ES2909893T3

ES2909893T3 - Formas de dosificación que comprenden un inhibidor de calicreína plasmática

Info

Publication number: ES2909893T3
Application number: ES18815293T
Authority: ES
Inventors: John Herman Collett; Gary Paul Cook; Jamie Joseph Farrar; Michael John Frodsham; Michael Bryan Roe; Richard Simon Todd; Robert Neil Ward
Original assignee: Kalvista Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Kalvista Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2018-11-28
Publication date: 2022-05-10
Anticipated expiration: 2038-11-28
Also published as: RS63069B1; CY1125227T1; RU2020121151A; HRP20220367T1; PT3716952T; JP7078722B2; ZA202003899B; RU2020121151A3; MX2020005168A; US11234939B2; IL274557B2; IL312036A; NZ764460A; HUE057912T2; DK3716952T3; IL274557B1; IL274557A; US20200345647A1; JP2021504312A; SMT202200112T1

Abstract

Una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A **(Ver fórmula)** en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Kα, expresada en grados 2θ) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3, en donde el término "aproximadamente" significa que hay una incertidumbre en las mediciones de los grados 2θ de ± 0,3 (expresada en grados 2θ).

Description

DESCRIPCIÓN

Formas de dosificación que comprenden un inhibidor de calicreína plasmática

La presente invención se refiere a formas de dosificación sólidas orales que comprenden un inhibidor de la calicreína plasmática, en particular una forma sólida (Forma 1) del compuesto de Fórmula A. También se proporcionan métodos para preparar formas de dosificación sólidas orales que comprenden el compuesto de Fórmula A usando la Forma 1 del compuesto de Fórmula A.

Antecedentes de la invención

Los inhibidores de la calicreína plasmática tienen una serie de aplicaciones terapéuticas, particularmente en el tratamiento de la permeabilidad vascular de la retina asociada con la retinopatía diabética, el edema macular diabético y el angioedema hereditario.

La calicreína plasmática es una serina proteasa similar a la tripsina que puede liberar cininas de los cininógenos (ver K. D. Bhoola et al., "Kallikrein-Kinin Cascade", Encyclopedia of Respiratory Medicine, p483-493; J. W. Bryant et al., "Human plasma kallikrein-kinin system: physiological and biochemical parameters" Cardiovascular and haematological agents in medicinal chemistry, 7, p234-250, 2009; K. D. Bhoola et al., Pharmacological Rev., 1992, 44, 1; y D. J. Campbell, "Towards understanding the kallikrein-kinin system: insights from the measurement of kinin peptides", Brazilian Journal of Medical and Biological Research 2000, 33, 665-677). Es un miembro esencial de la cascada intrínseca de la coagulación sanguínea, aunque su función en esta cascada no implica la liberación de bradicinina ni la escisión enzimática. La precalicreína plasmática está codificada por un único gen y se sintetiza en el hígado. Es secretada por los hepatocitos como una precalicreína plasmática inactiva que circula en el plasma como un complejo heterodímero unido a un cininógeno de alto peso molecular que se activa para dar la calicreína plasmática activa. Las cininas son potentes mediadores de la inflamación que actúan a través de receptores acoplados a proteína G y los antagonistas de las cininas (como los antagonistas de la bradiquinina) se han investigado anteriormente como posibles agentes terapéuticos para el tratamiento de una serie de trastornos (F. Marceau y D. Regoli, Nature Rev., Drug Discovery, 2004, 3, 845-852).

Se piensa que la calicreína plasmática desempeña un papel en varios trastornos inflamatorios. El principal inhibidor de la calicreína plasmática es el inhibidor de la esterasa serpina C1. Los pacientes que presentan una deficiencia genética en el inhibidor de la esterasa C1 padecen de angioedema hereditario (HAE) que produce hinchazón intermitente de la cara, las manos, la garganta, el tracto gastrointestinal y los genitales. Las ampollas formadas durante los episodios agudos contienen altos niveles de calicreína plasmática que escinde el cininógeno de alto peso molecular liberando bradicinina que lleva a una permeabilidad vascular aumentada. Se ha demostrado que el tratamiento con un inhibidor de la calicreína plasmática de proteína grande trata eficazmente e1HAE evitando la liberación de bradicinina que provoca la permeabilidad vascular aumentada (A. Lehmann "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery" Expert Opin. Biol. Ther. 8, p1187-99).

El sistema calicreína-cinina plasmática es anormalmente abundante en pacientes con edema macular diabético avanzado. Recientemente se ha publicado que la calicreína plasmática contribuye a disfunciones vasculares retinales en ratas diabéticas (A. Clermont et al. "Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinal thickening in diabetic rats" Diabetes, 2011, 60, p1590-.98). Además, la administración del inhibidor de la calicreína plasmática ASP-440 mejoró tanto la permeabilidad vascular de la retina como las anomalías del flujo sanguíneo en la retina en ratas diabéticas. Por lo tanto, un inhibidor de la calicreína plasmática debería tener utilidad como tratamiento para reducir la permeabilidad vascular de la retina asociada con la retinopatía diabética y el edema macular diabético.

La calicreína plasmática también desempeña un papel en la coagulación de la sangre. La cascada de coagulación intrínseca puede ser activada por el factor XII (FXII). Una vez que se activa el FXII (a FXIIa), FXIIa desencadena la formación de fibrina a través de la activación del factor XI (FXI), lo que da como resultado la coagulación de la sangre. La calicreína plasmática es un componente clave en la cascada de coagulación intrínseca porque activa FXII a FXIIa, lo que da como resultado la activación de la vía de coagulación intrínseca. Además, FXlla también activa precalicreína plasmática adicional, lo que da como resultado la calicreína plasmática. Esto da como resultado una amplificación de retroalimentación positiva del sistema de calicreína plasmática y la vía de coagulación intrínseca (Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339); Bird et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2012, 107, 1141-50).

El contacto del FXII en la sangre con superficies cargadas negativamente (como las superficies de las tuberías externas o la membrana del oxigenador por el que pasa la sangre durante la cirugía de derivación cardiopulmonar) induce un cambio conformacional en el zimógeno FXII que da como resultado una pequeña cantidad de FXII activo (FXIIa). La formación de FXlla desencadena la formación de calicreína plasmática que da como resultado la coagulación de la sangre, como se ha descrito anteriormente. La activación de FXII a FXlla también puede producirse en el cuerpo por contacto con superficies cargadas negativamente en varias fuentes (por ejemplo, bacterias durante la sepsis, ARN de células en degradación), lo que da como resultado una coagulación intravascular diseminada (Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339)).

Por lo tanto, la inhibición de la calicreína plasmática inhibiría la cascada de coagulación sanguínea descrita anteriormente y, por lo tanto, sería útil en el tratamiento de la coagulación intravascular diseminada y la coagulación sanguínea durante la cirugía de derivación cardiopulmonar donde no se desea la coagulación sanguínea. Por ejemplo, Katsuura et al. (Thrombosis Research, 1996, 82, 361-368) demostraron que la administración de un inhibidor de la calicreína plasmática, PKSI-527, para la coagulación intravascular diseminada inducida por LPS suprimió significativamente la disminución del recuento de plaquetas y el nivel de fibrinógeno, así como el aumento del nivel de FDP que suelen producirse en la coagulación intravascular diseminada. Bird et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2012, 107, 1141-50) demostraron que el tiempo de coagulación aumentó y la trombosis se redujo significativamente en ratones con deficiencia de calicreína plasmática. Revenko et al. (Blood, 2011, 118, 5302-5311) demostraron que la reducción de los niveles de precalicreína plasmática en ratones usando un tratamiento con oligonucleótidos antisentido dio como resultado efectos antitrombóticos. Tanaka et al. (Thrombosis Research 2004, 113, 333-339) demostraron que el contacto de la sangre con DX-88 (un inhibidor de la calicreína plasmática) dio como resultado un aumento del tiempo de coagulación activado (ACT). Lehman et al. (Expert Opin. Biol. Ther. 2008, 1187-99) demostraron que se descubrió que Ecallantide (un inhibidor de la calicreína plasmática) retrasa la coagulación inducida activada por contacto. Lehman et al. concluyen que Ecallantide "tuvo efectos anticoagulantes/n vitro, ya que inhibió la vía intrínseca de la coagulación inhibiendo la calicreína plasmática".

La calicreína plasmática también desempeña un papel en la inhibición de la activación de plaquetas y, por lo tanto, en el cese del sangrado. La activación de plaquetas es uno de los primeros pasos en la hemostasia, que lleva a la formación de tapones de plaquetas y al rápido cese del sangrado después del daño a los vasos sanguíneos. En el sitio de la lesión vascular, la interacción entre el colágeno expuesto y las plaquetas es fundamental para la retención y activación de las plaquetas y el posterior cese del sangrado.

Una vez activada, la calicreína plasmática se une al colágeno y de este modo interfiere con la activación de plaquetas mediada por colágeno mediada por receptores de GPVI (Liu et al. (Nat Med., 2011, 17, 206-210)). Como se ha analizado anteriormente, los inhibidores de la calicreína plasmática reducen la activación de la precalicreína plasmática inhibiendo la activación del factor XII mediada por la calicreína plasmática y reduciendo de este modo la amplificación de retroalimentación positiva del sistema de calicreína por el sistema de activación por contacto.

Por lo tanto, la inhibición de la calicreína plasmática reduce la unión de la calicreína plasmática al colágeno, reduciendo por tanto la interferencia de la calicreína plasmática en el cese del sangrado. Por lo tanto, los inhibidores de la calicreína plasmática serían útiles en el tratamiento de la hemorragia cerebral y el sangrado de la cirugía postoperatoria. Por ejemplo, Liu et al. (Nat Med., 2011, 17, 206-210) demostraron que la administración sistémica de un inhibidor de PK de molécula pequeña, ASP-440, redujo la expansión del hematoma en ratas. El hematoma cerebral puede producirse después de una hemorragia intracerebral y está provocado por el sangrado de los vasos sanguíneos en el tejido cerebral circundante como resultado de una lesión vascular. El sangrado en el modelo de hemorragia cerebral informado por Liu et al. fue inducido por una intervención quirúrgica que implicó una incisión en el parénquima cerebral que dañó los vasos sanguíneos. Estos datos demuestran que la inhibición de la calicreína plasmática redujo el sangrado y el volumen del hematoma de la cirugía postoperatoria. Bjorkqvist et al. (Thrombosis and Haemostasis, 2013, 110, 399-407) demostraron que la aprotinina (una proteína que inhibe las serina proteasas, incluyendo la calicreína plasmática) puede usarse para disminuir el sangrado posoperatorio.

Otras complicaciones de la diabetes como la hemorragia cerebral, nefropatía, cardiomiopatía y neuropatía, todas las cuales tienen asociaciones con la calicreína plasmática, también pueden considerarse como objetivos para un inhibidor de la calicreína plasmática.

Los inhibidores de la calicreína plasmática sintéticos y de molécula pequeña se han descrito con anterioridad, por ejemplo, por Garrett et al. ("Peptide aldehyde...." J. Peptide Res. 52, p62-71 (1998)), T. Griesbacher et al. ("Involvement of tissue kallikrein but not plasma kallikrein in the development of symptoms mediated by endogenous kinins in acute pancreatitis in rats" British Journal of Pharmacology 137, p692-700 (2002)), Evans ("Selective dipeptide inhibitors of kallikrein" WO03/076458), Szelke et al. ("Kininogenase inhibitors" WO92/04371), D. M. Evans et al. (Immunolpharmacology, 32, p115-116 (1996)), Szelke et al. ("Kininogen inhibitors" WO95/07921), Antonsson et al. ("New peptides derivatives" WO94/29335), J. Corte et al. ("Six membered heterocycles useful as serine protease inhibitors" WO2005/123680), J. Stürzbecher et al. (Brazilian J. Med. Biol. Res 27, p1929-34 (1994)), Kettner et al. (US 5,187,157), N. Teno et al. (Chem. Pharm. Bull. 41, p1079-1090 (1993)), W. B. Young et al. ("Small molecule inhibitors of plasma kallikrein" Bioorg. Med. Chem. Letts. 16, p2034-2036 (2006)), Okada et al. ("Development of potent and selective plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies on the structure-activity relationship" Chem. Pharm. Bull. 48, p1964-72 (2000)), Steinmetzer et al. ("Trypsin-like serine protease inhibitors and their preparation and use" WO08/049595), Zhang et al. ("Discovery of highly potent small molecule kallikrein inhibitors" Medicinal Chemistry 2, p545-553 (2006)), Sinha et al. ("Inhibitors of plasma kallikrein" WO08/016883), Shigenaga et al. ("Plasma Kallikrein Inhibitors" WO2011/118672), and Kolte et al. ("Biochemical characterization of a novel high-affinity and specific kallikrein inhibitor", British Journal of Pharmacology (2011), 162(7), 1639-1649). También, Steinmetzer et al. ("Serine protease inhibitors" WO2012/004678) describe análogos de péptidos ciclados que son inhibidores de la plasmina humana y la calicreína plasmática.

