ES2907190T3

ES2907190T3 - Detección de la reversión de un anticoagulante mediante pruebas de coagulación por ecarina y factor Xa

Info

Publication number: ES2907190T3
Application number: ES19176609T
Authority: ES
Inventors: Fowzia S Zaman; Marc DOUBLEDAY
Original assignee: Haemonetics Corp
Current assignee: Haemonetics Corp
Priority date: 2014-07-31
Filing date: 2015-07-30
Publication date: 2022-04-22
Anticipated expiration: 2035-07-30
Also published as: US20160032355A1; JP7246559B2; CN105424944B; US10954549B2; HK1223151A1; CN105424944A; EP3611507B1; JP6776221B2; EP3175245A1; JP2023072032A; US20210230663A1; US20200063184A1; JP7496449B2; JP2021012207A; JP2023017978A; WO2016019145A1; US10501773B2; EP3175245B1; JP7250744B2; EP3611507A1

Abstract

Método para detectar la reversión de un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que toma un anticoagulante, comprendiendo el método: (a) someter una muestra de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina de control; (b) someter una muestra del componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de control; (c) someter una muestra de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente; (d) someter una muestra del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del paciente; y (e) comparar la medición de la coagulación por ecarina de control con la medición de la coagulación por ecarina del paciente y comparar la medición de la coagulación por factor Xa de control con la medición por factor Xa del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de control y/o la medición de la coagulación por factor Xa del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de control identifica el componente sanguíneo del paciente como que tiene un agente reversor que ha revertido la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente.

Description

DESCRIPCIÓN

Detección de la reversión de un anticoagulante mediante pruebas de coagulación por ecarina y factor Xa

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

[0001] Esta solicitud reivindica prioridad sobre la solicitud provisional de EE. UU. n.° 62/031,371 presentada el 31 de julio de 2014 y la solicitud provisional de EE. UU. N.° 62/111,376 presentada el 3 de febrero de 2015.

Antecedentes

[0002] La presente invención se refiere al campo de la coagulación y la hemostasia.

[0003] Debido al envejecimiento de la población, el riesgo de enfermedades relacionadas con el sistema cardiovascular se ha convertido en una preocupación creciente. Se han venido usando anticoagulantes para combatir y/o tratar (p. ej., prevenir) síndromes incluyendo fibrilación auricular, embolia pulmonar, trombosis venosa profunda, tromboembolismo venoso, insuficiencia cardíaca congestiva, accidente cerebrovascular, infarto de miocardio e hipercoagulabilidad en pacientes. En el pasado, se usaba a menudo el fármaco anticoagulante denominado warfarina, que reducía los niveles funcionales de todos los factores de coagulación dependientes de la vitamina K. Sin embargo, se han desarrollado anticoagulantes mejorados recientemente que se dirigen específicamente a ciertos factores de la cascada de coagulación.

[0004] Por ejemplo, la incorporación de anticoagulantes orales ha cambiado el tratamiento de pacientes con enfermedades tromboembólicas venosas y arteriales. A diferencia de los antagonistas de la vitamina K orales (AVK) tradicionales, los anticoagulantes orales desarrollados recientemente, que no reducen de forma universal los factores dependientes de la vitamina K, se administran en dosis fijas y tienen un menor potencial de interacción de alimentos y medicamentos, con lo que se elimina el requisito de un seguimiento de laboratorio rutinario (Ansell J. et al., Chest 133: 160S-198S, 2008; Ageno W. et al., Chest 141: e44S-88S, 2012). Estos agentes innovadores muestran una eficacia y unos perfiles de seguridad similares o mejorados en comparación con los fármacos AVK, como la warfarina y los agentes parenterales consolidados, incluyendo heparina no fraccionada y heparina de bajo peso molecular.

[0005] Sin embargo, estos nuevos anticoagulantes orales presentan desafíos de tratamiento tanto para los médicos como para el personal de laboratorio cuando los pacientes desarrollan diátesis hemorrágicas (p. ej., debido a lesiones traumáticas o durante la cirugía). La falta de un método disponible para determinar el grado de anticoagulación plantea un gran desafío para los médicos que tratan pacientes hemorrágicos a los que potencialmente se les está administrando un anticoagulante. En algunos casos, no hay métodos útiles para detectar y monitorizar estos agentes (véase Miyares and Davis, Am. J. Health. Syst. Pharm. 69: 1473-1484, 2012). En Mani et al, J. Thromb. Thrombolysis 36, 187-194, 2013 se tratan varios métodos para medir el efecto anticoagulante de los nuevos anticoagulantes orales con objetivos específicos (incluyendo los inhibidores directos del factor Xa), así como sus limitaciones metodológicas y las restricciones a la hora de transferir sus resultados al contexto clínico.

[0006] Convendría disponer de un método rápido para detectar la presencia de un anticoagulante en una muestra tomada del paciente. También convendría identificar qué tipo de anticoagulante está en la muestra del paciente.

Sumario de los modos de realización

[0007] La invención proporciona un método rápido y preciso para detectar la reversión de un anticoagulante en una muestra tomada del paciente.

[0008] Se puede proporcionar un método para detectar un anticoagulante en al menos una cantidad terapéuticamente relevante (es decir, una cantidad terapéuticamente relevante o mayor) en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante. El método comprende (a) someter una muestra de control de un componente sanguíneo de control, la muestra de control que se sabe que no contiene el anticoagulante, a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación de la muestra de control; y (b) someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente que se sospecha que toma el anticoagulante a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación de la muestra del paciente, donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación de la muestra de control indica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente y donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente menor o igual que la medición de la coagulación de la muestra de control indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente. El anticoagulante puede ser un anticoagulante oral. El anticoagulante oral puede ser un inhibidor directo de la trombina o puede ser un inhibidor del factor Xa.

[0009] El método además puede comprender la clasificación del anticoagulante identificado como que está presente en el paciente al (a) someter una muestra de control del componente sanguíneo de control a una prueba de coagulación en la presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación de la ecarina de control; y (b) someter una muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente mayor que la medición de la coagulación por ecarina de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) en el paciente y donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de control identifica el anticoagulante como un anticoagulante antifactor Xa en el paciente.

[0010] Se puede proporcionar un método para detectar y/o clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante que comprende someter una primera muestra de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del paciente, someter una segunda muestra del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente; y comparar la medición de la coagulación por factor Xa del paciente con una medición de la coagulación por factor Xa de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante y comparar la medición de la coagulación por ecarina del paciente con una medición de la coagulación por ecarina de control del componente sanguíneo de control; donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente mayor que la medición de la coagulación por ecarina de control identifica la presencia del anticoagulante en o por encima de una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente e identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT), y donde la medición de la coagulación por factor Xa del paciente mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de control identifica la presencia del anticoagulante en o por encima de una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente e identifica el anticoagulante como un anticoagulante antifactor Xa, y donde la medición de la coagulación por factor Xa del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de control identifica la ausencia de un anticoagulante en o por encima de una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0011] Se puede proporcionar un método para detectar y/o clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor que una cantidad terapéuticamente relevante en un componente sanguíneo de un paciente, que comprende: detectar la presencia de un anticoagulante en un componente sanguíneo al (i) someter una primera porción de un componente sanguíneo de control, que se sabe que no contiene el anticoagulante, a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de control; y (ii) someter una primera porción del componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del paciente, donde la medición de la coagulación por factor Xa del paciente que es mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de control indica la presencia del anticoagulante en un nivel terapéutico en el componente sanguíneo del paciente y donde la medición de la coagulación por factor Xa del paciente que es menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de control indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo del paciente y que clasifica el anticoagulante, si está presente, en el componente sanguíneo del paciente, al (i) someter una segunda porción del componente sanguíneo de control a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina de control; y (ii) someter una segunda porción del componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente que es mayor que la medición de la coagulación por ecarina de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente que es menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de control identifica el anticoagulante como un anticoagulante antifactor Xa.

[0012] Se puede seleccionar la prueba de coagulación del grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina (TP), una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa) y la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

[0013] La medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0014] La prueba de coagulación puede consistir en una prueba de coagulación por análisis viscoelástico. El análisis viscoelástico se puede realizar usando un recipiente que contenga la muestra en un interior del recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el recipiente se desplaza respecto al pin. El recipiente puede carecer de una superficie inferior.

[0015] El paciente puede ser un ser humano. El paciente puede estar experimentando un estado incluyendo cirugía, traumatismo, hemorragia, accidente cerebrovascular o un episodio tromboembólico.

[0016] Se puede proporcionar un método para detectar y/o clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante (o mayor) en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante. El método incluye (a) detectar la presencia de un anticoagulante en un componente sanguíneo del paciente, que comprende los pasos de: (i) someter una muestra de control de un componente sanguíneo de control, el componente sanguíneo de control que se sabe que no contiene el anticoagulante, a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control; y (ii) someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente, donde la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control indica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente y donde la medición de la coagulación por factor Xa de la segunda muestra menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente; y (b) clasificar el anticoagulante en el paciente, que comprende los pasos de: (i) someter una segunda muestra de control del componente sanguíneo de control a la prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control; y (ii) someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente que es menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control identifica el anticoagulante como un reactivo antifactor Xa.

[0017] Se puede seleccionar la prueba de coagulación del grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina (TP), una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa) y la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

[0018] La medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante. Por ejemplo, la medición de la coagulación por factor Xa de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación por factor Xa de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante. La medición de la coagulación por ecarina de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación de la ecarina de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0019] La medición de la coagulación puede consistir en una prueba de coagulación por análisis viscoelástico. El análisis viscoelástico se puede realizar usando un recipiente que contenga la muestra en un interior del recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el recipiente se desplaza respecto al pin. El recipiente puede carecer de una superficie inferior.

[0020] El paciente puede ser un ser humano. El paciente puede estar experimentando un estado incluyendo cirugía, traumatismo, hemorragia, accidente cerebrovascular o un episodio tromboembólico.

[0021] El anticoagulante puede ser un anticoagulante oral (p. ej., un anticoagulante antifactor Xa o un anticoagulante IDT).

[0022] La medición de la coagulación por factor Xa del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en el paciente. La medición de la coagulación por factor Xa del paciente que es al menos 1.5 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en el paciente.

[0023] La medición de la coagulación por ecarina del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en el paciente. La medición de la coagulación por ecarina del paciente que es al menos 1.5 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en el paciente.

[0024] Al paciente identificado como que comprende la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor. El agente reversor puede consistir en concentrados de complejo protrombínico. Al paciente identificado como que comprende la presencia del anticoagulante IDT en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor que revierta el anticoagulante IDT (p. ej., idarucizumab). Al paciente identificado como que comprende la presencia del anticoagulante antifactor Xa en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor que revierta el anticoagulante antifactor Xa (p. ej., andexanet).

[0025] De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un método para detectar la reversión de un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que toma un anticoagulante, como se define en la reivindicación 1. El método incluye (a) someter una muestra del componente sanguíneo de control que se sabe que carece de (es decir, en ausencia de) un anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina de control; (b) someter una muestra del componente sanguíneo de control que se sabe que carece de (es decir, en ausencia de) un anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de control; (c) someter un componente sanguíneo de un paciente que se sabe que contiene un agente reversor o antídoto (p. ej., idarucizumab o andexanet) en presencia o ausencia de un anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación por ecarina del paciente y (d) someter un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del paciente, y comparar la medición de la coagulación por ecarina de control con la medición de la coagulación por ecarina del paciente y comparar la medición de la coagulación por factor Xa de control con la medición de la coagulación por factor Xa del paciente. Cuando la medición de la coagulación por ecarina del paciente y/o la medición de la coagulación por factor Xa del paciente es menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de control y/o la medición de la coagulación por factor Xa de control, se identifica al paciente como que comprende un agente reversor que ha revertido la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente. En algunos modos de realización, la reversión es una reversión completa de la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente. En algunos modos de realización, la reversión es una reversión parcial de la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente. En algunos modos de realización, el agente reversor es un concentrado de complejo protrombínico (CCP) o un principio activo (como un anticuerpo monoclonal o péptido) específico para revertir un inhibidor directo de la trombina (p. ej., idarucizumab) o para revertir un inhibidor del factor Xa (p. ej., andexanet) o un agente que revierte tanto los inhibidores directos de la trombina e inhibidores del factor Xa.

[0026] En algunos modos de realización, el anticoagulante es un anticoagulante oral. El anticoagulante oral puede ser un inhibidor directo de la trombina o puede ser un inhibidor del factor Xa.

[0027] En algunos modos de realización, se selecciona la prueba de coagulación del grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina (TP), una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa) y la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

[0028] En algunos modos de realización, la medición de la coagulación de la muestra de control consiste en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0029] En algunos modos de realización, la prueba de coagulación consiste en una prueba de coagulación por análisis viscoelástico. En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico se realiza usando un recipiente que contiene la muestra en un interior del recipiente. En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico se realiza usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente. En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico se realiza usando el recipiente y un pin, donde el recipiente se desplaza respecto al pin. En algunos modos de realización, el recipiente carece de una superficie inferior.

[0030] En varios modos de realización, el paciente es un ser humano. En algunos modos de realización, el paciente está experimentando un estado incluyendo cirugía, traumatismo, hemorragia, accidente cerebrovascular o un episodio tromboembólico.

[0031] En algunos modos de realización, la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control consiste en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación por factor Xa de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante. En algunos modos de realización, la medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo de control consiste en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación de la ecarina de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0032] Se puede proporcionar un método para detectar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante, comprendiendo el método someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación de la muestra del paciente, donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente mayor que una medición de la coagulación de una muestra de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0033] La medición de la coagulación de la muestra del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación de la muestra de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente. La medición de la coagulación de la muestra del paciente que es al menos 1.5 veces mayor que la medición de la coagulación de la muestra de control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0034] Se puede seleccionar la prueba de coagulación del grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina (TP), una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa) y la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

[0035] La medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0036] La prueba de coagulación puede consistir en una prueba de coagulación por análisis viscoelástico. El análisis viscoelástico se puede realizar usando un recipiente que contenga la muestra en un interior del recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el recipiente se desplaza respecto al pin. El recipiente puede carecer de una superficie inferior.

[0037] El paciente puede ser un ser humano. El paciente puede estar experimentando un estado incluyendo cirugía, traumatismo, hemorragia o un episodio tromboembólico.

[0038] La medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0039] El anticoagulante puede ser un anticoagulante oral. El anticoagulante oral puede ser un inhibidor directo de la trombina o puede ser un inhibidor del factor Xa.

[0040] Se puede proporcionar un método para clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante. El método incluye (a) someter una primera muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del componente sanguíneo del paciente, donde la medición de la coagulación por factor Xa del componente sanguíneo del paciente mayor que una medición de la coagulación por factor Xa de una muestra de sangre de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente; y (b) someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo del paciente; donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente mayor que una medición de la coagulación por ecarina de una prueba de control del componente sanguíneo de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control identifica el anticoagulante como un reactivo antifactor Xa.

[0041] Se puede proporcionar un método para detectar y clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente. El método incluye someter una muestra de control de un componente sanguíneo de control (que se sabe que no contiene el anticoagulante), a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la ecarina de control; y someter una muestra de un componente sanguíneo del paciente que se sospecha que toma el anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente, donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación de la muestra de control indica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en el paciente y lo clasifica como un IDT.

[0042] Se puede proporcionar un método para detectar y clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante. El método incluye (a) someter una primera muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo del paciente mayor que una medición de la coagulación por ecarina de una muestra de sangre de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente e identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT); y (b) someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación por factor Xa de la segunda muestra del paciente; donde la medición de la coagulación por factor Xa de la segunda muestra del paciente mayor que una medición de la coagulación por factor Xa de una muestra de control del componente sanguíneo de control identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente e identifica el anticoagulante como un antifactor Xa y donde la medición de la coagulación por factor Xa de la segunda muestra del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control identifica la muestra como que no tiene anticoagulante.

