ES2882520T3 - Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso - Google Patents

Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso Download PDF

Info

Publication number
ES2882520T3
ES2882520T3 ES18205668T ES18205668T ES2882520T3 ES 2882520 T3 ES2882520 T3 ES 2882520T3 ES 18205668 T ES18205668 T ES 18205668T ES 18205668 T ES18205668 T ES 18205668T ES 2882520 T3 ES2882520 T3 ES 2882520T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
immunoglobulin
oxyntomodulin
seq
region
oxyntomodulin derivative
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18205668T
Other languages
English (en)
Inventor
Sung Youb Jung
Dae Jin Kim
Sung Hee Park
Young Eun Woo
In Young Choi
Se Chang Kwon
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hanmi Science Co Ltd
Original Assignee
Hanmi Science Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47357296&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2882520(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hanmi Science Co Ltd filed Critical Hanmi Science Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2882520T3 publication Critical patent/ES2882520T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Un conjugado que comprende: un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 32-34, 2-23 o 27-31; una región Fc de inmunoglobulina; y un polímero no peptidílico, en donde el polímero no peptidílico une covalentemente la oxintomodulina y la región Fc de inmunoglobulina.

Description

DESCRIPCIÓN
Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso
[Campo Técnico]
La presente invención se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y su uso. Más particularmente, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico en donde el conjugado puede obtenerse mediante la unión covalente de oxintomodulina a una región Fc de inmunoglobulina mediante un polímero no peptidílico, y una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprende el conjugado.
[Antecedentes]
Recientemente, el crecimiento económico y los cambios en el estilo de vida han provocado cambios en los hábitos alimentarios. Las principales causas del aumento de las tasas de sobrepeso y obesidad en la población contemporánea son el consumo de alimentos ricos en calorías, tales como las comidas rápidas, y la falta de ejercicio. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que más de mil millones de personas en todo el mundo tienen sobrepeso y al menos 300 millones de ellas son clínicamente obesas. En particular, 250 000 personas mueren cada año en Europa y más de 2,5 millones de personas en todo el mundo mueren cada año como resultado del sobrepeso (Organización Mundial de la Salud, Estrategia mundial sobre Dieta, Actividad Física y Salud, 2004).
El sobrepeso y la obesidad aumentan la presión arterial y los niveles de colesterol para provocar la aparición o exacerbación de diversas enfermedades tales como las enfermedades cardiovasculares, la diabetes y la artritis, y también son las principales causas del aumento de las tasas de incidencia de arteriosclerosis, hipertensión, hiperlipidemia o enfermedades cardiovasculares en niños o adolescentes así como también en adultos.
La obesidad es una afección grave que provoca diversas enfermedades en todo el mundo. Se cree que se supera con esfuerzos individuales y también se cree que los pacientes obesos carecen de autocontrol. Sin embargo, es difícil tratar la obesidad, porque la obesidad es un trastorno complejo que involucra la regulación del apetito y el metabolismo energético. Para el tratamiento de la obesidad, las acciones anormales asociadas con la regulación del apetito y el metabolismo energético deben tratarse junto con los esfuerzos de los pacientes obesos. Se han realizado muchos intentos para desarrollar fármacos capaces de tratar las acciones anormales. Como resultado de estos esfuerzos, se han desarrollado fármacos tales como Rimonabant (Sanofi-Aventis), Sibutramin (Abbott), Contrave (Takeda) y Orlistat (Roche), pero tienen las desventajas de efectos adversos graves o efectos contra la obesidad muy débiles. Por ejemplo, se informó que Rimonabant (Sanofi-Aventis) muestra un efecto secundario del trastorno del nervio central, Sibutramina (Abbott) y Contrave (Takeda) muestran efectos secundarios cardiovasculares, y Orlistat (Roche) muestra solo 4 kg de pérdida de peso cuando se toma durante 1 año. Desafortunadamente, no existen agentes terapéuticos para la obesidad que se puedan recetar de forma segura a pacientes obesos.
Se han realizado muchos estudios para desarrollar agentes terapéuticos contra la obesidad que no tengan los problemas de los fármacos convencionales contra la obesidad. Recientemente, se ha prestado mucha atención a los derivados del glucagón. El páncreas produce glucagón cuando el nivel de glucosa en la sangre desciende como resultado de otros medicamentos o enfermedades, deficiencias hormonales o enzimáticas. El glucagón estimula la degradación del glucógeno en el hígado y facilita la liberación de glucosa para elevar los niveles de glucosa en sangre a un intervalo normal. Adicionalmente al efecto de aumentar el nivel de glucosa en sangre, el glucagón suprime el apetito y activa la lipasa sensible a hormonas (HSL) de los adipocitos para facilitar la lipólisis, por consiguiente muestra efectos contra la obesidad. Uno de los derivados del glucagón, el péptido similar al glucagón-1 (GLP-1) está en desarrollo como agente terapéutico para la hiperglucemia en pacientes con diabetes, y funciona para estimular la síntesis y secreción de insulina, inhibir la secreción de glucagón, retardar el vaciamiento gástrico, para aumentar la utilización de glucosa e inhibir la ingesta de alimentos. La exendina-4 se aísla del veneno de lagarto que comparte aproximadamente un 50 % de homología de aminoácidos con GLP-1 y también se informa que activa el receptor de GLP-1, por consiguiente se mejora la hiperglucemia en pacientes con diabetes. Sin embargo, se informa que los fármacos contra la obesidad que incluyen el GLP-1 muestran efectos secundarios tales como vómitos y náuseas.
Como una alternativa al GLP-1, por lo tanto, se ha prestado mucha atención a la oxintomodulina, un péptido derivado de un precursor del glucagón, el preglucagón, que se une a los receptores de dos péptidos, GLP-1 y glucagón. La oxintomodulina representa una potente terapia contra la obesidad, ya que inhibe la ingesta de alimentos como el GLP-1, promueve la saciedad y tiene una actividad lipolítica como el glucagón.
Basado en la función dual del péptido oxintomodulina, se ha estudiado activamente como fármaco para el tratamiento de la obesidad. Por ejemplo, la patente coreana núm. 925017 describe una composición farmacéutica que incluye oxintomodulina como ingrediente activo para el tratamiento de personas con sobrepeso, que se administra por vía oral, parenteral, mucosal, rectal, subcutánea o transdérmica. Otro ejemplo es el documento WO 2007/100535 A2, que describe variantes de oxintomodulina para el tratamiento de la obesidad.
Sin embargo, se ha informado de que este fármaco contra la obesidad que incluye oxintomodulina tiene una vida media in vivo corta y una eficacia terapéutica débil, aunque se administra en una dosis alta tres veces al día. Por tanto, se han realizado muchos esfuerzos para mejorar la vida media in vivo o el efecto terapéutico de la oxintomodulina sobre la obesidad mediante su modificación.
Por ejemplo, se prepara un agonista dual de oxintomodulina (Merck) por sustitución de L-serina con D-serina en la posición 2 de la oxintomodulina para aumentar la resistencia a la dipeptidil peptidasa-IV (DPP-IV) y por unión de un resto de colesterol en el C- terminal para aumentar la vida media en sangre al mismo tiempo. ZP2929 (Zelanda) se prepara por sustitución de L-serina con D-serina en la posición 2 para mejorar la resistencia a DPP-IV, sustitución de arginina con alanina en la posición 17 para mejorar la resistencia a la proteasa, por sustitución de metionina con lisina en la posición 27 para mejorar la estabilidad oxidativa y sustitución de glutamina con ácido aspártico y alanina en las posiciones 20 y 24 y asparagina con serina en la posición 28 para mejorar la estabilidad de desamidación. Sin embargo, a pesar de que la vida media del agonista dual oxintomodulina (Merck) se mejoró para mostrar una vida media de 8~12 minutos más que la oxintomodulina nativa, todavía tiene una vida media in vivo muy corta de 1,7 h y su dosis de administración también es tan alta como varios mg/kg. Desafortunadamente, la oxintomodulina o sus derivados tienen desventajas como la administración diaria de dosis altas debido a la corta vida media y baja eficacia.
[Descripción]
[Problema Técnico]
Por consiguiente, los presentes inventores han realizado muchos esfuerzos para desarrollar un método para aumentar la vida media en sangre de la oxintomodulina mientras se mantiene su actividad in vivo. Como resultado, encontraron que un conjugado preparado mediante la unión de un portador a la oxintomodulina con el uso de un polímero no peptidílico muestra una vida media en sangre mejorada mientras mantiene la actividad in vivo para exhibir excelentes efectos contra la obesidad, y completar así la presente invención.
[Solución técnica]
Un objetivo de la presente invención es proporcionar un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico en donde el conjugado puede obtenerse mediante la unión covalente de oxintomodulina a una región Fc de inmunoglobulina mediante un polímero no peptidílico.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad, que comprende los conjugados.
Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar un método para prevenir o tratar la obesidad, que comprende la etapa de administrar el conjugado o la composición a un sujeto.
Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar el uso del conjugado o la composición en la preparación de fármacos para la prevención o el tratamiento de la obesidad
Para el propósito de la presente invención, el conjugado es un conjugado que comprende un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 32-34, 2-23 o 27-31; una región Fc de inmunoglobulina, y un polímero no peptidílico, en donde el polímero no peptidílico une covalentemente la oxintomodulina y la región Fc de inmunoglobulina.
[Efectos ventajosos]
El conjugado que comprende oxintomodulina y el Fc de inmunoglobulina de la presente invención reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciamiento gástrico y facilita la lipólisis sin efectos secundarios, a diferencia de la oxintomodulina nativa, y también muestra excelentes efectos activadores de receptores y sostenibilidad a largo plazo, en comparación con la oxintomodulina. Por tanto, puede usarse ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia. A diferencia de la oxintomodulina nativa, el péptido novedoso de la presente invención reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciamiento gástrico y facilita la lipólisis sin efectos secundarios, y también muestra excelentes efectos activadores de receptores. Por tanto, puede usarse ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia.
[Descripción de los Dibujos]
La Figura 1 es un gráfico que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la dosis de administración de oxintomodulina o derivado de oxintomodulina.
La Figura 2a es un gráfico que muestra el resultado de purificar oxintomodulina monoPEGilada a través de una columna de purificación SO URCE S.
La Figura 2b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de oxintomodulina monoPEGilada purificada.
La Figura 2c es un gráfico que muestra el resultado de la purificación de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
La Figura 3a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 29) a través de una columna de purificación SO U RCE S.
La Figura 3b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
La Figura 4a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 30) a través de una columna de purificación SO U RCE S.
La Figura 4b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 30).
La Figura 4c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
La Figura 5a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 31) a través de una columna de purificación SO U RCE S.
La Figura 5b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
La Figura 6a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 2) a través de una columna de purificación SO URCE S.
La Figura 6b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 2).
La Figura 6c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
La Figura 6d es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO. La Figura 7a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 3) a través de una columna de purificación SO URCE S.
La Figura 7b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 3).
La Figura 7c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Butil FF. La Figura 7d es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source 15Q.
