ES2900302T3

ES2900302T3 - Fracciones de plasma como terapia para el crecimiento y la progresión del tumor

Info

Publication number: ES2900302T3
Application number: ES17790474T
Authority: ES
Inventors: Steven Braithwaite; S Minami; Joseph Mccracken
Original assignee: Alkahest Inc
Current assignee: Alkahest Inc
Priority date: 2016-04-28
Filing date: 2017-04-27
Publication date: 2022-03-16
Anticipated expiration: 2037-04-27
Also published as: EP3426265B1; US10245285B2; EP3426265A4; EP3995141A1; EP4353320B1; US20170340671A1; ES2975517T3; WO2017189919A2; US10905717B2; US20210113612A1; EP4353320A2; EP4353320A3; EP3426265A2; ES3037703T3; EP3995141B1; US20190167719A1

Abstract

Una Fracción de Proteína Plasmática (FPP) para su uso en la prevención de un cáncer tímico, en la que la FPP comprende una solución estéril de proteína compuesta de albúmina y globulina, derivada del plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos el 83 % con no más del 17 % de globulinas y otras proteínas plasmáticas, preferentemente en la que la FPP no comprende más del 1 % de gammaglobulina según se determina por electroforesis.

Description

DESCRIPCIÓN

Fracciones de plasma como terapia para el crecimiento y la progresión del tumor

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] Esta invención se refiere a la prevención del cáncer tímico. En particular, la invención se refiere a la fracción de proteínas plasmáticas (PPF) para su uso en la prevención del cáncer tímico.

ANTECEDENTES

[0002] Lo siguiente se ofrece sólo como información de fondo y no se admite como técnica anterior a la presente invención.

[0003] El cáncer es una de las enfermedades más comunes que afectan a la humanidad, y es una de las principales causas de muerte en todo el mundo. Sólo en Estados Unidos, es la segunda causa de muerte, por detrás de las enfermedades coronarias.

[0004] El envejecimiento de un organismo va acompañado de una acumulación de cambios a lo largo del tiempo. Se trata de un proceso multifactorial que provoca el deterioro progresivo de los sistemas de órganos y tejidos corporales. El envejecimiento es el resultado de factores genéticos y ambientales, como la dieta, el ejercicio, la exposición a microorganismos, los contaminantes químicos y la exposición a la radiación natural y artificial. (Nigam Y, et al., J. Aging Research, Vol. 2012, Art. ID No. 468469.). El envejecimiento se compone de tres grupos de cambios que incluyen: cambios en los mecanismos homeostáticos, como la temperatura corporal, la sangre y los volúmenes de fluido extracelular; disminución de la masa de los órganos; y disminución o pérdida de las reservas de los sistemas corporales. Se cree que este último cambio coincide con el deterioro de la capacidad de adaptación a retos externos como la cirugía u otros tipos de traumatismos. El reto es mantener la salud de la población mundial que envejece para conservar la calidad de vida así como reducir la carga de la infraestructura médica. (Véase id.)

[0005] El cáncer acompaña frecuentemente al envejecimiento y es una enfermedad de crecimiento celular incontrolado. De hecho, el mayor factor de riesgo para desarrollar un cáncer es el envejecimiento. Más del 60% de los cánceres en Estados Unidos se dan en personas de 65 años o más.

[0006] Se considera que el cáncer comprende seis rasgos distintivos: (1) mantener la señalización proliferativa; (2) evadir los supresores del crecimiento; (3) activar la invasión y la metástasis; (4) permitir la inmortalidad replicativa; (5) inducir la angiogénesis; y (6) resistir la muerte celular. (Hanahan D., et al., Cell Vol. 144, (2011) pp. 646-74). En las últimas décadas, han surgido diversos tratamientos contra el cáncer para contrarrestar estos procesos. Por ejemplo, el cáncer suele tratarse mediante uno o varios de los siguientes procedimientos: cirugía, quimioterapia (incluida la terapia con pequeñas moléculas dirigida a objetivos específicos), radioterapia, inmunoterapia y terapia con anticuerpos monoclonales. La localización y el grado del tumor, así como el estadio de la enfermedad, suelen determinar el tipo de terapia aplicada. Aunque se han realizado progresos apreciables desde que se declaró la "Guerra contra el Cáncer" hace más de cuatro décadas, existe la necesidad de nuevas terapias, en particular terapias con bases naturales con capacidad para elevar la calidad de vida, mejorar el cumplimiento y producir menos efectos secundarios que los que presentaban las anteriores terapias contra el cáncer.

[0007] Se ha observado que el cáncer y la autoinmunidad comparten una relación bidireccional. (Tal Sapir, et al., Uncovering the Hidden Potential of Intravenous Immunogloblin as an Anticancer Therapy, 29 Clin. Rev. Allergy & Immunology 307 (2005)). En consecuencia, se ha informado de que la administración de inmunoglobulina intravenosa (comúnmente abreviada como IVIg, IVIG o IGIV), un preparado de plasma humano, tiene ciertos efectos observables en la regresión del cáncer. (Id.) Se cree que esta función autoinmune está mediada por los efectos que la IVIg tiene sobre las células T del sujeto. (Jagadeesh Bayry, et al., Intravenous Immunoglobulin Expands Regulatory T Cells in Autoimmune Rheumatic Disease, 32 J. Rheumatology 450 (2012)).

[0008] Se han descrito enfoques adicionales para el tratamiento del cáncer mediante la administración de un producto de plasma sanguíneo que incluye composiciones ricas en plaquetas (US 2013/0121979, Mishra WO 2011/028733, Mishra), agentes antitumorales derivados del suero de caimanes o cocodrilos (WO 03/007874, Natural Cure Ltd.), preparados inmunitarios para tumores (EP 0 091 784, Baylor College Medicine) o fracciones de plasma (US 2007/117180, Morikawa etal.).

SUMARIO

[0009] La presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas.

[0010] La presente divulgación, entre otras cosas, describe un procedimiento de uso de plasma sanguíneo y fracciones de plasma sanguíneo para el tratamiento del cáncer. Aunque la IVIg es un componente conocido del plasma sanguíneo, la presente invención describe un uso para la prevención del cáncer independiente de la IVIg. En primer lugar, por ejemplo, las realizaciones de la invención que comprenden fracciones de plasma sanguíneo han sido agotadas en IVIg. Además, el plasma sanguíneo y las fracciones de plasma sanguíneo utilizadas en ratones inmunocomprometidos que carecen de células T, células B y células asesinas naturales funcionales siguen mostrando una inhibición del crecimiento tumoral. Además, los niveles estándar de tratamiento con IVIg administrados en los estudios sobre el cáncer (2g/kg) son casi 25 veces superiores a los niveles de IVIg presentes en el plasma sanguíneo. Además, las realizaciones de la invención que comprenden fracciones de plasma sanguíneo no contienen más del 1% de gammaglobulina (IVIg), mientras que los productos estándar de IVIg contienen al menos el 95% de IVIg. (A. Buchachery W. Kaar; Intravenous Immunoglobulin Gfrom Human Plasma-Purification Concepts and Important Quality Criteria; PRODUCTION OF PLASMA PROTEINS FOR THERAPEUTIC USE; Ch. 13 at 192 (J. BERTOLINI ET AL, EDS., 2013).

[0011] El plasma sanguíneo también puede fraccionarse en fracciones de plasma sanguíneo, muchas de las cuales están efectivamente agotadas en IVIg. En consecuencia, la presente invención aborda las deficiencias de los actuales tratamientos contra el cáncer, entre otras cosas, utilizando fracciones de plasma sanguíneo agotadas en IVIg y de factores de coagulación para tratar el crecimiento y la progresión del cáncer. Dado que las realizaciones de la presente invención se derivan naturalmente de la sangre humana, su eficacia en el tratamiento del cáncer se ve aumentada por la reducción significativa o la inexistencia de efectos secundarios, así como por el aumento del cumplimiento del paciente.

[0012] La presente divulgación se refiere en general al tratamiento de enfermedades tumorigénicas mediante el uso de productos sanguíneos, como el plasma (incluyendo productos que contienen plasma joven), o fracciones de plasma. La presente invención reconoce la necesidad de nuevos tratamientos de la enfermedad oncológica, particularmente tratamientos con bases naturales que mejoren la calidad de vida, mejoren el cumplimiento y presenten menos efectos secundarios que las terapias actuales contra el cáncer. Derivada del plasma sanguíneo y de fracciones de plasma sanguíneo, la presente invención se refiere a una solución para las deficiencias de las terapias actuales mediante la utilización de plasma sanguíneo o de fracciones de plasma sanguíneo con eficacia antitumoral.

[0013] En una divulgación, el producto sanguíneo puede ser plasma sanguíneo derivado de sangre entera. En otra divulgación, el producto sanguíneo puede ser plasma sanguíneo derivado de un grupo de donantes jóvenes, por ejemplo, plasma joven o productos sanguíneos que contienen plasma joven.

[0014] En otra divulgación, el producto sanguíneo puede ser fracciones de plasma sanguíneo, tal como una de varias fracciones de plasma sanguíneo obtenidas de un proceso de fraccionamiento de la sangre, tal como el proceso de fraccionamiento de Cohn descrito a continuación. En una realización, la fracción de plasma sanguíneo puede ser del tipo, aquí referido como "Fracción de Plasma", que es una solución compuesta por albúmina humana normal, alfa y beta globulinas, gammaglobulina, y otras proteínas ya sea individualmente o como complejos. En otra realización, la fracción de plasma sanguíneo puede ser un tipo de fracción de plasma sanguíneo conocido por los expertos en la técnica como "fracción de proteínas plasmáticas" (PPF). En otra divulgación, la fracción de plasma sanguíneo puede ser la fracción de "solución de albúmina humana" (HAS). En otra realización, la fracción de plasma sanguíneo puede ser una en la que se eliminen sustancialmente todos los factores de coagulación para conservar la eficacia de la fracción con un riesgo reducido de trombosis. Las realizaciones de la divulgación también pueden incluir la administración, por ejemplo, de una fracción derivada de un conjunto de donantes, tales donantes de una edad media o de un intervalo de edad específico. Otra realización de la divulgación puede incluir el seguimiento de la mejora de un sujeto diagnosticado con un cáncer que ha sido tratado con una fracción de plasma sanguíneo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0015] Los dibujos adjuntos ilustran realizaciones de la invención y, junto con la descripción, sirven para explicar la invención. Estos dibujos se ofrecen a título ilustrativo y no limitativo; se subraya que las diversas características de los dibujos pueden no estar a escala.

Figura 1. La figura 1 representa el cambio en el peso corporal de cuatro grupos de ratones tratados por separado, como porcentaje del peso corporal inicial determinado una semana antes del tratamiento.

Figura 2. La figura 2 representa la supervivencia de cada grupo de tratamiento determinada por el punto de tiempo de la muerte de cada ratón en relación con la línea de tiempo del estudio.

Figura 3. La figura 3 representa el peso de los tumores tímicos de los ratones al final de un estudio en el que se administró solución salina, plasma joven o plasma viejo a ratones viejos.

Figura 4. La figura 4 representa el tamaño de los tumores tímicos de los ratones al final de un estudio en el que se administró solución salina, plasma joven o plasma viejo a ratones viejos.

Figura 5. La figura 5 representa la supervivencia de los ratones NODscid tratados con solución salina (línea continua) o con PPF1 (línea discontinua) a partir de los 6 meses de edad.

Figura 6. La figura 6 informa delpeso de los tumores tímicos extirpados a ratones NODscid tratados con PPF1 o con controles salinos.

Figura 7. La figura 7 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer de colon CXF.

Figura 8. La figura 8 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer gástrico GXF.

