ES2900493T3 - Detección rápida de E. coli en un dispositivo de cultivo de película fina - Google Patents
Detección rápida de E. coli en un dispositivo de cultivo de película fina Download PDFInfo
- Publication number
- ES2900493T3 ES2900493T3 ES18720694T ES18720694T ES2900493T3 ES 2900493 T3 ES2900493 T3 ES 2900493T3 ES 18720694 T ES18720694 T ES 18720694T ES 18720694 T ES18720694 T ES 18720694T ES 2900493 T3 ES2900493 T3 ES 2900493T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- sheet
- culture medium
- coli
- growth zone
- glucuronidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims abstract description 53
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 9
- 239000010409 thin film Substances 0.000 title description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 103
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 80
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 47
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 46
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 claims abstract description 32
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 29
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 20
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 15
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 13
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 claims description 6
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 claims description 5
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 abstract description 5
- DHJFFLKPAYHPHU-BYNIDDHOSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-glucuronide Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 DHJFFLKPAYHPHU-BYNIDDHOSA-N 0.000 abstract 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 abstract 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 35
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 34
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 description 25
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 239000000306 component Substances 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 9
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 6
- 239000010408 film Substances 0.000 description 6
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 6
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 229920006378 biaxially oriented polypropylene Polymers 0.000 description 5
- 239000011127 biaxially oriented polypropylene Substances 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 4
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 4
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 4
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 4
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 3
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- DXPPIEDUBFUSEZ-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)CCCCCOC(=O)C=C DXPPIEDUBFUSEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031437 Cell cycle checkpoint protein RAD1 Human genes 0.000 description 2
- 101001130384 Homo sapiens Cell cycle checkpoint protein RAD1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000004820 Pressure-sensitive adhesive Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NCJWJQNOYLTOCG-UHFFFAOYSA-M 2-(4-methylphenyl)-3,5-diphenyltetrazol-2-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 NCJWJQNOYLTOCG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 241000588731 Hafnia Species 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 229920000161 Locust bean gum Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 229920006322 acrylamide copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CQHUIXDMSA-N alpha-D-Galp-(1->6)-alpha-D-Glcp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CQHUIXDMSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- WWAABJGNHFGXSJ-UHFFFAOYSA-N chlorophenol red Chemical compound C1=C(Cl)C(O)=CC=C1C1(C=2C=C(Cl)C(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 WWAABJGNHFGXSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000013409 condiments Nutrition 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 235000011850 desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229930182480 glucuronide Natural products 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N hafnium(IV) oxide Inorganic materials O=[Hf]=O CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021125 infant nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000000711 locust bean gum Substances 0.000 description 1
- 235000010420 locust bean gum Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- BOFXVYGDIRCHEQ-GHQVIJFQSA-N methyl beta-D-glucuronoside Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BOFXVYGDIRCHEQ-GHQVIJFQSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N novaluron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(OC(F)(F)F)F)=CC=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000005026 oriented polypropylene Substances 0.000 description 1
- 235000016046 other dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000008650 pH stress Effects 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000036417 physical growth Effects 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920006327 polystyrene foam Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 150000004728 pyruvic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000012056 semi-solid material Substances 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L terephthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L tetrazolium blue Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M tetrazolium violet Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/04—Filters; Permeable or porous membranes or plates, e.g. dialysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
- C12M33/02—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by impregnation, e.g. using swabs or loops
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/10—Enterobacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
- C12Q2304/20—Redox indicators
- C12Q2304/24—Tetrazolium; Formazan
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
- C12Q2304/40—Detection of gases
- C12Q2304/46—Carbon dioxide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/50—Indoles
- C12Q2334/52—5-Bromo-4-chloro-3-indolyl, i.e. BCI
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Un dispositivo para enumerar diferencialmente colonias de microorganismos coliformes y Escherichia coli, comprendiendo el dispositivo: una primera lámina impermeable al agua; una segunda lámina impermeable al agua unida a la primera lámina; un medio de cultivo seco, rehidratable adherido a la primera lámina; en donde el medio de cultivo comprende: nutrientes organonitrogenados que facilitan el crecimiento de microorganismos coliformes; un sistema indicador de fermentación de lactosa dispuesto en la zona de crecimiento microbiano, comprendiendo el sistema indicador de fermentación de lactosa D-lactosa, un primer compuesto inductor que mejora la producción de β-galactosidasa, y un indicador de pH; un sistema indicador de β-D-glucuronidasa dispuesto en la zona de crecimiento, comprendiendo el sistema indicador de β-D-glucuronidasa 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D- glucurónido y una pluralidad de compuestos que potencian la actividad enzimática de β- glucuronidasa en E. coli; un indicador redox; una cantidad eficaz de al menos un agente que inhibe selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes; y un primer agente gelificante soluble en agua fría; una zona de crecimiento microbiano dispuesta entre la primera lámina y la segunda lámina, en donde un área del medio de cultivo adherido a la primera lámina define la zona de crecimiento; y un segundo agente gelificante soluble en agua fría adherido a la segunda lámina; en donde la primera lámina se une a la segunda lámina de manera que el medio de cultivo se orienta hacia el segundo agente gelificante soluble en agua fría.
Description
DESCRIPCIÓN
Detección rápida de E. coli en un dispositivo de cultivo de película fina
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas
La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de los EE. UU. núm. 62/480.633, presentada el 3 de abril de 2017.
Antecedentes
En las pruebas de seguridad de alimentos y bebidas, la presencia o ausencia de bacterias conformes se considera una prueba importante de calidad. La cantidad de bacterias coliformes permitidas en las bebidas y en determinados alimentos (por ejemplo, productos lácteos) está regulada en muchos países en todo el mundo. Las bacterias coliformes incluyen coliformes fecales, tales como Escherichia coli. La presencia de coliformes fecales en una muestra de alimento o agua se usa como un indicador principal de contaminación fecal del alimento o agua y de la posible presencia de otros microorganismos patógenos.
Los métodos para detectar, identificar y/o enumerar microorganismos en las muestras de alimento varían frecuentemente según la naturaleza del alimento y los tipos de microorganismos que probablemente se encuentren en las muestras. Los compendios de los métodos de ensayo de muestras de alimento incluyen Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 27a edición sup., publicada por The American Public Health Association, Washington, D.C., y el Bacteriological Analytical Manual (“ BAM” ), publicado por la U.S. Food and Drug Administration, Washington, D.C. Los alimentos sólidos usualmente se suspenden en medios acuosos y se mezclan y/o pulverizan para obtener un homogenato líquido del material alimenticio, que puede usarse en métodos de análisis microbiano cuantitativo.
Las placas de recuento de E. coli/Coliformes 3M™ PETRIFILM™ constituyen un sistema de medio de cultivo preparado listo para la enumeración de bacterias E. coli y coliformes. Contienen nutriente de lactosa biliar rojo violeta, un agente gelificante en agua fría, cloruro de trifeniltetrazolio, un indicador que colorea las colonias bacterianas en rojo y BCIG, un indicador que colorea de azul E. coli.
La patente US-5.510.243 describe un proceso y un medio para la determinación simultánea del número y presencia de coliformes fecales vivos y Escherichia coli en una muestra que comprende 6-O-alfa-D-galactopiranosil-D-glucosa o isopropil-beta-D-tiogalactosido como un inductor de galactosidasa y metil-beta-D-glucurónido como un inductor de glucuronidasa. El medio semisólido estéril comprende también inhibidores bacterianos no objetivo, potenciadores bacterianos objetivo y múltiples sustratos fluorógenos y/o cromógenos que producen color y fluorescencia tras la escisión por una enzima específica expresada por las bacterias objetivo.
La patente US-6090541A describe el uso conjunto de un colorante precipitable y un colorante de contraste para mejorar la visualización de placas en lechos confluentes de bacterias en ensayos de bacteriófagos y bacterias. El medio puede comprender un inductor para una enzima capaz de escindir enzimáticamente el colorante precipitable.
Los métodos mencionados anteriormente, sin embargo, generalmente son relativamente caros, conllevan múltiples etapas, requieren períodos de incubación de aproximadamente 24 a 48 horas antes de poder contar las colonias, y/o requieren instrumentación relativamente sofisticada y/o personal relativamente muy cualificado.
Se necesitan métodos más rápidos para enumerar microorganismos coliformes y E. coli viables en muestras de alimentos y bebidas.