La Figura 8a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 23) a través de una columna de purificación SO U RCE S;
La Figura 8b es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source La Figura 8c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE ISO;
La Figura 9a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 24) a través de una columna de purificación SO U RCE S;
La Figura 9b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source 15Q;
La Figura 9c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE ISO;
La Figura 10a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 25) a través de una columna de purificación SO U RCE S;
La Figura 10b es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source 15Q;
La Figura 10c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE ISO;
La Figura 11a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 28) a través de una columna de purificación SO U RCE S;
La Figura 11b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source 15Q;
La Figura 11c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE ISO;
La Figura 12 es un gráfico que muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administración de los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
La Figura 13 es un gráfico que muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administración de conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
[Mejor modo]
En un aspecto para lograr los objetivos anteriores, la presente invención proporciona un conjugado que comprende oxintomodulina, una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico en donde el conjugado puede obtenerse mediante la unión covalente de la oxintomodulina a una región Fc de inmunoglobulina mediante un polímero no peptidílico
Para el propósito de la presente invención, el conjugado es un conjugado que comprende un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 32-34, 2-23 o 27-31; una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidílico, en donde el polímero no peptidílico une covalentemente la oxintomodulina a la región Fc de inmunoglobulina.
Como se usa en la presente descripción, el término "conjugado" significa un conjugado que comprende oxintomodulina y otros factores. Otros factores pueden ser cualquier sustancia que pueda inducir una mayor estabilidad en la sangre, suspender la emisión a través del riñón u otros efectos útiles. En la presente invención, los factores son la región Fc de inmunoglobulina. El conjugado está compuesto por una oxintomodulina y una región Fc de inmunoglobulina, que están unidas por un polímero no peptidílico. El polímero no peptidílico puede unir una oxintomodulina y una región Fc de inmunoglobulina a través de enlaces covalentes. Los dos extremos terminales del polímero no peptidílico se pueden unir a un grupo amino o un grupo tiol de la región Fc de inmunoglobulina y de derivados de oxintomodulina, respectivamente.
El conjugado de la presente invención significa tener una duración de la eficacia in vivo mejorada, en comparación con la oxintomodulina nativa, y el conjugado de acción prolongada puede incluir oxintomodulina preparada por modificación, sustitución, adición o eliminación de las secuencias de aminoácidos de la oxintomodulina nativa, oxintomodulina conjugada con un polímero biodegradable como polietilenglicol (PEG), oxintomodulina conjugada con una proteína de acción prolongada como albúmina o inmunoglobulina, oxintomodulina conjugada con ácido graso que tiene la capacidad de unirse a la albúmina en el cuerpo, u oxintomodulina encapsulada en nanopartículas biodegradables, pero el tipo de conjugado de acción prolongada no se limita a estos.
Como se usa en la presente descripción, el término "oxintomodulina" se refiere a un péptido derivado de un precursor de glucagón, pre-glucagón, e incluye una oxintomodulina nativa, precursores, derivados, fragmentos de estos y variantes de estos. Preferentemente, puede tener la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 1 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQW LM NTKRNRNNIA).
El término "variante de oxintomodulina" es un péptido que tiene una o más secuencias de aminoácidos diferentes de las de la oxintomodulina nativa, y se refiere a un péptido que retiene la función de activar los receptores de GLP-1 y glucagón, y puede prepararse mediante una cualquiera de sustitución, adición, eliminación y modificación o mediante una combinación de estas en una parte de las secuencias de aminoácidos de la oxintomodulina nativa.
El término "derivado de oxintomodulina" incluye péptidos, derivados de péptidos o miméticos de péptidos que se preparan mediante adición, eliminación o sustitución de aminoácidos de la oxintomodulina para activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón a un nivel alto, en comparación con la oxintomodulina nativa.
El término "fragmento de oxintomodulina" significa un fragmento que tiene uno o más aminoácidos añadidos o eliminados en el extremo N terminal o en el extremo C terminal de la oxintomodulina nativa, en el que se pueden añadir aminoácidos no naturales (por ejemplo, aminoácidos de tipo D)) y tiene la función de activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón.
Cada uno de los métodos de preparación de las variantes, derivados y fragmentos de oxintomodulina puede usarse individualmente o en combinación. Por ejemplo, la presente invención incluye un péptido que tiene uno o más aminoácidos diferentes de los del péptido nativo y una desaminación del residuo de aminoácido N-terminal y tiene la función de activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón.
Los aminoácidos mencionados en la presente descripción se abrevian de acuerdo con las reglas de nomenclatura de IUPAC-IUB de la siguiente manera:
Alanina A Arginina R
Asparagina N Ácido aspártico D
Cisteína C Ácido glutámico E
Glutamina Q Glicina G
Histidina H Isoleucina I
Leucina L Lisina K
Metionina M Fenilalanina F
Prolina P Serina S
Treonina T Triptófano W
Tirosina Y Valina V
En la presente invención, el derivado de oxintomodulina abarca cualquier péptido que se prepare mediante sustituciones, adiciones, eliminaciones o modificaciones postraduccionales (por ejemplo, metilación, acilación, ubiquitinación, enlace covalente intramolecular) en la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQW LM NTKRNRNNIA, SEQ ID NO. 1) para activar los receptores de glucagón y GLP-1 al mismo tiempo. Tras la sustitución o la adición de aminoácidos, pueden usarse cualquiera de los 20 aminoácidos que se encuentran comúnmente en las proteínas humanas, así como aminoácidos atípicos o no naturales. Las fuentes de aminoácidos atípicos disponibles en el mercado incluyen Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. y Genzyme Pharmaceuticals. Los péptidos que incluyen estos aminoácidos y las secuencias de péptidos atípicos pueden sintetizarse y comprarse a proveedores comerciales, por ejemplo, American Peptide Company o Bachem (Estados Unidos) o Anygen (Corea).
En una modalidad específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un péptido novedoso que incluye los aminoácidos de la siguiente Fórmula 1.
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21 -X22-X23-X24-R2 (Fórmula 1)
en donde R1 es histidina, desamino-histidilo, dimetil-histidilo (N-dimetil-histidilo), betahidroxiimidazopropionilo, 4-imidazoacetilo, beta-carboxiimidazopropionilo otirosina;
X I es Aib (ácido aminosiobutírico), d-alanina, glicina, Sar(N-metilglicina), serina o d-serina;
X2 es ácido glutámico o glutamina;
X3 es leucina o tirosina;
X4 es serina o alanina;
X5 es lisina o arginina;
X6 es glutamina o tirosina;
X7 es leucina o metionina;
X8 es ácido aspártico o ácido glutámico;
X9 es ácido glutámico, serina, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina, serina o se elimina;
X I I es alanina, arginina, valina o se elimina;
X12 es alanina, arginina, serina, valina o se elimina;
X13 es lisina, glutamina, arginina, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X14 es ácido aspártico, ácido glutámico, leucina o se elimina;
X15 es fenilalanina o se elimina;
X16 es isoleucina, valina o se elimina;
X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, lisina, glutamina, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X18 es triptófano o se elimina;
X19 es alanina, isoleucina, leucina, serina, valina o se elimina;
X20 es alanina, lisina, metionina, glutamina, arginina o se elimina;
X21 es asparagina o se elimina;
X22 es alanina, glicina, treonina o se elimina;
X23 es cisteína, lisina o se elimina;
X24 es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consisten en combinaciones de alanina, glicina y serina o se elimina; y
R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), G PSSG A PPPS (SEQ ID NO. 36), G PSSG A PPPSK (SEQ ID NO. 37), H SQ G TFTSD YSKYLD (SEQ ID NO. 38), H SQ G TFTSD YSRYLD K (SEQ ID NO. 39), H G EG TFTSD LSKQ M EEEAVK (SEQ ID NO. 40) o se elimina (excepto si la secuencia de aminoácidos de la Fórmula 1 es idéntica a la de la SEQ ID NO. 1)
En cualquier caso, para el propósito de la presente invención, el derivado de oxintomodulina comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 32-34, 2-23 o 27-31.
Con el fin de mejorar la actividad de la oxintomodulina de tipo salvaje para el receptor de glucagón y el receptor de GLP-1, el péptido de la presente invención puede sustituirse con 4-imidazoacetilo donde el carbono alfa de la histidina en la posición 1 de la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO. 1 se elimina, desaminohistidilo donde el grupo amino N-terminal se elimina, dimetil-histidilo (N-dimetil-histidilo) donde el grupo amino N-terminal se modifica con dos grupos metilo, beta-hidroxi imidazopropionilo donde el grupo amino N-terminal se sustituye con un grupo hidroxilo, o beta-carboxi imidazopropionilo donde el grupo amino N-terminal se sustituye con un grupo carboxilo. Además, la región de unión al receptor de GLP-1 puede estar sustituida con aminoácidos que mejoran los enlaces hidrófobos e iónicos o combinaciones de estos. Una parte de la secuencia de oxintomodulina puede estar sustituida con la secuencia de aminoácidos de GLP-1 o Exendina-4 para aumentar la actividad en el receptor de GLP-1.
Además, una parte de la secuencia de oxintomodulina puede sustituirse con una secuencia que estabiliza la hélice alfa. Preferentemente, los aminoácidos en las posiciones 10, 14, 16, 20, 24 y 28 de la secuencia de aminoácidos de la Fórmula 1 pueden sustituirse con aminoácidos o derivados de aminoácidos que consisten en Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4-NO2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-tienilo) y Ala(benzotienilo) que se sabe que estabilizan la hélice alfa, y no existen limitaciones para el tipo y la cantidad de aminoácidos o derivados de aminoácidos estabilizadores de la hélice alfa a insertar. Preferentemente, los aminoácidos en las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 también pueden sustituirse con ácido glutámico o lisina, respectivamente, para formar anillos, y no existen limitaciones de la cantidad de anillos a insertar. Con la máxima preferencia, el péptido puede ser un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de las siguientes Fórmulas 1 a 6.
En una modalidad específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un péptido novedoso que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 2 donde la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina se sustituye con la de la exendina o GLP-1.
R1-A-R3 (Fórmula 2)
En otra modalidad específica, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un péptido novedoso que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 3, que se prepara mediante la unión de una parte de la secuencia de aminoácidos de oxintomodulina y una parte de la secuencia de aminoácidos de exendina o GLP-1 a través de un enlazador de aminoácidos adecuado.
R1-BC-R4 (Fórmula 3)
En otra modalidad específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un péptido novedoso que incluye la secuencia de aminoácidos de la siguiente Fórmula 4, en donde una parte de la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina se sustituye con un aminoácido que puede aumentar la afinidad de unión al receptor de GLP-1, por ejemplo, la Leu en la posición 26 que se une con el receptor de GLP-1 mediante interacción hidrófoba se sustituye con el residuo hidrófobo Ile o Val.
R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 (Fórmula 4)
En otra modalidad específica más, el derivado de oxintomodulina de la presente invención es un péptido novedoso que incluye la siguiente Fórmula 5, en donde una parte de la secuencia de aminoácidos se elimina, añade o sustituye con otro aminoácido con el fin de aumentar las actividades de la oxintomodulina nativa en el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón.
