza de los ingredientes, excipientes y aditivos usados para formular y preparar el producto terminado, tal como, por ejemplo, el valor de pH, el contenido de agua libre y la composición química desde un punto de vista cualitativo y cuantitativo. Todos estos factores, además de influir en la viabilidad de las bacterias, pueden condicionar/modificar su eficacia una vez administradas en el cuerpo (viabilidad y funcionalidad in vivo) y, por consiguiente, perjudicar su capacidad de colonizar el intestino. A este respecto, es muy importante destacar que las bacterias deben protegerse durante el tránsito gástrico y duodenal, de lo contrario llegarán al intestino en un número muy reducido y en un estado apenas viable para multiplicarse en número suficiente.
Por tanto, sería deseable tener una tecnología para recubrir o microencapsular (cubrir) bacterias que permita preparar bacterias recubiertas o microencapsuladas (cubiertas) de tal manera que dichas bacterias recubiertas o microencapsuladas puedan adquirir la resistencia necesaria que les permita pasar a través del tránsito gástrico y duodenal intactas.
Un tercer inconveniente se refiere al hecho de que los recubrimientos usados para recubrir o cubrir las bacterias no son tales que aseguren un aguante o una resistencia suficiente a las tensiones por fricción mecánica que se producen durante el mezclado de las bacterias con los ingredientes, excipientes y aditivos usados en la formulación del producto final. En términos prácticos, los recubrimientos usados para recubrir las bacterias se someten a menudo a fricción o tensiones mecánicas que se crean durante las etapas de procesamiento, por ejemplo, durante el mezclado de las bacterias con los diversos ingredientes, excipientes y aditivos necesarios para formular un producto terminado, sea un producto alimenticio, un producto de tipo complemento, un producto sanitario o una composición farmacéutica. La consecuencia es que se produce una erosión que debilita el recubrimiento, provocando que pierda consistencia y estructura. Además, se crean microfracturas (grietas) en la parte exterior del recubrimiento, que permiten el paso de humedad y sustancias que son tóxicas para las bacterias. La consecuencia es una pérdida de estabilidad y viabilidad y una colonización baja o reducida.
Finalmente, también hay que hacer varias consideraciones con respecto a la estabilidad del propio producto alimenticio. En términos prácticos, después de un determinado intervalo de tiempo, las bacterias lácticas colocadas dentro de un producto alimenticio pueden dar lugar a fenómenos de precipitación y/o fenómenos de agregación con la posterior formación de un agregado o precipitado bacteriano. Estos fenómenos pueden alterar la vida útil de almacenamiento del producto alimenticio.
Por tanto, sigue existiendo la necesidad de poder tener un producto terminado (un producto alimenticio o un producto sanitario o un producto de tipo complemento o una composición farmacéutica) que comprenda bacterias lácticas o bifidobacterias, preferiblemente bacterias con actividad probiótica, que tengan una estabilidad en almacenamiento mejorada en comparación con los productos terminados presentes en el mercado.
Sigue existiendo la necesidad de poder tener un producto terminado (un producto alimenticio o un producto sanitario o un producto de tipo complemento o una composición farmacéutica) que comprenda bacterias lácticas o bifidobacterias, preferiblemente bacterias con actividad probiótica, en el que la concentración de bacterias presentes inicialmente no esté sujeta a una disminución con el tiempo tal como para conducir a una reducción drástica en la concentración de bacterias estimadas inicialmente a tiempo t(0), el tiempo de fabricación del producto.
Finalmente, es necesario que el producto alimenticio que contiene las bacterias probióticas se prepare de tal manera que mantenga las bacterias en un buen estado de viabilidad y funcionalidad con el fin de garantizar una colonización suficiente también si las bacterias recubiertas se ponen en contacto, en la formulación, con sustancias de carácter tóxico o antibióticos.
Después de una intensa actividad de investigación, el solicitante ha proporcionado una respuesta a las necesidades mencionadas anteriormente al desarrollar una tecnología para recubrir o microencapsular (cubrir) bacterias que hace posible producir bacterias recubiertas o microencapsuladas (cubiertas) que no presentan los inconvenientes de la técnica anterior.
El contenido de la presente invención se refiere a bacterias recubiertas o microencapsuladas en multicapa, tal como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
El contenido de la presente invención se refiere a un producto terminado (un producto alimenticio o un producto sanitario o un producto de tipo complemento o una composición farmacéutica) que comprende las bacterias recubiertas o microencapsuladas en multicapa, tal como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
Las realizaciones preferidas de la presente invención se exponen en la descripción detallada a continuación, que se presenta a modo de ejemplo.