Resumen
Generalmente, la presente descripción se refiere a la detección y enumeración opcional de microorganismos en una muestra. Particularmente, la presente invención se refiere a dispositivos de cultivo que pueden usarse para cultivar unidades formadoras de colonias (UFC) de bacterias coliformes en un medio de cultivo semisólido y para enumerar diferencialmente las UFC de coliformes y las UFC de E. coli. El dispositivo de cultivo de la invención incluye una pluralidad de compuestos que mejoran la actividad de p-glucuronidasa en E. coli y es particularmente útil para detectar y diferenciar colonias de E. coli I positivas a la p-glucuronidasa, por ejemplo E. coli positivas a la p-glucuronidasa inducibles y constitutivas, proporcionando, de esta manera, recuentos más precisos de los microorganismos presentes en una muestra. El medio de cultivo contiene, típicamente, TTC, que puede permitir la diferenciación y visualización de bacterias coliformes no productoras de beta glucuronidasa. Además, el medio de cultivo usado en el dispositivo proporciona, típicamente, una detección y enumeración más rápidas de bacterias coliformes y E. coli que los dispositivos de cultivo de película fina anteriores
La presente descripción también describe métodos para usar los dispositivos de cultivo. Los métodos descritos en la presente descripción proporcionan crecimiento, detección y diferenciación de bacterias coliformes y E. coli. Los métodos permiten una enumeración más rápida y más precisa de colonias de coliformes y de E. coli a múltiples
temperaturas (p. ej., 35-37 y 42-44C) que los métodos anteriores que usaban dispositivos de cultivo de película delgada para enumerar colonias de coliformes y de E. coli. En un aspecto, la presente descripción proporciona un dispositivo para enumerar diferencialmente colonias de microorganismos coliformes y de Escherichia coli. El dispositivo puede comprender una primera lámina impermeable al agua; una segunda lámina impermeable al agua unida a la primera lámina; un medio de cultivo seco y rehidratable que comprende un primer agente gelificante soluble en agua fría adherido a la primera lámina; una zona de crecimiento microbiano dispuesta entre la primera lámina y la segunda lámina; y un segundo agente gelificante soluble en agua fría adherido a la segunda lámina. El medio de cultivo puede comprender nutrientes organonitrogenados que facilitan el crecimiento de microorganismos coliformes, un sistema indicador de fermentación de lactosa, un sistema indicador de p-D-glucuronidasa, indicador de cloruro de tetrazolio y una cantidad eficaz de al menos un agente que inhibe selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes. Un área del medio de cultivo adherida a la primera lámina define la zona de crecimiento. El sistema indicador de fermentación de lactosa comprende D-lactosa, un primer compuesto inductor que mejora la producción de pgalactosidasa y un indicador de pH. El sistema indicador de p-D-glucuronidasa comprende 5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-glucurónido y una pluralidad de compuestos que potencian la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli. La primera lámina se une a la segunda lámina de manera que el medio de cultivo se orienta hacia el segundo agente gelificante soluble en agua fría. La primera lámina y la segunda lámina se configuran para retardar el paso de dióxido de carbono a través de ellas.
En cualquiera de las realizaciones anteriores, al menos uno de la pluralidad de compuestos que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli es el ácido D-glucurónico. En cualquiera de las realizaciones anteriores, la primera lámina y/o la segunda lámina pueden comprender una película de poliéster. En cualquiera de las realizaciones anteriores, la segunda lámina puede comprender tereftalato de polietileno. En cualquiera de las realizaciones anteriores, la zona de crecimiento puede definirse por un espaciador adherido a la primera lámina. En cualquiera de las realizaciones anteriores, el medio de cultivo comprende además un reactivo para tamponar el medio de cultivo, cuando se reconstituye con un líquido acuoso, a un pH entre aproximadamente 6,5 y aproximadamente 8. En cualquiera de las realizaciones anteriores, los nutrientes organonitrogenados se seleccionan de un grupo que consiste en extracto de levadura, peptonas porcinas, un digesto enzimático de gelatina, un digesto enzimático de peptona animal y una combinación de dos o más de los nutrientes organonitrogenados anteriores. En cualquiera de las realizaciones anteriores, el agente se puede seleccionar de un grupo que consiste en sales biliares, dodecilsulfato de sodio y combinaciones de los mismos.
La presente descripción describe un método para enumerar diferencialmente colonias de microorganismos coliformes y Escherichia coli a través de la reducción de TTC y la expresión de beta glucuronidasa constitutiva e inducible, respectivamente.
Las palabras “ preferido” y “ preferible” se refieren a las realizaciones de la invención que pueden dar como resultado determinados beneficios, en determinadas circunstancias. No obstante, otras realizaciones también pueden ser preferidas en las mismas u otras circunstancias. Además, la enumeración de una o más realizaciones preferidas no implica que otras realizaciones no sean útiles y no se prevé que excluyan otras realizaciones del alcance de la invención.
Los términos “ comprende” y variaciones de los mismos no tienen un significado limitativo cuando estos términos aparecen en la descripción y en las reivindicaciones.
Como se utiliza en la presente memoria, “ un” , “ uno” , “ el” , “ al menos uno” , y “ uno o más” se usan indistintamente. Por tanto, por ejemplo, un nutriente puede interpretarse con el significado de “ uno o más” nutrientes.
El término “ y/o” significa uno o todos los elementos relacionados o una combinación de dos cualquiera o más de los elementos relacionados.
También en la presente memoria, la enumeración de intervalos numéricos mediante puntos extremos incluye todos los números subsumidos dentro de ese intervalo (p. ej. 1 a 5 incluye 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4, 5, etc.).
El resumen anterior de la presente invención no pretende describir cada realización descrita ni cada implementación de la presente invención. La descripción que se ofrece a continuación muestra de un modo más concreto las realizaciones ilustrativas. En algunos puntos de la solicitud se proporcionan directrices mediante listas de ejemplos, cuyos ejemplos se pueden utilizar en varias combinaciones. En cada caso, la lista enumerada sirve únicamente de grupo representativo y no debe interpretarse como una lista exclusiva.
En los dibujos adjuntos y la descripción que se da más adelante se exponen detalles adicionales de estas u otras realizaciones. Otras características, objetos y ventajas resultarán evidentes a partir de la descripción y los dibujos, y a partir de las reivindicaciones.
Breve descripción de los dibujos
La presente invención puede ilustrarse en mayor detalle mediante referencia a los dibujos adjuntos, en donde:
La Fig. 1 es una vista en perspectiva superior, parcialmente en sección, de un dispositivo de cultivo microbiológico preferido de la presente descripción;
la Fig. 2 es una vista en sección transversal del dispositivo de la Fig. 1;
la Fig. 3 es una vista superior de un patrón de cuadrículas que puede imprimirse sobre la primera lámina o la segunda lámina del dispositivo de la Fig. 1.
Si bien las figuras arriba identificadas exponen varias realizaciones de la presente descripción, se contemplan también otras realizaciones, como se indica en la descripción. En todos los casos, esta exposición presenta la invención por vía de la representación y no de la limitación. Debe comprenderse que los expertos en la técnica pueden concebir muchas otras modificaciones y realizaciones que forman parte del alcance y espíritu de los principios de la invención. Las figuras pueden no estar dibujadas a escala.
Descripción detallada
Antes de que se explique cualquiera de las realizaciones de la presente descripción con detalle, se entenderá que la invención no está limitada en su aplicación a los detalles de construcción y la disposición de los componentes expuesta en la siguiente descripción o ilustrada en los siguientes dibujos. La invención es capaz de otras realizaciones y se puede poner en práctica o se puede realizar de diversas maneras. Asimismo, debe entenderse que la redacción y terminología usadas en la presente memoria tienen fines de descripción y no deben considerarse como una limitación. En la presente memoria, el uso de “ que incluye” , “ que comprende” , o “ que tiene” y variaciones de los mismos abarca los artículos que se indican a continuación y equivalentes de los mismos así como los artículos adicionales. Salvo que se indique o se limite de otra forma, los términos “ conectado” y “ acoplado” , y variaciones de los mismos, se usan de forma amplia y abarcan conexiones y acoplamientos, tanto directos como indirectos. Además, “ conectado” y “ acoplado” no están restringidos a las conexiones o acoplamientos físicos o mecánicos. Cabe entenderse que pueden utilizarse otras realizaciones y hacerse cambios estructurales o lógicos sin abandonar el ámbito de la presente descripción. Además, términos tales como “ delante” , “ detrás” , “ arriba” , “ abajo” , y similares se utilizan solamente para describir elementos según se relacionan entre sí, pero en forma alguna obligan a indicar orientaciones específicas del aparato, a indicar o implicar orientaciones necesarias o requeridas del aparato, o especificar cómo la invención descrita en la presente memoria se va a usar, montar, visualizar o colocar durante el uso.
El término “ cultivo” o “ crecimiento” de microorganismos, como se usa en la presente descripción, se refiere al método de multiplicación de organismos microbianos dejando que se reproduzcan en medios de cultivo predeterminados en condiciones que favorecen su crecimiento. Más particularmente, es el método para proporcionar un medio de cultivo y condiciones adecuadas para facilitar al menos una división celular de un microorganismo. Los medios de cultivo son medios sólidos, semisólidos o líquidos que contienen todos los nutrientes y los parámetros de crecimiento físico necesarios para el crecimiento microbiano.
El término “ enriquecimiento” , como se usa en la presente descripción, se refiere al método de cultivo para enriquecer selectivamente el crecimiento de un microorganismo específico proporcionando un medio y condiciones con propiedades específicas y conocidas que favorecen el crecimiento de ese determinado microorganismo. El ambiente del cultivo de enriquecimiento influirá positivamente en el crecimiento de un microorganismo seleccionado y/o influirá negativamente en el crecimiento de otros microorganismos.
