ES2923652T3 - Inhibidores de la actividad LDHA - Google Patents

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ES2923652T3 ES18727384T ES18727384T ES2923652T3 ES 2923652 T3 ES2923652 T3 ES 2923652T3 ES 18727384 T ES18727384 T ES 18727384T ES 18727384 T ES18727384 T ES 18727384T ES 2923652 T3 ES2923652 T3 ES 2923652T3
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Claudia Alejandra Bøen
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Abstract

La invención proporciona compuestos de fórmula (I), estereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y profármacos de los mismos: (I) donde A1 a A6 y R1 a R4 son como se definen aquí. Dichos compuestos son adecuados para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades o afecciones que están mediadas por la activación de la lactato deshidrogenasa A (LDHA), por ejemplo, el cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de la actividad LDHA
Campo de invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso como medicamentos.
Más específicamente, la presente invención se refiere a compuestos que inhiben la actividad de lactato deshidrogenasa A ("LDHA"). Estos compuestos encuentran uso en el tratamiento o prevención de enfermedades o afecciones que están mediadas por la activación de LDHA, incluyendo enfermedades que se caracterizan por células hiperproliferativas tales como el cáncer.
Los compuestos encuentran un uso particular contra cánceres hipóxicos y/o altamente glucolíticos tales como cáncer de páncreas y cáncer de mama.
Antecedentes de la invención
En presencia de oxígeno, las células diferenciadas normales dependen principalmente de la fosforilación oxidativa en las mitocondrias para generar energía en forma de ATP. La glucosa se metaboliza primero en el citosol a través de la vía de la glucólisis que conduce a la producción de piruvato. El piruvato se convierte luego en CO2 en el ciclo del ácido tricarboxílico mitocondrial. Este último procedimiento está relacionado con la producción de NADH que impulsa la producción de ATP durante la fosforilación oxidativa.
Las células sanas reaccionan a niveles bajos de oxígeno mediante un procedimiento denominado "glucólisis anaeróbica". Durante la glucólisis anaeróbica, el piruvato se convierte en lactato para permitir la regeneración continua de NAD+, que es crucial para la glucólisis. Sin embargo, las células cancerosas dependen principalmente de la fermentación de glucosa y el piruvato producido se convierte en lactato, incluso en presencia de niveles apropiados de oxígeno. Este cambio a la "glucólisis aeróbica" en las células cancerosas se denomina "efecto Warburg".
La glucólisis aeróbica proporciona a las células tumorales la capacidad de incorporar más carbono a la biomasa y de producir el ATP necesario para los procedimientos celulares independientes del oxígeno. Se ha demostrado en varios estudios que este cambio en el metabolismo glucolítico se correlaciona con una mayor captación de glucosa en las células cancerosas, lo que da como resultado un mal pronóstico y un aumento de la agresión tumoral. Varias enzimas glucolíticas en la ruta metabólica de la glucosa pueden asociarse con la glucólisis aeróbica. La interferencia con esta ruta metabólica a través de la inhibición de diversas enzimas metabólicas se ha propuesto previamente como un enfoque para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades metabólicas. Sin embargo, el objetivo del metabolismo alterado del cáncer en sí mismo aún no se ha abordado con un fármaco disponible comercialmente.
La conversión de piruvato a lactato es catalizada por la enzima lactato deshidrogenasa (LDH), que usa NADH como cofactor. La enzima comprende una estructura tetramérica, formada por combinaciones de dos subunidades, LDHA (M, músculo) y LDHB (H, corazón). La disposición estructural de estas subunidades da lugar a cinco isoformas: los dos homotetrámeros LDH1 (H4 , LDHB) que se encuentran predominantemente en el corazón y LDH5 (M4 , LDHA) que está presente en el músculo esquelético, así como tres heterotetrámeros que se encuentran en otros tejidos (por ejemplo, los pulmones y los riñones). La sexta isoforma, el homotetrámero LDHC (C4), es específico de testículos y espermatozoides y está relacionado con la fertilidad masculina.
Varios estudios han demostrado que la LDHA juega un papel crítico en la supervivencia de los tumores y que su expresión está regulada al alza en los tejidos cancerosos. Los niveles elevados de lactato conducen a acidosis extracelular que permite la invasión tumoral y la metástasis. Los informes que describen que el silenciamiento de la expresión de LDHA conduce a una proliferación tumoral reducida en hipoxia, crecimiento tumoral reducido y estimulación de la respiración mitocondrial apuntan al fuerte potencial de alteración metabólica en el tratamiento del cáncer. Además, los pacientes con deficiencia de la subunidad M de lactato deshidrogenasa no tienen síntomas de rigidez muscular o mioglobinuria en condiciones aeróbicas, lo que confirma que la LDHA es un objetivo farmacológico seguro y su inhibición no producirá efectos secundarios graves.
La LDHA juega un papel crucial en la promoción de la glucólisis en las células tumorales invasivas ya que contribuye al agotamiento de la reserva de piruvato producido por la actividad glucolítica. De lo contrario, el piruvato estaría disponible para la descarboxilación oxidativa y otras reacciones posteriores en la respiración celular. La sobreexpresión de LDHA se detecta en muchos tipos de células cancerosas y la eliminación de LDHA mediada por ARNsh da como resultado una inhibición significativa del crecimiento tumoral en líneas celulares de cáncer dependientes de glucolíticamente.
La reacción inversa, en la que el lactato exógeno se convierte en piruvato endógeno, es catalizada por la lactato deshidrogenasa B ("LDHB"). La LDHB se encuentra principalmente en el corazón y los glóbulos rojos, donde contribuye a la producción de energía en el corazón que late durante el ejercicio, donde el exceso de lactato de la actividad muscular anaeróbica es elevado. Esto sugiere que sería deseable la capacidad de lograr selectividad sobre esta enzima particular. La capacidad para inhibir la actividad de LDHA, y en particular para inhibir "selectivamente" la actividad de LDHA, representa de este modo un enfoque atractivo para el desarrollo de nuevos métodos terapéuticos para tratar el cáncer y enfermedades asociadas.
Se han informado y propuesto varios inhibidores de LDHA para su uso en el tratamiento de diversos tipos de cáncer. Entre estos se encuentran ciertos compuestos de piperidina-diona descritos por Genentech, Inc. en el documento WO 2015/140133. Se encontró que un número de los compuestos divulgados en esta solicitud anterior presentaban valores bajos de IC50 de LDHA en un ensayo de inhibición de la enzima LDHA, sin embargo, faltaban ensayos de inhibición en células cancerosas.