Figura 9. La figura 9 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer de hígado LIXF.

Figura 10. La figura 10 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular del linfoma de Burkitt LYXFNH.

Figura 11. La figura 11 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer de páncreas pAx F.

Figura 12. La figura 12 informa del efecto dependiente de la dosis de plasma joven y PPF1 sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer renal RXF.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0016] La presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas.

[0017] A pesar de la Guerra contra el Cáncer declarada por el Gobierno de los Estados Unidos hace más de cuarenta años, el cáncer sigue siendo una enfermedad mortal y muy extendida. Las terapias actuales, como la quimioterapia tradicional y la terapia dirigida con pequeñas moléculas, siguen teniendo una aplicación limitada por sus devastadores efectos secundarios y el reducido cumplimiento de los pacientes. Se necesitan nuevas terapias, sobre todo aquellas que, además de ser eficaces, tengan una base natural, aumenten la calidad de vida, mejoren el cumplimiento de los pacientes y reduzcan los duros efectos secundarios.

[0018] La divulgación se refiere a procedimientos de tratamiento del cáncer mediante la administración de productos sanguíneos, tales como productos de plasma sanguíneo, por ejemplo, plasma sanguíneo o fracciones de plasma sanguíneo. Otra divulgación se refiere al tratamiento de un paciente diagnosticado de cáncer con productos sanguíneos, como productos de plasma sanguíneo, por ejemplo, plasma sanguíneo o fracciones de plasma sanguíneo. Otra divulgación se refiere al tratamiento de un paciente diagnosticado de cáncer con una fracción de proteína plasmática (PPF). Otra divulgación se refiere al tratamiento de un paciente diagnosticado de cáncer con productos proteicos plasmáticos enriquecidos con proteínas.

1. Introducción

[0019] Se divulgan procedimientos y composiciones para tratar el cáncer en un sujeto. Aspectos de los procedimientos incluyen la administración de una composición al sujeto de una manera suficiente para tratar al sujeto del cáncer, la composición que comprende componentes de plasma incluyendo, plasma sanguíneo, o fracciones del mismo, o proteínas identificadas en plasma o fracciones de plasma que exhiben eficacia antitumoral.

[0020] La divulgación se relaciona con la identificación y el descubrimiento de procedimientos y composiciones para el tratamiento y/o la prevención del cáncer y la progresión del cáncer. En el presente documento se describen composiciones para el tratamiento de sujetos que padecen dicha enfermedad, lo que constituye un aspecto de la presente invención. Los procedimientos y composiciones descritos en el presente documento son útiles para: prevenir el cáncer; mejorar los síntomas del cáncer; frenar la progresión del cáncer, incluyendo las metástasis; y/o revertir la progresión del cáncer o el crecimiento del tumor. Una implementación de la invención incluye el uso de fracciones de plasma sanguíneo como tratamiento, tales como una o más fracciones o efluentes obtenidos de procesos de fraccionamiento de sangre como el proceso de fraccionamiento de Cohn descrito a continuación.

[0021] Otra realización de la divulgación incluye el uso de la Fracción Plasmática (una solución compuesta por albúmina humana normal, alfa y beta globulinas, gammaglobulina y otras proteínas, ya sea individualmente o como complejos, en lo sucesivo denominada "Fracción Plasmática"). Otra realización de la invención incluye la Fracción de Proteína del Plasma (PPF) para su uso como tratamiento. Otra divulgación incluye el uso de la fracción de solución de albúmina humana (HAS) como tratamiento. Aún otra divulgación incluye el uso de efluentes de procesos de fraccionamiento de sangre como el efluente I o el efluente II/NI descritos a continuación. Una realización adicional incluye una fracción de plasma sanguíneo de la que se han eliminado sustancialmente todos los factores de coagulación con el fin de retener la eficacia mientras se reduce el riesgo de trombosis (por ejemplo, véase Solicitud de patente de EE.UU. n° 62/236.710 y 62/376.529).

[0022] Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, a la décima de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario, entre los límites superior e inferior de ese intervalo también se divulga específicamente. Cada intervalo menor entre cualquier valor declarado o valor intermedio en un intervalo declarado y cualquier otro valor declarado o intermedio en ese intervalo declarado está comprendido dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse o excluirse de forma independiente en el intervalo, y cada intervalo en el que uno, ninguno o ambos límites se incluyan en los intervalos más pequeños también se engloba dentro de la invención, sin perjuicio de cualquier límite específicamente excluido en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, los intervalos que excluyen uno o ambos límites incluidos también se incluyen en la invención. "Entre", cuando se utiliza en el contexto de un intervalo numérico, incluye todos los números dentro del intervalo, incluidos los límites superior e inferior, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

2. Definiciones

[0023] A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por una persona con conocimientos normales en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque cualquier procedimiento y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento puede utilizarse en la práctica o en las pruebas de la presente invención, se describen ahora algunos procedimientos y materiales potenciales y preferidos.

[0024] Cabe señalar que, tal y como se utiliza en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno, una" y "el, la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y la referencia a "el péptido" incluye la referencia a uno o más péptidos y equivalentes de los mismos, por ejemplo, polipéptidos, conocidos por aquellos que tienen habilidad en la técnica, y así sucesivamente.

[0025] Al describir los procedimientos de la presente invención, los términos "huésped", "sujeto", "individuo" y "paciente" se utilizan indistintamente y se refieren a cualquier mamífero que necesite dicho tratamiento según los procedimientos divulgados. Dichos mamíferos incluyen, por ejemplo, humanos, ovinos, bovinos, equinos, porcinos, caninos, felinos, primates no humanos, ratones y ratas. En ciertas realizaciones, el sujeto es un mamífero no humano. En algunas realizaciones, el sujeto es un animal de granja. En otras realizaciones, el sujeto es una mascota. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero. En algunos casos, el sujeto es humano. Otros sujetos pueden incluir animales domésticos (por ejemplo, perros y gatos), ganado (por ejemplo, vacas, cerdos, cabras, caballos y similares), roedores (por ejemplo, ratones, cobayas y ratas, como en los modelos animales de enfermedades), así como primates no humanos (por ejemplo, chimpancés y monos). Como tal, los sujetos de la invención, incluyen pero no se limitan a los mamíferos, por ejemplo, los seres humanos y otros primates, como los chimpancés y otras especies de simios y monos; y similares, donde en ciertas realizaciones el sujeto son los seres humanos. El término sujeto también incluye a una persona u organismo de cualquier edad, peso u otra característica física, donde los sujetos pueden ser un adulto, un niño, un bebé o un recién nacido.

[0026] Por "joven", "individuo joven" o "donante joven" se entiende un individuo que tiene una edad cronológica de 40 años o menos, por ejemplo, 35 años o menos, incluso 30 años o menos, por ejemplo, 25 años o menos o 22 años o menos. En algunos casos, el individuo que sirve como fuente del producto sanguíneo que contiene plasma joven es uno que tiene 10 años o menos, por ejemplo, 5 años o menos, incluyendo 1 año o menos. En algunos casos, el sujeto es un recién nacido y la fuente del producto plasmático es el cordón umbilical, donde el producto plasmático se recoge del cordón umbilical del recién nacido. Como tal, "joven" e "individuo joven" pueden referirse a un sujeto que tiene entre 0 y 40 años, por ejemplo, 0, 1,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 años. En otros casos, "joven", "individuo joven" y "donante joven" pueden referirse a una edad biológica (en contraposición a la cronológica), como un individuo que no ha presentado los niveles de citoquinas inflamatorias en el plasma que presentan los individuos comparativamente mayores. Por el contrario, los términos "joven" e "individuo joven" pueden referirse a una edad biológica (en contraposición a la cronológica), como por ejemplo un individuo que presenta mayores niveles de citoquinas antiinflamatorias en el plasma en comparación con los niveles de individuos comparativamente mayores. A modo de ejemplo, y no de limitación, la citoquina inflamatoria es la Eotaxina, y la diferencia de veces entre un sujeto joven o un individuo joven y los individuos mayores es de al menos un 20%. Del mismo modo, la diferencia de veces entre individuos mayores y más jóvenes en otras citocinas inflamatorias puede utilizarse para referirse a una edad biológica. (Véase la Pat. de e E.UU. Solicitud n° 13/575.437). Por lo general, el individuo está sano, por ejemplo, no tiene ninguna neoplasia hematológica o enfermedad autoinmune en el momento de la recolección. En otros casos, "joven", "individuo joven" y "donante joven" pueden referirse a una edad relativa entre el donante o grupo de donantes "joven" y el sujeto que recibe el tratamiento. A modo de ejemplo, y no como limitación, el grupo de donantes puede tener un intervalo de edad superior que sea 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 años más joven que el sujeto a tratar. Otro ejemplo es que el grupo de donantes puede tener un intervalo de edad promedio o medio que es más joven que la edad del sujeto a tratar.

[0027] "Tratamiento", "tratar" y similares significan que se logra al menos una mejora de uno o más síntomas asociados con un cáncer que afecta al sujeto, donde mejora se usa en un sentido amplio para referirse al menos a una reducción en la magnitud de un parámetro, por ejemplo, un síntoma asociado con el cáncer que se está tratando. Como tal, "tratamiento", "tratar" y similares también incluyen situaciones en las que una condición patológica, o al menos los síntomas asociados con ella, se inhiben completamente, por ejemplo, se evita que ocurra, o se detiene, por ejemplo, se termina, de tal manera que el sujeto ya no sufre del cáncer, o al menos los síntomas que están asociados con la enfermedad. En algunos casos, "tratamiento", "tratar" y similares se refieren a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico en cuanto a la prevención total o parcial de una enfermedad o síntoma de la misma y/o puede ser terapéutico en cuanto a la curación parcial o total de una enfermedad y/o efecto adverso asociado a la enfermedad. "Tratamiento" puede ser cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero, e incluye: (a) evitar que la enfermedad se produzca en un sujeto que puede estar predispuesto a padecerla pero al que aún no se le ha diagnosticado; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; o (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar su regresión. El tratamiento puede dar lugar a una variedad de manifestaciones físicas diferentes, por ejemplo, la modulación de la expresión génica, la regresión del crecimiento o el tamaño de los tumores o el recuento de células cancerosas, la inhibición de la metástasis, la disminución del dolor asociado a un cáncer, etc. En algunas realizaciones se produce un tratamiento de la enfermedad en curso, donde el tratamiento estabiliza o reduce los síntomas clínicos indeseables del paciente. Este tratamiento puede realizarse antes de la pérdida completa de la función de los tejidos afectados. La terapia del sujeto puede ser administrada durante la etapa sintomática de la enfermedad, y en algunos casos después de la etapa sintomática de la enfermedad.

