ES2877708T3 - Antagonistas de IL-6 para su uso en el tratamiento de trastornos mediados por hepcidina - Google Patents

Antagonistas de IL-6 para su uso en el tratamiento de trastornos mediados por hepcidina Download PDF

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Abstract

Un antagonista de IL-6 para su uso en un método de tratamiento de la anemia por inflamación crónica mediada por hepcidina en un paciente, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho antagonista de IL-6 a dicho paciente, en donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, opcionalmente en donde esto se ha determinado previamente o en donde dicho método comprende una etapa anterior para determinar si dicho paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; en donde el antagonista de IL-6 es: (a) un anticuerpo anti-IL-6, o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo; o (b) un anticuerpo anti-IL-6R, o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo, opcionalmente tocilizumab o vobarilizumab.

Description

DESCRIPCIÓN
Antagonistas de IL-6 para su uso en el tratamiento de trastornos mediados por hepcidina
2. Antecedentes
La hormona peptídica, hepcidina, desempeña una función fundamental en la homeostasia del hierro. Hentze et al., Cell 142:24-38 (2010). Se sabe que la expresión de la hepcidina está influenciada por el producto del gen TMPRSS6, la matriptasa-2, una serina proteasa transmembrana de tipo II. Se ha demostrado que las variantes frecuentes del gen TMPRSS6 están correlacionadas con el estado del hierro, Benyamin et al., Nature Genetics 41(11):1173-1175 (2009), habiéndose demostrado que el SNP rs855791 (2321G^A; A736V) se correlaciona con variaciones naturales en la expresión de la hepcidina y los niveles de hemoglobina en sangre.
La expresión de la hepcidina también se ha relacionado con los trastornos del hierro en humanos, Pietrangelo, J. Hepatology 54:173-181 (2011), y en las anemias por enfermedad crónica (ACD) (también conocida como anemia por inflamación (AI)). La ACD es prevalente en pacientes con infección crónica, enfermedad autoinmunitaria, cáncer y enfermedad renal crónica (CKD). Sun et al., Am. J. Hematol. 87(4):392-400 (2012) Hashizume et al, Rheumatology International, Clinical and Experimental Investigations, 30(7): 917-923 (2009) divulga que tocilizumab, un anticuerpo anti-interleucina 6 humanizado, mejora la anemia en la artritis de los monos suprimiendo la producción de hepcidina inducida por IL-6.
Existe una necesidad en la técnica de métodos para tratar trastornos mediados por hepcidina.
3. Sumario
El alcance de invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
Hemos demostrado que la reducción de la señalización de IL-6 proporciona un beneficio clínico en pacientes con un trastorno mediado por hepcidina, incluida la anemia por enfermedad crónica y toxicidades celulares mediadas por hepcidina, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en pacientes con niveles elevados de IL-6.
En lo sucesivo, las referencias a aspectos y realizaciones se refieren a aspectos y realizaciones de la presente divulgación que no están necesariamente dentro del alcance de la invención reivindicada. Por consiguiente, en un primer aspecto, se proporcionan métodos para tratar un trastorno mediado por hepcidina. Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina que se ha determinado que tiene al menos una copia del alelo mayor en el SNP rs855791 de TMPRSS6. En una primera serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el paciente tiene niveles séricos elevados de CRP antes del tratamiento.
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica.
En algunas realizaciones de anemia, el paciente es varón y tiene un nivel de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de menos de 14 g/dl; un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 13 g/dl; un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 12 g/dl; o un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 11 g/dl. En algunas realizaciones de anemia, el paciente es mujer y tiene un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 12 g/dl; un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 11 g/dl; un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 10 g/dl; o un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 9 g/dl.
En algunas realizaciones de anemia, el paciente es varón y tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 40 %, menos del 35 % o 30-34 %. En algunas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 36 %, menos del 35 %, menos del 34 %, menos del 33 %, menos del 32 %, o menos del 31 %. En algunas realizaciones, el paciente mujer tiene un hematocrito antes del tratamiento de 26 - 29 %.
En diversas realizaciones de anemia, el paciente ha recibido al menos una administración de un agente estimulante de la eritropoyesis (ESA) antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una administración de un ESA antes del tratamiento y tiene un nivel de Hb normal o hematocrito normal. En diversas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una administración de un suplemento de hierro antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una administración de un suplemento de hierro antes del tratamiento y tiene un nivel de Hb normal o hematocrito normal. En diversas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una transfusión de sangre o concentrado de hematíes antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una transfusión de sangre o concentrado de hematíes antes del tratamiento y tiene un nivel de Hb normal o hematocrito normal.
En una variedad de realizaciones de anemia, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para aumentar los niveles de Hb del paciente por encima de los niveles antes del tratamiento. En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para aumentar el hematocrito del paciente por encima de los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir reducir la dosis de ESA del paciente sin reducir los niveles de Hb del paciente por debajo de los niveles existentes inmediatamente antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir una reducción de la dosis de ESA del paciente sin reducir los niveles de hematocrito del paciente por debajo de los niveles existentes inmediatamente antes del tratamiento.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir al menos una reducción del 10 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento, al menos una reducción del 20 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento, al menos una reducción del 30 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento, al menos una reducción del 40 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento, o al menos una reducción del 50 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período de tiempo suficiente para revertir la deficiencia funcional de hierro.
En una serie de realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica es enfermedad renal crónica (CKD).
En algunas realizaciones de CKD, el paciente tiene enfermedad renal crónica de estadio 1 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 2 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 3 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 4 KDOQI, o enfermedad renal crónica de estadio 5 KDOQI. En realizaciones particulares, el paciente tiene enfermedad renal crónica de estadio 5 KDOQI.
En algunas realizaciones de CKD, el paciente tiene síndrome cardiorrenal (CRS). En realizaciones particulares, el paciente tiene CRS Tipo 4. En ciertas realizaciones, el paciente ha recibido al menos un tratamiento de diálisis antes del tratamiento.
En algunas realizaciones de CKD, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un periodo de tiempo suficiente para reducir la mortalidad cardiovascular (CV) en comparación con los controles históricos emparejados por edad y enfermedad.
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica es una enfermedad inflamatoria crónica.
En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria crónica es artritis reumatoide (RA). En ciertas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento superior a 5,1. En algunas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de 3,2 a 5,1. En realizaciones particulares, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de menos de 2,6. En realizaciones seleccionadas, la RA del paciente antes del tratamiento tiene una actividad moderada a grave.
En algunas realizaciones de RA, el paciente ha recibido al menos una administración de metotrexato antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el paciente ha recibido al menos una administración de un antagonista del TNFa antes del tratamiento. En realizaciones seleccionadas, el antagonista de TNFa se selecciona del grupo que consiste en etanercept, adalimumab, infliximab, certolizumab y golimumab.
En algunas realizaciones de RA, el paciente ha recibido al menos una administración de un antagonista de IL-6 antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 antes del tratamiento es tocilizumab o tofacitinib.
En una serie preferida de realizaciones, el tratamiento con antagonista de IL-6 es MEDI5117.
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica se selecciona del grupo que consiste en artritis idiopática juvenil, espondilitis anquilosante, psoriasis en placas, artritis psoriásica, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica es cáncer. En ciertas realizaciones, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en: tumores sólidos, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer hematológico, mieloma múltiple, leucemias, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), linfomas, linfoma de Hodgkin y adenoma hepático.
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica es una infección crónica.
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es una anemia por enfermedad crónica en donde la enfermedad crónica es insuficiencia cardíaca congestiva (CHF).
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro (IRIDA).
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es síndrome coronario agudo. En realizaciones particulares, el paciente ha sufrido un infarto de miocardio (MI) en los 60 días anteriores a la primera administración de un antagonista de IL-6, en los 30 días anteriores a la primera administración de un antagonista de IL-6, en las 48 horas anteriores a la primera administración de un antagonista de IL-6, o en las 24 horas anteriores a la primera administración de un antagonista de IL-6.
En algunas realizaciones de síndrome coronario agudo, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para mejorar la contractilidad miocárdica en comparación con los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones de síndrome coronario agudo, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para mejorar la fracción de eyección cardíaca en comparación con los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones de síndrome coronario agudo, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir la fibrosis cardíaca en comparación con los niveles antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es la enfermedad de Castleman.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para mejorar el tratamiento de un trastorno mediado por hepcidina. El método comprende suspender la administración de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina, en donde se ha determinado que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para mejorar el tratamiento de un trastorno mediado por hepcidina suspendiendo una terapia que es ineficaz, reduciendo de este modo los efectos secundarios y reduciendo el coste sin pérdida de eficacia del tratamiento. Los métodos comprenden suspender la administración de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina, en donde se ha determinado que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En una serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En realizaciones típicas, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento. En diversas realizaciones, el paciente tiene niveles séricos elevados de CRP antes del tratamiento. En diversas realizaciones, el paciente tiene un trastorno mediado por hepcidina seleccionado de los descritos en la Sección 5.2.1 del presente documento. En ciertas realizaciones, el paciente tiene anemia por enfermedad crónica.
Los datos presentados en los Ejemplos 2, 3 y 5 a continuación demuestran que los antagonistas de IL-6 proporcionan un beneficio terapéutico en sujetos que tienen niveles elevados de IL-6 antes del tratamiento y al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, incluso en ausencia de anemia. Por consiguiente, en otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar trastornos inflamatorios mediados por IL-6 en pacientes sin anemia por inflamación crónica. Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un sujeto, normalmente un paciente humano, que tiene un trastorno inflamatorio mediado por IL-6, en donde el paciente no tiene anemia y en donde se ha determinado que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En una primera serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, los métodos excluyen afirmativamente el tratamiento de sujetos que son homocigotos para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento.
En realizaciones particulares de cualquiera de los métodos de tratamiento, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente tiene un nivel sérico de IL-6 antes del tratamiento superior a 2,5 pg/ml, superior a 5 pg/ml, superior a 7,5 pg/ml, superior a 10 pg/ml o superior a 12,5 pg/ml.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de IL-6 libre en el suero del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En realizaciones particulares, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de IL-6 libre en al menos el 10 % en comparación con los niveles antes del tratamiento, en al menos el 20 % en comparación con los niveles antes del tratamiento, o en al menos el 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento.
En realizaciones particulares de cualquiera de los métodos de tratamiento, el paciente tiene niveles elevados de proteína C reactiva (CRP) antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente tiene un nivel de CRP antes del tratamiento superior a 2 mg/l, superior a 3 mg/l, superior a 5 mg/l, superior a 7,5 mg/l o incluso superior a 10 mg/l.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de CRP del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En realizaciones particulares, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de CRP del paciente en al menos el 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento.
En realizaciones particulares de cualquiera de los métodos de tratamiento, se ha determinado que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 usando un ensayo de PCR en tiempo real Taqman®.
En realizaciones de cualquiera de los métodos de tratamiento, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 100 nM, menos de 50 nM, menos de 10 nM o menos de 1 nM. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado tiene una semivida de eliminación tras la administración intravenosa de al menos 7 días, de al menos 14 días, de al menos 21 días o al menos 30 días.
En diversas realizaciones de anticuerpo, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo monoclonal anti-IL-6 de longitud completa, tal como un anticuerpo IgG1 o IgG4.
En realizaciones seleccionadas, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado es totalmente humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado es humanizado.
En realizaciones actualmente preferidas, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado comprende las seis CDR de la región variable de MED5117. En algunas de estas realizaciones, el anticuerpo comprende la VH y la VL de MED5117. Y en realizaciones particulares, el anticuerpo es MED5117.
En diversas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado comprende las seis CDR de la región variable de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, elsilimomab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb). En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-IL-6 es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb). En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-IL-6 es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo de dominio único, un nanocuerpo VHH, un Fab o un scFv.
En una variedad de realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6R o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R, el fragmento de unión a antígeno o derivado es tocilizumab o vobarilizumab.
En una variedad de realizaciones, el antagonista de IL-6 es un inhibidor de JAK. En realizaciones particulares, el inhibidor de JAK se selecciona del grupo que consiste en tofacitinib (Xeljanz), decemotinib, ruxolitinib, upadacitinib, baricitinib, filgotinib, lestaurtinib, pacritinib, peficitinib, INCB-039110, ABT-494, INCB-047986 y AC-410.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un inhibidor de STAT3.
En algunas realizaciones en las cuales el antagonista de IL-6 es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno o derivado, el antagonista de IL-6 se administra por vía parenteral. En realizaciones particulares, el antagonista de IL-6 se administra por vía subcutánea.
En algunas realizaciones en las cuales el antagonista de IL-6 es un inhibidor de JAK o un inhibidor de STAT3, el antagonista de IL-6 se administra por vía oral.
4. Breve descripción de los dibujos
Las FIGS. 1A y 1B proporcionan diagramas de caja que muestran que se requieren mayores cantidades de eritropoyetina ("EPO") para el tratamiento de pacientes con enfermedad renal crónica (sujetos en diálisis con CKD de estadio 5) que tenían niveles elevados de IL-6 en suero y al menos una copia del alelo mayor en un SNP conocido en el gen TMPRSS6, rs855791 (G o C en la posición de nucleótido 2321, que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736; 736A), pero no en pacientes con enfermedad renal crónica que tenían niveles elevados de IL-6 y eran homocigotos para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6 (T o A en la posición de nucleótido 2321, que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que tiene una valina en la posición 736; 736V). Los datos de pacientes homocigotos para el alelo menor (A/A) se muestran en la FIG. 1A; los datos de pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor (homocigoto G/G y heterocigoto G/A) se combinaron y se muestran en la FIG. 1B. Cada una de las dos poblaciones de pacientes se estratificó adicionalmente en grupos basándose en los terciles del nivel de IL-6 en suero: Tercil "bajo" (IL-6 <5 pg/ml); Tercil "medio" (IL-6 = 5-15 pg/ml); Tercil "más alto" (IL-6 > 15 pg/ml). Los diagramas de caja con barras de error se superponen sobre los datos brutos. Cada diagrama de caja representa un grupo de pacientes basado tanto en el nivel de IL-6 como en el genotipo. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 1.
Las FIGS. 2A y 2B proporcionan curvas de supervivencia que demuestran que el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 confiere una mayor mortalidad por todas las causas en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos en diálisis con enfermedad renal crónica de estadio 5. La FIG. 2A muestra datos de pacientes homocigotos para el alelo menor (A/A). La FIG. 2B muestra los datos de pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor (homocigoto G/G y heterocigoto G/A). Cada grupo se separó en terciles de nivel de IL-6 en suero usando los niveles de IL-6 usados en la FIG. 1. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 1.
La FIG.3 es un gráfico que muestra que se requieren mayores cantidades de EPO para el tratamiento de pacientes con enfermedad renal crónica (sujetos en diálisis con CKD de estadio 5) que tenían niveles elevados del reactante de fase aguda CRP y que tenían al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, pero no en pacientes con enfermedad renal crónica que tenían niveles elevados en suero del reactante de fase aguda CRP y que eran homocigotos para el alelo menor del rs855791. Cada grupo de genotipos se separó en niveles de CRP sérica < 2 mg/l frente a > 2 mg/l. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 1.
Las FIGS. 4A y 4B proporcionan gráficos que demuestran que el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 confiere una mayor mortalidad por todas las causas en respuesta a niveles elevados de IL-6 en pacientes tras un infarto de miocardio ("MI"). La FIG. 4A representa la probabilidad acumulada de un acontecimiento de mortalidad a lo largo del tiempo (eje y) frente a los días posteriores al MI (eje x) para la población homocigota para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. La FIG. 4B representa la probabilidad acumulada de un acontecimiento de mortalidad a lo largo del tiempo para la población que tiene al menos una copia del alelo mayor rs855791 de TMPRSS6. Cada grupo se separó en terciles de nivel de IL-6 en suero como se indica. El nivel de IL-6 se midió un mes después del infarto de miocardio. La mortalidad se midió entre uno y doce meses después del infarto de miocardio. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 2.
Las FIGS. 5A y 5B proporcionan gráficos que demuestran que el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 confiere un mayor riesgo de insuficiencia cardíaca ("HF") en respuesta a niveles elevados de IL-6 en pacientes tras un MI. La FIG. 5A representa la probabilidad acumulada de HF a lo largo del tiempo (eje y) frente a los días posteriores al MI (eje x) para la población homocigota para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. La FIG. 5B representa la probabilidad acumulada de un acontecimiento de HF a lo largo del tiempo para la población que tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMRPSS6. Cada grupo se separó en terciles de nivel de IL-6 en suero como se indica. El nivel de IL-6 se midió un mes después del infarto de miocardio. La HF se midió entre uno y doce meses después del infarto de miocardio. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 2.
Las FIGS. 6A y 6B muestran resultados de ensayos de células iPS humanas que habían sido transfectadas con construcciones que expresan constitutivamente el alelo menor o el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 y diferenciadas en miocardiocitos, tras la exposición in vitro a BMP2+IL-6, o BMP2 solo, lo que demuestra que el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 confiere un mayor riesgo de muerte celular (azul de tripano positivo) en respuesta a IL-6. La FIG. 6A muestra los resultados en un entorno normóxico. La FIG. 6B muestra los resultados después de la exposición a condiciones hipóxicas y reoxigenación. Los datos implican que la reducción de la exposición a IL-6 debería mejorar la supervivencia de los miocardiocitos en pacientes con el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, pero no en pacientes con el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 3.
La FIG. 7 es un diagrama que muestra el diseño experimental de un estudio de síndrome cardiorrenal descrito en el Ejemplo 4. Se indujo un CRS4 en ratas genotípicamente análogas a seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. El diagrama muestra diferentes acontecimientos en el estudio a lo largo de una línea temporal. En el estudio, se indujo infarto de miocardio ("MI") en ratas en la semana 0. En la semana 2, se realizó una única nefrectomía ("Nx") en cada sujeto. El anticuerpo anti-IL-6 (ab9770, Abcam Plc, RU) (Rx) o el anticuerpo de control de isotipo ("IgG"; ab171516, Abcam Plc, RU) se administró una vez cada 3 días a partir de 1 día (D1) después de la nefrectomía hasta el final del estudio. El tratamiento de referencia (inhibidor de la ACE -perindopril) se administró diariamente desde 1 día después de la Nx hasta el final del estudio. En la semana 6, se sacrificaron los roedores. En el grupo de control, grupo de sujetos "simulado", no se indujo MI ni se realizó Nx. Se realizaron varias evaluaciones de los roedores en los puntos temporales indicados por las flechas.
Las FIGS. 8A-8D muestran la fracción de eyección cardíaca de ratas tratadas con anticuerpo anti-IL-6 ("ab IL-6"), tratamiento de referencia inhibidor de la ACE (perindopril o "Peri"), frente al grupo tratado con control ("isotipo") y animales operados simuladamente en el modelo de síndrome cardiorrenal resumido en la FIG. 7 y descrito en detalle en el Ejemplo 4. La Figura 8A es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección basal para todos los grupos dos semanas después del infarto de miocardio, pero antes de la nefrectomía. La Figura 8B es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos una semana después de la nefrectomía, después de 1 semana de tratamiento. La Figura 8C es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos dos semanas después de la nefrectomía, después de 2 semanas de tratamiento. La Figura 8D es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos cuatro semanas después de la nefrectomía, después de 4 semanas de tratamiento. Los resultados se expresan como media /-EEM y demuestran que la terapia anti-IL-6 tuvo una eficacia terapéutica en el modelo de síndrome cardiorrenal equivalente a la del tratamiento de referencia, medida por los cambios en la fracción de eyección cardíaca.
La FIG. 9 muestra un gráfica que muestra la contractilidad cardíaca de las ratas tratadas con anticuerpo anti-IL-6 ("ab IL-6"), tratamiento de referencia (perindopril o "Peri"), frente al grupo tratado con control ("isotipo") en el modelo de síndrome cardiorrenal resumido en la FIG. 7 y descrito en detalle en el Ejemplo 4. Se evaluó la contractilidad cardíaca al final del estudio midiendo dP/dtmax (mmHb/mseg), que es una medida de la presión dentro del corazón. Las mediciones se muestran para todos los grupos cuatro semanas después de la nefrectomía, después de 4 semanas de tratamiento. Los resultados se expresan como media /- EEM y demuestran que la terapia anti-IL-6 tuvo una eficacia terapéutica equivalente a la del tratamiento de referencia, como se muestra por el aumento de la contractilidad cardíaca en grupos de roedores tratados con anti-IL-6.
Las FIGS. 10A - 10C muestran que la terapia anti-IL-6 tenía un efecto sobre el síndrome cardiorrenal equivalente al del tratamiento de referencia, medido por los niveles de fibrosis en tejido cardíaco de grupos de roedores tratados con anti-IL-6 ("Ab IL-6)", tratamiento de referencia (perindopril o "Peri") y un control ("IgG"). La Figura 10A es una micrografía que muestra un corte histológico de tejido cardíaco teñido con rojo picrosirius. Se analizaron dos regiones del tejido: una región "Normal" y una región de "Margen de la fibrosis". Un ejemplo de región "Normal" se indica mediante la parte delineada del corte de tejido. El recuadro de la micrografía muestra una vista ampliada de la región "Normal", que muestra que pequeñas porciones de la región "Normal" tienen tejido fibrótico. La región del "Margen de la fibrosis" es una región de tejido en la región "Normal" periférica al tejido fibrótico. La Figura 10B es un gráfico que muestra los porcentajes del área de la región "Normal" indicada como tejido fibrótico (es decir, regiones teñidas/oscuras) en muestras de tejido de todos los grupos. La Figura 10C es un gráfico que muestra los porcentajes del área de la región "Margen de la fibrosis" indicada como tejido fibrótico en muestras de tejido de todos los grupos. Los resultados se expresan como media /- EEM. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 4. Las FIGS. 11A y 11B muestran datos de un modelo in vivo en el cual se indujo infarto de miocardio en ratones genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. El grupo de control no recibió ninguna terapia. El grupo experimental se trató con un anticuerpo anti-IL-6 murino. La FIG. 11A muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la fracción de eyección. La FIG. 11B muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la contractilidad, medida como fracción de acortamiento cardíaco del ventrículo izquierdo. Los datos demuestran que la terapia anti-IL-6 administrada inmediatamente después de un infarto de miocardio mejora la recuperación funcional del ventrículo izquierdo en roedores análogos a los pacientes humanos que tienen el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Los detalles se proporcionan en el Ejemplo 5.
Las figuras representan diversas realizaciones de la presente invención con fines ilustrativos únicamente. Un experto en la materia reconocerá fácilmente a partir de la siguiente descripción que pueden emplearse realizaciones alternativas de las estructuras y métodos ilustrados en el presente documento.