[0043] La medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente. La medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente que es al menos 1.5 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0044] La medición de la coagulación por ecarina de la muestra del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control puede identificar el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT). La medición de la coagulación por ecarina de la muestra del paciente que es al menos 1.5 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT).

[0045] El anticoagulante puede ser un anticoagulante oral. El anticoagulante oral puede ser un inhibidor directo de la trombina o puede ser un inhibidor del factor Xa.

[0046] Se puede seleccionar la prueba de coagulación del grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina (TP), una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa) y la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

[0047] La medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0048] La prueba coagulación puede consistir en una prueba de coagulación por análisis viscoelástico. El análisis viscoelástico se puede realizar usando un recipiente que contenga la muestra en un interior del recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente. El análisis viscoelástico se puede realizar usando el recipiente y un pin, donde el recipiente se desplaza respecto al pin. El recipiente puede carecer de una superficie inferior.

[0049] El paciente puede ser un ser humano. El paciente puede estar experimentando un estado incluyendo cirugía, traumatismo, hemorragia, accidente cerebrovascular o un episodio tromboembólico.

[0050] La medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación por factor Xa de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante. La medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo de control puede consistir en un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación de la ecarina de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

[0051] Al paciente identificado como que comprende la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor. El reversor puede consistir en concentrados de complejo protrombínico. Al paciente identificado como que comprende la presencia de un anticoagulante IDT en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor que revierta el anticoagulante IDT. El agente reversor que revierte el anticoagulante IDT puede ser idarucizumab. Al paciente identificado como que comprende la presencia del anticoagulante antifactor Xa en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor se le puede administrar una cantidad terapéuticamente relevante de un agente reversor que revierta el anticoagulante antifactor Xa. El agente reversor que revierte el anticoagulante antifactor Xa puede ser andexanet.

Breve descripción de los dibujos

[0052] Las características anteriores de la divulgación se entenderán más fácilmente mediante la referencia a la siguiente descripción detallada, con referencia a los dibujos que acompañan, en que:

La figura 1 es un diagrama esquemático que muestra la cascada de coagulación que conduce finalmente a la formación de un coágulo de fibrina hecho de fibrina entrecruzada. Tanto un reactivo antifactor Xa (o fármaco) como un inhibidor directo de la trombina afectarán tanto a la vía extrínseca como la intrínseca.

Las figuras 2A-2C son una serie de diagramas de flujo que muestran diferentes tipos de pruebas de coagulación que son útiles en modos de realización de la invención. La fig. 2A representa la prueba de coagulación del tiempo de protrombina (TP); la fig. 2B muestra la prueba de coagulación del tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa); la fig. 2C muestra la prueba de tiempo de coagulación activado (TCA).

La figura 3A es un diagrama esquemático que muestra un trazado de TEG medido a lo largo de la vida útil del coágulo de una muestra del componente sanguíneo tomada de un ser humano normal. R (tiempo de reacción) y TCA (tiempo de coagulación activado) es el tiempo de formación de los polímeros de cadena de fibrina, K (tiempo de coagulación) es una medición del tiempo hasta que se alcance una cierta fuerza del coágulo, a (ángulo alfa) es la pendiente de una línea dibujada desde la tangente R hasta la curva, y AM (amplitud máxima, medida en mm) es la fuerza del coágulo. La LY30 es una medición en porcentaje de la lisis que se mide hasta 30 minutos después de que se defina la AM.

La figura 3B es un diagrama esquemático que representa una curva de generación de trombo (curva V en verde) que recubre un trazado de TEG. La curva V se muestra en el gráfico desde una primera derivada de los cambios en la resistencia del coágulo expresada como un cambio en la fuerza del coágulo por unidad de tiempo (dinas/cm2/s), que representa la velocidad máxima de formación del coágulo. TMGT significa tasa máxima de generación de trombo; y TTMGT significa tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo.

La figura 4 es un diagrama esquemático que muestra un trazado de TEMograma. TC indica el tiempo de coagulación, TFC indica el tiempo de formación del coágulo, alfa es el ángulo alfa, el ángulo lambda es la tasa de lisis, FMC es la firmeza máxima del coágulo, y LM es la lisis máxima.

La figura 5 es un diagrama esquemático de la cascada de coagulación que muestra las etapas en las que varios reactivos de ecarina (que incluye ecarina y enzimas similares) interfieren con la cascada.

La figura 6 es un diagrama esquemático de un árbol de decisión que muestra los pasos implicados en un método no limitativo de la divulgación. Un componente sanguíneo tomado de un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante se somete primero a un paso de detección (para ver si hay un anticoagulante en el componente sanguíneo de la prueba) y luego se somete a un paso de clasificación para determinar si el anticoagulante es un anticoagulante iDt o un antifactor Xa.

La tabla 1 muestra la sensibilidad de los parámetros de coagulación de la prueba de TEG Kaolin en muestras de donantes sanos enriquecidas con diferentes dosis de apixabán, rivaroxabán y dabigatrán en presencia o ausencia de ecarina. En la tabla 1, R, tiempo de reacción; TMGT, tasa máxima de generación de trombo; TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* -el control. § - muestra pareada con o sin ecarina. EE - error estándar de la media de tres experimentos independientes medidos por triplicado. 1 símbolo p<0.05; 2 símbolos p<0.01; 3 símbolos p<0.001.

La tabla 2 muestra la sensibilidad de los parámetros de coagulación de la prueba Rapid TEG en muestras de donantes sanos enriquecidas con diferentes dosis de apixabán, rivaroxabán y dabigatrán en presencia o ausencia de ecarina. En la tabla 2, R, tiempo de reacción; TMGT, tasa máxima de generación de trombo; TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* -el control. § - muestra pareada con o sin ecarina. EE - error estándar de la media de tres experimentos independientes medidos por triplicado. 1 símbolo p<0.05; 2 símbolos p<0.01; 3 símbolos p<0.001.

Las figuras 7A-7F son gráficos de línea. Las figs. 7A-7C muestran los resultados de sensibilidad del tiempo R de la prueba de TEG caolín en función de las diferentes concentraciones de fármaco. La fig. 7A muestra rivaroxabán; la fig. 7B muestra apixabán; y la fig. 7C muestra dabigatrán. Las figuras 7D-7F muestran los resultados de la sensibilidad de tiempo TCA de la prueba Rapid TEG en función de las diferentes concentraciones de fármaco. La fig. 7D muestra rivaroxabán; la fig. 7E muestra apixabán; y la fig. 7F muestra dabigatrán. Los tiempos R para todas las dosis de dabigatrán, así como la concentración mayor de apixabán y rivaroxabán probada, fueron significativamente mayores que en la muestra de sangre no enriquecida. Los tiempos TCA para todas las concentraciones de dabigatrán, así como la concentración mayor e intermedia de apixabán y rivaroxabán, probaron ser significativamente mayores que en la muestra de sangre no enriquecida para el TCA. Las barras de puntos paralelas muestran los intervalos normales de R y TCA. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* - control. En las figs. 7A-7F, 1 símbolo p<0.05; 2 símbolos p<0.01; 3 símbolos p<0.001. Las barras de error representan el error estándar de tres experimentos independientes medidos por triplicado.

Las figuras 8A-8C son gráficos de línea que muestran los resultados del tiempo R de la prueba de TEG de caolín en función de las concentraciones de fármaco en presencia o ausencia de ecarina para rivaroxabán (fig. 8A), apixabán (fig. 8B) y dabigatrán (fig. 8C). Tanto el rivaroxabán como el apixabán muestran una reducción equivalente y significativa del tiempo R debido a la presencia de ecarina a pesar de la concentración de fármaco. El dabigatrán tiene una concentración dependiente de la disminución en tiempo R. Las barras de puntos paralelas muestran los intervalos normales de R para donantes normales. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* - control. § -Estadísticamente significativos entre muestras pareadas con o sin ecarina, p<0.001. Las barras de error representan el error estándar de tres experimentos independientes medidos por triplicado.

Las figuras 9A-9C son trazados TEG y gráficos de línea que muestran mediciones de la coagulación de sangre enriquecida con 50 ng/ml, 200 ng/ml, o 500 ng/ml de dabigatrán en una prueba de caolín estándar. La fig. 9A muestra el aumento en el tiempo R según aumenta la posología de dabigatrán. La fig. 9B (que es una vista ampliada de la fig. 7C) muestra el aumento en el tiempo R de la sangre enriquecida con dabigatrán en comparación con el tiempo R de caolín de sangre (no enriquecida) de control. La fig. 9C (que es una vista ampliada de la fig. 8C) muestra que, cuando se somete la sangre enriquecida con dabigatrán a una prueba de coagulación en presencia de ecarina y caolín, da lugar a una disminución en el tiempo R.

La figura 10 es un diagrama esquemático que muestra trazados TEG estándar que muestran el intervalo de generación de trombo en sangre enriquecida con 50 ng/ml de dabigatrán (rosa, línea más a la izquierda), 200 ng/ml de dabigatrán (verde, línea central) o 500 ng/ml de dabigatrán (blanco, línea más a la derecha) mediante caolín.

Las figuras 11A-11C son gráficos de línea que muestran mediciones de la coagulación de sangre enriquecida con 22 ng/ml, 89 ng/m o 500 ng/ml de rivaroxabán (un anticoagulante inhibidor del factor Xa) en una prueba de caolín estándar. La fig. 11A muestra un aumento en el tiempo R en la posología más alta de rivaroxabán. La fig.

11B muestra el aumento en el tiempo R de la sangre enriquecida con rivaroxabán en comparación con el tiempo R de caolín de sangre (no enriquecida) de control. La fig. 11C muestra que, cuando se somete la sangre enriquecida con rivaroxabán a la prueba de coagulación en presencia de ecarina, da lugar a una disminución drástica del tiempo R, de manera que incluso en la posología más alta, el tiempo R de la sangre enriquecida con rivaroxabán fue más breve que el límite inferior del intervalo normal de caolín para el tiempo R (de la sangre no enriquecida de control).

La figura 12 es un gráfico de línea que muestra los tiempos R en presencia del reactivo FXa de la sangre enriquecida con apixabán ("AP"; rombos), sangre enriquecida con rivaroxabán ("RV"; cuadrados) y sangre enriquecida con dabigatrán ("DB"; triángulos). La línea de puntos horizontal representa el intervalo R para la sangre de control (es decir, tomada de un donante que se sabe que no toma un anticoagulante y no enriquecida con ningún anticoagulante).

La figura 13 es un gráfico de barras que muestra los tiempos R en presencia de ecarina de la sangre de los donantes indicados enriquecida con 0 ng/ml de dabigatrán, 50 ng/ml de dabigatrán, 150 ng/ml de dabigatrán o 300 ng/ml de dabigatrán. La línea de puntos horizontal representa el intervalo R para sangre de control (sangre sin anticoagulante).

La figura 14 es un gráfico de línea que muestra los tiempos R de sangre que contiene rivaroxabán o apixabán de cuatro donantes en presencia de ecarina. La línea de puntos horizontal representa el intervalo R para sangre de control (sin ningún anticoagulante).

Las figuras 15A-15C son una serie de gráficos de barras que representan los pasos de detección y clasificación de la sangre obtenida de un paciente antes y después de que se le haya administrado un anticoagulante al paciente. La fig. 15A muestra que para las muestras «anteriores», la detección y clasificación de los tiempos R estaban dentro del intervalo R normal de la sangre de control. La fig. 15B muestra que en la muestra «posterior, en el paso de detección (es decir, en presencia del reactivo FXa), el tiempo R se prolongó de manera que ya no estaba en el intervalo R normal de la sangre de control. La fig. 15C muestra que en el paso de clasificación (es decir, en presencia del reactivo de ecarina), el tiempo R estaba dentro del intervalo normal. Estos resultados identificaron que había un anticoagulante en la muestra «posterior» y que el anticoagulante era un anticoagulante antifactor Xa.

La figura 16 es un gráfico de barras que demuestra la prolongación del tiempo R en presencia de un inhibidor directo de la trombina (IDT, barras rojas) seguido de una reducción del tiempo R a la línea de base cuando se administró un agente reversor (barras verdes) en muestras de plasma de cerdo. La línea de base se muestra como una barra azul.

Descripción detallada de modos de realización específicos

[0053] Se pueden proporcionar métodos y reactivos (p. ej., vasos dosificadores) para detectar la presencia de un anticoagulante en un componente sanguíneo (p. ej., de un paciente). Se pueden proporcionar métodos y reactivos para identificar qué tipo de anticoagulante está presente en el componente sanguíneo. La invención proporciona métodos y reactivos para demostrar la reversión del efecto anticoagulante con un agente reversor o antídoto.

[0054] Se refieren publicaciones (incluyendo publicaciones de patente), sitios web, nombres comerciales y literatura científica para establecer en la presente memoria el conocimiento disponible para los expertos en la materia. Cualquier conflicto entre cualquier referencia citada en la presente memoria y los modos didácticos específicos de está especificación serán resueltos en favor de la última.

[0055] Se puede proporcionar un método para detectar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante, comprendiendo el método (a) someter una muestra de control de un componente sanguíneo de control, la muestra de control que se sabe que no contiene el anticoagulante, a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación de la muestra de control;

(b) someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente que se sospecha que toma el anticoagulante a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación de la muestra del paciente y,

(c) comparar la medición de la coagulación de la muestra del paciente con la medición de la coagulación de la muestra de control donde la medición de la coagulación del paciente mayor que la medición de la coagulación de la muestra de control indica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente y donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente menor o igual que la medición de la coagulación de la muestra de control indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0056] Se puede proporcionar un método para detectar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante (o mayor que una cantidad terapéuticamente relevante) en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante, comprendiendo el método someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación de la muestra del paciente, donde la medición de la coagulación de la muestra del paciente mayor que una medición de la coagulación de una muestra de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0057] El grado de prolongación de la medición de la coagulación depende de la concentración del anticoagulante oral en el componente sanguíneo. Cuanto mayor sea la concentración, mayor será la medición de la coagulación en comparación con los componentes sanguíneos que se sabe que carecen de cualquier anticoagulante oral. En algunos modos de realización, la medición de la coagulación del componente sanguíneo de la prueba que es al menos 1.25 veces mayor que una medición de la coagulación de un componente sanguíneo que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo. En algunos modos de realización, la medición de la coagulación del componente sanguíneo de la prueba que es al menos 1.5 veces mayor que una medición de la coagulación de un componente sanguíneo que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo. En algunos modos de realización, la medición de la coagulación del componente sanguíneo de la prueba que es al menos 1.75 veces mayor que una medición de la coagulación de un componente sanguíneo que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo. En algunos modos de realización, la medición de la coagulación del componente sanguíneo de la prueba que es al menos dos veces mayor que una medición de la coagulación de un componente sanguíneo que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo.

[0058] En algunos modos de realización, la medición de la coagulación de la muestra de control puede consistir en un promedio, una mediana o un intervalo de al menos dos mediciones de coagulación de al menos dos muestras de control de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante. Por ejemplo, un intervalo (al que se puede hacer referencia como intervalo de referencia) se puede crear a partir de muestras de control de múltiples componentes sanguíneos de control (p. ej., de múltiples donantes que se sabe que carecen del anticoagulante). Si se usa un promedio o una mediana, se promedian las mediciones de la coagulación de múltiples muestras de control, y se usa el número promedio en la medición de la coagulación de la muestra de control.

[0059] En algunos modos de realización, la invención utiliza una prueba de coagulación para evaluar el funcionamiento de la cascada de coagulación en el componente sanguíneo del paciente.

