ES2891305T3

ES2891305T3 - Composiciones y métodos para el tratamiento de lesiones cutáneas precancerosas

Info

Publication number: ES2891305T3
Application number: ES15840602T
Authority: ES
Inventors: Lynn Cornelius; Shadmehr Demehri; Raphael Kopan
Original assignee: University of Washington; Washington University in St Louis WUSTL
Current assignee: University of Washington; Washington University in St Louis WUSTL
Priority date: 2014-09-10
Filing date: 2015-09-10
Publication date: 2022-01-27
Anticipated expiration: 2035-09-10
Also published as: EA201790565A1; EP3191103A4; DK3191103T3; AU2020281015A1; AU2023200052A1; KR102573972B1; WO2016040638A3; BR112017004893A2; US20210128732A1; US12186394B2; EA036833B1; MX387661B; EP3939593A1; AU2015315047A1; US10905763B2; EP3191103B1; CA2963922A1; CA2963922C; PH12017500677A1; IL251089A0

Abstract

Una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP), en la que el inductor de TSLP comprende entre un 0,002% y un 0,005% de calcipotriol, para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión cutánea precancerosa, en la que el tratamiento comprende la administración tópica de la composición a la lesión.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos para el tratamiento de lesiones cutáneas precancerosas

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional número US 62/048.586, presentada el 10 de septiembre de 2014.

Campo de la invención

La presente divulgación abarca composiciones y métodos para el tratamiento de lesiones cutáneas precancerosas. Las composiciones de la invención comprenden un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP) como se define en el presente documento.

Antecedentes de la invención

Los cánceres de piel no melanoma representan el tipo de cáncer más común que afecta a un gran número de individuos en los Estados Unidos [1]. Estos cánceres pueden dar lugar a una morbilidad importante, incluyendo ulceración, infección y desfiguración local si no se tratan. Es importante destacar que, en el caso del carcinoma de células escamosas, las lesiones precursoras que pueden identificarse clínicamente como queratosis actínicas pueden tratarse de forma precoz para evitar que se conviertan en neoplasias cutáneas completas que requieran costosas intervenciones quirúrgicas. Además de los tratamientos destructivos utilizados para las queratosis actínicas clínicamente visibles (por ejemplo, la crioterapia), se han desarrollado varios tratamientos tópicos que también pueden tratar las lesiones subclínicas. Estos tratamientos dirigidos al campo incluyen la terapia fotodinámica, el 5-fluorouracilo y el imiquimod [2]. WO 2010/080345 describe formulaciones de imiquimod de menor concentración de dosis y regímenes de dosificación cortos para tratar la queratosis actínica. EP 1491 188 A1 describe el uso tópico del ácido valproico, que puede utilizarse solo o en combinación con formulaciones tópicas de retinoides, ligandos de receptores nucleares o agentes quimioterapéuticos (por ejemplo, 5-Fluorouracilo), para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos de la piel. WO 2012/176212 A1 describe formulaciones de nano transportadores a base de lípidos para la focalización en la piel con el fin de lograr una entrega tópica mejorada. La eficacia de los tratamientos actuales, la duración del tratamiento y la gravedad de los efectos secundarios asociados a estos tratamientos han limitado el cumplimiento de los pacientes y su eficacia terapéutica. Por lo tanto, es necesario desarrollar nuevos tratamientos para la queratosis actínica que puedan ofrecer un resultado óptimo con menos aplicaciones y efectos secundarios. Teniendo en cuenta que el coste anual de la atención de la queratosis actínica sólo en Estados Unidos es de más de 900 millones de dólares [3], un tratamiento eficaz que pueda eliminar la queratosis actínica y prevenir el desarrollo del cáncer de piel también tendrá un gran impacto en nuestro sistema sanitario.

Sumario de la invención

Un aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para tratar una lesión cutánea precancerosa. El método comprende la administración tópica a la lesión de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP).

En otro aspecto de la presente divulgación se describe un método para prevenir la transición de una lesión cutánea precancerosa a un cáncer de piel. El método comprende: (a) identificar a un sujeto con una o más lesiones cutáneas precancerosas; y (b) administrar por vía tópica a la(s) lesión(es) cutánea(s) precancerosa(s) una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que la(s) lesión(es) cutánea(s) precancerosa(s) se reduce(n) de tamaño de tal manera que se evita la progresión a cáncer de piel.

En otro aspecto, la divulgación describe un método para prevenir la aparición de una lesión cutánea precancerosa. El método comprende administrar tópicamente a un sujeto con riesgo de desarrollar una lesión cutánea precancerosa una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP.

Breve descripción de las figuras

El archivo de solicitud contiene al menos un dibujo ejecutado en color. La Oficina proporcionará copias de esta publicación de solicitud de patente con dibujo(s) en color, previa solicitud y pago de la tasa correspondiente.

La FIG. 1A representa un esquema de la aleatorización de los pacientes. Se inscriben los pacientes elegibles y se evalúan y fotografían todos sus lugares anatómicos calificados para el tratamiento. La aleatorización de la medicación se basará en el lugar anatómico primario calificado del participante que sea elegido por el médico tratante. Una vez determinada la asignación de la medicación, los participantes se aplicarán la misma medicación en todos los lugares anatómicos calificados. *: La medicación del estudio se dispensará según la lista de aleatorización para cada lugar anatómico primario, pero los participantes se aplicarán la misma medicación en todos sus lugares anatómicos cualificados. RUE: extremidad superior derecha; LUE: extremidad superior izquierda.

La FIG. 1B muestra un diagrama con el calendario del ensayo clínico. Tenga en cuenta que las visitas de las semanas 2 y 4 son opcionales. *: Las visitas de las semanas 2 y 4 son recomendables, pero no obligatorias.

La FIG. 2 representa los datos demográficos de los pacientes del estudio. Se muestra el número de pacientes elegibles (175), el número que entró y completó el estudio (132) y su distribución en función de su localización anatómica primaria.

La FIG. 3 representa el porcentaje de reducción de las lesiones de queratosis actínica entre los tratamientos con calcipotriol+5-fluorouracilo y 5-fluorouracilo. El tratamiento de cuatro días, dos veces al día, con la combinación de 5-FU+calcipotriol da lugar a un aclaramiento significativamente mayor de las queratosis actínicas (QA) en comparación con el tratamiento estándar (5-FU+vaselina) a las 8 semanas de seguimiento (p < 0,0001 para todas las localizaciones anatómicas, prueba t de Student; RUE: extremidad superior derecha; LUE: extremidad superior izquierda).

La FIG. 4 muestra imágenes de los eventos adversos asociados a los regímenes de tratamiento. Los participantes tratados con 5-FU+calcipotriol dos veces al día durante 4 días desarrollaron una marcada inflamación centrada en los lugares de las queratosis actínicas, tal y como se observó justo después del último tratamiento (día 5) y 10 días después de interrumpir el tratamiento (semana 2).

Las FIG. 5A, FIG. 5B, FIG. 5C y FIG. 5D representan gráficos que muestran el porcentaje de participantes con puntuaciones de eritema de 0, 1 y 2 para cada zona anatómica tratada. (FIG. 5A) Cuero cabelludo, (FIG. 5B) Cara, (FIG, 5C) RUE y (FIG. 5D) LUE. Hay que tener en cuenta que, debido a la corta duración del tratamiento, ningún participante experimentó puntuaciones de eritema de 3 o 4, que son las que habitualmente se observan en los pacientes tratados con 5-FU dos veces al día durante 2-3 semanas (régimen estándar de atención).

Las FIG. 6A y FIG. 6B representan los dos regímenes de tratamiento utilizados para las imágenes presentadas en la FIG. 6C. La FIG. 6C representa secciones teñidas con Hematoxilina y Eosina (H&E) de las QA antes y después del tratamiento. Las imágenes muestran la acumulación de linfocitos en la dermis superior principalmente en la QA después del tratamiento (Tx) en el participante tratado con 5-FU+Calcipotriol (flecha). La tinción de inmunofluorescencia de las QA antes y después del tratamiento también muestra una fuerte expresión de TSLP en las QA después del tratamiento en los participantes tratados con 5-FU+Calcipotriol, incluyendo la acumulación de células T CD3+ cerca de la unión dérmicoepidérmica. La mayoría de estas células T son células T helper CD4+ (recuadro). K14 marca los queratinocitos de la piel.

Descripción detallada de la invención

Los solicitantes han descubierto sorprendentemente que una composición tópica que comprende un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP) reduce significativamente el número y el tamaño de las lesiones cutáneas precancerosas. La reducción del número y el tamaño de las lesiones se produce con un curso de tratamiento más corto, lo que reduce el riesgo de efectos adversos. En consecuencia, la presente divulgación proporciona composiciones y métodos para prevenir y tratar diversas lesiones de la piel. A continuación, se describen otros aspectos de la invención.

I. Composiciones

En un aspecto, una composición de la invención comprende un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP), en el que el inductor de TSLP comprende entre aproximadamente 0,002% y aproximadamente 0,005% de calcipotriol, para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión cutánea precancerosa, en el que el tratamiento comprende la administración tópica de la composición a la lesión. En una realización específica, una composición de la invención comprende 5-fluorouracilo (5-FU) y un análogo de la vitamina D. Un análogo de la vitamina D puede modificarse para mejorar la biodisponibilidad, la solubilidad, la estabilidad, las propiedades de manipulación o una combinación de ellas, en comparación con una versión no modificada. Así, en otro aspecto, una composición de la invención comprende vitamina D modificada. En otro aspecto, una composición de la invención comprende un profármaco de un análogo de la vitamina D.

Una composición de la invención puede comprender opcionalmente uno o más fármacos adicionales o agente terapéuticamente activo además del agente citotóxico y el inductor de TSLP. Una composición de la invención puede comprender además un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Además, una composición de la invención puede contener agentes conservantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, odorantes, sales (las sustancias de la presente invención pueden proporcionarse en forma de una sal farmacéuticamente aceptable), tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes.

Otros aspectos de la invención se describen con más detalle a continuación.

(a) agente citotóxico

Tal como se utiliza en el presente documento, un "agente citotóxico" es un agente que afecta a las células que se dividen rápidamente en general. Un agente citotóxico es cualquier compuesto natural, modificado o sintético que es tóxico para las células que se dividen rápidamente. Dichos agentes son útiles en el tratamiento de neoplasias, y en el tratamiento de otros síntomas o enfermedades caracterizadas por la proliferación celular o una población celular hiperactiva. El agente citotóxico puede ser un agente alquilante, un antimetabolito, un antibiótico antitumoral, un agente anticitoesquelético, un inhibidor de la topoisomerasa, un agente antihormonal, un agente terapéutico dirigido, un inhibidor de la angiogénesis, un polipéptido inhibidor del crecimiento, un agente terapéutico fotodinámico, un agente antineoplásico o una combinación de ellos. En una realización específica, el agente citotóxico puede ser seleccionado del grupo que consiste en un antimetabolito y un agente terapéutico fotodinámico.

Ejemplos no limitantes de agentes alquilantes adecuados pueden incluir la altretamina, la benzodopa, el busulfán, el carboplatino, la carboquina, la carmustina (BCNU), el clorambucil, la cloronafazina, la colofosfamida, la clorozotocina cisplatino, ciclosfosfamida, dacarbazina (DTIC), estramustina, fotemustina, ifosfamida, improsulfán, lipoplatino, lomustina (CCNU), mafosfamida, mannosulfán, mecloretamina, clorhidrato de mecloretamina, melfalán, meturedopa, mustina (mecloretamina), mitobronitol, nimustina, novembichina, oxaliplatino, fenesterina, piposulfán, prednimustina, ranimustina, satraplatino, semustina, temozolomida, tiotepa, treosulfán, triaziquona, trietilenemelamina, trietilenfosforamida (TEPA), trietilentiofosforamida (tiotepa), trimetilolomelamina, trofosfamida, mostaza uracilo y uredopa.

Ejemplos no limitantes de antibióticos antitumorales adecuados pueden incluir aclacinomisina, aclarubicina, actinomicinas, adriamicina, aurostatina (por ejemplo, monometil auristatina E), autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, calicheamicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorubicina, epirubicina, epoxomicina, esorubicina, idarubicina, marcellomicina, mitomicinas, mitramicina, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, plicamicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, esparsomicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, valrubicina, ubenimex, zinostatina y zorubicina.

