ES2890783T3

ES2890783T3 - Terapias de combinación para enfermedades malignas hematológicas con anticuerpos anti-CD38 e inhibidores de survivina

Info

Publication number: ES2890783T3
Application number: ES16815196T
Authority: ES
Inventors: Parul Doshi; Henk Lokhorst; Tuna Mutis
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2015-06-22
Filing date: 2016-06-22
Publication date: 2022-01-24
Anticipated expiration: 2036-06-22
Also published as: DOP2018000181A; CO2017013331A2; MA46315A; JP6816038B2; KR102601550B1; CN107708734A; EP3310386A1; JP2018522857A; EP3310386B1; AU2016282674B2; HK1250666A1; PH12017502342A1; MY192978A; IL256242B1; GT201700284A; EP3310386A4; PE20181323A1; CN107708734B; NI201700167A; US10668149B2

Abstract

Un anticuerpo anti-CD38 para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo de IgG1 y en donde el tratamiento también comprende administrar un inhibidor de survivina, en donde el inhibidor de survivina es YM155.

Description

DESCRIPCIÓN

Terapias de combinación para enfermedades malignas hematológicas con anticuerpos anti-CD38 e inhibidores de survivina

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente divulgación se refiere a tratamientos combinados para enfermedades malignas hematológicas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El mieloma múltiple (MM) es una enfermedad maligna de células B caracterizada por la acumulación latente de células plasmáticas secretoras en la médula ósea con un índice de proliferación bajo y una vida útil prolongada. La enfermedad finalmente ataca a los huesos y la médula ósea, dando como resultado múltiples tumores y lesiones en todo el sistema esquelético. Aproximadamente el 1% de todos los cánceres y un poco más del 10% de todas las enfermedades malignas hematológicas pueden atribuirse al MM. La incidencia de MM aumenta en la población de edad avanzada, con una edad mediana en el momento del diagnóstico de aproximadamente 61 años.

Las terapias disponibles actualmente para el MM incluyen regímenes de quimioterapia, trasplante de células madre, t Ha LOMID® (talidomida), REVLIMID® (lenalidomida), POMALYST® (pomalidomida), v ElCADE® (bortezomib), KYPROLIS® (carfilzomib), FARADYK®, (panobinostat) AREDIA® (pamidronato) y Zo MeTA® (ácido zoledrónico). Los protocolos de tratamiento actuales, que incluyen una combinación de agentes quimioterapéuticos como vincristina, BCNU, melfalán, ciclofosfamida, adriamicina y prednisona o dexametasona, producen una tasa de remisión completa de sólo aproximadamente el 5%, y la supervivencia mediana es de aproximadamente 36-48 meses desde el momento del diagnóstico. Los avances recientes en el uso de quimioterapia de dosis alta seguida de trasplante autólogo de células mononucleares de sangre periférica o de médula ósea han aumentado la tasa de remisión completa y la duración de la remisión. Sin embargo, la supervivencia global sólo se ha prolongado ligeramente y no se han obtenido pruebas de cura. En última instancia, todos los pacientes con MM recaen, incluso bajo terapia de mantenimiento con interferón-alfa (IFN-a) solo o en combinación con esteroides.

La eficacia de los regímenes de tratamiento farmacológicos disponibles para el MM está limitada por la baja tasa de proliferación celular y el desarrollo de resistencia a los fármacos en hasta el 90% de los pacientes. Se ha implicado que las translocaciones cromosómicas, las mutaciones oncogénicas, las vías de señalización desreguladas como las vías antiapoptóticas y de supervivencia y el nicho de la médula ósea contribuyen a la resistencia a los fármacos en el MM (para una revisión, ver Abdi et al., Oncotarget 4:2186-2207, 2013). El nicho de la médula ósea (BM) está implicado en la proliferación, supervivencia, diferenciación, migración y resistencia a los fármacos de las células plasmáticas malignas (Manier et al., J Biomed Biotechnol 2012; publicado en línea el 3 de octubre de 2012, doi:_10.1155/_2012/_157496).

La CD38, una glicoproteína transmembrana de tipo II, es un objetivo atractivo para los agentes terapéuticos de anticuerpos para variasdiversas enfermedades malignas hematológicas, incluyendo el mieloma múltiple. Los anticuerpos anti-CD38 se describen, por ejemplo, en la Publicación de Patente Internacional N° WO2008/037257, la Publicación de Patente Internacional N° WO2008/047242 y la Publicación de Patente Internacional N° WO2007/042309, y se están evaluando en entornos clínicos para determinar su eficacia en el mieloma múltiple y otras enfermedades malignas hematológicas.

La WO 2012/092612 describe anticuerpos que se unen a CD38 humana y CD38 de cynomolgus.

De Weers et al., Journal of Immunology (2010) 186(3), 1840-1848 describe un anticuerpo anti-CD38 capaz de matar tumores de mieloma múltiple.

Wagner et al., Oncotarget (2014), 5(21), 10237-10250 describe estudios preclínicos para bromuro de sepantronio (YM155) en mieloma múltiple.

Kila et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics (2012), 343(1), 178-183 describe los efectos del bromuro de sepantronio (YM155) en combinación con rituximab en linfoma no Hodking de células B humano.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

En la presente se proporciona un anticuerpo anti-CD38 para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo de IgG1 y en donde el tratamiento también comprende administrar un inhibidor de survivina, en donde el inhibidor de survivina es YM155.

También se proporciona en la presente un inhibidor de survivina para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el inhibidor de survivina es YM155, y en donde el tratamiento también comprende administrar un anticuerpo anti-CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, y en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG1.

También se proporciona en la presente una combinación de un anticuerpo anti-CD-38 y un inhibidor de survivina para su uso en el tratamiento de una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el inhibidor de survivina es YM155, y en donde el anticuerpo anti-CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LC^dR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, y en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG1.

En la presente se divulga un método para tratar a un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, que comprende administrar al sujeto con necesidad de ello un anticuerpo anti-CD38 y un inhibidor de survivina durante un tiempo suficiente para tratar la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1A. Las células estromales de la médula ósea (BMSC) median la protección contra la destrucción de células de mieloma múltiple (MM) por ADCC inducida por el anticuerpo anti-CD38 daratumumab en líneas celulares de MM. Se cultivaron células de MM CD38+ UM9 transducidas con luciferasa en presencia o ausencia de BMSC de donantes sanos (HD-BMSC) durante 16 horas antes de la incubación con concentraciones en serie de daratumumab y HD-PBMC en una proporción de células PBMC:MM de 30:1. La viabilidad de las células de MM se determinó después de 4 horas mediante imagenología de bioluminiscencia (BLI). Se calculó el porcentaje (%) de ADCC con respecto a la viabilidad celular sin daratumumab. Las barras de error indican el error estándar de la media (SEM) de las mediciones por triplicado. Los datos son representativos de 3 experimentos independientes. Las diferencias entre cultivos con o sin BMSC se probaron con una prueba t para datos no apareados *=p<0,05.

Figura 1B. Las células estromales de la médula ósea (BMSC) median la protección contra la destrucción de células de mieloma múltiple (MM) por ADCC inducida por el anticuerpo anti-CD38 daratumumab en líneas celulares de MM. Se cultivaron células de MM CD38+ RPMI8226 transducidas con luciferasa en presencia o ausencia de HD-BMSC durante 16 horas antes de la incubación con concentraciones en serie de daratumumab y HD-PBMC en una proporción de células PBMC:MM de 30:1. La viabilidad de las células de MM se determinó después de 4 horas mediante BLI. El% de ADCC se calculó con respecto a la viabilidad celular sin daratumumab. Las barras de error indican el SEM de las mediciones por triplicado. Los datos son representativos de 3 experimentos independientes. Las diferencias entre cultivos con o sin BMSC se probaron con una prueba t para datos no apareados *= p<0,05.

Figura 2A. Las BMSC median la protección contra la destrucción de células de MM por ADCC inducida por el anticuerpo anti-CD38 daratumumab en muestras primarias de pacientes con MM. Los aspirados de médula ósea completa obtenidos del paciente 1 con MM se cultivaron en presencia (barras blancas) o ausencia (barras negras) de células estromales de médula ósea autólogas y luego se trataron con daratumumab a las concentraciones indicadas. Las células autólogas presentes en el aspirado se usaron como células efectoras. Como las BM-MNC ya contienen células NK como células efectoras, no se añadieron células efectoras adicionales. La viabilidad de las células de MM CD138+ en los cultivos se determinaron después de 24 horas mediante citometría de flujo. Las barras de error indican el SEM de las mediciones por triplicado. Las diferencias entre cultivos con o sin BMSC se probaron con una prueba t para datos no apareados. *=p<0,05. Panel superior: paciente N° 1, panel inferior; paciente N° 2. BMSC: célula estromal de la médula ósea. ADCC: citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.

Figura 2B. Las BMSC median la protección contra la destrucción de células de MM por ADCC inducida por el anticuerpo anti-CD38 daratumumab en muestras primarias de pacientes con MM. Los aspirados de médula ósea completos obtenidos del paciente 2 con MM se cultivaron en presencia (barras blancas) o ausencia (barras negras) de células estromales de médula ósea autólogas y luego se trataron con daratumumab a las concentraciones indicadas. Las células autólogas presentes en el aspirado se usaron como células efectoras. Como las BM-MNC ya contienen células NK como células efectoras, no se añadieron células efectoras adicionales. La viabilidad de las células de MM CD138+ en los cultivos se determinaron después de 24 horas mediante citometría de flujo. Las barras de error indican el SEM de las mediciones por triplicado. Las diferencias entre cultivos con o sin BMSC se probaron con una prueba t para datos no apareados. *=p<0,05. Panel superior: paciente N° 1, panel inferior; paciente N° 2. BMSC: célula estromal de la médula ósea. ADCC: citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.

Figura 3. YM155 no induce la lisis de células NK. Se incubaron HD-PBMC y células mononucleares de médula ósea (BMMNC) del paciente con las concentraciones indicadas de YM155 durante 24 horas. El número de células NK CD3-CD56+ viables se determinó mediante citometría de flujo y se calculó el porcentaje de lisis usando las muestras no tratadas como control negativo.

Figura 4A. El daratumumab en combinación con YM155 proporciona un efecto sinérgico sobre la destrucción de células de MM por ADCC en presencia de células estromales. Se cultivaron células de MM RPMI8226 transducidas con luciferasa en presencia o ausencia de HD-BMSC. Se añadieron daratumumab e YM155 a las concentraciones indicadas. Se añadieron HD-PBMC en todos los pocillos a una proporción de PBMC:MM de 40:1 como fuente de células NK para inducir ADCC. La supervivencia de las células RPMI8226 se determinó después de 4 horas mediante BLI. El % de lisis se calculó con respecto a la supervivencia de las células RPMI8226 que no recibieron ningún tratamiento. En el caso de la combinación de YM155 y daratumumab, los valores de lisis esperados se dedujeron del tratamiento con daratumumab y YM155 solo, asumiendo que el efecto acumulativo sería aditivo, pero no sinérgico. Las diferencias estadísticas entre los resultados esperados y observados se determinaron en una prueba t pareada ***=P<0,005, *= P<0,05. DARA: daratumumab.

Figura 4B. El daratumumab en combinación con YM155 proporciona un efecto sinérgico sobre la destrucción de células de MM primarias por ADCC en presencia de células estromales. Se cultivaron aspirados completos de BM del paciente 1 con MM en presencia o ausencia de MM-BMSC autólogas. Se añadieron daratumumab e YM155 a las concentraciones indicadas. Como las BM-MNC contienen suficientes células NK (en ambos casos, aproximadamente a una proporción de células NK:MM de 30:1), no se añadieron células efectoras adicionales. Después de 24 horas, se enumeraron las células MM CD138+ viables en cada condición mediante citometría de flujo. El % de lisis se calculó con respecto a la supervivencia de las células de MM en BM-MNC que se cultivaron en las mismas condiciones pero no recibieron ningún tratamiento. Las diferencias estadísticas entre los resultados esperados y observados se determinaron en una prueba t pareada. *=P<0,05.

Figura 4C. El daratumumab en combinación con YM155 proporciona un efecto sinérgico sobre la destrucción de células de MM primarias por ADCC en presencia de células estromales. Se cultivaron aspirados completos de BM del paciente 2 con MM en presencia o ausencia de MM-BMSC autólogas. Se añadieron daratumumab e YM155 a las concentraciones indicadas. Como las BM-MNC contienen suficientes células NK (en ambos casos, aproximadamente a una proporción de células NK:MM de 30:1), no se añadieron células efectoras adicionales. Después de 24 horas, se enumeraron las células MM CD138+ viables en cada condición mediante citometría de flujo. El % de lisis se calculó con respecto a la supervivencia de las células de MM en BM-MNC que se cultivaron en las mismas condiciones pero no recibieron ningún tratamiento. Las diferencias estadísticas entre los resultados esperados y observados se determinaron en una prueba t pareada. *=P <0,05.