[0060] La cascada de coagulación es un proceso estrictamente regulado mediante el que la sangre cambia de estado líquido a un coágulo sólido. Este proceso se denomina coagulación. La figura 1 proporciona un diagrama esquemático de la cascada de coagulación. La coagulación se puede desencadenar por la vía del factor tisular extrínseca (p. ej., por lesión o daño a un vaso sanguíneo) o por la vía de activación por contacto intrínseca. Las dos vías se unen en la activación del factor Xa que entonces activa la protrombina en la trombina.

[0061] Por «componente sanguíneo» se entiende uno o más componentes de la sangre extraída, por ejemplo, de un paciente, donde el componente sanguíneo contiene una cantidad suficiente de plasma para formar un coágulo mediado por fibrina. El componente sanguíneo puede contener al menos aprox. 8 % de plasma en relación con el volumen (es decir, plasma al 8 % v/v). El componente sanguíneo puede contener al menos plasma al 10 % v/v aprox., al menos plasma al 12 % v/v aprox., o al menos plasma al 15 % v/v aprox., o al menos plasma al 20 % v/v aprox. El paciente puede ser un ser humano, pero también puede ser cualquier otro animal (p. ej., un animal de compañía o un animal exótico). La sangre es el tejido circulante de un organismo que lleva oxígeno y sustancias nutritivas a los tejidos y elimina el dióxido de carbono y varios productos metabólicos para excreción. La sangre incluye un fluido de color amarillo pálido o amarillo grisáceo, plasma, en el que están suspendidos los glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas. La sangre (a veces denominada sangre entera) se puede fraccionar en varios componentes o fracciones tras la centrifugación en gradiente de densidad. Por consiguiente, un componente sanguíneo incluye, entre otros, sangre entera (que se puede denominar simplemente sangre), glóbulos blancos incluyendo al menos aprox. 10 % de plasma en volumen, glóbulos rojos incluyendo al menos aprox. 10 % de plasma en volumen, plaquetas incluyendo al menos aprox. 10 % de plasma en volumen, plasma y varias fracciones de sangre incluyendo al menos aprox. 10 % de plasma en volumen, incluyendo la fracción de plaquetas, la fracción de glóbulos rojos (p. ej., compuesta por una mayoría de glóbulos rojos y una minoría de algunos glóbulos blancos y plasma) y la fracción de placa leucocitaria (p. ej., compuesta por una mayoría de glóbulos blancos y plaquetas y una minoría de algunos glóbulos rojos y plasma). Un componente sanguíneo también incluye cualquiera de los componentes enumerados anteriormente que también incluye una sustancia (p. ej., ácido cítrico o citrato, o heparina) añadida después de que se obtenga el componente sanguíneo del paciente que previene o reduce la coagulación del componente sanguíneo.

[0062] Por «anticoagulante» se entiende una sustancia (es decir, un reactivo o un fármaco) que previene o reduce la coagulación que está presente en un componente sanguíneo del paciente si el paciente ha tomado esa sustancia o se le ha administrado a este antes de obtener el componente sanguíneo del paciente. Esta administración puede ser por cualquier vía incluyendo la oral, parenteral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, etc. Nótese que una sustancia (p. ej., heparina o citrato) que se añade a un componente sanguíneo después de que se obtenga el componente sanguíneo del paciente no es un anticoagulante según esta definición.

[0063] El anticoagulante se puede administrar al paciente por vía oral. Se puede hacer referencia al anticoagulante administrado por vía oral como un anticoagulante oral.

[0064] Por «agente reversor» se entiende una sustancia (p. ej., un reactivo, un anticuerpo, una proteína o un fármaco) que revierte el efecto de la anticoagulación (p. ej., el agente reversor revierte la hemorragia consecuencia del anticoagulante) que está presente en un componente sanguíneo del paciente si el paciente ha tomado esa sustancia o se le ha administrado a este antes de obtener el componente sanguíneo del paciente. Esta administración puede ser por cualquier vía incluyendo la oral, parenteral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, etc.

[0065] El agente reversor se puede administrar al paciente por vía oral.

[0066] Por «paciente que se sospecha que toma un anticoagulante» se entiende que se sospecha que el paciente (p. ej., un paciente humano) ha tomado un anticoagulante (p. ej., mediante administración oral) antes de que se haya obtenido el componente sanguíneo del paciente. Por ejemplo, se puede llevar a un paciente inconsciente a urgencias. Durante la cirugía, se puede llevar a cabo uno de los métodos descritos en la presente memoria sobre una muestra del componente sanguíneo del paciente para determinar si este/esta ha tomado un anticoagulante mediante la detección de la presencia o ausencia del anticoagulante en la muestra del componente sanguíneo. Esta información es útil para atender las necesidades del paciente y para revertir el efecto anticoagulante según proceda. Se puede hacer referencia a un componente sanguíneo de un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante como un «componente sanguíneo que se sospecha que tiene un anticoagulante». Se puede hacer referencia a una muestra de un componente sanguíneo de un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante como una «muestra que se sospecha que tiene un anticoagulante».

[0067] En algunos modos de realización, el paciente del que se obtiene el componente sanguíneo es un paciente que se sospecha que tiene diátesis hemorrágica. En algunos modos de realización, la diátesis hemorrágica se puede deber a cualquier causa incluyendo una condición de hemofilia congénita, una deficiencia de vitamina K. En algunos casos, la diátesis hemorrágica se puede deber a la ingesta de un anticoagulante por parte del paciente de manera que se desconoce si el paciente tiene diátesis hemorrágica y, si el paciente tiene diátesis hemorrágica, se desconoce por qué el paciente tiene diátesis hemorrágica. Se pueden determinar la identificación y clasificación de un anticoagulante (si el paciente ha tomado el anticoagulante) y la reversión (si se ha administrado el agente reversor al paciente) mediante los métodos descritos en la presente memoria. En algunos modos de realización, el paciente padece (o padecerá pronto) una afección que puede implicar hemorragia. Por ejemplo, el paciente se puede estar sometiendo a cirugía, se puede estar preparando para la cirugía, puede estar lesionado o herido, puede tener una hemorragia, o puede haber sufrido o puede estar sufriendo en este momento o se sospecha que sufrirá un episodio tromboembólico inminentemente incluyendo, entre otros, un accidente cerebrovascular, episodio tromboembólico venoso (ETV), un ataque al corazón, una insuficiencia cardíaca, un episodio tromboembólico arterial y una embolia pulmonar. El paciente puede ser un paciente de trauma y/o tener hemorragia interna.

[0068] Los anticoagulantes orales desarrollados recientemente que no inhiben de forma universal todos los factores de coagulación dependientes de la vitamina K se pueden clasificar generalmente en dos categorías, dependiendo del factor de coagulación concreto al que se dirige el anticoagulante.

[0069] En algunos modos de realización, el anticoagulante oral es un inhibidor directo de la trombina, y se puede hacer referencia a este como un IDT. La trombina (factor de coagulación IIa) tiene un papel fundamental en el proceso de coagulación de la sangre (véase la fig. 1). La trombina desempeña múltiples funciones incluyendo (a) convertir el fibrinógeno soluble a fibrina; (b) activar los factores VI, VIII, XI y XIII, y (c) estimular plaquetas. Al activar los factores XI y XIII, la trombina genera más trombina y favorece la formación de moléculas de fibrina entrecruzadas, fortaleciendo así el coágulo de sangre.

[0070] Un IDT es un anticoagulante que une la trombina y bloquea la interacción de la trombina con sus sustratos. Los IDT pueden ser bivalentes (bloquear la trombina en el sitio activo y uno de los exositios) o univalentes (bloquear la trombina en el sitio activo). Los IDT bivalentes incluyen, entre otros, hirudina y bivalirudina. Los IDT univalentes incluyen, entre otros, argatrobán, melagatrán, ximelagatrán y dabigatrán. Boehringer Ingelheim International GmbH, Ingelheim, Alemania, comercializa el dabigatrán con la denominación de Pradaxa. El dabigatrán es un inhibidor oral directo de la trombina (factor IIa) que es «no permanente», selectivo y competitivo. El dabigatrán está autorizado en Europa y en EE. UU. para reducir el riesgo de tromboembolismo venoso (ETV) en pacientes de cirugía ortopédica, así como accidente cerebrovascular y embolia sistémica en pacientes con fibrilación auricular no valvular.

[0071] En algunos modos de realización, el anticoagulante oral es un inhibidor del factor Xa y se puede hacer referencia a este como un reactivo antifactor Xa, un inhibidor del factor Xa o un xabán. Un xabán actúa directamente sobre el factor Xa en la cascada de coagulación sanguínea (véase la fig. 1 A). Dos inhibidores del factor Xa disponibles comercialmente no limitativos son rivaroxabán (comercializado por Bayer Pharma AG, Leverkusen, Alemania y Janssen Pharmaceuticals, Inc., Titusville, Nueva Jersey con la denominación de Xarelto) y apixabán (comercializado por Bristol-Myers Squibb, Nueva York, Nueva York y Pfizer EEIG Sandwich, Reino Unido con la denominación de Eliquis). El rivaroxabán y apixabán están autorizados en Europa y en EE. UU. para reducir el riesgo de tromboembolismo venoso (ETV) en pacientes de cirugía ortopédica, así como accidente cerebrovascular y embolia sistémica en pacientes con fibrilación auricular no valvular. El rivaroxabán también está aprobado en la UE para la prevención secundaria en síndrome coronario agudo. Se puede administrar rivaroxabán en combinación con ácido acetilsalicílico (AAS) o con AAS más clopidogrel o ticlopidina para la prevención de episodios tromboembólicos en pacientes adultos con biomarcadores cardíacos elevados después de un episodio coronario de acuerdo con la información sobre el producto proporcionada por Bayer Pharma.

[0072] Otros inhibidores adicionales del factor Xa no limitativos incluyen betrixabán (LY517717; Portola Pharmaceuticals), darexabán (YM150; Astellas), edoxabán (Lixiana; DU-176b; Daiichi), TAK-442 (Takeda) y eribaxabán (PD0348292; Pfizer).

[0073] En varios modos de realización, los métodos descritos en la presente memoria implican el uso de un reactivo factor Xa. Por «reactivo factor Xa» se entiende factor Xa (fXa) y/o cualquier combinación de factores de coagulación que incluyan factor Xa. Este reactivo factor Xa puede contener otras sustancias para mejorar el rendimiento y/o la estabilidad (incluyendo sales, tampones, azúcares, etc.). Se añade el reactivo factor Xa a un componente sanguíneo después de que se haya obtenido el componente sanguíneo del paciente. O bien, se prepara el reactivo factor Xa a partir del factor X endógeno en la muestra del componente sanguíneo mediante la adición de otro reactivo como el veneno de la víbora de Russell, que activa la proenzima factor X (precursora del factor Xa activo).

[0074] Por «medición de la coagulación» es una medición de la formación del coágulo. Esta medición se puede hacer en cualquier momento durante la formación de un coágulo incluyendo, entre otros, el momento de la formación inicial de fibrina o el momento en que el coágulo alcanza un cierto nivel de fuerza. Si la prueba de coagulación usada para determinar la medición de la coagulación es una prueba de tromboelastografía (TEG) (p. ej., realizada en una plataforma de analizador de coagulación de tromboelastografía modelo 5000), el momento de la formación inicial de fibrina es el tiempo «R» y el momento en que el coágulo alcanza un cierto nivel de fuerza es el tiempo «K». Si la prueba de coagulación usada para determinar la medición de la coagulación es una prueba de tromboelastometría (TEM) (p.ej., realizada en la plataforma ROTEM), entonces el momento de formación inicial de fibrina es el «tiempo de reacción (TR)» y el momento en que el coágulo alcanza un cierto nivel de fuerza es el «tiempo de formación del coágulo (TFC)». Cabe señalar que la medición de la coagulación se puede hacer sobre un componente sanguíneo tomado directamente de un paciente o un componente sanguíneo que se ha tratado con un activador de la coagulación como caolín o un inhibidor de la coagulación como el citrato que se ha revertido adecuadamente mediante la adición del calcio.

[0075] Por «prueba de coagulación» se entiende cualquier tipo de prueba que se pueda usar para medir la capacidad de la sangre o un componente sanguíneo para formar un coágulo. Las pruebas de coagulación incluyendo, entre otras, una prueba viscoelástica (incluyendo una prueba de tromboelastografía (TEG) o una prueba de tromboelastometría (TEM)), una prueba del tiempo de protrombina (TP), una prueba del tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa), y una prueba del tiempo de coagulación activado (TCA).

[0076] En algunos modos de realización, la prueba de coagulación consiste en una prueba de coagulación del tiempo de protrombina (TP). La fig. 2A representa esquemáticamente la prueba de coagulación del tiempo de protrombina (TP). La prueba del TP se lleva a cabo al añadir un reactivo de tromboplastina que contiene factor tisular (que puede ser de origen recombinante o derivado de un extracto de cerebro, pulmón o placenta) y calcio plasmático (u otro componente sanguíneo, que puede estar citratado, por ejemplo) y medir el tiempo de coagulación. El tiempo de protrombina (TP) varía con el reactivo y el coagulómetro, pero normalmente oscila entre 10 y 14 segundos (véase Bates and Weitz, Circulation 112: e53-e60, 2005; White et al., "Approach to the bleeding patient", In: Colman RW et al. (eds) Hemostasis and Thrombosis: Basic Principies and Clinical Practice. 3rd ed. Philadelphia, Pa: JB Lippincott Co. 1134 -1147, 1994). El valor del TP se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. El TP puede ser anómalo (p. ej., se puede prolongar) cuando la sangre analizada contiene un anticoagulante (p. ej., el anticoagulante que se administró por vía oral a la persona cuya sangre se está analizando) o cuando la sangre que se está analizado es de pacientes con una deficiencia en un factor de coagulación (p. ej., una deficiencia de los factores VII, X y V, protrombina o fibrinógeno). Esta prueba también resulta anómala en pacientes con inhibidores de la reacción de conversión del fibrinógeno en fibrina, incluyendo dosis elevadas de heparina y la presencia de productos de degradación de la fibrina.

[0077] En algunos modos de realización, la prueba de coagulación consiste en una prueba de coagulación del tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa). La fig. 2B representa esquemáticamente los pasos involucrados en la prueba de coagulación del tiempo parcial de tromboplastina activado (TTPa). La prueba del TTPa también se conoce como prueba de tiempo de coagulación con cefalina y caolín (la cefalina es un sustituto fosfolípido plaquetario) o una prueba del tiempo de tromboplastina parcial activada con caolín (PTTK). El TTPa normalmente se lleva a cabo al añadir primero un tensioactivo (p. ej., caolín, celite, ácido elágico o sílice) y un fosfolípido diluido (p. ej., cefalina) en plasma citratado (fig.

2B). El fosfolípido en esta prueba se denomina tromboplastina parcial porque la tromboplastina tisular está ausente. Después de la incubación para permitir la activación óptima de los factores de contacto (p. ej., factor XII, factor XI, precalicreína y cininógeno de alto peso molecular) y la generación del factor IXa, entonces se añade calcio y se mide el tiempo de coagulación. Por consiguiente, el tiempo TTPa es el tiempo transcurrido desde la adición de calcio hasta la formación de un coágulo de fibrina. Aunque el tiempo de coagulación varía de acuerdo con los reactivos (p. ej., tipo de tensioactivo) y el coagulómetro usado, el TTPa normalmente oscila entre 22 y 40 segundos (véase Bates and Weitz, arriba). El valor del tiempo TTPa se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. El TTPa puede ser anómalo (p. ej., se puede prolongar) cuando la sangre analizada contiene un anticoagulante (p. ej., el anticoagulante que se administró por vía oral a la persona cuya sangre se está analizando). El TTPa se puede prolongar con deficiencias de los factores de contacto; factores IX, VIII, X o V; protrombina; o fibrinógeno. Los inhibidores específicos del factor, así como los inhibidores no específicos, también pueden prolongar el TTPa. Los productos de degradación de la fibrina y anticoagulantes (p. ej., heparina, inhibidores directos de la trombina o warfarina) también prolongan el TTPa.