La presente descripción se refiere generalmente a métodos de cultivo y detección y enumeración diferenciada de colonias de coliformes y E. coli en un dispositivo de cultivo de película delgada que contiene un agente gelificante soluble en agua fría.
“ Bacterias coliformes” se refiere en conjunto a un grupo de varios géneros (p.ej., Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Serratia y Escherichia) de bacterias que tienen la capacidad de fermentar lactosa con una producción resultante de ácido y gas. La mayoría de las bacterias coliformes se consideran generalmente no patógenas para los seres humanos. Sin embargo, algunas bacterias coliformes (p. ej., Escherichia coli) incluyen cepas que son altamente patógenas. Los coliformes se encuentran en la materia fecal de los mamíferos y se usan comúnmente como indicador de la contaminación fecal de alimentos y/o agua.
Los materiales de muestra adecuados pueden obtenerse o derivarse de diversas fuentes. El término “ fuente” se usa, generalmente, para referirse al alimento o no alimento cuyo análisis de microorganismos se desea llevar a cabo. La fuente puede ser un material sólido, líquido, semisólido, gelatinoso, un gas (p. ej., aire) y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la fuente puede proporcionarse mediante un elemento de captura que se ha usado, por ejemplo, para recolectar la fuente de una superficie de interés o del aire. En algunas realizaciones, la composición líquida puede incluir el elemento de captura, que puede fraccionarse además (p. ej., durante un proceso de agitación o disolución) para mejorar la recuperación de la fuente y los microorganismos de interés. La superficie de interés puede incluir al menos una parte de diversas superficies, incluidas, aunque no de forma limitativa, paredes (incluidas puertas), suelos, techos,
drenajes, sistemas de refrigeración, conductos (p. ej., conductos de aire), ventilaciones, asientos de inodoro, mangos, pomos de puerta, pasamanos, encimeras, superficies de mesas, superficies para comer (p. ej., bandejas, platos, etc.), superficies de trabajo, superficies de equipos, ropa, etc., y combinaciones de los mismos. En el método puede usarse la totalidad o una parte de la fuente. Cuando se usa una parte de la fuente, algunas veces puede denominarse como una “ muestra” de la fuente. Sin embargo, el término “ muestra” se usa generalmente en la presente descripción en referencia a la parte de volumen o masa de material que se obtiene de la fuente y se introduce en un dispositivo de prueba para la detección de microorganismos.
El término “ alimento” se usa generalmente en referencia a una composición comestible sólida, líquida (p. ej., incluidas, aunque no de forma limitativa, soluciones, dispersiones, emulsiones, suspensiones, etc., y combinaciones de las mismas) y/o semisólida. Los ejemplos de alimentos incluyen, aunque no de forma limitativa, carnes, aves de corral, huevos, pescado, mariscos, vegetales, frutas, alimentos preparados (p. ej., sopas, salsas, pastas), productos de grano (p. ej., harina, cereales, panes), alimentos enlatados, leche, otros productos lácteos (p. ej., queso, yogur, crema agria), grasas, aceites, postres, condimentos, especias, pastas, bebidas, agua, cerveza, alimento para animales, otros materiales comestibles adecuados y combinaciones de los mismos.
El término “TTC” es una abreviatura del colorante triphenyl tetrazolium chloride (cloruro de trifeniltetrazolio).
Un tipo de dispositivos de cultivo de película fina conocido en la técnica, que comprende dos láminas contiguas con medio de cultivo seco adherido entre ellas, se describe en la patente US-4.565.783. Estos dispositivos son útiles para cultivar, detectar y enumerar diversos microorganismos incluidos, por ejemplo, bacterias aerobias totales o bacterias coliformes.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona un dispositivo. Las Figs. 1 y 2 ilustran una realización de un dispositivo según la presente descripción. El dispositivo 10 de crecimiento microbiológico incluye un miembro de cuerpo que comprende una primera lámina 12 autoportante impermeable que tiene superficies superior e inferior. La primera lámina 12 preferiblemente es una película relativamente rígida de un material como poliéster, polipropileno o poliestireno que no absorberá ni se verá afectado de cualquier otra manera por el agua. Se ha descubierto que funcionan bien las películas de poliéster de aproximadamente 0,1 mm a 0,18 mm de espesor, películas de polipropileno de aproximadamente 0,1 mm a 0,2 mm de espesor y películas de poliestireno de aproximadamente 0, 38 mm de espesor. Otras primeras láminas adecuadas incluyen papel fotográfico con un polietileno u otro recubrimiento impermeable, como se describe en la patente US-4.565.783. La primera lámina 12 puede ser transparente u opaca, dependiendo de si se desea ver colonias bacterianas a través de la primera lámina. Para facilitar el recuento de colonias bacterianas, la primera lámina 12 puede tener un patrón (p. ej., un patrón de rejilla cuadrada) impreso en ella, como se muestra en la Fig. 3.
Adherido a la primera lámina 12 se encuentra un medio 16 de cultivo que comprende un primer agente gelificante soluble en agua fría descrito en la presente descripción. Además, adherida (ya sea directa o indirectamente) a la primera lámina 12 del dispositivo 10 se encuentra una segunda lámina 22. La segunda lámina 22 preferiblemente es transparente para facilitar el recuento de las colonias bacterianas en el dispositivo y es sustancialmente impermeable a las bacterias y al vapor de agua. Como se utiliza en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, “ sustancialmente impermeable a las bacterias y al vapor de humedad” designa segundas láminas que evitan la contaminación no deseada (p. ej., contaminación microbiana) del medio deshidratado durante el transporte, almacenamiento y uso de los dispositivos y que proporcionan un ambiente que favorecerá el crecimiento de microorganismos durante el período de incubación.
Por lo general, la segunda lámina 22 tendrá propiedades similares a la primera lámina 12, pero no tiene por qué ser tan rígida. Los materiales adecuados para la segunda lámina 22 incluyen películas plásticas tales como, por ejemplo, polipropileno (p. ej., biaxially-oriented polypropylene [polipropileno orientado biaxialmente - BOPP] de 40 pm de espesor) y poliéster (p. ej., polyethylene terephthalate [tereftalato de polietileno - PET] que tiene un espesor de aproximadamente 70 pm). La densidad del PET (p. ej., aproximadamente 1,38 g/mm3) es, frecuentemente, mayor que la densidad del BOPP (p. ej., aproximadamente 0,92 g/mm3). Opcionalmente, la primera lámina 12 y la segunda lámina 22 se configuran para retardar el paso de dióxido de carbono a través de ellas. De forma ventajosa, un dispositivo construido con la primera y segunda láminas que están configuradas para retardar el paso de dióxido de carbono a través de ellas es más eficaz para atrapar dióxido de carbono biogénico (p. ej., dióxido de carbono producido por la fermentación de un carbohidrato) adyacente a una colonia en el dispositivo que ha producido el dióxido de carbono biogénico (p. ej., por la fermentación de lactosa presente en el dispositivo).
Opcionalmente, la primera lámina 12 se recubre en una de sus superficies principales con una capa de un adhesivo 14 que sirve para mantener un medio 16 de cultivo seco y rehidratable sobre la primera lámina en una monocapa uniforme para facilitar la hidratación. Alternativamente, el adhesivo 14 puede revestirse sobre la segunda lámina 22 y el medio de cultivo revestirse sobre la primera lámina 12. En cualquier caso, el adhesivo 14 y el adhesivo 24 preferiblemente son insolubles en agua y no inhiben el crecimiento de microorganismos. Preferiblemente, los adhesivos son lo suficientemente transparentes cuando están húmedos como para permitir la visualización de colonias bacterianas a través de la película recubierta con el adhesivo. Los adhesivos adecuados para usar en el adhesivo 14 y el adhesivo 24 incluyen, por ejemplo, adhesivos sensibles a la presión. Sin embargo, pueden usarse también adhesivos activados por calor en donde una
sustancia de punto de fusión más bajo recubre una sustancia de punto de fusión más alto. También pueden ser útiles los adhesivos activados con agua, tales como mucílago. El adhesivo 14 contiene preferiblemente TTC, aunque ocasionalmente se usan otros aditivos o colorantes. A diferencia de algunos casos de los que se ha escrito previamente, los dispositivos de cultivo de la invención y los métodos descritos en la presente descripción no requieren la adición de ácido pirúvico ni piruvatos. En muchos casos preferidos, los dispositivos de cultivo de la invención descritos en la presente descripción, así como los métodos en los que se usan, están libres de ácido pirúvico y sus sales. El adhesivo 14 (que contiene usualmente TTC) debe recubrirse sobre la primera lámina 12 o la segunda lámina 22, según sea el caso, en un espesor que no interfiera sustancialmente con o evite la observación (p. ej., observación manual o mecánica) de colonias microbianas que crecen en el dispositivo y/o no interfiera sustancialmente con o evite la transmisión de radiación electromagnética (p. ej., luz visible) que se usa para observar las colonias microbianas. Típicamente, cuando la primera lámina 12 se recubre con el adhesivo 14, sigue un segundo recubrimiento de medio de cultivo celular. Un ejemplo no limitativo de un adhesivo adecuado para usar en un dispositivo de la presente descripción es un copolímero de isooctilacrilato/acrilamida (en una relación molar de 94/6). Otros adhesivos sensibles a la presión que pueden usarse incluyen isooctilacrilato/ácido acrílico (en una relación molar de 95/5 o 94/6) y caucho de silicona. Los adhesivos que se vuelven lechosos al exponerse al agua son menos preferidos, pero pueden usarse en conjunto con una primera lámina no transparente o cuando no se requiere visualización de colonias.