El solicitante ha encontrado que el recubrimiento que va a aplicarse de manera externa a las bacterias (células bacterianas) no debe estar formado por una sola capa de recubrimiento (o cubrimiento), por el contrario, debe estar formado por al menos dos capas de recubrimiento. La formación de un recubrimiento que consiste en una sola capa no se encuentra dentro del contexto de la presente invención. Las capas de recubrimiento que se forman sobre las bacterias son un número “n” comprendido desde 2 hasta 10; preferiblemente “n” está comprendido desde 3 hasta 9; ventajosamente “n” es igual a 3, ó 4, ó 5, ó 6, ó 7, u 8.
Una cantidad dada “X” en peso de bacterias, que tiene una concentración expresada en UFC/g, está recubierta o microencapsulada con una cantidad dada “Y” en peso de un material de recubrimiento que comprende lípidos de origen vegetal. La cantidad en peso Y puede ser menor que, igual a o mayor que X. La razón en peso Y:X, en relación con el peso final de las bacterias recubiertas, puede ser, por ejemplo, 1:1, ó 1,25:1, ó 1,50:1, ó 1,75:1, ó 2:1. La cantidad Y se aplica en un número “n” de capas o recubrimientos, en el que en cada capa o recubrimiento la cantidad en peso aplicada es igual a Y/n.
Por ejemplo, 100 gramos de bacterias (“X”) que tienen una concentración de 200x109 UFC/g pueden recubrirse o microencapsularse con 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento. En este caso, Y es igual a X. Los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento no se aplican a las bacterias en una sola etapa de recubrimiento o microencapsulación con el fin de producir bacterias con una sola capa o recubrimiento (bacterias monorecubiertas). Por el contrario, los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento se aplican sobre las bacterias en un número “n” de capas de recubrimiento. Para cada capa de recubrimiento que se forma, la cantidad de material de recubrimiento aplicada es igual a Y/n. Las bacterias recubiertas o microencapsuladas que se obtienen son bacterias recubiertas o multirecubiertas en multicapa. El valor de “n” se fija a priori según las propiedades que se deseen otorgar a las bacterias recubiertas, que depende de las propiedades químicas y físicas del producto terminado al que se añaden, el tipo de procesamiento necesario para formular el producto terminado, el contenido de agua presente en el producto terminado, los ingredientes, excipientes y aditivos usados para formular el producto terminado, el estado físico del producto terminado o la presencia de sustancias tóxicas o antibióticas.
Los tipos de lípidos que van a usarse también dependen de las propiedades químicas y físicas del producto terminado al que se añaden las bacterias recubiertas, el tipo de procesamiento necesario para formular el producto terminado, el contenido de agua presente en el producto terminado, los ingredientes, excipientes y aditivos usados para formular el producto terminado, el estado físico del producto terminado o la presencia de sustancias tóxicas o antibióticas.
En este ejemplo, los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en dos etapas (n=2). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 50 gramos. Los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 60 gramos (primera capa) 40 gramos (segunda capa) o, alternativamente, 80 gramos (primera capa) 20 gramos (segunda capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 200 gramos de bacterias recubiertas con dos capas, a una concentración de 100x109 UFC/g.
En este ejemplo, los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en tres etapas (n=3). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 33,3 gramos. Los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 40 gramos (primera capa) 40 gramos (segunda capa) 20 gramos (tercera capa) o, alternativamente, 50 gramos (primera capa) 25 gramos (segunda capa) 25 gramos (tercera capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 200 gramos de bacterias recubiertas con tres capas, a una concentración de 100x109 UFC/g.
Alternativamente, por ejemplo, los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en cuatro etapas (n=4). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 25 gramos. Los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 30 gramos (primera capa) 20 gramos (segunda capa) 30 gramos (tercera capa) 20 gramos (cuarta capa) o, alternativamente, 40 gramos (primera capa) 20 gramos (segunda capa) 20 gramos (tercera capa) 20 gramos (cuarta capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 200 gramos de bacterias recubiertas con cuatro capas, a una concentración de 100x109 UFC/g.