Figura 4D. El daratumumab en combinación con YM155 proporciona un efecto sinérgico sobre la destrucción de células de MM primarias por ADCC en presencia de células estromales. Se cultivaron células mononucleares de médula ósea (BM-MNC) de cuatro pacientes con MM que contenían células de MM CD138+ (45%, 5,5%, 10,2% 21,6% para los pacientes 1-4, respectivamente) en presencia o ausencia de MM-BMSC autólogas. Se añadieron daratumumab (1 ng/ml) y concentraciones submáximas apropiadas de YM155 (125, 62, 75 y 50 ng/ml para los pacientes 1-4, respectivamente). Como las BM-MNC contenían suficientes células NK (7,9%, 7,9%, 10,3% y 9,5% respectivamente), no se añadieron células efectoras adicionales. Después de 24 horas, las células de m M CD138+ viables se enumeraron en cada condición mediante citometría de flujo. El % de lisis se calculó con respecto a la supervivencia de las células de MM en BM-MNC que se cultivaron en las mismas condiciones pero no recibieron ningún tratamiento. Las diferencias estadísticas entre los resultados esperados y observados se determinaron en una prueba t pareada. *=P<0,05. ns: no significativo. DARA: daratumumab.

Figura 5. Efecto antitumoral de la terapia combinada con daratumumab y YM155. Análisis de la carga tumoral por grupo de tratamiento en ratones RAG2'/'^yc/' implantados con células UM9. Se implantaron subcutáneamente andamiajes híbridos recubiertos con MSC humanas y cargados con la línea celular de MM transducida con luciferasa UM9 en la espalda de ratones RAG2'/'^yc/' (4 andamiajes por ratón). Diez días después de la implantación, los tumores en crecimiento se visualizaron y cuantificaron mediante BLI. Luego, se trataron diferentes grupos de ratones (n=4) con vehículo de control (control) o se trataron con daratumumab, YM155 o daratumumab más YM155 como se indica. YM155 (o su vehículo, PBS) se administró con bombas de infusión subcutánea a una velocidad de 1 mg/kg/d YM155 durante 10 días. Cada ratón, incluyendo los del grupo de control, recibió HD-PBMC con depleción de células T (5x106 células) como fuente de células NK humanas para inducir ADCC. Los ratones se monitorizaron semanalmente mediante BLI. Los resultados se expresan como la carga tumoral media en cada andamiaje. Las barras de error representan el SEM. Las diferencias estadísticas entre los ratones tratados con daratumumab y los ratones tratados con daratumumab más YM155 se calcularon usando la prueba U de Mann-Whitney.

***P<0,001.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

"CD38" se refiere a la proteína CD38 humana (sinónimos: ADP-ribosil ciclasa 1, cADPr hidrolasa 1, ADP-ribosa hidrolasa 1 cíclica). La CD38 humana tiene una secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 1. es bien sabido que CD38 es una proteína de membrana de tipo II de paso único con los residuos de aminoácidos 1-21 que representan el dominio citosólico, los residuos de aminoácidos 22-42 que representan el dominio transmembrana y los residuos 43-300 que representan el dominio extracelular de CD38.

El término "anticuerpos", como se usa en la presente, se entiende en un sentido amplio e incluye moléculas de inmunoglobulina que incluyen anticuerpos monoclonales que incluyen anticuerpos monoclonales murinos, humanos, adaptados a humanos, humanizados y quiméricos, fragmentos de anticuerpos, anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos, anticuerpos diméricos, tetraméricos o multiméricos y anticuerpos de cadena sencilla.

Las inmunoglobulinas pueden asignarse a cinco clases principales, concretamente IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de la cadena pesada. IgA e IgG se subclasifican además como los isotipos IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Las cadenas ligeras de anticuerpos de cualquier especie de vertebrado pueden asignarse a uno de dos tipos claramente distintos, concretamente kappa (k) y lambda (A), en base a las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes.

El término "fragmentos de anticuerpos" se refiere a una porción de una molécula de inmunoglobulina que retiene el sitio de unión al antígeno de la cadena pesada y/o la cadena ligera, como las regiones determinantes de la complementariedad de cadena pesada (HCDR) 1, 2 y 3, las regiones determinantes de complementariedad de cadena ligera (LCDR) 1, 2 y 3, una región variable de cadena pesada (VH) o una región variable de cadena ligera (VL). Los fragmentos de anticuerpos incluyen un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CHI; un fragmento F(ab)², un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CHI; un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; un fragmento de dominio de anticuerpo (dAb) (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989), que consta de un dominio VH. Los dominios VH y VL pueden modificarse y enlazarse entre sí mediante un conector sintético para formar varios tipos de diseños de anticuerpos de cadena sencilla en los que los dominios VH/VL se emparejan intramolecularmente, o intermolecularmente en aquellos casos en los que los dominios VH y VL se expresan mediante constructos de anticuerpos de cadena sencilla separados, para formar un sitio de unión a antígeno monovalente, como Fv de cadena sencilla (scFv) o diacuerpo; descritos por ejemplo en las Publicaciones de Patente Internacional N° WO1998/44001, WO1988/01649, WO1994/13804 y WO1992/01047. Estos fragmentos de anticuerpo se obtienen usando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica, y los fragmentos se seleccionan por su utilidad de la misma manera que los anticuerpos de longitud completa.

La frase "anticuerpo aislado" se refiere a un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas (por ejemplo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a CD38 está sustancialmente libre de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos distintos de CD38 humana). Sin embargo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a CD38 puede tener reactividad cruzada con otros antígenos, como ortólogos de CD38 humana, como CD38 de Macaca fascicularis (cynomolgus). Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o productos químicos.

Una región variable de anticuerpo consiste en una región "marco" interrumpida por tres "sitios de unión al antígeno". Los sitios de unión al antígeno se definen usando varios términos: (i) Regiones determinantes de la complementariedad (CDR), tres en la VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) y tres en la VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3) se basan en la variabilidad de secuencia (Wu y Kabat J Exp Med 132:211-50, 1970; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). (ii) "Regiones hipervariables", "HVR" o "HV", tres en la VH (H1, H2, H3) y tres en la VL (L1, L2, L3) se refieren a las regiones de dominios variables de un anticuerpo que son de estructura hipervariable según la definición de Chothia y Lesk (Chothia y Lesk Mol Biol 196:901-17, 1987). Otros términos incluyen "IMGT-CDR" (Lefranc et al., Dev Comparat Immunol 27:55-77, 2003) y “Specificity Determining Residue Usage” (SDRU) (Almagro Mol Recognit 17:132-43, 2004). La base de datos International ImMunoGeneTics (IMGT) (http://www_imgt_org) proporciona una numeración y una definición estandarizadas de los sitios de unión a antígenos. La correspondencia entre las delineaciones de CDR, HV e IMGT se describe en Lefranc et al., Dev Comparat Immunol 27:55-77, 2003.

"Residuos de Chothia", como se usa en la presente, son los residuos de VL y VH del anticuerpo numerados según Al-Lazikani (Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273:927-48, 1997).

El "marco" o "secuencias marco" son las secuencias restantes de una región variable distintas de las definidas como sitios de unión al antígeno. Como los sitios de unión al antígeno pueden definirse mediante varios términos como se ha descrito anteriormente, la secuencia exacta de aminoácidos de un marco depende de cómo se haya definido el sitio de unión al antígeno.

"Anticuerpo humanizado" se refiere a un anticuerpo en el que los sitios de unión al antígeno se derivan de especies no humanas y los marcos de la región variable se derivan de secuencias de inmunoglobulina humana. Los anticuerpos humanizados pueden incluir sustituciones en las regiones marco de tal manera que el marco puede no ser una copia exacta de la inmunoglobulina humana o las secuencias génicas de la línea germinal expresadas.

"Anticuerpo humano" se refiere a un anticuerpo que tiene regiones variables de cadena ligera y pesada en las que tanto el marco como los sitios de unión al antígeno se derivan de secuencias de origen humano. Si el anticuerpo contiene una región constante, la región constante también se deriva de secuencias de origen humano.

Un anticuerpo humano comprende regiones variables de cadena pesada o ligera que se "derivan de" secuencias de origen humano si las regiones variables del anticuerpo se obtienen de un sistema que usa inmunoglobulina de línea germinal humana o genes de inmunoglobulina reorganizados. Tales sistemas incluyen bibliotecas de genes de inmunoglobulina humana mostradas en fagos y animales transgénicos no humanos como ratones que portan loci de inmunoglobulina humana como se describe en la presente. El "anticuerpo humano" puede contener diferencias de aminoácidos cuando se compara con la línea germinal humana o secuencias de inmunoglobulina reorganizadas debido, por ejemplo, a mutaciones somáticas de origen natural o la introducción intencionada de sustituciones en el marco o sitios de unión al antígeno. Típicamente, un "anticuerpo humano" es por lo menos aproximadamente un 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntico en la secuencia de aminoácidos a una secuencia de aminoácidos codificada por una línea germinal humana o un gen de inmunoglobulina reordenado. En algunos casos, un "anticuerpo humano" puede contener secuencias marco de consenso derivadas de análisis de secuencias marco humanas, por ejemplo, como se describe en Knappik et al., J Mol Biol 296:57-86, 2000), o HCDR3 sintética incorporadas en bibliotecas génicas de inmunoglobulina humana mostradas en fagos, como se describe en, por ejemplo, Shi et al., J Mol Biol 397:385-96, 2010 y la Publicación de Patente Internacional N° WO2009/085462). Los anticuerpos en los que los sitios de unión al antígeno se derivan de una especie no humana no se incluyen en la definición de "anticuerpo humano".

Los anticuerpos humanizados aislados pueden ser sintéticos. Los anticuerpos humanos, aunque se derivan de secuencias de inmunoglobulinas humanas, pueden generarse usando sistemas como la presentación de fagos que incorporan CDR sintéticas y/o marcos sintéticos, o pueden someterse a mutagénesis in vitro para mejorar las propiedades de los anticuerpos, lo que da como resultado anticuerpos que no existen de manera natural dentro del repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanos in vivo.

"Anticuerpo recombinante" incluye todos los anticuerpos que se preparan, expresan, crean o aíslan por medios recombinantes, como anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico o transcromosómico para genes de inmunoglobulina humana o un hibridoma preparado a partir de los mismos (se describe más adelante a continuación), anticuerpos aislados de una célula huésped transformada para expresar el anticuerpo, anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos combinatoria recombinante y anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implique el corte y empalme de secuencias génicas de inmunoglobulina humana con otras secuencias de ADN., o anticuerpos que se generan in vitro usando intercambio de brazos Fab.

"Anticuerpo monoclonal" se refiere a una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular única. Una composición de anticuerpo monoclonal muestra una única especificidad de unión y afinidad por un epítopo particular, o en el caso de un anticuerpo monoclonal biespecífico, una especificidad de unión dual para dos epítopos distintos. "Anticuerpo monoclonal" se refiere, por lo tanto, a una población de anticuerpos con una composición de aminoácidos individual en cada cadena pesada y en cada cadena ligera, excepto por posibles alteraciones bien conocidas como la eliminación de lisina C-terminal de la cadena pesada del anticuerpo. Los anticuerpos monoclonales pueden tener una glicosilación heterogénea dentro de la población de anticuerpos. El anticuerpo monoclonal puede ser monoespecífico o multiespecífico, monovalente, bivalente o multivalente. Un anticuerpo biespecífico se incluye en el término anticuerpo monoclonal.

"Epítopo" se refiere a una porción de un antígeno a la que se une específicamente un anticuerpo. Los epítopos habitualmente consisten de agrupaciones superficiales químicamente activas (como polares, no polares o hidrófobas) de fracciones como aminoácidos o cadenas laterales de polisacáridos y pueden tener características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Un epítopo puede estar compuesto de aminoácidos contiguos y/o no contiguos que forman una unidad espacial conformacional. Para un epítopo discontiguo, los aminoácidos de diferentes porciones de la secuencia lineal del antígeno se acercan en un espacio tridimensional a través del plegamiento de la molécula de proteína.

"Variante" se refiere a un polipéptido o polinucleótido que difiere de un polipéptido de referencia o un polinucleótido de referencia en una o más modificaciones, por ejemplo, sustituciones, inserciones o deleciones.

"En combinación con" significa que pueden administrarse dos o más agentes terapéuticos a un sujeto juntos en una mezcla, concurrentemente como agentes individuales o secuencialmente como agentes individuales en cualquier orden.