5. Descripción detallada
5.1. Visión general de los resultados experimentales
La hormona peptídica, hepcidina, desempeña una función fundamental en la homeostasia del hierro. Hentze et al., Cell 142:24-38 (2010). Se sabe que la expresión de la hepcidina está influenciada por el producto del gen TMPRSS6, la matriptasa-2, una serina proteasa transmembrana de tipo II. Se ha demostrado que las variantes frecuentes del gen TMPRSS6 están correlacionadas con el estado del hierro, Benyamin et al., Nature Genetics 41(11):1173-1175 (2009), habiéndose demostrado que el SNP rs855791 (2321G^A; A736V) se correlaciona con variaciones naturales en la expresión de la hepcidina y los niveles de hemoglobina en sangre. La expresión de la hepcidina también se ha relacionado con los trastornos del hierro en humanos, Pietrangelo, J. Hepatology 54:173-181 (2011), y en las anemias por enfermedad crónica (ACD) (también conocida como anemia por inflamación (AI)). La ACD es prevalente en pacientes con infección crónica, enfermedad autoinmunitaria, cáncer y enfermedad renal crónica (CKD). Sun et al., Am. J. Hematol. 87(4): 392-400 (2012).
Para determinar si el genotipo en el SNP rs855791 de TMPRSS6 predice el alcance de la anemia en la enfermedad renal terminal, los datos recopilados previamente en estudios clínicos de pacientes con enfermedad renal crónica se analizaron junto con el genotipado del SNP recién determinado. Debido a que la expresión de hepcidina también está regulada por IL-6, Casanovas et al., PLOS Computational Biol. 10(1):e1003421 (2014), los datos se analizaron más detalladamente para determinar si los niveles séricos de IL-6 podrían predecir el grado de anemia en la enfermedad renal terminal.
Tal como se describe en el Ejemplo 1 y se muestra en la FIG. 1, el grado de anemia subyacente, medido como la dosis de EPO titulada clínicamente, se correlacionaba con los niveles de IL-6 en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor en el SNP rs855791 de TMPRSS6. En estos pacientes, niveles séricos más altos de IL-6 se correlacionaban con una dosis requerida de EPO mayor (FIG. 1B). Por el contrario, el grado de anemia en pacientes que tienen dos copias del alelo menor no estaba correlacionado con los niveles séricos de IL-6 (FIG. 1A).
De manera análoga, la supervivencia global se correlacionaba con los niveles de IL-6 solo en pacientes con al menos una copia del alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6. En sujetos que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, la supervivencia estaba inversamente correlacionada con el nivel sérico de IL-6, teniendo los pacientes del tercil más alto de los niveles séricos de IL-6 una supervivencia estadísticamente significativamente peor que los del tercil de los niveles de IL-6 más bajos (FIG. 2B). Por el contrario, la supervivencia global de los pacientes homocigotos para el alelo menor en rs855791 no se vio afectada por los niveles de IL-6 (FIG. 2A).
Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, los aumentos en la IL-6 sérica pueden impulsar el aumento de la expresión de hepcidina, aumentando de este modo la anemia. El aumento del riesgo de mortalidad es una consecuencia del metabolismo desregulado del hierro, la anemia resultante y/o el aumento de la dosis del agente estimulante de la eritropoyesis, tal como EPO, administrado para tratamiento. Estas correlaciones plantean la posibilidad de que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 pueda reducir la anemia, reducir la dosis de EPO requerida y aumentar la supervivencia en pacientes con enfermedad renal crónica, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes que tienen niveles séricos elevados de IL-6.
Para determinar si el genotipo del rs855791 de TMPRSS6 afectaba a la sensibilidad a IL-6 en pacientes con enfermedad aguda, en lugar de crónica, en el Ejemplo 2 analizamos los datos recogidos previamente en estudios clínicos de pacientes hospitalizados por síndrome coronario agudo junto con el genotipado del SNP recientemente determinado.
La mortalidad de los sujetos homocigotos para el alelo menor (A) del SNP rs855791 de TMPRSS6 no se correlacionaba con las variaciones en la IL-6 (FIG. 4A). Sin embargo, una o dos copias del alelo mayor (G) conferían una mayor mortalidad por todas las causas en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos después de un infarto de miocardio (Figura 4B). Por tanto, TMPRSS6 modulaba el riesgo mediado por IL-6 de muerte tras un infarto de miocardio.
También se evaluó el efecto del genotipo de TMPRSS6 sobre el riesgo mediado por IL-6 de insuficiencia cardíaca. La insuficiencia cardíaca en sujetos homocigotos para el alelo menor (A) no se correlacionó con variaciones en la IL-6 (Figura 5A). Sin embargo, el alego G de TMPRSS6 confirió una tasa de insuficiencia cardíaca más alta en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos después de un infarto de miocardio (Figura 5B). Por tanto, TMPRSS6 modulaba el riesgo mediado por IL-6 de insuficiencia cardíaca tras un infarto de miocardio.
Los datos del Ejemplo 2 demuestran que la correlación entre el genotipo de TMPRSS6, y los niveles de IL-6, y los resultados clínicos adversos no se limita a los pacientes con enfermedad renal crónica. Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, los aumentos en la IL-6 sérica pueden impulsar el aumento de la expresión de hepcidina, con el consiguiente aumento del secuestro de hierro en los miocardiocitos, seguido de la toxicidad celular mediada por hierro. Estas correlaciones plantean la posibilidad de que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 pudiera reducir la insuficiencia cardíaca y la mortalidad en pacientes con síndrome coronario agudo, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes con niveles séricos elevados de IL-6.
Aunque las correlaciones observadas en los Ejemplos 1 y 2 sugieren fuertemente que la reducción de la señalización mediada por IL-6 debería proporcionar un beneficio clínico en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, niveles elevados de IL-6 y anemia o una toxicidad celular mediada por hepcidina, las correlaciones observadas no llegan a demostrar una relación causal. Por consiguiente, en el Ejemplo 3, se modificaron por ingeniería genética miocardiocitos de células madre pluripotentes inducidas (iPS) humanas para expresar solo el alelo mayor o el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6, y se ensayaron in vitro.
La expresión de hepcidina está regulada por las vías de señalización de BMP6/SMAD e IL-6/STAT, y tanto la BMP como la IL-6 actúan a través de sus respectivos receptores para impulsar el aumento de la expresión de hepcidina. Casanovas et al., PLOS Comp. Biol. 10(1): e1003421 (2014). Los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor y el alelo menor se trataron in vitro con agonistas de ambas vías de señalización, BMP2 e iL-6 recombinantes, o con BMP2 solo para modelar intervenciones clínicas en las que se reducen los niveles (o señalización) de IL-6. Las células iPS de control no se trataron con ningún agonista. La mortalidad celular se midió con tensión de oxígeno normal (normoxia) y también en condiciones que simulan hipoxia seguido de reoxigenación (reperfusión).
La FIG. 6A muestra los resultados cuando las células se trataron con niveles normales de oxígeno. Los miocardiocitos iPS que expresan solo el alelo menor (alelo menor "736V") del rs855791 de TMPRSS6 no se ven significativamente ("n.s") afectados por la eliminación de la señalización de IL-6: la mortalidad celular medida como porcentaje de células positivas para azul tripano no se redujo significativamente cuando las células se tratan con BMP2 solo en comparación con tratamiento con BMP2 IL-6. Por el contrario, los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 muestran una muerte celular estadísticamente significativamente menor cuando se elimina la señalización de IL-6.
La FIG. 6B muestra los resultados cuando las células se sometieron a hipoxia seguida de reoxigenación. En comparación con las condiciones de normoxia, la hipoxia/reoxigenación es tóxica para los miocardiocitos iPS, con aproximadamente el 40 por ciento de las células de control con el alelo mayor y menor muertas, en comparación con aproximadamente el 20 % de las células de control muertas en condiciones normóxicas (comparar con la Figura 6A). Frente a este aumento de la toxicidad de fondo, los miocardiocitos iPS con el alelo menor no se ven afectados significativamente por la eliminación de la señalización de IL-6: la mortalidad celular no se reduce significativamente cuando las células se tratan solo con BMP2, en comparación con el tratamiento con BMP2 IL-6. Por el contrario, los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 muestran una muerte celular estadísticamente significativamente menor cuando se elimina la señalización de IL-6.
Estos datos refuerzan las inferencias extraídas del análisis post hoc de los datos de los ensayos clínicos del Ejemplo 1 y el Ejemplo 2: la reducción de la señalización de IL-6 es eficaz para reducir la toxicidad mediada por IL-6 en miocardiocitos que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, pero no en miocardiocitos que expresan solo el alelo menor. Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, el aumento de toxicidad impulsado por IL-6 en los miocardiocitos iPS con el alelo mayor puede tener como resultado un aumento de la expresión de hepcidina mediado por IL-6, con el consiguiente aumento del secuestro de hierro en las células, seguido de la toxicidad celular mediada por hierro.
Los pacientes con enfermedad renal crónica, tales como los reclutados en los estudios MIMICK analizados en el Ejemplo 1, frecuentemente desarrollan una alteración de la función cardíaca, que es un factor importante que contribuye a la mortalidad global. Esta lesión cardíaca secundaria tras una enfermedad renal crónica primaria se denomina síndrome cardiorrenal tipo 4 (CRS tipo 4). Para probar directamente si la terapia anti-IL-6 sería efectiva como tratamiento en pacientes con CRS4 que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, como se sugiere por los datos de los Ejemplos 1 y 3, se utilizó un modelo de CRS4 en ratas que son genotípicamente análogas a los seres humanos que son homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
Después de 4 semanas de tratamiento, ambos grupos de tratamiento, el grupo tratado con un anticuerpo anti-IL-6 y el grupo tratado con el tratamiento de referencia de inhibidor de ACE, perindopril, mostraron niveles de fracción de eyección aumentados de manera estadísticamente significativa en comparación con el grupo de control de isotipo (FlG. 8D) (p<0,001). Los niveles de fracción de eyección similares en los grupos anti-IL-6 y tratamiento de referencia medidos después de la semana 4 de tratamiento mostraron que la terapia anti-IL-6 tenía una eficacia equivalente a la del inhibidor de ACE. La FlG. 9 muestra que la terapia anti-IL-6 también fue igual de eficaz que el inhibidor de ACE para conservar la contractilidad cardíaca. Las FIGS. 10A - 10C demuestran que la terapia anti-IL-6 fue igual de eficaz para reducir la fibrosis cardíaca.
Estos datos demuestran que el tratamiento con un agente anti-IL-6 es eficaz para reducir la lesión cardíaca y restaurar la función en un modelo in vivo de síndrome cardiorrenal en animales que son genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
De manera análoga, los datos de los Ejemplos 2 y 3 sugerían que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 podía reducir la insuficiencia cardíaca y la mortalidad en pacientes con síndrome coronario agudo, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes con niveles séricos elevados de IL-6.
Se realizó un estudio para determinar el efecto de la terapia anti-IL-6 después de un infarto agudo de miocardio en ratones que son genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
Las FIGS. 11A y 11B muestran datos de un modelo in vivo en el cual se indujo infarto de miocardio en ratones genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. El grupo de control no recibió ninguna terapia. El grupo experimental se trató con un anticuerpo anti-IL-6 murino. La FIG. 11A muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la fracción de eyección en comparación con los controles. La FIG. 11B muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la contractilidad, medida como fracción de acortamiento cardíaco, en comparación con los controles. Estos datos demuestran que la terapia anti-IL-6 administrada inmediatamente después de un infarto de miocardio mejora la recuperación funcional del ventrículo izquierdo en roedores que son genotípicamente análogos a los pacientes humanos que tienen el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
En conjunto, los datos experimentales demuestran que las intervenciones terapéuticas que reducen la señalización de IL-6 proporcionarán un beneficio clínico en pacientes con un trastorno mediado por hepcidina, tal como anemia o toxicidad celular mediada por hepcidina, pero solo en aquellos que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en pacientes con niveles elevados de IL-6.
Por consiguiente, tal como se describe adicionalmente a continuación, en un primer aspecto se proporcionan métodos para tratar un trastorno mediado por hepcidina. Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina que se ha determinado que tiene al menos una copia del alelo mayor en el SNP rs855791 de TMPRSS6. En un segundo aspecto, se proporcionan métodos para mejorar el tratamiento de trastornos mediados por hepcidina, comprendiendo el método suspender la administración de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina, en donde se ha determinado que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. El tratamiento mejora suspendiendo la terapia que es ineficaz, reduciendo de este modo los efectos secundarios y reduciendo el coste sin pérdida de eficacia del tratamiento. En un aspecto adicional, se proporcionan métodos para tratar trastornos inflamatorios mediados por IL-6 en pacientes sin anemia por inflamación crónica, comprendiendo los métodos administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un paciente que tiene un trastorno inflamatorio mediado por IL-6, no tiene anemia y se ha determinado que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
5.2. Definiciones
A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el significado comprendido habitualmente por un experto en la materia a la que pertenece esta invención. Como se utiliza en el presente documento, los siguientes términos tienen los significados que se les atribuyen a continuación.
Por "hepcidina" se entiende un polipéptido que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_066998 ("preproteína de hepcidina"), o un fragmento biológicamente activo de la misma. Las actividades biológicas de hepcidina ilustrativas incluyen la unión y reducción de los niveles de ferroportina del canal de exportación de hierro, inhibición del transporte de hierro, inhibición de la absorción intestinal de hierro e inhibición de la liberación de hierro de los macrófagos y el hígado. A continuación se proporciona una secuencia de aminoácidos de preproteína de hepcidina ilustrativa:
1 MALSSQIWAA CLLLLLLLAS LTSGSVFPQQ TGQLAELQPQ DRAGARASWM PMFQRRRRRD
61 T H F PIC IFC C GCCHRSKCGM CCKT (SEQ ID NO:1 )
Haciendo referencia a la secuencia anterior, la hepcidina existe en varias formas, que incluyen una preprohormona (aminoácidos 25-84), prohormona (aminoácidos 25-84) y formas maduras denominadas hepcidina-25 (aminoácidos 60-84), hepcidina-22 (aminoácidos 63-84) y hepcidina-20 (aminoácidos 65-84).
Un "trastorno mediado por hepcidina" es cualquier trastorno en el que la expresión de hepcidina contribuye a la etiología del trastorno o cualquiera de sus síntomas. La contribución de la hepcidina a la etiología puede conocerse, sospecharse o inferirse de una observación de que la administración de un antagonista de IL-6 proporciona un mayor beneficio terapéutico en pacientes con el trastorno que tienen al menos una copia del alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6 en comparación con pacientes con el trastorno que son homocigotos para el alelo menor del SNP rs855791 de TMPRSS6. Los trastornos mediados por hepcidina se describen con más detalle a continuación en la Sección 5.2.1.
Por "polipéptido de serina proteasa transmembrana 6 (TMPRSS6) " se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_001275929 y que tiene actividad de serina proteinasa. El polipéptido de TMPRSS6, también conocido como matriptasa-2 (MT2), escinde la hemojuvelina e inhibe la señalización morfogenética ósea. A continuación se proporciona una secuencia de aminoácidos de TMPRSS6 ilustrativa que tiene una alanina en la posición 736 (736A):
1 MPVAEAPQVA GGQGDGGDGE EAEPEGMFKA CEDSKRKARG YLRLVPLFVL LALLVLASAG
61 VLLWYFLGYK AEVMVSQVYS GSLRVLNRHF SQDLTRRESS AFRSETAKAQ KMLKELITST
121 RLGTYYNSSS VYSFGEGPLT C FFW FILQ IP EHRRLMLSPE W QALLVEEL LSTVNSSAAV
181 PYRAEYEVDP EGLVILEASV KDIAALNSTL GCYRYSYVGQ GQVLRLKGPD HLASSCLWHL
241 QGPKDLMLKL RLEWTLAECR DRLAMYDVAG PLEKRLITSV YGCSRQEPW EVLASGAIMA
301 WWKKGLHSY YDPFVLSVQP WFQACEVNL TLDNRLDSQG VLSTPYFPSY YSPQTHCSWH
361 LTVPSLDYGL ALWFDAYALR RQKYDLPCTQ GQWTIQNRRL CGLRILQPYA ER I PWATAG
421 IT IN F T S Q IS LTGPGVRVHY GLYNQSDPCP GEFLCSVNGL CVPACDGVKD CPNGLDERNC
481 VCRATFQCKE DSTCISLPKV CDGQPDCLNG SDEEQCQEGV PCGTFTFQCE DRSCVKKPNP
541 QCDGRPDCRD GSDEEHCDCG LQGPSSRIVG GAVSSEGEWP WQASLQVRGR HICGGALIAD
601 RWVITAAHCF QEDSMASTVL WTVFLGKVWQ NSRWPGEVSF KVSRLLLHPY HEEDSHDYDV
661 ALLQLDHPW RSAAVRPVCL PARSHFFEPG LHCWITGWGA LREGALRADA VALFYGWRNQ
721 GSETCCCPIS NALQKADVQL IPQDLCSEVY RYQVTPRMLC AGYRKGKKDA CQGDSGGPLV
781 CKALSGRWFL AGLVSWGLGC GRPNYFGVYT RITGVISW IQ Q W T (SEQ ID NO: 2)
A continuación se proporciona una secuencia de aminoácidos de TMPRSS6 ilustrativa que tiene una valina en la posición 736 (736V):
1 MPVAEAPQVA GGQGDGGDGE EAEPEGMFKA CEDSKRKARG YLRLVPLFVL LALLVLASAG
61 VLLWYFLGYK AEVMVSQVYS GSLRVLNRHF SQDLTRRESS AFRSETAKAQ KMLKELITST
121 RLGTYYNSSS VYSFGEGPLT C FFW FILQ IP EHRRLMLSPE WQALLVEEL LSTVNSSAAV
181 PYRAEYEVDP EGLVILEASV KDIAALNSTL GCYRYSYVGQ GQVLRLKGPD HLASSCLWHL
24 QGPKDLMLKL RLEWTLAECR DRLAMYDVAG PLEKRLITSV YGCSRQEPW EVLASGAIMA
30 VWKKGLHSY YDPFVLSVQP WFQACEVNL TLDNRLDSQG VLSTPYFPSY YSPQTHCSWH