Recubierto sobre al menos una parte del adhesivo opcional 14 (que usualmente contiene TTC y/o directamente sobre la primera lámina 12 se encuentra un recubrimiento que comprende un medio 16 de cultivo seco y rehidratable. El medio 16 de cultivo seco está sustancialmente exento de agua. Como se utiliza en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, la expresión “ sustancialmente exento de agua” designa un recubrimiento que tiene un contenido de agua no superior a aproximadamente el contenido de agua del recubrimiento deshidratado una vez que se ha dejado equilibrar con el medio ambiente. Se desea una monocapa uniforme de medio 16 de cultivo seco para garantizar la uniformidad de los medios de cultivo rehidratados. El medio de cultivo seco y rehidratable debe tener suficiente área superficial expuesta en una zona de crecimiento microbiano para la hidratación durante el uso. Generalmente, es adecuada una capa adhesiva en el intervalo de espesor de aproximadamente 5 pm a aproximadamente 13 pm.
Como alternativa a la realización ilustrativa de las Figs. 1 y 2, se contempla que un dispositivo de la presente descripción pueda comprender un pedestal con el medio de cultivo dispuesto sobre él y pueda ensamblarse de manera similar al dispositivo de cultivo descrito en la patente US-6.632.661.
La segunda lámina 22, como se ilustra, se recubre con capas de adhesivo 24 (adhesivo 24 que contiene preferiblemente y más comúnmente TTC) y polvo 26. El adhesivo 24 debe recubrirse sobre la segunda lámina 22 en un espesor que no interfiera sustancialmente con o evite la observación (p. ej., observación manual o mecánica) de colonias microbianas que crecen en el dispositivo y/o no interfiera sustancialmente con o evite la transmisión de radiación electromagnética (p. ej., luz visible) que se usa para observar las colonias microbianas. Generalmente, es adecuada una capa adhesiva en el intervalo de espesor de aproximadamente 5 pm a aproximadamente 13 pm.
El polvo 26 comprende un segundo agente gelificante soluble en agua fría seco. El segundo agente gelificante soluble en agua fría tiene propiedades similares al primer agente gelificante soluble en agua fría y puede comprender un agente gelificante soluble en agua fría que es idéntico al primer agente gelificante soluble en agua fría. El polvo 26 se adhiere a la segunda lámina 22 (p. ej., se adhiere al adhesivo 24 que se adhiere a la segunda lámina 22). El polvo 26 se recubre sobre el adhesivo 24 como se describe en la patente US-4.565.783. Se prefiere una monocapa uniforme de polvo seco 26. El polvo 26 debe tener suficiente área de superficie expuesta en una zona de crecimiento microbiano para actuar en combinación con el medio 16 de cultivo seco absorber un volumen predefinido de un líquido acuoso depositado en la zona de crecimiento durante el uso del dispositivo.
Como se utiliza en la especificación y en las reivindicaciones, el término “ polvo” designa un material en forma de partículas finamente dividido que tiene un diámetro promedio inferior a 400 micrómetros. Como se utiliza en la especificación y en las reivindicaciones, el término “ soluble en agua fría” designa un material que forma una solución en agua a temperatura ambiente.
La zona de crecimiento microbiano es la región en el dispositivo en la cual se coloca la muestra durante la inoculación del dispositivo. La primera lámina 12 y la segunda lámina 22 encierran la zona de crecimiento microbiano, con el medio de cultivo 16 y el polvo 26 uno frente al otro en la zona de crecimiento microbiano. Típicamente, la zona de crecimiento microbiano se separa de los bordes de la primera lámina 12 y la segunda lámina 22 para evitar la contaminación de la muestra y/o evitar fugas de la muestra fuera del dispositivo. Después de colocar un líquido acuoso (p. ej., que contiene la muestra que se va a analizar) en la zona de crecimiento microbiano, el medio 16 de cultivo seco y rehidratable y el polvo 26 en la zona de crecimiento microbiano se hidratan mediante el líquido para formar un medio de cultivo semisólido para cultivar colonias bacterianas coliformes. La zona de crecimiento microbiano está libre de matrices que evitan la visualización de las colonias bacterianas.
En cualquier realización, la zona de crecimiento microbiano viene definida opcionalmente por un elemento espaciador aplicado a la superficie de la primera lámina 12 sobre la cual se recubre el medio 16 de cultivo seco. El elemento espaciador comprende una pieza de espaciador 18 que tiene una abertura 20 (p. ej., una abertura circular, una abertura cuadrada, una abertura rectangular) cortada a través del centro para exponer el medio 16 de cultivo seco. Las paredes de la abertura 20 proporcionan una cavidad de tamaño y forma predeterminados para confinar el medio después de la hidratación. El espaciador 18 debe ser lo suficientemente grueso como para formar un pocillo del volumen deseado, p. ej., aproximadamente 1 mililitro, aproximadamente 2 mililitros, aproximadamente 3 mililitros o aproximadamente 5 mililitros. La espuma de polietileno de celda cerrada es un ejemplo de un material adecuado para el espaciador 18, pero puede usarse cualquier material que sea hidrófobo (no humectante), inerte a los microorganismos y capaz de soportar la esterilización. La abertura 20 forma un perímetro de la zona de crecimiento microbiano en el dispositivo de cultivo. Al recibir el volumen deseado (predeterminado), el dispositivo forma un medio de cultivo hidratado que facilita el crecimiento y la enumeración de colonias de coliformes.
El medio 16 de cultivo seco y rehidratable comprende nutrientes organonitrogenados que facilitan el crecimiento de microorganismos coliformes, una cantidad eficaz de al menos un agente que inhibe selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes, y un primer agente gelificante soluble en agua fría.
Los nutrientes organonitrogenados del medio 16 de cultivo proporcionan una recuperación rápida (p. ej., a partir del estrés por calor, estrés por pH, estrés por agua) y el crecimiento de microorganismos coliformes. Los nutrientes organonitrogenados proporcionan, por ejemplo, aminoácidos y/u oligopéptidos y/o vitaminas. Los ejemplos no limitativos de nutrientes organonitrogenados adecuados en cualquier realización de un dispositivo según la presente descripción incluyen extracto de levadura, peptonas porcinas, un digesto enzimático de gelatina, un digesto enzimático de peptona animal y una combinación de cualesquiera dos o más de los nutrientes organonitrogenados anteriores.
El medio 16 de cultivo de los dispositivos de la presente descripción incluye una cantidad eficaz de al menos un agente que inhibe selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes. El agente proporciona una ventaja competitiva para el crecimiento de microorganismos coliformes, con respecto al menos a un microorganismo no coliforme, en el dispositivo de la presente descripción. Estos agentes selectivos, que incluyen antibióticos, por ejemplo, son muy conocidos para una persona con experiencia en la técnica. En cualquier realización, el agente comprende sales biliares, dodecilsulfato de sodio, o una combinación de sales biliares y dodecilsulfato de sodio. La cantidad eficaz se selecciona de manera que, cuando un volumen predeterminado de líquido acuoso se deposita en la zona de crecimiento, el medio de cultivo rehidratado tiene una concentración del al menos un agente suficientemente alta como para inhibir selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes, pero no tan alta como para inhibir sustancialmente el crecimiento de microorganismos coliformes (es decir, los microorganismos coliformes forman colonias observables e identificables en un período de aproximadamente 24 horas de incubación a una temperatura de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 45 °C).
El medio 16 de cultivo de los dispositivos de la presente descripción es soluble en agua fría. La “ solubilidad en agua fría” del medio de cultivo empleado en los dispositivos de la presente invención incluye un primer agente gelificante soluble en agua fría en el medio de cultivo. Los primeros agentes gelificantes solubles en agua fría adecuados para su inclusión en el medio 16 de cultivo incluyen tanto agentes gelificantes naturales como sintéticos que forman soluciones en agua a temperatura ambiente. Los agentes gelificantes tales como goma guar, poliacrilamida, goma de algarrobo y agar, por ejemplo, forman soluciones en agua a temperatura ambiente y son primeros agentes gelificantes solubles en agua fría adecuados para proporcionar un medio de cultivo seco y rehidratable que es “ soluble en agua fría” según la presente descripción. Los primeros agentes gelificantes solubles en agua fría preferidos para el medio 16 de cultivo incluyen, por ejemplo, goma guar y goma xantano, siendo estos agentes gelificantes útiles individualmente o en combinación entre sí y en combinación con otros agentes gelificantes solubles en agua fría. Los nutrientes organonitrogenados para el crecimiento de microorganismos coliformes forman soluciones en agua a temperatura ambiente.
