ES2903132T3 - Ligando 1 de tipo Delta para el diagnóstico de infecciones graves - Google Patents
Ligando 1 de tipo Delta para el diagnóstico de infecciones graves Download PDFInfo
- Publication number
- ES2903132T3 ES2903132T3 ES18789176T ES18789176T ES2903132T3 ES 2903132 T3 ES2903132 T3 ES 2903132T3 ES 18789176 T ES18789176 T ES 18789176T ES 18789176 T ES18789176 T ES 18789176T ES 2903132 T3 ES2903132 T3 ES 2903132T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- protein
- delta
- ligand
- seq
- sepsis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 51
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 68
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 14
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 77
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 22
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 22
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 16
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000012084 abdominal surgery Methods 0.000 claims description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 21
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 16
- 102000014736 Notch Human genes 0.000 description 12
- 108010070047 Notch Receptors Proteins 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 108700041286 delta Proteins 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 6
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 6
- 102100033553 Delta-like protein 4 Human genes 0.000 description 5
- 101000872077 Homo sapiens Delta-like protein 4 Proteins 0.000 description 5
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 5
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 5
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 4
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 4
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 4
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 4
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 3
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 3
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 229940127276 delta-like ligand 3 Drugs 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 3
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100036462 Delta-like protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710112750 Delta-like protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100036466 Delta-like protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000928513 Homo sapiens Delta-like protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- 208000003017 Aortic Valve Stenosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022970 Basic leucine zipper transcriptional factor ATF-like Human genes 0.000 description 1
- 102100021703 C3a anaphylatoxin chemotactic receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 description 1
- 101100510615 Caenorhabditis elegans lag-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000028399 Critical Illness Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100023954 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-15 Human genes 0.000 description 1
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000903742 Homo sapiens Basic leucine zipper transcriptional factor ATF-like Proteins 0.000 description 1
- 101000896583 Homo sapiens C3a anaphylatoxin chemotactic receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000904080 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-15 Proteins 0.000 description 1
- 101000623667 Homo sapiens Mitochondrial carrier homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000633302 Homo sapiens Nicotinamide riboside kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000818425 Homo sapiens Palmitoyltransferase ZDHHC19 Proteins 0.000 description 1
- 101000911541 Homo sapiens Protein FAM214A Proteins 0.000 description 1
- 101000894525 Homo sapiens Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 Proteins 0.000 description 1
- 101001104110 Homo sapiens X-linked retinitis pigmentosa GTPase regulator-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N Meprobamate Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(N)=O NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100023198 Mitochondrial carrier homolog 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100029562 Nicotinamide riboside kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102100021068 Palmitoyltransferase ZDHHC19 Human genes 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102100026957 Protein FAM214A Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 102100021398 Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 Human genes 0.000 description 1
- 102100040089 X-linked retinitis pigmentosa GTPase regulator-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011203 antimicrobial therapy Methods 0.000 description 1
- 206010002906 aortic stenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- -1 cells Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005256 gram-negative cell Anatomy 0.000 description 1
- ACGUYXCXAPNIKK-UHFFFAOYSA-N hexachlorophene Chemical compound OC1=C(Cl)C=C(Cl)C(Cl)=C1CC1=C(O)C(Cl)=CC(Cl)=C1Cl ACGUYXCXAPNIKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002705 metabolomic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001431 metabolomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007474 nonparametric Mann- Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 102000035087 single-pass transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005496 single-pass transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000007102 tryptic soy broth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Uso de la proteína ligando 1 de tipo Delta o de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta como biomarcador para el diagnóstico in vitro de una infección grave.
Description
DESCRIPCIÓN
Ligando 1 de tipo Delta para el diagnóstico de infecciones graves
Campo técnico de la invención
La invención se refiere al uso del ligando 1 de tipo Delta como biomarcador en el diagnóstico de infecciones graves y a un método para un diagnóstico in vitro rápido de infecciones graves tales como la septicemia mediante el control del nivel del ligando 1 de tipo Delta en una muestra biológica.
Antecedentes de la invención
Los biomarcadores son características mensurables de un organismo que reflejan un estado fisiológico particular. En medicina, los biomarcadores son a menudo compuestos aislados de tejido biológico que se pueden utilizar como un indicador de la presencia o la intensidad de una enfermedad particular o como un control de la eficacia de una intervención determinada.
Los biomarcadores son particularmente útiles en el diagnóstico y posible pronóstico de una enfermedad, así como en el control de la progresión de la enfermedad o la respuesta al tratamiento. El biomarcador ideal debe obtenerse y medirse de manera fácil y debe ser fiable porque muestra una elevada sensibilidad y especificidad para una enfermedad.
Las infecciones graves, y en particular la septicemia, son afecciones médicas particularmente evasivas para las que no existen biomarcadores altamente fiables. Las infecciones graves, incluida la septicemia, se identifican mediante, y/o pueden dar lugar a, un fallo orgánico potencialmente mortal provocado por una respuesta inmunitaria desregulada a la infección. En la septicemia, la respuesta del hospedador que se desencadena por patógenos microbianos alcanza su punto máximo en un síndrome patológico que se caracteriza por una inflamación exagerada y una supresión inmunitaria posterior. A pesar de las constantes mejoras en la medicina de cuidados intensivos y las terapias antimicrobianas, dicha infección sigue siendo una de las principales causas de muerte en las unidades de cuidados intensivos en todos los grupos de edad en todo el mundo. Para mejorar los resultados y, al mismo tiempo, evitar un tratamiento antibiótico innecesario, es fundamental disponer de una prueba rápida y fiable para diagnosticar una infección grave.
La septicemia es una infección grave y, por tanto, potencialmente mortal. Hasta el momento, los hemocultivos siguen siendo el método de referencia en el diagnóstico de septicemia, sin embargo, los hemocultivos llevan tiempo y muchos pacientes que tienen signos y síntomas de septicemia tienen hemocultivos negativos. Por lo tanto, se necesita urgentemente un enfoque complementario para diagnosticar una infección grave y, en particular, para diagnosticar la septicemia.
C. Pierrakos y J. L. Vincent (2010) Critical Care, 14:R15 describen biomarcadores conocidos en la materia por ser útiles para identificar o descartar la septicemia. Estos incluyen varios biomarcadores dirigidos a citocinas/quimiocinas, células, receptores, coagulación, daño endotelial vascular, vasodilatación, disfunción orgánica y proteínas de fase aguda. Los ligandos Notch, y en particular el ligando 1 de tipo Delta, no se mencionan.
Van Engelen et al. (2018) "Biomarkers in Sepsis", Critical Care Clinics, 34(1):129-152 describe varios biomarcadores para diagnosticar la septicemia y, en particular, apunta al campo ómico (es decir, genómica, epigenética, transcriptómica, proteómica y metabolómica) de la biología de sistemas como una herramienta prometedora para el descubrimiento de nuevos biomarcadores.
