ES2883290T3 - Composición farmacéutica para el suministro de un fármaco aniónico - Google Patents

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Abstract

Una composición para suministrar un fármaco aniónico, que comprende: el fármaco aniónico como ingrediente activo; un compuesto catiónico; un copolímero de bloques anfifílico; y al menos una sal de ácido poliláctico seleccionada del grupo que consiste en los compuestos de Fórmulas 1 a 6 como se indica a continuación, en la que el fármaco aniónico forma un complejo con el compuesto catiónico por interacción electrostática, el complejo queda atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico, y la carga superficial de la micela es de -20 a 20 mV: [Fórmula 1] RO-CHZ-[A]n-[B]m-COOM en la que A es -COO-CHZ-; B es -COO-CHY-, -COO-CH2CH2CH2CH2CH2- o -COO-CH2CH2OCH2; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanillo, palmitoilo, metilo o etilo; Z e Y son cada uno un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo; M es Na, K o Li; n es un número entero de 1 a 30; y m es un número entero de 0 a 20; [Fórmula 2] RO-CHZ-[COO-CHX]p-[COOO-CHY']q-COO-CHZ-COOM en la que X es metilo; Y' es un átomo de hidrógeno o fenilo; p es un número entero de 0 a 25, q es un número entero de 0 a 25, con la condición de que p + q sea un número entero de 5 a 25; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanillo, palmitoilo, metilo o etilo; M es Na, K o Li; y Z es un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo; [Fórmula 3] RO-PAD-COO-W-M' en la que W-M' es **(Ver fórmula)** o **(Ver fórmula)** PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L- lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanoilo, palmitoilo, metilo o etilo; y M es independientemente Na, K o Li; [Fórmula 4] S-O-PAD-COO-Q en la que S es **(Ver fórmula)** L es -NR1 u -O-, en el que R1 es un átomo de hidrógeno o alquilo C1-10; Q es CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3 o CH2C6H5; a es un número entero de 0 a 4; b es un número entero de 1 a 10; M es Na, K o Li; y PAD es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero 0 de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4- dioxan-2-ona; **(Ver fórmula)** en la que R' es -PAD-OC(O)-CH2CH2C(O)-OM, en el que PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona, M es Na, K o Li; ya es un número entero de 1 a 4; y [Fórmula 6] YO-[-C(O)-(CHX)a-O-]m-C(O)-R-C(O)-[-O-(CHX')b-C(O)-]n, -OZ en la que X y X' son independientemente hidrógeno, alquilo C1-10 o arilo C6-20; Y y Z son independientemente Na, K o Li; m y n son independientemente un número entero de 0 a 95, con la condición de que 5 <m + n < 100; a y b son independientemente un número entero de 1 a 6; y R es -(CH2)k-, alquenilo divalente C2-10, arilo divalente C6-20 o una combinación de los mismos, en el que k es un número entero de 0 a 10.

Description

DESCRIPCIÓN
Composición farmacéutica para el suministro de un fármaco aniónico
[Campo Técnico]
Esta divulgación se refiere a una composición farmacéutica para suministrar un fármaco aniónico y un método para su preparación.
[Estado de la Técnica]
Se han estudiado durante mucho tiempo tecnologías de administración de fármacos seguras y eficientes para tratamiento usando fármacos aniónicos, particularmente ácido nucleico, y se han desarrollado varios sistemas de administración y tecnologías de administración. En particular, se han desarrollado tecnologías de administración que usan un sistema de suministro viral que usa adenovirus o retrovirus, etc., y un sistema de suministro no viral que usa lípidos catiónicos, polímeros catiónicos, etc.
Sin embargo, una tecnología que usa un sistema de suministro viral está expuesta a riesgos tales como una reacción inmune inespecífica, etc., y se sabe que tiene muchos problemas en la comercialización debido al complejo proceso de producción. Por lo tanto, estudios recientes han progresado hacia un sistema de suministro no viral que usa lípidos catiónicos o polímeros catiónicos para superar estas desventajas. Aunque el sistema de suministro no viral es menos eficaz que el sistema de suministro viral tiene menos efectos secundarios y la producción es menos costosa que el sistema de suministro viral.
Se han realizado muchos estudios sobre el sistema de suministro no viral utilizado para el suministro de ácido nucleico, y los ejemplos más representativos del mismo incluyen un complejo de lípido catiónico y ácido nucleico (lipoplex) y un complejo de un polímero policatiónico y ácido nucleico (poliplex). Se han realizado muchos estudios sobre lípidos catiónicos o polímeros policatiónicos porque estabilizan los fármacos aniónicos al formar un complejo mediante interacciones electrostáticas con el fármaco aniónico y facilitan el suministro a las células ((De Paula D, Bentley MV, Mahato RI, Hydrophobization and bioconjugation for enhanced siRNA delivery and targeting, RNA 13 (2007) 431-56; Gary DJ, Puri N, Won YY, Polymer-based siRNA delivery: Perspectives on the fundamental and phenomenological distinctions from polymer-based DNA delivery, J Control Release 121 (2007) 64-73).
Sin embargo, si los lípidos catiónicos o polímeros policatiónicos estudiados hasta ahora se usan en una cantidad requerida para obtener efectos suficientes, puede resultar una toxicidad grave, aunque menor que con el sistema de suministro viral, y por lo tanto puede ser inadecuado para uso terapéutico. Y aunque un complejo lípido-ácido nucleico que forma un complejo a través de un enlace entre un lípido catiónico y un ácido nucleico para suministrar el ácido nucleico a las células se usa ampliamente en experimentos de líneas celulares, no forma una estructura que pueda ser estable en sangre y, por lo tanto, no se puede utilizar en el cuerpo vivo (véase el documento US 6.458.382).
Además, se está estudiando el sistema de suministro que utiliza el ácido nucleico conjugado directamente con un lípido o un polímero, pero si un lípido o un polímero se conjuga directamente con un ácido nucleico, existen dificultades en términos de eficacia de conjugación o control de calidad. Además, la eficacia del suministro de ácido nucleico aún no se ha validado claramente.
Por lo tanto, se requiere desarrollar una tecnología de administración de fármacos aniónicos usando la cantidad mínima de polímero catiónico o lípido catiónico para disminuir la toxicidad, que es estable en sangre y fluidos corporales, y que permite el suministro a las células para obtener efectos suficientes. Mientras tanto, ha habido varios intentos de usar un copolímero de bloques anfifílico como un sistema de suministro de fármacos que puede solubilizar un fármaco poco soluble en agua formando una micela polimérica y estabilizar un fármaco poco soluble en agua en una solución acuosa (Publicación Internacional No. WO 1997/010849). Este copolímero de bloques anfifílico puede solubilizar un fármaco hidrófobo poco soluble en agua formando una micela polimérica que tiene una parte interior hidrófoba. Sin embargo, debido a que un fármaco hidrófilo tal como un ácido nucleico aniónico no puede quedar atrapado en la micela polimérica, no es adecuado para el suministro de un fármaco aniónico que incluya un ácido nucleico. También se divulgó una composición para el suministro de fármaco aniónico que forma un complejo de un ácido nucleico y un lípido catiónico por interacción electrostática para atrapar el complejo en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico. Sin embargo, se necesitan mejoras en términos de estabilidad del ácido nucleico en sangre y el direccionamiento específico de tejidos cancerosos.
La patente coreana No. 1296326 divulga una composición para el suministro de un fármaco aniónico que comprende un fármaco aniónico; un lípido catiónico; un copolímero de bloques anfifílico y un ácido poliláctico, en el que el fármaco aniónico forma un complejo con el lípido catiónico, y el complejo está atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y el ácido poliláctico. Sin embargo, debido a que el ácido poliláctico usado en esta patente es un polímero de ácido poliláctico convencional que tiene un grupo carboxilo en el extremo, el suministro del fármaco no es eficaz.
Mientras tanto, muchas enfermedades resultan de la sobreexpresión de genes de enfermedades o de la expresión de genes mutados. Dado que el ARNic (ARN de interferencia corto) inhibe la expresión de genes específicos de una manera específica de la secuencia, se destaca como un fármaco de ácido nucleico terapéutico. Particularmente, se espera que el ARNic supere los problemas del nucleótido antisentido o ribozima porque el ARNic tiene más potencia y una selectividad génica más precisa que el nucleótido antisentido o ribozima. El ARNic es una molécula de ARN bicatenaria corta e inhibe la expresión de los genes correspondientes al escindir el ARNm de genes que tienen una secuencia complementaria al mismo (McManus y Sharp, Nature Rev. Genet. 3: 737 (2002); Elbashir, et al., Genes Dev. 15: 188 (2001)).
