ES2913539T3 - Identificación de pacientes con fracción de acortamiento anómala - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para evaluar si un sujeto que padece hipertensión se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de a) determinar la cantidad de troponina cardíaca en una muestra del sujeto, y b) comparar la cantidad determinada, por tanto, con una cantidad de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Description

DESCRIPCIÓN

Identificación de pacientes con fracción de acortamiento anómala

La presente invención se refiere a un procedimiento para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. El procedimiento se basa en la determinación de la(s) cantidad(es) de troponina cardíaca y/o factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF-23) en una muestra del sujeto, y en la comparación de la(s) cantidad(es) determinada(s), por tanto, con una cantidad de referencia (cantidades de referencia).

La fracción de acortamiento de la pared media (MFS) anómala marca una función ventricular sistólica y/o diastólica anómala en una fase preclínica temprana durante la evolución hacia la hipertrofia ventricular izquierda (HVI) y la insuficiencia cardíaca, así como en la isquemia miocárdica. La MFS es una medida de la función sistólica que identifica a pacientes hipertensos que tienen indicios de lesión orgánica específica, reserva contráctil alterada y mortalidad incrementada. Por lo tanto, es importante la identificación de sujetos con fracción de acortamiento anómala. En particular, la identificación permite iniciar un tratamiento preventivo apropiado antes de que se produzca una evolución irreversible de la hipertrofia ventricular izquierda o incluso una insuficiencia cardíaca.

La fracción de acortamiento se puede reconocer usando modalidades de formación de imágenes (véase, por ejemplo, Honda T et al. J Cardiol. Marzo de 2002; 39(3):141-50; Palmiero P et al. Echocardiography. Enero de 2008; 25(1): 20-6; Shimizu G et al. Circulation. 1985; 71:266-272). Sin embargo, la fracción de acortamiento de la pared media anómala con frecuencia no se somete a prueba o se pasa por alto. Esto es cierto en particular en los ancianos. La evaluación de la fracción de acortamiento usando ecocardiografía requiere instrumentación costosa, técnicas de formación de imágenes especializadas y habilidades de grabación e interpretación de imágenes expertas. La aplicación generalizada del cribado ecocardiográfico de MFS anómala se ha visto limitada por la consideración de coste-beneficio. Sin embargo, esta desventaja se podría superar usando un biomarcador sanguíneo asociado con la fracción de acortamiento de la pared media.

Además, un procedimiento basado en biomarcadores sería útil para estratificar a los pacientes para técnicas de formación de imágenes posteriores tales como ecocardiografía o resonancia magnética nuclear.

El documento WO 2012/025355 describe un procedimiento de diagnóstico de anomalías funcionales y/o estructurales del corazón que preceden a la insuficiencia cardíaca, en un sujeto que presenta factores de riesgo de padecer insuficiencia cardíaca determinando la cantidad de troponina cardíaca y de IGFBP7. Divulga que un nivel de troponina T de igual a o mayor de 3,5 pg/ml es indicativo de anomalías funcionales y/o estructurales del corazón que preceden a la insuficiencia cardíaca. No se describen sujetos con fracción de acortamiento de la pared media (MFS) <15 %.

Saytan et al. 2007 (Am J Kidney Dis. de diciembre; 50(6): 1009-1019) divulga que la fracción de acortamiento de la pared media baja es una medida de la función sistólica deficiente y que, en pacientes asintomáticos en hemodiálisis, la fracción de acortamiento de la pared media baja fue un correlato independiente del log NT-proPNC (p<0,01). Además, no hubo una correlación significativa entre cTnT y mWFS (p=0,51).

Kitagawa et al. 2011 (Nephron Extra 1(1): 166-177) divulga que se pueden usar PNC así como troponina I hs para detectar la disfunción diastólica del ventrículo izquierdo en pacientes con insuficiencia renal crónica no diabéticos.

El factor de crecimiento de fibroblastos-23 (FGF-23) es una hormona de 32 kDa secretada en la sangre por los osteocitos óseos. Sus dos funciones son inducir la excreción urinaria de fósforo e inhibir la activación de la vitamina D; ambas acciones se producen en el túbulo proximal renal. Se encuentran altas concentraciones de FGF-23 circulante en pacientes con insuficiencia renal terminal. La hormona es un actor clave en la regulación del metabolismo de fosfato de calcio y vitamina D y tiene un papel causal en la patogenia de la hipertrofia del VI, un determinante importante de los episodios cardiovasculares agudos.

Kirkpantur et al. 2011 (Nephrol Dial Transplant 26:1346-1354) divulgan que los niveles de FGF-23 están asociados con un índice de masa ventricular izquierda (IMVI) y un índice de rendimiento miocárdico incrementados en pacientes en diálisis (véase la tabla 2). Los sujetos con fracción de acortamiento anómala < 15 % no se reconocieron. (Véase la tabla 2; todos los sujetos con FAc = fracción de acortamiento de alrededor de un 30 %).

Mirzaa et al. 2009 (Mirzaa Atheroscleosis 207, 546-551) divulgan una asociación entre concentraciones séricas elevadas de FGF-23 y masa ventricular izquierda incrementada, hipertrofia ventricular izquierda y forma geométrica del ventrículo izquierdo y riesgo incrementado de presencia de hipertrofia ventricular izquierda en ancianos que es más pronunciada en pacientes con insuficiencias renales (eGFR < 60 ml/min).

Faule et al. 2011 (J Clin Invest 121(11): 4393-4408) examinó el papel causal del FGF-23 en la patogenia de HVI en modelos animales y sugiere que las concentraciones crónicamente elevadas de FGF-23 contribuyen directamente a las altas tasas de hipertrofia ventricular izquierda y mortalidad. También divulga una asociación entre concentraciones séricas elevadas de FGF-23 y prevalencia de hipertrofia ventricular izquierda en seres humanos y que los niveles incrementados de FGF-23 preceden a la aparición de hipertrofia ventricular izquierda en seres humanos con insuficiencia renal crónica. También se describe un procedimiento de predicción del riesgo de que un paciente padezca hipertrofia ventricular izquierda en el futuro en base a la detección de FGF-23.

Gutiérrez et al. 2009 (Circulation 19 de mayo; 119(19): 2545-2552) divulga que las concentraciones de FGF-23 se asociaron significativamente con IMVI incrementado. Las concentraciones crecientes del log FGF-23 también se asociaron significativamente con la presencia de hipertrofia ventricular izquierda.

Taddei et al. 2011 (Heart Fail Rev 16:615-620) divulga la deficiencia de vitamina D, es decir, niveles reducidos de vitamina D, como factores de riesgo de HVI en pacientes con insuficiencia renal crónica.

Palmiero et al. 2008 (Echocardiography de enero; 25(1):20-6) divulga que la fracción de acortamiento de la pared media es un signo temprano importante de disfunción ventricular en pacientes hipertensos, incluso cuando la función diastólica es normal.

Ix et al. 2012 (J Am College of Cardiol.) divulgan que FGF-23 se puede usar como predictor en sujetos de la población.

El sistema IGFBP desempeña un papel importante en el crecimiento y la diferenciación celular. La proteína de unión a IGF 7 (=IGFBP-7) es una glucoproteína modular de 30 kDa que se sabe que se secreta por células endoteliales, células musculares lisas vasculares, fibroblastos y células epiteliales (Ono, Y., et al., Biochem Biophys Res Comm 202 (1994) 1490-1496). En la literatura, esta molécula también se ha denominado FSTL2; IBP 7; proteína relacionada con la proteína de unión a IGF I; IGFBP 7; IGFBP 7v; IGFBP rP1; IGFBP7; IGFBPRP1; proteína de unión al factor insulínico de crecimiento 7; precursor de la proteína de unión al factor insulínico de crecimiento 7; MAC25; proteína MAC25; factor estimulante de PGI2; y PSF o factor estimulante de prostaciclina. Se detectaron niveles bajos de IGFB-7 en sueros humanos aleatorios y se han visto concentraciones séricas incrementadas en asociación con la resistencia a la insulina (Lopez-Bermejo, A., et al., J. Clinical Endocrinology and Metabolism 88 (2003) 3401-3408, Lopez-Bermejo, A., et al., Diabetes 55 (2006) 2333-2339).

El documento US2010/0285491 divulga el uso de IGFBP-7 en la evaluación de insuficiencia cardíaca. Además divulga que el marcador IGFBP-7 se puede usar para seleccionar una pauta de tratamiento para un paciente que padece IC.

Motiwala et al. divulgan que la medición en serie de IGFBP7 se puede usar como factor pronóstico en pacientes con disfunción sistólica del ventrículo izquierdo (JACC, 2013, 61(10), E565).

El mimecano (con frecuencia también denominado "osteoglicina") es un componente multifuncional de la matriz extracelular. Se ha demostrado que el mimecano está implicado en la regulación de la fibrilogénesis del colágeno, un proceso esencial en el desarrollo, reparación de tejidos y metástasis (Tasheva et al., MoI. Vis. 8 (2002) 407­ 415). Desempeña un papel en la formación de hueso junto con TGF-beta-1 o TGF-beta-2. Los análisis de transcriptoma en tejido cardíaco humano y de rata revelaron una alta correlación de mimecano con la masa ventricular izquierda, así como con la remodelación extracelular en la miocardiopatía dilatativa (Petretto, E. et al., Nature Genetics 40 (2008) 546-552).

El documento WO2011/012268 divulga que el mimecano se puede usar como marcador para la evaluación de la insuficiencia cardíaca.

La endostatina se aisló originalmente de hemangioendotelioma murino como un fragmento proteolítico de 20 kDA de colágeno de tipo XVIII (O'Reilly, M.S. et al., Cell 88 (1997) 277-285). Los colágenos representan una familia de proteínas de la matriz extracelular con una conformación característica de triple hélice que forma agregados supramoleculares que desempeñan un papel dominante en el mantenimiento de la integridad estructural del tejido. El depósito excesivo de colágeno da lugar a fibrosis que altera el funcionamiento normal de los tejidos circundantes. La endostatina se libera de la cadena alfa 1 del colágeno XVIII por acción de diversas enzimas proteolíticas (Ortega, N. y Werb, Z., Journal of Cell Science 115 (2002) 4201-4214). La endostatina es un potente inhibidor de la angiogénesis y del crecimiento de los vasos sanguíneos.

El documento WO2010/124821 divulga que la endostatina se puede usar como marcador para la evaluación de la insuficiencia cardíaca.

El problema técnico subyacente a la presente invención se puede ver como la provisión de medios y procedimientos para cumplir con las necesidades mencionadas anteriormente.

El problema técnico se resuelve por los modos de realización caracterizados en las reivindicaciones y en el presente documento a continuación.

Procedimiento para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes

La presente invención se refiere a un procedimiento para evaluar si un sujeto que padece hipertensión se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar fracción de acortamiento de la pared media anómala, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de

a) determinar la cantidad de troponina cardíaca en una muestra del sujeto, y

b) comparar la cantidad determinada, por tanto, con una cantidad de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

La divulgación también se refiere a un procedimiento para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes que comprende las etapas de

a) determinar la(s) cantidad(es) de troponina cardíaca y/o factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF-23) en una muestra del sujeto, y

b) comparar la(s) cantidad(es) determinada(s), por tanto, con una cantidad de referencia (cantidades de referencia), con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Preferentemente, se evalúa si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes llevando a cabo la etapa adicional de c) evaluar si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, en base a los resultados de la comparación llevada a cabo en la etapa b).

El procedimiento de la presente invención, preferentemente, es un procedimiento ex vivo o in vitro. Además, puede comprender etapas además de las mencionadas de forma explícita anteriormente. Por ejemplo, otras etapas se pueden referir a pretratamientos de muestras o evaluación de los resultados obtenidos por el procedimiento. El procedimiento se puede llevar a cabo manualmente o asistido por automatización. Preferentemente, la etapa (a) y/o (b) puede estar asistida totalmente o en parte por automatización, por ejemplo, por un equipo robótico o sensitivo adecuado para la determinación en la etapa (a) o una comparación implementada por ordenador y/o evaluación basada en dicha comparación en la etapa (b).

El término "evaluar", como se usa en el presente documento, significa determinar si un sujeto como se expone en el presente documento se deberá someter o no a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Por tanto, llevando a cabo el procedimiento de la presente invención, se puede estratificar si un sujeto como se expone en el presente documento se debe someter o no a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Llevando a cabo el procedimiento de la presente invención, por ejemplo, se pueden identificar sujetos que no se deben someter a estas evaluaciones diagnósticas. Puesto que estas evaluaciones requieren instrumentación costosa, técnicas de formación de imágenes especializadas y habilidades en grabación e interpretación de imágenes expertas, se pueden evitar gastos de asistencia sanitaria innecesarios. Un sujeto que es susceptible de una evaluación basada en formación de imágenes, preferentemente, es un sujeto que tiene una probabilidad incrementada de padecer disfunción sistólica y/o diastólica. Por tanto, el sujeto requiere una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En particular, un sujeto que es susceptible de una evaluación basada en formación de imágenes, preferentemente, es un sujeto que tiene una probabilidad incrementada de padecer fracción de acortamiento de la pared media anómala. Un sujeto que no es susceptible de una evaluación basada en formación de imágenes, preferentemente, es un sujeto que tiene una probabilidad reducida de padecer disfunción sistólica y/o diastólica. Por tanto, el sujeto no requiere una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En particular, un sujeto que no es susceptible de una evaluación basada en formación de imágenes, preferentemente, es un sujeto que tiene una probabilidad reducida de padecer fracción de acortamiento de la pared media anómala.

Como se entenderá por los expertos en la técnica, una evaluación de este tipo normalmente no pretende ser correcta para un 100 % de los sujetos que se van a evaluar. El término, sin embargo, requiere que una parte estadísticamente significativa de los sujetos se pueda evaluar correctamente. Se puede confirmar si una evaluación es correcta por procedimientos bien conocidos en la técnica. Además, se puede determinar si una parte es estadísticamente significativa sin más preámbulos por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. Los intervalos de confianza preferentes son de al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 %. Los valores de p son, preferentemente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001.

De acuerdo con el procedimiento de la presente invención, se deberá evaluar si el sujeto que se va a someter a prueba se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Preferentemente, la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes tiene como objetivo crear imágenes del corazón. Por tanto, la evaluación deberá ser una evaluación del corazón. Más preferentemente, la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es la ecocardiografía o la resonancia magnética nuclear (RMN). La evaluación diagnóstica más preferente es la ecocardiografía.

Las técnicas de formación de imágenes mencionadas anteriormente son bien conocidas en la técnica. El término "ecocardiografía" como se usa en el presente documento, preferentemente, se refiere a la evaluación de la estructura y función cardíacas con imágenes y grabaciones producidas por ecografía. Preferentemente, el término incluye ecocardiografía unidimensional, bidimensional y tridimensional. Además, se concibe que el término "ecocardiografía" incluya ecocardiografía transtorácica, ecocardiografía de estrés y ecocardiografía de contraste. En un modo de realización en particular preferente, la ecocardiografía es una ecocardiografía en modo M.

La resonancia magnética nuclear es una técnica de formación de imágenes médica usada en radiología para visualizar las estructuras internas del cuerpo en detalle. Por RMN, se analiza la absorción y transmisión de ondas de radio de alta frecuencia a medida que irradian los átomos de hidrógeno en las moléculas de agua y otros componentes del tejido dispuestos en un fuerte campo magnético. El término "resonancia magnética nuclear", como se usa en el presente documento, se refiere a la resonancia magnética nuclear cardíaca (con frecuencia también denominada resonancia magnética nuclear cardiovascular).

En un modo de realización preferente del procedimiento de la presente invención, la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes se usa para diagnosticar la disfunción diastólica. En un modo de realización incluso más preferente del procedimiento de la presente invención, la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes se usa para diagnosticar la disfunción sistólica.

El término "disfunción diastólica" se entiende bien por el experto en la técnica. Preferentemente, el término se refiere a una función de bombeo reducida del corazón debido a un llenado ventricular alterado. Por tanto, el término, preferentemente, se refiere a la disminución del rendimiento de uno o ambos ventrículos del corazón durante la fase de tiempo de la diástole. El término "disfunción sistólica" también es bien conocido en la técnica. Como se usa en el presente documento, el término se refiere preferentemente a una función de bombeo reducida del corazón debido a una contractilidad disminuida del ventrículo. Preferentemente, la disfunción sistólica y/o diastólica no va unida a signos sintomáticos de insuficiencia cardíaca. También preferentemente, la disfunción sistólica y/o diastólica no irá unida a hipertrofia ventricular izquierda.

En un modo de realización en particular preferente del procedimiento de la presente invención, la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes se usa para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala, en particular una fracción de acortamiento de la pared media del ventrículo izquierdo anómala.