R1-E1-QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLMNT-E7-R5 (Fórmula 5)
En las Fórmulas 2 a 5, R1 es el mismo que en la descripción de la Fórmula 1;
A se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQW LM NT (SEQ ID NO. 41), SQ G TFTSD YSKYLD EEAVRLFIEW LM N T (SEQ ID NO. 42), SQ G TFTSDYSKYLDERRAQ DFVAW LKN T (SEQ ID NO. 43), G Q G TFTSD YSRYLEEEA VRLFIEW LKN G (SEQ ID NO. 44), G Q GTFTSD YSRQ M EEEAVRLFIEW LKN G (SEQ ID NO. 45), G EG TFTSD LSRQ M EEEAVRLFIEW AA (SEQ ID NO. 46) y SQ GTFTSDYSRQ M EEEAVRLFIEW LM N G (SEQ ID NO. 47);
B se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQW LM NT (SEQ ID NO. 41), SQ G TFTSD YSKYLD EEAVRLFIEW LM N T (SEQ ID NO. 42), SQ G TFTSDYSKYLDERRAQ DFVAW LKN T (SEQ ID NO. 43), G Q G TFTSD YSRYLEEEA VRLFIEW LKN G (SEQ ID NO. 44), G Q GTFTSD YSRQ M EEEAVRLFIEW LKN G (SEQ ID NO. 45), G EG TFTSD LSRQ M EEEAVRLFIEW AA (SEQ ID NO. 46), SQ G TFTSDYSRQ M EEEAVRLFIEW LM N G (SEQ ID NO. 47), G EG TFTSD LSRQ M EEEA V RLFIEW (SEQ ID NO. 48) y SQ G TFTSD YSRYLD (SEQ ID NO. 49);
C es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consisten en combinaciones de alanina, glicina y serina;
D1 es serina, ácido glutámico o arginina;
D2 es arginina, ácido glutámico o serina;
D3 es arginina, alanina o valina;
D4 es arginina, valina o serina;
D5 es glutamina, arginina o lisina;
D6 es isoleucina, valina o serina;
D7 es metionina, arginina o glutamina;
D8 es treonina, glicina o alanina;
E1 es serina, Aib, Sar, d-alanina o d-serina;
E2 es serina o ácido glutámico;
E3 es arginina o lisina;
E4 es glutamina o lisina;
E5 es ácido aspártico o ácido glutámico;
E6 es glutamina, cisteína o lisina;
E7 es cisteína, lisina o se elimina;
R3 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), G PSSG A PPPS (SEQ ID NO. 36) o G PSSG A PPPSK (SEQ ID NO. 37); R4 es HSQ G TFTSD YSKYLD (SEQ ID NO. 38), H SQ G TFTSD YSRYLD K (SEQ ID NO. 39) o H G EG TFTSD LSKQ M EEEAVK (SEQ ID NO. 40); y,
R5 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), G PSSG A PPPS (SEQ ID NO. 36), G PSSG A PPPSK (SEQ ID NO. 37) o se elimina (excepto si las secuencias de aminoácidos de las Fórmulas de 2 a 5 son idénticas a las de la SEQ ID NO. 1).
Preferentemente, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un péptido novedoso de la siguiente Fórmula 6.
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21 -X22-X23-X24-R2 (Fórmula 6)
en donde R1 es histidina, desamino-histidilo, 4-imidazoacetilo otirosina;
X I es Aib (ácido aminosiobutírico), glicina o serina;
X2 es ácido glutámico o glutamina;
X3 es leucina o tirosina;
X4 es serina o alanina;
X5 es lisina o arginina;
X6 es glutamina o tirosina;
X7 es leucina o metionina;
X8 es ácido aspártico o ácido glutámico;
X9 es ácido glutámico, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X10 es glutamina, ácido glutámico, lisina, arginina o se elimina;
X I I es alanina, arginina o se elimina;
X12 es alanina, valina o se elimina;
X13 es lisina, glutamina, arginina, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X14 es ácido aspártico, ácido glutámico, leucina o se elimina;
X15 es fenilalanina o se elimina;
X16 es isoleucina, valina o se elimina;
X17 es alanina, cisteína, ácido glutámico, glutamina, ácido alfa-metil-glutámico o se elimina;
X18 es triptófano o se elimina;
X19 es alanina, isoleucina, leucina, valina o se elimina;
X20 es alanina, lisina, metionina, arginina o se elimina;
X21 es asparagina o se elimina;
X22 es treonina o se elimina;
X23 es cisteína, lisina o se elimina;
X24 es un péptido que tiene de 2 a 10 aminoácidos que consiste en glicina o se elimina; y
R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), G PSSG A PPPS (SEQ ID NO. 36), G PSSG A PPPSK (SEQ ID NO. 37), H SQ G TFTSD YSKYLD (SEQ ID NO. 38), H SQ G TFTSD YSRYLD K (SEQ ID NO. 39), H G EG TFTSD LSKQ M EEEAVK (SEQ ID NO. 40) o se elimina (excepto si la secuencia de aminoácidos de la Fórmula 6 es idéntica a la de la SEQ ID NO. 1)
Con mayor preferencia, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede seleccionarse del grupo que consiste en los péptidos de las SEQ ID NO. 2 a 34. Aun con mayor preferencia, el derivado de oxintomodulina de la presente invención puede ser un derivado de oxintomodulina descrito en la Tabla 1 del Ejemplo 2-1.
La oxintomodulina tiene las actividades de dos péptidos, GLP-1 y glucagón. El GLP-1 disminuye la glucosa en sangre, reduce la ingesta de alimentos y suprime el vaciado gástrico, y el glucagón aumenta la glucosa en sangre, facilita la lipólisis y disminuye el peso corporal al aumentar el metabolismo energético. Los diferentes efectos biológicos de los dos péptidos pueden causar efectos no deseados como aumentar la glucosa en sangre si el glucagón muestra un efecto más dominante que el GLP-1, o causar náuseas y vómitos si el GLP-1 muestra un efecto más dominante que el glucagón. Por ejemplo, el conjugado que se produjo en el Ejemplo 10 a continuación mostró mayor afinidad por el receptor de GLP-1 que el producido en el Ejemplo 12, pero la eficacia del primero fue menor que la del último como se muestra en el experimento in vivo del Ejemplo 18. Esto podría deberse a la mayor eficacia de los conjugados en relación con el receptor de glucagón en el Ejemplo 12 a pesar de su baja eficacia en relación con el receptor de GLP-1. Por lo tanto, los derivados de oxintomodulina y sus conjugados de la presente invención no se limitan a aquellos derivados que muestran un aumento incondicional de actividades. Por ejemplo, los aminoácidos se pueden modificar en las posiciones 1 y 11 de la oxintomodulina, que se sabe que suprimen la actividad del glucagón, para controlar la relación de actividad entre el glucagón y el GLP-1.
Los conjugados de la presente invención pueden inducir una mayor estabilidad en la sangre, suspender la emisión a través del riñón y cambiar la afinidad por los receptores mediante la unión de un portador a la oxintomodulina a través de un enlace covalente o la formación de microesferas. El portador que puede formar un conjugado que contiene oxintomodulina se puede seleccionar del grupo que consiste en albúmina, transferrina, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, elastina, heparina, polisacárido como quitina, fibronectina y más favorablemente una región Fc de inmunoglobulina, todos los cuales pueden aumentar la vida media en sangre de los conjugados cuando se unen a la oxintomodulina.
El término "región Fc de inmunoglobulina" como se usa en la presente descripción, se refiere a una proteína que contiene la región constante de cadena pesada 2 (CH2) y la región constante de cadena pesada 3 (CH3) de una inmunoglobulina, excluidas las regiones variables de las cadenas pesada y ligera, la región constante de cadena pesada 1 (CHI) y la región constante de cadena ligera 1 (CL1) de la inmunoglobulina. Puede incluir además una región bisagra en la región constante de cadena pesada. Además, la región Fc de inmunoglobulina de la presente invención puede contener una parte o la totalidad de la región Fc que incluye la región constante de cadena pesada 1 (CHI) y/o la región constante de cadena ligera 1 (CL1), excepto las regiones variables de las cadenas pesada y ligera, siempre y cuando tenga una función fisiológica sustancialmente similar o mejor que la de la proteína nativa. Además, la región Fc de inmunoglobulina puede ser un fragmento que tiene una eliminación en una porción relativamente larga de la secuencia de aminoácidos de CH2 y/o CH3. Es decir, la región Fc de inmunoglobulina de la presente invención puede comprender 1) un dominio CH1, un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4, 2) un dominio CH1 y un dominio CH2, 3) un dominio CH1 y un dominio CH3, 4) un dominio CH2 y un dominio CH3, 5) una combinación de uno o más dominios y una región bisagra de inmunoglobulina (o una porción de la región bisagra), y 6) un dímero de cada dominio de las regiones constantes de cadena pesada y la región constante de cadena ligera.
La región Fc de inmunoglobulina de la presente invención incluye una secuencia de aminoácidos nativa y un derivado de secuencia (mutante) de la misma. Un derivado de la secuencia de aminoácidos es una secuencia que es diferente de la secuencia de aminoácidos nativa debido a una eliminación, una inserción, una sustitución conservadora o no conservadora o combinaciones de estas de uno o más de los residuos de aminoácidos. Por ejemplo, en un Fc de IgG, los residuos de aminoácidos que se conoce que son importantes en la unión, en las posiciones 214 a 238, 297 a 299, 318 a 322 o 327 a 331, pueden usarse como un objetivo adecuado para la modificación.
Además, son posibles otros diversos derivados, incluido uno en el que se elimina una región que puede formar un enlace disulfuro, o se eliminan ciertos residuos de aminoácidos en el extremo N-terminal de una forma Fc nativa o se le añade un residuo de metionina. Además, para eliminar las funciones efectoras, puede ocurrir una eliminación en un sitio de unión al complemento, tal como un sitio de unión a C1q y un sitio ADCC (citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos). Las técnicas para preparar tales derivados de secuencia de la región Fc de inmunoglobulina se describen en los documentos núms. WO 97/34631 y WO 96/32478.
Los intercambios de aminoácidos en proteínas y péptidos, que generalmente no alteran la actividad de las proteínas o péptidos, son conocidos en la técnica (H. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, Nueva York, 1979). Los intercambios más comunes son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu y Asp/Gly, en ambas direcciones. Además, la región Fc, si es conveniente, puede modificarse mediante fosforilación, sulfatación, acrilación, glicosilación, metilación, farnesilación, acetilación, amidación y similares.
Los derivados de Fc antes mencionados son derivados que tienen una actividad biológica idéntica a la región Fc de la presente invención o una estabilidad estructural mejorada, por ejemplo, frente al calor, pH o similares.
Además, estas regiones Fc pueden obtenerse a partir de formas nativas aisladas de seres humanos y otros animales incluidos vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y cobayas, o pueden ser recombinantes o derivadas de estas, obtenidas de células animales o microorganismos transformados. En este documento, pueden obtenerse a partir de una inmunoglobulina nativa mediante el aislamiento de inmunoglobulinas completas de organismos humanos o animales y su tratamiento con una enzima proteolítica. La papaína digiere la inmunoglobulina nativa en las regiones Fab y Fc, y el tratamiento con pepsina da como resultado la producción de fragmentos pF'c y F(ab)2. Estos fragmentos pueden someterse, por ejemplo, a cromatografía de exclusión por tamaño para aislar Fc o pF'c. Preferentemente, una región Fc de origen humano es una región Fc de inmunoglobulina recombinante que se obtiene a partir de un microorganismo.
Además, la región Fc de inmunoglobulina de la presente invención puede estar en una forma que tiene cadenas de azúcar nativas, cadenas de azúcar aumentadas en comparación con una forma nativa o cadenas de azúcar disminuidas en comparación con la forma nativa, o puede estar en una forma desglicosilada. El aumento, la disminución o la eliminación de las cadenas de azúcar del Fc de inmunoglobulina puede lograrse mediante métodos conocidos en la técnica, tales como un método químico, un método enzimático y un método de ingeniería genética mediante el uso de un microorganismo. La eliminación de las cadenas de azúcar de una región Fc da como resultado una fuerte disminución de la afinidad de unión a la parte C1q del cebador componente C1 del complemento y una disminución o pérdida de la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos o la citotoxicidad dependiente del complemento, por lo que no induce respuestas inmunitarias innecesarias in vivo. A este respecto, una región Fc de inmunoglobulina en una forma desglicosilada o aglicosilada puede ser más adecuada para el objetivo de la presente invención como un portador farmacológico.