Sin embargo, a pesar de estas ventajas, se sabe que el ARNic se degrada rápidamente por la nucleasa en la sangre y se excreta rápidamente del cuerpo a través de los riñones. También se sabe que ARNic no puede atravesar fácilmente una membrana celular porque está fuertemente cargado negativamente. Por lo tanto, para usar ARNic como agente terapéutico, es necesario desarrollar un sistema de suministro que pueda estabilizar ARNic en sangre, suministrarlo de manera eficiente a las células o tejidos diana y, sin embargo, no mostrar toxicidad.
[Contenido de la invención]
[Problemas por resolver]
Para resolver los problemas descritos anteriormente, un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición para suministrar un fármaco aniónico, que comprende una estructura micelar que contenía una sal de ácido poliláctico para suministrar eficazmente fármacos aniónicos al cuerpo.
[Medios técnicos para resolver los problemas]
Una realización de la presente invención se refiere a una composición para suministrar un fármaco aniónico que comprende una estructura micelar que contenía una sal de ácido poliláctico para suministrar eficazmente fármacos aniónicos al cuerpo, el uso de la composición para suministrar fármacos aniónicos.
La composición para suministrar un fármaco aniónico que contenía la estructura micelar de acuerdo con una realización de la presente invención comprende una estructura micelar de un copolímero de bloques anfifílico y una sal de ácido poliláctico, que incluye un complejo de un fármaco y un compuesto catiónico. Específicamente, la composición comprende un fármaco aniónico como ingrediente activo; un compuesto catiónico; un copolímero de bloques anfifílico; y una sal de ácido poliláctico, en la que el fármaco aniónico forma un complejo con el compuesto catiónico por interacción electrostática, y el complejo queda atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico.
La composición es soluble en agua y contiene una sal de ácido poliláctico como componente de la estructura micelar. Por lo tanto, en caso de administración en el cuerpo, la composición tiene una mayor estabilidad en sangre y puede suministrarse de manera eficiente a un sitio diana, especialmente tejido canceroso, evitando el sistema reticuloendotelial (RES). Por lo tanto, la composición sería útil para evitar el RES y/o mejorar el direccionamiento. El método para preparar la composición para suministrar un fármaco aniónico puede comprender (a) disolver un fármaco aniónico, un compuesto catiónico, un copolímero de bloques anfifílico y una sal de ácido poliláctico en un disolvente orgánico miscible en agua o un disolvente mixto de una solución acuosa y un disolvente orgánico; (b) eliminar una capa del disolvente orgánico de la etapa (a); y (c) añadir una solución acuosa a la mezcla de la etapa (b) en la que se elimina el disolvente orgánico, para formar micelas.
[Efectos de la invención]
La composición farmacéutica para suministrar un fármaco aniónico de acuerdo con una realización de la presente invención es capaz de mejorar la estabilidad del fármaco aniónico en sangre o fluidos corporales aislando el fármaco aniónico del entorno externo mediante el uso de un compuesto catiónico y una estructura micelar compuesta por un copolímero de bloques anfifílico y una sal de ácido poliláctico. Por lo tanto, la composición farmacéutica puede mejorar la estabilidad del fármaco aniónico en sangre o fluidos corporales cuando se administra en el cuerpo. Especialmente, la composición farmacéutica ayuda al fármaco aniónico a evitar el sistema reticuloendotelial (RES) para que sea administrado de manera eficiente a las células.
[Breve explicación de los dibujos]
La Figura 1 es una estructura esquemática del sistema de suministro de micelas poliméricas en el que el fármaco aniónico y el compuesto catiónico están atrapados de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 2 es un resultado de la medición de RMN de PLANa preparado de acuerdo con el Ejemplo de Preparación 8.
[Modos de la invención]
A continuación, se explicará en detalle la presente invención.
Entre los componentes de la composición de una realización de la presente invención, el fármaco aniónico y el compuesto catiónico están atrapados en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico. En la Figura 1 se muestra una estructura esquemática del sistema de micelas polimérico, en el que están atrapados el fármaco aniónico y el compuesto catiónico. Con referencia a la Figura 1, se forma un complejo del fármaco aniónico y el compuesto catiónico por interacción electrostática entre el fármaco aniónico y el compuesto catiónico. El complejo formado del fármaco aniónico y el compuesto catiónico está atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico.
Como se muestra en la Figura 1, la estructura micelar se forma a partir del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico. En un ambiente acuoso, la parte hidrofílica del copolímero de bloques anfifílico forma la pared externa de la micela, y la parte hidrófoba del copolímero de bloques anfifílico y una sal de ácido poliláctico, un ingrediente independiente, forman la pared interna de la micela. El fármaco aniónico y el compuesto catiónico quedan atrapados dentro de la micela formada. El complejo del fármaco aniónico y el compuesto catiónico está atrapado en la estructura micelar formada a partir del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico, por lo que puede tener una estabilidad mejorada en sangre o fluidos corporales. De acuerdo con una realización, el tamaño de partícula de la micela puede ser de 10 a 200 nm, preferiblemente de 10 a 150 nm. Además, la carga estándar de la partícula micelar es de -20 a 20 mV, preferiblemente de -10 a 10 mV. El tamaño de partícula y la carga estándar se determinan considerando la estabilidad de la estructura micelar, el contenido de los ingredientes constitucionales, la absorción de fármacos aniónicos en un organismo y la conveniencia de la esterilización como composición farmacéutica.
El fármaco aniónico como ingrediente activo en la composición de una realización de la presente invención puede incluir cualquier material que esté cargado negativamente en una solución acuosa y tenga actividad farmacológica. De acuerdo con una realización, la propiedad aniónica puede proporcionarse a partir de al menos un grupo funcional seleccionado de los grupos que consisten en grupo carboxílico, grupo fosfato y grupo sulfato. De acuerdo con una realización, el fármaco aniónico puede ser un fármaco multianiónico tal como un péptido, una proteína o una heparina, o un ácido nucleico.
Además, el ácido nucleico puede ser un ácido desoxirribonucleico, un ácido ribonucleico o un fármaco de ácido nucleico en el que la cadena principal, el azúcar o la base se modifican químicamente o se modifica su extremo. Ejemplos más específicos pueden ser un ácido nucleico seleccionado del grupo que consiste en ARN, ADN, ARNic, aptámero, ODN antisentido (oligodesoxinucleótido), ARN antisentido, ribozima y ADNzima, etc. Y la cadena principal, azúcar o base del ácido nucleico puede ser químicamente modificado o el extremo puede modificarse con el fin de aumentar la estabilidad en sangre o debilitar las reacciones inmunes, y similares. Específicamente, una parte del enlace fosfodiéster del ácido nucleico puede estar sustituida con un enlace fosforotioato o boranofosfato, o las posiciones 2'-OH de una parte de las bases de ribosa pueden incluir al menos un tipo de nucleótido modificado al que se le introducen varios grupos funcionales, tales como el grupo metilo, grupo metoxietilo, flúor y similares.
Además, al menos un extremo del ácido nucleico puede modificarse con uno o más seleccionados del grupo que consiste en colesterol, tocoferol y ácido graso C10-24. En el caso de ARNic, por ejemplo, el extremo 5' o 3', o ambos extremos de la cadena sentido y/o antisentido pueden modificarse, y preferiblemente puede modificarse el extremo de la cadena sentido.
El colesterol, tocoferol y ácido graso C10-24 pueden incluir análogos, derivados y metabolitos de los mismos.
El ARNic se refiere a ARN dúplex o ARN monocatenario que tiene una forma bicatenaria en el ARN monocatenario, que puede reducir o inhibir la expresión de un gen diana mediando la degradación del ARNm complementario a la secuencia de ARNic si el ARNic existe en la misma célula que el gen diana. El enlace entre las cadenas dobles se forma mediante un enlace de hidrógeno entre nucleótidos, no todos los nucleótidos en las cadenas dobles deben unirse de forma complementaria con los nucleótidos correspondientes, y ambas cadenas pueden estar separadas o pueden no estar separadas. De acuerdo con una realización, la longitud del ARNic puede ser de aproximadamente 15 a 60 nucleótidos (es decir, el número de nucleótidos de un ARN bicatenario, es decir, el número de pares de bases, y en el caso de un ARN monocatenario, significa la longitud de las cadenas dobles en el ARN monocatenario), específicamente alrededor de 15 a 30 nucleótidos, y más específicamente alrededor de 19 a 25 nucleótidos.
De acuerdo con una realización, el ARNic bicatenario puede tener una saliente de 1-5 nucleótidos en uno o ambos extremos del extremo 3' o 5'. De acuerdo con otra realización, puede ser romo sin un saliente en ambos extremos. Específicamente, puede ser ARNic divulgado en la publicación de patente de los Estados Unidos No. 2002/0086356 o la patente de los Estados Unidos No. 7.056.704 (incorporadas en este documento por referencias).