La expresión "fracción de acortamiento de la pared media" es bien conocida en la técnica (abreviada en el presente documento como "MFS". Es bien conocido en la técnica que una MFS del ventrículo izquierdo (VI) reducida es un signo temprano de disfunción del VI que es una fracción de acortamiento de la pared media del VI reducida. Preferentemente, la fracción de acortamiento de la pared media se considera anómala si es menor de un 15 %. Este valor de corte se ha usado como valor de referencia en el contexto de la IC y ha demostrado pertinencia pronóstica en sujetos hipertensos (véase Murredu et al., European Journal of Heart Failure (2012) 14, 718-729). También preferentemente, la fracción de acortamiento de la pared media se considera anómala si es menor de un 14 % o un 13 %. Además, la fracción de acortamiento de la pared media se considera normal si es mayor (o igual) a un 15 %. También preferentemente, la fracción de acortamiento de la pared media se considera normal si es mayor a un 16 % o un 17 %.

La fracción de acortamiento de la pared media se puede calcular por procedimientos bien conocidos. Por ejemplo, se puede calcular a partir del modelo cilíndrico de dos cáscaras como se describe por Shimizu et al. (Shimizu G, Hirota Y, Kita Y, Kawamura K, Saito T, Gaasch WH. Left ventricular midwall mechanics in systemic arterial hypertension. Circulation 1991;83:1676-84)). Este procedimiento es un refinamiento del procedimiento de la pared media convencional y proporciona datos que reflejan el acortamiento de una fibra o anillo de la pared media circunferencial teórico del miocardio. Supone una masa ventricular izquierda constante a lo largo del ciclo cardíaco y no requiere la suposición de que las fracciones de engrosamiento de la pared interna y externa son iguales.

La determinación de MFS también se describe por Mayet et al. o en artículos anteriores de Shimizu et al. (véase, por ejemplo, Mayet et al., Hypertension. 2000; 36: 755-759; Shimizu G, Zile MR, Blaustein AS, Gaasch WH. Left ventricular chamber filling and midwall fiber lengthening in patients with left ventricular hypertrophy: overestimation of fiber velocities by conventional midwall measurements. Circulation. 1985;71:266-272 o Shimizu G, Conrad CH, Gaasch WH. Phase-plane analysis of left ventricular chamber filling and midwall fiber lengthening in patients with left ventricular hypertrophy. Circulation. 1987;75 (suplemento I): I-34-I-39). Además, la determinación de MFS se ha descrito por de Simone et al. (JACC, 1994, vol. 23(6): 1444-51). Preferentemente, MFS como se usa en el presente documento se determina de acuerdo con el procedimiento como se describe por Shimizu en 1987 y 1985, más preferentemente MFS se determina de acuerdo con Mayet et al., lo más preferentemente, MFS se determina de acuerdo con de Simone.

El término "sujeto", como se usa en el presente documento, se refiere a animales, preferentemente mamíferos, y más preferentemente, seres humanos. El sujeto en el contexto de la presente invención puede ser hombre o mujer. Además, se concibe en particular que el sujeto sea mayor de 65 años.

En un modo de realización preferente de la presente invención, el sujeto no padece hipertrofia ventricular izquierda. En particular, se concibe en particular que el sujeto tenga una masa ventricular izquierda normal.

El término "hipertrofia ventricular izquierda" es bien conocido en la técnica. Se puede encontrar una visión general detallada de la hipertrofia ventricular izquierda, por ejemplo, en libros de texto estándar (véase Swamy Curr Cardiol Rep (2010) 12:277-282). La HVI se puede detectar por electrocardiografía, ecocardiografía o resonancia magnética nuclear (RMN) cardíaca. Preferentemente, la HVI se detecta por ecocardiografía. Además, los criterios para el diagnóstico de HVI son bien conocidos en la técnica (Mancia et al., European Heart J. 2007, 28:1462, Die Innere Medizin: Referenzwerk für den Facharzt - Wolfgang Gerok - 2007, página 293., Swamy Curr Cardiol Rep (2010) 12:277-282).

La evaluación de HVI, preferentemente, incluye mediciones del diámetro del tabique, grosor de la pared posterior del ventrículo izquierdo y diámetro telediastólico, con cálculo de la masa ventricular izquierda de acuerdo con fórmulas conocidas en la técnica. Los criterios en particular preferentes para diagnosticar HVI se divulgan, por ejemplo, en las directrices (Mancia et al., European Heart J. 2007, 28:1462). También preferentemente, los criterios se pueden obtener de las directrices ACC/AHA para la evaluación y gestión de la insuficiencia cardíaca crónica en el adulto, J. Am. Coll. Cardiol. 2001; 38;2101-2113.

Preferentemente, se usa(n) los criterios de voltaje de Cornell, los criterios de producto de Cornell, los criterios de voltaje de Sokolow-Lyon o el sistema de resultados de puntos de Romhilt-Estes (Mancia et al., European Heart J.

2007, 28:1462).

El término "hipertrofia ventricular izquierda" (abreviado "HVI") como se usa en el presente documentos, preferentemente, se refiere a un engrosamiento de las paredes de los ventrículos. La HVI es, preferentemente, una respuesta a una carga de trabajo crónicamente incrementada en el corazón. La HVI encontrada en pacientes que padecen hipertensión arterial (es decir, tensión arterial alta) es una enfermedad que requiere tratamiento. En el contexto de la presente invención, las anomalías funcionales y/o estructurales del corazón preceden típicamente a la hipertrofia ventricular izquierda y/o a la insuficiencia cardíaca.

La hipertrofia como respuesta a la poscarga incrementada asociada con la resistencia vascular periférica elevada es necesaria y protectora hasta un punto determinado. Más allá de ese punto, una variedad de disfunciones van unidas a la HVI, incluyendo menor capacidad vasodilatadora coronaria, mecánica de la pared del ventrículo izquierdo deprimida y un patrón de llenado diastólico del ventrículo izquierdo anómalo.

Preferentemente, un sujeto de sexo masculino padece HVI si el índice de masa ventricular izquierda (y, por tanto, la proporción de la masa ventricular izquierda con respecto a la superficie corporal, abreviado IMVI) es mayor de 105 g/m2, más preferentemente, es mayor de 110 g/m2, y lo más preferentemente, es mayor de 115 g/m2 (o en particular mayor de 116 g/m2). Preferentemente, un sujeto de sexo femenino padece HVI, si el IMVI es mayor de 85 g/m2, incluso más preferentemente, es mayor de 90 g/m2 y, lo más preferentemente, es mayor de 96 g/m2.

Como se expone anteriormente en el presente documento, el sujeto, preferentemente, tendrá una masa ventricular izquierda normal. Si el sujeto es hombre, se aplica lo siguiente: se considera que un sujeto tiene una masa ventricular izquierda normal, si el índice de masa ventricular izquierda del sujeto de sexo masculino es, preferentemente, igual a o menor de 105 g/m2 o, más preferentemente, es igual a o menor de 110 g/m2 o, lo más preferentemente, es igual a o menor de 115 g/m2 (o en particular igual a o menor de 116 g/m2). Si el sujeto es mujer, se aplica lo siguiente: se considera que un sujeto tiene una masa ventricular izquierda normal, si el índice de masa ventricular izquierda del sujeto es, preferentemente, igual a o menor de 85 g/m2 o, más preferentemente, es igual a o menor de 90 g/m2 o, más preferentemente, es igual a o menor de 96 g/m2. Se ha de entender que un sujeto que tiene una masa ventricular izquierda normal no padece HVI.

Preferentemente, el IMVI se determina como se divulga por Lang et al. (Recommendations for chamber quantification. Eur J Echocardiogr 2006; 7:79-108).

En un modo de realización preferente de la presente invención, el sujeto padece hipertensión. La hipertensión puede ser cualquier forma de hipertensión conocida por el experto en la técnica. En un modo de realización preferente de la presente invención, el individuo padece hipertensión arterial, hipertensión sistólica y/o diastólica. En particular, el sujeto padecerá hipertensión arterial. Preferentemente, un sujeto padece hipertensión arterial, si la tensión arterial sistólica supera 140 mmHg y/o la tensión arterial diastólica supera 90 mmHg. Más preferentemente, un sujeto padece hipertensión arterial, si la tensión arterial sistólica supera 140 mmHg y/o la tensión arterial diastólica supera 90 mmHg durante tres meses o más, seis meses o más, doce meses o más, dos años o más, tres años o más, o cinco años o más. Preferentemente, la tensión arterial elevada temporal, por ejemplo, provocada por el ejercicio físico, no está englobada en el término "hipertensión arterial".

La hipertensión puede ir unida a factores de riesgo para padecer insuficiencia cardíaca. Los factores de riesgo preferentes para padecer insuficiencia cardíaca, lesión orgánica latente, por ejemplo, del corazón, cerebro, riñones, vasos sanguíneos; obesidad, preferentemente obesidad definida como índice de masa corporal IMC < 25 kg/m2; obesidad; síndrome metabólico; diabetes mellitus de tipo 1 o de tipo 2, en particular diabetes mellitus de tipo 2; diabetes de tipo 1 con microalbuminuria, tabaquismo; antecedentes de revascularización; antecedentes de farmacoterapia cardiotóxica o abuso de alcohol; dislipidemia; colesterol total, proporción colesterol total/colesterol de las HDL, antecedentes personales de fiebre reumática; antecedentes familiares de miocardiopatía. Por tanto, pueden padecer hipertensión unida a uno o más de los factores de riesgo adicionales mencionados anteriormente. Sin embargo, también se contempla que dicho sujeto padezca hipertensión únicamente.

Además, se concibe además que el sujeto no padezca SCA (síndrome coronario agudo). El término "SCA" como se usa en el presente documento incluye IMCEST (infarto de miocardio con elevación del segmento ST); IMSEST (infarto de miocardio sin elevación del segmento ST) y angina de pecho inestable. Se concibe además que el sujeto que se va a someter a prueba no tenga antecedentes de SCA. En particular, el sujeto no habrá padecido SCA dentro de un mes antes de llevar a cabo el procedimiento de la presente invención (para ser más precisos, dentro de un mes antes de obtener la muestra).

También se contempla que el sujeto no padezca arteriopatía coronaria. El término "arteriopatía coronaria", abreviado APC, con frecuencia también llamada cardiopatía coronaria (CPC) o cardiopatía ateroesclerótica, es conocido para el experto en la técnica. Preferentemente, el término se refiere a una afección en la que los vasos sanguíneos que suministran sangre y oxígeno al corazón se estrechan. La arteriopatía coronaria está provocada normalmente por una afección llamada ateroesclerosis, que se produce cuando se acumula materia adiposa y una sustancia llamada placa en las paredes de las arterias. Esto provoca que se estrechen. En particular, la APC es el resultado de la acumulación de placas ateromatosas dentro de las paredes de las arterias que suministran al miocardio (el músculo del corazón). Preferentemente, un sujeto que padece APC tiene al menos un 50 % de estenosis (y por tanto al menos un 50 % de oclusión), en al menos una arteria coronaria principal. Por tanto, un sujeto que no padece APC, preferentemente, tiene menos de un 50 % de estenosis en las arterias coronarias principales. La forma de evaluar el grado de oclusión de una arteria coronaria es bien conocida en la técnica, preferentemente, el grado se evalúa por coronariografía. Si bien los síntomas y signos de la arteriopatía coronaria se observan en el estado avanzado de la enfermedad, la mayoría de los individuos con arteriopatía coronaria no muestran indicios de enfermedad durante décadas ya que la enfermedad evoluciona antes de que finalmente surja la primera aparición de los síntomas de un acontecimiento agudo, a menudo un infarto de miocardio "repentino".

Además, el sujeto no deberá ser gestante. Además, el sujeto no es, preferentemente, un atleta.

Se concibe además que el sujeto no padezca insuficiencia cardíaca y/o no muestre síntomas sintomáticos de insuficiencia cardíaca.

El término "insuficiencia cardíaca" como se usa en el presente documento, preferentemente, se refiere a una función sistólica y/o diastólica alterada del corazón que va unida a signos sintomáticos de insuficiencia cardíaca como es conocido para el experto en la técnica. Preferentemente, la insuficiencia cardíaca a la que se hace referencia en el presente documento también es insuficiencia cardíaca crónica. La insuficiencia cardíaca de acuerdo con la presente invención incluye insuficiencia cardíaca sintomática y/o avanzada. En la insuficiencia cardíaca sintomática, el sujeto muestra síntomas de insuficiencia cardíaca como es conocido para el experto en la técnica. Se contempla en particular que el término "insuficiencia cardíaca" como se usa en el presente documento se refiera a las fases C y D de la clasificación ACC/AHA. En estas fases, el sujeto muestra síntomas típicos de insuficiencia cardíaca, es decir, el sujeto aparentemente no está sano. El sujeto que tiene insuficiencia cardíaca y que se clasifica en la fase C o D ha experimentado cambios funcionales y/o estructurales no reversibles permanentes en su miocardio y, como consecuencia de estos cambios, no es posible un restablecimiento de la salud completo.

La clasificación ACC/AHA es una clasificación para la insuficiencia cardíaca desarrollada por el American College of Cardiology y la American Heart Association (véase J. Am. Coll. Cardiol. 2001; 38; 2101-2113, actualizado en 2005, véase J. Am. Coll. Cardiol. 2005; 46; el-e82). Se definen 4 fases A, B, C y D. Las fases A y B no son IC (insuficiencia cardíaca), pero se considera que ayudan a identificar a los pacientes temprano antes de que padezcan "verdadera" IC. Los pacientes en fases A y B se definen mejor como aquellos con factores de riesgo para la aparición de IC. Por ejemplo, los pacientes con arteriopatía coronaria, hipertensión o diabetes mellitus que aún no muestran una función del ventrículo izquierdo (VI) alterada, hipertrofia o distorsión de cavidad geométrica se considerarían como fase A, mientras que los pacientes que son asintomáticos pero muestran hipertrofia del VI (HVI, un fenómeno en el que las paredes de los ventrículos se engrosan) y/o una función VI alterada se designarían como fase B. La fase C entonces indica pacientes con síntomas actuales o pasados de IC asociados con cardiopatía estructural subyacente (la mayoría de los pacientes con IC), y la fase D designa a pacientes con verdadera IC resistente al tratamiento.

En un modo de realización preferente de la presente invención, el sujeto que se va a someter a prueba se clasifica como sujeto en fase B (de acuerdo con la clasificación ACC/AHA como se hace referencia anteriormente). Por tanto, el sujeto no muestra signos sintomáticos de insuficiencia cardíaca. Si el sujeto se clasifica como sujeto en fase B, el sujeto, preferentemente, tiene una masa ventricular izquierda normal como se especifica en otra parte en el presente documento con más detalle.

Además, se concibe que el sujeto en el contexto de la presente invención no tenga una función renal alterada. Preferentemente, el sujeto no padecerá insuficiencia renal, en particular el sujeto no padecerá insuficiencia renal aguda, crónica y/o terminal. Además, el sujeto, preferentemente, no padecerá hipertensión renal. La forma de evaluar si un sujeto presenta una función renal alterada es bien conocida en la técnica. Se pueden diagnosticar trastornos renales por cualquier medio conocido y considerado apropiado. En particular, se puede evaluar la función renal por medio de la tasa de filtración glomerular (TFG). Por ejemplo, la TFG se puede calcular por la fórmula de Cockgroft-Gault o MDRD (Levey 1999, Annals of Internal Medicine, 461-470). La Tf G es el volumen de líquido filtrado desde los capilares glomerulares renales hacia la cápsula de Bowman por unidad de tiempo. Clínicamente, esto se usa a menudo para determinar la función renal. La TFG se estimó originalmente (la TFG nunca se puede determinar, todos los cálculos derivaron de fórmulas tales como la fórmula de Cockgroft Gault o la fórmula MDRD aportan solo estimaciones y no la TFG "real") inyectando inulina en el plasma. Puesto que la inulina no se reabsorbe por el riñón después de la filtración glomerular, su tasa de excreción es directamente proporcional a la tasa de filtración de agua y solutos a través del filtro glomerular. En la práctica clínica, sin embargo, se usa el aclaramiento de creatinina para medir la TFG. La creatinina es una molécula endógena, sintetizada en el cuerpo, que se filtra libremente por el glomérulo (pero también se secreta por los túbulos renales en cantidades muy pequeñas). El aclaramiento de creatinina (CrCl) es, por lo tanto, una aproximación cercana de la TFG. La TFG se registra típicamente en mililitros por minuto (ml/min). El intervalo normal de TFG para hombres es de 97 a 137 ml/min, el intervalo normal de TFG para mujeres es de 88 a 128 ml/min. Por tanto, se contempla en particular que la TFG de un sujeto que no presenta una función renal alterada está dentro de este intervalo. Además, dicho sujeto tiene preferentemente una concentración sanguínea de creatinina (en particular una concentración sérica de creatinina) de menos de 0,9 mg/dl, más preferentemente de menos de 1,1 mg/dl y lo más preferentemente de menos de 1,3 mg/dl.

