ES2882106T3

ES2882106T3 - Composición de factor de crecimiento nervioso y polvo para inyección

Info

Publication number: ES2882106T3
Application number: ES16782601T
Authority: ES
Inventors: Jianping Tan; Bingzhang Wang
Original assignee: Beijing Staidson Medical Tech Co Ltd; Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Staidson Medical Tech Co Ltd; Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-04-21
Filing date: 2016-04-18
Publication date: 2021-12-01
Anticipated expiration: 2036-04-18
Also published as: CN107660149A; EP3287140A1; US11077193B2; WO2016169454A1; EP3287140A4; US20180161436A1; EP3287140B1; DK3287140T3; CN107660149B

Abstract

Una composición de factor de crecimiento nervioso, caracterizada por que dicha composición de factor de crecimiento nervioso comprende los siguientes componentes: un factor de crecimiento nervioso a una concentración masa-volumen de 10 μg/ml-100 μg/ml; un estabilizador de disacárido a una concentración masa-volumen de 10 mg/ml-80 mg/ml; un estabilizador de aminoácido a una concentración masa-volumen de 0 mg/ml-30 mg/ml; un tensioactivo a una concentración masa-volumen de 0,01 mg/ml-1 mg/ml de; un agente de soporte a una concentración masa-volumen de 10 mg/ml-50 mg/ml; un tampón de pH para mantener dicha composición de factor de crecimiento nervioso a un valor de pH de 6,0 a 7,4; un disolvente que es agua; en donde dicho estabilizador de disacárido es al menos uno de maltosa, trehalosa y lactosa.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición de factor de crecimiento nervioso y polvo para inyección

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición de factor de crecimiento nervioso y a un polvo para inyección, y pertenece al campo de la biología farmacéutica.

Antecedentes técnicos

El factor de crecimiento nervioso (NGF, siglas del inglés nerve growth factor), es un regulador del crecimiento de las células nerviosas con las funciones biológicas dobles de nutrición neuronal y promoción del crecimiento de neuritas, y tiene un efecto regulador importante en el desarrollo, diferenciación, crecimiento, regeneración y expresión de las propiedades funcionales de las neuronas centrales y periféricas. El NGF contiene tres subunidades, a, p, y, en donde la subunidad p es una región activa, formada por dos cadenas simples compuestas por 118 aminoácidos por un enlace no covalente. En 1953, el científico italiano Levi-Montalcini descubrió el NGF y ganó el Premio Nobel. En la actualidad, hay una serie de productos del NGF que aparecen en el mercado en todo el mundo y se utilizan clínicamente principalmente para el tratamiento de la displasia neurológica, incluida la ambliopía, neuroma, diversas lesiones nerviosas y enfermedades neurológicas y otras enfermedades.

El NGF es similar a otros fármacos proteicos; dado que la proteína tiene una semivida corta, la conformación espacial de la proteína cambia fácilmente y por tanto da como resultado la desnaturalización de las proteínas cuando se expone a condiciones extremas de temperatura y humedad, o por influencia de factores físicos y químicos; la proteína desnaturalizada perderá su actividad biológica original; además, debido a que la proteína a menudo tiende a adherirse a una superficie sólida, en el proceso de llenado, parte de la proteína se adherirá a la pared interior del recipiente, dando como resultado la pérdida de principios activos. Para garantizar su actividad biológica, es necesario añadir un estabilizador para impedir la pérdida de la actividad biológica.

En general, la albúmina se usa ampliamente en varios productos biológicos como excelente estabilizador y como agente formador de torta. Sin embargo, dado que la albúmina procede principalmente de sangre humana, sangre placentaria, y que la sangre puede contener algunos de los componentes desconocidos que no son fáciles de detectar, la composición de NGF como preparación no estéril que se esteriliza, puede contaminarse fácilmente; al mismo tiempo, las aplicaciones prolongadas y amplias de la albúmina también son susceptibles a las limitaciones de suministro de sangre y de los costes de producción; nuevamente, en la determinación del contenido de los productos intermedios y la preparación del producto acabado, la albúmina puede interferir con una cantidad relativamente pequeña de NGF y, por tanto, afectar a la gestión de la calidad del producto. Por lo tanto, para evitar los problemas anteriores, es necesario encontrar una composición estable de NGF sin albúmina.

Sumario de la invención

Es un objeto de la presente invención proporcionar una composición de factor de crecimiento nervioso y un polvo para inyección que no solo proteja el factor de crecimiento nervioso derivado de ratón (mNGF, siglas del inglés mousederived nerve growth factor) sino que también pueda garantizar la buena estabilidad del factor de crecimiento nervioso derivado de ser humano (hNGF, human-derived nerve growth factor) y el factor de crecimiento nervioso humano recombinante (rhNGF, recombinant human nerve growth factor) en los procesos de preparación, transporte y almacenamiento, y tener una mejor seguridad y control de calidad de la medicación clínica.

La presente invención proporciona una composición de factor de crecimiento nervioso que comprende los siguientes componentes:

un factor de crecimiento nervioso a una concentración masa-volumen de 10 pg/ml-100 pg/ml;

un estabilizador de disacárido a una concentración masa-volumen de 10 mg/ml-80 mg/ml;

un estabilizador de aminoácido a una concentración masa-volumen de 0 mg/ml-30 mg/ml;

un tensioactivo a una concentración masa-volumen de 0,01 mg/ml-1 mg/ml de;

un agente de soporte a una concentración masa-volumen de 10 mg/ml-50 mg/ml;

un tampón de pH para mantener dicha composición de factor de crecimiento nervioso a un valor de pH de 6,0 a 7,4;

un disolvente que es el agua.