Además, el ARNic puede tener una estructura simétrica con las mismas longitudes de dos cadenas, o puede tener una estructura no simétrica con una cadena más corta que la otra. Específicamente, puede ser una molécula de ARNic no simétrica de doble cadena que consta de 19 a 21 nucleótidos (nt) antisentido; y de 15 a 19 nt sentido que tiene una secuencia complementaria a la antisentido, en la que el extremo 5' de la antisentido es el extremo romo, y el extremo 3' de la antisentido tiene una saliente de 1-5 nucleótidos. Específicamente, puede ser ARNic divulgado en la Publicación Internacional No. WO 09/078685.
El fármaco aniónico de una realización de la presente invención se incluye preferiblemente en el contenido de 0,001 al 10% en peso, específicamente de 0,01 al 5% en peso, con base en el peso total de la composición. Si el contenido es inferior al 0,001% en peso, la cantidad de sistema de suministro es demasiado grande en comparación con el fármaco y, por lo tanto, el sistema de suministro puede provocar efectos secundarios. Si excede el 10% en peso, la estabilidad de la micela puede disminuir y la tasa de pérdida durante la esterilización del filtro puede aumentar porque la micela es demasiado grande.
De acuerdo con una realización, el compuesto catiónico forma un complejo con el fármaco aniónico mediante interacciones electrostáticas, y el complejo queda atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico. Por lo tanto, el compuesto catiónico puede incluir cualquier tipo de compuesto capaz de formar un complejo con el fármaco aniónico por interacción electrostática y, por ejemplo, puede incluir lípidos y polímeros. El lípido catiónico puede incluir cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODa c ), bromuro N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio (DDAB), cloruro N-(1-(2,3-dioleoiloxi)propil-N,N,N-trimetilamonio (DOt A p ), N,N-dimetil-(2,3-dioleoiloxi)propilamina (DODMA), N,N,N-trimetil-(2,3-dioleoiloxi)propilamina (DOTMA), 1,2-diacil-3-trimetilamonio-propano (TAP), 1,2-diacil-3-dimetilamonio-propano (DAP), 3p-[N-(N'N'N'-trimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (TC-colesterol), 3p-[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (DC-colesterol), 3 p-[N-(N'-monometilaminoetano)carbamoil]colesterol (MC-colesterol), 3p-[N-(aminoetano)carbamoil]colesterol (AC-colesterol), colesteriloxipropano-1-amina (COPA), tocoferol N-(N'-aminoetano)carbamoilpropanoico (AC-tocoferol), tocoferol N-(N'-metilaminoetano)carbamoilpropanoico (MC-tocoferol), o una combinación de los mismos. Si se usa un lípido catiónico de este tipo, para disminuir la toxicidad inducida por el lípido catiónico, puede ser preferible usar menos lípido policatiónico que tiene una alta densidad de carga y, más específicamente, solo puede incluirse en una molécula un grupo funcional capaz de exhibir una carga positiva en una solución acuosa. Por lo tanto, en una realización preferible, el lípido catiónico puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en 30-[N-(N',N',N'-trimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (TC-colesterol), 3p-[ N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (DC-colesterol), 3p-[N-(N'-monometilaminoetano)carbamoil] colesterol (MC-colesterol), 3p-[N-(aminoetano)carbamoil]colesterol (AC-colesterol), cloruro de N-(1-(2,3-dioleoiloxi) propil-N,N,N-trimetilamonio (DOTAP), N,N-dimetil-(2,3-dioleoiloxi)propilamina (Do DMA) y N,N,N-trimetil-(2,3-di oleoiloxi)propilamina (DOTMA). Por otro lado, el polímero catiónico puede seleccionarse del grupo que consiste en quitosano, glicol quitosano, protamina, polilisina, poliarginina, poliamidoamina (PAMAM), polietilenimina, dextrano, ácido hialurónico, albúmina, polímero polietilenimina (PEI), poliamina y polivinilamina (PVAm), y preferiblemente puede ser al menos uno seleccionado entre polímero polietilenimina (PEI), poliamina y polivinilamina (PVA).
En una realización, el lípido catiónico puede estar representado por la siguiente Fórmula 7:
[Fórmula 7]
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en la que n y m son cada uno de 0 a 12 con la condición de que 2 < n m < 12, a y b son cada uno de 1 a 6, y R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrocarburos C11-25 saturados e insaturados. Preferiblemente, n y m pueden ser independientemente de 1 a 9, y 2 < n m < 10. Preferiblemente, a y b son de 2 a 4.
Preferiblemente, R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en laurilo, miristilo, palmitilo, estearilo, araquidilo, behenilo, lignocerilo, cerotilo, miristoleilo, palmitoleilo, sapienilo, oleilo, linoleilo, araquidonilo, eicosapentaenilo, erucilo y docosahexaenilo y cerotilo.
Los ejemplos específicos del lípido catiónico pueden ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en 1,6-dioleoil trietilen tetramida, 1,8-dilinoleoil tetraetilen pentamida, 1,4-dimiristoleoil dietilen triamida, 1,10-diestearoil pentaetilen hexamida y 1,10-dioleoil pentaetilen hexamida.
El compuesto catiónico usado en una realización de la presente invención puede incluirse en el contenido de 0,01 al 50% en peso, y específicamente del 0,1 al 10% en peso con base en el peso total de la composición. Si el contenido es inferior al 0,01% en peso, puede que no sea suficiente para formar un complejo con el fármaco aniónico. Si excede el 50% en peso, la micela puede ser demasiado grande y, por lo tanto, la estabilidad de la micela puede disminuir y la tasa de pérdida durante la esterilización del filtro puede aumentar.
El compuesto catiónico se une al fármaco aniónico mediante interacciones electrostáticas para formar un complejo. De acuerdo con una realización, la relación de cantidades de carga eléctrica del compuesto catiónico (N) y el fármaco aniónico (P) (N/P: la relación de carga eléctrica positiva del compuesto catiónico con respecto a la carga eléctrica negativa del fármaco aniónico) es de 0,1 a 128, específicamente de 0,5 a 64, más específicamente de 1 a 32, mucho más específicamente de 1 a 24, y lo más específicamente de 6 a 24. Si la relación (N/P) es menor de 0,1, puede ser difícil formar un complejo que incluya una cantidad suficiente de fármaco aniónico. Por otro lado, si la relación (N/P) excede 128, se puede inducir toxicidad.
De acuerdo con una realización, el copolímero de bloques anfifílico puede ser un copolímero de bloques de tipo A-B que incluye un bloque A hidrófilo y un bloque B hidrófobo. El copolímero de bloques de tipo A-B forma una micela polimérica de tipo núcleo-cubierta en una solución acuosa, en la que el bloque B hidrófobo forma un núcleo (una pared interna) y el bloque A hidrófilo forma una cubierta (una pared externa).
A este respecto, el bloque A hidrófilo puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en polialquilenglicol, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, poliacrilamida y derivados de los mismos. El bloque A hidrófilo puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en monometoxipolietilenglicol, monoacetoxipolietilenglicol, polietilenglicol, un copolímero de polietileno y propilenglicol y polivinilpirrolidona. El bloque A hidrófilo puede tener un peso molecular promedio en número de 200 a 50.000 Dalton, específicamente de 1.000 a 20.000 Dalton, y más específicamente de 1.000 a 5.000 Dalton.
Si es necesario, un grupo funcional o un ligando que puede unirse a un tejido o célula específicos, o un grupo funcional capaz de promover suministro intracelular puede conjugarse químicamente con el extremo del bloque A hidrófilo para controlar la distribución del sistema de suministro micelar polimérico que se forma a partir del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico en un organismo, o para aumentar la eficacia del suministro del sistema de suministro micelar a las células. El grupo funcional o ligando puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en monosacárido, polisacárido, vitaminas, péptidos, proteínas y un anticuerpo contra un receptor de la superficie celular. En ejemplos más específicos, el grupo funcional o ligando puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en anisamida, vitamina B9 (ácido fólico), vitamina B12, vitamina A, galactosa, lactosa, manosa, ácido hialurónico, péptido RGD, péptido NGR, transferrina, un anticuerpo contra un receptor de transferrina, etc.
El bloque B hidrófobo es un polímero biocompatible y biodegradable, y puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en poliéster, polianhídrido, poliaminoácido, poliortoéster y polifosfazina. Ejemplos más específicos de los mismos pueden incluir polilactida, poliglicólido, policaprolactona, polidioxan-2-ona, un copolímero de polilactida y glicólido, un copolímero de polilactida y polidioxan-2-ona, un copolímero de polilactida y policaprolactona y un copolímero de poliglicólido y policaprolactona. De acuerdo con otra realización, el bloque B hidrófobo puede tener un peso molecular promedio en número de 50 a 50.000 Dalton, específicamente de 200 a 20.000 Dalton, y más específicamente de 1.000 a 5.000 Dalton. Y para aumentar la hidrofobicidad del bloque hidrófobo para mejorar la estabilidad de la micela, se pueden conjugar químicamente tocoferol, colesterol o ácido graso C10-24 a un grupo hidroxilo al extremo del bloque hidrófobo.