"Tratar" o "tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a las medidas profilácticas o preventivas, en donde el objeto es prevenir o ralentizar (disminuir) un cambio o trastorno fisiológico no deseado, como el desarrollo o propagación de un tumor o células tumorales. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen el alivio de los síntomas, la disminución de la extensión de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, sin empeoramiento) de la enfermedad, el retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, la mejora o paliación del estado de la enfermedad y la remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable y prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no recibe tratamiento. Aquellos con necesidad de tratamiento incluyen aquellos que ya tienen la afección o trastorno así como aquellos propensos a tener la afección o trastorno o aquellos en los que se debe prevenir la afección o trastorno.

"Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz puede variar de acuerdo con factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad de un agente terapéutico o una combinación de agentes terapéuticos para provocar una respuesta deseada en el individuo. Los indicadores ejemplares de un agente terapéutico o una combinación de agentes terapéuticos eficaz que pueden disminuir o reducir en asociación con la resistencia incluyen, por ejemplo, bienestar mejorado del paciente, reducción de la carga tumoral, crecimiento detenido o ralentizado de un tumor y/o ausencia de metástasis de células cancerosas a otros lugares del cuerpo.

"Sinergia", "sinergismo" o "sinérgico" significan más que el efecto aditivo esperado de una combinación. "Inhibe el crecimiento" (por ejemplo, en referencia a células, como células tumorales) se refiere a una disminución medible en el crecimiento celular in vitro o in vivo cuando se pone en contacto con un agente terapéutico o una combinación de agentes terapéuticos o fármacos en comparación con el crecimiento de las mismas células cultivadas en condiciones de control apropiadas bien conocidas por los expertos en la técnica. La inhibición del crecimiento de una célula in vitro o in vivo puede ser de por lo menos aproximadamente el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% o 100%. La inhibición del crecimiento celular puede producirse mediante una variedad de mecanismos, por ejemplo por ADCC, apoptosis, necrosis o por inhibición de la proliferación celular.

"Sujeto" incluye cualquier animal humano o no humano. "Animal no humano" incluye todos los vertebrados, por ejemplo, mamíferos y no mamíferos, como primates no humanos, ovejas, perros, gatos, caballos, vacas, pollos, anfibios, reptiles, etc. Los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente en la presente.

"Survivina", como se usa en la presente, se refiere a la proteína survivina que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 22. La survivina es un miembro de la familia de los inhibidores de la apoptosis (IAP). La survivina es una proteína funcional dual que actúa como inhibidor de la apoptosis y regulador del ciclo celular. La sobreexpresión de survivina se observa en enfermedades malignas humanas y se correlaciona positivamente con mal pronóstico, recurrencia tumoral y resistencia terapéutica (Liu et al., Cancer Biol. Ther., 7:1053-1060, 2008; Mita et al., Clin Cancer Res., 14:5000-5005, 2008).

SEQ ID NO: 22

MGAPTLPPAWQPFLKDHRISTFKNWPFLEGCACTPERMAEAGFIHCPTENEPDLA

QCFFCFKELEGWEPDDDPIEEHKKHSSGCAFLSVKKQFEELTLGEFLKLDRERAKN

KIAKETNNKKKEFEET AEKVRRAIEQL A AMD

"Inhibidor de la survivina" se refiere a una molécula que inhibe, antagoniza, reduce o suprime la actividad de la survivina; por ejemplo, una molécula que inhibe la actividad antiapoptótica de la survivina en una célula. El inhibidor de la survivina puede inhibir la actividad antiapoptótica de la survivina en aproximadamente un 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% o 100%. Los inhibidores de la supervivencia pueden ser una molécula pequeña, un péptido, una vacuna, un polinucleótido, una molécula de ADN o ARN.

La presente invención se basa, por lo menos en parte, en el descubrimiento de que las células estromales de la médula ósea (BMSC) que residen en el nicho de BM protegen las células de MM contra la ADCC inducida por anticuerpos, por lo menos en parte, regulando por incremento la survivina, y que los inhibidores de la survivina mejoran la ADCC mediada por anticuerpos por células de MM y anula la resistencia a ADCC inducida por BMSC. Se ha demostrado que las BMSc protegen a las células de MM de la lisis dependiente de linfocitos T citotóxicos (CTL) a través de la resistencia inmune mediada por la adhesión celular, y se ha descubierto que la survivina está regulada por incremento en las células de MM resistentes a la lisis (de Haart et al., Clin Cance Res 19:5591-5601, 2013).

En la presente se divulga un método para inhibir el crecimiento o la proliferación de células de mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar un anticuerpo anti-CD38 y un inhibidor de survivina al sujeto con necesidad de ello durante un tiempo suficiente para inhibir el crecimiento o la proliferación de las células de mieloma múltiple.

“Enfermedad maligna hematológica positiva para CD38” se refiere a una enfermedad maligna hematológica caracterizada por la presencia de células tumorales que expresan CD38, incluyendo leucemias, linfomas y mieloma. Ejemplos de tales enfermedades malignas hematológicas positivas para CD38 son leucemia/linfoma linfoblástico de células B precursoras y linfoma no Hodgkin de células B, leucemia promielocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda y neoplasias de células B maduras, como leucemia linfocítica crónica de células B (CLL)/linfoma linfocítico pequeño (SLL), leucemia linfocítica aguda de células B, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de células del manto (LCM), linfoma folicular (FL), incluyendo FL de grado bajo, intermedio y alto, linfoma cutáneo del centro del folículo, linfoma de células B de la zona marginal (tipo MALT, tipo ganglionar y esplénico), leucemia de células pilosas, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de Burkitt (BL), plasmocitoma, mieloma múltiple (MM), leucemia de células plasmáticas, trastorno linfoproliferativo postrasplante, macroglobulinemia de Waldenstrom, leucemias de células plasmáticas y linfoma anaplásico de células grandes (ALCL).

La CD38 se expresa en una variedad de enfermedades hematológicas malignas, incluyendo mieloma múltiple, leucemias y linfomas, como leucemia linfocítica crónica de células B, leucemia linfocítica aguda de células T y B, macroglobulinemia de Waldenstrom, amiloidosis sistémica primaria, linfoma de células del manto, leucemia prolinfocítica/mielocítica, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, linfoma folicular, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica granular grande (LGL), leucemia de células NK y leucemia de células plasmáticas. La expresión de CD38 se ha descrito en células epiteliales/endoteliales de diferente origen, incluyendo el epitelio glandular en la próstata, las células de los islotes en el páncreas, el epitelio ductal en las glándulas, incluyendo la glándula parótida, las células epiteliales bronquiales, las células en los testículos y el ovario y el epitelio tumoral en el adenocarcinoma colorrectal. Otras enfermedades, donde podría estar implicada la expresión de CD38 incluyen, por ejemplo, carcinomas broncoepiteliales del pulmón, cáncer de mama (que evoluciona a partir de la proliferación maligna del revestimiento epitelial en los conductos y lóbulos de la mama), tumores pancreáticos, que evolucionan a partir de las células p (insulinomas), tumores que evolucionan a partir del epitelio en el intestino (por ejemplo, adenocarcinoma y carcinoma de células escamosas), carcinoma en la glándula prostática y seminomas en cánceres de testículo y ovario. En el sistema nervioso central, los neuroblastomas expresan CD38.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es mieloma múltiple (MM), leucemia linfoblástica aguda (ALL), linfoma no Hodgkin (NHL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de Burkitt (BL), linfoma folicular (FL), linfoma de células del manto (MCL), leucemia mieloide aguda (AML) o leucemia linfocítica crónica (CLL).

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para es MM.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es ALL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es NHL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es DLBCL

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es BL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es FL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es MCL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es AML.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es CLL.

En algunas realizaciones, la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es una enfermedad de células plasmáticas.

En algunas realizaciones, la enfermedad de células plasmáticas es amiloidosis de cadena ligera (AL), mieloma múltiple (MM) o macroglobulinemia de Waldenstrom.

En algunas realizaciones, la enfermedad de células plasmáticas es AL.

En algunas realizaciones, la enfermedad de las células plasmáticas es MM.

En algunas realizaciones, la enfermedad de las células plasmáticas es la macroglobulinemia de Waldenstrom.

Ejemplos de linfomas no Hodgkin de células B son granulomatosis linfomatoide, linfoma de derrame primario, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma mediastínico de células B grandes, enfermedades de las cadenas pesadas (incluyendo enfermedad y, M y a), linfomas inducidos por terapia con agentes inmunosupresores, como linfoma inducido por ciclosporina y linfoma inducido por metotrexato.

En una realización, el trastorno que implica células que expresan CD38 es el linfoma de Hodgkin.

Otros ejemplos de trastornos que implican células que expresan CD38 incluyen enfermedades malignas derivadas de células T y NK, incluyendo neoplasias de células T maduras y células NK, incluyendo leucemia prolinfocítica de células T, leucemia linfocítica granular grande de células T, leucemia de células NK agresiva, leucemia/linfoma de células T adultas, linfoma extraganglionar de células NK/T, tipo nasal, linfoma de células T de tipo enteropatía 78, linfoma de células T hepatoesplénico, linfoma de células T subcutáneo tipo paniculitis, linfoma blástico de células NK, micosis fungoide/síndrome de Sézary, trastornos linfoproliferativos de células T positivos para CD30 cutáneos primarios (linfoma cutáneo primario anaplásico de células grandes C-ALCL, papulosis linfomatoide, lesiones limítrofes), linfoma angioinmunoblástico de células T, linfoma periférico de células T no especificado y linfoma anaplásico de células grandes.

Los ejemplos de enfermedades malignas derivadas de células mieloides incluyen leucemia mieloide aguda, incluyendo la leucemia promielocítica aguda, y enfermedades mieloproliferativas crónicas, incluyendo la leucemia mieloide crónica.

Puede usarse cualquier anticuerpo anti-CD38 en los métodos divulgados en la presente. Las regiones variables de los anticuerpos anti-CD38 pueden obtenerse a partir de anticuerpos anti-CD38 existentes y, opcionalmente, clonarse como anticuerpos de longitud completa usando métodos estándar. Las regiones variables de anticuerpos ejemplares que se unen a CD38 que pueden usarse se describen, por ejemplo, en las Publicaciones de Patente Internacional N° W005/103083, WO06/125640, WO07/042309, WO08/047242, WO12/092612, WO06/099875 y WO11/154453A1.

Un anticuerpo anti-CD38 ejemplar que puede usarse es DARZALEX™ (daratumumab). El DARZALEX™ (daratumumab) comprende secuencias de aminoácidos de una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL), como se muestra en la SEQ ID NO: 4 y 5, respectivamente, secuencias de aminoácidos de una región determinante de complementariedad de cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 como se muestra en las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y secuencias de aminoácidos de una región determinante de la complementariedad de cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 como se muestra en las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, y es del subtipo IgG1/K. La secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de DARZALEX™ (daratumumab) se muestra en la SEQ ID NO: 12 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera se muestra en la SEQ ID NO: 13.

SEQ ID NO: 1

MANCEFSPVSGDKPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVVVLAVVVPRWRQQWSGPGT

TKRFPETVLARCVKYTEIHPEMRHVDCQSVWDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLM

KFGTQTVPCNKIFFWSRIKDFAHQFTQVQRDMFTFEDTFFGYFADDFTWCGEFN

TSKINY QSCPDWRKDCSNNPV S VFWKTV SRRFAEAACD VVHVMLNGSRSKIFDK

NSTFGSVEVHNEQPEKVQTEEAWVIHGGREDSRDECQDPTIKEEESIISKRNIQFSC

KNIYRPDKFEQCVKNPEDSSCTSEI SEQ ID NO: 2

SKRNIQFSCKNIYR SEQ ID NO: 3

EKVQTLEAWVIHGG

SEQ ID NO: 4

EV QLLESGGGLV QPGGSLRLSCAV SGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVS A

ISGSGGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDK

ILWFGEPVFDYWGQGTLVTV SS

SEQ ID NO: 5

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD

ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQ

GTKVEIK

SEQ ID NO: 6

SFAMS SEQ ID NO: 7

AISGSGGGTYYADSVKG SEQ ID NO: 8

DKILWFGEPVFDY SEQ ID NO: 9

RASQSVSSYLA SEQ ID NO: 10

DASNRAT SEQ ID NO: 11

QQRSNWPPTF

SEQ ID NO: 12

EV QLLESGGGLV QPGGSLRLSC AVSGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVS AISGSG

GGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDKILWFGEPVF

D YW GQGTLVTV SS ASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKD YFPEPVTV SWN

SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV

EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS

NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN

HYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 13

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT

GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIKRTVAAP

SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS

KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Otro anticuerpo anti-CD38 ejemplar que puede usarse es mAb003 que comprende las secuencias de VH y VL de las SEQ ID NO: 14 y 15, respectivamente, y se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.829.693.