Alternativamente, por ejemplo, los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en cinco etapas (n=5). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 20 gramos. Los 100 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 40 gramos (primera capa) 15 gramos (segunda capa) 15 gramos (tercera capa) 15 gramos (cuarta capa) 15 (quinta capa) o, alternativamente, 30 gramos (primera capa) 20 gramos (segunda capa) 20 gramos (tercera capa) 15 gramos (cuarta capa) 15 gramos (quinta capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 200 gramos de bacterias recubiertas con cinco capas, a una concentración de 100x109 UFC/g.
Por ejemplo, 100 gramos de bacterias (“X”) que tienen una concentración de 200x109 UFC/g pueden recubrirse con 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento. En este caso, Y es mayor queX. Los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en un número “n” de capas de recubrimiento, por ejemplo, n=3, ó Con n=2, por ejemplo, los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en dos etapas (n=2). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 75 gramos. Los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 100 gramos (primera capa) 50 gramos (segunda capa) o, alternativamente, 80 gramos (primera capa) 70 gramos (segunda capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 250 gramos de bacterias recubiertas con dos capas, a una concentración de 80x109 UFC/g.
Con n=3, por ejemplo, los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en tres etapas (n=3). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 50 gramos. Los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 75 gramos (primera capa) 50 gramos (segunda capa) 25 gramos (tercera capa) o, alternativamente, 60 gramos (primera capa) 60 gramos (segunda capa) 30 gramos (tercera capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 250 gramos de bacterias recubiertas con tres capas, a una concentración de 80x109 UFC/g.
Con n=4, por ejemplo, los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en cuatro etapas (n=4). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 37,5 gramos. Los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 50 gramos (primera capa) 50 gramos (segunda capa) 25 gramos (tercera capa) 25 gramos (cuarta capa) o, alternativamente, 60 gramos (primera capa) 30 gramos (segunda capa) 30 gramos (tercera capa) 30 gramos (cuarta capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 250 gramos de bacterias recubiertas con cuatro capas, a una concentración de 80x109 UFC/g.
Con n=5, por ejemplo, los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento pueden aplicarse sobre las bacterias en cinco etapas (n=5). Por tanto, en cada capa o recubrimiento la cantidad aplicada es igual a Y/n, es decir, 30 gramos. Los 150 gramos (“Y”) de material de recubrimiento también pueden aplicarse sobre las bacterias de la siguiente manera: 50 gramos (primera capa) 25 gramos (segunda capa) 25 gramos (tercera capa) 25 gramos (cuarta capa) 25 (quinta capa) o, alternativamente, 40 gramos (primera capa) 30 gramos (segunda capa) 30 gramos (tercera capa) 25 gramos (cuarta capa) 25 gramos (quinta capa). Al final del procedimiento de recubrimiento o microencapsulación, se obtendrán 250 gramos de bacterias recubiertas con cinco capas, a una concentración de 80x109 UFC/g.
Las bacterias usadas en la invención son bacterias probióticas, preferiblemente bacterias lácticas y bifidobacterias. Las bacterias probióticas son bacterias vivas capaces de garantizar un efecto beneficioso al consumidor cuando las toma en grandes cantidades y durante una cantidad adecuada de tiempo.
Las bacterias se recubren o microencapsulan con un recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en al menos un lípido de origen vegetal. El recubrimiento está formado por un número de capas de recubrimiento comprendido desde 2 hasta 10, con el fin de producir una cubierta o un recubrimiento multicapa. Ventajosamente, n es igual a 3, ó 4, ó 5, ó 6.
Las bacterias probióticas usadas en la preparación del producto terminado, según la presente invención, se seleccionan del grupo que comprende las especies: L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, grupo L. delbrueckii, L. salivarius, L. casei, L. paracasei, grupo L. plantarum, L. rhamnosus, L. reuteri, L. brevis, L. buchneri, L. fermentum, L. Johnsonii, B. adolescentis, B. angulatum, B. bifidum, B. breve, B. catenulatum, B. infantis, B. lactis, B. longum, B. pseudolongum, B. pseudocatenulatum y S. thermophilus.
Las bacterias que van a recubrirse o microencapsularse están en forma liofilizada.
Las bacterias se recubren o microencapsulan con un material de recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en al menos un lípido de origen vegetal, usando técnicas y procedimientos conocidos por los expertos en la técnica.
Las capas de recubrimiento individuales se aplican/forman con una técnica de recubrimiento o microencapsulación multicapa o multicubierta que prevé la formación de capas independientes. La eficiencia del procedimiento para aplicar/formar una sola capa de recubrimiento es de al menos el 70%, pero está habitualmente comprendida desde el 80 hasta el 90%.