Hasta la fecha, el único inhibidor selectivo de la calicreína plasmática aprobado para uso médico es Ecallantide. Ecallantide está formulado como una solución para inyección. Es un inhibidor de la calicreína plasmática de proteína grande que presenta un riesgo de reacciones anafilácticas. Otros inhibidores de la calicreína plasmática conocidos en la técnica son generalmente moléculas pequeñas, algunas de las cuales incluyen grupos funcionales altamente polares e ionizables como guanidinas o amidinas. Recientemente, se han informado inhibidores de la calicreína plasmática que no presentan funcionalidades de guanidina o amidina. Por ejemplo Brandel et al. ("N-((6-amino-pyridin-3-yl)methyl)-heteroaryl-carboxamides as inhibitors of plasma kallikrein" WO2012/017020), Evans et al. ("Benzylamine derivatives as inhibitors of plasma kallikrein" WO2013/005045), Allan et al. ("Benzylamine derivatives" WO2014/108679), Davie et al. ("Heterocyclic derivates" WO2014/188211), y Davie et al. ("N-((het)arylmethyl)-heteroaryl-carboxamides compounds as plasma kallikrein inhibitors" WO2016/083820).

En la fabricación de formulaciones farmacéuticas, es importante que el compuesto activo esté en una forma en la que pueda manipularse y procesarse convenientemente para obtener un proceso de fabricación comercialmente viable. Por consiguiente, la estabilidad química y la estabilidad física del compuesto activo son factores importantes. El compuesto activo, y las formulaciones que lo contienen, deben poder almacenarse eficazmente durante períodos de tiempo apreciables, sin mostrar ningún cambio significativo en las características fisicoquímicas (por ejemplo, composición química, densidad, higroscopicidad y solubilidad) del compuesto activo.

Se sabe que la fabricación de una forma en estado sólido particular de un ingrediente farmacéutico puede afectar a muchos aspectos de sus propiedades en estado sólido y ofrecer ventajas en aspectos de solubilidad, tasa de disolución, estabilidad química, propiedades mecánicas, viabilidad técnica, procesabilidad, farmacocinética y biodisponibilidad. Algunos de estos se describen en "Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use", P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.) (Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich). Los métodos de fabricación de formas de estado sólido también se describen en "Practical Process Research and Development", Neal G. Anderson (Academic Press, San Diego) y "Polymorphism: In the Pharmaceutical Industry", Rolf Hilfiker (Ed) (Wiley VCH). El polimorfismo en cristales farmacéuticos se describe en Byrn (Byrn, S.R., Pfeiffer, R.R., Stowell, J.G., "Solid-State Chemistry of Drugs", SSCI Inc., West Lafayette, Indiana, 1999), Brittain,H.G., "Polymorphism in Pharmaceutical Solids", Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, 1999) o Bernstein (Bernstein, J., "Polymorphism in Molecular Crystals", Oxford University Press, 2002).

El solicitante ha desarrollado una nueva serie de compuestos que son inhibidores de la calicreína plasmática, que se divulgan en la WO2016/083820 (PCT/GB2015/053615). Estos compuestos demuestran una buena selectividad por la calicreína plasmática y son potencialmente útiles en el tratamiento de la retinopatía diabética, el edema macular y el angioedema hereditario. Uno de tales compuestos es N-[(3-fluoro-4-metoxipiridirin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida. El nombre N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida denota la estructura representada en la Fórmula A.

Los intentos iniciales para preparar el compuesto de Fórmula A se realizaron mediante la evaporación del solvente de amoníaco-metanol/DCM al 1% usado durante la cromatografía para producir una espuma con datos de XRPD que muestra principalmente un contenido amorfo. El solicitante desarrolló una nueva forma sólida de este compuesto (en lo sucesivo referida como 'Forma 1') que tiene propiedades fisicoquímicas ventajosas que lo hacen adecuado para el desarrollo. La Forma 1 se divulga en el PCT/GB2017/051579 como Forma 1. El solicitante también desarrolló una nueva forma sólida de este compuesto (en lo sucesivo referida como 'Forma 3') que tiene propiedades fisicoquímicas ventajosas que la hacen adecuada para el desarrollo. La Forma 3 se divulga en el PCT/GB2017/051579 como Forma 3.

Hasta la fecha se han aislado y caracterizado cuatro formas sólidas del compuesto de Fórmula A, que se divulgan en el PCT/GB2017/051579. A estas formas sólidas se hace referencia como 'Forma 1', 'Forma 2', 'Forma 3' y 'Forma 4' en el PCT/GB2017/051579.

Un objeto de la presente invención es proporcionar una forma de dosificación sólida oral que comprende la Forma 1 del compuesto de Fórmula A. La invención también se refiere a proporcionar métodos para preparar formas de dosificación sólidas orales que comprenden el compuesto de Fórmula A usando la Forma 1 del compuesto de Fórmula A.

Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar una forma de dosificación sólida oral que comprende la Forma 3 del compuesto de Fórmula A. La invención también se refiere a proporcionar métodos para preparar formas de dosificación sólidas orales que comprenden el compuesto de Fórmula A usando la Forma 3 del compuesto de Fórmula A.

Descripción de la invención

Por tanto, de acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) en aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3, en donde el término "aproximadamente" significa que hay una incertidumbre en las mediciones de los grados 20 de ± 0,3 (expresada en grados 20). En la presente solicitud, a esta forma sólida puede hacerse referencia como 'Forma 1'.

La Forma 1 del compuesto de Fórmula A tiene propiedades fisicoquímicas ventajosas que la hacen adecuada para el desarrollo. Por ejemplo, los datos de sorción gravimétrica de vapor (GVS) para la Forma 1 del compuesto de Fórmula A, Figura 4, muestran que en condiciones normales (por ejemplo, hasta un 70% de humedad relativa) sólo se produce un aumento relativamente gradual del contenido de agua. Esto es consistente con la ausencia de higroscopicidad significativa. Por el contrario, los materiales amorfos son típicamente significativamente higroscópicos, o incluso delicuescentes, lo que a menudo convierte al material en una goma impracticable. Además, la ausencia de pérdida de peso antes de la fusión de la muestra de la Forma 1 (ver datos STA, Figura 2) indica que la Forma 1 no está hidratada ni solvatada. Los hidratos estables pueden ser inadecuados para el desarrollo farmacéutico porque pueden inducir una transformación no deseable de la forma anhidra administrada del fármaco una vez que el fármaco se encuentra con el entorno acuoso del cuerpo humano. Otra ventaja de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A es que es más fácilmente procesable. Es decir, su preparación por cristalización (ver Ejemplos) es un procedimiento común y fácilmente escalable para eliminar impurezas indeseables.

Los datos de estabilidad divulgados en la presente proporcionan evidencia adicional de la idoneidad de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A para el desarrollo farmacéutico. Dos muestras de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A se almacenaron a 25° C/60% de HR y 40° C/75% de HR envasadas en bolsas dobles de polietileno y selladas en una botella de HDPE. En el punto temporal inicial, la XRPD mostró que la muestra era cristalina y consistente con la Forma 1. Bajo las condiciones de almacenamiento de 25° C/60% de HR y 40° C/75% de HR, la XRPD no mostró cambios después de 1 mes y después de 3 meses. (Figuras 7 y 8).

En la presente memoria descriptiva, los picos de difracción de rayos X en polvo (expresados en grados 20) se miden usando radiación Cu Ka.

La presente invención está definida por las reivindicaciones adjuntas.

En particular, la presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A

en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) en aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3,

en donde el término "aproximadamente" significa que hay una incertidumbre en las mediciones de los grados 20 de ± 0,3 (expresada en grados 20).

En particular, la presente invención proporciona un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A

que comprende los pasos de

(a) mezclar una forma sólida del compuesto de Fórmula A que muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3 con un fluido de granulación que comprende un aglutinante y, opcionalmente, un diluyente, un disgregante y/o un surfactante;

(b) granular la dispersión del paso (a) para formar gránulos;

(c) secar los gránulos;

(d) opcionalmente mezclar los gránulos del paso (b) o (c) con un diluyente, un ácido, un surfactante y/o un lubricante para formar gránulos mezclados; y

(e) comprimir o llenar los gránulos o gránulos mezclados en una forma de dosificación oral sólida,

que comprende los pasos de

(a) dispersar una forma sólida del compuesto de Fórmula A que muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3 en excipiente lipídico fundido;

(b) cargar la dispersión fundida en una cápsula,

que comprende cargar una cápsula con una forma sólida del compuesto de Fórmula A que muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3,

La presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida (Forma 1) del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresado en grados 20) a aproximadamente:

(1) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3; o

(2) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4 y 17,9; o

(3) 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4, 17,9, 21,2 y 22,0.

El término "aproximadamente" significa en este contexto que existe una incertidumbre en las mediciones de los grados 20 de ± 0,3 (expresado en grados 20), preferiblemente de ± 0,2 (expresado en grados 20).

La presente invención también proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos (expresados en grados 20) a aproximadamente

4,4, 11,2, 12,5, 13,2, 14,5, 16,3, 17,4, 17,9, 21,2, 22,0 y 22,6.

La presente invención también proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al mostrado en la Figura 1a.

El patrón de difracción de rayos X en polvo de una forma sólida puede describirse en la presente como "sustancialmente" el mismo que el representado en una Figura. Se apreciará que los picos en los patrones de difracción de rayos X en polvo pueden estar ligeramente desplazados en sus posiciones e intensidades relativas debido a diversos factores conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, pueden producirse desplazamientos en las posiciones de los picos o las intensidades relativas de los picos de un patrón debido al equipo usado, el método de preparación de las muestras, el envasado y las orientaciones preferidos, la fuente de radiación y el método y la duración de la recopilación de datos. Sin embargo, el experto en la técnica podrá comparar los patrones de difracción de rayos X en polvo que se muestran en las figuras de la presente con los de una forma sólida desconocida para confirmar la identidad de la forma sólida.

El experto en la técnica está familiarizado con las técnicas para medir los patrones de XRPD. En particular, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la muestra del compuesto puede registrarse usando un difractómetro Philips X-Pert MPD con las siguientes condiciones experimentales:

Ánodo de tubo: Cu;

Tensión del generador: 40 kV;

Corriente del tubo: 40 mA;

Longitud de onda alfa1: 1,5406 A;

Longitud de onda alfa2: 1,5444 A;

Muestra: 2 mg de muestra bajo análisis comprimida suavemente en el portamuestras de sílice de corte oblicuo único de fondo cero de XRPD.

La presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra un pico endotérmico en su termografía DSC a 151 ± 3° C, preferiblemente a 151 ± 2° C, más preferiblemente a 151 ± 1° C.

La presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un termografía sustancialmente igual a la que se muestra en la Figura 3.

El experto en la técnica está familiarizado con las técnicas para medir termografías DSC. En particular, la termografía dSc de la muestra de compuesto puede registrarse

(a) pesando 5 mg de la muestra en una bandeja de DSC de aluminio y sellando no herméticamente con una tapa de aluminio;

(b) cargando la muestra en un Perkin-Elmer Jade DSC y mantener la muestra a 30° C hasta que se obtenga una respuesta de flujo de calor estable mientras se usa una purga de helio de 20 cm3/min;

(c) calentando la muestra a una temperatura de entre 200 y 300° C a una velocidad de escaneo de 10° C/min y monitorizando la respuesta del flujo de calor resultante mientras se usa una purga de helio de 20 cm3/min.

La presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo como se ha descrito anteriormente y una termografía DSC como se ha descrito anteriormente.

La presente divulgación también proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A, en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al que se muestra en la Figura 6a.

Una referencia a un compuesto particular también incluye todas las variantes isotópicas.

El término "formas sólidas" descrito en la presente incluye formas cristalinas. Opcionalmente, las formas sólidas de la invención son formas cristalinas.

En una realización, la cantidad de la forma sólida del compuesto de Fórmula A en la forma de dosificación oral sólida está entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg, opcionalmente entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 1000 mg, entre aproximadamente 5 mg y aproximadamente 500 mg, entre aproximadamente 8 mg y aproximadamente 200 mg, o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 100 mg.

La forma sólida del compuesto de Fórmula A puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 70% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 5% en peso y aproximadamente el 60% en peso, o entre aproximadamente el 5% en peso y aproximadamente el 50% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

La forma de dosificación sólida oral puede comprender un aglutinante. Cuando está presente, el aglutinante puede comprender uno o más de: metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, povidona, copovidona, gelatina, goma arábiga, etilcelulosa, alcohol polivinílico, almidón, almidón pregelatinizado, agar, tragacanto y alginato de sodio. Preferiblemente, el aglutinante es povidona. Opcionalmente, el aglutinante es Kollidon K25 (una formulación de povidona disponible de BASF Corporation).

La relación en peso del compuesto de Fórmula A al aglutinante puede estar entre aproximadamente 1:0,01 y aproximadamente 1:1, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,03 y aproximadamente 1:0,5 o entre aproximadamente 1:0,05 y aproximadamente 1:0,3.