SEQ ID NO: 14

QV QLV QSGAEVKKPGSS VKV SCK ASGGTFSS YAFS WVRQAPGQGLEWMGRVIPF LGIANSAQKFQGRVTITADKSTSTAY MDLSSLRSEDTAVYYCARDDIAALGPFDYWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO: 15

DIQMTQSPSSLS AS V GDR VTITCRASQGISS WLA WY QQKPEKAPKSLIY A ASSLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP EDFAT Y Y CQQ YNS YPRTFGQGTKVEIK

Otro anticuerpo anti-CD38 ejemplar que puede usarse es mAb024 que comprende las secuencias de VH y VL de las SEQ ID NO: 16 y 17, respectivamente, y se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.829.693.

SEQ ID NO: 16

EV QLV QSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPH DSD ARY SPSFQGQ VTFS ADKSIST AY LQW S SLK ASDT AM Y Y C ARH V GWGSRYW YFDLW GRGTLVT V SS

SEQ ID NO: 17

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQS V SS YLAWY QQKPGQAPRLLIYD ASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAV YY CQQRSNWPPTFGQGTKVEIK

Otro anticuerpo anti-CD38 ejemplar que puede usarse es MOR-202 (MOR-03087) que comprende las secuencias de VH y v L de las SEQ ID NO: 18 y 19, respectivamente, y se describe en la Patente de Estados Unidos N° 8.088.896.

SEQ ID NO: 18

QV QLVESGGGLV QPGGSLRLSCAASGFTFSS YYMNWVRQ APGKGLEWV SGISGD PSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMN SLR AEDT A V Y Y C ARDLPL V YT GFA YW GQGTLVT V S S

SEQ ID NO: 19

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDSKRPS GIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAE DEAD YY CQT YTGGASLVFGGGTKLTVLGQ

Otro anticuerpo anti-CD38 ejemplar que puede usarse es isatuximab, que comprende las secuencias de VH y VL de las SEQ ID NO: 20 y 21, respectivamente, descritas en la Patente de Estados Unidos N° 8.153.765. La VH y la VL de isatuximab pueden expresarse como IgG1/K.

SEQ ID NO: 20

QV QLV QSGAEV AKPGTS VKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGT

IYPGDGDTGY AQKFQGKATLT ADKSSKTVYMHLSSLASEDS AVYY C ARGD

YYGSNSLDYWGQGTSVTVSS

SEQ ID NO: 21

DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTVVAWYQQKPGQSPRRLIYS

ASYRYIGVPDRFTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGG

GTKFEIK

Los anticuerpos anti-CD38 usados en los métodos divulgados en la presente también pueden seleccionarse de novo de, por ejemplo, una biblioteca de presentación de fagos, donde el fago se modifica para expresar inmunoglobulinas humanas o porciones de las mismas como Fabs, anticuerpos de cadena sencilla (scFv) o regiones variables de anticuerpos no emparejados o emparejados (Knappik et al., J Mol Biol 296:57-86, 2000; Krebs et al., J Immunol Meth 254:67-84, 2001; Vaughan et al., Nature Biotechnology 14:309-314, 1996; Sheets et al., PITAS (USA) 95:6157-6162, 1998; Hoogenboom y Winter, J Mol Biol 227:381, 1991; Marks et al., J Mol Biol 222:581, 1991). Los dominios variables de unión a CD38 pueden aislarse, por ejemplo, de bibliotecas de presentación de fagos que expresan regiones variables de cadena pesada y ligera de anticuerpos como proteínas de fusión con la proteína de la cubierta del bacteriófago pIX como se describe en Shi et al (2010). J. Mol. Biol. 397:385-96 y la Publicación de Patente Internacional N° WO09/085462). Las bibliotecas de anticuerpos pueden cribarse para determinar la unión al dominio extracelular de CD38 humana y los clones positivos obtenidos pueden caracterizarse adicionalmente y los Fab aislados de los lisados de clones y posteriormente clonados como anticuerpos de longitud completa. Tales métodos de presentación de fagos para aislar anticuerpos humanos están establecidos en la técnica. Ver, por ejemplo: Patente de Estados Unidos N° 5.223.409, Patente de Estados Unidos N° 5.403.484, y Patente de Estados Unidos N° 5.571.698, Patente de Estados Unidos N° 5.427.908, Patente de Estados Unidos N° 5.580.717, Patente de Estados Unidos N° 5.969.108, Patente de Estados Unidos N° 6.172.197, Patente de Estados Unidos N° 5.885.793, Patente de Estados Unidos N° 6.521.404, Patente de Estados Unidos N° 6.544.731, Patente de Estados Unidos N° 6.555.313, Patente de Estados Unidos N° 6.582.915 y Patente de Estados Unidos N° 6.593.081.

La presente divulgación también se refiere a un método para tratar a un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, que comprende administrar al sujeto con necesidad de ello un anticuerpo anti-CD38 que compite por unirse a CD38 con un anticuerpo que comprende la VL de la SEQ ID NO: 4 y la VL de la SEQ ID NO: 5 y un inhibidor de survivina durante un tiempo suficiente para tratar la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38.

La presente divulgación también se refiere a un método para tratar a un sujeto que tiene mieloma múltiple, que comprende administrar al sujeto con necesidad de ello un anticuerpo anti-CD38 que compite por unirse a CD38 con un anticuerpo que comprende la VH de la SEQ ID NO: 4 y la VL de la SEQ ID NO: 5 y un inhibidor de survivina durante un tiempo suficiente para tratar el mieloma múltiple.

La presente divulgación también se refiere a un método para tratar a un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, que comprende administrar al sujeto con necesidad de ello un anticuerpo anti-CD38 que se une a la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1) y un inhibidor de survivina durante un tiempo suficiente para tratar la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38.

La presente divulgación también se refiere a un método para tratar a un sujeto que tiene mieloma múltiple, que comprende administrar al sujeto con necesidad de ello un anticuerpo anti-CD38 que se une a la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1). y un inhibidor de survivina durante un tiempo suficiente para tratar el mieloma múltiple.

El anticuerpo anti-CD38 comprende la HCDR1, la HCDR2 y la HCDR2 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente.

El anticuerpo anti-CD38 comprende la LCDR1, la LCDR2 y la LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente.

El anticuerpo anti-CD38 comprende la HCDR1, la HCDR2, la HCDR3, la LCDR1, la LCDR2 y la LCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10 y 11, respectivamente.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a la de la SEQ ID NO: 4 y la VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a la de la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 4 y la VL de la SEQ ID NO: 5.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 14 y la VL de la SEQ ID NO: 15.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 16 y la VL de la SEQ ID NO: 17.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 18 y la VL de la SEQ ID NO: 19.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 20 y la VL de la SEQ ID NO: 21.

Los anticuerpos pueden evaluarse para su competición con un anticuerpo de referencia, por ejemplo DARFALEX (daratumumab que tiene la VH de la SEQ ID N^o: 4 y la VL de la SEQ ID NO: 5 para la unión a CD38 usando métodos in vitro bien conocidos. En un método ejemplar, pueden incubarse células de CHO que expresan de manera recombinante CD38 con un anticuerpo de referencia no marcado durante 15 min a 4° C seguido de la incubación con un exceso de anticuerpo de prueba marcado fluorescentemente durante 45 min a 4° C. Después de lavar en PBS/BSA, puede medirse la fluorescencia mediante citometría de flujo usando métodos estándar. En otro método ejemplar, la porción extracelular de CD38 humana puede recubrirse sobre la superficie de una placa ELISA. El exceso de anticuerpo de referencia no marcado puede añadirse durante aproximadamente 15 minutos y posteriormente pueden añadirse anticuerpos de prueba biotinilados. Después de lavados en PBS/Tween, puede detectarse la unión del anticuerpo de prueba biotinilado usando estreptavidina conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) y detectarse la señal usando métodos estándar. Es evidente que en los ensayos de competición, el anticuerpo de referencia puede estar marcado y el anticuerpo de prueba no marcado. El anticuerpo de prueba compite con el anticuerpo de referencia cuando el anticuerpo de referencia inhibe la unión del anticuerpo de prueba, o el anticuerpo de prueba inhibe la unión del anticuerpo de referencia en por lo menos un 80%, 85%, 90%, 95% o 100%. El epítopo del anticuerpo de prueba puede definirse adicionalmente, por ejemplo, mediante mapeo de péptidos o ensayos de protección de hidrógeno/deuterio usando métodos conocidos, o mediante determinación de la estructura cristalina.

Un anticuerpo anti-CD38 divulgado en la presente puede unirse a la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de la CD38 humana (SEQ ID NO: 1) cuando el anticuerpo se une a por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 residuos dentro de la SEQ ID NO: 2 y la SEQ ID NO: 3. Algunas veces, el anticuerpo anti-CD38 se une a por lo menos un aminoácido en la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y a por lo menos un aminoácido en la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1). Algunas veces, el anticuerpo anti-CD38 se une a por lo menos dos aminoácidos en la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y a por lo menos dos aminoácidos en la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID No : 1). Algunas veces, el anticuerpo anti-CD38 se une a por lo menos tres aminoácidos en la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y a por lo menos tres aminoácidos en la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1).

Un anticuerpo ejemplar que se une a la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y a la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1) es el DARZALEX™ (daratumumab).

Los anticuerpos que se unen a la región SKRNIQFSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1) pueden generarse, por ejemplo, inmunizando ratones con péptidos que tienen las secuencias de aminoácidos mostradas. en las SEQ ID NO: 2 y 3 usando métodos estándar y como se describe en la presente, y caracterizando los anticuerpos obtenidos para su unión a los péptidos usando, por ejemplo, ELISA o estudios de mutagénesis.

La porción Fc del anticuerpo puede mediar en funciones efectoras de anticuerpos como citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), como se describe con más detalle a continuación. Tales funciones pueden estar mediadas por la unión de un dominio o dominios efectores Fc a un receptor Fc en una célula inmunitaria con actividad fagocítica o lítica o mediante la unión de un dominio o dominios efectores Fc a componentes del sistema del complemento. Típicamente, el efecto o efectos mediados por las células de unión a Fc o los componentes del complemento dan como resultado la inhibición y/o el agotamiento de las células objetivo, por ejemplo, las células que expresan CD38. Los isotipos de IgG humanas IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 muestran una capacidad diferencial para las funciones efectoras. La ADCC puede estar mediada por IgG1 e IgG3, la ADCP puede estar mediada por IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, y la CDC puede estar mediada por IgG1 e IgG3.

El anticuerpo anti-CD38 de la invención es del isotipo IgG1. En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 es de isotipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG2.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG3.

En algunos casos, el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG4.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte de células que expresan CD38 por citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP), citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) o apoptosis.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte de células que expresan CD38 por ADCC.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte de células que expresan CD38 por ADCP.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte de las células que expresan CD38 por CDC.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte de las células que expresan CD38 por apoptosis.

"Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos", "citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos" o "ADCC" es un mecanismo para inducir la muerte celular que depende de la interacción de las células objetivo recubiertas de anticuerpos con las células efectoras que poseen actividad lítica, como las células asesinas naturales, monocitos, macrófagos y neutrófilos a través de receptores Fc gamma (FcyR) expresados en células efectoras. Por ejemplo, las células NK expresan FcYRIIIa, mientras que los monocitos expresan FcyRI, FcyRII y FcYRIIIa. La muerte de la célula objetivo recubierta de anticuerpo, como la célula de MM que expresa CD38, se produce como resultado de la actividad de la célula efectora a través de la secreción de proteínas y proteasas formadoras de poros de la membrana. Para evaluar la actividad ADCC de un anticuerpo anti-CD38, el anticuerpo puede añadirse a células que expresan CD38 en combinación con células efectoras inmunes, que puede ser activada por los complejos antígeno-anticuerpo dando como resultado la citólisis de la célula objetivo. La citólisis puede detectarse mediante la liberación de un marcador (por ejemplo, sustratos radiactivos, colorantes fluorescentes o proteínas intracelulares naturales) de las células lisadas. Las células efectoras ejemplares para tales ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células NK. Como células objetivo pueden usarse múltiples líneas celulares de mieloma o células de MM primarias que expresan CD38. En un ensayo ejemplar, se incuban líneas celulares de MM modificadas para expresar luciferasa con anticuerpos anti-CD38. Se añaden células efectoras de PBMC recién aisladas a una proporción de células objetivo: efectoras de 40:1. 4 horas después de la adición de PBMC, se añade luciferina y se determina la señal bioluminiscente resultante emitida por las células de MM supervivientes en el plazo de 20 minutos usando un luminómetro (SpectraMax, Molecular Devices), y puede calcularse el porcentaje de ADCC de células de MM usando la fórmula: % ADCC = 1-(señal bioluminiscente media en ausencia de PBMC/señal bioluminiscente media en presencia de PBMC) x 100%. El anticuerpo anti-CD38 "induce la ADCC in vitro" cuando el % de ADCC en un ensayo in vitro como el descrito anteriormente es por lo menos aproximadamente del 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90% o 100%.