Las bacterias en forma liofilizada pueden recubrirse o microencapsularse usando una técnica de lecho fluidizado (por ejemplo, pulverización superior o pulverización inferior), en la que el material de recubrimiento, representado por lípidos de origen vegetal, se aplica de manera externa sobre las bacterias después de calentarse y licuarse. Luego se añaden las bacterias probióticas recubiertas, usando técnicas conocidas, al producto terminado (un producto alimenticio, un producto de tipo complemento, un producto sanitario o una composición farmacéutica), por ejemplo, un producto alimenticio. El producto alimenticio se selecciona del grupo que comprende leche, leche entera fresca, leche semidesnatada, leche en polvo o liofilizada, queso, queso fresco, queso curado, queso rallado, mantequilla, margarina, yogur, nata, cremas a base de leche y chocolate, cremas para dulces, mermeladas y suspensiones oleosas. El producto alimenticio también puede estar representado por agua potable o una bebida no alcohólica. El agua o la bebida puede contener las bacterias recubiertas de la presente invención. Por ejemplo, las bacterias probióticas recubiertas en forma sólida se añaden gradualmente, con agitación, al producto terminado, evitando la formación de grumos y aglomerados. Cuando ha terminado la adición de bacterias, el producto se mantiene con agitación durante un tiempo comprendido desde 1 hasta 20 minutos a una temperatura comprendida desde 4 hasta 18°C. Alternativamente, las bacterias recubiertas pueden acomodarse, por ejemplo, en una tapa inferior de una botella que contiene agua o una bebida, por ejemplo, con sabor a naranja o con sabor a frutas en general. En el momento en que sea necesario, la tapa inferior puede abrirse y las bacterias recubiertas contenidas en ella caerán dentro de la bebida contenida en la botella. Las bacteria pueden mezclarse mediante agitación sencilla con agua o con la bebida, que puede tener, por ejemplo, sabor a naranja.
Las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en al menos un lípido de origen vegetal seleccionado del grupo que consiste en monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos saturados, poligliceroles esterificados con ácidos grasos saturados y ácidos grasos saturados libres. Los lípidos se seleccionan del grupo que comprende o, alternativamente, que consiste en grasas vegetales saturadas que tienen un punto de fusión comprendido desde 35°C hasta 85°C, preferiblemente comprendido desde 45 hasta 70°C. Ventajosamente, desde 50 hasta 60°C.
En una realización preferida, pueden usarse grasas vegetales saturadas que tienen un determinado grado de hidrofilicidad y/o hidrofobicidad; estas pueden seleccionarse del grupo que comprende monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos saturados, poligliceroles esterificados con ácidos grasos saturados y ácidos grasos saturados libres.
Los ácidos grasos saturados pueden seleccionarse del grupo que comprende desde 8 hasta 32 átomos de carbono, preferiblemente de 12 a 28 átomos de carbono, incluso más preferiblemente de 16 a 24 átomos de carbono.
Ventajosamente, el lípido de origen natural se selecciona del grupo que comprende o, alternativamente, que consiste en:
-(i) dipalmitoestearato de glicerilo E471, INCI (PCPC): estearato de glicerilo, CAS: 85251-77-0 (o 1323-83-7), EINECS: 286-490-9 (o 215-359-0). Ejemplo de un producto comercial: Biogapress Vegetal BM 297 ATO, Gattefossé Sa S (lípido (i));
-(ii) poli(palmitoestearato de glicerilo) E475, INCI: poligliceril-6-diestearato, CAS: 61725-93-7. Ejemplo de un producto comercial: Plurol Stearique WL 1009, Gattefossé Sa S (lípido (ii));
-(iii) una mezcla de ésteres de glicerol y ácidos grasos C16-C18, CAS: 68002-71-1, EINECS: 268-084-3. Ejemplo de un producto comercial: Precirol Ato 5, Gattefossé SAS (lípido (iii));
-(iv) una grasa vegetal hidrogenada de origen no láurico, que tiene un contenido de ácidos grasos libres calculado como el % de ácido oleico, máx. el 0,20%, un índice de peróxido de máx. 0,20 meq. de 02/kg de ácidos grasos saturados, un porcentaje mínimo de grasas sólidas a 20°C del 94% y un porcentaje de grasas sólidas a 40°C que oscila desde un mínimo del 94% hasta un máximo del 99%. Ejemplo de un nombre comercial: Revel C, Loders Croklaan B.V. (lípido (iv)).