El documento WO 2016/145426 A1 describe un método para diagnosticar septicemia utilizando niveles de expresión de CEACAM1, ZDHHC19, C9orf95, GNA15, BATF, C3AR1, KIAA1370, TGFBI, MTCH1, RPGRIP1 y HLA-DPB1 como biomarcadores.
El documento US 2005/059093 A1 describe un método para detectar moduladores de señalización Notch que comprende la etapa de controlar la señalización Notch en una célula del sistema inmunitario en presencia y ausencia de un modulador candidato y determinar si el modulador candidato modula la señalización Notch.
El documento WO 2017/004159 A1 describe composiciones que se unen e inhiben la actividad biológica de biomoléculas solubles para inhibir la interacción de la diana o el patógeno con otras moléculas o células. Los ligandos Notch, que incluyen el ligando 1 de tipo Delta (DLL1, del inglés "Delta-like ligand 1") se mencionan como particularmente útiles para tratar o evitar la aterosclerosis, estenosis calcificada de la válvula aórtica, insuficiencia cardíaca, accidente cerebrovascular y cáncer. Para tratar o evitar la septicemia asociada a una infección provocada por un patógeno, el documento WO 2017/004159A1 propone la unión selectiva de TNFa, interleucina 1, interleucina 6, interleucina 8, interleucina 12, interferón y, factor inhibidor de migración de macrófagos, GM-CSF y/o un factor de coagulación sanguínea.
El documento US 2006/140943 A1 describe el uso de un modulador de la señalización Notch para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de injerto contra hospedador (GVHD, del inglés "Graft Versus Host Disease") y enfermedades y afecciones provocadas por, o asociadas a, trasplantes tales como trasplantes de órganos, de tejidos y/o células (por ejemplo, trasplantes de médula ósea), en donde el modulador se utiliza para reducir la reactividad de las células del sistema inmunitario.
El documento WO 2012/092539 A2 describe un anticuerpo contra DLL4 y un método para tratar una enfermedad asociada a DLL4, tal como un trastorno de proliferación celular o una afección patológica asociada a la angiogénesis. El documento WO 2012/092539 A2 describe que la desregulación de la angiogénesis puede conducir a trastornos neoplásicos y no neoplásicos, y nombra la septicemia como uno de muchos de estos trastornos no neoplásicos.
Los documentos US 9.731.024 B2 y US 2017/0240590 A1 describen materiales y métodos para conjugar un polímero soluble en agua con una fracción de hidrato de carbono oxidado de una proteína terapéutica. Una de las muchas proteínas enumeradas como proteínas terapéuticas es la proteína 1 de tipo Delta.
Actualmente se utilizan varios biomarcadores para diagnosticar una infección grave tal como la septicemia. Las proteínas de fase aguda procalcitonina (PCT) y proteína C reactiva (CRP, del inglés "C-reactive protein"), junto con el recuento de leucocitos, han sido las más utilizadas.
No obstante, la eficacia de PCT y CRP está restringida por su falta de especificidad y sensibilidad para la septicemia. En particular, sigue siendo difícil diferenciar la septicemia de otras causas de inflamación no infecciosas. Por lo tanto, se requieren nuevos biomarcadores de septicemia con mayor fiabilidad.
Sumario de la invención
El problema subyacente a la invención es proporcionar un biomarcador que se pueda utilizar para diagnosticar una infección grave con un elevado nivel de fiabilidad.
Este problema se resuelve mediante el uso de la proteína ligando 1 de tipo Delta (DLL1) o una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta como biomarcador para el diagnóstico in vitro (ex vivo) de una infección grave. En consecuencia, un nivel elevado de proteína ligando 1 de tipo Delta o una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta en una muestra biológica de un paciente es indicativo de la presencia de una infección grave.
Adicionalmente, la invención se refiere a un método para el diagnóstico in vitro de una infección grave que comprende la determinación de la proteína ligando 1 de tipo Delta o una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta en una muestra biológica en donde un nivel elevado de expresión de la proteína ligando 1 de tipo Delta 0 de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta es indicativo de una infección.
Sorprendentemente, se encontró que el ligando 1 de tipo Delta actúa como un biomarcador para infecciones graves, en particular, la septicemia con un elevado nivel de fiabilidad. Las ventajas asociadas a este biomarcador de diagnóstico de la invención son el diagnóstico más temprano de la infección, tratamiento oportuno y mejor resultado de la enfermedad. También reducirá los costes innecesarios asociados a la prueba de otros biomarcadores que muestran una menor sensibilidad y selectividad que el ligando 1 de tipo Delta.
Descripción detallada de la invención
Las proteínas de tipo Delta son proteínas transmembrana de un solo paso conocidas por su papel en la señalización Notch como homólogos del ligando Notch Delta descrito por primera vez en Drosophila. Los sinónimos de DLL-1 son ligando 1 de tipo Delta, proteína de tipo Delta, H-Delta, 1, homólogo 1 Delta de Drosophila, ligando 1 Notch canónico de tipo Delta, DL1, ligando Notch de tipo Delta 1. En mamíferos, hay tres genes de tipo Delta que codifican el ligando 1 de tipo Delta (DLL1 que codifica DLL1), el ligando 3 de tipo Delta (DLL3 que codifica DLL3) y el ligando 4 de tipo Delta (DLL4 que codifica DLL4), comprendiendo todos los ligandos una región rica en cisteína conservada conocida como dominio DSL (Delta, Serrate, Lag2), varias repeticiones de tipo factor de crecimiento epidérmico (EGF, del inglés "epidermal growth factor") y un dominio transmembrana. Se conocen la secuencia de aminoácidos de la proteína ligando 1 de tipo Delta y la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta. Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de DLL1 se describe en American Journal of Pathology, Vol. 154, N.° 3, marzo de 1999, 785-794 o en la base de datos del National Center for Biotechnology Information (https:// www.ncbi.nlm.nih.gov/Drotein/ NP_005609.3). La ubicación cromosómica del ortólogo humano es 6q27.
La proteína ligando 1 de tipo Delta como se utiliza en la invención puede ser una proteína que está codificada por la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos que es al menos un 80 %, preferentemente un 85 % o un 90 % idéntica al SEQ ID NO: 1.
Adicionalmente, la proteína ligando 1 de tipo Delta puede ser una proteína que tiene al menos un 90 % de identidad, en particular un 95 % de identidad con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3.
La expresión proteína ligando 1 de tipo Delta como se utiliza en el presente documento para los propósitos de la invención también incluye productos de escisión de DLL1 de origen natural. Los productos de escisión de origen natural de acuerdo con la invención comprenden productos de escisión extracelulares, transmembrana e intracelulares. En una realización preferida, el producto de escisión de origen natural es un producto de escisión extracelular. Por lo tanto, la expresión proteína ligando 1 de tipo Delta también incluye polipéptidos que consisten esencialmente en fragmentos aminoterminal o carboxiterminal de la proteína de acuerdo con el SEQ ID NO: 2 y que están elevados en una infección grave, en particular septicemia. Por lo tanto, el término proteína DLL1 comprende la proteína DLL1 con modificaciones postraduccionales, proteolítica natural y procesada. También comprende la proteína DLL1 soluble e insoluble y las isoformas de origen natural de la proteína DLL1 de SEQ ID NO: 2 o 3 (UniProtKB -000548 (DLL1_HUMAN). Dichos productos de escisión naturales adecuados de DLL1, por ejemplo, se representan por los SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 y/o SEQ ID NO: 7 de aminoácidos. El SEQ ID NO: 4 representa la proteína DLL1 soluble. El SEQ ID NO: 5 representa el dominio transmembrana de la proteína DLL1 unido al dominio intracelular de la proteína DLL1. El SEQ ID NO: 6 representa el dominio intracelular de la proteína DLL1. El SEQ ID NO: 7 representa el dominio transmembrana de la proteína DLL1.
Además, dentro del término proteínas DLL1 se encuentran proteínas que están modificadas, por ejemplo, mediante fosforilación, metilación, acetilación y glucosilación.
En la invención se determina el nivel de proteína DLL1 y/o el nivel de una secuencia de nucleótidos de DLL1. Como se utiliza en el presente documento, la expresión secuencia de nucleótidos puede referirse a ADN, ADNc, ARN o ARNm. La secuencia de nucleótidos que codifica la proteína DLL1 o una isoforma de proteína DLL1 también puede ser una variante de corte y empalme a nivel de ARN. Dichas variantes de corte y empalme, por ejemplo, son secuencias de nucleótidos sin el extremo N o sin el extremo C de la secuencia.
De acuerdo con una realización de la invención, cuando se utiliza la secuencia de nucleótidos de DLL1 como biomarcador para el diagnóstico de una infección o en un método para el diagnóstico in vitro de una infección, un nivel de expresión elevado de DLL1 es indicativo de una infección grave. Las secuencias de nucleótidos ilustrativas de DLL1 en la determinación del nivel de expresión son SEQ ID NO: 1.
Las referencias a la secuencia de nucleótidos de DLL1 marcada como SEQ ID NO: 1 se refieren a la secuencia de ADN en Homo sapiens. Sin embargo, será evidente que la invención no se limita a Homo sapiens, sino que se extiende a todos los mamíferos.
El término "elevado", como se utiliza en el presente documento, significa un nivel aumentado en comparación con un control. El control puede ser cualquier sistema o muestra biológica no infectada. Normalmente, el control es de la misma especie que el sistema o muestra biológica infectada. Un paciente antes de una cirugía y/o antes de la aparición de la septicemia u otra infección grave puede, por ejemplo, servir como control. El experto en el campo de la medicina y la biología médica será capaz de identificar de manera fácil un control adecuado con el que se puedan comparar los niveles de expresión. Normalmente, una cantidad elevada de DLL1 puede ser una concentración de DLL1, que está significativamente más allá del valor de la desviación típica del control. De acuerdo con una realización preferida, una cantidad elevada de DLL1 es una concentración, que es dos veces o, en particular, tres veces el valor de la desviación típica de la media en la muestra de control. Tres veces el valor de la desviación típica de la media en la muestra de control da resultados particularmente buenos.
De manera alternativa, para la determinación de una cantidad elevada de DLL1 o para el diagnóstico de una infección grave, también es beneficioso definir un valor de corte y tener en cuenta dicho valor de corte para el diagnóstico de la septicemia cuando una muestra de un paciente se analiza de acuerdo con la invención. Un valor de corte permitirá diferenciar entre los grupos de pacientes que tienen una infección grave o que no tienen una infección grave. Un valor de corte razonable para el caso de que la infección grave sea septicemia es de aproximadamente 36331 pg de proteína DLL1 por ml. Un valor de corte de diagnóstico particularmente beneficioso para el caso en el que la infección grave es septicemia puede ser de aproximadamente 29.538 pg de proteína DLL1 por ml.
El nivel de expresión de DLL1 puede medirse en cualquier muestra biológica. La expresión "muestra biológica" como se utiliza en el presente documento comprende la totalidad de un organismo o cualquier parte de un organismo. Normalmente, se extrae una muestra biológica del organismo para un análisis ex vivo. Una muestra biológica puede incluir células individuales y/o cultivos de células y/o cultivos de tejidos. Las muestras biológicas también incluyen, pero sin limitación, tejidos, tales como tejido epitelial, muscular, conectivo y nervioso. La muestra biológica puede comprender, por ejemplo, sangre completa, capa leucoplaquetaria, plasma, suero, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), neutrófilos, monocitos, linfocitos T, orina, líquido espinal, líquido linfático, secreciones externas de la piel, lágrimas y/o saliva.
En una realización de la invención, el nivel de expresión de DLL1 se mide a partir de una sola célula o de un cultivo celular. La célula o el cultivo celular puede comprender células del sistema inmunitario, en particular. Normalmente, la célula o el cultivo celular comprende una célula inmunitaria. Preferentemente, la célula es un leucocito. Más preferentemente, la célula es un monocito. Preferentemente, el cultivo celular comprende leucocitos. Más
preferentemente, el cultivo celular comprende monocitos.
En otra realización, el nivel de expresión de DLL1 se mide a partir de un tejido. Preferentemente, el nivel de expresión de DLL1 se mide a partir de una muestra de sangre. El término "sangre", como se utiliza en el presente documento, incluye sangre completa, plasma sanguíneo y suero sanguíneo. Preferentemente, el nivel de expresión de DLL1 se mide a partir de una muestra de plasma sanguíneo.
En una realización preferida, el nivel de expresión de DLL1 se mide y se determina a partir de una muestra de plasma sanguíneo tomada de un paciente. El término "paciente", como se utiliza en el presente documento, incluye tanto seres humanos como mamíferos no humanos en riesgo de una infección grave o septicemia. A menudo, los pacientes son seres humanos o animales que se han sometido a cirugía.
Puede utilizarse cualquier medio adecuado para medir la expresión de proteínas. Normalmente, la expresión de proteínas se mide y se determina con un inmunoensayo. Preferentemente, la expresión de proteínas se mide y se determina con un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA) dirigido a una secuencia de proteína o polipéptido especificada. Los niveles de expresión de proteínas también se pueden medir y determinar con un ensayo de inmunotransferencia, tal como un ensayo de transferencia Western, espectrometría de masas, ELISpot o citometría de flujo e inmunohistoquímica.
Puede utilizarse cualquier medio adecuado para medir la expresión de nucleótidos para medir el nivel de expresión de DLL1. Por ejemplo, la expresión se puede medir mediante la realización de análisis de micromatrices, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR), una transferencia Northern, transferencia Southern o un análisis en serie de la expresión génica (SAGE).
Las infecciones graves son afecciones médicas particularmente evasivas, que pueden dar como resultado un fallo orgánico potencialmente mortal provocado por una respuesta inmunitaria desregulada a la infección. Ejemplos de infecciones graves son septicemia, neumonía y meningitis.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1 Transferencia Western. Se aislaron monocitos CD14+ de la sangre de donantes sanos y se infectaron in vitro con 1 * 106 bacterias/ml (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis) o se estimularon con 100ng/ml de lipopolisacárido (LPS). Después de dos horas, las bacterias se destruyeron con gentamicina. Las células de control (-) se dejaron sin tratar. Al día siguiente se produjeron lisados celulares. Para los análisis de transferencia Western, se transfirieron cantidades iguales de lisados de proteínas y se probaron con anticuerpos contra DLL1 o actina (control de carga).
La figura 2 muestra los resultados de ELISA de ratones de 12 semanas de edad inyectados (i.p.) con LPS (n = 16) o NaCl (n = 15; grupo de control). Veinticuatro horas después de la inyección, se tomaron muestras de sangre y se realizó la cuantificación de las concentraciones plasmáticas mediante ELISA de DLL-1 de ratón (p <0,0001; prueba de la U de Mann-Whitney).
La figura 3 muestra el análisis ELISA de los niveles de expresión de (A) DLL-1 o (B) DLL-4 de muestras de plasma sanguíneo de pacientes con septicemia (n = 50) tomadas inmediatamente (t0), 24 horas (t24), 48 horas (t48) y 168 horas (t168) después de la primera identificación de los síntomas de septicemia, así como los resultados de ELISA de muestras de plasma sanguíneo de donantes sanos (sanos; n = 20) y pacientes control tras cirugía abdominal (48 h después de OP ("OP en t2"; n = 20). ***p <0,0001; prueba de la U de Mann-Whitney.
La figura 4 muestra el análisis ROC de (A) leucocitos para pacientes con septicemia en t0 frente a pacientes de control; (B) Niveles de CRP de pacientes con septicemia en t0 frente a pacientes de control; C) Niveles de DLL-1 de pacientes con septicemia en t0 frente a pacientes de control; D) Niveles de DLL-1 de pacientes con septicemia en t0 frente a voluntarios sanos; E) Niveles de DLL-4 de pacientes con septicemia en t0 frente a pacientes de control; F) Niveles de DLL-4 de pacientes con septicemia en t0 frente a voluntarios sanos. ABC = área bajo la curva.
La figura 5 muestra el análisis ELISA de los niveles de proteína DLL-1 de muestras de plasma sanguíneo de pacientes con septicemia ("Septicemia"; Cohorte 1: n = 30, Cohorte 2: n = 50, Cohorte 3: n = 100), pacientes de control después de una cirugía visceral extensa ("después de OP"; Cohorte 1: n = 30, Cohorte 2: n = 20) y sujetos sanos ("Sano"; Cohorte 1: n = 30, Cohorte 2: n = 20) de tres estudios clínicos independientes (Cohorte 1 (A), Cohorte 2 (B), Cohorte 3 (C); véase el ejemplo 4 para obtener más detalles sobre el estudio). ***p <0,0001; prueba de la U de Mann-Whitney.
La figura 6 muestra el análisis ELISA de los niveles de proteína DLL-1 de muestras de plasma sanguíneo de (A) una cohorte de pacientes después de un traumatismo grave (n = 38) tomadas inmediatamente ("inicial"), 24 horas ("24 h") y 48 horas ("48 h") después de la inclusión del estudio (como máximo dentro de las 24 h posteriores al inicio de los síntomas clínicos). Lo mismo se muestra para (B) una cohorte de pacientes (n = 25) sometidos a
cirugía cardíaca con circulación extracorpórea. Los niveles de proteína se muestran antes de la cirugía ("previo a OP"), 4 horas después de la circulación extracorpórea ("4 h después de ECC") y 24 horas después de la circulación extracorpórea ("24 h después de ECC"). Estas cohortes de pacientes no mostraron signos de infección en ningún momento.
La figura 7 muestra un análisis ROC de los niveles de proteína DLL-1 de muestras de plasma sanguíneo (pacientes con septicemia: n = 327; controles: n = 377). ABC = área bajo la curva.
La figura 8 muestra monocitos CD14+ que se aislaron de sangre de donantes sanos y estimulados con LPS 100 ng/ml o infectados con 108 E. coli/106 monocitos. Después de dos horas, las bacterias se eliminaron con gentamicina. Las células de control (-) se dejaron sin tratar. Al día siguiente se produjeron lisados celulares. Para los análisis de transferencia Western, se transfirieron cantidades iguales de lisados de proteínas y se probaron con anticuerpos contra DLL1 o actina (control de carga).
Los siguientes ejemplos sirven para explicar mejor la invención, específicamente por referencia a determinadas realizaciones y figuras, que, sin embargo, no pretenden limitar la presente divulgación.
Ejemplos
Ejemplo 1 - El ligando 1 de tipo Delta detecta una infección bacteriana in vitro
Este ejemplo tenía como objetivo comprobar si el ligando Notch DLL1 podría regularse por incremento en pacientes con septicemia y, por lo tanto, podría utilizarse como un posible biomarcador. Se utiliza un modelo de infección in vitro con bacterias relacionadas con la septicemia. En la configuración experimental, se infectaron monocitos procedentes de sangre de donantes sanos durante dos horas con diferentes bacterias gramnegativas. (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae) y bacterias grampositivas (Enterococcus faecalis) y posteriormente se destruyeron las bacterias con antibióticos. Además, las células se estimularon con lipopolisacárido (LPS) agonista de TLR4, un componente de la pared celular gramnegativa que puede provocar un choque séptico cuando circula en el torrente sanguíneo. Después de una noche de incubación de células infectadas y estimuladas con LPS, se produjeron lisados para análisis de transferencia Western para la detección de DLL1. Los detalles experimentales se explican a continuación.
Aislamiento y cultivo celular - Se aislaron células mononucleadas procedentes de sangre periférica de sangre fresca o capa leucoplaquetaria de donantes sanos mediante centrifugación en gradiente de densidad (solución de separación Biocoll, 1,077 g/ml, Biochrom AG, Berlín, Alemania). Las células se lavaron tres veces con PBS y las células marcadas de manera magnética con CD14+ se seleccionaron positivamente mediante el separador autoMACS (autoMACS, programa: possel, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemania), complementado con 100 UI/ml de penicilina, 100 |jg/ml de estreptomicina que contenía suero de ternero fetal inactivado por calor al 10% (FCS, Promocell, Heidelberg, Alemania) a 37 °C en una atmósfera humidificada en presencia de CO2 al 5 %.
Cultivos bacterianos - Se cultivaron por separado Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, y Enterococcus faecalis durante la noche a 37 °C con CO2 al 5 % en una atmósfera humidificada. Al día siguiente, un clon de cada cultivo se transfirió al medio de caldo de soja tríptico y después de 2 horas con agitación constante a 37 °C, la suspensión bacteriana se ajustó mediante la medición de la absorción a una concentración de 108/ml de RPMI.
Infección in vitro - Se sembraron en placa 1 * 106 monocitos CD14+ clasificados en un formato de placa de 24 pocillos en 1 ml de RPMI/FCS al 10 %. Las células se infectaron con 1 * 106 bacterias/ml o se estimularon con lipopolisacárido agonista del receptor 4 de tipo toll (TLR4) (LPS 100 ng/ml). Después de dos horas, se añadió gentamicina 100 ng/ml (PAA Laboratories, Inc) a los cultivos bacterianos para destruir las bacterias.
Después de la incubación durante la noche de células infectadas y estimuladas con LPS, se produjeron lisados celulares y se realizó un análisis de transferencia Western utilizando actina como control.
Ensayo de transferencia Western - Se lisaron 2 * 106 células en tampón de lisis RIPA que contenía inhibidores de proteasa (cOmpleteTM, Roche, Mannheim, Alemania) e inhibidor de la fosfatasa (PhosSTOPTM, Roche). A continuación, los lisados celulares se separaron mediante SDS-PAGE al 10 % y se electrotransfirieron a membranas de nitrocelulosa (membrana de nitrocelulosa Whatman Protran; neoLab, Heidelberg, Alemania). Después de las etapas de bloqueo (TBS/Tween-20 al 0,05 %/BSA al 5 %) y de lavado (TBS/Tween al 0,05 %), se realizó inmunotransferencia con anticuerpos contra DLL-1 y p-actina (Cell Signaling Technology). La detección se mejoró mediante quimioluminiscencia (ECL; Perkin Elmer, Groningen, Países Bajos).
La figura 1 muestra que la proteína ligando 1 de tipo Delta es altamente detectable en todos los monocitos estimulados con LPS e infectados con bacterias, pero no en las células de control. Por lo tanto, la proteína ligando 1 de tipo Delta es adecuada para detectar una infección celular de etiología tanto grampositiva como gramnegativa.
Ejemplo 2 - El ligando 1 de tipo Delta se regula por incremento en un modelo de septicemia en ratón
Como se vio que DLL1 activado es muy abundante en monocitos infectados por bacterias in vitro, se examinó el comportamiento del ligando Notch en un modelo de septicemia por endotoxina en ratón. El LPS (precisamente la parte lipídica del LPS) también se denomina endotoxina y se utiliza comúnmente en modelos animales de septicemia. En pacientes críticos, el aumento de las concentraciones de endotoxina sérica se ha asociado al desarrollo de septicemia, gravedad de la enfermedad y mortalidad. La teoría de que la endotoxina juega un papel importante en la patogenia de la septicemia humana está respaldada por la observación de que la terapia con antibióticos puede conducir a una liberación repentina de cantidades masivas de endotoxina de bacterias muertas y un empeoramiento de la afección. En el presente documento, se utilizaron ratones machos de 12 semanas de edad con fines experimentales.
A ratones macho de doce semanas de edad se les inyectó por vía intraperitoneal con la porción lipídica de LPS (n = 16) o NaCl (n = 15; como control). Después de 24 horas, se extrajo sangre. Se recogieron los sobrenadantes libres de células y se analizaron los niveles de proteína ligando 1 de tipo Delta de ratón utilizando un ensayo ELISA comercial (abcam) siguiendo el protocolo habitual.
La figura 2 muestra que la proteína ligando 1 de tipo Delta está elevada en la sangre de los ratones infectados con LPS en comparación con la de los ratones de control. DLL1 está regulado por incremento en un modelo de septicemia en ratón. Por lo tanto, la proteína ligando 1 de tipo Delta es adecuada para detectar una infección asociada a LPS en la sangre de un modelo animal de septicemia in vivo.
Ejemplo 3 - El ligando 1 de tipo Delta está regulado por incremento en pacientes con septicemia
Se incluyeron 50 pacientes en el estudio, todos los cuales mostraron signos de septicemia grave después de una cirugía abdominal. La septicemia se definió de acuerdo con los criterios de la Surviving Sepsis Campaign. Solo se incluyeron pacientes no embarazadas de al menos 18 años de edad. Otros criterios de exclusión incluyeron enfermedades autoinmunitarias. Después de la inclusión, se extrajeron muestras de sangre de pacientes con septicemia directamente después de la identificación de los primeros signos de septicemia ("t0"), después de 24 horas ("t24"), 48 horas ("t48") y 168 horas ("t168").
A 20 pacientes de control que se habían sometido a cirugía abdominal pero que no presentaban signos de septicemia ("OP en t2") se les extrajo sangre 48 horas después de la cirugía. Se reclutaron 20 voluntarios sanos ("sano") como controles no operados y se les extrajo sangre una vez.
Se analizó el plasma sanguíneo para determinar los niveles de proteína ligando 1 de tipo Delta humana y adicionalmente proteína ligando 4 de tipo Delta humana utilizando ensayos ELISA comerciales (DLL1 - RayBio®; DLL4 - biocat) siguiendo el protocolo habitual. Los niveles de proteínas se analizaron de manera estadística utilizando la prueba U de Mann-Whitney.
La figura 3A muestra que la proteína ligando 1 de tipo Delta está elevada en la sangre de los pacientes diagnosticados con septicemia en comparación con los controles sanos y los pacientes que se sometieron a cirugía abdominal, pero que no mostraron signos de septicemia.
La figura 3B muestra que la proteína ligando 4 de tipo Delta no está elevada o no está elevada de manera significativa en la sangre de los pacientes diagnosticados con septicemia en comparación con los controles sanos y los pacientes no infectados que se sometieron a cirugía abdominal.
Por lo tanto, la proteína ligando 1 de tipo Delta, pero no la proteína ligando 4 de tipo Delta estrechamente relacionada, es adecuada para detectar la presencia de septicemia en la sangre de pacientes después de una cirugía abdominal y para diferenciar a los pacientes infectados tanto de los controles sanos como de los pacientes no infectados.
Los datos recopilados para la proteína ligando 1 de tipo Delta y la proteína ligando 4 de tipo Delta se analizaron utilizando la curva de rendimiento diagnóstico (ROC). Se calculó el área bajo la curva ROC (ABC) y los datos se compararon con los marcadores clínicamente relacionados establecidos de recuento de leucocitos y c Rp . En detalle, el área bajo la curva (ABC) de la curva ROC en t0 frente a OP en t2 fue 0,511 (valor de corte 20,73/nl) (Figura 4A) para leucocitos y 0,795 (valor de corte 175,1 mg/ml) para CRP (Figura 4B). El ABC de DLL1 de septicemia en t0 frente a OP en t2 fue 0,991 (valor de corte 36331 pg/ml) y 1,0 (valor de corte 25269 pg/ml) en septicemia en t0 frente a sano. Por tanto, la predicción de la infección mediante DLL-1 es mucho más fiable que los biomarcadores CRP y el recuento de leucocitos utilizados habitualmente. El ABC del análisis ROC de DLL4 fue 0,696 (valor de corte 1084 pg/ml) en comparación con OP en t2 (Figura 4E) y 0,655 (valor de corte 639,3 pg/ml) en comparación con controles sanos (Figura 4F).
Ejemplo 4 - El ligando 1 de tipo Delta está regulado por incremento en pacientes con septicemia
Las muestras de plasma recogidas en varios estudios se analizaron de manera secundaria para determinar la concentración del ligando 1 de tipo Delta (DLL1) mediante ELISA. En general, se analizaron 180 pacientes adultos
con septicemia (véase "Septicemia" en la Figura 5) de tres cohortes independientes como se describe a continuación utilizando el esquema: "[Número de referencia del registro alemán de ensayos clínicos]/[número de referencia del voto ético] (comité responsable)":
- Cohorte 1: [DRKS00012446]/[S-200/2017] (Heidelberg, Alemania), n = 30 (véase la figura 5A)
- Cohorte 2: [DRKS00005463]/[S-097/2013] (Heidelberg, Alemania), n = 50 (véase la figura 5b ).
- Cohorte 3: [DRKS00008090]/[S-247/2014] (Heidelberg, Alemania), n = 100 (véase la figura 5C).
Se tomaron muestras en el momento de la inclusión del estudio ("inicial) para las tres cohortes, así como 24 horas ("24 h") y 48 horas ("48 h") después de la inclusión del estudio para las cohortes 1 y 2. Todos los pacientes se reclutaron de acuerdo con los criterios de consenso de Sepsis-2 (2> criterios SIRS en combinación con una infección clínicamente sospechada o probada; Cohortes 1 y 2) o Sepsis-3 (cambio en la puntuación SOFA de 2> puntos e infección clínicamente sospechada o probada; Cohorte 3).
Asimismo, las cohortes 1 y 2 incluyeron pacientes después de una cirugía visceral extensa que no mostraron signos de infección en ningún momento durante el estudio (véase "después de OP" en la figura 5; Cohorte 1: n = 30, Cohorte 2: n = 20) y voluntarios sanos ("Sano"; Cohorte 1: n = 30, Cohorte 2: n = 20).
La cohorte 2 corresponde a la misma cohorte que se describe en el ejemplo 3. Por lo tanto, los valores de los datos de la figura 5B son idénticos a los valores de los datos de la figura 3A.
Los controles adicionales incluyeron una cohorte de 38 pacientes después de un traumatismo grave ([DRKS00010991]/[164/14] (Giessen, Alemania); véase la figura 6A) y una cohorte de 25 pacientes sometidos a cirugía cardíaca con circulación extracorpórea ([S-112/2018] (Heidelberg, Alemania); véase la figura 6B).
El análisis de datos se realizó con GraphPad Prism (versión 6.0, GraphPad Software Inc.). Se utilizaron gráficos de dispersión para la visualización. Para comparaciones de grupos, se utilizó la prueba U de Mann-Whitney no paramétrica y se supuso significativo un valor de p <0,05; *** marcas de valores p <0,0001.
Para la evaluación del valor diagnóstico de DLL1, todas las muestras de los pacientes con septicemia (todos los puntos temporales, n = 327 muestras de 180 pacientes) se combinaron y compararon con todas las muestras del grupo de control (todos los puntos temporales, n = 377 muestras; 327 muestras de 113 pacientes de control y 50 muestras de 50 voluntarios sanos) mediante análisis ROC. El valor de corte óptimo se calculó mediante el procedimiento del índice de Youden ((Sensibilidad Especificidad) -100)).
El número de 327 (Septicemia) muestras respecto a 377 (Control) muestras dadas anteriormente y utilizadas en el análisis ROC combinado es el resultado de la pérdida de pacientes durante el período de observación (principalmente debido a la muerte de los pacientes con septicemia y el alta hospitalaria para los pacientes después de una cirugía o un traumatismo grave). Los números de muestra están en detalle:
Cohorte 1
Septicemia: 30/30/27 (inicial/24 h/48 h)
Después de
OP: 30/29/28 (inicial/24 h/48 h)
Sano: 30
Cohorte 2
Septicemia: 50/46/44 (inicial/24 h/48 h)
Después de
OP: 20/20/20 (inicial/24 h/48 h)
Sano: 20
Cohorte 3
Septicemi 100 (in^ial)
Traumatismo grave
38/36/31 (inicial/24 h/48 h)
Cirugía cardíaca
25/25/25 (previo a OP/6 h/24 h después de ECC)
Inicialmente después del reclutamiento, las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes con septicemia en las cohortes 1, 2 y 3 fueron 60.292 pg/ml (IC al 95%: 47.820-72.765; n = 30), 106.126 pg/ml (IC al 95%: 90.102 - 122.149; n = 50) y 56.064 pg/ml (IC al 95 %: 49.494 - 62.634; n = 100), respectivamente (véanse las figuras 5A a C). Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes con septicemia en las cohortes 1 y 2 en t = 24 h fueron 53.027 pg/ml (IC al 95%: 41.824-64.229; n = 30) y 104.944 pg/ml (IC al 95%: 89.786- 120.101; n = 46, respectivamente). Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes con septicemia en las cohortes 1 y 2 en t = 48 h fueron 49.485 pg/ml (IC al 95 %: 39.766 - 59.205; n = 27) y 88.999 pg/ml (IC al 95 %: 75.490 - 102.508; n = 44, respectivamente). Los niveles difirieron de manera significativa entre los pacientes con septicemia y los controles (es decir, los pacientes de control y los sujetos sanos) en los puntos temporales correspondientes después de la cirugía.
Las concentraciones de DLL1 de las cohortes de pacientes de control con traumatismos (véase "después de OP" en las figuras 5A y 5B y todos los datos en la figura 6a ), así como los pacientes antes y después de la cirugía cardíaca (véase la figura 6B), fueron notablemente más bajas en comparación con los pacientes con septicemia en todos los puntos temporales medidos.
Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes de control con cirugía ("después de OP") en la cohorte 1 en t = inicial, t = 24 h y t = 48 h fueron 14.193 pg/ml (IC al 95 %: 12.385- 16.001; n = 30), 19.550 pg/ml (IC al 95 %: 14.536 - 24.565; n = 29) y 17.721 pg/ml (IC al 95 %: 15.498 - 19.944; n = 28, respectivamente).
Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes de control con cirugía ("después de OP") en la cohorte 2 en t = inicial, t = 24 h y t = 48 h fueron 13.548 pg/ml (IC al 95 %: 11.275- 15.821; n = 20), 16.187 pg/ml (IC al 95 %: 13.409- 18.964; n = 20) y 19.287 pg/ml (IC al 95 %: 13.618-24.955; n = 20, respectivamente).
Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes de control con traumatismos graves de la figura 6A en t = inicial, t = 24 h y t = 48 h fueron 19.119 pg/ml (IC al 95 %: 16.892-21.345; n = 38), 19.224 pg/ml (IC al 95 %: 17.184-21.263; n = 36) y 20.409 pg/ml (IC al 95 %: 16.351 -24.468; n = 31, respectivamente).
Las concentraciones plasmáticas medias de los pacientes de control de cirugía cardíaca en la figura 6B en t = inicial, t = 24 h y t = 48 h fueron 13.846 pg/ml (IC al 95 %: 10.633- 17.059; n = 25), 14.603 pg/ml (IC al 95%: 11.356- 17.850; n = 25) y 22.194 pg/ml (IC al 95 %: 18.497 - 25.891; n = 25, respectivamente).
Las concentraciones de DLL1 de los controles sanos (véase "Sano" en las figuras 5A y 5B) fueron notablemente más bajas en comparación con los pacientes con septicemia en todos los puntos temporales medidos. No hubo diferencias significativas entre los controles sanos y los pacientes de control. Las concentraciones plasmáticas medias de los controles sanos medidas en las cohortes 1 y 2 fueron 11,928 pg/ml (IC al 95 %: 10.645 - 13.211; n = 30) y 16.737 pg/ml (IC al 95 %: 14.542 - 18.932; n = 20, respectivamente).
El análisis de la curva de rendimiento diagnóstico (ROC) de todas las muestras disponibles agrupadas en septicemia (n = 327) o controles (n = 377) arrojó un área bajo la curva (ABC) de 0,9555 (IC al 95 %: 0,9401 - 0,9710; véase la figura 7). Se encontró un valor de corte diagnóstico óptimo de 29.538 pg/ml, que produce una sensibilidad del 88,7 % y una especificidad del 93,4 %.
Ejemplo 5 - Los productos de escisión del ligando 1 de tipo Delta detectan una infección bacteriana in vitro
Al unirse a su receptor, se escinde la proteína transmembrana DLL1. El dominio extracelular se libera al medio ambiente. El dominio transmembrana (TM) y el dominio intracelular (IC) (TMIC-DLL1) permanecen unidos dentro de la célula. Otros acontecimientos de escisión pueden liberar IC-DLL1 que migrará al núcleo. Para investigar si TMIC-DLL1 se puede utilizar para probar infecciones, se detectó el producto de escisión, monocitos primarios infectados in vitro, mediante análisis de transferencia Western.
Los monocitos primarios aislados de sangre de donantes sanos se infectaron con bacterias gramnegativas Escherichia coli (E. coli) o se estimularon con LPS, el componente principal de las membranas externas gramnegativas que activa la señalización TLR4. Las bacterias se destruyeron con gentamicina 2 h después de la infección. Al día siguiente, se lisaron y analizaron las células infectadas/tratadas con LPS.
Aislamiento de monocitos humanos primarios - Se aislaron PBMC de sangre fresca o capa leucoplaquetaria de donantes sanos mediante centrifugación en gradiente de densidad (solución de separación Biocoll, 1,077 g/ml, Biochrom AG, Berlín, Alemania). Las células CD14+ se marcaron de manera magnética con perlas (MiltenyiBiotec) y se seleccionaron mediante el separador autoMACS (autoMACS, programa: possel, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemania) dos veces. Se cultivaron los monocitos purificados (1 x 106 células/ml) en RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Alemania) complementado con 100UI/ml de penicilina, estreptomicina 100 pg/ml y suero de ternero fetal inactivado por calor al 10 % (Promocell, Heidelberg, Alemania) a 37 °C en una atmósfera humidificada en presencia de CO2 al 5 %.
Claims (15)
1. Uso de la proteína ligando 1 de tipo Delta o de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta como biomarcador para el diagnóstico in vitro de una infección grave.
2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la proteína ligando 1 de tipo Delta está codificada por la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1.
3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la proteína ligando 1 de tipo Delta es una proteína que tiene al menos un 90 % de identidad con la secuencia de aminoácidos de los SEQ ID NO: 2 y 3.
4. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, en donde la proteína ligando 1 de tipo Delta es un producto de escisión de la proteína ligando 1 de tipo Delta, en particular, en donde el producto de escisión es una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, Se Q ID NO: 6 y/o SEQ ID NO: 7.
5. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde un nivel elevado de expresión de la proteína ligando 1 de tipo Delta o de la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta es indicativo para el diagnóstico de una infección.
6. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la infección grave es septicemia.
7. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el nivel de expresión se determina en una muestra biológica.
8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la muestra biológica se selecciona del grupo que consiste en sangre completa, capa leucoplaquetaria, plasma, suero, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), neutrófilos, monocitos, linfocitos T, orina, líquido espinal, líquido linfático, secreciones externas de la piel, lágrimas y/o saliva.
9. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el nivel de expresión se determina en una muestra biológica tomada de un paciente después de una cirugía, en particular, después de una cirugía abdominal.
10. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 9 como orientación de una terapia con antibióticos.
11. Un método para el diagnóstico in vitro de una infección grave, que comprende la determinación de la proteína ligando 1 de tipo Delta o de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta en una muestra biológica, en donde un nivel elevado de expresión de la proteína ligando 1 de tipo Delta o de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína ligando 1 de tipo Delta es indicativo de una infección.
12. El método de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la proteína ligando 1 de tipo Delta está codificada por la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos que es al menos un 80 % idéntica al s Eq ID NO: 1.
13. El método de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la proteína ligando 1 de tipo Delta tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a los SEQ ID NO: 2 o 3, y/o tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 y/o SEQ ID NO: 7.
14. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en donde la muestra biológica se selecciona del grupo que consiste en sangre completa, capa leucoplaquetaria, plasma, suero, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), neutrófilos, monocitos, linfocitos T, orina, líquido espinal, líquido linfático, secreciones externas de la piel, lágrimas y/o saliva.
15. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en donde el nivel de expresión se determina en una muestra biológica tomada de un paciente después de una cirugía, en particular, después de una cirugía abdominal.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17198330.7A EP3477305A1 (en) | 2017-10-25 | 2017-10-25 | Delta-like ligand 1 for diagnosing severe infections |
| PCT/EP2018/079273 WO2019081636A1 (en) | 2017-10-25 | 2018-10-25 | DELTA 1 TYPE LIGAND FOR DIAGNOSING SERIOUS INFECTIONS |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2903132T3 true ES2903132T3 (es) | 2022-03-31 |
Family
ID=60269633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES18789176T Active ES2903132T3 (es) | 2017-10-25 | 2018-10-25 | Ligando 1 de tipo Delta para el diagnóstico de infecciones graves |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11181532B2 (es) |
| EP (2) | EP3477305A1 (es) |
| JP (1) | JP6998465B2 (es) |
| CN (1) | CN111433609B (es) |
| AU (1) | AU2018355742B2 (es) |
| CA (1) | CA3080063C (es) |
| ES (1) | ES2903132T3 (es) |
| WO (1) | WO2019081636A1 (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4409296A1 (en) | 2021-09-28 | 2024-08-07 | Universität Heidelberg | In vitro methods for detecting dll1 |
| EP4483186A1 (en) * | 2022-02-21 | 2025-01-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Dll1 marker panels for early detection of sepsis |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1410018A1 (en) | 2001-07-25 | 2004-04-21 | Lorantis Limited | Method for detecting modultators of notch signalling |
| GB0220658D0 (en) | 2002-09-05 | 2002-10-16 | Lorantis Ltd | Immunotherapy |
| EP1960552A2 (en) * | 2005-12-16 | 2008-08-27 | Genentech, Inc. | Method for diagnosing, prognosing and treating glioma |
| JP2010115131A (ja) * | 2008-11-12 | 2010-05-27 | Kao Corp | 肌評価方法及び皮膚老化改善剤・皮膚老化予防剤のスクリーニング方法 |
| US8809501B2 (en) | 2009-07-27 | 2014-08-19 | Baxter International Inc. | Nucleophilic catalysts for oxime linkage |
| US8642737B2 (en) | 2010-07-26 | 2014-02-04 | Baxter International Inc. | Nucleophilic catalysts for oxime linkage |
| WO2012092539A2 (en) | 2010-12-31 | 2012-07-05 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Antibodies to dll4 and uses thereof |
| WO2015127029A1 (en) | 2014-02-20 | 2015-08-27 | The Regents Of The University Of Michigan | Biomarkers for tuberculosis infection |
| IL297699A (en) | 2015-03-12 | 2022-12-01 | Univ Leland Stanford Junior | Methods for diagnosis of sepsis |
| CN114129737A (zh) | 2015-06-30 | 2022-03-04 | 纳米提克斯有限责任公司 | 与清除颗粒相关的组合物和方法 |
-
2017
- 2017-10-25 EP EP17198330.7A patent/EP3477305A1/en not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-10-25 EP EP18789176.7A patent/EP3701268B1/en active Active
- 2018-10-25 AU AU2018355742A patent/AU2018355742B2/en active Active
- 2018-10-25 CN CN201880069456.XA patent/CN111433609B/zh active Active
- 2018-10-25 US US16/757,003 patent/US11181532B2/en active Active
- 2018-10-25 JP JP2020536865A patent/JP6998465B2/ja active Active
- 2018-10-25 CA CA3080063A patent/CA3080063C/en active Active
- 2018-10-25 WO PCT/EP2018/079273 patent/WO2019081636A1/en not_active Ceased
- 2018-10-25 ES ES18789176T patent/ES2903132T3/es active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2018355742A1 (en) | 2020-03-26 |
| WO2019081636A1 (en) | 2019-05-02 |
| US11181532B2 (en) | 2021-11-23 |
| EP3701268A1 (en) | 2020-09-02 |
| US20200341007A1 (en) | 2020-10-29 |
| EP3477305A1 (en) | 2019-05-01 |
| JP2021500066A (ja) | 2021-01-07 |
| AU2018355742B2 (en) | 2022-03-17 |
| JP6998465B2 (ja) | 2022-02-10 |
| CA3080063C (en) | 2022-03-15 |
| CA3080063A1 (en) | 2019-05-02 |
| CN111433609B (zh) | 2021-09-28 |
| CN111433609A (zh) | 2020-07-17 |
| EP3701268B1 (en) | 2021-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schrödl et al. | Acute phase proteins as promising biomarkers: Perspectives and limitations for human and veterinary medicine | |
| JP7660605B2 (ja) | がんを診断する方法およびｎｋ細胞活性の測定を使用した診断キット | |
| JP6458087B2 (ja) | 院内感染に対する易感染性を判定するための方法 | |
| EP2848936A1 (en) | Method for detecting disseminated intravascular coagulation or infectious disseminated intravascular coagulation | |
| ES2903132T3 (es) | Ligando 1 de tipo Delta para el diagnóstico de infecciones graves | |
| KR20220170379A (ko) | 암의 진단용 신규한 바이오마커 및 이의 용도 | |
| Agier et al. | β‐Defensin Strengthens Antimicrobial Peritoneal Mast Cell Response | |
| EP2795337B1 (en) | Screening methods to identify compounds useful in the prevention and/or treatment of inflammatory conditions | |
| US20200132673A1 (en) | Proteoglycan irregularities in abnormal fibroblasts and therapies based therefrom | |
| US20220042996A1 (en) | Compositions and methods related to latrophilins as biomarkers for haematopoietic cell cancer | |
| JP6158825B2 (ja) | テネイシンｃおよび関節リウマチにおけるその使用 | |
| RU2498311C2 (ru) | Способ оценки активности туберкулеза у детей и подростков | |
| US20230405078A1 (en) | Detection and treatment of intestinal fibrosis | |
| Zheng et al. | The role of ELK4 up-regulation in macrophage polarization and its mechanism in connective tissue disease-associated interstitial lung disease | |
| WO2020216823A2 (en) | Methods for screening drugs for the treatment of sickle cell disease | |
| US20250228968A1 (en) | Tumor-intrinsic galectin-3 suppresses melanoma metastasis | |
| US12031976B2 (en) | Screening method for therapeutic substance for preventing or treating bronchopulmonary dysplasia (BPD) | |
| Salmanoğlu et al. | Serum vascular endothelial growth factor has diagnostic and prognostic significiances in ulcerative colitis | |
| CN120314579A (zh) | 白细胞介素-40作为生物标志物和治疗靶点在制备脓毒症诊断试剂和治疗药物中的用途 | |
| Ma et al. | Correlation analysis of serum HMGB1 with clinical indicators in children with sepsis | |
| Jurcak | The Role of Axon Guidance Signaling in the Tumor Microenvironment of Pancreatic Ductal Adenocarcinoma | |
| KR20250062590A (ko) | 신장 이식 후 만성거부반응 진단용 조성물 | |
| CN118641771A (zh) | 乳酸化修饰ptbp1在胶质瘤诊断、预后和治疗中的应用 | |
| JP2005519582A (ja) | 浸潤複合体および標的化方法 | |
| Kwong | The role of the N-terminal domain of a2 vacuolar ATPase (a2NTD) during tumor sterile inflammation |