"Citotoxicidad dependiente del complemento", o "CDC", se refiere a un mecanismo para inducir la muerte celular en el que un dominio efector Fc de un anticuerpo unido al objetivo se une y activa el componente del complemento Clq que a su vez activa la cascada del complemento que lleva la muerte de la célula objetivo. La activación del complemento también puede dar como resultado el depósito de componentes del complemento en la superficie de la célula objetivo que facilitan la ADCC al unirse a los receptores del complemento (por ejemplo, CR3) en los leucocitos. En un ensayo ejemplar, las células primarias de BM-MNC aisladas de un paciente con una enfermedad maligna de células B pueden tratarse con un anticuerpo anti-CD38 y un complemento derivado de suero humano agrupado al 10% durante 1 hora a una concentración de 0,3-10 pg/ml, y la supervivencia de células de MM CD138+ primarias pueden determinarse mediante citometría de flujo usando las técnicas descritas en van der Veer et al., Haematologica 96:284-290, 2011; van der Veer et al., Blood Cancer J 1(10):e41, 2011. El porcentaje de lisis de células de MM puede determinarse con respecto a un control de isotipo como se describe en la presente. Los anticuerpos anti-CD38 de la invención pueden inducir la CDC en aproximadamente un 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75 %, 80%, 85%, 90%, 95% o 100%.

"Fagocitosis celular dependiente de anticuerpos" ("ADCP") se refiere a un mecanismo de eliminación de células objetivo recubiertas de anticuerpos por internalización por células fagocíticas, como macrófagos o células dendríticas. La ADCP puede evaluarse usando macrófagos derivados de monocitos como células efectoras y células Daudi (ATCC® CCL-213™) o células tumorales de linfoma o leucemia de células B que expresan CD38 como células objetivo modificadas para expresar GFP u otra molécula marcada. La proporción de células efectoras: objetivo puede ser, por ejemplo, de 4:1. Las células efectoras pueden incubarse con células objetivo durante 4 horas con o sin anticuerpo anti-CD38. Después de la incubación, las células pueden separarse usando accutase. Los macrófagos pueden identificarse con anticuerpos anti-CD11b y anti-CD14 acoplados a un marcador fluorescente, y el porcentaje de fagocitosis puede determinarse en base al % de fluorescencia de GFP en los macrófagos CD11+CD14+ usando métodos estándar. Los anticuerpos anti-CD38 de la invención pueden inducir la ADCP en aproximadamente un 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75 %, 80%, 85%, 90%, 95% o 100%.

La ADCC provocada por anticuerpos anti-CD38 puede potenciarse mediante ciertas sustituciones en la Fc del anticuerpo. Las sustituciones ejemplares son, por ejemplo, sustituciones en las posiciones de aminoácidos 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 o 430 (numeración de residuos de acuerdo con el índice de EU) como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 6.737.056.

En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-CD38 comprenden una sustitución de aminoácidos en la Fc de anticuerpo.

En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-CD38 comprenden una sustitución en la Fc del anticuerpo en las posiciones de los aminoácidos 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 o 430 (numeración de residuos de acuerdo con el índice EU).

La ADCC provocada por los anticuerpos anti-CD38 también puede potenciarse modificando el componente oligosacárido del anticuerpo. Las IgG1 o IgG3 humanas están N-glicosiladas en Asn297 con la mayoría de los glicanos en las formas biantenarias G0, G0F, G1, GIF, G2 o G2F. Los anticuerpos producidos por células CHO no modificadas típicamente tienen un contenido de fucosa de glucano de aproximadamente por lo menos el 85%. La eliminación de la fucosa del núcleo de los oligosacáridos de tipo complejo biantenario unidos a las regiones Fc potencia la ADCC de los anticuerpos mediante la unión mejorada de FcYRIIIa sin alterar la unión del antígeno o la actividad de CDC. Tales anticuerpos modificados pueden lograrse usando diferentes métodos informados para conducir a la expresión con éxito de anticuerpos defucosilados relativamente altos que portan el tipo de complejo biantenario de oligosacáridos Fc como el control de la osmolalidad del cultivo (Konno et al., 2010; Cytotechnology 64(:249-65, 2012), aplicación de una línea de CHo variante Lec13 como la línea celular huésped (Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002), aplicación de una línea de CHO variante EB66 como la línea celular huésped (Olivier et al., MAbs; 2(4), 2010; Epub antes de la impresión; PMID:20562582), aplicación de una línea celular de hibridoma de rata YB2/0 como línea de células huésped (Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003), introducción de ARN interferente pequeño específicamente contra la a 1,6-fucosiltrasferasa (FUT8) (Mori et al., Biotechnol Bioeng88:901-908, 2004), o coexpresión de p1-1,4-N-acetilglucosaminiltransferasa III y a-manosidasa II de Golgi o un inhibidor de alfa-manosidasa I potente, kifunensina (Ferrara et al., J Biol Chem281:5032-5036, 2006, Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006; Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99: 652-65, 2008).

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 tiene una estructura de glucano biantenaria con un contenido de fucosa entre aproximadamente el 0% y aproximadamente el 15%, por ejemplo el 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0%.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 tiene una estructura de glucano biantenaria con un contenido de fucosa de aproximadamente el 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0%

Las sustituciones en la Fc y el contenido reducido de fucosa pueden potenciar la actividad ADCC del anticuerpo anti-CD38.

“Contenido de fucosa” significa la cantidad de monosacárido de fucosa dentro de la cadena de azúcar en Asn297. La cantidad relativa de fucosa es el porcentaje de estructuras que contienen fucosa relacionadas con todas las glicoestructuras. Estas pueden caracterizarse y cuantificarse mediante múltiples métodos, por ejemplo: 1) usando MALDI-TOF de una muestra tratada con N-glicosidasa F (por ejemplo, estructuras complejas, híbridas y oligo y con alto contenido de manosa) como se describe en la Publicación de Patente Internacional N° WO2008/077546 2); 2) por liberación enzimática de los glicanos Asn297 con posterior derivatización y detección/cuantificación por HPLC (UPLC) con detección de fluorescencia y/o HPLC-MS (UPLC-MS); 3) análisis de proteínas intactas del mAb nativo o reducido, con o sin tratamiento de los glicanos Asn297 con Endo S u otra enzima que escinde entre el primer y el segundo monosacáridos GlcNAc, dejando la fucosa unida a la primera GlcNAc; 4) digestión del anticuerpo a los péptidos constituyentes mediante digestión enzimática (por ejemplo, tripsina o endopeptidasa Lys-C), y posterior separación, detección y cuantificación por HPLC-MS (UPLC-MS); 5) Separación de los oligosacáridos del anticuerpo de la proteína del anticuerpo mediante desglicosilación enzimática específica con PNGasa F en Asn 297. Los oligosacáridos liberados de este modo pueden marcarse con un fluoróforo, separarse e identificarse mediante varias técnicas complementarias que permiten: caracterización excelente de las estructuras de glicanos mediante espectrometría de masas de ionización por desorción láser asistida por matriz (MALDI) por comparación de las masas experimentales con las masas teóricas, determinación del grado de sialilación por HPLC de intercambio iónico (GlycoSep C), separación y cuantificación de las formas de oligosacárido de acuerdo con los criterios de hidrofilicidad por HPLC de fase normal (GlycoSep N), y separación y cuantificación de los oligosacáridos mediante fluorescencia inducida por láser-electroforesis capilar de alto rendimiento (HPCE-LIF).

"Fucosa baja" o "bajo contenido de fucosa", como se usa en la solicitud, se refiere a anticuerpos con un contenido de fucosa de aproximadamente el 0% a aproximadamente el 15%.

"Fucosa normal" o "contenido de fucosa normal", como se usa en la presente, se refiere a anticuerpos con un contenido de fucosa de aproximadamente más del 50%, típicamente aproximadamente más del 80% o más del 85%.

Pueden usarse anticuerpos que son sustancialmente idénticos al anticuerpo que comprende la cadena pesada de la SEQ ID NO: 12 y la cadena ligera de la SEQ ID NO: 13. El término "sustancialmente idéntico" como se usa en la presente significa que las dos secuencias de aminoácidos de la cadena pesada o de la cadena ligera del anticuerpo que se comparan son idénticas o tienen "diferencias insustanciales". Las diferencias insustanciales son sustituciones de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 aminoácidos en una cadena pesada o cadena ligera de un anticuerpo que no afectan adversamente a las propiedades de los anticuerpos. El porcentaje de identidad puede determinarse, por ejemplo, mediante una alineación por pares usando la configuración predeterminada del módulo AlignX de Vector NTI v.9.0.0 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Las secuencias de proteínas de la presente pueden usarse como una secuencia de consulta para realizar una búsqueda en bases de datos públicas o de patentes para, por ejemplo, identificar secuencias relacionadas. Los programas ejemplares usados para realizar tales búsquedas son los programas XBLAST o BLASTP (http_//www_ncbi_nlm/nih_gov), o la suite GenomeQuest™ (GenomeQuest, Westborough, MA) usando la configuración predeterminada. Las sustituciones ejemplares que pueden realizarse en los anticuerpos anti-CD38 son, por ejemplo, sustituciones conservadoras con un aminoácido que tiene una carga, características hidrófobas o estereoquímicas similares. También pueden realizarse sustituciones conservadoras para mejorar las propiedades del anticuerpo, por ejemplo la estabilidad o la afinidad, o para mejorar las funciones efectoras del anticuerpo. Pueden hacerse sustituciones de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 aminoácidos, por ejemplo, en la cadena pesada o ligera del anticuerpo anti-CD38. Además, cualquier residuo nativo en la cadena pesada o ligera también puede sustituirse con alanina, como se ha descrito anteriormente para la mutagénesis de barrido de alanina (MacLennan et al., Acta Physiol Scand Suppl 643: 55-67, 1998; Sasaki et al., Adv Biophys 35: 1-24, 1998). Los expertos en la técnica pueden determinar las sustituciones de aminoácidos deseadas en el momento en que se deseen dichas sustituciones. Las sustituciones de aminoácidos pueden realizarse, por ejemplo, mediante mutagénesis por PCR (Patente de Estados Unidos N° 4.683.195). Pueden generarse bibliotecas de variantes usando métodos bien conocidos, por ejemplo, usando codones aleatorios (NNK) o no aleatorios, por ejemplo codones DVK, que codifican 11 aminoácidos (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp) y el cribado de las bibliotecas en busca de variantes con las propiedades deseadas. Las variantes generadas pueden probarse para determinar su unión a CD38 y su capacidad para inducir la ADCC usando los métodos descritos en la presente.

Las "modificaciones conservadoras" se refieren a modificaciones de aminoácidos que no afectan o alteran significativamente las características de unión del anticuerpo que contiene las secuencias de aminoácidos. Las modificaciones conservadoras incluyen sustituciones, adiciones y deleciones de aminoácidos. Las sustituciones conservadoras son aquellas en las que el aminoácido se reemplaza con un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Las familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares están bien definidas e incluyen aminoácidos con cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina, triptófano), cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, fenilalanina, triptófano, histidina, tirosina), cadenas laterales alifáticas (por ejemplo, glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina), amida (por ejemplo, asparagina, glutamina), cadenas laterales beta ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales que contienen azufre (cisteína, metionina). Además, cualquier residuo nativo en el polipéptido también puede sustituirse con alanina, como se ha descrito anteriormente para la mutagénesis de barrido de alanina (MacLennan et al., (1988) Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67; Sasaki et al., (1988) Adv Biophys 35:1-24). Las sustituciones de aminoácidos de los anticuerpos de la invención pueden realizarse mediante métodos conocidos, por ejemplo, mediante mutagénesis por PCR (Patente de Estados Unidos N° 4.683.195). Alternativamente, pueden generarse bibliotecas de variantes, por ejemplo, usando codones aleatorios (NNK) o no aleatorios, por ejemplo codones DVK, que codifican 11 aminoácidos (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp). Las variantes de anticuerpos resultantes pueden probarse para determinar sus características usando los ensayos descritos en la presente.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 puede unirse a CD38 humana con un intervalo de afinidades (K^d). En una realización, el anticuerpo anti-CD38 se une a CD38 con una K^digual o menor de aproximadamente 1 x 10'8 M, por ejemplo, 5 x 10'9 M, 1 x 10'9 M, 5x 10'1° M, 1 x 1010 M, 5 x 1011 M, 1 x 1011 M, 5 x 1012 M, 1 x 1012 M, 5 x 1013 M, 1 x 1013 M, 5 x 1014 M, 1 x 1014 M o 5 x 10'15 M, o cualquier intervalo o valor en el mismo, como se determina por resonancia de plasmones superficiales o el método Kinexa, según practiquen los expertos en la técnica. Una afinidad ejemplar es igual o menor de 1 x 10'8 M. Otra afinidad ejemplar es igual o menor de 1x10-9 M.