El tipo y la naturaleza química del lípido usado en la capa de recubrimiento dependen de las propiedades químicas y físicas del producto terminado, el contenido de agua presente en el producto terminado al que se añaden las bacterias recubiertas, los ingredientes, excipientes y aditivos usados para formular el producto terminado, el estado físico del producto terminado, por ejemplo, puede ser un producto terminado en una disolución acuosa (por ejemplo, leche), un producto terminado en forma de polvo o granular (por ejemplo, leche en polvo o queso rallado o mantequilla) o una suspensión oleosa.
En el contexto de la presente invención, “primera capa de recubrimiento” significa la capa de recubrimiento aplicada de manera externa sobre la superficie de las bacterias, mientras que “segunda capa de recubrimiento” significa la capa de recubrimiento aplicada de manera externa sobre dicha primera capa, y así sucesivamente para las otras capas que siguen.
Las bacterias recubiertas de la presente invención se recubren o microencapsulan (cubren) con un recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en al menos un lípido de origen vegetal tal como se define en las reivindicaciones adjuntas. Dicho recubrimiento es un recubrimiento multicapa formado por un número de capas de recubrimiento “n” comprendido desde 2 hasta 10. Cuando n=2, las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en un lípido de origen vegetal que es el mismo entre ellas. Cuando n está comprendido desde 3 hasta 10, las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en al menos un lípido de origen vegetal que es el mismo entre ellas.
Las bacterias se recubren o microencapsulan con un recubrimiento que comprende lípidos de origen vegetal tal como se define en las reivindicaciones adjuntas. Dicho recubrimiento está formado por un número de capas de recubrimiento “n” comprendido desde 2 hasta 10. Cuando “n” es 2, hay dos capas de recubrimiento. En términos prácticos, un recubrimiento doble (dos capas) se produce en sucesión, con dos lípidos iguales entre sí.
Cuando “n” es igual a 2, las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en al menos un lípido de origen vegetal que es el mismo entre ellas. El lípido se selecciona del grupo que comprende o, alternativamente, que consiste en los lípidos (i), (ii), (iii) y (iv).
Las bacterias pueden recubrirse con una primera capa de recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en lípido (i) y una segunda capa de recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en lípido (i) . La razón en peso entre dichas capas de recubrimiento primera y segunda está comprendida desde 1:3 hasta 3:1, preferiblemente de 1:2 a 2:1, ó 1:1.
Las bacterias pueden recubrirse con una primera capa de recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en lípido (ii) y una segunda capa de recubrimiento que comprende o, alternativamente, que consiste en lípido (ii) . La razón en peso entre dichas capas de recubrimiento primera y segunda está comprendida desde 1:3 hasta 3:1, preferiblemente de 1:2 a 2:1, ó 1:1.
Independientemente del tipo específico de lípido usado, los dos lípidos se pulverizan sobre las bacterias liofilizadas en sucesión, es decir, se aplica una doble cubierta sobre el liofilizado, que consiste en una primera capa de recubrimiento (la capa de recubrimiento aplicada de manera externa sobre la superficie de las bacterias) y una segunda capa de recubrimiento (la capa de recubrimiento aplicada de manera externa sobre dicha primera capa). Entre dichas capas de recubrimiento primera y segunda, se realiza una parada con el fin de dejar que las bacterias con la primera capa de recubrimiento enfríen y permitir que solidifique el recubrimiento. Posteriormente, se aplica la segunda capa de recubrimiento. El lípido que va a aplicarse se calienta hasta la temperatura de fusión con el fin de obtener una forma líquida que puede pulverizarse y, a esa temperatura, se aplica sobre las bacterias liofilizadas.
Las bacterias pueden recubrirse o microencapsularse con tres capas de recubrimiento. En términos prácticos, un recubrimiento con tres lípidos diferentes o iguales entre sí (recubrimiento triple o capa triple) se produce en sucesión.
Las bacterias pueden recubrirse con unas capas primera y segunda de lípido (i) y luego una tercera capa de lípido (ii), o con unas capas primera y segunda de lípido (ii) y una tercera capa de lípido (i).
Ventajosamente, la estabilidad que se logra se mantiene con el tiempo con las bacterias recubiertas de la presente invención; en particular, en un entorno que es muy desfavorable para las bacterias, tal como el representado por agua o polvos con mucha humedad, permite preparar con éxito bebidas a base de agua o agua y frutas.