Ejemplos no limitantes de agentes anticitoesqueléticos adecuados pueden incluir el cabazitaxel, las colchicinas, la demecolcina, el docetaxel, las epotilonas, la ixabepilona, la macromicina, el mepesucinato de omacetaxina, el ortataxel, el paclitaxel (por ejemplo, el DHA-paclitaxel), el taxano, el tesetaxel, la vinblastina, la vincristina, la vindesina y la vinorelbina.

Los inhibidores de la topoisomerasa adecuados pueden incluir, entre otros, amsacrina, etopósido (VP-16), irinotecán, mitoxantrona, RFS 2000, tenipósido y topotecán.

Entre los ejemplos no limitantes de agentes antihormonales adecuados se encuentran la aminoglutetimida, los antiestrógenos, los inhibidores de la aromatasa 4(5)-imidazoles, la bicalutamida, la finasterida, la flutamida, el fluvestrant, la goserelina, el 4-hidroxitamoxifeno, el keoxifeno, la leuprolida, el LY117018, el mitotano, la nilutamida, la onapristona, el raloxifeno, el tamoxifeno, el toremifeno y el trilostano.

Los ejemplos de agentes terapéuticos dirigidos pueden incluir, sin límite, anticuerpos monoclonales como alemtuzumab, cartumaxomab, edrecolomab, epratuzumab, gemtuzumab, gemtuzumab ozogamicin, glembatumumab vedotin, ibritumomab tiuxetan, reditux, rituximab, tositumomab y trastuzumab; inhibidores de la proteína quinasa, como bevacizumab, cetuximab, crizonib, dasatinib, erlotinib, gefitinib, imatinib, lapatinib, mubritinib, nilotinib, panitumumab, pazopanib, sorafenib, sunitinib, toceranib y vandetanib.

Ejemplos no limitantes de inhibidores de la angiogénesis pueden incluir la angiostatina, el bevacizumab, la denileucina diftitox, la endostatina, el everolimus, la genisteína, el interferón alfa, la interleucina-2, la interleucina-12, el pazopanib, el pegaptanib, el ranibizumab, la rapamicina (sirolimus), el temsirolimus y la talidomida.

Ejemplos no limitantes de polipéptidos inhibidores del crecimiento pueden incluir bortazomib, eritropoyetina, interleucinas (por ejemplo, Il-1, IL-2, IL-3, IL-6), factor inhibidor de la leucemia, interferones, romidepsina, trombopoyetina, TNF-a, ligando CD30, ligando 4-1BB y ligando Apo-1.

Otros agentes antineoplásicos pueden incluir la anagrelida, el trióxido de arsénico, la asparaginasa, el bexaroteno, la bropirimina, el celecoxib, el Fab químicamente ligado, el efaproxiral, el etoglucid, el ferruginol, la lonidamida, el masoprocol, la miltefosina, la mitoguazona, el talapanel, la trabectedina y el vorinostat.

En ciertas realizaciones, el agente citotóxico es un agente terapéutico fotodinámico. Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos fotodinámicos pueden ser el ácido aminolevulínico, el aminolevulinato de metilo, los retinoides (alitretinón, tamibaroteno, tretinoína) y la temoporfina. En una realización específica, el agente terapéutico fotodinámico es el ácido aminolevulínico.

[0023] En una realización específica, el agente citotóxico es un antimetabolito. Los antimetabolitos adecuados pueden incluir, entre otros, aminopterina, ancitabina, azacitidina, 8-azaguanina, 6-azauridina, capecitabina, carmofur (1-hexilcarbomoil-5-fluorouracilo), cladribina, clofarabina, citarabina (arabinósido de citosina (Ara-C)), decitabina, denopterina, dideoxiuridina, doxifluridina enocitabina, floxuridina, fludarabina, 5-fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea (hidroxicarbamida), leucovorina (ácido folínico), 6-mercaptopurina, metotrexato, nafoxidina, nelarabina, oblimersen, pemetrexed, pteropterina, raltitrexed, tegofur, tiazofurina, tiamiprina, tioguanina y trimetrexato. En una realización específica, el antimetabolito es el 5-fluorouracilo (5-FU). El 5-FU es un fármaco análogo a la pirimidina que se utiliza en el tratamiento del cáncer. Es un inhibidor suicida y actúa mediante la inhibición irreversible de la timidilato sintasa.

Generalmente, la forma de dosificación del agente citotóxico es una crema o una solución tópica. Sin embargo, se contemplan otras formas de dosificación adecuadas del citotóxico para la administración tópica. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica pueden formularse como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, aerosoles, aceites o bálsamos. La administración tópica también puede implicar el uso de la administración transdérmica, como parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis. En una realización específica, la composición farmacéutica se aplica como una pomada o crema tópica.

Las dosis del agente citotóxico pueden variar dependiendo de la enfermedad o trastorno a tratar y/o de la edad y condición del sujeto a tratar. En una realización en la que la composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP se administra a un sujeto, la concentración del agente citotóxico en la composición puede ser de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 25%, o de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 10% o, más preferiblemente, de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 5%. Por ejemplo, la concentración del agente citotóxico en la composición puede ser de alrededor del 0,1%, alrededor del 0,2%, alrededor del 0,3%, alrededor del 0,4%, alrededor del 0,5%, alrededor del 0,6%, alrededor del 0,7%, alrededor del 0,8%, alrededor del 0,9%, alrededor del 1%, alrededor del 1.5%, alrededor del 2%, alrededor del 2,5%, alrededor del 3%, alrededor del 3,5%, alrededor del 4%, alrededor del l 4,5%, alrededor del 5%, alrededor del 5,5%, alrededor del 6%, alrededor del 6,5%, alrededor del 7%, alrededor del 7,5%, alrededor del 8%, alrededor del 8,5%, alrededor del 9%, alrededor del 9,5% o alrededor del 10%. Alternativamente, la concentración del agente citotóxico en la composición puede ser de aproximadamente el 10%, el 11%, el 12%, el 13%, el 14%, el 15%, el 16%, el 17%, el 18%, el 19%, el 20%, el 21%, el 22%, el 23%, el 24% o el 25%. En ciertas realizaciones, la concentración de agente citotóxico en la composición puede ser de aproximadamente 0,5%, aproximadamente 1%, aproximadamente 2%, aproximadamente 2,5% o aproximadamente 5%. En otra realización, la concentración de agente citotóxico en la composición es de aproximadamente 2% a aproximadamente 5%. En una realización específica, la concentración de agente citotóxico en la composición es de aproximadamente 2,5%. En otra realización, la concentración del agente citotóxico en la composición es de aproximadamente el 5%.

En ciertas realizaciones, el agente citotóxico es el ácido aminolevulínico. Las dosis de ácido aminolevulínico pueden variar en función de la enfermedad o trastorno a tratar, la edad y el estado del sujeto a tratar. En una realización en la que la composición que comprende ácido aminolevulínico e inductor de TSLP se administra a un sujeto, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición puede ser de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 25% o, más preferiblemente, de aproximadamente el 15% a aproximadamente el 20%. Por ejemplo, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición puede ser de aproximadamente el 10%, el 11%, el 12%, el 13%, el 14%, el 15%, el 16%, el 17%, el 18%, el 19%, el 20%, el 21%, el 22%, el 23%, el 24% o el 25%. En ciertas realizaciones, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición puede ser de aproximadamente 18% a aproximadamente 22%. En una realización, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición es de aproximadamente 8% a aproximadamente 12%. En una realización específica, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición es de aproximadamente el 10%. En otra realización, la concentración de ácido aminolevulínico en la composición es de aproximadamente el 20%.

En una realización específica, el agente citotóxico es 5-FU. Las dosis de 5-FU pueden variar en función de la enfermedad o trastorno a tratar, la edad y el estado del sujeto a tratar. En una realización en la que la composición que comprende 5-FU e inductor de TSLP se administra a un sujeto, la concentración de 5-FU en la composición puede ser de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 10% o, más preferentemente, de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 5%. Por ejemplo, la concentración de 5-FU en la composición puede ser de alrededor del 0,1%, alrededor del 0,2%, alrededor del 0,3%, alrededor del 0,4%, alrededor del 0,5%, alrededor del 0,6%, alrededor del 0,7%, alrededor del 0,8%, alrededor del 0,9%, alrededor del 1%, alrededor del 2%, alrededor del 3%, alrededor del 4%, alrededor del 5%, alrededor del 6%, alrededor del 7%, alrededor del 8%, alrededor del 9%, alrededor del 10%. En ciertas realizaciones, la concentración de 5-FU en la composición puede ser de aproximadamente 0,5%, aproximadamente 1%, aproximadamente 2%, aproximadamente 2,5% o aproximadamente 5%. En una realización, la concentración de 5-FU en la composición es de aproximadamente 2% a aproximadamente 5%. En una realización específica, la concentración de 5-FU en la composición es de aproximadamente 2,5%. En otra realización, la concentración de 5-FU en la composición es de aproximadamente 5%.

(b) inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP)

Tal como se utiliza aquí, un "inductor de TSLP" es cualquier compuesto capaz de inducir la linfopoyetina estromal tímica (TSLP). La TSLp es una citoquina derivada del epitelio que pertenece a la familia de la interleucina-7 (IL-7).

Los inventores han descubierto que la TSLP actúa como una potente citoquina antitumoral en la piel al reclutar células CD4+ Th2 para montar una vigilancia inmunológica en la piel. Los métodos para determinar si un compuesto induce la TSLP son conocidos en la técnica. Por ejemplo, la expresión de ácido nucleico de TSLP, la expresión de proteína de TSLP o la actividad de TSLP pueden medirse como se describe con más detalle a continuación en las Secciones I(b)i,M,Mi. Entre los ejemplos no limitantes de inductores de TSLP se encuentran los análogos de la vitamina D, el ácido polinosínico-policidílico (poli(I:C) y otros ligandos del TLR3), el FSL-1 (y otros ligandos del TLR2-TLR6), la flagelina (y otros ligandos del TLR5), los agonistas de los adrenoceptores beta2, los agentes que elevan el AMPc (por ejemplo, Forskolina), ácidos grasos (ácido heptanoico, ácido octanoico, ácido nonanoico y ácido decanoico), xileno, 1,2,4-trimetilbenceno, 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA, acetato de tetradecanoilforbol, acetato de tetradecanoilforbol y forbol 12-miristato 13-acetato (PMA)), ftalato de dibutilo (DBP) y ftalato de diisononilo (DINP).

En una realización específica, un inductor de TSLP puede ser la vitamina D o un análogo de la misma. La vitamina D hace referencia a un grupo de secosteroides liposolubles. Los secoesteroides tienen una estructura muy similar a la de los esteroides, salvo que dos de los átomos de carbono del anillo B de los cuatro anillos típicos de los esteroides no están unidos, mientras que en los esteroides sí lo están. La vitamina D activa, o calcitriol, es un compuesto de fórmula (I)

La vitamina D3, también conocida como colecalciferol, es una forma de vitamina D y se genera en la piel de los animales cuando la energía de la luz es absorbida por una molécula precursora 7-dehidrocolesterol. La vitamina D3, o colecalciferol, es un compuesto de fórmula (II)

Los derivados estructuralmente modificados de la vitamina D pueden denominarse análogos de la vitamina D. Los análogos de la vitamina D pueden ser modificados para mejorar la biodisponibilidad, la solubilidad, tener una mejor estabilidad y/o propiedades de manipulación en comparación con una versión no modificada. También se contemplan los profármacos de los análogos de la vitamina D. Cualquier análogo de la vitamina D capaz de unirse al receptor de la vitamina D e inducir la linfopoyetina estromal tímica (TSLP) puede ser adecuado para una composición de la invención. Los análogos de la vitamina D son muchos, y serán reconocidos por la persona experta. Entre los ejemplos no limitantes de análogos de la vitamina D adecuados se incluyen I,25-(OH)2D3 (calcitrol), 26,27-Ffi-I,25-(OH)2D3 (ST-630), Ia-(OH)D², Ia-(OH)D3, I,24-(OH)2D3 (TV-02), 22-oxacalcitriol (OCT), calcipotriol (MC 903), I,25-(OH)2-16-ene-23-yne-D3(Ro 23-7553), EB 1089, ED-71, PRI-2191, PRI-2205, colecalciferol, ergocalciferol, calciferol, Calcijex, calcitriol, doxercalciferol, Hectorol, paricalcitol, Rocaltrol, Daivonex y Zemplar. El término "análogo", en el contexto de la presente invención, pretende incluir análogos sintéticos, así como metabolitos de la vitamina D. En una realización específica, el análogo de la vitamina D es el calcipotriol. El calcipotriol, o calcipotrieno, o calcitreno, o Dovonex®, es un compuesto de fórmula (III)

Generalmente, la forma de dosificación de un inductor de TSLP es una crema, ungüento o solución tópica. Sin embargo, se contemplan otras formas de dosificación adecuadas de un inductor de TSLP para la administración tópica. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica pueden formularse como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, aerosoles, aceites o bálsamos. La administración tópica también puede implicar el uso de la administración transdérmica, como parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se aplica como una pomada o crema tópica.