[0028] Productos sanguíneos que comprenden componentes de plasma. En la práctica de los procedimientos divulgados, se administra un producto sanguíneo que comprende componentes de plasma a un individuo que lo necesita, por ejemplo, un individuo que sufre o corre el riesgo de sufrir un cáncer. Como tal, las realizaciones de la invención incluyen la administración de un producto sanguíneo que comprende componentes de plasma de un individuo (el "individuo donante", o "donante") a un individuo al menos con riesgo de sufrir o padecer un cáncer (el "individuo receptor" o "receptor"). Por "producto sanguíneo con componentes plasmáticos" se entiende cualquier producto derivado de la sangre que comprenda plasma (por ejemplo, sangre entera, plasma sanguíneo o fracciones de la misma), cuando en algunos casos el producto no es sangre entera. El término "plasma" se utiliza en su sentido convencional para referirse al componente líquido de color pajizo/amarillo pálido de la sangre, compuesto por un 92% de agua, un 7% de proteínas como la albúmina, la gammaglobulina, el factor antihemofílico y otros factores de coagulación, y un 1% de sales minerales, azúcares, grasas, hormonas y vitaminas. Ejemplos no limitantes de productos sanguíneos que contienen plasma adecuados para su uso en los procedimientos en cuestión incluyen la sangre entera tratada con anticoagulantes (por ejemplo, EDTA, citrato, oxalato, heparina, etc.), productos sanguíneos producidos mediante el filtrado de la sangre entera para eliminar los glóbulos blancos ("leucorreducción"), productos sanguíneos que consisten en plasma derivado de la plasmaféresis o apéresis, plasma fresco congelado, productos sanguíneos que consisten esencialmente en plasma purificado y productos sanguíneos que consisten esencialmente en fracciones de plasma. En algunos casos, el producto plasmático que se emplea es un producto plasmático no sanguíneo, lo que significa que el producto no es sangre entera, ya que carece de uno o más componentes que se encuentran en la sangre completa, como eritrocitos, leucocitos, etc., al menos en la medida en que estos componentes están presentes en la sangre completa. En algunos casos, el producto plasmático es sustancialmente, si no completamente, acelular, donde en tales casos el contenido celular puede ser

[0029] 5% en volumen o menos, tal como 1% o menos, incluyendo 0,5% o menos, donde en algunos casos las fracciones de plasma acelular son aquellas composiciones que carecen completamente de células, es decir, no incluyen células.

[0030] Recolección de productos sanguíneos que comprenden componentes plasmáticos. Las realizaciones de los procedimientos descritos en el presente documento incluyen la administración de productos sanguíneos que comprenden componentes de plasma que pueden proceder de donantes, incluidos voluntarios humanos. El término "de origen humano" puede referirse a estos productos. Los procedimientos de obtención de plasma que comprende productos sanguíneos de los donantes son bien conocidos en la técnica. (Véase, por ejemplo, AABB TECHNICAL MANUAL, (MarkA. Fung, etal., eds., 18a ed. 2014)).

[0031] En una realización, las donaciones se obtienen por venopunción. En otra realización, la venopunción es solamente una única venopunción. En otra realización, no se emplea el reemplazo de volumen salino. En una realización, se utiliza el proceso de plasmaféresis para obtener el plasma que comprende los productos sanguíneos. La plasmaféresis puede consistir en la extracción de un volumen de plasma ajustado al peso con la devolución de componentes celulares al donante. En una realización, se utiliza citrato de sodio durante la plasmaféresis para evitar la coagulación de las células. El volumen de plasma recolectado de un donante está preferentemente entre 690 y 880 ml después de la administración de citrato, y se coordina preferentemente con el peso del donante.

3. Fracciones del plasma

[0032] Durante la Segunda Guerra Mundial, surgió la necesidad de un expansor de plasma estable que pudiera ser empleado en el campo de batalla cuando los soldados perdían grandes cantidades de sangre. Como resultado, se desarrollaron procedimientos de preparación de plasma secado por congelación. Sin embargo, el uso del plasma secado por congelación era difícil en situaciones de combate, ya que la reconstitución requería agua estéril. Como alternativa, el Dr. E.J. Cohn sugirió que se podía utilizar la albúmina y preparó una solución estable lista para usar que podía introducirse inmediatamente para el tratamiento del choque. (Véase JOHAN VANDERSANd E, CURRENT APPROACHES TO THE PREPARATION OF PLASMA FRACTIONS in (BIOTECHNOLOGY OF BLOOD) 165 (Jack Goldstein ed., 1st ed.) 1991)). El procedimiento del Dr. Cohn para purificar las fracciones de plasma utilizó etanol frío por su efecto desnaturalizador, y emplea cambios de pH y temperatura para lograr la separación.

[0033] Una realización de los procedimientos descritos en el presente documento incluye la administración de fracciones de plasma a un sujeto. El fraccionamiento es el proceso por el que se separan ciertos subconjuntos de proteínas del plasma. La tecnología de fraccionamiento es conocida en la técnica y se basa en los pasos desarrollados por Cohn et al. durante la década de 1940. (E. Cohn, Preparation and properties of serum and plasma proteins. IV. Un sistema para la separación en fracciones de los componentes proteicos y lipoproteicos de los tejidos y fluidos biológicos. 68 J Am Chem Soc 459 (1946)). En este proceso intervienen varias etapas, cada una de las cuales implica concentraciones específicas de etanol, así como cambios de pH, temperatura y osmolalidad que dan lugar a una precipitación selectiva de las proteínas. Los precipitados también se separan mediante centrifugación o precipitación. El "proceso de fraccionamiento de Cohn" original implicaba la separación de las proteínas a través de precipitados en cinco fracciones, designadas como fracción I, fracción II+IN, fracción IV-1, fracción IV-4 y fracción V. La albúmina era el producto final originalmente identificado (fracción V) de este proceso. Cada fracción (o efluente de una etapa de separación previa) contiene o puede contener fracciones de proteínas de utilidad terapéutica. (Véase Thierry Burnouf, Modern Plasma Fractionation, 21(2) Transfusion Medicine Reviews 101 (2007) Adil Denizli, Plasma fractionation: conventional and chromatographic methods for albumin purification, 4 J. Biol. & Chem. 315, (2011); y T. Brodniewicz-Proba, Human Plasma Fractionation and the Impact of New Technologies on the Use and Quality of Plasma-derived Products, 5 Blood Reviews 245 (1991), y Patente de EE.UU. n° 3869431, 5110907, 5219995, 7531513 y 8772461). Se pueden ajustar los parámetros experimentales anteriores para obtener fracciones de proteínas específicas. El uso de operaciones de precipitación y secado en el fraccionamiento del plasma permite preparar la fracción final estable de proteínas del plasma humano como una solución de casi cualquier concentración de proteínas. (Hink J.H., Jr., et al., Preparation and Properties of a Heat-Treated Human Plasma Protein Fraction, VOX SANGUINIS 2, 174, (1957)).

[0034] Más recientemente, el fraccionamiento ha alcanzado una mayor complejidad. Este reciente aumento de la complejidad se ha producido a través de: la introducción de la cromatografía, que ha dado lugar al aislamiento de nuevas proteínas a partir de fracciones existentes como el crioprecipitado, el plasma criopobre y las fracciones de Cohn; el aumento de la recuperación de IgG mediante la integración de la cromatografía y el proceso de fraccionamiento en etanol; y la reducción/inactivación/eliminación viral. (Id.) Para capturar las proteínas a pH fisiológico y concentración iónica, se puede utilizar la cromatografía de intercambio aniónico. Esto preserva la actividad funcional de las proteínas y/o las fracciones de proteínas. La heparina y los anticuerpos monoclonales también se utilizan en la cromatografía de afinidad. Un experto en la técnica reconocerá que los parámetros descritos anteriormente pueden ajustarse para obtener fracciones que contengan proteínas plasmáticas específicamente deseadas.

[0035] El plasma sanguíneo puede ser fraccionado en un entorno industrial. El plasma congelado se descongela en 1 ° C a 4 °C. Se aplica una centrifugación refrigerada continua al plasma descongelado y se aísla el crioprecipitado. El crioprecipitado recuperado se congela a -30 °C o menos y se almacena. El plasma pobre en crioprecipitado ("criopobre") se procesa inmediatamente para la captura (mediante, por ejemplo, cromatografía primaria) de factores de coagulación lábiles como el complejo del factor IX y sus componentes, así como de inhibidores de la proteasa como la antitrombina y el inhibidor de la esterasa C1. La centrifugación en serie y el aislamiento del precipitado pueden aplicarse en pasos posteriores. Dichas técnicas son conocidas por un experto en la técnica y se describen, por ejemplo, en las Patentes de EE.UU. núm. 4624780, 5219995, 5288853 y Solicitud de patente de EE.UU. núm. 20140343255 y 20150343025.

[0036] En una realización, la fracción plasmática puede comprender una fracción plasmática que contenga una concentración sustancial de albúmina (por ejemplo, Fracción de Proteína Plasmática (humana), Albúmina (humana)). En otra realización, la fracción de plasma puede comprender una fracción de plasma que contenga una concentración sustancial de IgG o inmunoglobulina intravenosa (IGIV). En otra realización, la fracción plasmática puede comprender una fracción plasmática de IGIV que ha sido sustancialmente reducida de inmunoglobulina (IgG) por procedimientos bien conocidos por un experto en la técnica, como por ejemplo, la reducción de proteínas mediada por la proteína A. (Véase Keshishian, H., et al., Multiplexed, Quantitative Workflow for Sensitive Biomarker Discovery in Plasma Yields Novel Candidates for Early Myocardial Injury, Molecular & Cellular Proteomics, 14 at 2375-93 (2015)). En una realización adicional, la fracción de plasma sanguíneo puede ser una en la que se eliminen sustancialmente todos los factores de coagulación para conservar la eficacia de la fracción con un riesgo reducido de trombosis. Por ejemplo, la fracción de plasma puede ser una fracción de plasma como se describe en la Patente de Estados Unidos n° 62/376.529 presentada el 18 de agosto de 2016.

4. Productos de albúmina

[0037] Para aquellos que tienen una experiencia normal en la técnica, hay dos categorías generales de productos de plasma de albúmina ("APP"): fracción de proteína de plasma (PPF) y solución de albúmina humana (HAS). La PPF se deriva de un proceso con un mayor rendimiento que la HAS, pero tiene una pureza mínima de albúmina menor que la HAS (>83% para la PPF y > 95% para la HAS). (Production of human albumin solution: a continually developing colloid, P. Matejtschuk et al., British J. of Anaesthesia 85(6): 887-95, en 888 (2000)). Además, algunos han señalado que la PPF tiene una desventaja debido a la presencia de "contaminantes" proteicos como la PKA. Id. Como consecuencia, los preparados de PPF han perdido popularidad como productos de plasma de albúmina, e incluso han sido retirados de las farmacopeas de algunos países. Id. En contra de estas preocupaciones, la invención hace un uso beneficioso de estos "contaminantes" Además de las a, p y y globulinas, así como de la mencionada PKA, los procedimientos de la invención utilizan proteínas adicionales u otros factores dentro de los "contaminantes" que son eficaces en el tratamiento del cáncer.

[0038] Los expertos en la técnica reconocerán que existen, o han existido, varias fuentes comerciales de PPF (los "preparados comerciales de PPF") Entre ellos se encuentran Plasma-Plex® PPF (Armour Pharmaceutical Co., Tarrytown, NY), Plasmanate™ PPF (Grifols, Clayton, NC), Plasmatein™ PPF (Alpha Therapeutics, Los Ángeles, CA) y Protenate™ PPF (Baxter Labs, Inc. Deerfield, IL).

[0039] Los expertos en la técnica también reconocerán que existen, o han existido, varias fuentes comerciales de HAS (los "Preparados comerciales de HAS") Entre ellos se encuentran Albuminar™ HAS (CSL Behring), AlbuRx™ HAS (CSL Behring), Albutein™ HAS (Grifols, Clayton, NC), Buminate™ HAS (Baxatla, Inc., Bannockburn, IL), Flexbumin™ HAS (Baxatla, Inc., Bannockburn, IL) y Plasbumin™ HAS (Grifols, Clayton, NC).

A. Fracción de proteína plasmática (humana) (PPF)

[0040] Según la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos ("FDA"), "Fracción de proteína plasmática (humana)", o PPF, es el nombre propio del producto definido como "una solución estéril de proteína compuesta de albúmina y globulina, derivada del plasma humano" (Código de Reglamentos Federales "CFR" 21 CFR 640.90). El material fuente de PPF es el plasma recuperado de la Sangre Entera preparada como se prescribe en 21 CFR 640.1 - 640.5 , o el Plasma Fuente preparado como se prescribe en 21 CFR 640.60 - 640.76.