36 LTVPSLDYGL ALWFDAYALR RQKYDLPCTQ GQWTIQNRRL CGLRILQPYA ERIPW A TA G
42 IT IN F T S Q IS LTGPGVRVHY GLYNQSDPCP GEFLCSVNGL CVPACDGVKD CPNGLDERNC
48 VCRATFQCKE DSTCISLPKV CDGQPDCLNG SDEEQCQEGV PCGTFTFQCE DRSCVKKPNP
54 QCDGRPDCRD GSDEEHCDCG LQGPSSRIVG GAVSSEGEWP WQASLQVRGR HICGGALIAD
60 RWVITAAHCF QEDSMASTVL WTVFLGKVWQ NSRWPGEVSF KVSRLLLHPY HEEDSHDYDV
66 ALLQLDHPW RSAAVRPVCL PARSHFFEPG LHCWITGWGA LREGALRADA VALFYGWRNQ
72 GSETCCCPIS NALQKVDVQL IPQDLCSEVY RYQVTPRMLC AGYRKGKKDA CQGDSGGPLV
78 CKALSGRWFL AGLVSWGLGC GRPNYFGVYT RITGV ISW IQ Q W T (SEQ ID NO: 3)
Por "Molécula de ácido nucleico de TMPRSS6 " se entiende un polinucleótido que codifica un polipéptido de TMPRSS6 (matriptasa-2; MT2). Una secuencia de molécula de ácido nucleico de TMPRSS6 ilustrativa se proporciona con el número de acceso del NCBI NM_001289000. A continuación se proporciona una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 que tiene una G en la posición de nucleótido 2321 ("alelo G"; "alelo mayor"):
1 GGACAAACAG AGGCTCCTGA GGCCTGTGTG CAGGCCCGGC ACCTATCTGC CGCTCCCAAA
61 GGATGCCCGT GGCCGAGGCC CCCCAGGTGG CTGGCGGGCA GGGGGACGGA GGTGATGGCG
121 AGGAAGCGGA GCCGGAGGGG ATGTTCAAGG CCTGTGAGGA CTCCAAGAGA AAAGCCCGGG 181 GCTACCTCCG CCTGGTGCCC CTGTTTGTGC TGCTGGCCCT GCTCGTGCTG GCTTCGGCGG 241 GGGTGCTACT CTGGTATTTC CTAGGGTACA AGGCGGAGGT GATGGTCAGC CAGGTGTACT 301 CAGGCAGTCT GCGTGTACTC AATCGCCACT TCTCCCAGGA TCTTACCCGC CGGGAATCTA 361 GTGCCTTCCG CAGTGAAACC GCCAAAGCCC AGAAGATGCT CAAGGAGCTC ATCACCAGCA 421 CCCGCCTGGG AACTTACTAC AACTCCAGCT CCGTCTATTC CTTTGGGGAG GGACCCCTCA 481 CCTGCTTCTT CTGGTTCATT CTCCAAATCC CCGAGCACCG CCGGCTGATG CTGAGCCCCG 541 AGGTGGTGCA GGCACTGCTG GTGGAGGAGC TGCTGTCCAC AGTCAACAGC TCGGCTGCCG 601 TCCCCTACAG GGCCGAGTAC GAAGTGGACC CCGAGGGCCT AGTGATCCTG GAAGCCAGTG 661 TGAAAGACAT AGCTGCATTG AATTCCACGC TGGGTTGTTA CCGCTACAGC TACGTGGGCC 721 AGGGCCAGGT CCTCCGGCTG AAGGGGCCTG ACCACCTGGC CTCCAGCTGC CTGTGGCACC 781 TGCAGGGCCC CAAGGACCTC ATGCTCAAAC TCCGGCTGGA GTGGACGCTG GCAGAGTGCC 841 GGGACCGACT GGCCATGTAT GACGTGGCCG GGCCCCTGGA GAAGAGGCTC ATCACCTCGG 901 TGTACGGCTG CAGCCGCCAG GAGCCCGTGG TGGAGGTTCT GGCGTCGGGG GCCATCATGG 961 CGGTCGTCTG GAAGAAGGGC CTGCACAGCT ACTACGACCC CTTCGTGCTC TCCGTGCAGC 1021 CGGTGGTCTT CCAGGCCTGT GAAGTGAACC TGACGCTGGA CAACAGGCTC GACTCCCAGG 1081 GCGTCCTCAG CACCCCGTAC TTCCCCAGCT ACTACTCGCC CCAAACCCAC TGCTCCTGGC 1141 ACCTCACGGT GCCCTCTCTG GACTACGGCT TGGCCCTCTG GTTTGATGCC TATGCACTGA 1201 GGAGGCAGAA GTATGATTTG CCGTGCACCC AGGGCCAGTG GACGATCCAG AACAGGAGGC 1261 TGTGTGGCTT GCGCATCCTG CAGCCCTACG CCGAGAGGAT CCCCGTGGTG GCCACGGCCG
1321 GGATCACCAT CAACTTCACC TCCCAGATCT CCCTCACCGG GCCCGGTGTG CGGGTGCACT
1381 ATGGCTTGTA CAACCAGTCG GACCCCTGCC CTGGAGAGTT CCTCTGTTCT GTGAATGGAC
1441 TCTGTGTCCC TGCCTGTGAT GGGGTCAAGG ACTGCCCCAA CGGCCTGGAT GAGAGAAACT
1501 GCGTTTGCAG AGCCACATTC CAGTGCAAAG AGGACAGCAC ATGCATCTCA CTGCCCAAGG
1561 TCTGTGATGG GCAGCCTGAT TGTCTCAACG GCAGCGACGA AGAGCAGTGC CAGGAAGGGG
1621 TGCCATGTGG GACATTCACC TTCCAGTGTG AGGACCGGAG CTGCGTGAAG AAGCCCAACC
1681 CGCAGTGTGA TGGGCGGCCC GACTGCAGGG ACGGCTCGGA TGAGGAGCAC TGTGACTGTG
1741 GCCTCCAGGG CCCCTCCAGC CGCATTGTTG GTGGAGCTGT GTCCTCCGAG GGTGAGTGGC
1801 CATGGCAGGC CAGCCTCCAG GTTCGGGGTC GACACATCTG TGGGGGGGCC CTCATCGCTG
1861 ACCGCTGGGT GATAACAGCT GCCCACTGCT TCCAGGAGGA CAGCATGGCC TCCACGGTGC
1921 TGTGGACCGT GTTCCTGGGC AAGGTGTGGC AGAACTCGCG CTGGCCTGGA GAGGTGTCCT
1981 TCAAGGTGAG CCGCCTGCTC CTGCACCCGT ACCACGAAGA GGACAGCCAT GACTACGACG
2041 TGGCGCTGCT GCAGCTCGAC CACCCGGTGG TGCGCTCGGC CGCCGTGCGC CCCGTCTGCC
2101 TGCCCGCGCG CTCCCACTTC TTCGAGCCCG GCCTGCACTG CTGGATTACG GGCTGGGGCG
2161 CCTTGCGCGA GGGCGCCCTA CGGGCGGATG CTGTGGCCCT ATTTTATGGA TGGAGAAACC
2221 AAGGCTCAGA GACATGTTGC TGCCCCATCA GCAACGCTCT GCAGAAAGTG GATGTGCAGT
2281 TGATCCCACA GGACCTGTGC AGCGAGGTCT ATCGCTACCA GGTGACGCCA CGCATGCTGT
2341 GTGCCGGCTA CCGCAAGGGC AAGAAGGATG CCTGTCAGGG TGACTCAGGT GGTCCGCTGG
2401 TGTGCAAGGC ACTCAGTGGC CGCTGGTTCC TGGCGGGGCT GGTCAGCTGG GGCCTGGGCT
2461 GTGGCCGGCC TAACTACTTC GGCGTCTACA CCCGCATCAC AGGTGTGATC AGCTGGATCC
2521 AGCAAGTGGT GACCTGAGGA ACTGCCCCCC TGCAAAGCAG GGCCCACCTC CTGGACTCAG
2581 AGAGCCCAGG GCAACTGCCA AGCAGGGGGA CAAGTATTCT GGCGGGGGGT GGGGGAGAGA
2641 GCAGGCCCTG TGGTGGCAGG AGGTGGCATC TTGTCTCGTC CCTGATGTCT GCTCCAGTGA
2701 TGGCAGGAGG ATGGAGAAGT GCCAGCAGCT GGGGGTCAAG ACGTCCCCTG AGGACCCAGG
2761 CCCACACCCA GCCCTTCTGC CTCCCAATTC TCTCTCCTCC GTCCCCTTCC TCCACTGCTG
2821 CCTAATGCAA GGCAGTGGCT CAGCAGCAAG AATGCTGGTT CTACATCCCG AGGAGTGTCT
2881 GAGGTGCGCC CCACTCTGTA CAGAGGCTGT TTGGGCAGCC TTGCCTCCAG AGAGCAGATT
2941 CCAGCTTCGG AAGCCCCTGG TCTAACTTGG GATCTGGGAA TGGAAGGTGC TCCCATCGGA
3001 GGGGACCCTC AGAGCCCTGG AGACTGCCAG GTGGGCCTGC TGCCACTGTA AGCCAAAAGG
3061 TGGGGAAGTC CTGACTCCAG GGTCCTTGCC CCACCCCTGC CTGCCACCTG GGCCCTCACA
3121 GCCCAGACCC TCACTGGGAG GTGAGCTCAG CTGCCCTTTG GAATAAAGCT GCCTGATCCA
3181 AAAAAAAAAA AAAAAA (SEQ ID N O :4)
A continuación se proporciona una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 que tiene una A en la posición de nucleótido 2321:
1 GGACAAACAG AGGCTCCTGA GGCCTGTGTG CAGGCCCGGC ACCTATCTGC CGCTCCCAAA
61 GGATGCCCGT GGCCGAGGCC CCCCAGGTGG CTGGCGGGCA GGGGGACGGA GGTGATGGCG
121 AGGAAGCGGA GCCGGAGGGG ATGTTCAAGG CCTGTGAGGA CTCCAAGAGA AAAGCCCGGG
181 GCTACCTCCG CCTGGTGCCC CTGTTTGTGC TGCTGGCCCT GCTCGTGCTG GCTTCGGCGG
241 GGGTGCTACT CTGGTATTTC CTAGGGTACA AGGCGGAGGT GATGGTCAGC CAGGTGTACT
301 CAGGCAGTCT GCGTGTACTC AATCGCCACT TCTCCCAGGA TCTTACCCGC CGGGAATCTA
361 GTGCCTTCCG CAGTGAAACC GCCAAAGCCC AGAAGATGCT CAAGGAGCTC ATCACCAGCA 421 CCCGCCTGGG AACTTACTAC AACTCCAGCT CCGTCTATTC CTTTGGGGAG GGACCCCTCA 481 CCTGCTTCTT CTGGTTCATT CTCCAAATCC CCGAGCACCG CCGGCTGATG CTGAGCCCCG 541 AGGTGGTGCA GGCACTGCTG GTGGAGGAGC TGCTGTCCAC AGTCAACAGC TCGGCTGCCG 601 TCCCCTACAG GGCCGAGTAC GAAGTGGACC CCGAGGGCCT AGTGATCCTG GAAGCCAGTG 661 TGAAAGACAT AGCTGCATTG AATTCCACGC TGGGTTGTTA CCGCTACAGC TACGTGGGCC 721 AGGGCCAGGT CCTCCGGCTG AAGGGGCCTG ACCACCTGGC CTCCAGCTGC CTGTGGCACC 781 TGCAGGGCCC CAAGGACCTC ATGCTCAAAC TCCGGCTGGA GTGGACGCTG GCAGAGTGCC 841 GGGACCGACT GGCCATGTAT GACGTGGCCG GGCCCCTGGA GAAGAGGCTC ATCACCTCGG 901 TGTACGGCTG CAGCCGCCAG GAGCCCGTGG TGGAGGTTCT GGCGTCGGGG GCCATCATGG 961 CGGTCGTCTG GAAGAAGGGC CTGCACAGCT ACTACGACCC CTTCGTGCTC TCCGTGCAGC 1021 CGGTGGTCTT CCAGGCCTGT GAAGTGAACC TGACGCTGGA CAACAGGCTC GACTCCCAGG 1081 GCGTCCTCAG CACCCCGTAC TTCCCCAGCT ACTACTCGCC CCAAACCCAC TGCTCCTGGC 1141 ACCTCACGGT GCCCTCTCTG GACTACGGCT TGGCCCTCTG GTTTGATGCC TATGCACTGA 1201 GGAGGCAGAA GTATGATTTG CCGTGCACCC AGGGCCAGTG GACGATCCAG AACAGGAGGC 1261 TGTGTGGCTT GCGCATCCTG CAGCCCTACG CCGAGAGGAT CCCCGTGGTG GCCACGGCCG 1321 GGATCACCAT CAACTTCACC TCCCAGATCT CCCTCACCGG GCCCGGTGTG CGGGTGCACT 1381 ATGGCTTGTA CAACCAGTCG GACCCCTGCC CTGGAGAGTT CCTCTGTTCT GTGAATGGAC 1441 TCTGTGTCCC TGCCTGTGAT GGGGTCAAGG ACTGCCCCAA CGGCCTGGAT GAGAGAAACT 1501 GCGTTTGCAG AGCCACATTC CAGTGCAAAG AGGACAGCAC ATGCATCTCA CTGCCCAAGG 1561 TCTGTGATGG GCAGCCTGAT TGTCTCAACG GCAGCGACGA AGAGCAGTGC CAGGAAGGGG 1621 TGCCATGTGG GACATTCACC TTCCAGTGTG AGGACCGGAG CTGCGTGAAG AAGCCCAACC 1681 CGCAGTGTGA TGGGCGGCCC GACTGCAGGG ACGGCTCGGA TGAGGAGCAC TGTGACTGTG 1741 GCCTCCAGGG CCCCTCCAGC CGCATTGTTG GTGGAGCTGT GTCCTCCGAG GGTGAGTGGC 1801 CATGGCAGGC CAGCCTCCAG GTTCGGGGTC GACACATCTG TGGGGGGGCC CTCATCGCTG 1861 ACCGCTGGGT GATAACAGCT GCCCACTGCT TCCAGGAGGA CAGCATGGCC TCCACGGTGC 1921 TGTGGACCGT GTTCCTGGGC AAGGTGTGGC AGAACTCGCG CTGGCCTGGA GAGGTGTCCT 1981 TCAAGGTGAG CCGCCTGCTC CTGCACCCGT ACCACGAAGA GGACAGCCAT GACTACGACG 2041 TGGCGCTGCT GCAGCTCGAC CACCCGGTGG TGCGCTCGGC CGCCGTGCGC CCCGTCTGCC 2101 TGCCCGCGCG CTCCCACTTC TTCGAGCCCG GCCTGCACTG CTGGATTACG GGCTGGGGCG 2161 CCTTGCGCGA GGGCGCCCTA CGGGCGGATG CTGTGGCCCT ATTTTATGGA TGGAGAAACC 2221 AAGGCTCAGA GACATGTTGC TGCCCCATCA GCAACGCTCT GCAGAAAGTG GATGTGCAGT 2281 TGATCCCACA GGACCTGTGC AGCGAGGTCT ATCGCTACCA AGTGACGCCA CGCATGCTGT 2341 GTGCCGGCTA CCGCAAGGGC AAGAAGGATG CCTGTCAGGG TGACTCAGGT GGTCCGCTGG 2401 TGTGCAAGGC ACTCAGTGGC CGCTGGTTCC TGGCGGGGCT GGTCAGCTGG GGCCTGGGCT 2461 GTGGCCGGCC TAACTACTTC GGCGTCTACA CCCGCATCAC AGGTGTGATC AGCTGGATCC 2521 AGCAAGTGGT GACCTGAGGA ACTGCCCCCC TGCAAAGCAG GGCCCACCTC CTGGACTCAG 2581 AGAGCCCAGG GCAACTGCCA AGCAGGGGGA CAAGTATTCT GGCGGGGGGT GGGGGAGAGA 2641 GCAGGCCCTG TGGTGGCAGG AGGTGGCATC TTGTCTCGTC CCTGATGTCT GCTCCAGTGA 2701 TGGCAGGAGG ATGGAGAAGT GCCAGCAGCT GGGGGTCAAG ACGTCCCCTG AGGACCCAGG 2761 CCCACACCCA GCCCTTCTGC CTCCCAATTC TCTCTCCTCC GTCCCCTTCC TCCACTGCTG 2821 CCTAATGCAA GGCAGTGGCT CAGCAGCAAG AATGCTGGTT CTACATCCCG AGGAGTGTCT 2881 GAGGTGCGCC CCACTCTGTA CAGAGGCTGT TTGGGCAGCC TTGCCTCCAG AGAGCAGATT 2941 CCAGCTTCGG AAGCCCCTGG TCTAACTTGG GATCTGGGAA TGGAAGGTGC TCCCATCGGA
3001 GGGGACCCTC AGAGCCCTGG AGACTGCCAG GTGGGCCTGC TGCCACTGTA AGCCAAAAGG
3061 TGGGGAAGTC CTGACTCCAG GGTCCTTGCC CCACCCCTGC CTGCCACCTG GGCCCTCACA
3121 GCCCAGACCC TCACTGGGAG GTGAGCTCAG CTGCCCTTTG GAATAAAGCT GCCTGATCCA
3181 AAAAAAAAAA AAAAAA (SEQ ID N O :5)
Por "variante" se entiende una secuencia de polinucleótidos o polipéptidos que difiere de una secuencia de referencia en uno o más nucleótidos o uno o más aminoácidos. Una variante de TMPRSS6 ilustrativa es TMPRSS6 (A736V), resultante del SNP rs855791 (G ^A).
Por "polimorfismo de un solo nucleótido" o "SNP" se entiende una variante de secuencia de ADN de origen natural en la que un solo nucleótido en el genoma difiere entre miembros de una especie biológica o entre cromosomas emparejados en un individuo. Los SNP pueden usarse como marcadores genéticos para alelos variantes. En una realización, el SNP de TMPRSS6 es rs855791.
Por "rs855791" se entiende un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) en el gen TMPRSS6 humano, 2321G^-A, que da como resultado una sustitución de alanina por valina (A736V) en el dominio catalítico de la matriptasa-2 (MT2), codificada por el gen TMPRSS6. El alelo con la frecuencia más alta en la población humana (el alelo mayor) es 2321G, que codifica 736A. El alelo con la frecuencia más baja en la población humana (alelo menor) es 2321A, que codifica 736V.
Por "heterocigoto" se entiende que un locus cromosómico tiene dos alelos diferentes. En una realización de los métodos descritos en el presente documento, heterocigoto se refiere a un genotipo en el cual un alelo tiene una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que tiene una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) (alelo mayor del rs855791), y el otro alelo tiene una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 variante que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una valina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una A o T en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6)(alelo menor del rs855791).
Por "homocigoto" se entiende que un locus cromosómico tiene dos alelos idénticos. En ciertas realizaciones de los métodos descritos en el presente documento, homocigoto se refiere a un genotipo en el cual ambos alelos tienen una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) (alelo mayor homocigoto del rs855791). En algunas realizaciones, homocigoto se refiere a un genotipo en el cual ambos alelos tienen una secuencia de ácido nucleico de TMPRSS6 que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una valina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una A o T en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) (alelo menor homocigoto del rs855791).
"Determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor de rs855791 de TMPRSS6 " incluye, pero sin limitación, realizar un ensayo para determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; solicitar un ensayo para determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; prescribir un ensayo para determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; o de otro modo dirigir o controlar que se realiza un ensayo para determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; y revisar que los datos del ensayo del genotipo de TMRSS6 o proteína o secuencia de un ácido nucleico para determinar que un paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
Por "interleucina 6 (IL-6)" o "polipéptido de IL-6" se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_000591 y que tiene actividad biológica de IL-6. La IL-6 es una citocina pleiotrópica con múltiples funciones biológicas. Las actividades biológicas de IL-6 ilustrativas incluyen actividades inmunoestimuladoras y proinflamatorias. A continuación se proporciona una secuencia de aminoácidos de IL-6 ilustrativa:
1 MCVGARRLGR GPCAALLLLG LGLSTVTGLH CVGDTYPSND RCCHECRPGN GMVSRCSRSQ
61 NTVCRPCGPG FYNDWSSKP CKPCTWCNLR SGSERKQLCT ATQDTVCRCR AGTQPLDSYK
121 PGVDCAPCPP GHFSPGDNQA CKPWTNCTLA GKHTLQPASN SSDAICEDRD PPATQPQETQ
181 GPPARPITVQ PTEAWPRTSQ GPSTRPVEVP GGRAVAAILG LGLVLGLLGP LAILLALYLL
241 RRDQRLPPDA HKPPGGGSFR TPIQEEQADA HSTLAKI (SEQ ID NO:6 )
Por "ácido nucleico de interleucina 6 (IL-6)" se entiende un polinucleótido que codifica un polipéptido de interleucina 6 (IL-6). Una secuencia de ácido nucleico de interleucina 6 (IL-6) ilustrativa se proporciona con el número de acceso del NCBI NM_000600. A continuación se proporciona la secuencia ilustrativa con el número de acceso del NCBI NM_000600.
1 AATATTAGAG TCTCAACCCC CAATAAATAT AGGACTGGAG ATGTCTGAGG CTCATTCTGC
61 CCTCGAGCCC ACCGGGAACG AAAGAGAAGC TCTATCTCCC CTCCAGGAGC CCAGCTATGA
121 ACTCCTTCTC CACAAGCGCC TTCGGTCCAG TTGCCTTCTC CCTGGGGCTG CTCCTGGTGT
181 TGCCTGCTGC CTTCCCTGCC CCAGTACCCC CAGGAGAAGA TTCCAAAGAT GTAGCCGCCC
241 CACACAGACA GCCACTCACC TCTTCAGAAC GAATTGACAA ACAAATTCGG TACATCCTCG
301 ACGGCATCTC AGCCCTGAGA AAGGAGACAT GTAACAAGAG TAACATGTGT GAAAGCAGCA
361 AAGAGGCACT GGCAGAAAAC AACCTGAACC TTCCAAAGAT GGCTGAAAAA GATGGATGCT
421 TCCAATCTGG ATTCAATGAG GAGACTTGCC TGGTGAAAAT CATCACTGGT CTTTTGGAGT
481 TTGAGGTATA CCTAGAGTAC CTCCAGAACA GATTTGAGAG TAGTGAGGAA CAAGCCAGAG
541 CTGTGCAGAT GAGTACAAAA GTCCTGATCC AGTTCCTGCA GAAAAAGGCA AAGAATCTAG
601 ATGCAATAAC CACCCCTGAC CCAACCACAA ATGCCAGCCT GCTGACGAAG CTGCAGGCAC
661 AGAACCAGTG GCTGCAGGAC ATGACAACTC ATCTCATTCT GCGCAGCTTT AAGGAGTTCC
7 21 TGCAGTCCAG CCTGAGGGCT CTTCGGCAAA TGTAGCATGG GCACCTCAGA TTGTTGTTGT
7 81 TAATGGGCAT TCCTTCTTCT GGTCAGAAAC CTGTCCACTG GGCACAGAAC TTATGTTGTT
841 CTCTATGGAG AACTAAAAGT ATGAGCGTTA GGACACTATT TTAATTATTT TTAATTTATT
901 AATATTTAAA TATGTGAAGC TGAGTTAATT TATGTAAGTC ATATTTATAT TTTTAAGAAG
961 TACCACTTGA AACATTTTAT GTATTAGTTT TGAAATAATA ATGGAAAGTG GCTATGCAGT
102 1 TTGAATATCC TTTGTTTCAG AGCCAGATCA TTTCTTGGAA AGTGTAGGCT TACCTCAAAT
108 1 AAATGGCTAA CTTATACATA TTTTTAAAGA AATATTTATA TTGTATTTAT ATAATGTATA
114 1 AATGGTTTTT ATACCAATAA ATGGCATTTT AAAAAATTCA GCAAAAAAAA AAAAAAAAAA
120 1 A (SEQ ID N O :7)
Por "complejo del receptor de interleucina 6 (IL-6R)" se entiende un complejo proteico que comprende una subunidad alfa del receptor de IL-6 (IL-6Ra) y la glicoproteína transductora de la señal 130 de la interleucina 6, también denominada subunidad p del receptor de interleucina 6 (IL-6Rp).
Por "polipéptido de la subunidad a del receptor de interleucina 6 (IL-6Ra)" se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_000556 o NP_852004 y que tiene actividad biológica del receptor de IL-6. Las actividades biológicas de IL-6Ra ilustrativas incluyen la unión a IL-6, la unión a la glicoproteína 130 (gp130) y la regulación del crecimiento y la diferenciación celular. A continuación se proporciona una secuencia de IL-6R ilustrativa:
1 MLAVGCALLA ALLAAPGAAL APRRCPAQEV ARGVLTSLPG DSVTLTCPGV EPEDNATVHW
61 VLRKPAAGSH PSRWAGMGRR LLLRSVQLHD SGNYSCYRAG RPAGTVHLLV DVPPEEPQLS
121 CFRKSPLSNV VCEWGPRSTP SLTTKAVLLV RKFQNSPAED FQEPCQYSQE SQKFSCQLAV
181 PEGDSSFYIV SMCVASSVGS KFSKTQTFQG CGILQPDPPA NITVTAVARN PRWLSVTWQD
241 PHSWNSSFYR LRFELRYRAE RSKTFTTWMV KDLQHHCVIH DAWSGLRHW QLRAQEEFGQ
301 GEWSEWSPEA MGTPWTESRS PPAENEVSTP MQALTTNKDD DNILFRDSAN ATSLPVQDSS
361 SVPLPTFLVA GGSLAFGTLL CIAIVLRFKK TWKLRALKEG KTSMHPPYSL GQLVPERPRP
421 TPV LV PLISP PVSPSSLGSD NTSSHNRPDA RDPRSPYDIS NTDYFFPR (SEQ ID NO: 8
Por "polipéptido de la subunidad p del receptor de interleucina 6 (IL-6Rp)" se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_002175, NP_786943, o NP_001177910 y que tiene actividad biológica del receptor de IL-6. Las actividades biológicas de IL-6Rp ilustrativas incluyen la unión a IL-6Ra, la actividad de señalización del receptor IL-6 y la regulación del crecimiento y diferenciación celular, expresión de hepcidina etc. A continuación se proporciona una secuencia de IL- 6Rp ilustrativa:
1 MLTLQTWLVQ A LFIFLT T ES TGELLDPCGY IS P E S P W Q L HSNFTAVCVL KEKCMDYFHV
61 NANYIVWKTN HFTIPKEQYT IINRTASSV T FTDIASLNIQ LTCNILTFGQ LEQNVYGITI
121 ISGLPPEKPK NLSCIVNEGK KMRCEWDGGR ETHLETNFTL KSEWATHKFA DCKAKRDTPT
181 SCTVDYSTVY FVNIEVWVEA ENALGKVTSD HINFDPVYKV KPNPPHNLSV IN S E E L S S IL
241 KLTWTNPSIK SV IILK Y N IQ YRTKDASTWS QIPPEDTAST RSSFTVQDLK PFTEYVFRIR
301 CMKEDGKGYW SDWSEEASGI TYEDRPSKAP SFWYKIDPSH TQGYRTVQLV WKTLPPFEAN
361 GKILDYEVTL TRWKSHLQNY TVNATKLTVN LTNDRYLATL TVRNLVGKSD AAVLTIPACD
421 FQATHPVMDL KAFPKDNMLW VEWTTPRESV KKYILEWCVL SDKAPCITDW QQEDGTVHRT
481 YLRGNLAESK CYLITVTPVY ADGPGSPESI KAYLKQAPPS KGPTVRTKKV GKNEAVLEWD
541 QLPVDVQNGF IRNYTIFYRT IIGNETAVNV DSSHTEYTLS SLTSDTLYMV RMAAYTDEGG
601 KDGPEFTFTT PKFAQGEIEA IW PV C LA FL LTTLLGVLFC FNKRDLIKKH IWPNVPDPSK
661 SHIAQWSPHT PPRHNFNSKD QMYSDGNFTD V SW EIEA ND KKPFPEDLKS LDLFKKEKIN
721 TEGHSSGIGG SSCMSSSRPS ISSSD EN ESS QNTSSTVQYS TWHSGYRHQ VPSVQVFSRS
781 ESTQPLLDSE ERPEDLQLVD HVDGGDGILP RQQYFKQNCS QHESSPDISH FERSKQVSSV
841 NEEDFVRLKQ Q ISDH ISQ SC GSGQMKMFQE VSAADAFGPG TEGQVERFET VGMEAATDEG
901 MPKSYLPQTV RQGGYMPQ ( í3EQ ID N O :9)1
Por "antagonista de IL-6" se entiende un agente que es capaz de disminuir la actividad biológica de IL-6. Los antagonistas de IL-6 incluyen agentes que disminuyen el nivel de polipéptido de IL-6 en suero, incluidos agentes que disminuyen la expresión de un polipéptido de IL-6 o nucleico ácido; agentes que disminuyen la capacidad de IL-6 para unirse a IL-6R; agentes que disminuyen la expresión del IL-6R; y agentes que disminuyen la transducción de señales por el receptor IL-6R cuando se une a IL-6. En realizaciones preferidas, el antagonista de IL-6 disminuye la actividad biológica de IL-6 en al menos aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 50 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o incluso un 100 %. Tal como se describe con más detalle en la Sección 5.7 a continuación, los antagonistas de IL-6 incluyen polipéptidos de unión a IL-6, tales como anticuerpos anti-IL-6 y fragmentos de unión a antígeno o derivados de los mismos; polipéptidos de unión a IL-6R, tales como anticuerpos anti-IL-6R y fragmentos de unión a antígeno o derivados de los mismos; y moléculas químicas sintéticas, tales como inhibidores de JAK1 y JAK3.