La adición de un estabilizador en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, impide o reduce la agregación y despolimerización de proteínas causada en el proceso de preparación o almacenamiento, y el término "estabilizador" se refiere a una sustancia que impide que el principio activo se agregue o despolimerice en una solución acuosa, y además de la función de estabilidad, el estabilizador también se puede utilizar como agente de soporte para mejorar la formabilidad del producto, no excluyéndose otras funciones;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de disacárido es de 30 mg/ml-70 mg/ml, y más preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de disacárido es de 30 mg/ml;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho estabilizador de disacárido es al menos uno de maltosa, trehalosa y lactosa;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 2 mg/ml-10 mg/ml, y más preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 3 mg/ml-10 mg/ml, y aún preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 3 mg/ml, 10 mg/ml.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho estabilizador de aminoácido puede ser al menos uno de alanina, glicina, arginina, ácido glutámico, histidina e isoleucina.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho estabilizador de disacárido y dicho estabilizador de aminoácido pueden ser específicamente uno cualquiera de los siguientes 4) a 8):

4) lactosa y glicina, 5) lactosa, sacarosa e isoleucina, 6) trehalosa, arginina e histidina, 7) maltosa, glicina e histidina, 8) maltosa, alanina, arginina y ácido glutámico.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dado que la proteína tiene una alta tendencia a interactuar con una superficie, es susceptible de adsorción y/o desnaturalización en una interfase gas-líquido, frascolíquido, que es inversamente proporcional a la concentración de proteína, y conduce a la formación de agregados proteicos solubles e insolubles, o a la pérdida de proteína en la solución por adsorción a la interfase. La adición del tensioactivo puede impedir la adsorción y/o desnaturalización iniciada por las interacciones de la superficie de la solución, de modo que se minimiza la adsorción y/o desnaturalización provocada por la superficie. Esto se debe a que el tensioactivo es una molécula anfótera que puede competir con la proteína en la posición de la interfase, y la porción hidrófoba de la molécula de tensioactivo ocupa la posición de la interfase (por ejemplo, gas-líquido), mientras que la porción hidrófila de la molécula permanece dirigida a la masa del disolvente; a una concentración suficiente (normalmente alrededor de la concentración micelar crítica del tensioactivo), la capa superficial de la molécula de tensioactivo actúa impidiendo la adsorción de moléculas de proteína en la interfase;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho tensioactivo es de 0,1 mg/ml-0,5 mg/ml, y más preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho tensioactivo es de 0,2 mg/ml-0,5 mg/ml, y aún preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho tensioactivo es de 0,2 mg/ml, 0,5 mg/ml;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho tensioactivo puede ser un tensioactivo no iónico, y preferentemente dicho tensioactivo no iónico puede ser al menos uno de poloxámero, polisorbato e hidroxiestearato de 15-polietilenglicol (abreviado como HS 15, lo mismo a continuación), y en particular puede ser uno cualquiera de poloxámero, polisorbato y HS 15.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, la adición de dicho agente de soporte puede mejorar el aspecto del producto acabado y garantizar que el producto tenga una buena formabilidad después de la liofilización;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho agente de soporte es de 20-50 mg/ml, y más preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho agente de soporte es de 20 mg/ml, 50 mg/ml;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho agente de soporte puede ser cualquiera de manitol, dextrina y dextrano.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, para garantizar que la composición tenga la mayor actividad biológica, generalmente es necesario controlar un intervalo de pH óptimo. El intervalo de pH óptimo para esta estabilidad debe determinarse en el momento de la selección de la formulación, generalmente usando una prueba de factor de influencia (iluminación, temperatura elevada, humedad elevada), pruebas de estabilidad acelerada y prolongada y otros métodos. Después de la determinación de la formulación, la composición en los procesos de producción y almacenamiento debe mantenerse en su intervalo de pH óptimo. Dado que el tampón de pH tiene una buena capacidad tamponante, la estabilidad relativa del pH del producto se puede mantener en un cierto intervalo; por lo tanto, en la formulación, a menudo se añade un tampón para el control del valor del pH;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, la concentración molar de dicho tampón de pH es de 10 mM-50 mM, preferentemente, la concentración molar de dicho tampón de pH es de 20 mM-25 mM, y más preferentemente, la concentración molar de dicho tampón de pH es de 20 mM, 25 mM;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, dicha composición de factor de crecimiento nervioso se mantiene a un valor de pH de 6,80-7,00, más preferentemente, dicha composición de factor de crecimiento nervioso se mantiene a un valor de pH de 6.86-6.91, y aún preferentemente, dicho factor de crecimiento nervioso se mantiene a un valor de pH de 6,86, específicamente 6,80, 6,82, 6,83, 6,85, 6,86, 6,87, 6,91,6,92 o 7,00; en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, el tampón de pH es al menos uno de un fosfato, un citrato, un acetato, un clorhidrato de histidina y un clorhidrato de arginina, y puede ser específicamente 1) un fosfato, 2) un citrato, 3) un acetato, 4) un clorhidrato de histidina o 5) un clorhidrato de histidina y un clorhidrato de arginina, en donde la relación molar entre el clorhidrato de histidina y el clorhidrato de arginina en 5) puede ser de 12:13. En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicha agua es agua para inyección.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho factor de crecimiento nervioso es un regulador del crecimiento de las células nerviosas con las funciones biológicas dobles de nutrición neuronal y promoción del crecimiento de neuritas, y tiene un efecto regulador importante sobre el desarrollo, diferenciación, crecimiento, regeneración y expresión de propiedades funcionales de las neuronas centrales y periféricas;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho factor de crecimiento nervioso es de 40 pg/ml-60 pg/ml, más preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho factor de crecimiento nervioso es de 50 pg/ml;

en la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, dicho factor de crecimiento nervioso es un factor de crecimiento nervioso derivado de ratón, un factor de crecimiento nervioso derivado de ser humano o un factor de crecimiento nervioso humano recombinante.