[0041] La PPF se somete a pruebas para determinar si cumple con las siguientes normas según 21 CFR 640.92 :

(a) El producto final será una solución de proteínas del 5,0 /- 0,30 por ciento; y

(b) La proteína total del producto final estará compuesta por un mínimo del 83% de albúmina y un máximo del 17% de globulinas. No más del 1% de la proteína total será gammaglobulina. La composición de proteína se determina mediante un procedimiento que ha sido aprobado para cada fabricante por el Director del Centro de Evaluación e Investigación Biológica de la Administración de Alimentos y Medicamentos.

[0042] Tal como se utiliza en el presente documento, la "Fracción de Proteína Plasmática" o "PPF" se refiere a una solución estéril de proteína compuesta por albúmina y globulina, derivada del plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos el 83% con no más del 17% de globulinas (incluidas las a1, a2, p y y globulinas) y otras proteínas plasmáticas, y no más del 1% de gammaglobulina según lo determinado por electroforesis. (Hink, J.H., Jr. et al., Preparation and Properties of a Heat-Treated Human Plasma Protein Fraction, Vox SANGUINIS 2(174) (1957)). La PPF también puede referirse a una forma sólida, que cuando se suspende en el disolvente, tiene una composición similar. La fracción de globulina total puede determinarse restando la albúmina de la proteína total. (Busher, J., Serum Albumin and Globulin, CLINICAL METHODS: THE HISTORY, PHYSICAL, AND LABORATORY EXAMINATIONS, Chapter 10, Walker HK, Hall WD, Hurst JD, eds. (1990)).

B. Albúmina (humana) (HAS)

[0043] Según la FDA, "Albúmina (Humana)" (también referida aquí como "HAS") es el nombre propio del producto definido como "solución estéril de la albúmina derivada del plasma humano" (Código de Regulaciones Federales "CFR" 21 CFR 640.80) El material fuente para la Albúmina (Humana) es el plasma recuperado de la Sangre Entera preparado como se prescribe en 21 CFR 640.1-640.5, o el Plasma Fuente preparado como se prescribe en 21 CFR 640.60 640.76. Otros requisitos para la albúmina (humana) se enumeran en 21 CFR 640.80 - 640.84.

[0044] La albúmina (humana) se prueba para determinar si cumple con las siguientes normas según 21 CFR 640.82:

(a) Concentración de proteínas. El producto final deberá ajustarse a una de las siguientes concentraciones: 4,0 /-0,25 por ciento; 5,0 /-0,30 por ciento; 20,0 /-1,2 por ciento; y 25,0 /-1,5 por ciento de solución de proteínas.

(b) Composición de proteína. Al menos el 96 por ciento de la proteína total del producto final deberá ser albúmina, según un procedimiento que haya sido aprobado para cada fabricante por el Director del Centro de Evaluación e Investigación Biológica de la Administración de Alimentos y Medicamentos.

[0045] Tal como se utiliza aquí, "albúmina (humana)" o "HAS" se refiere a una solución estéril de proteína compuesta de albúmina y globulina, derivada del plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos el 95%, con no más del 5% de globulinas (incluyendo a1, a2, p y y globulinas) y otras proteínas plasmáticas. HAS también puede referirse a una forma sólida, que cuando se suspende en el disolvente, tiene una composición similar. La fracción de globulina total puede determinarse restando la albúmina de la proteína total.

[0046] Como puede reconocer una persona con conocimientos normales en la técnica, las fracciones de PPF y HAS también pueden ser secadas por congelación o en otra forma sólida. Dichas preparaciones, con los aditivos adecuados, pueden utilizarse para hacer comprimidos, polvos, gránulos o cápsulas, por ejemplo. La forma sólida puede formularse en preparados para inyección disolviéndolos, suspendiéndolos o emulsionándolos en un disolvente acuoso o no acuoso, como aceites vegetales u otros similares, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilenglicol; y si se desea, con aditivos convencionales como solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsionantes, estabilizadores y conservantes.

5. Fracciones reducidas por el factor de coagulación

[0047] Otra realización de la divulgación utiliza una fracción de plasma sanguíneo de la que se eliminan sustancialmente todos los factores de coagulación para conservar la eficacia de la fracción con un riesgo reducido de trombosis. Convenientemente, el producto sanguíneo puede proceder de un donante joven o de un grupo de donantes jóvenes, y puede ser desprovisto de IgM para proporcionar un producto sanguíneojoven que sea compatible con ABO.

En la actualidad, el plasma que se transfunde se ajusta al tipo de sangre ABO, ya que la presencia de anticuerpos naturales contra los antígenos A y B puede provocar reacciones a la transfusión. La IgM parece ser la responsable de las reacciones transfusionales cuando los pacientes reciben plasma que no es ABO compatible. La eliminación de la IgM de los productos o fracciones sanguíneas ayuda a eliminar las reacciones de transfusión en los sujetos a los que se administran los productos sanguíneos y las fracciones de plasma sanguíneo de la divulgación.

[0048] En consecuencia, en una realización, la divulgación se dirige a un procedimiento para tratar o prevenir una condición relacionada con el envejecimiento, como el cáncer en un sujeto. El procedimiento comprende: administrar al sujeto un producto sanguíneo o una fracción sanguínea derivada de la sangre entera de un individuo o grupo de individuos, donde el producto sanguíneo o la fracción sanguínea está sustancialmente desprovisto de (a) al menos un factor de coagulación y/o (b) IgM. El individuo o individuos de los que se deriva el producto sanguíneo o la fracción sanguínea pueden ser individuos jóvenes. El producto sanguíneo puede estar sustancialmente desprovisto de al menos un factor de coagulación y de IgM. En ciertas realizaciones, el producto sanguíneo está sustancialmente desprovisto de fibrinógeno (Factor I). En otras realizaciones, el producto sanguíneo carece sustancialmente de eritrocitos y/o leucocitos. En otras realizaciones, el producto sanguíneo es sustancialmente acelular. En otras realizaciones, el producto sanguíneo se deriva del plasma. Tales realizaciones están relacionadas con la solicitud de patente de EE.UU. n° 62/236.710 y 62/376,529.

6. Productos proteicos de plasma enriquecido con proteínas

[0049] Otras divulgaciones utilizan fracciones de plasma con una concentración reducida de albúmina en comparación con la PPF, pero con cantidades aumentadas de globulinas y otras proteínas plasmáticas (lo que algunos han denominado "contaminantes"). Las divulgaciones, al igual que la PPF, la HAS, el efluente I y el efluente II/IN, carecen efectivamente de factores de coagulación. Estas fracciones plasmáticas se denominan en lo sucesivo "productos proteicos plasmáticos enriquecidos con proteínas". Por ejemplo, una divulgación puede utilizar un producto proteico plasmático enriquecido con proteínas compuesto por un 82% de albúmina y un 18% de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otra divulgación puede utilizar un producto proteico plasmático enriquecido con proteínas compuesto por un 81% de albúmina y un 19% de a, p y y globulinas y/o otras proteínas plasmáticas. Otra divulgación puede utilizar un producto proteico plasmático enriquecido con proteínas compuesto por un 80% de albúmina y un 20% de a, p y Y globulinas y/o otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos proteicos plasmáticos enriquecidos con proteínas, compuestos por un 70-79% de albúmina y un 21-30% correspondiente de a, p y Y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas que comprenden un 60-69% de albúmina y un 31-40% correspondiente de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas que comprenden un 50-59% de albúmina y un 41-50% correspondiente de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas que comprenden un 40-49% de albúmina y un 51-60% correspondiente de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas que comprenden un 30-39% de albúmina y un 61-70% correspondiente de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas, compuestas por un 20-29% de albúmina y un 71-80% correspondiente de a, p y Y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas, compuestas por un 10-19% de albúmina y un 81-90% correspondiente de a, p y Y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otras divulgaciones pueden utilizar productos de proteínas plasmáticas enriquecidas con proteínas, compuestas por un 1-9% de albúmina y un 91-99% correspondiente de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas. Otra divulgación puede utilizar productos proteicos plasmáticos enriquecidos con proteínas, compuestos por 0-1% de albúmina y 99-100% de a, p y y globulinas y otras proteínas plasmáticas

[0050] Las divulgaciones descritas anteriormente también pueden tener concentraciones totales de gammaglobulina de 0-5%.

[0051] Las concentraciones específicas de proteínas en una fracción de plasma pueden determinarse mediante técnicas bien conocidas por una persona con conocimientos normales en la técnica. A modo de ejemplo, y no como limitación, dichas técnicas incluyen la electroforesis, la espectrometría de masas, el análisis ELISA y el análisis de transferencia Western.

7. Preparación de fracciones de plasma sanguíneo

[0052] Los procedimientos de preparación de la PPF y de otras fracciones plasmáticas son bien conocidos por quienes tienen conocimientos normales en la técnica. Una divulgación permite que la sangre utilizada en la preparación de la fracción de proteínas del plasma humano se recoja en frascos con solución de citrato o anticoagulante de dextrosa para la inhibición de la coagulación, con la posterior separación de las fracciones I, II III, IV y PPF según el procedimiento divulgado en Hink et al. (Véase Hink, J.H., Jr. et al., Preparation and Properties of a Heat-Treated Human Plasma Protein Fraction, Vox SANGUINIS 2(174) (1957)) Según este procedimiento, la mezcla puede recolectarse a 2 - 8 °C. A continuación, el plasma puede separarse por centrifugación a 7 °C, extraerse y almacenarse a -20 °C. El plasma puede entonces descongelarse a 37 °C y fraccionarse, preferentemente dentro de las ocho horas siguientes a su extracción del almacenamiento a -20 °C.

[0053] El plasma puede separarse de la Fracción I utilizando etanol al 8% a pH 7,2 y una temperatura de -2 a -2,5 °C con una concentración de proteínas de 5,1 a 5,6 por ciento. Se puede añadir etanol frío al 53,3% (176 ml/L de plasma) con tampón de acetato (200 ml de acetato de sodio 4M, 230 ml de ácido acético glacial quantum statis a 1 L con H2O) mediante chorros a una tasa, por ejemplo, de 450 ml/minuto durante la bajada de la temperatura del plasma a -2 °C. La fracción I puede separarse y eliminarse del efluente (efluente I) mediante ultracentrifugación. El fibrinógeno puede obtenerse a partir de la Fracción I según procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.

[0054] La fracción II III puede separarse del efluente I mediante el ajuste del efluente al 21 por ciento de etanol a pH 6,8, temperatura a -6 °C, con una concentración de proteínas del 4,3 por ciento. Se puede añadir etanol frío al 95 por ciento (176 ml/L de Efluente I) con ácido acético 10 M utilizado para el ajuste del pH utilizando chorros a una tasa, por ejemplo, de 500 ml/minuto durante la disminución de la temperatura del Efluente I a -6 °C. El precipitado resultante (Fracción II III) puede eliminarse por centrifugación a -6 °C. La gammaglobulina puede obtenerse a partir de la Fracción II III utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.

[0055] La fracción IV-1 puede separarse del efluente II III mediante el ajuste del efluente al 19 por ciento de etanol a pH 5,2, temperatura a -6 °C y concentración de proteínas del 3 por ciento. E1H20 y el ácido acético 10 M utilizados para el ajuste del pH pueden añadirse mediante chorros mientras se mantiene el efluente II III a -6 °C durante 6 horas. La Fracción VI-1 precipitada puede sedimentarse a -6 °C durante 6 horas y posteriormente separarse del efluente por centrifugación a la misma temperatura. La fracción de proteínas plasmáticas estables puede recuperarse a partir del efluente IV-1 mediante el ajuste de la concentración de etanol al 30% a un pH de 4,65, una temperatura de -7 °C y una concentración de proteínas del 2,5%. Esto puede lograrse ajustando el pH del efluente IV-1 con ácidoalcohol frío (dos partes de ácido acético 2 M y una parte de etanol al 95%). Mientras se mantiene una temperatura de -7 °C, a cada litro de efluente IV-11 ajustado se añaden 70 ml de etanol frío (95 %). Las proteínas que precipitan pueden dejarse sedimentar durante 36 horas y posteriormente eliminarse por centrifugación a -7 °C.