El aglutinante puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 0,1% en peso y aproximadamente el 30% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 0,5% en peso y aproximadamente el 10% en peso, o entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 5% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un diluyente. El diluyente puede comprender uno o más de: carbonato de calcio, fosfato de calcio dibásico, fosfato de calcio tribásico, sulfato de calcio, celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, dextrinas, excipientes de dextrosa, fructosa, caolín, lactitol, lactosa, lactosa monohidrato, manitol, sorbitol, maltitol, almidón, almidón pregelatinizado y sacarosa. Preferiblemente, el diluyente es celulosa microcristalina. Opcionalmente, el diluyente es Avicel PH 101 y/o Avicel PH 102 (que son ambos excipientes de celulosa microcristalina disponibles de FMC Corporation).

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al diluyente puede estar entre aproximadamente 1:0,1 y aproximadamente 1:500, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,2 y aproximadamente 1:100, entre aproximadamente 1:0,5 y aproximadamente 1:50, entre aproximadamente 1:0,75 y aproximadamente 1:20, o entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:5.

El diluyente puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 99% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 10% en peso y aproximadamente el 70% en peso, o aproximadamente el 20% en peso y aproximadamente el 60% en peso, o aproximadamente el 40% en peso y aproximadamente el 60% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un disgregante. El disgregante puede comprender uno o más de: carboximetilcelulosa cálcica, carboximetilcelulosa sódica, croscarmelosa sódica, polivinilpirrolidona reticulada, glicolato de almidón sódico, silicato de magnesio y aluminio, celulosa en polvo, celulosa microcristalina, hidroxipropilcelulosa de baja sustitución, polacrilina potásica, almidón pregelatinizado, ácido algínico y alginato de sodio. Preferiblemente, el disgregante es croscarmelosa sódica. Opcionalmente, el disgregante es AcDiSol (una formulación de croscarmelosa sódica disponible de FMC Corporation).

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al disgregante puede estar entre aproximadamente 1:0,01 y aproximadamente 1:1, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,03 y aproximadamente 1:0,5, entre aproximadamente 1:0,05 y aproximadamente 1: 0,3 o entre aproximadamente 1:0,08 y aproximadamente 1:0,16.

El disgregante puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 0,1% en peso o aproximadamente el 50% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 0,5% en peso y aproximadamente el 30% en peso, o entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 20% en peso, o entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 10% en peso en base al peso total de la forma farmacéutica sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un lubricante. El lubricante puede comprender uno o más de: estearato de magnesio, estearato de calcio, monoestearato de glicerilo, palmitostearato de glicerilo, aceite de ricino hidrogenado, aceite vegetal hidrogenado, aceite mineral, polietilenglicol, benzoato de sodio, laurilsulfato de sodio, estearilfumarato de sodio, ácido esteárico, talco y estearato de zinc Preferiblemente, el lubricante es estearato de magnesio.

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al lubricante puede estar entre aproximadamente 1:0,001 y aproximadamente 1:1, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,005 y aproximadamente 1:0,5, entre aproximadamente 1:0,0075 y aproximadamente 1: 0,2 o entre aproximadamente 1:0,01 y aproximadamente 1:0,1.

El lubricante puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 0,1% en peso y aproximadamente el 10% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 0,2% en peso y aproximadamente el 5% en peso, o entre aproximadamente el 0,5% en peso y aproximadamente el 2% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un deslizante. El deslizante puede comprender uno o más de: talco, dióxido de silicio coloidal, trisilicato de magnesio, celulosa en polvo, almidón y fosfato de calcio tribásico.

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al deslizante puede estar entre aproximadamente 1:0,01 y aproximadamente 1:1.

El deslizante puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 0,1% en peso y aproximadamente el 10% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 0,2% en peso y aproximadamente el 5% en peso, o entre aproximadamente el 0,5% en peso y aproximadamente el 2% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un ácido. El ácido puede comprender uno o más de: ácido tartárico, ácido maleico, ácido succínico y ácido cítrico. Preferiblemente, el ácido es ácido tartárico. Alternativamente, el ácido puede ser ácido maleico.

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al ácido puede estar entre aproximadamente 1:0,1 y aproximadamente 1:2, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,2 y aproximadamente 1:1.

El ácido puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 40% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 2% en peso y aproximadamente el 30% en peso, o aproximadamente el 5% en peso y aproximadamente el 20% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

Alternativa o adicionalmente, la forma de dosificación sólida oral puede comprender un surfactante. El surfactante puede ser un surfactante iónico o un surfactante no iónico. El surfactante puede comprender uno o más de: laurilsulfato de sodio, polisorbato 20, polisorbato 40 y polisorbato 80. Opcionalmente, el surfactante se selecciona de laurilsulfato de sodio y polisorbato 80. Opcionalmente, el surfactante es laurilsulfato de sodio. Alternativamente, el surfactante puede ser polisorbato 80.

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al surfactante puede estar entre aproximadamente 1:0,01 y aproximadamente 1:1, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,03 y aproximadamente 1:0,5 o entre aproximadamente 1:0,05 y aproximadamente 1: 0.3.

El surfactante puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 20% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 0,5% en peso y aproximadamente el 10% en peso, o entre aproximadamente el 1% en peso y aproximadamente el 5% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

La forma de dosificación sólida oral puede comprender un excipiente lipídico. El excipiente lipídico puede comprender uno o más de: ésteres de ácidos grasos de sacarosa como estearato de sacarosa, palmitato de sacarosa, laurato de sacarosa, behenato de sacarosa, oleato de sacarosa, erucato de sacarosa y similares, y mezclas de los mismos; derivados de fosfolípidos, derivados de fosfatidilo, derivados de glicosilceramidas, derivados de ácidos grasos, surfactantes no iónicos, derivados de polietilenglicol de succinato de tocoferol de vitamina E (incluyendo el succinato de polietilenglicol de D-a-tocoferol (TPGS)), monooleato de glicerilo, surfactantes de la serie Gelucire® (que incluyen, por ejemplo, Gelucire 44/14, Gelucire 33/01 y Gelucire 50/13), y derivados de glicéridos. Opcionalmente, el excipiente lipídico es Gelucire 44/14 y/o succinato de polietilenglicol D-a-tocoferol (TPGS). Preferiblemente, el excipiente lipídico es succinato de polietilenglicol de D-a-tocoferol (TPGS). Alternativamente, el excipiente lipídico es Gelucire 44/14.

El punto de fusión del excipiente lipídico puede ser mayor de aproximadamente 25° C, mayor de aproximadamente 30° C, mayor de aproximadamente 35° C o mayor de aproximadamente 40° C. Opcionalmente, el punto de fusión del excipiente lipídico puede ser mayor de aproximadamente 35° C.

El punto de fusión del excipiente lipídico puede ser menor de aproximadamente 100° C, menor de aproximadamente 70° C, menor de aproximadamente 60° C o menor de aproximadamente 50° C. Opcionalmente, el punto de fusión del excipiente lipídico puede ser menor de aproximadamente 50° C.

La relación en peso de la forma sólida del compuesto de Fórmula A al excipiente lipídico puede estar entre aproximadamente 1:0,1 y aproximadamente 1:100, opcionalmente entre aproximadamente 1:0,5 y aproximadamente 1:50, entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:50, o entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:20.

El excipiente lipídico puede estar presente en una cantidad de entre aproximadamente el 10% en peso y aproximadamente el 99% en peso, opcionalmente entre aproximadamente el 50% en peso y aproximadamente el 95% en peso, o entre aproximadamente el 60% en peso y aproximadamente el 90% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede estar en forma de cápsula. La cubierta de la cápsula puede estar hecha de gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa o almidón. Opcionalmente, la cubierta de la cápsula está hecha de gelatina. Opcionalmente, la cubierta de la cápsula está hecha de hidroxipropilmetilcelulosa.

Alternativamente, la forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede estar en forma de comprimido.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede comprender un recubrimiento, que puede estar en forma de película. El recubrimiento puede ser un recubrimiento entérico. Un recubrimiento entérico es insoluble en el pH fuertemente ácido del estómago, pero soluble en las condiciones menos ácidas del intestino delgado. El recubrimiento puede tener una masa/área de entre aproximadamente 1 mg/cm2 y aproximadamente 10 mg/cm2, opcionalmente entre aproximadamente 2 mg/cm2 y aproximadamente 8 mg/cm2, o entre aproximadamente 3 mg/cm2 y aproximadamente 7 mg/cm2.

El recubrimiento puede tener una masa de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 100 mg, opcionalmente entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 80 mg, o entre aproximadamente 30 mg y aproximadamente 70 mg.

La masa del recubrimiento por área superficial de una forma de dosificación de tamaño 0, opcionalmente en forma de cápsula, puede estar entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 100 mg, opcionalmente entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 80 mg, o entre aproximadamente 30 mg y aproximadamente 70 mg.

El recubrimiento entérico puede comprender un polímero entérico que puede comprender uno o más de: goma laca, acetato de celulosa, ftalato de acetato de celulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, trimelitato, ftalato de polivinilacetato o polímeros a base de metacrilato como Eudragit L, Eudragit L100, Eudragit S, Eudragit S100, Eudragit L30D y Eudragit L30-D55. Preferiblemente, el recubrimiento entérico es Eudragit L30-D.55.

El recubrimiento entérico también puede comprender un plastificante. El plastificante puede comprender uno o más de: citrato de trietilo, ftalato de dibutilo, polietilenglicoles, propilenglicol, ftalato de dietilo, citrato de acetiltrietilo. Preferiblemente, el plastificante es citrato de trietilo.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede comprender una película envuelta alrededor del núcleo de la forma de dosificación. Los ejemplos de materiales de película adecuados incluyen HPMC, gelatina y polímeros Eudragit. Preferiblemente, el material de la película es HPMC.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede comprender uno o más ingredientes activos adicionales.

La presente invención también proporciona un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A, que comprende los pasos de

(b) granular la dispersión del paso (a) para formar gránulos;

(c) secar los gránulos;

(e) comprimir o llenar los gránulos o gránulos mezclados en una forma de dosificación oral sólida.

El fluido de granulación puede comprender además agua.

El secado en el paso (c) puede realizarse a una temperatura mayor de a aproximadamente 45° C, preferiblemente mayor de a aproximadamente 55° C. El secado en el paso (c) puede realizarse a una temperatura de entre aproximadamente 45° C y aproximadamente 90° C, preferiblemente entre aproximadamente 50° C y aproximadamente 80° C.

En el paso (e), los gránulos o los gránulos mezclados pueden comprimirse en una forma de dosificación oral sólida en forma de comprimido.

(a) dispersar una forma cristalina del compuesto de Fórmula A que presenta por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3 en lípido fundido excipiente; y

(b) cargar la dispersión fundida en una cápsula.

La presente invención también proporciona un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A, que comprende cargar una cápsula con una forma cristalina del compuesto de Fórmula A que muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3.

Debe entenderse que los componentes usados en los métodos de la presente invención (por ejemplo, aglutinante, diluyente, disgregante, surfactante, ácido y excipiente lipídico) son los mismos componentes que se describen para las formas de dosificación sólidas orales de la presente invención, y cualquier definición y/o limitación descrita para estos componentes puede aplicarse de igual manera a los componentes usados en los métodos de la presente invención.

La presente invención también proporciona una forma de dosificación sólida oral que puede obtenerse mediante cualquiera de los métodos de la presente invención.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención tiene una serie de aplicaciones terapéuticas, particularmente en el tratamiento de enfermedades o afecciones mediadas por la calicreína plasmática.

Por consiguiente, la presente invención proporciona una forma de dosificación sólida oral que comprende la Forma 1 del compuesto de Fórmula A, para uso en terapia.

La presente invención también proporciona una forma de dosificación sólida oral como se describe en la presente para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o afección mediada por calicreína plasmática.

La presente divulgación también proporciona un método de tratamiento de una enfermedad o afección mediada por calicreína plasmática, dicho método comprendiendo administrar a un mamífero con necesidad de dicho tratamiento una forma de dosificación sólida oral como se describe en la presente.

La presente invención también proporciona el uso de una forma de dosificación sólida oral como se describe en la presente en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática.

En un aspecto, la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática se selecciona de agudeza visual deteriorada, retinopatía diabética, permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética, edema macular diabético, angioedema hereditario, oclusión de la vena retiniana, diabetes, pancreatitis, hemorragia cerebral, nefropatía, cardiomiopatía, neuropatía, enfermedad inflamatoria intestinal, artritis, inflamación, choque séptico, hipotensión, cáncer, síndrome de dificultad respiratoria del adulto, coagulación intravascular diseminada, coagulación sanguínea durante cirugía de derivación cardiopulmonar y sangrado de cirugía posoperatoria. En una realización preferida, la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática es edema macular diabético. En otra realización preferida, la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática es angioedema hereditario.

Alternativamente, la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática puede seleccionarse de la permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética, edema macular diabético y angioedema hereditario. Alternativamente, la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática puede ser la permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética o edema macular diabético.