Como se usa en la presente descripción, el término "desglicosilación" se refiere a la eliminación enzimática de restos de azúcar de una región Fc, y el término "aglicosilación" se refiere a que una región Fc es producida de forma no glicosilada por un procariota, preferentemente E. coli.
Mientras tanto, la región Fc de inmunoglobulina puede derivarse de seres humanos u otros animales que incluyen vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y cobayas, y preferentemente de seres humanos.
Además, la región Fc de inmunoglobulina puede ser una región Fc que se deriva de IgG, IgA, IgD, IgE e IgM, o que se obtiene mediante combinaciones de estos, o híbridos de estos. Preferentemente, se deriva de IgG o IgM, que se encuentran entre las proteínas más abundantes en la sangre humana, y con la máxima preferencia de IgG que se sabe que mejora la vida media de las proteínas de unión a ligando.
Por otra parte, el término "combinación", como se usa en la presente descripción, significa que los polipéptidos que codifican regiones Fc de inmunoglobulina monocatenarias del mismo origen se unen a un polipéptido monocatenario de un origen diferente para formar un dímero o multímero. Es decir, puede formarse un dímero o multímero a partir de dos o más fragmentos que se seleccionan del grupo que consiste en los fragmentos Fc de IgG, Fc de IgA, Fc de IgM, Fc de IgD y Fc de IgE.
El término "polímero no peptidílico" se refiere a un polímero biocompatible que incluye dos o más unidades repetitivas unidas entre sí mediante cualquier enlace covalente en lugar de un enlace peptídico. En la presente invención, el polímero no peptidílico puede usarse de manera intercambiable con el enlazador no peptidílico.
El polímero no peptidílico útil en la presente invención puede seleccionarse del grupo que consiste en un polímero biodegradable, un polímero lipídico, quitina, ácido hialurónico y una combinación de estos, y preferentemente, el polímero biodegradable puede ser polietilenglicol, polipropilenglicol, copolímero de etilenglicol-propilenglicol, poliol polioxietilado, alcohol polivinílico, polisacárido, dextrano, éter poliviniletílico, ácido poliláctico (PLA) o ácido poliláctico-glicólico (PLGA), y con mayor preferencia, es polietilenglicol (PEG ). Además, sus derivados conocidos en la técnica y los derivados que pueden prepararse fácilmente mediante un método conocido en la técnica pueden incluirse en el alcance de la presente invención.
El enlazador peptídico que se usa en una proteína de fusión obtenida mediante un método convencional de fusión en marco tiene inconvenientes en el sentido de que es fácilmente escindido in vivo por una enzima proteolítica y, por lo tanto, no puede obtenerse un efecto suficiente de aumentar la vida media en suero del fármaco activo por un portador como se esperaba. Sin embargo, en la presente invención, el polímero que tiene resistencia a la enzima proteolítica puede usarse para mantener la vida media del péptido en el suero similar al portador. Por lo tanto, cualquier polímero no peptidílico puede usarse sin limitación, siempre que sea un polímero que tenga la función mencionada anteriormente, es decir, un polímero que tenga resistencia a la enzima proteolítica in vivo. El polímero no peptidílico tiene un peso molecular en el intervalo de 1 a 100 kDa, y preferentemente de 1 a 20 kDa. El polímero no peptidílico de la presente invención, que se une a la región Fc de inmunoglobulina, puede ser un polímero o una combinación de diferentes tipos de polímeros.
El polímero no peptidílico que se usa en la presente invención tiene un grupo reactivo que puede unirse a la región Fc de inmunoglobulina y al fármaco proteico. El polímero no peptidílico tiene un grupo reactivo en ambos extremos, que se selecciona preferentemente del grupo que consiste en un aldehído reactivo, un propionaldehído, un butiraldehído, una maleimida y un derivado de succinimida. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, hidroxi succinimidilo, succinimidil carboximetilo o carbonato de succinimidilo. En particular, cuando el polímero no peptidílico tiene un grupo aldehído reactivo en ambos extremos de este, es eficaz para unirse en ambos extremos con un polipéptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina con reacciones no específicas mínimas. Un producto final generado por alquilación reductora con un enlace aldehído es mucho más estable que el que está unido por un enlace amida. El grupo reactivo aldehído se une selectivamente a un extremo N-terminal a un pH bajo y se une a un residuo de lisina para formar un enlace covalente a un pH alto, tal como pH 9,0. Los grupos reactivos en ambos extremos del polímero no peptidílico pueden ser iguales o diferentes. Por ejemplo, el polímero no peptidílico puede poseer un grupo maleimida en un extremo, y un grupo aldehído, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Cuando se usa un polietilenglicol que tiene un grupo hidroxilo reactivo en ambos extremos de este como el polímero no peptidílico, el grupo hidroxilo puede activarse a varios grupos reactivos mediante reacciones químicas conocidas, o un polietilenglicol que tiene un grupo reactivo modificado disponible comercialmente puede usarse para preparar el conjugado de acción prolongada de la presente invención.
El conjugado de la presente invención puede ser que ambos extremos del polímero no peptidílico que tiene dos grupos terminales reactivos estén unidos a un grupo amino o un grupo tiol de la región Fc de inmunoglobulina y de derivados de oxintomodulina, respectivamente.
El polímero no peptidílico tiene un grupo reactivo en ambos extremos, que se selecciona preferentemente del grupo que consiste en un grupo aldehído reactivo, un grupo propionaldehído, un grupo butiraldehído, un grupo maleimida y un derivado de succinimida. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, hidroxi succinimidilo, succinimidil carboximetilo o carbonato de succinimidilo.
Los dos grupos terminales reactivos del polímero no peptidílico pueden ser iguales o diferentes entre sí. Por ejemplo, el polímero no peptidílico puede poseer un grupo maleimida en un extremo, y un grupo aldehído, un grupo propionaldehído o un grupo butiraldehído en el otro extremo. Por ejemplo, cuando el polímero no peptidílico tiene un grupo aldehído reactivo en un grupo terminal y un grupo maleimida en el otro grupo terminal, es eficaz para unirse en ambos extremos con un polipéptido fisiológicamente activo y una inmunoglobulina con un mínimo de reacciones inespecíficas. De acuerdo con los ejemplos de la presente invención, los conjugados se prepararon mediante la unión de la oxintomodulina o un derivado de esta y la región Fc de inmunoglobulina mediante un enlace covalente utilizando PEG que es un polímero no peptidílico que incluye el grupo propionaldehído solo o tanto el grupo de maleimidas como el grupo aldehído.
Los conjugados de la presente invención muestran una excelente actividad en el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón, en comparación con la oxintomodulina nativa, y la vida media en sangre aumenta al unirse con la región Fc para mantener la actividad in vivo durante un largo período de tiempo.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad que comprende el péptido.
Como se usa en la presente descripción, el término "prevención" significa todas las acciones mediante las cuales se restringe o retarda la aparición de la enfermedad. En la presente invención, "prevención" significa que la aparición de obesidad por factores tales como un aumento del peso corporal o de la grasa corporal se restringe o retarda mediante la administración de los conjugados de la presente invención.
Como se usa en la presente descripción, el término "tratamiento" significa todas las acciones mediante las cuales los síntomas de la enfermedad se han aliviado, mejorado o disminuido. En la presente invención, "tratamiento" significa que los síntomas de la obesidad se alivian, mejoran o disminuyen mediante la administración de los conjugados de la presente invención, lo que da como resultado una reducción del peso corporal o de la grasa corporal.
Como se usa en la presente descripción, el término "obesidad" implica la acumulación de una cantidad excesiva de tejido adiposo en el cuerpo, y se debe considerar un índice de masa corporal (peso corporal (kg) dividido por el cuadrado de la altura (m)) superior a 25 como obesidad. La obesidad generalmente es provocada por un desequilibrio energético, cuando la cantidad de ingesta dietética excede la cantidad de energía gastada durante un largo período de tiempo. La obesidad es una enfermedad metabólica que afecta a todo el cuerpo y aumenta el riesgo de diabetes, hiperlipidemia, disfunción sexual, artritis y enfermedades cardiovasculares y, en algunos casos, está asociada con la incidencia de cáncer.
Los conjugados de la presente invención, que se preparan mediante la unión de oxintomodulina o un derivado de esta con la región Fc de inmunoglobulina, muestran una excelente afinidad de unión a los receptores de glucagón y GLP-1 (Tabla 3) y una excelente resistencia a enzimas proteolíticas in vivo de manera que exhiben la actividad in vivo durante un largo período de tiempo, mostrando así excelentes efectos contra la obesidad tales como reducciones en el peso corporal (Figura 12).
La composición farmacéutica de la presente invención puede incluir además un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente descripción, el término "farmacéuticamente aceptable" significa que la composición es suficiente para lograr los efectos terapéuticos sin efectos secundarios perjudiciales, y puede determinarse fácilmente en función del tipo de las enfermedades, la edad del paciente, el peso corporal, las condiciones de salud, el sexo y sensibilidad al fármaco, vía de administración, modo de administración, frecuencia de administración, duración del tratamiento, fármacos que se usan en combinación o en coincidencia con la composición de esta invención y otros factores conocidos en medicina.
La composición farmacéutica que incluye el derivado de la presente invención puede incluir además un portador farmacéuticamente aceptable. Para la administración oral, el portador puede incluir, pero no se limita a, un aglutinante, un lubricante, un desintegrante, un excipiente, un solubilizante, un agente dispersante, un estabilizante, un agente de suspensión, un colorante y un agente saborizante. Para preparaciones inyectables, el portador puede incluir un agente tampón, un agente conservante, un analgésico, un solubilizante, un agente isotónico y un estabilizante. Para preparaciones para administración tópica, el portador puede incluir una base, un excipiente, un lubricante y un agente conservante.
La composición de la presente invención puede formularse en una variedad de formas de dosificación en combinación con los portadores farmacéuticamente aceptables antes mencionados. Por ejemplo, para administración oral, la composición farmacéutica puede formularse en comprimidos, grageas, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes u obleas. Para las preparaciones inyectables, la composición farmacéutica puede formularse en una ampolla como una forma de dosificación única o un recipiente multidosis. La composición farmacéutica también puede formularse en soluciones, suspensiones, comprimidos, píldoras, cápsulas y preparaciones de acción prolongada.
Mientras tanto, los ejemplos del portador, el excipiente y el diluyente adecuados para las formulaciones farmacéuticas incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma de acacia, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, metilhidroxibenzoato, propilhidroxibenzoato, talco, estearato de magnesio y aceites minerales. Adicionalmente, las formulaciones farmacéuticas pueden incluir además cargas, agentes anticoagulantes, lubricantes, humectantes, saborizantes y antisépticos adicionales.
Además, la composición farmacéutica de la presente invención puede tener cualquier formulación seleccionada del grupo que consiste en comprimidos, píldoras, polvos, gránulos, cápsulas, suspensiones, líquidos para uso interno, emulsiones, jarabes, soluciones acuosas estériles, disolventes no acuosos, formulaciones liofilizadas y supositorios.