Las dosis del inductor de TSLP pueden variar dependiendo de la enfermedad o trastorno a tratar y/o la edad y condición del sujeto a tratar. En una realización en la que la composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP se administra a un sujeto, la concentración del inductor de TSLP en la composición puede ser de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 20%, de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 10%, de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 1%, de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 0,1% o, más preferentemente, de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 0,01%. Por ejemplo, la concentración del inductor de TSLP en la composición puede ser de aproximadamente 0,001%, aproximadamente 0,002%, aproximadamente 0,003%, aproximadamente 0,004%, aproximadamente 0,005%, aproximadamente 0,006%, aproximadamente 0,007%, aproximadamente 0,008%, aproximadamente 0,009%, aproximadamente 0,01%, aproximadamente 0.02%, aproximadamente 0,03%, aproximadamente 0,04%, aproximadamente 0,05%, aproximadamente 0,06%, aproximadamente 0,07%, aproximadamente 0,08%, aproximadamente 0,09%, aproximadamente 0,1%, aproximadamente 0,2%, aproximadamente 0,3%, aproximadamente 0,4%, aproximadamente 0,5%, aproximadamente 0,6%, aproximadamente 0,7%, aproximadamente 0,8%, aproximadamente 0,9% o aproximadamente 1,0%. En una realización ejemplar, la concentración del inductor de TSLP en la composición es de aproximadamente 0,002% a aproximadamente 0,005%. En otra realización ejemplar, la concentración del inductor de TSLP en la composición es de aproximadamente 0,0025%. En otra realización ejemplar, la concentración del inductor de TSLP en la composición es de aproximadamente 0,005%.

En una realización específica, el inductor de TSLP es un análogo de la vitamina D. Las dosis del análogo de la vitamina D pueden variar en función de la enfermedad o el trastorno a tratar y/o de la edad y el estado del sujeto a tratar. En una realización en la que la composición que comprende 5-FU y un análogo de la vitamina D se administra a un sujeto, la concentración del análogo de la vitamina D en la composición puede ser de aproximadamente 0,001% a aproximadamente 0,1% o, más preferentemente, de aproximadamente 0,001% a aproximadamente 0,01%. Por ejemplo, la concentración del análogo de la vitamina D en la composición puede ser de aproximadamente 0,001%, aproximadamente 0,002%, aproximadamente 0,003%, aproximadamente 0,004%, aproximadamente 0,005%, aproximadamente 0,006%, aproximadamente 0.007%, aproximadamente 0,008%, aproximadamente 0,009%, aproximadamente 0,01%, aproximadamente 0,02%, aproximadamente 0,03%, aproximadamente 0,04%, aproximadamente 0,05%, aproximadamente 0,06%, aproximadamente 0,07%, aproximadamente 0,08%, aproximadamente 0,09%, aproximadamente 0,1%. En una realización ejemplar, la concentración del análogo de la vitamina D en la composición es de aproximadamente 0,002% a aproximadamente 0. 005%. En otra realización ejemplar, la concentración del análogo de la vitamina D en la composición es de aproximadamente 0,0025%. En otra realización ejemplar, la concentración del análogo de la vitamina D en la composición es de aproximadamente 0,005%.

1. Expresión de ácido nucleico de TSLP

En una realización, la expresión del ácido nucleico de TSLP puede medirse para identificar un compuesto que induce TSLP. Por ejemplo, cuando la expresión del ácido nucleico de TSLP aumenta en presencia de un compuesto en relación con un control no tratado, el compuesto induce TSLP. En una realización específica, el ARNm de TSLP puede medirse para identificar un compuesto que induce TSLP.

Los métodos para evaluar una cantidad de expresión de ácido nucleico en las células son bien conocidos en la técnica, y todos los métodos adecuados para evaluar una cantidad de expresión de ácido nucleico conocidos por un experto en la materia se contemplan dentro del alcance de la invención. El término "cantidad de expresión de ácidos nucleicos" o "nivel de expresión de ácidos nucleicos", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un nivel medible de expresión de los ácidos nucleicos, como, sin limitación, el nivel de transcripción de ARN mensajero (ARNm) expresado o una variante específica u otra porción del ARNm, las actividades enzimáticas u otras actividades de los ácidos nucleicos, y el nivel de un metabolito específico. El término "ácido nucleico" incluye el ADN y el ARN y puede ser de doble cadena o de cadena simple. Ejemplos no limitantes de métodos adecuados para evaluar una cantidad de expresión de ácido nucleico pueden incluir arrays, como microarrays, PCR, como RT-PCR (incluyendo RT-PCR cuantitativa), ensayos de protección de nucleasas y análisis de Northern blot. En una realización específica, la determinación de la cantidad de expresión de un ácido nucleico diana comprende, en parte, la medición del nivel de expresión del ARNm del ácido nucleico diana.

En una realización, la cantidad de expresión de ácido nucleico puede determinarse mediante el uso de una matriz, como un microarray. Los métodos de utilización de una microarray de ácidos nucleicos son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, en el array se puede utilizar una sonda de ácido nucleico que sea complementaria o hibridable a un producto de expresión de un gen diana. El término "hibridar" o "hibridable" se refiere a la interacción de unión no covalente específica de la secuencia con un ácido nucleico complementario. En una realización preferente, la hibridación se realiza en condiciones de alta rigurosidad. Los expertos en la materia conocen las condiciones de rigor apropiadas que favorecen la hibridación, o pueden encontrarse en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1 6.3.6. El término "sonda", tal como se utiliza aquí, se refiere a una secuencia de ácido nucleico que se hibridará con una secuencia diana de ácido nucleico. En un ejemplo, la sonda se hibrida con un producto de ARN del ácido nucleico o con una secuencia de ácido nucleico complementaria al mismo. La longitud de la sonda depende de las condiciones de hibridación y de las secuencias de la sonda y del ácido nucleico objetivo. En una realización, la sonda tiene al menos 8, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 400, 500 o más nucleótidos de longitud.

En otra realización, la cantidad de expresión de ácido nucleico puede determinarse mediante PCR. Los métodos de PCR son bien conocidos en la técnica y pueden incluir la PCR cuantitativa, la PCR semicuantitativa, la PCR multiplex o cualquier combinación de ellas. Específicamente, la cantidad de expresión del ácido nucleico puede determinarse utilizando la RT-PCR cuantitativa. Los métodos para realizar la RT-PCR cuantitativa son comunes en la técnica. En dicha realización, los cebadores utilizados para la RT-PCR cuantitativa pueden comprender un cebador directo y otro inverso para un gen diana. El término "cebador", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a una secuencia de ácido nucleico, ya sea natural, como en un digerido de restricción purificado, o producida sintéticamente, que es capaz de actuar como punto de síntesis cuando se coloca en condiciones en las que se induce la síntesis de un producto de extensión del cebador, que es complementario a una hebra de ácido nucleico (por ejemplo, en presencia de nucleótidos y un agente inductor, como la ADN polimerasa, y a una temperatura y pH adecuados). El cebador debe ser lo suficientemente largo como para cebar la síntesis del producto de extensión deseado en presencia del agente inductor. La longitud exacta del cebador dependerá de factores como la temperatura, las secuencias del cebador y los métodos utilizados. Un cebador suele contener entre 15 y 25 nucleótidos o más, aunque puede contener menos o más. Los factores que intervienen en la determinación de la longitud adecuada del cebador son fácilmente conocidos por un experto en la materia.

La cantidad de expresión de ácido nucleico puede medirse midiendo un transcrito de ARNm completo para una secuencia de ácido nucleico, o midiendo una porción del transcrito de ARNm para una secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, si se utiliza una matriz de ácido nucleico para medir la cantidad de expresión de ARNm, la matriz puede comprender una sonda para una porción del ARNm de la secuencia de ácido nucleico de interés, o la matriz puede comprender una sonda para el ARNm completo de la secuencia de ácido nucleico de interés. Del mismo modo, en una reacción de PCR, los cebadores pueden estar diseñados para amplificar toda la secuencia de ADNc de la secuencia de ácido nucleico de interés, o una porción de la secuencia de ADNc. Un experto en la materia reconocerá que hay más de un conjunto de cebadores que pueden utilizarse para amplificar el ADNc completo o una porción del ADNc para una secuencia de ácido nucleico de interés. Los métodos de diseño de cebadores son conocidos en la técnica. Los métodos de extracción de ARN de una muestra biológica son conocidos en la técnica.

El nivel de expresión puede o no normalizarse con respecto al nivel de un ácido nucleico de control. Dicho ácido nucleico de control no debe hibridar específicamente con una secuencia de nucleótidos de ARNm de la invención. Esto permite realizar comparaciones entre ensayos realizados en diferentes ocasiones.

ii. Expresión de la proteína TSLP

En otra realización, la expresión de la proteína TSLP puede ser medida para identificar un compuesto que induce TSLP. Por ejemplo, cuando la expresión de la proteína TSLP aumenta en presencia de un compuesto en relación con un control no tratado, el compuesto induce la TSLP. En una realización específica, la expresión de la proteína TSLP puede medirse mediante inmunoblot. En otra realización específica, la expresión de la proteína TSLP puede medirse mediante tinción de inmunofluorescencia.

Los métodos para evaluar una cantidad de expresión de proteínas son bien conocidos en la técnica, y todos los métodos adecuados para evaluar una cantidad de expresión de proteínas conocidos por un experto en la materia se contemplan dentro del alcance de la invención. Ejemplos no limitantes de métodos adecuados para evaluar una cantidad de expresión proteica pueden incluir métodos basados en agentes de unión a epítopos y métodos basados en espectrometría de masas.

En algunas realizaciones, el método para evaluar una cantidad de expresión de proteínas es la espectrometría de masas. Al explotar las propiedades intrínsecas de la masa y la carga, la espectrometría de masas (EM) puede resolver e identificar con seguridad una amplia variedad de compuestos complejos, incluidas las proteínas. La EM cuantitativa tradicional ha utilizado la ionización por electrospray (ESI) seguida de la EM en tándem (EM/EM) (Chen et al., 2001; Zhong et al., 2001; Wu et al., 2000), mientras que se están desarrollando métodos cuantitativos más recientes que utilizan la desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) seguida de la EM de tiempo de vuelo (TOF) (Bucknall et al., 2002; Mirgorodskaya et al., 2000; Gobom et al., 2000). De acuerdo con la presente invención, se puede utilizar la espectrometría de masas para buscar el nivel de proteína codificada a partir de un ácido nucleico objetivo de la invención.

En algunas realizaciones, el método para evaluar una cantidad de expresión de proteínas es un método basado en un agente de unión a epítopos. Tal como se utiliza aquí, el término "agente de unión a epítopos" se refiere a un anticuerpo, un aptámero, un ácido nucleico, un ácido oligonucleico, un aminoácido, un péptido, un polipéptido, una proteína, un lípido, un metabolito, una pequeña molécula o un fragmento de los mismos que reconoce y es capaz de unirse a una proteína del gen diana. Los ácidos nucleicos pueden incluir el ARN, el ADN y los derivados naturales o creados sintéticamente.

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "anticuerpo" generalmente significa un polipéptido o proteína que reconoce y puede unirse a un epítopo de un antígeno. Un anticuerpo, tal y como se utiliza en el presente documento, puede ser un anticuerpo completo tal y como se entiende en la técnica, es decir, formado por dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, o puede ser cualquier molécula similar a un anticuerpo que tenga una región de unión al antígeno, e incluye, pero no se limita a, fragmentos de anticuerpos como Fab', Fab, F(ab')2, anticuerpos de dominio único, Fv y Fv de cadena única. El término anticuerpo también se refiere a un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico y un anticuerpo humanizado. Las técnicas para preparar y utilizar diversas construcciones y fragmentos basados en anticuerpos son bien conocidas en la técnica. Los medios para preparar y caracterizar los anticuerpos también son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988).