El copolímero de bloques anfifílico que comprende el bloque hidrófilo (A) y el bloque hidrófobo (B) puede incluirse en el contenido del 40 al 99,98% en peso, específicamente del 85 al 99,8% en peso, y más específicamente del 90 al 99,8% en peso, con base en el peso seco total de la partícula. Si el contenido del copolímero de bloques anfifílico es inferior al 40% en peso, la micela puede llegar a ser tan grande que la estabilidad de la micela puede disminuir y la pérdida durante la esterilización por filtración puede aumentar. Si excede el 99,98% en peso, el contenido de fármaco aniónico que se puede incorporar puede llegar a ser demasiado pequeño.
De acuerdo con otra realización, el copolímero de bloques anfifílico puede incluir del 40 al 70% en peso del bloque hidrófilo (A), y específicamente del 50 al 60% en peso del bloque hidrófilo (A), con base en el peso del copolímero. Si la relación del bloque hidrófilo (A) es inferior al 40% en peso, la solubilidad del polímero en agua es baja y, por lo tanto, puede ser difícil formar una micela. Por lo tanto, la relación del bloque hidrófilo (A) es preferiblemente no menos del 40% en peso para producir suficiente solubilidad en agua para que el copolímero forme una micela. Si supera el 70% en peso, la hidrofilicidad puede ser demasiado alta y, por lo tanto, la estabilidad de la micela polimérica puede volverse demasiado baja y puede ser difícil solubilizar un complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico. Por lo tanto, a la luz de la estabilidad de la micela, la relación del bloque hidrófilo (A) es preferiblemente no más del 70% en peso.
De acuerdo con una realización, el copolímero de bloques anfifílico permite encerrar el complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico en la estructura micelar en una solución acuosa, en la que la relación entre el peso del complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico (a) con respecto al peso del copolímero de bloques anfifílico (b) [a/b * 100; (el peso del fármaco aniónico el peso del lípido catiónico)/el peso del copolímero de bloques anfifílico x 100] puede ser del 0,001 al 100% en peso, específicamente del 0,01 al 50% en peso, y más específicamente del 0,1 al 10% en peso. Si la relación en peso es inferior al 0,001% en peso, el contenido del complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico puede llegar a ser demasiado bajo y, por lo tanto, puede resultar difícil proporcionar un contenido suficiente del fármaco aniónico. Si excede el 100% en peso, puede que no se forme una estructura micelar de tamaño apropiado considerando el peso molecular del copolímero de bloques anfifílico y la cantidad de complejo del fármaco aniónico y el lípido.
La estructura micelar en la composición de acuerdo con una realización de la presente invención comprende una sal de ácido poliláctico (por ejemplo, PLANa). La sal de ácido poliláctico se distribuye al núcleo (pared interna) de la micela para mejorar la hidrofobicidad del núcleo y estabilizar la micela y, al mismo tiempo, ayudar a evitar el sistema reticuloendotelial (RES) en el cuerpo. Es decir, un anión de ácido carboxílico en la sal de ácido poliláctico se une eficazmente al complejo catiónico para disminuir la carga superficial de la micela polimérica. Por lo tanto, la carga positiva del potencial de superficie de una micela polimérica sería menor que la de una micela polimérica que no contiene una sal de ácido poliláctico y, por lo tanto, puede ser menos capturada por el sistema reticuloendotelial y administrada de manera eficiente a los sitios diana (por ejemplo, células cancerosas, células inflamatorias, etc.). La sal de ácido poliláctico, que es un componente independiente del copolímero de bloques anfifílico, es un componente de una pared interna de la micela y puede tener un peso molecular promedio en número de 500 a 50.000 Dalton, y específicamente de 1.000 a 50.000 Dalton. Si el peso molecular promedio en número es menor de 500 Dalton, la sal de ácido poliláctico no existe fácilmente en el núcleo (pared interna) de la micela porque la hidrofobicidad es demasiado baja. Si el peso molecular promedio en número supera los 50.000 Dalton, la micela polimérica puede ser demasiado grande.
La sal de ácido poliláctico puede usarse en 10 a 200 partes en peso, específicamente 10 a 100 partes en peso, y más específicamente 30 a 60 partes en peso por 100 partes en peso del copolímero de bloques anfifílico. Si el contenido de la sal de ácido poliláctico supera las 200 partes en peso por 100 partes en peso del copolímero de bloques anfifílico, el tamaño de la micela puede ser demasiado grande y, por lo tanto, la filtración por membrana esterilizante se vuelve difícil. Si el contenido de la sal de ácido poliláctico es inferior a 1 parte en peso por 100 partes en peso del copolímero de bloques anfifílico, es difícil obtener el efecto deseado.
De acuerdo con una realización, la composición de una realización de la presente invención puede comprender de 10 a 1.000 partes en peso del copolímero de bloques anfifílico y de 5 a 500 partes en peso de una sal de ácido poliláctico por 1 parte en peso del fármaco aniónico. Preferiblemente, el copolímero de bloques anfifílico puede tener de 50 a 800 partes en peso y más preferiblemente de 100 a 500 partes en peso. Preferiblemente, la sal de ácido poliláctico puede ser de 10 a 300 partes en peso y más preferiblemente de 50 a 100 partes en peso.
De acuerdo con una realización, el extremo de la sal de ácido poliláctico opuesto al extremo donde se forma la sal puede sustituirse con uno seleccionado del grupo que consiste en hidroxilo, acetoxi, benzoiloxi, decanoiloxi, palmitoiloxi y alcoxi C1-2.
La sal de ácido poliláctico se selecciona del grupo que consta de las Fórmulas 1 a 6 como se indica a continuación.
[Fórmula 1] RO-CHZ-[A]n-[B]m-COOM
en la que A es -COO-CHZ-; B es -COO-CHY-, -COO-CH2CH2CH2CH2CH2- o -COO-CH2CH2OCH2 ; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoílo, decanoilo, palmitoilo, metilo o etilo; Z y Y son cada uno un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo; M es Na, K o Li; n es un número entero de 1 a 30; y m es un número entero de 0 a 20;
[Fórmula 2] RO-CHZ-[COOCHX]p-[OOO-CHY']q-COO-CHZ-COOM en la que X es metilo; Y' es un átomo de hidrógeno o fenilo; p es un número entero de 0 a 25, q es un número entero de 0 a 25, con la condición de que p q sea un número entero de 5 a 25; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanoilo, palmitoilo, metilo o etilo; M es Na, K o Li; y Z es un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo;
[Fórmula 3] RO-PAD-COO-W-M'
en la que W-M' es
o
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PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanoilo, palmitoilo, metilo o etilo; y M es independientemente Na, K o Li;
[Fórmula 4] S-O-PAD-COO-Q
en la que S es
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L es -NR1- o -O-, en la que R1 es un átomo de hidrógeno o alquilo C1-10; Q es CH3 , CH2CH3 , CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3 o CH2C6H5; a es un número entero de 0 a 4; b es un número entero de 1 a 10; M es Na, K o Li; y PAD es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona;
[Fórmula 5]
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en la que R' es -PAD-OC(O)-CH2CH2-C(O)-OM, en la que PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona, M es Na, K o Li; y a es un número entero de 1 a 4; y
[Fórmula 6] YO-[-C(O)-(CHX)a-O-]m-C(O)-R-C(O)-(-O-(CHX')b-C(O)-]n-OZ
en la que X y X' son independientemente hidrógeno, alquilo C1-10 o arilo C6-20; Y y Z son independientemente Na, K o Li; m y n son independientemente un número entero de 0 a 95, con la condición de que 5 < m n <100; a y b son independientemente un número entero de 1 a 6; y R es -(CH2)k-, alquenilo divalente C2-10, arilo divalente C6-20 o una combinación de los mismos, en la que k es un número entero de 0 a 10.
La sal de ácido poliláctico es preferiblemente el compuesto de Fórmula 1 o Fórmula 2.
En una realización de la presente invención, la composición puede comprender además un lípido fusogénico en una cantidad de 0,01 al 50% en peso, y específicamente de 0,1 al 10% en peso basado en el peso total de la composición, para aumentar la eficiencia de suministro del fármaco aniónico en las células.
El lípido fusogénico forma un complejo del fármaco aniónico, el lípido catiónico y el lípido fusogénico por interacción electrostática cuando se mezcla con el complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico. El complejo que contenía el lípido fusogénico está atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico. En una realización, el lípido fusogénico se puede seleccionar del grupo que consiste en fosfolípido, colesterol, tocoferol y combinaciones de los mismos.
