ES2861065T3 - Composición para producir D-psicosa que comprende D-psicosa 3-epimerasa y sal y método para producir D-psicosa utilizando la misma - Google Patents

Composición para producir D-psicosa que comprende D-psicosa 3-epimerasa y sal y método para producir D-psicosa utilizando la misma

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Abstract

Una composición para producir D-psicosa, que comprende (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa y (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos, y (c) D-fructosa.

Description

DESCRIPCIÓN
Composición para producir D-psicosa que comprende D-psicosa 3-epimerasa y sal y método para producir D-psicosa utilizando la misma
Campo técnico
La presente invención se refiere a una composición para producir D-psicosa que comprende una D-psicosa 3-epimerasa, D-fructosa y una sal, y un método para producir D-psicosa usando la composición.
Técnica anterior
La D-psicosa es un azúcar natural presente en pequeñas cantidades en frutas tales como higos y pasas o productos de isomerización de melaza o glucosa. La D-psicosa es un monosacárido con un dulzor de 70% con relación al azúcar. Se informó que la D-psicosa es un edulcorante que contiene pocas calorías o ninguna porque no se metaboliza y que tiene poco efecto sobre el aumento de peso corporal debido a que inhibe la formación de grasa corporal. También se informó de que la D-psicosa inhibe la actividad de las enzimas involucradas en la síntesis de lípidos, lo que da como resultado una reducción de la obesidad abdominal (Matuo, T. y col., Asia Pac. J. Clin. Nutr., 10, 223-237, 2001; Matsuo. T. y K. Izumori. AsiaPac. J. Clin. Nutr., 13, s 127, 2004). Según un informe publicado recientemente, la D-psicosa no tiene influencia sobre la hiperglucemia y ayuda a la salud dental debido a sus propiedades no cariogénicas y anticariogénicas.
Por tanto, la D-psicosa ha atraído una atención creciente como edulcorante debido a las ventajas de la misma. Sin embargo, dado que la D-psicosa es un monosacárido raro que existe solo en una pequeña cantidad en la naturaleza, existe la necesidad de desarrollar una técnica eficiente para la producción de D-psicosa que pueda aplicarse a la industria alimentaria.
Los métodos convencionales para la producción de D-psicosa se dividen en métodos químicos y métodos biológicos. Según los métodos químicos, la psicosa se produce a partir de fructosa a partir de la catálisis de iones de molibdato. Los métodos químicos tienen la desventaja de que la D-psicosa se produce en una cantidad muy pequeña durante el tratamiento de la melaza o la isomerización de la glucosa, se incurre en costes considerables y se generan grandes cantidades de subproductos. Según los métodos biológicos, la D-psicosa se produce a partir de la D-fructosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa. Los problemas de los métodos biológicos son los rendimientos muy bajos y los altos costes de producción.
En un esfuerzo por resolver tales problemas, los autores de la presente invención informaron de un método para producir económicamente D-psicosa que comprende isomerizar glucosa a fructosa y hacer reaccionar la fructosa con células bacterianas inmovilizadas que producen una D-psicosa 3-epimerasa (Solicitud de Patente de Corea Núm. 10-2009-0118465), antes de la presentación de la presente solicitud. Los autores de la presente invención también informaron de un método para producir económicamente D-psicosa pura en un estado cristalino sin utilizar un disolvente orgánico tal como etanol. La D-psicosa producida por este método es fluida durante la producción y tiene valor comercial (Solicitud de Patente Coreana No. 10-2010-0027546). El documento WO 2006/129954 describe un método para producir D-psicosa utilizando una enzima epimerasa y D-fructosa como sustrato.
Sin embargo, los métodos para producir D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa (también denominada simplemente "psicosa epimerasa") (en adelante, los métodos se denominan simplemente "métodos de conversión enzimática") todavía tienen un rendimiento limitado. Por lo tanto, es necesario hacer un esfuerzo para aumentar el rendimiento de D-psicosa para la producción industrial en masa y mejorar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa mediante una psicosa epimerasa para reducir los costes de producción.