Por "anticuerpo de IL-6" o "anticuerpo anti-IL-6" se entiende un anticuerpo que se une específicamente a IL-6. Los anticuerpos anti-IL-6 incluyen anticuerpos monoclonales y policlonales que son específicos de IL-6, y fragmentos de unión a antígeno o derivados de los mismos. Los anticuerpos de IL-6 se describen con mayor detalle en la Sección 5.7.1 a continuación.
Por "trastorno inflamatorio mediado por IL-6" se entiende cualquier trastorno en el que se sabe o se sospecha que la IL-6 contribuye a la etiología de la enfermedad o cualquiera de sus síntomas.
Por "eritropoyetina (EPO)" se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_000790 y que tiene actividad biológica de EPO. Las actividades biológicas de EPO ilustrativas incluyen la unión al receptor de eritropoyetina y la proliferación resultante y diferenciación terminal de células precursoras eritroides y/o aumento de la eritropoyesis (producción de glóbulos rojos). A continuación se proporciona una secuencia de aminoácidos de EPO ilustrativa:
1 MGVHECPAWL WLLLSLLSLP LGLPVLGAPP RLICDSRVLE RYLLEAKEAE NITTGCAEHC
61 SLNENITVPD TKVNFYAWKR MEVGQQAVEV WQGLALLSEA VLRGQALLVN SSQPWEPLQL
121 HVDKAVSGLR SLTTLLRALG AQKEAISPPD AASAAPLRTI TADTFRKLFR VYSNFLRGKL
181 KLYTGEACRT GDR (SEQ ID N O :10)
Por "agente estimulante de la eritropoyesis (ESA)" se entiende un agente que estimula la eritropoyesis. Los ESA incluyen, aunque no de forma limitativa, EPO; darbepoetina (Aranesp); epoetina beta (NeoRecormon); epoetina delta (Dynepo); epoetina omega (Epomax); epoetina zeta.
Por "factor eritropoyético" se entiende un agente que aumenta el crecimiento o la proliferación de los glóbulos rojos o progenitores de los mismos (por ejemplo, una célula madre hematopoyética) y/o disminuye la muerte celular en glóbulos rojos o progenitores del mismo. En diversas realizaciones, los factores eritropoyéticos incluyen agentes estimulantes de la eritropoyesis, estabilizantes de HIF y suplementos de hierro.
Por "polipéptido de proteína C reactiva (CRP)" se entiende un polipéptido o fragmento del mismo que tiene al menos aproximadamente un 85 % o más de identidad de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos proporcionada con el número de acceso del NCBI NP_000558 y que tiene actividad de activación del complemento. Los niveles de CRP aumentan en respuesta a la inflamación. A continuación se proporciona una secuencia de CRP ilustrativa:
1 MEKLLCFLVL TSLSHAFGQT DMSRKAFVFP KESDTSYVSL KAPLTKPLKA FTVCLHFYTE
61 LSSTR G Y SIF SYATKRQDNE IL IFW SK D IG YSFTVGGSEI LFEVPEVTVA PVHICTSWES
121 ASGIVEFWVD GKPRVRKSLK KGYTVGAEAS IILG QEQ DSF GGNFEGSQSL VGDIGNVNMW
181 DFVLSPDEIN TIYLGGPFSP NVLNWRALKY EVQGEVFTKP QLWP (SEQ ID N O :11)
Por "agente" se entiende cualquier compuesto o composición adecuada para administrarse en terapia, e incluye explícitamente compuestos químicos; proteínas, incluidos anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos; péptidos; y moléculas de ácido nucleico.
Por "sujeto" se entiende un mamífero humano o no humano, incluyendo, pero sin limitación, bovino, caballo, cánido, ovino, felino y roedor, incluyendo sujetos murinos y de rata. Un "paciente" es un sujeto humano.
Como se utiliza en el presente documento, los términos "tratar", "que trata", "tratamiento", y similares se refieren a reducir o mejorar un trastorno, y/o signos o síntomas asociados con el mismo, o ralentizar o detener su progresión. Se apreciará que, aunque no se excluye, tratar un trastorno o afección no requiere que el trastorno, afección o síntomas asociados con los mismos se eliminen por completo.
"Antes del tratamiento" significa antes de la primera administración de un antagonista de IL-6 de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento. Antes del tratamiento no excluye, y frecuentemente incluye, la administración previa de tratamientos distintos de un antagonista de IL-6.
En esta divulgación, "comprende", "que comprende", "que contiene", "que tiene", "incluye", "incluyendo", y variantes lingüísticas de los mismos tienen el significado que se les atribuye en la ley de patentes de los Estados Unidos, lo que permite la presencia de componentes adicionales más allá de los explícitamente citados.
Por "muestra biológica" se entiende cualquier tejido, célula, fluido u otro material derivado de un organismo (p. ej., sujeto humano). En ciertas realizaciones, la muestra biológica es suero o sangre.
Por " inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE)" se entiende un agente que inhibe la función biológica de la enzima convertidora de angiotensina de convertir angiotensina I en angiotensina II. los inhibidores de ACE incluyen, sin limitación, quinapril, perindopril, ramipril, captopril, benazepril, trandolapril, fosinopril, lisinopril, moexipril, y enalapril. En diversas realizaciones, el inhibidor de ACE es perindopril.
5.1. Otras convenciones interpretativas
Salvo que se indique lo contrario, la numeración de restos de la región constante del anticuerpo se realiza de acuerdo con el índice EU como en Kabat.
Se entiende que los intervalos proporcionados en el presente documento son una forma abreviada de todos los valores comprendidos en el intervalo, incluidos los valores finales indicados. Por ejemplo, se entiende que un intervalo de 1 a 50 incluye cualquier número, combinación de números, o subintervalo del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, y 50.
Salvo que se indique lo contrario o sea evidente por el contexto, como se utiliza en el presente documento el término "o" es inclusivo. Salvo que se indique lo contrario o sea evidente por el contexto, como se utilizan en el presente documento, los términos "un", "una", y "el/la" son singular o plural.
Salvo que se indique lo contrario o sea de otra forma evidente por el contexto, como se utiliza en el presente documento se entiende que el término "aproximadamente" está dentro de un intervalo de tolerancia normal en la técnica, por ejemplo, dentro de 2 desviaciones típicas de la media. Aproximadamente puede entenderse dentro de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, 0,1 %, 0,05 % o 0,01 % del valor establecido. Salvo que sea evidente por el contexto, todos los valores numéricos proporcionados en el presente documento están modificados por el término aproximadamente.
5.2. Métodos para tratar trastornos mediados por hepcidina
En un primer aspecto, se proporcionan métodos para tratar un trastorno mediado por hepcidina.
Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un sujeto, normalmente un paciente humano, que tiene un trastorno mediado por hepcidina, en donde se ha determinado que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En una primera serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, los métodos excluyen afirmativamente el tratamiento de sujetos que son homocigotos para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento.
5.2.1. Trastornos mediados por hepcidina
5.2.1.1. Anemia por enfermedad crónica / Inflamación crónica
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina tratado por los métodos descritos en el presente documento es una anemia por enfermedad crónica, también conocida como anemia por inflamación crónica.
En diversas realizaciones, el paciente es varón y tiene un contenido de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de menos de 14 g/dl. En algunas realizaciones, el paciente varón tiene un nivel de Hb antes del tratamiento de 13,0 -13,9 g/dl, 12,0 - 12,9 g/dl, 11,0 - 11,9 g/dl, 10,0 - 10,9 g/dl, o menos de 10 g/dl. En diversas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un contenido de Hb antes del tratamiento de menos de 12 g/dl. En algunas realizaciones, el paciente mujer tiene un nivel de Hb antes del tratamiento de 11,0 - 11,9 g/dl, 10,0 - 10,9 g/dl, 9,0 - 9,9 g/dl, 8,0 - 8,9 g/dl, o menos de 8 g/dl. En algunas de estas realizaciones, el paciente ha sido tratado previamente con un ESA. En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con suplementos de hierro. En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con una transfusión de sangre o concentrado de hematíes.
En diversas realizaciones, el paciente es varón y tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 40 %. En algunas realizaciones, el paciente varón tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 39 %, menos del 38 %, menos del 37 %, menos del 36 %, o menos del 35 %. En ciertas realizaciones, el paciente varón tiene un hematocrito antes del tratamiento del 39 %, 38 %, 37 %, 36 %, 35 %, 34 %, 33 %, 32 %, 31 % o 30 %. En diversas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 36 %. En algunas realizaciones, el paciente mujer y tiene un hematocrito antes del tratamiento de menos del 35 %, 34 %, 33 %, 32 %, 31 %, 30 %, 29 %, 28 %, 27 % o 26 %. En ciertas realizaciones, el paciente mujer tiene un hematocrito antes del tratamiento del 35 %, 34 %, 33 %, 32 %, 31 %, 30 %, 29 %, 28 %, 27 % o 26 %. En algunas de estas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un ESA. En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con suplementos de hierro. En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con una transfusión de sangre o concentrado de hematíes.
En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un ESA y tiene un contenido de Hb normal antes del tratamiento y/o un hematocrito normal antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente es varón y tiene un contenido de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de al menos 14 g/dl y/o un hematocrito antes del tratamiento de al menos el 40 %. En ciertas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un contenido de Hb antes del tratamiento de al menos 12 g/dl y/o un hematocrito de al menos el 36 %. En realizaciones específicas, el ESA es EPO. En realizaciones específicas, el ESA es darbepoetina alfa.
En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un suplementos de hierro y tiene un contenido de Hb normal antes del tratamiento y/o un hematocrito normal antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente es varón y tiene un contenido de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de al menos 14 g/dl y/o un hematocrito antes del tratamiento de al menos el 40 %. En ciertas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un contenido de Hb antes del tratamiento de al menos 12 g/dl y/o un hematocrito de al menos el 36 %.
En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con una transfusión de sangre o concentrado de hematíes, y tiene un contenido de Hb normal antes del tratamiento y/o un hematocrito normal antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el paciente es varón y tiene un contenido de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de al menos 14 g/dl y/o un hematocrito antes del tratamiento de al menos el 40 %. En ciertas realizaciones, el paciente es mujer y tiene un contenido de Hb antes del tratamiento de al menos 12 g/dl y/o un hematocrito de al menos el 36 %.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para aumentar los niveles de Hb del paciente por encima de los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para aumentar el hematocrito del paciente por encima de los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para aumentar tanto los niveles de Hb como de hematocrito por encima de los niveles antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir reducir la dosis de ESA del paciente sin reducir los niveles de Hb del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir reducir la dosis de ESA del paciente sin reducir el hematocrito del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir reducir la dosis de ESA del paciente sin reducir los niveles de Hb y el hematocrito del paciente.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir al menos una reducción del 10 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período de tiempo suficiente para permitir una reducción de al menos 20 %, 30 %, 40 %, o 50 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento. En realizaciones particulares, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para permitir una reducción de al menos el 60 %, o incluso una reducción de al menos el 75 % de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período de tiempo suficiente para revertir la deficiencia funcional de hierro.
5.2.1.1.1. Enfermedad renal crónica
En diversas realizaciones, la enfermedad crónica es enfermedad renal crónica (CKD).
En algunas realizaciones, el paciente tiene enfermedad renal crónica de estadio 1 KDOQI. En ciertas realizaciones, el paciente tiene enfermedad renal crónica de estadio 2 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 3 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 4 KDOQI, o enfermedad renal crónica de estadio 5 KDOQI.
En algunas realizaciones, el paciente tiene síndrome cardiorrenal (CRS). En ciertas realizaciones, el paciente tiene CRS Tipo 4.
En algunas realizaciones, el paciente ha sido tratado con diálisis.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un periodo de tiempo suficiente para reducir la mortalidad cardiovascular (CV) en comparación con las cohortes históricas emparejadas por edad y enfermedad.
5.2.1.1.2. Enfermedades inflamatorias crónicas
En diversas realizaciones, la enfermedad crónica es una enfermedad inflamatoria crónica.
En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria crónica es artritis reumatoide (RA).
En realizaciones específicas, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento superior a 5,1. En algunas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de 3,2 a 5,1. En algunas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de menos de 2,6. En diversas realizaciones, la RA del paciente antes del tratamiento tiene una actividad grave. En algunas realizaciones, la RA del paciente antes del tratamiento tiene una actividad moderada.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con metotrexato. En algunas realizaciones, el metotrexato se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6. En algunas realizaciones, el tratamiento con metotrexato continúa cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un agente anti-TNFa. En realizaciones particulares, el agente anti-TNFa se selecciona de etanercept, adalimumab, infliximab, certolizumab y golimumab. En realizaciones particulares, el agente anti-TNFa se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un antagonista del receptor de IL-1. En realizaciones específicas, el antagonista del receptor de IL-1 es anakinra. En realizaciones particulares, el antagonista del receptor de IL-1 se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con abatacept. En realizaciones particulares, el abatacept se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un antagonista de IL-6, y el método además comprende continuar con la administración de un antagonista de IL-6 solo en aquellos pacientes en los que se ha determinado recientemente que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En realizaciones específicas, el antagonista de IL-6 es tocilizumab. En realizaciones específicas, el antagonista de IL-6 es tofacitinib. En diversas realizaciones, la enfermedad inflamatoria crónica se selecciona del grupo que consiste en artritis idiopática juvenil, espondilitis anquilosante, psoriasis en placas, artritis psoriásica, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.
5.2.1.1.3. Cáncer
En diversas realizaciones, la enfermedad crónica es cáncer.
En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en: tumores sólidos, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer hematológico, mieloma múltiple, leucemias, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), linfomas y linfoma de Hodgkin.
5.2.1.1.4. Infección crónica
En diversas realizaciones, la enfermedad crónica es una infección crónica.
5.2.1.1.5. Insuficiencia cardíaca congestiva
En diversas realizaciones, la enfermedad crónica es insuficiencia cardíaca congestiva (CHF).
5.2.1.2. Anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro (IRIDA)
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro (IRIDA).
5.2.1.3. Anemia asociada con adenomas hepáticos productores de hepcidina
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es anemia asociada con un adenoma hepático productor de hepcidina.
5.2.1.4. Síndrome coronario agudo
Los datos presentados en los Ejemplos 2, 3 y 5 a continuación demuestran que los antagonistas de IL-6 son eficaces para reducir el riesgo de insuficiencia cardíaca y muerte, y para aumentar la función cardíaca y reducir la fibrosis después de un infarto agudo de miocardio. Por consiguiente, en diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es síndrome coronario agudo.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sufrido un infarto de miocardio en los 60 días previos a la primera administración de un antagonista de IL-6. En realizaciones particulares, el paciente ha sufrido un infarto de miocardio en los 30 días, 14 días, 7 días, 48 horas o 24 horas previos a la primera administración de un antagonista de IL-6. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para mejorar la contractilidad miocárdica en comparación con los niveles antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para mejorar la fracción de eyección cardíaca en comparación con los niveles antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir la fibrosis cardíaca en comparación con los niveles antes del tratamiento.
5.2.1.5. Enfermedad de Castleman
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por hepcidina es la enfermedad de Castleman.
5.3. Métodos para mejorar el tratamiento trastornos mediados por hepcidina
En otro aspecto, se proporcionan métodos para mejorar el tratamiento de un trastorno mediado por hepcidina suspendiendo una terapia que es ineficaz, reduciendo de este modo los efectos secundarios y reduciendo el coste sin pérdida de eficacia del tratamiento. Los métodos comprenden suspender la administración de un antagonista de IL-6 a un paciente con un trastorno mediado por hepcidina, en donde se ha determinado que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En una serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el paciente es homocigoto para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. En realizaciones típicas, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento. En diversas realizaciones, el paciente tiene niveles séricos elevados de CRP antes del tratamiento.
En diversas realizaciones, el paciente tiene un trastorno mediado por hepcidina seleccionado de los descritos en la Sección 5.2.1 anterior. En ciertas realizaciones, el paciente tiene anemia por enfermedad crónica.
5.4. Métodos para tratar trastornos inflamatorios mediados por IL-6
Los datos presentados en los Ejemplos 2, 3 y 5 a continuación demuestran que los antagonistas de IL-6 proporcionan un beneficio terapéutico en sujetos que tienen niveles elevados de IL-6 antes del tratamiento y al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, incluso en ausencia de anemia. Por consiguiente, en otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar trastornos inflamatorios mediados por IL-6 en pacientes sin anemia por inflamación crónica.
Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un sujeto, normalmente un paciente humano, que tiene un trastorno inflamatorio mediado por IL-6, en donde el paciente no tiene anemia y en donde se ha determinado que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En una primera serie de realizaciones, se ha determinado previamente que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. En otra serie de realizaciones, el método comprende además la etapa previa de determinar que el sujeto tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, los métodos excluyen afirmativamente el tratamiento de sujetos que son homocigotos para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6. Normalmente, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el trastorno mediado por IL-6 es artritis reumatoide (RA).
En realizaciones específicas, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento superior a 5,1. En algunas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de 3,2 a 5,1. En algunas realizaciones, el paciente tiene una puntuación DAS28 antes del tratamiento de menos de 2,6. En diversas realizaciones, la RA del paciente antes del tratamiento tiene una actividad grave. En algunas realizaciones, la RA del paciente antes del tratamiento tiene una actividad moderada.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con metotrexato. En algunas realizaciones, el metotrexato se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6. En algunas realizaciones, el metotrexato se continúa cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con un agente anti-TNFa. En realizaciones particulares, el agente anti-TNFa se selecciona de etanercept, adalimumab, infliximab, certolizumab y golimumab. En realizaciones particulares, el agente anti-TNFa se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En ciertas realizaciones, el paciente ha sido tratado con abatacept. En realizaciones particulares, el abatacept se suspende cuando se inicia el tratamiento con un antagonista de IL-6.
En diversas realizaciones, el trastorno mediado por IL-6 se selecciona del grupo que consiste en artritis idiopática juvenil, espondilitis anquilosante, psoriasis en placas, artritis psoriásica, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.
5.5. Niveles séricos de IL-6 y CRP antes del tratamiento
En realizaciones típicas de los métodos descritos en el presente documento, el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento.
En algunas realizaciones, el paciente tiene un nivel sérico de IL-6 antes del tratamiento superior a 2,5 pg/ml. En diversas realizaciones, el paciente tiene un nivel sérico de IL-6 antes del tratamiento superior a 5 pg/ml, superior a 7.5 pg/ml, superior a 10 pg/ml, superior a 12,5 pg/ml o superior a 15 pg/ml.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles séricos de IL-6 del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles séricos de IL-6 del paciente en al menos el 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento.
En diversas realizaciones, el paciente tiene niveles elevados de proteína C reactiva (CRP) antes del tratamiento. En algunas realizaciones, el paciente tiene un nivel de CRP antes del tratamiento superior a 2 mg/l, 2,5 mg/l, 3 mg/l, 3.5 mg/l, 4 mg/l, 4,5 mg/l o 5 mg/l. En algunas realizaciones, el paciente tiene unos niveles de CRP antes del tratamiento superiores a 7,5 mg/l, 10 mg/l, 12,5 mg/l o 15 mg/l.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de CRP del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento. En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período suficiente para reducir los niveles de CRP del paciente en al menos el 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento.
5.6. Genotipado del rs855791 de TMPRSS6
Los métodos descritos en el presente documento comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de IL-6 a un sujeto en el que se ha determinado que tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Preferentemente, se identifican ambos alelos correspondientes al gen de interés, permitiendo de este modo la identificación y discriminación de pacientes que son homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, heterocigotos para los alelos mayor y menor del rs855791 de TMPRSS6 y homocigotos para el alelo menor del rs855791 deTMPRSS6 y para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. Preferentemente, se identifican ambos alelos correspondientes al gen de interés, permitiendo de este modo la identificación y discriminación de pacientes que son homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, heterocigotos para los alelos mayor y menor del rs855791 de TMPr Ss 6 y homocigotos para el alelo menor del rs855791 deTMPRSS6.
La ausencia (alelo mayor) o presencia (alelo menor) del SNP rs855791 (2321G^A) en el gen TMPRSS6 se determina usando técnicas convencionales.