Además, las bacterias recubiertas de la presente invención permiten que las bacterias probióticas se formulen en una mezcla íntima con antibióticos para preparar, por ejemplo, una cápsula que contiene bacterias probióticas recubiertas y antibióticos para su administración simultánea. De esta manera, puede garantizarse que las bacterias resistan la barrera gástrica y la presencia de antibióticos y puedan llegar intactas al intestino y colonizar para restaurar el equilibrio de la flora bacteriana devastada por el efecto del antibiótico.
El contenido de la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende las bacterias recubiertas liofilizadas de la presente invención y al menos un principio activo farmacéutico con actividad antibiótica; preferiblemente, el antibiótico puede seleccionarse del grupo que comprende, entre otros, ciprofloxacina, eritromicina o ampicilina.
El solicitante llevó a cabo una serie de ensayos experimentales, cuyos resultados se notifican a continuación.
La tabla A muestra, a modo de ejemplo, un grupo de microorganismos que tienen aplicación válida en el contexto de la presente invención. Todas las cepas se depositaron según el Tratado de Budapest y la autoridad de depósito competentes las pone a disposición del público, previa solicitud.
El solicitante llevó a cabo ensayos experimentales in vivo e in vitro con el fin de evaluar la estabilidad y la resistencia a los jugos gástricos, pancreáticos y sales biliares de las bacterias recubiertas con dos, tres y cuatro capas de recubrimiento que comprenden los lípidos (i), (ii), (iii) y (iv) mencionados anteriormente. Las pruebas llevadas a cabo confirman que las bacterias recubiertas (gastroprotegidas) son capaces de soportar el ataque de los jugos gástricos y pancreáticos y las sales biliares y, por tanto, son capaces de llegar al intestino vivas y viables y a una concentración idéntica a la inicial presente en el producto en el momento de preparación.
1) Análisis de estabilidad de 3 muestras bacterianas de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) en agua a 25°C durante 4 días, tabla 1.
Muestra 1 (ejemplo de referencia): se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con un capa de recubrimiento que consiste en 100 gramos de lípido (ii). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (ii) = 1:1 (un solo recubrimiento).
Muestra 2 (ejemplo de referencia): se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con un capa de recubrimiento que consiste en 100 gramos de lípido (i). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i) = 1:1 (un solo recubrimiento).
Muestra 3 (ejemplo de referencia): se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble).
Las bacterias recubiertas (muestras de referencia 1, 2 y 3) se colocaron en agua en una cantidad tal como para garantizar una concentración de 5x109 UFC/10 ml. Las suspensiones obtenidas se almacenaron a 25°C en viales de vidrio.
Tabla 1
Figure imgf000008_0002
La tabla 1 muestra que con una misma cantidad de material de recubrimiento usada (Y), en este caso 100 gramos, la formación de dos capas de recubrimiento otorga sorprendentemente una mayor estabilidad a las células de las bacterias recubiertas.
2) Análisis de estabilidad de una muestra bacteriana de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) en agua a 25°C durante 14 días, tabla 2.
Se sometió a prueba una muestra como la del ensayo anterior, muestra de referencia 3, en agua a 25°C durante 14 días. Muestra de referencia 3: se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble).
Las bacterias recubiertas (muestra de referencia 3) se colocaron en agua en una cantidad tal como para garantizar una concentración de 5x109 UFC/10 ml. Las suspensiones obtenidas se almacenaron a 25°C en viales de vidrio.
Tabla 2
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
La tabla 2 muestra que en un entorno acuoso (muy desfavorables para las bacterias), el recubrimiento doble otorga una excelente estabilidad, también durante un periodo de tiempo muy largo tal como 14 días. Los resultados de la tabla 2 confirman los mostrados en la tabla 1.
3) Análisis de estabilidad de una muestra de leche en polvo complementada con bacterias de la cepa Bifidobacterium breve BR03 (DSM 16604) a 25°C durante 60 días, tabla 3.
Muestra a: leche en polvo bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Bifidobacterium breve BR03 (DSM 16604), NR.
Muestra b: leche en polvo bacterias de Bifidobacterium breve BR03 (DSM 16604). Se recubren 100 gramos de la cepa Bifidobacterium breve BR03 (DSM 16604) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i)+(i) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra (b)) se mezclaron con leche en polvo y se almacenaron a 25°C durante 60 días.