[0056] Las proteínas recuperadas (fracción de proteínas plasmáticas estables) pueden secarse (por ejemplo, mediante secado por congelación) para eliminar el alcohol y el H2O. El polvo seco resultante puede disolverse en agua destilada estéril, por ejemplo utilizando 15 litros de agua/kg de polvo, con la solución ajustada a pH 7,0 con NaOH 1 M. Se puede conseguir una concentración final del 5 % de proteínas añadiendo agua destilada estéril que contenga acetiltriptófano de sodio, caprilato de sodio y NaCl, ajustando a concentraciones finales de 0,004 M de acetil-triptófano, 0,004 M de caprilato y 0,112 M de sodio. Por último, la solución puede filtrarse a 10 °C para obtener una solución clara y, posteriormente, tratarse térmicamente para inactivar los patógenos a 60 °C durante al menos 10 horas.

[0057] Los procedimientos precedentes de preparación de las fracciones de plasma sanguíneo y de la fracción de proteínas plasmáticas (PPF) son sólo ejemplares. Una persona con conocimientos normales en la técnica reconocería que estos procedimientos pueden variar. Por ejemplo, el pH, la temperatura y la concentración de etanol, entre otras cosas, pueden ajustarse para producir diferentes variaciones de las fracciones de plasma y de la fracción de proteínas del plasma en las diferentes realizaciones de la invención. En otro ejemplo, otras realizaciones de la invención contemplan el uso de la nanofiltración para la eliminación/inactivación de patógenos de las fracciones de plasma y de la fracción de proteínas del plasma.

[0058] Una realización adicional de la divulgación contempla procedimientos y composición que utilizan y/o comprenden fracciones adicionales de plasma sanguíneo. Por ejemplo, las fracciones con una concentración de albúmina inferior a la de los preparados de PPF o HAS, como las fracciones que tienen menos del 83 % de albúmina.

8. Tratamiento

[0059] Los aspectos de los enfoques descritos en el presente documento incluyen un plasma que comprende un producto sanguíneo para el tratamiento de un sujeto con una cantidad eficaz de dicho plasma que comprende un producto sanguíneo, como una fracción de plasma sanguíneo, por ejemplo, como se ha descrito anteriormente. Esto incluye el tratamiento de un sujeto humano con una cantidad efectiva de un producto sanguíneo que comprende plasma. Un experto en la técnica reconocería que los procedimientos de tratamiento de los sujetos con una cantidad eficaz de plasma que comprende productos sanguíneos están reconocidos en la técnica. Una realización descrita en el presente documento consiste en administrar plasma fresco congelado a un sujeto para el tratamiento de un cáncer. En una realización, el plasma que comprende el producto sanguíneo se administra inmediatamente, por ejemplo, dentro de las 12-48 horas siguientes a la recolección de un donante, al individuo que padece un cáncer. En estos casos, el producto puede almacenarse bajo refrigeración, por ejemplo, a 0-10 °C. En otra realización, el plasma fresco congelado se almacena congelado (criopreservado) a -18 °C o más frío. Antes de su administración, el plasma fresco congelado se descongela y, una vez descongelado, se administra al sujeto entre 60 y 75 minutos después de iniciado el proceso de descongelación. Cada sujeto puede recibir una sola unidad de plasma fresco congelado (200-250 ml), el plasma fresco congelado puede provenir de donantes de un intervalo de edad predeterminado. En una realización, el plasma fresco congelado es donado por (derivado de) individuos jóvenes. En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por (derivado de) donantes del mismo sexo. En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por (derivado de) donantes del intervalo de edad entre 18-22 años. En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por (derivado de) donantes de un intervalo de edad de 40 años o menos, 30 años o menos, o 25 años o menos. En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por (derivado de) donantes de un intervalo de edad que es, en promedio, menor que el del sujeto o sujetos a tratar. En una realización, los sujetos son tratados dos veces por semana con 3-4 días entre infusiones. En una realización, el tratamiento persiste hasta que se alcanza un punto final específico.

[0060] En otra realización, el plasma que comprende los productos sanguíneos se examina después de la donación según el tipo de sangre. En otra realización, el plasma que comprende los productos sanguíneos se somete a un cribado para detectar agentes de enfermedades infecciosas como el VIH I y II, el VHB, el VHC, e1HTLV I y II, el anti-HBc según los requisitos del 21 CFR 640.33 y las recomendaciones contenidas en los documentos de orientación de la FDA.

[0061] En una divulgación, el sujeto es tratado con una Fracción de Plasma. En una realización de la invención, la Fracción Plasmática es una PPF. Una realización de la invención comprende una fracción de proteína plasmática (PPF) para su uso en la prevención del cáncer tímico. En otra realización de la invención, la fracción de plasma es una fracción de PPF derivada de donantes jóvenes; o es una fracción de PPF modificada que ha sido sometida a un fraccionamiento o procesamiento adicional (por ejemplo, una PPF con una o más proteínas específicas eliminadas parcial o sustancialmente). En otra realización de la invención, la fracción plasmática es una fracción plasmática IGIV, que ha sido sustancialmente agotada de inmunoglobulina (IgG). En otra realización de la invención, la Fracción de Plasma es una fracción que ha sido sustancialmente agotada de factores de coagulación. Una fracción sanguínea que está "sustancialmente agotada" oque tiene proteínas específicas "sustancialmente eliminadas", como la IgG, se refiere a una fracción sanguínea que contiene menos del 50 % de la cantidad que se encuentra en el producto de referencia o en el plasma sanguíneo completo, tal como menos del 45 %, 40 %, 35 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, 0,25 %, 0,1 %, niveles indetectables, o cualquier número entero entre estos valores, medidos mediante ensayos estándar bien conocidos en la técnica.

9. Puntos finales

[0062] Los aspectos de los procedimientos descritos en el presente documento incluyen la medición de puntos finales del tratamiento del cáncer. Estos criterios de valoración pueden utilizarse, por ejemplo, en ensayos clínicos o en el tratamiento individual de un sujeto. Los criterios de valoración descritos en el presente documento no pretenden ser limitativos y se presentan únicamente como criterios de valoración ejemplares. Los criterios de valoración oncológicos son conocidos por los expertos en la técnica. (Véase Oncology Endpoints in a Changing Landscape, Managed Care (Suppl.) pp. 1-10 (2016)) y pueden agruparse en dos categorías generales: criterios de valoración centrados en el paciente y centrados en el tumor. Los criterios de valoración centrados en el paciente incluyen la supervivencia global (SG) y la calidad de vida relacionada con la salud (CVRS). Los criterios de valoración centrados en el tumor suelen incluir la supervivencia sin progresión (SLP) y el tiempo hasta la progresión (TTP), y se utilizan como sustitutos de los criterios de valoración centrados en el paciente en los ensayos clínicos. Otros criterios de valoración son: la supervivencia libre de enfermedad (SLE), que es el tiempo transcurrido desde la aleatorización en un ensayo clínico hasta la recidiva o la muerte por cualquier causa; la tasa de respuesta objetiva o la tasa de respuesta global (TRO), que mide la proporción de pacientes con una reducción del tamaño del tumor en una cantidad predefinida; la duración de la respuesta (DRO), que es el tiempo transcurrido desde la documentación de la respuesta del tumor hasta la progresión de la enfermedad; el tiempo hasta el fracaso del tratamiento (TFT), que mide el tiempo transcurrido desde la aleatorización en un ensayo clínico hasta la interrupción del tratamiento por cualquier motivo; los criterios de respuesta relacionados con el sistema inmunitario (CRI) (A. Hoos et al., Improved endpoints for cancer immunotherapy trials 23(suppl. 8) Ann. Oncol. viii47 (2012)); la enfermedad mínima residual (MRD), que detecta restos de ciertos cánceres sanguíneos; los criterios de valoración del sistema nervioso central (SNC), que incluyen la tasa de respuesta global del SNC, la tasa de control de la enfermedad del SNC; y la respuesta patológica completa (pCR), que se utiliza para evaluar la eficacia de los fármacos administrados como tratamientos neoadyuvantes.

10. Monitorización

[0063] Otro aspecto de la divulgación incluye la monitorización de un sujeto que es tratado utilizando los procedimientos descritos en el presente documento. Dichos procedimientos de control de dicho sujeto incluyen, entre otros, los siguientes pruebas de patología, como la evaluación microscópica de células anormales; imágenes de diagnóstico, como por ejemplo, mediante rayos X, tomografía computarizada (TC), tomografía por emisión de positrones (PET), resonancia magnética (RM) y cualquier combinación de las mismas; análisis de sangre para medir sustancias en la sangre que indiquen el grado de avance del cáncer u otros problemas relacionados con el mismo; medición de biomarcadores tumorales (como ácidos nucleicos, metabolitos o proteínas) en muestras del paciente, como las procedentes de la sangre, la orina u otros tejidos/secreciones que presentan niveles más altos o más bajos de lo normal con determinados cánceres; o pruebas genómicas. Esto incluye, por ejemplo y sin limitación, los biomarcadores que están presentes en diferentes cantidades o concentraciones en el plasma sanguíneo o en fracciones de plasma sanguíneo de individuos jóvenes en relación con individuos relativamente mayores. Además, otro aspecto incluye la monitorización de los signos vitales básicos de un sujeto que es tratado como se describe en el presente documento. A modo de ejemplo, y no como una limitación, dichos signos vitales pueden incluir el peso corporal, la presión arterial, la movilidad, la cognición, el grado de dolor y la temperatura corporal.

11. Administración

[0064] En la práctica de la divulgación, se administra al sujeto un producto de plasma sanguíneo, como el plasma sanguíneo o una fracción de plasma sanguíneo, por ejemplo, como se ha descrito anteriormente. En una realización, el plasma sanguíneo o la fracción de plasma sanguíneo se administra por infusión intravenosa. La tasa de infusión puede variar, pero en una realización de la invención, la tasa de infusión es de 5-8 ml/minuto. Quienes tengan conocimientos normales de la técnica reconocerán que la tasa de infusión puede depender del estado del sujeto y de su respuesta a la administración.

[0065] En aquellas realizaciones en las que se administra una cantidad efectiva de un agente activo al mamífero, la cantidad o dosis es efectiva cuando se administra durante un periodo de tiempo adecuado, como una semana o más, incluyendo dos semanas o más, como 3 semanas o más, un mes o más, 2 meses o más, 3 meses o más, 4 meses o más, 5 meses o más, 6 meses o más, 1 año o más, etc., para evidenciar una reducción de la afección, por ejemplo, la proliferación tumoral, el crecimiento tumoral, la metástasis tumoral, el dolor asociado y/o la angiogénesis en el mamífero. Por ejemplo, una dosis efectiva es la dosis que, cuando se administra durante un periodo de tiempo adecuado, ralentizará la condición, por ejemplo, en un 20 % o más, por ejemplo, en un 30 % o más, en un 40 % o más, o en un 50 % o más, en algunos casos en un 60 % o más, en un 70 % o más, en un 80 % o más, o en un 90 % o más. Por ejemplo, para las indicaciones tumorales, detendrá: la proliferación del tumor, el crecimiento del tumor, la metástasis, el dolor asociado y/o la angiogénesis en un paciente que sufre de cáncer. En algunos casos, una cantidad o dosis efectiva de agente activo no sólo ralentizará o detendrá la progresión de la condición de la enfermedad, sino que también inducirá la reversión de la condición, es decir, causará una disminución del tamaño del tumor. Por ejemplo, en algunos casos, una cantidad efectiva es la cantidad que, cuando se administra durante un periodo de tiempo adecuado, mejorará los síntomas de un individuo que sufre un tumor en, por ejemplo, 1,5 veces, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, en algunos casos 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces o 10 veces o más en relación con el tamaño del tumor, el dolor asociado o la angiogénesis antes de la administración del producto sanguíneo.