Específicamente, el fosfolípido puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilcolina (PC) y ácido fosfatídico. La fosfatidiletanolamina (PE), la fosfatidilcolina (PC) y el ácido fosfatídico pueden estar combinados con uno o dos ácidos grasos C10-24. El colesterol y el tocoferol pueden incluir análogos, derivados y metabolitos de cada uno de colesterol y tocoferol.
Específicamente, el lípido fusogénico puede seleccionarse del grupo que consiste en dilauroil fosfatidiletanolamina, dimiristoil fosfatidiletanolamina, dipalmitoil fosfatidiletanolamina, diestearoil fosfatidiletanolamina, dioleoil fosfatidiletanolamina, diolinoleoil fosfatidiletanolamina, 1 -palmitoil-2-oleoil fosfatidiletanolamina, 1,2-difitanoil-3-snfosfatidiletanolamina, dilauroil fosfatidilcolina, dimiristoil fosfatidilcolina, dipalmitoil fosfatidilcolina, diestearoil fosfatidilcolina, dioleil fosfatidilcolina, dilinoleoil fosfatidilcolina, 1-palmitoil-2-oleoil fosfatidilcolina 1,2-difitanoil-3-snfosfatidilcolina, ácido dilauroil fosfatídico, ácido dimiristoil fosfatídico, ácido dipalmitoil fosfatídico, ácido diestearoil fosfatídico, ácido dioleoil fosfatídico, ácido dilinoleoil fosfatídico, ácido 1-pamitoil-2-oleoil fosfatídico, ácido, 1,2-difitanoil-3-sn-fosfatídico, colesterol, tocoferol y combinaciones de los mismos.
De acuerdo con una realización preferida, el lípido fusogénico puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE), 1,2-dipalmitoleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC), 1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfocolina (DOPC) y 1,2-dipalmitoleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DPPE), etc.
De acuerdo con una realización de la presente invención, la composición, que contenía el complejo fármaco aniónicocompuesto catiónico atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico, puede suministrarse en la ruta de los vasos sanguíneos, tejido muscular, subcutáneo, oral, óseo, transdérmico o local, y similares, y puede formularse en diversas formulaciones de administración oral o parenteral. Los ejemplos de la formulación de administración oral pueden incluir tabletas, cápsulas, polvo y líquido, y los ejemplos de la formulación de administración parenteral pueden incluir gotas para los ojos e inyección. De acuerdo con una realización preferida, la composición puede ser una formulación inyectable. Por ejemplo, si el compuesto se liofiliza, puede reconstituirse con agua destilada para inyección, solución salina fisiológica al 0,9%, solución acuosa de dextrosa al 5% y similares, para formulación en una formulación para inyección.
El método para preparar la composición para suministrar un fármaco aniónico que contenía el fármaco aniónico, el lípido catiónico, el copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico puede comprender:
(a) disolver un fármaco aniónico, un compuesto catiónico, un copolímero de bloques anfifílico y una sal de ácido poliláctico en un disolvente orgánico miscible en agua o un disolvente mixto de una solución acuosa y un disolvente orgánico;
(b) eliminar una capa de disolvente orgánico de la mezcla de la etapa (a); y
(c) añadir una solución acuosa a la mezcla de la etapa (b) en la que se elimina el disolvente orgánico, para formar micelas.
Específicamente, en la etapa (a), el fármaco aniónico, el compuesto catiónico, el copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico se mezclan con el disolvente orgánico miscible en agua o el disolvente mixto de una solución acuosa y un disolvente orgánico para formar un complejo. Específicamente, el disolvente orgánico miscible en agua puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en acetona, etanol, metanol y ácido acético, y el disolvente orgánico en el disolvente mixto puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en acetato de etilo, acetonitrilo, cloruro de metileno, cloroformo y dioxano. La solución acuosa puede ser agua destilada, agua para inyección o tampón. La relación de mezcla del disolvente orgánico y la solución acuosa en el disolvente mixto puede no estar particularmente limitada. Por ejemplo, sobre la base del volumen, la relación del disolvente orgánico y la solución acuosa en el disolvente mixto puede ser de 1:0,1 a 50, y más específicamente de 1:0,5 a 10 (volumen de disolvente orgánico : volumen de solución acuosa), pero puede no limitarse a las mismas.
En la etapa (b), el disolvente orgánico se puede eliminar de la mezcla obtenida de la etapa (a) por evaporación. La mezcla restante se disuelve en la solución acuosa en la etapa (c) después de que se evapora el disolvente orgánico, por lo que el complejo del fármaco aniónico y el compuesto catiónico queda atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico. El tipo y la cantidad de la solución acuosa se describieron anteriormente.
El método puede comprender además la etapa (d) para liofilización añadiendo un coadyuvante de liofilización, después de la etapa (c).
El método de preparación puede comprender además un proceso para esterilizar la solución de micelas de polímero de la etapa (c) usando un filtro esterilizante, antes de liofilizar en la etapa (d).
El coadyuvante de liofilización usado se añade para ayudar a la composición liofilizada a mantener una forma de torta, o para ayudar a que la composición se funda rápida y uniformemente durante el proceso de reconstitución después de la liofilización de la composición de copolímero de bloques anfifílico. Específicamente, el coadyuvante de liofilización puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en lactosa, manitol, sorbitol y sacarosa. La cantidad de coadyuvante de liofilización puede ser del 1 al 90% en peso, y más específicamente del 10 al 60% en peso, con base en el peso seco total de la composición liofilizada.
De acuerdo con el método, se prepara una composición en la que un complejo del fármaco aniónico y el compuesto catiónico está atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico. Específicamente, la partícula micelar en la composición preparada es estable en sangre y tiene un tamaño de partícula de 10 a 200 nm, y específicamente de 10 a 150 nm.
[Descripción detallada para realizar la invención]
A continuación, la presente invención se explicará en detalle con referencia a los siguientes Ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos son solo para ilustrar la invención y su alcance no se limita a los mismos de ninguna manera.
[Ejemplo de preparación 1] Síntesis de 1,6-dioleoil trietilentetramida
El compuesto del título se sintetizó e identificó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 de la Publicación Internacional No. WO 2012-091523.
[Ejemplos de preparación 2 y 3] Polimerización de copolímero de bloques de mPEG-PLA (monometoxi etilenglicolpolilactida) (A-B)
Se sintetizó mPEG-PLA que tiene un peso molecular promedio en número de 5.000 - 4.000 Dalton de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo de preparación 1 de la Publicación internacional No. WO 2012-09152 [Ejemplo de preparación 2].
Se sintetizó un copolímero de bloques mPEG-PLA que tiene un peso molecular promedio en número de 2.000 - 1.750 Dalton de acuerdo con el mismo método utilizando monometoxipolietilenglicol (peso molecular de 2.000 Dalton o menos, corporación NOF) [Ejemplo de preparación 3].
[Ejemplos de preparación 4 y 5] Polimerización de mPEG-PLA-tocoferol
Se obtuvo mPEG-PLA-tocoferol (un peso molecular promedio en número de 5.000 - 4.000 - 530 Dalton) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo de preparación 2 de la publicación internacional No. WO 2012-091523 [Ejemplo de preparación 4].
Se obtuvo mPEG-PLA-tocoferol con un peso molecular promedio en número de 2.000 - 1.750 - 530 Dalton de acuerdo con el mismo método [Ejemplo de preparación 5].
[Ejemplos de preparación 6 y 7] Síntesis de ácido poliláctico (PLA)
Se obtuvo PLA (un peso molecular promedio en número de 1.700 Dalton) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo de preparación 8 de la patente coreana No. 1296326, y el rendimiento fue del 87% [Ejemplo de preparación 6].
Se obtuvo PLA con un peso molecular promedio en número de 4.000 Dalton haciendo reaccionar durante 24 horas de acuerdo con el mismo método. PLA purificado se confirmó mediante RMN 1H y el rendimiento fue del 85% [Ejemplo de preparación 7].
[Ejemplos de preparación 8 y 9] Síntesis de la sal sódica del ácido D,L-poliláctico (PLANa)
Se añadieron 150 ml de acetonitrilo a 100 g de ácido poliláctico (peso molecular promedio en número de 1.700) obtenido del Ejemplo de preparación 6 para disolver el ácido poliláctico. Se le añadieron lentamente 150 ml de bicarbonato de sodio acuoso (0,1 g/ml) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 2 horas a 100 rpm. Se le añadieron 15 g de cloruro de sodio a temperatura ambiente y se agitó para fundir, y la capa de solución acuosa se eliminó usando un embudo de decantación.
Se añadieron 100 ml de agua destilada y 10 g de cloruro de sodio a la capa restante de disolvente orgánico y se agitó hasta fundir la mezcla. La capa del disolvente orgánico se recogió utilizando un embudo de decantación. El disolvente orgánico y el agua destilada se eliminaron completamente mediante destilación fraccionada de la capa obtenida de disolvente orgánico a 80 °C durante 2 horas en condiciones de vacío.