Si el procedimiento de la presente invención engloba la determinación de la cantidad de FGF-23 (y vitamina D), el sujeto, preferentemente, no deberá presentar deficiencia de vitamina D.

Además, es preferente que el sujeto en el contexto del procedimiento para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, el procedimiento para diagnosticar MFS anómala y el procedimiento para predecir el riesgo de mortalidad no tiene niveles incrementados de un péptido natriurético. Preferentemente, el sujeto no tiene niveles incrementados de un péptido natriurético cerebral. Más preferentemente, el sujeto no tiene niveles incrementados de un péptido natriurético de tipo PNC. Lo más preferentemente, el sujeto no tiene niveles incrementados de NT-proPNC. Preferentemente, el sujeto tiene un nivel de NT-proPNC de menos de 125 pg/ml para una edad <75 años, 450 pg/ml para una edad >75 años o más preferentemente de menos de 100 pg/ml para una edad <75 años, 300 pg/ml para una edad >=75 años, en particular en una muestra de sangre, suero o plasma.

El término "muestra" se refiere a una muestra de un líquido corporal, a una muestra de células separadas o a una muestra de un tejido o un órgano. Se pueden obtener muestras de líquidos corporales por técnicas bien conocidas e incluyen, preferentemente, muestras de sangre, plasma, suero u orina, más preferentemente, muestras de sangre, plasma o suero. Se pueden obtener muestras de tejidos u órganos a partir de cualquier tejido u órgano, por ejemplo, por biopsia. Se pueden obtener células separadas de los líquidos corporales o los tejidos u órganos por técnicas de separación tales como centrifugación o separación celular. Preferentemente, se obtienen muestras de células, tejidos u órganos a partir de las células, tejidos u órganos que expresan o producen los péptidos a los que se hace referencia en el presente documento.

El término "troponina cardíaca" se refiere a todas las isoformas de troponina expresadas en las células del corazón y, preferentemente, las células subendocárdicas. Estas isoformas están bien caracterizadas en la técnica como se describe, por ejemplo, en Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, n.° 4: 681-686 y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493. Preferentemente, troponina cardíaca se refiere a troponina T y/o a troponina I y, lo más preferentemente, a troponina T. Se ha de entender que las isoformas de troponinas se pueden determinar en el procedimiento de la presente invención conjuntamente, es decir, simultánea o secuencialmente, o de forma individual, es decir, sin determinar la otra isoforma en absoluto. Las secuencias de aminoácidos para la troponina T humana y troponina I humana se divulgan en Anderson, loc cit y Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493.

La expresión "troponina cardíaca" engloba también variantes de las troponinas específicas mencionadas anteriormente, es decir, preferentemente, de troponina I y más preferentemente, de troponina T. Dichas variantes tienen al menos las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales que las troponinas cardíacas específicas. En particular, comparten las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales si son detectables por los mismos ensayos específicos a los que se hace referencia en la presente memoria descriptiva, por ejemplo, por ensayos ELISA usando anticuerpos policlonales o monoclonales que reconocen específicamente las dichas troponinas cardíacas. Además, se ha de entender que una variante como se hace referencia de acuerdo con la presente invención, tendrá una secuencia de aminoácidos que difiere debido a al menos una sustitución, deleción y/o adición aminoacídica, en la que la secuencia de aminoácidos de la variante todavía es, preferentemente, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 % o al menos aproximadamente un 99 % idéntica a la secuencia amino de la troponina específica (en particular a lo largo de toda la longitud). Preferentemente, el grado de identidad se va a determinar comparando dos secuencias óptimamente alineadas en una ventana de comparación, donde el fragmento de la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o deleciones (por ejemplo, huecos o salientes) en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineación óptima. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se produce el residuo aminoacídico idéntico en ambas secuencias para proporcionar el número de posiciones emparejadas, dividiendo el número de posiciones emparejadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por

100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia. Se puede llevar a cabo la alineación óptima de secuencias para su comparación por el algoritmo de homología local de Smith y Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981), por el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970), por la búsqueda para el procedimiento de similitud de Pearson y Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988), por implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA en el paquete informático Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI) o por inspección visual. Dado que se han identificado dos secuencias para su comparación, se emplean preferentemente

GAP y BESTFIT para determinar su alineación óptima y, por tanto, el grado de identidad. Preferentemente, se usan los valores por defecto de 5,00 para peso de hueco y 0,30 para longitud de peso de hueco. Las variantes pueden ser variantes alélicas o cualquier otro homólogo, parálogo u ortólogo específico de especie. Además, las variantes a las que se hace referencia en el presente documento incluyen fragmentos de las troponinas cardíacas específicas o los tipos de variantes mencionados anteriormente siempre que estos fragmentos tengan las propiedades inmunológicas y biológicas esenciales como se hace referencia anteriormente. Preferentemente, las variantes de troponina cardíaca tienen propiedades inmunológicas (es decir, composición de epítopos) comparables a las de la troponina T o troponina I humana. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la concentración de las troponinas cardíacas. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la concentración de las troponinas cardíacas. Dichos fragmentos pueden ser, por ejemplo, productos de degradación de las troponinas. Se incluyen además variantes que difieren debido a modificaciones postraduccionales tales como fosforilación o miristilación. Preferentemente, la propiedad biológica de la troponina I y su variante es la capacidad para inhibir la ATPasa de actomiosina o para inhibir la angiogénesis in vivo e in vitro, que se puede detectar, por ejemplo, en base al ensayo descrito por Moses et al. 1999 PNAS USA

96 (6): 2645-2650). Preferentemente, la propiedad biológica de la troponina T y su variante es la capacidad para formar un complejo con troponina C e I, para unirse a iones de calcio o para unirse a tropomiosina, preferentemente si está presente como un complejo de troponina C, I y T o un complejo formado por troponina C, troponina I y una variante de troponina T. Es conocido que se pueden detectar concentraciones bajas de troponina cardíaca circulante en sujetos en diversas afecciones, pero se requieren otros estudios para entender su respectivo papel y tasa (Masson et al., Curr Heart Fail Rep (2010) 7:15-21).

Preferentemente, la troponina cardíaca es troponina T, en particular troponina T humana. Preferentemente, la cantidad de troponina T se determina usando un ensayo de troponina altamente sensible como se describe en los ejemplos, o en el documento WO2012/025355.

El factor de crecimiento de fibroblastos-23 (abreviado "FGF-23") es un actor clave en la regulación del metabolismo de fosfato de calcio y vitamina D y tiene un papel causal en la patogenia de la hipertrofia del VI, un determinante importante de los episodios cardiovasculares agudos. El factor de crecimiento de fibroblastos-23 (FGF-23) es una hormona de 32 kDa secretada en la sangre por los osteocitos óseos. Sus dos funciones son inducir la excreción urinaria de fósforo e inhibir la activación de la vitamina D; ambas acciones se producen en el túbulo proximal renal.

Se encuentran altas concentraciones de FGF-23 circulante en pacientes con insuficiencia renal terminal.

Preferentemente, el FGF-23 es FGF-23 humano. La secuencia del FGF-23 humano es bien conocida en la técnica, por ejemplo, la secuencia de secuencia amino se puede evaluar a través del número de acceso de GenBank NM_020638.1 GI: 10190673. Además, la secuencia también se divulga en Shimada et al., 2001, PNAS, vol. 98(11) página 6500 a 6505. El término "FGF-23" engloba también variantes del FGF-23 mencionado anteriormente.

Dichas variantes tienen al menos las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales que el FGF-23 específico. En particular, comparten las mismas propiedades biológicas e inmunológicas esenciales si son detectables por los mismos ensayos específicos a los que se hace referencia en la presente memoria descriptiva, por ejemplo, por ensayos ELISA que usan anticuerpos policlonales o monoclonales que reconocen específicamente el dicho FGF-23. Además, se ha de entender que una variante como se hace referencia de acuerdo con la presente invención, tendrá una secuencia de aminoácidos que difiere debido a al menos una sustitución, deleción y/o adición aminoacídica, en la que la secuencia de aminoácidos de la variante todavía es, preferentemente, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 % o al menos aproximadamente un 99 % idéntica a la secuencia amino del FGF-23 (en particular a lo largo de toda la longitud). La forma de calcular el grado de identidad se divulga en otra parte en el presente documento. Preferentemente, el FGF-23 se determina usando el kit ELISA de FGF-23 humano (extremo C) de Immutopics, Inc. (que se distribuye, por ejemplo, con el n.° de cat. 60-6100).

La determinación de la cantidad de un péptido o polipéptido, en particular de un marcador seleccionado del grupo que consiste en una troponina cardíaca, el factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF-23), IGFBP7 (proteína de unión a IGF 7), GDF-15, endostatina y mimecano, que hace referencia en la presente memoria descriptiva a que se refiere a medir la cantidad o concentración, preferentemente, semicuantitativa o cuantitativamente. La medición se puede realizar directa o indirectamente. La medición directa se refiere a medir la cantidad o concentración del péptido o polipéptido en base a una señal que se obtiene a partir del propio péptido o polipéptido y con una intensidad que se correlaciona directamente con el número de moléculas del péptido presentes en la muestra. Una señal de este tipo, en ocasiones denominada en el presente documento señal de intensidad, se puede obtener, por ejemplo, midiendo un valor de intensidad de una propiedad física o química específica del péptido o polipéptido. La medición indirecta incluye medir una señal obtenida a partir de un componente secundario (es decir, un componente que no es el propio péptido o polipéptido) o un sistema de lectura biológica, por ejemplo, respuestas celulares, ligandos, marcadores o productos de reacción enzimáticos mensurables.

De acuerdo con la presente invención, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido se puede lograr por todos los medios conocidos para determinar la cantidad de un péptido en una muestra. Dichos medios comprenden inmunoensayo y procedimientos que pueden utilizar moléculas marcadas en diversos formatos de ensayo de tipo sándwich, competencia u otros. Dichos ensayos se basan, preferentemente, en agentes de detección tales como anticuerpos que reconocen específicamente el péptido o polipéptido que se va a determinar. Los agentes de detección podrán, directa o indirectamente, generar una señal que indique la presencia o bien la ausencia del péptido o polipéptido. Además, la intensidad de la señal se puede correlacionar, preferentemente, directa o indirectamente (por ejemplo, de forma inversamente proporcional) con la cantidad de polipéptido presente en una muestra. Otros procedimientos adecuados comprenden medir una propiedad física o química específica para el péptido o polipéptido tal como su masa molecular precisa o espectro de RMN. Dichos procedimientos comprenden, preferentemente, biosensores, dispositivos ópticos acoplados a inmunoensayos, biochips, dispositivos analíticos tales como espectrómetros de masas, analizadores de RMN o dispositivos de cromatografía. Además, los procedimientos incluyen procedimientos basados en ELISA con microplacas, inmunoensayos completamente automatizados o robóticos (disponibles, por ejemplo, en ElecsysTM analyzers), CBA (un ensayo de unión a cobalto enzimático, disponible, por ejemplo, en Roche-HitachiTM analyzers) y ensayos de aglutinación de látex (disponibles, por ejemplo, en Roche-HitachiTM analyzers).

Preferentemente, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido comprende las etapas de (a) poner en contacto una célula que puede provocar una respuesta celular con una intensidad que es indicativa de la cantidad del péptido o polipéptido con el dicho péptido o polipéptido durante un período de tiempo adecuado, (b) medir la respuesta celular. Para medir respuestas celulares, la muestra o muestra procesada se añade, preferentemente, a un cultivo celular y se mide una respuesta celular interna o externa. La respuesta celular puede incluir la expresión mensurable de un gen indicador o la secreción de una sustancia, por ejemplo, un péptido, polipéptido o una molécula pequeña. La expresión o sustancia generará una señal de intensidad que se correlaciona con la cantidad del péptido o polipéptido.

También preferentemente, determinar la cantidad de un péptido o polipéptido comprende la etapa de medir una señal de intensidad específica obtenible a partir del péptido o polipéptido en la muestra. Como se describe anteriormente, una señal de este tipo puede ser la intensidad de señal observada a una variable m/z específica para el péptido o polipéptido, observada en espectros de masas o un espectro de RMN específico para el péptido o polipéptido.

Determinar la cantidad de un péptido o polipéptido puede comprender, preferentemente, las etapas de (a) poner en contacto el péptido con un ligando específico, (b) (opcionalmente) retirar el ligando no unido, (c) medir la cantidad de ligando unido, es decir, el complejo del ligando formado en la etapa (a). De acuerdo con un modo de realización preferente, dichas etapas de poner en contacto, retirar y medir se pueden realizar por una unidad analizadora del sistema divulgado en el presente documento. De acuerdo con algunos modos de realización, dichas etapas se pueden realizar por una única unidad analizadora de dicho sistema o por más de una unidad analizadora en comunicación funcional entre sí. Por ejemplo, de acuerdo con un modo de realización específico, dicho sistema divulgado en el presente documento puede incluir una primera unidad analizadora para realizar dichas etapas de poner en contacto y retirar y una segunda unidad analizadora, conectada de forma funcional a dicha primera unidad analizadora por una unidad de transporte (por ejemplo, un brazo robótico), que realiza dicha etapa de medir.

El ligando unido, es decir, el ligando o el complejo ligando/péptido, generará una señal de intensidad. La unión de acuerdo con la presente invención incluye unión tanto covalente como no covalente. Un ligando de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier compuesto, por ejemplo, un péptido, polipéptido, ácido nucleico o molécula pequeña, que se une al péptido o polipéptido descrito en el presente documento. Los ligandos preferentes incluyen anticuerpos, ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos tales como receptores o compañeros de unión para el péptido o polipéptido y fragmentos de los mismos que comprenden los dominios de unión para los péptidos, y aptámeros, por ejemplo, aptámeros de ácidos nucleicos o péptidos. Los procedimientos para preparar dichos ligandos son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la identificación y producción de anticuerpos o aptámeros adecuados también se ofrece por proveedores comerciales. El experto en la técnica está familiarizado con procedimientos para desarrollar derivados de dichos ligandos con mayor afinidad o especificidad. Por ejemplo, se pueden introducir mutaciones aleatorias en los ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos. Estos derivados se pueden someter a prueba a continuación para determinar la unión de acuerdo con procedimientos de cribado conocidos en la técnica, por ejemplo, presentación en fagos. Los anticuerpos como se hace referencia en el presente documento incluyen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales, así como fragmentos de los mismos, tales como fragmentos Fv, Fab y F(ab)2 que se pueden unir a antígeno o hapteno. La presente invención también incluye anticuerpos monocatenarios y anticuerpos híbridos humanizados en los que las secuencias de aminoácidos de un anticuerpo donante no humano que presentan una especificidad de antígeno deseada se combinan con secuencias de un anticuerpo aceptor humano. Las secuencias donantes incluirán normalmente al menos los residuos aminoacídicos de unión a antígeno del donante, pero pueden comprender además otros residuos aminoacídicos estructural y/o funcionalmente pertinentes del anticuerpo donante. Dichos híbridos se pueden preparar por diversos procedimientos bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el ligando o agente se une específicamente al péptido o polipéptido. La unión específica de acuerdo con la presente invención significa que el ligando o agente no se debe unir sustancialmente a ("reaccionar de forma cruzada" con) otro péptido, polipéptido o sustancia presente en la muestra que se va a analizar. Preferentemente, el péptido o polipéptido unido específicamente se debe unir con una afinidad al menos 3 veces mayor, más preferentemente al menos 10 veces mayor e incluso más preferentemente al menos 50 veces mayor que cualquier otro péptido o polipéptido pertinente. La unión inespecífica puede ser tolerable, si todavía se puede distinguir y medir inequívocamente, por ejemplo, de acuerdo con su tamaño en una inmunotransferencia, o por su abundancia relativamente mayor en la muestra. La unión del ligando se puede medir por cualquier procedimiento conocido en la técnica. Preferentemente, dicho procedimiento es semicuantitativo o cuantitativo. A continuación se describen otras técnicas adecuadas para la determinación de un polipéptido o péptido.