Después de recubrir el medio de cultivo sobre la primera lámina y secarlo sobre ella, el medio de cultivo seco adherido a la primera lámina tiene un peso de recubrimiento. El peso de recubrimiento del medio de cultivo seco se selecciona de manera que, cuando la zona de crecimiento se rehidrata con un volumen predefinido de líquido acuoso (p. ej., un líquido acuoso que comprende una muestra a analizar para los microorganimos coliformes y E. coli), el medio de cultivo rehidratado tiene la concentración apropiada de cada ingrediente para facilitar el crecimiento y la enumeración diferencial de los microorganismos coliformes y E. coli. En cualquier realización, el peso de recubrimiento del medio de cultivo seco adherido a la primera lámina puede ser de aproximadamente 130 mg/100 cm2 a aproximadamente 195 mg/100 cm2.
El medio de cultivo seco y rehidratable de un dispositivo según la presente descripción comprende un sistema indicador de fermentación de lactosa dispuesto en la zona de crecimiento microbiano. El sistema indicador de fermentación de lactosa proporciona dos indicaciones de colonias de bacterias coliformes que crecen en el dispositivo: una primera indicación (producción de ácido) debido a la fermentación de lactosa y una segunda indicación (producción de gas) debido a la fermentación de lactosa. La producción de tanto ácido como gas (CO2)
procedentes de la fermentación de lactosa confirma la presencia de una colonia de microorganismos coliformes en crecimiento en el dispositivo. La presencia de ácido y gas en combinación con la precipitación del producto de reducción de TTC “ formazan” durante el crecimiento de colonias puede proporcionar la diferenciación de bacterias coliformes frente a organismos de E coli inducibles y constitutivos. En consecuencia, el sistema indicador de fermentación de lactosa comprende D-lactosa y un indicador de pH. El indicador de pH tiene un intervalo de transición alrededor de 7,0. Los indicadores de pH adecuados incluyen indicadores de pH de sulfoneftaleína, tales como rojo de fenol y rojo de clorofenol, por ejemplo.
El sistema indicador de fermentación de lactosa incluye, además, un primer compuesto inductor que mejora la producción de enzimas (p. ej., p-galactosidasa) para usar lactosa. Los ejemplos no limitativos de los primeros compuestos inductores adecuados incluyen isopropil-p-D-tiogalactósido (IPTG) y fenil-p-D-galactósido.
El sistema indicador de fermentación de lactosa se dispone (p. ej., en el medio de cultivo seco y rehidratable) en la zona de crecimiento microbiano del dispositivo de cultivo. Por lo tanto, en cualquier realización, al menos uno de los componentes del sistema indicador de fermentación de lactosa puede añadirse al medio de cultivo antes de recubrir el medio de cultivo sobre la primera lámina 12 y/o el primer adhesivo 14. Alternativamente, al menos un componente del sistema indicador de fermentación de lactosa puede incluirse en un líquido acuoso (p. ej., agua, un tampón y/o la muestra) que se deposita en o sobre la zona de crecimiento microbiano cuando el medio de cultivo se rehidrata para su uso. En cualquier realización en donde la lactosa se dispone en el dispositivo en el medio de cultivo seco, la lactosa está presente en el medio de cultivo seco a un peso de recubrimiento de aproximadamente 8,5 mg/100 cm2 a aproximadamente 27 mg/100 cm2.
El medio de cultivo seco y rehidratable de un dispositivo según la presente descripción comprende un sistema indicador de p-D-glucuronidasa dispuesto en la zona de crecimiento microbiano. El sistema indicador de p-D-glucuronidasa proporciona una indicación de colonias, tales como colonias de E. coli, que producen actividad enzimática de p-D-glucuronidasa. Por lo tanto, el sistema indicador de p-D-glucuronidasa proporciona un medio para distinguir colonias de E. coli presentes en el dispositivo frente a colonias de coliformes no E. coli presentes en el dispositivo. En consecuencia, el sistema indicador de p-D-glucuronidasa comprende un sustrato enzimático de p-D-glucuronidasa cromogénico (p. ej., 5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-glucurónido). Además, el sistema indicador p-D-glucuronidasa comprende además una pluralidad de compuestos que potencian la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli. Los ejemplos no limitativos de compuestos adecuados que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli incluyen metil-p-D-glucurónido, fenil-p-D-glucurónido, y ácido D-glucurónico. En cualquier realización, un primer compuesto que mejora la actividad enzimática de pglucuronidasa en E. coli se selecciona de metil-p-D-glucurónido y fenil-p-D-glucurónido. En cualquier realización, un segundo compuesto que mejora la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli es ácido D-glucurónico. Sorprendentemente, un dispositivo que tiene una combinación del primer y segundo compuestos que mejora la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli tiene mayor capacidad de detección de E. coli positiva a la ¡5-glucuronidasa. Dicha combinación de compuestos para detectar este tipo de microorganismo no se ha conocido anteriormente.
Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que al menos uno de la pluralidad de compuestos que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli puede inducir la producción de más enzima p-glucuronidasa por parte de las células. Alternativamente, o de forma adicional, al menos uno de la pluralidad de compuestos que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli puede mejorar la actividad de las moléculas enzimáticas de pglucuronidasa cuando reaccionan con un sustrato enzimático cromogénico (p. ej., 5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-glucurónido).
El sistema indicador de p-D-glucuronidasa se dispone (p. ej., en el medio de cultivo seco y rehidratable) en la zona de crecimiento microbiano del dispositivo de cultivo. Por lo tanto, en cualquier realización, al menos uno de los componentes del sistema indicador de p-D-glucuronidasa puede añadirse al medio de cultivo antes de recubrir el medio de cultivo sobre la primera lámina 12, el primer adhesivo 14 o segunda lámina 22. Alternativamente, al menos un componente del sistema indicador de p-D-glucuronidasa puede incluirse en un líquido acuoso (p. ej., agua, un tampón y/o la muestra) que se deposita en o sobre la zona de crecimiento microbiano cuando el medio de cultivo se rehidrata para su uso.
En cualquier realización, un dispositivo de la presente descripción puede comprender un reactivo para tamponar el medio de cultivo cuando el medio de cultivo se reconstituye con un líquido acuoso durante el uso. El reactivo puede regular el medio de cultivo (cuando se hidrata durante el uso) a un pH entre aproximadamente 6,5 y 7,5. Un ejemplo no limitativo de un reactivo adecuado para tamponar el medio de cultivo una sal de fosfato (p. ej., Na2HPO4, NaH2PO4 , K2HPO4, KH2PO4, o una combinación de cualesquiera dos o más de los reactivos anteriores). El reactivo se coloca (p. ej., en el medio de cultivo seco y rehidratable) en la zona de crecimiento microbiano del dispositivo de cultivo. Por lo tanto, en cualquier realización, el reactivo puede añadirse al medio de cultivo antes de recubrir el medio de cultivo sobre la primera lámina 12 y/o el primer adhesivo 14. Alternativamente, el reactivo puede incluirse en un líquido acuoso (p. ej., agua, un tampón y/o la muestra) que se deposita en o sobre la zona de crecimiento microbiano cuando el medio de cultivo se rehidrata para su uso.
Los componentes del medio de cultivo pueden mezclarse juntos en un líquido acuoso y recubrirse sobre la primera lámina, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 12 de la patente US-4.565.783. Después de revestir el medio de cultivo sobre la primera lámina, la capa del medio de cultivo se seca hasta que esté esencialmente libre de agua. Opcionalmente, antes de recubrir el medio de cultivo sobre la primera lámina, la primera lámina se recubre con una capa de un adhesivo como se describe en la presente descripción. Después, el medio de cultivo se recubre sobre la capa adhesiva y se seca hasta que la capa de medio de cultivo esté esencialmente libre de agua.
En cualquier realización, puede ser deseable incorporar un indicador no específico (p. ej., un colorante) en la zona de crecimiento microbiano para indicar una presencia de una colonia microbiana en crecimiento en el dispositivo. En algunas realizaciones, el indicador puede incorporarse en el medio 16 de cultivo. Alternativamente, el indicador puede incorporarse en el adhesivo 14. Los indicadores adecuados son los que son metabolizados por los microorganismos en crecimiento y que hacen que las colonias se coloreen para facilitar la visualización. Los ejemplos de tales indicadores incluyen cloruro de trifeniltetrazolio, rojo de p-toliltetrazolio, violeta de tetrazolio, azul de tetrazolio y colorantes relacionados.
Opcionalmente, en cualquier realización, un dispositivo de la presente descripción comprende además la fórmula para bebés en polvo dispuesta en la zona de crecimiento microbiano. La fórmula para bebés puede proporcionarse en la zona de crecimiento como un componente del medio de cultivo seco o, alternativamente, puede mezclarse con el segundo agente gelificante soluble en agua fría adherido a la capa adhesiva 24 sobre la segunda lámina. La fórmula para bebés proporciona una pluralidad de nutrientes (p. ej., proteínas, carbohidratos, minerales y vitaminas) que pueden facilitar el crecimiento de microorganismos coliformes. Un ejemplo no limitativo de una fórmula para bebés en polvo adecuada para usar en un dispositivo de la presente descripción es la fórmula para bebés GERBER® GOOD START® Gentle (Etapa 1) comercializada por Nestle Infant Nutrition; Florham Park, NJ.