Además, la composición puede formularse en una única forma de dosificación adecuada para el cuerpo del paciente, y preferentemente se formula en una preparación útil para fármacos peptídicos de acuerdo con el método típico en el campo farmacéutico para su administración por vía oral o parenteral tal como a través de la piel, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intramedular, intraventricular, pulmonar, transdérmica, subcutánea, intraperitoneal, intranasal, intracolónica, tópica, sublingual, vaginal o rectal, pero no se limita a estas.
La composición puede usarse mediante la mezcla con una variedad de portadores farmacéuticamente aceptables, tales como solución salina fisiológica o disolventes orgánicos. Para aumentar la estabilidad o absortividad, pueden usarse carbohidratos tales como glucosa, sacarosa o dextranos, antioxidantes tales como ácido ascórbico o glutatión, agentes quelantes, proteínas de bajo peso molecular u otros estabilizantes.
La dosis de administración y la frecuencia de la composición farmacéutica de la presente invención están determinadas por el tipo de ingrediente activo, junto con varios factores tales como la enfermedad a tratar, vía de administración, edad, sexo y peso corporal del paciente y gravedad de la enfermedad.
La dosis eficaz total de la composición de la presente invención puede administrarse a un paciente en una sola dosis, o puede administrarse durante un largo período de tiempo en múltiples dosis de acuerdo con un protocolo de tratamiento fraccionado. En la composición farmacéutica de la presente invención, el contenido de ingrediente activo puede variar en función de la gravedad de la enfermedad. Preferentemente, la dosis diaria total del péptido de la presente invención puede ser de aproximadamente 0,0001 yg a 500 mg por 1 kg de peso corporal de un paciente. Sin embargo, la dosis eficaz del péptido se determina teniendo en cuenta varios factores que incluyen la edad del paciente, el peso corporal, las condiciones de salud, el sexo, la gravedad de la enfermedad, la dieta y la tasa de secreción, adicionalmente la vía de administración y la frecuencia del tratamiento de la composición farmacéutica. En vista de esto, los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente una dosis eficaz adecuada para el uso particular de la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención no se limita particularmente a la formulación, vía y modo de administración, siempre que muestre los efectos de la presente invención.
La composición farmacéutica de la presente invención muestra una excelente duración in vivo de la eficacia y el título, por consiguiente se reduce notablemente el número y la frecuencia de administración de esta.
Además, la composición farmacéutica puede administrarse sola o en combinación o en coincidencia con otras formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad. Las formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad no están particularmente limitadas y pueden incluir un agonista del receptor de GLP-1, un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de la DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de la hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de la lipasa gástrica/pancreática, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor p3A, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de la grelina y/o un antagonista del receptor de la grelina.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona un método para prevenir o tratar la obesidad, que comprende la etapa de administrar a un sujeto el conjugado o la composición farmacéutica que lo incluye.
Como se usa en la presente descripción, el término "administración" significa la introducción de una cantidad de una sustancia predeterminada en un paciente mediante un determinado método adecuado. La composición de la presente invención puede administrarse a través de cualquiera de las vías comunes, siempre que sea capaz de alcanzar un tejido deseado, por ejemplo, pero no se limita a, administración intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, oral, tópica, intranasal, intrapulmonar o intrarrectal. Sin embargo, dado que los péptidos se digieren tras la administración oral, los ingredientes activos de una composición para administración oral deben recubrirse o formularse para su protección contra la degradación en el estómago.
En la presente invención, el término "sujeto" es aquellos que se sospecha que tienen obesidad, lo que significa mamíferos, incluidos humanos, ratones y ganado, que tienen obesidad o tienen la posibilidad de obesidad. Sin embargo, se incluye sin limitación cualquier sujeto a tratar con el péptido o la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica que incluye el péptido de la presente invención se administra a un sujeto sospechoso de tener obesidad, por consiguiente se trata al sujeto de manera eficaz. La obesidad es como se describió anteriormente.
El método terapéutico de la presente invención puede incluir la etapa de administrar la composición que incluye el péptido en una cantidad farmacéuticamente eficaz. La dosis diaria total de la composición puede determinarse mediante un juicio médico apropiado por parte de un médico, y la composición puede administrarse una o varias veces. Con respecto a los objetivos de la presente invención, el nivel de dosis específica terapéuticamente eficaz para cualquier paciente en particular puede variar en función de varios factores bien conocidos en el campo médico, que incluyen el tipo y el grado de respuesta a alcanzar, composiciones concretas de acuerdo con si otros agentes se usan con ellas o no, la edad del paciente, el peso corporal, las condiciones de salud, el sexo y la dieta, el tiempo y la vía de administración, la tasa de secreción de la composición, la duración de la terapia, otros fármacos usados en combinación o en coincidencia con la composición de la presente invención, y otros factores conocidos en el campo médico.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona un uso del conjugado o la composición farmacéutica que lo incluye en la preparación de fármacos para la prevención o el tratamiento de la obesidad.
Los aspectos y modalidades preferidos de la invención se describen con más detalle en las reivindicaciones adjuntas.
[Modo para llevar a la práctica la invención]
De aquí en lo adelante, la presente invención se describirá con más detalle con referencia a los siguientes ejemplos. Ejemplo 1. Producción de línea celular activada in vitro
Ejemplo 1-1: Producción de la línea celular que muestra la respuesta de AMPc a GLP-1
La PCR se realizó mediante el uso de una región correspondiente al ORF (marco abierto de lectura) en el ADNc (OriGene Technologies, S.A. EE . UU.) del gen del receptor de GLP-1 humano como plantilla, y los siguientes cebadores directos e inversos que incluyen cada uno de los sitios de restricción HindIII y EcoRI para obtener un producto de PCR.
Cebador directo: 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAATAC-3 '(SEQ ID NO. 47)
Cebador inverso: 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAAGATAG-3 '(SEQ ID NO. 48)
El producto de PCR se clonó en el conocido vector de expresión de células animales x0GC/dhfr, para preparar un vector recombinante x0GC/GLP1 R.
La línea celular CHO DG44 que se cultivó en el medio DMEM/F12 (10 % FBS) se transfectó con el vector recombinante x0GC/GLP1R mediante el uso de Lipofectamine (Invitrogen, EE . UU.), y se cultivó en un medio de selección que contenía 1 mg/ml de G418 y metotraxato 10 nM. Las líneas celulares de un solo clon se seleccionaron a partir de esta mediante una técnica de dilución límite, y finalmente se seleccionó a partir de estas una línea celular que mostraba una excelente respuesta de AMPc a GLP-1 de una manera dependiente de la concentración.
Ejemplo 1-2: Producción de la línea celular que muestra la respuesta de AMPc a glucagón
La PCR se realizó mediante el uso de una región correspondiente al ORF en el ADNc (OriGene Technologies, S.A. EE . UU.) del gen del receptor de glucagón humano como plantilla, y los siguientes cebadores directos e inversos que incluyen cada uno de los sitios de restricción EcoRI y XhoI para obtener un producto de PCR.
Cebador directo: 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3 '(SEQ ID NO. 49) Cebador inverso: 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3 '(SEQ ID NO. 50)
El producto de PCR se clonó en el conocido vector de expresión en células animales x0GC/dhfr, para preparar el vector recombinante x0GC/GCGR.
La línea celular CHO DG44 que se cultivó en el medio DMEM/F12 (10 % FBS) se transfectó con el vector recombinante x0GC/GCGR mediante el uso de lipofectamina y se cultivó en un medio de selección que contenía 1 mg/ml de G418 y metotraxato 10 nM. Las líneas celulares de un solo clon se seleccionaron a partir de esta mediante una técnica de dilución límite, y finalmente se seleccionó a partir de estas una línea celular que mostraba una excelente respuesta de AMPc a glucagón de una manera dependiente de la concentración.
Ejemplo 2. Ensayo de actividad in vitro de los derivados de oxintomodulina
Ejemplo 2-1: Síntesis de los derivados de oxintomodulina
Para medir las actividades in vitro de los derivados de oxintomodulina, se sintetizaron derivados de oxintomodulina que tienen las siguientes secuencias de aminoácidos (Tabla 1).
[Tabla 1]
Figure imgf000016_0001
En la Tabla 1, los aminoácidos en negrita y subrayados representan la formación de anillos, y los aminoácidos representados por X significan un aminoácido no nativo, ácido alfa-metil-glutámico. Adicionalmente, CA representa 4-imidazoacetilo y DA representa desamino-histidilo.
Ejemplo 2-2: Ensayo de actividad in vitro de derivados de oxintomodulina
Para medir las eficacias contra la obesidad de los derivados de oxintomodulina sintetizados en el Ejemplo 2-1, se midió la actividad celular in vitro mediante el uso de las líneas celulares preparadas en los Ejemplos 1-1 y 1-2. Las líneas celulares fueron las preparadas mediante la transfección de CHO (ovario de hámster chino) para expresar el gen del receptor de GLP-1 humano y el gen del receptor de glucagón, respectivamente. Por tanto, son adecuadas para medir las actividades de GLP-1 y glucagón. Por lo tanto, se midió la actividad de cada derivado de oxintomodulina mediante el uso de cada línea celular transformada.
Específicamente, cada línea celular se subcultivó dos veces o tres veces a la semana, y se prepararon alícuotas en cada pocillo de una placa de 96 pocillos a una densidad de 1 X 105, seguido por cultivación durante 24 horas.
Las células cultivadas se lavaron con tampón KRB y se suspendieron en 40 ml de tampón KRB que contenía IBMX 1 mM y se dejaron a temperatura ambiente durante 5 minutos. La oxintomodulina (SEQ ID NO. 1) y los derivados de oxintomodulina (representados por las SEQ ID NO. 2-6, 8, 10-13, 17, 18, 23-25, 27, 28 y 32-34) se diluyeron de 1000 nM a 0,02 nM mediante una dilución en serie de 5 veces, y se añadieron a las células 40 ml de cada uno de estos, y se cultivó a 37 °C durante 1 hora en una incubadora de CO2. A continuación, se añadió 20 ml de tampón de lisis celular para la lisis celular y los lisados celulares se aplicaron a un kit de ensayo de AMPc (Molecular Device, EE . UU.) para medir las concentraciones de AMPc. Los valores de EC 50 se calcularon a partir de ellas, y se compararon entre sí. Los valores de EC 50 se muestran en la siguiente Tabla 2.
[Tabla 2]
Figure imgf000017_0001
Como se muestra en la Tabla 2, había derivados de oxintomodulina que mostraban excelentes actividades in vitro y diferentes proporciones de actividades en el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón, en comparación con la oxintomodulina nativa de SEQ ID NO. 1.
Se sabe que la oxintomodulina activa tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagón para suprimir el apetito, facilitar la lipólisis y promover la saciedad, por consiguiente muestra efectos contra la obesidad. Los derivados de oxintomodulina de acuerdo con la presente invención muestran actividades in vitro tanto en el receptor de GLP-1 como en el receptor de glucagón más altas que la oxintomodulina de tipo salvaje y, por lo tanto, pueden usarse como un agente terapéutico contra la obesidad con mayor eficacia que la oxintomodulina conocida.
Ejemplo 3. Ensayo de actividad in vivo de derivados de oxintomodulina
Para medir la actividad terapéutica in vivo de los derivados de oxintomodulina, se examinaron los cambios en la ingesta de alimentos mediante la administración de derivados de oxintomodulina en ratones ob/ob mediante el uso de oxintomodulina nativa como control.