Tabla 3
Figure imgf000009_0002
4) Análisis de estabilidad de una muestra de leche fresca complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 4°C durante 7 y 14 días, tabla 4 y figura 1.
Muestra 4a: leche fresca bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103), NR.
Muestra 4b: leche fresca bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i)+(i) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra (4b)) se mezclaron con leche fresca y se almacenaron at 4°C durante 7 y 14 días.
Tabla 4
Figure imgf000009_0003
5) Análisis de estabilidad de una muestra de mantequilla complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 4°C durante 20, 50 y 150 días, tabla 5 y figura 2.
Muestra 5a: mantequilla bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103), NR.
Muestra 5b: mantequilla bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (ii)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra (5b)) se mezclaron con mantequilla fresca y se almacenaron a 4°C durante 20, 50 y 150 días.
Tabla 5
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6) Análisis de estabilidad de una muestra de queso rallado complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 4°C durante 20, 50 y 150 días, tabla 6 y figura 3.
Muestra 6a: queso rallado bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus g G (ATCC53103), NR.
Muestra 6b: queso rallado bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (ii)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra 6(b)) se mezclaron con queso rallado y se almacenaron a 4°C durante 20, 50 y 150 días.
Tabla 6
Figure imgf000010_0003
7) Análisis de estabilidad de una muestra de crema con sabor a leche para rellenar dulces complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 25°C durante 30, 90 y 180 días, tabla 7 y figura 4.
Muestra 7a: crema con sabor a leche para rellenar dulces bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103), NR.
Muestra 7b: crema con sabor a leche para rellenar dulces bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (ii)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra 7(b)) se mezclaron con crema con sabor a leche para rellenar dulces y se almacenaron a 25°C durante 30, 90 y 180 días.
Tabla 7
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8) Análisis de estabilidad de una muestra de crema con sabor a chocolate para rellenar dulces complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 25°C durante 30, 90 y 180 días, tabla 8 y figura 5.
Muestra 8a: Crema con sabor a chocolate para rellenar dulces bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103), NR.
Muestra 8b: Crema con sabor a leche para rellenar dulces bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (ii) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (ii)+(ii) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra 8(b)) se mezclaron con crema con sabor a chocolate para rellenar dulces y se almacenaron a 25°C durante 30, 90 y 180 días.
Tabla 8
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9) Análisis de estabilidad de una muestra de mermelada con sabor a albaricoque complementada con bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a 25°C durante 30, 90 y 180 días, tabla 9 y figura 6.
Muestra 9a: mermelada con sabor a albaricoque bacterias liofilizadas no recubiertas (células “desnudas”) de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103), NR.
Muestra 9b: mermelada con sabor a albaricoque bacterias de la cepa Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103). Se recubren 100 gramos de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) a una concentración de 200 UFC/g con dos capas de recubrimiento, R: la primera capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i), mientras que la segunda capa de recubrimiento consiste en 50 gramos de lípido (i) (recubrimiento doble). Razón en peso de bacterias liofilizadas:lípido (i)+(i) = 1:1 (recubrimiento doble). Las bacterias recubiertas (muestra 9(b)) se mezclaron con mermelada con sabor a albaricoque y se almacenaron a 25°C durante 30, 90 y 180 días.
Tabla 9
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En las tablas 10, 11, 12 y 13, se usan las siguientes expresiones:
T= totales
R= recubiertas
NR= no recubiertas
Días= número de días
BLN= billón
UFC= unidades formadoras de colonias
LGG Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103)
BR03 Bifidobacterium breve BR03 (DSM16604)
BS01 Bifidobacterium lactis BS01 (LMG P-21384)
LR04 Lactobacillus casei subesp. rhamnosus LR04 (DSM 16605)
LR06 Lactobacillus rhamnosus LR06 (DSM 21981)
LA02 Lactobacillus acidophilus LA02 (LMG P-21382)
LP01 Lactobacillus plantarum LP 01 (LMG P-21021)
Tabla 10: análisis de supervivencia de bacterias recubiertas (R) en contacto con elementos tóxicos.
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Tabla 11: análisis de supervivencia de bacterias no recubiertas (NR) en contacto con elementos tóxicos.