A continuación, se añadieron 150 ml de acetona anhidra para disolver el polímero y el precipitado no disuelto se eliminó mediante separación por filtración. La acetona se eliminó mediante destilación fraccionada a 80 °C durante 2 horas en condiciones de vacío. Como resultado, se obtuvieron 69 g de sal sódica de ácido poliláctico purificada. La sal sódica del ácido poliláctico purificada se identificó mediante RMN [Ejemplo de preparación 8].
La sal sódica del ácido poliláctico se preparó a partir de ácido poliláctico (peso molecular promedio en número de 4.000) obtenido a partir del Ejemplo de preparación 7 [Ejemplo de preparación 9].
[Ejemplo comparativo 1] Preparación de micelas poliméricas que contienen ARNic/1,6-dioleoil trietilentetramida (dioTETA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)
Se disolvieron 1,89 mg de 1,6-dioTETA (relación N/P: 18) en 94,63 j l de cloroformo y se disolvieron 100 |jg de ARNic en 80 j l de agua destilada. Se disolvieron 60 mg de mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k) en 200 j l de cloroformo. Se añadieron 505,37 j l de cloroformo hasta que la relación en volumen de la capa orgánica a la capa acuosa alcanzó 10. Se añadió ARNic gota a gota a la mezcla de solución en la que se disolvieron 1,6-dioTETA y mPEG-PLA-tocoferol en cloroformo, y la mezcla se convirtió en una emulsión usando un sonicador. La emulsión se añadió gota a gota a 2.320 j l de agua destilada y se convirtió en una emulsión compleja utilizando un sonicador. La emulsión compleja preparada se puso en un matraz redondo de 1 boca y se destiló a presión reducida en un evaporador rotatorio para eliminar selectivamente el cloroformo con el fin de preparar micelas poliméricas que contienen ARNic/1,6-dioleoil trietilentetramida (dioTETA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k) (véase la Tabla 1).
T l 11
Figure imgf000011_0001
(La relación se expresa en el orden de la cantidad de ARNic en |jg, la relación N/P y la cantidad de polímero en mg. Lo mismo se aplicará a las tablas a continuación).
[Ejemplo comparativo 2] Preparación de micelas poliméricas que contienen ARNic/1,6-dioleoil trietilentetramida (dioTETA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLA (1,7 k)
Se disolvieron 2,52 mg de 1,6-dioTETA (relación N/P: 16) en 126,18 j l de cloroformo y se disolvieron 150 jg de ARNic en 120 j l de agua destilada. Se disolvieron 9 mg de PLA-COOH (1,7 k) en 180 j l de cloroformo y se disolvieron 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k) en 100 j l de cloroformo. Se añadieron 813,82 j l de cloroformo hasta que la relación en volumen de la capa orgánica a la capa acuosa alcanzó 10. Se añadieron 1.564 j l de cloroformo a 20 j l de la solución de cloroformo en la que se disolvieron 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol, que correspondían a 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol (20% en peso) y la mezcla se colocó en un matraz redondo de 1 boca. A continuación, se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio.
Se mezclaron la solución de dioTETA, la solución de PLA y la solución de 24 mg de mPEG-PLA-tocoferol, y se añadió gota a gota la solución acuosa de ARNic para preparar la emulsión usando un sonicador. La emulsión se colocó en un matraz redondo de una boca recubierto con 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio. Se preparó micela polimérica que contenía ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLA añadiendo 3 ml de agua destilada al matraz y agitando el matraz suavemente para disolver (véase la Tabla 2).
T l 21
Figure imgf000011_0002
[Ejemplos 1 y 2] Preparación de una composición que contenía ARNic/1,6-dioleoil trietilentetramida (dioTETA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k - 1,7 k)/PLANa (1,7 k)
Se disolvieron 2,52 mg de 1,6-dioTETA en 126,18 j l de cloroformo y se disolvieron 150 jg de ARNic en 120 j l de agua destilada. Se disolvieron 9 mg de PLANa (1,7 k) en 180 j l de cloroformo y se disolvieron 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k) en 100 j l de cloroformo. Se añadieron 813,82 j l de cloroformo hasta que la relación en volumen de la capa orgánica a la capa acuosa alcanzó 10. Se añadieron 1.564 j l de cloroformo a 20 j l de la solución de cloroformo de 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol, que correspondían a 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol (20% en peso) y la mezcla se puso en un matraz redondo de 1 boca. A continuación, se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio.
Se mezclaron la solución de dioTETA, la solución de PLANa y la solución de 24 mg de mPEG-PLA-tocoferol y se añadió gota a gota la solución acuosa de ARNic para preparar la emulsión usando un sonicador. La emulsión se colocó en un matraz redondo de una boca recubierto con 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio.
Se preparó una composición que contenía ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa añadiendo 3 ml de agua destilada al matraz y disolviendo mediante agitación suave del matraz. La micela polimérica 2 se preparó de la misma manera que anteriormente usando diferentes cantidades de dioTETA y PLANa.
T l 1
Figure imgf000011_0003
[Ejemplos 3 a 6] Preparación de la composición que contenía ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/ PLANa (1,7 k)
Las composiciones 3 a 6 que contienen ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando diferentes cantidades de dioTETA o mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k).
Las composiciones preparadas a partir de los Ejemplos 3 a 6 se enumeran en la Tabla 4 a continuación:
T l 41
Figure imgf000012_0001
[Ejemplos 7 y 8] Preparación de una composición que contenía ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)
Las composiciones 7 y 8 que contienen ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando diferentes cantidades de PLANa (1,7 k) (véase Tabla 5).
T l 1
Figure imgf000012_0002
[Ejemplo experimental 1] Comparación del tamaño de partícula y la carga superficial de la micela de ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) dependiendo del cambio de la relación de composición Para confirmar la formación de nanopartículas dependiendo de la relación de ARNic/dioTETA (relación N/P), se midieron la cantidad de copolímero de bloques anfifílico (2 k-1,7 k) y la cantidad de PLANa (1,7 k), el tamaño y la carga superficial de las micelas. El tamaño de partícula se midió mediante DLS (dispersión dinámica de luz). Específicamente, se utilizó un láser de He-Ne como fuente de luz y se operó un Zetasizer Nano ZS90 (MALVERN) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
El tamaño y la carga superficial de las micelas de los Ejemplos 1 a 4 que tienen diferentes relaciones N/P se muestran en la Tabla 6 a continuación:
T l 1
Figure imgf000012_0003
continuación
Figure imgf000013_0001
El tamaño y la carga superficial de las micelas de los Ejemplos 1,5 y 6 que tienen diferentes cantidades del copolímero de bloques anfifílico (2 k-1,7 k) se muestran en la Tabla 7 a continuación:
T l 1
Figure imgf000013_0004
El tamaño y la carga superficial de las micelas de los Ejemplos 1, 7 y 8 que tienen diferentes cantidades de PLANa (1,7 k) se muestran en la Tabla 8 a continuación:
T l 1
Figure imgf000013_0002
[Ejemplos 9 a 11] Preparación de una composición que contenía ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol/PLANa Las micelas poliméricas 9, 10 y 11 se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 1, excepto que se usó mPEG-PLA-tocoferol (5 k-4 k) en lugar de mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k), o se usó PLANa (4 k) en lugar de PLANa (1,7 k).
T l 1
Figure imgf000013_0003
[Ejemplo experimental 2] Comparación del tamaño de partícula y la carga superficial de la micela de ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol/PLANa de acuerdo con el cambio de la composición y la relación de composición
El tamaño y la carga superficial de las micelas de los Ejemplos 1, 9, 10 y 11 se midieron de la misma manera que en el Ejemplo Experimental 1 para confirmar la formación de nanopartículas dependiendo del peso molecular del copolímero de bloques anfifílico y PLA- COONa. Los resultados se muestran en la Tabla 10 a continuación:
T l 11
Figure imgf000014_0001
[Ejemplo 12] Preparación de una composición que contenía ARNic-colesterol/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)
Se preparó una composición que contenía ARNic-colesterol/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando ARNic-colesterol. El disolvente se eliminó de la mezcla mediante destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio. La composición se preparó añadiendo 3 ml de agua destilada al matraz y disolviendo con agitación el matraz suavemente.
[Ejemplo 13] Preparación de una composición que contenía ARNic-PEG/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)
Se preparó una composición que contenía ARNic-PEG/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando ARNic-PEG. El disolvente se eliminó de la mezcla mediante destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio. La composición se preparó añadiendo 3 ml de agua destilada al matraz y disolviendo con agitación el matraz suavemente.