En la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, la concentración de cada componente puede ser una cualquiera de los siguientes 1) a 17):

1) el factor de crecimiento nervioso: 40 pg/ml-80 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 10 mg/ml-40 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 0 mg/ml-6 mg/ml, el tensioactivo: 0,01 mg/ml-0,2 mg/ml, el agente de soporte: 10 mg/ml-30 mg/ml, el tampón de pH: 10 mM-25 mM;

2) el factor de crecimiento nervioso: 60 pg/ml-100 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 40 mg/ml-80 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 6 mg/ml-30 mg/ml, el tensioactivo: 0,2 mg/ml-1 mg/ml, el agente de soporte: 30 mg/ml-50 mg/ml, el tampón de pH: 25 mM - 50 mM;

3) el factor de crecimiento nervioso: 10 pg/ml-50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml-50 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 2 mg/ml-10 mg/ml, el tensioactivo: 0,05 mg/ml-0,4 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml-40 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM-30 mM;

4) el factor de crecimiento nervioso: 10 pg/ml-50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 35 mg/ml-70 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 3 mg/ml-13 mg/ml, el tensioactivo: 0,1 mg/ml-0,5 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml-40 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM-30 mM;

5) el factor de crecimiento nervioso: 10 pg/ml-50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 35 mg/ml-70 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 4 mg/ml-14 mg/ml, el tensioactivo: 0,1 mg/ml-0,5 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml-40 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM-30 mM;

6) el factor de crecimiento nervioso: 40 pg/ml-60 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml-70 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 0 mg/ml-10 mg/ml, el tensioactivo: 0,2 mg/ml-0,5 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml - 50 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM - 25 mM;

7) el factor de crecimiento nervioso: 40 pg/ml-60 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml-70 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 3 mg/ml-10 mg/ml, el tensioactivo: 0,2 mg/ml-0,5 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml a 50 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM a 25 mM;

8) el factor de crecimiento nervioso: 10 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 10 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 0 mg/ml, el tensioactivo: 0,01 mg/ml, el agente de soporte: 10 mg/ml, el tampón de pH: 10 mM;

9) el factor de crecimiento nervioso: 40 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 2 mg/ml, el tensioactivo: 0,05 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM;

10) el factor de crecimiento nervioso: 50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 35 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 3 mg/ml, el tensioactivo: 0,1 mg/ml, el agente de soporte: 30 mg/ml, el tampón de pH: 25 mM;

11) el factor de crecimiento nervioso: 60 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 40 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 4 mg/ml, el tensioactivo: 0,2 mg/ml, el agente de soporte: 40 mg/ml, el tampón de pH: 30 mM;

12) el factor de crecimiento nervioso: 80 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 50 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 6 mg/ml, el tensioactivo: 0,4 mg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 50 mM;

13) el factor de crecimiento nervioso: 100 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 70 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 10 mg/ml, el tensioactivo: 0,5 mg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 50 mM;

14) el factor de crecimiento nervioso: 100 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 80 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 13 mg/ml, el tensioactivo: 1 mg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 50 mM;

15) el factor de crecimiento nervioso: 100 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 80 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 14 mg/ml, el tensioactivo: 1 pg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 50 mM;

16) el factor de crecimiento nervioso: 100 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 80 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 30 mg/ml, el tensioactivo: 1 mg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 50 mM;

17) el factor de crecimiento nervioso: 50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 3 mg/ml, el tensioactivo: 0,2 mg/ml, el agente de soporte: 50 mg/ml, el tampón de pH: 25 mM;

18) el factor de crecimiento nervioso: 50 pg/ml, el estabilizador de disacárido: 30 mg/ml, el estabilizador de aminoácido: 10 mg/ml, el tensioactivo: 0,5 mg/ml, el agente de soporte: 20 mg/ml, el tampón de pH: 20 mM.

La presente invención proporciona además un método para preparar el polvo para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, en donde la composición de factor de crecimiento nervioso anterior se liofiliza para obtener el polvo para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un polvo para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso preparado mediante el método anterior, para su administración mediante inyección.

En los polvos para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso anterior, el contenido de agua de los polvos para inyección puede ser de 1,2 %-3,0 %, en concreto de 1,3 %, 1,7 %, 1,9 %, 2,2 %, 2,3 %, 2,4 %, 2,5 %, 2,7 % o 2,8 %; el valor del pH de los polvos para inyección puede ser de 6,80-7,20, específicamente de 6,80, 6,82, 6,83, 6,85, 6,92, 6,93, 6,95, 7,05, 7,10, 7,10 o 7,20.

El uso de las composiciones de factor de crecimiento nervioso anteriores en el tratamiento de lesiones nerviosas o la preparación de un medicamento para el tratamiento de lesiones nerviosas también está dentro del alcance de la presente invención. Dicha composición de factor de crecimiento nervioso puede ser específicamente un polvo para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso. La lesión nerviosa puede ser una lesión del nervio óptico y la causa de la lesión puede ser una lesión con el puño, un accidente de coche, una lesión por golpe físico o una lesión por explosión en los ojos.