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a a : an ss e supervvenca e acteras recu ertas en contacto con ant tcos: cpro oxacna ugm, A1, eritromicina (0,5 ug/ml), A2, y ampicilina (1 ug/ml para lactobacilos y 0,5 ug/ml para bifidobacterias), A3. T= totales, R= recubiertas, NR= no recubiertas.
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Tabla 13: análisis de supervivencia de bacterias no recubiertas liofilizadas (NR) en contacto con antibióticos: ciprofloxacina (10 ug/ml), A1, eritromicina (0,5 ug/ml), A2, y ampicilina (1 ug/ ml para lactobacilos y 0,5 ug/ml para bifidobacterias), A3. T= totales, R= recubiertas, NR= no recubiertas.
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Tabla A
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Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Bacterias probióticas recubiertas con un recubrimiento que comprende lípidos de origen vegetal, caracterizadas porque dicho recubrimiento es un recubrimiento multicapa que comprende al menos una primera capa de recubrimiento y una segunda capa de recubrimiento, en las que las capas de recubrimiento primera y segunda están elaboradas del mismo material de recubrimiento y en las que:
- una primera capa de recubrimiento se forma sobre la superficie externa de las bacterias y una segunda capa de recubrimiento se forma sobre la superficie externa de dicha primera capa de recubrimiento, en las que dichas capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en un lípido de origen vegetal seleccionado del grupo que consiste en monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos saturados, poligliceroles esterificados con ácidos grasos saturados y ácidos grasos saturados libres y en las que:
los recubrimientos primero y segundo se pulverizan sobre bacterias liofilizadas en sucesión, en las que entre dichos recubrimientos primero y segundo, se realiza una parada para permitir que la primera capa de recubrimiento enfríe y solidifique, y posteriormente se aplica la segunda capa de recubrimiento.
2. Bacterias según la reivindicación 1, en las que los lípidos son grasas vegetales saturadas que tienen un punto de fusión de desde 35°C hasta 85°C, preferiblemente desde 45 hasta 70°C.
3. Bacterias según la reivindicación 1 ó 2, en las que los lípidos se seleccionan de un dipalmitoestearato de glicerilo E471 (lípido (i)), un poli(palmitoestearato de glicerilo) E475 (lípido (ii)), una mezcla de ésteres de glicerol y ácidos grasos C16-C18) (lípido (iii)) y un grasa vegetal hidrogenada de origen no láurico (lípido (iv)).
4. Bacterias según la reivindicación 3, en las que el recubrimiento multicapa consiste en dos capas y las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en lípido (i).
5. Bacterias según la reivindicación 3, en las que la multicapa consiste en dos capas y las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en lípido (ii).
6. Bacterias según la reivindicación 3, en las que la multicapa consiste en tres capas, las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en lípido (i) y una tercera capa de recubrimiento comprende o, alternativamente, consiste en lípidos (ii), (iii) y (iv) o, alternativamente, las capas de recubrimiento primera y segunda comprenden o, alternativamente, consisten en lípido (ii) y una tercera capa de recubrimiento comprende o, alternativamente, consiste en lípidos (i), (iii) y (iv).
7. Bacterias según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en las que dichas bacterias recubiertas tienen una concentración comprendida desde 1x106 hasta 1x1011 UFC/g, preferiblemente de 1x107 a 1x1010 UFC/g, incluso más preferiblemente de 1x108 a 1x109 UFC/g.
8. Producto alimenticio o producto sanitario o producto de tipo complemento que comprende las bacterias recubiertas según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.
9. Producto alimenticio según la reivindicación 8, en el que las bacterias recubiertas, preferiblemente a una concentración comprendida desde 1x106 hasta 1x1011 UFC/g o de 1x107 a 1x1010 UFC/g o de 1x108 a 1x109 UFC/g, se introducen en un alimento seleccionado del grupo que comprende:
- leche en polvo, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- leche fresca, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- mantequilla o margarina, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- nata o yogur, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- queso rallado, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- cremas con sabor a leche para rellenar dulces, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- cremas con sabor a chocolate para rellenar dulces, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio;
- mermelada de albaricoque, en una cantidad comprendida desde el 0,1 hasta el 20% en peso, preferiblemente del 0,5 al 10% en peso, incluso más preferiblemente del 1 al 5% en peso, en relación con el peso del producto alimenticio.
10. Composición farmacéutica que comprende las bacterias recubiertas según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y al menos un principio activo farmacéutico con actividad antibiótica; preferiblemente un antibiótico seleccionado del grupo que comprende ciprofloxacina, eritromicina o ampicilina.
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