Tal como se utiliza aquí, el término "aptámero" se refiere a un polinucleótido, generalmente un ARN o ADN que tiene una actividad biológica útil en términos de actividad bioquímica, reconocimiento molecular o atributos de unión. Por lo general, un aptámero tiene una actividad molecular como la adhesión a una molécula diana en un epítopo (región) específico. Es generalmente aceptado que un aptámero, que es específico en su unión a un polipéptido, puede ser sintetizado y/o identificado por métodos de evolución in vitro. Los medios para preparar y caracterizar aptámeros, incluso mediante métodos de evolución in vitro, son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, US 7,939,313).

En general, un método basado en un agente de unión a epítopos para evaluar una cantidad de expresión de proteínas comprende el contacto de una muestra que comprende un polipéptido con un agente de unión a epítopos específico para el polipéptido en condiciones eficaces para permitir la formación de un complejo entre el agente de unión a epítopos y el polipéptido. Los métodos basados en agentes de unión de epítopos pueden ocurrir en solución, o el agente de unión de epítopos o la muestra pueden ser inmovilizados en una superficie sólida. Ejemplos no limitativos de superficies adecuadas son las placas de microtitulación, los tubos de ensayo, las perlas, las resinas y otros polímeros.

Un agente de unión de epítopos puede unirse al sustrato en una amplia variedad de formas, como apreciarán los expertos en la materia. El agente de unión del epítopo puede sintetizarse primero, con la posterior unión al sustrato, o puede sintetizarse directamente en el sustrato. El sustrato y el agente de unión al epítopo pueden derivarse con grupos funcionales químicos para la posterior unión de ambos. Por ejemplo, el sustrato puede derivarse con un grupo funcional químico que incluya, entre otros, grupos amino, grupos carboxilo, grupos oxo o grupos tiol. A partir de estos grupos funcionales, el agente de unión al epítopo puede unirse directamente utilizando los grupos funcionales o indirectamente utilizando enlazadores.

El agente de unión al epítopo también puede estar unido al sustrato de forma no covalente. Por ejemplo, puede prepararse un agente de unión de epítopos biotinilado, que puede unirse a las superficies recubiertas covalentemente con estreptavidina, dando lugar a la unión. Alternativamente, se puede sintetizar un agente de unión de epítopos en la superficie utilizando técnicas como la fotopolimerización y la fotolitografía. Otros métodos de fijación de agentes de unión de epítopos a superficies sólidas y métodos de síntesis de biomoléculas en sustratos son bien conocidos en la técnica, es decir, la tecnología VLSIPS de Affymetrix (por ejemplo, véase U.S. Pat. N.° 6.566.495y Rockett y Dix, Xenobiotica 30(2):155-177).

El contacto de la muestra con un agente de unión a epítopos en condiciones efectivas durante un período de tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo generalmente implica añadir la composición del agente de unión a epítopos a la muestra e incubar la mezcla durante un período de tiempo suficiente para que el agente de unión a epítopos se una a cualquier antígeno presente. Después de este tiempo, el complejo será lavado y el complejo puede ser detectado por cualquier método bien conocido en la técnica. Los métodos de detección del complejo agente de unión al epítopo-polipéptido se basan generalmente en la detección de una etiqueta o marcador. El término "etiqueta", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquier sustancia unida a un agente de unión al epítopo, o a otro material de sustrato, en el que la sustancia es detectable por un método de detección. Ejemplos no limitantes de etiquetas adecuadas incluyen moléculas luminiscentes, moléculas quimioluminiscentes, fluorocromos, agentes de enfriamiento fluorescentes, moléculas coloreadas, radioisótopos, centelleantes, biotina, avidina, estrepavidina, proteína A, proteína G, anticuerpos o fragmentos de los mismos, polihistidina, Ni2+, etiquetas Flag, etiquetas myc, metales pesados y enzimas (incluyendo fosfatasa alcalina, peroxidasa y luciferasa). Los métodos de detección de un complejo agente de unión a epítopo-polipéptido basados en la detección de una etiqueta o marcador son bien conocidos en la técnica.

En algunas realizaciones, un método basado en un agente de unión al epítopo es un inmunoensayo. Los inmunoensayos pueden realizarse en diferentes formatos. En términos generales, los inmunoensayos pueden dividirse en dos categorías: inmunoensayos competitivos e inmunoensayos no competitivos. En un inmunoensayo competitivo, un analito no marcado en una muestra compite con el analito marcado para unirse a un anticuerpo. El analito no unido se elimina por lavado y se mide el analito unido. En un inmunoensayo no competitivo, se marca el anticuerpo, no el analito. Los inmunoensayos no competitivos pueden utilizar un anticuerpo (por ejemplo, el anticuerpo de captura está marcado) o más de un anticuerpo (por ejemplo, al menos un anticuerpo de captura que no está marcado y al menos un anticuerpo de "tapado" o de detección que está marcado) Las etiquetas adecuadas se describen más arriba.

En algunas realizaciones, el método basado en el agente de unión al epítopo es un ELISA. En otras realizaciones, el método basado en el agente de unión al epítopo es un radioinmunoanálisis. En otras realizaciones, el método basado en el agente de unión al epítopo es un inmunoblot o Western blot. En realizaciones alternativas, el método basado en el agente de unión al epítopo es un array. En otra realización, el método basado en el agente de unión del epítopo es la citometría de flujo. En diferentes realizaciones, el método basado en el agente de unión del epítopo es la inmunohistoquímica (IHC) o la inmunofluorescencia. La IHC utiliza un anticuerpo (o un anticuerpo marcado con fluorescencia en el caso de la inmunofluorescencia) para detectar y cuantificar antígenos en muestras de tejido intactas. Las muestras de tejido pueden ser bloques de tejido recién congelados y/o fijados con formalina e incluidos en parafina (o en plástico) preparados para su estudio mediante IHC o inmunofluorescencia. Los métodos de preparación de bloques de tejido para su estudio mediante IHC o inmunofluorescencia, así como los métodos de realización de IHC o inmunofluorescencia son bien conocidos en la técnica.

Mi. Actividad de TSLP

En una realización, la actividad de TSLP puede ser medida para identificar un compuesto que induce TSLP. La TSLP es una citoquina derivada del epitelio que pertenece a la familia de la interleucina-7 (IL-7). La TSLP actúa como una potente citoquina antitumoral en la piel al reclutar células CD4+ Th2. En consecuencia, la inflamación y/o las células Th2 pueden medirse como una indicación de la actividad de la TSLP. La inflamación puede medirse mediante métodos habituales en la técnica. Por ejemplo, la inflamación puede medirse visualmente mediante IHC, inmunofluorescencia y/o RT-PCR. Los marcadores de inflamación no limitantes que pueden examinarse incluyen GR1, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD11c, CD117, B220 e IFN^y. Cuando la inflamación aumenta en presencia de un compuesto en relación con un control no tratado, el compuesto induce la TSLP.

En otra realización, las células CD4+ y/o las células CD8+ pueden ser medidas como una indicación de la actividad de TSLP. La cantidad de células CD4+ y/o células CD8+ puede medirse mediante métodos habituales en la técnica. Por ejemplo, las células CD4+ y/o CD8+ pueden medirse mediante citometría de flujo. Cuando la cantidad de células CD4+ y/o CD8+ aumenta en presencia de un compuesto en relación con un control no tratado, el compuesto induce la TSLP.

(c) los componentes de la composición

La presente divulgación también proporciona composiciones farmacéuticas. La composición farmacéutica comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, como ingredientes activos, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

El excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser un diluyente, un aglutinante, un relleno, un agente amortiguador, un agente modificador del pH, un desintegrante, un dispersante, un conservante, un lubricante o un agente colorante. La cantidad y los tipos de excipientes utilizados para formar las composiciones farmacéuticas pueden seleccionarse según los principios conocidos de la ciencia farmacéutica.

En una realización, el excipiente puede ser un diluyente. El diluyente puede ser compresible (es decir, plásticamente deformable) o abrasivamente frágil. Entre los ejemplos no limitantes de diluyentes compresibles adecuados se encuentran la celulosa microcristalina (MCC), los derivados de la celulosa, la celulosa en polvo, los ésteres de celulosa (es decir, ésteres mixtos de acetato y butirato), etilcelulosa, metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, almidón de maíz, almidón de maíz fosfatado, almidón de maíz pregelatinizado, almidón de arroz, almidón de patata, almidón de tapioca, almidón-lactosa, almidón-carbonato de calcio, almidón glicolato de sodio, glucosa, fructosa, lactosa, lactosa monohidrato, sacarosa, xilosa, lactitol, manitol, malitol, sorbitol, xilitol, maltodextrina y trehalosa. Entre los ejemplos no limitantes de diluyentes abrasivos adecuados se encuentran el fosfato de calcio dibásico (anhidro o dihidrato), el fosfato de calcio tribásico, el carbonato de calcio y el carbonato de magnesio.

En otra realización, el excipiente puede ser un aglutinante. Los aglutinantes adecuados incluyen, entre otros, almidones, almidones pregelatinizados, gelatina, polivinilpirrolidona, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa poliacrilamidas, poliviniloxoazolidona, polivinilalcoholes, alcohol de ácidos grasos C¹²-C¹⁸, polietilenglicol, polioles, sacáridos, oligosacáridos, polipéptidos, oligopéptidos y combinaciones de los mismos. En otra realización, el excipiente puede ser un relleno. Los rellenos adecuados incluyen, entre otros, carbohidratos, compuestos inorgánicos y polivinilpirrolidona. A modo de ejemplo no limitativo, el relleno puede ser sulfato de calcio, tanto di- como tribásico, almidón, carbonato de calcio, carbonato de magnesio, celulosa microcristalina, fosfato de calcio dibásico, carbonato de magnesio, óxido de magnesio, silicato de calcio, talco, almidones modificados, lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol.

En otra realización, el excipiente puede ser un agente amortiguador. Ejemplos representativos de agentes amortiguadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, fosfatos, carbonatos, citratos, tampones de tris y sales salinas tamponadas (por ejemplo, solución salina tamponada de tris o solución salina tamponada de fosfato).

En varias realizaciones, el excipiente puede ser un modificador del pH. A modo de ejemplo no limitativo, el agente modificador del pH puede ser carbonato sódico, bicarbonato sódico, citrato sódico, ácido cítrico o ácido fosfórico. En otra realización, el excipiente puede ser un desintegrante. El desintegrante puede ser no efervescente o efervescente. Ejemplos adecuados de desintegrantes no efervescentes incluyen, pero no se limitan a, almidones como el almidón de maíz, almidón de patata, almidones pregelatinizados y modificados de los mismos, edulcorantes, arcillas, como la bentonita, celulosa microcristalina, alginatos, almidón glicolato de sodio, gomas como el agar, guar, garrofín, karaya, pecitina y tragacanto. Ejemplos no limitantes de desintegrantes efervescentes adecuados incluyen el bicarbonato de sodio en combinación con ácido cítrico y el bicarbonato de sodio en combinación con ácido tartárico.

En otra realización, el excipiente puede ser un dispersante o un agente potenciador de la dispersión. Los dispersantes adecuados pueden incluir, entre otros, almidón, ácido algínico, polivinilpirrolidonas, goma guar, caolín, bentonita, celulosa de madera purificada, glicolato de almidón de sodio, silicato isoamorfo y celulosa microcristalina. En otra realización alternativa, el excipiente puede ser un conservante. Entre los ejemplos no limitantes de conservantes adecuados se encuentran los antioxidantes, como el BHA, el BHT, la vitamina A, la vitamina C, la vitamina E o el palmitato de retinilo, el ácido cítrico, el citrato de sodio; los quelantes, como el EDTA o el EGTA; y los antimicrobianos, como los parabenos, el clorobutanol o el fenol.

En otra realización, el excipiente puede ser un lubricante. Ejemplos no limitativos de lubricantes adecuados son los minerales, como el talco o la sílice, y las grasas, como la estearina vegetal, el estearato de magnesio o el ácido esteárico.

En otra realización, el excipiente puede ser un agente colorante. Los aditivos de color adecuados incluyen, pero no se limitan a, colores para alimentos, medicamentos y cosméticos (FD&C), colores para medicamentos y cosméticos (D&C), o colores externos para medicamentos y cosméticos (Ext. D&C).

La fracción en peso del excipiente o de la combinación de excipientes en la composición puede ser de alrededor del 99% o menos, de alrededor del 97% o menos, de alrededor del 95% o menos, de alrededor del 90% o menos, de alrededor del 85% o menos, de alrededor del 80% o menos, de alrededor del 75% o menos, de alrededor del 70% o menos, de alrededor del 65% o menos, de alrededor del 60% o menos, alrededor de 55% o menos, alrededor de 50% o menos, alrededor de 45% o menos, alrededor de 40% o menos, alrededor de 35% o menos, alrededor de 30% o menos, alrededor de 25% o menos, alrededor de 20% o menos, alrededor de 15% o menos, alrededor de 10% o menos, alrededor de 5% o menos, alrededor de 2%, o alrededor de 1% o menos del peso total de la composición.