Una solicitud relacionada presentada por Genentech, Inc., WO 2015/142903, se refiere al control de la producción de lactato en cultivos de células de mamíferos usados para producir proteínas recombinantes. Los mismos compuestos de piperidina-diona se describen y prueban en cuanto a su capacidad para inhibir la LDHA en el mismo ensayo de inhibición de la enzima LDHA. El compuesto 44 (denominado "Gx" en el documento WO 2015/142903; véase la estructura a continuación) se prueba en células CHO derivadas de un huésped CHO-K1 transfectado de forma estable para producir un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante para determinar su efecto sobre el crecimiento de
Figure imgf000003_0001
En un artículo posterior escrito por los inventores de estas aplicaciones de Genentech anteriores, este inhibidor de LDHA particular (en el artículo denominado "GNE-140") se usó para investigar el papel de LDHA en el crecimiento tumoral in vitro e in vivo. (véase Nature Chemical Biology DOI:10.1038/NCHEMBIO.2143, 1 August 2016). En células pancreáticas humanas MIA PaCa-2, la inhibición de LDHa por "GNE-140" afectó rápidamente al metabolismo global, aunque la muerte celular solo se produjo después de 2 días de inhibición continua de LDHA. En particular, in vivo, "GNE-140" no pudo mantener la inhibición de LDHA durante más de 1 hora debido a su rápida eliminación. Los autores concluyeron que los inhibidores de LDHA requieren propiedades farmacocinéticas que puedan proporcionar una modulación sostenida del objetivo in vivo durante múltiples días para aumentar su utilidad clínica.
De este modo, todavía existe una necesidad de inhibidores de LDHA alternativos.
Ahora se ha encontrado una clase seleccionada de compuestos que exhiben actividad inhibidora de LDHA y que, al menos en algunas realizaciones, exhiben actividad inhibidora de LDHA "selectiva". Estos compuestos proporcionan una alternativa a los inhibidores de LDHA conocidos en el estado de la técnica, tales como los descritos en los documentos WO 2015/140133 y WO 2015/142903. Sus propiedades los hacen particularmente apropiados para su uso en el tratamiento o prevención de afecciones o trastornos que están mediados por la activación de LDHA, por ejemplo, como agentes anticancerígenos para su uso contra tumores hipóxicos y/o altamente glucolíticos.
Como se describirá en este documento, al menos en algunas realizaciones, los compuestos según la invención proporcionan una mejora sobre los divulgados en los documentos WO 2015/140133 y WO 2015/142903.
Sumario de la invención
En un aspecto, la invención se refiere a los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000004_0001
en la que:
Ai es -O-, -CH2- o -S-;
A2 es NR (en el que R es cualquiera H o alquilo C1-3) u -O-;
A3 es N o CR5 ;
A4 es N o CR6;
A5 es N o CR7 ;
A6 es N o CR8;
R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente de H y halógeno;
R4 se selecciona de:
- H;
- halógeno;
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR9 en el que R9 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR10 en el que R10 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
R5 se selecciona de:
- H;
- hidroxi;
- alquilo C1-6 ; y
- alcoxi C1-6 ;
R6 se selecciona de:
-H;
- halógeno;
- alquilo Ci-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano y nitro;
- alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano, nitro y cicloalquilo C3-8 ;
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, - -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR11 en el que R11 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR12 en el que R12 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
R7 y R8 se seleccionan independientemente de:
- H;
- hidroxi;
- alquilo C1-6 ; y
- alcoxi C1-6 ;
con las condiciones de que:
A3 y A4 no sean ambos N al mismo tiempo;
A5 y A6 no sean ambos N al mismo tiempo; y
cuando A2 es NR, al menos uno de R1, R2 y R3 es halógeno.
En un aspecto adicional, la invención se relaciona con tautómeros de compuestos de fórmula (I) y derivados de los mismos, tales como los compuestos de fórmula (la), sus estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000005_0001
da)
en la que Ai a A6 y R1 a R4 son como se definen en este documento; y Rp es ya sea H o un grupo que tiene la fórmula (II):
Figure imgf000005_0002
en la que:
* indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula;
Y es -O- o NR¡ donde R¡ es ya sea H o alquilo C1-3 (por ejemplo, CH3);
X se selecciona de:
- H;
- hidroxi;
- NRjRk donde R1 y Rk se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6 (preferiblemente alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3);
- -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos hidrofílicos;
- -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos arilo o heteroarilo, cuyos grupos arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ; y
- un grupo arilo o heteroarilo que puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ;
p es 0 o 1;
q es un número entero desde 0 a 6;
r es 0 o 1; y
s es 0 o 1.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o (Ia), un estereoisómero, un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (Ia), un estereoisómero, un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia o para su uso como medicamento.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (Ia), un estereoisómero, un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de LDHA, por ejemplo para su uso en la inhibición "selectiva" de LDHA sobre LDHB.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (Ia), un estereoisómero, un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno que responde a la inhibición de LDHA, por ejemplo, una enfermedad o trastorno que está mediado por la activación de LDHa , preferiblemente para su uso en el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo tal como cáncer.
Descripción detallada de la invención
Definiciones
El término "alquilo", como se usa en este documento, se refiere a una cadena de carbono monovalente saturada, lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, tert-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, neo-pentilo, n-hexilo, etc. Un grupo alquilo contiene preferiblemente de 1-6 átomos de carbono, por ejemplo, 1-4 átomos de carbono. A menos que se especifique lo contrario, cualquier grupo alquilo puede estar sustituido en una o más posiciones con un sustituyente apropiado. Cuando está presente más de un grupo sustituyente, estos pueden ser iguales o diferentes. Los sustituyentes apropiados incluyen grupos hidroxi, alcoxi C1-6 , amino, ciano y nitro, o átomos de halógeno (por ejemplo, F, Cl o Br). El término "alcoxi", como se usa en este documento, se refiere a un grupo -O-alquilo, en el que alquilo es como se define en este documento. Los ejemplos de grupos alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propiloxi, etc. A menos que se especifique lo contrario, cualquier grupo alcoxi puede estar sustituido en una o más posiciones con un sustituyente apropiado. Cuando está presente más de un grupo sustituyente, estos pueden ser iguales o diferentes. Los sustituyentes apropiados incluyen grupos hidroxi, alcoxi C1-6 , amino, ciano y nitro, o átomos de halógeno (por ejemplo, F, Cl o Br).
El término "arilo", como se usa en este documento, se refiere a sistemas de anillos aromáticos. Tales sistemas de anillos pueden ser monocíclicos o bicíclicos y contener al menos un anillo aromático insaturado. Cuando estos contienen anillos bicíclicos, estos pueden estar condensados. Preferiblemente tales sistemas contienen de 6-20 átomos de carbono, por ejemplo, ya sea 6 o 10 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen fenilo, 1-naftilo y 2-naftilo. Un grupo arilo preferido es fenilo. A menos que se indique lo contrario, cualquier grupo arilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes como se describe en este documento. Cuando está presente más de un grupo sustituyente, estos pueden ser iguales o diferentes.
El término "cicloalquilo" se refiere a un sistema de carbono cíclico saturado monovalente. Incluye anillos monocíclicos y bicíclicos. Los anillos monocíclicos pueden contener desde 3 a 8 átomos de carbono y los anillos bicíclicos pueden contener desde 7 a 14 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo monocíclicos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, etc. A menos que se especifique lo contrario, cualquier grupo cicloalquilo puede estar sustituido en una o más posiciones con un sustituyente apropiado. Cuando está presente más de un grupo sustituyente, estos pueden ser iguales o diferentes. Los sustituyentes apropiados incluyen grupos hidroxi, alcoxi C1-6, amino, ciano y nitro, o átomos de halógeno (por ejemplo, F, Cl o Br).
