ES2913208T3 - Tratamientos de combinación y usos y métodos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD1, en donde el anticuerpo que se une a BCMA se conjuga con un agente citotóxico como inmunoconjugado.

Description

DESCRIPCIÓN
Tratamientos de combinación y usos y métodos de los mismos
Campo de la invención
La presente invención se refiere a combinaciones que comprenden anticuerpos anti-BCMA, incluyendo anticuerpos monoclonales contra BCMA humana en combinación con agentes inmunomoduladores tales como anticuerpos anti-PD-1. Además, la invención se refiere al uso de las combinaciones en el tratamiento del cáncer en un mamífero tal como un ser humano.
Antecedentes de la invención
El tratamiento eficaz de los trastornos hiperproliferativos, incluido el cáncer, es un objetivo continuo en el campo de la oncología. En general, el cáncer es el resultado de la desregulación de los procesos normales que controlan la división celular, la diferenciación y la muerte celular apoptótica y se caracteriza por la proliferación de células malignas que tienen el potencial de crecimiento ilimitado, expansión local y metástasis sistémica. La desregulación de los procesos normales incluye anomalías en las vías de transducción de señales y respuesta a factores que difieren de los que se encuentran en las células normales.
Las inmunoterapias son un enfoque para tratar los trastornos hiperproliferativos. Un obstáculo importante que los científicos y los médicos han encontrado en la creación de varios tipos de inmunoterapias contra el cáncer ha sido romper la tolerancia al antígeno propio (cáncer) para montar una respuesta antitumoral potente que dé lugar a la regresión tumoral. A diferencia de la creación tradicional de agentes de moléculas grandes y pequeñas que se dirigen al tumor, las inmunoterapias contra el cáncer se dirigen a las células del sistema inmunitario que tienen el potencial de generar un grupo de células efectoras de memoria para inducir efectos más duraderos y minimizar las recidivas.
BCMA (CD269 o TNFRSF17) es un miembro de la superfamilia de receptores de TNF. Es un receptor de membrana integral no glucosilado para los ligandos BAFF y APRIL. Los ligandos de BCMA también pueden unirse a receptores adicionales: TACI (por sus siglas en inglés, activador transmembrana y modulador de calcio e interactor de ligando de ciclofilina), que se une a APRIL y BAFF; así como BAFF-R (receptor de BAFF o BR3), que muestra una afinidad restringida pero alta para BAFF. En conjunto, estos receptores y sus ligandos correspondientes regulan diferentes formas de inmunidad humoral, homeostasis y desarrollo de linfocitos B.
La expresión de BCMA generalmente se restringe al linaje de linfocitos B y se informa que aumenta en la diferenciación de linfocitos B terminales. BCMA se expresa por blastocitos de plasma humano, células plasmáticas de las amígdalas, bazo y médula ósea, pero también por los linfocitos B de memoria de las amígdalas y por los linfocitos B del centro germinal, que tienen un fenotipo TACI-BAFFR bajo (Darce et al, 2007). BCMA está prácticamente ausente en los linfocitos B vírgenes y de memoria (Novak et al., 2004a and b). El antígeno BCMA se expresa en la superficie celular, por lo que es accesible al anticuerpo, pero también se expresa en el Golgi. Como sugiere su perfil de expresión, la señalización de BCMA, normalmente relacionada con la supervivencia y proliferación de los linfocitos B, es importante en las últimas etapas de diferenciación de linfocitos B, así como en la supervivencia de células plasmáticas de médula ósea de larga vida (O'Connor et al., 2004) y plasmablastos (Avery et al., 2003). Asimismo, como BCMA se une a APRIL con alta afinidad, se sugiere que el eje de señalización BCMA-APRIL predomina en las últimas etapas de la diferenciación de linfocitos B, siendo quizás la interacción fisiológicamente más relevante.
Las proteínas de unión a antígeno y los anticuerpos que se unen a BCMA y modulan la señalización se conocen en la técnica y se divulgan como inmunoterapia, por ejemplo para cáncer, documento NCT02064387: A Phase I Open-label, Dose Escalation Study to Investigate the Safety, Pharmacokinetics, Pharmacodynamics, Immunogenicity and Clinical Activity of the Antibody Drug Conjugate GSK2857916 in Subjects With Relapsed/Refractory Multiple Myeloma and Other Advanced Hematologic Malignancies Exp",ClinicalTrials.gov Archive, 13/11/2015, páginas 1-6, XP055340655.
La unión de los ligandos de PD-1, PD-L1 y PD-L2, al receptor PD-1 que se encuentra en los linfocitos T, inhibe la proliferación de linfocitos T y la producción de citocinas. El aumento de los ligandos de PD-1 se produce en algunos tumores y la señalización a través de esta vía puede contribuir a la inhibición de la vigilancia inmunitaria activa de los linfocitos T de los tumores. Las proteínas de unión a antígeno y los anticuerpos que se unen al receptor PD-1 y bloquean su interacción con PD-L1 y PD-L2 pueden liberar la inhibición de la respuesta inmunitaria mediada por la vía PD-1, incluida la respuesta inmunitaria antitumoral.
Potenciar la función de los linfocitos T antitumorales e inducir la proliferación de linfocitos T es un enfoque nuevo y poderoso para el tratamiento del cáncer. Actualmente se comercializan tres anticuerpos de oncología inmunológica (p. ej., inmunomoduladores). Se cree que el anti-CTLA-4 (YER-VOY®/ipilimumab) aumenta las respuestas inmunitarias en el punto de cebado de los linfocitos T y se cree que los anticuerpos anti-PD-1 (OPDIVO®/nivolumab y KEYTRUDA®/pembrolizumab) actúan en el microambiente tumoral local, aliviando un punto de control inhibidor en los linfocitos T específicos del tumor que ya se han cebado y activado.
OX40 (p. ej., OX40 humano (hOX40) o hOX40R) es un miembro de la familia de receptores del factor de necrosis tumoral que se expresa, entre otras células, en linfocitos T CD4 y CD8 activados. Una de sus funciones está en la diferenciación y supervivencia a largo plazo de estas células. El ligando para OX40 (OX40L) se expresa por células presentadoras de antígeno activadas.
Se divulga un ADC anti BCMA en combinación con otros agentes en Ryan et al. Molecular Cancer therapeutics, vol.
6, n.° 11, 01/11/2007, páginas 3009-3018 y en particular en combinación con el tratamiento de referencia: Melero et al.: "Evolving synergistic combinations of targeted immunotherapies to combat cancer", Nature Reviews, Cancer, vol.
15, n.° 8, 24/07/2015, páginas 457-472 o con lenolidamida Tai Yu-Tzu et al: BLOOD, vol. 123, n.° 20, 25/02/2014, páginas 3128-3138 sin embargo, aunque ha habido muchos avances recientes en el tratamiento del cáncer, sigue existiendo la necesidad de encontrar un tratamiento más eficaz y/o mejorado de un individuo que padece los efectos del cáncer. Las combinaciones y métodos del presente documento que se relacionan con la combinación de enfoques terapéuticos para mejorar la inmunidad antitumoral abordan esta necesidad.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD1, en donde el anticuerpo que se une a BCMA se conjuga con un agente citotóxico como inmunoconjugado.
La invención es como se define en las reivindicaciones adjuntas.
También se divulgan combinaciones que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a una diana inmunomoduladora. Los ejemplos de dianas inmunomoduladoras incluyen PD-1 y OX40.
En otra realización de la invención, los anticuerpos que se unen a BCMA se conjugan con un agente citotóxico como inmunoconjugado (por ejemplo, un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC, por sus siglas en inglés)). El agente citotóxico incluye MMAE o MMAF y el agente citotóxico puede conjugarse con los anticuerpos que se unen a BCMA a través de un enlazador como citrulina-valina o maleimidocaproílo.
En una realización, el anticuerpo que se une a BCMA es un antagonista. En otra realización, el anticuerpo que se une a BCMA es un anticuerpo monoclonal IgG1.
En una realización, el anticuerpo que se une a BCMA es un anticuerpo que comprende la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 3, la variante N99D de la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, o variantes de las mismas. En otra realización, el anticuerpo que se une a BCMA es un anticuerpo que comprende la CDR H1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 3 o la variante N99D de la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 y variantes de las mismas. En otra realización más, el anticuerpo que se une a BCMA es un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 23 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 31.
La presente invención proporciona combinaciones que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1.
En una realización, el anticuerpo que se une a PD-1 es un antagonista. En otra realización, el anticuerpo que se une a PD-1 es un anticuerpo monoclonal IgG4.
En una realización, el anticuerpo que se une a PD-1 comprende la CDR H1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, y variantes de las mismas. En otra realización más, el anticuerpo que se une a PD-1 comprende una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 207 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 208.
En otra realización más, el anticuerpo que se une a PD-1 es pembrolizumab, nivolumab, o un anticuerpo que comprende el 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con pembrolizumab o nivolumab.
También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden las combinaciones de la presente invención.
También se proporcionan métodos para tratar el cáncer en un mamífero (tal como un ser humano) que lo necesite, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo que se une a PD1. En una realización, el cáncer es mieloma múltiple (MM) o leucemia de linfocitos B del linfoma no Hodgkiniano (NHL, por sus siglas en inglés). En una realización, los anticuerpos que se unen a BCMA y el antígeno que se une a PD-1 se administran al mismo tiempo o secuencialmente. Los métodos prevén la administración sistémica (por ejemplo, intravenosa) o intratumoral de las combinaciones.
En el presente documento se proporciona el uso de las combinaciones descritas en el presente documento en el tratamiento del cáncer.
Se contempla el uso de las combinaciones descritas en el presente documento en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
De manera adecuada, se proporcionan kits que comprenden las composiciones farmacéuticas de la invención junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1. El ADC de BCMA induce la muerte celular inmunogénica en líneas de células cancerosas que expresan BCMA
Figura 1A) Esquema que muestra la muerte celular inmunogénica (ICD, por sus siglas en inglés) en líneas de células cancerosas que expresan BCMA. ICD es un tipo especial de apoptosis con frecuencia asociado con la liberación celular de ATP y HMGB1 y la exposición de CRT en la membrana celular. ICD induce una respuesta inmune a través de la participación del proceso de presentación de antígenos por parte de las células dendríticas (DC, por sus siglas en inglés).
Figura 1B) aBCMA-MMAF induce ATP, CRT y HMGB1 en la línea celular MM BCMA+ Las líneas celulares analizadas se trataron con conjugado de anticuerpo y fármaco anti-BCMA-MMAF o mitoxantrona durante 48 horas y después se evaluaron: 1) la pérdida en el número de células mediante citometría de flujo automatizada, 2) la exposición a calreticulina (CRT) se marcó con un anticuerpo policlonal anti-CRT y se evaluó mediante citometría de flujo, 3) el contenido de HMGB1 en el sobrenadante celular se evaluó mediante ELISA y la posterior evaluación de la absorbancia, y 4) se evaluó el ATP en el sobrenadante celular mediante evaluación de luminiscencia posterior. Anti-BCMA-MMAF indujo liberación de ATP, liberación de HMGB1 y exposición a CRT solo en NCI-H929, una línea celular MM BCMA positiva.
Figura 2: Inducción de la activación de la maduración de células dendríticas a través de la inducción de muerte celular inmunogénica
Figura 2A) La expresión en la superficie celular de CD83 aumentó en las células dendríticas HLA-DR+ de tres donantes sanos después de un cocultivo de 24 horas con células de mieloma múltiple NCI-H929 tratadas con ADC de BCMA.
Figura 2B) La expresión en la superficie celular de CD40 aumentó en las células dendríticas CD11c+ de tres donantes sanos después de un cocultivo de 24 horas con células de mieloma múltiple NCI-H929 tratadas con ADC de BCMA. La expresión del marcador se midió en (a) células dendríticas no tratadas (sin ADC de BCMA) solas y (b-f) células dendríticas que se cultivaron conjuntamente con (b) células NCI-H929 sin tratar (sin ADC de BCMA), (c) control de IgG (10 pg/ml), (d) células NCI-H929 tratadas con 0,1, (e) 1 y (f) 10 pg/ml de ADC de BCMA (48 horas). (g) se incluyó un tratamiento de células dendríticas con 3 pg/ml de lipopolisacárido (LPS) como control positivo. Eje X: logaritmo de la intensidad de fluorescencia media (MFI, por sus siglas en inglés). La línea vertical representa la MFI del control de IgG.
Figura 3. Supresión de la producción de IL-10 tanto de las células NCI-H929 como del sistema de cocultivo con células NCI-H929 tratadas con ADC de BCMA y células dendríticas inmaduras
FIGURA 3A y 3B. La IL-10 disminuyó en los sobrenadantes de células dendríticas cocultivadas de dos donantes humanos sanos y células de mieloma múltiple NCI-H929 tratadas con ADC de BCMA. La IL-10 se midió en (a) células dendríticas no tratadas (sin ADC de BCMA) solas y (b-f) células dendríticas que se cultivaron conjuntamente con (b) células NCI-H929 sin tratar (sin ADC de BCMA), (c) control de IgG (10 pg/ml), (d) células nCi-H929 tratadas con 0,1, (e) 1 y (f) 10 pg/ml de ADC de BCMA (48 horas). (g) se incluye un tratamiento de células dendríticas con 3 pg/ml de lipopolisacárido (LPS) como control positivo.
Figura 3C. La IL-10 disminuyó con el tratamiento con ADC de BCMa en sobrenadantes de células de mieloma múltiple NCI-H929 cultivadas solas. IL-10 se midió en células de mieloma múltiple NCI-H929 sin tratar (a), control de IgG (b), células de mieloma múltiple NCI-H929 tratadas con 0,1 (c), 1 (d), y 10 pg/ml de ADC de BCMA (e) (48 horas).
Figura 4: Efecto de ADC de BCMA en linfocitos T humanos
Figura 4A) La diferencia porcentual (%) promedio (Avg) y el coeficiente de variación (CV) para el porcentaje (%) y MFI de marcadores en células CD4 en PBMC después de la estimulación con anti-CD3/anti-CD28 en presencia de ADC de BCMA durante 24 y 72 horas;
Figura 4B) La diferencia porcentual (%) promedio (Avg) y el coeficiente de variación (CV) para el porcentaje (%) y MFI de marcadores en células CD8 en PBMC después de la estimulación con anti-CD3/anti-CD28 en presencia de ADC de BCMA durante 24 y 72 horas;
Figura 4C) La diferencia porcentual (%) promedio (Avg) y el coeficiente de variación (CV) para el porcentaje (%) de células CD4 y CD8 que expresan IFNy e IL-4 en PBMC con estimulación con anti-CD3/anti-CD28 en presencia de ADC de BCMA durante 48 y 72 horas;
Figura 4D) Efecto de ADC de BCMA sobre la proliferación de linfocitos T CD4+ y CD8+. Linfocitos T CD4+ y CD8+ estimulados con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 en presencia o ausencia de varias concentraciones de ADC de BCMA. Después de 96 horas, se analizó la proliferación celular mediante citometría de flujo. Los datos representan la media ± DE de 3 donantes diferentes. ADC de BCMA no parece tener efectos directos sobre los linfocitos T humanos.
Figura 5: Gráficos que demuestran el efecto de la combinación de un anticuerpo anti-BCMA y un anticuerpo anti-OX40 sobre el volumen tumoral (figura 5A) y la tasa de supervivencia (figura 5B) en ratones EL4-Luc2-hBCMA.
Figura 6: Gráficos que demuestran el efecto de la combinación de un anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF y un anticuerpo anti-PD-1 sobre el volumen del tumor en ratones EL4-Luc2-hBCMA.
Figura 7: Gráficos que demuestran el efecto de la combinación de un anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF y un anticuerpo anti-PD-1 sobre el volumen del tumor en ratones EL4-Luc2-hBCMA.
Descripción detallada de la invención
COMBINACIONES
La presente invención proporciona una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD1, en donde el anticuerpo que se une a BCMA se conjuga con un agente citotóxico como inmunoconjugado.
PROTEÍNAS DE UNIÓN A ANTÍGENO QUE SE UNEN A BCMA
En una realización, se proporcionan anticuerpos o fragmentos de los mismos que se unen específicamente a BCMA, por ejemplo, que se unen específicamente a BCMA humana (hBCMA). En otra realización, los anticuerpos que se unen a BCMA inhiben la unión de BAFF y/o APRIL al receptor de BCmA.
En una realización adicional, los anticuerpos o fragmentos de los mismos tienen la capacidad de unirse a FcyRIIIA y mediar en las funciones efectoras mediadas por FcgRIIIA, o tienen una función efectora mediada por FcyRIIIA potenciada. En una realización de la invención, tal como se proporciona en el presente documento, los anticuerpos son capaces de internalizarse. En una realización específica de la invención como se proporciona en el presente documento, los anticuerpos que se describen en el presente documento son capaces de internalizarse a una velocidad rápida. Por ejemplo, los anticuerpos se internalizan en menos de 12 horas, o en menos de 6 horas, o en menos de 120 minutos. En una realización, los anticuerpos se internalizan en menos de 30 minutos, por ejemplo, en 15 minutos. La internalización de los anticuerpos se puede medir utilizando técnicas conocidas en la técnica, por ejemplo mediante microscopía confocal para visualizar el BCMA unido a su receptor y colocalizado con vesículas intracelulares (endosomas y lisosomas) o presente en el citoplasma o, como alternativa, mediante citometría de flujo para detectar la variación a lo largo del tiempo de la presencia de BCMA en la superficie celular con desaparición de BCMA que indica internalización.
En una realización adicional, los anticuerpos de la presente invención tienen una función efectora, por ejemplo, citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC, por sus siglas en inglés), por ejemplo, los anticuerpos tienen una función efectora de ADCC potenciada.
En otra realización, los anticuerpos se conjugan con un fármaco que es un agente citotóxico para formar un inmunoconjugado (por ejemplo, un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC)). En una realización de este tipo, el agente citotóxico es auristatina. En otra realización más, el agente citotóxico es monometil auristatina E (MMAE) o monometil auristatina F (MMAF). En una realización, el inmunoconjugado también se potencia con ADCC.
En una realización, el agente citotóxico se conjuga con los anticuerpos que se unen a BCMA a través de un enlazador, tal como valina-citrulina (VC) o maleimidocaproílo (mc).
En una realización de este tipo, el inmunoconjugado puede provocar la muerte celular inmunogénica.
En una realización de la invención, se proporcionan anticuerpos según la invención como se describe en el presente documento que se unen a BCMA no unido a la membrana, por ejemplo al BCMA en suero.
En otro ejemplo, el anticuerpo que se unen a BCMA es un antagonista que bloquea la unión de BCMA con un ligando de BCMA tal como BAFF o ApRiL.
En una realización, los anticuerpos que se unen a BCMA contienen un dominio similar a inmunoglobulina o un fragmento del mismo. En otra realización, los anticuerpos que se unen a BCMA son anticuerpos monoclonales, por ejemplo IgG, IgM, IgA, IgD o IgE, subclases de los mismos, o variantes modificadas de los mismos. En otra realización más, los anticuerpos que se unen a BCMA son anticuerpos IgG.