La presente divulgación proporciona además un método no reivindicado para tratar una lesión nerviosa que comprende la etapa de: administrar una cantidad eficaz de una composición de factor de crecimiento nervioso a un paciente con lesión nerviosa. Dicha composición de factor de crecimiento nervioso puede ser específicamente un polvo para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso. La administración puede ser específicamente una inyección intramuscular. La lesión nerviosa puede ser una lesión del nervio óptico y la causa de la lesión puede ser una lesión con el puño, un accidente de coche, una lesión por golpe físico o una lesión por explosión en los ojos.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra la curva de cambio del contenido promedio de NGF a lo largo del tiempo en los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los ejemplos y la preparación de referencia, en condiciones aceleradas (25 °C, HR de 60 ± 10 %).

La figura 2 muestra la curva de cambio de la actividad promedio a lo largo del tiempo de los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los ejemplos y la preparación de referencia, en condiciones aceleradas (25 °C, HR de 60 ± 10%).

La figura 3 muestra la curva de cambio del contenido promedio de NGF a lo largo del tiempo en los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los ejemplos y la preparación de referencia, en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C).

La figura 4 muestra la curva de cambio de la actividad promedio a lo largo del tiempo de los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los ejemplos y la preparación de referencia, en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C).

Descripción detallada de las realizaciones

Con el fin de proporcionar una mejor comprensión de la solución técnica de la presente invención a los expertos en la materia, la presente invención se describirá en más detalle con referencia a ejemplos y ejemplos de prueba, pero estos ejemplos no deben interpretarse como limitantes de la presente invención.

Los métodos experimentales usados en los siguientes Ejemplos son métodos convencionales a menos que se especifique lo contrario.

Los materiales, reactivos y similares usados en los siguientes Ejemplos están disponibles comercialmente, a menos que se especifique lo contrario.

Las soluciones madre de mNGF y hNGF utilizadas en los siguientes Ejemplos son adquirieron en Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd., la solución madre de rhNGF se adquirió en Sino Biological Inc., y todos los demás excipientes son de calidad inyectable a menos que se especifique lo contrario.

La unidad de concentración del tensioactivo en los siguientes Ejemplos se expresa en %, tal como 0,1 % para 1 mg/ml.

Para encontrar un sustituto de la albúmina como estabilizador del NGF, en la presente invención, se han llevado a cabo una gran cantidad de experimentos exploratorios, en los que para preparar una variedad de composiciones de NGF y polvos para inyección, como estabilizador para este producto se utiliza maltosa, trehalosa, sacarosa, lactosa, alanina, glicina, arginina, ácido glutámico, histidina, isoleucina y como tensioactivo se utiliza polisorbato-20 (abreviado como TW-20, lo mismo a continuación), polisorbato-80 (abreviado como TW-80, lo mismo a continuación), poloxámero 188 (abreviado como F68, lo mismo a continuación) y HS 15 y se determina la humedad, el pH, la presión osmótica, el contenido y la actividad de los productos acabados.

Ejemplo 1. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

La composición de NGF y el polvo para inyección se preparan de la siguiente manera:

se pesa una cantidad de formulación de un citrato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de trehalosa, manitol y F68 y se agita hasta su completa disolución, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,85 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido cítrico, se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 pm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 80 pg/ml.

La composición anterior se subenvasa en un frasco de inyección de vidrio de borosilicato a 0,63 ± 0,03 ml/frasco y se liofiliza, para preparar un polvo estéril para inyección de hNGF, es decir, un polvo para inyección de hNGF.

Ejemplo 2 (no incluido en la invención). Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un fosfato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de sacarosa, glicina, histidina y dextrano y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-20 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-20 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de rhNGF, el pH se ajusta a un pH de 7,00 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido fosfórico, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 pm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 50 pg/ml.

La composición anterior se subenvasa en un frasco de inyección de vidrio de borosilicato a 0,63 ± 0,03 ml/frasco y se liofiliza, para preparar un polvo estéril para inyección de rhNGF, es decir, un polvo para inyección de rhNGF.

Ejemplo 3. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un acetato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de maltosa, alanina, arginina, ácido glutámico y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el HS 15 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el HS 15 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,92 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido acético, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 |jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 40 jg/ml.

Ejemplo 4 (no incluido en la invención). Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un clorhidrato de histidina de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de sacarosa, histidina y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-20 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-20 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,87 como se muestra en la Tabla 1 con HCl o L-histidina, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 60 jg/ml.

Ejemplo 5. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un citrato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de trehalosa, sacarosa y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-80 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-80 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de mNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,82 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido cítrico, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 60 jg/ml.

La composición anterior se subenvasa en un frasco de inyección de vidrio de borosilicato a 0,63 ± 0,03 ml/frasco y se liofiliza, para preparar un polvo estéril para inyección de mNGF, es decir, un polvo para inyección de mNGF.

Ejemplo 6 (no incluido en la invención). Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un fosfato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de sacarosa, glicina y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-80 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-80 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,91 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido fosfórico, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 |jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 50 jg/ml.

Ejemplo 7. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un clorhidrato de histidina de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de maltosa, glicina, histidina y dextrina y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-80 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-80 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de rhNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,80 como se muestra en la Tabla 1 con HCl o L-histidina, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 100 jg/ml.

Ejemplo 8. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un citrato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de trehalosa y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que e1HS 15 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el HS 15 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,86 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido cítrico, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 40 jg/ml.

Ejemplo 9. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un fosfato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de lactosa, glicina y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-20 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-20 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de hNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,86 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido fosfórico, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 jm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 50 jg/ml.

Ejemplo 10. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesan cantidades de formulación de un clorhidrato de histidina y de un clorhidrato de arginina de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de trehalosa, arginina, histidina y manitol y se agita hasta su completa disolución; dado que el TW-20 en la formulación se encuentra en un estado de agregado esférico en el agua para inyección y no se mezcla fácilmente de manera uniforme, el TW-20 se disuelve primero en agua caliente para inyección (40 °C-80 °C) para formular en una solución acuosa al 1 %, y después de haberse enfriado a temperatura ambiente, se añade a la solución anterior en una cantidad convertida a partir de la cantidad de formulación y se mezcla uniformemente en la presente invención; finalmente, se añade una solución madre de rhNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,83 como se muestra en la Tabla 1 con HCl o L-histidina o L-arginina, y se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 pm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 60 pg/ml.

Ejemplo 11. Preparación de la composición de NGF y polvo para inyección

se pesa una cantidad de formulación de un fosfato de acuerdo con la composición de la formulación de la Tabla 1, se añade una cantidad adecuada de agua para inyección y se agita hasta su completa disolución, después, se añaden cantidades de formulación de lactosa, sacarosa, isoleucina, manitol y F68 y se agita hasta su completa disolución, se añade una solución madre de mNGF, el pH se ajusta a un pH de 6,85 como se muestra en la Tabla 1 con NaOH o ácido fosfórico, se añade agua para inyección al volumen de la escala, después de haberse mezclado uniformemente, la mezcla se filtra a través de una membrana de microfiltración de 0,22 pm en un recipiente estéril para preparar una composición que tiene una concentración de NGF de aproximadamente 10 pg/ml.

T l 1 n i l m n n l E m l 1-11

continuación

*No incluido en la invención

Ejemplo 12. Prueba de rendimiento de los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los Ejemplos 1-11

(1) Prueba de aspecto, humedad, presión osmótica, pH, contenido y actividad

Se observa el aspecto de los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los Ejemplos 1-11 y de una preparación de referencia (factor de crecimiento nervioso de ratón para inyección, nombre comercial: Sutaisheng, fabricado por Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd.), respectivamente, y se determinan sus humedades, presiones osmóticas, pH, contenidos y actividades.

El método de determinación del contenido de NGF se lleva a cabo de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 en la Patente n.° 200510130348.3, titulada "Method for Determining the Content of Nerve Growth Factor". El método de prueba de actividad se determina mediante un método celular, y el método detallado de operación se lleva a cabo de acuerdo con el método del Ejemplo 1 de la Publicación de Patente n.°CN 103376248a , titulada "Method for Quantitative Determination of Nerve Growth Factor Activity". Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2.

*No Incluido en la Invención

Como se puede observar en la Tabla 2, los índices de los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en la presente invención, cumplen todos los requisitos estándar de calidad.

(2) Detección de intervalo de pH estable

De acuerdo con la composición de la formulación del Ejemplo 2 (no incluido en la invención), se formulan 3 composiciones de NGF, en donde la cantidad total de fosfato se mantiene constante y las cantidades de NaH2PO4, H2O y Na2HPO4 se ajustan de modo que los valores de pH de las composiciones de NGF sean de 6,0, 6,8 y 7,4, respectivamente, después, se llenan en frascos de penicilina, respectivamente, y se liofilizan para preparar un polvo inyectable estéril. Se toman muestras y se añade una cantidad apropiada de agua estéril para inyección para formular las soluciones. En condiciones de temperatura ambiente, se observa el aspecto de las soluciones y se determina el valor del pH, el contenido y la actividad a las 0, 4, 8, 12 y 24 horas, respectivamente. Los resultados se muestran en la siguiente tabla.

T l R l i n in r l H l l m i i n F

De los datos de la tabla anterior se desprende que después de colocar las tres composiciones de NGF con diferentes valores de pH a temperatura ambiente durante 24 h, los índices no presentan cambios significativos con respecto a las 0 h, cumplen todos los requisitos estándar de calidad, lo que indica que, en condiciones de temperatura ambiente, las soluciones de muestra pueden permanecer estables durante 24 h en un intervalo de pH de 6,0-7,4, preferentemente a un pH de 6,8.

(3) Prueba de estabilidad

A. Prueba de estabilidad acelerada

De acuerdo con los requisitos de las "Directrices técnicas para la investigación sobre la estabilidad de productos biológicos", las muestras de la preparación de referencia (Sutaisheng) y los polvos para inyección de la composición de NGF subenvasados, preparados en los Ejemplos, se examinaron para determinar una estabilidad acelerada durante 0-6 meses en condiciones de 25 °C, HR de 60 ± 10 %. Se observa el aspecto de las muestras y se determinan las humedades, presiones osmóticas, valores de pH, contenidos y actividades. Los resultados se muestran en la Tabla 4 y en Figura 1 (curva de cambio del contenido promedio a lo largo del tiempo) y la figura 2 (curva de cambio de la actividad promedio a lo largo del tiempo).