Normalmente, la PCR se usa para amplificar una muestra biológica obtenida del paciente.
En algunas realizaciones, la ausencia o presencia de polimorfismo se detecta al mismo tiempo con amplificación usando PCR en tiempo real (RT-PCR). En ciertas realizaciones, el ensayo de RT-PCR emplea 5' nucleasa (sondas TaqMan®), balizas moleculares y/o sondas de hibridación FRET. Revisado en Espy et al., Clin. Microbiol. Rev. 2006 January; 19(1): 165-256. En realizaciones típicas, se usa un ensayo disponible en el mercado. En realizaciones seleccionadas, el ensayo disponible en el mercado se selecciona del grupo que consiste en TaqMan™ SNP Genotyping Assays (ThermoFisher); PCR SNP Genotyping Assay (Qiagen); Novallele Genotyping Assays (Canon); y ensayos SNP Type™ (anteriormente SNPtype) (Fluidigm).
En algunas realizaciones, la ausencia o presencia de polimorfismo se detecta tras una amplificación usando hibridación con una sonda específica del SNP rs855791, digestión con endonucleasa de restricción, secuenciación de ácidos nucleicos, extensión del cebador, análisis de micromatriz o chip de genes, espectrometría de masas y/o un ensayo de protección de ADNasa. En algunas realizaciones, las variantes alélicas se determinan por secuenciación. En ciertas realizaciones, se utiliza la secuenciación de Sanger. En ciertas realizaciones, se usa una variedad de técnicas de secuenciación de última generación, incluyendo por ejemplo una técnica de secuenciación seleccionada del grupo que consiste en secuenciación de micromatrices, secuenciación Solexa (Illumina), Ion Torrent (Life Technologies), SOliD (Applied Biosystems), pirosecuenciación, secuenciación en tiempo real de una única molécula (Pacific Bio), secuenciación en nanoporos y secuenciación en corrientes de túnel.
5.7. Antagonistas de IL-6
El antagonista de IL-6 usado en los métodos descritos en el presente documento es capaz de disminuir la actividad biológica de IL-6.
5.7.1. Anticuerpos anti-IL-6
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo monoclonal anti-IL-6 de longitud completa. En realizaciones particulares, el anticuerpo monoclonal de longitud completa es un anticuerpo IgG. En ciertas realizaciones, el anticuerpo monoclonal de longitud completa es un anticuerpo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es una composición policlonal que comprende una pluralidad de especies de anticuerpos anti-IL-6 de longitud completa, teniendo cada una de la pluralidad CDR únicas. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un fragmento de anticuerpo seleccionado de fragmentos Fab, Fab' y F(ab')2. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un scFv, un Fv unido por disulfuro (dsFv) o un anticuerpo de dominio único, tal como un nanocuerpo de dominio único VHH derivado de camélido. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un inmunoconjugado o fusión que comprende un fragmento de unión a antígeno de IL-6. En algunas realizaciones, el anticuerpo es biespecífico o multiespecífico, teniendo al menos una de las porciones de unión a antígeno especificidad por IL-6.
En algunas realizaciones, el anticuerpo es totalmente humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo está humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo es quimérico y tiene regiones V no humanas y dominios de la región C humana. En algunas realizaciones, el anticuerpo es murino.
En realizaciones típicas, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 100 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 75 nM, 50 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM o 10 nM. En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 5 nM, 4 nM, 3 nM o 2 nM. En realizaciones seleccionadas, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 1 nM, 750 pM o 500 pM. En realizaciones específicas, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de no más de 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM o 100 pM.
En realizaciones típicas, el anticuerpo anti-IL-6 neutraliza la actividad biológica de IL-6. En algunas realizaciones, el anticuerpo neutralizante impide la unión de IL-6 al receptor de IL-6.
En realizaciones típicas, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una semivida de eliminación tras la administración intravenosa de al menos 7 días. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una semivida de eliminación de al menos 14 días, al menos 21 días o al menos 30 días.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 tiene una región constante de IgG humana con al menos una sustitución de aminoácido que prolonga la semivida en suero en comparación con el dominio constante de IgG humana no sustituida.
En ciertas realizaciones, el dominio constante de la IgG comprende sustituciones en los restos 252, 254 y 256, en donde la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 252 es una sustitución con tirosina, la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 254 es una sustitución con treonina y la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 256 es una sustitución con ácido glutámico ("YTE"). Véase la Patente de EE.UU. N.° 7.083.784. En ciertas realizaciones de semivida extendida, el dominio constante de la IgG comprende sustituciones seleccionadas de T250Q/M428L (Hinton et al., J. Immunology 176:346-356 (2006)); N434A (Yeung et al., J. Immunology 182:7663-7671 (2009)); o T307A/E380A/N434A (Petkova et al., International Immunology, 18: 1759-1769 (2006)).
En algunas realizaciones, la semivida de eliminación del anticuerpo anti-IL-6 aumentó al utilizar las propiedades de unión a FcRN de la seroalbúmina humana. En ciertas realizaciones, el anticuerpo se conjuga con la albúmina (Smith et al., Bioconjug. Chem., 12: 750-756 (2001)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 se fusiona con dominios bacterianos de unión a albúmina (Stork et al., Prot. Eng. Design Science 20: 569-76 (2007)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 se fusiona con péptido de unión a albúmina (Nguygen et al., Prot Eng Design Sel 19: 291-297 (2006)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL es biespecífico, siendo una especificidad para IL-6 y una especificidad para seroalbúmina humana (Ablynx, WO 2006/122825 (nanocuerpo biespecífico)).
En algunas realizaciones, la semivida de eliminación del anticuerpo anti-IL-6 aumenta mediante PEGilación (Melmed et al., Nature Reviews Drug Discovery 7: 641-642 (2008)); por conjugación con polímero de HPMA (Lu et al., Nature Biotechnology 17: 1101-1104 (1999)); mediante conjugación con dextrano (Nuclear Medicine Communications, 16: 362-369 (1995)); mediante conjugación con homopolímeros de aminoácidos (HAP; HAPilación) (Schlapschy et al., Prot Eng Design Sel 20: 273-284 (2007)); o mediante polisialilación (Constantinou et al., Bioconjug. Chem. 20: 924­ 931 (2009)).
5.7.1.1.1. MED5117 y derivados
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 o porción de unión a antígeno del mismo comprende las seis CDR de MEDI5117. En realizaciones particulares, el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera de MEDI5117. En realizaciones específicas, el anticuerpo es el anticuerpo MEDI5117 de longitud completa. El anticuerpo MEDI5117 se describe en los documentos WO 2010/088444 y US 2012/0034212. El anticuerpo MEDI5117 tiene las siguientes secuencias de CDR y de cadena pesada y ligera:
CDR1 de VH de MEDI5117
SNYMI (SEQ ID NO:12)
CDR2 de VH de MEDI5117
DLYYYAGDTYYADSVKG (SEQ ID NO:13)
CDR3 de VH de MEDI5117
WADDHPPWIDL (SEQ ID NO:14)
CDR1 de VL de MEDI5117
RASQGISSWLA (SEQ ID NO:15)
CDR2 de VL de MEDI5117
KASTLES (SEQ ID NO:16)
CDR3 de VL de MEDI5117
QQSWLGGS (SEQ ID NO:17)
Cadena pesada de MEDI5117
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTISSNYMIWVRQAPGKGLEWVSDLYYYAGDTYY
ADSVKGRFTMSRDISKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARWADDHPPWIDLWGRGTLVTVSS
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N O :18)
Cadena ligera de MEDI5117
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASTLESGVPS
RFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSWLGGSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS
DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL
SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID N O :19)
En diversas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 es un derivado de MED5117.
En algunas realizaciones, el derivado de MED5117 incluye una o más sustituciones de aminoácidos en las regiones V de la cadena pesada y/o ligera de MED5117.
En ciertas realizaciones, el derivado comprende menos de 25 sustituciones de aminoácidos, menos de 20 sustituciones de aminoácidos, menos de 15 sustituciones de aminoácidos, menos de 10 sustituciones de aminoácidos, menos de 5 sustituciones de aminoácidos, menos de 4 sustituciones de aminoácidos, menos de 3 sustituciones de aminoácidos, menos de 2 sustituciones de aminoácidos, o 1 sustitución de aminoácido respecto a la V h y/o Vl original del anticuerpo anti-IL-6 MEDI5117, conservando la especificidad por la IL-6 humana.
En ciertas realizaciones, el derivado de MED5117 comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 % o al menos un 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos del dominio de VH y VL de MEDI5117. El porcentaje de identidad de secuencia se determina usando algoritmos BLAST con los parámetros por defecto.
En ciertas realizaciones, el derivado de MED5117 comprende una secuencia de aminoácidos en la cual las CDR comprenden una secuencia de aminoácidos que es al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 % o al menos un 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de las respectivas CDR de MEDI5117. El porcentaje de identidad de secuencia se determina usando algoritmos BLAST con los parámetros por defecto.
En ciertas realizaciones, los derivados de CDR de Vh y/o Vl comprenden sustituciones conservadoras de aminoácidos en uno o más restos de aminoácidos no esenciales predichos (es decir, restos de aminoácidos que no son críticos para que el anticuerpo se una específicamente a IL-6 humana).
5.7.1.1.2. Otros anticuerpos anti-IL-6
En diversas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 comprende las seis CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, elsilimomab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb). En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb). En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-IL-6 es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 comprende las seis CDR de un anticuerpo seleccionado de los descritos en los documentos US 2016/0168243, US 2016/0130340, US 2015/0337036, US 2015/0203574, US 2015/0140011, US 2015/0125468, US 2014/0302058, US 2014/0141013, US 2013/0280266, US 2013/0017575, US 2010/0215654, US 2008/0075726, patente de Estados Unidos n.° 5856135, US 2006/0240012, US 2006/0257407, o la Patente de Estados Unidos N.° 7291721.
5.7.2. Anticuerpos anti-receptor de IL-6
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo anti-receptor de IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo monoclonal anti-receptor de IL-6 de longitud completa. En realizaciones particulares, el anticuerpo monoclonal de longitud completa es un anticuerpo IgG. En ciertas realizaciones, el anticuerpo monoclonal de longitud completa es un anticuerpo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es una composición policlonal que comprende una pluralidad de especies de anticuerpos anti-receptor de IL-6 de longitud completa, teniendo cada una de la pluralidad c Dr únicas. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un fragmento de anticuerpo seleccionado de fragmentos Fab y Fab'. En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un scFv, un anticuerpo de un único dominio, incluyendo un nanocuerpo de dominio único VHH derivado de camélido. En algunas realizaciones, el anticuerpo es biespecífico o multiespecífico, teniendo al menos una de las porciones de unión a antígeno especificidad por IL-6R.
En algunas realizaciones, el anticuerpo es totalmente humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo está humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo es quimérico y tiene regiones V no humanas y dominios de la región C humana. En algunas realizaciones, el anticuerpo es murino.
En realizaciones típicas, el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 100 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R tiene una Kd para unión a IL-6R humana de menos de 75 nM, 50 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM o 10 nM. En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6R humana de menos de 5 nM, 4 nM, 3 nM o 2 nM. En realizaciones seleccionadas, el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6R humana de menos de 1 nM, 750 pM o 500 pM. En realizaciones específicas, el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tiene una Kd para unión a IL-6R humana de no más de 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM o 100 pM.
En realizaciones típicas, el anti-IL-6R reduce la actividad biológica de IL-6.
En realizaciones típicas, el anticuerpo anti-IL-6R tiene una semivida de eliminación tras la administración intravenosa de al menos 7 días. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R tiene una semivida de eliminación de al menos 14 días, al menos 21 días o al menos 30 días.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R tiene una región constante de IgG humana con al menos una sustitución de aminoácido que prolonga la semivida en suero en comparación con el dominio constante de IgG humana no sustituida.
En ciertas realizaciones, el dominio constante de la IgG comprende sustituciones en los restos 252, 254 y 256, en donde la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 252 es una sustitución con tirosina, la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 254 es una sustitución con treonina y la sustitución de aminoácido en el resto de aminoácido 256 es una sustitución con ácido glutámico ("YTE"). Véase la Patente de EE.UU. N.° 7.083.784. En ciertas realizaciones de semivida extendida, el dominio constante de la IgG comprende sustituciones seleccionadas de T250Q/M428L (Hinton et al., J. Immunology 176:346-356 (2006)); N434A (Yeung et al., J. Immunology 182:7663-7671 (2009)); o T307A/E380A/N434A (Petkova et al., International Immunology, 18: 1759-1769 (2006)).
En algunas realizaciones, la semivida de eliminación del anticuerpo anti-IL-6R aumentó al utilizar las propiedades de unión a FcRN de la seroalbúmina humana. En ciertas realizaciones, el anticuerpo se conjuga con la albúmina (Smith et al., Bioconjug. Chem., 12: 750-756 (2001)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R se fusiona con dominios bacterianos de unión a albúmina (Stork et al., Prot. Eng. Design Science 20: 569-76 (2007)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 se fusiona con péptido de unión a albúmina (Nguygen et al., Prot Eng Design Sel 19: 291-297 (2006)). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL es biespecífico, siendo una especificidad para IL-6R y una especificidad para seroalbúmina humana (Ablynx, WO 2006/122825 (nanocuerpo biespecífico)).
En algunas realizaciones, la semivida de eliminación del anticuerpo anti-IL-6R aumenta mediante PEGilación (Melmed et al., Nature Reviews Drug Discovery 7: 641-642 (2008)); por conjugación con polímero de HPMA (Lu et al., Nature Biotechnology 17: 1101-1104 (1999)); mediante conjugación con dextrano (Nuclear Medicine Communications, 16: 362-369 (1995)); mediante conjugación con homopolímeros de aminoácidos (HAP; HAPilación) (Schlapschy et al., Prot Eng Design Sel 20: 273-284 (2007)); o mediante polisialilación (Constantinou et al., Bioconjug. Chem. 20: 924­ 931 (2009)).
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R o porción de unión a antígeno del mismo comprende las seis CDR de tocilizumab. En realizaciones particulares, el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera de tocilizumab. En realizaciones específicas, el anticuerpo es el anticuerpo tocilizumab de longitud completa.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R o porción de unión a antígeno del mismo comprende las seis CDR de sarilumab. En realizaciones particulares, el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera de sarilumab. En realizaciones específicas, el anticuerpo es el anticuerpo sarilumab de longitud completa.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R o porción de unión a antígeno del mismo comprende las seis CDR de VX30 (Vaccinex), ARGX-109 (arGEN-X), FM101 (Formatech), SA237 (Roche), NI-1201 (NovImmune), o un anticuerpo descrito en el documento US 2012/0225060.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6R o porción de unión a antígeno es un anticuerpo de dominio único. En realizaciones particulares, el anticuerpo de dominio único es un anticuerpo de dominio único VHH de camélido. En realizaciones específicas, el anticuerpo es vobarilizumab (ALX-0061) (Ablynx NV).
5.7.3. Anticuerpos del complejo anti-IL-6:IL-6R
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo específico para el complejo de IL-6 e IL-6R. En ciertas realizaciones, el anticuerpo tiene las seis CDR de un anticuerpo seleccionado de los descritos en el documento US 2011/0002936.
5.7.4. Inhibidores de JAK y STAT
Se sabe que IL-6 transmite señales a través de la vía JAK-STAT.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un inhibidor de la vía de señalización JAK. En algunas realizaciones, el inhibidor de JAK es un inhibidor específico de JAK1. En algunas realizaciones, el inhibidor de JAK es un inhibidor específico de JAK3. En algunas realizaciones, el inhibidor de JAK es un inhibidor de pan-JAK.
En ciertas realizaciones, el inhibidor de JAK se selecciona del grupo que consiste en tofacitinib (Xeljanz), decernotinib, ruxolitinib, upadacitinib, baricitinib, filgotinib, lestaurtinib, pacritinib, peficitinib, INCB-039110, ABT-494, INCB-047986 y AC-410.
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un inhibidor de STAT3. En una realización específica, el inhibidor es AZD9150 (AstraZeneca, Isis Pharmaceuticals), una molécula antisentido de STAT3.
5.7.5. Antagonistas de IL-6 adicionales
En diversas realizaciones, el antagonista de IL-6 es un péptido antagonista.
En ciertas realizaciones, el antagonista de IL-6 es C326 (un inhibidor de IL-6 de Avidia, también conocido como AMG220) o FE301, un inhibidor de proteína recombinante de IL-6 (Ferring International Center S.A., Conaris Research Institute AG). En algunas realizaciones, el antagonista anti-IL-6 comprende gp130 soluble, FE301 (Conaris/Ferring).
5.8. Regímenes de dosificación
5.8.1. Anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno, péptidos
En realizaciones típicas, anticuerpo, los fragmentos de unión a antígeno y los péptidos antagonistas de IL-6 se administran por vía parenteral.
En algunas realizaciones parenterales, el antagonista de IL-6 se administra por vía intravenosa. En ciertas realizaciones intravenosas, el antagonista de IL-6 se administra como una inyección en embolada. En ciertas realizaciones intravenosas, el antagonista de IL-6 se administra como una perfusión. En ciertas realizaciones intravenosas, el antagonista de IL-6 se administra como una inyección en embolada seguida de perfusión. En algunas realizaciones parenterales, el antagonista de IL-6 se administra por vía subcutánea.
En diversas realizaciones, el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno o el péptido antagonista de IL-6 se administra en una dosis que es independiente del peso o área superficial del paciente (dosis fija).
En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg o 10 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg o 20 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 25 mg, 30 mg, 40 mg o 50 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg o 100 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 1 - 10 mg, 10 - 15 mg, 15 - 20 mg, 20 - 30 mg, 30 - 40 mg o 40 - 50 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija intravenosa es 1 - 40 mg, o 50 - 100 mg.
En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg o 100 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg o 200 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg o 250 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 10 - 100 mg, 100 - 200 mg, o 200 -250 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 10 - 20 mg, 20 - 30 mg, 30 - 40 mg, 40 - 50 mg, 50 -60 mg, 60 -70 mg, 70 - 80 mg, 80 - 90 mg, o 90 - 100 mg. En algunas realizaciones, la dosis fija subcutánea es 100 -125 mg, 125 - 150 mg, 150 - 175 mg, 175 - 200 mg, o 200 - 250 mg.
En diversas realizaciones, el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno, o péptido antagonista de IL-6 se administra como una dosis basada en el peso del paciente.
En algunas realizaciones, el antagonista se administra en una dosis intravenosa de 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,4 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,6 mg/kg, 0,7 mg/kg, 0,8 mg/kg, 0,9 mg/kg o 1,0 mg/kg. En algunas realizaciones, el antagonista se administra en una dosis de 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4 mg/kg, 4,5 mg/kg o 5 mg/kg.
En algunas realizaciones, la dosis subcutánea basada en el peso es 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,4 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,6 mg/kg, 0,7 mg/kg, 0,8 mg/kg, 0,9 mg/kg o 1,0 mg/kg. En algunas realizaciones, el antagonista se administra en una dosis de 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4 mg/kg, 4,5 mg/kg o 5 mg/kg.
En diversas realizaciones intravenosas, el antagonista de IL-6 se administra una vez cada 7 días, una vez cada 14 días, una vez cada 21 días, una vez cada 28 días, o una vez al mes. En diversas realizaciones subcutáneas, el antagonista de IL-6 se administra una vez cada 14 días, una vez cada 28 días, una vez al mes, una vez cada dos meses (meses alternos) o una vez cada tres meses.
En determinadas realizaciones preferidas, el antagonista de IL-6 es el anticuerpo MEDI5117. En diversas realizaciones, MEDI5117 se administra en una dosis fija de 1 - 30 mg IV una vez a la semana. En ciertas realizaciones, el anticuerpo MEDI5117 se administra en una dosis fija de 1, 2, 3, 4, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25, o 30 mg IV una vez a la semana. En algunas realizaciones, el anticuerpo MEDI5117 se administra en una dosis fija de 25 - 250 mg s.c. una vez al mes a una vez cada tres meses. En realizaciones particulares, MEDI5117 se administra en una dosis de 30 mg, 45 mg, 60 mg, 75 mg, 100 mg, 120 mg, 125 mg, 150 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 240 mg, o 250 mg s.c. una vez al mes, una vez cada dos meses, o una vez cada 3 meses.
En algunas realizaciones, el antagonista de IL-6 es tocilizumab. En diversas realizaciones, tocilizumab se administra por s.c. en una dosis inicial para pacientes >100 kg de 162 mg una vez a la semana. En algunas realizaciones, el tocilizumab se administra por vía intravenosa a una dosis de 4 mg/kg una vez cada 4 semanas seguido de un aumento a 8 mg/kg cada 4 semanas basándose en la respuesta clínica.
5.8.2. Inhibidores de JAK y STAT
En realizaciones típicas, los inhibidores de JAK de molécula pequeña y los inhibidores de STAT se administran por vía oral.
En diversas realizaciones, el inhibidor se administra una o dos veces al día a una dosis oral de 1 - 10 mg, 10 - 20 mg, 20 - 30 mg, 30 - 40 mg, o 40 - 50 mg. En algunas realizaciones, el inhibidor se administra una o dos veces al día a una dosis oral de 50 - 60 mg, 60 - 70 mg, 70 - 80 mg, 80 - 90 mg, o 90 - 100 mg. En algunas realizaciones, el inhibidor se administra en una dosis de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, o 50 mg PO una vez o dos veces al día. En algunas realizaciones, el inhibidor se administra a una dosis de 75 mg PO QD o BID, 100 mg PO QD o BID.
En ciertas realizaciones, el inhibidor de JAK es tofacitinib y se administra a una dosis de 5 mg PO BID u 11 mg PO al día.
En ciertas realizaciones, el inhibidor de JAK es decernotinib y se administra a una dosis de 25 mg, 50 mg, 100 mg, o 150 mg PO BID.
En ciertas realizaciones, el inhibidor es ruxolitinib y se administra a una dosis de 25 mg PO BID, 20 mg PO BID, 15 mg PO BID, 10 mg PO BID o 5 mg PO BID.
5.9. Agentes terapéuticos adicionales
En varias realizaciones de los métodos descritos en el presente documento, el método comprende además la administración de un agente terapéutico adicional al antagonista de IL-6, en donde el segundo agente terapéutico también es capaz de reducir la expresión de hepcidina.
En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un antagonista de BMP. En ciertas realizaciones, el antagonista de BMP es un anticuerpo anti-BMP6. En realizaciones particulares, el anticuerpo anti-BMP6 tiene las seis CDR de un anticuerpo descrito en los documentos US 2016/0176956 o US 2016/0159896.