[0066] Bioquímicamente, por una "cantidad efectiva" o "dosis efectiva" de agente activo se entiende una cantidad de agente activo que inhibirá, antagonizará, disminuirá, reducirá o suprimirá en aproximadamente 20 % o más, por ejemplo en un 30 % o más, en un 40 % o más, o en un 50 % o más, en algunos casos en un 60 % o más, en un 70 % o más, en un 80 % o más, o en un 90 % o más, en algunos casos en aproximadamente un 100 %, es decir, hasta cantidades insignificantes, y en algunos casos invierte el tamaño del tumor, o el grado de: proliferación; dolor asociado; metástasis; y/o angiogénesis.

12. Fracción de proteínas plasmáticas

[0067] En la práctica de la invención, se administra una fracción de plasma al sujeto. En una realización, la fracción plasmática es la fracción de proteínas plasmáticas (PPF). En otras realizaciones, la PPF se selecciona entre los preparados comerciales de PPF.

[0068] En otra realización, la PPF está compuesto por un 88 % de albúmina humana normal, un 12 % de alfa y beta globulinas y no más de un 1 % de gammaglobulina, según lo determinado por electroforesis. Las realizaciones de esta forma de realización utilizadas en la práctica de la invención incluyen, por ejemplo, esta forma de realización como una solución al 5 % de PPF tamponada con carbonato de sodio y estabilizada con caprilato de sodio 0,004 M y acetiltriptófano 0,004 M. En la práctica de la invención pueden utilizarse otras formulaciones, incluidas las que modifican el porcentaje de PPF (por ejemplo, aproximadamente 1 % a aproximadamente 10 %, aproximadamente 10 % a aproximadamente 20 %, aproximadamente 20 % a aproximadamente 25 %, aproximadamente 25 % al 30 %) en la solución, así como las concentraciones de disolvente y estabilizadores.

13. Fracciones plasmáticas de la edad específica del donante

[0069] Una divulgación incluye la administración de una fracción de plasma sanguíneo o una fracción de plasma derivada del plasma de individuos de ciertos intervalos de edad. Otras realizaciones incluyen la administración de una fracción de proteína plasmática derivada del plasma de individuos de determinados intervalos de edad. Una realización incluye la administración de una PPF que ha sido derivada del plasma de individuos jóvenes. En otra realización de la invención, los individuos jóvenes son de una sola edad específica o de un intervalo de edad específico. En otra realización, la edad media de los donantes es menor que la del sujeto o menor que la edad media de los sujetos en tratamiento.

[0070] Ciertas realizaciones de la divulgación incluyen la agrupación de sangre o plasma sanguíneo de individuos de intervalos de edad específicos y el fraccionamiento del plasma sanguíneo como se ha descrito anteriormente para obtener un producto de fracción de proteína plasmática como PPF o HAS. En una realización alternativa de la invención, la fracción de proteínas plasmáticas o la fracción específica de proteínas plasmáticas se obtiene de individuos específicos que se ajustan a un intervalo de edad especificado. En otra realización, la fracción de plasma sanguíneo, la fracción de plasma o el producto de la fracción de proteína plasmática específica se obtiene de un grupo de individuos jóvenes, de los cuales "joven" puede determinarse por la edad cronológica o biológica como se ha descrito anteriormente, y la(s) edad(es) de los individuos puede ser una edad específica o un intervalo de edad.

14. Indicaciones

[0071] Como se ha resumido anteriormente, los aspectos de la divulgación incluyen procedimientos para tratar un cáncer en un sujeto. El cáncer puede manifestarse, por ejemplo, como tumores sólidos o cáncer de sangre. El cáncer también puede manifestarse en una serie de tejidos (incluso como metástasis) o como especies de cáncer que incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, los siguientes: leucemia linfocítica aguda (LLA); leucemia mieloide aguda (LMA); suprarrenal, anal; angiosarcoma; astrocitoma; cáncer de células basales; ducto biliar; vejiga; hueso; cerebro; carcinoide; cardíaco sarcoma cardíaco; sistema nervioso central; cervical; leucemia linfocítica crónica (LLC); leucemia mieloide crónica (LMC); colon; craneofaringioma; ependimoma; esofágico; tumores de Ewing; ojo; fibroma; vesícula biliar; gástrico; tumores carcinoides gastrointestinales; tumor del estroma gastrointestinal (GIST); células germinales; glioma; glioma multiforme; hemangioblastoma; hemangiopericitoma hamartoma; cabeza y cuello; linfoma de Hodgkin; hipofaringe; sarcoma de Kaposi; laringe; leucemia; hígado; pulmón; tumor carcinoide de pulmón; ganglios linfáticos; linfoma; melanoma; meningioma; cáncer de piel de células de Merkel; mesoteliamoa; mieloma múltiple; síndrome mielodisplásico; mieloma; mixoma; cavidad nasal y seno paranasal; nasofaringe; neuroblastoma; linfoma no Hodgkin; cáncer de pulmón de células no pequeñas; cavidad oral y orofaringe; osteosarcoma; ovario; páncreas; pene; pneal; pituitaria; tumor cardíaco primitivo; neuroectodérmico primitivo (incluido el meduloblastoma); rectal; renal; retinoblastoma; rabdomioma; rabdomiosarcoma; glándula salival; schwannoma; piel; linfoma cutáneo; cáncer de pulmón de células pequeñas; sarcomas de tejidos blandos; médula espinal; carcinoma de células escamosas; cáncer de piel de células escamosas; testicular; tímico; tiroides; uterino; vaginal; vulvar; macroglobulinemia de Waldenstrom; y tumor de Wilms.

[0072] Cáncer de timo. Un aspecto de la invención incluye una fracción de proteína plasmática para su uso en un procedimiento de prevención de neoplasias tímicas y no neoplasias. Las neoplasias del timo incluyen el timoma, el linfoma, el carcinoma tímico, el carcinoide tímico, el timolipoma, los tumores de células germinales y las metástasis pulmonares. Las no neoplasias del timo incluyen el bocio intratorácico, los quistes tímicos, los linfangiomas y los aneurismas aórticos. La etiología y los factores de riesgo de los tumores tímicos no se conocen del todo, pero la irradiación previa y las infecciones por el virus de Epstein-Barr son candidatos a desempeñar ese papel. (Omar M. Rashid et al., Thymic neoplasm: a rare disease with a complex clinical presentation 5(2) J Thorac Dis 173 (2013)). Aunque se consideran neoplasias raras, la tasa de supervivencia a cinco años de los pacientes que presentan timomas es de aproximadamente el 78 %, y la del carcinoma tímico de aproximadamente el 40 %. (David S. Ettinger, et al., Thymomas and Thymic Carcinomas 11(5) J. Natl Comprehensive Cancer Network 562 (2013)). El tratamiento de los timomas y del carcinoma tímico incluye la resección quirúrgica y la quimioterapia, con respuestas pobres a la quimioterapia, especialmente en el carcinoma tímico. (Id.)

[0073] Cáncer gástrico: Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar el cáncer gástrico. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del adenocarcinoma gástrico, los tumores carcinoides gástricos, los tumores del estroma gastrointestinal (GIST) y los linfomas gástricos. Los síntomas del cáncer gástrico que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y no a modo de limitación, dolor de estómago, heces con sangre, vómitos, pérdida de peso, problemas para tragar, ictericia en los ojos/piel, hinchazón de estómago, estreñimiento o diarrea, fatiga y acidez.

[0074] Cáncer de páncreas. Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar el cáncer de páncreas. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del cáncer pancreático exocrino, los tumores neuroendocrinos pancreáticos (NETs o tumores de células de los islotes), el insulinoma, el glucagonoma, el gastrinoma, el somatostatinoma, los VIPomas y los PPomas. Los síntomas del cáncer de páncreas que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y no a modo de limitación, la diabetes, la pérdida de peso, la ictericia, el dolor en el abdomen y la espalda, y la diarrea.

[0075] Cáncer renal (de riñón). Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar el cáncer renal. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del carcinoma de células renales, el carcinoma de células de transición, el sarcoma renal, el tumor de Wilms y el linfoma renal. Los tipos de células cancerosas de Rena que pueden tratarse, a modo de ejemplo y no de limitación, son los de células claras, papilares, sarcomatoides, medulares/de conducto colector, cromófobos, oncocitomas y angiomilipomas. Los síntomas del cáncer renal que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y sin carácter limitativo, sangre en la orina, bultos en el abdomen, pérdida de apetito, pérdida de peso, dolor lateral, fiebre, fatiga, anemia e hinchazón de pies, tobillos o piernas.

[0076] Cáncer de hígado. Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar el cáncer de hígado. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del carcinoma hepatocelular (CHC), el colangiocarcinoma (cáncer de vías biliares) y el angiosarcoma. Los síntomas del cáncer de hígado que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y no a modo de limitación, pérdida de apetito, pérdida de peso, náuseas/vómitos, agrandamiento del hígado, agrandamiento del bazo, dolor abdominal o cerca del omóplato derecho, hinchazón abdominal o acumulación de líquido, picor, ictericia, fiebre, venas agrandadas en el vientre, hematomas anormales o sangrado anormal, hipercalcemia, hipoglucemia, ginecomastia, eritrocitosis y colesterol alto.

[0077] Cáncer colorrectal. Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar el cáncer colorrectal. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del adenocarcinoma colorrectal, el tumor carcinoide, el tumor del estroma gastrointestinal (GIST), el carcinoma de células pequeñas, el sarcoma y el linfoma. Los síntomas del cáncer de hígado que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y no a modo de limitación, la pérdida de peso, el dolor o los calambres abdominales, la fatiga, la hemorragia rectal, la sangre en las heces y los cambios en los hábitos intestinales.

[0078] Linfoma. Otro aspecto de la divulgación incluye un procedimiento para tratar linternas. A modo de ejemplo y no de limitación, la divulgación contempla el tratamiento del linfoma de Hodgkin, el linfoma de Hodgkin infantil, el linfoma no Hodgkin y el linfoma no Hodgkin infantil. Estos ejemplos incluyen subtipos de linfomas como los de células B, células T y células NK, el linfoma de Hodgkin de esclerosis nodular, el linfoma de Hodgkin clásico rico en linfocitos, el linfoma de Hodgkin de celularidad mixta linfoma de Hodgkin con agotamiento de linfocitos, linfoma de Hodgkin nodular con predominio de linfocitos, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma linfocítico pequeño, linfoma mediastínico primario de células B grandes, linfoma de células B de la zona marginal esplénica, linfoma de células B de la zona extranodal de MALT, linfoma de células B de la zona marginal nodal, linfoma linfoblástico, linfoma de Burkitt/leucemia de células de Burkitt, linfoma/leucemia de células T del adulto (virus linfotrópico de células T humano tipo I positivo), linfoma extraganglionar de células NK/T - tipo nasal, linfoma de células T asociado a enteropatía, linfoma de células T hepatoesplénico gamma/delta, linfoma de células T subcutáneo tipo paniculitis y micosis fungoide. Los síntomas del cáncer de hígado que pueden reducirse o revertirse con los procedimientos de tratamiento incluyen, por ejemplo y no a modo de limitación, la hinchazón de los ganglios linfáticos, la hinchazón de las piernas/tobillos, la hinchazón y los calambres abdominales, la pérdida de peso, la pérdida de apetito, los escalofríos, la fatiga, el picor y la tos persistente.