Tabla 4. Resultados de la prueba de estabilidad acelerada de los polvos para inyección de la composición de NGF y la re aración de referencia

continuación

continuación

*No incluido en la invención

Como puede observarse a partir de la Figura 1, el contenido promedio de NGF en la preparación de referencia y los polvos para inyección de la composición de NGF preparados en los Ejemplos, presentan una tendencia a la reducción a lo largo del tiempo en condiciones aceleradas (25 °C, HR de 60 ± 10 %), en donde la velocidad de reducción del contenido promedio de NGF en la preparación de referencia es significativamente mayor que la de los Ejemplos de la presente invención. Como puede observarse a partir de los resultados de la Tabla 4, los aspectos, humedades, valores de pH y presiones osmóticas de las muestras no cambian significativamente en las condiciones aceleradas (25 °C, HR de 60 ± 10 %) durante 6 meses, pero el contenido de la preparación de referencia se reduce en aproximadamente un 10,5 %, las tasas de reducción en el contenido de los polvos para inyección de la composición de NGF de los Ejemplos 1 a 11 son del 7,8%, 6,1%, 8,0%, 3,2%, 5,5%, 3,6%, 7,9%, 3,0%, 2,4%, 5,2% y 8,1%, respectivamente, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos de la presente invención es superior a la de la preparación de referencia en condiciones aceleradas. Entre ellas, las tasas de reducción en el contenido de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 son del 3,2 %, 3,6 %, 3,0 %, 2,4 %, respectivamente, muy por debajo de las de la preparación de referencia, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 es significativamente superior a la de la preparación de referencia en las condiciones aceleradas.

Como puede observarse a partir de la Figura 2, la actividad promedio de NGF en la preparación de referencia y en los polvos para inyección de la composición de NGF subenvasados preparados en los Ejemplos, presenta en conjunto una tendencia a la reducción a lo largo del tiempo en condiciones aceleradas (25 °C, Hr de 60 ± 10 %), en donde la actividad de la preparación de referencia se reduce rápidamente después de dos meses de aceleración. Como puede observarse a partir de los resultados de la Tabla 4, los aspectos, humedades, valores de pH y presiones osmóticas de las muestras, no cambian significativamente en condiciones aceleradas (25 °C, HR de 60 ± 10 %) durante 6 meses, pero la actividad de la preparación de referencia se reduce en un 17,7 %, las actividades de los polvos para inyección de la composición de Ng F de los Ejemplos 1 a 11, se reducen en un 14,5 %, 12,5 %, 15,3 %, 8,9 %, 10,6 %, 9,2 %, 12,9%, 6,3%, 5,9%, 11,1 % y 13,8%, respectivamente, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos de la presente invención es superior a la de la preparación de referencia en condiciones aceleradas. Entre ellas, las tasas de reducción en las actividades de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 son del 8,9 %, 9,2 %, 6,3 % y 5,9 %, respectivamente, muy por debajo de las de la preparación de referencia, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 es significativamente superior a la de la preparación de referencia en las condiciones aceleradas.

B. Prueba de estabilidad prolongada

De acuerdo con los requisitos de las "Directrices técnicas para la investigación sobre la estabilidad de productos biológicos", las muestras de la preparación de referencia (Sutaisheng) y los polvos para inyección de NGF subenvasados preparados en los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9, se examinan para determinar la estabilidad prolongada durante 0-12 meses en la condición de 6 ± 2 °C. Se observa el aspecto de las muestras y se determinan las humedades, presiones osmóticas, valores de pH, contenidos y actividades. Los resultados se muestran en la Tabla 5 y en la Figura 3 (curva de cambio del contenido promedio a lo largo del tiempo) y la figura 4 (curva de cambio de la actividad promedio a lo largo del tiempo).

Tabla 5. Resultados de las pruebas de estabilidad prolongada de los polvos para inyección de la composición de NGF la re aración de referencia

continuación

continuación

*No incluido en la invención

Como puede observarse a partir de la Figura 3, el contenido promedio de NGF en la preparación de referencia y en los polvos para inyección de la composición de NGF subenvasados preparados en los Ejemplos, presenta una tendencia a la reducción a lo largo del tiempo en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C), en donde la velocidad de reducción del contenido promedio de NGF en la preparación de referencia es significativamente mayor que la de los Ejemplos de la presente invención. Como puede observarse a partir de los resultados de la Tabla 5, los aspectos, humedades, valores de pH y presiones osmóticas de las muestras no cambian significativamente en la condición prolongada (6 ± 2 °C) durante 12 meses, pero el contenido de la preparación de referencia se reduce en aproximadamente un 6,7 %, las tasas de reducción en el contenido de los polvos para inyección de la composición de NGF de los Ejemplos 1 a 11 son del 6,3 %, 5,1 %, 6,2 %, 2,8 %, 5,1 %, 3,0 %, 6,1 %, 2,6 %, 2,0 %, 4,5 % y 6,0 %, respectivamente, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos de la presente invención es superior a la de la preparación de referencia en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C). Entre ellas, las tasas de reducción en el contenido de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 son del 2,8 %, 3,0 %, 2,6 % y 2,0 %, respectivamente, muy por debajo de las de la preparación de referencia, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 es significativamente superior a la de la preparación de referencia en la condición prolongada.