[0078] En algunos modos de realización, la prueba de coagulación consiste en una prueba del tiempo de coagulación activado (TCA). La fig. 2C representa esquemáticamente los pasos involucrados en la prueba del tiempo de coagulación activado (TCA). Normalmente, la sangre entera se extrae en un tubo o cartucho que contiene un activador de la coagulación (p. ej., celite, caolín o partículas de vidrio) y una barra de agitación magnética. Una vez se ha generado la trombina, esta induce tanto la aglutinación de las plaquetas como la formación de fibrina y entonces se mide el tiempo que tarda la sangre en coagularse (véase también Van Cott and Laposata, "Coagularon". In: Jacobs DS et al. (eds), The Laboratory Test Handbook, 5th ed. Cleveland, Ohio: Lexi-Comp; 2001:327-358, 2001). El valor de referencia para el TCA oscila entre 70 y 180 segundos. El valor del TCA se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. El tiempo TCA se puede prolongar cuando la sangre analizada contiene un anticoagulante (p. ej., un anticoagulante que se administró por vía oral a la persona cuya sangre se está analizando).

[0079] En algunos modos de realización, la prueba de coagulación consiste en un análisis viscoelástico. Por «análisis viscoelástico» se entiende cualquier método de análisis que mida las características de sólidos elásticos (por ejemplo, sólidos de fibrina) y fluidos. En otras palabras, el análisis viscoelástico permite el estudio de las propiedades de un fluido viscoso, como sangre, plasma o una muestra de sangre.

En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico se lleva a cabo en condiciones que imitan las condiciones in vivo que dan lugar a la hemostasia. Por ejemplo, las condiciones pueden incluir una temperatura que imita una temperatura corporal (p. ej., una temperatura de 37 °C). Las condiciones también pueden incluir la formación del coágulo y disolución a velocidades de flujo que imitan las encontradas en los vasos sanguíneos.

[0080] En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico de una muestra de sangre puede incluir someter la muestra de sangre a análisis en un instrumento de análisis hemostático. Un método de análisis viscoelástico no limitativo es la prueba de tromboelastografía («TEG»). Por consiguiente, en algunos modos de realización, el análisis viscoelástico incluye someter una muestra de sangre a análisis usando tromboelastografía (TEG), que Helmut Hartert describió en Alemania por primera vez en la década de 1940.

[0081] Se describen varios dispositivos que emplean tromboelastografía y métodos para usarla en las patentes de EE. UU. con publicación N.25,223,227; 6,225,126; 6,537,819; 7,182,913; 6,613,573; 6,787,363; 7,179,652; 7,732,213, 8,008,086; 7,754,489; 7,939,329; 8,076,144; 6,797,419; 6,890,299; 7,524,670; 7,811,792; 20070092405; 20070059840; 8,421,458; US 20120301967; y 7,261,861.

[0082] La tromboelastografía (TE) monitoriza las propiedades elásticas de la sangre según se induce a coagularse en un entorno de baja cizalladura parecido al flujo sanguíneo venoso lento. Los patrones de cambios en la elasticidad de cizalladura del coágulo en desarrollo permiten la determinación de la cinética, así como la fuerza y la estabilidad del coágulo formado; en resumen, las propiedades mecánicas del coágulo en desarrollo. Como se ha descrito anteriormente, la cinética, fuerza y estabilidad del coágulo proporciona información sobre la capacidad del coágulo para realizar «trabajo mecánico», es decir, resistencia a la tensión de cizalladura de la sangre circulante. En esencia, el coágulo es el aparato elemental de la hemostasia. Los instrumentos de hemostasia que miden la hemostasia son capaces de medir la capacidad del coágulo para realizar trabajo mecánico a lo largo de su desarrollo estructural. Estos analizadores de hemostasia miden continuamente todas las fases de la hemostasia del paciente como un producto neto de componentes de sangre entera de una manera estática o no aislada desde el momento de la iniciación de la prueba hasta la formación inicial de fibrina, a partir del fortalecimiento de la tasa de coagulación y finalmente, la fuerza del coágulo a través de la lisis del coágulo.

[0083] En algunos modos de realización, el análisis viscoelástico y/o el analizador de hemostasia comprende un recipiente que está en contacto con la sangre.

[0084] Como se usa en la presente memoria, por «recipiente» se entiende una superficie rígida (p. ej., una superficie sólida), una porción de la cual entra en contacto con una porción de una muestra de sangre colocada en el recipiente en algún momento durante el análisis viscoelástico. También se puede hacer referencia a la porción del recipiente que entra en contacto con la porción de la muestra de sangre como el «interior» del recipiente. Nótese que la fase «en el recipiente» no significa que el recipiente tenga una superficie inferior que esté en contacto con la porción de la muestra de sangre. Más bien, el recipiente puede ser una estructura en forma de anillo, donde el interior del anillo es el interior del recipiente, lo que significa que el interior del anillo es la porción del recipiente con forma de anillo que entra en contacto con una porción de la muestra de sangre. Una muestra de sangre puede fluir en el recipiente y mantenerse ahí, por ejemplo, mediante presión de vacío o tensión superficial.

[0085] Otros tipos adicionales de recipientes que se incluyen en esta definición son aquellos presentes en placas y casetes (p. ej., un casete microfluídico), donde la placa o el casete tiene múltiples canales, reservorios, túneles y anillos en esta. Cada uno de los canales contiguos (comprendiendo, por ejemplo, un canal, un reservorio y un anillo) es un recipiente, como se usa el término en la presente memoria. De ahí que pueda haber múltiples recipientes en un solo casete. La patente de EE. UU. N.° 7,261,861 describe este casete con múltiples canales o recipientes. Cualquiera de las superficies de cualquiera de los canales o túneles del casete puede ser un interior del recipiente si esa superficie entra en contacto con cualquier porción de la muestra de sangre, en cualquier momento durante el análisis viscoelástico.

[0086] Se describen otros instrumentos analizadores de hemostasia no limitativos en la patente de EE. UU. N.° 7,261,861; la publicación de patente de EE. UU. N.° US20070092405; y la publicación de patente de EE. UU. N.° US20070059840.

[0087] Otro instrumento analizador de hemostasia no limitativo que lleva a cabo el análisis viscoelástico mediante tromboelastografía es el sistema de análisis de hemostasia de tromboelastografía TEG comercializado por Haemonetics, Corp. (Braintree, MA).

[0088] Por consiguiente, la prueba de TEG se puede realizar mediante el sistema de análisis de hemostasia de tromboelastografía TEG que mide la fuerza mecánica de un coágulo de sangre en evolución. Para llevar a cabo la prueba, se introduce la muestra de sangre en el recipiente (p. ej., un vaso dosificador o una cubeta), y el pin de plástico entra en el centro del recipiente. El contacto con las paredes interiores del recipiente (o adición de un activador de coágulo al recipiente) inicia la formación del coágulo. El analizador de hemostasia de tromboelastografía TEG entonces rota el recipiente de manera oscilante, aproximadamente de 4.45 grados a 4.75 grados, cada 10 segundos, para iniciar el flujo venoso lento y activar la coagulación. Como forma de fibrina y aglutinantes plaquetarios, conectan el interior del recipiente con el pin de plástico, transfiriendo la energía usada para mover el recipiente en el pin. Un hilo de torsión conectado al pin mide la fuerza del coágulo con el tiempo, con la magnitud de salida directamente proporcional a la fuerza del coágulo. Según aumenta la fuerza del coágulo con el tiempo, se desarrolla una curva de trazado de TEG clásica (véase la fig. 3A). La curva representada es de un paciente humano normal que se sabe que no toma ningún anticoagulante.

[0089] Un transductor convierte el movimiento giratorio del pin a una señal eléctrica, que se puede monitorizar mediante un ordenador que incluya un procesador y un programa de control. El ordenador es operativo en la señal eléctrica para crear un perfil de hemostasia correspondiente al proceso coagulación medido. Además, el ordenador puede incluir una pantalla o acoplarse a una impresora para proporcionar una representación visual del perfil de hemostasia. Esta configuración del ordenador cumple perfectamente con las habilidades de un experto medio en la materia. Como se muestra en la fig. 3A, el perfil de hemostasia resultante (es decir, una curva de trazado de TEG) es una medición del tiempo que tarda en formarse la primera hebra de fibrina, la cinética de la formación de coágulo, la fuerza del coágulo (medida en milímetros (mm) y convertida a unidades de elasticidad de cizalladura de dyn/cm2 ) y la disolución del coágulo. Véase también Donahue et al., J. Veterinary Emergency and Critical Care: 15 (1): 9-16. (Marzo de 2005).

[0090] Las descripciones de varios de estos parámetros medidos, cualquiera de los cuales se puede usar como una medición de la coagulación de acuerdo con los métodos descritos aquí, son como sigue:

[0091] R es el periodo de tiempo de latencia desde el momento en que la sangre se colocó en el analizador de tromboelastografía hasta la formación inicial de fibrina. Esto normalmente transcurre entre aprox. 30 segundos y aprox.

10 minutos; sin embargo, el intervalo R variará según la prueba de TEG realizada en concreto (p. ej., tipo de componente sanguíneo analizado, si el componente sanguíneo está citratado o no, etc.). Por ejemplo, en el ejemplo 1 a continuación, el intervalo R normal (es decir, de un componente sanguíneo citratado en presencia de caolín) está entre aprox. 5 minutos y aprox. 10 minutos. Para pacientes en un estado hipocoagulable (es decir, un estado en que disminuye la coagulabilidad de la sangre), el número R es más alto, lo que indica una formación del coágulo más lenta, mientras que en un estado hipercoagulable (es decir, un estado en que aumenta la coagulabilidad de la sangre), el número R es más bajo. En los métodos descritos en la presente memoria, el valor de R (en minutos o segundos) se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa. Nótese que en la fig. 3A, el valor de R se etiqueta como «R/TCA» puesto que cuando se realiza la prueba de TEG con un componente sanguíneo tratado con caolín-factor tisular, a veces se hace referencia al valor de R como el valor TCA (valor del tiempo de coagulación activado) en referencia a la anterior prueba de tiempo de coagulación activado (TCA) descrita anteriormente y en la fig. 2C.

[0092] El valor K (medido en minutos) es el tiempo desde el final de R hasta que el coágulo alcanza 20 mm y este valor K representa la velocidad de la formación del coágulo. El valor K está normalmente entre aprox. 0 y aprox. 4 minutos (es decir, después del final de R). En un estado hipocoagulable, el número K es más alto, mientras que en un estado hipercoagulable, el número K es más bajo. Este valor K se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0093] El ángulo a (o simplemente a) mide la rapidez de acumulación de fibrina y entrecruzamiento (fortalecimiento del coágulo). Es el ángulo entre la línea formada desde el punto de división tangente a la curva y el eje horizontal. Este ángulo normalmente es entre aprox. 47 ° y 74 °. En un estado hipocoagulable, el grado a es inferior, mientras que en un estado hipercoagulable, el grado a es mayor. Este ángulo a se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0094] La AM o amplitud máxima en mm es una función directa de las propiedades dinámicas máximas de la unión de la fibrina y plaqueta y representa la fuerza máxima del coágulo fibrina-plaqueta. Este número es normalmente de aprox.

54 mm a aprox. 72 mm, y la AM ocurre normalmente entre aprox. 15 y aprox. 35 minutos después del inicio del ensayo viscoelástico. Nótese que, si la muestra de sangre analizada tiene una función plaquetaria reducida, esta AM representa la fuerza del coágulo solamente según la fibrina. La disminución en la AM puede reflejar un estado hipocoagulable (p. ej., con disfunción plaquetaria o trombocitopenia), mientras que una AM aumentada (p. ej., junto con un R disminuido) puede sugerir un estado hipercoagulable. Este valor de AM se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0095] La LY30 es una medición del área de trazado, reducción 30 minutos después de la AM. LY30 es una disminución porcentual en la amplitud 30 minutos después de la AM. Este número es normalmente entre 0 % y aprox. 8 %, una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. Cuando no se produce fibrinólisis, el valor de la amplitud en el trazado de la AM permanece constante o puede disminuir ligeramente debido a la retracción del coágulo. Sin embargo, según se produce la fibrinólisis (p. ej., en un estado hipocoagulable), la curva del trazado de TEG empieza a decaer. La pérdida resultante en el área-bajo-la-curva potencial en los 30 minutos siguientes a la amplitud máxima en la prueba de TEG se llama LY30 (véase la fig. 3A). La LY30, el porcentaje de lisis 30 minutos siguientes al punto de amplitud máxima (expresado como un porcentaje del coágulo lisado) indica el índice de lisis del coágulo.

[0096] Cabe señalar que se pueden llevar a cabo las modificaciones de la prueba de TEG, como las pruebas de TEG modificadas descritas a continuación en el apartado de ejemplos. Por ejemplo, en el ejemplo 1 a continuación, la prueba RapidTEG (rTEG) incorpora tanto factor tisular como caolín para generar los parámetros convencionales de caolín, así como el parámetro de TEG-TCA, que se mide en segundos. El TEG-TCA es equivalente al tiempo de coagulación activado (véase Chavez JJ., Anesth. Analg. 99: 1290-1294, 2004). Un tiempo prolongado de TEG-TCA (en comparación con el tiempo de TCA de un componente sanguíneo normal) indica una formación del coágulo más lenta.

[0097] Finalmente, cabe señalar que las curvas de velocidad se pueden derivar de las pruebas de TEG caolín y las pruebas RapidTEG (que incorporan tanto caolín como factor tisular). Estas curvas de velocidad se pueden trazar usando software de TEG. Estas curvas representan la velocidad de propagación del coágulo (TMGT, tasa máxima de generación de trombo; y TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo) (véase la fig. 3B). Se pueden usar o bien la TMGT o el TTMGT o ambos como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0098] Las mediciones viscoelásticas de la coagulación proporcionadas por dispositivos como la TEG se están empleando cada vez más para evaluar a pacientes de trauma que llegan en estado de shock secundario a hemorragia masiva, así como para cuidados intensivos de los pacientes de cirugía con diátesis hemorrágica. La TEG se usa ampliamente como una herramienta de gestión para la cirugía cardíaca y los pacientes trasplantados, y proporciona información para guiar la administración de productos sanguíneos (véase Holcolmb J.B. et al., Ann. Surg. 256: 476-486, 2012). La TEG es capaz de detectar tanto el bajo peso molecular como la heparina no fraccionada y, con el uso de un vaso dosificador de heparinasa, puede ilustrar si los efectos de estos agentes se han revertido por completo. Además, la prueba de TEG PlateletMapping se usa para cuantificar la respuesta a los tratamientos antiplaquetarios incluyendo clopidogrel y aspirina, que se pueden usar en combinación con un anticoagulante oral. Las pruebas de TEG que usan ecarina se han empleado para monitorizar la hirudina recombinante, así como la bivalirudina, durante la cirugía cardíaca (Koster, A. et al., J. Card. Surg. 23: 321-323, 2008; Choi, T.S. et al., Am. J. Clin. Path. 125: 290-295, 2006).

