ES2912954T3 - Combinación de un compuesto de pirroloquinolina y un agente antimicrobiano de aminoglucósido - Google Patents

Abstract

Una combinación que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

DESCRIPCIÓN

Combinación de un compuesto de pirroloquinolina y un agente antimicrobiano de aminoglucósido

La presente invención se refiere a una combinación de agentes antimicrobianos que son útiles para la prevención y/o el tratamiento de infecciones microbianas. En particular, se refiere a una combinación que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos. Esta combinación es particularmente útil para la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa.

Antes de la aparición de los antibióticos, los pacientes que padecían infecciones microbianas agudas (por ejemplo, tuberculosis o neumonía) tenían pocas posibilidades de supervivencia. Por ejemplo, la mortalidad por tuberculosis era de alrededor del 50 %. Aunque la aparición de agentes antimicrobianos en los años cuarenta y cincuenta cambió rápidamente este panorama, las bacterias han respondido mediante la adquisición progresiva de resistencia a los antibióticos de uso habitual. Actualmente, todos los países del mundo tienen bacterias resistentes a los antibióticos. De hecho, más del 70 % de las bacterias que dan lugar a infecciones intrahospitalarias en los EE.UU. resisten a al menos uno de los principales agentes antimicrobianos que se usan normalmente para combatir las infecciones (Nature Reviews, Drug Discovery 1, 895-910 (2002)).

Una manera de abordar el creciente problema de las bacterias resistentes es el desarrollo de nuevas clases de agentes antimicrobianos. Sin embargo, hasta la aparición del linezolid en 2000, no se había comercializado ninguna clase nueva de antibiótico durante más de 37 años. Además, incluso el desarrollo de clases nuevas de antibióticos proporciona únicamente una solución temporal y, de hecho, ya existen informes sobre la resistencia de determinadas bacterias al linezolid (Lancet 357, 1179 (2001) y Lancet 358, 207-208 (2001)).

Para desarrollar soluciones a más largo plazo para el problema de la resistencia bacteriana, está claro que se precisan enfoques alternativos. Uno de tales enfoques alternativos es reducir al mínimo, tanto como sea posible, las oportunidades que se dan a las bacterias para el desarrollo de resistencia a los antibióticos importantes. Por tanto, las estrategias que se pueden adoptar incluyen limitar el uso de los antibióticos para el tratamiento de las infecciones no agudas, así como controlar qué antibióticos se administran a los animales con el fin de propiciar el crecimiento.

Sin embargo, para abordar el problema de manera más eficaz, resulta necesario comprender los mecanismos reales mediante los cuales las bacterias generan resistencia a los agentes antibióticos. Hacer esto precisa, en primer lugar, un estudio de cómo actúan los agentes antibióticos actuales para destruir las bacterias.

Los agentes antimicrobianos se dirigen a componentes esenciales del metabolismo bacteriano. Por ejemplo, las lactamas p (por ejemplo, las penicilinas y cefalosporinas) inhiben la síntesis de la pared celular, mientras que otros agentes inhiben una diversa gama de dianas, tales como la ADN girasa (quinolonas) y la síntesis de proteínas (por ejemplo, macrólidos, aminoglucósidos, tetraciclinas y oxazolidinonas). La gama de organismos contra los que los agentes antimicrobianos son eficaces varía, dependiendo de qué organismos dependen en gran medida de la etapa (o etapas) metabólica que se inhibe/inhiben. Además, el efecto sobre las bacterias puede variar desde una mera inhibición del cultivo (es decir, un efecto bacteriostático, como se observa con agentes tales como las tetraciclinas) hasta la destrucción total (es decir, un efecto bactericida, tal como se observa, por ejemplo, con la penicilina).

Las bacterias han estado creciendo en la Tierra durante más de 3 mil millones de años y, en ese tiempo, han tenido que responder a un gran número de presiones del entorno. Por lo tanto, quizás no resulte sorprendente que las bacterias hayan desarrollado una diversidad aparentemente inagotable de mecanismos mediante los cuales pueden responder a las presiones metabólicas que les imponen los agentes antibióticos. De hecho, los mecanismos mediante los que las bacterias pueden generar resistencia incluyen estrategias tan diversas como la inactivación de fármacos, la modificación del sitio de acción, la modificación de la permeabilidad de la pared celular, la sobreproducción de la enzima diana y la elusión de las etapas inhibidas. No obstante, se ha observado que la tasa de resistencia que aparece para un agente en particular varía extensamente, dependiendo de factores tales como el mecanismo de acción del agente, de si el modo de destrucción del agente depende del tiempo o la concentración, de la potencia contra la población de bacterias y de la magnitud y duración de la concentración en suero disponible.

Se ha propuesto (Science 264, 388-393 (1994)) que los agentes que se dirigen a enzimas individuales (por ejemplo, rifampicina) son los más propensos al desarrollo de resistencia. Además, cuanto más tiempo estén en contacto con las bacterias niveles subóptimos del agente antimicrobiano, más probable es la aparición de resistencia.

Además, actualmente se sabe que muchas infecciones microbianas incluyen subpoblaciones de bacterias que son fenotípicamente resistentes a los antimicrobianos (J. Antimicrob. Chemother. 4, 395-404 (1988); J. Med. Microbiol. 38, 197-202 (1993); J. Bacteriol. 182, 1794-1801 (2000); anteriormente citado, 182, 6358-6365 (2000); anteriormente citado, 183, 6746-6751 (2001); FEMS Microbiol. Lett. 202, 59-65 (2001); y Trends in Microbiology 13, 34-40 (2005)). Parece haber varios tipos de tales bacterias fenotípicamente resistentes, incluyendo bacterias persistentes, de fase estacionaria, así como las de la profundidad de las biopelículas. Sin embargo, cada uno de estos tipos se caracteriza por su baja tasa de crecimiento en comparación con las bacterias en fase logarítmica en las mismas condiciones. La carencia de nutrientes y las altas densidades celulares también son características comunes de tales bacterias.

Aunque son resistentes a los agentes antimicrobianos en su estado de crecimiento lento, las bacterias fenotípicamente resistentes difieren de las que son genotípicamente resistentes en que recuperan su susceptibilidad a los antimicrobianos cuando vuelven a un estado de crecimiento rápido (por ejemplo, cuando los nutrientes se vuelven más fácilmente disponibles para ellas).

La presencia de bacterias fenotípicamente resistentes en una infección conduce a la necesidad de ciclos prolongados de agentes antimicrobianos, que comprenden múltiples dosis. Esto se debe a que las bacterias resistentes que se multiplican lentamente proporcionan un agrupamiento de organismos "latentes" que se pueden convertir a un estado de crecimiento rápido cuando las condiciones lo permiten (reiniciando de este modo la infección de forma eficaz). Múltiples dosis a lo largo del tiempo solucionan este problema mediante la destrucción gradual de las bacterias "latentes" que se convierten a una forma "activa".

Sin embargo, hacer frente a las bacterias "latentes" mediante la administración de ciclos prolongados de antimicrobianos plantea sus propios problemas. Es decir, la exposición prolongada de las bacterias a concentraciones subóptimas de agente antimicrobiano puede conducir a la aparición de bacterias genotípicamente resistentes, que a continuación se pueden multiplicar rápidamente en presencia de incluso concentraciones altas del antimicrobiano.

Es más probable que los ciclos prolongados con antimicrobianos fomenten la aparición de resistencia genotípica que los ciclos más cortos, ya que las bacterias que no se multiplican tienden a sobrevivir y, curiosamente, probablemente tengan una capacidad potenciada de mutar a la resistencia (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 11736-11740 (1995); J. Bacteriol. 179, 6688-6691 (1997); y Antimicrob. Agents Chemother. 44, 1771-1777 (2000)).

En vista de lo anterior, un nuevo enfoque para combatir el problema de la resistencia bacteriana podría ser seleccionar y desarrollar agentes antimicrobianos basándose en su capacidad para destruir microorganismos "latentes". La producción de tales agentes permitiría, entre otras cosas, el acortamiento de los regímenes de quimioterapia en el tratamiento de infecciones microbianas, reduciendo, por tanto, la frecuencia con la que surge la resistencia genotípica en los microorganismos.

La Solicitud de Patente Internacional, número de publicación WO2000028074 describe un método de cribado de compuestos para determinar su capacidad para destruir microorganismos clínicamente latentes. Utilizando este método, el Solicitante ha observado que muchos agentes antimicrobianos convencionales, tales como co-amoxiclav, azitromicina, levofloxacino, linezolid y mupirocina, que por lo demás presentan una excelente actividad biológica contra las bacterias en fase logarítmica (es decir, que se multiplican), presentan poca o ninguna actividad contra microorganismos clínicamente latentes. Esta observación ha hecho necesario el desarrollo de antimicrobianos novedosos que se puedan utilizar para destruir microorganismos clínicamente latentes.

Las Solicitudes de Patente Internacional, números de publicación WO2007054693, WO2008117079 y WO2008142384 describen compuestos que presentan actividad biológica contra microorganismos clínicamente latentes. Los ejemplos de tales compuestos incluyen 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina, 4-(3-bencilpirrolidin-1-il)-2-metil-6-fenoxiquinolina, N-[4-(3-bencilpirrolidin-1-il)-2-metilquinolin-6-il]benzamida y derivados farmacéuticamente aceptables de las mismas.