En ciertas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un antagonista de hemojuvelina. En realizaciones particulares, el antagonista de hemojuvelina es un anticuerpo anti-hemojuvelina. En realizaciones específicas, el anticuerpo anti-hemojuvelina tiene las seis CDR de los anticuerpos divulgados en Kovac et al., Haematologica (2016) doi: 10.3324/ haematol.2015.140772 [publicación electrónica previa a la impresión].
En ciertas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un antagonista de hepcidina. En realizaciones particulares, el antagonista de hepcidina es un anticuerpo anti-hepcidina. En realizaciones específicas, el anticuerpo tiene las seis CDR de un anticuerpo descrito en el documento US 2016/0017032.
5.10. Kits
En otro aspecto, se proporcionan kits.
En realizaciones típicas, los kits proporcionan reactivos para determinar, en una muestra biológica obtenida de un paciente, el genotipo del paciente en la localización del s Np rs855791 de TMPRSS6.
5.11. Aspectos y realizaciones adicionales
5.11.1. Métodos de tratamiento de la inflamación en la enfermedad renal crónica o la enfermedad cardiovascular
En otros aspectos y realizaciones, se proporcionan composiciones y métodos para caracterizar y tratar la inflamación en la enfermedad renal crónica o enfermedad cardiovascular con un antagonista de IL-6, así como métodos para caracterizar la sensibilidad de un paciente al tratamiento.
Estos aspectos y realizaciones se basan, al menos en parte, en el descubrimiento de que la inflamación en pacientes con enfermedad renal crónica y pacientes con enfermedad cardiovascular que tienen uno o más alelos de TMPRSS6 que comprende G o C en la posición del nucleótido 2321 (que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736) provocó que estos pacientes tuvieran un mayor riesgo de muerte, y que dichos sujetos pudieran ser tratados con un antagonista de IL-6 para reducir este riesgo. Como se describe con mayor detalle a continuación, los pacientes con enfermedad renal crónica fueron genotipados y se analizaron los niveles séricos de IL-6 y CRP y estos datos de diagnóstico se compararon con la dosis de EPO administrada y el riesgo de muerte. Los pacientes que tienen uno o más alelos de TMpRSS6 que comprenden G o C en la posición de aminoácido 2321 (que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736) y niveles elevados de IL-6 y/o CRP, requirieron dosis más altas de EPO para la terapia y tuvieron una mayor mortalidad. Se ha demostrado que el nucleótido en esta posición es importante para identificar a los pacientes con anemia por deficiencia de hierro (véase Finberg et al., Nat. Genet. 2008; 40(5): 569-571). Estos datos apoyan firmemente la identificación de un subconjunto de pacientes basándose en el genotipo de TMPRSS6 que requirió una dosis más alta de EPO y/o que tienen un mayor riesgo de muerte, y probablemente respondería a la inhibición de IL-6 con o sin el tratamiento de referencia para el tratamiento de la anemia (por ejemplo, asociada con la enfermedad renal crónica). Al inhibir la inflamación, se puede reducir la dosis de EPO, evitando de este modo los efectos secundarios adversos de la EPO (por ejemplo, riesgo cardiovascular).
Estos aspectos y realizaciones se basan además en el descubrimiento de que los pacientes que tienen uno o más alelos de TMPRSS6 que comprende G o C en la posición del nucleótido 2321 (que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición del aminoácido 736) tienen un mayor riesgo de muerte asociada con infarto de miocardio o enfermedad cardiovascular. Es probable que estos pacientes también se beneficien de la inhibición de IL-6, lo que reduciría la inflamación y aumentaría el riesgo.
Por consiguiente, se proporcionan métodos terapéuticos para tratar la inflamación asociada con enfermedad cardiovascular o enfermedad renal crónica, incluida la anemia de la enfermedad renal crónica y/o reducir el riesgo de muerte asociada con tales afecciones inhibiendo la actividad biológica de IL-6, por ejemplo, en pacientes seleccionados por genotipado de TMPRSS6 en el SNP rs855791, ya sea bloqueando la unión de IL-6 o su receptor (gp80) entre sí, o su señalización o expresión (por ejemplo, por anticuerpo anti-IL-6 o por anticuerpo anti-IL-6R o inhibición de JAK1/STAT3). En una realización, el tratamiento de la enfermedad renal crónica se lleva a cabo con o sin el tratamiento de referencia para la anemia, así como los métodos para caracterizar la capacidad de respuesta de un paciente que padece una enfermedad renal crónica al tratamiento de la anemia, por ejemplo, genotipando TMPRSS6 en el SNP rs855791 y detectando niveles de marcadores inflamatorios (por ejemplo, niveles séricos aumentados de IL-6 y/o CRP).
Se proporcionan métodos para tratar enfermedades cardiovasculares o la anemia por enfermedad renal crónica y/o reducir la muerte asociada con la inflamación crónica en dichos pacientes mediante la administración de un agente que inhibe la actividad o expresión biológica de IL-6.
En algunos aspectos y realizaciones, se proporcionan composiciones y métodos para tratar la inflamación crónica que contribuye a la mortalidad en sujetos que tienen enfermedad renal crónica o enfermedad cardiovascular, y para caracterizar la capacidad de respuesta de los pacientes a tales terapias. En realizaciones particulares, se proporcionan métodos para caracterizar y tratar la anemia inflamatoria crónica y la mortalidad (por ejemplo, en la enfermedad renal crónica), así como para caracterizar la capacidad de respuesta de un paciente al tratamiento de la anemia (por ejemplo, la administración de eritropoyetina o agentes estimulantes de la eritropoyesis). En un aspecto, se proporcionan métodos para el tratamiento de la inflamación crónica en un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6, en donde el sujeto que se selecciona para el tratamiento tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar la inflamación o la inflamación crónica en un sujeto seleccionado que tiene enfermedad cardiovascular o enfermedad renal crónica, implicando el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6 (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-6), en donde el sujeto que se selecciona para el tratamiento tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736. En una realización, el método reduce el riesgo de mortalidad del sujeto. En una realización, el sujeto tiene antecedentes de infarto de miocardio o insuficiencia cardíaca.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para reducir la inflamación y el riesgo de mortalidad en un sujeto seleccionado con enfermedad cardiovascular o enfermedad renal, comprendiendo el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6 (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-6), en donde el sujeto que se selecciona tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 e inflamación elevada con respecto a una referencia. En una realización, el sujeto tiene antecedentes de infarto de miocardio o insuficiencia cardíaca.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para reducir el riesgo de mortalidad en un sujeto que tiene enfermedad renal crónica o insuficiencia cardíaca, comprendiendo el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6, en donde el sujeto se identifica por tener uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 e inflamación elevada con respecto a una referencia.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar la anemia en un sujeto, implicando el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6 solo o en combinación con una terapia para la anemia, donde se identifica que el sujeto tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 (también denominada matriptasa-2; MT2) que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) e inflamación elevada con respecto a una referencia.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar la anemia en un sujeto que tiene inflamación elevada, implicando el método administrar un antagonista de iL-6 (por ejemplo, anticuerpo anti-IL-6) solo o en combinación con un factor eritropoyético en una cantidad eficaz para neutralizar la inflamación en un sujeto que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6).
Incluso en otro aspecto, se proporcionan métodos para mejorar la capacidad de respuesta a la EPO en un sujeto identificado que lo necesita, comprendiendo el método administrar un antagonista de iL-6 (por ejemplo, anticuerpo de IL-6) en una cantidad eficaz para neutralizar la inflamación en un sujeto que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6), disminuyendo de este modo la dosis de EPO.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para reducir la mortalidad en un sujeto que tiene inflamación elevada, implicando el método administrar un antagonista de IL-6 en una cantidad eficaz para neutralizar la inflamación en un sujeto que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6).
En otro aspecto más, se proporcionan métodos para seleccionar una terapia para un sujeto identificado que lo necesita, implicando el método: caracterizar el sujeto que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6); y detectar el nivel de uno o más marcadores inflamatorios de IL-6 o CRP, donde la caracterización indica que debe administrarse un antagonista de IL-6, solo o en combinación con una terapia para la anemia.
En otro aspecto más, se proporcionan métodos para aumentar la proliferación o supervivencia de glóbulos rojos o progenitores de los mismos (por ejemplo, células madres hematopoyéticas, proeritroblastos, eritroblastos o reticulocitos) en un sujeto identificado que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6 y un factor eritropoyético, donde en el sujeto se identifica que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) e inflamación elevada con respecto a una referencia.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene, o se ha identificado que tiene anemia, incluyendo anemia por cáncer, anemia en enfermedades autoinmunitarias crónicas, anemia en enfermedades inflamatorias crónicas, anemia en enfermedades cardiovasculares, anemia en síndromes metabólicos, y similares. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene o se ha identificado que tiene enfermedad renal crónica. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene o se ha identificado que tiene inflamación. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene o se ha identificado que tiene un mayor riesgo de muerte asociada con inflamación crónica, enfermedad renal crónica, o enfermedad cardiovascular. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto se ha identificado que necesita tratamiento. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene o se ha identificado que tiene inflamación elevada. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene o se ha identificado que tiene uno o más alelos que codifican un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736 (por ejemplo, que tiene una G o C en la posición de nucleótido 2321 de una molécula de ácido nucleico de TMPRSS6) e inflamación elevada con respecto a una referencia. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el método comprende administrar al sujeto un antagonista de IL-6. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el método comprende administrar al sujeto un antagonista de IL-6 y una terapia para la anemia. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto es un ser humano.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, la terapia para la anemia comprende administrar un factor eritropoyético. En diversas realizaciones, el factor eritropoyético es uno o más de eritropoyetina, agente estimulante de la eritropoyesis, estabilizante de HIF y suplemento de hierro.
En diversas realizaciones, la inflamación elevada se caracteriza por niveles aumentados de IL-6 y/o CRP, con respecto a una referencia (por ejemplo, medido por ensayos de CRP convencionales o ensayos de alta sensibilidad (hsCRP), que detectan ambos la CRP, pero que difieren en el rendimiento analítico). En diversas realizaciones, la inflamación elevada se caracteriza por una IL-6 mayor de aproximadamente 5 pg/ml. En diversas realizaciones, la inflamación elevada se caracteriza por una CRP mayor de aproximadamente 2 mg/l.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el antagonista de IL-6 se administra en una cantidad eficaz para neutralizar la inflamación. En diversas realizaciones, la cantidad eficaz para neutralizar la inflamación reduce la IL-6 a menos de aproximadamente 15 pg/ml, menos de aproximadamente 10 pg/ml o menos de aproximadamente 5 pg/ml. En diversas realizaciones, la cantidad eficaz para neutralizar la inflamación reduce la CRP a menos de aproximadamente 2 mg/l o menos de aproximadamente 0,2 mg/l.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, la administración de un antagonista de IL-6 o un anticuerpo anti-IL-6 reduce la dosis de EPO. En ciertas realizaciones, la dosis de EPO se reduce a aproximadamente 40 UI/kg/semana, aproximadamente 50 UI/kg/semana, aproximadamente 80 UI/kg/semana, aproximadamente 100 UI/kg/semana o más. En diversas realizaciones, la administración de un antagonista de IL-6 o un anticuerpo anti-IL-6 reduce un efecto secundario del aumento de la dosis de EPO.
En una realización, los pacientes con enfermedad renal crónica se tratan con o sin el tratamiento de referencia para la anemia. En particular, se proporciona un agente que inhibe la actividad o expresión biológica de IL-6 en un sujeto que tiene anemia asociada con enfermedad renal crónica con o sin un tratamiento para la anemia (por ejemplo, administración de EPO, ESA, estabilizantes de HIF, suplemento de hierro o transfusión de glóbulos rojos). Los tratamientos para la anemia actúan estimulando la eritropoyesis o la producción de glóbulos rojos. Por tanto, agentes que aumentan el crecimiento o la proliferación y/o disminuyen la muerte celular de los glóbulos rojos o progenitores de los mismos. Los progenitores de glóbulos rojos incluyen, por ejemplo, células madre hematopoyéticas, progenitores mieloides comunes, proeritroblastos, eritroblastos, reticulocitos o cualquier célula capaz de diferenciarse o madurar en glóbulos rojos.
Un agente que inhibe la actividad biológica de IL-6 ya sea bloqueando la unión de IL-6 o su receptor (gp80) entre sí, o su señalización o expresión puede proporcionarse a un sujeto que tiene anemia asociada con enfermedad renal crónica en una composición farmacéutica, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del agente, un agente para tratar la anemia (por ejemplo, EPO, ESA, inhibidores de la HIF prolilhidroxilasa, suplemento de hierro) y un excipiente adecuado. En una realización, el agente es un antagonista de IL-6 o un anticuerpo anti-IL-6 que disminuye el nivel o la actividad de un polipéptido o molécula de ácido nucleico de IL-6 en un sujeto, o inhibe la señalización intracelular desencadenada por la activación del receptor de IL-6. Puede administrarse un anticuerpo anti-IL-6 (por ejemplo, MEDI5117) en combinación con un tratamiento para la anemia (por ejemplo, administración de EPO, ESA, estabilizante de HIF y suplemento de hierro). Los métodos de tratamiento de la anemia varían dependiendo del genotipo de TMPRSS6 del paciente y del estado inflamatorio del paciente. A los pacientes homocigotos o heterocigotos para el alelo mayor de TMPRSS6 que comprende G o C en la posición de nucleótido 2321 (que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una alanina en la posición de aminoácido 736) y que tienen niveles elevados de marcadores inflamatorios (por ejemplo, IL-6 y/o CRP) se les administra un antagonista de IL-6 o un anticuerpo anti-IL-6 que disminuye el nivel o la actividad de un polipéptido de IL-6 en el contexto de un tratamiento para la anemia (por ejemplo, administración de EPO, ESA, estabilizante de HIF y suplemento de hierro). Los pacientes homocigotos para el alelo menor de TMPRSS6 que comprende A o T en la posición de nucleótido 2321 (que codifica un polipéptido de TMPRSS6 que comprende una valina en la posición de aminoácido 736) no requieren una terapia anti-IL-6 para complementar el tratamiento para la anemia. Los métodos de tratamiento para la anemia pueden variar dependiendo del estadio de la enfermedad renal crónica, la edad del paciente, la salud y el estado físico del paciente.
En otro aspecto, se proporcionan ensayos que son útiles para caracterizar a un sujeto que tiene anemia asociada con inflamación crónica (por ejemplo, en la enfermedad renal crónica). Los marcadores inflamatorios IL-6 y CRP pueden detectarse mediante cualquier método adecuado. Los métodos descritos en el presente documento pueden usarse individualmente o en combinación para la detección de un biomarcador de IL-6 o CRP y/o una afección inflamatoria. En una realización, la inflamación se caracteriza por detectar el nivel de IL-6 y/o polipéptido de CRP en una muestra biológica (por ejemplo, suero) del sujeto en relación con la expresión en una referencia (por ejemplo, suero de un sujeto de control sano), donde un aumento en la expresión de IL-6 y/o CRP es indicativo de inflamación. En otra realización, un aumento en la expresión de IL-6 y/o CRP es indicativo de que un sujeto que tiene anemia asociada con enfermedad renal crónica no responderá al tratamiento de la anemia y/o responderá al tratamiento de la anemia cuando se administra en combinación con un antagonista de IL-6 (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-6).
En una realización, se mide un nivel de polipéptido de IL-6 y/o CRP mediante inmunoensayo. El inmunoensayo normalmente utiliza un anticuerpo (u otro agente que se une específicamente al marcador) para detectar la presencia o el nivel de un biomarcador en una muestra. Los anticuerpos se pueden producir mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, inmunizando animales con el biomarcador o fragmentos del mismo. Los biomarcadores se pueden aislar de las muestras en función de sus características de unión. Como alternativa, si se conoce la secuencia de aminoácidos de un biomarcador polipeptídico, el polipéptido puede sintetizarse y usarse para generar anticuerpos mediante métodos bien conocidos en la técnica.
En diversas realizaciones, se usan inmunoensayos tradicionales, incluyendo, por ejemplo, transferencia Western, inmunoensayos en sándwich que incluyen ELISA y otros inmunoensayos enzimáticos, inmunoensayos basados en fluorescencia y quimioluminiscencia. La nefelometría es un ensayo realizado en fase líquida, en el que los anticuerpos están en solución. La unión del antígeno al anticuerpo da como resultado cambios en la absorbancia, la cual se mide. Otras formas de inmunoensayo incluyen el inmunoensayo magnético, radioinmunoensayo y la PCR inmunocuantitativa en tiempo real (iqPCR). Otros métodos de detección incluyen la cromatografía líquida y la espectrometría de masas.
Los inmunoensayos se pueden llevar a cabo en sustratos sólidos (por ejemplo, chips, perlas, plataformas de microfluidos, membranas) o en cualquier otra forma que soporte la unión del anticuerpo al marcador y la posterior detección. Se puede detectar un solo marcador a la vez o se puede usar un formato multiplex. El inmunoanálisis multiplex puede involucrar micromatrices planas (chips de proteína) y micromatrices basadas en perlas (matrices en suspensión).
Los pacientes con enfermedad renal crónica que tienen anemia identificada por tener niveles aumentados de polipéptido de IL-6 y/o CRP se seleccionan para el tratamiento con un agente que reduce la expresión o actividad de IL-6 (por ejemplo, anticuerpo anti-IL-6) en combinación con un tratamiento para la anemia. Los pacientes tratados pueden controlarse detectando alteraciones en la hemoglobina, el hematocrito, dosis de eritropoyetina, la expresión de IL-6 y/o CRP después del tratamiento. Los pacientes que muestran una reducción en la expresión de IL-6 y/o CRP y/o una reducción en la inflamación se identifican como sensibles a la inhibición de IL-6.
5.11.2. Métodos para tratar el síndrome cardiorrenal
En otros aspectos y realizaciones, se proporcionan composiciones y métodos para tratar el síndrome cardiorrenal.
Estos aspectos y realizaciones se basan, al menos en parte, en el descubrimiento de que el tratamiento anti-IL-6 de la lesión cardíaca en un modelo de roedor de síndrome cardiorrenal tuvo un efecto equivalente al tratamiento de referencia. Como se describe con mayor detalle a continuación, los modelos de roedores de síndrome cardiorrenal se trataron con anti-IL-6 o terapia de referencia (inhibidor de la ACE, perindopril) después de un infarto de miocardio. Después del tratamiento, se midieron la fracción de eyección, la fuerza de la contractilidad cardíaca y el porcentaje de tejido fibrótico en el tejido cardíaco. Los niveles de fracción de eyección en ambos grupos de sujetos tratados con antiIL-6 y los grupos de sujetos tratados con el tratamiento de referencia aumentaron en comparación con los niveles en un grupo de sujetos tratados con un tratamiento de control. La contractilidad cardíaca en ambos grupos tratados con anti-IL-6 y tratados con el tratamiento de referencia aumentaron en comparación con los niveles en un grupo de sujetos tratados con un tratamiento de control. Las cantidades de tejido fibrótico en ambos grupos tratados con anti-IL-6 y tratados con terapia de referencia disminuyeron en comparación con la cantidad en un grupo de sujetos tratado con un tratamiento de control. De forma adicional, los niveles de fracción de eyección y la cantidad de tejido fibrótico fueron similares en el grupo de sujetos tratados con anti-IL-6 y en el grupo de sujetos tratados con la terapia de referencia. Los resultados demuestran que la terapia anti-IL-6 tuvo una eficacia equivalente a la terapia de referencia en el tratamiento del síndrome cardiorrenal en un modelo de roedor.
Estos aspectos y realizaciones se basan adicionalmente, al menos en parte, en el descubrimiento de que los pacientes identificados con síndrome cardiorrenal después de un infarto de miocardio y con niveles elevados de IL-6 tenían un riesgo particularmente aumentado de muerte cardiovascular, incluyendo insuficiencia cardíaca. Sin desear quedar ligados a teoría alguna, la IL-6 puede desempeñar un papel causal en el desarrollo y/o progresión del síndrome cardiorrenal. Por tanto, los pacientes que tienen niveles elevados de IL-6 después de un infarto de miocardio o los pacientes que tienen síndrome cardiorrenal y niveles elevados de IL-6 probablemente se beneficiarán de la inhibición de IL-6.
Por consiguiente, se proporcionan métodos terapéuticos para tratar una lesión cardíaca y/o renal en un sujeto que tiene un síndrome cardiorrenal, que implica la administración al sujeto de un antagonista de IL-6. En algunas realizaciones, el tratamiento de una lesión cardíaca y/o renal en un sujeto que tiene un síndrome cardiorrenal se lleva a cabo con o sin tratamiento de referencia para el síndrome cardiorrenal. También se proporcionan métodos para caracterizar el riesgo de muerte cardiovascular en un paciente después de un infarto de miocardio, implicando el método la detección de un nivel aumentado de IL-6 en una muestra biológica obtenida del paciente.
En un aspecto, se proporcionan métodos para tratar una lesión cardíaca y/o renal en un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal, implicando el método la administración al sujeto de un antagonista de IL-6.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para aumentar la función cardíaca en un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal, implicando el método la administración al sujeto de un antagonista de IL-6.
Incluso en otro aspecto, se proporcionan métodos para reducir la fibrosis en un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal, implicando el método la administración al sujeto de un antagonista de IL-6.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el método implica además administrar una terapia de referencia al sujeto. En diversas realizaciones, la terapia de referencia es un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE).
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el aumento de la función cardíaca se caracteriza por un aumento en la fracción de eyección del sujeto y/o la fuerza de la contractilidad cardíaca, con respecto a una referencia. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, la reducción de la fibrosis se caracteriza por una disminución en el porcentaje de tejido fibrótico en una muestra de tejido del sujeto, con respecto a una referencia. En diversas realizaciones, la fibrosis es en el tejido cardíaco.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene una lesión cardíaca y/o renal. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene una lesión cardíaca como consecuencia de una lesión renal.
En otro aspecto, la divulgación proporciona un método para identificar un mayor riesgo de muerte cardiovascular (por ejemplo, insuficiencia cardíaca) en un sujeto después de un infarto de miocardio en el sujeto, implicando el método medir un nivel de uno o más polinucleótidos o polipéptido de IL-6 en una muestra del sujeto con respecto a una referencia, donde un nivel aumentado de uno o más de un polinucleótido o polipéptido de IL-6 indica un riesgo aumentado de muerte cardiovascular.
Incluso en otro aspecto, la divulgación proporciona un método para caracterizar un riesgo de muerte cardiovascular (por ejemplo, insuficiencia cardíaca) en un sujeto después de un infarto de miocardio en el sujeto, implicando el método medir un nivel de uno o más polinucleótidos o polipéptido de IL-6 en una muestra del sujeto con respecto a una referencia, donde un nivel aumentado de uno o más de un polinucleótido o polipéptido de IL-6 indica un riesgo aumentado de muerte cardiovascular.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto tiene síndrome cardiorrenal, insuficiencia cardíaca, enfermedad renal crónica, o ninguna patología cardiorrenal. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, se ha identificado que el sujeto tiene síndrome cardiorrenal, insuficiencia cardíaca, enfermedad renal crónica, o ninguna patología cardiorrenal aproximadamente un mes después del infarto de miocardio.
En otro aspecto, la divulgación proporciona un método para tratar una lesión cardíaca y/o renal en un sujeto seleccionado que tiene síndrome cardiorrenal, implicando el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6, donde el sujeto se selecciona para el tratamiento detectando un nivel aumentado de uno o más de un polinucleótido o polipéptido de IL-6 en una muestra biológica del sujeto con respecto a una referencia.
Incluso en otro aspecto, la divulgación proporciona un método para reducir el riesgo de muerte cardiovascular (por ejemplo, insuficiencia cardíaca) en un sujeto seleccionado que tiene síndrome cardiorrenal, implicando el método administrar al sujeto un antagonista de IL-6, donde el sujeto se selecciona detectando un nivel aumentado de uno o más de un polinucleótido o polipéptido de IL-6 en una muestra biológica del sujeto con respecto a una referencia. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto ha tenido un infarto de miocardio.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el antagonista de IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6. En diversas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-6 es MEDI5117.
En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, la muestra biológica es una muestra de plasma o una muestra de suero. En diversas realizaciones de cualquiera de los aspectos definidos en el presente documento, el sujeto es un ser humano.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar el síndrome cardiorrenal en pacientes y/o reducir el riesgo de muerte o insuficiencia cardíaca en dichos pacientes mediante la administración de un agente que inhibe la actividad o expresión biológica de IL-6. En una realización, los pacientes con síndrome cardiorrenal se tratan con o sin tratamiento de referencia para el síndrome cardiorrenal (por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ACE)). En particular, se proporciona un agente que inhibe la actividad o expresión biológica de IL-6 a un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal (por ejemplo, administración de anticuerpo anti-IL-6).
En otro aspecto, se proporcionan métodos para aumentar la función cardíaca y métodos para reducir la fibrosis en sujetos que tienen síndrome cardiorrenal. Los métodos comprenden administrar un agente que inhibe la actividad biológica o expresión de IL-6 al sujeto. En algunas realizaciones, el aumento de la función cardíaca se caracteriza por un aumento en la fracción de eyección del sujeto con respecto a una referencia (por ejemplo, la fracción de eyección de un sujeto de control sano) o la contractilidad cardíaca (por ejemplo, dP/dtmax) con respecto a una referencia (por ejemplo, contractilidad cardíaca de un sujeto de control sano). En algunas realizaciones, la reducción de la fibrosis se caracteriza por una disminución en el porcentaje de tejido fibrótico en una muestra de tejido del sujeto, con respecto a una referencia (por ejemplo, muestra de tejido obtenida de un sujeto de control sano). En una realización, la fibrosis es en el tejido cardíaco.
Un agente que inhibe la actividad biológica de IL-6 ya sea bloqueando la unión de IL-6 o su receptor (gp80) entre sí, o su señalización o expresión puede proporcionarse a un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal en una composición farmacéutica, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del agente y un excipiente adecuado. En una realización, el agente es un antagonista de IL-6 o un anticuerpo anti-IL-6 que disminuye el nivel o la actividad de un polipéptido o polinucleótido de IL-6 en un sujeto, o inhibe la señalización intracelular desencadenada por la activación del receptor de IL-6. Se puede administrar un anticuerpo anti-IL-6 (por ejemplo, MEDI5117). Los métodos de tratamiento para el síndrome cardiorrenal pueden variar dependiendo del estadio del síndrome cardiorrenal, la edad del paciente, la salud y el estado físico del paciente.
En diversas realizaciones, los sujetos que tienen síndrome cardiorrenal se tratan con un antagonista de IL-6. De forma adicional, los sujetos que tienen un mayor riesgo de muerte cardiovascular y/o insuficiencia cardíaca después de un infarto de miocardio pueden identificarse caracterizando el nivel plasmático de IL-6 en el sujeto. Los sujetos que tienen niveles elevados de IL-6 tienen un mayor riesgo de muerte cardiovascular y/o insuficiencia cardíaca. Dichos sujetos pueden seleccionarse para el tratamiento con un antagonista de IL-6. De manera adicional, los sujetos que tienen síndrome cardiorrenal y niveles elevados de IL-6, incluidos los sujetos que han sufrido un infarto de miocardio, pueden seleccionarse para el tratamiento. Una vez seleccionados para el tratamiento, a dichos sujetos se les puede administrar prácticamente cualquier antagonista de IL-6 conocido en la técnica. Los antagonistas de IL-6 adecuados incluyen, por ejemplo, antagonistas de IL-6 conocidos, antagonistas de IL-6 disponibles en el mercado, antagonistas de IL-6 desarrollados usando métodos bien conocidos en la técnica y antagonistas de los sistemas de señalización intracelular asociados con IL-6R.
En otro aspecto, se proporcionan ensayos para caracterizar el riesgo de muerte cardiovascular, insuficiencia cardíaca y/o mortalidad en un sujeto después de un infarto de miocardio. Los ensayos presentan la detección de IL-6 en una muestra biológica obtenida del sujeto. La IL-6 puede detectarse mediante cualquier método adecuado. En una realización, el riesgo de muerte cardiovascular o insuficiencia cardíaca se caracteriza por detectar el nivel de un polipéptido de IL-6 en una muestra biológica (por ejemplo, suero o plasma) del sujeto con respecto a la expresión en una referencia (por ejemplo, suero o plasma de un sujeto de control sano o de un sujeto de control sin patología cardiorrenal), donde un aumento de iL-6 es indicativo de un mayor riesgo de muerte cardiovascular o insuficiencia cardíaca. Los sujetos identificados con mayor riesgo de muerte cardiovascular, insuficiencia cardíaca o mortalidad pueden seleccionarse para el tratamiento. En otra realización, se selecciona un sujeto que tiene síndrome cardiorrenal y niveles aumentados de IL-6 para el tratamiento con un antagonista de IL-6 (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-6).
En una realización, se mide el nivel de polinucleótidos de IL-6. Los niveles de polinucleótidos de IL-6 pueden medirse mediante métodos convencionales, tales como PCR cuantitativa, transferencia Northern, micromatriz, espectrometría de masas e hibridación in situ.
En una realización, se mide el nivel de polipéptido de IL-6. Los niveles de polipéptidos de IL-6 se pueden medir mediante métodos convencionales, tales como mediante inmunoensayo. El inmunoensayo normalmente utiliza un anticuerpo (u otro agente que se une específicamente al marcador) para detectar la presencia o el nivel de un biomarcador en una muestra. Los anticuerpos se pueden producir mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, inmunizando animales con el biomarcador o fragmentos del mismo. Los biomarcadores se pueden aislar de las muestras en función de sus características de unión. Como alternativa, si se conoce la secuencia de aminoácidos de un biomarcador polipeptídico, el polipéptido puede sintetizarse y usarse para generar anticuerpos mediante métodos bien conocidos en la técnica.
En diversas realizaciones, el ensayo emplea inmunoensayos tradicionales que incluyen, por ejemplo, transferencia Western, inmunoensayos en sándwich que incluyen ELISA y otros inmunoensayos enzimáticos, inmunoensayos basados en fluorescencia y quimioluminiscencia. La nefelometría es un ensayo realizado en fase líquida, en el que los anticuerpos están en solución. La unión del antígeno al anticuerpo da como resultado cambios en la absorbancia, la cual se mide. Otras formas de inmunoensayo incluyen el inmunoensayo magnético, radioinmunoensayo y la PCR inmunocuantitativa en tiempo real (iqPCR). Otros métodos de detección incluyen la cromatografía líquida y la espectrometría de masas.
Los inmunoensayos se pueden llevar a cabo en sustratos sólidos (por ejemplo, chips, perlas, plataformas de microfluidos, membranas) o en cualquier otra forma que soporte la unión del anticuerpo al marcador y la posterior detección. Se puede detectar un solo marcador a la vez o se puede usar un formato multiplex. El inmunoanálisis multiplex puede involucrar micromatrices planas (chips de proteína) y micromatrices basadas en perlas (matrices en suspensión).
Los pacientes con síndrome cardiorrenal identificados por tener niveles elevados de polipéptido de IL-6 se seleccionan para el tratamiento con un agente que reduce la expresión o actividad de IL-6 (por ejemplo, anticuerpo anti-IL-6). El tratamiento puede administrarse en combinación con un tratamiento de referencia para el síndrome cardiorrenal (por ejemplo, un inhibidor de la ACE). Los pacientes tratados con un método de la divulgación pueden controlarse detectando alteraciones en IL-6 después del tratamiento.
5.12. Ejemplos
Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, no de limitación.
5.12.1. Ejemplo 1: La dosis de EPO y la supervivencia global en pacientes con enfermedad renal crónica se correlacionan con los niveles séricos de IL-6 y PCR solo en pacientes con al menos una copia del alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6
La hormona peptídica, hepcidina, desempeña una función fundamental en la homeostasia del hierro. Hentze et al., Cell 142:24-38 (2010). Se sabe que la expresión de la hepcidina está influenciada por el producto del gen TMPRSS6, la matriptasa-2, una serina proteasa transmembrana de tipo II. Se ha demostrado que las variantes frecuentes del gen TMPRSS6 están correlacionadas con el estado del hierro, Benyamin et al., Nature Genetics 41(11):1173-1175 (2009), y determinadas mutaciones en el gen TMPRSS6 también han demostrado que producen anemia por deficiencia de hierro resistente al hierro (IRIDA), Finberg et al., Nature Genetics 40(5):569-571 (2008). SNP rs855791 (2321G^A; A736V) es una variación natural en el gen TMPRSS6 que se ha asociado con variaciones naturales en la expresión de hepcidina y los niveles de hemoglobina en sangre.
Para determinar si el genotipo en el SNP rs855791 de TMPRSS6 predecía el alcance de la anemia en la enfermedad renal terminal, los datos recopilados previamente en estudios clínicos de pacientes con enfermedad renal crónica se analizaron junto con el genotipado del SNP recién determinado. Debido a que la expresión de hepcidina también está regulada por IL-6, Casanovas et al., PLOS Computational Biol. 10(1): e1003421 (2014), los datos también se analizaron detalladamente para determinar si los niveles séricos de IL-6 podrían predecir el grado de anemia en la enfermedad renal terminal.
Métodos
Datos de N = 257 pacientes reclutados en las cohortes MIMICK1, MIMICK2 (Cartografía de marcadores inflamatorios en la enfermedad renal crónica) y MIA (desnutrición, inflamación y aterosclerosis) que fueron reclutados durante el período de octubre de 2003 a septiembre de 2004 en seis unidades de diálisis en la región de Estocolmo-Uppsala (Suecia) se modificó a N = 208 según los criterios de diálisis prevalente, ferritina >100 ng/ml, y Hb >10 mg/dl para seleccionar pacientes que se mantenían estables en hemodiálisis sin deficiencia de hierro y sin anemia marcada, excluyendo de este modo a los pacientes con factores que podrían separar la manipulación del hierro de los niveles de la hemoglobina.
Todos los datos clínicos del paciente, incluida la dosis de eritropoyetina (EPO) en UI/kg/semana, nivel sérico de IL-6 en pg/ml, nivel sérico de CRP en mg/l, supervivencia en meses y genotipo de TMPRSS6 en el SNP rs855791, se recopilaron y analizaron utilizando software de análisis estadístico (SPSS Statistics Desktop; IBM). Los alelos de TMPRSS6 estudiados y su nucleótido y aminoácido están indicados en la Tabla 1.
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La cohorte se separó en subgrupos de rs855791 (AA homocigoto, AG heterocigoto y GG homocigoto), y cada grupo de genotipo se separó en terciles o cuartiles del nivel sérico de IL-6 (por ejemplo, IL-6 < 5 pg/ml frente a > 10 pg/ml e IL-6 < 5 pg/ml frente a > 15 pg/ml) o nivel sérico de CRP (CRP < 2 mg/l frente a > 2 mg/l). Se hicieron comparaciones entre la dosis de EPO en los terciles y cuartiles superior e inferior. Se realizaron análisis estadísticos dentro de los grupos de genotipos mediante la prueba T de Student y entre grupos mediante ANOVA.
Resultados
Debido a que los médicos responsables del tratamiento habían titulado la dosis de EPO de cada paciente para alcanzar niveles normales de hemoglobina, la dosis de EPO podría usarse como un indicador del grado subyacente de anemia. Se encontró que la dosis de EPO en sujetos homocigotos para el alelo menor (A/A) era relativamente insensible a las variaciones en la IL-6 (Figura 1A; panel izquierdo). Sin embargo, la dosis de EPO en sujetos con al menos una copia del alelo mayor - pacientes heterocigotos (A/G) u homocigotos (G/G) para el alelo mayor (G) - fueron sensibles a su nivel de IL-6 (FIG. 1B; panel derecho). En estos últimos sujetos, los niveles elevados de IL-6 en suero (por ejemplo, > 5 pg/ml) se asociaron con un aumento de la dosis de EPO.
Sin pretender quedar ligados a una teoría particular, la homocigosidad en el alelo menor eliminó la influencia de IL-6 en el manejo del hierro. Por tanto, la dosis de EPO en estos pacientes (A/A) fue aproximadamente la misma independientemente del nivel de IL-6.
Los sujetos homocigotos para el alelo menor (A) del rs855791 de TMPRSS6 mostraron una mortalidad similar independientemente de los niveles de IL-6 (FIG. 2A). Sin embargo, la supervivencia en sujetos con al menos una copia del alelo mayor, pacientes heterocigotos u homocigotos para el alelo mayor (G), varió según el nivel de IL-6 (FIG. 2B). De hecho, el alelo G de TMPRSS6 confirió una mayor mortalidad por todas las causas en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos en diálisis con enfermedad renal crónica estadio 5. En sujetos que tienen al menos una copia del alelo mayor (G), los niveles de IL-6 > 5 pg/ml (es decir, los terciles medio y más alto de IL-6) estaban asociados con un aumento de la mortalidad en comparación con los niveles de IL-6 < 5 pg/ml ( es decir, IL-6 de tercil bajo) (Figura 2B).
El nivel del reactante de fase aguda, CRP, un marcador de inflamación, también se correlacionó con una dosis mayor de EPO en sujetos heterocigotos u homocigotos para el alelo mayor (G), pero no en pacientes homocigotos para el alelo menor (FIG. 3).
Discusión
Como se muestra en la Fig. 1, el grado de anemia subyacente, medido como la dosis de EPO titulada clínicamente, se correlacionaba con los niveles de IL-6 en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor en el SNP rs855791 de TMPRSS6. En estos pacientes, cuanto mayor era el nivel sérico de IL-6, mayor era la dosis de EPO requerida (FIG. 1B). Por el contrario, el grado de anemia en pacientes que tienen dos copias del alelo menor no estaba correlacionado con los niveles séricos de IL-6 (FIG. 1A).
De manera análoga, la supervivencia global se correlacionaba con los niveles de IL-6 solo en pacientes con al menos una copia del alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6. En sujetos que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, la supervivencia estaba inversamente correlacionada con el nivel sérico de IL-6, teniendo los pacientes del tercil más alto de los niveles séricos de IL-6 una supervivencia estadísticamente significativamente peor que los del tercil de los niveles de IL-6 más bajos (FIG. 2B). Por el contrario, la supervivencia global de los pacientes homocigotos para el alelo menor en rs855791 no se vio afectada por los niveles de IL-6 (FIG. 2A).
Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, los aumentos en la IL-6 sérica pueden impulsar el aumento de la expresión de hepcidina, aumentando de este modo la anemia. El aumento del riesgo de mortalidad es una consecuencia del metabolismo desregulado del hierro, la anemia resultante y/o el aumento de la dosis del agente estimulante de la eritropoyesis, tal como EPO. Si estas correlaciones reflejan una relación causal, plantean la posibilidad de que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 pueda reducir la anemia, reducir la dosis de EPO requerida y aumentar la supervivencia en pacientes con enfermedad renal crónica, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes que tienen niveles séricos elevados de IL-6.
5.12.2. Ejemplo 2: El riesgo de muerte y el riesgo de insuficiencia cardíaca después de un infarto agudo de miocardio se correlacionan con los niveles séricos de IL-6 solo en pacientes con al menos una copia del alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6
Para determinar si el genotipo del rs855791 de TMPRSS6 afectaba a la sensibilidad a IL-6 en pacientes con enfermedad aguda en lugar de enfermedad crónica, se analizaron los datos recogidos previamente en estudios clínicos de pacientes hospitalizados por síndrome coronario agudo junto con el genotipado del SNP recientemente determinado.
Métodos
Se analizaron los datos de sujetos previamente reclutados en un Estudio multicéntrico de inhibición plaquetaria y resultados del paciente (PLATO). Los pacientes eran elegibles para el reclutamiento en PLATO si habían sido hospitalizados por un síndrome coronario agudo con un inicio de los síntomas durante las 24 horas anteriores. Se midió la mortalidad y la presencia de insuficiencia cardíaca en estos sujetos a partir de los treinta días siguientes a un infarto de miocardio.
Resultados
La mortalidad de los sujetos homocigotos para el alelo menor (A) del SNP rs855791 de TMPRSS6 no se correlacionaba con las variaciones en la IL-6 (FIG. 4A). Sin embargo, una o dos copias del alelo mayor (G) conferían una mayor mortalidad por todas las causas en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos después de un infarto de miocardio (Figura 4B). Por tanto, TMPRSS6 modulaba el riesgo mediado por IL-6 de muerte tras un infarto de miocardio.
El efecto del genotipo de TMPRSS6 sobre el riesgo mediado por IL-6 de insuficiencia cardíaca también se midió en sujetos reclutados en PLATO a partir de los treinta días siguientes a un infarto de miocardio. La insuficiencia cardíaca en sujetos homocigotos para el alelo menor (A) no se correlacionó con variaciones en la IL-6 (Figura 5A). Sin embargo, el alego G de TMPRSS6 confirió una tasa de insuficiencia cardíaca más alta en respuesta a niveles elevados de IL-6 en sujetos después de un infarto de miocardio (Figura 5B). Por tanto, TMPRSS6 modulaba el riesgo mediado por IL-6 de insuficiencia cardíaca tras un infarto de miocardio.
Discusión
Estos datos demuestran que la correlación entre el genotipo de TMPRSS6, y los niveles de IL-6, y los resultados clínicos adversos no se limita a los pacientes con enfermedad renal crónica. Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor de TMPRSS6, los aumentos en la IL-6 sérica pueden impulsar el aumento de la expresión de hepcidina, con el consiguiente aumento del secuestro de hierro en los miocardiocitos, seguido de la toxicidad celular mediada por hierro. Si estas correlaciones reflejan una relación causal, plantean la posibilidad de que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 pudiera reducir la insuficiencia cardíaca y la mortalidad en pacientes con síndrome coronario agudo, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes con niveles séricos elevados de IL-6.
5.12.3. Ejemplo 3: Los estudios in vitro en miocardiocitos humanos derivados de iPS confirman una relación causal entre el genotipo de TMPRSS6 y la citotoxicidad mediada por IL-6
Aunque las correlaciones observadas en los Ejemplos 1 y 2 implican que la reducción de la señalización mediada por IL-6 debería proporcionar un beneficio clínico en pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, niveles elevados de IL-6 y anemia o una toxicidad celular mediada por hepcidina, las correlaciones observadas no llegan a demostrar una relación causal. Por consiguiente, se llevaron a cabo experimentos en miocitos cardíacos derivados de células pluripotentes inducidas humanas (iPS-CM) transfectados con variantes de TMPRSS6 para analizar el efecto de BMP y BMP más IL-6 sobre la expresión de hepcidina y la susceptibilidad celular a la lesión isquémica.
5.12.3.1. Métodos
Cultivo de miocardiocitos derivados de iPS humanas - Se sembraron miocardiocitos iCell (Cellular Dynamics International, CDI Inc.) en una placa de cultivo celular de 6 pocillos o 96 pocillos recubierta con gelatina al 0,1 % con medio de placa de miocardiocitos iCell (CDI Inc.). Cuarenta y ocho horas después de la siembra en placa, se reemplazó el medio de siembra con Medio de mantenimiento (CDI Inc.). El medio de mantenimiento se reemplazó cada dos días hasta el día en que se realizó el experimento.
Protocolo de isquemia simulada/reoxigenación - Los miocardiocitos iPS se sometieron a isquemia simulada (SI) durante 90 min reemplazando el medio celular con un "tampón de isquemia" que contenía NaCl 118 mm, NaHCO3 24 mm, NaH2PO4 1,0 mm, CaCl2-2H2O 2,5 mm, MgCb 1,2 mm, lactato de sodio 20 mm, KCl 16 mm, 2-desoxiglucosa 10 mm (pH ajustado a 6,2) como se ha descrito anteriormente (Das, A., Xi, L., and Kukreja, K. C. (2005) J. Biol. Chem.
280: 12944-12955; Das A, Smolenski A, Lohmann SM, Kukreja RC. (2006) J. Biol Chem. 281(50):38644-52). Las células se incubaron a 37 °C en una incubadora de tres gases ajustando a 1-2 % de O2 y 5 % de CO2 durante todo el período SI. La reoxigenación (RO) se logró reemplazando el tampón isquémico con medio celular normal en condiciones normóxicas. Necrosis celular después de 2 o 18 h de reoxigenación, respectivamente. Las iCells se sometieron a 4 horas de SI y 24 horas de RO como antes.
Evaluación de la viabilidad y la apoptosis celular - Se realizó un ensayo de exclusión con azul de tripano para evaluar la necrosis celular como se ha descrito anteriormente (Das, A., Xi, L., and Kukreja, K. C. (2005) J. Biol. Chem. 280, 12944-12955; Das A, Smolenski A, Lohmann SM, Kukreja RC. (2006) J. Biol. Chem. 281(50):38644-52).
Transfección de miocardiocitos iCell - El día 8 después de la siembra, el medio se reemplazó con Medio de mantenimiento fresco y las células se incubaron durante 4 horas. Las células se transfectaron con pCMV6-XL5 TMPRSS6 (K523) o pCMV6-XL5 TMPRSS6 (K523) V763A usando Reactivo de transfección ViaFect™ de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Promega Corp., Madison, WI). Después de 48 horas de transfección, las células se sometieron a experimentos adicionales.