En cualquier realización en donde la fórmula para bebés se dispone en el dispositivo en el medio de cultivo seco, la fórmula para bebés está presente en el medio de cultivo seco a un peso de recubrimiento de hasta aproximadamente 27 mg/100 cm2. En cualquier realización, la fórmula para bebés puede estar presente en el medio de cultivo seco a un peso de recubrimiento de hasta aproximadamente 14 mg/100 cm2. En cualquier realización, la fórmula para bebés puede estar presente en el medio de cultivo seco a un peso de recubrimiento de hasta aproximadamente 19 mg/100 cm2.
Los dispositivos de cultivo de película fina se han usado para cultivar y enumerar colonias de microorganismos (p. ej., especies de E. coli) patógenos y, posteriormente, las colonias se han transferido (p. ej., mediante la técnica “ blott” ) sobre una membrana para la identificación de los microorganismos, por ejemplo, como se describe en la patente US-5.137.812. Se contempla que, en algunas realizaciones, los dispositivos de cultivo de película fina según la presente descripción puedan usarse además para cultivar y enumerar colonias de microorganismos que se transfieren posteriormente (p. ej., mediante la técnica” blott” ) sobre una membrana para la identificación de los microorganismos.
En cualquier realización, un dispositivo de cultivo de la presente descripción puede comprender un medio de cultivo seco y rehidratable adherido a la primera lámina, en donde el medio de cultivo seco y rehidratable comprende los componentes enumerados en la Tabla 1.
Tabla 1. Lista de componentes de un medio de cultivo seco y rehidratable ilustrativo de la presente descripción.
Compuestos organonitrogenados: Extracto de levadura; Peptona porcina; Lactosa; Digestos enzimáticos de tejido animal; digestos enzimáticos de gelatina, indicador de pH de fórmula para bebés; rojo de fenol
Sales: MgC12, FAC, Sales Biliares, KH2PO4; K2HPO4
Inductores: metil glucurónido; Ácido D-glucurónico, IPTG
Indicadores: BCIglucurónido
Agentes gelificantes: Goma guar
La presente descripción describe un método para enumerar diferencialmente colonias de microorganismos coliformes y de Escherichia coli. El método comprende poner en contacto una muestra y un líquido acuoso en la zona de crecimiento microbiano de cualquier realización del dispositivo de cultivo de la presente descripción para formar un dispositivo de cultivo inoculado. En cualquier realización, la muestra puede comprender el líquido acuoso. Generalmente, las cantidades de agente gelificante; agentes indicadores (TTC y BCIG); y el medio de cultivo seco en la zona de crecimiento microbiano del dispositivo de cultivo se seleccionan para proporcionar una concentración eficaz para detectar y distinguir colonias de bacterias coliformes y de E. coli cuando estas (es decir, el agente gelificante, los agentes indicadores y el nutriente) se reconstituyen con un volumen predeterminado (p. ej., 1 mililitro, 2 mililitros, 5 mililitros) de líquido acuoso. El líquido acuoso puede añadirse con los materiales de muestra (p. ej., el material de muestra puede disolverse, homogeneizarse, suspenderse y/o diluirse en un líquido acuoso tal como agua estéril, un regulador acuoso, o un medio nutriente acuoso, por ejemplo). Cuando la muestra comprende materiales sólidos (p. ej., un filtro de membrana que tiene material retenido sobre él o en él) o semisólidos, el volumen predeterminado de líquido (p. ej., agua estéril, un medio nutriente acuoso) puede usarse para reconstituir el dispositivo de cultivo antes o después de usar la muestra sólida o semisólida para inocular el dispositivo.
El uso de los dispositivos de la presente invención se describirá con referencia específica al dispositivo de las Figs. 1 y 2. Para usar el dispositivo de las Figs. 1 y 3 como una placa de vertido, la segunda lámina 22 se retira y una cantidad predeterminada de agua o una muestra de prueba acuosa se coloca sobre la primera lámina 12 en la zona de crecimiento microbiano definida por el miembro espaciador 18. Los componentes del medio 16 de cultivo seco adheridos a la primera lámina 12 por medio del adhesivo 14 se hidratan o disuelven rápidamente y se forma un gel nutriente. La segunda lámina 22 se reemplaza, a continuación, sobre la primera lámina, y una placa pesada se coloca en la parte superior para esparcir la muestra completamente por toda la zona de crecimiento microbiano. Después, el dispositivo se incuba durante un período de tiempo predeterminado.
La muestra puede ponerse en contacto con la zona de crecimiento microbiano del dispositivo de cultivo mediante el uso de métodos conocidos en la técnica (p. ej., vertiendo o pipeteando una muestra líquida en el dispositivo de cultivo). La segunda lámina se levanta, típicamente, (p. ej., como se muestra en la Fig. 1) para permitir el depósito de la muestra entre la primera lámina y la segunda lámina; preferiblemente en la abertura de un espaciador, si está presente, en el dispositivo de cultivo. Poniendo en contacto una muestra y un líquido acuoso con el agente gelificante en la zona de crecimiento microbiano se forma un dispositivo de cultivo inoculado. Después de formar el dispositivo de cultivo inoculado, la segunda lámina se reduce para formar una barrera protectora contra la contaminación y/o evaporación excesiva del líquido acuoso durante la incubación. La muestra puede esparcirse uniformemente sobre la región de crecimiento microbiano, por ejemplo, colocando una placa pesada en la parte superior del dispositivo cubierto.
El método comprende además incubar (p. ej., en una cámara ambiental de temperatura controlada) el dispositivo de cultivo inoculado durante un período de tiempo. Las condiciones de incubación (p. ej., la temperatura de incubación) pueden influir en la velocidad de crecimiento de las bacterias coliformes presentes en la muestra. Una persona con experiencia en la técnica reconocerá las temperaturas de incubación adecuadas para detectar
bacterias coliformes. Un dispositivo de cultivo inoculado de la presente descripción puede incubarse, por ejemplo, a temperaturas de aproximadamente 35 °C a aproximadamente 45 °C, inclusive, por ejemplo. El dispositivo de cultivo puede incubarse en un ambiente gaseoso aerobio (p. ej., ambiente atmosférico normal).
El dispositivo de cultivo inoculado se incuba durante un período de tiempo suficiente para permitir el crecimiento de bacterias coliformes. El período de incubación mínimo necesario para detectar bacterias coliformes se relaciona con la temperatura a la que se incuba el dispositivo de cultivo. Por ejemplo, cuando el dispositivo de cultivo se incuba a aproximadamente 35°, el período de tiempo puede ser de aproximadamente 12 horas a aproximadamente 24 horas, inclusive; cuando el dispositivo de cultivo se incuba a aproximadamente 42°, el período de tiempo puede ser de aproximadamente 8 horas a aproximadamente 18 horas, inclusive; cuando en donde el dispositivo de cultivo se incuba a aproximadamente 42°, el periodo de tiempo puede ser de aproximadamente 8 horas a aproximadamente 12 horas, inclusive.
El método de la presente descripción comprende además detectar una colonia de bacterias coliformes y/o detectar una colonia de bacterias E. coli en el dispositivo de cultivo (p. ej., observar una colonia de bacterias coliformes y/o detectar una colonia de bacterias E. coli en el dispositivo de cultivo). Detectar una colonia de bacterias coliformes en el dispositivo de cultivo puede comprender detectar colonias en el dispositivo de cultivo que han reaccionado con al menos uno de los sistemas indicadores (p. ej., el sistema indicador de fermentación de lactosa y el sistema indicador de p-D-glucuronidasa). Una colonia de bacterias coliformes se distingue por su capacidad de fermentar lactosa a productos finales ácidos y gaseosos. Por lo tanto, detectar una colonia de coliformes comprende observar una o ambas de la reducción de formazan como un precipitado en la colonia y una zona ácida (como evidencia el indicador de pH en el dispositivo; p. ej., una zona amarilla en donde el indicador de pH es rojo de fenol) próximo a la colonia (p. ej., dentro de aproximadamente 1-2 mm del perímetro de la colonia) y observar también una burbuja de gas atrapada en el medio de cultivo semisólido próximo a la colonia (p. ej., tocando el perímetro de la colonia o dentro de aproximadamente 1 mm del perímetro de la colonia).
Además de observar la zona ácida y la(s) burbuja(s) de gas próximas a la colonia, detectar y distinguir una colonia de bacterias E. coli comprende además detectar un producto de la actividad enzimática de pglucuronidasa. Por ejemplo, cuando el sistema indicador de p-glucuronidasa comprende BCIG, las colonias de E. coli tendrán un aspecto azul (o verde azulado) con o sin una pequeña zona azul (o azulada) rodeando cada una de las colonias.