[0099] Otra prueba viscoelástica de hemostasia que se puede usar es la prueba de tromboelastometría («TEM»). Esta prueba de TEM se puede realizar mediante el analizador de la coagulación de tromboelastometría de ROTEM (TEM International GmbH, Múnich, Alemania), cuyo uso es ampliamente conocido (véase, p. ej., Sorensen, B., et al.. J. Thromb. Haemost., 2003. 1(3): p. 551-8. Ingerslev, J., et al., Haemophilia, 2003. 9(4): p. 348-52. Fenger-Eriksen, C., et al. Br J Anaesth, 2005. 94(3): p. 324-9]. En el analizador ROTEM, la muestra de sangre se coloca en un recipiente (también denominado cubeta o vaso dosificador) y se sumerge un pin cilíndrico. Entre el pin y la pared interior del recipiente hay un hueco de 1 mm que la sangre cierra. Un resorte gira el pin a la derecha y a la izquierda. Siempre y cuando la sangre sea líquida (es decir, libre de coágulos), el movimiento es ilimitado. Sin embargo, cuando la sangre empieza a coagularse, el coágulo restringe cada vez más el giro del pin con la creciente firmeza del coágulo. El pin se conecta a un detector óptico. Esta cinética se detecta mecánicamente y un ordenador integrado a las curvas de trazado habituales (TEMograma) y a los parámetros numéricos (véase la fig. 4) la calcula.

[0100] En el analizador de la coagulación de tromboelastometría de ROTEM, un ordenador que incluya un procesador y un programa de control puede monitorizar el movimiento del pin. El ordenador es operativo en la señal eléctrica para crear un perfil de hemostasia correspondiente al proceso coagulación medido. Además, el ordenador puede incluir una pantalla o acoplarse a una impresora para proporcionar una representación visual del perfil de hemostasia (llamada TEMograma). Esta configuración del ordenador no excede las habilidades de un experto medio en la materia. Como se muestra en la fig. 5, el perfil de hemostasia resultante (es decir, una curva de trazado de TEM) es una medición del tiempo que tarda en formarse la primera hebra de fibrina, la cinética de la formación de coágulo, la fuerza del coágulo (medida en milímetros (mm) y convertida a unidades de elasticidad de cizalladura de dyn/cm2) y la disolución del coágulo. Las descripciones de varios de estos parámetros medidos, cualquiera de los cuales se puede usar como una medición de la coagulación de acuerdo con los métodos descritos aquí, son como sigue:

[0101] El TC (tiempo de coagulación) es el periodo de tiempo de latencia desde el momento en que la sangre se colocó en el analizador ROTEM hasta que el coágulo se empieza a formar. Este tiempo TC se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0102] TFC (tiempo de formación del coágulo): el tiempo desde el TC hasta que se ha alcanzado un punto de firmeza del coágulo de 20 mm. Este tiempo TFC se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0103] Ángulo alfa: el ángulo alfa es el ángulo de la tangente de 2 mm de amplitud. Este ángulo alfa se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0104] FMC (firmeza máxima del coágulo): la FMC es la amplitud vertical mayor del trazo. La FMC refleja la fuerza absoluta del coágulo de fibrina y plaqueta. El valor de la FMC se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0105] A10 (o valor A5, A15 o A20). Este valor A10 describe la firmeza del coágulo (o amplitud) obtenida después de 10 (o 5 o 15 o 20) minutos y proporciona un pronóstico del valor previsto de la FMC en una fase temprana. Cualquiera de estos valores A (p. ej., A10) se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0106] LI30 (índice de lisis después de 30 minutos). El valor del LI30 es el porcentaje de la estabilidad del coágulo restante respecto al valor de la f Mc 30 min después del TC. Este valor del LI30 se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. Cuando no se produce fibrinólisis, el valor de la amplitud en la FMC en un trazado de TEM permanece constante o puede disminuir ligeramente debido a la retracción del coágulo. Sin embargo, según se produce la fibrinólisis (p. ej., en un estado hipocoagulable), la curva del trazado de TEM empieza a decaer. El LI30 corresponde al valor de la LY30 de un trazado de TEG.

[0107] LM (lisis máxima). El parámetro de LM describe el porcentaje de estabilidad perdida del coágulo (respecto a la FMC, en %) visto en cualquier punto de tiempo seleccionado o cuando se ha detenido la prueba. Este valor de LM se puede usar como una medición de la coagulación no limitativa de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria.

[0108] Por consiguiente, los parámetros de interés en las pruebas de TEG o TEM, cada uno de los cuales se puede usar como una medición de la coagulación de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria, incluyen la fuerza máxima del coágulo, que es un reflejo de la fuerza del coágulo. Este es el valor de la AM en la prueba de TEG y el valor de la FMC en la prueba de TEM. El tiempo de reacción (R) en TEG (medido en segundos o minutos) y el tiempo de coagulación (TC) en TEM es el tiempo hasta que hay una primera evidencia de coágulo; la cinética del coágulo (K, medida en minutos) es un parámetro en la prueba de TEG que indica el logro de firmeza del coágulo; y a en TEG o ángulo alfa en TEM es una medición angular desde una línea tangente dibujada a la curva del trazado de TEG o el trazado de TEM empieza desde el punto de tiempo de reacción del coágulo que es reflejo de la cinética de desarrollo del coágulo. (Véase Trapani, L.M. Thromboelastography: Current Applications, Future Directions", Open Journal of Anesthesiology 3(1): Article ID: 27628, 5 pages (2013); y Kroll, M..H., "Thromboelastography: Theory and Practice in Measuring Hemostasis," Clinical Laboratory News: Thromboelastography 36(12), December 2010; manuales de instrucciones del instrumento de TEG (se puede consultar en Haemonetics, Corp.), y el manual de instrucciones para el instrumento ROTEM (se puede consultar en TEM International GmbH).

[0109] En algunos modos de realización, se registran los parámetros (y de ahí las mediciones de la coagulación) mediante la observación de los diferentes niveles de excitación de la muestra según se produce la coagulación. Por ejemplo, cuando el recipiente es un casete microfluídico o un canal concreto en el casete, la muestra del componente sanguíneo se puede excitar a una frecuencia de resonancia y observar su comportamiento mediante una fuente electromagnética o luminosa según se produce la coagulación. En otros modos de realización, se puede observar la medición de la coagulación de la muestra del componente sanguíneo con respecto a los cambios mediante una fuente luminosa sin excitar la muestra.

[0110] Puesto que un único casete puede tener múltiples recipientes (p. ej., diferentes canales en el casete), las diferentes muestras (p. ej., porciones del componente sanguíneo del paciente) son fácilmente comparables entre sí. Por ejemplo, un canal se puede no tratar, un canal se puede tratar con el reactivo factor Xa, y un canal se puede tratar con el reactivo de ecarina. En otro modo de realización, se pueden medir los componentes sanguíneos de los diferentes individuos en diferentes canales, y los resultados de los diferentes individuos obtenidos simultáneamente de un único casete.

[0111] Por «cantidad terapéuticamente relevante» se entiende una cantidad de un anticoagulante en el componente sanguíneo analizado que está dentro del rango de concentración terapéuticamente eficaz para el anticoagulante. La cantidad terapéuticamente relevante diferirá de cada anticoagulante y se ve afectada por la biodisponibilidad del anticoagulante y también por la vida media del anticoagulante tras la ingesta por parte del paciente. Por ejemplo, el dabigatrán tiene una vida media de 12-17 horas que se prolonga en pacientes con insuficiencia renal (información sobre el producto de Boehringer Ingelheim International G. Pradaxa (dabigatrán etexilato)). El apixabán y el rivaroxabán tienen vidas medias más breves que el dabigatrán. Sin embargo, el apixabán tiene una vida media aumentada hasta el 44 % en pacientes con insuficiencia renal grave en comparación con voluntarios sanos (véase Dager et al., Crit. Care Med. 41: e42-46, 2013). Se puede esperar que el efecto anticoagulante del apixabán o rivaroxabán persista durante al menos 10 30 horas después de la última dosis, es decir, durante aprox. dos vidas medias. Sin embargo, generalmente, la cantidad terapéuticamente relevante de un anticoagulante es entre aprox. 75 ng/ml y aprox. 500 ng/ml en sangre (o componente sanguíneo). Por ejemplo, para el apixabán, una cantidad terapéuticamente relevante es entre aprox. 275 y aprox. 775 ng/ml, o entre aprox. 300 y aprox. 650 ng/ml, o entre aprox. 400 y aprox. 600 ng/ml, o unos 500 ng/ml aprox. en sangre o componente sanguíneo. Para el rivaroxabán, una cantidad terapéuticamente relevante es entre aprox. 40 y aprox. 350 ng/ml, o entre aprox. 55 y aprox. 250 ng/ml, o entre aprox. 70 y aprox. 150 ng/ml, o unos 89 ng/ml aprox. en sangre o componente sanguíneo. Para el dabigatrán, una cantidad terapéuticamente relevante es entre aprox. 100 y aprox. 350 ng/ml, o entre aprox. 150 y aprox. 300 ng/ml, o entre aprox. 175 y aprox. 250 ng/ml, o unos 200 ng/ml aprox. en sangre o componente sanguíneo.

[0112] Se puede proporcionar un método para clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor que una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo de un paciente, comprendiendo el método: (a) identificar la presencia de un anticoagulante en el componente sanguíneo, que comprende los pasos de (i) someter una muestra de un componente sanguíneo de control (que se sabe que no contiene anticoagulante) a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación de control; y (ii) someter una muestra del componente sanguíneo del mismo donante (del que se desconoce la presencia de anticoagulante) a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación del segundo componente sanguíneo, donde la medición de la coagulación de la segunda muestra que es mayor que la medición de la coagulación de la primera muestra indica la presencia del anticoagulante en un nivel terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo y donde la medición de la coagulación de la segunda muestra que es menor o igual que la medición de la coagulación de la primera muestra indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el componente sanguíneo y (b) clasificar el anticoagulante en el componente sanguíneo, que comprende los pasos de: (i) someter una segunda porción del componente sanguíneo (que se sabe que contiene anticoagulante de acuerdo con los pasos descritos en (a) a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación de la segunda porción; y (ii) someter una segunda porción de la sangre (que se sabe que no contiene anticoagulante) a la prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación de esta porción, donde la medición de la coagulación de la porción (que se sabe que contiene anticoagulante) que es mayor que la medición de la coagulación de la porción (que se sabe que no contiene anticoagulante) identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación de la porción (que se sabe que contiene anticoagulante) que es menor o igual que la medición de la coagulación de la porción (que se sabe que no contiene anticoagulante) identifica el anticoagulante como un anticoagulante antifactor Xa.

[0113] Se puede proporcionar un método para clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor que una cantidad terapéuticamente relevante en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante, comprendiendo el método: (a) identificar la presencia de un anticoagulante en un componente sanguíneo del paciente, que comprende los pasos de: (i) someter una muestra de control de un componente sanguíneo de control, el componente sanguíneo de control que se sabe que no contiene el anticoagulante, a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control; y (ii) someter una muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa para obtener la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente, donde la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control indica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente y donde la medición de la coagulación por factor Xa de la segunda muestra menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra de control indica la ausencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente; y (b) clasificar el anticoagulante en el paciente, que comprende los pasos de: (i) someter una segunda muestra de control del componente sanguíneo de control a la prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control; y (ii) someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a la prueba de coagulación en presencia del reactivo de ecarina para obtener la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente que es menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra de control identifica el anticoagulante como un reactivo antifactor Xa.

[0114] Se puede proporcionar un método para clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor que una cantidad terapéuticamente relevante en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante, comprendiendo el método: (a) someter una primera muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del componente sanguíneo del paciente, donde la medición de la coagulación por factor Xa del componente sanguíneo del paciente

mayor que una medición de la coagulación por factor Xa de una muestra de sangre de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente; y (b) someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente; donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente mayor que una medición de la coagulación por ecarina de una prueba de control del componente sanguíneo de control identifica el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT) y donde la medición de la coagulación por ecarina de la segunda muestra del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control identifica el anticoagulante como un reactivo antifactor Xa.

[0115] Se puede proporcionar un método para identificar y clasificar un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que se sospecha que toma un anticoagulante (o que se sabe que toma un anticoagulante), comprendiendo el método someter una primera muestra del paciente de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo del paciente, donde la medición de la coagulación por ecarina del componente sanguíneo del paciente mayor que una medición de la coagulación por ecarina de una muestra de sangre de control de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente y lo clasifica como un IDT. El método además puede incluir someter una segunda muestra del paciente del componente sanguíneo de un paciente que se sabe o sospecha que contiene anticoagulante a la prueba de coagulación en presencia de un reactivo FXa para obtener la medición del FXa de la coagulación de la segunda muestra del paciente; donde la medición del FXa de la coagulación de la segunda muestra del paciente mayor que una medición del FXa de la coagulación de una muestra de control del componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante identifica la presencia de un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante y lo clasifica como un inhibidor del FXa y donde la medición del FXa de la coagulación de la segunda muestra del paciente menor o igual que la medición del FXa de la coagulación de la muestra de control indica la ausencia de cualquier anticoagulante.

[0116] La medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente. La medición de la coagulación por factor Xa de la muestra del paciente que es al menos 1.5 veces, o al menos 1.75 veces, o al menos 2.0 veces, o al menos 2.25 veces mayor que la medición de la coagulación por factor Xa de la muestra control puede identificar la presencia del anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante en el paciente.

[0117] La medición de la coagulación por ecarina de la muestra del paciente que es al menos 1.25 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control puede identificar el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina (IDT). La medición de la coagulación por ecarina de la muestra del paciente que es al menos 1.5 veces, o al menos 1.75 veces, o al menos 2.0 veces, o al menos 2.25 veces mayor que la medición de la coagulación por ecarina de la muestra de control puede identificar el anticoagulante como un inhibidor directo de la trombina.

[0118] Por «reactivo de ecarina» se entiende una molécula que activa una proenzima protrombina (precursora de la trombina activa) y produce una forma activada con actividad enzimática similar a la trombina. Un reactivo de ecarina también puede incluir enzimas similares a la ecarina. Se muestran algunos reactivos de ecarina no limitativos en la fig. 5. El reactivo de ecarina puede activar la proenzima protrombina (precursora de la trombina activa) y se puede derivar del veneno de la víbora gariba, Echis carinatus. El reactivo de ecarina puede ser textarina.

[0119] La figura 6 es un diagrama esquemático del árbol de decisión implicado en este método. Como se muestra en la figura 6, el paso (a) del método anteriormente descrito al que se puede hacer referencia como el paso de «detección». Usar una prueba de coagulación en presencia del reactivo factor Xa, si la medición de la coagulación (el «tiempo R» en la fig. 6) del componente sanguíneo analizado está dentro del intervalo normal (donde el intervalo normal se basa en un componente sanguíneo de un donante que se sabe que no toma un anticoagulante), el paciente cuyo componente sanguíneo analizado se obtuvo se identifica como que no toma un anticoagulante (es decir, no se le está administrando un anticoagulante al paciente antes de que se haya obtenido el componente sanguíneo de la prueba). Si, sin embargo, la medición de la coagulación (el «tiempo R» en la fig. 6) del componente sanguíneo analizado no está dentro del intervalo normal (p. ej., tiene un tiempo R mayor que el intervalo normal), entonces el paciente cuyo componente sanguíneo analizado se obtuvo se identifica como que toma un anticoagulante. Se puede hacer referencia al paso (b) del método anteriormente descrito como el paso de «clasificación» (véase la fig. 6). Una vez el componente sanguíneo se ha identificado como que

se ha obtenido de un paciente anticoagulado (es decir, al paciente se le administra un anticoagulante), mediante un reactivo de ecarina en una prueba de coagulación, el anticoagulante se puede identificar como un anticoagulante IDT o un antifactor Xa dependiendo de si la medición de la coagulación está dentro del intervalo de ecarina normal o no. Como se muestra en la fig. 6, el tiempo R en una prueba de coagulación mediante ecarina está dentro del intervalo normal (es decir, el intervalo de tiempos R en presencia de ecarina del componente sanguíneo de donantes sanos que se sabe que no toman un anticoagulante), entonces se identifica el anticoagulante en el paciente como un inhibidor del factor Xa. Sin embargo, si el tiempo R en una prueba de coagulación mediante ecarina es mayor (es decir, está fuera) del intervalo normal (es decir, el intervalo de tiempos R en presencia de ecarina del componente sanguíneo de donantes que se sabe que no toman un anticoagulante), entonces se identifica el anticoagulante en el paciente como un inhibidor IDT.