Análisis de transferencia Western - Se realizaron transferencias Western como se ha descrito anteriormente (Das, A., Xi, L., and Kukreja, K. C. (2005) J. Biol. Chem. 280, 12944-12955; Das A, Smolenski A, Lohmann SM, Kukreja RC. (2006) J. Biol. Chem. 281(50):38644-52). La proteína soluble total se extrajo de las células con tampón de lisis (Cell Signalling, MA). El homogeneizado se centrifugó a 10.000 x g durante 5 min a 4 °C y se recuperó el sobrenadante. La proteína (50 |jg de cada muestra) se separó con geles de acrilamida al 12 % y se transfirió a una membrana de nitrocelulosa y a continuación se bloqueó con leche desnatada en polvo al 5 % en TBST (Tris-HCl 10 mm, NaCl 100 mm, pH 7,4 y Tween 20 al 0,1 %) durante 1 hora. A continuación la membrana se incubó durante la noche con anticuerpo primario monoclonal/policlonal de conejo o policlonal de cabra a una dilución de 1:1000 para cada una de las proteínas respectivas, es decir, Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb, Beclin-1, SQSTM1/p62, LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb, Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb, Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb, Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb, S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb de Cell Signaling, MA, Anti-matriptasa 2 (t Mp RSS6) y Anti-SLC40A1 (Ferroportina) de Abcam Company, MA y Actina-HRP policlonal de cabra (Santa Cruz Biotechnology, TX). A continuación, las membranas se incubaron con anti-anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa de rábano picante de conejo (dilución 1: 2000; Amersham Biosciences) durante 2 h. Las transferencias se desarrollaron utilizando un sistema quimioluminiscente y las bandas se escanearon y cuantificaron mediante análisis densitométrico.
PCR en tiempo real - Ensayo de Taqman - El ARN total, incluido el ARN pequeño, se aisló utilizando el mini kit miRNeasy de acuerdo con el protocolo del fabricante (QIAGEN Sciences, MD, EE.UU.). La concentración y pureza del ARN aislado se midió utilizando un espectrofotómetro Nanodrop ND-1000 (Agilent Technologies, CA, Ee . UU.). Brevemente, se convirtió 1 jg de ARN total en ADNc con hexámero aleatorio usando un kit de síntesis de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems, CA, EE. UU.). La reacción de transcripción inversa se llevó a cabo usando las siguientes condiciones de PCR: 25 °C durante 10 min; 37 °C durante 120 min y 85 °C durante 5 min. La PCR en tiempo real se realizó usando sondas específicas de amplicón Taqman (Applied Biosystems, CA, EE. UU.) Hamp (CGGCTCTGCAGCCTTG) (SEQ ID NO:20) con la siguiente condición de ciclo de PCR: 95 °C durante 10 minutos; 95 °C durante 15 segundos y 60 °C durante 60 segundos. La expresión de Hamp se normalizó para el gen constitutivo GAPDH (CTTCCAGGAGCGAGATCCCGCTAA) (SEQ ID NO:21). La expresión génica relativa se analizó usando el método 2-AACt.
Mutagénesis de TMPRSS6 y transfección de células iPS - se adquirió pCMV6-XL5 TMPRSS6 en Origene Technologies (Rockville, MD), número de catálogo SC306623 que corresponde al número de acceso en GenBank NM_153609. Este clon contiene una mutación que da como resultado un cambio de aminoácido, K253A. Se realizó una mutagénesis dirigida al sitio para revertir el aminoácido en la posición 253 a la lisina canónica (K). Una vez que se confirmó la reversión, se realizó una mutagénesis dirigida al sitio para introducir la mutación V736A. Todas las reacciones de mutagénesis se llevaron a cabo utilizando el kit de mutagénesis dirigida al sitio QuikChange II XL de Agilent Technologies (Santa Clara, CA; número de catálogo 200521). Todos los vectores se secuenciaron para confirmar. Las secuencias de cebadores utilizadas fueron: antisentido (as) TMPRSS6 E253K GCATGAGGTCCTTGGGGCCCTGCAG (SEQ ID NO:22); sentido (s) TMPRSS6 E253K CTGCAGGGCCCCAAGGACCTCATGC (SEQ ID NO:23); antisentido (as) TMPRSS6 V736A CCTGGTAGCGATAGGCCTCGCTGCACAGG (SEQ ID NO:24); sentido (s) TMPRSS6 V736A CCTGTGCAGCGAGGCCTATCGCTACCAGG (SEQ ID NO:25).
5.12.3.2. Resultados
Los CM-iPS humanos solo expresan mínimamente la matriptasa-2 al inicio del estudio. Las células se transfectaron con una construcción que impulsa la expresión constitutiva de la matriptasa-2 736A, codificada por el alelo mayor del SNP rs855791 de TMPRSS6, o matriptasa-2 736V, codificada por el alelo menor, que imita los miocardiocitos que expresan el alelo mayor homocigoto y el alelo menor homocigoto, respectivamente.
La expresión de hepcidina está regulada por las vías de señalización de BMP6/SMAD e IL-6/STAT, y tanto la BMP como la IL-6 actúan a través de sus respectivos receptores para impulsar el aumento de la expresión de hepcidina. Casanovas et al., PLOS Comp. Biol. 10(1): e1003421 (2014). Los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor y el alelo menor se trataron in vitro con agonistas de ambas vías de señalización, BMP2 e iL-6 recombinantes, o con BMP2 solo para modelar intervenciones clínicas en las que se reducen los niveles (o señalización) de IL-6. Las células iPS de control no se trataron con ningún agonista. La mortalidad celular se midió con tensión de oxígeno normal (normoxia) y también en condiciones que simulan hipoxia seguido de reoxigenación (reperfusión).
La FIG. 6A muestra los resultados cuando las células se trataron con niveles normales de oxígeno. Los miocardiocitos iPS que expresan solo el alelo menor (alelo menor "736V") del rs855791 de TMPRSS6 no se ven significativamente ("n.s") afectados por la eliminación de la señalización de IL-6: la mortalidad celular medida como porcentaje de células positivas para azul tripano no se redujo significativamente cuando las células se tratan con BMP2 solo, en comparación con el tratamiento con BMP2 IL-6. Por el contrario, los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 muestran una muerte celular estadísticamente significativamente menor cuando se elimina la señalización de IL-6.
La FIG. 6B muestra los resultados cuando las células se sometieron a hipoxia seguida de reoxigenación. En comparación con las condiciones de normoxia, la hipoxia/reoxigenación es significativamente tóxica para los miocardiocitos iPS, con aproximadamente el 40 por ciento de las células de control con el alelo mayor y menor muertas, en comparación con aproximadamente el 20 % de las células de control en condiciones normóxicas (comparar la FIG.
6B con la FIG. 6A). Frente a este aumento de la toxicidad de fondo, los miocardiocitos iPS con el alelo menor no se ven afectados significativamente por la eliminación de la señalización de IL-6: la mortalidad celular no se reduce significativamente cuando las células se tratan solo con BMP2, en comparación con el tratamiento con BMP2 IL-6. Por el contrario, los miocardiocitos iPS que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 muestran una muerte celular estadísticamente significativamente menor cuando se elimina la señalización de IL-6.
5.12.3.3. Discusión
Estos datos refuerzan las inferencias extraídas del análisis post hoc de los datos de los ensayos clínicos del Ejemplo 1 y el Ejemplo 2: la reducción de la señalización de IL-6 puede ser eficaz para reducir la toxicidad mediada por IL-6 en miocardiocitos que expresan el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, pero no en miocardiocitos que expresan solo el alelo menor. Sin pretender quedar ligados a teoría alguna, el aumento de toxicidad impulsado por IL-6 en los miocardiocitos iPS con el alelo mayor puede tener como resultado un aumento de la expresión de hepcidina mediado por IL-6, con el consiguiente aumento del secuestro de hierro en las células, seguido de la toxicidad celular mediada por hierro.
5.12.4. Ejemplo 4: La terapia anti-IL-6 es tan efectiva como el tratamiento de referencia actual en un modelo de síndrome cardiorrenal en ratas genotípicamente análogas a los homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 humanos
Los pacientes con enfermedad renal crónica, tales como los reclutados en los estudios MIMICK analizados en el Ejemplo 1, frecuentemente desarrollan una alteración de la función cardíaca, que es un factor importante que contribuye a las tasas de mortalidad. Esta lesión cardíaca secundaria tras una enfermedad renal crónica primaria se denomina síndrome cardiorrenal tipo 4 (CRS tipo 4).
Para probar si la terapia anti-IL-6 sería efectiva como tratamiento en pacientes con CRS4 que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, como se sugiere por los datos de los Ejemplos 1 y 3, se utilizó un modelo de CRS4 en ratas genotípicamente análogas a los seres humanos que son homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
La FIG. 7 muestra un esquema del diseño del estudio.
En la semana 0, se indujo infarto de miocardio en los animales con CRS. En la semana 2, se realizó una nefrectomía. En cambio, un grupo de control fue sometido a operaciones simuladas. Antes de la nefrectomía, se realizaron varias evaluaciones de los sujetos. Las evaluaciones incluyeron mediciones de creatinina sérica, tasa de filtración glomerular, niveles de proteínas en orina de 24 horas, ecocardiografía, presión arterial en el manguito en la cola y biomarcadores en plasma y orina.
El tratamiento se inició el día 1 después de la nefrectomía. Los animales se dividieron en tres grupos: (i) tratamiento de control, (ii) terapia anti-IL-6 y (iii) terapia de referencia. La terapia anti-IL-6 fue un anticuerpo anti-IL-6 adecuado para su uso en roedores. La terapia de referencia fue la administración de perindopril, un inhibidor de la ACE (enzima convertidora de angiotensina). Al inicio del tratamiento, se llevaron a cabo evaluaciones de los sujetos en todos los grupos. Las evaluaciones incluyeron medición de creatinina sérica, tasa de filtración glomerular, niveles de proteínas de 24 horas y biomarcadores en plasma.
El día 3 y el día 7 después de la nefrectomía, se llevaron a cabo evaluaciones de los sujetos en todos los grupos. Las evaluaciones incluyeron la medición de creatinina sérica y biomarcadores en plasma el día 3 y la medición de creatinina sérica, tasa de filtración glomerular, niveles de proteínas de 24 horas, ecocardiografía, presión arterial y biomarcadores en plasma el día 7.
En la semana 6, se sacrificaron los sujetos. Antes del sacrificio, se llevaron a cabo varias evaluaciones de los sujetos en todos los grupos. Las evaluaciones incluyeron medición de creatinina sérica, tasa de filtración glomerular, niveles de proteínas de 24 horas, presión sanguínea, biomarcadores en plasma, ecocardiografía y análisis en el circuito de presión-volumen. Después del sacrificio, también se recogió tejido de sujetos en todos los grupos para evaluación histológica (es decir, tinción de tejido cardíaco con rojo Sirio).
Las FIGS. 8A-8D muestran la fracción de eyección cardíaca de ratas sin CRS ("Simulado"), animales con CRS tratados con un anticuerpo de control de isotipo farmacológicamente irrelevante ("isotipo"), Los animales con CRS tratados con anticuerpo anti-IL-6 ("ab IL-6") y animales con CRS tratados con el tratamiento de referencia inhibidor de la ACE ("Peri") en el modelo de síndrome cardiorrenal resumido en la FIG. 7.
La Figura 8A muestra los niveles de fracción de eyección basal para todos los grupos dos semanas después del infarto de miocardio, pero antes de la nefrectomía, y antes del tratamiento, lo que demuestra que el infarto de miocardio inducido experimentalmente provocó una disminución significativa en la fracción de eyección cardíaca. La Figura 8B es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos una semana después de la nefrectomía, después de 1 semana de tratamiento. La Figura 8C es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos dos semanas después de la nefrectomía, después de 2 semanas de tratamiento. La Figura 8D es un gráfico que muestra los niveles de la fracción de eyección para todos los grupos cuatro semanas después de la nefrectomía, después de 4 semanas de tratamiento. Los resultados se expresan como media /- EEM.
Después de 4 semanas de tratamiento, ambos grupos de tratamiento, el grupo tratado con anti-IL-6 y el grupo tratado con terapia de referencia con inhibidores de la ACE, mostraron niveles de fracción de eyección aumentados de manera estadísticamente significativa en comparación con el grupo de control de isotipo (FIG. 8D) (p <0,001). Los niveles de fracción de eyección similares en los grupos anti-IL-6 y tratamiento de referencia medidos después de la semana 4 de tratamiento mostraron que la terapia anti-IL-6 tenía una eficacia equivalente a la del inhibidor de ACE perindopril (tratamiento de referencia), lo que demuestra que la terapia anti-IL-6 tuvo eficacia terapéutica para conservar la función cardíaca en el modelo de síndrome cardiorrenal equivalente a la terapia de referencia, medida por los cambios en la fracción de eyección cardíaca.
La medición de la contractilidad cardíaca (FIG. 9) mostró que la terapia anti-IL-6 también tuvo un efecto equivalente a la terapia de referencia con un inhibidor de la ACE. Después de 4 semanas de tratamiento, la contractilidad cardíaca en los grupos tratados con anti-IL-6 y la terapia de referencia aumentó significativamente respecto a la contractilidad cardíaca del grupo de control de isotipo. La contractilidad cardíaca similar en los grupos anti-IL-6 y tratamiento de referencia demuestra que la terapia anti-IL-6 tuvo eficacia para conservar la función cardíaca en el modelo de síndrome cardiorrenal equivalente al inhibidor de la ACE perindopril (terapia de referencia), medida por la contractilidad.
La medición de la fibrosis en tejido cardíaco extraído de animales en todos los grupos también demostró que la terapia anti-IL-6 tenía un efecto equivalente a la terapia de referencia (FIG. 10A-10C). La fibrosis en el tejido cardíaco se cuantificó midiendo el porcentaje de área de tejido fibrótico en dos regiones: la región "Normal" y una región de "Margen de la fibrosis". Un ejemplo de región "Normal" se indica mediante la parte delineada del corte de tejido que se muestra en la micrografía de la FIG. 10A. El recuadro de la micrografía muestra una vista ampliada de la región "Normal", que muestra que pequeñas porciones de la región "Normal" tienen tejido fibrótico. La región del "Margen de la fibrosis" es una región de tejido en la región "Normal" periférica al tejido fibrótico.
Los gráficos de las FIGS. 10B y 10C muestran que el tejido cardíaco de los sujetos en grupos tratados con anti-IL-6 o tratamiento de referencia tenía un porcentaje de área de tejido fibrótico significativamente menor en comparación con el grupo de control de isotipo, ambos cuando se midieron en la región "Normal" (FIG. 10B) o en la región del "Margen de la fibrosis" (FIG. 10C). Además, las áreas porcentuales de tejido fibrótico medidas en los grupos de tratamiento anti-IL-6 y tratamiento de referencia fueron similares (tanto en la región "Normal" como en la región "Margen de la fibrosis"), lo que indica que el anti-IL-6 tenía un efecto antifibrótico equivalente al del inhibidor de la ACE perindopril (tratamiento de referencia).
Estos datos demuestran que el tratamiento con un agente anti-IL-6 es eficaz para reducir la lesión cardíaca y restaurar la función en un modelo in vivo de síndrome cardiorrenal en animales que son genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
5.12.5. Ejemplo 5: La terapia anti-IL-6 es efectiva en conservar la función cardíaca en un modelo de infarto agudo de miocardio en ratones genotípicamente análogos a los homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 humanos
Los datos de los Ejemplos 2 y 3 sugerían que la reducción de los niveles de IL-6 o la señalización de IL-6 podía reducir la insuficiencia cardíaca y la mortalidad en pacientes con síndrome coronario agudo, pero solo en aquellos pacientes que tienen al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, teniendo el mayor efecto en aquellos pacientes con niveles séricos elevados de IL-6.
Se realizó un estudio en roedores para determinar el efecto de la terapia anti-IL-6 después de un infarto agudo de miocardio en ratones genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.
Las FIGS. 11A y 11B muestran datos de un modelo in vivo en el cual se indujo infarto de miocardio en ratones genotípicamente análogos a los seres humanos homocigotos para el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6. El grupo de control no recibió ninguna terapia. El grupo experimental se trató con un anticuerpo anti-IL-6 murino. La FIG. 11a muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la fracción de eyección. La FIG. 11B muestra que el tratamiento con anti-IL-6 proporciona una mejora estadísticamente significativa en la contractilidad, medida como fracción de acortamiento cardíaco. Los datos demuestran que la terapia anti-IL-6 administrada inmediatamente después de un infarto de miocardio mejora la recuperación funcional del ventrículo izquierdo en roedores que son genotípicamente análogos a los pacientes humanos que tienen el alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un antagonista de IL-6 para su uso en un método de tratamiento de la anemia por inflamación crónica mediada por hepcidina en un paciente, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho antagonista de IL-6 a dicho paciente,
en donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6, opcionalmente en donde esto se ha determinado previamente o en donde dicho método comprende una etapa anterior para determinar si dicho paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6; en donde el antagonista de IL-6 es:
(a) un anticuerpo anti-IL-6, o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo; o
(b) un anticuerpo anti-IL-6R, o fragmento de unión a antígeno o derivado del mismo, opcionalmente tocilizumab o vobarilizumab.
2. El antagonista de IL-6 para el uso de la reivindicación 1, en donde la anemia por inflamación crónica mediada por hepcidina es una anemia por:
(a) enfermedad renal crónica (CKD), opcionalmente enfermedad renal crónica de estadio 1 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 2 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 3 KDOQI, enfermedad renal crónica de estadio 4 KDOQI, o enfermedad renal crónica de estadio 5 KDOQI; opcionalmente en donde el paciente tiene síndrome cardiorrenal (CRS) opcionalmente de Tipo 4; y opcionalmente ha recibido al menos un tratamiento de diálisis antes del tratamiento;
(b) una enfermedad inflamatoria crónica, opcionalmente artritis reumatoide (RA), artritis idiopática juvenil, espondilitis anquilosante, psoriasis en placas, artritis psoriásica, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa;
(c) cáncer, opcionalmente tumores sólidos, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer hematológico, mieloma múltiple, leucemias, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), linfomas, linfoma de Hodgkin y adenoma hepático;
(d) una infección crónica; o
(e) insuficiencia cardíaca congestiva (CHF).
3. El antagonista de IL-6 para el uso de la reivindicación 2 en donde el paciente es:
(a) varón y tiene:
(i) un nivel de hemoglobina (Hb) antes del tratamiento de menos de 14 g/dl, menos de 13 g/dl, menos de 12 g/dl, o menos de 11 g/dl; y/o
(ii) un hematocrito antes del tratamiento de menos del 40 %, menos del 35 % o 30 - 34 %;
(b) mujer y tiene:
(i) un nivel de Hb antes del tratamiento de menos de 12 g/dl, menos de 11 g/dl, menos de 10 g/dl, o menos de 9 g/dl; y/o
(ii) un hematocrito antes del tratamiento de menos del 36 %, menos del 30 % o 26 - 29 %.
4. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde:
el paciente tiene niveles séricos elevados de IL-6 antes del tratamiento, opcionalmente en donde dicho nivel de IL-6 antes del tratamiento es superior a 2,5 pg/ml, 5 pg/ml, 7,5 pg/ml, 10 pg/ml o 12,5 pg/ml; y/o
el paciente tiene niveles séricos elevados de CRP antes del tratamiento, opcionalmente en donde dicho nivel de CRP antes del tratamiento es superior a 2 mg/l, 3 mg/l, 5 mg/l, 7,5 mg/l o 10 mg/l.
5. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una copia del alelo mayor del rs855791 de TMPRSS6 usando un ensayo de PCR en tiempo real.
6. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente ha recibido antes del tratamiento al menos una administración de un agente estimulante de la eritropoyesis (ESA), un suplemento de hierro o una transfusión de sangre o concentrado de hematíes y opcionalmente tiene un nivel de Hb normal o hematocrito normal.
7. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el antagonista de IL-6 se administra a una dosis, según una pauta, y durante un período de tiempo suficiente para:
(a) aumentar los niveles de Hb o hematocrito del paciente por encima de los niveles antes del tratamiento; y/o (b) permitir la reducción de la dosis de ESA del paciente sin reducir los niveles de Hb o hematocrito del paciente por debajo de los niveles existentes inmediatamente antes del tratamiento, opcionalmente en donde dicha reducción de la dosis de ESA del paciente en comparación con la dosis de ESA antes del tratamiento es de al menos 10 %, 20 % o 50 %; y/o
(c) revertir la deficiencia funcional de hierro; y/o
(d) reducir la mortalidad cardiovascular (CV) en pacientes con CKD en comparación con controles históricos emparejados por edad y por enfermedad; y/o
(e) reducir los niveles de IL-6 libre en el suero del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento, opcionalmente en al menos el 10 %, 20 % o 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento; y/o (f) reducir los niveles de CRP del paciente por debajo de los niveles antes del tratamiento, opcionalmente, en al menos el 50 % en comparación con los niveles antes del tratamiento.
8. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado:
(a) tiene una Kd para unión a IL-6 humana de menos de 100 nM, 50 nM, 10 nM o 1 nM; y/o
(b) tiene una semivida de eliminación tras la administración intravenosa de al menos 7 días, 14 días, 21 días o 30 días.
9. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado:
es totalmente humano o es humanizado, y/o es un anticuerpo monoclonal anti-IL-6 de longitud completa, opcionalmente un anticuerpo IgG1 o IgG4; o
es un anticuerpo de un único dominio, un nanocuerpo VHH, un Fab o un scFv.
10. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado comprende las seis CDR de la región variable de MED5117, o comprende la VH y la VL de MEDI5117, o en donde el anticuerpo es MEDI5117.
11. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado comprende las seis CDR de la región variable, o comprende la región V de la cadena pesada y la región V de la cadena ligera, de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, elsilimomab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
12. El antagonista de IL-6 para el uso de la reivindicación 11, en donde el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento de unión a antígeno o derivado es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en siltuximab, gerilimzumab, sirukumab, clazakizumab, olokizumab, VX30 (VOP-R003; Vaccinex), EB-007 (EBI-029; Eleven Bio), ARGX-109 (ArGEN-X), FM101 (Femta Pharmaceuticals, Lonza) y ALD518/BMS-945429 (Alder Biopharmaceuticals, Bristol-Myers Squibb).
13. El antagonista de IL-6 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno o derivado se administra por vía parenteral, opcionalmente por vía subcutánea o intravenosa.
14. Un método para determinar si un antagonista de IL-6, como se define en la reivindicación 1, será ineficaz en un paciente con anemia por inflamación crónica mediada por hepcidina, comprendiendo el método determinar en una muestra biológica del paciente si el paciente es homocigoto o no para el alelo menor del rs855791 de TMPRSS6, opcionalmente usando un ensayo de PCR en tiempo real.
15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, que además comprende la etapa de determinar si se debe suspender la administración de un antagonista de IL-6 a un paciente del que se ha determinado que es homocigoto.
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