16. Terapia de combinación

[0079] Para su uso en los procedimientos del asunto, los productos de plasma sanguíneo descritos en el presente documento pueden administrarse en combinación con otros agentes farmacéuticamente activos, incluyendo otros agentes que tratan la condición subyacente o un síntoma de la condición. "En combinación con", tal como se utiliza aquí, se refiere a usos en los que, por ejemplo, el producto de plasma sanguíneo se administra durante todo el curso de la administración del segundo compuesto; en los que el producto de plasma sanguíneo se administra durante un período de tiempo que se solapa con la administración del segundo compuesto, por ejemplo donde la administración del producto de plasma sanguíneo comienza antes de la administración del segundo compuesto y la administración del producto de plasma sanguíneo termina antes de la administración del segundo compuesto; donde la administración del segundo compuesto comienza antes de la administración del producto de plasma sanguíneo y la administración del segundo compuesto termina antes de la administración del producto de plasma sanguíneo donde la administración del producto de plasma sanguíneo comienza antes de que comience la administración del segundo compuesto y la administración del segundo compuesto termina antes de que termine la administración del producto de plasma sanguíneo; donde la administración del segundo compuesto comienza antes de que comience la administración del producto de plasma sanguíneo y la administración del producto de plasma sanguíneo termina antes de que termine la administración del segundo compuesto. Como tal, "en combinación" también puede referirse al régimen que implica la administración de dos o más compuestos. "En combinación con", tal como se utiliza aquí, también se refiere a la administración de dos o más composiciones/compuestos que pueden administrarse en la misma o en diferentes formulaciones, por la misma o por diferentes vías, y en el mismo o diferente tipo de forma de dosificación.

[0080] Ejemplos de otros agentes para su uso en la terapia de combinación del cáncer incluyen, pero no se limitan a, talidomida, marimastat, COL-3, b Ms -275291, escualamina, 2-ME, SU6668, neovastat, Medi-522, EMD121974, CAI, celecoxib, interleucina-12, IM862, TNP470, avastin, gleevec, herceptin, y mezclas de los mismos. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos para su uso en la terapia de combinación incluyen, pero no se limitan a, daunorubicina, daunomicina, dactinomicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina, esorubicina, bleomicina, mafosfamida, ifosfamida, arabinósido de citosina, bis-cloroetilnitrosurea, busulfán, mitomicina C, actinomicina D, mitramicina, prednisona, hidroxiprogesterona, testosterona, tamoxifeno, dacarbazina, procarbazina, hexametilmelamina, pentametilmelamina, mitoxantrona, amsacrina, clorambucil, metilciclohexilnitrosurea, mostazas nitrogenadas, melfalán, ciclofosfamida, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-azacitidina, hidroxiurea, desoxi-coformicina, 4-hidroxiperoxi-ciclofosforamida, 5-fluorouracilo (5-FU), 5-fluorodeoxiuridina (5-FUdR), metotrexato (MTX), colchicina, taxol, vincristina, vinblastina, etopósido (VP-16), trimetrexato, irinotecán, topotecán, gemcitabina, tenipósido, cisplatino y dietilestilbestrol (DES).

17. Kits

[0081] También se divulgan kits para practicar uno o más de los procedimientos descritos anteriormente. Los kits del asunto pueden variar mucho.

[0082] Los kits pueden incluir bolsas de recolección de sangre, tubos, agujas, tubos de centrifugación, y similares. Los kits como se describen en el presente documento incluyen uno o más, por ejemplo, dos o más, contenedores de producto de plasma sanguíneo, como la fracción de proteína de plasma, como tres o más, cuatro o más, cinco o más, incluyendo seis o más contenedores de producto de plasma sanguíneo. En algunos casos, el número de contenedores distintos de producto de plasma sanguíneo en el kit puede ser de 9 o más, 12 o más, 15 o más, 18 o más, 21 o más, 24 o más 30 o más, incluyendo 36 o más, por ejemplo, 48 o más. Cada contenedor puede tener asociada una información de identificación que incluya diversos datos sobre el producto de plasma sanguíneo contenido en el mismo, cuya información de identificación puede incluir uno o más de la edad del donante del producto de plasma sanguíneo, detalles de procesamiento en relación con el producto de plasma sanguíneo, por ejemplo, si el producto de plasma sanguíneo fue procesado para eliminar las proteínas por encima de un peso molecular promedio (como el descrito anteriormente), detalles del tipo de sangre, etc. En algunos casos, cada contenedor del kit incluye información de identificación sobre el plasma sanguíneo contenido en el mismo, y la información de identificación incluye información sobre la edad del donante del producto de plasma sanguíneo, por ejemplo, la información de identificación proporciona datos de confirmación de la edad del donante del producto de plasma sanguíneo (donde dicha información de identificación puede ser la edad del donante en el momento de la recolección). En algunos casos, cada contenedor del kit contiene un producto de plasma sanguíneo de un donante de sustancialmente la misma edad, es decir, todos los contenedores incluyen producto de donantes que son sustancialmente la misma, si no la misma, edad. Por edad sustancialmente igual se entiende que los diversos donantes de los que se obtienen los productos de plasma sanguíneo de los kits difieren en cada uno, en algunos casos, en 5 años o menos, como 4 años o menos, por ejemplo, 3 años o menos, incluyendo 2 años o menos, como 1 año o menos, por ejemplo, 9 meses o menos, 6 meses o menos, 3 meses o menos, incluyendo 1 mes o menos. La información de identificación puede estar presente en cualquier componente conveniente del contenedor, como una etiqueta, un chip RFID, etc. La información de identificación puede ser legible para el ser humano, para el ordenador, etc., según se desee. Los contenedores pueden tener cualquier configuración conveniente. Aunque el volumen de los contenedores puede variar, en algunos casos los volúmenes van de 10 ml a 5000 ml, tales como 25 ml a 2500 ml, por ejemplo, 50 ml a 1000 ml, incluyendo 100 ml a 500 ml. Los contenedores pueden ser rígidos o flexibles, y pueden estar fabricados de cualquier material conveniente, por ejemplo, materiales poliméricos, incluyendo materiales plásticos de grado médico. En algunos casos, los contenedores tienen una configuración de bolsa o de bolsa pequeña. Además de los contenedores, dichos kits pueden incluir además dispositivos de administración, por ejemplo, como se ha descrito anteriormente. Los kits pueden incluir además uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, como los descritos anteriormente en relación con la terapia de combinación. Los componentes de dichos kits pueden suministrarse en cualquier embalaje adecuado, por ejemplo, una caja o estructura análoga, configurada para contener los contenedores y otros componentes del kit.

[0083] Además de los componentes anteriores, los kits del asunto incluirán además instrucciones para practicar los procedimientos del sujeto. Estas instrucciones pueden estar presentes en los kits del sujeto en una variedad de formas, una o más de las cuales pueden estar presentes en el kit. Una forma en la que estas instrucciones pueden estar presentes es como información impresa en un medio o sustrato adecuado, por ejemplo, una pieza o piezas de papel en las que se imprime la información, en el embalaje del kit, en un prospecto, etc. Otro medio sería un soporte legible por ordenador, por ejemplo, un disquete, un CD, una unidad flash portátil, etc., en el que se haya grabado la información. Aún otro medio que puede estar presente es una dirección de sitio web que puede utilizarse a través de Internet para acceder a la información en un sitio retirado. En los kits puede haber cualquier medio conveniente.

18. Procedimientos experimentales

[0084] Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la técnica una descripción completa de cómo hacer y utilizar la presente invención, y no pretenden representar que los experimentos que se presentan a continuación sean todos o los únicos experimentos realizados. Se ha procurado garantizar la exactitud de las cifras utilizadas (por ejemplo, las cantidades, la temperatura, etc.), pero hay que tener en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular medio, la temperatura es grados centígrados y la presión es casi atmosférica.

[0085] Los procedimientos generales de la bioquímica molecular y celular pueden encontrarse en libros de texto estándar como Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed. (Sambrook et al., HaRBor Laboratory Press 2001) Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed. (Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons 1999); Protein Methods (Bollag et al., John Wiley & Sons 1996) Nonviral Vectors for Gene Therapy (Wagner et al. eds., Academic Press 1999) Viral Vectors (Kaplift & Loewy eds., Academic Press 1995 Immunology Methods Manual (I. Lefkovits ed., Academic Press 1997); y Cell and Tissue Culture: Laboratory Precedures in Biotechnology (Doyle & Griffiths, John Wiley & Sons 1998). Los reactivos, vectores de clonación y kits para la manipulación genética a los que se hace referencia en esta divulgación están disponibles en proveedores comerciales como BioRad, Stratagene, Invitrogen, Sigma-Aldrich y Clontech.

A. Materiales y reactivos

[0086] La solución salina USP se compró a Hospira (Lake Forest, IL). Las inyecciones se realizaron con agujas de 27,5G o 30G, a un volumen de 150 pl por inyección. Se recolectó plasma de donantes humanos de 18 y >65 años mediante plasmaféresis por Biomat®, en sitios múltiples. La recolección se realizó según los procedimientos operativos estándar de Biomat® y se proporcionaron muestras de 3ml retenidas de las recolecciones. Todos los materiales fueron analizados para comprobar la ausencia de VIH, Hepatitis B y Hepatitis C. Los viales fueron enviados al lugar del estudio en hielo seco.

[0087] Las PPF disponibles comercialmente ("PPF1"), como los preparados comerciales de PPF descritos anteriormente, en solución al 5 %, se almacenaron a 4 °C.

B. Preparación del plasma

[0088] Al llegar al lugar del estudio, las muestras de plasma de 45-50 donantes de cada grupo de edad se centrifugaron a 3200g a 0 °C durante 30 minutos, se filtraron a través de un filtro de 0,22pm, se agruparon para cada grupo de edad y se somaron alícuotas en alícuotas de 1ml y se congelaron a 80 °C. Los viales se descongelaron durante una hora en hielo al principio de cada día de inyección, y en el caso de que no se utilizara un vial entero, el vial se almacenó a 4 °C hasta el siguiente día de inyección.

C. Sum inistro y cría de animales

[0089] Se utilizaron cepas de ratón NOD.CB17-Prkdcscid/NcrCrl ("NODscid", código de cepa 394, Charles River, MA) (Bosma, M. et al., The scid mouse mutant. 137 Curr Top Microbiol Immunol 197 (1988)) y NODscid gamma ("NSG", código de cepa 005557, Bar Harbor, ME). Los estudios de plasma se realizaron en ratones machos. Se recibieron 18 ratones de 1 mes (jóvenes) y 44 de 10 meses (envejecidos) antes del inicio del estudio. Dieciocho ratones jóvenes y cuarenta y dos de edad entraron en el estudio del plasma sanguíneo (Figuras 1-4), de los cuales dieciocho y veintiocho, respectivamente, completaron el estudio mediante la recolección de tejido en el punto final. Para el estudio de PPF1 (Figuras 5 y 6), 20 ratones tratados con solución salina y 20 ratones tratados con PPF1 comenzaron el estudio a los 6 meses de edad.

[0090] En todos los estudios, se perforó la oreja de cada ratón para designar un número de identificación único. Todos los ratones fueron alojados individualmente en condiciones específicas libres de patógenos bajo un ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, y toda la manipulación y uso de los animales se realizó de acuerdo con las directrices estándar aprobadas por el IACUC.