En una realización de la invención, se proporcionan anticuerpos como se describe en el presente documento, en donde los anticuerpos comprenden la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 3, la variante N99D de la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, o variantes de las mismas. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región CDRH3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 3 o SEQ. ID. NO: 200.
En una realización adicional de la invención, se proporcionan anticuerpos como se describe en el presente documento, en donde los anticuerpos comprenden además una o más de: CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5 y/o CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 y/o variantes de las mismas.
En una realización de la invención, se proporcionan anticuerpos como se describe en el presente documento, en donde los anticuerpos comprenden la cDrH3 de la SEQ. ID. NO: 184 o una variante de la sEq. ID. NO: 184.
En una realización adicional de la invención, se proporcionan anticuerpos como se describe en el presente documento, en donde los anticuerpos comprenden además una o más de: CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 182, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 183, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 185, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 186 y/o CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 187 y/o variantes de las mismas.
En una realización adicional más, los anticuerpos comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, la variante N99D de la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5 y CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6. En otra realización, los anticuerpos comprenden regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 1, SEQ. ID. NO: 2, SEQ. ID. NO: 200, SEQ. ID. NO: 4, SEQ. ID. NO: 5 y SEQ. ID. NO: 6.
En una realización adicional, los anticuerpos comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 3, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5 y CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6. En otra realización, los anticuerpos comprenden regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 1, SEQ. ID. NO: 2, SEQ. ID. NO: 3, SEQ. ID. NO: 4, SEQ. ID. NO: 5 y SEQ. ID. NO: 6.
En una realización adicional más, los anticuerpos comprenden la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 184, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 183, CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 182, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 185, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 186 y CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 187.
Los anticuerpos de la presente invención proceden del anticuerpo murino que tiene las regiones variables como se describe en la SEQ. ID. NO: 7 y SEQ. ID. NO: 9 o equivalentes no murinos del mismo, tal como variantes de rata, humanas, quiméricas o humanizadas del mismo, por ejemplo, proceden del anticuerpo que tiene las secuencias variables de cadena pesada como se describe en la SeQ. iD. NO: 11, SEQ. ID. NO: 13, sEq . ID. NO: 15, SEQ. ID. NO: 17, SEQ. ID. NO: 19, SEQ. ID. NO: 21, SEQ. ID. NO: 23, SEQ. ID. NO: 25, SEQ. ID. NO: 27 y SEQ. ID. NO: 29 y/o las secuencias variables de cadena ligera como se describe en las SEQ. ID. NO: 31, SEQ. ID. NO: 33 y/o SEQ. ID. NO: 35.
En otra realización, los anticuerpos de la presente invención proceden de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena pesada de SEQ ID NO: 116 o SEQ ID NO: 118 y/o las secuencias de cadena ligera variable como se describe en la SEQ ID NO: 120, o SEQ ID NO: 122. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 116 o SEQ ID NO: 118 y/o una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 120, o SEQ. ID. NO: 122.
En otra realización, los anticuerpos de la presente invención proceden de un anticuerpo que tiene las secuencias de región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 140 y/o las secuencias de región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 144. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 140 y/o una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 144.
En una realización de la invención, se proporcionan anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada aislada seleccionada de una cualquiera de las siguientes: SEQ. ID. NO: 11, SEQ. ID. NO: 13, SEQ. ID. NO: 15, SEQ. ID. NO: 17, SEQ. ID. NO: 19, SEQ. ID. NO: 21, SEQ. ID. NO: 23, SEQ. ID. NO: 25, SEQ. ID. NO: 27, SEQ. ID. NO: 29, SEQ. ID. NO: 116 o SEQ. ID. NO: 118.
En otra realización de la invención, se proporcionan anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera aislada seleccionada de una cualquiera de las siguientes: sEq . iD. NO: 31, SEQ. ID. NO: 33 o SEQ. ID. NO: 35, SEQ. ID. NO: 120 o SEQ. ID. NO: 122.
En una realización adicional de la invención, se proporcionan anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada aislada seleccionada de una cualquiera de las siguientes: SEQ. ID. NO: 11, SEQ. ID. NO: 13, SEQ. ID. NO: 15, SEQ. ID. NO: 17, SEQ. ID. NO: 19, SEQ. ID. NO: 21, SEQ. ID. NO: 23, SEQ. ID. NO: 25, SEQ. ID. NO: 27 y SEQ. ID. NO: 29 y una región variable de cadena ligera aislada seleccionada de una cualquiera de las siguientes: SEQ. ID. NO: 31, SEQ. ID. NO: 33 y/o SEQ. ID. NO: 35.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 23 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 31. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 23 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 31.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 27 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 31. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 27 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 31.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 29 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 31. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 29 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 31.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 116 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 120. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 116 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 120.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 118 y una región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 122. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 118 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 122.
En una realización, el inmunoconjugado es GSK2857916. Tai, Blood, 123(2):3128-38 (2014). GSK2857916 comprende un anticuerpo anti-BCMA conjugado con monometil auristatitina F (MMAF) a través de un enlazador de maleimidocaproílo (mc). GSK2857916 procede del clon J6M0 y comprende las secuencias de aminoácidos de la SEQ. ID. NO: 55, SEQ. ID. NO: 63, SEQ. ID. NO: 23, SEQ. ID. NO: 31, SEQ. ID. NO: 1, SEQ. ID. NO: 2, SEQ. ID. NO: 200, SEQ. ID. NO: 4, SEQ. ID. NO: 5 y SEQ. ID. NO: 6.
En una realización, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 12, o SEQ. ID. NO: 14, o SEQ. ID. NO: 16, o SEQ. ID. NO: 18, o SEQ. ID. NO: 20, o SEQ. ID. NO: 22, o SEQ. ID. NO: 24, o SEQ. ID. NO: 26, o SEQ. ID. NO: 28, o SEQ. ID. NO: 30 o SEQ. ID. NO: 117 o SEQ. ID. NO: 119 o SEQ. ID. NO: 141.
En una realización, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 32, o SEQ. ID. NO: 34, o SEQ. ID. NO: 36 o SEQ. ID. NO: 121 o SEQ. ID. NO: 123 o SEQ. ID. NO: 145.
En una realización adicional, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 24, o SEQ. ID. NO: 28 o SEQ. ID. NO: 30 y un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 32, o SEQ. ID. NO: 34.
En una realización adicional más, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 24 y un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 32.
En una realización adicional más, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 117 y un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 121.
En una realización adicional más, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 119 y un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 123.
En una realización adicional más, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 141 y un polinucleótido que codifica una región variable de cadena ligera aislada de la SEQ. ID. NO: 145.
En una realización adicional, los anticuerpos pueden comprender una cualquiera de las regiones variables de cadena pesada como se describe en el presente documento en combinación con una cualquiera de las regiones variables de cadena ligera como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, los anticuerpos pueden unirse (por ejemplo, y antagonizar) a BCMA, p. ej., BCMA humana.
En una realización, los anticuerpos comprenden una o más CDR según la invención descrita en el presente documento, o una o ambas de la región variable de cadena pesada o la región variable de cadena ligera según la invención descritas en el presente documento. En una realización, los anticuerpos se unen a BCMA de primate. En una realización de este tipo, los anticuerpos se unen adicionalmente a BCMA de primates no humanos, por ejemplo, BCMA de mono macaco cynomolgus.
En otra realización, los anticuerpos se seleccionan del grupo que consiste en un dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, diacuerpo, triacuerpo, tetracuerpo, minianticuerpo y un minicuerpo.
En una realización de la presente invención, los anticuerpos son anticuerpos humanizados o quiméricos, en una realización adicional, el anticuerpo está humanizado.
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
En una realización de la presente invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena pesada como se expone en la SEQ. ID. NO: 55 o SEQ. ID. NO: 59 o SEQ. ID. NO: 61.
En una realización de la presente invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena ligera como se expone en la SEQ. ID. NO: 63 o SEQ. ID. NO: 65.
En otra realización de la invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena pesada de la SEQ. ID.
NO: 55 y una secuencia de cadena ligera como se establece en la SEQ. ID. NO: 63. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 55 y una región de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 63.
En una realización, se proporciona una proteína de unión a antígeno o un fragmento de la misma que compite con una proteína de unión a antígeno de la invención como se describe en el presente documento. Por lo tanto, en una realización de este tipo se proporciona una proteína de unión a antígeno que compite con una proteína de unión a antígeno que comprende la secuencia variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 23 y la región variable de cadena ligera de la SEQ. ID. NO: 31.
La competencia entre los anticuerpos de la presente invención y un anticuerpo de referencia puede determinarse mediante FMAT, Biacore o ELISA de competencia. En una realización, el ensayo de competencia lo lleva a cabo Biacore. Hay varias razones posibles para esta competencia: las dos proteínas pueden unirse a los mismos epítopos o solapantes, puede haber una inhibición estérica de la unión, o la unión de la primera proteína puede inducir un cambio conformacional en el antígeno que evita o reduce la unión de la segunda proteína.
En otra realización, los anticuerpos se unen a BCMA humana con alta afinidad, por ejemplo, cuando se miden con Biacore, los anticuerpos se unen a BCMA humana con una afinidad de 20 nM o menos o una afinidad de 15 nM o menos o una afinidad de 5 nM o menos o una afinidad de 1000 pM o menos o una afinidad de 500 pM o menos o una afinidad de 400 pM o menos, o 300 pM o menos o por ejemplo aproximadamente 120 pM. En una realización adicional, los anticuerpos se unen a BCMA humana cuando se mide con Biacore entre aproximadamente 100 pM y aproximadamente 500 pM o entre aproximadamente 100 pM y aproximadamente 400 pM, o entre aproximadamente 100 pM y aproximadamente 300 pM. En una realización de la presente invención, los anticuerpos se unen a BCMA con una afinidad de menos de 150 pm.
En una realización de este tipo, esto lo mide Biacore, por ejemplo, como se establece en el ejemplo 4 del documento WO2012163805.
En otra realización, los anticuerpos se unen a BCMA humana y neutralizan la unión de los ligandos BAFF y/o APRIL al receptor de BCMA en un ensayo de neutralización celular en donde los anticuerpos tienen una CI50 de entre aproximadamente 1 nM y aproximadamente 500 nM, o entre aproximadamente 1 nM y aproximadamente 100 nM, o entre aproximadamente 1 nM y aproximadamente 50 nM, o entre aproximadamente 1 nM y aproximadamente 25 nM, o entre aproximadamente 5 nM y aproximadamente 15 nM. En una realización adicional de la presente invención, los anticuerpos se unen a BCMA y neutralizan BCMA en un ensayo de neutralización celular en donde los anticuerpos tienen una CI50 de aproximadamente 10 nM.
En una realización de este tipo, esto se mide mediante un ensayo de neutralización celular, por ejemplo, como se establece en el ejemplo 4,6 del documento WO2012163805.
PROTEÍNAS DE UNIÓN A ANTÍGENO QUE SE UNEN A PD-1
En una realización de la invención, como se describe en el presente documento, la combinación comprende anticuerpos (por ejemplo, un anticuerpo) que se unen específicamente a BCMA y anticuerpos (por ejemplo, un anticuerpo) o fragmentos de los mismos que se unen específicamente a PD-1. En un ejemplo, los anticuerpos que se unen a PD-1 se unen específicamente a PD-1 humana (hPD-1). En otro ejemplo, los anticuerpos que se unen a PD-1, es decir, antagonistas que bloquean la unión de PD-1 con un ligando de PD-1 tal como PD-L1 o PD-L2.
En una realización, los anticuerpos que se unen a PD-1 contienen un dominio similar a inmunoglobulina o un fragmento del mismo. En otra realización, el anticuerpo que se une a PD-1 es un anticuerpo monoclonal, por ejemplo IgG, IgM, IgA, IgD o IgE, subclases de los mismos, o variantes modificadas de los mismos. En otra realización más, los anticuerpos que se unen a PD-1 son anticuerpos IgG. En otra realización, los anticuerpos que se unen a PD-1 son anticuerpos IgG4.
En una realización de la invención, se proporciona un anticuerpo como se describe en el presente documento, en donde el anticuerpo comprende la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203 o una variante de la misma. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región CDRH3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 203.
En una realización adicional de la invención, se proporciona un anticuerpo como se describe en el presente documento, en donde el anticuerpo comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3: SEQ. ID. NO: 206 y/o variantes de las mismas. En otra realización, los anticuerpos comprenden regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con las secuencias de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 201, SEQ. ID. NO: 202, SEQ. ID. NO: 203, SEQ. ID. NO: 204, SEQ. ID. NO: 205 y SEQ. ID. NO: 206.
En una realización de la invención, se proporciona un anticuerpo como se describe en el presente documento, en donde el anticuerpo comprende la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 213 o una variante de la misma.
En una realización adicional de la invención, se proporciona un anticuerpo como se describe en el presente documento, en donde el anticuerpo comprende además una o más de: CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 211, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 212, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 214, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 215 y/o CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 216 o variantes de las mismas.
En una realización adicional más, los anticuerpos comprenden la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205 y CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206.
En una realización adicional más, los anticuerpos comprenden la CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 213, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 211, CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 212, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 214, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 215 y CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 216.
En una realización de la invención, se proporciona un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada aislado seleccionado de la SEQ. ID. NO: 207 o SEQ. ID. NO: 217. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 207 o SEQ. ID. NO: 217.
En otra realización de la invención, se proporciona un anticuerpo que comprende una región variable de cadena ligera aislada seleccionada de la SEQ. ID. NO: 208 o SEQ. ID. NO: 218. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 208 o SEQ. ID. NO: 218.
En otra realización de la invención, se proporcionan un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada aislada seleccionada de la SEQ. ID. NO: 207 o SEQ. ID. NO: 217 y un dominio variable de cadena ligera aislado seleccionado de la SEQ. ID. NO: 208 o SEQ. ID. NO: 218. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 207 o SEQ. ID. NO: 217 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 208 o SEQ. ID. NO: 218.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada codificada por la SEQ. ID. NO: 207 y una región variable de cadena ligera codificada por la SEQ. ID. NO: 208. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 207 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 208.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención comprenden una región variable de cadena pesada codificada por la SEQ. ID. NO: 217 y una región variable de cadena ligera codificada por la SEQ. ID. NO: 218. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 217 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 218.
En una combinación contemplada, el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SeQ. ID. nO: 2, CDRH3 de la SEQ ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y los anticuerpos que se unen a PD-1 comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ ID NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SeQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporciona un polinucleótido que codifica una región variable de cadena pesada aislada de la SEQ. ID. NO: 207. En otra realización, los anticuerpos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 207.
En una realización, se proporciona un polinucleótido que codifica las regiones CDR de la SEQ. ID. NO: 201, SEQ. ID. NO: 202, SEQ. ID. NO: 203, SEQ. ID. NO: 204, SEQ. ID. NO: 205 y SEQ. ID. NO: 206. En otra realización, los anticuerpos comprenden regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ. ID. NO: 201, SEQ. ID. NO: 202, SEQ. ID. NO: 203, SEQ. ID. NO: 204, SEQ. ID. NO: 205 y SEQ. ID. NO: 206.
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende una 0 más CDR según la invención descritas en el presente documento, o una o ambas regiones variables de cadena pesada o regiones variables de cadena ligera según la invención descritas en el presente documento.
En otra realización, el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en un dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, diacuerpo, triacuerpo, tetracuerpo, minianticuerpo, y un minicuerpo.
En una realización, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos humanizados o quiméricos, en una realización adicional, el anticuerpo está humanizado.
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
En una realización de la presente invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena pesada como se expone en la SEQ. ID. NO: 209.
En una realización de la presente invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena ligera como se expone en la SEQ. ID. NO: 210.
En otra realización de la invención, se proporciona un anticuerpo con la secuencia de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 209 y una secuencia de cadena ligera como se expone en la SEQ ID. NO: 210.
En una realización, se proporciona un anticuerpo o fragmento del mismo que compite con los anticuerpos de la invención como se describe en el presente documento. Por lo tanto, en una realización de este tipo se proporciona un anticuerpo que compite con anticuerpos que comprenden la secuencia variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 207 y la región variable de cadena ligera de la sEq . ID. NO: 208.
Los anticuerpos aislados como se describe en el presente documento se unen a PD-1 humana y pueden unirse a PD-1 humana codificada por el gen Pdcd1, o genes o secuencias de ADNc que tienen un 90 por ciento de homología o un 90 por ciento de identidad con los mismos. La secuencia completa del ARNm de hPD-1 se puede encontrar con el número de registro de GenBank U64863. La secuencia de la proteína para la PD-1 humana se puede encontrar en el número de registro de GenBank AAC51773.
En otra realización, los anticuerpos se unen a la PD-1 humana con alta afinidad, por ejemplo, cuando se mide con Biacore, los anticuerpos se unen a la PD-1 humana con una afinidad de 1 nM o menos. En una realización de la presente invención, los anticuerpos se unen a PD-1 con una afinidad de menos de 100 pm.
La afinidad de unión de pembrolizumab por PD-1 de cynomolgus se evaluó mediante ELISA, ELISA celular y por biointerferometría lumínica. En estos estudios, se observó que la afinidad de unión de pembrolizumab a PD-1 de cynomolgus y humana estaba en el mismo intervalo, aunque ligeramente inferior para PD-1 de cynomolgus. Mediante análisis cinético, la KD fue 29 pM para PD-1 humana y 118 pM para PD-1 de cynomolgus. Funcionalmente, pembrolizumab bloqueó la unión de ligandos de PD-1 humana a células que expresan PD-1 humana o de cynomolgus con una potencia comparable. Un experto apreciará que cuanto menor sea el valor numérico de KD, más fuerte será la unión. El recíproco de KD (es decir, 1/KD) es la constante de asociación en equilibrio (KA) que tiene unidades M-1. Un experto apreciará que cuanto mayor sea el valor numérico de KA, más fuerte será la unión.
La constante de velocidad de disociación (kd) o "tasa de disociación" describe la estabilidad del complejo, es decir, la fracción de complejos que se descomponen por segundo. Por ejemplo, una kd de 0,01 s-1 equivale al 1 % de los complejos que se descomponen por segundo. En una realización, la constante de velocidad de disociación (kd) es 1x10-3 s-1 o menos, 1x10-4 s-1 o menos, 1x10-5 s-1 o menos, o 1 x10-6 s-1 o menos. La kd puede estar entre 1x10-5 s-1 y 1x10-4 s-1; o entre 1x10-4 s-1 y 1x10-3 s-1.
La competencia entre los anticuerpos de la presente invención y un anticuerpo de referencia puede determinarse mediante FMAT, Biacore o ELISA de competencia. En una realización, el ensayo de competencia lo lleva a cabo Biacore. Hay varias razones posibles para esta competencia: las dos proteínas pueden unirse a los mismos epítopos o solapantes, puede haber una inhibición estérica de la unión, o la unión de la primera proteína puede inducir un cambio conformacional en el antígeno que evita o reduce la unión de la segunda proteína.
En una realización de la invención, los anticuerpos contra PD-1 son pembrolizumab, también conocido como KEYTRUDA® o MK3475 y como lambrolizumab. Pembrolizumab es un anticuerpo monoclonal que se une al receptor PD-1 y bloquea su interacción con PD-L1 y PD-L2, liberando la inhibición de la respuesta inmunitaria mediada por la vía PD-1, incluida la respuesta inmunitaria antitumoral.
En modelos de tumor singénico de ratón, el bloqueo de la actividad de PD-1 dio como resultado una disminución del crecimiento tumoral. Pembrolizumab es una inmunoglobulina IgG4 kappa con un peso molecular aproximado de 149 kDa.
Pembrolizumab (KEYTRUDA®) es un anticuerpo bloqueante del receptor de muerte programada 1 (PD-1) humano indicado para el tratamiento de pacientes con melanoma irresecable o metastásico y progresión de la enfermedad después de ipilimumab y, si la mutación BRAF V600 es positiva, un inhibidor de BRAF. La dosis recomendada de pembrolizumab es de 2 mg/kg administrados en infusión intravenosa durante 30 minutos cada 3 semanas hasta progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable.
Pembrolizumab es un polvo estéril, sin conservantes, liofilizado de color blanco a blanquecino en viales de un solo uso. Cada vial se reconstituye y diluye para infusión intravenosa. Cada 2 ml de solución reconstituida contiene 50 mg de pembrolizumab y está formulado en L-histidina (3,1 mg), polisorbato-80 (0,4 mg), sacarosa (140 mg). Puede contener ácido clorhídrico/hidróxido de sodio para ajustar el pH a 5,5.
Se describe pembrolizumab, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos n.° 8.354.509 y 8.900.587.
Pembrolizumab se ha aprobado para el tratamiento de pacientes con melanoma irresecable o metastásico y progresión de la enfermedad después de ipilimumab y, si la mutación BRAF V600 es positiva, un inhibidor de BRAF.
En una realización, la combinación comprende pembrolizumab y GSK2857916.
Como otro ejemplo, se puede usar un anticuerpo anti-BCMA en combinación con nivolumab (OPDIVO®). Nivolumab es un anticuerpo monoclonal de inmunoglobulina G4 (IgG4) humana que se une al receptor PD-1 y bloquea su interacción con PD-L1 y PD-L2, liberando la inhibición de la respuesta inmunitaria mediada por la vía PD-1, incluida la respuesta inmunitaria antitumoral. En modelos de tumor singénico de ratón, el bloqueo de la actividad de PD-1 dio como resultado una disminución del crecimiento tumoral.
Nivolumab (OPDIVO®) es un anticuerpo bloqueante del receptor de muerte programada 1 (PD-1) indicado para el tratamiento de pacientes con: melanoma irresecable o metastásico y progresión de la enfermedad después de ipilimumab y, si la mutación BRAF V600 es positiva, un inhibidor de BRAF. Esta indicación está aprobada bajo aprobación acelerada basándose en la tasa de respuesta del tumor y la durabilidad de la respuesta. La continuación de la aprobación para esta indicación puede depender de la verificación y descripción del beneficio clínico en los ensayos de confirmación y el cáncer de pulmón no microcítico escamoso metastásico con progresión durante o después de la quimioterapia basada en platino.
La dosis recomendada de nivolumab (OPDIVO®) es de 3 mg/kg administrados en infusión intravenosa durante 60 minutos cada 2 semanas hasta progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable.
La patente de Estados Unidos n.° 8.008.449 ejemplifica siete HuMAb anti-PD-1: 17D8, 2D3, 4H1, 5C4 (también denominado en el presente documento nivolumab o BMS-936558), 4A1 1,7D3 y 5F4. Véase también la patente de Estados Unidos n.° 8.779.105. Cualquiera de estos anticuerpos, o sus CDR (o una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 % (por ejemplo, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 %) de identidad con cualquiera de estas secuencias de aminoácidos), puede usarse en las composiciones y métodos descritos en el presente documento.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y MÉTODOS DE TRATAMIENTO
La invención también proporciona composiciones farmacéuticas, que incluyen las combinaciones descritas en el presente documento y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La combinación de la invención puede comprender dos composiciones farmacéuticas, una que comprende anticuerpos anti-BCMA o fragmentos, y la otra que comprende anticuerpos anti-PD-1 o fragmentos de los mismos, teniendo cada uno de ellos los mismos o diferentes vehículos, diluyentes o excipientes. El uno o más vehículos, uno o más diluyentes o uno o más excipientes deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación, susceptibles de formulación farmacéutica, y no perjudiciales para el receptor de los mismos.
Los componentes de la combinación de la invención y las composiciones farmacéuticas que comprenden dichos componentes pueden administrarse secuencialmente en cualquier orden y por diferentes vías; los componentes y las composiciones farmacéuticas que los comprenden pueden administrarse simultáneamente.
Cada uno de los componentes de las combinaciones descritas en el presente documento puede fabricarse en el mismo vial/recipiente o en diferentes viales/recipientes. Por ejemplo, en una realización, los anticuerpos que se unen a BCMA se fabrican en el mismo vial/recipiente que los anticuerpos que se unen a PD-1 y todos los componentes de la combinación se administran simultáneamente. En otra realización ilustrativa, los anticuerpos que se unen a BCMA se fabrican en un vial/recipiente diferente como los anticuerpos que se unen a PD-1 y cada uno de los componentes de la combinación se puede administrar simultáneamente, secuencialmente, y con las mismas o diferentes vías de administración.
Según otra realización de la invención, también se proporciona un proceso para la preparación de una composición farmacéutica que incluye mezclar un componente de la combinación de la invención y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Los componentes de la invención pueden administrarse por cualquier vía apropiada. Para algunos componentes, las vías adecuadas incluyen oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural). Se apreciará que la vía preferida puede variar con, por ejemplo, la afección del receptor de la combinación y el cáncer a tratar. También se apreciará que cada uno de los agentes administrados, puede administrarse a través de la misma vía o a través de vías diferentes y que los componentes pueden combinarse entre sí o en composiciones farmacéuticas distintas.
En una realización, uno o más componentes de una combinación de la invención se administran por vía intravenosa. En otra realización, uno o más componentes de una combinación de la invención se administran por vía intratumoral. En otra realización, uno o más componentes de una combinación de la invención se administran sistémicamente, por ejemplo, por vía intravenosa, y uno o más componentes de una combinación de la invención se administran por vía intratumoral. En otra realización, todos los componentes de una combinación de la invención se administran sistémicamente, por ejemplo, por vía intravenosa. En una realización alternativa, todos los componentes de la combinación de la invención se administran por vía intratumoral. En cualquiera de las realizaciones, por ejemplo, en este párrafo, los componentes de la invención se administran como una o más composiciones farmacéuticas.
La administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de las combinaciones de la invención ( o cantidades terapéuticamente eficaces de cada uno de los componentes de la combinación) es ventajosa frente a los compuestos individuales que las componen en que las combinaciones proporcionan una o más de las siguientes propiedades mejoradas cuando se compara con la administración individual de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que las componen: i) un mayor efecto anticanceroso que el agente individual más activo, ii) actividad anticancerosa sinérgica o altamente sinérgica, iii) un protocolo de dosificación que proporciona una actividad anticancerosa potenciada con un perfil de efectos secundarios reducido, iv) una reducción en el perfil de efectos tóxicos, v) un aumento en la ventana terapéutica o vi) un aumento en la biodisponibilidad de uno o ambos compuestos que las componen.
En una realización, la presente invención proporciona métodos para tratar cáncer, yal como en el tratamiento de trastornos de linfocitos B en un mamífero (por ejemplo, un ser humano) que lo necesite, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la combinación como se describe en el presente documento. En una realización, el cáncer es mieloma múltiple. En otra realización, el cáncer es linfoma no Hodgkiniano.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer que comprenden administrar uno cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA de la presente invención o conjugados de anticuerpo y fármaco de los mismos; y pembrolizumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer que comprenden administrar uno cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA o inmunoconjugados del mismo; y nivolumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer en un ser humano que lo necesite que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SeQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer en un ser humano que lo necesite que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de pembrolizumab o nivolumab.
En una realización, se divulgan métodos para tratar cáncer en un ser humano que lo necesite que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. iD. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. iD. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a OX40 que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 219, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 220, CDRH3 de la SEQ ID NO: 221, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 222, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 223, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 224, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar mieloma múltiple en un ser humano que lo necesite, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar linfoma no Hodgkiniano en un ser humano que lo necesite, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
Se proporcionan métodos en donde el tamaño del tumor del cáncer en dicho mamífero se reduce en más de una cantidad aditiva en comparación con el tratamiento con los anticuerpos contra BCMA y los anticuerpos que se unen a los anticuerpos contra PD-1 utilizado como monoterapia. Adecuadamente, la combinación puede ser sinérgica.
En una realización, el mamífero tiene una mayor supervivencia cuando se trata con la combinación como se describe en el presente documento en comparación con un mamífero que recibió los anticuerpos contra BCMA o los anticuerpos contra PD-1 como monoterapia. En una realización, los métodos comprenden además administrar al menos un agente antineoplásico al mamífero que lo necesita.
Se contempla el uso en el tratamiento de cáncer, en particular en el tratamiento de trastornos de linfocitos B en un mamífero (por ejemplo, un ser humano) que lo necesite. En una realización, el cáncer es mieloma múltiple. En otra realización, el cáncer es linfoma no Hodgkiniano.
En una realización, se proporciona el uso de las combinaciones descritas en el presente documento para tratar cáncer en donde la combinación comprende cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA de la presente invención o conjugados de anticuerpo y fármaco del mismo; y pembrolizumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo.
En una realización, se proporciona el uso de las combinaciones descritas en el presente documento para tratar cáncer en donde la combinación comprende uno cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA o inmunoconjugados del mismo; y nivolumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo
En una realización, se proporciona el uso de combinaciones para tratar cáncer en un ser humano que lo necesite, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. iD. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. iD. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporciona el uso de combinaciones para tratar el mieloma múltiple en un ser humano que lo necesite, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SeQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se proporciona el uso de combinaciones para tratar el linfoma no Hodgkiniano en un ser humano que lo necesite, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En la presente invención también se proporciona el uso de una combinación de composiciones farmacéuticas de esta invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer tal como en particular en el tratamiento de trastornos de linfocitos B. En una realización, el cáncer es mieloma múltiple. En otra realización, el cáncer es linfoma no Hodgkiniano.
En una realización, el uso de una combinación o composiciones farmacéuticas de esta invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer incluye combinaciones que comprenden uno cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA de la presente invención o conjugados de anticuerpo y fármaco del mismo; y pembrolizumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo.
En una realización, el uso de una combinación o de composiciones farmacéuticas de esta invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer incluye combinaciones que comprenden uno cualquiera de los anticuerpos que se unen a BCMA o inmunoconjugados de los mismos; y nivolumab, o un anticuerpo que comprende un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de homología de secuencia con el mismo
En una realización, se contempla el uso de combinaciones en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ.
ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se contempla el uso de combinaciones en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del mieloma múltiple, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprenden la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
En una realización, se contempla el uso de combinaciones en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma no Hodgkiniano, en donde la combinación comprende:
i) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6 o variantes del mismo conjugado con MMAF; y
ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 que comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 201, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 202, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 203, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 204, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 205, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 206, o variantes de las mismas.
También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden la combinación de la presente invención para tratar cáncer. La presente invención también proporciona un kit de combinación que comprende composiciones farmacéuticas de la invención junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. El kit puede incluir opcionalmente instrucciones de uso.
Los trastornos de los linfocitos B se pueden dividir en defectos del desarrollo de los linfocitos B/producción de inmunoglobulinas (inmunodeficiencias) y proliferación excesiva/descontrolada (linfomas, leucemias). Como se usa en el presente documento, el trastorno de linfocitos B se refiere a ambos tipos de enfermedades, y se proporcionan métodos para tratar trastornos de linfocitos B con anticuerpos.
Los ejemplos de cánceres y, en particular, enfermedades mediadas por linfocitos B o células plasmáticas o enfermedades o trastornos mediados por anticuerpos incluyen mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica (CLL, por sus siglas en inglés), linfoma folicular (FL, por sus siglas en inglés), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL, por sus siglas en inglés), mieloma múltiple no secretor, mieloma múltiple latente, gammapatía monoclonal de significado indeterminado (MGUS, por sus siglas en inglés), plasmocitoma solitario (óseo, extramedular), linfoma linfoplasmacítico (LPL, por sus siglas en inglés), macroglobulinemia de Waldenstrom, leucemia de células plasmáticas, amiloidosis primaria (AL), enfermedad de la cadena pesada, lupus eritematoso sistémico (SLE, por sus siglas en inglés), síndrome POEMS/mieloma osteoesclerótico, crioglobulinemia de tipo I y II, enfermedad por depósito de cadenas ligeras, síndrome de Goodpasture, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP, por sus siglas en inglés), glomerulonefritis aguda, pénfigo y trastornos penfigoides, y epidermólisis ampollosa adquirida; o cualquier leucemia de linfocitos B de linfoma no Hodgkiniano (NHL, por sus siglas en inglés) o linfoma de Hodgkin (HL, por sus siglas en inglés).
En una realización particular, la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en mieloma múltiple (MM), leucemia de linfocitos B de linfoma no Hodgkiniano (NHL), linfoma folicular (FL) y linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL).
En una realización de la presente invención, la enfermedad es mieloma múltiple o leucemia de linfocitos B de linfoma no Hodgkiniano (NHL).
En una realización de la presente invención, la enfermedad es mieloma múltiple.
De manera adecuada, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de un cáncer como se describe en el presente documento.
La combinación de la invención puede utilizarse sola o en combinación con uno o más agentes terapéuticos distintos.
Cuando una composición farmacéutica o combinación de la presente invención se administra para el tratamiento del cáncer, el término "administrar" y sus derivados, como se usa en el presente documento, significa administración simultánea o cualquier forma de administración secuencial separada de una combinación, como se describe en el presente documento, y a un principio o principios activos adicionales, conocidos como útiles en el tratamiento de cáncer, incluida la quimioterapia (por ejemplo, y un agente antineoplásico), tratamiento de radiación y cirugía. La expresión principio o principios activos adicionales, como se usa en el presente documento, incluye cualquier compuesto o agente terapéutico conocido o que demuestre propiedades ventajosas cuando se administra a un paciente que necesita tratamiento contra el cáncer. Preferentemente, si la administración no es simultánea, los compuestos se administran temporalmente muy cerca entre sí. Asimismo, carece de importancia si los compuestos se administran en la misma forma farmacéutica, por ejemplo, un compuesto puede administrarse por vía intravenosa y otro compuesto puede administrarse por vía oral.
Normalmente, cualquier agente antineoplásico que tenga actividad frente a un tumor susceptible que se esté tratando puede administrarse con las combinaciones descritas en el presente documento en el tratamiento de cáncer en la presente invención. Se pueden encontrar ejemplos de dichos agentes en Cancer Principles and Practice of Oncology por V.T. Devita y S. Hellman (editores), 6a edición (15 de febrero, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Un experto en la materia sería capaz de discernir qué combinaciones de agentes serían útiles basándose en las características particulares de los fármacos y del cáncer en cuestión. Los agentes antineoplásicos habituales útiles en la presente invención incluyen, pero sin limitación, agentes antimicrotúbulos tales como los diterpenoides y los alcaloides de la vinca; complejos de coordinación de platino; agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureas y triazenos; agentes antimitóticos tales como antraciclinas, actinomicinas y bleomicinas; inhibidores de topoisomerasa II, tales como epipodofilotoxinas; antimetabolitos tales como análogos de purina y pirimidina, y compuestos antifolato; inhibidores de la topoisomerasa I, tales como camptotecinas; hormonas y análogos de hormonas; inhibidores de las rutas de transducción de señales; inhibidores de la angiogénesis de tirosina quinasa no receptora; agentes inmunoterapéuticos; agentes proapoptóticos; e inhibidores de la señalización del ciclo celular. En el presente documento se proporciona una lista no limitante de agentes antineoplásicos.
Los ejemplos de un principio o principios activos adicionales para la administración con las combinaciones descritas en el presente documento son agentes quimioterapéuticos.
Los agentes antimicrotúbulos o antimitóticos son agentes específicos de fase activos frente a los microtúbulos de las células tumorales durante la fase M o de mitosis del ciclo celular. Los ejemplos de agentes antimicrotúbulos incluyen, pero sin limitación, diterpenoides y alcaloides de la vinca.
Los diterpenoides, que se obtienen de fuentes naturales, son agentes antineoplásicos específicos de fase que funcionan en las fases G2/M del ciclo celular. Se cree que los diterpenoides estabilizan la subunidad p-tubulina de los microtúbulos, mediante la unión a esta proteína. Después, el desmontaje de la proteína parece quedar inhibido con detención de la mitosis y muerte celular posterior. Los ejemplos de diterpenoides incluyen, pero sin limitación, paclitaxel y su análogo docetaxel.
Paclitaxel, 13-éster de 2-benzoato de 4,10-diacetato de 5p,20-epoxi-1,2a,4,7p,10p,13a-hexa-hidroxitax-11-en-9-ona con (2R,3S)-N-benzoil-3-fenilisoserina; es un producto de diterpeno natural aislado del tejo del Pacífico, Taxus brevifolia, y está disponible en el mercado como la solución inyectable TAXOL®. Es un miembro de la familia de taxanos de los terpenos. Fue aislado por primera vez en 1971 por Wani et al. J. Am. Chem, Soc., 93:2325. 1971), quién caracterizó su estructura por métodos químicos y de cristalografía de rayos X. Un mecanismo de su actividad se refiere a la capacidad del paclitaxel para unirse a tubulina, inhibiendo de esta forma el crecimiento de células cancerosas. Schiff et al., Proc. Natl, Acad, Sci. EE.UU., 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981). Para una revisión de la síntesis y actividad anticancerosa de algunos derivados de paclitaxel, véanse: D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, titulado "New trends in Natural Products Chemistry 1986", Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne, Eds. (Elsevier, Ámsterdam, 1986) págs. 219­ 235.
Paclitaxel está autorizado en Estados Unidos para uso clínico en el tratamiento del cáncer de ovario resistente al tratamiento (Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. Intem, Med., 111:273,1989) y para el tratamiento del cáncer de mama (Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991.) Es un posible candidato para el tratamiento de neoplasias cutáneas (Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46) y carcinomas de cabeza y cuello (Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990). El compuesto también muestra potencial para el tratamiento de la poliquistosis renal (Woo et. al., Nature, 368:750. 1994), el cáncer de pulmón y la malaria. El tratamiento de los pacientes con paclitaxel da como resultado la supresión de la médula ósea (múltiples linajes celulares, Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998) relacionada con la duración de la dosificación por encima de una concentración umbral (50 nM) (Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) págs.16-23, 1995).
Docetaxel, (2R,3S)-N-carboxi-3-fenilisoserina, éster N-ferc-butílico, 13-éster con 2-benzoato de 4-acetato de 5p-20-epoxi-1,2a,4,7p,10p,13a-hexahidroxitax-11-en-9-ona, trihidrato; está disponible en el mercado como solución inyectable como TAXOTERE®. Docetaxel está indicado para el tratamiento del cáncer de mama. Docetaxel es un derivado semisintético de paclitaxel q.v., preparado utilizando un precursor natural, 10-desacetil-baccatina III, extraído de la acícula del tejo europeo. La toxicidad limitante de la dosis del docetaxel es la neutropenia.
Los alcaloides de la vinca son agentes antineoplásicos específicos de fase obtenidos de la vinca. Los alcaloides de la vinca actúan en la fase M (mitosis) del ciclo celular uniéndose de forma específica a la tubulina. Por consiguiente, la molécula de tubulina unida no puede polimerizarse formando microtúbulos. Se cree que la mitosis queda detenida en la metafase con la posterior muerte celular. Los ejemplos de alcaloides de la vinca incluyen, pero sin limitación, vinblastina, vincristina y vinorelbina.
Vinblastina, sulfato de vincaleucoblastina, está disponible en el mercado como VELBAN®, como solución inyectable. Aunque, tiene una posible indicación como una terapia de segunda línea para diversos tumores sólidos, está indicada principalmente en el tratamiento del cáncer de testículos y de diversos linfomas, incluyendo la enfermedad de Hodgkin; y de linfomas linfocíticos e histiocíticos. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis de la vinblastina.
Vincristina, vincaleucoblastina, 22-oxo-, sulfato, está disponible en el mercado como ONCOVIN®, como una solución inyectable. La vincristina está indicada para el tratamiento de leucemias agudas y también se ha descubierto su uso en regímenes de tratamiento para linfomas malignos de Hodgkin y no Hodgkinianos. La alopecia y los efectos neurológicos son los efectos secundarios más comunes de la vincristina y, en un menor grado, pueden producirse efectos de mielosupresión y mucositis gastrointestinal.
Vinorelbina, 3',4'-didehidro-4'-desoxi-C'-norvincaleucoblastina [R-(R*,R*)-2,3-dihidroxibutanodioato (1:2) (sal)], disponible en el mercado como una solución inyectable de tartrato de vinorelbina (NAVELBINE®), es un alcaloide semisintético de la vinca. La vinorelbina está indicada como en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos, tal como cisplatino, en el tratamiento de diversos tumores sólidos, particularmente los cánceres de pulmón no microcíticos, de mama avanzado, y de próstata resistente a hormonas. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la vinorelbina.
Los complejos de coordinación de platino son agentes antineoplásicos no específicos de fase, que interactúan con el ADN. Los complejos de platino entran en las células tumorales, experimentan, acuación y forman entrecruzamientos intra e intercadenas con el ADN, provocando efectos biológicos adversos para el tumor. Los ejemplos de complejos de coordinación de platino incluyen, pero sin limitación, cisplatino y carboplatino.
Cisplatino, cis-diaminadicloroplatino, está disponible en el mercado como PLATINOL®, como una solución inyectable. El cisplatino está indicado principalmente en el tratamiento del cáncer de testículos y ovárico metastásicos, y del cáncer de vejiga avanzado. Los efectos secundarios primarios limitantes de la dosis del cisplatino son la nefrotoxicidad, que se puede controlar mediante hidratación y diuresis, y la ototoxicidad.
Carboplatino, platino, diamina [1,1-ciclobutano-dicarboxilato(2-)-O,O’], está disponible en el mercado como PARAPLATIN®, como una solución inyectable. El carboplatino está indicado principalmente en el tratamiento de primera y segunda línea del carcinoma ovárico avanzado. La supresión de la médula ósea es la toxicidad limitante de la dosis del carboplatino.
Los agentes alquilantes son agentes antineoplásicos específicos no de fase y son fuertes electrófilos. Normalmente, los agentes alquilantes forman enlaces covalentes, mediante alquilación, con el ADN, a través de radicales nucleófilos de las moléculas de ADN, tales como fosfato, amino, sulfhidrilo, hidroxilo, carboxilo y grupos imidazol. Tal alquilación altera las funciones del ácido nucleico, conduciendo a la muerte celular. Los ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero sin limitación, mostazas nitrogenadas tales como ciclofosfamida, melfalán y clorambucilo; sulfonatos de alquilo tales como busulfán; nitrosoureas tales como carmustina; y triacenos tales como dacarbazina.
Ciclofosfamida, 2-[bis(2-cloroetil)amino]tetrahidro-2H-1,3,2-oxazafosforina 2-óxido monohidrato, está disponible en el mercado como solución inyectable o comprimidos como CYTOXAN®. La ciclofosfamida está indicada en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos, en el tratamiento de linfomas malignos, mieloma múltiple y leucemias. Alopecia, náuseas, vómitos y leucopenia son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de ciclofosfamida.
Melfalán, 4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, está disponible en el mercado como una solución inyectable o comprimidos como ALKERAN®. El melfalán está indicado para el tratamiento paliativo del mieloma múltiple y del carcinoma de ovario epitelial no resecable. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común del melfalán.
Clorambucilo, ácido 4-[bis(2-cloroetil)amino]bencenobutanoico, está disponible en el mercado como los comprimidos LEUKERAN®. El clorambucilo está indicado para el tratamiento paliativo de la leucemia linfática crónica y los linfomas malignos tales como linfosarcoma, linfoma folicular gigante y enfermedad de Hodgkin. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común de clorambucilo.
Busulfán, 1,4-butanodiol dimetanosulfonato, está disponible en el mercado como los COMPRIMIDOS MYLERAN®. El busulfán está indicado para el tratamiento paliativo de la leucemia mielógena crónica. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común de busulfán.
Carmustina, 1,3-[bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea, está disponible en el mercado como viales individuales de material liofilizado como BiCNU®. La carmustina está indicada para el tratamiento paliativo en monoterapia o junto con otros agentes para tumores cerebrales, mieloma múltiple, enfermedad de Hodgkin y linfomas no Hodgkinianos. La mielosupresión retardada es el efecto secundario limitante de la dosis más común de vinorelbina.
Dacarbazina, 5-(3,3-dimetil-1-triazeno)-imidazol-4-carboxamida, está disponible en el mercado como viales individuales de material como DTIC-Dome®. La dacarbazina está indicada para el tratamiento de melanoma maligno metastásico y, en combinación con otros agentes, para el tratamiento de segunda línea de la enfermedad de Hodgkin. Náuseas, vómitos y anorexia son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de dacarbazina.
Los antineoplásicos antibióticos son agentes no específicos de fase, que se unen o intercalan con el ADN. Normalmente, tal acción da como resultado complejos de ADN estables o la ruptura de las cadenas, lo que normalmente altera la función de los ácidos nucleicos, conduciendo a la muerte celular. Los ejemplos de agentes antineoplásicos antibióticos incluyen, pero sin limitación, actinomicinas tales como dactinomicina, antrociclinas tales como daunorrubicina y doxorrubicina; y bleomicinas.
Dactinomicina, también conocida como Actinomicina D, está disponible en el mercado en forma inyectable como COSMEGEN®. La dactinomicina está indicada para el tratamiento del tumor de Wilm y el rabdomiosarcoma. Náuseas, vómitos y anorexia son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de dactinomicina.
Daunorrubicina, clorhidrato de (8S-cis-)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi-a-L-lixohexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi-1-metoxi-5,12 naftacenodiona, disponible en el mercado como una forma inyectable liposomal como DAUNOXOME® o como una inyectable como CERUBIDINE®. La doxorrubicina está indicada para la inducción de la remisión en el tratamiento de la leucemia no linfocítica aguda y el sarcoma de Kaposi asociado con el VIH avanzado. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la daunorrubicina.
Doxorrubicina, clorhidrato de (8S, 10S)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi-a-L-lyxo-hexopiranosil)oxi]-8-glicoloílo, 7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi-1-metoxi-5,12 naftacenodiona, está disponible en el mercado como una forma inyectable como RUBEX® o ADRIAMYCIN RDF®. Doxorrubicina está principalmente indicada para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda y la leucemia mieloblástica aguda, pero también es un componente útil en el tratamiento de algunos tumores sólidos y linfomas. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la doxorrubicina.
Bleomicina, una mezcla de antibióticos glucopeptídicos citotóxicos aislados de una cepa de Streptomyces verticillus, está disponible en el mercado como BLENOXANE®. La bleomicina está indicada como tratamiento paliativo, en monoterapia o junto con otros agentes, de carcinoma escamocelular, linfomas y carcinomas de testículos. Las toxicidades pulmonar y cutánea son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de bleomicina.
Los inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, pero sin limitación, epipodofilotoxinas.
Las epipodofilotoxinas son agentes antineoplásicos específicos de fase obtenidos de la mandrágora. Normalmente, las epipodofilotoxinas afectan a las células en las fases S y G2 del ciclo celular mediante la formación de un complejo ternario con la topoisomerasa II y el ADN, provocando rupturas de las cadenas de ADN. Las rupturas de las cadenas se acumulan y se produce la muerte celular. Los ejemplos de epipodofilotoxinas incluyen, pero sin limitación, etopósido y tenipósido.
Etopósido, 4'-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R)-etilideno-p-D-glucopiranósido], está disponible en el mercado como una solución inyectable o cápsulas como VePESID®, y se conoce habitualmente como VP-16. El etopósido está indicado en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de los cánceres de testículos y de pulmón no microcítico. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de etopósido. La incidencia de leucopenia tiende a ser más grave que la trombocitopenia.
Tenipósido, 4'-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R)-tenilideno-p-D-glucopiranósido], está disponible en el mercado como una solución inyectable como VUMOn® y se conoce habitualmente como VM-26. El tenipósido está indicado en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda en niños. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de tenipósido. El tenipósido puede inducir tanto leucopenia como trombocitopenia.
Los agentes neoplásicos antimetabolitos son agentes antineoplásicos específicos de fase que actúan en la fase S (síntesis de ADN) del ciclo celular, inhibiendo la síntesis de ADN o inhibiendo la síntesis de bases púricas o pirimidínicas y, por lo tanto, limitando la síntesis de ADN. Por consiguiente, la fase S no avanza y se produce la muerte celular. Los ejemplos de agentes antineoplásicos antimetabolitos incluyen, pero sin limitación, fluorouracilo, metotrexato, citarabina, mercaptopurina, tioguanina y gemcitabina.
5-Fluorouracilo, 5-fluoro-2,4-(1H, 3H) pirimidinadiona, está disponible en el mercado como fluorouracilo. La administración de 5-fluorouracilo conduce a la inhibición de la síntesis de timidilato y también se incorpora tanto en el ARN como en el ADN. Normalmente el resultado es la muerte celular. El 5-fluorouracilo está indicado en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de los carcinomas de mama, colon, recto, estómago y páncreas. La mielosupresión y la mucositis son los efectos secundarios limitantes de la dosis de 5-fluorouracilo. Otros análogos de fluoropirimidina incluyen 5-fluoro desoxiuridina (floxuridina) y 5-fluorodesoxiuridina monofosfato.
Citarabina, 4-amino-1-p-D-arabinofuranosil-2 (1 H)-pirimidinona, está disponible en el mercado como CYTOSAR-U® y se lo conoce comúnmente como Ara-C. Se cree que la citarabina presenta especificidad de fase celular en la fase S, inhibiendo la elongación de la cadena de ADN mediante la incorporación terminal de citarabina en la cadena de ADN que se está sintetizando. La citarabina está indicada en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda. Otros análogos de citidina incluyen 5-azacitidina y 2',2'-difluorodesoxicitidina (gemcitabina). La citarabina induce leucopenia, trombocitopenia y mucositis.
Mercaptopurina, 1,7-dihidro-6H-purina-6-tiona monohidrato, está disponible en el mercado como PURINETHOL®. La mercaptopurina presenta especificidad de fase celular en la fase S inhibiendo la síntesis de ADN mediante un mecanismo aún no especificado. La mercaptopurina está indicada en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda. La mielosupresión y la mucositis gastrointestinal son efectos secundarios esperados de mercaptopurina en dosis altas. Un análogo de la mercaptopurina útil es la azatioprina.
Tioguanina, 2-amino-1,7-dihidro-6H-purina-6-tiona, está disponible en el mercado como TABLOID®. La tioguanina presenta especificidad de fase celular en la fase S inhibiendo la síntesis de ADN mediante un mecanismo todavía no especificado. La tioguanina está indicada en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda. La mielosupresión, incluyendo leucopenia, trombocitopenia y anemia, son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de administración de tioguanina. Sin embargo, se producen efectos secundarios gastrointestinales y pueden ser limitantes de la dosis. Otros análogos de purina incluyen pentostatina, eritrohidroxinoniladenina, fosfato de fludarabina y cladribina.
Gemcitabina, monoclorhidrato de 2'-desoxi-2',2'-difluorocitidina (isómero p), está disponible en el mercado como GEM-ZAR®. La gemcitabina presenta especificidad de fase celular en la fase S y por bloqueo de la progresión de las células a través del límite G1/S. La gemcitabina está indicada junto con cisplatino en el tratamiento del cáncer de pulmón no microcítico localmente avanzado y en monoterapia para el tratamiento del cáncer de páncreas localmente avanzado. La mielosupresión, incluyendo leucopenia, trombocitopenia y anemia, son los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de administración de gemcitabina.
Metotrexato, ácido N-[4[[(2,4-diamino-6-pteridinil)metil]metilamino] benzoil]-L-glutámico, está disponible en el mercado como metotrexato de sodio. El metotrexato presenta efectos de fase celular, específicamente en la fase S, inhibiendo la síntesis, la reparación y/o la replicación de ADN, a través de la inhibición de la ácido dihidrofólico reductasa, que es necesaria para la síntesis de los nucleótidos purínicos y el timidilato. El metotrexato está indicado en monoterapia o junto con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento del coriocarcinoma, leucemia meníngea, linfoma no Hodgkiniano y carcinomas de mama, cabeza, cuello, ovario y vejiga. Mielosupresión (leucopenia, trombocitopenia y anemia) y mucositis son efectos secundarios esperados de la administración de metotrexato.
Las camptotecinas, incluyendo, la camptotecina y los derivados de camptotecina, están disponibles o en desarrollo como inhibidores de la Topoisomerasa I. Se cree que la actividad citotóxica de las camptotecinas está relacionada con su actividad inhibidora de la Topoisomerasa I. Los ejemplos de camptotecinas incluyen, pero sin limitación, irinotecán, topotecán y las diversas formas ópticas de 7-(4-metilpiperazino-metilen)-10,11-etilendioxi-20-camptotecina, descritas a continuación.
Irinotecán HCl, (4S)-4,11-dietil-4-hidroxi-9-[(4-piperidinopiperidin)carboniloxi]-1 H-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14(4H,12H)-diona clorhidrato, está disponible en el mercado como la solución inyectable CAMP-TOSAR®.
El irinotecán es un derivado de la camptotecina que se une, junto con su metabolito activo SN-38, al complejo de la topoisomerasa I - ADN. Se cree que la citotoxicidad se produce como resultado de roturas bicatenarias irreparables producidas por la interacción del complejo ternario topoisomerasa I: ADN: irinotecán o SN-38 con enzimas de replicación. El irinotecán está indicado para el tratamiento del cáncer metastásico del colon o el recto. Los efectos secundarios limitantes de la dosis del irinotecán HCl son mielosupresión, incluyendo neutropenia, y efectos GI, incluyendo diarrea.
Topotecán HCl, (S)-10-[(dimetilamino)metil]-4-etil-4,9-dihidroxi-1 H-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14-(4H,12H)-diona monoclorhidrato, está disponible en el mercado como la solución inyectable HYCAMTIN®. Topotecán es un derivado de la camptotecina que se une al complejo topoisomerasa I - ADN e impide que se vuelvan a unir las roturas monocatenarias provocadas por la Topoisomerasa I en respuesta a la tensión de torsión de la molécula de ADN. Topotecán está indicado para el tratamiento de segunda línea del carcinoma metastásico de ovario y el cáncer de pulmón microcítico. El efecto secundario limitante de la dosis del topotecán HCl es la mielosupresión, principalmente la neutropenia.
También de interés, es el derivado de camptotecina de fórmula A siguiente, actualmente en desarrollo, incluyendo la forma de mezcla racémica (R,S) así como los enantiómeros R y S:
Figure imgf000021_0001
conocido por el nombre químico "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11-etilendioxi-20(R,S)-camptotecina (mezcla racémica) o "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11- etilendioxi-20(R)-camptotecina (enantiómero R) o "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11-etilendioxi-20(S)-camptotecina (enantiómero S). Dicho compuesto, así como compuestos relacionados, se describen, incluyendo los métodos de elaboración, en las patentes de Estados Unidos n.° 6.063.923; 5342947; 5559235; 5.491.237 y en la solicitud de patente pendiente de Estados Unidos. n.° 08/977.217 presentada el 24 de noviembre de 1997.
Las hormonas y análogos de hormonas son compuestos útiles para el tratamiento de cánceres en los que existe una relación entre la hormona (u hormonas) y el crecimiento del cáncer, y/o la ausencia del mismo. Los ejemplos de hormonas y de análogos de hormonas útiles en el tratamiento del cáncer incluyen, pero sin limitación, adrenocorticoesteroides tales como prednisona y prednisolona que son útiles en el tratamiento del linfoma maligno y la leucemia aguda en niños; aminoglutetimida y otros inhibidores de la aromatasa, tales como anastrozol, letrazol, vorazol y exemestano, útiles en el tratamiento del carcinoma corticosuprarrenal y del carcinoma de mama dependiente de hormonas que contiene receptores de estrógenos; progestrinas, tales como acetato de megestrol, útiles en el tratamiento del cáncer de mama dependiente de hormonas y carcinoma de endometrio; estrógenos, andrógenos y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona y 5a-reductasas tales como finasterida y dutasterida, útiles en el tratamiento del carcinoma prostático y de la hipertrofia prostática benigna; antiestrógenos, tales como tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, así como moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERMS, por sus siglas en inglés) tales como los descritos en las patentes de Estados Unidos N.° 5.681.835, 5.877.219 y 6.207.716, útiles en el tratamiento del carcinoma de mama dependiente de hormonas y otros cánceres susceptibles; y la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH, por sus siglas en inglés) y análogos de la misma, que estimulan la liberación de la hormona luteinizante (LH, por sus siglas en inglés) y/o la hormona estimulante del folículo (FSH, por sus siglas en inglés), para el tratamiento del carcinoma prostático, por ejemplo, agonistas y antagonistas de LHRH, tales como acetato de goserelina y luprolida.
Letrozol (nombre comercial Femara) es un inhibidor de la aromatasa no esteroideo oral para el tratamiento del cáncer de mama que responde a las hormonas después de la cirugía. Los estrógenos son producidos por la conversión de andrógenos a través de la actividad de la enzima aromatasa. A continuación, los estrógenos se unen a un receptor de estrógenos, que hace que las células se dividan. El letrozol evita que la aromatasa produzca estrógenos por unión reversible competitiva, al hemo de su unidad citocromo P450. La acción es específica y letrozol no reduce la producción de mineraloesteroides o corticoesteroides.