Los términos "halógeno", "halo" o "átomo de halógeno" se usan indistintamente en este documento y se refieren a -F, -Cl, -Br o -I.
El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se define en este documento en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo alquilo está reemplazado por un átomo de halógeno, preferiblemente F, Cl o Br. Los ejemplos de tales grupos incluyen -CH2F, -CHF2 , -CF3 , -CCl3, -CHCb, -CH2CF3 , etc.
El término "hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo como se define en este documento en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo alquilo está reemplazado por un grupo hidroxi. Los ejemplos de tales grupos incluyen metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, tert-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, neo-pentilo, n-hexilo, etc., en el que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen por -OH.
El término "anillo heterocíclico" como se usa en este documento se refiere a un sistema carbocíclico de 4 a 6 miembros (preferiblemente de 5 o 6 miembros) saturado o parcialmente insaturado en el que al menos un átomo del anillo es un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, siendo los átomos restantes del anillo de carbono. La estructura de anillo heterocíclico puede estar unida al resto de la molécula a través de un átomo de carbono o a través de un átomo de nitrógeno. Los ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, tetrahidrofurano, piperidina, pirrolidina, dioxano, morfolina, etc. A menos que se indique lo contrario, cualquier anillo heterocíclico mencionado en este documento puede estar opcionalmente sustituido con uno o más grupos, que pueden ser idénticos o diferentes. por ejemplo, grupos hidroxi, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amino, ciano o nitro, o átomos de halógeno (por ejemplo, F, Cl o Br).
Como se usa en este documento, el término "heteroarilo" se refiere a grupos aromáticos heterocíclicos. Dichos grupos pueden ser monocíclicos o bicíclicos y contener al menos un sistema de anillo heteroaromático insaturado. Cuando estos son monocíclicos, comprenden anillos de 5 o 6 miembros que contienen al menos un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, oxígeno y azufre y contienen suficientes enlaces conjugados para formar un sistema aromático. Cuando estos son bicíclicos, pueden contener de 9 a 11 átomos en el anillo. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen tiofeno, tienilo, piridilo, tiazolilo, furilo, pirrolilo, triazolilo, imidazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, pirazolilo, imidazolonilo, oxazolonilo, tiazolonilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, bencimidazolilo, benzooxazolilo, benzofurilo, indolilo, isoindolilo, piridocinilo, piridocinilo, pirimidinilo, imidazopiridilo, oxazopiridilo, tiazolopiridilo, imidazopiridazinilo, oxazolopiridazinilo, tiazolopiridazinilo y purinilo. A menos que se indique lo contrario, cualquier anillo de heteroarilo mencionado en este documento puede estar opcionalmente sustituido con uno o más grupos como se describe en este documento. Cuando está presente más de un grupo sustituyente, estos pueden ser iguales o diferentes.
El término "grupo hidrofílico" se refiere a un grupo sustituyente que es capaz de formar puentes de hidrógeno. Los ejemplos de grupos hidrofílicos incluyen, pero no se limitan a, hidroxi, tiol y amina.
Cuando se hace referencia a uno o más sustituyentes, esto se refiere a la sustitución por 1 a 12 sustituyentes que pueden seleccionarse independientemente de los grupos definidos en este documento. En una realización, pueden estar presentes 1,2, 3, 4, 5 o 6 sustituyentes, preferiblemente 1, 2 o 3, por ejemplo, 1 o 2.
Los compuestos de la invención pueden contener uno o más estereocentros y, por lo tanto, pueden existir en diferentes formas estereoisómeras. El término "estereoisómero" se refiere a compuestos que tienen una constitución química idéntica pero que difieren con respecto a la disposición espacial de los átomos o grupos. Ejemplos de estereoisómeros son enantiómeros y diastereómeros. El término "enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí. El término "diastereoisómeros" se refiere a estereoisómeros con dos o más estereocentros que no son imágenes especulares entre sí. Se considera que la invención se extiende a los diastereómeros y enantiómeros, así como a las mezclas racémicas y mezclas enantioenriquecidas en las que la relación de enantiómeros es distinta de 1 :1.
Los compuestos descritos en este documento se pueden resolver en sus enantiómeros y/o diastereómeros. Por ejemplo, cuando estos contienen solo un estereocentro, estos pueden proporcionarse en forma de racemato o mezcla racémica (una mezcla 50:50 de enantiómeros) o pueden proporcionarse como enantiómeros puros, es decir, en forma R o S. Cualquiera de los compuestos que se presentan como racemato puede separarse en sus enantiómeros mediante métodos conocidos en la técnica, tales como separación en columna en fases quirales o mediante recristalización en un disolvente ópticamente activo. Aquellos compuestos con al menos dos átomos de carbono asimétricos pueden resolverse en sus diastereoisómeros sobre la base de sus diferencias físico-químicas usando métodos conocidos per se, por ejemplo, por cromatografía y/o cristalización fraccionada, y cuando estos compuestos se obtienen en forma racémica, pueden ser disueltos posteriormente en sus enantiómeros.
El término "tautómero", como se usa en este documento, se refiere a isómeros estructurales que se interconvierten fácilmente por medio de una reacción química que puede implicar la migración de un protón acompañada por un cambio de un enlace sencillo y un enlace doble adyacente. Incluye, en particular, tautómeros de ceto-enol. Dependiendo de las condiciones, los compuestos pueden existir predominantemente ya sea en forma de ceto o enol y no se pretende que la invención se limite a la forma particular que se muestra en cualquiera de las fórmulas estructurales proporcionadas en este documento.
El término "sal farmacéuticamente aceptable", como se usa en este documento, se refiere a cualquier sal orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos descritos en este documento. Una sal farmacéuticamente aceptable puede incluir una o más moléculas adicionales, tal como contraiones. Los contraiones pueden ser cualquier grupo orgánico o inorgánico que estabilice la carga del compuesto original. Si el compuesto de la invención es una base, se puede preparar una sal farmacéuticamente aceptable apropiada por reacción de la base libre con un ácido orgánico o inorgánico. Si el compuesto de la invención es un ácido, se puede preparar una sal farmacéuticamente aceptable apropiada mediante la reacción del ácido libre con una base orgánica o inorgánica. En este documento se describen ejemplos no limitantes de sales apropiadas.
El término "farmacéuticamente aceptable" significa que el compuesto o composición es química y/o toxicológicamente compatible con otros componentes de la formulación o con el paciente (por ejemplo, ser humano) que se va a tratar.
Por "una composición farmacéutica" se entiende una composición en cualquier forma apropiada para ser usada con fines médicos.
Como se usa en este documento, "tratamiento" incluye cualquier aplicación terapéutica que pueda beneficiar a un ser humano o un animal no humano (por ejemplo, un mamífero no humano). Tanto los tratamientos humanos como los veterinarios están dentro del alcance de la presente invención, aunque principalmente la invención está dirigida al tratamiento de humanos. El tratamiento puede ser con respecto a una enfermedad o condición existente o puede ser profiláctico.
Como se usa en este documento, una "cantidad farmacéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que conducirá al efecto farmacológico y/o terapéutico deseado, es decir, una cantidad del agente que es eficaz para lograr su propósito previsto. Si bien las necesidades individuales de los pacientes pueden variar, la determinación de los rangos óptimos para las cantidades efectivas del agente activo está dentro de la capacidad de un experto en la técnica. Generalmente, el régimen de dosificación para tratar una enfermedad o afección con cualquiera de los compuestos descritos en este documento se selecciona de acuerdo con una variedad de factores que incluyen la naturaleza de la afección médica y su gravedad.
Como se usa en este documento, "lactato deshidrogenasa A" o "LDHA" se refiere a una enzima que se expresa predominantemente en el músculo y que convierte el piruvato que se origina en la glucólisis en lactato, junto con la oxidación de NADH en NAD+.
Cualquier referencia en este documento a "actividad de lactato deshidrogenasa A" o "actividad de LDHA" se refiere a la conversión de piruvato en lactato, a una actividad de proliferación celular o a cualquier otra actividad enzimática de la lactato deshidrogenasa A, o un fragmento de la misma. La referencia a un "inhibidor de lactato deshidrogenasa A" o "inhibición de la lactato deshidrogenasa A" debe interpretarse de acuerdo con lo anterior. Un "inhibidor de lactato deshidrogenasa A" es de este modo un compuesto que reduce la conversión de piruvato en lactato por lactato deshidrogenasa A, que reduce la actividad proliferativa de lactato deshidrogenasa A, o que reduce de otro modo la actividad enzimática de lactato deshidrogenasa A. Dicha reducción no necesita ser completa, pero por lo general será una reducción de al menos aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, o puede ser tan alta como al menos 90 % o al menos el 95 %. En ciertas realizaciones de la invención, los compuestos descritos en este documento inhiben "selectivamente" una actividad enzimática de la lactato deshidrogenasa A. Tal inhibición se considera "selectiva" siempre que el compuesto inhiba la actividad de la lactato deshidrogenasa A en mayor medida que inhibe la de lactato deshidrogenasa B.
La invención se basa, al menos en parte, en el descubrimiento de que ciertas modificaciones de los inhibidores de LDHA conocidos conducen a compuestos que no solo retienen su actividad inhibidora de LDHA, sino que también pueden exhibir selectividad para la inhibición de LDHA. Este descubrimiento conduce al uso de los compuestos para tratar afecciones o enfermedades en sujetos, por ejemplo, en humanos, que están mediados por la activación de LDHA. La permeabilidad de la membrana celular de los compuestos mejora aún más cuando estos se proporcionan en forma de ciertos derivados como se describe en este documento.
En un aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, tautómeros y sales
Figure imgf000009_0001
A1 es -O-, -CH2- o -S-;
A2 es NR (en la que R es ya sea H o alquilo C1-3) u -O-;
A3 es N o CR5 ;
A4 es N o CR6;
A5 es N o CR7 ;
A6 es N o CR8;
R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente de H y halógeno;
R4 se selecciona de:
- H;
- halógeno;
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR9 en el que R9 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR10 en el que R10 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
R5 se selecciona de:
- H;
- hidroxi;
- alquilo C1-6 ; y
- alcoxi C1-6 ;
R6 se selecciona de:
- H;
- halógeno;
- alquilo Ci-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano y nitro;
- alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano, nitro y cicloalquilo C3-8 ;
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro;
- OR11 en el que R11 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR12 en el que R12 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
R7 y R8 se seleccionan independientemente de:
- H;
- hidroxi;
- alquilo C1-6 ; y
- alcoxi C1-6 ;
con las condiciones de que:
A3 y A4 no son ambos N al mismo tiempo;
A5 y A6 no son ambos N al mismo tiempo; y
cuando A2 es NR, al menos uno de R1, R2 y R3 es halógeno.
En un aspecto adicional, la invención proporciona compuestos de fórmula (Ia), sus tautómeros, estereoisómeros y
Figure imgf000010_0001
en la que A1 a A6 y R1 a R4 son como se definen en este documento; y RP es H o un grupo que tiene la fórmula (II):
Figure imgf000010_0002
en la que:
* indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula;
Y es -O- o NRi donde Ri es H o alquilo C1-3 (por ejemplo, CH3);
X se selecciona de:
- H;
- hidroxi;
- NRjRk donde Rj y Rk se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6 (preferiblemente alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3);
- -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos hidrofílicos;
- -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos arilo o heteroarilo, cuyos grupos arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ; y
- un grupo arilo o heteroarilo que puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ;
p es 0 o 1;
q es un número entero desde 0 a 6;
r es 0 o 1; y
s es 0 o 1.
Cualquiera de las realizaciones descritas en este documento puede estar relacionada con los compuestos de fórmula (I) o con los compuestos de fórmula (Ia), sus tautómeros, estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables. En una realización, A1 es -S-.
En una realización, A2 es NH o N-metilo, preferiblemente NH
En una realización, la invención se relaciona con compuestos de fórmula (III) y (IIIa), sus tautómeros, estereoisómeros
Figure imgf000011_0001
en las que A3 a Ae, R1 a R4 y Rp son como se definen en este documento.
En otra realización, A2 es O. Cuando A2 es O, R1, R2 y R3 pueden ser H o halógeno. En una realización, A2 es O y al menos uno de R1, R2 y R3 es halógeno.
En una realización, la invención se relaciona con compuestos de fórmula (IV) y (IVa), sus tautómeros, estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000012_0001
en las que A3 a A6, R1 a R4 y Rp son como se definen en este documento.
En una realización, A5 es N. En una realización, tanto A4 como A5 son N.
En una realización, A5 es CR7 en el que R7 es H. En una realización, A6 es CR8 en el que R8 es H. En una realización, tanto A5 como A6 son CH.
En una realización, A3 es N. Cuando A3 es N, A4 es distinto de N, es decir, CR6. En una realización, cuando A3 es N, A4 es CRa y R4 es H. En otra realización, cuando A3 es N, A4 es CR6 en el que R6 es distinto de H y R4 es H. En otra realización, cuando A3 es N, A4 es CR6 en el que R6 es H y R4 es distinto de H.
En una realización, la invención se refiere a los compuestos de fórmula (V) y (Va), sus tautómeros, estereoisómeros
Figure imgf000012_0002
en la que Ai, A2, R1 a R3, R6 y Rp son como se definen en este documento.