[0120] Una vez que se ha identificado al paciente como que se le administra un anticoagulante, si se desea, se puede tratar al paciente con un agente reversor (p. ej., en una cantidad terapéuticamente relevante). Por ejemplo, si el paciente se ha identificado como que toma un anticoagulante dabigatrán (un anticoagulante IDT), un agente reversor no limitativo que se le puede administrar al paciente para revertir el efecto anticoagulante del dabigatrán es idarucizumab (Boehringer Ingelheim). De manera similar, si el paciente se ha identificado como que toma un inhibidor del anticoagulante factor Xa, un agente reversor no limitativo que se le puede administrar al paciente para revertir el efecto anticoagulante del inhibidor del factor Xa es andexanet alfa (Portola Pharmaceuticals). Otro agente reversor no limitativo que se le puede administrar al paciente para revertir el efecto anticoagulante de un anticoagulante IDT o inhibidor del factor Xa es un concentrado de complejo protrombínico (CCP) (por ejemplo, el CCP de factor 4 comercializado con denominación KCentra, Octaplex y Beriplex)

[0121] Cabe señalar que la figura 6 es meramente un ejemplo de los métodos divulgados. Los pasos de clasificación y los pasos de detección pueden ocurrir simultáneamente. Por ejemplo, si la prueba de coagulación es una prueba realizada mediante el método y aparato donde se realizan múltiples pruebas de coagulación simultáneamente (usando, por ejemplo, el método de TEG y el aparato divulgado en la patente de EE. UU. N.° 7,261,861), uno puede imaginar fácilmente la situación hipotética donde, si un único casete contiene cuatro canales, los cuatro canales pueden contener (a) el componente sanguíneo de control de un donante que se sabe que no toma un anticoagulante en presencia de un reactivo factor Xa, (b) el componente sanguíneo de la prueba en

presencia de un reactivo factor Xa, (c) el componente sanguíneo de control en presencia de un reactivo de ecarina, y (d) el componente sanguíneo de la prueba en presencia de un reactivo de ecarina. Donde los intervalos normales del componente sanguíneo de control están predeterminados, los cuatro canales pueden ser, por ejemplo, (a) sangre de la prueba sin reactivo factor Xa, (b) sangre de la prueba con reactivo factor Xa, (c) sangre de la prueba sim reactivo de ecarina, y (d) sangre de la prueba con reactivo de ecarina. Por supuesto que el médico experimentado puede utilizar cualquier prueba de coagulación para determinar la información necesaria para determinar si el paciente toma un anticoagulante y, si lo hace, si el anticoagulante es un anticoagulante IDT o un antifactor Xa.

[0122] Se proporcionan los ejemplos siguientes que están destinados a ilustrar, sin ser limitativos, los diferentes métodos descritos en la presente memoria.

Ejemplo 1

[0123] La prueba de coagulación de TEG se usó para determinar si las dosis inferiores, normales y superiores de dabigatrán, rivaroxabán y apixabán se podrían detectar en sangre enriquecida con estos compuestos. Los tres anticoagulantes orales (ACO), a saber, dabigatrán, rivaroxabán y apixabán, se mezclaron con la sangre obtenida de 14 donantes humanos sanos voluntarios. Para cada ACO analizado, la sangre citratada de los tres donantes se enriqueció con tres concentraciones diferentes del fármaco activo (es decir, el compuesto). Las muestras de sangre enriquecidas y las muestras de control enriquecidas con disolvente se analizaron con el analizador de hemostasia de tromboelastografía TEG® 5000 (Haemonetics Corporation, Braintree, MA, EE. UU.) mediante los reactivos de Kaolin y RapidTEG® (Haemonetics). Cada muestra se realizó por triplicado. Todas las muestras se analizaron con y sin ecarina (adquirida en Enzyme Research Laboratories, South Bend, IN). Este estudio fue aprobado por la IRB y todos los donantes eran mayores de 18 años y firmaron consentimientos informados.

Preparación de la muestra

[0124] Se extrajo sangre mediante la técnica de venopunción estándar y un kit de extracción Becton Dickinson Vacutainer Push Button con una aguja de calibre 21. Se mezcló y analizó la sangre dentro de las dos horas siguientes a extraerse.

[0125] El dabigatrán madre se preparó a partir de la fracción de dabigatrán activo (Alsachim, Francia) mediante la disolución en 0.1 M de HCI y una dilución adicional en 1:1 DMSO:H20. La solución madre final usada para enriquecer la sangre tenía una concentración de 20 ng/pL en 0.1M HC1/DMSO/H20. Los tubos de sangre citratada se enriquecieron con este dabigatrán madre para crear concentraciones finales de 500, 200 y 50 ng/mL de sangre entera citratada.

[0126] El dabigatrán está aprobado para la prevención del tromboembolismo venoso (ETV) tras el reemplazo programado de rodilla o cadera (220 mg/día para pacientes sin insuficiencia renal y 150 mg/día para pacientes con insuficiencia renal moderada y para la prevención de accidente cerebrovascular en pacientes con insuficiencia renal y fibrilación auricular (FA) en EE. UU. (en una dosis reducida de 75 mg/día). (Boehringer Ingelheim International, información sobre el producto y la prescripción de dabigatrán etexilato) Una dosis oral de 150 mg de dabigatrán tiene una concentración plasmática (C.) de 110 ng/mL (véase Stangier et al., Clin. Pharmacokinet. 47: 285-295, 2008; Mueck, W., et al., Thrombosis Journal 11:10 (2013).

[0127] El rivaroxabán madre se preparó mediante la agitación de un comprimido de 20 mg de Xarelto (Jannsen, Titusville, NJ) en una solución 1:1 Dm SO: H20, que se diluyó hasta una concentración final de 20 ng/uL de rivaroxabán en 1:1 DMSO:H20. Los tubos de sangre citratada se enriquecieron con este rivaroxabán madrepara crear concentraciones finales de 500, 89 y 22 ng/mL en sangre entera citratada. Rivaroxabán está aprobado para la prevención de accidente cerebrovascular y embolia sistémica en adultos con FA no valvular (20 mg/día; UE y Ee . UU.), para el tratamiento de trombosis venosa profunda (TVP) y embolia pulmonar (EP) y para la prevención de TVP y EP recurrentes en pacientes adultos (15 mg dos veces al día durante 3 semanas seguidos de 20 mg/día; UE y EE. UU.) (véase Wong et al., J. Thromb. Haemost. 6: 820-829, 2008; Janssen Pharmaceuticals, información sobre la prescripción de rivaroxabán. Una dosis oral de 10 mg de rivaroxabán tiene una Cmáx de 141 ng/mL (véase Mueck, W., et al., Thrombosis Journal 11:10, 2013; Kubitza D. et al., Clin Pharmacol Ther. 78:412-421, 2005). El apixabán madre se preparó de una manera similar a partir de un comprimido de 2.5 mg de Eliquis (Bristol-Myers Squibb, Nueva York, NY), con concentraciones finales de 1000, 500 y 250 ng/mL en sangre entera. Apixabán está aprobado para la prevención de la ETV en cirugías programadas de reemplazo de rodilla o cadera (2.5 mg dos veces al día) y para la prevención de accidente cerebrovascular y embolia sistémica en pacientes con FA no valvular (5 mg dos veces al día) (véase Bristol-Myers SP, EEIG. resumen de las características del producto apixabán). Una dosis oral de 20 mg de apixabán tiene una Cmáx de 460 ng/mL mL (véase Mueck, W., et al., Thrombosis Journal 11:10, 2013; Raghavan N et al., Drug Metab Dispos. 37:74-81, 2009). Las muestras de control, preparadas para cada fármaco analizado, incluían un testigo tratado con disolvente que contenía solo sangre citratada y el disolvente usado para diluir el fármaco madre, y un tubo de sangre citratada no adulterada.

T romboelastografía:

[0128] La prueba se realizó en analizadores TEG-5000 (Haemonetics Corp., Braintree, MA, EE. UU.) usando viales de caolín 0.2 M de CaCl2, viales RapidTEG (rTEG), agua de disolución y, vasos dosificadores transparentes y pins desechables proporcionados por el fabricante (Haemonetics, Braintree, MA), y ecarina (Enzyme Research Laboratories, South Bend, IN). Toda la prueba se realizó por triplicado en cada dosis y se permitió que continuara hasta que se definió el parámetro de AM (amplitud máxima). Se representan los diferentes componentes del trazado de TEG en la fig. 3A. La prueba de caolín genera un parámetro R, que se mide en minutos, y es el tiempo transcurrido desde el inicio de la prueba hasta el punto donde la aparición de la coagulación proporciona suficiente resistencia para producir una lectura de 2 mm de amplitud en el trazado de TEG. Este parámetro representa la fase de iniciación de la coagulación respecto a la función de los factores de coagulación enzimáticos. El parámetro R tiene un intervalo normal de 5 a 10 min para caolín. Un tiempo R prolongado indica una formación del coágulo más lenta. K es una medición del intervalo de tiempo desde el punto de división al punto donde el entrecruzamiento de fibrina proporciona suficiente resistencia del coágulo para producir una lectura de 20 mm de amplitud. El ángulo a es el ángulo formado por la pendiente de una línea tangente trazada desde el tiempo R al K y una línea central medida en grados. El tiempo K y el ángulo a denotan la tasa a la que se fortalece el coágulo y es representativo de la escisión de la trombina del fibrinógeno disponible en fibrina. La AM indica el punto en el que la fuerza del coágulo alcanza su amplitud máxima, medida en milímetros en el trazado de TEG, y refleja el resultado final de la interacción plaqueta-fibrina máxima mediante los receptores GPIIb-IIIa (véase Khurana S etal., J Lab Clin Med.

130:401-411, 1997).

[0129] La prueba RapidTEG (rTEG) incorporó tanto factor tisular como caolín para generar los parámetros convencionales de caolín, así como el parámetro de TEG-TCA, que se mide en segundos. El TEG-TCA es equivalente al tiempo de coagulación activado (véase Chavez J.J. et al., Anesth. Analg. 99:1290-1294, 2004) y tiene un intervalo normal de 86 a 118 segundos. Un tiempo de TEG-TCA prolongado indica una formación del coágulo más lenta. Además, las curvas de velocidad derivadas de las pruebas de caolín y rTEG anteriormente mencionadas se trazaron usando software de TEG. Estas curvas representan la velocidad de propagación del coágulo (TMGT, tasa máxima de generación de trombo; y TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo) (véase la fig. 3B).

[0130] Para la prueba de caolín se mezcló 1 mL de la muestra de sangre citratada con caolín y se añadieron 340 microlitros (pL) de esta sangre al vaso dosificador de TEG que contenía 20 pL de 0.2 M de CaCl2 para recalcificación. La prueba de caolín con ecarina se realizó de una manera similar, usando 20 pL de una solución de ecarina/CaCl2 (0.16 M de CaCl2; 19 UE/mL de ecarina).

[0131] Para la prueba RapidTEG (rTEG) se reconstituyó el reactivo con 20 pL de agua de disolución y se permitió que reposara durante 5 minutos según las instrucciones del fabricante. Se añadieron diez pL de este agente reconstituido a este vaso dosificador de TEG con 20 pL de 0.2 M de CaCl2 para recalcificación.

[0132] Se añadieron 340 pL de la muestra de sangre citratada al vaso dosificador con estos dos reactivos, y se mezclaron los contenidos del vaso dosificador 3 veces mediante la extracción de los contenidos del vaso dosificador en la pipeta y volviendo a dispensarlos en el vaso dosificador. La prueba comenzó inmediatamente después del mezclado y se permitió que transcurriera hasta que se hubo definido el parámetro de AM. La prueba rTEG con ecarina se realizó como la prueba rTEG anterior, usando 20 pL de una solución de ecarina/CaCl2 (0.16 M de CaCl2; 19 UE/mL de ecarina).

Análisis estadístico

[0133] Los análisis estadísticos se hicieron usando una prueba t de Student de dos colas. Para todos los análisis, un valor P de <0.05 se consideró significativo estadísticamente.

RESULTADOS:

[0134] Los resultados de la prueba de caolín se muestran en la tabla 1 y en las figuras 7A, 7B y 7C.

[0135] La tabla 1 muestra la sensibilidad de los parámetros de coagulación de la prueba de TEG Kaolin en muestras de donantes sanos enriquecidas con diferentes dosis de apixabán, rivaroxabán y dabigatrán en presencia o ausencia de ecarina. En la tabla 1, R, tiempo de reacción; TMGT, tasa máxima de generación de trombo; TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* -el control. § - muestra pareada con o sin ecarina. EE - error estándar de la media de tres experimentos independientes medidos por triplicado. 1 símbolo p<0.05; 2 símbolos p<0.01; 3 símbolos p<0.001.

[0136] Los parámetros de R, K, a y TMGT en la prueba de caolín solo lograron significación estadística para las concentraciones más elevadas de rivaroxabán (tabla 1, fig. 7A), pero fueron capaces de detectar la presencia de todas las concentraciones analizadas de apixabán (P<.045) (tabla 1, fig. 7B) y dabigatrán (P<.038) (tabla 1, fig. 7C). Además, el parámetro de TTMGT fue estadísticamente diferente para todos los fármacos entre el grupo de control y todas las concentraciones analizadas. Por otra parte, los parámetros de R, a y TTMGT para las muestras de dabigatrán fueron significativamente diferentes entre todas las concentraciones que indicaban una dosis-respuesta adecuada (tabla 1, figura 7C). Por último, los valores de AM de la prueba de caolín para el rivaroxabán y dabigatrán no cambiaron con la adición de los NOAC estudiados en comparación con el control, que ilustra la falta de efecto de estos agentes en la contribución plaqueta/fibrina a la fuerza del coágulo. Sin embargo, el trazado de apixabán en la concentración de 250 ng/mL manifestó que la AM era significativamente diferente del grupo de control (P<.001), sin embargo, seguía estando dentro del intervalo normal (datos no mostrados).

[0137] La tabla 2 muestra la sensibilidad de los parámetros de coagulación de la prueba Rapid TEG en muestras de donantes sanos enriquecidas con diferentes dosis de apixabán, rivaroxabán y dabigatrán en presencia o ausencia de ecarina. En la tabla 2, R, tiempo de reacción; TMGT, tasa máxima de generación de trombo; TTMGT, tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombo. Estadísticamente significativos entre: ¥ - dosis mayor y dosis intermedia; o - dosis mayor y dosis inferior; O - dosis intermedia y dosis inferior;* -el control. § - muestra pareada con o sin ecarina. EE - error estándar de la media de tres experimentos independientes medidos por triplicado. 1 símbolo p<0.05; 2 símbolos p<0.01; 3 símbolos p<0.001.

[0138] El parámetro de TEG TCA para todos los fármacos analizados en la prueba RapidTEG fue significativamente diferente entre el grupo de control y todas las concentraciones analizadas de rivaroxabán, apixabán y dabigatrán. Los resultados de esta prueba se muestran en la tabla 2 y en las fig. 7D, 7E, y 7F) con la excepción de la concentración de rivaroxabán de 22 ng/mL (P=0.576) (véase la tabla 2, fig. 7D).