Los inhibidores de las vías de transducción de señales son aquellos inhibidores, que bloquean o inhiben un proceso químico que suscita un cambio intracelular. Como se usa en el presente documento, este cambio es la proliferación o diferenciación celular. Los inhibidores de la transducción de señales útiles en la presente invención incluyen inhibidores de tirosina cinasas receptoras, las tirosina cinasas no receptoras, bloqueadores de dominio SH2/SH3, serina/treonina cinasas, fosfotidil inositol-3 cinasas, la señalización de mioinositol y oncogenes Ras.
Varias proteínas tirosina cinasas catalizan la fosforilación de restos de tirosilo específicos en diversas proteínas implicadas en la regulación del crecimiento celular. Dichas proteínas tirosina cinasas pueden clasificarse en líneas generales como cinasas receptoras o no receptoras.
Las tirosina cinasas receptoras son proteínas transmembrana que tienen un dominio de unión a ligando extracelular, un dominio transmembrana y un dominio tirosina cinasa. Las tirosina cinasas receptoras están implicadas en la regulación del crecimiento celular y generalmente se denominan receptores de factores de crecimiento. La activación inadecuada o incontrolada de muchas de estas cinasas, es decir, la actividad anómala del receptor del factor de crecimiento de cinasas, por ejemplo, por sobreexpresión o mutación, ha mostrado dar como resultado un crecimiento celular incontrolado. Por consiguiente, la actividad anómala de dichas cinasas se ha relacionado con el crecimiento de tejidos malignos. Por consiguiente, los inhibidores de dichas cinasas podrían proporcionar métodos de tratamiento para el cáncer. Los receptores de factores de crecimiento incluyen, por ejemplo, receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFr, por sus siglas en inglés), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFr, por sus siglas en inglés), erbB2, erbB4, receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFr, por sus siglas en inglés), tirosina cinasa con dominios de homología al factor de crecimiento epidérmico y similares a la inmunoglobulina (TIE-2), receptor del factor de crecimiento insulínico de tipo I (IGFI, por sus siglas en inglés), factor estimulante de colonias de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF, por sus siglas en inglés), receptores de Trk (TrkA, TrkB y TrkC), receptores de efrina (eph) y el protoncogén RET. Varios inhibidores de receptores de factores de crecimiento están actualmente en desarrollo e incluyen antagonistas de ligandos, anticuerpos, inhibidores de tirosina cinasa y oligonucleótidos antisentido. Se describen receptores de factores de crecimiento y agentes que inhiben la función de los receptores de factores de crecimiento, por ejemplo, en Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, N.° 2 de febrero de 1997; y Lofts, F. J. et al, "Growth factor receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed. Workman, Paul y Kerr, David, CRC press 1994, Londres.
Las tirosina cinasas, que son cinasas no receptoras de factores de crecimiento se denominan tirosina cinasas no receptoras. Las tirosina cinasas no receptoras útiles en la presente invención, que son dianas o posibles dianas de fármacos antineoplásicos, incluyen cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (por sus siglas en inglés, cinasa de adhesión focal), tirosina cinasa de Brutons y Bcr-Abl. Dichas cinasas no receptoras y agentes que inhiben la función de las tirosina cinasas no receptoras se describen en Sinh, S. y Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465 - 80; y Bolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404.
Los bloqueadores de los dominios SH2/SH3 son agentes que alteran la unión del dominio SH2 o SH3 en una diversidad de enzimas o de proteínas adaptadoras, que incluyen, la subunidad p85 de PI3-K, la familia Src de cinasas, moléculas adaptadoras (Shc, Crk, Nck, Grb2) y Ras-GAP. Los dominios SH2/SH3 son dianas para fármacos antineoplásicos y se comentan en Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32.
Los inhibidores de las serina/treonina cinasas incluyen bloqueadores de la cascada de cinasa MAP, que incluyen bloqueadores de cinasas Raf (rafk), cinasas reguladas por mitógeno o por señales extracelulares (MEK, por sus siglas en inglés) y cinasas reguladas por señales extracelulares (ERK, por sus siglas en inglés); y bloqueadores de los miembros de la familia de proteínas cinasas C, incluyendo bloqueadores de las PKC (alfa, beta, gamma, épsilon, mu, lambda, iota, zeta). La familia de las cinasas IkB (IKKa, IKKb), las cinasas de la familia PKB, los miembros de la familia de cinasas AKT y las cinasas receptoras de TGF beta. Dichas serina/treonina cinasas e inhibidores de las mismas se describen en Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A. y Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A. y Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; patente de Estados Unidos. n.° 6.268.391; y Martinez-lacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52.
Los inhibidores de los miembros de la familia de fosfatidil inositol-3 cinasa que incluyen bloqueadores de cinasa PI3, ATM, ADN-PK y Ku, también son útiles en la presente invención. Dichas cinasas se comentan en Abraham, T.A. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, DS (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; y Zhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545.
En la presente invención también son útiles los inhibidores de señalización del mioinositol, tales como los bloqueadores de fosfolipasa C y análogos de mioinositol. Dichos inhibidores de señalización se describen en Powis, G., y Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed., Paul Workman y David Kerr, CRC press 1994, Londres.
Otro grupo de inhibidores de las vías de transducción de señales son los inhibidores del oncogén Ras. Dichos inhibidores incluyen inhibidores de farnesiltransferasa, geranil-geranil transferasa y proteasas CAAX, así como oligonucleótidos antisentido, ribozimas y agentes inmunoterapéuticos. Se ha demostrado que dichos inhibidores bloquean la activación de ras en células que contienen ras mutante de tipo silvestre, actuando así como agentes antiproliferativos. La inhibición del oncogén Ras se comenta en Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion en Lipidology. 9 (2) 99 - 102; y Bennett, C.F. y Cowsert, L.M. BioChim. Biophys. Acta, (1999) 1489( 1):19-30.
Como se menciona anteriormente, los antagonistas de anticuerpos contra la unión al ligando de cinasas receptoras también pueden servir como inhibidores de la transducción de señales. Este grupo de inhibidores de las vías de transducción de señales incluyen el uso de anticuerpos humanizados contra el dominio de unión a ligando extracelular de tirosina cinasas receptoras. Por ejemplo, el anticuerpo C225 de Imclone específico contra EGFR (véase Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286); el anticuerpo Herceptin® contra erbB2 (véase Tyrosine Kinase Signalling en Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183); y el anticuerpo 2CB específico contra VEGFR2, (véase Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124).
Los inhibidores de la angiogénesis de las cinasas no receptoras también pueden ser de utilidad en la presente invención. Los inhibidores de la angiogénesis relacionados con VEGFR y TIE2 se analizan anteriormente con respecto a los inhibidores de la transducción de señales (ambos receptores son tirosina cinasas receptoras). La angiogénesis en general está relacionada con la señalización de erbB2/EGFR ya que se ha demostrado que los inhibidores de erbB2 y EGFR inhiben la angiogénesis, principalmente la expresión de VEGF. Por tanto, la combinación de un inhibidor de erbB2/EGFR con un inhibidor de la angiogénesis tiene sentido. Por consiguiente, los inhibidores de tirosina cinasas no receptoras pueden usarse en combinación con los inhibidores de EGFR/erbB2 de la presente invención. Por ejemplo, los anticuerpos anti-VEGF, que no reconocen VEGFR (la tirosina cinasa receptora), pero se unen al ligando; los inhibidores de integrina de molécula pequeña (alfav beta3) que inhibirán la angiogénesis; la endostatina y angiostatina (no RTK) también pueden demostrarse útiles junto con los inhibidores de la familia erb divulgados. (Véanse Bruns CJ et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935; Schreiber AB, Winkler ME y Derynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253; Yen L et al. (2000), Oncogene 19: 3460-3469).
Pazopanib, que está disponible en el mercado como VOTRIENT®, es un inhibidor de tirosina cinasas (TKI, por sus siglas en inglés). Pazopanib se presenta como la sal clorhidrato, con el nombre químico 5-[[4-[(2,3-dimetil-2H-indazol-6-il)metilamino]-2-pirimidinil]amino]-2-metilbencenosulfonamida monoclorhidrato. Pazoponib está aprobado para el tratamiento de pacientes con carcinoma de células renales avanzado.
Bevacisumab, disponible en el mercado como AVASTIN®, es un anticuerpo monoclonal humanizado que bloquea VEGF-A. AVASTIN® está aprobado para el tratamiento de diversos tipos de cáncer, incluido el colorrectal, de pulmón, de mama, de riñón y glioblastomas.
Rituximab es un anticuerpo monoclonal quimérico que se vende como RITUXAN® y MABTHERA®. Rituximab se une a CD20 en los linfocitos B y provoca la apoptosis celular. Rituximab se administra por vía intravenosa y está aprobado para el tratamiento de la artritis reumatoide y el linfoma no Hodgkiniano de linfocitos B.
Ofatumumab es un anticuerpo monoclonal completamente humano que se vende como ARZERRA®. Ofatumumab se une a CD20 en los linfocitos B y se usa para tratar la leucemia linfocítica crónica CLL (por sus siglas en inglés); un tipo de cáncer de los glóbulos blancos) en adultos que son resistentes al tratamiento con fludarabina (Fludara) y alemtuzumab Campath).
Trastuzumab (HEREPTIN®) es un anticuerpo monoclonal humanizado que se une al receptor HER2. Su indicación original es el cáncer de mama HER2 positivo. Trastuzumab emtansina (nombre comercial Kadcyla) es un conjugado de anticuerpo y fármaco que consiste en el anticuerpo monoclonal trastuzumab (Herceptin) unido al agente citotóxico DM1. Trastuzumab solo detiene el crecimiento de las células cancerosas al unirse al receptor HER2/neu, mientras que DM1 ingresa a las células y las destruye uniéndose a la tubulina. Debido a que el anticuerpo monoclonal se dirige a HER2, y HER2 solo se sobreexpresa en las células cancerosas, el conjugado suministra la toxina específicamente a las células tumorales.8 El conjugado se abrevia T-DM1.
Cetuximab (ERBITUX®) es un anticuerpo humano quimérico de ratón que inhibe el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR).
Los inhibidores de mTOR incluyen, pero sin limitación, rapamicina (FK506) y rapálogos, RAD001 o everolimus (Afinitor), CCI-779 o temsirolimus, AP23573, AZD8055, WYE-354, WYE-600, WYE-687 y Pp121.
Everolimus se vende como Afinitor® por Novartis y es el derivado 40-O-(2-hidroxietilo) de sirolimus y funciona de manera similar a sirolimus como un inhibidor de mTOR (diana de rapamicina en mamíferos). Actualmente se utiliza como inmunosupresor para evita el rechazo de trasplantes de órganos y el tratamiento del cáncer de células renales. También se han realizado muchas investigaciones sobre everolimus y otros inhibidores de mTOR para su uso en varios tipos de cáncer. Tiene la siguiente estructura química (fórmula II) y nombre químico:
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dihidroxi-12-[(2fí)-1-[(1 S,3fí,4fí)-4-(2-hidroxietoxi)-3-metoxiciclohexil]propan-2-il]-19,30-dimetoxi-15,17,21,23,29,35-hexametil-11,36-dioxa-4-azatriciclo [30.3.1.04’9]hexatriaconta-16,24,26,28-tetraeno-2,3,10,14,20-pentona.
El bexaroteno se vende como Targretin® y es miembro de una subclase de retinoides que activan selectivamente los receptores de retinoides X (RXR, por sus siglas en inglés). Estos receptores de retinoides tienen una actividad biológica distinta de la de los receptores de ácido retinoico (RAR, por sus siglas en inglés). El nombre químico es ácido 4-[1-(5,6,7,8-tetrahidro-3,5,5,8,8-pentametil-2-naftalenil)etenil] benzoico. El bexaroteno se usa para tratar el linfoma cutáneo de linfocitos T (CTCL, por sus siglas en inglés, un tipo de cáncer de piel) en personas cuya enfermedad no pudo tratarse con éxito con al menos otro medicamento.
El sorafenib comercializado como Nexavar® pertenece a una clase de medicamentos llamados inhibidores multicinasas. Su nombre químico es 4-[4-[[4-cloro-3-(trifluorometil)fenil]carbamoilamino]fenoxi]-W-metil-piridina-2-carboxamida. Sorafenib se usa para tratar el carcinoma de células renales avanzado (un tipo de cáncer que comienza en los riñones). Sorafenib también se usa para tratar el carcinoma hepatocelular irresecable (un tipo de cáncer de hígado que no se puede tratar con cirugía).
También pueden ser útiles en combinación con los compuestos de fórmula (I) los agentes utilizados en regímenes inmunoterapéuticos. Hay una serie de estrategias inmunológicas para generar una respuesta inmunitaria contra erbB2 o EGFR. Estas estrategias están generalmente en el ámbito de las vacunas contra tumores. La eficacia de los enfoques inmunológicos se puede potenciar en gran medida mediante la inhibición combinada de las vías de señalización de erbB2/EGFR utilizando un inhibidor de molécula pequeña. El análisis sobre el enfoque de la vacuna inmunológica/tumoral contra erbB2/EGFR se encuentra en Reilly Rt et al. (2000), Cancer Res. 60: 3569-3576; y Chen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J y Kipps TJ. (1998), Cancer Res. 58: 1965-1971.
Ejemplos de inhibidores de erbB incluyen lapatinib, erlotinib y gefitinib. Lapatinib, W-(3-cloro-4-{[(3-fluorofenil)metil]oxi}fenil)-6-[5-({[2-(metilsulfonil)etil]amino}metil)-2-furanil]-4-quinazolinamina ( representado por la Fórmula III, como se ilustra), es un potente inhibidor doble, oral, de molécula pequeña, de las tirosina cinasas erbB-1 y erbB-2 (EGFR y HER2) que está aprobado en combinación con capecitabina para el tratamiento del cáncer de mama metastásico HER2 positivo.
La base libre, las sales de HCl y las sales de ditosilato del compuesto de fórmula (III) se pueden preparar según los procedimientos descritos en el documento WO 99/35146, publicado el 15 de julio de 1999; y el documento WO 02/02552 publicado el 10 de enero de 2002.
Erlotinib, W-(3-etinilfenil)-6,7-bis{[2-(metiloxi)etil]oxi}-4-quinazolinamina disponible en el mercado con el nombre comercial Tarceva está representado por la fórmula IV, como se ilustra:
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La base libre y la sal de HCl de erlotinib se pueden preparar, por ejemplo, según el documento US 5.747.498, Ejemplo 20.
Gefitinib, 4-quinazolinamina, N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-[3-4-morfolin)propoxi] está representado por la fórmula V, como se ilustra:
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Gefitinib, que está disponible en el mercado con el nombre comercial IRESSA® (Astra-Zeneca) es un inhibidor de erbB-1 que está indicado como monoterapia para el tratamiento de pacientes con cáncer de pulmón no microcítico localmente avanzado o metastásico después de no haber respondido a quimioterapias tanto basadas en platino como con docetaxel. La base libre, las sales de HCl y las sales de diHCl de gefitinib se pueden preparar según los procedimientos de la solicitud de patente internacional N.° PCT/GB96/00961, presentada el 23 de abril de 1996, y publicada como el documento WO 96/33980 el 31 de octubre de 1996.
Trastuzumab (HEREPTIN®) es un anticuerpo monoclonal humanizado que se une al receptor HER2. Su indicación original es el cáncer de mama HER2 positivo.
Cetuximab (ERBITUX®) es un anticuerpo humano quimérico de ratón que inhibe el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR).
Pertuzumab (también llamado 2C4, nombre comercial Omnitarg) es un anticuerpo monoclonal. El primero de su clase en una línea de agentes llamados "inhibidores de la dimerización de HER". Al unirse a HER2, inhibe la dimerización de HER2 con otros receptores HER, que se supone que da como resultado un crecimiento tumoral más lento. Pertuzumab se describe en el documento WO01/00245 publicado el 4 de enero de 2001.
Rituximab es un anticuerpo monoclonal quimérico que se vende como RITUXAN® y MABTHERA®. Rituximab se une a CD20 en los linfocitos B y provoca la apoptosis celular. Rituximab se administra por vía intravenosa y está aprobado para el tratamiento de la artritis reumatoide y el linfoma no Hodgkiniano de linfocitos B.
Ofatumumab es un anticuerpo monoclonal completamente humano que se vende como ARZERRA®. Ofatumumab se une a CD20 en los linfocitos B y se usa para tratar la leucemia linfocítica crónica (CLL; un tipo de cáncer de los glóbulos blancos) en adultos que son resistentes al tratamiento con fludarabina (Fludara) y alemtuzumab (Campath).
En la combinación de la presente invención también pueden utilizarse agentes que se utilizan en regímenes proapoptóticos (por ejemplo, oligonucleótidos antisentido bcl-2). Los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 bloquean la apoptosis. Por lo tanto, el aumento de bcl-2 se ha relacionado con la quimiorresistencia. Los estudios han demostrado que el factor de crecimiento epidérmico (EGF) estimula a los miembros antiapoptóticos de la familia bcl-2 (es decir, mcl-1). Por lo tanto, las estrategias diseñadas para reducir la expresión de bcl-2 en tumores han demostrado un beneficio clínico y ahora se encuentran en ensayos de fase II/IN, en concreto, el oligonucleótido antisentido G3139 de bcl-2 de Genta. Dichas estrategias proapoptóticas que utilizan la estrategia de oligonucleótidos antisentido para bcl-2 se comentan en Water JS et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823; y Kitada S et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79.
Los inhibidores de señalización del ciclo celular inhiben moléculas implicadas en el control del ciclo celular. Una familia de proteína cinasas denominada cinasas dependientes de ciclina (CDK, por sus siglas en inglés) y su interacción con una familia de proteínas denominadas ciclinas, controla la progresión a través del ciclo celular eucariota. La activación e inactivación coordinadas de diferentes complejos de ciclina/CDK son necesarias para la progresión normal a través del ciclo celular. Actualmente están en desarrollo varios inhibidores de señalización del ciclo celular. Por ejemplo, los ejemplos de cinasas dependientes de ciclina, que incluyen CDK2, CDK4, y CDK6 y los inhibidores de las mismas se describen en, por ejemplo, Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230.
Como se usa en el presente documento, "inmunomoduladores" se refiere a cualquier sustancia que incluya anticuerpos monoclonales que afecten al sistema inmunitario. Los anticuerpos para PD-1 de la presente invención pueden considerarse inmunomoduladores. Los inmunomoduladores pueden usarse como agentes antineoplásicos para el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, los inmunomoduladores incluyen, pero sin limitación, anticuerpos anti-CTLA-4 tal como ipilimumab (YERVOY®) y anticuerpos anti-PD-1 (Opdivo/nivolumab y Keytruda/pembrolizumab). Otros inmunomoduladores incluyen, pero sin limitación, anticuerpos para OX-40, anticuerpos para PD-L1, anticuerpos para LAG3, anticuerpos para TIM-3, anticuerpos para 41BB y anticuerpos para GITR.