La composición puede ser formulada en varias formas de dosificación y administrada tópicamente por un número de diferentes medios que entregarán una cantidad terapéuticamente efectiva de los ingredientes activos. Dichas composiciones administradas por vía tópica en formulaciones de unidades de dosificación pueden contener portadores, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables, según se desee. La administración tópica también puede implicar el uso de la administración transdérmica, como parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis. La formulación de medicamentos se discute, por ejemplo, en Gennaro, A. R., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa. (18a ed., 1995), y Liberman, H. A. y Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker Inc., New York, N.Y. (1980).

Para la administración tópica (por ejemplo, transdérmica o transmucosa), generalmente se incluyen en el preparado penetrantes adecuados a la barrera que se va a permeabilizar. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica pueden formularse como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, esprays, aerosoles o aceites. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se aplica como una pomada o crema tópica. Cuando se formula en una pomada, el principio activo puede emplearse con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo puede ser formulado en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica al ojo incluyen gotas oculares en las que el ingrediente activo está disuelto o suspendido en un portador adecuado, especialmente un disolvente acuoso. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas, pastillas y colutorios. La administración transmucosa puede llevarse a cabo mediante el uso de aerosoles nasales, aerosoles, comprimidos o supositorios, y la administración transdérmica puede ser a través de ungüentos, bálsamos, geles, parches o cremas como se conoce generalmente en la técnica.

En ciertas realizaciones, una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP se encapsula en un vehículo adecuado para ayudar a la entrega del compuesto a las células diana, para aumentar la estabilidad de la composición, o para minimizar la toxicidad potencial de la composición. Como se apreciará por un experto en la materia, una variedad de vehículos son adecuados para entregar una composición de la presente invención. Ejemplos no limitantes de sistemas de administración de fluidos estructurados adecuados pueden incluir nanopartículas, liposomas, microemulsiones, micelas, dendrímeros y otros sistemas que contienen fosfolípidos. Los métodos para incorporar las composiciones a los vehículos de suministro son conocidos en la técnica.

En una realización alternativa, se puede utilizar un vehículo de entrega de liposomas. Los liposomas, dependiendo de la forma de realización, son adecuados para la entrega de un agente citotóxico y un inductor de TSLP en vista de sus propiedades estructurales y químicas. En general, los liposomas son vesículas esféricas con una membrana bicapa de fosfolípidos. La bicapa lipídica de un liposoma puede fusionarse con otras bicapas (por ejemplo, la membrana celular), entregando así el contenido del liposoma a las células. De esta manera, un agente citotóxico y un inductor de TSLP pueden ser entregados selectivamente a una célula por encapsulación en un liposoma que se fusiona con la membrana de la célula diana.

Los liposomas pueden estar compuestos por una variedad de diferentes tipos de fosolípidos que tienen diferentes longitudes de cadena de hidrocarburos. Los fosfolípidos suelen estar formados por dos ácidos grasos unidos mediante fosfato de glicerol a uno de los diversos grupos polares. Los fosfolípidos adecuados incluyen el ácido fosfatídico (PA), la fosfatidilserina (PS), el fosfatidilinositol (PI), el fosfatidilglicerol (PG), el difosfatidilglicerol (DPG), la fosfatidilcolina (PC) y la fosfatidiletanolamina (PE). Las cadenas de ácidos grasos que componen los fosfolípidos pueden tener una longitud de entre 6 y 26 átomos de carbono, y las cadenas lipídicas pueden ser saturadas o insaturadas. Las cadenas de ácidos grasos adecuadas incluyen (nombre común presentado entre paréntesis) ndodecanoato (laurato), n-tretradecanoato (miristato), n-hexadecanoato (palmitato), n-octadecanoato (estearato), neicosanoato (araquidato), n-docosanoato (behenato), n-tetracosanoato (lignocerato), cis-9-hexadecenoato (palmitoleato), cis-9-octadecanoato (oleato), cis,cis-9,12-octadecandienoato (linoleato), todo cis-9, 12, 15-octadecatrienoato (linolenato), y todo cis-5,8,11,14-eicosatetraenoato (araquidonato). Las dos cadenas de ácidos grasos de un fosfolípido pueden ser idénticas o diferentes. Los fosfolípidos aceptables incluyen el dioleoil PS, dioleoil PC, distearoil PS, distearoil PC, dimiristoil PS, dimiristoil PC, dipalmitoil PG, estearoil, oleoil PS, palmitoil, linolenil PS, y similares.

Los fosfolípidos pueden proceder de cualquier fuente natural y, como tales, pueden comprender una mezcla de fosfolípidos. Por ejemplo, la yema de huevo es rica en PC, PG y PE, la soja contiene PC, PE, PI y PA, y el cerebro o la médula espinal de los animales están enriquecidos en PS. Los fosfolípidos también pueden proceder de fuentes sintéticas. Pueden utilizarse mezclas de fosfolípidos con una proporción variada de fosfolípidos individuales. Las mezclas de diferentes fosfolípidos pueden dar lugar a composiciones de liposomas con propiedades ventajosas de actividad o estabilidad de la actividad. Los fosfolípidos mencionados pueden mezclarse, en proporciones óptimas, con lípidos catiónicos, como el cloruro de N-(1-(2,3-dioleolioxi)propilo)-N,N,N-trimetil amonio, el percloarato de 1,1'-dioctadecil-3,3,3',3'-tetrametilindocarbocianina, el yoduro de 3,3'-deheptiloxacarbocianina, 1,1'-dedodecil-3,3,3',3'-tetrametilindocarbocianina percloarato, 1,1'-dioleil-3,3,3',3'-tetrametilindocarbocianina metanosulfonato, N-4-(delinoleilaminostiril)-N-metilpiridinio yoduro, o 1,1,-dilinoleil-3,3,3',3'-tetrametilindocarbocianina percloarato.

Los liposomas pueden comprender opcionalmente esfingolípidos, en los que la esfingosina es la contraparte estructural del glicerol y uno de los ácidos grasos de un fosfoglicérido, o colesterol, un componente principal de las membranas de las células animales. Los liposomas pueden contener opcionalmente lípidos pegilados, que son lípidos unidos covalentemente a polímeros de polietilenglicol (PEG). El tamaño de los PEGs puede oscilar entre unos 500 y unos 10.000 daltons.

Los liposomas pueden comprender además un disolvente adecuado. El disolvente puede ser un disolvente orgánico o un disolvente inorgánico. Los disolventes adecuados incluyen, entre otros, dimetilsulfóxido (DMSO), metilpirrolidona, N-metilpirrolidona, acetronitrilo, alcoholes, dimetilformamida, tetrahidrofurano, o combinaciones de los mismos.

Los liposomas que llevan un agente citotóxico y un inductor de TSLP pueden prepararse mediante cualquier método conocido de preparación de liposomas para la administración de fármacos, como, por ejemplo, el detallado en U.S. Pat. N.° 4.241.046, 4,394,448, 4,529,561, 4,755,388, 4,828,837, 4,925,661, 4,954,345, 4,957,735, 5,043,164, 5,064,655, 5,0 77,211 y 5,264,618. Por ejemplo, los liposomas pueden prepararse mediante la sonicación de lípidos en una solución acuosa, la inyección de disolventes, la hidratación de lípidos, la evaporación inversa o la liofilización por congelación y descongelación repetidas. En una realización preferente, los liposomas se forman por sonicación. Los liposomas pueden ser multilamelares, que tienen muchas capas como una cebolla, o unilamelares. Los liposomas pueden ser grandes o pequeños. La sonicación continua de alto cizallamiento tiende a formar lipsomas unilamelares más pequeños.

Como sería evidente para un experto, todos los parámetros que gobiernan la formación de liposomas pueden ser variados. Estos parámetros incluyen, entre otros, la temperatura, el pH, la concentración del compuesto de metionina, la concentración y composición del lípido, la concentración de cationes multivalentes, la velocidad de mezcla, la presencia y la concentración del disolvente.

En otra realización, una composición de la invención puede ser entregada a una célula como una microemulsión. Las microemulsiones son generalmente soluciones claras y termodinámicamente estables que comprenden una solución acuosa, un tensioactivo y un "aceite". El "aceite" en este caso, es la fase fluida supercrítica. El tensioactivo descansa en la interfaz aceite-agua. Cualquiera de los diversos tensioactivos es adecuado para su uso en formulaciones de microemulsión, incluidos los descritos en el presente documento o los conocidos en la técnica. Los microdominios acuosos adecuados para su uso en la invención generalmente tendrán dimensiones estructurales características de unos 5 nm a unos 100 nm. Los agregados de este tamaño son malos dispersores de la luz visible y, por tanto, estas soluciones son ópticamente claras. Como apreciará unexperto en la materia, las microemulsiones pueden tener y tendrán una multitud de estructuras microscópicas diferentes, incluyendo agregados en forma de esfera, varilla o disco. En una realización, la estructura puede ser micelas, que son las estructuras de microemulsión más simples que son generalmente objetos esféricos o cilíndricos. Las micelas son como gotas de aceite en agua, y las micelas inversas son como gotas de agua en aceite. En una realización alternativa, la estructura de la microemulsión son las láminas. Se compone de capas consecutivas de agua y aceite separadas por capas de tensioactivos. El "aceite" de las microemulsiones está compuesto óptimamente por fosfolípidos. Cualquiera de los fosfolípidos detallados anteriormente para los liposomas son adecuados para las realizaciones dirigidas a las microemulsiones. El agente citotóxico y un inductor de TSLP pueden ser encapsulados en una microemulsión por cualquier método generalmente conocido en la técnica.

En otra realización, un agente citotóxico y un inductor de TSLP pueden ser entregados en una macromolécula dendrítica, o un dendrímero. En términos generales, un dendrímero es una molécula ramificada en forma de árbol, en la que cada rama es una cadena de moléculas entrelazadas que se divide en dos nuevas ramas (moléculas) después de una cierta longitud. Esta ramificación continúa hasta que las ramas (moléculas) se compactan tanto que el dosel forma un globo. En general, las propiedades de los dendrímeros están determinadas por los grupos funcionales de su superficie. Por ejemplo, los grupos finales hidrofílicos, como los grupos carboxilo, suelen hacer un dendrímero soluble en agua. Alternativamente, se pueden incorporar fosfolípidos en la superficie de un dendrímero para facilitar la absorción a través de la piel. Cualquiera de los fosfolípidos detallados para su uso en las realizaciones de liposomas es adecuado para su uso en las realizaciones de dendrímeros. Cualquier método generalmente conocido en el arte puede ser utilizado para hacer dendrímeros y encapsular composiciones de la invención en ellos. Por ejemplo, los dendrímeros pueden producirse mediante una secuencia iterativa de pasos de reacción, en la que cada iteración adicional conduce a un dendrímero de orden superior. Por consiguiente, tienen una estructura tridimensional regular y muy ramificada, con un tamaño y una forma casi uniformes. Además, el tamaño final de un dendrímero suele estar controlado por el número de pasos iterativos utilizados durante la síntesis. Una variedad de tamaños de dendrímeros son adecuados para su uso en la invención. Generalmente, el tamaño de los dendrímeros puede oscilar entre 1 nm y 100 nm aproximadamente.

II. Métodos

Los inventores han descubierto inesperadamente que una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP es significativamente más eficaz que un agente citotóxico solo en el tratamiento de lesiones cutáneas precancerosas con un curso de tratamiento más corto. Este descubrimiento inesperado tiene la ventaja añadida de disminuir los acontecimientos adversos, con lo que puede mejorar el cumplimiento de los pacientes. El inductor de TSLP sirve para inducir la expresión de TSLP, modulando así el entorno inmunitario en la piel. El agente citotóxico induce la apoptosis de las células, lo que libera antígenos que aumentan la respuesta inmunitaria montada por el inductor de TSLP.