La unión de un ligando se puede medir directamente, por ejemplo, por RMN o resonancia de plasmón superficial. La medición de la unión de un ligando, de acuerdo con modos de realización preferentes, se realiza por una unidad analizadora de un sistema divulgado en el presente documento. Después de esto, se puede calcular una cantidad de la unión medida por un dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento. Si el ligando también sirve como sustrato de una actividad enzimática del péptido o polipéptido de interés, se puede medir un producto de reacción enzimático (por ejemplo, se puede medir la cantidad de una proteasa midiendo la cantidad de sustrato escindido, por ejemplo, en una inmunoelectrotransferencia). De forma alternativa, el ligando puede presentar propiedades enzimáticas por sí mismo y el complejo "ligando/péptido o polipéptido" o el ligando que se unió por el péptido o polipéptido, respectivamente, se puede poner en contacto con un sustrato adecuado permitiendo la detección por la generación de una señal de intensidad. Para la medición de productos de reacción enzimáticos, preferentemente la cantidad de sustrato es saturante. El sustrato también se puede marcar con un marcador detectable antes de la reacción. Preferentemente, la muestra se pone en contacto con el sustrato durante un período de tiempo adecuado. Un período de tiempo adecuado se refiere al tiempo necesario para que se produzca una cantidad de producto detectable, preferentemente mensurable. En lugar de medir la cantidad de producto, se puede medir el tiempo necesario para la aparición de una cantidad dada (por ejemplo, detectable) de producto. En tercer lugar, el ligando se puede acoplar de forma covalente o no covalente a un marcador permitiendo la detección y medición del ligando. Se puede realizar el marcaje por procedimientos directos o indirectos. El marcaje directo implica el acoplamiento del marcador directamente (de forma covalente o no covalente) al ligando. El marcaje indirecto implica la unión (de forma covalente o no covalente) de un ligando secundario al primer ligando. El ligando secundario se deber unir específicamente al primer ligando. Dicho ligando secundario se puede acoplar a un marcador adecuado y/o ser la diana (receptor) del ligando terciario que se une al ligando secundario. El uso de ligandos secundarios, terciarios o incluso de orden superior se usa a menudo para incrementar la señal. Los ligandos secundarios y de orden superior adecuados pueden incluir anticuerpos, anticuerpos secundarios y el sistema de estreptavidina-biotina bien conocido (Vector Laboratories, Inc.). El ligando o sustrato también se puede "marcar" con una o más marcas como es conocido en la técnica. Dichas marcas pueden ser entonces dianas para ligandos de orden superior. Las marcas adecuadas incluyen biotina, digoxigenina, marca His, glutatión-S-transferasa, FLAG, GFP, marca myc, hemaglutinina (HA) del virus de la gripe A, proteína de unión a maltosa y similares. En el caso de un péptido o polipéptido, la marca está preferentemente en el extremo N y/o el extremo C. Los marcadores adecuados son cualquier marcador detectable por un procedimiento de detección apropiado. Los marcadores típicos incluyen partículas de oro, microesferas de látex, éster de acridano, luminol, rutenio, marcadores enzimáticamente activos, marcadores radioactivos, marcadores magnéticos ("por ejemplo, microesferas magnéticas", incluyendo marcadores paramagnéticos y superparamagnéticos) y marcadores fluorescentes. Los marcadores enzimáticamente activos incluyen, por ejemplo, peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, luciferasa y derivados de las mismas. Los sustratos adecuados para detección incluyen di-amino-bencidina (DAB), 3,3'-5,5'-tetrametilbencidina, NBT-BCIP (cloruro de 4-nitroazul de tetrazolio y 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato, disponible como solución madre preparada de Roche Diagnostics), CDP-Star™ (Amersham Bio-sciences), ECF™ (Amersham Biosciences). Una combinación enzima-sustrato adecuada puede dar como resultado un producto de reacción coloreado, fluorescencia o quimioluminiscencia, que se puede medir de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica (por ejemplo, usando una película sensible a la luz o un sistema de cámara adecuado). En cuanto a medir la reacción enzimática, los criterios dados anteriormente se aplican de forma análoga. Los marcadores fluorescentes típicos incluyen proteínas fluorescentes (tales como GFP y sus derivados), Cy3, Cy5, Texas Red, fluoresceína y los tintes Alexa (por ejemplo, Alexa 568). Otros marcadores fluorescentes están disponibles, por ejemplo, de Molecular Probes (Oregón). También se contempla el uso de puntos cuánticos como marcadores fluorescentes. Los marcadores radioactivos típicos incluyen 35S, 125I, 32P, 33P y similares. Un marcador radioactivo se puede detectar por cualquier procedimiento conocido y apropiado, por ejemplo, una película sensible a la luz o un aparato de diagnóstico con fósforo. Los procedimientos de medición adecuados de acuerdo con la presente invención también incluyen precipitación (en particular inmunoprecipitación), electroquimioluminiscencia (quimioluminiscencia electrogenerada), RIA (radioinmunoanálisis), ELISA (ensayo de inmunoadsorción enzimática), inmunoensayos enzimáticos de tipo sandwich, inmunoanálisis de tipo sandwich de electroquimioluminiscencia (ECLIA), fluoroinmunoanálisis de lantánidos potenciado por disociación (DELFIA), análisis de proximidad de centelleo (SPA), turbidimetría, nefelometría, turbidimetría o nefelometría potenciada con látex o inmunoensayos en fase sólida. Otros procedimientos conocidos en la técnica (tales como electroforesis en gel, electroforesis en gel 2D, electroforesis en gel de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE), inmunoelectrotransferencia y espectrometría de masas) se pueden usar solos o en combinación con marcaje u otros procedimientos de detección como se describe anteriormente.

La cantidad de un péptido o polipéptido se puede determinar, también preferentemente, como sigue: (a) poner en contacto un soporte sólido que comprende un ligando para el péptido o polipéptido como se especifica anteriormente con una muestra que comprende el péptido o polipéptido y (b) medir la cantidad de péptido o polipéptido que se une al soporte. El ligando, preferentemente elegido del grupo que consiste en ácidos nucleicos, péptidos, polipéptidos, anticuerpos y aptámeros, está preferentemente presente sobre un soporte sólido en forma inmovilizada. Los materiales para fabricar soportes sólidos son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros, materiales de columna disponibles comercialmente, microesferas de poliestireno, microesferas de látex, microesferas magnéticas, partículas metálicas coloidales, superficies y chips de vidrio y/o silicio, tiras de nitrocelulosa, membranas, láminas, Duracyte, pocillos y paredes de bandejas de reacción, tubos de plástico, etc. El ligando o agente puede estar unido a muchos vehículos diferentes. Los ejemplos de vehículos bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno, poli(cloruro de vinilo), polipropileno, polietileno, policarbonato, dextrano, nailon, amilosas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas, agarosas y magnetita. La naturaleza del vehículo puede ser soluble o bien insoluble para los propósitos de la invención. Los procedimientos adecuados para fijar/inmovilizar dicho ligando son bien conocidos e incluyen, pero no se limitan a interacciones iónicas, hidrófobas, covalentes y similares. También se contempla usar "matrices de suspensión" como matrices de acuerdo con la presente invención (Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12). En dichas matrices de suspensión, el vehículo, por ejemplo, una microesfera, está presente en suspensión. La matriz consiste en diferentes microesferas, posiblemente marcadas, que portan diferentes ligandos. En general son conocidos procedimientos de producción de dichas matrices, por ejemplo, en base a la química en fase sólida y grupos protectores fotolábiles (documento US 5.744.305).

Preferentemente, la cantidad de los marcadores como se hace referencia en el presente documento se determina usando los ensayos descritos en el ejemplo 1 y 2.

El término "cantidad" como se usa en el presente documento engloba la cantidad absoluta de un polipéptido o péptido, la cantidad o concentración relativa del dicho polipéptido o péptido así como cualquier valor o parámetro que se correlaciona con el mismo o se puede derivar del mismo. Dichos valores o parámetros comprenden valores de señal de intensidad de todas las propiedades físicas o químicas específicas obtenidas de los dichos péptidos por mediciones directas, por ejemplo, valores de intensidad en espectros de masas o espectros de RMN. Además, se engloban todos los valores o parámetros que se obtienen por mediciones indirectas especificadas en otra parte en esta descripción, por ejemplo, cantidades de respuesta determinadas a partir de sistemas de lectura biológicos en respuesta a los péptidos o señales de intensidad obtenidas de ligandos unidos específicamente. Se ha de entender que los valores que se correlacionan con las cantidades o parámetros mencionados anteriormente también se pueden obtener por todas las operaciones matemáticas estándar.

El término "comparar" como se usa en el presente documento engloba comparar la cantidad de un marcador como se hace referencia en el presente documento, en particular de péptido o polipéptido comprendido por la muestra que se va a analizar con una cantidad de una fuente de referencia adecuada en otra parte en esta descripción. Se ha de entender que comparar como se usa en el presente documento se refiere a una comparación de parámetros o valores correspondientes, por ejemplo, una cantidad absoluta se compara con una cantidad de referencia absoluta mientras que una concentración se compara con una concentración de referencia o una señal de intensidad obtenida a partir de una muestra de prueba se compara con el mismo tipo de señal de intensidad de una muestra de referencia. La comparación a la que se hace referencia en la etapa (b) del procedimiento de la presente invención se puede llevar a cabo manualmente o por un dispositivo informático (por ejemplo, de un sistema divulgado en el presente documento). Para una comparación asistida por ordenador, el valor de la cantidad determinada se puede comparar con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos por un programa informático. El programa informático puede evaluar además el resultado de la comparación, es decir, proporciona automáticamente la evaluación deseada en un formato de salida adecuado. El dicho resultado puede servir o no, preferentemente, como ayuda para evaluar si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes como se expone en otra parte en el presente documento. Por ejemplo, un resultado de una comparación se puede dar como datos brutos (cantidades absolutas o relativas) y, en algunos casos, como indicador en forma de una palabra, frase, símbolo o valor numérico que puede ser indicativo de un diagnóstico/evaluación particular. Por lo tanto, la cantidad de referencia se ha de elegir de modo que una diferencia o bien una similitud en las cantidades comparadas permita llevar a cabo la evaluación o el diagnóstico como se divulga en el presente documento.

El término "cantidad de referencia", como se usa en el presente documento, se refiere a una cantidad que permite la asignación de un sujeto al grupo de sujetos que se deberán someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes o bien a un grupo de sujetos que no se deberán someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Una cantidad de referencia de este tipo puede ser una cantidad umbral que separa estos grupos entre sí. En consecuencia, la cantidad de referencia para un biomarcador como se hace referencia en el presente documento, en particular de una troponina cardíaca o FGF-23, será una cantidad que permita la asignación de un sujeto a un grupo de sujetos que se deberán someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, o a un grupo de sujetos que no se deberán someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Una cantidad de umbral adecuada que separa los dos grupos se puede calcular sin más preámbulos por las pruebas estadísticas a las que se hace referencia en otra parte en el presente documento en base a las cantidades del marcador como se hace referencia en el presente documento de un sujeto o grupo de sujetos que se deberán someter a la evaluación, o bien un sujeto o grupo de sujetos que no se deberán someter a la evaluación. Las cantidades de referencia preferentes que se pueden derivar de los sujetos o grupo de sujetos mencionados anteriormente se indican en otra parte en el presente documento.

La cantidad de referencia se puede usar para definir y establecer una cantidad umbral. La cantidad umbral, preferentemente, permite una admisión y/o un descarte que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Dicha admisión y/o descarte se puede proporcionar por el dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento en base a dicha comparación de la "cantidad" calculada con una referencia o un umbral. Por ejemplo, un dispositivo informático de un sistema puede proporcionar un indicador, en forma de una palabra, símbolo o valor numérico que sea indicativo de una admisión o un descarte. La cantidad de referencia aplicable para un sujeto individual puede variar dependiendo de diversos parámetros fisiológicos tales como edad, sexo o subpoblación, así como de los medios usados para la determinación del polipéptido o péptido al que se hace referencia en el presente documento. Se puede determinar una cantidad de referencia adecuada a partir de una muestra de referencia que se va a analizar conjuntamente, es decir, simultánea o posteriormente, con la muestra de prueba.

Preferentemente, la cantidad de referencia es una cantidad de referencia calculada. Preferentemente, la cantidad de referencia calculada permitirá diferenciar entre un sujeto que se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes y un sujeto que no se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Las cantidades de referencia se pueden calcular, en principio, para una cohorte de sujetos como se especifica anteriormente en base a los valores medios o promedios para un biomarcador dado aplicando procedimientos estadísticos estándar. En particular, la exactitud de una prueba tal como un procedimiento que tiene como objetivo diagnosticar un acontecimiento, o no, se describe mejor por sus características operativas del receptor (ROC) (véase en especial Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577). El gráfico ROC es una curva de todos los pares de sensibilidad/especificidad resultantes de variar continuamente el umbral de decisión en todo el intervalo de datos observado. El rendimiento clínico de un procedimiento de diagnóstico depende de su exactitud, es decir, su capacidad para asignar correctamente los sujetos a una determinada evaluación, pronóstico o diagnóstico. La curva ROC indica la superposición entre las dos distribuciones representando la sensibilidad frente a la 1-especificidad para el intervalo completo de umbrales adecuados para realizar una distinción. En el eje y está la sensibilidad, o la fracción de positivos verdaderos, que se define como la proporción del número de resultados de prueba positivos verdaderos con respecto al producto del número de resultados de prueba positivos verdaderos y el número de negativos falsos. Esto también se ha denominado positividad en presencia de una enfermedad o afección. Se calcula exclusivamente a partir del subgrupo afectado. En el eje x esta la fracción de positivos falsos, o 1-especificidad, que se define como la proporción del número de resultados positivos falsos con respecto al producto del número de resultados negativos verdaderos y el número de positivos falsos. Es un índice de especificidad y se calcula en su totalidad a partir del subgrupo no afectado. Debido a que las fracciones de positivos verdaderos y falsos se calculan en su totalidad por separado, usando los resultados de prueba de dos subgrupos diferentes, la curva ROC es independiente de la prevalencia del acontecimiento en la cohorte. Cada punto en la curva ROC representa un par de sensibilidad/-especificidad correspondiente a un umbral de decisión particular. Una prueba con discriminación perfecta (sin solapamiento en las dos distribuciones de resultados) tiene una curva ROC que pasa a través de la esquina izquierda superior, donde la fracción de positivos verdaderos es de 1,0, o de un 100 % (sensibilidad perfecta), y la fracción de positivos falsos es de 0 (especificidad perfecta). La curva teórica para una prueba sin ninguna discriminación (distribuciones de resultados idénticas para los dos grupos) es una línea diagonal a 45° desde la esquina inferior izquierda a la esquina superior derecha. La mayoría de las curvas se encuentran entre estos dos extremos. Si la curva ROC se encuentra completamente por debajo de la diagonal a 45°, esto se rectifica fácilmente invirtiendo el criterio para "positividad" de "mayor que" a "menor que" o viceversa. Cualitativamente, cuanto más cerca esté la curva de la esquina superior izquierda, mayor será la exactitud global de la prueba. Dependiendo de un intervalo de confianza deseado, se puede derivar un umbral de la curva ROC que permita el diagnóstico o la predicción de un acontecimiento dado con un equilibrio apropiado de sensibilidad y especificidad, respectivamente. En consecuencia, la referencia que se va a usar para el procedimiento mencionado anteriormente de la presente invención puede ser, preferentemente, una cantidad umbral o de corte y se puede generar, preferentemente, estableciendo una ROC para dicha cohorte como se describe anteriormente y derivando una cantidad umbral a partir de la misma. Dependiendo de una sensibilidad y especificidad deseadas para un procedimiento de diagnóstico, la curva ROC permite derivar umbrales adecuados.

Una cantidad de referencia preferente está dentro de un intervalo de 5 a 6 pg/ml para una troponina cardíaca, en particular para la troponina T. Una cantidad de referencia en particular preferente es de 5,9 pg/ml.

Una cantidad de referencia preferente está dentro de un intervalo de 73 a 77 pg/ml para FGF-23. Una cantidad de referencia en particular preferente es de 74 UR/ml. Preferentemente, la cantidad de marcadores se determina usando los ensayos que se describen en los ejemplos 1 y 2.

Preferentemente, lo siguiente se aplica como algoritmo de diagnóstico (en particular si la referencia es una cantidad de referencia calculada):

Preferentemente, una cantidad incrementada del marcador (y, por tanto, de una troponina cardíaca y/o FGF-23) en la muestra del sujeto en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. También preferentemente, una cantidad disminuida del/de los marcador(es) en la muestra del sujeto en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto no se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Como se expone anteriormente en el presente documento, la cantidad de referencia se puede derivar de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que es/son susceptible(s) de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En este caso, una cantidad del/de los marcador(es) que se va a determinar en el contexto de la presente invención que es esencialmente idéntica o que es mayor que la(s) cantidad(es) de referencia indica que el sujeto que se va a someter a prueba se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Preferentemente, la cantidad de referencia se deriva de una muestra de dicho sujeto o de muestras de dicho grupo de sujetos. Preferentemente, un sujeto que se sabe que es susceptible de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es un sujeto que padece un fraccionamiento de la pared media anómalo (el término "fraccionamiento de la pared media anómalo" se especifica en otra parte en el presente documento).

Preferentemente, aplicando la cantidad de referencia mencionada anteriormente, se puede admitir que el sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes.

Adicionalmente o de forma alternativa, la cantidad de referencia se puede derivar, preferentemente, de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que no es/son susceptible(s) de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En este caso, una cantidad del/de los marcador(es) que se va a determinar en el contexto de la presente invención que es esencialmente idéntica o que es menor que la(s) cantidad(es) de referencia indica que el sujeto que se va a someter a prueba no se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Preferentemente, la cantidad de referencia se deriva de una muestra de dicho sujeto o de muestras de dicho grupo de sujetos. Preferentemente, un sujeto del que se sabe que no es susceptible de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es un sujeto que no padece fraccionamiento de la pared media anómalo (el término "fraccionamiento de la pared media anómalo" se especifica en otra parte en el presente documento).

Preferentemente, aplicando la cantidad de referencia mencionada anteriormente, se puede descartar que el sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes.

Además, si la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que no es/son susceptible(s) de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, en particular de un sujeto o grupo de sujetos que no padece(n) de fraccionamiento de la pared media anómalo, se aplica lo siguiente como algoritmo de diagnóstico: Preferentemente, una cantidad de troponina cardíaca, en particular, de troponina T, que es al menos un 10 %, o, más preferentemente, al menos un 25 % mayor que la cantidad de referencia de la troponina cardíaca, en particular, de troponina T, es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. También preferentemente, una cantidad de FGF-23 que es al menos un 5 % o, más preferentemente, al menos un 10 % mayor o, incluso más preferentemente, al menos un 25 % mayor que la cantidad de referencia de FGF-23 es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

La definición del término "sujeto" se da en otra parte en el presente documento. Las definiciones también se aplican al/a los sujeto(s) de referencia de acuerdo con los procedimientos de la presente invención (es decir, a los sujetos de los que se derivan las cantidades de referencia). Preferentemente, el sujeto que se va a someter a prueba y el/los sujeto(s) de referencia tienen la misma edad, sexo y/o raza. En consecuencia, es preferente que la cantidad de referencia se ajuste por edad, sexo y/o raza. También preferentemente, el sujeto que se va a someter a prueba y el/los sujeto(s) de referencia pueden padecer hipertensión, en particular, hipertensión unida a los mismos factores de riesgo (para los factores de riesgo, véase en otra parte en el presente documento).

Los marcadores como se hace referencia en el presente documento se pueden determinar solos. Sin embargo, se pueden determinar conjuntamente, es decir, el procedimiento de la presente invención puede englobar la determinación de una troponina cardíaca y FGF-23.

Además, en un modo de realización de la presente invención se contempla determinar además la cantidad de vitamina D en la etapa a) además de la determinación de FGF-23, para calcular una proporción entre la cantidad de FGF-23 y la cantidad de vitamina D en una etapa adicional a1), y comparar la proporción calculada, por tanto, con una proporción de referencia.

En consecuencia, la presente divulgación también se refiere a un procedimiento para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes que comprende las etapas de

a) determinar la cantidad del factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF-23) y la cantidad de vitamina D en una muestra del sujeto,

a1) calcular una proporción entre la cantidad de FGF-23 y la cantidad de vitamina D, y

b) comparar la proporción calculada, por tanto, con una proporción de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Las cantidades de FGF-23 y vitamina D se pueden determinar en diferentes muestras del sujeto. Sin embargo, también se contempla determinar las cantidades en la misma muestra.

Preferentemente, el procedimiento mencionado anteriormente puede comprender además la determinación de la cantidad de una troponina cardíaca en la muestra (en la etapa a)), y la comparación de la cantidad determinada, por tanto, con una cantidad de referencia (en la etapa b)).

Preferentemente, la evaluación de si el sujeto se deberá someter a la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes se basa en los resultados de la(s) comparación/comparaciones llevada(s) a cabo en la etapa b).

La proporción entre la cantidad de FGF-23 y la cantidad de vitamina D puede ser la proporción de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D o puede ser la proporción de la cantidad de vitamina D con respecto a la cantidad de FGF-23.

Las proporciones de referencia adecuadas se pueden determinar por el experto en la técnica sin más preámbulos como se expone anteriormente en el presente documento en el contexto de la cantidad de referencia.

Preferentemente, si la proporción es la proporción de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D, también se aplica lo siguiente como algoritmo de diagnóstico:

Preferentemente, una proporción incrementada de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D en la muestra del sujeto en comparación con la proporción de referencia (de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D) indica que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. También preferentemente, una proporción disminuida de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D en la muestra del sujeto en comparación con la proporción de referencia (de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D) indica que el sujeto no se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

La proporción de referencia de FGF-23 con respecto a vitamina D se puede derivar de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que son susceptibles de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En este caso, una proporción de FGF-23 con respecto a vitamina D que es esencialmente idéntica o que es mayor que la proporción de referencia indica que el sujeto se deberá someter a dicha evaluación. Preferentemente, la proporción de referencia se deriva de una muestra de dicho sujeto o de muestras de dicho grupo de sujetos. Preferentemente, un sujeto que se sabe que es susceptible de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es un sujeto que padece MFS anómala.

Preferentemente, aplicando la proporción de referencia mencionada anteriormente se puede admitir que el sujeto se deba someter a dicha evaluación.

Adicionalmente o de forma alternativa, la proporción de referencia de FGF-23 con respecto a vitamina D se puede derivar, preferentemente, de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que no son susceptibles de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. En este caso, una proporción de FGF-23 con respecto a vitamina D en la muestra de prueba que es esencialmente idéntica o que es menor que la proporción de referencia indica que el sujeto no se deberá someter a dicha evaluación. Preferentemente, la proporción de referencia se deriva de una muestra de dicho sujeto o de muestras de dicho grupo de sujetos. Preferentemente, un sujeto que se sabe que no es susceptible de una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es un sujeto que no padece MFS anómala.

Preferentemente, aplicando la proporción de referencia mencionada anteriormente se puede descartar que el sujeto se deba someter a dicha evaluación.

También preferentemente, si la proporción de referencia de FGF-23 con respecto a vitamina D se deriva de un sujeto o de un grupo de sujetos que se sabe que no padecen fraccionamiento de la pared media anómalo, también se aplica lo siguiente como algoritmo de diagnóstico: Preferentemente, una proporción de FGF-23 con respecto a vitamina D en la muestra de prueba que es al menos un 5 % o, más preferentemente, al menos un 10 % mayor que la proporción de referencia es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

El término "vitamina D" se entiende bien por el experto en la técnica. Como se usa en el presente documento, el término, preferentemente, se refiere a un grupo de prohormonas liposolubles, de las que las dos formas principales son la vitamina D2 (también denominada ergocalciferol) y la vitamina D3 (también denominada colecalciferol). Preferentemente, el término engloba la vitamina D en cualquiera de sus formas, en particular la vitamina D1, la vitamina D2, la vitamina D3 o la vitamina D4. Además, se concibe que el término englobe cualquier precursor de la misma. La vitamina D se obtiene típicamente en un organismo a partir de la exposición al sol, alimentos y complementos, es biológicamente inerte y experimenta dos reacciones de hidroxilación para activarse en el organismo. Por ejemplo, una forma activa de vitamina D encontrada en los seres humanos es el calcitriol.

Es conocido en la técnica que el procedimiento más exacto para determinar la cantidad de vitamina D es por medio de la determinación de 25-hidroxivitamina D. La 25-hidroxivitamina D es una prehormona que se produce en el hígado por hidroxilación de vitamina D3 (colecalciferol) por la enzima colecalciferol 25-hidroxilasa. Por lo tanto, el término "vitamina D", en particular, se refiere a 25-hidroxivitamina D. En consecuencia, es en particular preferente en el contexto de la presente invención determinar la cantidad de 25-hidroxivitamina D en una muestra del sujeto.

En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, la cantidad (proporción) de referencia del/de los marcador(es) que se va a determinar en el contexto del procedimiento es la cantidad (proporción) del/de los marcador(es) en una muestra del sujeto (de prueba) que se ha obtenido antes de la muestra como se expone en la etapa a).

En el contexto de la presente solicitud, la muestra que se ha obtenido antes de la muestra como se expone en la etapa a), también se denomina "primera muestra", en la que la muestra de prueba expuesta en la etapa a) se denomina "segunda muestra" puesto que se obtendrá después de la primera muestra.

En consecuencia, la presente invención se refiere a un procedimiento de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en imágenes que comprende las etapas

a) determinar la(s) cantidad(es) de troponina cardíaca y/o factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF-23) en una primera muestra y una segunda muestra del sujeto, y

b) comparar la(s) cantidad(es) determinada(s), por tanto, en la segunda muestra con la(s) cantidad(es) en la primera muestra, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Como se expone anteriormente en el presente documento, la segunda muestra se habrá obtenido después de la primera muestra (en otras palabras: la primera muestra se habrá obtenido antes de la segunda muestra). Se contempla en particular que la segunda muestra se obtenga después de un período de tiempo razonable después de obtener la primera muestra. Se ha de entender que las cantidades de biomarcadores a las que se hace referencia en el presente documento no cambian instantáneamente (por ejemplo, en 1 minuto o 1 hora). Por lo tanto, "razonable" en este contexto se refiere a los intervalos entre obtener la primera y la segunda muestra permitiendo los intervalos que se ajuste(n) el/los biomarcador(es). Preferentemente, la segunda muestra se habrá obtenido de 1 a 24 meses después de la primera muestra. Más preferentemente, la segunda muestra se habrá obtenido de 6 a18 meses después de la primera muestra. Incluso más preferentemente, la segunda muestra se habrá obtenido de 6 a 12 meses después de la primera muestra. Lo más preferentemente, la segunda muestra se habrá obtenido de 9 a 12 meses después de la primera muestra. De acuerdo con la primera muestra se habrá obtenido, preferentemente, de 1 a 24 meses, más preferentemente, de 6 a 18 meses, incluso más preferentemente, de 6 a 12 meses o, lo más preferentemente, de 9 a 12 meses antes de la segunda muestra.

También se concibe evaluar la evolución temporal de la cantidad de los marcadores como se hace referencia en el procedimiento de la presente invención, es decir, de una troponina cardíaca y/o de FGF-23 (o la evolución temporal de una proporción entre FGF-23 y vitamina D en un sujeto como se expone en el presente documento. En consecuencia, el procedimiento mencionado anteriormente puede comprender la etapa adicional de determinar la cantidad de una troponina cardíaca y/o FGF-23 (o una proporción entre FGF-23 y vitamina D) en al menos una muestra adicional de dicho sujeto (por tanto, en un tercera muestra, en una cuarta muestra, en una quinta muestra, etc.) y comparar la cantidad (proporción) determinada, por tanto, con la cantidad de dicha proporción de troponina cardíaca y FGF-23 (o proporción entre FGF-23 y vitamina D), respectivamente, en dicha primera muestra y/o dicha segunda muestra y/o cualquier muestra que se obtuvo antes de que se obtuviera dicha al menos una muestra adicional. Para los intervalos de tiempo preferentes para obtener las muestras, véase anteriormente.

Preferentemente, un incremento y, más preferentemente, un incremento significativo y, lo más preferentemente, un incremento estadísticamente significativo de la cantidad de una troponina cardíaca y/o FGF-23 (y/o de la proporción de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D) en la segunda muestra en comparación con la primera muestra indica que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Preferentemente, una disminución y, más preferentemente, una disminución significativa y, lo más preferentemente, una disminución estadísticamente significativa de la cantidad de una troponina cardíaca y/o FGF-23 (y/o de la proporción de la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D), o una cantidad esencialmente inalterada de una troponina cardíaca y/o FGF-23 (o una proporción esencialmente inalterada) en la segunda muestra en comparación con la primera muestra indica que el sujeto no se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

En particular, un incremento significativo es un incremento de un tamaño que se considera que es significativo para la evaluación, en particular dicho incremento se considera estadísticamente significativo.

Los términos "significativo" y "estadísticamente significativo" son conocidos por el experto en la técnica. Por tanto, se puede determinar si un incremento o disminución es significativo o estadísticamente significativo sin más preámbulos por el experto en la técnica usando diversas herramientas de evaluación estadística bien conocidas.

Los incrementos significativos preferentes de la cantidad de una troponina cardíaca y/o de FGF-23 (o una proporción de FGF-23 con respecto a vitamina D), preferentemente de la cantidad (proporción) del/de los biomarcador(es) en una muestra de sangre, suero o plasma, que se ha encontrado en el transcurso de la invención que es indicativa de que el sujeto se deberá someter o no a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, se dan en el presente documento a continuación.

Si el marcador es una troponina cardíaca, se aplica lo siguiente:

Preferentemente, una cantidad de una troponina cardíaca, en particular, de troponina T, en la segunda muestra que es al menos un 10 % o, más preferentemente, al menos un 25 % mayor que la cantidad de referencia (la cantidad de la troponina cardíaca en la primera muestra) es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Además, de acuerdo con la invención, un incremento de la cantidad de una troponina cardíaca, en particular de troponina T, en la segunda muestra en comparación con la cantidad en la primera muestra, preferentemente de al menos 0,5 pg/ml, más preferentemente de al menos 1,0 pg/ml e incluso, más preferentemente, de al menos 1,5 pg/ml, de al menos 2,0 pg/ml o de al menos 2,5 pg/ml, de al menos 3,0 pg/ml y lo más preferentemente de al menos 4,0 pg/ml se considera que es significativo y, por tanto, indica que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Si el marcador es FGF-23, se aplica lo siguiente:

Preferentemente, una cantidad de un FGF-23 en la segunda muestra que es al menos un 5 % o, más preferentemente, al menos un 10 % mayor que la cantidad de referencia (la cantidad de FGF-23 en la primera muestra) es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Además, de acuerdo con la invención, un incremento de la cantidad de FGF-23 en la segunda muestra en comparación con la cantidad en la primera muestra, preferentemente, de al menos 1,0 pg/ml, más preferentemente de al menos 2,0 pg/ml e incluso, más preferentemente, de al menos 3,0 pg/ml, de al menos 4,0 pg/ml o de al menos 5,0 pg/ml, de al menos 6,0 pg/ml y lo más preferentemente de al menos 7,0 pg/ml se considera que es significativo y, por tanto, indica que el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Si se determina la proporción de FGF-23 con respecto a vitamina D, se aplica lo siguiente.

Preferentemente, una proporción, en la segunda muestra que es al menos un 5 % o, más preferentemente, al menos un 10 % mayor que la proporción de referencia (la proporción en la primera muestra) es indicativa de que un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

En un modo de realización preferente del procedimiento mencionado anteriormente, el sujeto que se va a someter a prueba no padecía MFS anómala en el momento en que se obtuvo la primera muestra. Además, fue preferente que el sujeto no padeciera disfunción diastólica y/o sistólica en el momento en que se obtuvo la primera muestra. Sin embargo, el sujeto debía padecer hipertensión en el momento en que se obtuvo la primera muestra. La hipertensión puede ir unida a factores de riesgo como se expone en otra parte en el presente documento. Preferentemente, se clasifica como sujeto en fase A de acuerdo con la clasificación ACC/AHA como se hace referencia anteriormente en el momento en que se obtuvo la primera muestra.

En un ejemplo preferente, el procedimiento comprende además la etapa de recomendar un tratamiento, si el sujeto que se va a someter a prueba padece MFS anómala y/o si el sujeto que se va a someter a prueba se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Los tratamientos preferentes como se usa en el contexto de la presente invención engloban cambios en el estilo de vida, régimen alimenticio, intervenciones en el cuerpo, así como la administración de fármacos apropiados para el tratamiento del sujeto.

Los fármacos adecuados para el tratamiento son bien conocidos en la técnica, véase, por ejemplo, Heart Disease, 2008, 8.a edición, Eds. Braunwald, Elsevier Sounders, capítulo 24 (con respecto a la insuficiencia cardíaca) y capítulo 41 (con respecto a la hipertensión).

Como se usa en el presente documento, el término "péptidos natriuréticos cerebrales", preferentemente, se refiere a péptidos de tipo péptido natriurético cerebral (PNC) y variantes de los mismos que tienen el mismo potencial predictivo. Los péptidos de tipo PNC comprenden pre-proPNC, proPNC, NT-proPNC y PNC. El prepropéptido (134 aminoácidos en el caso de pre-proPNC) comprende un péptido señalizador corto, que se escinde enzimáticamente para liberar el propéptido (108 aminoácidos en el caso de proPNC). El propéptido se escinde además en un propéptido N terminal (NT-propéptido, 76 aminoácidos en el caso de NT-proPNC) y la hormona activa (32 aminoácidos en el caso de PNC). Preferentemente, los péptidos natriuréticos cerebrales de acuerdo con la presente invención son NT-proPNC, PNC y variantes de los mismos. PNC es la hormona activa y tiene una semivida más corta que su homóloga inactiva NT-proPNC respectiva. PNC se metaboliza en la sangre, mientras que NT-proPNC circula en la sangre como una molécula intacta y, como tal, se elimina por vía renal. La semivida in vivo de NT-proPNC es 120 min más larga que la de PNC, que es de 20 min (Smith 2000, J Endocrinol. 167: 239­ 46). Las preanalíticas son más consistentes con NT-proPNC permitiendo un fácil transporte de la muestra a un laboratorio central (Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42:942-4). Las muestras de sangre se pueden almacenar a temperatura ambiente durante varios días o se pueden enviar por correo o despachar sin pérdida en su recuperación. Por el contrario, el almacenamiento de PNC durante 48 horas a temperatura ambiente o a 4° Celsius da lugar a una pérdida en la concentración de al menos un 20 % (Mueller loc. cit.; Wu 2004, Clin Chem 50: 867­ 73.). Por lo tanto, dependiendo de la evolución temporal o propiedades de interés, cualquier medición de las formas activas o inactivas del péptido natriurético puede ser ventajosa. Los péptidos natriuréticos lo más preferentes de acuerdo con la presente invención son NT-proPNC o variantes de los mismos. Como se analiza en resumen anteriormente, el NT-proPNC humano, como se hace referencia de acuerdo con la presente invención, es un polipéptido que comprende, preferentemente, 76 aminoácidos de longitud correspondiente a la porción N terminal de la molécula de NT-proPNC humano. La estructura del PNC y NT-proPNC humanos ya se ha descrito en detalle en la técnica anterior, por ejemplo, documentos WO 02/089657, WO 02/083913 o Bonow loc. cit. Preferentemente, NT-proPNC humano como se usa en el presente documento es NT-proPNC humano como se divulga en el documento EP 0648228 B1. Estos documentos de la técnica anterior se incorporan por el presente documento por referencia con respecto a las secuencias específicas de NT-proPNC y variantes de los mismos divulgadas en los mismos. El NT-proPNC al que se hace referencia de acuerdo con la presente invención engloba además variantes alélicas y otras de dicha secuencia específica para el NT-proPNC humano analizado anteriormente. Específicamente, se conciben polipéptidos variantes que están al nivel aminoacídico preferentemente, al menos un 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 95 %, 97 %, 98 % o un 99 % idéntico al NT-proPNC humano, preferentemente a lo largo de toda la longitud del NT-proPNC humano. El grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se puede determinar por algoritmos bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el grado de identidad se va a determinar comparando dos secuencias óptimamente alineadas en una ventana de comparación, donde el fragmento de la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o deleciones (por ejemplo, huecos o salientes) en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineación óptima. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se produce el residuo aminoacídico idéntico en ambas secuencias para proporcionar el número de posiciones emparejadas, dividiendo el número de posiciones emparejadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia. Se puede llevar a cabo la alineación óptima de secuencias para su comparación por el algoritmo de homología local de Smith y Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981), por el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970), por la búsqueda para el procedimiento de similitud de Pearson y Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988), por implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA en el paquete informático Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI) o por inspección visual. Dado que se han identificado dos secuencias para su comparación, se emplean preferentemente GAP y BESTFIT para determinar su alineación óptima y, por tanto, el grado de identidad. Preferentemente, se usan los valores por defecto de 5,00 para peso de hueco y 0,30 para longitud de peso de hueco. Las variantes a las que se hace referencia anteriormente pueden ser variantes alélicas o cualquier otro homólogo, parálogo u ortólogo específico de especie. Sustancialmente similares y también concebidos son los productos de degradación proteolítica que todavía se reconocen por los medios de diagnóstico o por ligandos dirigidos contra el péptido de longitud completa respectivo. También se engloban polipéptidos variantes que tienen deleciones, sustituciones y/o adiciones aminoacídicas en comparación con la secuencia de aminoácidos de NT-proPNC humano siempre que los dichos polipéptidos tengan propiedades de NT-proPNC. Las propiedades de NT-proPNC como se hace referencia en el presente documento son propiedades inmunológicas y/o biológicas. Preferentemente, las variantes de NT-proPNC tienen propiedades inmunológicas (es decir, composición de epítopos) comparables a las de NT-proPNC humano. Por tanto, las variantes serán reconocibles por los medios o ligandos mencionados anteriormente usados para la determinación de la cantidad de los péptidos natriuréticos. Las propiedades de NT-proPNC biológicas y/o inmunológicas se pueden detectar por el ensayo descrito en Karl et al. (Karl 1999, Scand J Clin Lab Invest 230:177-181), Yeo et al. (Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115). Las variantes también incluyen péptidos modificados de forma postraduccional tales como péptidos glucosilados. Además, una variante de acuerdo con la presente invención también es un péptido o polipéptido que se ha modificado después de la recogida de la muestra, por ejemplo por unión covalente o no covalente de un marcador, en particular un marcador radioactivo o fluorescente, al péptido.

En un aspecto de la divulgación, se contempla un procedimiento para establecer una ayuda para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes o para evaluar si un sujeto padece MFS anómala, comprendiendo dicho procedimiento:

a) determinar la cantidad de al menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en una troponina cardíaca y/o FGF-23, vitamina D (i) poniendo la muestra en contacto con un agente de detección que se une específicamente a dicha troponina cardíaca durante un tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo del dicho agente de detección y dicha troponina cardíaca, y/o poner la muestra en contacto con un agente de detección que se une específicamente a FGF-23 durante un tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo del dicho agente de detección y FGF-23 (ii) medir la(s) cantidad(es) del/de los complejo(s) formado(s), en el que la(s) dicha(s) cantidad(es) del/de los complejo(s) formado(s) es/son proporcional(es) a la(s) cantidad(es) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 y (iii) transformar la(s) cantidad(es) del/de los complejo(s) formado(s) en una cantidad (en cantidades) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 que refleje la(s) cantidad(es) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 presente en la muestra;

b) comparar dicha(s) cantidad(es) con una referencia (con referencias); y

c) establecer una ayuda para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes o para diagnosticar MFS anómala en función del resultado de la comparación realizada en la etapa b).

En otro aspecto de la divulgación, se contempla un sistema para establecer una ayuda para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes o para diagnosticar MFS anómala, que comprende:

a) una unidad analizadora configurada para poner la muestra en contacto con un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca, durante un tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo del dicho agente de detección y troponina cardíaca a partir de la muestra y/o con un agente de detección que se une específicamente a FGF-23 durante un tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo del dicho agente de detección y FGF-23 de la muestra (y, opcionalmente, si se determina FGF-23, con un agente de detección que se une específicamente a la vitamina D durante un tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo del dicho agente de detección y la vitamina D de la muestra,

b) una unidad analizadora configurada para medir la(s) cantidad(es) del/de los complejo(s) formado(s), en el que la(s) dicha(s) cantidad(es) del/de los complejo(s) formado(s) es/son proporcional(es) a la(s) cantidad(es) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 (y, opcionalmente, vitamina D),

c) un dispositivo informático que tiene un procesador y en comunicación funcional con dichas unidades de análisis, y

d) un medio legible por máquina no transitorio que incluye una pluralidad de instrucciones ejecutables por el procesador, las instrucciones, cuando se ejecutan, transforman la cantidad del/de los complejo(s) formado(s) en una cantidad (en cantidades) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 (y, opcionalmente, vitamina D) que refleja la(s) cantidad(es) de la troponina cardíaca y/o FGF-23 (y opcionalmente vitamina D) en la muestra, comparan dicha(s) cantidad(es) con una referencia (con referencias) y establecen una ayuda para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes o para diagnosticar MFS anómala en base al resultado de dicha comparación con dicha(s) referencia(s).

Un agente de detección adecuado puede ser, en un aspecto, un anticuerpo que se une específicamente al marcador, es decir, un anticuerpo que se une específicamente a una troponina cardíaca o un anticuerpo que se une específicamente a FGF-23, en una muestra de un sujeto que se va a investigar por el procedimiento de la invención. Otro agente de detección que se puede aplicar, en un aspecto, puede ser un aptámero que se une específicamente a la troponina cardíaca o FGF-23. Aún en otro aspecto, la muestra se retira del complejo formado entre el agente de detección y el al menos antes de la medición de la cantidad de complejo formado. En consecuencia, en un aspecto, el agente de detección se puede inmovilizar sobre un soporte sólido. Aún en un aspecto, la muestra se puede retirar del complejo formado sobre el soporte sólido aplicando una solución de lavado. El complejo formado será proporcional a la cantidad del marcador presente en la muestra. Se entenderá que la especificidad y/o sensibilidad del agente de detección que se va a aplicar define el grado de proporción del marcador comprendido en la muestra que se puede unir específicamente. Otros detalles sobre cómo se puede llevar a cabo la determinación también se encuentran en otra parte en el presente documento. La cantidad de complejo formado se transformará en una cantidad de al menos un marcador que refleja la cantidad efectivamente presente en la muestra. Una cantidad de este tipo, en un aspecto, puede ser esencialmente la cantidad presente en la muestra o puede ser, en otro aspecto, una cantidad que es una determinada proporción de la misma debido a la relación entre el complejo formado y la cantidad presente en la muestra original.

Aún en un aspecto del procedimiento mencionado anteriormente, la etapa a) se puede llevar a cabo por una unidad analizadora, en un aspecto, una unidad analizadora como se define en otra parte en el presente documento.

En un aspecto del procedimiento de la invención, la(s) cantidad(es) determinada(s) en la etapa a) se compara(n) con una referencia. En un aspecto, la referencia es una referencia como se define en otra parte en el presente documento. Aún en otro aspecto, la referencia tiene en cuenta la relación proporcional entre la cantidad medida de complejo y la cantidad presente en la muestra original. Por tanto, las referencias aplicadas en un aspecto del procedimiento de la invención son referencias artificiales que se adoptan para reflejar las limitaciones del agente de detección que se ha usado. En otro aspecto, dicha relación también se puede tener en cuenta cuando se lleva a cabo la comparación, por ejemplo, incluyendo una etapa de cálculo de normalización y/o corrección para la cantidad determinada antes de comparar realmente el valor de la cantidad determinada y la referencia. De nuevo, la etapa de cálculo de normalización y/o corrección para la cantidad determinada adopta la etapa de comparación de modo que las limitaciones del agente de detección que se ha usado se reflejen apropiadamente. En un aspecto, la comparación se lleva a cabo automáticamente, por ejemplo, asistida por un sistema informático o similar.

La ayuda para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes se establece en base a la comparación llevada a cabo en la etapa b) asignando el sujeto a un grupo de sujetos que se deberán someter a dicha evaluación, o a un grupo de sujetos que no se deberán someter a dicha evaluación. La ayuda para el diagnóstico de MFS anómala se establece en base a la comparación llevada a cabo en la etapa b) asignando el sujeto a un grupo de sujetos que padecen MFS anómala, o a un grupo de sujetos que no padecen MFS anómala. Como ya se ha analizado en otra parte en el presente documento, la asignación del sujeto investigado no debe ser correcta en un 100 % de los casos investigados. Además, los grupos de sujetos en los que se asigna el sujeto investigado son grupos artificiales en cuanto a que se establecen en base a consideraciones estadísticas, es decir, un determinado grado preseleccionado de verosimilitud en base al que funcionará el procedimiento de la invención. En un aspecto de la invención, la ayuda se establece automáticamente, por ejemplo, asistida por un dispositivo informático o similar, como se describe y divulga en el presente documento.

En un aspecto del procedimiento de la invención, dicho procedimiento comprende además una etapa de recomendar y/o gestionar el sujeto de acuerdo con el resultado establecido en la etapa c).

En un aspecto del procedimiento mencionado anteriormente, las etapas b) y/o c) se llevan a cabo por una o más unidades analizadoras como se expone en otra parte en el presente documento.

La presente invención también se refiere al uso de i) una troponina cardíaca o ii) de un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca, en una muestra de un sujeto que padece hipertensión para evaluar si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala.

La divulgación también se refiere al uso de i) una troponina cardíaca y/o FGF-23 o ii) un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca y/o de un agente de detección que se une específicamente a FGF-23, en un muestra de un sujeto para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Si se usa FGF-23, el uso puede comprender además el uso de vitamina D. Si es un agente de detección que se une específicamente a FGF-23, el uso puede comprender además el uso de un agente de detección que se une específicamente a la vitamina D. Además, se puede calcular una proporción entre FGF-23 y vitamina D.

La divulgación también se refiere al uso de i) una troponina cardíaca y/o FGF-23 (y, opcionalmente, vitamina D) o ii) de un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca y/o de un agente de detección que se une específicamente a FGF-23 (y, opcionalmente, de un agente de detección que se une específicamente a la vitamina D) para la fabricación de una composición farmacéutica o de diagnóstico para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en imágenes.

El término "agente de detección" como se usa en el presente documento se refiere a un agente que puede reconocer y unirse específicamente al/a los polipéptido(s) biomarcador(s) presente(s) en una muestra. El término se usa de manera intercambiable con el término "ligando" en el presente documento. Además, el dicho agente permitirá la detección directa o indirecta del complejo formado por el dicho agente y el biomarcador. La detección directa se puede lograr incluyendo en el agente un marcador detectable. El marcaje indirecto se puede lograr por otro agente que se une específicamente al complejo que comprende el biomarcador y el agente de detección en el que el dicho otro agente puede generar, a continuación, una señal detectable. Los compuestos adecuados que se pueden usar como agentes de detección son bien conocidos en la técnica. Preferentemente, el agente de detección es un anticuerpo, en particular un anticuerpo monoclonal o aptámero que se une específicamente al biomarcador como se hace referencia en el presente documento. El término "anticuerpo" se ha descrito en otra parte en el presente documento.

De acuerdo con un modo de realización preferente de la presente invención, se proporciona un dispositivo adaptado para llevar a cabo el procedimiento de la invención que comprende

a) una unidad analizadora que comprende un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca, y opcionalmente un agente de detección que se une específicamente a FGF-23, estando dicha unidad adaptada para determinar la(s) cantidad(es) del/de los marcador(es) en una muestra de un sujeto que padece hipertensión; y

b) una unidad analizadora para comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) con la(s) cantidad(es) de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala, comprendiendo dicha unidad una base de datos con una cantidad (o cantidades) de referencia y un algoritmo implementado por ordenador para llevar a cabo la comparación.

Las cantidades de referencia y algoritmos preferentes se divulgan en otra parte en el presente documento.

Si se determinan FGF-23 y vitamina D, se deberá calcular una proporción como se expone en otra parte en el presente documento y se deberá comparar con una proporción de referencia. En este caso, la unidad analizadora como se expone en el contexto de los dispositivos mencionados anteriormente permitirá (también) calcular una proporción entre FGF-23 y vitamina D. Además, la base de datos comprenderá valores para proporciones de referencia.

Un modo de realización preferente de la presente divulgación incluye un sistema para evaluar si un sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes o para diagnosticar MFS anómala como se expone en otra parte en el presente documento. Los ejemplos de sistemas incluyen analizadores de química clínica, analizadores de química de coagulación, analizadores de inmunoquímica, analizadores de orina, analizadores de ácido nucleico, usados para detectar el resultado de reacciones químicas o biológicas o para supervisar el progreso de reacciones químicas o biológicas. Más específicamente, los sistemas ejemplares de la presente divulgación pueden incluir sistemas Roche Elecsys™ y analizadores de inmunoanálisis Cobas®, analizadores Abbott Architect™ y Axsym™, analizadores Siemens Centaur™ e Immulite™, y analizadores Beckman Coulter UniCel™ y Acess™ o similares.

Los modos de realización del sistema pueden incluir una o más unidades analizadoras utilizadas para poner en práctica la divulgación objeto. Las unidades analizadoras del sistema divulgado en el presente documento están en comunicación funcional con el dispositivo informático divulgado en el presente documento a través de cualquiera de una conexión por cable, Bluetooth, LANS o señal inalámbrica, como son conocidos. Adicionalmente, de acuerdo con la presente divulgación, una unidad analizadora puede comprender un aparato independiente, o módulo dentro de un instrumento más grande, que realiza una o ambas de la detección, por ejemplo, evaluación cualitativa y/o cuantitativa de muestras para propósitos diagnósticos. Por ejemplo, una unidad analizadora puede realizar o ayudar con el pipeteo, dosificación, mezcla de muestras y/o reactivos. Una unidad analizadora puede comprender una unidad de mantenimiento de reactivos para mantener los reactivos para realizar los ensayos. Los reactivos se pueden disponer, por ejemplo, en forma de recipientes o casetes que contienen reactivos individuales o un grupo de reactivos, dispuestos en receptáculos o posiciones apropiados dentro de un transportador o compartimento de almacenamiento. Los reactivos de detección también pueden estar en forma inmovilizada sobre un soporte sólido que está en contacto con la muestra. Además, una unidad analizadora puede incluir un componente de detección y/o procedimiento que es optimizable para análisis específico.