La solicitud de patente internacional WO2008056151 describe formulaciones farmacéuticas para aplicación tópica que comprenden compuestos basados en el sistema de anillos de pirrol[3,2-c]quinolina. Uno de tales compuestos es 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina.

Se conocen una diversidad de agentes antimicrobianos de aminoglucósido. Los ejemplos incluyen amikacina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona.

La presente invención se basa en el hallazgo inesperado de que la actividad antimicrobiana de un agente antimicrobiano de aminoglucósido mejora sustancialmente si se administra en combinación con el compuesto 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina. Además, esta combinación de agentes ha demostrado sorprendentemente que presenta una actividad antimicrobiana sinérgica contra determinados microorganismos en fase logarítmica (es decir, que se multiplican) y en fase estacionaria (es decir, que no se multiplican). La sorprendente actividad biológica de la combinación de la presente invención ofrece la oportunidad de acortar los regímenes de quimioterapia y puede dar como resultado una reducción de la aparición de la resistencia microbiana asociada al uso de tal combinación.

Por tanto, en una realización la presente invención proporciona una combinación que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización, la invención proporciona la combinación de la invención para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde la infección bacteriana está provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa; en particular para la destrucción de bacterias que se multiplican, que no se multiplican y/o las clínicamente latentes asociadas a tal infección.

Como se usa en el presente documento, las expresiones "combinación" y "en combinación con" se refieren a la administración separada y secuencial de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma y el agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Cuando los agentes se administran secuencialmente, puede administrarse en primer lugar la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma o el agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Cuando la administración es simultánea, los agentes pueden administrarse en la misma composición farmacéutica o en una distinta. El tratamiento complementario, es decir, cuando se usa un agente como tratamiento primario y el otro agente se usa para ayudar a ese tratamiento primario, también es una realización de la presente invención.

De acuerdo con una realización adicional de la invención, se proporciona un producto que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como una preparación combinada para el uso simultáneo, por separado o secuencial en la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde la infección está provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en particular para su uso en la destrucción de bacterias que se multiplican, que no se multiplican y/o las clínicamente latentes asociadas a tal infección.

También se proporciona una composición farmacéutica que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo y un adyuvante, diluyente o transportador farmacéuticamente aceptable, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos. Dicha composición puede utilizarse para la prevención y/o el tratamiento de infecciones bacterianas, en donde la infección está provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa, y en particular para su uso en la destrucción de bacterias que se multiplican, que no se multiplican y/o las clínicamente latentes asociadas a tal infección.

La combinación de la presente invención puede utilizarse para prevenir y/o tratar infecciones bacterianas provocadas por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa. En particular, puede utilizarse para destruir bacterias que se multiplican, que no se multiplican y/o las clínicamente latentes asociadas con tales infecciones. Las referencias en el presente documento al tratamiento de una infección bacteriana incluyen, por lo tanto, destruir bacterias que se multiplican, que no se multiplican y/o las clínicamente latentes asociadas con tales infecciones.

Los agentes antimicrobianos de aminoglucósido adecuados para su uso en las combinaciones de la presente invención incluyen uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, y una sal y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los agentes antimicrobianos de aminoglucósido preferidos son kanamicina, gentamicina, tobramicina y neomicina, y sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables. En una realización de la invención, el agente antimicrobiano de aminoglucósido es gentamicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización alternativa de la invención, el agente antimicrobiano de aminoglucósido es neomicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización alternativa adicional de la invención, el agente antimicrobiano de aminoglucósido es kanamicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma. En aún una realización alternativa adicional de la invención, el agente antimicrobiano de aminoglucósido es tobramicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma.

Como se usa en el presente documento, el término "destruir" significa una pérdida de viabilidad, como se evalúa mediante una falta de actividad metabólica.

Como se usa en el presente documento, "microorganismo clínicamente latente" significa un microorganismo (por ejemplo, una bacteria o bacterias) que es metabólicamente activo, pero tiene una tasa de crecimiento que está por debajo del umbral de expresión de una enfermedad infecciosa. El umbral de expresión de una enfermedad infecciosa se refiere al umbral de la tasa de crecimiento por debajo del cual están ausentes los síntomas de la enfermedad infecciosa en un hospedador.

La actividad metabólica de los microorganismos clínicamente latentes puede determinarse mediante varios métodos conocidos por los expertos en la materia; por ejemplo, mediante la medición de los niveles de ARNm en los microorganismos o mediante la determinación de su tasa de captación de uridina. En este sentido, los microorganismos clínicamente latentes, en comparación con los microorganismos en condiciones de cultivo logarítmico (in vitro o in vivo), poseen niveles reducidos, pero aún significativos, de:

(I) ARNm (por ejemplo, del 0,0001 al 50 %, tal como del 1 al 30, del 5 al 25 o del 10 al 20 %, del nivel de ARNm); y/o

(II) captación de uridina (por ejemplo, [3H]uridina) (por ejemplo, del 0,0005 al 50 %, tal como del 1 al 40, del 15 al 35 o del 20 al 30 % del nivel de captación de [3H]uridina).

Los microorganismos clínicamente latentes poseen normalmente una serie de características identificables. Por ejemplo, pueden ser viables, pero no cultivables; es decir, normalmente no pueden detectarse mediante técnicas de cultivo convencionales, pero son detectables y cuantificables mediante técnicas tales como recuento por dilución en caldo, microscopía, o técnicas moleculares, tales como reacción en cadena de la polimerasa. Además, los microorganismos clínicamente latentes son fenotípicamente tolerantes y, como tales, son sensibles (en fase logarítmica) a los efectos biostáticos de los agentes antimicrobianos convencionales (es decir, los microorganismos para los que la concentración inhibidora mínima (CIM) de un antimicrobiano convencional no cambia sustancialmente); pero poseen una susceptibilidad drásticamente disminuida a la destrucción inducida por fármacos (por ejemplo, los microorganismos para los que, con cualquier agente antimicrobiano convencional dado, la relación de la concentración microbiocida mínima (por ejemplo, la concentración bactericida mínima, CBM) respecto a la CIM es de 10 o más).

Como se usa en el presente documento, el término "microorganismos" significa hongos y bacterias. Las referencias en el presente documento a "microbiano", "antimicrobiano" y "de forma antimicrobiana" se interpretará en consecuencia. Por ejemplo, el término "microbiano" significa hongos o bacterias, e "infección microbiana" significa cualquier infección fúngica o bacteriana.

Como se usa en el presente documento, el término "bacterias" (y los derivados del mismo, tal como "infección microbiana") incluye, pero sin limitación, referencias a organismos (o infecciones debidas a organismos) de las siguientes clases y tipos específicos:

cocos grampositivos, tales como estafilococos (por ejemplo Staph. aureus, Staph. epidermidis, Staph. saprophyticus, Staph. auricularis, Staph. capitis capitis, Staph. c. ureolyticus, Staph. caprae, Staph. cohnii cohnii, Staph. c. urealyticus, Staph. equorum, Staph. gallinarum, Staph. haemolyticus, Staph. hominis hominis, Staph. h. novobiosepticius, Staph. hyicus, Staph. intermedius, Staph. lugdunensis, Staph. pasteuri, Staph. saccharolyticus, Staph. schleiferi schleiferi, Staph. s. coagulans, Staph. sciuri, Staph. simulans, Staph. warneri y Staph. xylosus);

estreptococos (por ejemplo, betahemolítico, estreptococos piógenos (tales como Strept. agalactiae, Strept. canis, Strept. dysgalactiae dysgalactiae, Strept. dysgalactiae equisimilis, Strept. equi equi, Strept. equi zooepidemicus, Strept. iniae, Strept. porcinus y Strept. pyogenes), microaerophilic, pyogenic streptococci (Streptococcus "milleri", tales como Strept. anginosus, Strept. constellatus constellatus, Strept. constellatus pharyngidis y Strept. intermedius), estreptococos del grupo “mitis” de la cavidad bucal (alpha-haemolytic - Streptococcus "viridans", tales como Strept. mitis, Strept. oralis, Strept. sanguinis, Strept. cristatus, Strept. gordonii y Strept. parasanguinis), "salivarius" (no hemolíticos, tales como Strept. salivarius y Strept. vestibularis) y grupos "mutans" (estreptococos de la superficie dental, tales como Strept. criceti, Strept. mutans, Strept. ratti y Strept. sobrinus), Strept. acidominimus, Strept. bovis, Strept. faecalis, Strept. equinus, Strept. pneumoniae y Strept. suis, o estreptococos clasificados alternativamente como Streptococcus Grupo A, B, C, D, E, G, L, P, U o V);

cocos gramnegativos, tales como Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Neisseria cinerea, Neisseria elongata, Neisseria flavescens, Neisseria lactamica, Neisseria mucosa, Neisseria sicca, Neisseria subflava y Neisseria weaveri;

Bacillaceae, tales como Bacillus anthracis, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus stearothermophilus y Bacillus cereus;

Enterobacteriaceae, tal como Escherichia coli, Enterobacter (por ejemplo, Enterobacter aerogenes, Enterobacter agglomerans y Enterobacter cloacae), Citrobacter (tales como Citrob. freundii y Citrob. divernis), Hafnia (por ejemplo, Hafnia alvei), Erwinia (por ejemplo, Erwinia persicinus), Morganella morganii, Salmonella (Salmonella enterica y Salmonella typhi), Shigella (por ejemplo, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii y Shigella sonnei), Klebsiella (por ejemplo Klebs. pneumoniae, Klebs. oxytoca, Klebs. ornitholytica, Klebs. planticola, Klebs. ozaenae, Klebs. terrigena, Klebs. granulomatis (Calymmatobacterium granulomatis) y Klebs. rhinoscleromatis), Proteus (por ejemplo, Pr. mirabilis, Pr. rettgeri y Pr. vulgaris), Providencia (por ejemplo, Providencia alcalifaciens, Providencia rettgeri y Providencia stuartii), Serratia (por ejemplo, Serratia marcescens y Serratia liquifaciens), y Yersinia (por ejemplo, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis y Yersinia pseudotuberculosis);

Enterococci (por ejemplo Enterococcus avium, Enterococcus casseliflavus, Enterococcus cecorum, Enterococcus dispar, Enterococcus durans, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus flavescens, Enterococcus gallinarum, Enterococcus hirae, Enterococcus malodoratus, Enterococcus mundtii, Enterococcus pseudoavium, Enterococcus raffinosus y Enterococcus solitarius);

Helicobacter (por ejemplo, Helicobacter pylori, Helicobacter cinaedi y Helicobacter fennelliae); Acinetobacter (por ejemplo, A. baumanii, A. calcoaceticus, A. haemolyticus, A. johnsonii, A. junii, A. Iwoffi y A. radioresistens);

Pseudomonas (p. ej. Ps. aeruginosa, Ps. maltophilia (Stenotrophomonas maltophilia), Ps. alcaligenes, Ps. chlororaphis, Ps. fluorescens, Ps. luteola. Ps. mendocina, Ps. monteilii, Ps. oryzihabitans, Ps. pertocinogena, Ps. pseudalcaligenes, Ps. putida y Ps. stutzeri);

Bacteriodes fragilis;

Peptococcus (por ejemplo, Peptococcus niger);

Peptostreptococcus;

Clostridium (por ejemplo, C. perfringens, C. difficile, C. botulinum, C. tetani, C. absonum, C. argentinense, C. baratii, C. bifermentans, C. beijerinckii, C. butyricum, C. cadaveris, C. carnis, C. celatum, C. clostridioforme, C. cochlearium, C. cocleatum, C. fallax, C. ghonii, C. glycolicum, C. haemolyticum, C. hastiforme, C. histolyticum, C. indolis, C. innocuum, C. irregulare, C. leptum, C. limosum, C. malenominatum, C. novyi, C. oroticum, C. paraputrificum, C. piliforme, C. putrefasciens, C. ramosum, C. septicum, C. sordelii, C. sphenoides, C. sporogenes, C. subterminale, C. symbiosum y C. tertium);

Mycoplasma (por ejemplo, M. pneumoniae, M. hominis, M. genitalium y M. urealyticum);

Mycobacteria (por ejemploMycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium marinum, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium abscessus, Mycobacterium leprae, Mycobacterium smegmitis, Mycobacterium africanum, Mycobacterium alvei, Mycobacterium asiaticum, Mycobacterium aurum, Mycobacterium bohemicum, Mycobacterium bovis, Mycobacterium branderi, Mycobacterium brumae, Mycobacterium celatum, Mycobacterium chubense, Mycobacterium confluentis, Mycobacterium conspicuum, Mycobacterium cookii, Mycobacterium flavescens, Mycobacterium gadium, Mycobacterium gastri, Mycobacterium genavense, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium goodii, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium hassicum, Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium interjectum, Mycobacterium heidelberense, Mycobacterium lentiflavum, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium microgenicum, Mycobacterium microti, Mycobacterium mucogenicum, Mycobacterium neoaurum, Mycobacterium nonchromogenicum, Mycobacterium peregrinum, Mycobacterium phlei, Mycobacterium scrofulaceum, Mycobacterium shimoidei, Mycobacterium simiae, Mycobacterium szulgai, Mycobacterium terrae, Mycobacterium thermoresistabile, Mycobacterium triplex, Mycobacterium triviale, Mycobacterium tusciae, Mycobacterium ulcerans, Mycobacterium vaccae, Mycobacterium wolinskyi y Mycobacterium xenopi);

Haemophilus (p. ej. Haemophilus influenzae, Haemophilus ducreyi, Haemophilus aegyptius, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus haemolyticus y Haemophilus parahaemolyticus);

Actinobacillus (p. ej. Actinobacillus actinomycetemcomitans, Actinobacillus equuli, Actinobacillus hominis, Actinobacillus lignieresii, Actinobacillus suis y Actinobacillus ureae);

Actinomyces (p. ej. Actinomyces israelii);

Brucella (por ejemplo Brucella abortus, Brucella canis, Brucella melintensis y Brucella suis); Campylobacter (p. ej. Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Campylobacter lari y Campylobacter fetus);

Listeria monocytogenes;

Vibrio (por ejemplo Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus, Vibrio alginolyticus, Vibrio carchariae, Vibrio fluvialis, Vibrio furnissii, Vibrio hollisae, Vibrio metschnikovii, Vibrio mimicus y Vibrio vulnificus);

Erysipelothrix rhusopathiae;

Corynebacteriaceae (p. ej. Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium jeikeum y Corynebacterium urealyticum); Spirochaetaceae, tales como Borrelia (por ejemplo Borrelia recurrentis, Bórrela burgdorferi, Bórrela afzelii, Bórrela andersonii, Bórrela bissettii, Bórrela garinii, Bórrela japónica, Bórrela lusitaniae, Bórrela tanukii, Bórrela turdi, Bórrela valaisiana, Bórrela caucasica, Bórrela crócidurae, Bórrela duttóni, Bórrela graingeri, Bórrela hermsii, Bórrela hispanica, Bórrela latyschewii, Bórrela mazzóttii, Bórrela parkeri, Bórrela persica, Bórrela turicatae y Bórrela venezuelensis) y Treponema (Trepónema pallidum ssp. pallidum, Trepónema pallidum ssp. endemicum, Trepónema pallidum ssp. pertenue y Trepónema carateum);

Pasteurella (por ejemplo Pasteurella aerógenes, Pasteurella bettyae, Pasteurella canis, Pasteurella dagmatis, Pasteurella gallinarum, Pasteurella haemólytica, Pasteurella multócida multócida, Pasteurella multócida gallicida, Pasteurella multócida septica, Pasteurella pneumótrópica y Pasteurella stómatis);

Bordetella (p. ej. Bórdetella brónchiseptica, Bórdetella hinzii, Bórdetella hólmseii, Bórdetella parapertussis, Bórdetella pertussis y Bórdetella trematum);

Nócardiaceae, tales como Nócardia (p. ej. Nócardia asteróides y Nócardia brasiliensis); Rickettsia (p. ej. Ricksettsii o Cóxiella burnetii);

Legionella (p. ej. Legiónalla anisa, Legiónalla birminghamensis, Legiónalla bózemanii, Legiónalla cincinnatiensis, Legiónalla dumóffii, Legiónalla feeleii, Legiónalla górmanii, Legiónalla hackeliae, Legiónalla israelensis, Legiónalla jórdanis, Legiónalla lansingensis, Legiónalla lóngbeachae, Legiónalla maceachernii, Legiónalla micdadei, Legiónalla óakridgensis, Legiónalla pneumóphila, Legiónalla sainthelensi, Legiónalla tucsónensis y Legiónalla wadswórthii); Móraxella catarrhalis;

Cyclóspóra cayetanensis;

Entamóeba histólytica;

Giardia lamblia;

Trichómónas vaginalis;

Tóxóplasma góndii;

Stenótróphómónas maltóphilia;

Burkhólderia cepacia; Burkhólderia mallei y Burkhólderia pseudómallei;

Francisella tularensis;

Gardnerella (p. ej. Gardneralla vaginalis y Gardneralla móbiluncus);

Streptóbacillus mónilifórmis;

Flavóbacteriaceae, tales como Capnócytóphaga (p. ej. Capnócytóphaga canimórsus, Capnócytóphaga cynódegmi, Capnócytóphaga gingivalis, Capnócytóphaga granulósa, Capnócytóphaga haemólytica, Capnócytóphaga óchracea y Capnócytóphaga sputigena);

Bartónella (Bartónella bacillifórmis, Bartónella clarridgeiae, Bartónella elizabethae, Bartónella henselae, Bartónella quintana y Bartónella vinsónii arupensis);

Leptóspira (por ejemplo Leptóspira biflexa, Leptóspira bórgpetersenii, Leptóspira inadai, Leptóspira interrógans, Leptóspira kirschneri, Leptóspira nóguchii, Leptóspira santarósai y Leptóspira weilii);

Spirillium (p. ej. Spirillum minus);

Baceteróides (p. ej. Bacteróides caccae, Bacteróides capillósus, Bacteróides cóagulans, Bacteróides distasónis, Bacteróides eggerthii, Bacteróides fórsythus, Bacteróides fragilis, Bacteróides merdae, Bacteróides óvatus, Bacteróides putredinis, Bacteróides pyógenes, Bacteróides splanchinicus, Bacteróides stercóris, Bacteróides tectus, Bacteróides thetaiótaómicrón, Bacteróides unifórmis, Bacteróides ureólyticus y Bacteróides vulgatus);

Prevotella (p. ej. Prevótella bivia, Prevótella buccae, Prevótella córpóris, Prevótella dentalis (Mitsuókella dentalis), Prevótella denticóla, Prevótella disiens, Prevótella enóeca, Prevótella heparinólytica, Prevótella intermedia, Prevótella lóeschii, Prevótella melaninógenica, Prevótella nigrescens, Prevótella óralis, Prevótella óris, Prevótella óulóra, Prevótella tannerae, Prevótella venóralis y Prevótella zóógleófórmans);

Pórphyrómónas (p. ej. Pórphyrómónas asaccharólytica, Pórphyrómónas cangingivalis, Pórphyrómónas canóris, Pórphyrómónas cansulci, Pórphyrómónas catóniae, Pórphyrómónas circumdentaria, Pórphyrómónas crevióricanis, Pórphyrómónas endódóntalis, Pórphyrómónas gingivalis, Pórphyrómónas gingivicanis, Pórphyrómónas levii y Pórphyrómónas macacae);

Fusobacterium (p. ej. F. gonadiaformans, F. mortiferum, F. naviforme, F. necrogenes, F. necrophorum necrophorum, F. necrophorum fundiliforme, F. nucleatum nucleatum, F. nucleatum fusiforme, F. nucleatum polymorphum, F. nucleatum vincentii, F. periodonticum, F. russii, F. ulcerans y F. varium);

Chlamydia (p. ej. Chlamydia trachomatis);

Cryptosporidium (p. ej. C. parvum, C. hominis, C. canis, C. felis, C. meleagridis y C. muris);

Chlamydophila (p. ej. Chlamydophila abortus (Chlamydia psittaci), Chlamydophila pneumoniae (Chlamydia pneumoniae) y Chlamydophila psittaci (Chlamydia psittaci));

Leuconostoc (p. ej. Leuconostoc citreum, Leuconostoc cremoris, Leuconostoc dextranicum, Leuconostoc lactis, Leuconostoc mesenteroides y Leuconostoc pseudomesenteroides);

Gemella (p. ej. Gemella bergeri, Gemella haemolysans, Gemella morbillorum y Gemella sanguinis); y Ureaplasma (p. ej. Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum).

Las bacterias particulares que pueden tratarse utilizando una combinación de la invención incluyen: estafilococos, tales como Staph. aureus (ya sea sensible a la meticilina (es decir, MSSA, forma siglada de methicillinsensitive Staphylococcus aureus) o resistente a la meticilina (es decir, MRSA, forma siglada de methicillin-resistant Staphylococcus aureus) y Staph. epidermidis;

estreptococos, tales como, Strept. agalactiae y Strept. pyogenes;

Bacillaceae, tales como Bacillus anthracis;

Enterobacteriaceae, tal como Escherichia coli, Klebsiella (por ejemplo, Klebs. pneumoniae y Klebs. oxytoca) y Proteus (por ejemplo, Pr. mirabilis, Pr. rettgeri y Pr. vulgaris);

Haemophilis influenzae;

Pseudomonas (por ejemplo, Ps. aeruginosa, Ps. maltophilia (Stenotrophomonas maltophilia), Ps. alcaligenes, Ps. chlororaphis, Ps. fluorescens, Ps. luteola. Ps. mendocina, Ps. monteilii, Ps. oryzihabitans, Ps. pertocinogena, Ps. pseudalcaligenes, Ps. putida y Ps. stutzeri);

enterococos, tales como Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium; y

Mycobacteria, tales como Mycobacterium tuberculosis.

En una realización de la invención, la combinación es para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde la infección bacteriana está provocada por Staph. aureus; por ejemplo, ya sea MSSA o MRSA, o Pseudomonas aeruginosa.

En una realización preferida de la invención, se proporciona el uso de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, preferentemente la sal clorhidrato o mesilato de la misma, en combinación con tobramicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana provocada por Pseudomonas aeruginosa; en particular para la destrucción de microorganismos que se multiplican, que no se multiplican y/o clínicamente latentes asociados a tal infección.

En una realización preferida adicional de la invención, se proporciona el uso de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, preferentemente la sal clorhidrato o mesilato de la misma, en combinación con kanamicina, gentamicina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la mismas para la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana provocada por Staphylococcus aureus, preferentemente MSSA o MRSA; en particular para la destrucción de microorganismos que se multiplican, que no se multiplican y/o clínicamente latentes asociados a tal infección.

La combinación de la presente invención puede utilizarse para prevenir y/o tratar infecciones asociadas con cualquier organismo bacteriano, tales como los mencionados anteriormente; en particular, puede utilizarse para la destrucción de microorganismos que se multiplican, que no se multiplican y/o clínicamente latentes asociados a tal infección. Las afecciones particulares que pueden prevenirse y/o tratarse utilizando la combinación de la presente invención incluyen abscesos, conjuntivitis bacteriana, queratitis bacteriana, infecciones óseas y articulares, heridas de quemaduras, celulitis, colangitis, colecistitis, fibrosis quística, cistitis, enfermedades de las vías respiratorias altas, eccema, empiema, endocarditis, epididimitis, erisipela, infecciones oculares, forúnculos, infecciones gastrointestinales (gastroenteritis), infecciones genitales, gingivitis, quemaduras infectadas, infecciones después de operaciones dentales, infecciones en la región bucal, infecciones asociadas a prótesis, abscesos intraabdominales, abscesos hepáticos, mastitis, meningitis e infecciones del sistema nervioso, osteomielitis, otitis, orquitis, pancreatitis, paroniquia, pelviperitonitis, peritonitis, peritonitis con apendicitis, derrame pleural, neumonía, infecciones de heridas posoperatorias, gangrena gaseosa postoperatoria, prostatitis, enfisema pulmonar, pielonefritis, piodermia, salpingitis, artritis séptica, infecciones sépticas, septicemia, sinusitis, infecciones cutáneas, infecciones sistémicas, síndrome del choque tóxico o infecciones de heridas; o infecciones con MSSA o MRSA.

Las referencias en el presente documento a "tratamiento" se extienden tanto a la profilaxis como al tratamiento de enfermedades o síntomas establecidos.

Se apreciará que también se pueden administrar uno o más compuestos antimicrobianos adicionales en combinación con 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sale y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma y el agente antimicrobiano de aminoglucósido en conformidad con un aspecto de la presente invención.

Los compuestos antimicrobianos adicionales adecuados para su uso en la presente invención incluyen uno o más compuestos seleccionados de los siguientes:

(1) lactamas p, incluyendo:

(i) penicilinas, tales como

(I) bencilpenicilina, bencilpenicilina procaína, fenoxi-metilpenicilina, meticilina, propicilina, epicilina, ciclacilina, hetacilina, ácido 6-aminopenicilánico, ácido penicílico, sulfona del ácido penicilánico (sulbactam), penicilina G, penicilina V, feneticilina, ácido fenoximetilpenicilínico, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, D-(-)-penicilamina, dicloxacilina, nafcilina y oxacilina,

(II) penicilinas resistentes a la penicilinasa (por ejemplo, flucloxacilina),

(III) penicilinas de amplio espectro (por ejemplo, ampicilina, amoxicilina, metampicilina y bacampicilina),

(IV) penicilinas antipseudomonas (por ejemplo, carboxipenicilinas, tales como ticarcilina, o ureidopenicilinas, tales como piperacilina),

(V) mecilinamas (por ejemplo, pivmecilinam), o

(VI) combinaciones de cualesquiera dos o más de los agentes mencionados en (I) a (V) anteriores, o combinaciones de cualquiera de los agentes mencionados en (I) a (V) anteriores con un inhibidor de la lactamasa p, tal como tazobactam o, particularmente, ácido clavulánico (ácido que está opcionalmente en forma de sal de metal, por ejemplo, en forma de sal con un metal alcalino, tal como sodio o, particularmente, potasio);

(ii) cefalosporinas, tales como cefaclor, cefadroxilo, cefalexina (cephalexin), cefcapeno, cefcapeno pivoxilo, cefdinir, cefditoreno, cefditoreno pivoxilo, cefixima, cefotaxima, cefpiroma, cefpodoxima, cefpodoxima proxetilo, cefprozilo, cefradina, ceftazidima, cefteram, cefteram pivoxilo, ceftriaxona, cefuroxima, cefuroxima axetilo, cefaloridina, cefacetrilo, cefamandol (cephamandole), cefaloglicina, ceftobiprol, PPI-0903 (TAK-599), ácido 7-aminocefalosporánico, ácido 7-aminodesacetoxicefalosporánico, cefamandol, cefazolina, cefmetazol, cefoperazona, cefsulodina, sal de zinc de cefalosporina C, cefalotina, cefapirina; y

(iii) otras lactamas p, tales como monobactamas (por ejemplo, aztreonam), carbapenémicos (por ejemplo, imipenem (opcionalmente, en combinación con un inhibidor de la enzima renal, tal como cilastatina), meropenem, ertapenem, doripenem (S-4661) y RO4908463 (CS-023)), penémicos (por ejemplo, faropenem) y 1-oxa-p-lactamas (por ejemplo, latamoxef).

(2) Tetraciclinas, tales como tetraciclina, desmeclociclina, doxiciclina, limeciclina, minociclina, oxitetraciclina, clortetraciclina, meclociclina y metaciclina, así como glicilciclinas (por ejemplo, tigeciclina).

(3) Uno o más aminoglucósidos adicionales, tales como amikacina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona.

(4) (i) Macrólidos, tales como azitromicina, claritromicina, eritromicina, roxitromicina, espiramicina, anfotericinas B (por ejemplo, anfotericina B), bafilomicinas (por ejemplo, bafilomicina A1), brefeldinas (por ejemplo, brefeldina A), concanamicinas (por ejemplo, concanamicina A), complejo de filipina, josamicina, mepartricina, midecamicina, nonactina, nistatina, oleandomicina, oligomicinas (por ejemplo, oligomicina A, oligomicina B y oligomicina C), pimaricina, rifampicina, rifamicina, rosamicina, tilosina, virginiamicina y fosfomicina.

(ii) Cetólidos, tales como telitromicina y cetromicina (ABT-773).

(iii) Lincosaminas, tales como lincomicina.

(5) Clindamicina y clindamicina 2-fosfato.

(6) Fenicoles, tales como cloranfenicol y tianfenicol.

(7) Corticoides, tales como ácido fusídico (opcionalmente en forma de sal de metal, por ejemplo, en forma de sal con un metal alcalino, tal como sodio).

(8) Glucopéptidos, tales como vancomicina, teicoplanina, bleomicina, fleomicina, ristomicina, telavancina, dalbavancina y oritavancina.

(9) Oxazolidinonas, tales como linezolid y AZD2563.

(10) Estreptograminas, tales como quinupristina y dalfopristina, o una combinación de las mismas.

(11) (i) Péptidos, tales como polimixinas (por ejemplo, colistina y polimixina B), lisostafina, duramicina, actinomicinas (por ejemplo, actinomicina C y actinomicina D), actinonina, 7-aminoactinomicina D, antimicina A, antipaína, bacitracina, ciclosporina A, equinomicina, gramicidinas (por ejemplo, gramicidina A y gramicidina C), mixotiazol, nisina, paracelsina, valinomicina y viomicina.

(ii) Lipopéptidos, tales como daptomicina.

(iii) Lipoglucopéptidos, tales como ramoplanina.

(12) Sulfonamidas, tales como sulfametoxazol, sulfadiazina, sulfaquinoxalina, sulfatiazol (cuyos dos últimos agentes están opcionalmente en forma de sal de metal, por ejemplo, en forma de sal con un metal alcalino, tal como sodio), succinilsulfatiazol, sulfadimetoxina, sulfaguanidina, sulfametazina, sulfamonometoxina, sulfanilamida y sulfasalazina.

(13) Trimetoprim, opcionalmente en combinación con una sulfonamida, tal como sulfametoxazol (por ejemplo, la combinación co-trimoxazol).

(14) Fármacos antituberculosos, tales como isoniacida, rifampicina, rifabutina, pirazinamida, etambutol, estreptomicina, amikacina, capreomicina, kanamicina, quinolonas, ácido para-aminosalicílico, cicloserina y etionamida.

(15) Fármacos antileprosos, tales como dapsona, rifampicina y clofazimina.

(16) (i) Nitroimidazoles, tales como metronidazol y tinidazol.

(ii) Nitrofuranos, tales como nitrofurantoína.

(17) Quinolonas, tales como ácido nalidíxico, norfloxacino, ciprofloxacino, ofloxacino, levofloxacino, moxifloxacino, gatifloxacino, gemifloxacino, garenoxacino, DX-619, w Ck 771 (la sal de arginina de S-(-)-nadifloxacino), 8-quinolinol, cinoxacino, enrofloxacino, flumequina, lomefloxacino, ácido oxolínico y ácido pipemídico.

(18) Derivados de aminoácidos, tales como azaserina, bestatina, D-cicloserina, 1,10-fenantrolina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina y ácido L-alanil-L-1-aminoetil-fosfónico.

(19) Ácidos aureólicos, tales como cromomicina A3, mitramicina A y mitomicina C.

(20) Benzoquinoides, tales como herbimicina A.

(21) Cumarina-glucósidos, tales como novobiocina.

(22) Derivados de éter de difenilo, tales como irgasán.

(23) Epipolitiodixopiperazinas, tales como gliotoxina de Gliocladium fimbriatum.

(24) Derivados de ácidos grasos, tales como cerulenina.

(25) Glucosaminas, tales como 1-desoximanojirimicina, 1-desoxinojirimicina y W-metil-1-desoxinojirimicina.

(26) Derivados de indol, tales como estaurosporina.

(27) Diaminopirimidinas, tales como iclaprim (AR-100).

(28) Macrolactamas, tales como ascomicina.

(29) Taxoides, tales como paclitaxel.

(30) Estatinas, tales como mevastatina.

(31) Ácidos polifenólicos, tales como ácido (+)-úsnico.

(32) Poliéteres, tales como lasalocid A, lonomicina A, monensina, nigericina y salinomicina.

(33) Derivados de ácido picolínico, tales como ácido fusárico.

(34) Nucleósidos de peptidilo, tales como blasticidina S, nikomicina, nourseotricina y puromicina.

(35) Nucleósidos, tales como adenina 9-p-D-arabinofuranósido, 5-azacitidina, cordicepina, formicina A, tubercidina y tunicamicina.

(36) Pleuromutilinas, tales como GSK-565154, GSK-275833 y tiamulina.

(37) Inhibidores de la péptido desformilasa, tales como LBM415 (NVP PDF-713) y BB 83698.

(38) Agentes antibacterianos para la piel, tales como fucidina, benzamicina, clindamicina, eritromicina, tetraciclina, sulfadiazina de plata, clortetraciclina, metronidazol, framicitina, gramicidina, sulfato de neomicina, polimixinas (por ejemplo, polimixina B) y gentamicina.

(39) Agentes diversos, tales como metenamina (hexamina), doxorrubicina, piericidina A, estigmatelina, actidiona, anisomicina, apramicina, cumermicina A1, ácido L(+)-láctico, citocalasinas (por ejemplo, citocalasina B y citocalasina D), emetina y ionomicina.

(40) Agentes antisépticos, tales como clorhexidina, derivados de fenol (por ejemplo, timol y triclosán), compuestos de amonio cuaternario (por ejemplo, cloruro de benzalconio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de bencetonio, bromuro de cetrimonio, cloruro de cetrimonio y estearato de cetrimonio), diclorhidrato de octenidina y terpenos (por ejemplo, terpinen-4-ol).

Como se usa en el presente documento, la expresión "derivado farmacéuticamente aceptable" significa:

(a) sales farmacéuticamente aceptables; y/o

(b) solvatos (incluyendo hidratos).

Las sales de adición de ácido adecuadas incluyen sales de carboxilato (por ejemplo, sales de formiato, acetato, trifluoroacetato, propionato, isobutirato, heptanoato, decanoato, caprato, caprilato, estearato, acrilato, caproato, propiolato, ascorbato, citrato, glucuronato, glutamato, glicolato, a-hidroxibutirato, lactato, tartrato, fenilacetato, mandelato, fenilpropionato, fenilbutirato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, dinitrobenzoato, o-acetoxibenzoato, salicilato, nicotinato, isonicotinato, cinamato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, malato, maleato, hidroximaleato, hipurato, ftalato o tereftalato), sales de haluro (por ejemplo, sales de cloruro, bromuro o yoduro), sales de sulfonato (por ejemplo, bencenosulfonato, metil-, bromo- o cloro-bencenosulfonato, xilenosulfonato, metanosulfonato, etanosulfonato, propanosulfonato, hidroxietanosulfonato, 1- o 2-naftaleno-sulfonato o sales de 1,5-naftalenodisulfonato) o sales de sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato o nitrato.

Una forma de sal preferida de la gentamicina es la sal de sodio de la misma, gentamicina de sodio.

Una forma de sal preferida de la kanamicina es la sal de sodio de la misma, sulfato de kanamicina.

Una forma de sal preferida de la tobramicina es la sal de sodio de la misma, sulfato de tobramicina.

Una forma de sal preferida de la neomicina es la sal de sodio de la misma, sulfato de neomicina.

Para disipar cualquier duda, las referencias en el presente documento a la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina significan un compuesto que tiene la siguiente estructura química:

Se puede preparar la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o un derivado farmacéuticamente aceptable de la misma mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, siguiendo los métodos divulgados en la solicitud de patente internacional, números de publicación WO2007054693 y WO2008056151. Los derivados farmacéuticamente aceptables preferidos de la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina incluyen sales de adición de ácido de la misma, particularmente las sales de clorhidrato y mesilato de la misma.

Los agentes antimicrobianos de aminoglucósido pueden prepararse de acuerdo con métodos conocidos y/o están disponibles en el mercado. Por ejemplo, tobramicina, la kanamicina y la gentamicina están disponibles en el mercado en Sigma Aldrich Ltd.

Los compuestos incluidos en la combinación de la invención pueden administrarse simultánea o secuencialmente y, cuando se administran secuencialmente, la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma o el agente antimicrobiano de aminoglucósido como se define en el presente documento, pueden administrarse primero. Cuando la administración es simultánea, la combinación puede administrarse en la misma composición farmacéutica o en una distinta.

Los compuestos incluidos en la combinación de la invención pueden administrarse como materia prima, pero los principios activos se proporcionan preferentemente en forma de composiciones farmacéuticas.

Los principios activos pueden utilizarse como formulaciones separadas o como formulación combinada individual. Cuando se combinan en la misma formulación, se apreciará que los dos compuestos deben ser estables y compatibles entre sí y con los otros componentes de la formulación.

Las formulaciones de la invención incluyen las adecuadas para la administración oral, parenteral (incluyendo subcutánea, por ejemplo, mediante inyección o mediante comprimido de liberación lenta, intradérmica, intratecal, intramuscular, por ejemplo, mediante liberación lenta e intravenosa), rectal y tópica (incluyendo dérmica, bucal y sublingual) o en una forma adecuada para la administración mediante inhalación o insuflación. La vía de administración más adecuada puede depender de la afección y el trastorno del paciente.

Preferentemente, las composiciones de la invención están formuladas para administración oral o tópica o para la administración por inhalación.

Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en una forma farmacéutica unitaria y pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia, por ejemplo, como se describe en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Lippincott Williams y Wilkins, 21a Edición, (2005). Los métodos adecuados incluyen la etapa de asociar los principios activos con un transportador que constituya uno o más excipientes. En general, las formulaciones se preparan mediante la asociación de manera uniforme e íntima de los principios activos con transportadores líquidos o transportadores sólidos finamente divididos o ambos y, a continuación, si fuera necesario, dando forma al producto en la formulación deseada. Se apreciará que, cuando los dos principios activos se administran de manera independiente, cada uno puede administrarse mediante un medio distinto.

Cuando se formulan con excipientes, los principios activos pueden estar presentes en una concentración del 0,1 al 99,5 % (tal como del 0,5 al 95 %) en peso de la mezcla total; convenientemente del 30 al 95 %, para comprimidos y cápsulas, y del 0,01 al 50 %, para preparaciones líquidas.

Una concentración adecuada de la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma es de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10 %, preferentemente de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 5 %, por ejemplo, el 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 3, 4 o 5 %, en peso de la mezcla total.

Una concentración adecuada para un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo es del 0,01 al 10 %, por ejemplo, el 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,3, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 %, en peso de la mezcla total.

Las formulaciones adecuadas para la administración oral pueden presentarse como unidades discretas, tales como cápsulas, sellos o comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables, en particular, para administración pediátrica), conteniendo, cada uno, una cantidad predeterminada del principio activo; como polvo o granulados; como solución o suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o emulsión líquida de agua en aceite. El principio activo también puede presentarse como una inyección en embolada, electuario o pasta.

Se puede fabricar un comprimido mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más excipientes. Los comprimidos prensados pueden prepararse comprimiendo en una máquina adecuada el principio activo en forma fluida, tal como polvo o granulados, opcionalmente mezclado con otros excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón, polivinilpirrolidona y/o hidroximetil celulosa), rellenos (por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa microcristalina, almidón de maíz, fosfato de calcio y/o sorbitol), lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol y/o sílice), disgregantes (por ejemplo, almidón de patata, croscarmelosa de sodio y/o glicolato de almidón de sodio) y agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Los comprimidos moldeados pueden prepararse mediante el moldeo en una máquina adecuada de una mezcla del principio activo en polvo con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos pueden opcionalmente recubrirse o ranurarse, y pueden formularse para proporcionar una liberación controlada (por ejemplo, liberación retardada, sostenida o pulsada, o una combinación de liberación inmediata y liberación controlada) de los principios activos.

Como alternativa, los principios activos pueden incorporarse en preparaciones líquidas orales tales como suspensiones acuosas u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires. Las formulaciones que contienen los principios activos también pueden presentarse como un producto seco para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina, hidroximetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio y/o grasas hidrogenadas comestibles), agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán y/o goma arábiga), vehículos no acuosos (por ejemplo, aceites comestibles, tales como aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol y/o alcohol etílico) y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo y/o ácido sórbico).

Las composiciones tópicas, que son útiles para el tratamiento de trastornos cutáneos o de las membranas accesibles mediante la exploración digital (tales como la membrana de la boca, la vagina, el cuello uterino, el ano y el recto), incluyen cremas, pomadas, lociones, pulverizaciones, geles y soluciones o suspensiones acuosas estériles. Como tales, las composiciones tópicas incluyen aquellas en las que los principios activos se disuelven o dispersan en un vehículo dermatológico conocido en la técnica (por ejemplo, geles acuosos o no acuosos, pomadas, emulsiones de agua en aceite o de aceite en agua). Los constituyentes de tales vehículos pueden comprender agua, soluciones tampón acuosas, disolventes no acuosos (tales como etanol, isopropanol, alcohol bencílico, 2-(2-etoxietoxi)etanol, propilenglicol, monolaurato de propilenglicol, glicofurol o glicerol), aceites (por ejemplo, un aceite mineral, tal como una parafina líquida, triglicéridos naturales o sintéticos, tales como Miglyol™, o aceites de silicona, tales como dimeticona). Dependiendo, entre otros, de la naturaleza de la formulación, así como de su uso previsto y el sitio de aplicación, el vehículo dermatológico empleado puede contener uno o más componentes seleccionados del siguiente listado: un agente solubilizante o disolvente (por ejemplo, una p-ciclodextrina, tal como hidroxipropil p-ciclodextrina, o un alcohol o poliol, tal como etanol, propilenglicol o glicerol); un agente espesante (por ejemplo, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa o carbómero); un agente gelificante (por ejemplo, un copolímero de polioxietileno-polioxipropileno); un conservante (por ejemplo, alcohol bencílico, cloruro de benzalconio, clorhexidina, clorbutol, un benzoato, sorbato de potasio o EDTA, o una sal del mismo); y un agente (o agentes) tamponantes de pH (por ejemplo, una mezcla de sales de dihidrógeno fosfato e hidrógeno fosfato, o una mezcla de ácido cítrico y una sal de hidrógeno fosfato). Las formulaciones tópicas también pueden formularse como un parche transdérmico.

Los métodos de producción de composiciones farmacéuticas tópicas, tales como cremas, pomadas, lociones, pulverizaciones y soluciones o suspensiones acuosas estériles, son muy conocidas en la técnica. Se describen métodos adecuados de preparación de composiciones farmacéuticas tópicas, por ejemplo, en los documentos WO9510999, US 6974585, WO2006048747, así como en los documentos citados en cualquiera de estas referencias.

Las composiciones farmacéuticas tópicas de acuerdo con la presente invención pueden utilizarse para tratar una diversidad de trastornos cutáneos o de membranas, tales como infecciones cutáneas o de membranas (por ejemplo, infecciones de las membranas nasales, las axilas, la ingle, el perineo, el recto, la piel dermatítica, las úlceras cutáneas y los sitios de inserción de equipo médico, tales como agujas i.v., catéteres y cánulas de traqueotomía o sondas de alimentación) con cualquiera de las bacterias, hongos descritos anteriormente, (por ejemplo, cualquiera de los organismos estafilococos, estreptococos, Micobacteria o Pseudomonas mencionados anteriormente, tales como S. aureus (por ejemplo, S. aureus resistente a la meticilina (MRSA))).

Las composiciones tópicas de la invención pueden utilizarse para la desinfección preoperatoria quirúrgica de las manos, el lavado de manos antiséptico y la antisepsia preoperatoria y posoperatoria en pacientes sometidos a una intervención quirúrgica programada.

Las afecciones bacterianas particulares que pueden tratarse mediante las composiciones farmacéuticas tópicas de la presente invención también incluyen las afecciones relacionadas con la piel y con membranas divulgadas anteriormente en el presente documento.

En una realización preferida de la invención, se proporciona una composición farmacéutica tópica para la descolonización nasal del MRSA.

Las composiciones para su uso de acuerdo con la invención pueden presentarse en un envase o dosificador que puede contener una o más formas farmacéuticas unitarias que contengan los principios activos. El envase puede, por ejemplo, comprender papel metálico o plástico, tal como un envase alveolado. Cuando las composiciones estén destinadas a la administración como dos composiciones separadas, estas pueden presentarse en forma de un envase doble.

Las composiciones farmacéuticas también pueden recetarse al paciente en "envases para pacientes" que contienen el ciclo completo de tratamiento en un envase individual, habitualmente un envase alveolado. Los envases para pacientes tienen una ventaja sobre las recetas tradicionales, en las que el farmacéutico divide la provisión de un producto farmacéutico para el paciente a partir de una provisión a granel, en que el paciente siempre tiene acceso al prospecto de envase contenido en el envase para pacientes, que normalmente falta en las recetas tradicionales. Se ha demostrado que la inclusión del prospecto del envase mejora el cumplimiento terapéutico del paciente con las instrucciones del médico.

La administración de la combinación de la invención por medio de un envase para pacientes individual o envases para pacientes de cada composición, incluyendo un prospecto de envase que indique al paciente el uso correcto de la invención, es una característica adicional de la presente invención.

Por lo tanto, en el presente documento se describe un envase para pacientes que comprende al menos un principio activo de la combinación de acuerdo con la invención, es decir, al menos uno de 4-metil-8-fenoxM-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o un derivado farmacéuticamente aceptable de la misma y un agente antimicrobiano de aminoglucósido, y un prospecto informativo que contiene instrucciones sobre el uso de la combinación de la invención.

También se describe un paquete doble que comprende en asociación, para administración por separado, 4-metil-8-fenoxi-1 -(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o un derivado farmacéuticamente aceptable de la misma y un agente antimicrobiano de aminoglucósido.

La cantidad de principios activos necesarios para el tratamiento variará en función de la naturaleza de la afección tratada y de la edad y el estado del paciente y, en última instancia, quedará a criterio del médico o veterinario responsable. Sin embargo, en general, las dosis empleadas para el tratamiento de un ser humano adulto estarán normalmente en el intervalo de 0,02 a 5000 mg al día, preferentemente de 1 a 1500 mg al día. La dosis deseada puede presentarse convenientemente en una dosis individual o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o más subdosis al día.

Pruebas biológicas

Los procedimientos de prueba que se pueden emplear para determinar la actividad biológica (por ejemplo, bactericida o antimicrobiana) de los principios activos incluyen los conocidos por expertos en la materia para la determinación de:

(a) la actividad bactericida contra bacterias clínicamente latentes; y

(b) la actividad antimicrobiana contra bacterias en fase logarítmica.

En relación con el punto (a) anterior, los métodos para la determinación de la actividad contra bacterias clínicamente latentes incluyen una determinación, en condiciones conocidas por los expertos en la materia (tales como las descritas en Nature Reviews, Drug Discovery 1, 895-910 (2002)), de la concentración estacionaricida mínima ("CEM") o la concentración dormicida mínima ("CDM") de un compuesto de prueba.

A modo de ejemplo, el documento W02000028074 describe un método adecuado de cribado de compuestos para determinar su capacidad para destruir microorganismos clínicamente latentes. Un método típico puede incluir las siguientes etapas:

(1) cultivar un cultivo bacteriano hasta la fase estacionaria;

(2) tratar el cultivo en fase estacionaria con uno o más agentes antimicrobianos a una concentración y/o un tiempo suficiente para destruir las bacterias en cultivo, seleccionando, de este modo, una subpoblación fenotípicamente resistente;

(3) incubar una muestra de la subpoblación fenotípicamente resistente con uno o más compuestos o agentes de prueba; y

(4) evaluar cualquier efecto antimicrobiano contra la subpoblación fenotípicamente resistente.

De acuerdo con este método, la subpoblación fenotípicamente resistente puede verse como representativa de las bacterias clínicamente latentes que permanecen metabólicamente activas in vivo y que pueden dar como resultado una recidiva o aparición de la enfermedad.

En relación con el punto (b) anterior, los métodos para la determinación de la actividad contra las bacterias en fase logarítmica incluyen una determinación, en condiciones convencionales (es decir, condiciones conocidas por los expertos en la materia, tales como las descritas en el documento WO2005014585), de la concentración inhibidora mínima (CIM) o la concentración bactericida mínima (CBM) de un compuesto de prueba. A continuación, se describen ejemplos específicos de tales métodos.

Ejemplos

Ejemplo 1: Actividad in vitro de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina en combinación con kanamicina o gentamicina contra S. aureus en fase logarítmica

Materiales y métodos

Cepas bacterianas y medio de cultivo

Staphylococcus aureus (Oxford); grampositiva; Cepa de referencia.

Para el crecimiento nocturno de bacterias se utilizó Caldo Nutritivo N.° 2 (NB, forma siglada de Nutrient Broth) (Oxoid, Cambridge, GB). Para la evaluación de las concentraciones inhibidoras mínimas (las CIM), las pruebas de susceptibilidad para los antimicrobianos y la eficacia de las combinaciones de antimicrobianos se utilizó el caldo Iso-Sensitest (Oxoid).

Para el crecimiento y la cuantificación de los organismos se utilizó agar soja triptona (TSA, forma siglada de trypton soya agar) (Oxoid, Cambridge, GB). Todos los medios se autoclavaron a 121 °C durante 15 minutos antes de su uso.

Condiciones de cultivo bacteriano

Se prepararon cultivos bacterianos mediante la inoculación de 10 ml de NB con una colonia individual de bacterias en agar sangre o TSA y se incubaron a 37 °C con agitación continua a 100 rpm durante 16 a 24 horas. Los cultivos de una noche se utilizaron para las pruebas experimentales.

En el recuento de las UFC, se diluyeron las suspensiones bacterianas utilizando agua desionizada estéril o solución salina tamponada con fosfato (p Bs , Sigma Aldrich Ltd, Poole, Dorset, GB). Se sembraron en placas 100 pl de diluciones sucesivas con factor 10 de cultivo de bacterias en un tercio de las placas de TSA por triplicado y se incubaron de 24 a 48 horas a 37 °C. La cantidad de células que aparecieron en las placas se contó utilizando un contador de colonias AcoLyte (Synbiosis) y los resultados se expresaron como unidades formadoras de colonias/ml (UFC/ml).

Antibióticos

La kanamicina y la gentamicina se adquirieron en Sigma Aldrich Ltd.

Helperby Therapeutics proporcionó la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina (en forma de sal de clorhidrato).

Se prepararon soluciones madre de 10 mg/ml de kanamicina, gentamicina y 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina respectivamente mediante dilución en dimetilsulfóxido (DMSO) o agua. Las soluciones de antibiótico se almacenaron a -20 °C.

Evaluación de la CIM y la CBM

Los análisis de la concentración inhibidora mínima (CIM) de kanamicina, gentamicina y 4-metil-8-fenoxi-1 -(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina se realizaron en caldo Iso-Sensitest utilizando un método de dilución en caldo y se determinaron como la concentración más baja de agente antimicrobiano que inhibía el cultivo visible después de la incubación de una noche a 37 °C. La solución madre de cada fármaco se diluyó hasta las concentraciones necesarias. Se tomaron 10 pl de fármaco de cada dilución y se mezclaron con 290 pl de cultivo con 106 células bacterianas en una placa de 96 pocillos para obtener las concentraciones finales necesarias (pl/ml).

Las placas se leyeron a 405 nm utilizando un lector de placas de 96 pocillos Elx 800 equipado con un filtro de 405 nm (Bio-Tek) antes y después de la incubación. Los valores de la CIM de los fármacos se determinaron mediante la comparación de la lectura de la densidad óptica entre antes y después del tratamiento con el fármaco.

La concentración bactericida mínima (CBM) se determinó mediante el subcultivo de 100 pl de diluciones de la placa de 96 pocillos en placas de agar TSA sin fármaco nuevo y la incubación adicional durante 24 a 48 horas a 37 °C. La dilución más alta que no mostró ninguna colonia bacteriana individual en las placas de TSA se consideró la CBM.

Eficacia de las combinaciones de antimicrobianos

La actividad antimicrobiana de la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina en combinación con (a) kanamicina y (b) gentamicina contra S. aureus, en un intervalo de concentraciones desde por debajo hasta por encima de la CIM, se evaluó en un ensayo de suspensión mediante el método de la curva de destrucción en función del tiempo.

Se prepararon diluciones dobles sucesivas de los compuestos antimicrobianos de la siguiente manera: 4-metil-8-fenoxi-1 -(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina de 16 pg/ml a 0,25 pg/ml; kanamicina de 4 a 0,24 pg/ml; y gentamicina de 8 a 0,5 pg/ml. Se añadieron diez microlitros de cada solución antimicrobiana a las filas de una placa de microtitulación de 96 pocillos en concentraciones decrecientes y, a continuación, se añadieron 10 pl de 4-metil-8-fenoxi-1 -(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina a las columnas en concentraciones decrecientes. A continuación, los pocilios se inocularon con 280 |jl de una suspensión de S. aureus (cepa Oxford) que contenía 107 UFC/ml de inóculo. También se incluyeron controles sin fármaco.

Las placas de microtitulación se incubaron a 37 °C durante 16 a 24 horas, se leyeron en un lector de placas de 96 pocillos, a continuación, se diluyeron las muestras y se sembraron en placas 100 j l de cada dilución en placas de TSA. Después de 24 a 48 horas de incubación, se contaron las UFC. Cada prueba se realizó por triplicado y se repitió dos veces. La sinergia se definió como una disminución de 2 log-io en los recuentos de colonias, cuando se comparó la actividad antibacteriana de las combinaciones con la del agente individual más activo.

Análisis estadístico

El recuento medio de colonias bacterianas en puntos de tiempo variables se comparó mediante la prueba de la t bilateral con varianza desigual. Los valores de P de <0,05 indicaron una diferencia significativa.

Resultados

Determinación de la susceptibilidad de S. Aureus a kanamicina, gentamicina y 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-d¡h¡dro-1H-p¡rrolo[3,2-c1qu¡nol¡na

Estudios de destrucción en función del tiempo para 4-met¡l-8-fenox¡-1-(2-fen¡let¡l)-2.3-d¡h¡dro-1H-p¡rrolo[3.2-c1qu¡nol¡na en combinación con (a) kanamicina y (b) gentamicina

Los resultados de la curva de destrucción para las combinaciones de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]qu¡nolina (4 jg/m l) con kanamicina y gentamicina contra S. aureus se muestran en las Figuras 1 y 2. Los resultados se presentan como la media de la reducción logarítmica en organismos viables ± la desviación típica (*P<0,005, **P<0,001 y ***P<0,0001).

El control de crecimiento para estos experimentos no se muestra, pero estaba muy turbio durante el tiempo de los experimentos.

Conclusiones

Se observaron actividades sinérgicas significativas para la kanamicina (2, 4 y 8 jg/m l) en combinación con 4-metil-8-fenoxi-1 -(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2- c]quinolina (4 jg/ml).

Se observaron sinergias similares para la gentamicina (8, 4, 2 y 1 jg/m l) en combinación con 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2- c]quinolina (4 jg/ml).

Ejemplo 2: Actividad in vitro de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina en combinación con tobramicina contra Pseudomonas aeruginosa en fase estacionaria

Materiales y métodos

Cepas bacterianas y medio de cultivo

Pseudomonas aeruginosa (aislado clínico).

Condiciones de cultivo bacteriano

Se inoculó una colonia individual de Ps. aeruginosa en 10 ml de caldo nutritivo n.° 2 (NB) (Oxoid) que se incubó durante toda una noche a 37 °C con agitación continua a 120 rpm. Se añadieron 200 j l del cultivo de una noche a un frasco de 500 ml con tapón de rosca que contenía 100 ml de NB. El cultivo de 100 ml se incubó a 37 °C con agitación continua durante 5 a 6 días. Los cultivos se diluyeron con solución salina tamponada con fosfato a 107 UFC/ml.

Antibióticos

La tobramicina se adquirió de Sigma Aldrich Ltd.

Helperby Therapeutics proporcionó la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina (en forma de sal de mesilato).

Se prepararon soluciones madre de 10 mg/ml de tobramicina y mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina mediante dilución en agua. Las soluciones de antibiótico se almacenaron a -20 °C.

La suspensión de células bacterianas se incubó con tobramicina y mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina a distintas concentraciones. Las actividades de la combinación y de cada uno de los fármacos individuales se midieron mediante recuentos de UFC a las 0, 2, 4, 6 y 8 horas. Los recuentos de UFC se realizaron de la siguiente manera: a partir de diluciones seriadas con factor 10 de los cultivos experimentales, se añadieron muestras de 100 pl a placas por triplicado de placas de agar nutritivo (Oxoid). Las unidades formadoras de colonias (UFC) se contaron después de la incubación de las placas a 37 °C durante 24 horas.

Resultados

Los resultados de la curva de destrucción para las combinaciones de mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina (HT61) (32, 16 u 8 pg/ml) con tobramicina (T) (2 o 1 pg/ml) contra Pseudomonas aeruginosa se muestran en las Figuras 3 a 7. Los resultados se presentan como la media de la reducción logarítmica en organismos viables ± la desviación típica (*P<0,005, **P<0,001 y ***P<0,0001).

Conclusiones

El mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina solo a 32, 16 y 8 pg/ml mostró actividades leves o nulas contra P. aeruginosa en fase estacionaria. Además, la tobramicina sola a 2 y 1 pg/ml tuvo actividades muy bajas o nulas. Sin embargo, la tobramicina en combinación con el mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina destruyó las bacterias rápidamente. Los recuentos de UFC llegaron a 0 a las 4 o 6 horas después de la incubación. Estos datos son indicativos de una actividad sinérgica.

Ejemplo 3: Actividad in vitro de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina en combinación con tobramicina contra Pseudomonas aeruginosa en fase logarítmica mediante análisis en damero (chequerboard analysis)

Materiales y métodos

Cepas bacterianas y medio de cultivo

Pseudomonas aeruginosa (aislado clínico).

Para el crecimiento nocturno de bacterias se utilizó Caldo Nutritivo N.° 2 (NB) (Oxoid, Cambridge, GB).

Se utilizó el caldo Iso-Sensitest (Oxoid) para la evaluación de las concentraciones inhibidoras mínimas (las CIM). Condiciones de cultivo bacteriano

Se cultivó P. aeruginosa en 10 ml de NB durante una noche a 37 °C con agitación continua a 120 rpm. Los cultivos de una noche se diluyeron 1000 X con caldo iso-sensitest para obtener una suspensión celular que contenía las bacterias a 106 UFC/ml. Los cultivos se incubaron a 37 °C con agitación durante 1-2 horas y sirvieron como cultivos en fase logarítmica. La viabilidad de las bacterias se estimó mediante recuentos de unidades formadoras de colonias (UFC). Antibióticos

La tobramicina se adquirió de Sigma Aldrich Ltd.

Helperby Therapeutics proporcionó la 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina (en forma de sal de mesilato).

Ensayo de fármacos de bacterias en fase logarítmica

Las combinaciones de tobramicina y mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina se prepararon utilizando placas de 96 pocillos utilizando concentraciones de fármaco a partir de 16 ug/ml para la tobramicina y de 64 ug/ml para HT61. Los dos fármacos se diluyeron de forma sucesiva al doble hasta 0 y se combinaron en un patrón de una matriz.

Preparación de compuestos

Se prepararon soluciones madre de 10 mg/ml de tobramicina y mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina mediante dilución en agua. Las soluciones de antibiótico se almacenaron a -20 °C.

Determinación de las actividades

La densidad óptica de las células bacterianas se leyó a 405 nm utilizando un lector de placas (Bio TEK). La concentración de CIM se determinó como la concentración más baja de fármaco que inhibe el crecimiento bacteriano. Los valores de la CIM de los fármacos se determinaron mediante la comparación de la lectura de la densidad óptica entre antes y después del tratamiento con el fármaco.

Resultados

Tobramicina 5*10

El mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina solo no tiene CIM contra P. aeruginosa. La CIM de la tobramicina fue de 1 jg/ml. Sin embargo, con tobramicina a 0,5 |jg/ml, se observó una CIM de HT61 a 16 jg/ml.

Conclusiones

No se demostró CIM para el mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina dentro del intervalo de concentraciones utilizado. La CIM de la tobramicina fue de 1 jg/ml. Sin embargo, en combinación con tobramicina 0,5 jg/ml, se observó una CIM del mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina a 16 jg/ml. Se observó una actividad combinada cuando se utilizó mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina en combinación con tobramicina.

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. Una combinación que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

2. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde la infección bacteriana está provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa.

3. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende clorhidrato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina.

4. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende mesilato de 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina.

5. Una combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido es neomicina, kanamicina, gentamicina o tobramicina, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de las mismas.

6. Una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho uso comprende destruir bacterias que se multiplican y/o clínicamente latentes asociadas con tal infección.

7. Una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la combinación es para su uso en la prevención y/o el tratamiento de abscesos, conjuntivitis bacteriana, queratitis bacteriana, infecciones óseas y articulares, heridas de quemaduras, celulitis, colangitis, colecistitis, fibrosis quística, cistitis, enfermedades de las vías respiratorias altas, eccema, empiema, endocarditis, epididimitis, erisipela, infecciones oculares, forúnculos, infecciones gastrointestinales (gastroenteritis), infecciones genitales, gingivitis, quemaduras infectadas, infecciones después de operaciones dentales, infecciones en la región bucal, infecciones asociadas a prótesis, abscesos intraabdominales, abscesos hepáticos, mastitis, meningitis e infecciones del sistema nervioso, osteomielitis, otitis, orquitis, pancreatitis, paroniquia, pelviperitonitis, peritonitis, peritonitis con apendicitis, derrame pleural, neumonía, infecciones de heridas posoperatorias, gangrena gaseosa postoperatoria, prostatitis, enfisema pulmonar, pielonefritis, piodermia, salpingitis, artritis séptica, infecciones sépticas, septicemia, sinusitis, infecciones cutáneas, infecciones sistémicas, síndrome del choque tóxico o infecciones de heridas; o infecciones con MSSA o MRSA.

8. Una composición farmacéutica que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un adyuvante, diluyente o transportador farmacéuticamente aceptable,

en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

9. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8 que está formulada para la administración oral o tópica.

10. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8 que está formulada para la administración por inhalación.

11. Un producto que comprende 4-metil-8-fenoxi-1-(2-feniletil)-2,3-dihidro-1H-pirrolo[3,2-c]quinolina o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un agente antimicrobiano de aminoglucósido o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como una preparación combinada para el uso simultáneo, por separado o secuencial en la prevención y/o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde la infección está provocada por Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa; y

en donde el agente antimicrobiano de aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en arbekacina, amikacina, apramicina, gentamicina, netilmicina, neomicina, estreptomicina, tobramicina, amastatina, butirosina, butirosina A, daunorrubicina, dibekacina, dihidroestreptomicina, G 418, higromicina B, kanamicina B, kanamicina, kirromicina, paromomicina, rodoestreptomicina, ribostamicina, sisomicina, espectinomicina, estreptozocina y tiostreptona, o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.