En un aspecto, la divulgación describe un método para tratar una lesión cutánea precancerosa, el método comprende administrar tópicamente a la lesión una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 7 días. En otra realización, la divulgación abarca un método para evitar que se produzca una lesión cutánea precancerosa, el método comprende administrar tópicamente a un sujeto con riesgo de desarrollar una lesión cutánea precancerosa una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 7 días. Tal y como se utiliza aquí, "una lesión cutánea precancerosa" es una lesión cutánea que tiene el potencial de evolucionar hacia un cáncer de piel, pero que no es un cáncer. Ejemplos no limitantes de tipos de lesiones precancerosas pueden ser la queratosis actínica (queratosis solar), la queilitis actínica (labio de Farmer), el cuerno cutáneo, el lunar (nevus) y el nevus displásico. En una realización específica, la lesión cutánea precancerosa es una queratosis actínica. Los métodos para identificar las lesiones cutáneas precancerosas son conocidos en la técnica. Por ejemplo, una biopsia de piel o una dermascopia pueden identificar una lesión cutánea precancerosa. Una revisión de la dermascopia y su uso en el diagnóstico de las lesiones cutáneas precancerosas se ofrece en Giacomel et al., Dermatol Clin 2013, 31:649-678. Por ejemplo, en la dermatoscopia, las queratosis actínicas (QA) faciales no pigmentadas suelen mostrar una escama superficial de color amarillo blanquecino y un patrón de fresa, este último consistente en una pseudored eritematosa (de color rosa a rojo) que rodea los folículos pilosos. Los orificios de los folículos pilosos están rodeados por un halo blanco y rellenos de un tapón queratósico amarillento, formando un peculiar aspecto targetoide. Además, a menudo se observan vasos finos, lineales y ondulados que rodean los folículos pilosos. Además, ocasionalmente son visibles pequeños vasos enrollados en la QA de la cara. La histología también puede utilizarse para diagnosticar una lesión precancerosa. Por ejemplo, las queratosis actínicas (QA) se definen a nivel histológico por la displasia y consisten en queratinocitos que manifiestan núcleos atípicos agrandados, irregulares e hipercromáticos. Las QA también muestran un crecimiento desorganizado, que interrumpe la diferenciación y da lugar a un estrato córneo engrosado con núcleos retenidos. Para estratificar los grados de displasia epidérmica, se ha propuesto una escala de gradación de tres niveles para las QA que es paralela a la utilizada para la evaluación de la displasia cervical. Las características histológicas de la neoplasia intraepidérmica queratinocítica I (KIN I) son atipias celulares de los queratinocitos basales limitadas al tercio inferior de la epidermis. El KIN II muestra queratinocitos atípicos que ocupan los dos tercios inferiores de la epidermis, y el KIN III muestra queratinocitos atípicos en toda la epidermis; este último estadio es equivalente al carcinoma in situ. La atipia epidérmica localizada en las QA refleja una alteración parcial del programa de diferenciación, mientras que una alteración más completa del programa de diferenciación se asocia a los CCE in situ (SCCIS). Los criterios de clasificación de KIN evalúan las características macroscópicas y microscópicas de las QA. Además, la presentación clínica, los antecedentes del paciente, como la exposición a los rayos UV, y el aspecto de la lesión pueden identificar una lesión precancerosa. Por ejemplo, la queratosis actínica (QA) suele aparecer en zonas expuestas al sol como la cara, el cuero cabelludo calvo, los labios y el dorso de las manos. Una lesión de queratosis actínica puede ser de plana a ligeramente elevada, normalmente de menos de 2,5 cm de diámetro, de textura áspera, seca y escamosa, y se parece a las verrugas. La mayoría se vuelven rojos, pero algunos serán de color bronceado, rosa, rojo y/o de tono carne. En una realización específica, los métodos de la invención pueden usarse para tratar lesiones QA de tipo KIN I, KIN II y/o KIN III.

En otro aspecto, la divulgación también describe un método para prevenir la transición de una lesión precancerosa a cáncer de piel, comprendiendo el método la identificación de un sujeto con una o más lesiones cutáneas precancerosas y la administración tópica a la(s) lesión(es) cutánea(s) precancerosa(s) de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que la(s) lesión(es) cutánea(s) precancerosa(s) se reduce(n) en tamaño de tal manera que se previene la progresión a cáncer de piel. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 7 días. En otra realización específica, el cáncer de piel es un cáncer de piel no melanoma. Las queratosis actínicas no tratadas pueden evolucionar hacia un carcinoma de células escamosas (CCE). En consecuencia, la divulgación abarca un método para prevenir la transición de una lesión de queratosis actínica a un carcinoma de células escamosas, comprendiendo el método la identificación de un sujeto con una o más lesiones de queratosis actínica y la administración tópica a la(s) lesión(es) de queratosis actínica(s) de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que la(s) lesión(es) de queratosis actínica se reduce(n) en tamaño de tal manera que se previene la progresión a carcinoma de células escamosas. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 7 días.

En otro aspecto, la divulgación se refiere a un método de tratamiento de una lesión cutánea no cancerosa. El método comprende la identificación de un sujeto con una o más lesiones cutáneas no cancerosas y la administración tópica a la(s) lesión(es) cutánea(s) no cancerosa(s) de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que la(s) lesión(es) cutánea(s) no cancerosa(s) se reduce(n) de tamaño. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 10 días. Las lesiones cutáneas no cancerosas adecuadas pueden incluir verrugas e infecciones virales similares de la piel. Ejemplos no limitantes de verrugas pueden ser las verrugas plantares, las verrugas cutáneas, las verrugas anogenitales, las verrugas vulgares, las verrugas planas, las verrugas filiformes y las lesiones parecidas a las verrugas asociadas a infecciones víricas de la piel, como el virus del papiloma humano y el molusco contagioso. Los métodos para diagnosticar las verrugas son conocidos en la técnica. Por lo general, un artesano experto puede diagnosticar una verruga mediante un examen. Sin embargo, también puede utilizarse una biopsia para diagnosticar una verruga. Las verrugas pueden aparecer en cualquier parte del cuerpo, aunque las más comunes son las de la cara, las manos, los dedos, los pies, las piernas y los genitales. Las verrugas pueden tener un aspecto áspero, liso, plano, elevado, contener "semillas" negras, ser redondas, ovaladas y más claras u oscuras que la piel circundante.

En otro aspecto, la divulgación se refiere a un método para tratar el cáncer de piel no melanoma. El método comprende la identificación de un sujeto con cáncer de piel no melanoma y la administración tópica al cáncer de piel no melanoma de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que el cáncer de piel no melanoma se reduce de tamaño. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 10 días. Ejemplos no limitantes de tipos de cáncer de piel no melanoma pueden ser el carcinoma de células basales, el carcinoma de células escamosas, la enfermedad de Bowen, los queratoacantomas, el carcinoma de células de Merkel, los linfomas cutáneos (de la piel), el sarcoma de Kaposi, los tumores anexos de la piel, el carcinoma de las glándulas sebáceas y los sarcomas. Alrededor del 80% de los cánceres de piel se desarrollan a partir de las células basales y se denominan carcinomas de células basales. El carcinoma de células basales se desarrolla con mayor frecuencia en la cabeza y el cuello. Está causada principalmente por la exposición al sol o se desarrolla en personas que recibieron radioterapia cuando eran niños. Este tipo de cáncer de piel suele crecer lentamente y rara vez hace metástasis (se extiende) a otras partes del cuerpo. Aproximadamente el 20% de los cánceres de piel se desarrollan a partir de células escamosas y se denominan carcinomas de células escamosas. Este tipo de cáncer está causado principalmente por la exposición al sol, pero puede aparecer en la piel que ha sido quemada, dañada por productos químicos o expuesta a los rayos X. Los lugares de una afección cutánea inflamatoria crónica, las membranas mucosas (la piel que recubre la boca, la nariz, el ano y la vagina de la mujer) y los labios son susceptibles de sufrir un carcinoma de células escamosas. El carcinoma de células escamosas rara vez hace metástasis, pero es más probable que se extienda que el carcinoma de células basales. Los métodos de identificación de los cánceres de piel no melanoma son conocidos en la técnica. En general, un experto en la materia puede diagnosticar un cáncer de piel no melanoma mediante un examen. Sin embargo, también puede utilizarse una biopsia para diagnosticar un cáncer de piel no melanoma.

En otro aspecto más, la divulgación describe un método para tratar el cáncer de piel por melanoma. El método comprende la identificación de un paciente con cáncer de piel de melanoma y la administración tópica al cáncer de piel de melanoma de una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP, en la que el cáncer de piel de melanoma se reduce de tamaño. En una realización específica, la composición puede administrarse hasta 10 días. El melanoma se produce cuando se forman células cancerosas en las células de la piel llamadas melanocitos. Específicamente, los métodos de la divulgación pueden utilizarse para tratar el melanoma in situ (MIS). El MIS también se denomina melanoma en estadio 0. En el estadio 0, se encuentran melanocitos anormales en la epidermis. Por lo general, la MIS sólo afecta a la capa superior de la piel. Estos melanocitos anormales pueden convertirse en cáncer y extenderse al tejido normal cercano. Los métodos de diagnóstico e identificación del melanoma son conocidos en la técnica. Por lo general, el melanoma puede diagnosticarse basándose en los antecedentes familiares, la historia del paciente, la presentación clínica y/o una biopsia del examen de la piel de un lunar que haya cambiado de tamaño, forma o color, que tenga bordes o contornos irregulares, que sea de más de un color, que sea asimétrico, que pique o rezume, que sangre o que esté ulcerado, un cambio en la piel pigmentada o lunares satélites.

La administración de una composición de la invención puede dar lugar a una reducción superior al 50% del tamaño de la lesión en relación con el tratamiento estándar. Por ejemplo, la administración de una composición de la invención puede dar lugar a una reducción del tamaño de la lesión superior al 55%, superior al 60%, superior al 65%, superior al 70%, superior al 75%, superior al 80%, superior al 85%, superior al 90%, superior al 95% o al 100% en relación con el tratamiento estándar. Por ejemplo, una composición que comprenda 5-FU y un análogo de la vitamina D puede dar lugar a una reducción mayor del 50% del tamaño de la lesión en relación con una composición que comprenda 5-FU como único agente activo. En algunas realizaciones, la administración de una composición que comprende 5-FU y un análogo de la vitamina D puede dar lugar a una reducción del tamaño de la lesión superior al 55%, superior al 60%, superior al 65%, superior al 70%, superior al 75%, superior al 80%, superior al 85%, superior al 90%, superior al 95% o al 100% en relación con una composición que comprende 5-FU como único agente activo. En una realización en la que se ha producido una reducción del 100% del tamaño de la lesión, se puede considerar que la lesión ha sido eliminada.

Los métodos de la divulgación pueden disminuir la incidencia y/o la gravedad de los acontecimientos adversos en relación con la incidencia y/o la gravedad de los acontecimientos adversos comunes durante el tratamiento estándar de atención. Entre los ejemplos no limitantes de acontecimientos adversos durante el uso tópico de un agente citotóxico se incluyen: dolor local, prurito, picor, quemazón, escozor, formación de costras, exudación, dermatitis, fotosensibilidad, dolor de cabeza, insomnio, irritabilidad, erupción cutánea, leucocitosis, trombocitopenia, defectos de nacimiento, inflamación, aborto espontáneo, Herpes simplex, dermatitis alérgica de contacto, telangectasia, hiper o hipopigmentación y cicatrices. En concreto, la incidencia y/o la gravedad del enrojecimiento, la descamación, las costras, el picor y el ardor pueden disminuir en relación con el tratamiento estándar. Por ejemplo, puede haber una disminución del 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 100% en la incidencia y/o gravedad de los acontecimientos adversos en relación con el tratamiento estándar.

(a) administración

En ciertos aspectos, una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de la invención puede ser administrada a un sujeto. La administración se lleva a cabo mediante técnicas eficaces estándar. En una realización preferente, la composición se administra por vía tópica. Una composición de la invención puede administrarse por vía tópica en forma de pomada, crema, suspensión, loción, polvo, solución, pasta, gel, espray, aerosol, pomada, parche o aceite. En algunas realizaciones, una composición de la invención se administra como una pomada o crema tópica.

Para aplicaciones terapéuticas, se administra a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad de la composición terapéutica suficiente para producir una respuesta medible (por ejemplo, reducción del tamaño de la lesión, reducción del número de lesiones, reducción de la toxicidad y mejora de la tolerabilidad del tratamiento, inducción de TSLP, reducción de los síntomas asociados a las lesiones, como enrojecimiento, descamación, costras, picor, ardor y grosor, normalización de la diferenciación de los queratinocitos y de la expresión génica, restauración de la integridad epidérmica con funciones de barrera competentes, reducción de la proliferación celular aberrante y de la inflamación). Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en una composición terapéutica de la invención pueden variarse para administrar una cantidad del compuesto(s) activo(s) que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un sujeto particular. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de diversos factores, como la actividad de la composición terapéutica, la formulación, la vía de administración, la combinación con otros fármacos o tratamientos, la edad, la lesión precancerosa, el cáncer de piel no melanoma, el cáncer de piel melanoma, la verruga, los síntomas y el estado físico y el historial médico previo del sujeto que se está tratando. En algunas realizaciones, se administra una dosis mínima, y se aumenta la dosis en ausencia de toxicidad limitante de la dosis. La determinación y el ajuste de una dosis terapéuticamente eficaz, así como la evaluación de cuándo y cómo realizar dichos ajustes, son conocidos por aquellos con conocimientos ordinarios en el arte de la medicina.