De acuerdo con algunos modos de realización, una unidad analizadora se puede configurar para la detección óptica de un analito, por ejemplo un marcador, con una muestra. Una unidad analizadora ejemplar configurada para la detección óptica comprende un dispositivo configurado para convertir energía electromagnética en una señal eléctrica, que incluye detectores ópticos tanto de un único elemento como de múltiples elementos o de matriz. De acuerdo con la presente divulgación, un detector óptico puede supervisar una señal electromagnética óptica y proporcionar una señal de respuesta o señal de salida eléctrica en relación con una señal de referencia indicativa de la presencia y/o concentración de un analito en una muestra que se localiza en una trayectoria óptica. Dichos dispositivos también pueden incluir, por ejemplo, fotodiodos, incluyendo fotodiodos de avalancha, fototransistores, detectores fotoconductores, matrices de sensores lineales, detectores CCD, detectores CMOS, incluyendo detectores de matrices CMOS, fotomultiplicadores y matrices fotomultiplicadoras. De acuerdo con determinados modos de realización, un detector óptico, tal como un fotodiodo o fotomultiplicador, puede contener dispositivos electrónicos de acondicionamiento o procesamiento de señales adicionales. Por ejemplo, un detector óptico puede incluir al menos un preamplificador, filtro electrónico o circuito integrado. Los pre-preamplificadores adecuados incluyen, por ejemplo, preamplificadores de integración, transimpedancia y ganancia de corriente (espejo de corriente).

Adicionalmente, una o más unidades analizadoras de acuerdo con la presente divulgación pueden comprender una fuente de luz para emitir luz. Por ejemplo, una fuente de luz de una unidad analizadora puede consistir en al menos un elemento emisor de luz (tal como un diodo emisor de luz, una fuente de radiación eléctrica tal como una lámpara incandescente, una lámpara electroluminiscente, una lámpara de descarga de gas, una lámpara de descarga de alta intensidad, un láser) para medir las concentraciones de analitos con una muestra que se está sometiendo a prueba o para posibilitar una transferencia de energía (por ejemplo, a través de transferencia de energía de resonancia fluorescente o catalizando una enzima).

Además, una unidad analizadora del sistema puede incluir una o más unidades incubadoras (por ejemplo, para mantener una muestra o un reactivo a una temperatura o intervalo de temperatura especificado). En algunos modos de realización, una unidad analizadora puede incluir un termociclador, incluir un termociclador en tiempo real, para someter una muestra a ciclos de temperatura repetidos y supervisar un cambio en la cantidad de un producto de amplificación con la muestra.

Adicionalmente, una unidad analizadora del sistema divulgado en el presente documento puede comprender, o estar conectada de forma funcional a, un recipiente de reacción o unidad de alimentación de cubeta. Las unidades de alimentación ejemplares incluyen unidades de procesamiento de líquido, tales como una unidad de pipeteo, para suministrar muestras y/o reactivos a los recipientes de reacción. La unidad de pipeteo puede comprender una aguja lavable reutilizable, por ejemplo, una aguja de acero, o puntas de pipeta desechables. La unidad analizadora puede comprender además una o más unidades de mezcla, por ejemplo, un agitador para agitar una cubeta que comprende un líquido o una paleta de mezcla para mezclar líquidos en una cubeta o recipiente de reactivos.

De lo anterior se deduce que de acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, partes de algunas etapas de los procedimientos divulgados y descritos en el presente documento se pueden realizar por un dispositivo informático. Un dispositivo informático puede ser un ordenador de propósito general o un dispositivo informático portátil, por ejemplo. También se debe entender que se pueden usar conjuntamente múltiples dispositivos informáticos, tales como en una red u otros procedimientos de transferencia de datos, para realizar una o más etapas de los procedimientos divulgados en el presente documento. Los dispositivos informáticos ejemplares incluyen ordenadores de sobremesa, ordenadores portátiles, asistentes de datos personales ("PDA"), tales como dispositivos de marca BLACKBERRY, teléfonos móviles, tabletas, servidores y similares. En general, un dispositivo informático comprende un procesador que puede ejecutar una pluralidad de instrucciones (tales como un programa informático).

Un dispositivo informático tiene acceso a una memoria. Una memoria es un medio legible por ordenador y puede comprender un único dispositivo de almacenamiento o múltiples dispositivos de almacenamiento, localizados localmente con el dispositivo informático o bien accesibles al dispositivo informático a través de una red, por ejemplo. Los medios legibles por ordenador pueden ser cualquier medio disponible al que se puede acceder por el dispositivo informático e incluyen medios tanto volátiles como no volátiles. Además, los medios legibles por ordenador pueden ser uno o ambos de medios extraíbles y no extraíbles. A modo de ejemplo, y sin limitación, los medios legibles por ordenador pueden comprender medios de almacenamiento informáticos. Los medios de almacenamiento informáticos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, RAM, ROM, EEPROM, memoria flash o cualquier otra tecnología de memoria, CD-ROM, disco versátil digital (DVD) u otro almacenamiento en disco óptico, casetes magnéticos, cinta magnética, almacenamiento en disco magnético u otros dispositivos de almacenamiento magnético, o cualquier otro medio que se pueda usar para almacenar una pluralidad de instrucciones a las que se puede acceder por el dispositivo informático y ejecutar por el procesador del dispositivo informático.

De acuerdo con modos de realización de la presente divulgación, el programa informático puede incluir instrucciones que, cuando se ejecutan por un procesador del dispositivo informático, pueden realizar una o más etapas de los procedimientos divulgados en el presente documento. Algunas de las instrucciones se pueden adaptar para producir señales que controlan el funcionamiento de otras máquinas y por tanto pueden funcionar a través de esas señales de control para transformar materiales muy alejados del propio ordenador. Estas descripciones y representaciones son los medios usados por los expertos en la técnica de procesamiento de datos, por ejemplo, para transmitir lo más eficazmente lo esencial de su trabajo a otros expertos en la técnica.

La pluralidad de instrucciones también puede comprender un algoritmo que en general está concebido como una secuencia autocoherente de etapas que da lugar a un resultado deseado. Estas etapas son las que requieren manipulaciones físicas de cantidades físicas. Normalmente, aunque no necesariamente, estas cantidades adoptan la forma de pulsos o señales eléctricos o magnéticos que se pueden almacenar, transferir, transformar, combinar, comparar y manipular de otro modo. En ocasiones resulta conveniente, principalmente por motivos de uso común, referirse a estas señales como valores, caracteres, datos de visualización, números o similares como una referencia a los elementos físicos o manifestaciones en que se incorporan o expresan dichas señales. Sin embargo, se debe tener en cuenta que todos estos términos y similares se han de asociar con las cantidades físicas apropiadas y se usan simplemente aquí como etiquetas convenientes aplicadas a estas cantidades. De acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, un algoritmo para llevar a cabo una comparación entre una cantidad determinada de uno o más marcadores divulgados en el presente documento, y una referencia adecuada, se incorpora y se realiza ejecutando las instrucciones. Los resultados se pueden dar como salida de datos brutos diagnósticos paramétricos o como cantidades absolutas o relativas. De acuerdo con diversos modos de realización del sistema divulgado en el presente documento, se puede proporcionar un "diagnóstico" por el dispositivo informático de un sistema divulgado en el presente documento en base a dicha comparación de la "cantidad" calculada con una referencia o un umbral. Por ejemplo, un dispositivo informático de un sistema puede proporcionar un indicador, en forma de una palabra, símbolo o valor numérico que sea indicativo de un diagnóstico particular.

El dispositivo informático también puede tener acceso a un dispositivo de salida. Los dispositivos de salida ejemplares incluyen máquinas de fax, pantallas, impresoras y archivos, por ejemplo. De acuerdo con algunos modos de realización de la presente divulgación, un dispositivo informático puede realizar una o más etapas de un procedimiento divulgado en el presente documento, y después de esto proporcionar una salida, por medio de un dispositivo de salida, con relación a un resultado, indicación, proporción u otro factor del procedimiento.

Finalmente, la divulgación se refiere a un kit adaptado para llevar a cabo un procedimiento de la presente invención que comprende un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca y/o un agente de detección que se une específicamente a FGF-23, patrones de referencia así como instrucciones para llevar a cabo el dicho procedimiento.

En un ejemplo preferente, el kit puede comprender además un agente de detección que se une específicamente a la vitamina D.

El término "kit", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo de los componentes mencionados anteriormente, preferentemente, proporcionados por separado o dentro de un único recipiente. El recipiente también comprende instrucciones para llevar a cabo el procedimiento de la presente invención. Estas instrucciones pueden estar en forma de un manual o se pueden proporcionar por un código de programa informático que puede llevar a cabo las comparaciones a la que se hace referencia en los procedimientos de la presente invención y establecer un diagnóstico en consecuencia cuando se implementa en un ordenador o en un dispositivo de procesamiento de datos. El código del programa informático se puede proporcionar en un medio o dispositivo de almacenamiento de datos, tal como un medio de almacenamiento óptico (por ejemplo, un disco compacto) o directamente en un ordenador o dispositivo de procesamiento de datos. Además, el kit comprenderá al menos un patrón para una referencia como se define en el presente documento anteriormente.

En algunos modos de realización, un kit divulgado en el presente documento incluye al menos un componente o una combinación envasada de componentes para poner en práctica un procedimiento divulgado. Por "combinación envasada" se quiere decir que los kits proporcionan un único envase que contiene una combinación de uno o más componentes, tales como sondas (por ejemplo, un anticuerpo), controles, tampones, reactivos (por ejemplo, conjugado y/o sustrato), instrucciones y similares, como se divulga en el presente documento. Un kit que contiene un único recipiente también se incluye dentro de la definición de "combinación envasada". En algunos modos de realización, los kits incluyen al menos una sonda, por ejemplo un anticuerpo (que tiene afinidad específica por un epítopo de un biomarcador como se divulga en el presente documento. Por ejemplo, los kits pueden incluir un anticuerpo que se marca con un fluoróforo o un anticuerpo que es miembro de una proteína de fusión. En el kit, la sonda se puede inmovilizar y se puede inmovilizar en una conformación específica. Por ejemplo, se puede proporcionar una sonda inmovilizada en un kit para unir específicamente la proteína diana, para detectar la proteína diana en una muestra y/o para retirar la proteína diana de una muestra.

De acuerdo con algunos modos de realización, los kits incluyen al menos una sonda, que se puede inmovilizar, en al menos un recipiente. Los kits también pueden incluir múltiples sondas, opcionalmente inmovilizadas, en uno o más recipientes. Por ejemplo, las múltiples sondas pueden estar presentes en un único recipiente o en recipientes separados, por ejemplo, en los que cada recipiente contiene una única sonda.

En algunos modos de realización, un kit puede incluir una o más sondas no inmovilizadas y uno o más soportes sólidos que incluyen o no una sonda inmovilizada. Algunos de dichos modos de realización pueden comprender algunos o todos los reactivos y suministros necesarios para inmovilizar una o más sondas al soporte sólido, o algunos o todos los reactivos y suministros necesarios para la unión de sondas inmovilizadas a proteínas específicas dentro de una muestra.

En determinados modos de realización, una única sonda (incluyendo múltiples copias de la misma sonda) se puede inmovilizar en un único soporte sólido y proporcionarse en un único recipiente. En otros modos de realización, dos o más sondas, cada una específica para una proteína diana diferente o una forma diferente de una única proteína diana (tal como un epítopo específico), se proporciona en un único recipiente. En algunos de dichos modos de realización, una sonda inmovilizada se puede proporcionar en múltiples recipientes diferentes (por ejemplo, en forma de un solo uso), o múltiples sondas inmovilizadas se pueden proporcionar en múltiples recipientes diferentes. En otros modos de realización, las sondas se pueden inmovilizar en múltiples tipos diferentes de soportes sólidos. Cualquier combinación de sonda(s) inmovilizada(s) y recipiente(s) se contempla para los kits divulgados en el presente documento, y cualquier combinación de los mismos se puede seleccionar para lograr un kit adecuado para un uso deseado.

Un recipiente de los kits puede ser cualquier recipiente que sea adecuado para envasar y/o contener uno o más componentes divulgados en el presente documento, incluyendo por ejemplo sondas (por ejemplo, un anticuerpo), controles, tampones y reactivos (por ejemplo, conjugado y/o sustrato). Los materiales adecuados incluyen, pero no se limitan a, vidrio, plástico, cartón u otro producto de papel, madera, metal y cualquier aleación de los mismos. En algunos modos de realización, el recipiente puede encerrar completamente una sonda(s) inmovilizada(s) o puede cubrir simplemente la sonda para minimizar la contaminación por polvo, aceites, etc., y la exposición a la luz. En algunos otros modos de realización, los kits pueden comprender un único recipiente o múltiples recipientes, y cuando están presentes múltiples recipientes, cada recipiente puede ser el mismo que todos los otros recipientes, diferente a los otros o diferente a algunos pero no a todos los otros recipientes.

Los siguientes ejemplos simplemente ilustrarán la invención. No se interpretarán, en absoluto, para limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1: cohorte de pacientes

Se examinó la relación entre los niveles plasmáticos de FGF-23 (ELISA, Immutopics), 25-hidroxivitamina D total (ECLIA, Roche Diagnostics), IFGBP7, endostatina, mimecano y 2 marcadores cardíacos (hs-cTnT y NT-proPNC, ensayos Roche Elecsys) y la masa del VI elevada/BSA (>95 g/m2 para mujeres, >115 para hombres), la fracción de acortamiento de la pared media por debajo de lo normal (MFS<15 %) y la mortalidad en 2001 personas ancianas (edad media 73±5 años, 48 % mujeres), residentes en el centro de Italia (estudio PREDICTOR). Los sujetos se dividieron en 4 categorías de acuerdo con los valores normales del índice de masa del VI y MF. Se determinaron los marcadores en muestras de plasma. Los datos sobre la mortalidad por cualquier causa estuvieron disponibles para un subgrupo de 1200 sujetos después de una mediana de seguimiento de 47 meses (86 muertes).

Se examinaron tres marcadores (endostatina, IGFBP7 mimecano/osteoglicina) en 550 sujetos ancianos seleccionados de los 2001 sujetos de 65-84 años del estudio epidemiológico PREDICTOR. Esta subcohorte comprende 50 sujetos normales, 150 sujetos en fase A, 300 sujetos en fase B de AHA/ACC. La mediana de seguimiento fue de 47 meses (21 muertes).

Los sujetos se dividieron en 4 categorías de acuerdo con los valores normales del índice de masa del VI y MFS

a) sujetos con índice de masa del VI normal (masa del VI/BSA < 95 g/m2 para mujeres y <115 g/m2 para hombres) Y MFS normal (> 15 %)

b) sujetos con índice de masa del VI normal (masa del VI/BSA < 95 g/m2 para mujeres y <115 g/m2 para hombres) Y MFS anómala (< 15 %)

c) sujetos con índice de masa del VI elevada (masa del VI/BSA > 95 g/m2 para mujeres y >115 g/m2 para hombres) Y MFS normal (> 15 %)

d) sujetos con índice de masa del VI elevada (masa del VI/BSA > 95 g/m2 para mujeres y >115 g/m2 para hombres) Y MFS anómala (< 15 %)

Ejemplo 2: ensayos

Se determinó la troponina T usando el ensayo de troponina T hs (de alta sensibilidad) Elecsys con STAT (tiempo de obtención breve) con ELISA de electroquimioluminiscencia de tipo sandwich de Roche. La prueba emplea dos anticuerpos monoclonales dirigidos específicamente frente a troponina T cardíaca humana. Los anticuerpos reconocen dos epítopos (posición aminoacídica 125-131 y 136-147) localizados en la parte central de la proteína troponina T cardíaca, que consiste en 288 aminoácidos. El ensayo hs-TnT permite una medición de niveles de troponina T en el intervalo de 3 a 10000 pg/ml.

Se determinó NT-proPNC usando el ensayo de proPNC II Elecsys con STAT (tiempo de obtención breve) con ELISA de electroquimioluminiscencia de tipo sandwich de Roche. La prueba emplea dos anticuerpos monoclonales que reconocen epítopos localizados en la parte N terminal (1-76) de proPNC (1-108).