Específicamente, los ratones ob/ob obesos y diabéticos, usados comúnmente para probar la eficacia de los agentes terapéuticos contra la obesidad y la diabetes, se mantuvieron en ayunas durante 16 horas y se les administró 1 o 10 mg/kg de oxintomodulina, o 0,02, 0,1, 1 o 10 mg/kg del derivado de oxintomodulina de SEQ ID NO. 2. Luego, se examinó la ingesta de alimentos durante 2 horas (Figura 1). La Figura 1 es un gráfico que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la dosis de administración de oxintomodulina o derivado de oxintomodulina. Como se muestra en la Figura 1, la administración de 1 mg/kg de derivado de oxintomodulina mostró efectos inhibidores sobre la ingesta de alimentos más excelentes que la administración de 10 mg/kg de oxintomodulina.
De manera conjunta, los derivados de oxintomodulina de la presente invención tienen efectos contra la obesidad mucho más altos que la oxintomodulina de tipo salvaje, aunque se administran en una dosis más baja, lo que indica una mejora en los problemas de la oxintomodulina de tipo salvaje que muestra efectos contra la obesidad más bajos y debe administrarse en dosis altas tres veces al día.
Ejemplo 4: Preparación de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina (s Eq ID NO. 1) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K (PEG con dos grupos propilaldehído, NOF, Japón), la oxintomodulina y PEG PropionALD(2) de 3,4 K reaccionaron en una proporción molar de 1:12 con la concentración de proteína de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón de borato de sodio 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45 %, y se añadió a la misma cianoborohidruro de sodio 20 mM (cianoborohidruro (SCB, NaCNBH3), NaCNBH3) como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a un SO U RCE S (XK16, Amersham Biosciences) para purificar oxintomodulina que tenía lisina monopegilada (columna: SO URCE S (XK16, Amersham Biosciences), velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de Na 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 2a). La Figura 2a es un gráfico que muestra el resultado de purificar oxintomodulina monoPEGilada a través de una columna de purificación SO U RCE S. La monoPEGilación de los picos eluidos se examinó mediante SD S-PAGE y la selectividad de lisina se examinó mediante mapeo de péptidos con el uso de Asp-N proteasa (Figura 2b). La Figura 2b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos de oxintomodulina monoPEGilada purificada.
A continuación, se hicieron reaccionar la oxintomodulina monoPEGilada purificada y el Fc de inmunoglobulina en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SC B 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO U RCE 15Q para purificar los conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina (columna: SO U RCE 15Q (Xk 16, Amersham Biosciences), velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 2c). La Figura 2c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 5: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y PEG PropionALD(2) de 3,4 K se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:12 con la concentración de proteína de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón de borato de Na 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45 %, y se le añadió SC B 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (Columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 3a). La Figura 3a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 29) a través de una columna de purificación SO U RCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 29) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y un Fc de inmunoglobulina (columna: SO URCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 3b). La Figura 3b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y el Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 6: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y el PEG PropionALD(2) de 3,4 K se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:15 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón H EPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (Columna: SO U RCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 4a). La Figura 4a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 30) a través de una columna de purificación SO U RCE S. La monoPEGilación de los picos eluidos se examinó mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examinó mediante mapeo de péptidos con el uso de Asp-N proteasa (Figura 4b). La Figura 4b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO.
30).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 30) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 ° C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y el Fc de inmunoglobulina (columna: SO U RC e 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 4c). La Figura 4c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y el Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 7: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y PEG PropionALD(2) de 3,4 K se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:15 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón H EPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (columna: SO U RCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 5a). La Figura 5a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 31) a través de una columna de purificación SO URCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 31) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y el Fc de inmunoglobulina (columna: SO U RC e 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 5b). La Figura 5b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y el Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 8: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y PEG PropionALD(2) de 3,4 K se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón H EPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (Columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 6a). La Figura 6a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 2) a través de una columna de purificación SO URCE S. La monoPEGilación de los picos eluidos se examinó mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examinó mediante mapeo de péptidos con el uso de Asp-N proteasa (Figura 6b). La Figura 6b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 2).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 2) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO U RCE 15Q (Columna: SO U RC e 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 6c) y una columna de purificación Source ISO (Columna: SO U RCE ISO (XK16, Amersham Biosciences), velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 100 % 100 min B, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,3 M)) (Figura 6d) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (S E q ID NO. 2) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 6c es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
2) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO, y la Figura 6d es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
Ejemplo 9: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 27 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y PEG PropionALD(2) de 3,4 K se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en una mezcla de disolventes de tampón H EPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 %, y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (Columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 7a). La Figura 7a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 3) a través de una columna de purificación SO URCE S. La monoPEGilación de los picos eluidos se examinó mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examinó mediante mapeo de péptidos con el uso de Asp-N proteasa (Figura 7b). La Figura 7b es un gráfico que muestra el resultado del mapeo de péptidos del derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 3).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 3) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación de Butil FF (Columna: Butil FF (XK16, Amersham Biosciences), velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 5 min A (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1,5 M)) (Figura 7c) y una columna de purificación SO URCE 15Q (Columna: SO URCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 7d) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (s E q ID NO. 3) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 7c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación de Butil FF, y la Figura 7d es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q.
Ejemplo 10: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 24 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) con PEG MAL-10K-a Ld (NOF., Japón), el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 %, y se le añadió guanidina 1 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO U RCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cisteína monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 8a). La Figura 8a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 23) a través de una columna de purificación SO URCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 23) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 8b) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (Figura 8c) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 8b es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q, y la Figura 8c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
Ejemplo 11: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) con PEG MAL-10K-ALD, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
24) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 %, y se le añadió guanidina 1 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cisteína monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 9a). La Figura 9a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 24) a través de una columna de purificación SO URCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 24) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 ° C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 9b) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (Figura 9c) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 9b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q, y la Figura 9c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
Ejemplo 12: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) con PEG MAL-10K-ALD, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
25) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 3 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) y se le añadió guanidina 1 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina con cisteína monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 10a). La Figura 10a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 25) a través de una columna de purificación SO U RCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 25) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 10b) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (Figura 10c) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 10b es un gráfico que muestra el resultado de purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q, y la Figura 10c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
Ejemplo 13: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de lisina en la posición 20 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) con PEG PropionALD(2) de 3,4 K, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a 4 °C durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de borato de sodio 50 mM (pH 9,0) y se le añadió guanidina 2 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO U RCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3 % 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)) (Figura 11a). La Figura 11a es un gráfico que muestra el resultado de purificar un derivado de oxintomodulina monoPEGilado (SEQ ID NO. 28) a través de una columna de purificación SO URCE S.
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 28) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1:10 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 ° C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 11b) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (Figura 11c) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y el Fc de inmunoglobulina. La Figura 11b es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación SO URCE 15Q, y la Figura 11c es un gráfico que muestra el resultado de purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y el Fc de inmunoglobulina a través de una columna de purificación Source ISO.
Ejemplo 14: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) con PEG MAL-10K-ALD, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
32) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 3 con la concentración de proteína de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) y se le añadió guanidina 2 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cisteína monopegilada (columna: s Ou RC E S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 32) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 8 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) y el Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 15: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) con PEG MAL-10K-ALD, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
33) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 1 con la concentración de proteína de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) y se le añadió guanidina 2 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina con cisteína monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 33) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6.0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) y el Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 16: Preparación de conjugados que incluyen un derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) y Fc de inmunoglobulina
En cebador lugar, para la PEGilación del residuo de cisteína en la posición 30 de la secuencia de aminoácidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) con PEG MAL-10K-ALD, el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO.
34) y PEG MAL-10K-ALD se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 1 con la concentración de proteína de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón Tris 50 mM (pH 8,0) y se le añadió guanidina 1 M. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE S para purificar el derivado de oxintomodulina con cisteína monopegilada (columna: SO URCE S, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 50 min B (A: citrato de sodio 20 mM, pH 3,0 etanol al 45 %, B: A KCl 1 M)).
A continuación, el derivado de oxintomodulina monoPEGilado purificado (SEQ ID NO. 34) y el Fc de inmunoglobulina se hicieron reaccionar en una relación molar de 1: 5 con la concentración de proteína de 20 mg/ml a 4 ° C durante 16 horas. En este momento, la reacción se llevó a cabo en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se le añadió SCB 20 mM como agente reductor. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de purificación SO URCE 15Q (columna: SO U RCE 15Q, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: A0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificación Source ISO (columna: SO URCE ISO, velocidad de flujo: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) para purificar los conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 17: Actividad in vitro de conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina
Para medir la eficacia contra la obesidad de los conjugados que incluyen la oxintomodulina o un derivado de oxintomodulina y el Fc de inmunoglobulina que se prepararon en los Ejemplos anteriores, se realizaron experimentos de la misma manera que en el Ejemplo 2-2.
Específicamente, cada uno de los transformantes preparados en los Ejemplos 1-1 y 1-2 se subcultivó dos o tres veces a la semana, y se prepararon alícuotas en cada pocillo de una placa de 96 pocillos a una densidad de 1 X 105, seguido de cultivo durante 24 horas. Cada uno de los transformantes cultivados se lavó con tampón KRB y se suspendió en 40 ml de tampón KRB que contenía IBMX 1 mM y se dejaron a temperatura ambiente durante 5 minutos. GLP-1, glucagón y los conjugados de derivados de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23, 24, 25, 32, 33 o 34)-Fc de inmunoglobulina se diluyeron de 1000 nM a 0,02 nM mediante una dilución en serie de 5 veces, y se añadieron 40 ml de cada uno de estos a cada transformante, y se cultivaron a 37 °C durante 1 hora en una incubadora de CO2. A continuación, se añadieron 20 ml de tampón de lisis celular para la lisis celular y los lisados celulares se aplicaron a un kit de ensayo de AMPc (Molecular Device, EE . UU.) para medir las concentraciones de AMPc mediante el uso de un instrumento Victor (Perkin Elmer, EE . UU.). Los valores de EC 50 se calcularon a partir de ellas y se compararon entre sí (Tabla 3).
[Tabla 3]
Figure imgf000023_0001
Como se muestra en la Tabla 3, se encontró que los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran la actividad in vitro para los receptores de GLP-1 y glucagón.
Ejemplo 18: Actividad in vivo de conjugados de derivados de oxintomodulina-inmunoglobulina
Se examinó si los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran excelentes efectos reductores del peso corporal in vivo.
Específicamente, se alimentaron ratones C57BL/6 normales de 6 semanas de edad con una dieta alta en grasas de 60 kcal durante 24 semanas para aumentar su peso corporal en aproximadamente 50 g en promedio, y se les administraron conjugados de derivados de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23, 24 o 25)-Fc de inmunoglobulina por vía subcutánea a una dosis de 0,03 o 0,06 mg/kg/semana durante 3 semanas. A continuación, se midieron los cambios en el peso corporal de los ratones (Figura 12 y Figura 13). La Figura 12 y la Figura 13 son gráficos que muestran cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administración de los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina. Como se muestra en la Figura 12 y la Figura 13, a medida que se incrementó la dosis de administración de los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, el peso corporal se redujo en proporción directa, aunque hubo diferencias entre los tipos de los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, lo que sugiere que los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina reducen el peso corporal de una manera dependiente de la dosis.
<110> HANMI SC IEN CE CO., LTD.