D. Adm inistración

[0091] Para el estudio del plasma sanguíneo (Figuras 1-4), los animales se dividieron en 3 cohortes de 20 ratones cada una, y el inicio del estudio se escalonó una semana entre las cohortes. Cada cohorte se sometió a 5 semanas de inyecciones en la vena de la cola, dos veces por semana durante 4,5 semanas para un total de 9 inyecciones de solución salina, plasma joven o plasma viejo. Los ratones de doce meses de edad se dividieron uniformemente en 3 grupos de tratamiento al inicio del estudio en función del peso inicial del mismo. Los ratones se pesaron una vez a la semana desde el inicio hasta el final del estudio.

[0092] Para el estudio de PPF1 (Figuras 5 y 6), los ratones NODscid fueron inyectados con solución salina USP o con 5 % de PPF1 a partir de los 6 meses de edad por inyección intravenosa en la vena de la cola. Los ratones recibieron dos inyecciones semanales de 150|jl durante un máximo de 5 meses.

E. Peso corporal

[0093] El peso de cada ratón se midió cada semana antes de la primera dosificación de la semana, y se tomó una medición final del peso antes del punto final del estudio de perfusión y recolección de tejido. La supervivencia de cada grupo se determinó trazando el punto de muerte de cada ratón en relación con la línea de tiempo del estudio.

[0094] La Figura 1 representa el cambio en el peso corporal para cuatro grupos de tratamiento separados como un porcentaje del peso corporal inicial determinado una semana antes del tratamiento (media ± s.e.m.). El peso corporal de cada ratón se midió cada semana antes de la primera dosis de la semana, y la medición del peso final se realizó antes del punto final del estudio de la perfusión y la recolección de tejidos. La figura 1 ilustra que los ratones jóvenes aumentaron gradualmente su peso corporal, mientras que todos los ratones de edad disminuyeron su peso corporal. Se observó una tendencia al aumento del peso corporal en los ratones envejecidos tratados con plasma de donantes jóvenes (plasma joven).

F. Supervivencia

[0095] La supervivencia de los ratones NODscid tratados con solución salina, plasma joven, plasma viejo o PPF1 a partir de los 6 meses de edad se determinó trazando el punto de tiempo de la muerte de cada ratón en relación con la línea de tiempo del estudio. La figura 2 representa la supervivencia de los grupos tratados con suero fisiológico, con plasma joven (YP) y con plasma viejo (OP), determinada por el punto de tiempo de la muerte de cada ratón en relación con la línea de tiempo del estudio. La figura 5 representa la supervivencia de los ratones NODscid tratados con solución salina (línea continua) o con PPF1 (línea discontinua) a partir de los 6 meses de edad. La supervivencia se determinó trazando el punto de tiempo de la muerte de cada ratón en relación con la línea de tiempo del estudio. La figura 2 ilustra que hubo una tendencia a mejorar la supervivencia de los ratones tratados con infusiones de plasma humano joven o viejo. La Figura 5 ilustra que hubo una tendencia a mejorar la supervivencia de los ratones tratados con PPF1 en comparación con los ratones tratados con solución salina.

G. Peso del tum or

[0096] Tras la muerte, por causas naturales o por eutanasia por motivos de salud, se buscó en los ratones NODscid la presencia de tumores tímicos de aparición espontánea. Si se encontraban, se extirpaban los tumores y se medía y registraba el peso de cada uno de ellos. Al final del estudio con plasma viejo y joven, se encontraron menos tumores tímicos en los ratones viejos tratados con plasma humano joven que en los controles con solución salina. La figura 3 ilustra que los pesos de los tumores fueron significativamente diferentes entre los grupos de solución salina y de plasma joven (YP), tal como se determinó mediante una prueba de comparación t (Mann-Whitney). (OP = plasma viejo; sal = solución salina).

[0097] Al final del estudio con PPF1, se encontraron menos tumores tímicos en los ratones tratados con PPF1 que en los controles con solución salina. La figura 6 ilustra que el peso de los tumores tendía a disminuir en el grupo tratado con PPF1 en comparación con el grupo tratado con solución salina. (SAL = solución salina).

H. Tamaño del tumor

[0098] Las mediciones del tamaño del tumor se tomaron en tres dimensiones utilizando una regla de precisión y se trazaron. El tamaño y el peso se analizaron por separado. Al final del estudio, se buscó en los ratones la presencia de tumores tímicos. Si se encontraban, se extirpaban los tumores y se medía y registraba el tamaño de cada uno de ellos. En el estudio en el que el tratamiento incluía plasma viejo (OP) y joven (YP), se encontraron menos tumores tímicos en los ratones viejos tratados con plasma humano joven que en los controles con solución salina. La figura 4 ilustra que los tamaños de los tumores fueron significativamente diferentes entre los grupos de solución salina y de plasma joven, tal como se determinó mediante una prueba de comparación t (Mann-Whitney). (sal = solución salina).

I. Ensayos de inhibición del crecimiento de líneas celulares tumorales (Ensayo de viabilidad celular CellTiter Blue)

[0099] Se evaluó la actividad anticancerígena del plasma joven y de la PPF1 en un panel de seis líneas celulares de cáncer humano mediante el ensayo de viabilidad Cell Titer Blue de Promega. Las líneas celulares de cáncer se cosecharon a partir de cultivos en fase exponencial, se contaron y se sembraron en placas de microtitulación de fondo plano de 96 pocillos a una densidad celular que dependía de la tasa de crecimiento de la línea celular (4.000 y 30.000 células para las líneas celulares de tumores sólidos, 10.000 a 60.000 para las líneas celulares de cáncer hematológico). Las líneas celulares analizadas fueron: CXF269 (adenocarcinoma colorrectal); GXF251 (adenocarcinoma gástrico); LIXFC575 (carcinoma hepatocelular); LYXFN-RAJI (linfoma de Burkitt de linfocitos B); PAXF1647 (adenocarcinoma pancreático); y RXF1781 (carcinoma renal). El plasma joven y la PPF1 se prepararon con diluyente de plasma a un volumen de 50|jL en 5 concentraciones (10 j L de plasma o PpF1 40 j L de diluyente, 20 j L de plasma o PPF1 30 j L de diluyente, 30 j L de plasma o PPF1 20 j L de diluyente, 40 j L de plasma o PPF1 10 j L, 50 j L de plasma o PpF1 0 j L de diluyente).

[0100] Después de un período de recuperación de 24 horas para permitir que las células reanuden su crecimiento exponencial, se añadieron 10jl de medio de cultivo (cuatro pocillos de control/placa) o de medio de cultivo con el compuesto de prueba (plasma joven o PPF1) mediante un sistema robótico de manipulación de líquidos y se continuó el tratamiento durante 4 días. Los compuestos se aplicaron en incrementos de medio logaritmo a 10 (o 5) concentraciones por duplicado. Tras el tratamiento y la incubación de las células, se añadieron 20jl/pocillo de reactivo CellTiter-Blue®. Tras una incubación de hasta 4 horas, se midió la fluorescencia (FU) utilizando el Enspire Multimode Plate Reader (excitación A=531nm, emisión A=615 nm). Se ajustaron curvas de concentración-respuesta sigmoidales a los puntos de datos (valores T/C) obtenidos para cada línea celular utilizando un ajuste de curva no lineal de 4 parámetros (software Oncotest Warehouse). Para cada línea celular, las curvas de actividad se calcularon promediando los valores de fondo de 24 pocillos y restando este valor de cada uno de los tres valores replicados para la condición de control y las condiciones de prueba que van del 10 al 50 % (v/v). Los valores ajustados al fondo para la condición de control se promediaron, y todos los valores (condiciones de control y de prueba) se normalizaron a este valor para generar valores ajustados al fondo, normalizados al control, para los gráficos de las figuras 7 a 12. Las figuras 7 a 12 muestran que para todas las líneas celulares de cáncer, la PPF1 redujo potentemente la viabilidad de las células cancerosas de manera dependiente de la dosis, lo que indica que la PPF1 demuestra una actividad inhibidora contra una variedad de tipos de células cancerosas, incluyendo tumores sólidos y hematopoyéticos. Las figuras 7 a 12 también demuestran que el plasma joven (PJ) modula la viabilidad de las células cancerosas de manera dependiente de la dosis, siendo inhibidor contra una variedad de tipos de células cancerosas, incluyendo tumores sólidos y hematopoyéticos en concentraciones relevantes.

J. Modelo tumoral in vivo de xenoinjerto

[0101] Los ratones lampiños atímicos macho se obtienen de Charles River (Wilmington, MA). Los experimentos de tumorigenicidad en modelos de xenoinjertos se realizan de la siguiente manera. Se inyecta por vía subcutánea en los flancos de los ratones una suspensión celular única de una línea celulartumoral (ATCC, Manassas, VA). Los animales son evaluados cada dos días para detectar la presencia de tumores. Una vez que los tumores son palpables, se inicia la medición de los mismos y se continúa dos veces por semana hasta que los tumores alcanzan aproximadamente el 8-10 % del peso corporal de los ratones. Se utilizan calibradores de precisión (calibradores Vernier, Carolina Biological Supply, Burlington, NC) para determinar la longitud (L) y la anchura (W) de los tumores y el volumen tumoral.

[0102] El volumen del tumor se mide mediante la fórmula (1/2)(LxW2). Los ratones se dividen en 6 cohortes y se administran inyecciones i.v. por la vena de la cola dos veces por semana durante cuatro semanas. A cada cohorte se le asigna una de las siguientes opciones: 150 j L de plasma derivado de donantes de 18 a 22 años de edad como se describe arriba; 150 j L de plasma derivado de donantes de > 65 años de edad como se describe arriba; 150 j L de PPF1 (solución al 5 %); 150 j L de PPF1 (solución al 10 %); 150 j L de PPF1 (solución al 20 %); o 2g/kg de IVIg.

[0103] El volumen del tumor se determina al menos dos veces por semana. Tras cuatro semanas de tratamiento, los ratones son sacrificados y se extirpan y recolectan los tumores y otros órganos (cerebro, riñón, corazón, hígado, bazo, páncreas, pulmones, próstata y timo). Se determina y registra el peso de los tumores. La mitad de los tumores y otros órganos recolectados se conservan en formol al 10 % y se embeben en parafina para los análisis histológicos.

K. Diseminación tumoral in vivo

[0104] Los ratones NODscid son inyectados a través de la vena de la cola con suspensiones celulares de una línea de células tumorales (ATCC, Manassas, VA) de cantidades variables en el intervalo de 1x105 a 1x106 células por inyección. Los animales se observan de 17 a 30 días y se sacrifican a los 30 días. Las metástasis en los tejidos se cuantificaron mediante la escisión y recolección de tejidos (cerebro, riñón, corazón, hígado, bazo, páncreas, pulmones, próstata, timo). Los tejidos recolectados se fijaron con formalina y se determinó el número de nódulos metastásicos de cada órgano utilizando un microscopio de zoom estéreo (AmScope, Irvine, CA).

[0105] Lo anterior sólo ilustra los principios de la invención. Se apreciará que los expertos en la técnica podrán idear diversas disposiciones que, aunque no se describan o muestren explícitamente en el presente documento, incorporan los principios de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una Fracción de Proteína Plasmática (FPP) para su uso en la prevención de un cáncer tímico, en la que la FPP comprende una solución estéril de proteína compuesta de albúmina y globulina, derivada del plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos el 83 % con no más del 17 % de globulinas y otras proteínas plasmáticas, preferentemente en la que la FPP no comprende más del 1 % de gammaglobulina según se determina por electroforesis.

2. La PPF para su uso según la reivindicación 1, en la que la PPF es una PPF comercialmente disponible.