YERVOY® (ipilimumab) es un anticuerpo para CTLA-4 totalmente humano comercializado por Bristol Myers Squibb. La estructura proteica de ipilimumab y los métodos que se utilizan se describen en las patentes de Estados Unidos números 6.984.720 y 7.605.238.
OPDIVO®/nivolumab es un anticuerpo monoclonal totalmente humano comercializado por Bristol Myers Squibb dirigido contra el receptor de superficie celular humano inmunorregulador negativo PD-1 (muerte programada-1 o muerte celular programada-1/PCD-1) con actividad de inmunopotenciación. Nivolumab se une y bloquea la activación de PD-1, una proteína transmembrana de la superfamilia Ig, por sus ligandos PD-L1 y PD-L2, dando como resultado la activación de linfocitos T y respuestas inmunitarias mediadas por células contra células tumorales o patógenos. La PD-1 activada regula negativamente la activación y la función efectora de los linfocitos T a través de la supresión de la activación de la vía P13k/Akt. Otros nombres para nivolumab incluyen: BMS-936558, MDX-1106 y OnO-4538. La secuencia de aminoácidos para nivolumab y los métodos de uso y preparación se divulgan en la patente de Estados Unidos N.° US 8.008.449.
KEYTRUDA®/pembrolizumab es un anticuerpo anti-PD-1 comercializado por Merck para el tratamiento del cáncer de pulmón. La secuencia de aminoácidos de pembrolizumab y los métodos de uso se divulgan en la patente de Estados Unidos n.° 8.168.757.
CD134, también conocido como OX40, es un miembro de la superfamilia de receptores TNFR que no se expresa constitutivamente en los linfocitos T vírgenes en reposo, a diferencia de CD28. OX40 es una molécula coestimuladora secundaria, expresada después de 24 a 72 horas tras la activación; su ligando, OX40L, tampoco se expresa en células presentadoras de antígenos en reposo, pero sí tras su activación. La expresión de OX40 depende de la activación completa del linfocito T ; sin CD28, la expresión de OX40 está retardada y a niveles cuatro veces más bajos. Los anticuerpos para OX-40, las proteínas de fusión para OX-40 y los métodos para usarlos se divulgan en las patentes de Estados Unidos números US 7.504.101; US 7758852; US 7858765; US 7550140; US 7960515; WO2012027328; WO2013028231.
Los anticuerpos contra PD-L1 (también denominados CD274 o B7-H1) y los métodos de uso se divulgan en la patente de Estados Unidos N.° 7.943.743; la patente de los Estados Unidos n.° 8.383.796; el documento US20130034559, el documento WO2014055897, la patente de Estados Unidos n.° 8.168.179; y la patente de Estados Unidos n.° 7.595.048. Los anticuerpos para PD-L1 están en desarrollo como agentes inmunomoduladores para el tratamiento del cáncer.
En otra realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer en un mamífero que lo necesite, que comprenden: administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de
a) una combinación de la presente invención; y
b) al menos un agente antineoplásico.
En otra realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer en un mamífero que lo necesite, que comprenden: administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de
a) una combinación de la presente invención; y
b) al menos un inmunomodulador.
En una realización, se proporcionan métodos para tratar cáncer en un ser humano que lo necesita, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de la presente invención, en donde la combinación comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD-1 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a OX-40.
En la realización, se puede emplear la combinación de la invención con otros métodos terapéuticos de tratamiento del cáncer. En particular, en la terapia antineoplásica, se prevén terapia de combinación con otros agentes quimioterapéuticos, hormonales, de anticuerpos así como tratamientos quirúrgicos y/o de radiación distintos de los mencionados anteriormente.
En una realización, la terapia adicional contra el cáncer es quirúrgica y/o radioterapia.
En una realización, la terapia adicional contra el cáncer es al menos un agente antineoplásico adicional.
Cualquier agente antineoplásico que tenga actividad frente a un tumor susceptible de tratarse, puede utilizarse en la combinación. Los agentes antineoplásicos habituales útiles incluyen, pero sin limitación, agentes antimicrotúbulos tales como los diterpenoides y los alcaloides de la vinca; complejos de coordinación de platino; agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureas y triazenos; agentes antimitóticos tales como antraciclinas, actinomicinas y bleomicinas; inhibidores de topoisomerasa II, tales como epipodofilotoxinas; antimetabolitos tales como análogos de purina y pirimidina, y compuestos antifolato; inhibidores de la topoisomerasa I, tales como camptotecinas; hormonas y análogos de hormonas; inhibidores de las rutas de transducción de señales; inhibidores de la angiogénesis de tirosinas no receptoras; agentes inmunoterapéuticos; agentes proapoptóticos; e inhibidores de la señalización del ciclo celular.
En una realización, la combinación de la presente invención comprende un anticuerpo anti-BCMA y un anticuerpo para PD-1 y al menos un agente antineoplásico seleccionado de agentes antimicrotúbulos, complejos de coordinación de platino, agentes alquilantes, agentes antibióticos, inhibidores de topoisomerasa II, antimetabolitos, inhibidores de topoisomerasa I, hormonas y análogos de hormonas, inhibidores de vías de transducción de señales, inhibidores de angiogénesis MEK de tirosinas no receptoras, agentes inmunoterapéuticos, agentes proapoptóticos e inhibidores de la señalización del ciclo celular.
En una realización, la combinación de la presente invención comprende un anticuerpo anti-BCMA y un anticuerpo para PD-1 y al menos un agente antineoplásico que es un agente antimicrotúbulos seleccionado entre diterpenoides y alcaloides de la vinca.
En una realización adicional, al menos un agente antineoplásico es un diterpenoide.
En una realización adicional, al menos un agente antineoplásico es un alcaloide de la vinca.
En una realización, la combinación de la presente invención comprende un anticuerpo anti-BCMA y un anticuerpo para PD-1 y al menos un agente antineoplásico, que es un complejo de coordinación de platino.
En una realización adicional, al menos un agente antineoplásico es paclitaxel, carboplatino o vinorrelbina.
En una realización adicional, al menos un agente antineoplásico es carboplatino.
En una realización adicional, el al menos un agente antineoplásico es vinorrelbina.
En una realización adicional, el al menos un agente antineoplásico es paclitaxel.
En una realización, la combinación de la presente invención comprende un anticuerpo anti-BCMA y un anticuerpo para PD-1 y al menos un agente antineoplásico que es un inhibidor de la vía de transducción de señales.
En una realización adicional, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una cinasa receptora del factor de crecimiento VEGFR2, TIE2, PDGFR, BTK, erbB2, EGFr, IGFR-1, TrkA, TrkB, TrkC o c-fms.
En una realización adicional, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una serina/treonina cinasa rafk, akt o PKC-zeta.
En una realización adicional, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una tirosina cinasa no receptora seleccionada de la familia src de cinasas.
En una realización adicional el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de c-src.
En una realización adicional el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor del oncogén Ras seleccionado de inhibidores de farnesil transferasa y geranilgeranil transferasa.
En una realización adicional, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una serina/treonina cinasa seleccionada del grupo que consiste en PI3K.
En una realización adicional, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor doble de EGFr/erbB2, por ejemplo N-{3-Cloro-4-[(3-fluorobencil)oxi]fenil}-6-[5-({[2-(metanosulfonil)etil] amino}metil)-2-furil]-4-quinazolinamina (de estructura mostrada a continuación):
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Definiciones
Como se usa en el presente documento, el término "agonista" se refiere a una proteína de unión a antígeno que incluye, pero sin limitación, un anticuerpo, que al entrar en contacto con un receptor de coseñalización provoca uno o más de los siguientes (1) estimula o activa el receptor, (2) potencia, aumenta o promueve, induce o prolonga una actividad, la función o presencia del receptor (3) imita una o más funciones de un ligando o molécula natural que interactúa con una diana o receptor e incluye iniciar uno o más eventos de señalización a través del receptor, imitar una o más funciones de un ligando natural, o iniciar uno o más cambios conformacionales parciales o completos que se observan en el funcionamiento conocido o la señalización a través del receptor y/o (4) potencia, aumenta, promueve o induce la expresión del receptor. La actividad agonista se puede medir in vitro mediante varios ensayos conocidos en la técnica tales como, pero sin limitación, medición de la señalización celular, proliferación celular, marcadores de activación de células inmunitarias, producción de citocinas. La actividad agonista también se puede medir in vivo mediante varios ensayos que miden criterios de valoración sustitutos tales como, pero sin limitación, la medición de la proliferación de linfocitos T o la producción de citocinas.
Como se usa en el presente documento, el término "antagonista" se refiere a una proteína de unión a antígeno que incluye, pero sin limitación, un anticuerpo, que al entrar en contacto con un receptor de coseñalización provoca uno o más de los siguientes (1) atenúa, bloquea o inactiva el receptor y/o bloquea la activación de un receptor por su ligando natural, (2) reduce, disminuye o acorta la actividad, función o presencia del receptor y/o (3) reduce, disminuye, anula la expresión del receptor. La actividad antagonista se puede medir in vitro mediante varios ensayos conocidos en la técnica tales como, pero sin limitación, medición de un aumento o disminución en la señalización celular, proliferación celular, marcadores de activación de células inmunitarias, producción de citocinas. La actividad antagonista también se puede medir in vivo mediante varios ensayos que miden criterios de valoración sustitutos tales como, pero sin limitación, la medición de la proliferación de linfocitos T o la producción de citocinas.
Por tanto, como se usa en el presente documento, la expresión "combinación de la invención" se refiere a una combinación que comprende anticuerpos anti-BCMA adecuadamente antagonistas de anticuerpos anti-BCMA y anticuerpos para PD-1, adecuadamente un anticuerpo anti-PD-1 antagonista, pudiéndose administrar cada uno de dichos anticuerpos por separado o simultáneamente como se describe en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, los términos "cáncer", "neoplasia" y "tumor", se usan indistintamente y en forma singular o bien plural, se refieren a células que han experimentado una transformación maligna o que han experimentado cambios celulares que dan como resultado un crecimiento anómalo o no regulado o hiperproliferación. Dichos cambios o transformaciones malignas suelen hacer que dichas células sean patológicas para el organismo hospedador, por lo tanto, también se pretende incluir precánceres o células precancerosas que son o podrían volverse patológicas y requieren o podrían beneficiarse de una intervención. Las células cancerosas primarias (es decir, las células obtenidas cerca del sitio de transformación maligna) pueden distinguirse fácilmente de las células no cancerosas mediante técnicas bien establecidas, particularmente examen histológico. La definición de una célula cancerosa, como se usa en el presente documento, incluye no solo una célula cancerosa primaria, sino cualquier célula derivada de un ancestro de células cancerosas. Esto incluye células cancerosas metastatizadas y cultivos in vitro y líneas celulares procedentes de células cancerosas. Al referirse a un tipo de cáncer que normalmente se manifiesta como un tumor sólido, un tumor "clínicamente detectable" es uno que es detectable basándose en la masa tumoral; p. ej., mediante procedimientos tales como exploración CAT, formación de imágenes por MR, rayos X, ultrasonido o palpación, y/o que sea detectable debido a la expresión de uno o más antígenos específicos del cáncer en una muestra obtenible de un paciente. En otras palabras, los términos en el presente documento incluidos incluyen células, neoplasias, cánceres y tumores de cualquier estadio, incluyendo lo que un médico llama precáncer, tumores, crecimientos in situ, así como crecimientos metastásicos en estadio tardío, Los tumores pueden ser tumores hematopoyéticos, por ejemplo, tumores de células sanguíneas o similares, lo que significa tumores líquidos. Los ejemplos específicos de condiciones clínicas basadas en un tumor de este tipo incluyen leucemia tal como leucemia mielocítica crónica o leucemia mielocítica aguda; mieloma tal como mieloma múltiple; linfoma y similares.
Como se usa en el presente documento, se entiende que el término "agente" significa una sustancia que produce un efecto deseado en un tejido, sistema, animal, mamífero, ser humano u otro sujeto. Por consiguiente, la expresión "agente antineoplásico" se entiende como una sustancia que produce un efecto antineoplásico en un tejido, sistema, animal, mamífero, ser humano u otro sujeto. También debe entenderse que un "agente" puede ser un solo compuesto o una combinación o composición de dos o más compuestos.
Por el término "tratar" y derivados del mismo como se usa en el presente documento, se entiende tratamiento terapéutico. En referencia a una afección particular, tratar significa: (1) mejorar la afección o una o más de las manifestaciones biológicas de la afección; (2) interferir con (a) uno o más puntos de la cascada biológica que conduce a o es responsable de la afección o (b) una o más de las manifestaciones biológicas de la afección; (3) aliviar uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con la afección o uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con la afección o tratamiento de la misma; (4) ralentizar la progresión de la afección o una o más de las manifestaciones biológicas de la afección y/o (5) curar dicha afección o una o más de las manifestaciones biológicas de la afección eliminando o reduciendo a niveles indetectables una o más de las manifestaciones biológicas de la afección durante un período de tiempo considerado como un estado de remisión para esa manifestación sin tratamiento adicional durante el período de remisión. Un experto en la materia entenderá la duración del tiempo que se considera remisión para una enfermedad o afección particular. De este modo también se contempla el tratamiento profiláctico. El experto en la técnica apreciará que "prevención" no es un término absoluto. En medicina, se entiende que "prevención" se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o la gravedad de una afección o manifestación biológica de la misma o para retardar la aparición de dicha afección o manifestación biológica de la misma. El tratamiento profiláctico es apropiado, por ejemplo, cuando se considera que un sujeto tiene un alto riesgo de padecer cáncer, tal como cuando un sujeto tiene un fuerte historial familiar de cáncer o cuando un sujeto ha estado expuesto a un carcinógeno.
Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" significa aquella cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que se busca, por ejemplo, por un investigador o médico. Asimismo, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, da como resultado una mejora en el tratamiento, curación, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. La expresión también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para potenciar la función fisiológica normal.
"Proteína de unión a antígeno" significa una proteína que se une a un antígeno, incluyendo anticuerpos o moléculas modificadas por ingeniería que funcionan de manera similar a los anticuerpos. Dichos formatos de anticuerpos alternativos incluyen un triacuerpo, tetracuerpo, minianticuerpo, y un minicuerpo, También se incluyen armazones alternativos en los que una o más CDR de cualquier molécula según la divulgación pueden disponerse en un armazón o esqueleto de proteína que no es inmunoglobulina adecuado, tal como un aficuerpo, un armazón SpA, dominio del receptor de LDL de clase A, un avímero (véase, p. ej., las publicaciones de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301) o un dominio EGF. Una ABP también incluye fragmentos de unión a antígeno de dichos anticuerpos u otras moléculas. Asimismo, una ABP de una combinación de la invención, o un método o uso de la misma, puede comprender las regiones VH formateadas en un anticuerpo de longitud completa, un fragmento (Fab')2, un fragmento Fab, una molécula biespecífica o biparatópica o equivalente de la misma (tal como scFV, bi-tri- o tetracuerpos, Tandabs, etc.), cuando se combinan con una cadena ligera adecuada. La proteína de unión a antígeno puede comprender un anticuerpo que es una IgG 1, IgG2, IgG3 o IgG4; o IgM; IgA, IgE o IgD o una variante modificada de las mismas. El dominio constante de la cadena pesada del anticuerpo se puede seleccionar en consecuencia. El dominio constante de cadena ligera puede ser un dominio constante kappa o lambda. La ABP también puede ser un anticuerpo quimérico del tipo descrito en el documento WO86/01533 que comprende una región de unión a antígeno y una región que no es de inmunoglobulina.
Una proteína de unión a antígeno también puede ser un receptor de antígenos quimérico. La expresión "receptores de antígenos quiméricos" ("CAR", por sus siglas en inglés) como se usa en el presente documento, se refiere a un receptor modificado por ingeniería que consiste en un dominio de unión a la diana extracelular (que generalmente procede de un anticuerpo monoclonal), una región espaciadora, una región transmembrana y uno o más dominios efectores intracelulares. Los CAR también se han denominado receptores de linfocitos T quiméricos o inmunorreceptores quiméricos (CIR, por sus siglas en inglés). Los CAR se introducen genéticamente en las células hematopoyéticas, tales como linfocitos T, para redirigir la especificidad por un antígeno de superficie celular deseado.
Los receptores de antígenos quiméricos (CAR) se han desarrollado como TCR artificiales para generar especificidades novedosas en los linfocitos T sin necesidad de unirse a complejos de péptido antigénico-MHC. Estos receptores sintéticos contienen un dominio de unión a la diana que está asociado con uno o más dominios de señalización a través de un enlazador flexible en una sola molécula de fusión. El dominio de unión a la diana se usa para dirigir el linfocito T a dianas específicas en la superficie de las células patológicas y los dominios de señalización contienen maquinaria molecular para la activación y proliferación de linfocitos T. El enlazador flexible que atraviesa la membrana del linfocito T (es decir, formando un dominio transmembrana) permite la visualización en la membrana celular del dominio de unión a la diana del CAR. Los CAR han permitido con éxito que los linfocitos T se redirijan contra antígenos expresados en la superficie de células tumorales de diversas neoplasias malignas, incluyendo linfomas y tumores sólidos (Jena et al. (2010) Blood, 116(7):1035-44).
El desarrollo de los CAR ha abarcado tres generaciones hasta el momento. Los CAR de primera generación comprendían dominios de unión a diana fijados a un dominio de señalización procedente de la región citoplásmica de las cadenas gamma del receptor Fc o CD3zeta. Se demostró que los CAR de primera generación redirigen con éxito los linfocitos T a la diana seleccionada, sin embargo, no consiguieron proporcionar expansión prolongada y actividad antitumoral in vivo. Los CAR de segunda y tercera generación se han centrado en potenciar la supervivencia de los linfocitos T modificados y aumentar la proliferación al incluir moléculas coestimuladoras, tales como CD28, OX-40 (CD134) y 4-1BB (CD137).
Los linfocitos T que portan CAR podrían usarse para eliminar células patológicas en un entorno de enfermedad. Un objetivo clínico sería transformar células de pacientes con ADN recombinante que contenga una construcción de expresión para el CAR a través de un vector (por ejemplo, un vector lentivírico) después de la aféresis y el aislamiento de linfocitos T. Después de la expansión de los linfocitos T, se vuelven a introducir en el paciente con el objetivo de dirigirse y destruir las células diana patológicas.