<120> UN CONJUGADO QUE COM PRENDE OXINTOMODULINA Y UN FRAGMENTO DE INMUNOGLOBULINA Y SU USO
<130> OPA12063
<150> PCT/KR2012/004722
<151> 2012-06-15
<160> 53
<170> Kopatentln 2.0
<210> 1
<211> 37
<212> PRT
<213> oxintomodulina
<400> 1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn
20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 2
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 2
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn
20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210>3
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 3
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Lys Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 4
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210>5
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 5
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 6
<211> 42
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 6
Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Ala Ala Hls Ser Gln Gly Thr 20 25 30
Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp
35 40
<210>7
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 7
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys
20 25 30
<210>8
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400>8
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu Glu Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Lys
20 25
<210>9
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<400> 9
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Xaa Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 10
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 10
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 11
<211> 43
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 11
Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Ala Ala Hls Ser Gln Gly Thr 20 25 30
Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Lys
35 40
<210> 12
<211> 38
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 12
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Gly 1 5 10 15
Gly Gly Hls Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met 20 25 30
Glu Glu Glu Ala Val Lys
35
<210> 13
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (16)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<220>
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<400> 13
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15
Glu Ala Val Xaa Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys
20 25 30 <210> 14
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<220>
<221> VARIANTE
<222> (24)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<400> 14
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Xaa Leu Phe lie Xaa Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 15
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (24)
<223> Xaa = ácido alfa-metil-glutámico
<400> 15
Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Xaa Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 16
<211> 34
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 16
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gly Gly Hls Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu 20 25 30
Glu Lys
<210> 17
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 17
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp lie Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 18
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 18
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp lie Arg Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 19
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 19
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Lys Leu Phe lie Glu Trp lie Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 20
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 20
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu
Glu Ala Val Lys Leu Phe lie Glu Trp lie Arg Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 21
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 21
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Leu Glu Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Val Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 22
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = desamino-histidil
<400> 22
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20 25 30 <210> 23
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 23
Hls Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 24
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 25
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 26
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 26
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 27
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina'
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 27
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Cys Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 28
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 28
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 29
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = d-serina.
<400> 29
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 30
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<400> 30
Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 31
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = d-serina.
<400> 31
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30
Arg Asn Asn lie Ala
35
<210> 32
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Xaa = 4-imidazoacetil
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 32
Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 33
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 33
Hls Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ala Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 34
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = ácido aminoisobutírico
<400> 34
Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30 <210> 35
<211>8
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 35
Lys Arg Asn Arg Asn Asn lie Ala
1 5
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 36
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
1 5 10
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 37
Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
1 10
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 38
Hls Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 39
Hls Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Lys 1 10 15
<210> 40
<211> 20
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 40
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Lys
20
<210> 41
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 41
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg
Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 42
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 42
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Glu
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 43
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 43
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15
Arg Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Lys Asn Thr
20 25
<210> 44
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 44
Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly
20 25
<210> 45
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 45
Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly
20 25
<210> 46
<211> 26
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 46
Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Ala Ala
20 25
<210> 47
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 47
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Met Asn Gly
20 25
<210> 48
<211> 24
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo B
<400> 48
Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15
Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp
20
<210> 49
<211> 14
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> grupo B
<400> 49
Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 50
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 50
cccggccccc gcggccgcta ttcgaaatac 30
<210> 51
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 51
gaacggtccg gaggacgtcg actcttaaga tag 33
<210> 52
<211> 34
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 52
cagcgacacc gaccgtcccc ccgtacttaa ggcc 34
<210> 53
<211> 32
<212>ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 53
ctaaccgact ctcggggaag actgagctcg cc 32

Claims (22)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado que comprende:
un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 32-34, 2-23 o 27-31;
una región Fc de inmunoglobulina; y
un polímero no peptidílico, en donde el polímero no peptidílico une covalentemente la oxintomodulina y la región Fc de inmunoglobulina.
2. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el derivado de oxintomodulina puede activar el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagón.
3. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el conjugado tiene efectos contra la obesidad.
4. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los aminoácidos en las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, o 24 y 28 del derivado de oxintomodulina forman un anillo.
5. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polímero no peptidílico comprende polietilenglicol, polipropilenglicol, un copolímero de etilenglicol-propilenglicol, un poliol polioxietilado, alcohol polivinílico, un polisacárido éter poliviniletílico, ácido poliláctico (PLA), ácido polilácticoglicólico (PLGA), un polímero lipídico, ácido hialurónico o una combinación de estos.
6. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el polímero no peptidílico es polietilenglicol.
7. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el polisacárido es dextrano, una quitina o una combinación de estos.
8. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde un extremo del polímero no peptidílico se une a un grupo amino o un grupo tiol de la región Fc de inmunoglobulina y el otro extremo del polímero no peptidílico se une a un grupo amino o un grupo tiol del derivado de oxintomodulina.
9. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polímero no peptidílico tiene grupos reactivos que pueden unirse con la región Fc de inmunoglobulina y el derivado de oxintomodulina en ambos extremos.
10. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el grupo reactivo se selecciona del grupo que consiste en un grupo aldehído, un grupo propionaldehído, un grupo butiraldehído, un grupo maleimida y un derivado de succinimida.
11. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 9, en donde los grupos reactivos en ambos extremos son iguales o diferentes entre sí.
12. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la región Fc de inmunoglobulina es una región Fc no glicosilada.
13. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la región Fc de inmunoglobulina se selecciona del grupo que consiste en un dominio CH1, un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4; un dominio CH1 y un dominio CH2; un dominio CH1 y un dominio CH3; un dominio CH2 y un dominio CH3; una combinación de uno o más dominios y una región bisagra de inmunoglobulina o una porción de esta; y un dímero de cada dominio de las regiones constantes de cadena pesada y la región constante de cadena ligera.
14. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la región Fc de inmunoglobulina es un derivado en el que se elimina una región que puede formar un enlace disulfuro, se eliminan ciertos residuos de aminoácidos en el extremo N terminal de una forma Fc nativa, se añade un residuo de metionina en el extremo N-terminal de una forma Fc nativa, se elimina un sitio de unión al complemento o se elimina un sitio de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC).
15. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la región Fc de inmunoglobulina es una región Fc derivada de una inmunoglobulina seleccionada del grupo que consiste en IgG, IgA, IgD, IgE e IgM.
16. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la región Fc de inmunoglobulina es una región Fc de IgG4.
17. El conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la región Fc de inmunoglobulina es una región Fc no glicosilada derivada de IgG4 humana.
18. Una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de la obesidad, que comprende el conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.
19. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 18, que comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.
20. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 18 o 19, en donde la composición se administra sola o en combinación con otras formulaciones farmacéuticas que muestran efectos profilácticos o terapéuticos sobre la obesidad.
21. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la formulación farmacéutica se selecciona del grupo que consiste en un agonista del receptor de GLP-1, un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de la hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de la lipasa gástrica/pancreática, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor p3A, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de la grelina y un antagonista del receptor de la grelina.
22. El conjugado de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 o la composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21 para su uso en la prevención o el tratamiento de la obesidad.
ES18205668T 2011-06-17 2012-06-15 Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso Active ES2882520T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20110058852 2011-06-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2882520T3 true ES2882520T3 (es) 2021-12-02

Family

ID=47357296

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18205668T Active ES2882520T3 (es) 2011-06-17 2012-06-15 Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso
ES12801247T Active ES2710356T3 (es) 2011-06-17 2012-06-15 Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES12801247T Active ES2710356T3 (es) 2011-06-17 2012-06-15 Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo

Country Status (33)

Country Link
US (3) US9731031B2 (es)
EP (2) EP2721062B1 (es)
JP (2) JP6038905B2 (es)
KR (2) KR101577734B1 (es)
CN (2) CN109306015B (es)
AR (2) AR086969A1 (es)
AU (3) AU2012270366C1 (es)
BR (1) BR112013032375B1 (es)
CA (2) CA3080189C (es)
CL (1) CL2013003619A1 (es)
CY (1) CY1121255T1 (es)
DK (2) DK2721062T3 (es)
ES (2) ES2882520T3 (es)
HR (1) HRP20190265T1 (es)
HU (1) HUE042585T2 (es)
IL (4) IL229759A (es)
LT (1) LT2721062T (es)
MX (2) MX353402B (es)
MY (1) MY164680A (es)
PE (3) PE20181268A1 (es)
PH (2) PH12018501119B1 (es)
PL (1) PL2721062T3 (es)
PT (1) PT2721062T (es)
RS (1) RS58606B1 (es)
RU (2) RU2607365C2 (es)
SG (2) SG195275A1 (es)
SI (1) SI2721062T1 (es)
SM (1) SMT201900078T1 (es)
TR (1) TR201901402T4 (es)
TW (2) TWI519541B (es)
UA (2) UA125895C2 (es)
WO (1) WO2012173422A1 (es)
ZA (1) ZA201309013B (es)

Families Citing this family (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US12203113B2 (en) 2009-07-09 2025-01-21 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
UA126465C2 (uk) 2011-06-10 2022-10-12 Ханмі Сайенс Ко., Лтд. Пептид, що має активність оксинтомодуліну, та фармацевтична композиція для лікування ожиріння, яка його містить
RU2607365C2 (ru) 2011-06-17 2017-01-10 Ханми Сайенс Ко., Лтд. Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
EA201492269A1 (ru) 2012-06-04 2016-02-29 Опко Байолоджикс Лтд. Пегилированные варианты oxm
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
WO2014073842A1 (en) 2012-11-06 2014-05-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
AU2013366692B2 (en) 2012-12-21 2017-11-23 Sanofi Dual GLP1/GIP or trigonal GLP1/GIP/Glucagon agonists
AR096891A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
WO2015086728A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
CR20160376A (es) 2014-01-20 2016-10-07 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de acción prolongada y uso de la misma
MX387560B (es) * 2014-03-31 2025-03-18 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Procedimiento para mejorar la solubilidad de proteínas y péptidos usando un enlace del fragmento fc de inmunoglobulina.