Como puede observarse a partir de la Figura 4, la actividad promedio de NGF en la preparación de referencia y en los polvos para inyección de la composición de NGF subenvasados preparados en los Ejemplos, presenta en conjunto una tendencia a la reducción a lo largo del tiempo en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C), en donde la velocidad de reducción en la actividad de la preparación de referencia es mayor que la de los Ejemplos de la presente invención. Como puede observarse a partir de los resultados de la Tabla 4, los aspectos, humedades, valores de pH y presiones osmóticas de las muestras, no cambian significativamente en la condición prolongada (6 ± 2 °C) durante 12 meses, pero la actividad de la preparación de referencia se reduce en un 12,8 %, las actividades de los polvos para inyección de la composición de NGF de los Ejemplos 1 a 11, se reducen en un 10,9 %, 9,6 %, 10,3 %, 4,8 %, 8,7 %, 5,4 %, 9,2 %, 3,8 %, 3,4 %, 8,1 % y 10,2 %, respectivamente, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos de la presente invención es superior a la de la preparación de referencia en la condición de estabilidad prolongada (6 ± 2 °C). Entre ellas, las actividades de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 se reducen en un 4,8 %, 5,4 %, 3,8 % y 3,4 %, respectivamente, muy por debajo de las de la preparación de referencia, lo que indica que la estabilidad de los Ejemplos 4 (no incluido en la invención), 6 (no incluido en la invención), 8 y 9 es significativamente superior a la de la preparación de referencia en la condición prolongada.

(4) Evaluación clínica

Un total de 271 pacientes con lesión del nervio óptico se someten a un ensayo clínico de 12 semanas mediante el diseño de un estudio clínico controlado multicéntrico no aleatorizado; todos los sujetos tienen 14 años o más y pueden comunicarse bien con los investigadores, comprender y cumplir con los requisitos de los ensayos clínicos y firmar un consentimiento informado.

Condición del sujeto: 14 años o más.

Género: hombre o mujer.

Fuente del sujeto: se inscribieron 409 pacientes procedentes de diversas unidades de investigación oftalmológica, con lesiones del nervio óptico causadas por diversos motivos.

Causa de la lesión: 136 casos de lesión con puño (136 ojos), 152 casos de accidente de coche (152 ojos), 73 casos de lesiones por golpes físicos (73 ojos), 49 casos de lesiones por explosión en los ojos (49 ojos). No todos los casos van acompañados de rotura del globo ocular y daño causado por la compresión del nervio óptico debido a fracturas orbitales.

Método de tratamiento: al grupo de tratamiento se le inyecta la preparación de referencia y las composiciones de NGF de la presente invención por inyección intramuscular (agua para inyección) una vez al día con 30 |jg cada uno, y todos los casos se administran de forma continua durante 12 semanas. El grupo de placebo se trata con un control negativo (sin principio activo, y los excipientes restantes son los mismos que los de las composiciones de NGF).

El grupo de tratamiento comprende 271 casos (271 ojos), con una edad de 18 a 63 años, y una edad promedio de 34,2 años; 189 hombres (189 ojos), 82 mujeres (82 ojos); 147 ojos en el ojo derecho, 124 ojos en el ojo izquierdo. El grupo de placebo comprende 138 pacientes (138 ojos), con una edad de 13 a 55 años, y una edad promedio de 33,9 años, 96 hombres (96 ojos), 42 mujeres (42 ojos), 45 ojos en el ojo derecho y 93 ojos en el ojo izquierdo.

Diseño de la agrupación: la agrupación se muestra en la siguiente tabla:

Tabla 6 A ru ación del ensa o clínico número de suetos

Observación: se usa la composición de factor de crecimiento nervioso preparada en el Ejemplo 9, lo mismo a continuación.

Evaluación de reacciones adversas clínicas habituales: el grupo de placebo, el grupo de la preparación de referencia y el grupo de la composición de NGF, respectivamente, reciben la administración y en cada grupo se observan los síntomas y la incidencia de las reacciones adversas, y los resultados se muestran en la siguiente tabla.

Tabla 7 Reacciones adversas clínicas habituales al NGF

_________ _________ ________ ________ __________ __________

Observación: * indica que hay una diferencia significativa en comparación con el grupo de placebo (P < 0,05), # indica que hay una diferencia significativa en comparación con el grupo de la preparación de referencia (P < 0,05).

A partir de la tabla anterior puede observarse que, en comparación con el grupo de placebo, las principales reacciones adversas de las composiciones de NGF preparadas en la presente invención son dolor local, urticaria y mareo, y en comparación con el grupo con la preparación de referencia, las composiciones de NGF preparadas en la presente invención pueden aliviar significativamente las reacciones adversas, tales como dolor local, urticaria, mareo, etc. Eficacia clínica: el grupo de placebo, el grupo de la preparación de referencia y el grupo de la composición de NGF, respectivamente, reciben la administración y en cada grupo se observa la eficacia clínica. Los resultados se muestran en la siguiente tabla.

Tabla 8. Com aración de la eficacia clínica del NGF

___________ ___________

La eficacia clínica de la tabla anterior se evalúa usando los siguientes criterios de evaluación de eficacia clínica: © Recuperación: la visión se recupera a 1,0 o más y desaparecen las manchas oscuras en el campo visual central; © Eficaz: la visión aumenta en 4 líneas o más, las manchas oscuras en el campo visual central se reducen o las manchas totalmente oscuras se convierten en manchas relativamente oscuras;

® Aliviada: la visión aumenta en 2 líneas o más y no hay cambios en el campo visual;

A partir de la tabla anterior puede observarse que, en comparación con el grupo de placebo, las composiciones de NGF y los polvos para inyección de las mismas de la presente invención, pueden ser eficaces en el tratamiento de la lesión del nervio óptico causada por diversas causas, tienen la eficacia integral del tratamiento de la lesión del nervio óptico que es superior a la del grupo con la preparación de referencia, pueden reducir significativamente la incidencia de reacciones adversas y tienen un buen efecto terapéutico clínico.