[0139] Por otra parte, el parámetro de TEG TCA fue capaz de distinguir entre concentraciones de rivaroxabán (véanse los resultados en la tabla 2 y en la fig. 7D) y de dabigatrán (tabla 2, fig. 7F) que indicaban una buena curva de dosisrespuesta. Los parámetros de K, a y TMGT para tanto el apixabán como el rivaroxabán de la prueba RapidTEG no mostraron ninguna diferencia estadística entre el control o entre las concentraciones estudiadas (véase la tabla 2). Sin embargo, el parámetro de K para el grupo de dabigatrán fue estadísticamente diferente del control para las concentraciones más bajas analizadas (200 ng/mL, P=.003; 50 ng/mL, P=.003) pero no para la concentración de 500 ng/mL (P=.438) y el parámetro de a del grupo de dabigatrán fue estadísticamente diferente del control para la concentración de 500 ng/mL (P<.01) y 50 ng/mL (P<.001) pero no para la concentración de 200 ng/mL (P=.383) (tabla 2). Además, tanto el parámetro de K como el de a fueron capaces de diferenciar entre la concentración más alta de dabigatrán y las otras concentraciones (500 ng/mL vs. 200 ng/mL, P=.002; 500 ng/mL vs. 50 ng/mL, P<.001) (tabla 2). Por otra parte, el parámetro de TMGT fue sensible a las dos concentraciones más bajas de dabigatrán (500 ng/mL, P=.061; 200 ng/mL, P=.0015; 50 ng/mL, P<0.001). El parámetro del TTMGT de la prueba RapidTEG es sensible a la presencia tanto de rivaroxabán como de dabigatrán, pero no de apixabán (tabla 2). Por otra parte, el parámetro del TTMGT es capaz de diferenciar entre las concentraciones de dabigatrán (500 ng/mL vs. 200 ng/mL, PP<0.001; 200 ng/mL vs. 50 ng/mL, P<.0,001) (tabla 2). Por último, los valores de AM de la prueba RapidTEG para rivaroxabán y apixabán no cambiaron con la adición de las concentraciones de fármaco estudiadas en comparación con control y solo los valores de AM de la concentración de 500 ng/mL de dabigatrán fueron significativamente diferentes del grupo de control (P<0.01), sin embargo, seguía estando dentro del intervalo normal (datos no mostrados).

[0140] La ecarina se deriva del veneno de la víbora gariba, Echis carinatus. La ecarina activa la protrombina (la precursora de la trombina, véase la fig. 5). Esta activación de la trombina por parte de la ecarina produce meizotrombina, un producto intermedio protrombina-trombina que tiene un nivel bajo de actividad enzimática procoagulante.

[0141] Como se puede ver en la tabla 1 y también en las fig. 8A-8C, la adición de la ecarina a la prueba de caolín provocó una disminución significativa de los valores de R, K y TTMGT tanto para los grupos tratados y de control (apixabán P<.001; rivaroxabán P<.003; dabigatrán P<.004) y un aumento significativo de los valores de a y del TMGT tanto para los grupos tratados como de control (apixabán P<.001; rivaroxabán P<.008; dabigatrán P<.008) (véase la tabla 1). Por otra parte, la adición de ecarina a la prueba de caolín en presencia de fármacos antifactor Xa (también llamados fármacos antiXa) disminuye considerablemente los valores de R para el intervalo hipercoagulable (<5 min) sin diferencia estadística del de control, a excepción de las posologías más altas estudiadas (apixabán: 1000 ng/mL, P=.026; 500 ng/mL, P=.756; 250 ng/mL, P=.054), rivaroxabán (500 ng/mL, P=.0017; 89 ng/mL, P=.079; 22 ng/mL, P=.898) mientras que en presencia de dabigatrán solo hay una disminución de R respecto a la dosis (tabla 1, véase también la fig. 8C). La adición de ecarina a la prueba de caolín no cambió los valores de AM de las muestras para el dabigatrán o rivaroxabán respecto a las muestras analizadas sin ecarina, pero en presencia de apixabán, los valores de AM fueron estadísticamente diferentes (1000 ng/mL, P=.020; 500 ng/mL, P=.009; 250 ng/mL, P<.001) de las muestras analizadas sin ecarina, sin embargo, seguía estando dentro del intervalo normal (datos no mostrados).

[0142] Como se puede ver en la tabla 2, la adición de ecarina a la prueba RapidTEG disminuye significativamente los tiempos de TEG-TCA tanto para los fármacos antiXa como IDT (apixabán, P<.001; rivaroxabán, P<001; dabigatrán, P<.001), así como los tiempos de TTMGT en presencia tanto de rivaroxabán como dabigatrán (rivaroxabán, P<.001; dabigatrán, P<.001) que aumentan el estado de hipercoagulabilidad (véase la tabla 2). Por otro lado, el ángulo a de RapidTEG no cambió para ninguna de las concentraciones estudiadas cuando se añadió la ecarina en presencia de rivaroxabán o apixabán. Sin embargo, para las concentraciones más bajas de dabigatrán hubo una disminución en el valor del ángulo (200 ng/mL, P=.047; 50 ng/mL, P=.016) (tabla 2). Los valores K de RapidTEG disminuyeron significativamente para las concentraciones más altas y más bajas de apixabán (1000 ng/mL, P=0.017; 250 ng/mL, P=0.17) y la concentración intermedia de rivaroxabán (89 ng/mL, P=.044), pero aumentaron en la concentración intermedia de dabigatrán (200 ng/mL, P=.004) cuando se añadió ecarina. Por último, la adición de ecarina a la prueba RapidTEG solo disminuyó significativamente el valor de AM para la concentración de 200 ng/mL de dabigatrán (p<0.05), sin embargo, seguía estando dentro del rango normal (datos no mostrados).

Ejemplo 2

[0143] Los voluntarios humanos sanos (a los que no se les administró ningún anticoagulante), donaron sangre. Tras la donación, la sangre extraída de los donantes (que se añadió al citrato para prevenir la coagulación) se dividió en porciones, y las porciones de sangre no se enriquecieron con nada o se enriquecieron con dabigatrán o rivaroxabán. Las porciones se analizaron entonces mediante tromboelastografía, incluyendo las pruebas realizadas en presencia de ecarina.

[0144] Para estos estudios, se extrajo sangre de estos tres voluntarios humanos sanos. Para cada dosis se hicieron tres pruebas de tromboelastografía, y el número notificado indica el resultado promedio. El inhibidor directo de la trombina usado fue dabigatrán. El dabigatrán madre fue 1 ml de DMSO 750 ul de solución salina (0.9 % NaCl) 1 mg de fracción de dabigatrán activo. El fármaco antifactor Xa usado fue rivaroxabán. El rivaroxabán madre fue un comprimido de 20 mg disuelto en 1 ml de solución salina más 9 ml de DMSO.

[0145] Se usaron tres dosis de cada uno (dabigatrán y rivaroxabán), a saber, una dosis baja, una dosis normal y una dosis alta. Para el dabigatrán, la dosis baja fue de 50 ng/ml, la dosis normal fue de 200 ng/ml, y la dosis alta fue de 500 ng/ml. Para el rivaroxabán, la dosis baja fue de 22 ng/ml, la dosis normal fue de 89 ng/ml, y la dosis alta fue de 500 ng/ml.

[0146] La figura 9A muestra el trazado de TEG caolín de los componentes sanguíneos enriquecidos con 50 ng/ml de dabigatrán (línea roja), 200 ng/ml de dabiggatran (línea verde) y 500 ng/ml de dabigatrán (línea negra). Como se puede ver en la fig. 9A, la presencia de dabigatrán aumenta el valor de R de los componentes sanguíneos analizados de forma dosis-dependiente. La fig. 9B es un gráfico de los valores de R de los componentes sanguíneos enriquecidos en comparación con el valor de R del componente sanguíneo de control (es decir, tomado de un voluntario que se sabe que no está tomando un anticoagulante y cuya sangre no se enriqueció con un anticoagulante). Nótese que la fig. 9B es una vista ampliada de la fig. 7C. Como muestra la fig. 9B, el intervalo de referencia del valor de R para la sangre de control estaba entre aprox. 5 minutos y aprox. 10 minutos, donde el valor de R promedio estaba en aprox. 7.9 minutos. La dosis más baja de dabigatrán (50 ng/ml) dio lugar a un valor de R que estaba fuera del intervalo de referencia normal (es decir, de control). Es interesante señalar que, cuando los componentes sanguíneos se tratan con ecarina, el valor de R de la sangre enriquecida con dabigatrán se reduce y se acerca al intervalo de referencia normal (véase la fig. 9C). Nótese que la fig. 9C es una vista ampliada de la fig. 8C.

[0147] La figura 10 muestra que la presencia de dabigatrán disminuye la velocidad y el tiempo para lograr la generación del trombo. Estos resultados se reflejan en la tabla 3 a continuación, que miden la TMGT (mm/min) y el TMRTG (min) de la sangre enriquecida. (Véase la fig. 3B para una descripción de estos parámetros).

Tabla 3

[0148] La figura 11A muestra el trazado de TEG con caolín de los componentes sanguíneos enriquecidos con 22 ng/ml de rivaroxabán (línea roja), 89 ng/ml de rivaroxabán (línea verde) y 500 ng/ml de rivaroxabán (línea negra). Como se puede ver en la fig. 11A, la presencia de una dosis alta de rivaroxabán aumenta el valor de R de los componentes sanguíneos analizados de forma dosis-dependiente. La fig. 11B es un gráfico de los valores de R de los componentes sanguíneos enriquecidos con rivaroxabán en comparación con el valor de R del componente sanguíneo de control (es decir, tomado de un voluntario que se sabe que no está tomando un anticoagulante y cuya sangre no se enriqueció con un anticoagulante). Como muestra la fig. 11B, el intervalo de referencia del valor de R para la sangre de control estaba entre aprox. 5 minutos y aprox. 10 minutos, donde el valor de R de control estaba en aprox. 8.2 minutos. La dosis más alta de rivaroxabán (500 ng/ml) dio lugar a que el valor de R que estuviera fuera del intervalo de referencia normal (es decir, de control), mientras que las dos dosis más bajas estuvieran dentro del intervalo de referencia de control. Es interesante señalar que, cuando los componentes sanguíneos se tratan con ecarina, el valor de R de la sangre enriquecida con rivaroxabán se reduce drásticamente y los tres niveles de dosificación se quedan fuera del intervalo de referencia de control (véase la fig. 11C).

Ejemplo 3

[0149] Este método se llevó a cabo para determinar si la TEG se podría usar para identificar la presencia de un anticoagulante en un componente sanguíneo.

[0150] Se analizó la sangre de donantes sanos que se sabía que no están tomando ningún anticoagulante oral y sin ningún otro problema sanitario usando un reactivo FXa o de ecarina en un analizador de hemostasia TEG®.

[0151] El reactivo FXa (es decir, el reactivo factor Xa) se usa para detectar la presencia (o ausencia) de un anticoagulante en el componente sanguíneo analizado. En ausencia de cualquier anticoagulante oral, el reactivo FXa acelerará el proceso de coagulación y dará lugar a un tiempo R muy breve. En presencia de inhibidores directos de la trombina y/o anticoagulante(s) antifactor Xa, el proceso se ralentiza y provocará la prolongación del tiempo R. Esta diferencia en el tiempo R se utiliza para detectar la presencia del anticoagulante oral.

[0152] Si está disponible la muestra anterior y posterior, entonces la diferencia significativa en el tiempo R se usará para detectar la presencia. Sin embargo, en una población de pacientes real, se asume que no se podrá disponer fácilmente de las muestras anteriores (fármaco). En este caso se usará para la detección un intervalo de referencia generado a partir de una muestra de población sana. Si el tiempo R de una muestra de sangre está dentro del intervalo normal, entonces se concluye que no hay anticoagulación oral presente. Si el tiempo R está fuera del intervalo, entonces el resultado indicará la presencia de un anticoagulante oral en esa persona/donante.

[0153] El reactivo de ecarina se usa para clasificar el tipo de anticoagulante. El tiempo R de la prueba de ecarina se usa para diferenciar entre las dos clases disponibles (inhibidores directos de la trombina e inhibidores antiXa). Este reactivo de ecarina se puede usar en combinación con los resultados del reactivo FXa para tomar una decisión. Se generará un intervalo de referencia para una población voluntaria sana de muestra (que no se le administre ningún fármaco) para este reactivo.

[0154] De acuerdo con este método, si el reactivo FXa indica la presencia de un anticoagulante oral, entonces el tiempo R del reactivo de ecarina se analizará frente al intervalo de referencia de ecarina a efectos de clasificación. Si el tiempo R está dentro del intervalo normal de ecarina, entonces el anticoagulante presente será un antiXa. Un tiempo R que está fuera del intervalo (normal de ecarina) indicará la presencia de un inhibidor directo de la trombina.

[0155] El tiempo R generado a partir de múltiples donantes se usó para elaborar un intervalo de referencia. La sangre se enriqueció con inhibidores directos de la trombina o antiXa(s) en concentraciones diferentes y se analizó usando el reactivo FXa o el reactivo de ecarina. Las concentraciones del fármaco elegidas representan los intervalos terapéuticos publicados para estas dos clases de fármacos. Esta prueba se repitió en múltiples donantes para tener en cuenta posibles variaciones de donantes.

[0156] La figura 12 muestra los intervalos de referencia para el tiempo R (en minutos) en presencia del reactivo FXa. La línea de puntos en la fig. 12 representa el intervalo de referencia normal para el reactivo FXa (es decir, el tiempo R de un componente sanguíneo que se sabe que carece de un anticoagulante en presencia del reactivo FXa. En ausencia de cualquier anticoagulante oral, el tiempo R quedará dentro de este intervalo (es decir, estará por debajo de aproximadamente 1.8 minutos). En la fig. 12, AP y RV se refieren a apixabán y rivaroxabán respectivamente y es representativo de dos fármacos antiXa no limitativos. Un inhibidor directo de la trombina (IDT) no limitativo está representado con DB o dabigatrán en la fig. 12. El enriquecimiento in vitro de la sangre del mismo donante (que se sabe que no se le administra un anticoagulante) con uno de los fármacos antiXa (es decir, AP y RV) o con el inhibidor directo de la trombina (es decir, DB) dio lugar a una prolongación del tiempo R dosis-dependiente en comparación con el intervalo de referencia.

[0157] En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del FXa está entre aprox. 1.0 min y aprox. 2.0 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del FXa está entre aprox. 1.5 min y aprox. 1.9 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del FXa está en aprox. 1.8 minutos.

[0158] Como se muestra en la figura 12, una concentración de 100 ng/ml del fármaco en el componente sanguíneo (donde esta cantidad es una cantidad terapéuticamente relevante de AP, RV y DB) eleva el tiempo R al menos 1.25 veces, o al menos 1.5 veces, o al menos 1.75 veces, o al menos 2 veces por encima del intervalo de referencia de aproximadamente 1.8 minutos.

[0159] Se puede detectar la presencia de un anticoagulante inhibidor directo de la trombina en un componente sanguíneo usando tromboelastografía al usar un reactivo de ecarina. La fig. 13 muestra las mediciones del tiempo R en componentes sanguíneos de cuatro donantes, cuya sangre (tras extraerse del donante) se enriqueció con dabigatrán en las cantidades indicadas y se midió mediante tromboelastografía en presencia del reactivo de ecarina. El tiempo R (en minutos) se comparó con el tiempo R obtenido de la sangre del donante sin anticoagulante oral (que se sabe que no se le administra un anticoagulante) tratada con un reactivo de ecarina y se midió mediante tromboelastografía.

[0160] En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del reactivo de ecarina está entre aprox. 1.0 minutos y aprox. 3.5 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del reactivo de ecarina está entre aprox. 1.5 min y aprox. 3.25 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del reactivo de ecarina está entre aprox. 1.9 minutos y aprox. 3 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia del reactivo de ecarina está en aprox. 3.1 minutos.