En el contexto de la presente invención, las referencias en la presente a "tratamiento" incluyen referencias a tratamientos curativos, paliativos y profilácticos, a menos que existan indicaciones específicas de lo contrario. Los términos "terapia", "terapéutico" y "terapéuticamente" deben interpretarse de la misma manera.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede administrarse sola o en combinación con uno o más de otros principios activos farmacéuticos. A este respecto, la forma de dosificación sólida oral puede comprender además otro ingrediente activo farmacéutico. Alternativamente, la forma de dosificación oral de la invención puede coadministrarse (concurrente, consecutiva o secuencialmente) con una o más formas de dosificación separadas adicionales que incorporan los otros principios activos farmacéuticos.

En otro aspecto, la forma de dosificación sólida oral de la presente invención puede administrarse en combinación con el tratamiento con láser de la retina.

Para la administración a pacientes humanos, la dosis diaria total del compuesto de Fórmula A está típicamente en el intervalo de aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 10.000 mg, o entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 5000 mg, o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 1000 mg dependiendo de, por supuesto, el modo de administración.

La dosis diaria total puede administrarse en dosis individuales o divididas y, a discreción del médico, puede estar fuera del intervalo típico que se proporciona en la presente. Estas dosificaciones se basan en un sujeto humano promedio que tiene un peso de aproximadamente 60 kg a 70 kg. El médico podrá determinar fácilmente las dosis para sujetos cuyo peso se encuentre fuera de este intervalo, como los bebés y los ancianos.

La forma de dosificación sólida oral de la presente invención está destinada a administrarse por vía oral. La administración oral puede implicar la deglución, de tal manera que el compuesto se introduzca en el tracto gastrointestinal, y/o la administración bucal, lingual o sublingual mediante la cual el compuesto se introduce en el torrente sanguíneo directamente desde la boca.

La invención se ilustrará ahora mediante los siguientes ejemplos no limitativos. En los ejemplos se presentan las siguientes figuras:

Figura 1a: Patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 1). Figura 1b: Patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 2). Figura 1c: Patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 3). Figura 2: STA de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 1).

Figura 3: Termógrafo DSC de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 1).

Figura 4: Isotermas gravimétricas de sorción de vapor (adsorción y desorción) de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 1).

Figura 5: Patrón de difracción de rayos X en polvo (parte superior) del compuesto de Fórmula A después de la suspensión de la Forma 1 con 90:10 de IPA:agua. El patrón de difracción de rayos X en polvo inferior es de la Forma 1 como referencia (Ejemplo 1).

Figura 6a: Patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma 3 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 4a). Figura 6b: Patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma 5 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 4c). Figura 6c: Termografía DSC de la Forma 5 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 4c).

Figura 6d: Distribución del tamaño de partículas de la Forma 5 del compuesto de Fórmula A.

Figura 6e: Isotermas gravimétricas de sorción de vapor (adsorción y desorción) de la Forma 5 del compuesto de Fórmula A (Ejemplo 4c).

Figura 7: Patrones de difracción de rayos X en polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A durante un estudio de estabilidad a 25° C/60% de HR a los 0 días (parte superior), 1 mes (medio) y 3 meses (parte inferior).

Figura 8: Patrones de difracción de rayos X en polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A durante un estudio de estabilidad a 40° C/75% de HR a los 0 días (parte superior), 1 mes (medio) y 3 meses (parte inferior).

Figura 9: Curvas de disolución de la cápsula llena de TPGS en HCl 0,1 M y tampón de pH 3, inicialmente y después del almacenamiento a 25° C y 40° C.

Figura 10: Curvas de disolución de la cápsula llena de Gelucire 44/14 en HCl 0,1 M y tampón de pH 3, inicialmente y después del almacenamiento a 25° C y 40° C.

Detalles Experimentales Generales

En los siguientes ejemplos, se usan las siguientes abreviaturas y definiciones:

Todas las reacciones se llevaron a cabo en atmósfera de nitrógeno a menos que se especifique lo contrario.

Los espectros de ¹H NMR se registraron en un espectrómetro Bruker (400 MHz) o en un JEOL (400 MHz) con referencia al solvente de deuterio y a ta.

Los iones moleculares se obtuvieron usando LCMS que se llevó a cabo usando una columna Chromolith Speedrod RP-18e, 50 x 4,6 mm, con un gradiente lineal del 10% al 90% 0,1% de HCO²H/MeCN en 0,1% de HCO²H/H²O durante 13 min, caudal de 1,5 ml/min, o usando Agilent, X-Select, ácido, 5-95% de MeCN/agua durante 4 min. Los datos se recopilaron usando un espectrómetro de masas Thermofinnigan Surveyor MSQ con ionización por electropulverización junto con un sistema Thermofinnigan Surveyor LC.

Alternativamente, los iones moleculares se obtuvieron usando LCMS que se llevó a cabo usando una columna Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2,7 pm, 3,0 x 50 mm) con ácido fórmico al 0,1% v/v en agua [eluyente A]; MeCN [eluyente B]; Caudal de 0,8 ml/min y tiempo de equilibrio de 1,5 minutos entre muestras, el gradiente se muestra a continuación. La detección de masas se proporcionó con un espectrómetro de masas API 2000 (electropulverización).

Gradiente:

Cuando los productos se purificaron mediante cromatografía ultrarrápida, "sílice" se refiere a gel de sílice para cromatografía, de 0,035 a 0,070 mm (de 220 a 440 mesh) (por ejemplo, gel de sílice Merck 60) y una presión de nitrógeno aplicada de hasta 10 psi de elución en columna acelerada. Las purificaciones por HPLC preparativa de fase inversa se llevaron a cabo usando un sistema de bombeo de gradiente binario Waters 2525 a caudales de típicamente 20 ml/min usando un detector de matriz de fotodiodos Waters 2996.

Todos los solventes y reactivos comerciales se usaron tal como se recibieron.

Los nombres químicos se generaron usando un software automatizado, como el software Autonom proporcionado como parte del paquete ISIS Draw de MDL Information Systems o el software Chemaxon proporcionado como un componente de MarvinSketch o como un componente del IDBS E-WorkBook.

Los patrones de difracción de rayos X en polvo se recogieron en un difractómetro Philips X-Pert MPD y se analizaron usando las siguientes condiciones experimentales (Método A), a menos que se especifique lo contrario:

Ánodo de tubo: Cu

Tensión del generador: 40 kV

Corriente del tubo: 40 mA

Longitud de onda alfal: 1,5406 A

Longitud de onda alfa2: 1,5444 A

Ángulo de inicio [20]: 4

Ángulo final [20]: 40

Escaneo continuo

Aproximadamente 2 mg de la muestra bajo análisis se comprimieron suavemente en el portamuestras de sílice de corte oblicuo simple de fondo cero de XRPD. A continuación, la muestra se cargó en el difractómetro para su análisis.

Cuando se especifica, los patrones de difracción de rayos X en polvo se recogieron usando el siguiente método (Método B):

Los estudios de difracción de rayos X en polvo se realizaron usando un Bruker AXS D2 PHASER (D2-205355) en configuración Bragg-Brentano, equipo N°2353. Se usa un ánodo de Cu a 30 kV, 10 mA, rotación estándar de etapa de muestra (5/min) con parada de haz y monocromatización mediante un filtro Kp (0,59% Ni). Las rendijas que se usan son rendijas de divergencia fija de 1,0 mm (=0,61°), rendija de Soller axial primaria de 2,5° y rendija de Soller axial secundaria de 2,5°. El detector es un detector lineal LYNXEYE con abertura de detector de rendija de recepción de 5°. El portamuestras estándar (cavidad de 0,1 mm en oblea de silicio (510)) tiene una contribución mínima a la señal de fondo. Las condiciones de medición: rango de escaneo 5-45° 20, rotación de la muestra 5 rpm, 0,5 s/paso, 0,010°/paso, rendija del detector de 3,0 mm; y todas las condiciones de medición se registran en el archivo de control del instrumento. El software usado para la toma de datos es Diffrac. Comandante v4.0. El análisis de datos se realiza usando el software de evaluación Diffrac.Eva V4.1. No se aplica corrección de fondo ni suavizado a los patrones.

Los datos de DSC se recopilaron usando el método siguiente: se pesaron aproximadamente 5 mg de cada muestra en una bandeja de DSC de aluminio y se selló de no herméticamente con una tapa de aluminio. Luego, la muestra se cargó en un Perkin-Elmer Jade DSC y se mantuvo a 30° C. Una vez que se obtuvo una respuesta de flujo de calor estable, la muestra se calentó a una temperatura entre 200 y 300° C a una tasa de escaneo de 10° C/min y se monitorizó la respuesta de flujo de calor resultante. Se usó una purga de helio de 20 cm3/min. Antes del análisis, se verificó la temperatura y el flujo de calor del instrumento usando un estándar de indio.

Los datos de sorción gravimétrica de vapor (GVS) se recopilaron usando el método siguiente: se colocaron aproximadamente 10 mg de muestra en una bandeja de balanza de sorción de vapor de malla de alambre y se cargaron en una balanza de sorción de vapor 'IgaSorp' (Hiden Analytical Instruments). Luego, la muestra se secó manteniendo un entorno con una humedad del 0% hasta que no se registraron más cambios de peso. Posteriormente, la muestra se sometió a un perfil de rampa del 0-90% de HR en incrementos de 10% de HR, manteniendo la muestra en cada paso hasta que se alcanzó el equilibrio (99% de finalización del paso). Tras alcanzar el equilibrio, el % de HR dentro del aparato se elevó al paso siguiente y se repitió el procedimiento de equilibrio. Después de completar el ciclo de sorción, la muestra se secó usando el mismo procedimiento. Luego se monitorizaron los cambios de peso durante los ciclos de sorción/desorción, permitiendo que se determinase la naturaleza higroscópica de la muestra.

Los datos del análisis térmico simultáneo (STA) se recopilaron usando el método siguiente: se pesaron con precisión aproximadamente 5 mg de muestra en un crisol de cerámica y se colocaron en la cámara del analizador Perkin-Elmer STA 600 TGA/DTA a temperatura ambiente. Luego, la muestra se calentó a una velocidad de 10° C/min, típicamente de 25° C a 300° C, tiempo durante el cual se monitorizó el cambio de peso, así como la señal de DTA. El gas de purga utilizado fue nitrógeno a un caudal de 20 cm3/min.

I. Preparación de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A

A. 1-(4-hidroximetil-bencil)-1H-piridin-2-ona

Se disolvió alcohol 4-(clorometil)bencílico (5,0 g, 31,93 mmol) en acetona (150 ml). Se añadieron 2-hidroxipiridina (3,64 g, 38,3 mmol) y carbonato de potasio (13,24 g, 95,78 mmol) y la mezcla de la reacción se agitó a 50° C durante 3 horas, después de lo cual el solvente se eliminó al vacío y el residuo se recogió en cloroformo (100 ml). Esta solución se lavó con agua (30 ml), salmuera (30 ml), se secó (Na²SÜ⁴) y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (sílice), eluyente MeOH al 3%/CHCl³al 97%, para dar un sólido blanco identificado como 1-(4-hidroximetil-bencil)-1H-piridin-2-ona (5,30 g, 24,62 milimoles, 77% de rendimiento).

[M+Na]⁺= 238

B. 1-(4-clorometil-bencil)-1H-piridin-2-ona

Se enfriaron 1-(4-hidroximetil-bencil)-1H-piridin-2-ona (8,45 g, 39,3 mmol), DCM seco (80 ml) y trietilamina (7,66 ml, 55,0 mmol) en un baño de hielo. Se añadió cloruro de metanosulfonilo (3,95 ml, 51,0 mmol) y se agitó en un baño de hielo durante 15 min. Se retiró el baño de hielo y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de la reacción se repartió entre DCM (100 ml) y solución acuosa saturada de NH⁴Cl (1,00 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM adicional (2 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na²SO⁴, se filtraron y se concentraron para dar 1-(4-clorometil-bencil)-1H-piridin-2-ona (8,65 g, 36,6 mmol, 93% de rendimiento) como un sólido amarillo pálido.

[MH]⁺= 234,1

C.3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxilato de metilo

Se añadió carbonato de potasio (519 mg, 3,76 mmol) a una solución de 3-(metoximetil)-1H-pirazol-4-carboxilato de metilo (320 mg, 1,88 mmol; N° CAS 318496-66-1 (sintetizado de acuerdo con el método descrito en la W02012/009009)) y 1-(4-(clorometil)bencil)piridin-2(1H)-ona (527 mg, 2,26 mmol) en DMF (5 ml) y se calentó a 60° C durante la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con salmuera (2 x 100 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se redujo al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (columna de 40 g, 0-100% de EtOAc en isohexanos) para proporcionar dos regioisómeros. El segundo isómero de la columna se recogió para proporcionar 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxilato de metilo (378 mg, 1,01 mmol, 53,7% de rendimiento) como una goma incolora.