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) * 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
KR20150140177A (ko) 2014-06-05 2015-12-15 한미약품 주식회사 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
EP3230309B1 (en) 2014-12-10 2023-03-29 OPKO Biologics Ltd. Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides
PE20171154A1 (es) 2014-12-30 2017-08-16 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivados de glucagon con estabilidad mejorada
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
PL3310347T3 (pl) 2015-06-19 2021-12-27 Opko Biologics Ltd. Długo działające czynniki krzepnięcia i sposoby wytwarzania
EP4523705A3 (en) 2015-06-30 2025-06-11 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
WO2017052329A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Protein complex by use of a specific site of an immunoglobulin fragment for linkage
SG11201805586SA (en) 2015-12-31 2018-07-30 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Triple glucagon/glp-1/gip receptor agonist
EP3479841A4 (en) 2016-06-29 2020-03-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. GLUCAGON DERIVATIVE, CONJUGATE THEREOF, COMPOSITION THEREOF AND THERAPEUTIC USE THEREOF
MY206271A (en) 2016-07-11 2024-12-06 Opko Biologics Ltd Long-acting coagulation factor vii and methods of producing same
JP7158378B2 (ja) 2016-09-23 2022-10-21 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド インスリン受容体との結合力が減少された、インスリンアナログ及びその用途
JOP20190095A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
TW201832783A (zh) 2016-12-02 2018-09-16 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／胰高血糖素雙重激動劑、連接子和透明質酸的接合物
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
CN110545849A (zh) 2017-02-03 2019-12-06 韩美药品株式会社 具有增加的持续性的生理活性物质的缀合物及其应用
KR102629006B1 (ko) 2017-03-23 2024-01-25 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된 인슐린 아날로그의 결합체 및 이의 용도
WO2019035672A1 (ko) 2017-08-16 2019-02-21 동아에스티 주식회사 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체
SG11202001283PA (en) * 2017-08-16 2020-03-30 Dong A St Co Ltd Acylated oxyntomodulin peptide analog
WO2019171352A2 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
UY38249A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Sanofi Sa Productos conjugados que comprenden un agonista del receptor triple de glp-1/glucagón/gip, un conector y ácido hialurónico
KR20200135618A (ko) * 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN121591873A (zh) * 2018-07-19 2026-03-03 D&D制药技术股份有限公司 包括多肽的药物组合物
CN110964116A (zh) * 2018-09-26 2020-04-07 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 GLP1-Fc融合蛋白及其缀合物
US12441776B2 (en) 2018-11-30 2025-10-14 Eirgen Pharma Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
WO2020128967A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
CN111944055B (zh) * 2019-05-16 2022-08-02 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
WO2021235915A1 (ko) * 2020-05-22 2021-11-25 한미약품 주식회사 액상 제제
AU2024210783A1 (en) * 2023-01-17 2025-07-31 Eli Lilly And Company Novel linkers for sustained delivery of therapeutics
WO2026075985A1 (en) 2024-10-01 2026-04-09 Neolaia Inc. Quinoline- and quinazoline-carboxamide derivatives as cd38 inhibitors
WO2026075971A1 (en) 2024-10-01 2026-04-09 Neolaia Inc. Combination therapy for treatment of metabolic disorders and inflamation related disorders using incretin compounds and cd38 inhibitors

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
WO1999044630A1 (en) 1998-03-06 1999-09-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein-free preparations
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
WO2005003296A2 (en) 2003-01-22 2005-01-13 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7217845B2 (en) * 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
US7772188B2 (en) * 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
ES2383300T3 (es) * 2003-11-13 2012-06-20 Hanmi Holdings Co., Ltd Fragmento Fc de IgG para un vehículo de fármacos y procedimiento para su preparación
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
CN101128487B (zh) 2004-12-02 2012-10-10 杜门蒂斯有限公司 靶向血清白蛋白和glp-1或pyy的双特异性结构域抗体
KR20070115947A (ko) * 2005-02-11 2007-12-06 아밀린 파마슈티칼스, 인크. 선택가능한 특성들을 가지는 ｇｉｐ 유사체 및 하이브리드폴리펩타이드
WO2007022123A2 (en) 2005-08-11 2007-02-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides with selectable properties
CN102343084A (zh) * 2005-03-31 2012-02-08 安米林药品公司 用于治疗精神病和精神障碍的胰淀素和胰淀素激动剂
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
ATE553124T1 (de) 2005-06-13 2012-04-15 Imp Innovations Ltd Oxyntomodulinanaloga und ihre wirkungen auf das fressverhalten
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
CA2638800A1 (en) 2006-02-22 2007-09-07 Merck & Co., Inc. Oxyntomodulin derivatives
WO2007146038A2 (en) 2006-06-07 2007-12-21 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
GB0624868D0 (en) * 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
CA2677932A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
ATE499088T1 (de) 2007-07-10 2011-03-15 Lilly Co Eli Glp-1-fc fusionsprotein-formulierung
CN103416421B (zh) 2007-07-27 2016-07-27 拜尔农作物科学股份公司 三元活性化合物结合物
WO2009033739A2 (en) 2007-09-11 2009-03-19 Mondobiotech Laboratories Ag Use of a peptide as a therapeutic agent
MX2010004298A (es) 2007-10-30 2010-05-03 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1.
EP2249853A4 (en) 2008-01-30 2012-12-26 Univ Indiana Res & Tech Corp ESTER BASED PEPTIDE PRODRUGS
AR072160A1 (es) 2008-06-17 2010-08-11 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1
US8450270B2 (en) 2008-06-17 2013-05-28 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability in physiological pH buffers
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
EP2344200A2 (en) 2008-09-19 2011-07-20 Nektar Therapeutics Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use
WO2010033240A2 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
JP5635531B2 (ja) 2008-12-15 2014-12-03 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ グルカゴン類似体
PE20120332A1 (es) * 2008-12-19 2012-04-14 Univ Indiana Res & Tech Corp Profarmacos de peptido de la superfamilia de glucagon basado en amida
ES2610356T3 (es) 2009-02-03 2017-04-27 Amunix Operating Inc. Polipéptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
MX2011009803A (es) * 2009-03-20 2011-09-30 Hanmi Holdings Co Ltd Metodo para preparar un polipeptido conjugado fisiologicamente activo en un sitio especifico.
CA2755336C (en) 2009-03-20 2015-07-14 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
EP2443146B1 (en) 2009-06-16 2016-10-05 Indiana University Research And Technology Corporation Gip receptor-active glucagon compounds
AU2010272944B2 (en) 2009-07-13 2015-11-19 Zealand Pharma A/S Acylated glucagon analogues
EP2496249B1 (en) 2009-11-03 2016-03-09 Amylin Pharmaceuticals, LLC Glp-1 receptor agonist for use in treating obstructive sleep apnea
WO2011071957A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Sea Lane Biotechnologies, Llc Conjugates comprising an antibody surrogate scaffold with improved pharmacokinetic properties
US8703701B2 (en) 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
EP2552951A1 (en) 2010-03-26 2013-02-06 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
JP6050746B2 (ja) 2010-05-13 2016-12-21 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションIndiana University Research And Technology Corporation Ｇタンパク質共役受容体活性を示すグルカゴンスーパーファミリーのペプチド
EP2588126A4 (en) 2010-06-24 2015-07-08 Univ Indiana Res & Tech Corp AMID-BASED GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDE PRODRUGS
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
CN102576513B (zh) 2010-09-06 2014-11-12 松下电器产业株式会社 显示装置及其控制方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
CN102010473A (zh) 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
WO2012088379A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Marcadia Biotech, Inc. Methods for treating metabolic disorders and obesity with gip and glp-1 receptor-active glucagon-based peptides
JP6118500B2 (ja) 2011-02-28 2017-04-19 ローム アンド ハース エレクトロニック マテリアルズ エルエルシーＲｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＬＬＣ フォトレジスト組成物、およびフォトリソグラフィパターンを形成する方法
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
UA126465C2 (uk) 2011-06-10 2022-10-12 Ханмі Сайенс Ко., Лтд. Пептид, що має активність оксинтомодуліну, та фармацевтична композиція для лікування ожиріння, яка його містить
RU2607365C2 (ru) 2011-06-17 2017-01-10 Ханми Сайенс Ко., Лтд. Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение
KR20140043793A (ko) 2011-06-22 2014-04-10 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 글루카곤/glp-1 수용체 공동-작용물질
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
HK1207564A1 (en) 2012-04-19 2016-02-05 Opko Biologics Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
CN104583232B (zh) 2012-06-21 2018-04-13 印第安纳大学研究及科技有限公司 展现gip受体活性的胰高血糖素类似物
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
WO2014073842A1 (en) 2012-11-06 2014-05-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Also Published As

Publication number Publication date
TW201305195A (zh) 2013-02-01
AR086969A1 (es) 2014-02-05
IL272345A (en) 2020-03-31
CL2013003619A1 (es) 2014-05-30
US20170340753A1 (en) 2017-11-30
RU2016147505A3 (es) 2020-04-08
UA125895C2 (uk) 2022-07-06
IL245556B (en) 2018-03-29
BR112013032375A2 (pt) 2016-11-22
IL257928B (en) 2020-02-27
IL257928A (en) 2018-06-28
SMT201900078T1 (it) 2019-02-28
HUE042585T2 (hu) 2019-07-29
CY1121255T1 (el) 2020-05-29
IL245556A0 (en) 2016-06-30
US11872283B2 (en) 2024-01-16
CN109306015A (zh) 2019-02-05
TWI519541B (zh) 2016-02-01
MX381780B (es) 2025-03-13
EP2721062B1 (en) 2018-11-14
BR112013032375B1 (pt) 2022-09-20
WO2012173422A1 (en) 2012-12-20
CA2838504C (en) 2020-07-21
TWI601744B (zh) 2017-10-11
JP2014518209A (ja) 2014-07-28
MX2013014779A (es) 2014-06-23
EP3502129B1 (en) 2021-04-07
WO2012173422A9 (en) 2013-03-14
RU2733544C2 (ru) 2020-10-05
PH12018501119B1 (en) 2022-08-03
IL229759A0 (en) 2014-01-30
CN103732616B (zh) 2018-08-17
MY164680A (en) 2018-01-30
IL229759A (en) 2017-08-31
EP2721062A1 (en) 2014-04-23
PL2721062T3 (pl) 2019-05-31
CN109306015B (zh) 2022-04-26
ZA201309013B (en) 2014-11-26
UA114709C2 (uk) 2017-07-25
PE20141178A1 (es) 2014-09-12
AR125914A2 (es) 2023-08-23
AU2017202672A1 (en) 2017-05-11
RU2607365C2 (ru) 2017-01-10
AU2017202672B2 (en) 2019-01-17
AU2018282298B2 (en) 2020-06-18
DK3502129T3 (da) 2021-07-12
US20190321485A1 (en) 2019-10-24
NZ718999A (en) 2017-07-28
CA3080189A1 (en) 2012-12-20
DK2721062T3 (en) 2019-02-25
HRP20190265T1 (hr) 2019-04-05
CA2838504A1 (en) 2012-12-20
PE20181268A1 (es) 2018-08-03
SG10201605006XA (en) 2016-08-30
NZ742400A (en) 2021-05-28
EP2721062A4 (en) 2014-11-12
ES2710356T3 (es) 2019-04-24
LT2721062T (lt) 2019-02-11
JP6345216B2 (ja) 2018-06-20
NZ618811A (en) 2016-05-27
CN103732616A (zh) 2014-04-16
TW201506037A (zh) 2015-02-16
US20140212440A1 (en) 2014-07-31
SI2721062T1 (sl) 2019-03-29
RU2016147505A (ru) 2018-10-24
AU2012270366B2 (en) 2017-02-02
PH12018501119A1 (en) 2019-02-04
EP3502129A1 (en) 2019-06-26
PT2721062T (pt) 2019-02-12
AU2012270366C1 (en) 2017-07-13
AU2018282298A1 (en) 2019-01-17
MX353402B (es) 2018-01-11
PH12013502517A1 (en) 2014-01-20
IL272345B (en) 2021-01-31
RU2013153198A (ru) 2015-07-27
US10363320B2 (en) 2019-07-30
SG195275A1 (en) 2013-12-30
JP6038905B2 (ja) 2016-12-07
PE20230404A1 (es) 2023-03-07
RS58606B1 (sr) 2019-05-31
TR201901402T4 (tr) 2019-02-21
CA3080189C (en) 2023-01-17
JP2017071609A (ja) 2017-04-13
AU2012270366A1 (en) 2014-01-16
KR101591411B1 (ko) 2016-02-05
US9731031B2 (en) 2017-08-15
KR101577734B1 (ko) 2015-12-29
KR20120139579A (ko) 2012-12-27
NZ733478A (en) 2020-06-26
KR20140133493A (ko) 2014-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2882520T3 (es) Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina y su uso
ES2802099T3 (es) Una composición para el tratamiento de la diabetes que comprende un análogo de oxintomodulina
ES2748158T3 (es) Formulación líquida de conjugado de proteínas que comprende la oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina
ES2973017T3 (es) Derivado del glucagón y una composición que comprende un conjugado de acción prolongada del mismo
HK40009561B (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40009561A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40003883A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
HK40003883B (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ718999B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ742400B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof