ES2905729T3

ES2905729T3 - Disolución de galato de epigalocatequina

Info

Publication number: ES2905729T3
Application number: ES18814497T
Authority: ES
Inventors: Bernard Do; Muriel Paul; Alain Astier
Original assignee: Assistance Publique Hopitaux de Paris APHP; Universite Paris Saclay
Current assignee: Assistance Publique Hopitaux de Paris APHP; Universite Paris Saclay
Priority date: 2017-11-23
Filing date: 2018-11-21
Publication date: 2022-04-11
Anticipated expiration: 2038-11-21
Also published as: US11938113B2; EP3713562B1; CN111372581A; EP3713562A1; JP2021504460A; WO2019101777A1; CA3091094A1; US20200375939A1; EP3488849A1

Abstract

Una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética estable que comprende: - 13-107 mg/ml de galato de epigalocatequina, - Al menos un disacárido, - 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante, - Un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable o dermocosméticamente aceptable, en donde dicha disolución tiene un pH en un intervalo de 3,0 a 4,0 y la relación molar de galato de epigalocatequina/disacárido es de 0,1 a 0,8, particularmente 0,25.

Description

DESCRIPCIÓN

Disolución de galato de epigalocatequina

La presente invención se refiere a una disolución acuosa estable farmacéutica o dermocosmética que comprende galato de epigalocatequina.

El té verde (Camellia sinensis) se ha consumido ampliamente en China y otros países asiáticos durante varios milenios. Es considerado como uno de los nutrientes más prometedores para la prevención y/o tratamiento de muchas enfermedades. ("Cabrera, Artacho et al., Journal of the American College of Nutrition, vol. 25, núm. 2, 79-99 (2006)). El té verde contiene una alta cantidad de polifenoles. Las catequinas polifenólicas son bien conocidas por sus potentes propiedades antioxidantes, lo que las convierte en candidatas para el desarrollo de fármacos que cubren amplios dominios terapéuticos. La mayoría de los polifenoles presentes en el té verde son flavanoles, comúnmente llamados catequinas (Afzal, Safer et al., Inflammopharmacology. 2015 agosto; 23(4):151-61).

Las propiedades antioxidantes de las catequinas del té verde se examinaron en varios modelos in vitro e in vivo. Los resultados experimentales y los estudios clínicos proporcionaron datos convincentes sobre el efecto beneficioso de los extractos de té y los polifenoles del té (Yang, Wang et al. Nat Rev Cáncer. 2009 junio; 9(6): 429-439). Las catequinas se describen particularmente por tener efectos anticancerígenos y propiedades protectoras frente enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer.

El galato de epigalocatequina (EGCG), muy de lejos el más abundante de los polifenoles de catequina del té verde, ha sido reconocido por su tremendo potencial para prevenir o ralentizar las enfermedades relacionadas con el envejecimiento, como el cáncer, la diabetes y la degeneración de los tejidos (Krupkova et al. Journal o Nutritional Bioquemistry 37 (2016) 1 -12).

Se ha demostrado que EGCG previene, in vitro e en vivo, el daño oxidativo y agotamiento de las enzimas antioxidantes causado por la exposición a la radiación solar UV (Vayalil et al. Carcinogénesis 24 (2003) 927-936). Se ha encontrado que los tratamientos tópicos con EGCG disminuyen la respuesta inflamatoria de la piel debido a la exposición solar al inhibir la infiltración de leucocitos inflamatorios y la producción de metabolitos de prostaglandina (Nichols et Katiyar, Dermatol Arc. Res. 302 (2010) 71-83). Además, se ha informado que EGCG protege frente a la supresión del sistema inmunitario cutáneo inducida por la luz solar y previene el fotoenvejecimiento de la piel al reducir la expresión de las metaloproteinasas de la matriz provocadas por la radiación solar UV (Shin et al., Tropical Journal of Pharmaceutical Research (2014) 13 (7): 1079-1084)

EGCG es de origen natural y está contenido en extracto de té verde. Su contenido varía según la estación, el tipo de hojas y la parte de la planta utilizada. Los extractos secos de té verde contienen aproximadamente un 35 % de polifenoles, un 30 % de los cuales se deben a las catequinas, que a su vez contienen un 55-80 % de EGCG.

EGCG está actualmente disponible como fármacos a base de hierbas o extractos de té verde (monograph 1433, current European Pharmacopoeia; monograph 2668, Pharmaeuropa junio 2017), aislado o no. Las infusiones de té y las cápsulas o comprimidos coformulados con vitaminas representan las principales vías de ingesta de EGCG.

A pesar del hecho de que el EGCG exhibe notables propiedades antioxidantes, solo se han observado efectos limitados en estudios epidemiológicos en animales y seres humanos. Después de la administración oral, se encontró que la biodisponibilidad de EGCG era muy baja en seres humanos, dando como resultado concentraciones plasmáticas de 5 a 50 veces menores que la concentración que mostró que ejercía actividades biológicas en sistemas in vitro (Chow et al., Clin Cancer Res 11 (2005) 4627-4633).

Al igual que las otras catequinas, EGCG sufre de solubilidad deficiente y baja permeabilidad de la piel.

Las propiedades biofarmacéuticas deficientes de EGCG se deben principalmente a su relativa baja solubilidad en agua, baja estabilidad química, baja permeabilidad y una vida media plasmática corta.

De hecho, en condiciones normales, el EGCG es soluble solo a una proporción de 4,6 g/L (10 mM). La cantidad de EGCG soluble está lejos de ser suficiente para desarrollar un producto farmacéutico, que necesita una alta concentración de ingrediente activo en un pequeño volumen.

El EGCG reacciona rápidamente por autooxidación y, por lo tanto, muestra una estabilidad química muy baja. La autooxidación de EGCG produce especies reactivas de oxígeno capaces de inducir la polimerización y descomposición de EGCG. Los derivados, dímeros u oligómeros de quinona resultantes tienen tasas de absorción intestinal mucho más bajas.

En general, su entorno inmediato, como la presencia de agua, pH, temperatura, contenido de oxígeno, niveles de antioxidantes e iones metálicos, incluso en cantidades traza (hierro, zinc, cobre, aluminio) afecta directamente su estabilidad (Krupkova et al., Journal of Nutritional Bioquemistry 37 (2016) 1-12).

Por cierto, la baja biodisponibilidad también se debe en parte a sus interacciones con los nutrientes presentes, incluidos los excipientes coformulados. De hecho, los estudios han demostrado que los componentes comúnmente poco solubles de la cápsula y los de la propia cubierta de gelatina pueden combinarse con EGCG después de la desintegración y formar complejos aún menos solubles que impiden la absorción.

Los inconvenientes mencionados anteriormente también impiden que se use EGCG en productos para el cuidado de la piel. Además de su inestabilidad química, permeabilidad de la piel deficiente, baja solubilidad en agua, EGCG es muy sensible a la radiación ultravioleta. Se encontró que el EGCG se descomponía un 70 % después de 1 h de radiación ultravioleta. Debido a que EGCG es un ingrediente muy útil para la protección de la piel frente a los efectos dañinos de la radiación solar, su estabilización bajo la exposición a la radiación ultravioleta es de suma importancia para la preparación de productos dermatológicos efectivos que contienen EGCG.

Para mejorar la solubilidad y estabilidad de EGCG en el contexto de la administración tópica, se han propuesto varias tecnologías en el pasado. Sin embargo, las formulaciones de EGCG descritas hasta el día de hoy todavía no pueden cumplir completamente los requisitos para el desarrollo clínico de EGCG.

El documento US20140088030 describió un método para producir derivados O-a-glucósido de compuestos fenólicos (como EGCG), mediante la incubación de sacarosa y una glucansacarasa de la especie Leuconostoc con los compuestos fenólicos. Sin embargo, este método implica cambios estructurales de EGCG. Estos cambios pueden alterar otras propiedades de EGCG.

También se han desarrollado nanopartículas que encapsulan EGCG para promover la liberación sostenida de concentrados de polifenol de té verde en el tracto gastrointestinal (Krupkova et al., Journal of Nutritional Biochemistry 37 (2016) 1-12). Sin embargo, los cambios en las velocidades de liberación y la cinética podrían hacer que la fase biofarmacéutica de EGCG fuera aún más compleja y mucho menos predecible. Por cierto, para dosis equivalentes administradas, es posible que el uso de una forma de liberación gradual de EGCG, que por lo tanto está presente en dosis más pequeñas en el tracto gastrointestinal, lo expusiera más a degradaciones enzimáticas y metabolismos bacterianos que una forma de liberación inmediata.

Krupkova et al. (Journal of Nutritional Biochemistry 37 (2016) 1-12) describieron una formulación en disolución de catequinas de té verde (GTC) que comprende 1,09 mM de una mezcla de GTC, 0,15 g/mL de sacarosa y 2 mg/mL de ácido cítrico. Sin embargo, una evaluación de 6 meses reveló que la adición de sacarosa tenía poco efecto sobre la estabilidad del GTC, mientras que la adición de ácido cítrico desestabilizó el GTC.

Existe una gran necesidad de desarrollar un producto farmacéutico o dermocosmético que contenga EGCG que tenga solubilidad y estabilidad mejoradas, fácil de formular y exento de excipiente o ingrediente que pueda formar complejos insolubles con EGCG.

El objetivo de la invención ha sido desarrollar una nueva formulación galénica de galato de epigalocatequina (EGCG) en donde ECGC tiene una mejor solubilidad y estabilidad en agua.

El primer aspecto de la presente invención se refiere a una disolución acuosa estable farmacéutica o dermocosmética de galato de epigalocatequina, comprendiendo dicha disolución:

• 13-107 mg/ml de galato de epigalocatequina,

• Al menos un disacárido,

• 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

• Un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable o dermocosméticamente aceptable,

en donde dicha disolución está a un pH en un intervalo de 3,0 a 4,0 y la relación molar de galato de epigalocatequina/disacárido es de 0,1 a 0,8, particularmente 0,25.

En una realización, la presente invención se refiere a una disolución acuosa farmacéutica estable de galato de epigalocatequina, comprendiendo dicha disolución:

• 13-107 mg/ml de galato de epigalocatequina,

• Al menos un disacárido,

• 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

• Un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable,

en donde dicha disolución tiene un pH en un intervalo de 3,0 a 4,0 y la relación molar de galato de epigalocatequina/disacárido es de 0,1 a 0,8, particularmente 0,25.

En una realización particular, dicha disolución estable es para su uso en la preparación de un producto dermofarmacéutico.

Otra realización de la presente invención se refiere a una disolución acuosa dermocosmética de galato de epigalocatequina, comprendiendo dicha disolución:

• 13-107 mg/ml de galato de epigalocatequina,

• Al menos un disacárido,

• 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

• Un agente modificador del pH cosméticamente aceptable,

Contra todo pronóstico, sin recurrir a la temperatura ni a disolventes orgánicos como el DMSO, los inventores de la presente invención han logrado aumentar casi 20 veces la concentración de EGCG en disolución acuosa en presencia de un disacárido.

Además, se observa que esta disolución acuosa puede ser estable a 2-8°C ya temperatura ambiente durante 18-24 meses y 9-12 meses, respectivamente.

Los inventores han observado por primera vez que el EGCG y el disacárido, cuando están presentes en cierto intervalo de relaciones molares y en disolución acuosa, pueden formar un complejo en donde se forman enlaces de hidrógeno entre los grupos hidroxilo del EGCG y los del disacárido como aceptor.

Sin estar limitado por ninguna teoría, se supone que la formación del complejo EGCG/disacárido y el enlace de hidrógeno hacen posible aumentar sustancialmente la solubilidad del EGCG en disolución acuosa, lo que a su vez da como resultado un aumento de la estabilidad de la disolución mediante:

• disminución del contenido de oxígeno disuelto,

• aumento de la relación sustrato/reactivo haciendo las reacciones menos cuantitativas,

• mejor autoprotección de EGCG por auto-extinción y extinción del oxígeno singlete.

Por cierto, el enlace de hidrógeno formado entre el EGCG y el disacárido evitaría que la función éster se expusiera a los reactivos de hidrólisis.

Gracias a la alta concentración de EGCG soluble y alta estabilidad, dicha disolución farmacéutica puede mostrar una biodisponibilidad mejorada de EGCG en comparación con las formulaciones de EGCG conocidas hasta la fecha, ya que la alta concentración de EGCG puede evitar la disolución progresiva de EGCG ligada a una baja relación sustrato/reactivo, favorecer el paso de la barrera intestinal y limitar el aclaramiento hepático de EGCG, que se sabe que es importante.

Por el término "una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética estable de galato de epigalocatequina" se refiere en el presente documento a una disolución farmacéutica o dermocosmética que conserva al menos el 95 % (p/p) de EGCG y su epímero trans, galato de galocatequina (GCG), en comparación con la cantidad inicial de EGCG en dicha disolución después de al menos 9 meses de almacenamiento a temperatura ambiente de 20 a 25°C o al menos 18 meses de almacenamiento de 2 a 8°C.

La disolución farmacéutica de la invención es farmacéuticamente aceptable, es decir, no produce una reacción adversa, alérgica o de otro tipo cuando se administra a un paciente.

Como se usa en el presente documento, el término "galato de epigalocatequina" en la presente invención significa EGCG natural purificado de cualquier parte de las hojas de Camellia sinensis recogido en cualquier temporada.

Preferiblemente, cualquier extracto de EGCG que tenga un contenido de al menos 90%, particularmente al menos 95%, más particularmente al menos 97% en peso de EGCG es adecuado para preparar una disolución de la presente invención.

Preferiblemente, el extracto de EGCG utilizado para preparar una disolución de la presente invención satisface los requisitos especificados en la European Pharmacopoeia actual en cuestión (monographs 1433 y 2668, European Pharmacopoiea actual).

El término "disacárido" significa azúcares formados a partir de la condensación de dos monosacáridos que se unen por enlace glucosídico.

En una realización preferida, dicho disacárido es un disacárido fácilmente soluble en agua que tiene una solubilidad superior a 100 mg/ml a 25°C.

En una realización más preferida, dicho disacárido es sacarosa o trehalosa.

Como se usa en el presente documento, el término "agente quelante" se refiere a un compuesto químico que reacciona con iones metálicos para formar complejos metálicos solubles en agua estables. En una disolución farmacéutica de la presente invención, la presencia de agentes quelantes tiene como objetivo capturar cualquier ion de metal traza potencialmente presente en la disolución y evitar la desprotonación de EGCG que puede catalizarse en presencia de iones de metal incluso en concentración de traza.

Ejemplos de agentes quelantes adecuados para una disolución de la presente invención son ácido cítrico, edetato cálcico disódico, edetato disódico, ácido fumárico, ácido málico, maltol y ácido pentético.

El pH de una disolución de la presente invención se mantiene en un intervalo de pH de 3,0 a 4,0 para evitar el riesgo de degradación del EGCG relacionado con la pérdida de un protón a un pH más alto (>5,0).

En una realización preferida de la presente invención, la disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención tiene un pH en un intervalo de 3,0 a 3,5.

El pH de la disolución se puede ajustar mediante la incorporación de un agente modificador del pH adecuado farmacéutica o dermocosméticamente aceptable.

El término "agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier agente químico que sea, dentro del alcance del buen juicio médico, adecuado para usar en contacto con los tejidos humanos sin toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares.

El término "agente modificador del pH aceptable dermocosméticamente" se refiere a cualquier agente químico que no sea tóxico para su uso en un producto dermocosmético.

Se entiende por "producto dermocosmético" un producto para ser puesto en contacto con diferentes partes superficiales del cuerpo humano, especialmente la epidermis, el cabello, las uñas, los labios, etc., dicho producto combina una acción cosmética con una acción dermatológica.

Generalmente, el agente modificador del pH puede ser un agente acidificante, especialmente un ácido. Puede usarse cualquier ácido farmacéuticamente aceptable adecuado en la disolución farmacéutica de la presente invención. Puede usarse cualquier ácido dermocosméticamente aceptable en la disolución dermocosmética de la presente invención. A veces, puede ser necesario incorporar un agente amortiguador para aumentar el pH de la disolución para alcanzar el intervalo de pH deseado. En una disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención se puede utilizar, respectivamente, cualquier agente amortiguador farmacéuticamente o dermocosméticamente aceptable. En una realización de la presente invención, el agente modificador del pH se elige entre ácido acético, ácido adípico, carbonato de amonio, hidróxido de amonio, fosfato de amonio, ácido cítrico, dietanolamina, ácido fumárico, ácido clorhídrico, ácido málico, ácido nítrico, ácido propiónico, acetato de potasio, bicarbonato de potasio, cloruro de potasio, citrato de potasio, metafosfato de potasio, fosfato de potasio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de sodio, citrato de sodio, glicolato de sodio, hidróxido de sodio, lactato de sodio, fosfato de sodio, propionato de sodio, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, trietanolamina o mezclas de los mismos.

La cantidad de agente modificador del pH requerida es la que puede conferir a la disolución el pH deseado.

Según una realización de la presente invención, un agente quelante y un agente modificador del pH pueden ser un mismo compuesto. Por ejemplo, el ácido cítrico es al mismo tiempo un agente quelante y un agente modificador del pH.

Según una realización de la presente invención, la disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención comprende además al menos un agente antioxidante adecuado para los sistemas acuosos y compatible con pH ácido. Ejemplos de agentes antioxidantes adecuados son ácido ascórbico, ácido eritórbico, monotioglicerol, metabisulfito de sodio, bisulfito de sodio o azúcar reductor.

El término "azúcar reductor" se define en el presente documento para incluir cualquier sacárido que incluya un grupo funcional aldehído o que pueda isomerizarse para formar un grupo funcional aldehído en disolución básica, por ejemplo glucosa, fructosa, maltosa, galactosa, lactosa y pentosa tales como xilosa.

En una realización preferida de la presente invención, el agente antioxidante en una disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención es glucosa o fructosa.

En una realización preferida, cuando la disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención comprende un antioxidante elegido entre ácido ascórbico, ácido eritórbico, monotioglicerol, metabisulfito de sodio o bisulfito de sodio, la concentración de dicho antioxidante está en el intervalo de 0,01 mg /ml a 0,5 mg/ml.

En otra realización preferida, cuando la disolución farmacéutica o dermocosmética de la presente invención comprende un azúcar reductor, la concentración de dicho azúcar reductor es de al menos 10 mg/ml, preferiblemente no más de 500 mg/ml, más preferiblemente a 100 mg /ml.

En una disolución farmacéutica de la presente invención no es necesaria la presencia de un disolvente orgánico. En una realización particular de la invención, dicha disolución farmacéutica está exenta de disolvente orgánico. Ejemplos de disolventes orgánicos son acetona, acetonitrilo, cloroformo, sulfóxido de dimetilo, etanol, propileno, glicol, glicerol, PEG400.

En otra realización particular de la invención, dicha disolución farmacéutica comprende un disolvente orgánico elegido entre etanol, propilenglicol, glicerol, PEG 400.

En una realización particular, la presente invención proporciona una disolución acuosa farmacéutica que comprende o consiste en:

• 13-107 mg/ml, particularmente 27-67 mg/ml, más particularmente 27-53 mg/ml, de galato de epigalocatequina, • 0,05-3,0 mg/ml, particularmente 0,08-0,25 mg/ml, más particularmente 0,10-0,20 mg/ml de ácido cítrico,

• 25-140 mg/ml, particularmente 50-125 mg/ml, más particularmente 100-125 mg/ml de sacarosa,

• Opcionalmente, 25-250 mg/ml, en particular 100 mg/ml, de glucosa y/o fructosa.

En una realización aún más particular, la presente invención proporciona una disolución acuosa farmacéutica que comprende o consiste en:

• 27 mg/ml de galato de epigalocatequina

• 0,1 mg/ml de ácido cítrico

• 100 mg/ml de sacarosa,

• 100 mg/ml de glucosa.

En una realización de la presente invención, la disolución farmacéutica se formula como una composición farmacéutica oral, especialmente como una composición farmacéutica para beber.

Dicha disolución puede incluir uno o más edulcorantes y/o agentes aromáticos farmacéuticamente aceptables. Un edulcorante o un agente aromático es particularmente útil cuando dicha disolución farmacéutica no contiene glucosa o fructosa como agente antioxidante.

Los edulcorantes pueden incluirse, entre otros, aspartamo, acesulfamo-K, manitol, sorbitol, lactitol, xilitol, eritritol o sus mezclas. El agente aromático puede ser cualquier aroma de frutas u otros aromas tales como aromas de sabor a cola o sus mezclas.

La cantidad de dicho edulcorante o agente aromático se puede determinar según el conocimiento común en el campo de la formulación de fármacos.

En otra realización, la disolución farmacéutica de la invención es una formulación inyectable, que puede administrarse por vía parenteral, como la vía intravenosa o subcutánea, o por vía tópica.

Una disolución farmacéutica de la presente invención se puede preparar de acuerdo con cualquier método convencional para la preparación de disoluciones. Los ingredientes deben añadirse uno tras otro después de la disolución completa de cada ingrediente añadido previamente. La disolución de los ingredientes se puede lograr con agitación a temperatura ambiente.

Después de la disolución completa de todos los ingredientes, la disolución puede someterse a una o varias filtraciones estériles y luego llenarse en envases farmacéuticos, como un vial de dosis múltiples, al volumen adecuado.

En otra realización particular, la presente invención proporciona una disolución acuosa dermocosmética que comprende o consiste en:

• 13-107 mg/ml, particularmente 27-67 mg/ml, más particularmente 27-53 mg/ml, de galato de epigalocatequina, • 0,05-3,0 mg/ml, particularmente 0,08-0,25 mg/ml, más particularmente 0,10-0,20 mg/ml de ácido cítrico, • 25-140 mg/ml, particularmente 50-125 mg/ml, más particularmente 100-125 mg/ml de sacarosa,

En una realización aún más particular, la presente invención proporciona una disolución acuosa dermocosmética que comprende o consiste en:

• 27 mg/ml de galato de epigalocatequina

• 0,1 mg/ml de ácido cítrico

• 100 mg/ml de sacarosa,

• 100 mg/ml de glucosa.

Otro aspecto de la presente invención proporciona una dosis unitaria de galato de epigalocatequina que comprende una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética descrita anteriormente.

En comparación con una disolución de la presente invención acondicionada en mayor volumen, como en un vial multidosis, una disolución farmacéutica o dermocosmética en dosis unitaria ofrece más ventajas para los pacientes, en particular en el mantenimiento de la estabilidad química de la disolución.

Dicha dosis unitaria de la presente invención tiene un volumen en el intervalo de 5-30 ml, particularmente 10-15 ml, más particularmente 15 ml.

De acuerdo con la invención, una dosis unitaria de la disolución comprende galato de epigalocatequina en un peso en el intervalo de 200-1600 mg, particularmente 400-1200 mg, más particularmente 400 mg.

En una realización preferible, la dosis unitaria de la presente invención está en un volumen de 5-30 ml, particularmente 10-15 ml, más particularmente 15 ml, que contiene EGCG en un peso en el intervalo de 200-1600 mg, particularmente 400-1200 mg, más particularmente 400 mg.

En una realización más preferible, la dosis unitaria de la presente invención está en un volumen de 15 ml y contiene 400 mg de EGCG y 1,5 g de sacarosa.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición sólida resultante de cualquier proceso de eliminación de agua, especialmente liofilización o secado por pulverización, de una disolución acuosa farmacéutica descrita anteriormente, o de una dosis unitaria descrita anteriormente.

Dicha composición sólida puede ser de formas polimorfas cristalinas, hidratadas o anhidras.

Una disolución farmacéutica descrita anteriormente se puede restablecer a partir de dicha composición sólida mediante la adición de un volumen adecuado de agua.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una disolución farmacéutica acuosa, una disolución farmacéutica acuosa en dosis unitaria o una composición sólida resultante de cualquier proceso de eliminación de agua de dicha disolución farmacéutica, o de dicha dosis unitaria.

En una realización particular, dicha composición farmacéutica de la invención está formulada para ser utilizada como producto dermofarmacéutico.

Dicho producto puede ser una composición tópica semisólida o pastosa resultante de mezclar dicha disolución dermocosmética con diferentes bases pastosas o semisólidas.

La presente invención proporciona una disolución farmacéutica acuosa, una disolución farmacéutica acuosa en una dosis unitaria, o una composición sólida resultante de cualquier proceso de eliminación de agua de dicha disolución farmacéutica, o de dicha dosis unitaria, para su uso como un medicamento en el tratamiento de cánceres, trastorno cardiovascular, diabetes, enfermedades neurodegenerativas, tales como enfermedad de Parkinson y enfermedad de Alzheimer, o enfermedades dermatológicas.

La presente invención proporciona también un producto dermocosmético que comprende una disolución acuosa dermocosmética, una disolución acuosa dermocosmética en una dosis unitaria, o una composición sólida resultante de cualquier proceso de eliminación de agua de dicha disolución dermocosmética, o de dicha dosis unitaria.

Dicho producto dermocosmético puede ser una composición tópica semisólida o pastosa resultante de mezclar dicha disolución dermocosmética o dicha composición sólida con diferentes bases pastosas o semisólidas.

Dicho producto dermocosmético puede ser productos para el cuidado de la piel, tales como cremas solares, cremas de día, cremas de noche, productos para después del sol, maquillaje, barras de labios, cosméticos para los ojos, champús, geles de ducha.

La presente invención proporciona también una mezcla formada por galato de epigalocatequina y un disacárido, en particular sacarosa, en la que la relación molar galato de epigalocatequina/disacárido es de 0,1 a 0,8, en particular 0,25. Dicha mezcla asegura una mejor tasa de disolución de agua de EGCG a temperatura ambiente de 20°C a 25°C. La presente invención también se refiere a un complejo eutéctico formado por EGCG y disacáridos, en donde el EGCG y los disacáridos están en una proporción molar de 0,7-0,85.

El término "complejo eutéctico" se refiere a un complejo obtenido después de la fusión a una temperatura específica de dos o más componentes en un intervalo específico de relación molar. En un complejo eutéctico, los componentes se funden y solidifican a la misma temperatura, que es inferior a la temperatura de fusión de cada componente. En dicho complejo, el EGCG y los disacáridos están unidos por enlaces de hidrógeno.

Según una realización particular de la presente invención, el complejo eutéctico es un complejo formado por EGCG y sacarosa en el que el EGCG y la sacarosa se encuentran en una relación molar de 0,7-0,85.

En una realización preferida, el complejo eutéctico EGCG/sacarosa de la presente invención tiene una temperatura eutéctica en el intervalo de 80-90°C.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para mejorar la solubilidad en agua del EGCG.

Dicho método comprende las etapas siguientes:

(i) preparar una disolución que contiene:

- al menos un disacárido, en particular sacarosa y trehalosa, en donde la relación molar de galato de epigalocatequina/disacárido es de 0,1 a 0,8, particularmente 0,25

- 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

- un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable para ajustar el pH de la disolución en un intervalo de 3,0 a 4,0, - opcionalmente, al menos un agente antioxidante adecuado para los sistemas acuosos y compatible con pH ácido, (ii) disolver 13-107 mg/ml, particularmente 27-67 mg/ml, más particularmente 27-53 mg/ml, de EGCG en la disolución preparada en la etapa anterior.

La presente invención se refiere también a un método para mejorar la biodisponibilidad del EGCG.

Dicho método comprende las etapas siguientes:

(i) disolver 13-107 mg/ml, particularmente 27-67 mg/ml, más particularmente 27-53 mg/ml, de EGCG en una disolución que contiene:

- 0,1-1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

- un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable para ajustar el pH de la disolución en un intervalo de 3,0 a 4,0, opcionalmente, al menos un agente antioxidante adecuado para los sistemas acuosos y compatible con pH ácido, (ii) administrar dicha disolución a un paciente que necesite tratamiento por EGCG.

En una realización preferida, cuando el antioxidante se elige entre ácido ascórbico, ácido eritórbico, monotioglicerol, metabisulfito de sodio o bisulfito de sodio, la concentración de dicho antioxidante en la disolución anteriomente mencionada está en el intervalo de 0,01 mg/ml a 0,5 mg/ml.

En otra realización preferida, cuando la disolución farmacéutica de la presente invención comprende un azúcar reductor, la concentración de dicho azúcar reductor es de al menos 10 mg/ml, preferiblemente no más de 500 mg/ml, más preferiblemente de 100 mg/ml.

La administración se puede realizar por vía oral o por vía parenteral.

La presente invención se ilustra con más detalle mediante las siguientes figuras y ejemplos.

Figuras

La Figura 1 muestra la solubilidad del EGCG en una disolución que contiene 100 mg/ml de sacarosa según la invención (representada por símbolos de diamantes) en comparación con la de EGCG sola en agua (representada por símbolos cuadrados). El eje X representa el tiempo de disolución (horas). El eje Y representa el contenido de EGCG en disolución (g/L).

Las Figuras 2A, 2B y 2C muestran la estabilidad de una formulación de EGCG proporcionada en la Tabla 1 a continuación (Figura 2A) frente a la de la disolución basada en EGCG sola (Figura 2B). Ambas disoluciones se sometieron a un calentamiento progresivo entre 25 y 135°C a razón de 5°C por minuto. Al final del calentamiento, los residuos formados por cada disolución se ilustran en la Figura 2A y se analizan mediante cromatografía líquida de alta resolución. La Figura 2B es el cromatograma de la formulación de EGCG que figura en la Tabla 1. La Figura 2C es el cromatograma de la suspensión acuosa a base de EGCG libre de otros excipientes.

La Figura 3 muestra los espectros ATR-IR del complejo formado por EGCG y sacarosa.

La Figura 4 compara el porcentaje acumulado de permeación de EGCG (% CEP) a lo largo del tiempo de la disolución de la presente invención (formulación reivindicada) y la de la formulación de control (cápsula) a través de una membrana de diálisis sintética en medio intestinal superior simulado hasta 6 h.

La Figura 5 muestra la evolución en el tiempo de las concentraciones de EGCG en plasma en ratas después de la administración oral de una formulación de control (dosis de Capsugel 27 mg/kg) y una disolución de la presente invención (Formulación a 27 mg/kg).

Ejemplos

Ejemplo 1

1. Materiales y métodos

1.1 Formulación

Unas disoluciones orales de EGCG se preparan de acuerdo con la formulación dada en la tabla 1 a continuación. Tabla 1: ejemplo de fórmula de disolución de EGCG de 400 mg/15 ml

El EGCG utilizado para preparar dicha disolución es un extracto de EGCG aislado (> 97 % p/p del extracto seco). Antes de su uso, la sustancia activa se controló minuciosamente para garantizar que su calidad cumpliera con Monograph 2668 (Pharmeuropa, junio de 2017).

La suspensión patrón de referencia de EGCG utilizada para los ensayos de estabilidad al estrés es una suspensión de agua que contiene únicamente EGCG a una concentración de 26,6 mg/mL. La suspensión estándar se prepara de manera extemporánea dispersando una cantidad apropiada de un extracto de EGCG aislado (> 97 % p/p del extracto seco) en agua destilada para lograr dicha concentración.

La disolución patrón de referencia de EGCG utilizada para los estudios de estabilidad a largo plazo y acelerados es una disolución de agua que contiene únicamente EGCG a una concentración de 0,26 mg/mL. La disolución patrón se prepara extemporáneamente disolviendo una cantidad apropiada de un extracto de EGCG aislado (> 97 % p/p del extracto seco) en agua destilada para lograr dicha concentración.

1.2 Proceso de fabricación

A continuación se muestra un ejemplo del proceso de fabricación.

Etapa 1: Preparación de la d isolución

Etapa 1: Se llena un recipiente de vidrio Pyrex de 20 litros hasta un volumen correspondiente a 1/3 del volumen final de la disolución con agua para inyección.

Etapa 2: se añaden al agua cantidades adecuadas de EGCG, ácido cítrico, glucosa, sacarosa, sabor a cola según la Tabla 1 para alcanzar la disolución completa mezclando.

Etapa 3: se añade agua para inyección hasta alcanzar el volumen final.

Etapa 2: Filtración

La filtración se realiza mediante un cartucho de filtración Millipore de 1p®. La disolución filtrada se almacena en un tanque de acero inoxidable de 20 litros con entrada de nitrógeno para inertizar la disolución y el espacio superior del contenedor.

Etapa 3: Llenado en frasco m ultidosis

La disolución se introduce en un frasco de vidrio ámbar multidosis de 250 ml. La botella llena se cierra con una tapa con un sello de polietileno.

1.3 Pruebas de estabilidad al estrés:

1 mL de la suspensión patrón de referencia y una formulación de la invención descrita en la Tabla 1 anteriormente se sometieron a un programa de gradiente térmico que oscilaba entre 25 y 135°C a una velocidad de 5°C por minuto. Al final de esta exposición, una parte de cada uno de los residuos formados se depositó en un portaobjetos de vidrio y la parte restante se analizó por cromatografía líquida de alta resolución. Los resultados se muestran en la Figura 2. 1.4 Ensayos de estabilidad a largo plazo y acelerados

Condiciones de almacenamiento y protocolos de muestreo

El lote ensayado se prepara según la formulación de dosis unitaria de 250 ml mencionada en la Tabla 1.

La disolución patrón de referencia de EGCG es una disolución de agua que contiene únicamente EGCG a una concentración de 0,26 mg/mL.

El lote analizado se almacenó de acuerdo con la directriz Q1A de ICH. Los detalles de los puntos de tiempo de muestreo para cada condición se presentan en la Tabla 2. Se diluye 1/100 en agua destilada antes del análisis HPLC. Tabla 2 - Protocolo de muestreo y almacenamiento para estudios de lotes primarios

Ensayos de estabilidad y límites de aceptación

La monitorización de las características químicas, físicas y microbianas adecuadas durante los estudios de estabilidad y en cada momento en el tiempo ha permitido evaluar la estabilidad de la disolución oral de EGCG.

La estabilidad química de EGCG se evaluó mediante HPLC, método de ensayo validado como método indicador de estabilidad. Dicho procedimiento es adecuado para el ensayo del producto de investigación EGCG utilizando un patrón externo. El ensayo de EGCG se logra comparando la respuesta de una disolución de muestra con la respuesta de la disolución patrón de referencia de EGCG preparada a una concentración nominal similar y analizada de la misma manera. Las disoluciones patrón de muestra y de referencia se analizan mediante HPLC de fase inversa de gradiente y detección UV utilizando una columna y condiciones de cromatografía adecuadas.

El ensayo de HPLC utiliza un cromatógrafo de líquidos equipado con un detector UV (longitud de onda variable o detector de matriz de diodos) y equipado con una columna de Interchim® VKR5 C18 (250 x 4,6,0 mm, tamaño de partícula de 5 pm) o equivalente.

Acetonitrilo, ácido acético y agua pura se utilizan para preparar la fase móvil A (5/95/0,07 v/v/v Acetonitrilo/Agua/Ácido acético) y la fase móvil B (50/50/0,05 v/v/v Acetonitrilo/Agua /Ácido acético).

Procedimiento de cromatografía

Se analiza usando condiciones cromatográficas adecuadas, por ejemplo, las que se dan en la Tabla 3.

Tabla 3 - Condiciones cromatográficas para el ensayo de EGCG

Criterios de idoneidad del sistema

Todos los criterios de idoneidad del sistema se calculan de acuerdo con la European Pharmacopoeia “Capítulo 2.2.46". Los parámetros específicos del procedimiento pueden modificarse dentro de los límites validados y de la farmacopea, si es necesario, para lograr la idoneidad del sistema.

Los criterios de idoneidad del sistema que se deben cumplir se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4 - Criterios de idoneidad del sistema

Cálculo

El porcentaje de cantidad de EGCG restante en la disolución de muestra diluida en comparación con la cantidad original en esa muestra se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula

Wstd x Pstd x Asam x D

EGCG (% ^{de cantidad original ) = ----- :— :----- —— :------ „ _ — X} 100

Astd x Vstd x 26.67

Donde:

Astd = Área del pico debido a EGCG en la disolución patrón de referencia

Asam = Área del pico debido a EGCG en la disolución de muestra diluida

D = factor de dilución

Wstd = Peso de EGCG tomado para la disolución patrón de referencia (mg)

Pstd = Pureza de la disolución patrón de referencia (% p/p)

Vstd = Volumen de la disolución patrón de referencia (mL)

1.5. Imagen de espectros ATR-IR

La imagen de espectros ATR-IR del complejo sacarosa/EGCG se obtiene mediante espectroscopia FTIR. Los experimentos se realizaron en un sistema Perkin-Elmer Spectrum BX FT-IR basado en accesorios de muestreo de reflectancia difusa con el programa informático FT-IR Spectrum v2.00. Los espectros de las muestras con estrés se registraron a temperatura ambiente en el intervalo de número de onda de 400-4000 cm-1 utilizando la celda ATR. 2. Resultados 2.1 Solubilidad de la disolución de EGCG según la invención

La solubilidad de EGCG en una disolución que contiene 10% en peso de sacarosa se compara con la de EGCG solo en agua. La concentración de EGCG en la disolución de ensayo alcanza casi 80 g/L después de solo 1 hora de disolución, mientras que la solubilidad de EGCG en la disolución de control no puede pasar de 5 g/L después de 4 horas de disolución (Figura 1).

2.2 Estabilidad de la d isolución de EGCG según la invención.

El ensayo de estabilidad, tal como se describe en la sección 1.3, se lleva a cabo para una disolución de EGCG con la formulación que se indica en la Tabla 1 y una disolución a base de EGCG solo. Las dos disoluciones fueron inicialmente no turbias y transparentes. Al final del calentamiento aplicado, el residuo de la disolución basada en EGCG solo es negro, mientras que se ha observado una película vítrea transparente en lugar de la formulación de EGCG reivindicada en el presente documento (Figura 2A). Cuando se somete a análisis por cromatografía, el residuo negro prácticamente no contiene más EGCG, mientras que el perfil cromatográfico del producto resultante del tratamiento térmico de la formulación ensayada es idéntico al de la disolución de partida, es decir, que representa lo mismo que el pico debido al EGCG y al de otro polifenol del té verde inicialmente presente (Figuras 2B y 2C).

Los resultados del ensayo de estabilidad a largo plazo se dan en la tabla 5 a continuación.

Tabla 5: Ensayo de estabilidad a largo plazo

La pérdida de almacenamiento observada a 25°C/60% HR sobre 2-8°C se debe principalmente a la epimerización del EGCG con la aparición de galato de galocatequina (GCG), mientras que la diferencia entre 25°C/60%HR y 40°C/75%HR se debe principalmente a la hidrólisis de la función éster que da como resultado la aparición de epicatequina y ácido gálico.

El ensayo de estabilidad a largo plazo muestra que los niveles de EGCG presentes en la disolución de 400 mg/15 ml permanecieron sin cambios a 2-8 °C y solo se registró una pérdida del 5 % para el almacenamiento a 25°C. Por cierto, se ha demostrado que esta pérdida se atribuyó en gran medida a la epimerización de EGCG. La epimerización de catequinas puede ser reversible. Por cierto, los epímeros trans de catequina no tienen efectos tóxicos sino actividades biológicas similares a las de sus contrapartes cis.

Estos resultados sugieren que las formulaciones desarrolladas pudieron proteger al EGCG de la autooxidación y la hidrólisis.

2.3 Estructura del complejo eutéctico

La imagen de espectros ATR-IR muestra la presencia de una amplia absorción en las regiones IR de estiramiento OH y la ausencia de picos de estiramiento libres de OH (Figura 3), lo que sugiere que con las funciones OH de la sacarosa como aceptores, EGCG formaría complejos con sacarosa mediante enlaces fuertes de hidrógeno OH-O.

El enlace de H puede haber causado que los modos vibratorios vibren a frecuencias y/o intensidades relativas más bajas que antes, siempre que los átomos involucrados en los modos de vibración participen activamente en el enlace de H.

Ejemplo 2: estudio de permeabilidad in vitro

En este estudio, se usó una membrana de celulosa regenerada artificialmente como barrera sustituta de las células Caco-2 para comparar el paso por la membrana del EGCG de una formulación de control y una disolución de la presente invención. Esta membrana artificial tiene la ventaja de que no es necesario implementar etapas de cultivo, lavado o preincubación para llevar a cabo el estudio de comparación.

1. Materiales y métodos

Se usó una disolución de EGCG con la formulación dada en la Tabla 1. La formulación de control eran cápsulas que contenían una cantidad equivalente por dosis unitaria de EGCG

Evaluación de la permeabilidad utilizando un sistema de inserción de membrana artificial

El estudio de permeabilidad de ambas formulaciones de EGCG se realizó utilizando un dispositivo de diálisis listo para usar Float-A-Lyzer® G2 desarrollado por Spectrum Labs (http://fr.spectrumlabs.com/dialysis/FloatALyzer.html?Lang=English&). El dispositivo así llamado cuenta con una membrana de éster biotecnológico de celulosa regenerada (límite de peso molecular, 3,5-5 kDa, diámetro de la membrana, 10 mm y longitud total, 100 mm). Comprende un compartimento donante separado del receptor (aceptor) por la membrana del éster biotecnológico celulósico. La capacidad del compartimiento receptor fue de 600 mL. El área disponible para la difusión fue de unos 7,85 cm2 (Tabla 6).

Tabla 6: parámetros del sistema de diálisis listo para usar utilizado

Disoluciones de llenado de los compartimentos donante y aceptor

La composición de la disolución utilizada para llenar el compartimiento del donante imita la composición del medio duodenal, mientras que el fluido de difusión es una disolución tampón de fosfato 10-4 mol L-1 ajustada a pH 5,5. El medio de duodeno simulado, propuesto por Tenore et al (Food Chemistry 169 (2015) 320-326), se compone de 10-3 mol L-1 disolución tampón de fosfato, pancreatina (0,4 mg mL-1) y sales biliares (2,5 mg mL-1). La mezcla final se ajusta a pH 6,8 usando ácido clorhídrico.

Estudios comparativos de permeabilidad in vitro

El compartimiento del donante se llenó por separado con cada formulación, ya sea 750 pL de la formulación reivindicada o una cápsula que contenía 20 mg de EGCG y lactosa. La célula donante se cubrió con papel de aluminio para evitar la evaporación del vehículo. El fluido, en la cámara receptora, se mantuvo a 37 ± 0,5°C y se agitó continuamente a muy baja velocidad (30 rpm), utilizando un agitador magnético controlado termostáticamente con perla recubierta de teflón. Se tuvo cuidado de asegurarse de que no hubiera burbujas de aire dentro del compartimiento del receptor.

Se extrajo periódicamente una alícuota (1 ml cada vez) en el tiempo preestablecido de la celda receptora mencionada anteriormente, que se diluyó 10 veces con disolución tampón de fosfato 10-4 mol L-1 (pH 5,5) y se filtró a través de un filtro de 0,45 pm. El contenido de EGCG se determinó por HPLC. El fluido de difusión del mismo volumen se precalentó a 37°C. El volumen de las muestras extraídas se reemplazó por fluido de difusión precalentado en la celda de difusión para mantener el volumen constante y poder mantener la condición de hundimiento. El experimento se llevó a cabo hasta 6 h. En cada etapa se calcularon las tasas de penetración del fármaco en diferentes momentos.

Análisis de los datos

Los datos obtenidos del estudio de permeabilidad para cada formulación se utilizaron para calcular el %CEP, Papp (coeficiente de permeabilidad aparente) y ER.

Papp y ER se calcularon siguiendo las fórmulas estándar (Arch Appl Sci Res 2010; 2:31-42; Eur J Pharm Sci 1994; 2:311 -30; Asian J Pharm Clin Res 2010;3:31 -4):

• Coeficiente de permeabilidad (P ^app ):

^Papp = (VA/area xtiempo) x ([EG CG ] aceptor /[E G C G ] donante)

donde, VA = Volumen en el compartimiento del aceptor, Área = Superficie específica de la membrana, Tiempo = Tiempo total de transporte

• ER:

ER = Papp de la formulación de la presente solicitud/Papp de control (cápsula).

Análisis HPLC

Las muestras diluidas se analizaron por HPLC, método de ensayo validado como método indicador de estabilidad descrito anteriormente en el Ejemplo 1. Dicho procedimiento es adecuado para el ensayo de EGCG utilizando un patrón externo. El ensayo de eGcG se logra comparando la respuesta de una disolución de muestra con la respuesta de la disolución patrón de referencia de EGCG preparada a una concentración nominal similar y analizada de la misma manera. Las disoluciones estándar de muestra y de referencia se analizan mediante HPLC de fase inversa de gradiente y detección UV utilizando una columna y condiciones de cromatografía adecuadas.

2. Resultados

El estudio de permeabilidad de las dos formulaciones de EGCG (la disolución de la presente invención frente al control, es decir, EGCG en cápsula) se llevó a cabo utilizando una membrana de éster biotecnológico celulósico como membrana de difusión y medio intestinal simulado como fluido de difusión en diferentes momentos hasta 6 h.

Los resultados de esta investigación se han mencionado en las Tablas 7 y 8. Los valores de % CEP y Papp se determinaron a las 6 h en los casos de todas las muestras. Estos valores fueron últimos/mínimos en el caso de la formulación de control (cápsula), mientras que la disolución de la presente invención mostró valores máximos. Curiosamente, el valor Papp encontrado en este estudio para la formulación de control resulta ser equivalente al encontrado por Zhang et al (International Journal of Pharmaceutics 287 (2004) 1-12) investigando la absorción y disposición intestinal de GTC por el modelo de monocapa Caco-2, de modo que demuestra la transposición entre nuestro modelo de membrana artificial y el modelo celular caco-2.

Los resultados mencionados anteriormente también se han representado en diferentes gráficos tomando el % de CEP en diferentes momentos frente al tiempo (Figura 4).

Tabla 7: % CEP de EGCG del control (cápsula) y la disolución de la presente invención usando membrana de diálisis sintética

Tabla 8: Perfiles de permeabilidad in vitro de las muestras de EGCG a través de membrana de diálisis sintética hasta 6h

Los resultados generales de este estudio muestran que la disolución de la presente invención dio el mejor resultado de permeación para controlar con una ER de = 4.

Estos resultados contribuyen claramente a proporcionar una prueba de concepto de que la disolución de la presente invención puede mejorar la biodisponibilidad de EGCG, allanando el camino para mejorar la eficacia clínica.

Ejemplo 3: Estabilidad de las disoluciones acuosas frente a la radiación de luz

Se colocó una disolución de EGCG con la formulación dada en la Tabla 1 en viales de vidrio Pyrex de 15 ml, sellados herméticamente y expuestos a la luz utilizando una cámara de ensayo de xenón Q-SUN Xe-1 que funciona en modo ventana. El haz de luz, que presentaba un espectro característico que oscilaba entre 300 y 800 nm, se proporcionó con una intensidad de 1,50 W m -2. Se tomaron alícuotas de las muestras después de 1 hora de exposición. No se notó ningún cambio en la coloración de la disolución. Además, el perfil cromatográfico de la disolución ensayada era idéntico al de la disolución de partida, es decir que representa lo mismo que el pico debido al EGCG y al de otro polifenol del té verde inicialmente presente (ECG).

Ejemplo 4: Concentraciones plasmáticas de EGCG en rata

Este ensayo se realizó para comparar las concentraciones plasmáticas y el área total bajo la curva (AUCtotal) obtenido tras la administración oral en ratas de la formulación de EGCG de la presente invención con cápsulas que contienen EGCG.

1. Materiales y métodos

Animales

Se utilizaron 9 ratas macho Sprague-Dawley con un peso de al menos 300 g. Janvier Labs las suministró.

El ensayo in vivo se ubicó en el área de roedores de Eurofins ADME BIOANALYSES. Hay iluminación totalmente artificial en la habitación con un ciclo controlado de 12 horas de luz, 12 horas de oscuridad. Está climatizado por un sistema diseñado para mantener las condiciones normales. Una etiqueta de oreja identificaba a cada animal. Se examinó la salud y el bienestar general de los animales. Los animales tuvieron libre acceso a comida y agua durante el experimento.

El proceso, el tratamiento y la eutanasia se realizaron de acuerdo con los procedimientos actuales en uso en Eurofins ADME BIOANALYSES.

Ensayo analítico

El ensayo analítico se basó en el método descrito por de Lourdes et al (J. Agrie. Food Chem. 2007, 55, 8857-8863). Los iones moleculares e hijos se seleccionaron para cada molécula después de la infusión directa en el sistema MS-MS. El método analítico consistió en una precipitación de las proteínas mediante la adición de un disolvente apropiado seguido de un análisis LC-MS/MS. De acuerdo con la sensibilidad esperada, se utilizaron al menos 8 patrones de calibración para la elaboración de la curva de calibración en plasma. Se calcularon los coeficientes de correlación correspondientes que debían ser superiores a 0,75 para continuar con el ensayo in vivo.

El intervalo de calibración ensayado será de 4 a 5000 ng/mL de EGCG en plasma. La diferencia entre la concentración media observada y la concentración nominal se utilizó para estimar la desviación del método.

Formulación administrada para el ensayo in vivo

Las dos formulaciones de EGCG administradas en la experiencia (una formulación de control y una disolución de la presente invención preparadas por la Farmacia del Hospital Henri Mondor) se enumeran en la Tabla 9 a continuación. Tabla 9: Formulación de EGCG para ensayo in vivo

Las formulaciones se almacenaron a temperatura ambiente. Las formulaciones se mantuvieron bajo agitación magnética durante la administración.

Muestreo de sangre y tiempos de muestreo

En los tiempos prescritos, se recolectó sangre y se trató como se indica a continuación:

Sitio de recolección: seno retroorbitario usando un tubo capilar

Volumen de sangre recolectada: 0,300 ml mínimo por punto de tiempo

Anticoagulante: heparina de litio

Los tiempos de muestreo exactos se registraron en cada muestra de sangre.

Las muestras de sangre se centrifugaron a 2500 rpm a 10°C y el plasma se extrajo y se colocó en tubos de polipropileno etiquetados.

Estas muestras de plasma individuales se almacenaron congeladas (-20°C ± 5°C) hasta su análisis.

Los tiempos de muestreo para las dos formulaciones mencionadas anteriormente se enumeran en la Tabla 10. Tabla 10: Tiempos de muestreo

2. Resultados

Los resultados de concentración y AUCtotai se resumen en la tabla 11 a continuación.

La figura 5 ilustra la evolución de las concentraciones de EGCG en plasma a lo largo del tiempo.

Como muestran estos resultados, la exposición sistémica resultante de la formulación resultante de la invención es, a dosis iguales administradas, mucho mayor que la de la forma de cápsula tradicional que contiene el 100% del polvo de EGCG. En efecto, la relación AUC total por dosis es de 18 a favor de la formulación resultante de la invención. Tabla 11: Resultados de concentración plasmática y AUCtotal

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética estable que comprende:

- 13-107 mg/ml de galato de epigalocatequina,

- Al menos un disacárido,

- 0,1 -1,0 mmol/l de al menos un agente quelante,

- Un agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable o dermocosméticamente aceptable,

2. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según la reivindicación 1, en donde el disacárido se elige de sacarosa y trehalosa.

3. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según la reivindicación 1 ó 2, que comprende además al menos un agente antioxidante adecuado para los sistemas acuosos y compatible con pH ácido, en particular elegido de ácido ascórbico, ácido eritórbico, monotioglicerol, metabisulfito de sodio y bisulfito de sodio, azúcar reductor.

4. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha disolución está exenta de disolvente orgánico.

5. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha disolución comprende además un disolvente orgánico elegido entre etanol, propilenglicol, glicerol, PEG 400.

6. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el agente quelante se elige de ácido cítrico, edetato cálcico disódico, edetato disódico, ácido fumárico, ácido málico, maltol y ácido pentético.

7. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el agente modificador del pH farmacéuticamente aceptable se elige de ácido acético, ácido adípico, carbonato de amonio, hidróxido de amonio, fosfato de amonio, ácido cítrico, dietanolamina, ácido fumárico ácido clorhídrico, ácido málico, ácido nítrico, ácido propiónico, acetato de potasio, bicarbonato de potasio, cloruro de potasio, citrato de potasio, metafosfato de potasio, fosfato de potasio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de sodio, citrato de sodio, glicolato de sodio, hidróxido de sodio, lactato de sodio, fosfato de sodio, propionato de sodio, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, trietanolamina.

8. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende o consiste en:

- 13- 107 mg/ml, particularmente 27-67 mg/ml, más particularmente 27-53 mg/ml, de galato de epigalocatequina - 0,05-3,0 mg/ml, particularmente 0,08-0,25 mg/ml, más particularmente 0,10-0,20 mg/ml de ácido cítrico,

- 25-140 mg/ml, particularmente 50-125 mg/ml, más particularmente 100-125 mg/ml de sacarosa,

- Opcionalmente, 25-250 mg/ml, en particular 100 mg/ml, de glucosa y/o fructosa.

9. La disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según la reivindicación 8, que comprende o consiste en: - 27 mg/ml de galato de epigalocatequina

- 0,1 mg/ml de ácido cítrico

- 100 mg/ml de sacarosa,

- 100 mg/ml de glucosa

10. Una dosis unitaria de galato de epigalocatequina que comprende una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

11. La dosis unitaria según la reivindicación 10, en donde dicha dosis unitaria tiene un volumen en el intervalo de 5 30 ml, particularmente 10-15 ml, más particularmente 15 ml.

12. La dosis unitaria según la reivindicación 10 u 11, en donde el galato de epigalocatequina tiene un peso en el intervalo de 200-1600 mg, particularmente 400-1200 mg, más particularmente 400 mg.

13. Una composición sólida resultante de cualquier proceso de eliminación de agua, especialmente liofilización, de una disolución acuosa farmacéutica o dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o de una dosis unitaria según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.

14. La disolución acuosa farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una dosis unitaria según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, o la composición sólida según la reivindicación 13, para su uso como un medicamento en el tratamiento de cánceres, trastornos cardiovasculares, diabetes, enfermedades neurodegenerativas, o enfermedades dermatológicas.

15. Un producto dermofarmacéutico que comprende la disolución acuosa farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una dosis unitaria según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, o la composición sólida según la reivindicación 13.

16. Un producto dermocosmético que comprende la composición dermocosmética según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o la composición sólida según la reivindicación 13.