[MH]⁺= 368,2

D. Ácido 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxílico

A 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxilato de metilo (3,77 g, 10,26 mmol) en THF (5 ml)) y MeOH (5 ml) se le añadió solución de NaOH 2M (15,39 ml, 30,8 mmol) y se agitó a ta durante la noche. Se añadió HCl 1M (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se redujo al vacío para dar ácido 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxílico (1,22 g, 3,45 mmol, 33,6% de rendimiento) como un polvo blanco.

[MH]⁺= 354,2

E. 3-Fluoro-4-metoxi-piridina-2-carbonitrilo

A un vial grande para microondas, se le añadió cianuro de cobre (I) (1,304 g, 14,56 mmol) a una solución de 2-bromo-3-fluoro-4-metoxipiridina (1 g, 4,85 mmol) en DMF (5 ml). El vial de reacción se selló y se calentó a 100° C durante 16 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con agua (20 ml) y EtOAc (20 ml). La suspensión espesa se sonicó y requirió agua adicional (40 ml) y EtOAc (2 x 50 ml) con sonicación para romper el precipitado sólido. Las capas combinadas se filtraron a través de un tapón de celite y la capa orgánica se aisló, se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el solvente se eliminó a presión reducida para dar un sólido verde pálido identificado como el compuesto deseado 3- fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (100 mg, 0,578 mmol, 12% de rendimiento)

F. Éster terc-butílico del ácido (3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-ilmetil)-carbámico

Se disolvió 3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (100 mg, 0,578 mmol) en metanol anhidro (10 ml, 247 mmol) y se añadió hexahidrato de cloruro de níquel (14 mg, 0,058 mmol) seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (255 mg, 1,157 mmol). La solución de color verde pálido resultante se enfrió en un baño de hielo y sal a -5° C y luego se añadió en porciones borohidruro de sodio (153 mg, 4,05 mmol) manteniendo la temperatura de reacción a ~0° C. La solución de color marrón oscuro se dejó agitar a 0° C y se dejó calentar lentamente a ta y luego se dejó agitar a ta durante 3 horas. La mezcla de la reacción se evaporó hasta la sequedad a 40° C para proporcionar un residuo negro que se diluyó con DCM (10 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio (10 ml). Se formó una emulsión por lo que los compuestos orgánicos se separaron a través de un cartucho separador de fases y se concentraron. El líquido bruto se purificó por cromatografía eluyendo con EtOAc/iso-hexano para proporcionar el compuesto del título, Éster terc-butílico del ácido (3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-ilmetil)-carbámico como un aceite amarillo transparente (108 mg, 62% de rendimiento)

[MH]⁺= 257

G. Sal de clorhidrato de C-(3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-il)-metilamina

Se recogió éster terc-butílico del ácido (3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-ilmetil)-carbámico (108 mg, 0,358 mmol) en alcohol isopropílico (1 ml) y luego se añadió HCl (6N en alcohol isopropílico) (1 ml, 0,578 mmol) a ta y se dejó en agitación a 40° C durante 2 horas. La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida y luego se trituró con éter, se sonicó y luego se decantó para dar un sólido de color crema (75 mg, 55% de rendimiento) identificado como sal de clorhidrato de C-(3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-il)-metilamina.

[MH]⁺= 157

Ejemplo______ 1_______-______ N-[(3-Fluoro-4-metox¡p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l]-3-(metox¡met¡l)-1 -({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil1fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 1)

Se disolvieron ácido 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxílico (825 mg, 2,34 mmol) y sal de clorhidrato de C-(3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-il)-metilamina (450 mg, 2,34 mmol) en DCM mientras se enfriaban a 0° C. Se añadieron clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (627,0 mg, 3,27 mmol), HOBt (378,8 mg, 2,80 mmol) y trietilamina (1,63 ml, 1182 mmol) mientras se agitaba, la mezcla se dejó calentar a ta y se continuó agitando durante 20 horas. Se añadió cloroformo (50 ml), la mezcla se lavó con NaHCO^asaturado (ac) y se redujo al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía eluyendo con metanol/DCM. El solvente se eliminó al vacío y el sólido resultante se trituró con éter dietílico. Los sólidos resultantes se recogieron por filtración para proporcionar el compuesto del título.

[MH]⁺= 492.0

NMR (CD³OD) ó: 3.41 (3H, s), 4.03 (3H, s), 4.65 (2H, s), 4.72 (2H, d, J=2.3Hz), 5.24 (2H, s), 5.37 (2H, s), 6.44 (1H, td, J = 1.4, 6.8Hz), 6.62 (1H, d, J = 9.0Hz), 7.18-7.22 (1H, m), 7.31-7.38 (4H, m), 7.56-7.60 (1H, m), 7.75 (1H, dd, J = 1.9, 7.1Hz), 8.18 (1H, s), 8.27 (1H, d, J = 5.6Hz) ppm.

En la Figura 1 a se muestra un difractograma XRPD del compuesto de Fórmula A (Forma 1).

Tabla de posiciones de picos:

continuación

Análisis térmico simultáneo (STA)

Los datos de STA para la Forma 1 se muestran en la Figura 2.

Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

Los datos de DSC para la Forma 1 se muestran en la Figura 3.

Sorción gravimétrica de vapor (GVS)

Los datos de GVS para la Forma 1 se enumeran en la tabla siguiente y se muestran en la Figura 4.

Estudios de lechadas

La Forma 1 (20 mg) se suspendió en 90/10 IPA/agua (200 pl o 300 pl) y se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El sobrenadante se evaporó en lugar de filtrarse debido al pequeño volumen y el sólido resultante se examinó por XRPD (Figura 5). El XRPD resultante (Figura 5) era diferente al de la Figura 1a lo que indicó que la base libre probablemente tiene tendencia a formar hidratos.

Solubilidad acuosa visible

Se pesó la Forma 1 (10 mg) en un vial de vidrio y se añadió agua en porciones de 100 pl hasta 3 ml y posteriormente en porciones de 1 ml. La solubilidad se evaluó visualmente después de un breve período de equilibrio.

La Forma 1 no dio ninguna indicación de que se disolviera en absoluto en 20 ml de agua (<< 0,5 mg/ml).

Ejemplo_______2_______-______ N-[(3-fluoro-4-metox¡p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡n-3-(metox¡met¡l)-1-(l4-[(2-oxop¡r¡d¡n-1-¡l)met¡l1fen¡l}met¡l)p¡razol-4-carboxam¡da (Forma 1)

Se disolvieron ácido 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxílico (825 mg, 2,34 mmol) y sal de clorhidrato de C-(3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-il)-metilamina (450 mg, 2,34 mmol) en DCM mientras se enfriaba a 0° C. Se añadieron clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (627,0 mg, 3,27 mmol), HOBt (378,8 mg, 2,80 mmol) y trietilamina (1,63 ml, 1182 mmol) mientras se agitaba, la mezcla se dejó calentar a ta y se continuó agitando durante 20 horas. Se añadió cloroformo (50 ml), la mezcla se lavó con NaHCOa saturado (ac) y se redujo al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía eluyendo con metanol/DCM. El sólido resultante se disolvió en MeCN caliente, se dejó enfriar y precipitó, y los sólidos resultantes se recogieron por filtración para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (1,30 mg, 11% de rendimiento).

En la Figura 1b se muestra un difractograma de XRPD (registrado usando el Método B) del compuesto de Fórmula A (Forma 1). El difractograma de XRPD (Figura 1b) de los sólidos aislados confirmó que tenían la misma forma sólida que la Forma 1 (Ejemplo 1) (Figura 1a).

T l i i n i :

Ejemplo_______3_______-______ N-[(3-fluoro-4-metox¡p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡n-3-(metox¡met¡l)-1-(l4-[(2-oxop¡r¡d¡n-1-¡l)met¡l1fen¡l}met¡l)p¡razol-4-carboxam¡da (Forma 1)

Se disolvió ácido 3-(metoximetil)-1-(4-((2-oxopiridin-1(2H)-il)metil)bencil)-1H-pirazol-4-carboxílico (61 g, 0,173 mol) en DMF (400 ml) y se añadió en porciones 1,1 '-carbonildiimidazol (27,99 g, 0,173 mol). Una vez que se hubo completado la adición, la reacción se calentó a 50° C durante 2 horas. Se añadió C-(3-fluoro-4-metoxi-piridin-2-il)-metilamina (26,95 g, 0,173 mol) a la mezcla de la reacción en porciones. La reacción se calentó a 50° C durante la noche. La reacción se enfrió a ta y se añadió gota a gota a una mezcla 3:1 de agua y NaHCO3 saturado (ac) (4000 ml). La suspensión resultante se agitó durante 30 min antes de aislar los sólidos por filtración. Los sólidos se lavaron con agua (2 x 500 ml) antes de secarlos en un horno de vacío para dar 119 g del producto bruto. El producto bruto se combinó con otros dos lotes separados (comenzando con 0,173 mol y 0,0874 mol del material de partida de ácido respectivamente) y se suspendieron juntos en IPA (1400 ml) y se calentaron a reflujo. Se añadieron porciones adicionales de IPA hasta que todo el material se hubo disuelto a reflujo (se añadieron un total de 2000 ml de IPA). La solución se mantuvo a reflujo durante 30 min antes de enfriarse a ta. La mezcla se enfrió adicionalmente con un baño de hielo/agua durante 30 min antes de que el producto se recogiera por filtración. Los sólidos se lavaron con IPA y se secaron para dar 167,2 g del producto del título (78,5% de rendimiento).

[MH]⁺= 491.9

El espectro de NMR (CD³OD) se ajustaba al espectro de NMR de la Forma A.

Un difractograma de XRPD (registrado usando el Método B) de los sólidos aislados (Figura 1c) confirmó que tenían la misma forma sólida que la Forma 1 (Ejemplo 1 y Ejemplo 2) (Figuras 1 ay1 b).

Tabla de posiciones de picos:

Datos de estabilidad

Una muestra de la Forma 1 se envasó en bolsas dobles de polietileno y se selló en una botella de HDPE y se almacenó en condiciones de 25° C/60% de HR. La muestra se volvió a analizar después de 1 mes y 3 meses por XRPD (usando el Método B). Los datos se muestran en la Figura 7. No se observó ningún cambio en el difractograma de XRPD cuando la muestra se almacenó a 25° C/60% de HR después de 1 o 3 meses.

Se llevaron a cabo pruebas adicionales en la muestra de la Forma 1 almacenada a 25° C/60% de HR como se describe en la Tabla 1:

T l 1

Se envasó una segunda muestra de la Forma 1 en bolsas dobles de polietileno y se selló en una botella de HDPE y se almacenó en condiciones de estabilidad acelerada de 40° C/75% de HR. La muestra se volvió a analizar después de 1 mes y 3 meses por XRPD (usando el Método B). Los datos se muestran en la Figura 8. No se observó ningún cambio en el difractograma de XRPD cuando la muestra se almacenó a 40° C/75% de HR después de 1 o 3 meses.

Se llevaron a cabo pruebas adicionales en la muestra de la Forma 1 almacenada a 40° C/75% de HR, como se describe en la Tabla 2:

T l 2

Ejemplo______ 4A______ -______ N-r(3-fluoro-4-metox¡p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l1-3-(metox¡metil)-1 -(rf4-r(2-oxopirid¡n-1-¡l)met¡l1fen¡l}met¡l)pirazol-4-carboxam¡da (Forma 3)

Se maduró una suspensión de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (30 mg) en metanol/agua 50/50 (100 pl) mediante ciclos de temperatura durante 2 días. Los sólidos resultantes se aislaron para proporcionar N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil] fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 3).

En la Figura 6a se muestra un difractograma de XRPD de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metilo)pirazol-4-carboxamida (Forma 3).

Tabla de posiciones de picos:

Ejemplo______4B______ -______ N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-ihmetil1-3-(metoximetih-1 -(l4-[(2-oxopiridin-1-il)metil1fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 5)

Se maduró una suspensión de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (500 mg) en metanol/agua 50/50 (2,5 ml) mediante ciclos de temperatura de 20° C a 50° C durante 24 horas. Los sólidos resultantes se aislaron para proporcionar N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil] fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 5).

Ejemplo______4C______ -______ N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metin-3-(metoximetil)-1 -(■f4-[(2-oxopiridin-1-il)metil1fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 5)

Se preparó una solución de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (500 mg) en metanol/agua 50/50 (20 ml). La solución se dejó evaporar hasta la sequedad al vacío para proporcionar N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1 -il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 5).

En la Figura 6b se muestra un difractograma de XRPD de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida (Forma 5) obtenido del Ejemplo 4C. Este difractograma de XRPD se obtuvo usando el Método B anterior.

Tabla de posiciones de picos de los picos más prominentes:

La forma 5 es menos estable que las Formas 1, 2 o 3 y se convierte en la Forma polimorfa 3 con el tiempo. Realizar una medición de XRPD en la Forma 5 dio como resultado la Forma 3.

Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

Los estudios de TGA/DSC se realizaron usando un Mettler Toledo TGA/DSC1 Stare System, equipo N°1547, equipado con automuestreador, usando crisoles de Al perforados con agujas de 40 pl. Condiciones de medición: 5 min 30,0° C, 30,0-350,0° C con 10° C/min., flujo de N2 de 40 ml/min. El software usado para el control de instrumentos y análisis de datos es STARe v12.10. Los datos de TGA/DSC para la Forma 5 se muestran en la Figura 6c.

Distribución de tamaño de partículas

Los estudios de distribución de tamaño de partícula se realizaron usando un Malvern Instruments Mastersizer, equipo N°1712. El Mastersizer usó un intervalo de lentes 300RF de 0,05 pm-900 mm. Se usó polidisperso como modelo de análisis. Se realizó una medición de fondo antes de cada medición de muestra, el tiempo de escaneo de fondo fue de 12 segundos (12000 instantáneas). Cada muestra se dispersó en Multipar G, índice de refracción de 1,42. El rango de oscurecimiento en la dispersión de la muestra estuvo entre el 10%-30%. Cada muestra se midió 6 veces en t=0 y t=30 minutos y el tiempo de escaneo de medición fue de 10 segundos (10000 instantáneas). La velocidad de agitación objetivo de la unidad de dispersión de muestras fue de 2000±10 rpm. La recopilación y evaluación de datos se realizó usando el software Mastersizer S Versión 2.19. El análisis de distribución de tamaño de partículas resultante de la Forma polimorfa 5 se muestra en la Figura 6d.

Sorción gravimétrica de vapor

La Forma 5 es higroscópica con una captación de masa del 2,3%, según se determina por estudios de sorción gravimétrica de vapor (GVS). Los estudios de GVS se realizaron usando un Surface Measurement Systems Ltd. DVS-1 No Video, equipo N°2126. La muestra se cargó en una bandeja de balanza, típicamente 20-30 mg, y se equilibró a 0% de HR. Después de secar el material, se aumentó la HR en un 10% por paso durante 1 hora por incremento, finalizando en un 95% de HR. Después de completar el ciclo de sorción, la muestra se secó usando el mismo método. El software usado para la recopilación de datos fue DVSWin v3.01 No Video. El análisis de datos se realizó usando DVS Standard Analysis Suite v6.3.0 (estándar). La GVS resultante se muestra en la Figura 6e.

Los datos de la Forma 5 se resumen en la tabla siguiente.

II. Preparación de formas de dosificación sólidas orales a partir de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A Ejemplo 5A (Forma 1 del compuesto de Fórmula A en una cápsula)

Se pasó la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada como en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm. Luego, se pesaron 100 mg del polvo resultante en una cápsula de gelatina de tamaño 0 y se cerró la cápsula.

Las características de flujo y densidad, y la distribución del tamaño de partículas del polvo preparado pasando la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada como en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm se determinó de la siguiente manera. El intervalo de humedad durante la caracterización fue del 42-65%.

Caracterización del flujo y la densidad del polvo de la Forma 1

La densidad (compactada y aparente) de la API se determinó por duplicado de acuerdo con USP [616]2012 usando un aparato de densidad compactada. Los valores del índice de Carr y de la relación de Hausner se calcularon a partir de las cifras de densidad compactada y aparente registradas de acuerdo con USP [1174] 2010.

Los resultados medios obtenidos de las mediciones y los cálculos por duplicado de la densidad aparente, la densidad compactada, el índice de Carr y la relación de Hausner se resumen en la Tabla 3.

T l

Una relaci ón de Hausner de menos de 1,25 y un valor del ín dice de Carr de entre el 5 y el 15% indican propiedades de flujo buenas/excelentes (M.E. Aulton, Aulton's pharmaceutics the design and manufacturing of medicine, 3a Ed, Churchill Livingstone Elsevier, Hungría, 2007, p356). Los resultados de la Tabla 3 para la Forma 1 indican pobres características de flujo deficientes en base al índice de Carr y la relación de Hausner.

La determinación del flujo de polvo (gramos/segundo) del polvo preparado pasando la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida como se preparó en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm se realizó por duplicado usando un 'aparato de flujo a través de un orificio'(25 mm y 10 mm por duplicado).). Las mediciones se realizaron primero sin agitación del medidor de flujo. Si no se producía flujo, la prueba se repetía golpeando suavemente y repetitivamente el medidor de flujo con una espátula de acero (usando una fuerza constante cada vez). Los resultados obtenidos para el flujo de polvo a través de un orificio de 25 mm y 10 mm se muestran en la Tabla 4.

T l 4

El polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A no fluyó por un orificio de 25 mm ni de 10 mm sin golpeo y sólo el primero con golpeo, lo que confirma el resultado obtenido para el Índice de Carr y la relación de Hausner (Tabla 3). El polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A se pegó a la espátula y tamices a pesar de que la humedad era relativamente alta. Este comportamiento puede verse afectado por las condiciones de humedad.

El valor de densidad aparente medido para la Forma 1 del compuesto de Fórmula A es bajo, lo que significa que es difícil lograr dosis altas usando mezclas de polvo simples (ya sea directamente encapsuladas o comprimidas en comprimidos) porque habrá un volumen disponible limitado para los excipientes que son necesarios para garantizar un flujo adecuado (dentro de las limitaciones del tamaño de dosis adecuada).

Distribución del tamaño de partículas (PSD)

La distribución del tamaño de partículas del polvo preparado pasando la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada como en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm se determinó por duplicado mediante análisis de tamiz usando un agitador de tamiz ajustado a una amplitud de 1 mm durante 5 min. Los tamaños de tamiz usados fueron de 1 mm, 710 pm, 500 pm, 355 pm, 250 pm, 125 pm, 63 pm y bandeja.

Los resultados obtenidos para la determinación del tamaño de partículas se muestran en la Tabla 5.

T l

El material retenido en las mallas de mayor apertura parecía ser aglomerados blandos. El hecho de que el material quedara retenido en la malla de 1,0 mm después de que el polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A ya se había tamizado a través de una malla de 1,0 mm respalda esta observación e implica que el polvo de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A se aglomera espontáneamente. La mayoría de la Forma 1 se retuvo en los tamices de 125 y 250 pm.

Ejemplo 5B (Forma 1 del compuesto de Fórmula A en una cápsula)

Se pasó la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada como en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm. Luego, se pesaron 10 mg del polvo resultante en una cápsula de gelatina de tamaño 0 y se cerró la cápsula.

Ejemplo 6 - Formulación de TPGS de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A

Se pasó la Forma 1 de N-[(3-fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada como en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm.

Se calentó succinato de polietilenglicol de tocoferol (TPGS) (172 g) a 65° C usando un baño de agua, luego se añadió la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (28 g) al TPGS fundido con mezclado usando un mezclador Silverson (la Forma 1 se añadió durante 26 minutos con 4 minutos de mezclado adicional, mezclador Silverson ajustado a 5400 RPM). La temperatura de la mezcla se ajustó a 55° C para la encapsulación. Se extrajo una alícuota de la mezcla utilizando una pipeta Gilson (ajustada a 710 pl), se dispensó en una cápsula de gelatina de tamaño 0 y se dejó enfriar a temperatura ambiente.

La carga de fármaco de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en el TPGS fue del 14,0% (p/p), y el peso de llenado de la mezcla en la cápsula fue de 719,0 mg. La dosis para la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en la cápsula fue de 100,7 mg.

En la Figura 9 se muestran los resultados de las pruebas de disolución de la cápsula resultante en HCl 0,1 M y tampón de pH 3, inicialmente y después del almacenamiento a 25° C y 40° C.

Las pruebas de disolución se realizaron de acuerdo con Ph. Eur. 2.9.3 usando un aparato de disolución Distek usando medios de disolución de HCl 0,1 M, o tampón de ácido cítrico-fosfato de pH 3. La disolución se realiza a 37° C con una velocidad de paleta de 50 rpm. Las muestras (2 ml) se recogen a través de un filtro de cánula de 4 pm y se procesan a través de un filtro de jeringuilla de PVDF de 0,2 pm en un vial UPLC para el análisis fuera de línea. El análisis UPLC se realiza usando una inyección de 1,5 pl de muestra en una columna Waters CSH C18, 2,1 x 75 mm, 1,7 pm con detección UV y un gradiente de acetonitrilo: agua durante 2,5 minutos.

Ejemplo 7 - Formulación de Gelucire 44/14 de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A

Se pasó la Forma 1 de N-[(3-Fluoro-4-metoxipiridin-2-il)metil]-3-(metoximetil)-1-({4-[(2-oxopiridin-1-il)metil]fenil}metil)pirazol-4-carboxamida preparada en el Ejemplo 3 a través de un tamiz de 1,0 mm.

El Gelucire 44/14 (172 g) se calentó a 65° C usando un baño de agua, luego se añadió la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (28 g) al Gelucire 44/14 fundido con mezclado usando un mezclador Silverson (la Forma 1 se añadió durante 17 minutos con 5 minutos de mezclado adicional, mezclador Silverson ajustado a 5400 RPM). La temperatura de la mezcla se ajustó a 55° C para la encapsulación. Se extrajo una alícuota de la mezcla usando una pipeta Gilson (ajustada a 710 pl), se dispensó en una cápsula de gelatina de tamaño 0 y se dejó enfriar a temperatura ambiente.

La carga de fármaco de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en Gelucire 44/14 fue del 14,0% (p/p), y el peso de llenado de la mezcla en la cápsula fue de 713,0 mg. La dosis para la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en la cápsula fue de 99,8 mg.

Los resultados de las pruebas de disolución de la cápsula resultante en HCl 0,1 M y tampón de pH 3, inicialmente y después del almacenamiento a 25° C y 40° C se muestran en la Figura 10.

La prueba de disolución se realizó de acuerdo con Ph. Eur. 2.9.3 usando un aparato de disolución Distek usando medios de disolución de HCl 0,1 M, o tampón de ácido cítrico-fosfato de pH 3. La disolución se realiza a 37° C con una velocidad de paleta de 50 rpm. Las muestras (2 ml) se recogen a través de un filtro de cánula de 4 pm y se procesan a través de un filtro de jeringuilla de PVDF de 0,2 pm en un vial UPLC para el análisis fuera de línea. El análisis UPLC se realiza usando una inyección de 1,5 lL de muestra en una columna Waters CSH C18, 2,1 x 75 mm, 1,7 pm con detección UV y un gradiente de acetonitrilo: agua durante 2,5 minutos.

Ejemplo 8 - Formulación de TPGS de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (cápsula de HPMC)

Se calentó succinato de polietilenglicol de tocoferol (TPGS) (172 g) a 78,4° C usando un baño de agua y luego se añadió la Forma 1 del compuesto de Fórmula A (28 g) al TPGS fundido (la Forma 1 se añadió durante 26 minutos con 4 minutos de mezclado adicional, mezclador Silverson ajustado a 5400 RPM). La temperatura de la mezcla se ajustó a 55° C, luego se sometió a homogeneización de alto cizallamiento (174 min @ 1200 RPM luego 230 min @ 2600 RPM). Se extrajo una alícuota de la mezcla usando una pipeta Gilson (ajustada a 710 pl), se dispensó en una cápsula de HPMC de tamaño 0 y se dejó enfriar a temperatura ambiente.

La carga de fármaco de la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en el TPGS fue del 14,0% (p/p), y el peso de llenado de la mezcla en la cápsula fue de 717,8 mg. La dosis para la Forma 1 del compuesto de Fórmula A en la cápsula fue de 100,5 mg.

Ejemplo 9-Formulaciones de comprimidos del compuesto de Fórmula A

Se prepararon cuatro formulaciones de gránulos (referidas como WG^a, WG^b, WG^cy WG ^d) de acuerdo con el siguiente método usando las cantidades descritas en la Tabla 6 y la Tabla 7:

El fluido de granulación primario se preparó añadiendo los componentes de acuerdo con la Tabla 6 en un recipiente de mezclado (250 g para WG^ay 200 g para WG^b, WG^cy WG^d). El fluido de granulación principal se agitó hasta que se volvió homogéneo usando un agitador magnético o un agitador de cabeza.

Para cada sublote, se añadieron la Forma 1 del compuesto de Fórmula A, Avicel PH101 y AcDiSol a un mezclador de alto cizallamiento Multipro y se mezclaron a alta velocidad durante 5 minutos. Mientras se continuaba mezclando a alta velocidad, se vertió el fluido de granulación primario en la mezcla durante el transcurso de otros 5 minutos.

Si el material se pegaba al costado del mezclador de alto cizallamiento Multipro, el proceso se interrumpía y se raspaba el material del recipiente antes de reiniciar el mezclado y la adición de fluido.

Al final de la adición del fluido de granulación primario, el gránulo húmedo se mezcló durante otro minuto. A continuación, se añadió lentamente fluido de granulación secundario con mezclado en el transcurso de otros 5 minutos.

El gránulo húmedo resultante se pasó a través de una malla de 4,0 mm. Luego, el gránulo húmedo se colocó en una bandeja de acero inoxidable y se secó en un horno durante la noche a la temperatura especificada. Luego, los gránulos secos se pasaron a través de una malla de 1 mm y se dejaron reposar en condiciones ambientales durante 2 horas para que se equilibraran. Se aislaron las formulaciones de gránulos WG^aWG^b, WG^cy WG^d.

-

T l 7-F rm l i n r n l

Se caracterizaron los gránulos WG^aWG^b, WG^cy WG^dresultantes, y los resultados se muestran en la Tabla 8. Los métodos usados para medir cada uno de los parámetros se describen a continuación.

El LOD de los gránulos se determinó usando una muestra de 5 g de los gránulos usando una balanza de humedad Sartorius a 105° C.

La densidad (compactada y aparente) de los gránulos se determinó por duplicado de acuerdo con USP [616] 2012 usando un aparato de densidad compactada. Los valores del índice de Carr y de la relación de Hausner se calcularon a partir de las cifras de densidad compactada y aparente registradas de acuerdo con USP [1174] 2010.

La determinación del flujo de polvo (gramos/segundo) de los gránulos se realizó por duplicado usando un aparato de "flujo a través de un orificio" (25 mm y 10 mm por duplicado). Las mediciones se realizaron primero sin agitación del medidor de flujo. Si no se producía flujo, la prueba se repetía golpeando suavemente y repetitivamente el medidor de flujo con una espátula de acero (usando una fuerza constante cada vez).

La distribución del tamaño de partícula de los gránulos se determinó por duplicado mediante análisis de tamiz usando un agitador de tamiz ajustado a una amplitud de 1 mm durante 5 minutos. Los tamaños de tamiz usados fueron 1 mm, 710 pm, 500 pm, 355 pm, 250 pm, 125 pm, 63 pm y bandeja.

-

Los datos de caracterización física muestran que todos los lotes de gránulos estaban secos (es decir, <3,5% p/p) con buenas propiedades de flujo: los valores del índice de Carr y la relación de Hausner son ambos bajos y el caudal de masa a través del orificio fue significativo. incluso a 10 mm. El secado de los gránulos a una temperatura de 60° C redujo el contenido de agua de los gránulos en comparación con los gránulos secados a 40° C. Los gránulos eran densos (densidad aparente >0,4 g/ml) y granulares (la mayoría del material retenido en las mallas de 250 y 355 pm durante el análisis de tamiz) y, por lo tanto, son adecuados para la formación de tabletas.

Se prepararon ocho formulaciones de tabletas (referidas como T1 a T5, T1A, T2A y T5A, 95 g de cada una) de acuerdo con el siguiente método usando las cantidades descritas en la Tabla 9:

La cantidad requerida de gránulos y cada uno de los excipientes extragranulares (excepto el estearato de magnesio) se dispensaron en el recipiente de mezclado de un mezclador Erweka AR401. La mezcla se mezcló a 15 RPM durante 15 minutos. Se añadió estearato de magnesio al recipiente de mezclado y la mezcla se mezcló durante 5 minutos adicionales a 15 RPM.

T l -F rm l i n m rimi

Después, cada mezcla resultante se prensó en comprimidos de acuerdo con el siguiente método:

Se usó una prensa Manesty F3 para prensar los comprimidos. La prensa se ajustó a 60 TPM sin herramientas, luego se ajustó con herramientas cóncavas normales redondas con un diámetro de 8,3 mm y una configuración de sobrecarga de 11 kN. La prensa se configuró para producir comprimidos con un peso objetivo de 300 mg contra el resorte de sobrecarga. La configuración de la leva se ajustó a la configuración que se muestra en la Tabla 10.

Se prepararon 250 comprimidos de cada formulación de comprimido. Al principio, a la mitad y al final del proceso de formación de comprimidos, se midieron el grosor, el peso y la dureza de 5 unidades.

Los datos de caracterización física de las formulaciones de comprimidos T1-T5, T1A, T2A y T5A se muestran en la Tabla 10.

Los datos de la Tabla 10 se generaron usando los siguientes procedimientos estándar:

Dureza: Ph.Eur. 2.9.8

Friabilidad: Ph. Eur. 2.9.7

Disgregación: Ph. Eur. 2.9.1

En la Tabla 11 se compara la estabilidad física de las formulaciones de comprimidos después del almacenamiento a 25° C y 40° C durante 4 semanas con los datos iniciales (Tabla 10). Las formulaciones T1, T4 y T5 experimentan poco o ningún cambio desde el inicio.

Tabla 11-Comparación de las características físicas de los lotes de comprimidos antes y después de 4 semanas de almacenamiento

La uniformidad del contenido de las formas de dosificación se determinó usando el siguiente procedimiento estándar: Eur. Ph. 2.9.40 (Uniformidad de Unidades de Dosificación). Los resultados se muestran en la Tabla 12.

T l 12 - nif rmi n ni

Ejemplo 10

Las formulaciones de comprimidos T1A, T2A y T5A se seleccionaron para recubrimiento entérico.

El recubrimiento y las pruebas físicas de los comprimidos T1A, T2A y T5A se realizaron con un secador de lecho fluido Aeromatic Strea-1 a un intervalo de temperatura controlado y una tasa de rociado media de 1,2 gramos por minuto para lograr una ganancia de peso final de 50 mg de recubrimiento.

El material de recubrimiento es una suspensión acuosa de Eudragit L30-D55 plastificado por Plasacry1HTP20 (al 33% de sustancia polimérica seca que contiene citrato de trietilo (TEC) como plastificante y monoestearato de glicerol como agente antiadherente).

Los componentes son fabricados por Evonik.

Se preparó una formulación de recubrimiento usando las cantidades descritas en la Tabla 13. Se añadió Eudragit L30-D55 al agua desionizada con agitación superior. El Plasacryl HTP20 se añadió lentamente con agitación teniendo cuidado de no airear el líquido. La mezcla se agitó durante por lo menos 10 minutos adicionales hasta que la mezcla fue homogénea. La suspensión se pasó a través de una malla de 500 pm.

Los comprimidos T1A, T2A y T5A se rociaron con la formulación de recubrimiento usando un secador de lecho fluido Aeromatic Strea-1 usando los parámetros descritos en la Tabla 14 para producir comprimidos recubiertos CT1A, CT2A y CT5A.

T l 1 -F rm l i n r rimi n

El recubrimiento entérico tenía que cumplir con los siguientes criterios en las dos etapas de prueba de disgregación/disolución (en base a Ph. Eur. 2.9.1):

1. Tampón de citrato de pH 3: (a) sin disgregación de la forma de dosis en el plazo de 2 horas y (b) <10% de liberación de API durante la prueba de disolución en el plazo de 2 horas.

2. Tampón de fosfato de pH 6: la forma farmacéutica debe disgregarse en el plazo de una hora.

La prueba de disolución se realizó de acuerdo con Ph. Eur. 2.9.3 usando un aparato de disolución Distek usando medios de disolución de tampón de ácido cítrico-fosfato de pH 3. La disolución se realiza a 37° C con una velocidad de paleta de 50 rpm. Las muestras (2 ml) se recogen a través de un filtro de cánula de 4 pm y se procesan a través de un filtro de jeringuilla de PVDF de 0,2 pm en un vial UPLC para el análisis fuera de línea. El análisis UPLC se realiza usando una inyección de 1,5 pl de muestra en una columna Waters CSH C18, 2,1 x 75 mm, 1,7 pm con detección UV y un gradiente de acetonitrilo: agua durante 2,5 minutos.

T l 1

CT1A

El peso del recubrimiento aplicado (48,6 mg) fue cercano al objetivo (49,5 mg) y no había defectos aparentes en el recubrimiento. Estos comprimidos pasaron la prueba de pH 3 (sin ruptura en el plazo de 2 horas) y la prueba de pH 6 donde la disgregación se completó en el plazo de 19 minutos. Se probó la disolución de seis comprimidos en pH 3, pero no se detectó ningún API disuelto en el plazo de seis horas. Por lo tanto, estos comprimidos superaron la especificación de <10% disueltos en el plazo de 2 horas.

CT2A

El peso del recubrimiento aplicado (47,1 mg) fue cercano al objetivo (49,5 mg) y no había defectos aparentes en el recubrimiento. Estos comprimidos pasaron la prueba de pH 3 (no se rompieron en el plazo de 2 horas). Sin embargo, tres de los seis comprimidos fallaron en la prueba de pH 6 (es decir, tiempo de disgregación >1 hora) y los tres comprimidos restantes dieron una disgregación significativamente más lenta que CT1A. Mientras que el recubrimiento funcional aparentemente se había disgregado por completo a los 23-24 minutos a pH 6, quedaban fragmentos grandes del núcleo después de 1 hora de prueba. Cabe señalar que la disgregación de los núcleos prercubiertos es muy rápida en todos los medios de disgregación, por lo que el recubrimiento debe estar provocando la lenta disgregación de los núcleos a pH 6.

La explicación más probable para la disgregación demasiado lenta de los núcleos de los comprimidos es que el polímero entérico había penetrado en los núcleos durante el recubrimiento o durante la prueba de disgregación y se había neutralizado por la presencia del ácido tartárico. En su forma neutra, el polímero es insoluble y puede actuar como aglutinante evitando la disgregación de los núcleos.

CT5A

El peso del recubrimiento aplicado (49,0 mg) fue cercano al objetivo (49,5 mg) y no había defectos aparentes en el recubrimiento. Estos comprimidos pasaron la prueba de pH 3 (sin ruptura en el plazo de 2 horas) y la prueba de pH 6 donde la disgregación se completó en el plazo de 31-40 minutos. Se analizó la disolución de seis comprimidos en pH3, pero no se detectó ningún API disuelto en el plazo de seis horas. Por lo tanto, estos comprimidos pasaron la especificación de <10% API disuelto en el plazo de 2 horas.

Ejemplo 11 - Cápsula de TPGS recubierta

Las cápsulas del Ejemplo 6 se pusieron en bandas a mano usando una solución de etanol/agua de HPMC 606 y posteriormente se recubrieron con una dispersión acuosa de Eudragit L30-55 en un minirecubridor Caleva para lograr una ganancia de peso de polímero de 5,5 mg/cm2. Las cápsulas se recubrieron en dos lotes de 14 cápsulas cada uno. La composición de la solución de recubrimiento se proporciona en la Tabla 16.

Primero, se mezcló previamente citrato de trietilo con agua a alta velocidad durante 10 minutos, luego se añadió la suspensión de Eudragit a la solución y se mezcló suavemente usando un mezclador Heidolph. La mezcla se pasó a través de un tamiz de 0,5 mm antes del uso y se agitó continuamente durante el recubrimiento. Los parámetros de recubrimiento se proporcionan en la Tabla 17.

T l 1 - m iin l l i n r rimi n E r i L -

T l 17 - Pr m r r rimi n n ri

Ejemplo 12

Las formulaciones de gránulos WG^ay WG^a-se prepararon de acuerdo con el siguiente método usando las cantidades descritas en la Tabla 18 y la Tabla 19:

El fluido de granulación primario se preparó añadiendo los componentes de acuerdo con la Tabla 18 en un recipiente de mezclado (600 g). El fluido de granulación primario se agitó hasta la homogeneidad usando un agitador magnético o un agitador superior.

Para cada sublote, se añadieron la Forma 1 del compuesto de Fórmula A, Avicel PH101 y AcDiSol a un mezclador de alto cizallamiento Multipro y se mezclaron a alta velocidad durante 5 minutos. Mientras se continuaba mezclando a alta velocidad, se vertió el fluido de granulación primario en la mezcla en el transcurso de otros 5 minutos. Si el material se pegaba al lateral del mezclador de alto cizallamiento Multipro, el proceso se interrumpía y se raspaba el material del recipiente antes de reiniciar el mezclado y la adición de fluido.

Al final de la adición del fluido de granulación primario, el gránulo húmedo se mezcló durante otro minuto. Luego, se añadió lentamente fluido de granulación secundario con mezclado en el transcurso de otros 5 minutos.

El gránulo húmedo resultante se pasó a través de una malla de 4,0 mm. Luego, el gránulo húmedo se colocó en una bandeja de acero inoxidable y se secó en un horno durante la noche a 60° C. Luego, los gránulos secos se pasaron a través de una malla de 1 mm y se dejaron reposar en condiciones ambientales durante la noche para equilibrarlos. Se aislaron las formulaciones de gránulos WG^a'y WG^a”.

T l 1-Frml in l fl i r nl i n

T l 1-Frml in rnl

Se caracterizaron los gránulos WG^a'y WG^a-, y los resultados se muestran en la Tabla 20. A continuación se describen los métodos usados para medir cada uno de los parámetros.

Se prepararon dos formulaciones para comprimidos (referidas como T1A' y T1A” , 150 g de cada una) de acuerdo con el siguiente método usando las cantidades descritas en la Tabla 21:

T l 21-F rm l i n m rimi

Luego, cada mezcla resultante se prensó en comprimidos de acuerdo con el método siguiente:

Se usó una prensa Manesty F3 para prensar los comprimidos. La prensa se configuró a 40 TPM sin herramientas, luego se configuró con herramientas cóncavas normales redondas con un diámetro de 8,3 mm y una configuración de sobrecarga como se muestra en la Tabla 22. La prensa se configuró para producir comprimidos a un objetivo de 300 mg de peso contra el resorte de sobrecarga. La configuración de leva se ajustó a la configuración que se muestra en la Tabla 22.