Se determinó FGF-23 humano (extremo C) usando el kit ELISA de Immutopics Inc., número de cat. 60-6100, ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA) de segunda generación para la determinación de los niveles del factor de crecimiento de fibroblastos 23 humano en plasma o medios de cultivo celular). Este kit ELISA de FGF-23 humano (extremo C) de segunda generación es un ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA) de dos sitios para la medición de FGF-23 en plasma o medios de cultivo celular. Se han seleccionado dos anticuerpos policlonales de cabra purificados por afinidad para detectar epítopos dentro de la porción carboxílica terminal (extremo C) de FGF-23. Un anticuerpo se biotinila para la captura y el otro anticuerpo se conjuga con la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) para la detección. Estos anticuerpos se unen tanto a la molécula intacta como a los grandes fragmentos carboxílicos terminales del FGF-23 humano. Una muestra que contiene FGF-23 humano se incuba simultáneamente con el anticuerpo de captura biotinilado y el anticuerpo conjugado con HRP en un pocillo de microvaloración recubierto con estreptavidina. El FGF-23 contenido en la muestra se une inmunológicamente por el anticuerpo de captura y al anticuerpo de detección para formar un complejo de tipo "sandwich". Al final de este período de incubación, el pocillo se lava para retirar cualquier anticuerpo no unido y otros componentes. La enzima unida al pocillo se incuba con una solución de sustrato en una reacción cronometrada y a continuación se mide en un lector de placas de microvaloración espectrofotométrico. La actividad enzimática del complejo de anticuerpo unido al pocillo es directamente proporcional a la cantidad de FGF-23 en la muestra. Se genera una curva de calibración trazando la absorbancia frente a la concentración de FGF-23 respectiva para cada patrón en escalas lineales o logarítmicas. Se determina la concentración de FGF-23 humano en las muestras directamente a partir de esta curva.

Para la detección de mimecano en suero o plasma humano, se usó un ELISA de tipo sandwich. Para la captura y detección del antígeno, alícuotas de un anticuerpo policlonal antimimecano de R&D Systems (número de catálogo: AF 2660) se conjugan con biotina y digoxigenina, respectivamente. Se incuban placas de microvaloración de 96 pocillos recubiertas con estreptavidina con 100 |jl de anticuerpo policlonal antimimecano biotinilado durante 60 min a 0,2 jg/m l en solución de PBS 1x. Después de la incubación, se lavan las placas tres veces con PBS 1x Tween-20 al 0,02 %, se bloquean con PBS BSA (seroalbúmina bovina) al 2 % durante 45 min y a continuación se lavan de nuevo tres veces con PBS 1x Tween-20 al 0,02 %. A continuación, se incuban los pocillos durante 1 h con 100 j l de una dilución en serie del mimecano recombinante como antígeno estándar o bien con muestras de suero o plasma diluidas (1:5 en PBS 1x BSA al 1 %) de pacientes o individuos de control, respectivamente. Después de la unión de mimecano, se lavan las placas tres veces con PBS 1x Tween-20 al 0,02 %. Para la detección específica de mimecano unido, se incuban los pocillos con 100 j l de anticuerpo policlonal antimimecano digoxigenilado durante 45 min a 0,2 pg/ml en PBS 1x BSA al 1 %. Después de esto, se lavan las placas tres veces para retirar el anticuerpo no unido. En una etapa siguiente, se incuban los pocillos con 100 j l de 75 mU/ml de conjugados anti-digoxigenina-POD (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n.° de catálogo 1633716) durante 30 min en PBS 1x BSA al 1 %. Posteriormente, se lavan las placas seis veces con el mismo tampón de lavado que anteriormente. Para la detección de complejos antígeno-anticuerpo, se incuban los pocillos con 100 j l de solución ABTS (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n.° de catálogo 11685767) y se mide la densidad óptica (DO) después de 15 min a 405 y 492 nm con un lector de ELISA.

Para la medición de endostatina en suero o plasma humano, se usó un ELISA de tipo sandwich (inmunoanálisis de endostatina humana Quantikine, número de catálogo DNSTO, R&D Systems) disponible comercialmente. Se realizan las mediciones de acuerdo con las instrucciones dadas por el fabricante.

Para la detección de IGFBP7 en suero o plasma humano, se usó un ELISA de tipo sandwich. Para la captura y detección del antígeno, alícuotas de un anticuerpo policlonal anti-IGFBP7 de R&D Systems (número de catálogo: AF 1334) se conjugó con biotina y digoxigenina, respectivamente.

Ejemplo 3: resultados

Alteraciones sutiles de la geometría del VI: fracción de acortamiento de la pared media

Los resultados se muestran en la tabla 1. Las medianas de las concentraciones de hs-cTnT, NT-proPNC, FGF-23 y vitamina D fueron en promedio bajas. Las medianas de las concentraciones de hs-cTnT, Nt-proPNC y FGF-23/vitamina D fueron mayores en sujetos con masa del VI elevada y/o MFS por debajo de lo normal (para ambos, ajustados por sexo y edad). FGF-23 y vitamina D estuvieron asociados significativamente con la masa del VI independientemente de hs-cTnT.

Las medianas de las concentraciones de NT-proPNC no se incrementaron en sujetos ancianos con índice de masa del VI normal Y MFS por debajo de lo normal frente a sujetos ancianos con masa del VI normal Y MFS normal.

Por el contrario, las medianas de las concentraciones de hs-cTnT y la proporción de las medianas de las concentraciones de FGF-23/vitamina D se incrementaron significativamente en un 37 % y un 11 % en sujetos ancianos con índice de masa del VI normal Y MFS por debajo de lo normal frente a sujetos ancianos con masa del VI normal Y MFS normal.

Los niveles de troponina cardíaca y FGF-23 están elevados en sujetos ancianos con alteraciones sutiles de la geometría y función del VI (incluso antes de que se detecten alteraciones en la geometría del VI). Por tanto, la determinación de estos marcadores ayudará a identificar un fenotipo intermedio en la evolución de la hipertensión hacia la disfunción sistólica o diastólica antes de que se haga evidente la HVI (por ecografía, RMN, ECG). Además, se puede determinar la proporción de FGF-23/vitamina D. Un nivel incrementado de un marcador seleccionado de troponina cardíaca, FGF-23 (preferentemente la proporción de FGF-23/vitamina D) en relación con el nivel de referencia respectivo indica que el paciente padece MFS.

Estudios de casos

Una paciente de 75 años con insuficiencia cardíaca de clase A tiene un IMC por debajo de 30 kg/m2 e hipertensión. La troponina T y el FGF-23 se determinan en una muestra de suero obtenida del paciente (con los kits descritos anteriormente). El valor de troponina T es de 7,1 pg/ml, el valor de FGF-23 de 93 UR/ml (unidades relativas/ml, Immunotopics) que es indicativo de que se debe llevar a cabo una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Para confirmar la evaluación basada en biomarcadores, se realizan pruebas diagnósticas basadas en formación de imágenes de la disfunción diastólica usando un algoritmo multiparamétrico derivado de Doppler que incluye índices derivados de Doppler de flujo transmitral y flujo venoso pulmonar, y ecografía Doppler tisular del anillo mitral lateral (E/e') como una estimación indirecta de las presiones de llenado del VI incrementadas. Se diagnostica que el paciente tiene disfunción diastólica. Esto confirma que la detección de troponina T y FGF-23 permite una evaluación fiable de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Un paciente masculino de 71 años con insuficiencia cardíaca de clase A tiene un IMC por debajo de 30 kg/m2 e hipertensión. La troponina T y el FGF-23 se determinan en una muestra de suero obtenida del paciente. El valor de troponina T está por debajo de 3,0 pg/ml, el valor de FGF-23 es de 59 UR/ml que es indicativo de que no es necesaria una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Para confirmar la evaluación basada en biomarcadores, se realizan pruebas diagnósticas basadas en formación de imágenes para la disfunción diastólica usando un algoritmo multiparamétrico derivado de Doppler que incluye índices derivados de Doppler de flujo transmitral y flujo venoso pulmonar, y ecografía Doppler tisular del anillo mitral lateral (E/e') como una estimación indirecta de las presiones de llenado del VI incrementadas. Se diagnostica que el paciente no tiene disfunción diastólica, confirmando por tanto que la detección de troponina T permite una evaluación fiable de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Una paciente de 69 años con insuficiencia cardíaca de clase A tiene un IMC por debajo de 30 kg/m2 e hipertensión. La troponina T y el FGF-23 determinados en una muestra de suero obtenida del paciente. El valor de troponina T es de 6,5 pg/ml, el valor de FGF-23 es de 99 UR/ml que es indicativo de que es necesaria una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Por lo tanto, se realizan pruebas diagnósticas basadas en formación de imágenes para la función sistólica para confirmar la evaluación basada en biomarcadores. La función sistólica del VI se calcula a nivel de la pared media (fracción de acortamiento de la pared media, MFS) usando un modelo elipsoidal modificado. Además, la masa del VI se calcula de acuerdo con las recomendaciones de la Sociedad Americana de Ecocardiografía y la Asociación Europea de Ecocardiografía (EAE). Se diagnostica que el paciente tiene MFS por debajo de lo normal y masa del VI normal, confirmando por tanto que la detección de troponina T permite una evaluación fiable de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Un paciente masculino de 76 años con insuficiencia cardíaca de clase A tiene un IMC por debajo de 30 kg/m2 e hipertensión. La troponina T se determina en una muestra de suero obtenida del paciente. El valor de troponina T está por debajo de 3 pg/ml, el valor de FGF-23 es de 64 UR/ml que es indicativo de que no es necesaria una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Se realiza un diagnóstico de la función sistólica para confirmar la evaluación basada en biomarcadores. La función sistólica del VI se calcula a nivel de la pared media (fracción de acortamiento de la pared media, MFS) usando un modelo elipsoidal modificado. Además, la masa del VI se calcula de acuerdo con las recomendaciones de la Sociedad Americana de Ecocardiografía y la Asociación Europea de Ecocardiografía (EAE). Se diagnostica que el paciente tiene MFS normal y masa del VI normal, lo que confirma que la detección de troponina T permite una evaluación fiable de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en imágenes.

Una paciente de 66 años con insuficiencia cardíaca de clase A tiene un IMC de 40 kg/m2 e hipertensión y diabetes. La troponina T se determina en una muestra de suero obtenida del paciente. El valor de troponina T está por debajo de 3,0 pg/ml que es indicativo de que no es necesaria una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Se informa al paciente de que vuelva para una visita de seguimiento a los 12 meses o si los síntomas empeoran. Después de 12 meses, el paciente acude a una visita de seguimiento. La troponina T se determina en una muestra de suero obtenida del paciente. El valor de troponina T es de 3,5 pg/ml que es indicativo de que es necesaria una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes. Por lo tanto, se realizan pruebas diagnósticas basadas en formación de imágenes para la función sistólica para confirmar la evaluación basada en troponina. La función sistólica del VI se calcula a nivel de la pared media (fracción de acortamiento de la pared media, MFS) usando un modelo elipsoidal modificado. Además, la masa del VI se calcula de acuerdo con las recomendaciones de la Sociedad Americana de Ecocardiografía y la Asociación Europea de Ecocardiografía (EAE). Se diagnostica que el paciente tiene MFS por debajo de lo normal y masa del VI normal, lo que confirma que la detección de troponina T permite una evaluación fiable de si un sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

Conclusiones:

Conclusiones: los niveles de hs-cTnT y FGF-23 están elevados en sujetos ancianos con alteraciones sutiles de la geometría y función del VI, y pueden ayudar a identificar un fenotipo intermedio temprano en la evolución hacia la insuficiencia cardíaca. En particular, los niveles de hs-cTnT y la proporción de niveles de FGF-23/niveles de vitamina D están elevados en sujetos ancianos con índice de masa del VI normal y MFS anómala.

La aplicación generalizada del cribado ecocardiográfico de la disfunción sistólica/diastólica se ha visto limitada por consideraciones de rentabilidad económica. Esta desventaja, sin embargo, se podría superar aplicando el procedimiento de la presente invención. Determinando la cantidad de una troponina cardíaca y/o de FGF-23, es posible evaluar si se requeriría o no una evaluación basada en formación de imágenes de la función cardíaca. En consecuencia, llevando a cabo el procedimiento de la presente invención se pueden evitar gastos innecesarios de asistencia sanitaria.

La detección de cambios miocárdicos tempranos sutiles y/o HVI temprana se puede mejorar por combinaciones de biomarcadores seleccionados de NT-ProPNC, troponina T y endostatina. Además, se pueden determinar los marcadores mimecano, FGF23/vitamina y GDF15 para detectar cambios miocárdicos tempranos sutiles.

La detección de los marcadores a los que se hace referencia en el presente documento permitirá estratificar si un paciente hipertenso que tiene una masa ventricular izquierda normal y que no padece hipertrofia ventricular izquierda se debe someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar una disfunción diastólica o sistólica (preferentemente ecocardiografía), en la que un nivel incrementado de marcador(es) en relación con el nivel de referencia respectivo indica que el paciente se debe someter a la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes y en la que cualquier otro nivel del/de los marcador(es) indica(n) que el paciente no se debe someter a la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

En la población actual de ancianos de bajo riesgo, los niveles elevados de FGF-23 y los niveles bajos de vitamina D identifican individuos con cambios estructurales sutiles y predicen mortalidad por cualquier causa.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para evaluar si un sujeto que padece hipertensión se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de

a) determinar la cantidad de troponina cardíaca en una muestra del sujeto, y

b) comparar la cantidad determinada, por tanto, con una cantidad de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el sujeto no padece hipertrofia ventricular izquierda, en particular en el que el sujeto tiene una masa ventricular izquierda normal.

3. El procedimiento de una cualquiera de la reivindicación 1 o 2, en el que la evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes es ecocardiografía o resonancia magnética nuclear.

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la cantidad de referencia es una cantidad de referencia calculada, en el que una cantidad incrementada en la muestra del sujeto en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes y/o en el que una cantidad disminuida en la muestra del sujeto en comparación con la cantidad de referencia indica que el sujeto no se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que

i) la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que es/son susceptible(s) de dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, en el que una cantidad de la troponina cardíaca que es esencialmente idéntica o que es mayor que la cantidad de referencia indica que el sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes (admisión) y/o

ii) la cantidad de referencia se deriva de un sujeto o grupo de sujetos que se sabe que no es/son susceptible(s) de dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes, en el que una cantidad de la troponina que es esencialmente idéntica o que es menor que la cantidad de referencia indica que el sujeto que se va a someter a prueba no se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes (descarte).

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la cantidad de referencia es la cantidad de la en una primera muestra que se ha obtenido del sujeto antes de la muestra como se expone en la etapa a) de la reivindicación 1 ("segunda muestra").

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la primera muestra se ha obtenido de 6 a 18 meses antes que la segunda muestra.

8. El procedimiento de las reivindicaciones 6 o 7, en el que una cantidad de una troponina cardíaca, en particular, de troponina T, en la segunda muestra que es al menos un 10 % o, en particular, al menos un 25 % mayor que la cantidad en la primera muestra, y/o en el que una cantidad de FGF-23 en la segunda muestra, que es al menos un 5 % o, en particular, al menos un 10 % mayor que la cantidad en la primera muestra es indicativa de que un sujeto se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes y/o en el que una cantidad esencialmente inalterada de o una cantidad disminuida de FGF-23 y/o de una troponina cardíaca en la segunda muestra en comparación con la primera muestra es indicativa de que un sujeto no se deberá someter a dicha evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que el sujeto no padecía MFS anómala en el momento en que se ha obtenido la primera muestra, en particular en el que el sujeto padecía hipertensión en el momento en que se obtuvo la primera muestra.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la muestra es una muestra de sangre, suero o plasma.

11. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que las cantidades de una troponina cardíaca y FGF-23 se determinan en la etapa a) del procedimiento.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que el procedimiento comprende además la determinación de la cantidad de vitamina D en la etapa a), el cálculo de una proporción entre la cantidad de FGF-23 con respecto a la cantidad de vitamina D en una etapa adicional a1), y la comparación de la proporción calculada, por tanto, con una proporción de referencia.

13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el sujeto no tiene niveles de NT-proPNC incrementados, en particular en una muestra de sangre, suero o plasma.

14. Uso de i) una troponina cardíaca o ii) de un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca, en una muestra de un sujeto que padece hipertensión para evaluar si el sujeto se deberá someter a una evaluación diagnóstica basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala.

15. Un dispositivo adaptado para llevar a cabo el procedimiento de la reivindicación 1 a 13 que comprende

a) una unidad analizadora que comprende un agente de detección que se une específicamente a una troponina cardíaca, y opcionalmente un agente de detección que se une específicamente a FGF-23, estando dicha unidad adaptada para determinar la(s) cantidad(es) del/de los marcador(es) en una muestra de un sujeto que padece hipertensión; y

b) una unidad analizadora para comparar la(s) cantidad(es) determinada(s) con la(s) cantidad(es) de referencia, con lo que se evalúa si el sujeto se deberá someter a una evaluación basada en formación de imágenes para diagnosticar una fracción de acortamiento de la pared media anómala, comprendiendo dicha unidad una base de datos con una cantidad (o cantidades) de referencia y un algoritmo implementado por ordenador para llevar a cabo la comparación.