Instrumentación KinExA, ELISA o ensayos de unión competitiva conocidos por los expertos en la técnica. La afinidad medida de una interacción de anticuerpo/CD38 particular puede variar si se mide en diferentes condiciones (por ejemplo, osmolaridad, pH). Por tanto, las mediciones de afinidad y otros parámetros de unión (por ejemplo, K^d, Kon, Kof se realizan típicamente con condiciones estandarizadas y un tampón estandarizado, como el tampón descrito en la presente. Los expertos en la técnica apreciarán que el error interno para las mediciones de afinidad, por ejemplo, usando Biacore 3000 o ProteOn (medido como desviación estándar, SD) puede estar típicamente dentro del 5-33% para las mediciones dentro de los límites típicos de detección. Por lo tanto, el término "aproximadamente" en el contexto de Kd refleja la desviación estándar típica en el ensayo. Por ejemplo, la SD típica para una K^dde 1 x 10-9 M es hasta ± 0,33 x 10-9 M.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 es un anticuerpo biespecífico. Las regiones VL y/o VH de los anticuerpos anti-CD38 existentes o las regiones VL y VH identificadas de novo como se describe en la presente pueden modificarse en anticuerpos biespecíficos de longitud completa. Tales anticuerpos biespecíficos pueden prepararse modulando las interacciones de CH3 en la Fc del anticuerpo para formar anticuerpos biespecíficos usando tecnologías como las descritas en la Patente de Estados Unidos N° 7.695.936; Publicación de Patente Internacional N° WO04/111233; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2010/0015133; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2007/0287170; Publicación de Patente Internacional N° WO2008/119353; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2009/0182127; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2010/0286374; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2011/0123532; Publicación de Patente Internacional N° WO2011/131746; Publicación de Patente Internacional N° WO2011/143545; o Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2012/0149876.

Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos de la invención pueden generarse in vitro en un entorno libre de células introduciendo mutaciones asimétricas en las regiones CH3 de dos anticuerpos homodiméricos monoespecíficos y formando el anticuerpo heterodimérico biespecífico a partir de dos anticuerpos homodiméricos monoespecíficos originales en condiciones reductoras para permitir la isomerización de enlaces disulfuro de acuerdo con los métodos descritos en la Publicación de Patente Internacional N° WO2011/131746. En los métodos, el primer anticuerpo bivalente monoespecífico (por ejemplo, anticuerpo anti-CD38) y el segundo anticuerpo bivalente monoespecífico se diseñan para tener ciertas sustituciones en el dominio CH3 que promueven la estabilidad del heterodímero; los anticuerpos se incuban juntos en condiciones reductoras suficientes para permitir que las cisteínas de la región bisagra experimenten la isomerización del enlace disulfuro; generando de este modo el anticuerpo biespecífico mediante intercambio de brazo Fab. Las condiciones de incubación pueden restaurarse óptimamente a no reductoras. Los agentes reductores ejemplares que pueden usarse son 2-mercaptoetilamina (2-MEA), ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), glutatión, tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP), L-cisteína y beta-mercaptoetanol, preferiblemente un agente reductor seleccionado del grupo que consiste de: 2-mercaptoetilamina, ditiotreitol y tris(2-carboxietil)fosfina. Por ejemplo, puede usarse incubación durante por lo menos 90 min a una temperatura de por lo menos 20° C en presencia de por lo menos 25 mM de 2-MEA o en presencia de por lo menos 0,5 mM de ditiotreitol a un pH de 5-8, por ejemplo, un pH de 7,0 o un pH de 7,4.

Las mutaciones de CH3 ejemplares que pueden usarse en una primera cadena pesada y en una segunda cadena pesada del anticuerpo biespecífico son K409R y/o F405L.

Las estructuras biespecíficas adicionales en las que pueden incorporarse las regiones VL y/o VH de los anticuerpos de la invención son, por ejemplo, inmunoglobulinas de dominio variable dual (DVD) (Publicación de Patente Internacional N° WO2009/134776), o estructuras que incluyen varios dominios de dimerización para conectar los dos brazos del anticuerpo con diferente especificidad, como dominios de dimerización de colágeno o cremallera de leucina (Publicación de Patente Internacional N° WO2012/022811, Patente de Estados Unidos N° 5.932.448; Patente de Estados Unidos N° 6.833.441). Los DVD son anticuerpos de longitud completa que comprenden la cadena pesada que tiene una estructura VH1-conector-VH2-CH y la cadena ligera que tiene la estructura VL1-conector-VL2-CL; el conector siendo opcional.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 se conjuga con una toxina. Los métodos de conjugación y las toxinas adecuadas son bien conocidos.

En algunas realizaciones, el sujeto que tiene MM es homocigoto para fenilalanina en la posición 158 de CD16 (genotipo FcYRIIIa-158F/F) o heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición 158 de CD16 (genotipo FcYRIIIa-158F/V). CD16 también se conoce como el receptor IIIa de Fc gamma (FcYRIIIa) o la isoforma III-A del receptor de la región Fc de gamma inmunoglobulina de baja afinidad. Se ha demostrado que el polimorfismo de valina/fenilalanina (V/F) en la posición 158 del residuo de proteína FcYRIIIa afecta a la afinidad de FcYRIIIa por la IgG humana. El receptor con polimorfismos FcYRIIIa-158F/F o FcYRINa-158FN demuestra una interacción de Fc reducida y, por lo tanto, una ADCC reducida en comparación con FcYRIIIa-158V/V. La falta o la baja cantidad de fucosa en los oligosacáridos enlazados a N humanos mejora la capacidad de los anticuerpos para inducir ADCC debido a la unión mejorada de los anticuerpos a FcYRIIIa humano (CD16) (Shields et al., J Biol Chem 277:26733-40, 2002). Los pacientes pueden analizarse para determinar su polimorfismo de FcYRIIIa usando métodos rutinarios.

En algunos casos, el inhibidor de survivina es una molécula pequeña.

En algunos casos, el inhibidor de survivina es un polinucleótido.

Los inhibidores de la survivina pueden inhibir la apoptosis inducida por la survivina mediante cualquier mecanismo, como inhibir la transcripción génica de survivina o la expresión de proteínas, inhibir la dimerización de la proteína de survivina, potenciar la desestabilización o inducir su degradación, etc.

Un inhibidor de molécula pequeña de survivina ejemplar es YM155. YM155 se une al promotor de survivina e inhibe su transcripción. Otros inhibidores de molécula pequeña de survivina ejemplares son, por ejemplo, derivados del ácido nordihidroguaiarético como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 6.608.108, y las moléculas descritas en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2012/0122910. Otros inhibidores de polinucleótidos de survivina se describen, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 6.838.283, Publicaciones de Patente Internacional N° WO01/057059, W^o09/114476 y WO09/044793. Los inhibidores de polinucleótidos incluyen microARN (miARN), ARN interferentes pequeños (ARNip), oligos específicos de alelo (ASO) y otros inhibidores de polinucleótidos conocidos en la técnica.

Administración/Composiciones farmacéuticas

En los usos de la invención, los anticuerpos anti-CD38 pueden proporcionarse en composiciones farmacéuticas adecuadas que comprenden el anticuerpo anti-CD38 y un portador farmacéuticamente aceptable. El portador puede ser un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra el anticuerpo anti-CD38. Tales vehículos pueden ser líquidos, como agua y aceites, incluyendo los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Por ejemplo, puede usarse solución salina al 0,4% y glicina al 0,3%. Estas soluciones son estériles y generalmente están libres de material particulado. Pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales bien conocidas (por ejemplo, filtración). Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas como agentes de ajuste y tamponadores del pH, agentes estabilizantes, espesantes, lubricantes y colorantes, etc. La concentración de las moléculas o anticuerpos de la invención en tal formulación farmacéutica puede variar ampliamente, es decir, desde menos de aproximadamente el 0,5%, habitualmente hasta por lo menos aproximadamente el 1% hasta tanto como el 15 o 20% en peso y se seleccionará principalmente en base a la dosis requerida, volúmenes de fluido, viscosidades, etc., de acuerdo con el modo particular de administración seleccionada. Los vehículos y formulaciones adecuados, que incluyen otras proteínas humanas, por ejemplo, albúmina de suero humano, se describen, por ejemplo, en, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a Edición, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams y Wilkins, Filadelfia, PA2006, Parte 5, Pharmaceutical Manufacturing págs. 691-1092, Ver especialmente págs. 958-989.

El modo de administración del anticuerpo anti-CD38 en los usos de la invención puede ser cualquier vía adecuada como administración parenteral, por ejemplo, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa o subcutánea, pulmonar, transmucosa (oral, intranasal, intravaginal, rectal). u otros medios apreciados por el experto en la técnica, bien conocidos en la técnica.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina se administran simultáneamente, secuencialmente o por separado.

El anticuerpo anti-CD38 en los usos de la invención puede administrarse a un paciente por cualquier vía adecuada, por ejemplo por vía parental mediante infusión intravenosa (IV) o inyección en bolo, por vía intramuscular, subcutánea o intraperitoneal. La infusión IV puede administrarse, por ejemplo, durante 15, 30, 60, 90, 120, 180 o 240 minutos, o de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 horas.

La dosis administrada a un paciente que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es suficiente para aliviar o por lo menos detener parcialmente la enfermedad que se está tratando ("cantidad terapéuticamente eficaz") y puede ser algunas veces de 0,005 mg a aproximadamente 100 mg/kg, por ejemplo, de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 30 mg/kg o de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 25 mg/kg, o de aproximadamente 4 mg/kg, aproximadamente 8 mg/kg, aproximadamente 16 mg/kg o aproximadamente 24 mg/kg, o por ejemplo de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 mg/kg, pero puede ser incluso mayor, por ejemplo, de aproximadamente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 mg/kg.

También puede administrarse una dosis unitaria fija, por ejemplo, 50, 100, 200, 500 o 1000 mg, o la dosis puede basarse en el área de superficie del paciente, por ejemplo, 500, 400, 300, 250, 200 o 100 mg/m2. Habitualmente, pueden administrarse entre 1 y 8 dosis (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8) para tratar el MM, pero pueden administrarse 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más dosis.

La administración del anticuerpo anti-CD38 en los usos de la invención puede repetirse después de un día, dos días, tres días, cuatro días, cinco días, seis días, una semana, dos semanas, tres semanas, un mes, cinco semanas, seis semanas, siete semanas, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses o más. También son posibles cursos repetidos de tratamiento, al igual que la administración crónica. La administración repetida puede ser a la misma dosis o a una dosis diferente. Por ejemplo, el anticuerpo anti-CD38 en los usos de la invención puede administrarse a 8 mg/kg o a 16 mg/kg a intervalos semanales durante 8 semanas, seguido de la administración a 8 mg/kg o a 16 mg/kg cada dos semanas durante 16 semanas adicionales, seguido de la administración de 8 mg/kg o de 16 mg/kg cada cuatro semanas mediante infusión intravenosa.

Los anticuerpos anti-CD38 pueden administrarse en los usos de la invención mediante terapia de mantenimiento, como, por ejemplo, una vez a la semana durante un período de 6 meses o más.

Por ejemplo, los anticuerpos anti-CD38 en los usos de la invención pueden proporcionarse como una dosificación diaria en una cantidad de aproximadamente 0,1-100 mg/kg, como 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 mg/kg, por día, en por lo menos uno de los días 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40, o alternativamente, por lo menos una de las semanas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 después del inicio del tratamiento, o cualquier combinación de los mismos, usando dosis individuales o divididas de cada 24, 12, 8, 6, 4 o 2 horas, o cualquier combinación de las mismas.

Los anticuerpos anti-CD38 en el uso de la invención también pueden administrarse profilácticamente para reducir el riesgo de desarrollar cáncer, retrasar el inicio de la aparición de un evento en la progresión del cáncer y/o reducir el riesgo de recurrencia cuando un cáncer está en remisión. Esto puede ser especialmente útil en pacientes en los que es difícil localizar un tumor que se sabe que está presente debido a otros factores biológicos.

El anticuerpo anti-CD38 en los usos de la invención puede liofilizarse para su almacenamiento y reconstituirse en un potador adecuado antes de su uso. Esta técnica ha demostrado ser eficaz con preparaciones de proteínas convencionales y pueden emplearse técnicas de liofilización y reconstitución bien conocidas.

En los usos de la invención, el anticuerpo anti-CD38 se administra en combinación con un inhibidor de survivina.