Se prepararon 100 comprimidos de cada formulación de comprimido. Al principio, a la mitad y al final del proceso de formación de comprimidos, se midieron el grosor, el peso y la dureza de 5 unidades.

Los datos de la Tabla 22 se generaron usando los siguientes procedimientos estándar:

Dureza: Ph.Eur. 2.9.8

Friabilidad: Ph. Eur. 2.9.7

Disgregación: Ph. Eur. 2.9.1

El LOD de los comprimidos se determinó usando una muestra de 5 g usando una balanza de humedad Sartorius a 105° C.

Los comprimidos T1A' se produjeron entre 77 ± 15 N (dureza baja) y 162 ± 20 N (dureza alta). Todos los conjuntos de comprimidos estaban cerca del peso objetivo con buena RSD, friabilidad aceptable (<0,5%) y buenos tiempos de disgregación en agua (<15 minutos).

Durante la formación de comprimidos del lote T1A", no fue posible lograr comprimidos que cumplieran con el objetivo de dureza inferior y los comprimidos producidos no tenían una dureza superior a 40 kN. Los comprimidos parecían blandos. T1A' (comprimido con éxito con gránulos que tienen un alto nivel de finos) y T1A" (no comprimido a partir de gránulos con bajos niveles de finos) solo diferían en términos del punto de adición del AcDiSol.

III. Métodos biológicos

La capacidad del compuesto de Fórmula A para inhibir la calicreína plasmática puede determinarse usando los siguientes ensayos biológicos:

Determinación de la IC ⁵⁰ para la calicreína plasmática

La actividad inhibidora de la calicreína plasmática in vitro se determinó usando métodos estándar publicados (ver, por ejemplo, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). La calicreína plasmática humana (Protogen) se incubó a 25° C con el sustrato fluorogénico H-DPro-Phe-Arg-AFC y varias concentraciones del compuesto de prueba. La actividad enzimática residual (tasa de reacción inicial) se determinó midiendo el cambio en la absorbancia óptica a 410 nm y se determinó el valor IC⁵⁰para el compuesto de prueba.

Cuando se probó en este ensayo, el compuesto de Fórmula A mostró una IC⁵⁰(PKal humana) de 3,3 nM. El compuesto de Fórmula A también se seleccionó para determinar la actividad inhibidora frente a la enzima relacionada KLK1 usando el siguiente ensayo biológico:

Determinación de la IC ⁵⁰ para KLK1

La actividad inhibidora de KLK1 in vitro se determinó usando métodos estándar publicados (ver, por ejemplo, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). Se incubó KLK1 humana (Callbiochem) a 2,5° C con el sustrato fluorogénico H-DVal-Leu-Arg-AFC y varias concentraciones del compuesto de prueba. La actividad enzimática residual (tasa de reacción inicial) se determinó midiendo el cambio en la absorbancia óptica a 410 nm y se determinó el valor de IC⁵⁰para el compuesto de prueba.

Cuando se probó en este ensayo, el compuesto de Fórmula A mostró una IC⁵⁰(KLK1 humana) de >40000 nM.

El compuesto de Fórmula A también se seleccionó para determinar la actividad inhibidora frente a la enzima relacionada FXIa usando el siguiente ensayo biológico:

Determinación del % de inhibición para FXIa

La actividad inhibidora de FXIa in vitro se determinó usando métodos estándar publicados (ver, por ejemplo, Johansen et al., Int. J. Tiss. Reac. 1986, 8, 185; Shori et al., Biochem. Pharmacol., 1992, 43, 1209; Stürzebecher et al., Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1992, 373, 1025). Se incubó FXIa humana (Enzyme Research Laboratories) a 25° C con el sustrato fluorogénico Z-Gly-Pro-Arg-AFC y 40 pM del compuesto de prueba. La actividad enzimática residual (tasa de reacción inicial) se determinó midiendo el cambio en la absorbancia óptica a 410 nm.

Cuando se probó en este ensayo, el compuesto de Fórmula A mostró un % de inhibición a 40 pM (FXIa humana) del 0%.

IV. Farmacocinética

Se realizó un estudio farmacocinético del compuesto de Fórmula A para evaluar la farmacocinética después de una dosis oral individual en ratas macho Sprague-Dawley. A dos ratas se les administró una dosis po de 5 ml/kg de una composición nominal de 2 mg/ml (10 mg/kg) del compuesto de prueba en vehículo. Después de la dosificación, se recogieron muestras de sangre durante un período de 24 horas. Los tiempos de muestreo fueron 5, 15 y 30 minutos, luego 1, 2, 4, 6, 8 y 12 horas. Después de la recogida, las muestras de sangre se centrifugaron y la fracción de plasma se analizó para determinar la concentración del compuesto de prueba por LCMS.

Los datos de exposición oral obtenidos de este estudio para el compuesto de Fórmula A se muestran en la Tabla 23:

Tabla 23 - Datos de exposición oral

Tabla 24 - Datos farmacocinéticos in vivo para formas de dosificación sólidas orales de la presente invención Estudio en vida

La especie de prueba fue el mono Cynomologous. Las formas de dosificación sólidas orales se administraron mediante colocación directa en el estómago del animal usando un tubo de alimentación forzada y desplazamiento de aire. Se recogieron extracciones de sangre nominales de 1 ml en tubos de sangre que contenían citrato trisódico al 3,2% como anticoagulante. Las muestras de sangre se procesaron por centrifugación para preparar muestras de plasma. Las muestras de plasma se almacenaron a menos de -50° C antes del análisis.

El análisis de plasma se realizó mediante el método siguiente:

La cuantificación del compuesto de Fórmula A a partir de plasma conservado en citrato se realizó mediante precipitación de proteínas usando ácido acético al 4% en acetonitrilo. Se usó una placa de precipitación de proteínas Biotage ISOLUTE® PPT+ para filtrar las proteínas precipitadas. La cuantificación del compuesto de Fórmula A por LC-MS se realizó en un instrumento Waters Quattro Micro API con un intervalo de calibración de 1 a 3160 ng/ml. El análisis de datos de concentración de plasma se realizó usando un modelo no compartimental en WinNonlin.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una forma de dosificación sólida oral que comprende una forma sólida del compuesto de Fórmula A

en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra por lo menos los siguientes picos de difracción de rayos X en polvo característicos (radiación Cu Ka, expresada en grados 20) a aproximadamente 11,2, 12,5, 13,2, 14,5 y 16,3,

2. La forma de dosificación sólida oral de la reivindicación 1, en donde la cantidad de la forma sólida del compuesto de Fórmula A en la forma de dosificación está entre 0,1 mg y 1.000 mg; y/o

en donde la forma sólida del compuesto de Fórmula A está presente en una cantidad de entre el 1% en peso y el 70% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral.

3. La forma de dosificación sólida oral de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además: (i) un aglutinante, opcionalmente en donde el aglutinante comprende uno o más de: metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, povidona, copovidona, gelatina, goma arábiga, etilcelulosa, alcohol polivinílico, almidón, almidón pregelatinizado, agar, tragacanto y alginato de sodio; y/o

en donde el aglutinante está presente en una cantidad de entre el 0,1% en peso y el 30% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral; y/o

en donde la relación en peso del compuesto de Fórmula A al aglutinante está entre 1:0,01 y 1:1; y/o

(ii) un diluyente, opcionalmente en donde el diluyente comprende uno o más de: carbonato de calcio, fosfato de calcio dibásico, fosfato de calcio tribásico, sulfato de calcio, celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, dextrinas, excipientes de dextrosa, fructosa, caolín, lactitol, lactosa, lactosa monohidrato, manitol, sorbitol, maltitol, almidón, almidón pregelatinizado y sacarosa; y/o

en donde el diluyente está presente en una cantidad de entre el 1% en peso y el 99% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral; y/o

en donde la relación en peso del compuesto de Fórmula A al diluyente está entre 1:0,1 y 1:500; y/o

(iii) un disgregante; y/o

(iv) un lubricante y/o deslizante; y/o

(v) un ácido, opcionalmente en donde el ácido comprende uno o más de: ácido maleico, ácido tartárico, ácido succínico y ácido cítrico; y/o

en donde el ácido está presente en una cantidad de entre el 1% en peso y el 40% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral; y/o

en donde la relación en peso del compuesto de Fórmula A al ácido está entre 1:0,1 y 1:2; y/o

(vi) un surfactante, opcionalmente en donde el surfactante comprende laurilsulfato de sodio y/o Tween 80; y/o en donde el surfactante está presente en una cantidad de entre el 1% en peso y el 20% en peso en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral; y/o

en donde la relación en peso del compuesto de Fórmula A al surfactante está entre 1:0,01 y 1:1; y/o

(vii) un recubrimiento, opcionalmente en donde el recubrimiento es un recubrimiento entérico; y/o

(viii) uno o más ingredientes activos adicionales.

4. La forma de dosificación sólida oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprende además un excipiente lipídico, opcionalmente en donde el excipiente lipídico comprende uno o más de: ésteres de ácidos grasos de sacarosa como estearato de sacarosa, palmitato de sacarosa, laurato de sacarosa, behenato de sacarosa, oleato de sacarosa, erucato de sacarosa y mezclas de los mismos; fosfolípidos, fosfatidilos, glicosilceramidas, ácidos grasos, surfactantes no iónicos, polietilenglicol de succinato de tocoferilo de vitamina E (TPGS) (incluyendo succinato de polietilenglicol de D-a-tocoferol (IPGS)), monooleato de glicerilo, surfactantes de la serie Gelucire®, glicéridos y mezclas de los mismos; y/o en donde el excipiente lipídico está presente en una cantidad de entre el 10% en peso y el 99% en base al peso total de la forma de dosificación sólida oral; y/o en donde la relación en peso del compuesto de Fórmula A al excipiente lipídico está entre 1:0,1 y 1:100; y/o

un recubrimiento, opcionalmente en donde el recubrimiento es un recubrimiento entérico; y/o

uno o más ingredientes activos adicionales.

5. La forma de dosificación sólida oral de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde:

(i) la forma de dosificación sólida oral está en forma de cápsula, opcionalmente en donde la cubierta de la cápsula está hecha de gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa o almidón, o

(ii) la forma de dosificación sólida oral está en forma de comprimido.

6. Un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A

que comprende los pasos de

(b) granular la dispersión del paso (a) para formar gránulos;

(c) secar los gránulos;

7. El método de la reivindicación 6,

en donde el fluido de granulación comprende además agua; y/o

en donde el secado en el paso (c) se realiza a una temperatura mayor de 45° C, preferiblemente mayor de 55° C; y/o

en donde, en el paso (e), los gránulos o gránulos mezclados se comprimen en una forma de dosificación oral sólida en forma de comprimido.

8. Un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A

que comprende los pasos de

(b) cargar la dispersión fundida en una cápsula,

9. El método de la reivindicación 8,

en donde el excipiente lipídico es TPGS o Gelucire 44/14, preferiblemente TPGS;

y/o

en donde la cubierta de la cápsula está hecha de gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa o almidón.

10. Un método para preparar una forma de dosificación sólida oral que comprende un compuesto de Fórmula A

11. Una forma de dosificación sólida oral que puede obtenerse mediante el método de cualquiera de las reivindicaciones 6-10.

12. La forma de dosificación sólida oral de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o el método de cualquiera de las reivindicaciones 6-10 en donde:

(i) la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al mostrado en la Figura 1a; y/o

(ii) la forma sólida del compuesto de Fórmula A muestra un pico endotérmico en su termografía DSC a 151 ± 3° C; y/o

la forma sólida del compuesto de Fórmula A tiene una termografía DSC sustancialmente igual a la que se muestra en la Figura 3.

13. Una forma de dosificación sólida oral como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y 11, para su uso en terapia.

14. Una forma de dosificación sólida oral como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y 11, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática, en donde:

(i) la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática se selecciona de agudeza visual deteriorada, retinopatía diabética, permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética, edema macular diabético, angioedema hereditario, oclusión de la vena retiniana, diabetes, pancreatitis, hemorragia cerebral, nefropatía, cardiomiopatía, neuropatía, enfermedad inflamatoria intestinal, artritis, inflamación, choque séptico, hipotensión, cáncer, síndrome de dificultad respiratoria del adulto, coagulación intravascular diseminada, coagulación sanguínea durante la cirugía de derivación cardiopulmonar y sangrado de cirugía posoperatoria; o, (ii) la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática se selecciona de permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética, edema macular diabético y angioedema hereditario; o,

(iii) la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática se selecciona de permeabilidad vascular retiniana asociada con retinopatía diabética y edema macular diabético; o,

(iv) la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática es edema macular diabético.

15. La forma de dosificación sólida oral para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la enfermedad o afección mediada por la calicreína plasmática es angioedema hereditario.