El método de la presente descripción comprende además enumerar colonias de bacterias coliformes, si están presentes, y/o colonias de E. coli, si están presentes, en el dispositivo de cultivo inoculado después de incubar el dispositivo de cultivo inoculado. Por lo tanto, después de detectar las colonias de bacterias coliformes y de E. coli como se describe en la presente descripción, el número de colonias detectadas se determina manualmente o mediante el uso de procesos automatizados conocidos en la técnica (p. ej., mediante el uso de un contador de colonias automatizado tal como, por ejemplo, un lector de placas PETRIFILM comercializado por 3M Company; St. Paul, MN).
Los objetos y ventajas de esta invención se ilustran además por los siguientes ejemplos, pero los materiales y cantidades particulares de los mismos citados en estos ejemplos, así como otras condiciones y detalles, no deberán tomarse como una limitación indebida de la presente invención.
Ejemplos
Ejemplos 1-13 Fabricación de artículos para la detección microbiana.
Preparación de medios de cultivo.
Las mezclas mostradas en la Tabla 1 se prepararon en recipientes separados. El volumen líquido de la mezcla se llevó a 1000 ml con agua desionizada.
Preparación de las primeras láminas.
Las mezclas mostradas en las Tablas 2 y 3 se prepararon añadiendo primero la goma guar al agua seguido de la adición posterior de los componentes restantes y se calentaron a 80 C para permitir la pasteurización del medio de cultivo. Después de la etapa de calentamiento, la mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se almacenó a 4 °C hasta su uso.
Las mezclas líquidas se calentaron hasta alcanzar la temperatura ambiente y se recubrieron sobre una película de poliéster, y la capa recubierta se secó tal como se describe en el Ejemplo 1 de la patente US-5.384.766. El peso de recubrimiento seco de cada medio de cultivo separado recubierto sobre películas individuales fue de aproximadamente 0,2 a 0,3 g/155 cm2. Las láminas recubiertas se cortaron en rectángulos de 10,2 cm x 7,6 cm.
La espuma de poliestireno (0,51 mm de espesor), obtenida de American FujiSeal (Shaumberg, IL) se usó para fabricar los elementos espaciadores. La cara de las láminas de espuma se adhirió a un recubrimiento desprendible recubierto con adhesivo (adhesivo de transferencia 3M 927). Los círculos (aproximadamente 6 cm de diámetro) se cortaron a troquel a partir de las láminas de espuma. Las láminas de espuma se cortaron en rectángulos de 10,2 cm x 7,6 cm, con los orificios circulares aproximadamente centrados en los rectángulos. Los recubrimientos desprendibles se retiraron, y los elementos espaciadores se adhirieron (a través del adhesivo sobre la lámina de espuma) a las láminas recubiertas con medio de cultivo seco de manera que el medio de cultivo quedó expuesto en la abertura circular de la lámina de espuma.
Preparación de las segundas láminas.
Bi-axially oriented polypropylene (Polipropileno orientado biaxialmente - BOPP) recubierto con adhesivo (adhesivo de transferencia 3M 927) que contiene 5 veces el triphenyl tetrazolium chloride (cloruro de trifeniltetrazolio - TTC, núm. part. 17779; Sigma Chemical Co.; St. Louis, Mo ) descrito en el Ejemplo 11 de la patente US-4.565.783. Posteriormente, la película de BOPP recubierta con adhesivo se recubrió en polvo con goma guar, como se describe en el Ejemplo 11 de la patente US-4.565.783. Las segundas láminas se cortaron en rectángulos de 10,6 cm x 7,6 cm
Montaje de los dispositivos de cultivo.
Se aplicó cinta adhesiva doble a lo largo de uno de los bordes (a lo largo de la dimensión más estrecha) del espaciador de espuma sobre cada una de las primeras láminas. Se superpuso una segunda lámina sobre la primera lámina (como se muestra en la Fig. 1) de manera que la superficie recubierta de la segunda lámina quedara orientada hacia el espaciador de espuma adherido a la primera lámina y las láminas se presionaron entre sí para fijar la segunda lámina a la cinta adhesiva doble.
Tabla 2. Medios de cultivo. Todos los valores de la tabla se indican en gramos. Cada mezcla se disolvió en un total de 1000 ml de agua desionizada.
Tabla 3. Medios de cultivo. Todos los valores de la tabla se indican en gramos. Cada mezcla se disolvió en un total de 1000 ml de agua desionizada.
Ejemplo 1.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 87 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 2.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 83 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 3.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 84 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 4.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 88 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 5.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 89 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 6.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 72 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 7.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 66 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 8.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 63 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 9.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 62 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 10.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 69 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 11.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 64 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 12.
Los dispositivos se elaboraron adhiriendo primeras láminas recubiertas con medio 70 a segundas láminas preparadas como se ha descrito anteriormente.
Ejemplo 13. Uso de dispositivos de cultivo para cultivar y enumerar colonias de coliformes o de E. coli.
E coli ATCC 51813 se obtuvo de Microbiologies (St. Cloud, MN) y, posteriormente, se aisló y almacenó como soluciones madre de glicerol congeladas en cultivo puro. REC1, una cepa natural de E coli aislada de queso Mozzarella que presentaba un comportamiento inducible de beta glucuronidasa se almacenó en glicerol hasta su uso.
Los cultivos durante la noche de E coli ATCC 51813 y E coli REC1 se diluyeron en serie en tampón de Butterfield según fue necesario para proporcionar colonias cuyo recuento (p. ej., 15-150 UFC/ml) pudiera realizarse en los dispositivos de cultivo. Se inoculó 1 ml de la muestra diluida en las placas prototipo. Las placas inoculadas se incubaron a dos temperaturas (35 °C y 42 °C) y las placas se observaron al cabo de 24 ± 6 horas.
Como controles, los cultivos diluidos se inocularon en placas de recuento de E. coli/coliformes 3M™ PETRIFILM™ (PFEC) y placas de recuento de E. coli 3M™ PETRIFILM™ Select (PSEC) (ambas obtenidas de 3M Health Care; St. Paul, m N) según las instrucciones del fabricante, se incubaron durante 24 ± 2 horas o 48+/-3 horas, y se llevó a cabo el recuento de las colonias según las instrucciones del fabricante.
Después del período de incubación, se observó que los dispositivos de cultivo de los Ejemplos 1-12 detectaban y enumeraban colonias visibles que tenían un aspecto azul (es decir, positivo a la glucuronidasa, indicando una colonia de E. coli) rodeadas por una zona ácida de color amarillo (es decir, colonia fermentadora de lactosa) con una o más burbujas de gas adyacentes (es decir, colonia fermentadora de lactosa). Los recuentos de colonias para cada uno de los Ejemplos 1-12 fueron similares a los recuentos en los recuentos de placa PETRIFILM de control Además, se analizaron cualitativamente las colonias de cada una de las placa para determinar la actividad de pglucuronidasa y la fermentación de lactosa en cada uno de los dispositivos de cultivo. Los resultados se muestran en la Tabla 4.
Tabla 4. Observaciones de actividad de p-glucuronidasa y fermentación de lactosa.
Para la reacción de p-glucuronidasa: ++ = colonia Azul/Verde, = colonia Roja/Morada, y - = colonia Roja.
Para la producción de Gas: ++ = burbujas de gas grandes adyacentes a las colonias, - = Burbujas de gas muy pequeñas adyacentes a las colonias.
Claims (15)
- REIVINDICACIONESi. Un dispositivo para enumerar diferencialmente colonias de microorganismos coliformes y Escherichia coli, comprendiendo el dispositivo:una primera lámina impermeable al agua;una segunda lámina impermeable al agua unida a la primera lámina;un medio de cultivo seco, rehidratable adherido a la primera lámina;en donde el medio de cultivo comprende:nutrientes organonitrogenados que facilitan el crecimiento de microorganismos coliformes;un sistema indicador de fermentación de lactosa dispuesto en la zona de crecimiento microbiano, comprendiendo el sistema indicador de fermentación de lactosa D-lactosa, un primer compuesto inductor que mejora la producción de p-galactosidasa, y un indicador de pH;un sistema indicador de p-D-glucuronidasa dispuesto en la zona de crecimiento, comprendiendo el sistema indicador de p-D-glucuronidasa 5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-glucurónido y una pluralidad de compuestos que potencian la actividad enzimática de pglucuronidasa en E. coli;un indicador redox;una cantidad eficaz de al menos un agente que inhibe selectivamente el crecimiento de microorganismos no coliformes; yun primer agente gelificante soluble en agua fría;una zona de crecimiento microbiano dispuesta entre la primera lámina y la segunda lámina, en donde un área del medio de cultivo adherido a la primera lámina define la zona de crecimiento; yun segundo agente gelificante soluble en agua fría adherido a la segunda lámina;en donde la primera lámina se une a la segunda lámina de manera que el medio de cultivo se orienta hacia el segundo agente gelificante soluble en agua fría.
- 2. El dispositivo de la reivindicación 1, en donde un primer compuesto de la pluralidad de compuestos que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli se selecciona de metil-p-D-glucurónido y fenil-p-D-glucurónido.
- 3. El dispositivo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde un segundo compuesto de la pluralidad de compuestos que mejoran la actividad enzimática de p-glucuronidasa en E. coli es ácido D-glucurónico.