[0161] Como muestra la figura 13, el intervalo de referencia de un donante concreto puede variar. Por ejemplo, el donante 126 tiene un tiempo R breve sin tratar (es decir, cuando la sangre del donante 126 no se ha enriquecido con DB).

Enriquecer la sangre del donante 126 con 50 ng/ml de DB y medir el tiempo R mediante tromboelastografía en presencia de un reactivo de ecarina dio lugar a un tiempo R aumentado que era dos veces mayor que el tiempo R no tratado de la sangre del donante 126 no enriquecida (es decir, sangre no tratada o de control). Como se muestra en la fig. 13, esto era válido para los otros donantes, así como en comparación con la sangre no enriquecida de los otros donantes. Por otra parte, al usar un tiempo R de aprox. 3.1 minutos como un intervalo de referencia colectivo, la sangre de los donantes 117, 127 y 146 enriquecida con 50 ng/ml de DB (que es menor que la cantidad terapéuticamente relevante de 110 ng/ml de DB, véase Muek et al., arriba) en presencia de ecarina era al menos 1.25 veces, o al menos 1.5 veces mayor que el intervalo de referencia de 3.1 minutos. Al observar los tiempos R de 150 ng/ml de DB (que es una cantidad terapéuticamente relevante de DB), la sangre enriquecida de los cuatro donantes tuvo un tiempo R (en presencia de ecarina) que sobrepasó el intervalo de referencia colectivo de 3.1 minutos por al menos 1.25 veces o al menos 1.4 veces.

[0162] Al usar un reactivo de ecarina se puede detectar la presencia de un fármaco anticoagulante antifactor Xa en un componente sanguíneo mediante tromboelastografía.

[0163] La fig. 14 muestra las mediciones del tiempo R en componentes sanguíneos de cuatro donantes, cuya sangre (tras extraerse del donante) se enriqueció con rivaroxabán (un fármaco antifactor Xa) en las cantidades indicadas y se midió mediante tromboelastografía en presencia del reactivo de ecarina. El tiempo R (en minutos) se comparó con el tiempo R obtenido de la sangre del donante sin anticoagulante oral (es decir, tomada de un paciente que se sabe que no se le administra un anticoagulante) tratada con el reactivo de ecarina y se midió mediante tromboelastografía.

[0164] En la prueba realizada en la figura 14, el tiempo R (en minutos) de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia de ecarina está entre aprox. 1 min y aprox. 4.5 minutos (datos no mostrados). En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia de ecarina está entre aprox. 3.9 min y aprox.

4.2 minutos. En algunos casos, el intervalo de referencia de la sangre de control (es decir, tomada de un donante al que no se le ha administrado un anticoagulante) en presencia de ecarina está en aprox. 4.1 minutos.

[0165] Como se muestra en la figura 14, una concentración que varía entre 50-350 ng/ml del fármaco RV en el componente sanguíneo (donde esto representa una cantidad terapéuticamente relevante de RV) da lugar a un tiempo R que está dentro del intervalo de referencia de aproximadamente 1 a 4.1 minutos. Nótese que el intervalo de referencia del tiempo R de la sangre de control dependerá del paciente del que se haya extraído la muestra de sangre. En algunos casos, el tiempo R de la sangre enriquecida con RV es al menos 1.25 veces o al menos 1.5 veces, o al menos 1.75 veces, o al menos 2 veces más pequeño/lento que el tiempo R límite superior de la sangre de control.

[0166] Se encuentra un resultado similar para otro fármaco antifactor Xa, a saber, apixabán (datos no mostrados).

[0167] Estos resultados de la figura 14 muestran que la ecarina se puede usar para clasificar un anticoagulante como una molécula del factor Xa.

Ejemplo 4

[0168] Detección y clasificación de un anticoagulante mediante el reactivo factor Xa y de ecarina.

[0169] La sangre de un único voluntario humano se analizó mediante tromboelastografía con factor Xa y ecarina antes y después de que se le administrara un anticoagulante por vía oral al voluntario.

[0170] Para estos estudios, los intervalos normales para el reactivo concreto (es decir, factor Xa o ecarina) se determinaron mediante múltiples donantes que se sabe que no están tomando ningún anticoagulante.

[0171] Se sabía que el voluntario humano no estaba tomando (es decir, no se le estaba administrando) un anticoagulante. En este ejemplo, se extrajo la sangre del voluntario antes y después de que se le administrara cualquier anticoagulante al voluntario. Esta es la muestra del componente sanguíneo «anterior». Al voluntario se le administraron por vía oral 20 mg de rivaroxabán, un anticoagulante antifactor Xa. Dos horas y treinta minutos después de la administración oral del rivaroxabán, se volvió a extraer sangre del voluntario. Esta es la muestra del componente sanguíneo «posterior».

[0172] Se analizaron las muestras «anteriores» y «posteriores» mediante tromboelastografía en presencia del factor Xa o en presencia de ecarina. Cuando se determina el tiempo R en presencia del factor Xa, ese tiempo se denomina tiempo de detección. Cuando se determina el tiempo R en presencia de ecarina, ese tiempo se denomina tiempo de clasificación.

[0173] La fig. 15A muestra los resultados de los análisis «anteriores» (es decir, los tiempos R tomados antes de que se le administrara un fármaco anticoagulante al donante). En la fig. 15A la línea horizontal continua en aproximadamente 1.5 minutos (en el tiempo de detección) y la línea horizontal continua en aproximadamente 4.1 minutos (en el tiempo de clasificación) indica el límite superior del intervalo de referencia para el factor Xa y la ecarina, respectivamente, como se determina a partir de múltiples donantes humanos que se sabe que no están tomando un anticoagulante (es decir, donantes de control). Como se muestra en la fig. 15A, en ausencia de cualquier fármaco anticoagulante en la sangre del voluntario (es decir, en las muestras de sangre «anteriores»), el tiempo R para el reactivo de detección (es decir, FXa) queda dentro del intervalo normal (es decir, está por debajo de la línea horizontal) del tiempo de detección como los tiempos R estaban dentro del intervalo normal (es decir, dentro del intervalo de sangre de donantes de control que se sabe que no están tomando un anticoagulante), estos hallazgos confirmaron la ausencia de cualquier anticoagulante en la sangre del voluntario. (Véase también el árbol de decisión en la fig. 6).

[0174] La fig. 15B muestra los resultados de los análisis «anteriores» y «posteriores» (es decir, análisis «posteriores» de los tiempos R tomados después de que se le haya administrado un fármaco anticoagulante al donante) mediante tromboelastografía en presencia del reactivo FXa. Se extrajo sangre 2 horas y 30 minutos después de que se le administraran por vía oral al paciente donante 20 mg de rivaroxabán, un fármaco antiXa. Como en la fig. 15A, la línea horizontal en aproximadamente 1.5 minutos es el límite superior del intervalo de referencia de múltiples donantes que se sabe que no están tomando un anticoagulante en presencia del reactivo FXa (es decir, este es el intervalo de referencia para el tiempo de detección). Como en la fig. 15B, el tiempo de detección «anterior» está dentro (es decir, más breve que) el intervalo de referencia de aproximadamente 1.5 minutos. Sin embargo, el tiempo de detección «posterior» (es decir, 2.5 horas después de que se le administrara rivaroxabán por vía oral al donante) está fuera del intervalo de referencia de 1.5 minutos. De hecho, el tiempo de detección «posterior» es aproximadamente 4.4 minutos; por consiguiente, en este estudio, el tiempo de detección «posterior» es 2.93 veces mayor que el intervalo de referencia tiempo R de 1.5 minutos. El tiempo de detección «posterior» (el tiempo R) fuera del intervalo de referencia en el tiempo de referencia indica la presencia de un anticoagulante (consúltese la fig. 5).

[0175] La fig. 15C muestra los resultados de los análisis «anteriores» y «posteriores» (es decir, análisis «posterior» de los tiempos R tomados después de que se le haya administrado un fármaco anticoagulante al donante) mediante tromboelastografía en presencia del reactivo de ecarina. Se extrajo sangre 2 horas y 30 minutos después de que se le administraran por vía oral al paciente donante 20 mg de rivaroxabán, un fármaco antiXa. Como en la fig. 15A, la línea horizontal en aproximadamente 4.1 minutos es el límite superior del intervalo de referencia en presencia del reactivo de ecarina (es decir, es el intervalo de referencia para el tiempo de clasificación) como se determina a partir de múltiples donantes que se sabe que no están tomando un anticoagulante. Como se muestra en la fig. 15C, debido a los resultados R de la sangre del voluntario «posterior» estaban dentro del intervalo de referencia de ecarina de la sangre de control (es decir, la sangre de donantes que se sabe que no están tomando un anticoagulante), se identificó el anticoagulante en la sangre del voluntario como un reactivo factor Xa y no se identificó como un inhibidor directo de la trombina (véase también el árbol de decisión en la fig. 6).

[0176] Por consiguiente, en las figs. 15A-15C, mediante el reactivo FXa y el reactivo de ecarina en combinación con la prueba de coagulación por tromboelastografía, el análisis de sangre de un voluntario que toma (es decir, se le administra) un anticoagulante fue capaz de confirmar que (a) el voluntario estaba tomando un anticoagulante (como pone de manifiesto el tiempo R aumentado en el tiempo de detección en presencia del Factor Xa en comparación con la sangre de control) y (b) que el anticoagulante que estaba tomando el voluntario era un reactivo antifactor Xa y no era un reactivo inhibidor directo de la trombina (como pone de manifiesto el tiempo R dentro del intervalo de referencia de la sangre de control en presencia de ecarina).

Ejemplo 5

[0177] Los nuevos anticoagulantes orales (ACO) no requieren que supervisión rutinaria, sin embargo, puede ser necesario que se midan los niveles de fármaco en situaciones clínicas como traumatismos y cirugías de urgencia. Los análisis clínicos o de laboratorio de sangre entera no están establecidos para el dabigatrán. La tromboelastografía (TEG®) ha demostrado resultados prometedores en la detección y seguimiento del dabigatrán a través de los cambios en los parámetros hemostáticos.

[0178] Este estudio evaluó el efecto del dabigatrán y su agente reversor específico con el sistema TEG®6S de nueva generación totalmente automatizado.

[0179] El sistema TEG®6S (Haemonetics Corp., Braintree, MA) se basa en mediciones viscoelásticas mediante frecuencia de resonancia y cartuchos microfluídicos multicanal desechables. La sangre y el plasma de voluntarios sanos se enriquecieron con dabigatrán en un intervalo terapéutico (en concentraciones crecientes) y se analizaron con un cartucho para ACO con un canal de inhibidor directo de la trombina (IDT) basado en ecarina. Este canal también se evaluó con plasma porcino a partir de un modelo experimental de traumatismo (n=6) donde se midieron los niveles de dabigatrán con TT diluido (Hemoclot®). Se correlacionó el tiempo R de la TEG 6s con los niveles de fármaco.

[0180] Resultados: in vitro: el tiempo R se correlacionó estrechamente con los niveles de dabigatrán en sangre entera (r2 > 0.95). La correlación significativa también se observó en plasma (r2> 0.6).

[0181] Modelo de traumatismo: el tiempo R se correlacionó significativamente con los niveles de dabigatrán en plasma (r2 > 0.7). El tiempo R en la línea de base estaba en (3.4± 0.6 min, n=4). Tras la administración de dabigatrán, se observó una prolongación significativa del tiempo R observado antes y después del traumatismo con tiempos R >21± 5.9 min La administración del agente reversor idarucizumab devolvió el tiempo R a la línea de base (3.6±0.6 min).

[0182] La tabla 4 resume como se analiza el tiempo R de los diferentes canales para detectar y clasificar los anticoagulantes.

Tabla 4

[0183] El gráfico de barras mostrado en la figura 16 muestra como en las cinco muestras independientes de plasma de cerdo, el tiempo R se prolonga en presencia de un anticoagulante IDT (barras rojas); sin embargo, al administrar el agente reversor idarucizumab, el tiempo R (barra verde) volvió a la línea de base (barras azules). Por consiguiente, cuando se analiza una muestra mediante los métodos descritos en la presente memoria, la identificación y la clasificación de un anticoagulante en la muestra permite la reversión deseada de ese anticoagulante.

[0184] Conclusión: la TEG® 6s tiene el potencial para medir el efecto del dabigatrán en el sistema de hemostasia de forma eficaz en sangre entera, así como plasma en un entorno clínico. Esta tecnología innovadora está completamente automatizada y puede proporcionar resultados clínicamente relevantes con sangre entera en tan solo 5 minutos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Método para detectar la reversión de un anticoagulante en una cantidad terapéuticamente relevante o mayor en un paciente que toma un anticoagulante, comprendiendo el método:

(a) someter una muestra de un componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina de control;

(b) someter una muestra del componente sanguíneo de control que se sabe que carece del anticoagulante a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa de control;

(c) someter una muestra de un componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo de ecarina para obtener una medición de la coagulación por ecarina del paciente;

(d) someter una muestra del componente sanguíneo del paciente a una prueba de coagulación en presencia de un reactivo factor Xa para obtener una medición de la coagulación por factor Xa del paciente; y

(e) comparar la medición de la coagulación por ecarina de control con la medición de la coagulación por ecarina del paciente y comparar la medición de la coagulación por factor Xa de control con la medición por factor Xa del paciente,

donde la medición de la coagulación por ecarina del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por ecarina de control y/o la medición de la coagulación por factor Xa del paciente menor o igual que la medición de la coagulación por factor Xa de control identifica el componente sanguíneo del paciente como que tiene un agente reversor que ha revertido la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente.

2. Método de la reivindicación 1, donde la prueba de coagulación se selecciona de entre el grupo que consiste en una prueba de tiempo de protrombina, una prueba de tiempo parcial de tromboplastina activado, una prueba de tiempo de coagulación activado, y una prueba de coagulación por análisis viscoelástico.

3. Método de la reivindicación 2, donde la prueba de coagulación es una prueba de coagulación por análisis viscoelástico y donde el análisis viscoelástico se realiza usando un recipiente que contiene la muestra en un interior del recipiente.

4. Método de la reivindicación 3, donde el análisis viscoelástico se realiza usando el recipiente y un pin, donde el pin se desplaza respecto al recipiente o donde el recipiente se desplaza respecto al pin.

5. Método de la reivindicación 3, donde el recipiente carece de una superficie inferior.

6. Método de cualquier reivindicación precedente, donde el paciente es un ser humano.

7. Método de cualquier reivindicación precedente, donde el paciente experimenta un estado seleccionado del grupo que consiste en cirugía, traumatismo, hemorragia, accidente cerebrovascular y un episodio tromboembólico.

8. Método de cualquier reivindicación precedente, donde el anticoagulante es un anticoagulante oral, opcionalmente donde el anticoagulante oral es un inhibidor directo de la trombina o un inhibidor del factor Xa.

9. Método de la reivindicación 1, donde la medición de la coagulación por factor Xa de control es un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación por factor Xa de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante, y donde la medición de la coagulación por ecarina de control es un intervalo de al menos dos mediciones de la coagulación por ecarina de al menos dos componentes sanguíneos de control que se sabe que carecen del anticoagulante.

10. Método de la reivindicación 1, donde el agente reversor revierte la actividad anticoagulante de un inhibidor directo de la trombina, opcionalmente donde el agente reversor es idarucizumab.

11. Método de la reivindicación 1, donde el agente reversor revierte la actividad anticoagulante de inhibidor del factor Xa.

12. Método de la reivindicación 11, donde el agente reversor es andexanet.

13. Método de acuerdo con las reivindicaciones 10 u 11, donde el agente reversor es un concentrado de complejo protrombínico.

14. Método de la reivindicación 1, donde la reversión es una reversión completa de la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente.

15. Método de la reivindicación 1, donde la reversión es una reversión parcial de la actividad anticoagulante del anticoagulante en el paciente.