El momento de la administración del tratamiento en relación con la propia enfermedad y la duración del mismo se determinarán en función de las circunstancias que rodeen el caso. El tratamiento puede comenzar en el propio hospital o clínica, o en un momento posterior tras el alta hospitalaria o tras ser atendido en una clínica ambulatoria. En un aspecto, la administración de una composición de la invención puede dar lugar a una duración acortada del tratamiento en relación con el estándar de atención. Por ejemplo, el tratamiento estándar puede ser dos veces al día durante dos semanas. Sin embargo, los solicitantes han descubierto de forma inesperada que una duración más corta de la terapia da lugar a una reducción significativa del tamaño de la lesión en relación con el tratamiento estándar. En consecuencia, la duración del tratamiento puede ser inferior a 14 días. Por ejemplo, la duración del tratamiento puede ser de unos 13 días, unos 12 días, unos 10 días, unos 9 días, unos 8 días, unos 7 días, unos 6 días, unos 5 días, unos 4 días, unos 3 días, unos 2 días o 1 día. En ciertas realizaciones, la duración del tratamiento puede ser de 10 días, 7 días, 6 días, 5 días, 4 días, 3 días o 2 días. En una realización, la duración del tratamiento puede ser de hasta 7 días. En otra realización, la duración del tratamiento puede ser de entre 4 y 6 días. En una realización específica, la duración del tratamiento puede ser de 4 días. En otra realización específica, la duración del tratamiento puede ser de 6 días.

La frecuencia estándar de cuidado de la dosis es dos veces al día. En consecuencia, la frecuencia de dosificación de una composición de la invención puede ser dos veces al día. Alternativamente, se contempla que la frecuencia de dosificación puede ser alterada. Por ejemplo, la frecuencia de dosificación puede ser de una, dos o tres veces al día. Un aumento de la frecuencia de las dosis puede dar lugar a una disminución de la duración del tratamiento. Alternativamente, una disminución de la frecuencia de las dosis puede dar lugar a un aumento de la duración del tratamiento.

(b) sujeto

Un sujeto puede ser un roedor, un humano, un animal de ganado, un animal de compañía o un animal zoológico. En una realización, el sujeto puede ser un roedor, por ejemplo, un ratón, una rata, una cobaya, etc. En otra realización, el sujeto puede ser un animal de ganado. Ejemplos no limitativos de animales de ganado adecuados pueden ser cerdos, vacas, caballos, cabras, ovejas, llamas y alpacas. En otra realización, el sujeto puede ser un animal de compañía. Ejemplos no limitativos de animales de compañía pueden ser mascotas como perros, gatos, conejos y pájaros. En otra realización, el sujeto puede ser un animal zoológico. Tal y como se utiliza aquí, un "animal zoológico" se refiere a un animal que puede encontrarse en un zoológico. Estos animales pueden incluir primates no humanos, gatos grandes, lobos y osos. En una realización preferente, el sujeto es un humano.

El sujeto humano puede ser de cualquier edad. Sin embargo, dado que el melanoma, el cáncer de piel no melanoma y las lesiones precancerosas de la piel se asocian generalmente con el envejecimiento, un sujeto humano puede ser un sujeto humano mayor. En algunas realizaciones, el sujeto humano puede tener unos 20, 25, 30, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 años de edad o más. En algunas realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 30 años de edad o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 40 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 45 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 50 años de edad o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 55 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 60 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 65 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 70 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 75 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 80 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 85 años o más. En otras realizaciones preferentes, el sujeto humano tiene 90 años o más.

Aún más, el sujeto puede ser un sujeto con riesgo de desarrollar una lesión cutánea precancerosa. Un experto en la materia sería capaz de determinar un sujeto con riesgo de desarrollar una lesión cutánea precancerosa. Por ejemplo, se puede determinar que un sujeto tiene riesgo de desarrollar una lesión cutánea precancerosa basándose en los antecedentes familiares, la historia del paciente, la presentación clínica, una biopsia de examen de la piel, una dermascopia, la exposición al sol y/o la exposición de la piel a productos químicos o rayos X. Las zonas específicas de riesgo pueden incluir áreas expuestas al sol como la cara, el cuero cabelludo calvo, los labios y el dorso de las manos.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar realizaciones preferentes de la invención. Los expertos en la materia deberían apreciar que las técnicas divulgadas en los ejemplos que siguen representan técnicas descubiertas por los inventores que funcionan bien en la práctica de la invención y, por lo tanto, se puede considerar que constituyen modos preferentes para su práctica.

Ejemplo 1. Ensayo clínico para evaluar el papel del calcipotriol en el tratamiento de las lesiones cutáneas precancerosas.

Objetivos:

Los inventores plantearon la hipótesis de que el calcipotriol puede utilizarse para crear un entorno inmunitario antitumoral en la piel humana que conduzca a la eliminación de las queratosis actínicas. En consecuencia, los inventores realizaron un ensayo clínico para examinar esta hipótesis. El objetivo del ensayo clínico era determinar el potencial terapéutico del calcipotriol en el tratamiento de las queratosis actínicas en humanos. El calcipotriol ejerce sus efectos antitumorales, al menos en parte, modulando el entorno inmunitario de la piel. Por lo tanto, para optimizar la exposición antigénica de las células inmunitarias que atacan los tumores de la piel, se investigará la capacidad del calcipotriol para aumentar los efectos de un agente quimioterapéutico tópico, el 5-fluorouracilo, que se utiliza actualmente en la clínica para el tratamiento de la queratosis actínica. La inducción de la apoptosis por parte del 5-fluorouracilo en las células tumorales liberará antígenos que pueden aumentar la respuesta inmunitaria montada por el calcipotriol. Por lo tanto, se comparará la respuesta de los pacientes con queratosis actínicas múltiples al calcipotriol tópico+5-fluorouracilo frente al 5-fluorouracilo solo durante un periodo de tratamiento de 4 días dos veces al día. Los grupos de tratamiento se dividirán en función de la localización anatómica de las lesiones de queratosis actínica (cuero cabelludo, cara, extremidad superior derecha y extremidad superior izquierda) con el fin de delimitar aún más los efectos específicos de los tratamientos. El objetivo principal del estudio es comparar la eficacia de 5-fluorouracilo+calcipotriol tópico frente a 5-fluorouracilo solo en el tratamiento de la queratosis actínica en pacientes con queratosis actínicas múltiples en cada una de las cuatro localizaciones anatómicas (cuero cabelludo, cara, extremidad superior derecha y extremidad superior izquierda). El resultado de interés es el cambio porcentual del número de queratosis actínicas en el área de tratamiento objetivo en el cuero cabelludo, la cara, la extremidad superior derecha y la extremidad superior izquierda a las 8 semanas después del tratamiento. Los criterios de valoración secundarios del estudio incluyen: determinar la eliminación completa y parcial (>75%) de las queratosis actínicas a las 8 semanas del tratamiento; determinar la toxicidad y la tolerabilidad de 5-fluorouracilo tópico+calcipotriol frente a 5-fluorouracilo solo en el tratamiento de la queratosis actínica al final del tratamiento de 4 días del curso; examinar la inducción de la expresión de TSLP en los queratinocitos por el calcipotriol en el sitio de las queratosis actínicas al final del tratamiento de 4 días del curso; determinar cualquier diferencia en la respuesta a 5-fluorouracilo+calcipotriol tópico frente a 5-fluorouracilo solo entre los cuatro sitios anatómicos a las 8 semanas después del tratamiento.

Criterios de elegibilidad:

En este ensayo clínico aleatorio doble ciego, los participantes con queratosis actínica fueron asignados aleatoriamente a recibir 5-FU+calcipotriol (grupo de prueba) o 5-FU+vaselina (grupo de control) preparación tópica para una auto aplicación dos veces al día durante 4 días.

Procedimiento de inscripción:

En este estudio aleatorio doble ciego, se reclutaron 132 pacientes con queratosis actínica que se presentaron en las clínicas de dermatología de la Universidad de Washington. La Unidad de Ensayos Clínicos de Dermatología de la WUSM es conocida a nivel nacional por desarrollar y participar en ensayos clínicos terapéuticos. La Unidad de Ensayos Clínicos se nutre de la amplia base de pacientes de la División: más de 50.000 visitas de pacientes al año. Hasta el 15% de estas visitas son para el tratamiento de la queratosis actínica [11]. Los pacientes de más de 50 años que cumplían los criterios de elegibilidad para el estudio se ofrecieron a participar en el mismo de acuerdo con las directrices del IRB. Si estaba dispuesto a participar y era capaz de hacerlo, el paciente daba su consentimiento y se inscribía en el estudio en función de su lugar anatómico de tratamiento. Si el participante tiene dos o más sitios anatómicos calificados, uno fue elegido como el sitio anatómico primario por el médico tratante y los otros sitios fueron considerados como sitios secundarios. La asignación de sitios anatómicos primarios se priorizó como Cuero cabelludo>Cara>Extremidad superior izquierda>Extremidad superior derecha. En todos los casos, los participantes recibieron una sola medicación, que aplicaron en todos los lugares afectados para evitar cualquier confusión. Se utilizaron cuatro listas aleatorias de medicamentos, una para cada lugar anatómico primario (cuero cabelludo, cara, extremidad superior derecha y extremidad superior izquierda).

El médico tratante eligió los lugares anatómicos primarios y secundarios (si procede) para el tratamiento, documentó la cantidad de queratosis actínicas clínicamente visibles, marcó las lesiones en transparencias y fotografió la(s) zona(s) de tratamiento por separado. Los participantes fueron asignados aleatoriamente a recibir preparaciones tópicas de 5-FU+calcipotriol (grupo de prueba) o 5-FU+vaselina (grupo de control) consultando la lista de aleatorización para su sitio anatómico primario. Si la lista de aleatorización para un sitio anatómico estaba completa (40 para cada sitio), el médico eligió otro sitio anatómico calificado como el sitio primario si estaba presente. Los participantes se aplicaron la medicación del estudio en todas las zonas de tratamiento cualificadas dos veces al día durante 4 días consecutivos, empezando el día siguiente a su primera visita. Los preparados tópicos se entregaron a los participantes sin coste alguno en la visita inicial. Se pidió a los participantes que volvieran a la visita de seguimiento el día 5 (es decir, el día después de la última aplicación), la semana 2 y 4 (ambas recomendadas, pero no obligatorias) y la semana 8. En cada una de las visitas de seguimiento, se evaluó la piel tratada en busca de cualquier signo de irritación (incluido el eritema, la formación de costras o la ulceración (utilizando una escala de eritema, Tabla 2)) y se cuantificaron clínicamente y se fotografiaron las queratosis actínicas. En las últimas visitas (8 semanas) se marcaron las queratosis actínicas restantes en transparencias. Los participantes que decidieron no asistir a las visitas de la semana 2 y/o 4 fueron contactados por teléfono en los puntos de tiempo de la semana 2 y 4, se les preguntó sobre la condición de su piel tratada, la presencia de cualquier evento adverso, la correcta curación de los sitios de biopsia y se les pidió que enviaran fotografías por correo electrónico (si estaban de acuerdo con la comunicación por correo electrónico). Todos los registros se guardaron en un despacho cerrado con llave o en un ordenador protegido con contraseña al que sólo pueden acceder los miembros del equipo de investigación.