- 4. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la segunda lámina comprende una película de poliéster.
- 5. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la primera lámina y la segunda lámina se configuran para retardar el paso de dióxido de carbono a través de ellas.
- 6. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además ácido D-glucurónico dispuesto en la zona de crecimiento microbiano.
- 7. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la primera lámina, la segunda lámina, o ambas, comprenden una película de poliéster.
- 8. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la zona de crecimiento viene definida por un espaciador adherido a la primera lámina.
- 9. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el medio de cultivo adherido a la primera lámina tiene un peso de recubrimiento de aproximadamente 130 mg/100 cm2 a aproximadamente 195 mg/100 cm2.
- 10. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la lactosa se dispone en el medio de cultivo seco adherido a la primera lámina, en donde la lactosa está presente en el medio de cultivo seco a un peso de recubrimiento de aproximadamente 8,5 mg/100 cm2 a aproximadamente 27 mg/100 cm2.
- 11. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el medio de cultivo comprende además un reactivo para tamponar el medio de cultivo, cuando se reconstituye con un líquido acuoso, a un pH entre aproximadamente 6,5 y aproximadamente 7,5.
- 12. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la zona de crecimiento está configurada para recibir un líquido acuoso que tiene un volumen predeterminado de aproximadamente 1 mililitro a aproximadamente 5 mililitros y, después de recibir el volumen predeterminado, forma un medio de cultivo hidratado que facilita el crecimiento y la enumeración de colonias de coliformes.
- 13. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el segundo gelificante soluble en agua fría se dispone sobre la segunda lámina en forma de partículas secas o partículas aglomeradas secas.
- 14. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el primer compuesto inductor que mejora la producción de p-galactosidasa comprende isopropil-p-D-tiogalactopiranósido.
- 15. El dispositivo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además fórmula para bebés seca dispuesta en la zona de crecimiento microbiano.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762480633P | 2017-04-03 | 2017-04-03 | |
| PCT/US2018/025641 WO2018187197A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-04-02 | Rapid detection of e. coli in a thin film culture device |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2900493T3 true ES2900493T3 (es) | 2022-03-17 |
Family
ID=62063607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES18720694T Active ES2900493T3 (es) | 2017-04-03 | 2018-04-02 | Detección rápida de E. coli en un dispositivo de cultivo de película fina |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11319573B2 (es) |
| EP (1) | EP3607083B1 (es) |
| JP (1) | JP7125975B2 (es) |
| CN (1) | CN110475870B (es) |
| ES (1) | ES2900493T3 (es) |
| WO (1) | WO2018187197A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018187195A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | 3M Innovative Properties Company | Rapid detection of e. coli in a thin film culture device |
| US11851643B2 (en) | 2018-05-03 | 2023-12-26 | 3M Innovative Properties Company | Selective thin-film culture device for enumerating microorganisms |
| WO2024011248A1 (en) * | 2022-07-08 | 2024-01-11 | Neogen Food Safety Us Holdco Corporation | Compositions comprising scleroglucan, articles containing the same, methods of making, and methods of using |
| US12228511B1 (en) * | 2023-09-25 | 2025-02-18 | Craig Ellins | Organic plant material microbial test kit devices and processing method |
| US20250347622A1 (en) * | 2023-09-25 | 2025-11-13 | Craig Ellins | Organic plant material microbial test kit devices and processing method |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4565783A (en) | 1981-01-27 | 1986-01-21 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Dry culture media |
| US5518895A (en) * | 1990-02-15 | 1996-05-21 | Akzo N.V. | Device for detecting microorganisms using piezoelectric means |
| US5089413A (en) | 1989-05-19 | 1992-02-18 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Method and apparatus for culturing with microbiological dry culture medium |
| CA2022614A1 (en) | 1989-08-31 | 1991-03-01 | Richard R. Matner | Colony blotting method and device |
| US5210022A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-11 | Rcr Scientific, Inc. | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria |
| JPH06105384A (ja) | 1992-09-21 | 1994-04-15 | Fujitsu Ltd | 電子交換機におけるｌａｎ管理システム |
| US5364766A (en) * | 1993-05-14 | 1994-11-15 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Culture medium for rapid count of coliform bacteria |
| US5723308A (en) | 1993-05-14 | 1998-03-03 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Culture medium for rapid count of coliform bacteria |
| DE4324392A1 (de) | 1993-07-21 | 1995-01-26 | Merck Patent Gmbh | Kulturmedium für den gleichzeitigen Nachweis von coliformen Bakterien und Escherichia coli |
| US5510243A (en) * | 1994-06-21 | 1996-04-23 | Gelman Sciences, Inc. | Multiple chromogen enzyme targeting (MCET) for use in bacterial contamination monitoring |
| US5601998A (en) | 1994-08-18 | 1997-02-11 | Minnesota Mining & Mfg | Culture medium and device for detection and enumeration of enterobacteriaceae |
| KR970707302A (ko) | 1994-11-07 | 1997-12-01 | 프랭크 파렌트 | 대장균군 또는 대장균을 검출하기 위한 효소적 방법(enzymatic method for detecting coliform bacteria or e. coli) |
| US5605812A (en) | 1995-05-19 | 1997-02-25 | Charm Sciences, Inc. | Test kit and method for the quantitative determination of coliform bacteria and E. coli |
| ES2294787T3 (es) * | 1995-06-05 | 2008-04-01 | Biomerieux, Inc. | Dispositivo y metodo para detectar microorganismos. |
| US5958675A (en) | 1997-04-18 | 1999-09-28 | 3M Innovative Properties Company | Method for detecting bacteria using bacteriophage, contrast-coloring dye and precipitable dye |
| US6641996B1 (en) * | 1997-09-09 | 2003-11-04 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| JP2001333795A (ja) | 2000-05-24 | 2001-12-04 | Chisso Corp | 大腸菌群検出用培地積層物およびシート状培地 |
| US6632661B2 (en) | 2000-12-07 | 2003-10-14 | 3M Innovative Properties Company | Self-spreading microbiological culture device |
| JP2008017712A (ja) | 2006-07-10 | 2008-01-31 | Chisso Corp | 微生物培地 |
| FR2912424A1 (fr) | 2007-02-08 | 2008-08-15 | Biomerieux Sa | Milieu de detection et/ou d'identification de bacteries |
| ES2674430T3 (es) | 2010-12-29 | 2018-06-29 | Abbott Laboratories | Producto nutricional para mejorar la tolerancia, digestión y absorción de nutrientes liposolubles en un lactante, niño pequeño o niño |
| CA2823518A1 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | 3M Innovative Properties Company | Articles and method for detecting a target microorganism |
| CN102311990B (zh) * | 2011-09-16 | 2013-04-17 | 广州绿洲生化科技股份有限公司 | 一种大肠菌群的显色培养基及其快速检测卡 |
| US8921067B2 (en) * | 2013-02-04 | 2014-12-30 | 3M Innovative Properties Company | Method and culture device for detecting yeasts and molds |
| JP2014183802A (ja) | 2013-03-25 | 2014-10-02 | Koojin Bio Kk | Ｂ群連鎖球菌検出培地 |
| WO2018187195A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | 3M Innovative Properties Company | Rapid detection of e. coli in a thin film culture device |
-
2018
- 2018-04-02 CN CN201880022771.7A patent/CN110475870B/zh active Active
- 2018-04-02 JP JP2020502536A patent/JP7125975B2/ja active Active
- 2018-04-02 WO PCT/US2018/025641 patent/WO2018187197A1/en not_active Ceased
- 2018-04-02 US US16/492,715 patent/US11319573B2/en active Active
- 2018-04-02 EP EP18720694.1A patent/EP3607083B1/en active Active
- 2018-04-02 ES ES18720694T patent/ES2900493T3/es active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP7125975B2 (ja) | 2022-08-25 |
| US11319573B2 (en) | 2022-05-03 |
| JP2020512832A (ja) | 2020-04-30 |
| EP3607083B1 (en) | 2021-11-10 |
| WO2018187197A1 (en) | 2018-10-11 |
| US20200109431A1 (en) | 2020-04-09 |
| EP3607083A1 (en) | 2020-02-12 |
| CN110475870B (zh) | 2024-01-26 |
| CN110475870A (zh) | 2019-11-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6796632B2 (ja) | 酵母菌及びカビを検出するための方法及び培養装置 | |
| US11414641B2 (en) | Article and method for detecting aerobic bacteria | |
| JP5911511B2 (ja) | 標的微生物を検出するための物品及び方法 | |
| US12624379B2 (en) | Rapid detection of E. coli in a thin film culture device | |
| US11319573B2 (en) | Rapid detection of E. coli in a thin film culture device | |
| CN103547678B (zh) | 沙门氏菌检测物品及其使用方法 | |
| WO2025250926A1 (en) | Compositions for the isolation and quantitation of bacillus cereus in thin film dehydrated culture medium | |
| JP7792329B2 (ja) | セレウス菌グループ検出用培地 | |
| CN103403178A (zh) | 包含对氨基苯甲酸作为选择剂的微生物培养基 |