Las composiciones obtenidas de los Ejemplos 12 y 13 se enumeran en la Tabla 11 a continuación:
T l 111
Figure imgf000014_0002
[Ejemplo 14] Preparación de una composición que contenía ARNic/bPEI/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)
Se disolvieron 0,3 mg de bPEI en 15 j l de agua destilada y se disolvieron 150 |jg de ARNic en 120 j l de agua destilada. La solución acuosa de bPEI y la solución acuosa de ARNic se mezclaron en 105 j l de solución acuosa de HBS (HEPES 10 mM, NaCl 1 mM). Se disolvieron 9 mg de PLANa (1,7 k) en 180 j l de cloroformo y se disolvieron 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k) en 100 j l de cloroformo. Se agregaron 2.140 j l de cloroformo hasta que la relación en volumen de la capa orgánica a la capa acuosa alcanzó un valor de 10. Se agregaron 1.564 j l de cloroformo a 20 j l de la solución de cloroformo de 30 mg de mPEG-PLA-tocoferol, que corresponde a 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol (20% en peso), y se colocaron en un matraz redondo de 1 boca. A continuación, se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio.
Se mezclaron la solución de PLANa y la solución de 24 mg de mPEG-PLA-tocoferol, y se añadió gota a gota la solución acuosa de HBS que contenía bPEI y ARNic para preparar la emulsión usando un sonicador. La emulsión se colocó en un matraz redondo de una boca recubierto con 6 mg de mPEG-PLA-tocoferol y el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio. Se preparó una composición que contenía ARNic/bPEl/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) añadiendo 6 ml de agua destilada al matraz y disolviendo con agitación el matraz suavemente (véase la Tabla 12).
[Tabla 12]
Figure imgf000015_0001
[Ejemplos 15 y 16] Preparación de una composición que contenía ARNic/lípido catiónico/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)
La composición 9 que contenía ARNic/1,10-dioleoil pentaetilenhexamida (dioPEHA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) y composición 10 que contenía a Rníc/ 1,8-dilinoleoil tetraetilenpentamida (dilTEPA)/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k) se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando un lípido catiónico diferente (véase la Tabla 13).
Tabla 13
Figure imgf000015_0002
[Ejemplos 17 y 18] Preparación de una composición que contenía ARNic-PEG/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa
(1,7 k)/DOPE (dioleoilfosfatidiletanolamina)
Se preparó una composición que contenía ARNic-PEG/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol (2 k-1,7 k)/PLANa (1,7 k)/DOPE de la misma manera que en el Ejemplo 1 usando ARNic-PEG. DOPE se utilizó en la misma cantidad o cuatro veces más que dioTETA. El disolvente se eliminó de la mezcla mediante destilación a presión reducida en un evaporador rotatorio. La composición se preparó agregando 3 ml de agua destilada al matraz y se disolvió agitando suavemente el matraz (Tabla 14).
T l 14
Figure imgf000015_0003
[Ejemplo experimental 3] Comparación del tamaño y la carga superficial de micelas de ARNic/material catiónico/copolímero de bloques anfifílico/PLANa (/DOPE)
El tamaño y la carga superficial de las micelas se midieron de la misma manera que en el Ejemplo Experimental 1 para confirmar la formación de nanopartículas dependiendo de los tipos de ARNic y el material catiónico, y la presencia de PLANa o DOPE. Los resultados se muestran en la Tabla 15 a continuación:
T l 1
Figure imgf000015_0004
continuación
Figure imgf000016_0001
[Ejemplo experimental 4] Análisis de la concentración en sangre de micelas de ARNic/material catiónico/copolímero de bloques anfifílico/PLANa
La formulación preparada en el Ejemplo Experimental 1 se administró a animales y las muestras de sangre se recogieron 0,5 y 6 horas después del suministro. La concentración en sangre de micelas se analizó mediante RT (transcripción inversa) y qRT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa) como se muestra a continuación.
La formulación se inyectó por vía intravenosa en ratones Balb/c a razón de 1 mg/kg y se recogió sangre después de 0,5 y 6 horas, respectivamente. La sangre se centrifugó a 13.000 rpm, 4 °C durante 15 minutos y el sobrenadante se recogió en un tubo nuevo. Se prepararon un total de 11 concentraciones que variaban de 4 pM a 0,00256 pM en PBS para formulaciones estándar. Se añadió 1 pl de la formulación estándar diluida a una placa de 96 pocillos para PCR, y se añadieron a la misma 9 pl de suero de ratón Balb/c y 90 pl de Triton X-100 al 0,25%. Después de que se añadieran 90 pl de Triton X-100 al 0,25% a 10 pl de una muestra de sangre experimental, se llevó a cabo una etapa de pretratamiento para liberar el sistema de suministro. Después de que se liberó la formulación, el ARNic expuesto se sintetizó como ADNc a través de RT (transcripción inversa) y se realizó qRT-PCR (sistema en tiempo real Bio-Rad CFX96) usando el ADNc sintetizado. El análisis se realizó utilizando el programa Bio-Rad CFX Manager.
T l 1
Figure imgf000016_0002
Como puede verse en la Tabla 16, a las 0,5 horas la concentración en sangre de las formulaciones preparadas en los Ejemplos 1 y 2 fue de 5 a 8 veces mayor que las de los Ejemplos Comparativos 1 y 2. Por lo tanto, se confirmó que la estabilidad de la formulación de una realización de la presente invención en sangre era excelente.
[Ejemplo experimental 5] Distribución in vivo de la micela de ARNic/material catiónico/copolímero de bloques anfifílico/ PLANa en tejido
Se determinó la cantidad de micelas poliméricas de ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol/PLANa en tejido de hígado y canceroso en un cuerpo.
La línea celular de cáncer de ovario humano A2780cis se inyectó por vía subcutánea en ratones desnudos Balb/c para producir ratones con inducción de cáncer. La formulación se administró por vía intravenosa a una dosis de 1 mg/kg una vez cada dos días, cuatro veces en total. Veinticuatro horas después de la última administración, se extrajeron tejido de hígado y canceroso y se pesaron 200 mg de cada uno, luego se colocaron en 1,8 ml de Triton X-100 al 0,25% y se trituraron con un triturador de tejidos. Para una muestra de tejido estándar, se inyectó solución salina fisiológica y los tejidos se trituraron de la misma manera. Se prepararon un total de 11 concentraciones que variaban de 4 pM a 0,00256 pM en PBS para formulaciones estándar. Se añadieron 99 pl del tejido estándar molido y 1 pl de la formulación estándar diluida a una placa de 96 pocillos para PCR. Las muestras de tejido a analizar se añadieron en una cantidad de 100 pl y se llevó a cabo una etapa de pretratamiento para liberar las formulaciones. El ARNic expuesto se sintetizó hasta ADNc a través de RT (transcripción inversa), y se realizó qRT-PCR (sistema en tiempo real Bio-Rad CFX96) utilizando el ADNc sintetizado. El análisis se realizó utilizando el programa Bio-Rad CFX Manager.
Los resultados del análisis se muestran en la Tabla 17 a continuación.
T l 11
Figure imgf000017_0001
Como se muestra en la Tabla 17, en el Ejemplo 2 de acuerdo con una realización de la presente invención, la distribución de la micela polimérica se redujo en el tejido hepático, pero aumentó en el tejido canceroso en comparación con el Ejemplo comparativo 1. Estos resultados sugieren que la micela polimérica que contenía PLANa de una realización de la presente invención es capaz de dirigirse específicamente al tejido canceroso.
[Ejemplo experimental 6] Actividad in vivo de la micela de ARNic/material catiónico/copolímero de bloques anfifílico/ PLANa (capacidad para la represión génica)
La actividad in vivo de las micelas poliméricas de ARNic/dioTETA/mPEG-PLA-tocoferol/PLANa se determinó mediante la medición de la represión génica.
Se trasplantaron ratones desnudos Balb/c con secciones de cáncer de pulmón humano A549 para producir ratones con inducción de cáncer. Las formulaciones se suministraron por vía intravenosa a una dosis de 0,5 mg/kg una vez cada dos días, tres veces en total. Se administró solución salina fisiológica a un control. Cada formulación se administró a cinco (5) ratones. Veinticuatro horas después de la última administración, se extrajeron los tejidos cancerosos y se molieron inicialmente usando un recipiente de mortero en presencia de nitrógeno líquido. A continuación, los tejidos se trituraron de nuevo utilizando un homogeneizador QIAGEN (TissueLyser). Se trataron 10 mg del tejido canceroso, que se trituró dos veces, con 600 pl de una solución homogeneizante de trabajo preparada (600 pl de solución homogeneizadora 6 pl de proteinasa K (23 mg/ml)) para exponer el ARNm de HPRT de las células. Después de preparar las muestras como se indicó anteriormente, se analizaron utilizando un kit de ensayo de bADN de acuerdo con las instrucciones del fabricante (método de análisis para bADN de Panomics).