En tales circunstancias, los autores de la presente invención han realizado una investigación seria para desarrollar un método para mejorar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa utilizando una psicosa epimerasa y, como resultado, encontraron que el uso de un aluminato o yodato en una conversión enzimática El método puede mejorar significativamente la tasa de conversión. La presente invención se ha logrado basándose en este hallazgo.
Problema técnico
Un objeto de la presente invención es proporcionar una composición para producir D-psicosa que comprende (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa, (b) al menos una sal seleccionada entre el grupo que consiste en aluminatos y yodatos y (c) D-Fructosa.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para producir D-psicosa a partir de D-fructosa que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un método para aumentar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa.
Solución técnica
Con el fin de lograr el objetivo anterior y otros objetos de la presente invención, un aspecto de la presente invención proporciona una composición para producir D-psicosa que comprende (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa, (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos y (c) D-fructosa.
La D-psicosa 3-epimerasa (en lo sucesivo denominada simplemente "psicosa epimerasa") utilizada en la composición de la presente invención puede ser cualquier proteína que sea activa en la epimerización de D-fructosa a D-psicosa. Se pueden utilizar como psicosa epimerasa una cepa que expresa endógenamente la proteína, un transformante de la cepa que expresa la proteína, un cultivo de la cepa o una proteína aislada del cultivo.
En una realización, la psicosa epimerasa puede ser una psicosa epimerasa de tipo salvaje derivada de Agrobacterium tumefaciens o Kaistia granuli o una variante de la misma. Específicamente, la psicosa epimerasa puede ser una que tenga una homología de al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% con la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1, 2, 3 o 4. Una variante de psicosa epimerasa cuya secuencia de aminoácidos tenga una homología con la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1, 2, 3 o 4 y esté parcialmente suprimida, modificada, sustituida o añadida también está dentro del alcance de la presente invención siempre que su secuencia de aminoácidos sea enzimáticamente activa en la epimerización de D-fructosa a D-psicosa. Más específicamente, la psicosa epimerasa puede tener la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1 o 4.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "homología" se refiere a un porcentaje de identidad entre dos radicales polipeptídicos. La correspondencia entre las secuencias de un radical a otro se puede determinar mediante mecanismos conocidas en la técnica. Por ejemplo, la homología se puede determinar alineando la información de la secuencia y alineando directamente la información de la secuencia entre dos moléculas polipeptídicas utilizando un programa informático fácilmente disponible. La homología también se puede determinar hibridando polinucleótidos en condiciones en las que se forman cadenas dobles estables entre regiones homólogas, degradando los polinucleótidos hibridados con una nucleasa específica monocatenaria y determinando el tamaño de los fragmentos degradados.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "homólogo" en todas sus formas gramaticales y variaciones de ortografía se refiere a la relación entre proteínas que poseen un "origen evolutivo común", que comprende proteínas de superfamilias (p. ej., la superfamilia de las inmunoglobulinas) y proteínas homólogas de diferentes especies (p. ej., cadena ligera de miosina, etc.). Tales proteínas (y sus genes codificantes) tienen homología de secuencia, como se refleja en su similitud de secuencia. Sin embargo, en el uso común y en la presente invención, el término "homólogo", cuando se modifica con un adverbio tal como "altamente", se puede referir a la similitud de secuencia y se puede relacionar o no con un origen evolutivo común.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "similitud de secuencia" se refiere al grado de identidad o correspondencia entre secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos de proteínas que pueden o no compartir un origen evolutivo común. En una realización específica, dos secuencias de aminoácidos son "sustancialmente homólogas" o "sustancialmente similares" cuando al menos 70% (75%, 90%, 95%, 96%, 97% o 99% según una realización) de los polipéptidos coincide con la longitud definida de las secuencias de aminoácidos. Las secuencias que son sustancialmente homólogas se pueden identificar comparando las secuencias utilizando soporte lógico convencional disponible en los bancos de datos de secuencias, o en un experimento de hibridación de Southern bajo, por ejemplo, condiciones rigurosas como se define para ese sistema particular. La definición de las condiciones de hibridación apropiadas está dentro del conocimiento práctico de la técnica (véase, por ejemplo, Sambrook et al., 1989, más abajo).
En una realización adicional, la cepa que expresa la psicosa epimerasa utilizada en la presente invención puede ser cualquier microorganismo que pueda expresar un gen que codifique cualquiera de las secuencias de aminoácidos descritas en la presente. Específicamente, la cepa puede ser Corynebacterium glutamicum (KCCM11046P, Publicación de Patente de Corea Núm. 10-2011-0035805; KCCM11204P, Patente de Corea Núm. 10-1203856; KCCM11403P, Patente de Corea Núm. 10-1455759; o KCCM11918P, Solicitud de Patente de Corea Núm. 10-2016­ 0152947) pero no se limita a ello.
La psicosa epimerasa se puede mezclar con D-fructosa como sustrato antes de su uso. Alternativamente, se puede añadir D-fructosa a la psicosa epimerasa o viceversa antes de su uso. Alternativamente, la enzima o la cepa que expresa la enzima se pueden inmovilizar sobre un soporte antes de su uso. Los ejemplos de soportes adecuados para su uso en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, agar, agarosa, k-carragenano, alginato y quitosano.
La composición de la presente invención comprende D-fructosa. Específicamente, la D-fructosa se puede utilizar a una concentración de 0,01 M a 10 M, 0,01 M a 5 M, 0,01 M a 3 M, 0,05 M a 10 M, 0,05 M a 5 M, 0,05 M a 3 M, 0,08 M a 10 M, 0,08 M a 5 M, 0,08 M a 3 M o 0,1 M a 2,8 M. La sal se puede utilizar en una cantidad tal que la razón de concentración molar (M) de la sal a la D-fructosa esté en el intervalo de 1:0,01 a 1, de 1: 0,05 a 1, de 1:0,1 a 1, de 1:0,1 a 0,8, de 1:0,1 a 0,6 o 1:0,2 a 0,6. Dentro de este intervalo, la tasa de conversión de la D-fructosa en D-psicosa se puede mantener en un intervalo óptimo.
La tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa se puede aumentar en presencia de la sal en un factor de 1,5 a 5,0, de 1,8 a 5,0, de 2,0 a 5,0, de 1,5 a 3,0, de 1,8 a 3,0 o de 2,0 a 3,0, en comparación con en ausencia de la sal. La composición de la presente invención puede comprender adicionalmente de manera opcional un aditivo capaz de promover o ayudar en la producción de D-psicosa. El ingrediente no está limitado y puede ser, por ejemplo, un ion metálico, tal como manganeso, magnesio, hierro, cobalto y/o aluminio, o una sal metálica. La sal de metal se selecciona del grupo que consiste en NiSO4, NiCh, CoCh, MnCh, MnSO4, ZnSO4 y mezclas de los mismos. El ion metálico o la sal metálica se pueden utilizar a una concentración de 0,5 a 10 mM, de 0,5 a 5 mM o de 0,5 a 3 mM. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para producir D-psicosa a partir de D-fructosa que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa. Un aspecto adicional de la presente invención proporciona un método para aumentar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa.
Ahora, se proporcionará una descripción del método para producir D-psicosa a partir de D-fructosa y el método para aumentar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa.
Según una realización de la presente invención, la D-fructosa se puede producir mediante hidrólisis de sacarosa o isomerización de glucosa. Es decir, la D-psicosa se puede producir utilizando materias primas comunes y económicas tales como fructosa, sacarosa y glucosa con alto rendimiento, lo que permite la producción en masa de D-psicosa. Específicamente, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (pre-a) isomerizar D-glucosa a D-fructosa antes de la etapa (a). En la etapa (pre-a), se puede utilizar una proteína que sea activa en la isomerización de glucosa. Los ejemplos de proteínas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, glucosa isomerasas y fosfoglucosa isomerasas.
Según una realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (c) añadir D-fructosa antes de, o después de, o simultáneamente a la adición de la sal. Según una realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente la adición de D-fructosa simultáneamente a la adición de la sal. Específicamente, la sal y la D-fructosa se pueden añadir por separado de una vez. Alternativamente, la sal se puede añadir mezclada con D-fructosa.
Cada uno de los métodos de la presente invención puede comprender adicionalmente (c') añadir un aditivo capaz de promover o ayudar en la producción de psicosa. Específicamente, el aditivo puede ser un ion metálico (p. ej., manganeso, magnesio, hierro, cobalto y/o aluminio) o una sal metálica. Más específicamente, la sal metálica se puede seleccionar del grupo que consiste en NiSO4, NiCh, CoCh, MnCh, MnSO4, ZnSO4 y mezclas de los mismos. Según una realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (d) epimerizar la D-fructosa después de la etapa (b), (c) o (c'). La reacción se puede llevar a cabo a un pH de 7 a 9,0, un pH de 7,5 a 9,0, un pH de 7,8 a 9,0, un pH de 8,0 a 9,0, un pH de 7,5 a 8,5, un pH de 7,8 a 8,5, un pH de 7,8 a 8,3 o un pH de 8,0. La reacción se puede llevar a cabo a una temperatura de 30°C a 65°C, 40°C a 65°C, 50°C a 65°C, 50°C a 60°C, 53°C a 57°C o 55°C. La reacción se puede llevar a cabo durante al menos 2 horas, al menos 3 horas y/o como máximo 16 horas, como máximo 24 horas, como máximo 36 horas o como máximo 48 horas.
Según otra realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (e) aislar y/o purificar D-psicosa después de la etapa (b), (c), (c') o (d). No existe ninguna restricción particular sobre el método para purificar D-psicosa. La D-psicosa se puede purificar mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Los ejemplos no limitantes de tales métodos de purificación incluyen cromatografía, cristalización fraccionada, purificación de iones, diálisis, precipitación, adsorción y electroforesis, que se pueden realizar solos o combinados. Por ejemplo, la D-psicosa se puede purificar mediante cromatografía. En este caso, el sacárido diana se puede separar basándose en las diferencias en la fuerza de unión entre los sacáridos y los iones metálicos anclados a una resina iónica.
Cada uno de los métodos según la presente invención puede comprender adicionalmente (f) blanquear y/o desmineralizar antes o después de la etapa de purificación. El blanqueamiento y/o desmineralización hace que la D-psicosa sea más pura sin impurezas.
Según otra realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (g) cristalizar D-psicosa después de la etapa (b), (c), (c'), (d), (e) o (f). Se puede utilizar cualquier método de cristalización adecuado conocido en la técnica sin limitación particular. Por ejemplo, la D-psicosa se puede cristalizar durante el enfriamiento. Como resultado de la cristalización, se puede obtener D-psicosa purificada con alto rendimiento.
Según una realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente concentrar la solución de D-psicosa antes de la cristalización. Esta concentración da como resultado una reducción de 2,5 a 3 veces en la concentración de la D-psicosa purificada y permite una cristalización más eficaz.
Según otra realización de la presente invención, cada uno de los métodos puede comprender adicionalmente (h) reutilizar la D-fructosa que permanece sin reaccionar después de la etapa de purificación (e) en la etapa de epimerización (d) y/o reutilizar las aguas madre a partir de las cuales se ha separado el cristal después de la etapa de cristalización (g) en la etapa de purificación (e). Esta reutilización permite la producción de D-psicosa con mayor rendimiento y reduce la cantidad de D-fructosa desperdiciada, por lo que resulta económicamente ventajoso.
El método para producir D-psicosa a partir de D-fructosa y el método para aumentar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa comparten enzima, cepa, cultivo y sal en común con la composición para producir D-psicosa, y, por tanto, se omite una descripción para evitar una complejidad excesiva de la memoria descriptiva.
Efectos ventajosos
El uso de una enzima derivada de un microorganismo hace que el método para producir D-psicosa sea respetuoso con el medio ambiente. Además, la adición de un aluminato o yodato para mejorar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa a través de una reacción enzimática aumenta significativamente el rendimiento de producción de D-psicosa, siendo así eficaz para maximizar la producción de D-psicosa.