En una realización de los compuestos de la invención, por ejemplo, en los compuestos de fórmula (V) y (Va), R6 puede ser distinto de H. Por ejemplo, R6 puede seleccionarse de cualquiera de los siguientes:
- halógeno;
- alquilo Ci-a opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi Ci-a, haloalquilo Ci-a, hidroxialquilo Ci-a, amino, ciano y nitro;
- alcoxi Ci-a opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi Ci-a, haloalquilo Ci-a, hidroxialquilo Ci-a, amino, ciano, nitro y cicloalquilo C3-8;
- un anillo heterocíclico de 4 a a miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo Ci-a, alcoxi Ci-a, haloalquilo Ci-a, hidroxialquilo Ci-a, -CO2H, -C(O)-O-alquilo Ci-a, -C(O)-alquilo Ci-a, amino, ciano y nitro;
- ORii en el que Rii es un anillo heterocíclico de 4 a a miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo Ci-a, alcoxi Ci-a, haloalquilo Ci-a, hidroxialquilo Ci-a, -CO2H, -C(O)-O-alquilo Ci-a, -C(O)-alquilo Ci-a, amino, ciano y nitro; y
- ORi2 en el que R i2 es un grupo cicloalquilo C3-8.
i2
En una realización, R6 es halógeno (por ejemplo, Br o Cl, preferiblemente Br), o un grupo alcoxi Ci-6 opcionalmente sustituido.
En una realización, R6 es un grupo alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido como se define en este documento. Cuando está sustituido, los sustituyentes apropiados incluyen grupos cicloalquilo C3-8, por ejemplo, ciclopentilo no sustituido. En una realización, A3 es CR5. En otra realización, A3 es CH.
En una realización, cuando A3 es CH, A4 es CR6. En otra realización, cuando A3 es CH, A4 es CR6 en la que R6 es H. En una realización, la invención se refiere a compuestos de fórmula (VI) y (VIa), sus tautómeros, estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000013_0001
en las que Ai, A2 , Ri a R4 y RP son como se definen en este documento.
En una realización de los compuestos de la invención, por ejemplo en los compuestos de fórmula (VI) y (Vía), R4 puede ser distinto de H. Por ejemplo, R4 puede seleccionarse de cualquiera de los siguientes:
- halógeno;
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro;
- OR9 en el que R9 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
- OR10 en el que R10 es un grupo cicloalquilo C3-8.
En una realización, R4 se selecciona de:
- H;
- halógeno; y
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro.
En una realización, R4 se selecciona de:
- H;
- Br o Cl, preferiblemente Br; y
- un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros que no está sustituido.
En una realización, R4 es H, Br o morfolinilo.
En cualquiera de los compuestos descritos en este documento, Ri, R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente de H y halógeno siempre que cuando A2 sea NH o N-(alquilo C1-3) al menos uno de R1, R2 y R3 sea halógeno
En ciertas realizaciones de la invención, uno o dos de R1, R2 y R3 son halógenos. En una realización, uno de R1 , R2 y R3 es halógeno. En otra realización, R1 es halógeno y R2 y R3 son H. En otra realización, R2 es halógeno y R1 y R3 son H. En otra realización, R3 es halógeno y R1 y R2 son H.
Cuando uno o más de R1, R2 y R3 es halógeno, estos pueden seleccionarse independientemente de -F, -Cl y -Br. En una realización, estos se seleccionan de -F y -Cl.
En una realización, R1 o R3 es -Cl, o R2 es -F.
En una realización, RP representa un grupo que tiene la fórmula (II):
Figure imgf000014_0001
en la cual
Y es -O- o NRi donde Ri es ya sea H o alquilo C1-3 (por ejemplo, CH3), preferiblemente -O- o NH, por ejemplo, -O-; X se selecciona de:
- NRjRk donde Rj y Rk se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6 (preferiblemente alquilo C1-3, por ejemplo, CH3);
- -alquilo C1-12 (preferiblemente alquilo C1-6) opcionalmente sustituido con uno o más grupos hidrofílicos seleccionados independientemente de: -OR' (en el que R' es H o alquilo C1-3, por ejemplo, CH3) y -NR"2 (en el que cada R" se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3, por ejemplo, CH3); y
- un grupo arilo o heteroarilo que puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6, haloalcoxi C1-6 y hidroxialquilo C1-6; y
p, q, r y s son como se definen en este documento.
En una realización, Y es -O-.
En una realización, X es alquilo C1-12 (preferiblemente alquilo C1-6) opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de: -OR' (en el que R' es ya sea H o alquilo C1-3, por ejemplo, CH3), y -NR"2 (en el que cada R" se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3, por ejemplo, CH3).
En una realización, RP es un grupo de fórmula (II) en el que p es 1, y cada uno de r y s es 0. En esta realización, RP es un grupo de fórmula (VII):
*-CO-O-(CH2)q-X (VII)
en la que *, q y X son como se definen en este documento.
En la fórmula (VII), X puede ser alquilo C1-12 opcionalmente sustituido en el que el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada. Se pueden preferir los grupos alquilo de cadena corta, tal como alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C1-4. En una realización, X es alquilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1. Los ejemplos no limitantes de grupos de fórmula (VII) incluyen los siguientes (en los que * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula):
Figure imgf000014_0002
Figure imgf000015_0001
En una realización, RP es un grupo de fórmula (II) en el que cada uno de p, r y s es 0. En esta realización, RP es un grupo de fórmula (VIII):
*-CO-(CH2)q-X (VIII)
en la que *, q y X son como se definen en este documento.
En la fórmula (VIII), X puede ser alquilo C1-12 opcionalmente sustituido en el que el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada. Se pueden preferir los grupos alquilo de cadena corta, tales como alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C1-4. En una realización, X es alquilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1. En la fórmula (VIII), X puede ser un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, por ejemplo, un grupo heteroarilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1, preferiblemente 0.
Los ejemplos no limitantes de grupos de fórmula (VIII) incluyen los siguientes (en los que * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula):
Figure imgf000016_0001
En una realización, Rp es un grupo de fórmula (II) en la que Y es -O-, cada uno de p y r es 1 y s es 0. En esta realización, RP es un grupo de fórmula (IX):
*-CO-O-(CH2)q-O-X (IX)
en la que *, q y X son como se definen en este documento.
En la fórmula (IX), X puede ser alquilo C1-12 opcionalmente sustituido en el que el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada. Se pueden preferir los grupos alquilo de cadena corta, tales como alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C1-4. En una realización, X es alquilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1. Preferiblemente, q es 1.
Los ejemplos no limitantes de grupos de fórmula (IX) incluyen los siguientes (en los que * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula):
Figure imgf000016_0002
En una realización, RP es un grupo de fórmula (II) en la que Y es -O-, cada uno de p y s es 0 y r es 1. En esta realización, RP es un grupo de fórmula (X):
*-CO-(CH2)q-O-X (X)
en la que *, q y X son como se definen en este documento.
En la fórmula (X), X puede ser alquilo C1-12 opcionalmente sustituido en el que el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada. Se pueden preferir los grupos alquilo de cadena corta, como alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C1-4. En una realización, X es alquilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1.
Los ejemplos no limitantes de grupos de fórmula (X) incluyen los siguientes (en los que * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula):
Figure imgf000017_0001
En una realización, RP es un grupo de fórmula (II) en el que Y es -O-, p es 0 y cada uno de r y s es 1. En esta realización, RP es un grupo de fórmula (XI):
*-CO-(CH2)q-O-CO-X (XI)
en la que *, q y X son como se definen en este documento.
En la fórmula (XI), X puede ser alquilo C1-12 opcionalmente sustituido en el que el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada. Se pueden preferir los grupos alquilo de cadena corta, como alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, por ejemplo, alquilo C1-4. En una realización, X es alquilo no sustituido. En una realización, q es 0 o 1.
Los ejemplos no limitantes de grupos de fórmula (XI) incluyen los siguientes (en los que * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula):
Figure imgf000017_0002
Los ejemplos de compuestos de acuerdo con la invención incluyen, pero no se limitan a, los siguientes:
6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,4-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(6-etoxipiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,5-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona; 3-((2-doro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
3-((2,3-didorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
3-((2,5-didorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
3-((2-dorofenil)tio)-6-(pirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
3-((2-dorofenil)tio)-6-(piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
3-((2-dorofenil)tio)-6-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
Carbonato de 5-[(2-doro-4-fluorofenil)sulfanil]-2-[6-(cidopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo;
Carbonato de 6'-(cidopentilmetoxi)-5-((2,3-didorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il metilo;
Acetato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6'-(ciclopentilmetoxi)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-ilo; Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il- propilo; Carbonato de 5-((2,3-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo;
Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il decilo;
Carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
Carbonato de 2-(5-bromopiridin-2-il)-5-((2-clorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il metilo;
Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,4-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo);
6-(5-bromopiridin-2-il)-3-((2-dorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
3-((2,4-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
Carbonato de 5-((2,4-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo);
Carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il isobutilo; Acetato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
Pivalato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il iso­ butilo;
Isonicotinato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
Carbonato de 5-((2-clorofenil)tio)-2-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il (2-metoxietilo);
Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo);
y sus estereoisómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los compuestos según la invención se pueden convertir en una sal de los mismos, particularmente en una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos con un ácido o una base inorgánicos u orgánicos. Los ácidos que se pueden usar para este propósito incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfónico, ácido metanosulfónico, ácido fosfórico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido acético, ácido trifluoroacético y ácido ascórbico. Las bases que pueden ser apropiadas para este fin incluyen hidróxidos de metales alcalinos y alcalinotérreos, por ejemplo, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o hidróxido de cesio, amoníaco y aminas orgánicas tales como dietilamina, trietilamina, etanolamina, dietanolamina, ciclohexilamina y diciclohexilamina. Los procedimientos para la formación de sales son convencionales en la técnica.
En una realización, los compuestos de la invención se pueden proporcionar en forma de sus derivados de enol correspondientes. Estos incluyen compuestos representados por la fórmula (Ib), sus estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000019_0001
en la que A1 a A6 y R1 a R4 son como se definen en este documento. Cualquiera de estos grupos puede definirse de acuerdo con cualquiera de las realizaciones en este documento descritas con respecto a los compuestos de fórmula (I).
En una realización, los compuestos de la invención son los de fórmula (Ic), sus estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000019_0002
en la que A1 a A6, R1 a R4 son como se definen en este documento, y RP es un grupo de fórmula (II) como se define en este documento.
Cualquiera de A1 a A6, R1 a R4 y RP en la fórmula (Ic) puede definirse de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en este documento con respecto a los compuestos de fórmula (I).
Como se entenderá, los compuestos descritos en este documento pueden existir en diversas formas estereoisómeras, incluidos enantiómeros, diastereómeros y mezclas de los mismos. La invención abarca todos los isómeros ópticos de los compuestos en este documento descritos y mezclas de isómeros ópticos. Por consiguiente, los compuestos que existen como diastereoisómeros, racematos y/o enantiómeros están dentro del alcance de la invención.
En una realización, la invención proporciona compuestos que tienen la siguiente estereoquímica, sus tautómeros y
Figure imgf000020_0001
en la que A1 a A6 y R1 a R4 son como se definen en este documento.
En otra realización, la invención proporciona compuestos que tienen la siguiente estereoquímica, sus tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000020_0002
en la que Ai a A6 y Ri a R4 son como se definen en este documento.
Cualquiera de los compuestos (la), (III), (Illa), (IV), (IVa), (V), (Va), (VI) y (Vía) que tienen esta estereoquímica y, en su caso, cualquier el tautómero, o las sales farmacéuticamente aceptables, forman realizaciones adicionales de la invención.
Los compuestos según la invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando métodos de síntesis conocidos en la técnica, por ejemplo, usando métodos análogos a los descritos en el documento WO 2015/140133.
Los siguientes esquemas muestran métodos generales para preparar los compuestos de la invención y los intermedios clave. Tales métodos forman otro aspecto de la invención. Los compuestos usados como materiales de partida se conocen ya sea de la literatura o pueden estar disponibles comercialmente. Alternativamente, estos pueden obtenerse fácilmente por métodos conocidos de la literatura. Como se comprenderá, se pueden usar otras rutas de síntesis para preparar los compuestos usando diferentes materiales de partida, diferentes reactivos y/o diferentes condiciones de reacción. En los ejemplos se encuentra una descripción más detallada de cómo preparar los compuestos de acuerdo con la invención.
Figure imgf000021_0001
En el esquema 1, A2 es NR (en el que R es H o alquilo C1-3), y A3 a Ae, Ri a R4 son como se definen en este documento.
Figure imgf000022_0001
En el esquema 2, A3 a Ae y Ri a R4 son como se definen en este documento.
Figure imgf000023_0001
átomo de halógeno, por ejemplo, Cl.
Los compuestos según la invención tienen valiosas propiedades farmacológicas, en particular un efecto inhibidor sobre LDHA. En vista de su capacidad para inhibir LDHA, los compuestos según la invención son apropiados para el tratamiento y/o prevención de cualquier condición o enfermedad que esté mediada por la activación de LDHA.
La LDHA juega un papel central en la patología de una variedad de cánceres. De este modo, los compuestos de la invención son particularmente apropiados para prevenir y/o tratar afecciones cancerosas malignas y premalignas en las que la LDHA está regulada al alza, tales como crecimientos o tumores cancerosos, y sus metástasis; tumores tales como sarcomas y carcinomas, en particular tumores sólidos.
Más específicamente, los compuestos son efectivos en el tratamiento y/o prevención de los siguientes cánceres: sarcomas, incluyendo sarcomas osteogénicos y de tejidos blandos; carcinomas, por ejemplo, carcinomas de mama, pulmón, cerebro, vejiga, tiroides, próstata, colon, recto, páncreas, estómago, hígado, útero, hepático, riñón, próstata, cuello uterino y ovario; linfomas, incluidos los linfomas de Hodgkin y no Hodgkin; neuroblastoma, melanoma, mieloma, tumor de Wilm; leucemias, incluyendo leucemia linfoblástica aguda y leucemia mieloblástica aguda; astrocitomas, gliomas y retinoblastomas.
Los ejemplos de cánceres que pueden tratarse de acuerdo con la invención incluyen cánceres de colon (tales como cáncer colorrectal), cáncer de páncreas (por ejemplo, adenocarcinoma de páncreas), cáncer gástrico, cánceres de hígado (por ejemplo, carcinomas hepatocelular y hepatoblastoma), tumor de Wilms del riñón, meduloblastoma, cánceres de piel (por ejemplo, melanoma), cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de cuello uterino, cánceres de ovario (por ejemplo, cáncer de endometrio de ovario), cáncer de vejiga, cánceres de tiroides (por ejemplo, cáncer de tiroides anaplásico), cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de próstata y glioblastoma.
Particularmente preferible, los compuestos descritos en este documento pueden usarse en el tratamiento y/o prevención de cáncer de mama, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, tiroides, colorrectal, pancreático y de próstata y glioblastoma. El tratamiento del cáncer de páncreas y el cáncer de mama es un aspecto preferido de la invención.
Visto desde otro aspecto, la invención proporciona de este modo un compuesto como se describe en este documento para su uso en terapia. A menos que se especifique lo contrario, el término "terapia" como se usa en este documento pretende incluir tanto el tratamiento como la prevención.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un compuesto como se describe en este documento para su uso en el tratamiento o la prevención de cualquiera de las afecciones descritas en este documento, por ejemplo, en el tratamiento o la prevención de cánceres de colon (tales como el cáncer colorrectal), cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cánceres de hígado (por ejemplo, carcinomas hepatocelular y hepatoblastoma), tumor de Wilms del riñón, meduloblastoma, cánceres de piel (por ejemplo, melanoma), cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de cuello uterino, cáncer de endometrio de ovario, cáncer de vejiga, cáncer de tiroides anaplásico, cáncer de cabeza y cáncer de cuello, cáncer de mama, cáncer de próstata o glioblastoma.
Los compuestos descritos en este documento también encuentran uso en el tratamiento o la prevención de otras afecciones asociadas con la hiperproliferación de células y otras enfermedades metabólicas, tales como la epilepsia.
El cerebro necesita mucha energía para funcionar y sus altas demandas de energía se satisfacen a partir de su principal fuente de energía, la glucosa, que es suministrada por el torrente sanguíneo. Sin embargo, el cerebro también puede usar otros sustratos energéticos tales como los cuerpos cetónicos y el lactato. Las cetonas se consumen durante períodos prolongados de inanición, mientras que el lactato se consume durante la actividad física rigurosa, tal como el ejercicio. Las dietas cetogénicas que son altas en grasas y bajas en carbohidratos se han usado desde la década de 1920 como una forma para que los pacientes epilépticos con epilepsia farmacorresistente controlen y, por lo tanto, reduzcan sus ataques (Geyelin, Med. Rec. 99: 1037-1039, 1921; Peterman, Am. J. Dis. Child. 28: 28-33, 1924; and Neal et al., Lancet Neurol. Vol. 7 (6): 500-506, 2008). Esto sugiere que la epilepsia es una enfermedad metabólica que podría beneficiarse de los inhibidores de LDHA como terapia.
Los astrocitos, células gliales en forma de estrella en el cerebro, usan glucosa y la convierten en lactato, que luego se convierte en piruvato en las neuronas; esto se denomina lanzadera de lactato astrocito-neurona. Las neuronas consumen mucho lactato como fuente de energía durante la excitación neuronal, cuando los epilépticos tienen convulsiones (Gallagher et al., Brain 132: 2839-2849, 2009). Se ha demostrado que el piruvato, el compuesto orgánico producido en las neuronas, facilita la actividad epiléptica al despolarizar las células nerviosas (Sada et al., Science 347, 6228: 1362-1367, 2015). El piruvato y el lactato se pueden convertir entre sí mediante la enzima LDH y, de este modo, son regulados por esta. Oxamato, la sal de la mitad de la amida del ácido oxálico, un análogo estructural del piruvato y conocido inhibidor de LDHA, se inyectó directamente en el hipocampo de ratones con epilepsia del lóbulo temporal y se descubrió que suprimía sus convulsiones (Sada et al., arriba). La inhibición de la LDH eliminó los efectos despolarizantes del lactato y también hizo que las células nerviosas se hiperpolarizaran, lo que significa que eran menos excitables, más estables y, de este modo, menos propensas a la actividad epiléptica. Estas observaciones en conjunto sugieren que los inhibidores de LDHA imitan la dieta cetogénica y también podrían servir como un posible fármaco anticonvulsivo para la epilepsia.
Las células altamente proliferativas tales como las células cancerosas tienen demandas de alta energía y necesitan un suministro constante de precursores biosintéticos para que se acumulen macromoléculas tales como ADN, proteínas y lípidos. Para satisfacer esta demanda, se incrementa la captación de glucosa, un efecto que se observa de manera similar en las células inmunitarias e inflamatorias cuando se ha producido una lesión, durante una infección o inflamación. Durante la inflamación, las células T se activan y, de este modo, cambian su metabolismo para su uso el procedimiento menos eficiente pero más rápido de la glucólisis aeróbica, que es independiente de la función mitocondrial e implica una mayor producción de lactato (MacIver et al., Annu. Rev. Immunol. 31: 259-283, 2013; Palmer et al., Front. Immunol, 6: 1,2015). Los experimentos con ratones con enfermedades autoinmunes tales como el asma y la artritis han demostrado que los inhibidores glucolíticos, tales como el dicloroacetato, alivian su inflamación (Bian et al., Arthritis Res. Ther. 11, R132, 2009). También existen compuestos naturales que se sabe que tienen propiedades antiinflamatorias, tales como el comino y la panepoxidona, que también han demostrado inhibir la LDHA (Das et al., PLos ONE 9, e99583, 2014; Arora et al., Oncotarget 6: 662-678, 2015).
Los inhibidores de LDHA descritos en este documento son capaces de cambiar el metabolismo celular de la glucólisis aeróbica a la fosforilación oxidativa y, por lo tanto, también son apropiados para su uso como agentes terapéuticos para trastornos inflamatorios tales como la artritis reumatoide, la esclerosis múltiple y afecciones alérgicas tales como el asma, ya que estas afecciones se caracterizan por un aumento de la glucólisis y la actividad de la LDH.
Para su uso en un tratamiento terapéutico o profiláctico, los compuestos de la invención por lo general se formularán como una formulación farmacéutica. En un aspecto adicional, la invención proporciona de este modo una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la invención, junto con uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Los portadores, excipientes y diluyentes aceptables para su uso terapéutico son bien conocidos en la técnica y se pueden seleccionar con respecto a la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica estándar. Los ejemplos incluyen aglutinantes, lubricantes, agentes de suspensión, agentes de recubrimiento, agentes solubilizantes, agentes conservantes, agentes humectantes, emulsionantes, tensioactivos, edulcorantes, colorantes, agentes aromatizantes, antioxidantes, odorantes, soluciones reguladoras, agentes estabilizantes y/o sales.