En los usos de la invención, el anticuerpo anti-CD38 se administra en combinación con un inhibidor de survivina YM155.

El YM155 usado en los usos de la invención está fácilmente disponible de acuerdo con los procesos de producción como se divulgan en las Publicaciones de Patente Internacional N° WO01/60803 y WO2004/092160.

YM155 puede administrarse por vía oral, parenteral o intravenosa. A este respecto, la preparación de inyección para administración intravenosa incluye aquellas que contienen soluciones, suspensiones y emulsiones acuosas o no acuosas estériles. El solvente acuoso incluye, por ejemplo, agua destilada para inyección y solución salina fisiológica. El solvente no acuoso incluye, por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales como aceite de oliva, alcoholes como etanol, polisorbato 80 y similares. Tales composiciones pueden contener agentes de ajuste de la tonicidad, antisépticos, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes dispersantes, estabilizantes y agentes solubilizantes adicionales. Estos pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro bacteriano, mezcla de esterilizadores o irradiación. Alternativamente, es posible preparar una composición sólida libre de gérmenes y disolverla o suspenderla en agua estéril o un solvente estéril para inyección inmediatamente antes del uso.

En la administración intravenosa, YM155 puede administrarse, por ejemplo, a 0,1-20 mg/m2/día, como 1-10 mg/m2/día, una vez al día o dividido en varias dosis, o continuamente mediante infusión (instilación continua). YM155 puede infundirse a 3-10 mg/m2/día continuamente durante un período de 4 días a 20 días, por ejemplo, de 4 días a 14 días, o 5 días, 7 días, 10 días o 14 días, y/o durante 7 días. Cuando se continúa la administración, puede emplearse un ciclo de medicación que comprende un período de descanso del fármaco de 1 día a 2 meses, de 7 días a 21 días o de 14 días, después de la finalización del período de medicación anterior. Alternativamente, YM155 puede administrarse continuamente mediante infusión a una dosis de 3-8 mg/m2/ día durante 7 días, seguido de descanso de fármaco de 14 días; este ciclo como un ciclo se repite dependiendo de las condiciones. La frecuencia de administración, dosificación, tiempo de infusión, ciclo de medicación y similares, pueden determinarse adecuadamente de acuerdo con los casos individuales considerando el tipo de agente anticanceroso, el estado, la edad, el sexo, etc. de los pacientes-En el uso de la invención, la combinación del anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina puede administrarse durante cualquier marco temporal conveniente. Por ejemplo, el anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina pueden administrarse a un paciente el mismo día. Sin embargo, el anticuerpo anti-CD38 y la survivina también pueden administrarse en días alternos o semanas o meses alternos, y así sucesivamente. En algunos métodos, el anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina pueden administrarse con suficiente proximidad en el tiempo para que estén presentes simultáneamente (por ejemplo, en el suero) a niveles detectables en el paciente que se está tratado. En algunos métodos, un ciclo completo de tratamiento con el anticuerpo anti-CD38 que consiste de una serie de dosis durante un período de tiempo es seguido o precedido por un ciclo de tratamiento con inhibidor de survivina, que consiste de una serie de dosis. Puede usarse un periodo de recuperación de 1, 2 o varios días o semanas entre la administración del anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina.

El anticuerpo anti-CD38 en combinación con el inhibidor de survivina puede administrarse junto con cualquier forma de terapia con radiación, incluyendo la radiación de haz externo, la radioterapia de intensidad modulada (IMRT) y cualquier forma de radiocirugía, incluyendo Gamma Knife, Cyberknife, Linac y radiación intersticial (por ejemplo, semillas radiactivas implantadas, balón GliaSite) y/o con cirugía.

Administración subcutánea de composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo que se une específicamente a CD38 y una hialuronidasa

El anticuerpo anti-CD38 puede administrarse como una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y una hialuronidasa por vía subcutánea.

La concentración del anticuerpo anti-CD38 en la composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede ser de aproximadamente 20 mg/ml.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender entre aproximadamente 1200 mg y 1800 mg del anticuerpo anti-CD38.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1200 mg del anticuerpo anti-CD38.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.600 mg del anticuerpo anti-CD38.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.800 mg del anticuerpo anti-CD38.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender entre aproximadamente 30.000 U y 45.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.200 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 30.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.800 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 45.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.600 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 30.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender aproximadamente 1.600 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 45.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica administrada por vía subcutánea puede comprender la hialuronidasa rHuPH20 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 23.

rHuPH20 es una hialuronidasa recombinante (HYLENEX® recombinante) y se describe en Publicación de Patente Internacional N° WO2004/078140.

La hialuronidasa es una enzima que degrada el ácido hialurónico (EC 3.2.1.35) y reduce la viscosidad del hialuronano en la matriz extracelular, aumentando de este modo la permeabilidad del tejido.

SEQ ID NO: 23

MGVLKFKHIFFRSFVKSSGVSQIVFTFLLIPCCLTLNFRAPPVIPNVPFLWAWNAPS

EFCLGKFDEPLDMSLFSFIGSPRINATGQGVTIFYVDRLGYYPYIDSITGVTVNGGIP

QKISLQDHLDKAKKDITFYMPVDNLGMAVIDWEEWRPTWARNWKPKDVYKNRS

IELVQQQNVQLSLTEATEKAKQEFEKAGKDFLVETIKLGKLLRPNHLWGYYLFPD

CYNHHYKKPGYNGSCFNVEIKRNDDLSWLWNESTALYPSIYLNTQQSPVAATLY

VRNRVREAIRVSKIPDAKSPLPVFAYTRIVFTDQVLKFLSQDELVYTFGETVALGA

SGIVIWGTLSIMRSMKSCLLLDNYMETILNPYIINVTLAAKMCSQVLCQEQGVCIR

KNWNSSDYLHLNPDNFAIQLEKGGKFTVRGKPTLEDLEQFSEKFYCSCYSTLSCK

EKAD VKDTD AVDV CIADGV CID AFLKPPMETEEPQIFYNASPSTLS ATMFIV SILFLI

ISSVASL

La administración de la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y la hialuronidasa puede repetirse después de un día, dos días, tres días, cuatro días, cinco días, seis días, una semana, dos semanas, tres semanas, cuatro semanas, cinco semanas, seis semanas, siete semanas, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses o más. También son posibles cursos repetidos de tratamiento, al igual que la administración crónica. La administración repetida puede ser a la misma dosis o a una dosis diferente. Por ejemplo, la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y la hialuronidasa puede administrarse una vez a la semana durante ocho semanas, seguida de una vez cada dos semanas durante 16 semanas, seguido de una vez cada cuatro semanas. Las composiciones farmacéuticas a administrar pueden comprender aproximadamente 1200 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 30.000 U de hialuronidasa, en donde la concentración del anticuerpo que se une específicamente a CD38 en la composición farmacéutica es de aproximadamente 20 mg/ml. Las composiciones farmacéuticas a administrar pueden comprender aproximadamente 1.800 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 45.000 U de hialuronidasa. Las composiciones farmacéuticas a administrar pueden comprender aproximadamente 1.600 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 30.000 U de hialuronidasa. Las composiciones farmacéuticas a administrar pueden comprender aproximadamente 1.600 mg del anticuerpo anti-CD38 y aproximadamente 45.000 U de hialuronidasa.

La composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y la hialuronidasa puede administrarse por vía subcutánea en la región abdominal.

La composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y la hialuronidasa puede administrarse a un volumen total de aproximadamente 80 ml, 90 ml, 100 ml, 110 ml o 120 ml.

Para la administración, pueden mezclarse 20 mg/ml del anticuerpo anti-CD38 en acetato de sodio 25 mM, cloruro de sodio 60 mM, D-manitol 140 mM, polisorbato 20 al 0.04%, pH 5.5 con rHuPH2O, 1.0 mg/ml (75-150 kU/ml) en L-Histidina 10 mM, NaCl 130 mM, L-Metionina 10 mM, Polisorbato 80 al 0,02%, pH 6,5 antes de la administración de la mezcla a un sujeto.

Realizaciones adicionales

En algunas realizaciones de la invención, el anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina se administran simultáneamente, secuencialmente o por separado.

En algunas realizaciones el anticuerpo anti-CD38 se administra por vía intravenosa.

En algunas realizaciones el anticuerpo anti-CD38 se administra por vía subcutánea en una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 y una hialuronidasa.

Aunque se ha descrito la invención en términos generales, en los siguientes ejemplos se divulgarán adicionalmente las realizaciones de la invención que no debe interpretarse que limitan el alcance de las reivindicaciones.

Materiales y métodos

Células y cultivo celular

Células mononucleares de médula ósea (BM-MNC) y células mononucleares de sangre periférica (PBMC)

Se recogieron aspirados de BM de pacientes con MM o individuos sanos, así como PB de individuos sanos usando protocolos y procedimientos aprobados por el comité ético médico institucional de acuerdo con la declaración de Helsinki. Se aislaron PBMC y bM-MNC de donantes sanos (HD) mediante centrifugación en gradiente de densidad Ficoll-Hypaque de muestras de PB o aspirados de BM, respectivamente. Las PBMC se usaron directamente como células efectoras en experimentos de ADCC; las BM-MNC se crioconservaron hasta su uso.

Líneas celulares de mieloma múltiple (MM)

Se mantuvieron las líneas celulares de MM humanas transducidas con luciferasa (Luc) RPMI-8226 y UM9 en RPMI1640 (Invitrogen), suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS; Integro BV) y antibióticos (penicilina/estreptomicina; Life Technologies) a 37° C en una atmósfera humidificada que contenía 5% de CO².

Células estromales de la médula ósea (BMSC)

Se aislaron y cultivaron células estromales adherentes de BM-MNC de individuos sanos (hBMSC) o de pacientes con MM (pBMSC) mediante adherencia plástica. Las células se cultivaron en Optimem (Invitrogen) con lisado de plaquetas al 5%, heparina y antibióticos. Las hBMSC se usaron en experimentos hasta el pase seis y las pBMSC se usaron después del pase uno o dos.

Reactivos

Se disolvió YM155 (bromuro de sepantronio; bromuro de 4,9-dihidro-1-(2-metoxietil)-2-metil-4,9-dioxo-3-(2-pirazinilmetil)-1H-naft[2,3-d]imidazolio; CAS 781661-94-7) (Selleck Chemicals) en dimetilsulfóxido (DMSO) a una concentración de 1 mM y se dividieron en alícuotas para su almacenamiento hasta su uso. YM155 se diluyó en medio de cultivo a las concentraciones indicadas en cada experimento.

YM155; Fórmula I:

I

Citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) basada en bioluminiscencia específica de compartimento contra líneas celulares de mieloma múltiple ("ensayos de citotoxicidad basados en BLI específicos de compartimento")

Las hBMSC se sembraron a una densidad de 1 x 104 células/pocillo en placas de 96 pocillos de fondo plano opacos blancos (Costar) en 100 pl de medio de cultivo. Después de un período de adherencia de seis horas, se añadieron líneas celulares de MM transducidas con luc a una densidad de 1 x 104 células/pocillo en pocillos recubiertos o no recubiertos con BMSC. En experimentos en los que se probó YM155, se añadió YM155 a las concentraciones indicadas junto con células de MM. Después de 16-20 horas, se añadió daratumumab a las concentraciones indicadas y se dejó durante 15 minutos a temperatura ambiente. Luego, se añadieron PBMC recién aisladas de individuos sanos como células efectoras a las proporciones objetivo efectoras indicadas. 4 horas después de la adición de PBMC, se añadieron 125 pg/ml de luciferina de escarabajo (Promega) y se determinó la señal bioluminiscente emitida por las células de MM supervivientes en el plazo de 20 minutos usando un luminómetro (SpectraMax, Molecular Devices). El porcentaje de supervivencia de las células de MM se calculó usando la fórmula: % de supervivencia = (señal bioluminiscente media en ausencia de PBMC/señal bioluminiscente media en presencia de PBMC) x 100%. En estos ensayos la supervivencia de las células de MM es un reflejo directo de la lisis mediada por ADCC y se correlaciona con ensayos de liberación de cromo clásicos como se describe en McMillin et al., Nat Med 16:483-489, 2010.