El ARNm de GAPDH, un gen que no se ve afectado por ARNic de HPRT, también se analizó mediante el mismo método. Los valores medios de expresión relativa de ARNic de HPRT en tejidos cancerosos se calcularon corrigiendo la cantidad medida de ARNm de HPRT. Los resultados del análisis se muestran en la Tabla 18 a continuación.
T l 11
Figure imgf000017_0002
Como se muestra en la Tabla 18, Ejemplo 2 de acuerdo con una realización de la presente invención, se inhibió la expresión in vivo del ARNm del gen diana HPRT en un 54% en el cáncer.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Una composición para suministrar un fármaco aniónico, que comprende:
el fármaco aniónico como ingrediente activo;
un compuesto catiónico;
un copolímero de bloques anfifílico; y
al menos una sal de ácido poliláctico seleccionada del grupo que consiste en los compuestos de Fórmulas 1 a 6 como se indica a continuación,
en la que el fármaco aniónico forma un complejo con el compuesto catiónico por interacción electrostática, el complejo queda atrapado en la estructura micelar del copolímero de bloques anfifílico y la sal de ácido poliláctico, y la carga superficial de la micela es de -20 a 20 mV:
[Fórmula 1] RO-CHZ-[A]n-[B]m-COOM
en la que A es -COO-CHZ-; B es -COO-CHY-, -COO-CH2CH2CH2CH2CH2- o -COO-CH2CH2OCH2 ; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanillo, palmitoilo, metilo o etilo; Z e Y son cada uno un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo; M es Na, K o Li; n es un número entero de 1 a 30; y m es un número entero de 0 a 20;
[Fórmula 2] RO-CHZ-[COO-CHX]p-[COOO-CHY']q-COO-CHZ-COOM
en la que X es metilo; Y' es un átomo de hidrógeno o fenilo; p es un número entero de 0 a 25, q es un número entero de 0 a 25, con la condición de que p q sea un número entero de 5 a 25; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanillo, palmitoilo, metilo o etilo; M es Na, K o Li; y Z es un átomo de hidrógeno, metilo o fenilo;
[Fórmula 3] RO-PAD-COO-W-M'
en la que W-M' es
Figure imgf000018_0001
o
eooM
1:
----- O í---- CH2COOM
PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona; R es un átomo de hidrógeno o acetilo, benzoilo, decanoilo, palmitoilo, metilo o etilo; y M es independientemente Na, K o Li;
[Fórmula 4] S-O-PAD-COO-Q
en la que S es
Figure imgf000018_0002
L es -NR1 u -O-, en el que R1 es un átomo de hidrógeno o alquilo C1-10; Q es CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3 o CH2C6H5; a es un número entero de 0 a 4; b es un número entero de 1 a 10; M es Na, K o Li; y PAD es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4- dioxan-2-ona;
[Fórmula 5]
Figure imgf000019_0001
en la que R' es -PAD-OC(O)-CH2CH2C(O)-OM, en el que PAD se selecciona del grupo que consiste en D,L-polilactida, D-polilactida, ácido polimandélico, copolímero de D,L-lactida y ácido glicólico, copolímero de D,L-lactida y ácido mandélico, copolímero de D,L-lactida y caprolactona, y copolímero de D,L-lactida y 1,4-dioxan-2-ona, M es Na, K o Li; ya es un número entero de 1 a 4; y
[Fórmula 6] YO-[-C(O)-(CHX)a-O-]m-C(O)-R-C(O)-[-O-(CHX')b-C(O)-]n, -OZ en la que X y X' son independientemente hidrógeno, alquilo C1-10 o arilo C6-20; Y y Z son independientemente Na, K o Li; m y n son independientemente un número entero de 0 a 95, con la condición de que 5 <m n < 100; a y b son independientemente un número entero de 1 a 6; y R es -(CH2)k-, alquenilo divalente C2-10, arilo divalente C6-20 o una combinación de los mismos, en el que k es un número entero de 0 a 10.
2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el fármaco aniónico es un ácido nucleico, preferiblemente al menos uno seleccionado del grupo que consiste en ARN, ADN, ARNic (ARN de interferencia corto), aptámero, ODN antisentido (oligodesoxinucleótido antisentido), ARN antisentido, ribozima y ADNzima.
3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el compuesto catiónico es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un lípido catiónico y un polímero catiónico.
4. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el lípido catiónico es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODAC), bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio (DDAB), cloruro de N-(1-(2,3-dioleoiloxi)propil-N,N,N-trimetilamonio (DOTAP), N,N-dimetil-(2,3-dioleoiloxi)propilamina (DODMA), 1,2-diacil-3-trimetilamonio-propano (TAP), 1,2-diacil-3-dimetilamonio-propano (DAP), 3p-[N-(N',N',N'-trimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (TC-colesterol), 3p-[N-(N',N'-dimetilaminoetano) carbamoil]colesterol (DC-colesterol), 3p-[N-(N'-monometilaminoetano)carbamoil]colesterol (MC-colesterol), 3p-[N-(aminoetano)carbamoil]colesterol (AC-colesterol), colesteriloxipropano-1-amina (COPA), tocoferol N-(N'-aminoetano) carbamoilpropanoico (AC-tocoferol) y tocoferol N-(N'-metilaminoetano)carbamoilpropanoico (MC-tocoferol).
5. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el lípido catiónico está representado por la siguiente Fórmula 7:
[Fórmula 7]
Figure imgf000019_0002
en la que n y m son cada uno de 0 a 12 con la condición de que 2 < n m < 12, preferiblemente 1 a 9, con la condición de que 2 < n m < 10, a y b son cada uno de 1 a 6, preferiblemente 2 a 4, R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrocarburos C11-25 saturados e insaturados, preferiblemente seleccionados del grupo que consiste en laurilo, miristilo, palmitilo, estearilo, araquidilo, behenilo, lignocerilo, cerotilo, miristoleilo, palmitoleilo, sapienilo, oleilo, linoleilo, araquidonilo, eicosapentaenilo, erucilo, docosahexaenilo y cerotilo.
6. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la relación de cantidades de cargas eléctricas del lípido catiónico (N) y el fármaco aniónico (P) (N/P) es de 0,1 a 128.
7. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el copolímero de bloques anfifílico es un copolímero de dibloques de tipo A-B compuesto por un bloque A hidrófilo y un bloque B hidrófobo, en el que el bloque A hidrófilo es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en polialquilenglicol, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, poliacrilamida y derivados de los mismos, y el bloque B hidrófobo es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en poliéster, polianhídrido, poliaminoácido, poliortoéster y polifosfazina.
8. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, en la que un grupo hidroxilo en el extremo del bloque B hidrófobo está modificado por al menos uno seleccionado del grupo que consiste en colesterol, tocoferol y ácido graso C10-24.
9. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el bloque A hidrófilo tiene un peso molecular promedio en número de 200 a 50.000 Dalton y el bloque B hidrófobo tiene un peso molecular promedio en número de 50 a 50.000 Dalton.
10. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la relación del peso del complejo del fármaco aniónico y el lípido catiónico (a) y el peso del copolímero de bloques anfifílico (b) [a/b x 100] es de 0,001 a 100% en peso.
11. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la sal de ácido poliláctico está representada por la Fórmula 1 o la Fórmula 2.
12. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la sal de ácido poliláctico tiene un peso molecular promedio en número de 500 a 50.000 Dalton.
13. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende de 10 a 1.000 partes en peso del copolímero de bloques anfifílico y de 5 a 500 partes en peso de la sal de ácido poliláctico por 1 parte en peso del fármaco aniónico.
14. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que además comprende un lípido fusogénico, preferiblemente al menos uno seleccionado del grupo que consiste en dilauroil fosfatidiletanolamina, dimiristoil fosfatidiletanolamina, dipalmitoil fosfatidiletanolamina, diestearoil fosfatidiletanolamina, dioleoil fosfatidiletanolamina, diolinoleoil fosfatidiletanolamina, 1 -palmitoil-2-oleoil fosfatidiletanolamina, 1,2-difitanoil-3-sn-fosfatidiletanolamina, dilauroil fosfatidilcolina, dimiristoil fosfatidilcolina, dipalmitoil fosfatidilcolina, diestearoil fosfatidilcolina, dioleil fosfatidilcolina, dilinoleoil fosfatidilcolina, 1 -palmitoil-2-oleoil fosfatidilcolina, 1,2-difitanoil-3-sn-fosfatidilcolina, ácido dilauroil fosfatídico, ácido dimiristoil fosfatídico, ácido dipalmitoil fosfatídico, ácido diestearoil fosfatídico, ácido dioleoil fosfatídico, ácido dilinoleoil fosfatídico, ácido 1-pamitoil-2-oleoil fosfatídico, ácido, 1,2-difitanoil-3-sn-fosfatídico, colesterol y tocoferol.
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