Aplicación industrial

Los polvos para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso preparados en la presente invención, conservan una buena estabilidad en los procesos de preparación, transporte y almacenamiento: (1) en el proceso de preparación: después de que los polvos para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso preparados en la presente invención se pongan a temperatura ambiente durante 24 horas, el contenido y la actividad del NGF en ellos no tienen ningún cambio significativo; (2) en comparación con la preparación de referencia, en los procesos de transporte y almacenamiento convencionales (6 ± 2 °C), los polvos para inyección de la composición de NGF de la presente invención, tienen una reducción de contenido eficaz de solo 2,0 %-6,3 %, preferentemente de 2,0 %-3,0 %, y una reducción de actividad de solo 3,4 %-10,9 %, después de colocarse durante 12 meses, por lo que tienen una excelente estabilidad.

Los polvos para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso preparados en la presente invención, pueden reducir significativamente la incidencia de reacciones adversas en el ensayo clínico, tienen un buen efecto terapéutico clínico y tienen una mejor seguridad y control de calidad de la medicación clínica en comparación con la preparación de referencia existente.

La presente invención tiene los siguientes efectos beneficiosos:

(1) las composiciones de factor de crecimiento nervioso y los polvos para inyección de la presente invención pueden evitar el riesgo potencial resultante del virus u otros componentes desconocidos transportados en la albúmina usando como estabilizador un disacárido o una combinación de un disacárido y un aminoácido en lugar de albúmina.

(2) los polvos para inyección de la composición de factor de crecimiento nervioso de la presente invención no solo tienen un efecto protector sobre el factor de crecimiento nervioso derivado de ratón (mNGF), sino que también pueden garantizar la buena estabilidad del factor de crecimiento nervioso derivado de ser humano (hNGF) y del factor de crecimiento nervioso humano recombinante (rhNGF) en los procesos de preparación, transporte y almacenamiento, y tienen una mejor seguridad y control de calidad de la medicación clínica.

(3) las composiciones de factor de crecimiento nervioso y los polvos para inyección de la presente invención tienen principios definidos, son fácilmente cualitativos y cuantitativos, y el estabilizador utilizado en ellos tiene una alta pureza, una amplia fuente y una fácil producción en masa a largo plazo, lo que facilita el control de costes y la mejora de la calidad del producto.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición de factor de crecimiento nervioso, caracterizada por que dicha composición de factor de crecimiento nervioso comprende los siguientes componentes:

un tensioactivo a una concentración masa-volumen de 0,01 mg/ml-1 mg/ml de;

un agente de soporte a una concentración masa-volumen de 10 mg/ml-50 mg/ml;

un disolvente que es agua;

en donde dicho estabilizador de disacárido es al menos uno de maltosa, trehalosa y lactosa.

2. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de disacárido es de 30 mg/ml-70 mg/ml.

3. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizada por que la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 2 mg/ml-10 mg/ml, preferentemente, la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 3 mg/ml-10 mg/ml.

4. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada por que dicho estabilizador de aminoácido es al menos uno de alanina, glicina, arginina, ácido glutámico, histidina e isoleucina.

5. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por que dicho estabilizador de aminoácido es al menos uno de alanina, glicina, arginina, ácido glutámico, histidina e isoleucina; preferentemente, dicho estabilizador de disacárido y estabilizador de aminoácido son uno cualquiera de los siguientes 4) a 8):

6. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por que la concentración masa-volumen de dicho tensioactivo es de 0,1 mg/ml-0,5 mg/ml.

7. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada por que dicho tensioactivo es un tensioactivo no iónico, preferentemente dicho tensioactivo no iónico es al menos uno de poloxámero, polisorbato e hidroxiestearato de 15-polietilenglicol.

8. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada por que la concentración masa-volumen de dicho agente de soporte es de 20-50 mg/ml.

9. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada por que dicho agente de soporte es cualquiera de manitol, dextrina y dextrano.

10. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada por que la concentración molar de dicho tampón de pH es de 10mM-50 mM, preferentemente, la concentración molar de dicho tampón de pH es de 20 mM-25 mM; dicho tampón de pH es al menos uno de un fosfato, un citrato, un acetato, un clorhidrato de histidina y un clorhidrato de arginina;

el agua es agua para inyección.

11. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada por que la concentración masa-volumen de dicho factor de crecimiento nervioso es de 40 pg/ml-60 pg/ml;

preferentemente, dicho factor de crecimiento nervioso es un factor de crecimiento nervioso derivado de ratón, un factor de crecimiento nervioso derivado de ser humano o un factor de crecimiento nervioso humano recombinante.

12. La composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada por que en dicha composición de factor de crecimiento nervioso:

la concentración masa-volumen de dicho factor de crecimiento nervioso es de 50 pg/ml;

la concentración masa-volumen de dicho estabilizador de disacárido es de 30 mg/ml, la concentración masavolumen de dicho estabilizador de aminoácido es de 10 mg/ml;

la concentración masa-volumen de dicho tensioactivo es de 0,5 mg/ml;

la concentración masa-volumen de dicho agente de soporte es de 20 mg/ml;

la concentración molar de dicho tampón de pH es de 20 mM.

13. Un método para la preparación de una composición de factor de crecimiento nervioso en forma de polvo para inyección, caracterizado por que la composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 se liofiliza para obtener dicha composición de factor de crecimiento nervioso en forma de polvo para inyección.

14. Una composición de factor de crecimiento nervioso en forma de polvo para inyección preparada mediante el método de acuerdo con la reivindicación 13.

15. Una composición de factor de crecimiento nervioso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en el tratamiento de una lesión nerviosa, en donde la lesión nerviosa puede ser una lesión del nervio óptico.