Procedimiento de investigación/tratamiento:

En la visita inicial (Día 0), se delimitó la(s) zona(s) de tratamiento de la queratosis actínica calificada(s), se contaron las lesiones, se marcaron en transparencias, se fotografiaron y se asignó la medicación del estudio según la lista de aleatorización correspondiente al sitio anatómico primario del participante (FIG. 1). Los participantes se aplicaron la medicación asignada en todos los lugares anatómicos calificados, a partir del día siguiente a su primera visita. Se les indicó que aplicaran una fina capa del medicamento en la piel afectada para cubrir toda la zona con la mano y que se frotaran bien la piel dos veces al día (por la mañana y al acostarse) durante cuatro días consecutivos. Los participantes debían lavarse bien las manos después de cada aplicación. Los participantes debían evitar la exposición a la luz solar natural o artificial (incluidas las cabinas de bronceado, las lámparas solares, etc.) durante el período de tratamiento de 4 días y utilizar un protector solar de FPS 50+ cada día después de aplicar la medicación por la mañana (se proporcionó protector solar a los participantes). Los participantes recibieron un diario para documentar la hora y la fecha de sus tratamientos, el uso de protectores solares y registrar cualquier efecto secundario. Los participantes volvieron a la clínica para la reevaluación en el día 5, la semana 2 (opcional), la 4 (opcional) y la 8. Los médicos tratantes determinaron clínicamente el recuento de queratosis actínicas de los participantes y los fotografiaron en cada visita. En la última visita (semana 8) se marcaron las queratosis actínicas restantes en transparencias. También se evaluó el eritema y la irritación utilizando una escala de eritema estándar (Tabla 2; [12]). Los participantes que no acudieron a las visitas de la semana 2 y/o 4 fueron contactados por teléfono en esos momentos para determinar el estado de su piel tratada, los lugares de la biopsia y la presencia de cualquier acontecimiento adverso. Se les pidió que enviaran fotografías de su piel tratada por correo electrónico (si estaban de acuerdo con la comunicación por correo electrónico). El criterio de valoración principal del estudio es el porcentaje de reducción del número total de queratosis actínicas a las 8 semanas en cada zona anatómica. Para confirmar la inducción de TSLP por el tratamiento con calcipotriol, medimos la expresión de TSLP en biopsias en sacabocados de 4 mm de la queratosis actínica antes y después del tratamiento. Los médicos tratantes recogieron y etiquetaron estas muestras de piel basándose en la identificación única de tres dígitos de los participantes (por ejemplo, "201") sin comprometer su condición de cegado. Hemos procesado los tejidos para su análisis histológico utilizando métodos estándar.

Preparación y almacenamiento del medicamento: Crema tópica de 5-fluorouracilo al 5% (Efudex; Taro Pharmaceuticals U.S.A. Inc., Hawthorne, NY) se mezcló con una pomada tópica de calcipotriol al 0,005% (calcitreno, calcipotrieno, Dovonex; Taro Pharmaceuticals; grupo de prueba) o vaselina (grupo de control) en una proporción de peso de 1:1. La mezcla de los dos medicamentos se realizó en las instalaciones de la División de Dermatología de acuerdo con las directrices de la USP 795 para las condiciones de composición no estéril y bajo la supervisión de la Farmacia de Medicamentos en Investigación del Centro Oncológico Sitemann. Además, el etiquetado del producto se ajustaba a los requisitos de la ley de MO. Los envases de 5-FU+calcipotriol y 5-FU+vaselina se etiquetaron con un código único de tres dígitos (por ejemplo, "201").

Cada envase individual de la medicación del estudio también se etiquetará con la siguiente información general: El número de identificación del estudio del participante; La frase, "Sólo para uso tópico"; La frase, "Conservar a temperatura ambiente controlada 15-25°C (59-77°F)"; La frase, "PRECAUCIÓN: Nuevo fármaco - Limitado a uso en investigación; no para uso oftálmico o intravaginal"; y la frase "Mantener fuera del alcance de los niños". Los medicamentos se almacenarán en un armario cerrado con llave a temperatura ambiente controlada (15-25°C) en la sede de las clínicas dermatológicas de la Universidad de Washington. Los médicos tratantes no conocerán el contenido de los envases (etiquetados con un código único de tres dígitos).

Para fines de desarrollo del producto, la concentración de calcipotriol en la crema combinada puede aumentarse para lograr una mayor respuesta inmune antitumoral, pero la concentración de 5-FU presente en la formulación actual (5%) es óptima según nuestros datos experimentales.

Biopsia de piel: Antes del tratamiento (en la primera visita), se realizó una biopsia de una lesión de queratosis actínica en la cara, el cuero cabelludo o las extremidades superiores mediante un procedimiento de biopsia en sacabocados de 4 mm. Tras el período de tratamiento de 4 días (en la visita del día 5), se realizó una biopsia de una queratosis actínica tratada en la cara, el cuero cabelludo o las extremidades superiores mediante un procedimiento de biopsia en sacabocados de 4 mm para determinar la inducción de la expresión de genes y proteínas por la aplicación de calcipotriol. Se utilizó un punzón de biopsia de 4 mm para extraer la piel y se colocaron dos suturas absorbibles para cerrar la herida de la piel. Se indicó a los participantes que evitaran el lugar de la biopsia del "día 0" durante el período de tratamiento de 4 días. Las muestras de piel se dividieron por la mitad. Una mitad se utilizó para la preparación del ARN y la otra se congeló en medio OCT o se fijó en medio de formaldehído etiquetada sólo con el número de identificación del estudio y se mantuvo a -80°C en un congelador cerrado o en una oficina cerrada hasta el futuro procesamiento para la tinción regular de H&E y los análisis inmunohistoquímicos [13]. Los participantes recibieron instrucciones verbales y escritas sobre el cuidado de las heridas. Los participantes volvieron a ser vistos en 5-10 días desde el momento del procedimiento (visita del día 5 para la primera biopsia; visita de la semana 2 para las otras dos, recomendada para estos pacientes) para asegurar la curación completa de la herida, y el tratamiento de cualquier posible complicación.

Evaluación de la lesión: Todas las lesiones de queratosis actínica se evaluaron y contaron mediante un examen clínico. Los criterios de diagnóstico clínico incluían pápulas rosas gruesas, escamosas o costrosas en zonas expuestas al sol. El diagnóstico y los recuentos se documentaron mediante fotografía en cada visita y se marcaron en transparencias en la primera (día 0) y en la última (semana 8).

Resultados:

Datos demográficos de los participantes.

El número de pacientes elegibles fue de 175, el número que entró y completó el estudio fue de 132 y su distribución basada en su sitio anatómico primario se muestra en la FIG. 2. La edad, el sexo y la cantidad de fármaco utilizado (en gramos) por zona anatómica tratada se muestran en la Tabla 3. No hay diferencias significativas entre el grupo de prueba y el de control con respecto a ninguno de los parámetros enumerados.

Porcentaje de reducción del número de queratosis actínicas en cada zona anatómica.

El tratamiento de cuatro días dos veces al día con la combinación de 5-FU+calcipotriol da como resultado un aclaramiento significativamente mayor de las queratosis actínicas (QA) en comparación con el tratamiento estándar (5-FU+vaselina) a las 8 semanas de seguimiento (p<0,0001 para todos los sitios anatómicos, prueba t de Student; RUE: extremidad superior derecha; LUE: extremidad superior izquierda) (FIG. 3). Los análisis estadísticos detallados se muestran en la Tabla 4.

Eventos adversos.

El eritema es el único evento adverso observado en este estudio, que corresponde al nivel de activación inmunológica (es decir, inflamación) en la piel. Los participantes tratados con 5-FU+calcipotriol dos veces al día durante 4 días desarrollaron una marcada inflamación centrada en los lugares de las queratosis actínicas, tal como se observa justo después del último tratamiento (día 5) y 10 días después de suspender el tratamiento (semana 2)(FIG. 4). Esta inflamación se espera en base a nuestra hipótesis de que el calcipotriol induce al sistema inmunitario a atacar las QA en la piel. El porcentaje de participantes con puntuaciones de eritema de 0, 1 y 2 se muestra para cada zona anatómica tratada en la FlG.5. Hay que tener en cuenta que, debido a la corta duración del tratamiento, ningún participante experimentó puntuaciones de eritema de 3 o 4, que son las que habitualmente se observan en los pacientes tratados con 5-FU dos veces al día durante 2-3 semanas (régimen estándar de atención).

Las muestras de piel recogidas en el lugar de la queratosis actínica (QA) se utilizan para determinar el mecanismo de acción de 5-FU+calcipotriol contra la Qa .

Las secciones teñidas con hematoxilina y eosina (H&E) de las QA antes y después del tratamiento se muestran en la FIG. 6. Las imágenes muestran la acumulación de linfocitos en la dermis superior principalmente en la QA después del tratamiento (Tx) en el participante tratado con 5-FU+Calcipotriol (flecha). La tinción de inmunofluorescencia de las QA antes y después del tratamiento también muestra una fuerte expresión de TSLP en las QA después del tratamiento en los participantes tratados con 5-FU+Calcipotriol, incluyendo la acumulación de células T CD3+ cerca de la unión dérmico-epidérmica. La mayoría de estas células T son células T helper CD4+ (recuadro). K14 marca los queratinocitos de la piel.

Referencias para el ejemplo.

1. Kim, R.H. y A.W. Armstrong, Nonmelanoma skin cáncer. Dermatol Clin, 2012. 30(1): p. 125-39, ix.

2. Fenske, N.A., J. Spencer y F. Adam, Actinic keratoses: past, present and future. J Drugs Dermatol, 2010.

9(5 Suppl ODAC Conf Pt 1): p. s45-9.

3. Warino, L., et al., Frequency ans cost of actinic keratosis treatment. Dermatol Surg, 2006. 32(8): p. 1045-9.

4. Devaux, S., et al., Topical vitamin D analogues alone or in association with topical steroids for psoriasis: a systematic review. J Eur Acad Dermatol Venereol, 2012. 26 Suppl 3: p. 52-60.

5. Li, M., et al., Topical vitamin D3 and low-calcemic analogs induce thymic stromal lymphopoietin in mouse keratinocytes and trigger an atopic dermatitis. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006. 103(31): p. 11736-41.

6. Ziegler, S.F. y D. Artis, Sensing the outside world: TSLP regulates barrier immunity. Nat Immunol, 2010.

11(4): p. 289-293.

7. Demehri, S., et al., Elevated epidermal thymic stromal lymphopoietin levels establish an antitumor environment in the skin. Cancer Cell, 2012. 22(4): p. 494-505.

8. Di Piazza, M., et al., Loss of Cutaneous TSLP-Dependent Immune Responses Skews the Balance of Inflammation from Tumor Protective to Tumor Promoting. Cancer Cell, 2012. 22(4): p. 479-93.

9. Tanghetti, E.A., The role of topical vitamin D modulators in psoriasis therapy. J Drugs Dermatol, 2009. 8(8 Suppl): p. s4-8.

10. Lebwohl, M., y otros, Igenol mebutate gel for actinic keratosis. N Engl J Med, 2012. 366(11): p. 1010-9. 11. Davis, S.A., et al., Top dermatologic conditions in patients of color: an analysis of nationally representative data. J Drugs Dermatol, 2012. 11(4): p.466-73.

12. Fullerton, A., y otros, Guidelines for measurement of skin colour and erythema. A report from the Standardization Group of the European Society of Contact Dermatitis. Contact Dermatitis, 1996. 35(1): p. 1 10.

13. Soumelis, V., et al., Human epithelial cells trigger dendritic cell mediated allergic inflammation by producing TSLP. Nat Immunol, 2002. 3(7): p.673-80.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de linfopoyetina estromal tímica (TSLP), en la que el inductor de TSLP comprende entre un 0,002% y un 0,005% de calcipotriol, para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión cutánea precancerosa, en la que el tratamiento comprende la administración tópica de la composición a la lesión.

2. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el agente citotóxico es 5-fluorouracilo (5-FU).

3. Composición para su uso según la reivindicación 1 o 2, en la que la composición comprende de aproximadamente 2% a aproximadamente 5% de 5-FU.

4. Composición para su uso según cualquier reivindicación anterior, en la que la lesión cutánea precancerosa es una queratosis actínica.

5. Composición para su uso según cualquier reivindicación anterior, en la que la composición se administra dos veces al día durante 4 a 6 días.

6. Una composición que comprende un agente citotóxico y un inductor de TSLP para su uso en la prevención de la transición de una lesión cutánea precancerosa a un cáncer de piel en un sujeto identificado con una o más lesiones cutáneas precancerosas, en la que el inductor de TSLP comprende entre un 0,002% y un 0,005% aproximadamente de calcipotriol, y dicho uso comprende la administración tópica de la composición a la lesión cutánea precancerosa.

7. Composición para su uso según la reivindicación 6, en la que la lesión cutánea precancerosa es queratosis actínica y el cáncer de piel es carcinoma de células escamosas; y/o preferentemente en la que dicha composición se administra dos veces al día durante 4 a 6 días.

8. Composición para su uso según la reivindicación 7, en la que el agente citotóxico es 5-FU, que está preferentemente presente en la composición de aproximadamente 2% a aproximadamente 5%.