Descripción de los dibujos
La Fig. 1 muestra los cromatogramas de HPLC obtenidos cuando la D-fructosa se convirtió en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa en el Ejemplo Comparativo 1 y cuando la D-fructosa se convirtió en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa en presencia de un aluminato en el Ejemplo 1-1 ((a) D-fructosa 0,1 M, (b) D-fructosa 1,7 M y (c) D-fructosa 2,8 M) y el Ejemplo 1-2 (d).
La Fig. 2 muestra los cromatogramas de HPLC obtenidos cuando la D-fructosa se convirtió en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa en el Ejemplo Comparativo 2 y cuando la D-fructosa se convirtió en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa en presencia de un yodato en el Ejemplo 2-1 (a) y el Ejemplo 2-2 (b).
La Fig. 3 muestra las tasas de conversión (%) de D-fructosa en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa en el Ejemplo Comparativo 1 y los Ejemplos 1-1 y 2-1 (a) y en el Ejemplo Comparativo 2 y los Ejemplos 1-2 y 2-2 (b).
Modo de invención
La presente invención se describirá ahora con más detalle. Los expertos en la técnica reconocerán y apreciarán fácilmente las descripciones que no se incluyen en la presente memoria y, por lo tanto, se omite su descripción.
1. Ejemplos comparativos: producción de D-psicosa basada en conversión enzimática
Ejemplo Comparativo 1
Se llevó a cabo una reacción de conversión enzimática utilizando Corynebacterium glutamicum (KCCM11403P), que es una cepa recombinante conocida por expresar una variante de una psicosa epimerasa derivada de Agrobacterium tumefaciens (véase la Patente de Corea Núm. 10-1455759). Se disolvió D-fructosa 0,1 M en agua y a esto se le añadió MnCh 10 mM para preparar una materia prima para la reacción de conversión enzimática. Se añadió la cepa (20% p/p) a la materia prima y se dejó que la reacción transcurriera a pH 8,0 y 55°C durante 3 h. A continuación, se realizó el análisis mediante HPLC cargando la muestra en una columna Aminex HPX-87C (Bio-Rad) a 80°C y dejando que el agua como fase móvil fluya a una velocidad de 0,6 ml/min a través de la columna. Las áreas bajo los picos correspondientes al sustrato (D-fructosa) de la psicosa epimerasa y el producto (D-psicosa) se compararon y cuantificaron para calcular la tasa de conversión de D-fructosa.
Como resultado, la tasa de conversión en D-psicosa por el método de conversión enzimática fue de 25% (Tabla 1).
Ejemplo Comparativo 2
Se llevó a cabo una reacción de conversión enzimática utilizando una psicosa epimerasa derivada de Kaistia granuli. La enzima se produjo mediante el siguiente procedimiento. En primer lugar, se inocularon 5 ml de medio LB-ampicilina (Difco) con la cepa recombinante (E. coli BL21 (DE3)/KGDPE (KCCM11918P) que expresa la psicosa epimerasa de SEQ ID NO: 4. El inóculo se cultivó en una incubadora a 37°C hasta que se alcanzó una absorbancia de 1,5 a 600 nm. Se inocularon 500 ml de medio LB-ampicilina con el caldo de cultivo, seguido del cultivo principal. Cuando la absorbancia del cultivo a 600 nm alcanzó 0,7, se añadió IPTG 0,5 mM para inducir la expresión masiva de la D-psicosa 3-epimerasa. Se continuó el cultivo a una temperatura de 16°C con agitación a 150 rpm durante 16 h. Para purificar la enzima, el caldo de cultivo se centrifugó a 8000 rpm durante 20 min para recoger las células bacterianas. Las células bacterianas recolectadas se lavaron dos veces con NaCl al 0,85% (p/v), se suspendieron en un tampón de lisis (Tris-HCl 50 mM, pH 7,0, NaCl 300 mM) y se rompieron a 4°C durante 20 min utilizando un homogeneizador ultrasónico. El producto lisado celular se centrifugó a 13.000 rpm y 4°C durante 20 min. Se recogió el sobrenadante, se cargó en una columna Ni-NTA Superflow (Qiagen) preequilibrada con el tampón de lisis. Se dejó fluir secuencialmente a través de la columna un tampón (Tris-HCl 50 mM, NaCl 300 mM, pH 7,0) que contenía imidazol 20 mM y un tampón (Tris-HCl 50 mM, NaCl 300 mM, pH 7,0) que contenía imidazol 250 mM. Se encontró que el monómero de la enzima tenía un peso molecular de ~32 kDa, determinado por SDS-PAGE.
Se disolvió D-fructosa 0,1 M en agua y a esto se le añadió MnCh 10 mM para preparar una solución de reacción enzimática para la reacción de conversión enzimática. A la solución de reacción enzimática se le añadieron 0,4 mg/ml de la enzima purificada. Se dejó que la reacción transcurriera a pH 8,0 y 55°C durante 3 h.
A continuación, se realizó el análisis mediante HPLC cargando la muestra en una columna Aminex HPX-87C (Bio-Rad) a 80°C y dejando que el agua como fase móvil fluya a una velocidad de 0,6 ml/min a través de la columna. Las áreas bajo los picos correspondientes al sustrato (D-fructosa) de la psicosa epimerasa y el producto (D-psicosa) se compararon y cuantificaron para calcular la tasa de conversión de D-fructosa.
Como resultado, la tasa de conversión en D-psicosa por el método de conversión enzimática fue de 25% (Tabla 2).
[2. Ejemplo 1: Producción de D-psicosa en presencia de aluminato
Ejemplo 1-1
Las materias primas se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo Comparativo 1, excepto que la concentración de D-fructosa se cambió a 0,1 M, 1,7 M y 2,8 M. Se añadió aluminato de sodio (NaAlO2) 0,05 M, 0,85 M y 1,4 M a las materias primas que contenían D-fructosa0,1 M, 1,7 M y 2,8 M, respectivamente. La D-fructosa se convirtió en D-psicosa en las mismas condiciones que se describen en el Ejemplo Comparativo 1. Las tasas de conversión de D-fructosa se analizaron de la misma manera que se describe en el Ejemplo Comparativo 1.
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Como se puede ver en la Tabla 1, la tasa de conversión de D-fructosa 0,1 M en presencia de aluminato de sodio fue 268% más alta que en el Ejemplo Comparativo 1. Las tasas de conversión de D-fructosa a mayores concentraciones de 1,7 M y 2,8 M en presencia de aluminato de sodio fueron 268% y 212% más altas que en el Ejemplo Comparativo 1, respectivamente, lo que indica que la adición del aluminato aumenta significativamente la tasa de conversión en D-psicosa (véanse (a) a (c) de la Fig. 1 y (a) de la Fig. 3).
Ejemplo 1-2
Se añadió aluminato de sodio (NaAlO2) 50 mM a la solución de reacción enzimática que contenía D-fructosa 0,1 M preparada en el Ejemplo Comparativo 2. La D-fructosa se convirtió en D-psicosa en las mismas condiciones que se describen en el Ejemplo Comparativo 2. La tasa de conversión de D-fructosa se analizó de la misma manera que se describe en el Ejemplo Comparativo 2.
Los resultados se muestran en la Tabla 1. Como se puede observar en la Tabla 1, la tasa de conversión de D-fructosa en presencia de aluminato de sodio fue 200% más alta que en el Ejemplo Comparativo 1, lo que indica que la adición del aluminato aumenta significativamente la tasa de conversión en D-psicosa como en el Ejemplo 1-1 (véanse (d) de la Fig. 1 y (b) de la Fig. 3).

Claims (4)

REIVINDICACIONES
1. Una composición para producir D-psicosa, que comprende (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa y (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos, y (c) D-fructosa.
2. Un método para producir D-psicosa a partir de D-fructosa, que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa.
3. Un método para aumentar la tasa de conversión de D-fructosa en D-psicosa utilizando una D-psicosa 3-epimerasa, que comprende añadir (b) al menos una sal seleccionada del grupo que consiste en aluminatos y yodatos a (a) una D-psicosa 3-epimerasa, una cepa que expresa la enzima o un cultivo de la cepa.
4. El método de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, que comprende adicionalmente añadir D-fructosa antes de, o después de, o simultáneamente a la adición de la sal.
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