Ensayo de ADCC basado en FACS en BM-MNC de mieloma múltiple

Se usaron BM-MNC congeladas de pacientes con MM con 15-35% de células MM CD138+ en ensayos de ADCC basados en FACS. Las células se descongelaron y se cultivaron en HS al 10% en RPMI. Después de 16-20 h, se contaron las BM-MNC por exclusión de azul de tripano y se sembraron 4 x 104 células/pocillo en 96 placas de fondo redondo. Se añadieron daratumumab y/o YM155 en los pocillos como se indica por experimento. Después de 24 horas, las células se tiñeron con anticuerpos anti-CD138, anti-CD38, anti-CD56 y anti-CD3 conjugados fluorescentes y la supervivencia de las células de MM CD138+ primarias en las BM-MNC se determinó mediante FACS como se ha descrito anteriormente (Groen et al., Blood 120:e9-e16, 2012). El porcentaje de lisis de células de MM se dedujo usando la siguiente fórmula: % de células de lisis = 1-(recuentos de células CD138+ supervivientes en los pocillos tratados/recuentos del número de células CD138+ supervivientes en los pocillos de control) x 100%. Citometría de flujo

Para determinar el nivel de expresión de CD38 en células de MM, las células de MM se cultivaron solas o con BMSC y se incubaron con anticuerpo conjugado con fluoresceína de CD38. Las células se tiñeron adicionalmente con CD105 como marcador para BMSC. La expresión de CD38 en células negativas para CD105 se determinó mediante FACS como se describe (de Haart et al., Clin Cancer Res 19:5591-601, 2013).

Experimentos de direccionamiento de tumores in vivo

Se cargaron in vitro andamiajes híbridos que consistían de tres partículas de fosfato cálcico bifásico de 2 a 3 mm recubiertas con HD-BMSC con la línea celular de MM Luc+ UM9 (1x106 células/andamiaje) antes de la implantación s.c. en ratones RAG2'/'^yc/' como se ha descrito anteriormente (Groen et al., Blood 120:e9-e16, 2012). Diez días después de la implantación, los ratones con tumores que crecían en los andamiajes se trataron con vehículo de control, daratumumab PBS o daratumumab YM155. Cada ratón, incluyendo el grupo de control, recibió además HD-PBMC empobrecidas en células T (5x106 células) como fuente de células NK humanas para inducir la ADCC. Se administraron PBS y YM155 diluidas en PBS usando bombas de infusión subcutánea (Alzet 1007D) que suministran 1 mg/kg/d del fármaco de manera continua. Las bombas se retiraron después de 10 días. El BLI se realizó como se ha descrito anteriormente (Spaapen et al., Clin Cancer Res 16:5481-88, 2010; Rozemuller et al., Haematologica 93:1049-57, 2008).

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de granzima B (ELISA)

El contenido de granzima B (GzB) de los sobrenadantes libres de células se determinó usando un kit ELISA comercial (Pelipair, Sanquin, Amsterdam, NL) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Ejemplo 1. Las células estromales de médula ósea confieren protección contra la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos de las células de mieloma múltiple

Como las células estromales del microambiente de la médula ósea (BM) protegen a las células de MM contra la citotoxicidad mediada por CTL y NK, se evaluó si se produce un efecto protector similar contra la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) inducida por el daratumumab.

Se probó la inducción de ADCC por BMSC de donantes sanos contra dos líneas de células de MM transducidas con luciferasa CD38+, UM9 y RPMI con concentraciones en serie de daratumumab en presencia o ausencia de HD-PBMC como células efectoras en ensayos de citotoxicidad basados en BLI específicos del compartimento. En ausencia de BMSC, daratumumab mediaba la ADCC en ambas líneas celulares de MM de una manera dependiente de la dosis. Ambas líneas celulares fueron menos sensibles a la ADCC inducida por daratumumab en presencia de BMSC. La Figura 1A muestra el efecto de las BMSC sobre la ADCC inducida por daratumumab en células UM9, y la Figura 1B muestra el efecto de las BMSC sobre la ADCC inducida por daratumumab en células RPMI-8226.

La capacidad de las BMSC para proteger a las células de MM primarias de la ADCC inducida por daratumumab también se evaluó en un ensayo de ADCC basado en FACS usando la metodología descrita anteriormente. En los ensayos, se incubaron BM-MNC que contenían por lo menos un 15% de células plasmáticas malignas CD138+ y un número suficiente de células NK efectoras autólogas con daratumumab para inducir la ADCC. Las BM-MNC se probaron solas o en cocultivo con BMSC autólogas para evaluar el efecto de las BMSC. Se realizó un ensayo de viabilidad basado en FACS después de 24 horas de cultivo para determinar las células supervivientes CD138+ y calcular la lisis. La inducción de ADCC de células de MM primarias fue menos eficiente en presencia de MM-BMSC autólogas en ambos donantes probados (Figura 2A y Figura 2B), lo que indica que las células estromales del microambiente tumoral indujeron una resistencia a la terapia con daratumumab.

Ejemplo 2. La supresión de ADCC inducida por BMSC no está provocada por la regulación por disminución de c D38 o la supresión de células NK

Se evaluaron los posibles cambios en la expresión superficial de CD38 y la activación de las células NK para comprender los mecanismos de protección mediada por BMSC contra la ADCC.

Las líneas celulares de MM UM9 y RPMI-8226 se cultivaron en presencia o ausencia de BMSC de donantes sanos. El cocultivo de células de MM con BMSC no reguló por disminución los niveles de expresión de CD38 en ninguna línea celular de MM (datos no mostrados).

Como se sabe que las BMSC producen varios factores inmunosupresores como IDO, TGF-p o PGE-2, la protección contra ADCC por las BMSC podría deberse a la supresión de la activación de las células NK, lo que reduciría su capacidad para desgranular y liberar la granzima B y la perforina en la sinapsis inmune para matar a sus objetivos. Con este propósito, se determinó el efecto de las BMSC sobre la activación de las células NK por daratumumab usando la excreción de granzima B mediada por daratumumab como marcador de la actividad de las células NK. Los niveles de granzima B fueron en general más altos en los sobrenadantes en presencia de pf BMSC (datos no mostrados). Por tanto, la protección mediada por BMSC contra ADCC probablemente no se debió a la supresión de células NK.

Ejemplo 3. La inhibición de la survivina anula la protección mediada por BMSC contra ADCC y proporciona destrucción mediada por ADCC sinérgica de células de mieloma múltiple con daratumumab

Se ha demostrado que las BMSC protegen a las células de MM contra la lisis de CTL mediante la regulación por incremento de la survivina en las células de MM. La modulación de la survivina se evaluó como un posible mecanismo para la protección mediada por BMSC contra la ADCC inducida por daratumumab usando YM155, un inhibidor de molécula pequeña de la survivina.

Primero, se evaluó el efecto de YM155 sobre la viabilidad de las células NK. Se cultivaron BM-MNC de pacientes con MM en presencia de diferentes dosis de YM155 durante 24 horas. La viabilidad de las células de MM (células CD138+) y las células NK (células CD3'CD138'CD56+) se determinó mediante FACS. Las células NK no se vieron afectadas a las dosis de YM155 que ya mostraban algo de toxicidad para las células de MM (Figura 3).

Se evaluó el efecto de daratumumab, YM155 o una combinación de daratumumab y YM155 en células RPMI-8226 y en dos muestras de pacientes con MM usando concentraciones de YM155 que se demostró que no son tóxicas para las células NK.

En los ensayos, se usaron daratumumab y YM155 a una concentración de 0,3 pg/ml y 1 nM, respectivamente, para células RPMI-8226 y a una concentración de 1 pg/ml y 120 nM para muestras de pacientes con MM, respectivamente. Se usaron PBMC de donantes sanos como células efectoras a una proporción de células efectoras: objetivo de 40:1 para las células RPMI-8226 y de 30:1 para las muestras de pacientes con MM.

En las células RPMI-8226, el daratumumab solo o YM155 solo indujo la lisis de aproximadamente el 20% de las células en ausencia de BMSC. En presencia de BMSC, el daratumumab indujo la lisis de aproximadamente el 10% de las células, mientras que YM155 no tuvo ningún efecto. La combinación de daratumumab y YM155 proporcionó un efecto sinérgico que induce la lisis de aproximadamente el 50% de las células en ausencia de BMSC e induce la lisis de aproximadamente el 45% de las células en presencia de BMSC (Figura 4A). El efecto sinérgico de la combinación de daratumumab y YM155 en las BMSC fue de aproximadamente 5 veces. De manera similar, la combinación de daratumumab y YM155 proporcionó un efecto sinérgico en la muestra 1 de pacientes con MM usando 120 nM YM155 (Figura 4b ), un efecto sinérgico moderado en la muestra 2 de pacientes con MM usando una cantidad menor de YM155 (64 nM) (Figura 4C), y en una muestra combinada de células de MM derivadas de 4 pacientes (Figura 4D). Por lo tanto, YM155 anuló los efectos protectores de las BMSC sobre la ADCC mediada por daratumumab en células y líneas celulares de MM.

Por tanto, la regulación por incremento de la survivina puede ser un mecanismo importante de supresión de la destrucción de células de MM mediada por ADCC, que puede prevenirse mediante la modulación farmacológica de la survivina.

Ejemplo 4. Efecto antitumoral in vivo de la terapia de combinación de daratumumab y YM155

Se probó la relevancia in vivo de la combinación de daratumumab con YM155 en el modelo de xenoinjerto preclínico en ratones RAG2'/'gc/', en los que se cultivaron tumores de MM en un nicho similar a BM humanizado creado por implantación subcutánea de andamiajes cerámicos recubiertos con BMSC humanas. Se implantaron por vía subcutánea andamiajes híbridos recubiertos con MSC humanas y se cargaron con la línea celular de Mm transducida con luciferasa UM9 en la espalda de ratones RAG2'/'^yc/' (4 andamiajes por ratón). Diez días después de la implantación, los tumores en crecimiento se visualizaron y cuantificaron mediante BLI. Luego, se trataron diferentes grupos de ratones (n=4) con vehículo de control (control) o con daratumumab, YM155 o daratumumab más YM155. YM155 o su vehículo, PBS se administró con bombas de infusión subcutánea a una velocidad de 1

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-CD38 para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo de IgG1 y en donde el tratamiento también comprende administrar un inhibidor de survivina, en donde el inhibidor de survivina es YM155.

2. Un inhibidor de survivina para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el inhibidor de survivina es YM155, y en donde el tratamiento también comprende administrar un anticuerpo anti-CD38, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, y en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG1.

3. Una combinación de un anticuerpo anti-CD-38 y un inhibidor de survivina para su uso en el tratamiento de una enfermedad maligna hematológica positiva para CD38, en donde el inhibidor de survivina es YM155, y en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) 1, una HCDR2 y una HCDR3 de las SEQ ID NO: 6, 7 y 8, respectivamente, y las secuencias de una región determinante de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) 1, una LCDR2 y una LCDR3 de las SEQ ID NO: 9, 10 y 11, respectivamente, y en donde el anticuerpo anti-CD38 es del isotipo IgG1.

4. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es mieloma múltiple (MM), leucemia linfoblástica aguda (ALL), linfoma no Hodgkin (NHL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de Burkitt (BL), linfoma folicular (FL), linfoma de células del manto (MCL), leucemia mieloide aguda (AML) o leucemia linfocítica crónica (CLL).

5. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la enfermedad maligna hematológica positiva para CD38 es una enfermedad de células plasmáticas, como en donde la enfermedad de células plasmáticas es amiloidosis de la cadena ligera (AL), mieloma múltiples (MM) o macroglobulinemia de Waldenstrom, preferiblemente en donde la enfermedad de células plasmaticas es MM.

6. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el anticuerpo anti-CD38 compite por la unión a CD38 con un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada (VH) de la SEQ ID NO: 4 y una región variable de cadena ligera (VL) de la SEQ ID NO: 5.

7. El anticuerpo anti-CD38, el inhibidor de survivina o la combinación para el uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo anti-CD38 se une a la región SKRNiQfSCKNIYR (SEQ ID NO: 2) y la región EKVQTLEAWVIHGG (SEQ ID NO: 3) de CD38 humana (SEQ ID NO: 1).

8. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a la de la SEQ ID NO: 4 y la VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a la de la SEQ ID NO: 5.

9. El anticuerpo anti-CD38, el inhibidor de survivina o la combinación para el uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el anticuerpo anti-CD38 comprende la VH de la SEQ ID NO: 4 y la VL de la SEQ ID NO: 5.

10. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el anticuerpo anti-CD38 induce la muerte celular positiva para CD38 mediante citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP), citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) o apoptosis.

11. El anticuerpo anti-CD38 de la reivindicación 1, el inhibidor de survivina de la reivindicación 2 o la combinación de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde: el anticuerpo anti-CD38 y el inhibidor de survivina se administran simultáneamente, secuencialmente o por separado, opcionalmente en donde:

a. el anticuerpo anti-CD38 es administra por vía intravenosa; o

b. el anticuerpo anti-CD38 se administra por vía subcutánea en una composición farmacéutica que comprende anticuerpo anti-CD38 y una hialuronidasa; opcionalmente en donde la hialuronidasa es rHuPH20 de la SEQ NO: 23.