El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, se refiere a moléculas con un dominio de unión a antígeno y, opcionalmente, un dominio similar a inmunoglobulina o un fragmento del mismo, e incluye anticuerpos monoclonales (por ejemplo, IgG, IgM, IgA, IgD o IgE y sus variantes modificadas), recombinantes, policlonales, quiméricos, humanizados, biparatópicos, biespecíficos y heteroconjugados, o un anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada. Un "anticuerpo" incluye xenogénico, alogénico, singénico u otras formas modificadas de los mismos. Un anticuerpo puede aislarse o purificarse. Un anticuerpo también puede ser recombinante, es decir, producirse por medios recombinantes; por ejemplo, un anticuerpo que es 90 % idéntico a un anticuerpo de referencia puede generarse mediante mutagénesis de determinados restos utilizando técnicas de biología molecular recombinante conocidas en la técnica. Por tanto, los anticuerpos de la presente invención pueden comprender regiones variables de cadena pesada y regiones variables de cadena ligera de una combinación de la invención, o un método o uso de la misma, que puede formatearse en la estructura de un anticuerpo natural o formatearse en un anticuerpo recombinante de longitud completa, un fragmento (Fab')2, un fragmento Fab, una molécula biespecífica o biparatópica o equivalente de la misma (tal como scFV, bi-tri- o tetracuerpos, Tandabs, etc.), cuando se combinan con una cadena ligera adecuada. El anticuerpo puede ser una IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 o una variante modificada de las mismas. El dominio constante de la cadena pesada del anticuerpo se puede seleccionar en consecuencia. El dominio constante de cadena ligera puede ser un dominio constante kappa o lambda. El anticuerpo también puede ser un anticuerpo quimérico del tipo descrito en el documento WO86/01533 que comprende una región de unión a antígeno y una región que no es de inmunoglobulina.
Un experto en la materia reconocerá que los anticuerpos de la invención se unen a un epítopo en sus dianas. El epítopo de los anticuerpos es la región de su antígeno a la que se unen los anticuerpos. Dos anticuerpos se unen al mismo epítopo o a epítopos solapantes si cada uno inhibe (bloquea) de manera competitiva la unión del otro al antígeno. Es decir, un exceso 1 x, 5x, 10x, 20x o 100x de un anticuerpo inhibe la unión del otro en al menos un 50 %, pero preferentemente en un 75 %, 90 % o incluso el 99 % tal como se mide en un ensayo de unión competitiva en comparación con un control que carece del anticuerpo competitivo (véase, p. ej., Junghans et al., Cancer Res.50:1495, 1990). Como alternativa, dos anticuerpos tienen el mismo epítopo si esencialmente todas las mutaciones de aminoácido en el antígeno que reducen o eliminan la unión de un anticuerpo reducen o eliminan la unión del otro. Además, el mismo epítopo puede incluir "epítopos solapantes", por ejemplo, si algunas mutaciones de aminoácidos que reducen o eliminan la unión de un anticuerpo reducen o eliminan la unión del otro.
La fuerza de unión puede ser importante en la dosificación y administración de un anticuerpo de la combinación, o método o uso del mismo, de la invención. En una realización, los anticuerpos de la invención se unen a su diana (por ejemplo, BCMA o PD-1) con alta afinidad. La afinidad es la fuerza de unión de una molécula, por ejemplo, un anticuerpo de una combinación de la invención, o un método o uso del mismo, a otro, por ejemplo, su antígeno diana, en un único sitio de unión. La afinidad de unión de un anticuerpo a su diana puede determinarse mediante métodos de equilibrio (por ejemplo, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) o radioinmunoensayo (RIA)) o cinéticos (por ejemplo, análisis BIACORE). Por ejemplo, los métodos Biacore conocidos en la técnica pueden usarse para medir la afinidad de unión.
La avidez es la suma total de la fuerza de unión de dos moléculas entre sí en múltiples sitios, por ejemplo, teniendo en cuenta la valencia de la interacción.
Se contemplan, en el presente documento, fragmentos funcionales de los anticuerpos de una combinación de la invención, o un método o uso de los mismos.
Por tanto, los "fragmentos de unión" y "fragmentos funcionales" pueden ser fragmentos Fab y F(ab')2 que carecen del fragmento Fc de un anticuerpo inalterado, se eliminan más rápidamente de la circulación, y pueden tener una unión de tejido menos inespecífica que un anticuerpo inalterado ((Wahl et al., J. Nuc. Med. 24:316-325 (1983)). También se incluyen fragmentos Fv (Hochman, J. et al. (1973) Biochemistry 12:1130-1135; Sharon, J. et al.(1976) Biochemistry 15:1591-1594). Estos diversos fragmentos se producen utilizando técnicas convencionales como la escisión con proteasas o la escisión química (véase, p. ej., Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121:663-69 (1986)).
"Fragmentos funcionales", como se usa en el presente documento, significa una porción o fragmento de los anticuerpos de una combinación de la invención, o un método o uso de los mismos, que incluyen el sitio de unión a antígeno y son capaces de unirse a la misma diana que los anticuerpos originales, por ejemplo, pero sin limitación, unirse al mismo epítopo, y que también conservan una o más funciones de modulación u otras descritas en el presente documento o conocidas en la técnica.
Como los anticuerpos de la presente invención pueden comprender regiones variables de cadena pesada y regiones variables de cadena ligera de una combinación de la invención, o un método o uso de las mismas, que pueden formatearse en la estructura de un anticuerpo natural, un fragmento funcional es uno que conserva la unión o una o más funciones de los anticuerpos de longitud completa como se describe en el presente documento. Un fragmento de unión de anticuerpos de una combinación de la invención, o un método o uso del mismo, por lo tanto, puede comprender las regiones VL o VH, un fragmento (Fab')2, un fragmento Fab, un fragmento de una molécula biespecífica o biparatópica o equivalente de la misma (tal como scFV, bi-tri- o tetracuerpos, Tandabs, etc.), cuando se combinan con una cadena ligera adecuada.
El término "CDR" como se usa en el presente documento, se refiere a las secuencias de aminoácidos de la región determinante de la complementariedad de un anticuerpo. Estas son las regiones hipervariables de las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina. Hay tres CDR (o regiones CDR) de cadena pesada y tres de cadena ligera en la porción variable de una inmunoglobulina.
Será evidente para los expertos en la materia que existen varias convenciones de numeración para las secuencias de CDR; Chothia (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883), Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4a Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM (University of Bath) y Contact (University College London). La región de solapamiento mínima que usa al menos dos de los métodos Kabat, Chothia, AbM y contact puede determinarse para proporcionar la "unidad de unión mínima". La unidad de unión mínima puede ser una subporción de una CDR. La estructura y el plegamiento de proteína del anticuerpo pueden significar que otros restos se consideran parte de la secuencia de CDR y así lo comprendería un experto. Obsérvese que algunas de las definiciones de CDR pueden variar dependiendo de la publicación individual utilizada.
A menos que se indique lo contrario y/o en ausencia de una secuencia específicamente identificada, referencias en el presente documento a "CDR", "CDRL1" (o "LC CDR1"), "CDRL2" (o "LC CDR2"), "CDRL3" (o "LC CDR3"), "CDRH1" (o "HC CDR1"), "CDRH2" (o "HC Cd R2"), "CDRH3" (o "HC CDR3") se refieren a secuencias de aminoácidos numeradas según cualquiera de las convenciones conocidas; como alternativa, las CDR se denominan "CDR1", "CDR2", "CDR3" de la cadena ligera variable y "CDR1", "CDR2", y "CDR3" de la cadena pesada variable. En realizaciones particulares, la convención de numeración es la convención de Kabat.
El término "variante", como se usa en el presente documento, se refiere a una región variable de cadena pesada o una región variable de cadena ligera que se ha modificado con al menos una, por ejemplo, 1, 2 o 3, sustituciones, eliminaciones o adiciones de aminoácidos, en donde los anticuerpos modificados que comprenden la variante de cadena pesada o de cadena ligera conservan sustancialmente las características biológicas de la modificación previa de los anticuerpos. En una realización, los anticuerpos que contienen una región variable de cadena pesada o una región variable de cadena ligera variantes conservan el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 % de características biológicas de los anticuerpos antes de la modificación. Se apreciará que cada región variable de cadena pesada o región variable de cadena ligera puede modificarse sola o en combinación con otra región variable de cadena pesada o región variable de cadena ligera. Los anticuerpos de la divulgación incluyen secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada que son un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % homólogas a las secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada descritas en el presente documento. Los anticuerpos de la divulgación incluyen secuencias de aminoácidos de región variable de cadena ligera que son un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % homólogas a las secuencias de aminoácidos de región variable de cadena ligera descritas en el presente documento.
El porcentaje de homología puede ser sobre toda la región variable de cadena pesada y/o toda la región variable de cadena ligera o el porcentaje de homología puede limitarse a las regiones marco, mientras que las secuencias que corresponden a las CDR tienen una identidad del 100 % con las CDR divulgadas en el presente documento dentro de la región variable de cadena pesada y/o la región variable de cadena ligera.
La expresión "variante de CDR" como se usa en el presente documento, se refiere a una CDR que se ha modificado con al menos una, por ejemplo, 1, 2 o 3, sustituciones, eliminaciones o adiciones de aminoácidos, en donde los anticuerpos modificados que comprenden la variante de CDR conservan sustancialmente las características biológicas de los anticuerpos antes de la modificación. En una realización, los anticuerpos que contienen una CDR variante conservan el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 % de características biológicas de los anticuerpos antes de la modificación. Se apreciará que cada CDR que puede modificarse puede modificarse sola o en combinación con otra CDR. En una realización, la modificación es una sustitución, particularmente una sustitución conservativa, por ejemplo, como se muestra en la tabla 1.
Tabla 1
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Por ejemplo, en una variante de CDR, los restos de aminoácidos de la unidad de unión mínima pueden permanecer iguales, pero los restos flanqueantes que comprenden la CDR como parte de las definiciones de Kabat o Chothia pueden sustituirse con un resto de aminoácido conservativo.
Dichos anticuerpos que comprenden CDR o unidades de unión mínimas modificadas como se describe anteriormente pueden denominarse en el presente documento "variantes de CDR funcionales" o "variantes de unidades de unión funcionales".
El anticuerpo puede ser de cualquier especie o modificarse para que sea adecuado para administrar a una especie distinta. Por ejemplo, las CDR de un anticuerpo de ratón pueden humanizarse para su administración a seres humanos. En cualquier realización, el anticuerpo es opcionalmente un anticuerpo humanizado.
Un "anticuerpo humanizado" se refiere a un tipo de anticuerpo modificado por ingeniería que tiene sus CDR procedentes de una inmunoglobulina donante no humana, siendo las restantes partes procedentes de la inmunoglobulina de la molécula procedentes de una (o más) inmunoglobulina(s) humana(s). Además, los restos de soporte del marco pueden alterarse para conservar la afinidad de unión (véanse, p. ej., Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)). Un anticuerpo aceptor humano adecuado puede ser uno seleccionado de una base de datos convencional, p. ej., la base de datos KABAT®, base de datos Los Alamos y base de datos Swiss Protein, por homología con las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del anticuerpo donante. Un anticuerpo humano caracterizado por una homología con las regiones marco del anticuerpo donante (basándose en los aminoácidos) puede ser adecuado para proporcionar una región constante de cadena pesada y/o una región marco variable de cadena pesada para la inserción de las CDR donantes. Un anticuerpo aceptor adecuado capaz de donar regiones marco variables o constantes de cadena ligera puede seleccionarse de manera similar. Cabe señalar que no es necesario que las cadenas pesada y ligera del anticuerpo aceptor se originen a partir del mismo anticuerpo aceptor. La técnica anterior describe varias formas de producir dichos anticuerpos humanizados; véanse, por ejemplo, los documentos EP-A-0239400 y EP-A-054951.
En otra realización adicional más, el anticuerpo humanizado tiene una región constante de anticuerpo humano que es una IgG. En otra realización, la IgG es una secuencia como se divulga en cualquiera de las referencias o publicaciones de patentes anteriores.
"Función efectora mediada por FcyRIIIA potenciada" tal como se usa en el presente documento indica que la función efectora habitual de los anticuerpos se ha incrementado deliberadamente en comparación con sus niveles habituales. Esto puede realizarse mediante cualquier medio conocido en la técnica, por ejemplo, mediante mutaciones que aumenten la afinidad por la unión de FcYRIIIA o mediante la alteración de la glucosilación de los anticuerpos (por ejemplo, inactivar una fucosiltransferasa)
Para las secuencias de nucleótidos y aminoácidos, la expresión "idéntica" o "identidad de secuencia" indica el grado de identidad entre dos secuencias de ácido nucleico o dos secuencias de aminoácidos cuando se alinean de forma óptima y se comparan con inserciones o eliminaciones adecuadas.
El porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, % de identidad = número de posiciones idénticas/número total de posiciones multiplicado por 100), teniendo en cuenta el número de huecos y la longitud de cada hueco, que es necesario introducir para una alineación óptima de las dos secuencias. La comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias pueden conseguirse usando un algoritmo matemático, como se describe a continuación.
El porcentaje de identidad entre una secuencia de ácido nucleico de consulta y una secuencia de ácido nucleico concreta es el valor de "identidades", expresadas como un porcentaje, que se calcula mediante el algoritmo BLASTN cuando una secuencia de ácido nucleico concreta tiene una cobertura de consulta del 100 % con una secuencia de ácido nucleico de consulta después de realizar una alineación BLASTN por pares. Dichas alineaciones BLASTN por pares entre una secuencia de ácido nucleico de consulta y una secuencia de ácido nucleico concreta se realizan utilizando la configuración predeterminada del algoritmo BLASTN disponible en el sitio web del National Center for Biotechnology Institute con el filtro para regiones de baja complejidad desactivado. Cabe destacar que, una secuencia de ácido nucleico de consulta puede describirse mediante una secuencia de ácido nucleico identificada en una o más reivindicaciones del presente documento.
El porcentaje de identidad entre una secuencia de aminoácidos de consulta y una secuencia de aminoácidos concreta es el valor de "identidades", expresadas como un porcentaje, que se calcula mediante el algoritmo BLASTP cuando una secuencia de aminoácidos en cuestión tiene una cobertura de consulta del 100 % con una secuencia de aminoácidos de consulta después de realizar una alineación BLASTP por pares. Dichas alineaciones BLASTP por pares entre una secuencia de ácido nucleico de consulta y una secuencia de ácido nucleico concreta se realizan utilizando la configuración predeterminada del algoritmo BLASTP disponible en el sitio web del Instituto Nacional del Centro de Biotecnología con el filtro para regiones de baja complejidad desactivado. Cabe destacar que, una secuencia de aminoácidos de consulta puede describirse mediante una secuencia de aminoácidos identificada en una o más reivindicaciones en el presente documento.
En una realización de la invención como se describe en el presente documento, los anticuerpos tienen una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad de secuencia con las secuencias de aminoácidos como se establece en el listado de secuencias. En una realización particular, los anticuerpos tienen al menos un 98 %, por ejemplo, un 99 % de identidad de secuencia con los que se encuentran en el listado de secuencias.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos ilustran varios aspectos no limitantes de la presente invención.
Ejemplo 1. Producción de anticuerpos para BCMA.
La producción de anticuerpos según la invención como se describe en el presente documento y la conjugación con una toxina y las correspondientes afinidades de unión de dichos anticuerpos se pueden encontrar en el documento WO2012163805.
Ejemplo 2 - Muerte celular inmunogénica (ICD)
El proceso de muerte celular inmunogénica puede inducir la producción de moléculas peligrosas que conducen a la activación de células dendríticas (véase la figura 1A). Las células NCI-H929 tratadas con ADC de Bc MA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) produjeron tres moléculas peligrosas (ATP, HMGB1 y CRT) tras la muerte celular (figura 1B). Para investigar el efecto de la destrucción de células NCI-H929 por ADC de BCMA en la activación de células dendríticas, se realizaron experimentos de cocultivo con células NCI-H929 tratadas con ADC de BCMA y células dendríticas inmaduras (iDC) diferenciadas de monocitos humanos in vitro con tratamiento de GM-CSF/IL-4. Varios marcadores de maduración de células dendríticas, así como IL-10 e IL-12p70, dos citocinas principales secretadas por las células dendríticas tras la activación, se monitorizaron en este proceso para evaluar el efecto de la muerte celular inducida por ADC de BCMA en la activación de las células dendríticas.
Se obtuvo sangre humana completa nueva de tres donantes sanos de la Upper Providence Blood Donation Unit con jeringas recubiertas de heparina sódica líquida (Sagent 10 UI/ml de concentración final). Los monocitos se aislaron de sangre humana completa nueva utilizando el kit de enriquecimiento de monocitos RosetteSep (n.° de cat. 15068) y se evaluó la expresión de CD14 en la superficie celular (BD Bioscience n.° de cat. 562698) usando citometría de flujo. Los monocitos aislados (1,5x106 células/pocillo) se cultivaron en 2 ml de medio X-Vivo-15 complementado con plasma autólogo al 1 %, 50 ng/ml de GM-CSF humano recombinante (R&D, 215-GM-050) y 100 ng/ml de IL-4 humana recombinante (R&D, 204-IL-050) durante 7 días a 37C°/5 %de CO2. Los cultivos recibieron medio cambio de medio en el día 3 o 4 mientras mantenían las concentraciones de factor de estimulación. Se pasaron > 2 pases de células de mieloma múltiple NCI-H929 desde la descongelación a 37 °C, 5 % de CO2, 90 % de aire húmedo en RPMI-1640 complementado con FBS al 10 %. Las células se colocaron en placas a una densidad de 7,5x105 células/ml en 2 ml en placas de 12 pocillos. Se añadió una respuesta a la dosis de anticuerpos potenciados por ADC de J6M0 al medio y las células se incubaron a 37 °C/5 % de CO2 durante 48 horas.
El día 7, las iDC se cocultivaron con células NCI-H929 tratadas con anticuerpos potenciados por ADC de J6M0 en una proporción de 1:1 durante 24 horas en placas de 96 pocillos. Todas las células se contaron al inicio del cocultivo y se diluyeron con medio X-Vivo-15 a una concentración de 7,5x105 células/ml. Se combinaron 7,5x104 células/pocillo (100 pl) de iDCS y células NCI-H929 pretratadas en cada pocillo en una placa de 96 pocillos. Las células cocultivadas se incubaron a 37 °C/5 % de CO2 durante 24 horas. Un panel de citometría de flujo que consistía en CD1 a, CD11c, CD40, CD80, CD83, CD86, HLA-DR, y CD14 se utilizó para evaluar la diferenciación y maduración de células dendríticas nuevas, bloqueadas con FcR en el FACS Canto II. Adicionalmente, se recogieron los sobrenadantes celulares, se congelaron a -20 °C y se analizaron para detectar IL-10 e IL-12p70 usando kits MSD.
El análisis de datos se realizó en Flow Jo v7.6.5 para el panel de citometría de flujo y utilizó la selección de células CD11c+ o HLA-DR+ para distinguir las células dendríticas de las células tumorales. Las células NCI-H929 son negativas para HLA-DR y tienen una expresión de CD11c mucho más baja que las células dendríticas, lo que permite que las dos poblaciones de células se seleccionen claramente. Los datos de IL-10 e IL-12p70 secretadas de los sobrenadantes en los ensayos de cocultivo se analizaron en MSD Discovery Workbench v4.0.12.
Estos resultados sugieren que la destrucción de células NCI-H929 con ADC de BCMA tiene un efecto estimulador sobre las células dendríticas y puede conducir a la activación de células dendríticas. Cuando se monitorizaron IL-12p70 e IL-10, IL-12p70 estuvo por debajo del límite de detección en todas las condiciones. Se pudo detectar IL-10 y hubo un efecto inhibidor significativo de ADC de BCMA en la producción de II-10. Sin embargo, este efecto puede no estar relacionado con la activación de células dendríticas por la muerte celular inmunogénica de células NCI-H929 inducida por ADC de BCMA ya que el efecto inhibidor sobre IL-10 se observó con células NCI-H929 solas tratadas con ADC de BCMA. El efecto inhibidor sobre la producción de IL-10 es beneficioso para estimular la respuesta inmunitaria. (Véanse la figura 2 y la figura 3)
Ejemplo 3
Los linfocitos T pueden activarse mediante la participación del receptor de linfocitos T (TCR) y las moléculas coestimuladoras expresadas en la superficie celular. Tras la activación de los linfocitos T, una serie de marcadores de superficie adicionales aumentan. El efecto in vitro de ADC de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) sobre la activación y función de los linfocitos T se caracterizó mediante la monitorización de varios de estos marcadores asociados a la activación de los linfocitos T. Asimismo, tras la activación, los linfocitos T producen citocinas tales como IFNy e IL-4. También se estudió el efecto de ADC de BCMA sobre las producciones de IFNy e IL-4 en linfocitos T estimulados. Estos experimentos pueden proporcionar datos sobre el efecto de ADC de BCMA en la activación y función de los linfocitos T. Además, también se evaluó la proliferación de linfocitos T CD4+ y CD8+ humanos tras la estimulación en presencia de ADC de BCMA. La sangre humana se obtuvo del programa de obtención de donantes de sangre en GlaxoSmithKline. Se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) de sangre completa humana mediante centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll (GE Healthcare). El anticuerpo anti-CD3 humano (eBioscience, n.° de catálogo 16-0037-85, clon OKT3) diluido con tampón de recubrimiento (Biolegend, n.° de catálogo 421701) se recubrió en una placa de fondo plano de 96 pocillos durante la noche.
3.1 Efecto de ADC de BCMA sobre la activación de linfocitos T por estimulación con anti-CD3/anti-CD28 en PBMC
El ADC de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) se probó en el ensayo de activación de linfocitos T de PBMC. En este estudio, el tratamiento con ADC de BCMA y la activación de PBMC se produjeron simultáneamente y los efectos se monitorizaron a las 24 y 72 horas. Este estudio se repitió dos veces (n=2) con sangre de dos donantes diferentes. En este estudio, se añadieron 100 pl de PBMC (2x10A6 células/ml) en RPMI-1640 con FBS al 10 % (Hyclone; n.° de catálogo SH30071.03) en pocillos recubiertos con anticuerpo anti-CD3 con o sin 0,5 pg/ml de anticuerpo anti-CD28 soluble (eBioscience, n.° de catálogo 16-0289, clon CD28.2). Una solución madre de 9,6 mg/ml de ADC de BCMA o_4,6 mg/ml de control de IgG de Ab contra BCMA se diluyó primero en medio RPMI-1640 para obtener concentraciones de anticuerpos de 1 mg/ml que se diluyeron posteriormente en un volumen igual de medio RPMI-1640 para obtener concentraciones de anticuerpos de 60, 6 y 0,6 gg/ml. Se añadieron 100 gl de cada una de las soluciones finales de anticuerpos diluidos a 100 gl de PBMC en RPMI-1640/FBS al 10 % para obtener concentraciones finales de anticuerpos de 30, 3 y 0,3 gg/ml. Se incluyeron tres repeticiones técnicas para cada condición de ensayo. Las PBMC se cultivaron a 37 °C y 5 % de CO2 durante varios tiempos como se indica anteriormente. Las células se transfirieron a una placa de 96 pocillos profundos y se lavaron dos veces con 1 ml de tampón de tinción (BD Biosciences, n.° de catálogo 554656), se tiñeron con anticuerpos conjugados con fluorescencia o controles de isotipo (véase la sección 3.3. Fármacos y Materiales), y se incubaron durante 30 min en hielo. El análisis de inmunofluorescencia se realizó en un citómetro de flujo FACS CANTO II (BD Biosciences) y se analizó con el software DIVA (BD Biosciences). Se usó citometría de flujo para monitorizar el porcentaje de células CD4 o CD8 que expresan un marcador determinado y la intensidad de fluorescencia media (IFM) de este marcador en células CD4 o CD8.
3.2 Efecto de ADC de BCMA en la producción de IPNy e IL-4 por linfocitos T tras estimulación con anti-CD3/anti-CD28 en PBMC
Este estudio se repitió dos veces (n=2) con sangre de dos donantes diferentes. Se añadieron 100 gl de PBMC (1 x 10A6 células/ml) en RPMI-1640 con FBS al 10 % en pocillos recubiertos con anticuerpo anti-CD3 con o sin 0,5 gg/ml de anticuerpo anti-CD28 soluble. A continuación se añadieron 100 gl de cada ADC de BCMA diluido (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) y soluciones de control de IgG (véase la sección 3.1 para el protocolo de dilución de anticuerpos) y las PBMC se cultivaron a 37 °C y 5 % de CO2 durante 48 horas y 72 horas. Se incluyeron tres repeticiones técnicas para cada condición de ensayo. Al final del estudio, las células se transfirieron, lavaron, tiñeron y analizaron por citometría de flujo como se describe en la sección 3.1. Para la tinción intracelular, las células se fijaron con tampón cytofix (BD Biosciences, n.° de catálogo 554655) a temperatura ambiente durante 20 minutos y se permeabilizaron con tampón de perm/de lavado (BD Biosciences, n.° de catálogo 554723) a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de teñirlas con anticuerpos o controles de isotipo.
3.3 Efecto de ADC de BCMA sobre la proliferación de linfocitos T tras la estimulación con anti-CD3/anti-CD28
Se recibieron linfocitos T CD4+ o CD8+ aislados de sangre periférica normal nueva y se contaron usando un Beckman Coulter ViCell y después se centrifugaron a 330 g durante 7 minutos. A continuación, las células se tiñeron con colorante de proliferación Cell Trace CFSE de Molecular Probes (n.° de cat. C34554) (5-10 gM) en PBS/BSA al 0,5 %. Las células se incubaron durante 5 minutos en hielo antes de una incubación adicional durante 5 minutos en hielo en RPMI 1640/FBS al 10 % frío. Se eliminó cualquier colorante libre mediante dos centrifugaciones celulares adicionales a 300 g durante 5 minutos. Las células se resuspendieron en medios completos RPMI 1640/FBS al 10 %/IL-2 (2,8 ng/ml). Después se sembraron las células (105 células/100 gl de volumen/pocillo) en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos recubiertas previamente con anti-CD3 (1 gg/ml) y anti-CD28 (1 gg/ml). El ADC de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) se añadió a las células inmediatamente después de la siembra en placa y se incubó a 37 °C durante 96 horas.
Después de los 4 días de incubación, el sobrenadante celular se recogió y se congeló a menos 80 °C y las células se recogieron para la tinción de citometría de flujo. Se analizó utilizando un citómetro de flujo CANTO II con filtros de excitación y emisión de 488 nm apropiados para fluoresceína (FITC) para Cell Trace CFSE.
Los anticuerpos e isotipos para los marcadores monitorizados mediante análisis de citometría de flujo se enumeran en la tabla 2 a continuación.
Tabla 2.
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continuación
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El porcentaje sin procesar y los datos de IFM para cada marcador en cada concentración de ADC de BCMA se compararon con el control de IgG correspondiente en el análisis estadístico. Para tener en cuenta la variabilidad de los diferentes donantes de sangre, se utilizó un modelo lineal de efectos mixtos para analizar los datos. Brevemente, el donante y la interacción entre el donante y el grupo (tratamiento con ADC de BCMA o control de IgG) se trataron como efectos aleatorios, y el grupo se trató como un efecto fijo en el modelo. Siguiendo el análisis del modelo de efectos mixtos, cada grupo de tratamiento con ADC de BCMA se comparó a continuación con el grupo con control de IgG. Debido a comparaciones múltiples, el método de Dunnett se usó para controlar la tasa de error de tipo 1 general. Los valores de p ajustados < 0,05 por el método de Dunnett se declararon significativos para el porcentaje o el valor de IFM en una concentración específica de ADC de BCMA. Se consideró que ADC de BCMA cambiaba significativamente la expresión de un marcador si al menos 2 de las 3 concentraciones de ADC de BCMA inducían un cambio estadísticamente significativo (valores p < 0,05) del porcentaje o valor de IFM del marcador.
Para el informe de datos, el porcentaje promedio o el valor promedio de IFM entre tres repeticiones técnicas se generó en cada concentración de ADC de BCMA y los valores de % de diferencia se calcularon como: % de diferencia = (Avg 916 - Avg IgG)*100/Avg IgG, donde Avg 916 y Avg IgG representan los valores promedio del grupo de tratamiento con ADC de BCMA y el grupo de control de IgG, respectivamente. Los valores de % de diferencia con diferentes donantes para un marcador dado a una concentración y punto de tiempo de ADC de BCMA dados se usaron para calcular el valor de % de diferencia promedio y el CV (coeficiente de variación) que se informaron en la figura 4A-C. Los valores de % de diferencia positivos y negativos representan el aumento y la disminución de un marcador, respectivamente.
El % de CD4 y el % de CD8 se midieron de forma independiente en tres grupos para cada experimento, realizando tres repeticiones técnicas en cada grupo. Cada grupo se analizó estadísticamente como se describe anteriormente. Los cambios en los valores de % de CD4 y % de CD8 se consideraron significativos si al menos 2 de los 3 grupos tenían cambios significativos (valores de p < 0,05). Para el informe de datos, se generó un CV agrupado tomando el promedio de CV para 3 grupos.
En este estudio, se caracterizó el efecto in vitro de ADC de BCMA sobre la activación y función de los linfocitos T monitorizando el efecto del compuesto sobre una serie de marcadores asociados con la activación de los linfocitos T. La mayoría de estos marcadores aumentan tras la activación de los linfocitos T. Estos marcadores incluyen los marcadores de activación de linfocitos T CD25 y CD69; los marcadores coinhibidores PD-1, CTLA-4; los marcadores coestimuladores ICOS, OX-40 y CD137; y los marcadores de agotamiento de linfocitos T TIM3 y LAG3. CD73 y CD39 son proteínas de superficie implicadas en la activación de la vía de la adenosina y se consideran moléculas coinhibidoras en la activación de los linfocitos T. La correlación entre su nivel de expresión y la activación de los linfocitos T se comprende menos. En general, los datos indican que ADC de BCMA tiene un efecto mínimo sobre la activación de linfocitos T CD4 y CD8 estimulados con anti-CD3/anti-CD28 en PBMC. ADC de BCMA no tiene un efecto significativo sobre la producción de IPNy e IL-4 en células tanto CD4 como CD8 en PBMC después de la estimulación con anti-CD3/anti-CD28. Estos datos son coherentes con la falta de expresión de BCMA en linfocitos T humanos.
Ejemplo 4: Eficacia in vivo de ADC de BCMA en combinación con anticuerpo anti-OX40
Todos los procedimientos en animales se revisaron y aprobaron por el GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes del inicio de los estudios.
4.1 Modelo singénico de EL4-Luc2-hBCMA en ratones
El propósito de estos experimentos fue evaluar las combinaciones descritas en el presente documento en modelos de ratones singénicos de tumorgénesis. EL4-Luc2 (Bioware Ultra EL4-luc2 n.° 58230C40) se transfectó con un plásmido que codifica BCMA humana. EL4 es una célula de linfoma de ratón inducida en un ratón C57BL por DBMA (ATCC TIB-39). El día 13, se pesaron ratones hembra C57BL/6 (n=10) y se inocularon en el flanco derecho con 1 x 105 de las células EL4-Luc2-hBCMA transducidas y se dejó crecer hasta que el volumen tumoral alcanzó ~ 700 mm3. El crecimiento tumoral se midió utilizando un calibrador digital "ProMax" de Fowler. Se midieron el largo (L) y el ancho (W) de los tumores para determinar el volumen tumoral usando la fórmula: Volumen tumoral = 0,52 x L x W2.
4.2 Pauta posológica
El día 0, cuando se logró el volumen tumoral diana, los ratones se dividieron de manera aleatoria en 12 grupos de tratamiento. Los tratamientos se administraron el día 4, el día 7, el día 11 y el día 15. El volumen tumoral y el peso corporal se midieron comenzando el día 0 hasta el día 27, 3 veces por semana. Los animales se sacrificaron cuando un tumor alcanzó un volumen de 2000 mm3. La pauta posológica se resume en la tabla 3.
Tabla 3:
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4.3 Resultados
Los resultados del ejemplo 4 se reproducen en la figura 5. La figura 5A representa el volumen tumoral. El eje X representa el número de días en el estudio y el eje Y representa el volumen tumoral (mm3). Cada línea en un solo gráfico en la figura 5A representa un único ratón (n=10 ratones para cada grupo de tratamiento). La figura 5B representa la tasa de supervivencia global. Estos resultados demuestran que la reducción del volumen tumoral aumenta ligeramente cuando un ACD de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) se combina con un anticuerpo anti-OX40.
Ejemplo 5: Eficacia in vivo del anticuerpo anti-BCMA en combinación con el anticuerpo anti-PD-1
Todos los procedimientos en animales se revisaron y aprobaron por el GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes del inicio de los estudios.
5.1 Modelo singénico de EL4-Luc2-hBCMA en ratones
Se usó el mismo modelo de EL4-Luc2-hBCMA en ratones como se describe en el ejemplo 4.
5.2 Pauta posológica
El día 0, cuando el volumen tumoral alcanzó un promedio de 200 mm3, los ratones se dividieron de manera aleatoria en 13 grupos de tratamiento. Los tratamientos se administraron en el día 0, el día 4, el día 8, el día 11, el día 15 y el día 17. Los días de tratamiento y el programa de dosificación se resumen en la tabla 4. El volumen tumoral y el peso corporal se midieron comenzando el día 0 hasta el día 57. Los animales se sacrificaron cuando un tumor alcanzó un volumen de 2000 mm3. La pauta posológica se resume en la tabla 4.
Tabla 4:
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5.3 Resultados
Los volúmenes tumorales resultantes para el ejemplo 5 se representan en la figura 6. El eje X representa el número de días en el estudio y el eje Y representa el volumen tumoral (mm3). Cada línea en un solo gráfico en la figura 6 representa un único ratón (n=10 ratones para cada grupo de tratamiento).
Ejemplo 6: Eficacia in vivo de las combinaciones
Todos los procedimientos en animales se revisaron y aprobaron por el GSK Institutional Animal Care and Use Committee antes del inicio de los estudios.
6.1 Modelo singénico de EL4-Luc2-hBCMA en ratones
Se usó el mismo modelo de EL4-Luc2-hBCMA en ratones como se describe en el ejemplo 4.
6.2 Pauta posológica
El día 0, cuando se logró el volumen tumoral diana, los ratones se dividieron de manera aleatoria en 14 grupos de tratamiento. Los tratamientos se administraron el día 0, el día 3, el día 7, el día 10, el día 14 y el día 17. El volumen tumoral y el peso corporal se midieron comenzando el día 0 hasta el día 102. Los animales se sacrificaron cuando un tumor alcanzó un volumen de 2000 mm3. La pauta posológica se resume en la tabla 4. La pauta posológica se resume en la tabla 5.
Tabla 5:
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6.3 Resultados
Los volúmenes tumorales resultantes para el ejemplo 6 están representados por los gráficos en la figura 7. El eje X representa el número de días en el estudio y el eje Y representa el volumen tumoral (mm3). Cada línea en un solo gráfico en la figura 7 representa un único ratón (n=10 ratones para cada grupo de tratamiento). Los resultados demuestran que el tratamiento con una combinación de ADC de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) y un anticuerpo anti-PD-1 da como resultado una reducción moderada y coherente en el volumen tumoral en comparación con el tratamiento con ADC de BCMA (anticuerpo anti-BCMA conjugado con MMAF: GSK285791) solo o un anticuerpo anti-PD-1 solo.
Sumario de secuencias Tabla A
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Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a BCMA y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a PD1, en donde el anticuerpo que se une a BCMa se conjuga con un agente citotóxico como inmunoconjugado.
2. La combinación de la reivindicación 1, en donde el agente citotóxico conjugado con el anticuerpo que se une a BCMA es MMAE o MMAF.
3. La combinación de la reivindicación 2, en donde el agente citotóxico se conjuga con el anticuerpo que se une a BCMA a través de un enlazador, y en donde el enlazador es citrulina-valina o maleimidocaproílo.
4. La combinación de cualquier reivindicación anterior, en donde el anticuerpo que se une a BCMA comprende la CDRH1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la SEQ. ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID. NO: 3 o SEQ. ID. NO: 200, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6.
5. La combinación de cualquier reivindicación anterior, en donde el anticuerpo que se une a BCMA comprende una región variable de cadena pesada de la SEQ. ID. NO: 23 y una región variable de cadena ligera de la s Eq . ID. NO: 31.
6. La combinación de cualquier reivindicación anterior, en donde el anticuerpo que se une a PD-1 es pembrolizumab o nivolumab.
7. La combinación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende:
i) un anticuerpo que se une a BCMA, en donde el anticuerpo que se une a BCMA es un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo anti-BCMA que comprende la Cd Rh 1 de la SEQ. ID. NO: 1, CDRH2 de la s Eq . ID. NO: 2, CDRH3 de la SEQ. ID.NO: 200 o SEQ. ID. NO: 3, CDRL1 de la SEQ. ID. NO: 4, CDRL2 de la SEQ. ID. NO: 5, CDRL3 de la SEQ. ID. NO: 6, conjugado con MMAF; y
ii) pembrolizumab o nivolumab.
8. La combinación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende dos composiciones farmacéuticas, una que comprende el anticuerpo que se une a BCMA y la otra que comprende el anticuerpo que se une a PD-1.
9. Una composición farmacéutica que comprende la combinación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.
10. Una combinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una composición de la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento de cáncer.
11. La combinación para su uso según la reivindicación 10, en donde el cáncer se selecciona de mieloma múltiple (MM), linfoma no Hodgkiniano, leucemia de linfocitos B (NHL), linfoma folicular (FL) y linfoma difuso de linfocitos B grandes (DL-BCL).
12. La combinación para su uso según la reivindicación 10 u 11, en donde el anticuerpo que se une a BCMA y el anticuerpo que se une a PD1 se usan como una combinación para uso simultáneo o secuencial en cualquier orden.
13. La combinación para su uso según la reivindicación 12, en donde la combinación es para la administración por la misma vía o por vías diferentes.
14. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en donde el tamaño tumoral del cáncer se reduce en más de una cantidad aditiva en comparación con el tratamiento con el anticuerpo que se une a BCMA o el anticuerpo que se une a PD-1 utilizados como monoterapia.
15. La combinación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, en donde la combinación puede emplearse con otros métodos terapéuticos tales como terapia antineoplásica, otros agentes quimioterapéuticos, hormonales o de anticuerpos, así como tratamientos quirúrgicos y/o de radiación.
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