Los compuestos de la invención pueden formularse con uno o más portadores y/o excipientes convencionales según técnicas bien conocidas en la técnica. Por lo general, las composiciones se adaptarán para administración oral o parenteral, por ejemplo mediante inyección intradérmica, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa.
Por ejemplo, estos pueden formularse en formas de administración oral convencionales, por ejemplo, comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas, polvos, granulados, soluciones, dispersiones, suspensiones, jarabes, emulsiones, etc., usando excipientes convencionales, por ejemplo, disolventes, diluyentes, aglutinantes, edulcorantes, aromas, modificadores de pH, modificadores de viscosidad, antioxidantes, etc. Los excipientes apropiados pueden incluir, por ejemplo, almidón de maíz, lactosa, glucosa, celulosa microcristalina, estearato de magnesio, polivinilpirrolidona, ácido cítrico, ácido tartárico, agua, etanol, glicerol, sorbitol, polietilenglicol, propilenglicol, alcohol cetilestearílico, carboximetilcelulosa o sustancias grasas tales como grasas saturadas o mezclas apropiadas de los mismos, etc.
Cuando se emplea la administración parenteral, ésta puede ser, por ejemplo, por medio de inyección intravenosa, subcutánea o intramuscular. Para ello, pueden emplearse soluciones estériles que contengan el principio activo, tal como una emulsión de aceite en agua. Cuando haya agua, se puede agregar un sistema regulador apropiado (por ejemplo, fosfato de sodio, acetato de sodio o borato de sodio) para evitar la desviación del pH en las condiciones de almacenamiento.
El uso de composiciones administrables por vía oral, por ejemplo, se prefieren especialmente comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas, jarabes, etc.
Las formulaciones se pueden preparar usando técnicas convencionales, tales como procedimientos de disolución y/o mezcla.
La dosificación requerida para lograr la actividad deseada de los compuestos en este documento descritos dependerá de diversos factores, como el compuesto seleccionado, su modo y frecuencia de administración, si el tratamiento es terapéutico o profiláctico, y la naturaleza y gravedad de la enfermedad o afección, etc. Por lo general, un médico determinará la dosificación real que será más apropiada para un sujeto individual.
El nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier paciente en particular pueden variar y dependerán de factores tales como la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad del paciente, el modo y tiempo de administración, y la severidad de la condición particular. El compuesto y/o la composición farmacéutica se pueden administrar de acuerdo con un régimen desde 1 a 10 veces al día, tal como una o dos veces al día. Para la administración oral y parenteral a pacientes humanos, el nivel de dosificación diario del agente puede ser en dosis únicas o divididas.
Se espera que las dosificaciones diarias apropiadas de los compuestos descritos en este documento estén en el intervalo de 0.1 mg a 1 g del compuesto; 1 mg a 500 mg del compuesto; 1 mg a 300 mg del compuesto; 5 mg a 100 mg del compuesto, o 10 mg a 50 mg del compuesto. Por “dosificación diaria” se entiende la dosificación por 24 horas.
Las propiedades farmacológicas de los compuestos de la invención pueden analizarse usando ensayos estándar para la actividad funcional. En los ejemplos se proporcionan protocolos detallados para probar los compuestos de la invención.
Ejemplos
La invención se describirá ahora con más detalle por medio de los siguientes ejemplos no limitantes y con referencia a las figuras adjuntas, en las que:
La figura 1 muestra la viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-231 a las 24, 72 y 120 horas después de la incubación con diversos compuestos según la invención;
La figura 2 muestra la viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-468 a las 24, 72 y 120 horas después de la incubación con diversos compuestos según la invención;
La figura 3 muestra la viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-231 y MDA-MB-468 a las 120 horas después de la incubación con el compuesto conocido del ejemplo 24 (que corresponde al compuesto 44 en el documento WO 2015/142903) y los compuestos de los ejemplos 8 y 10;
La figura 4 muestra la viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-231 y MDA-MB-468 a las 120 horas después de la incubación con el compuesto conocido del ejemplo 25 (que corresponde al compuesto 194 en el documento WO 2015/142903) y los compuestos de los ejemplos 1, 3 y 5;
La figura 5 muestra la viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-231 y MDA-MB-468 a las 120 horas después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 10 y 17;
La figura 6 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 y células cancerosas MIA PaCa-2 después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 1 a 23;
La figura 7 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 y células cancerosas MIA PaCa-2 después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 8, 9, 10 y 29 en comparación con la incubación con el compuesto conocido del ejemplo 24 (que corresponde al compuesto 44 en el documento WO 2015/142903);
La figura 8 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 y células cancerosas MIA PaCa-2 después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 1, 3, 5 y 7 en comparación con la incubación con el compuesto conocido del ejemplo 25 (que corresponde al compuesto 194 en el documento WO 2015/142903);
La figura 9 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 y células cancerosas MIA PaCa-2 después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 10, 17 y 31;
La figura 10 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 y células cancerosas MIA PaCa-2 después de la incubación con los compuestos de los ejemplos 8, 14, 32 y 33;
La figura 11 muestra el % de lactato en células MDA-MB-468 después de la incubación con el compuesto del ejemplo 10 (como una mezcla racémica) en comparación con uno de sus enantiómeros (Enantiómero 1) (figura de la izquierda) y el % de lactato en células MIA PaCa-2, células MDA-MB-231, células BT-549, células MCF-7 y células m Da -MB-468 para el mismo enantiómero del compuesto del ejemplo 10 (figura de la derecha); y
La figura 12 muestra la tasa de viabilidad celular de las células cancerosas MDA-MB-468 después de la incubación con las concentraciones indicadas del compuesto del ejemplo 10 durante un transcurso de tiempo de 120 horas con intervalos de 3 horas (figura de la izquierda) y células vivas por % de células cancerosas m Da -MB-468 sin tratar después de 96 horas de incubación para diferentes concentraciones de compuesto del ejemplo 10 (figura de la derecha).
Las reacciones químicas descritas en los Ejemplos pueden adaptarse fácilmente para preparar otros inhibidores de LDHA de acuerdo con la invención, por ejemplo, usando otros reactivos conocidos en la técnica, modificando las condiciones de reacción y/o eligiendo cualquier grupo protector apropiado, etc.
Se usaron todos los reactivos y disolventes comercialmente disponibles sin más purificaciones. Los espectros de RMN (1H, 13C) se registraron en un espectrómetro Bruker AVII-400 MHz, AVIII-400 MHz o un DPX-300 MHz. Las constantes de acoplamiento (J) se informan en hercios (Hz) y los cambios químicos se informan en partes por millón (ppm) en relación con CDCb (7.26 ppm para 1H y 77.16 ppm para 13C), metanol-d4 (3.31 ppm para 1H y 49.15 ppm para 13C) y DMSO-d6 (2.50 ppm para 1H y 39.52 ppm para 13C). Todos los rendimientos no están corregidos.
Abreviaturas:
DCM: diclorometano; h: hora; MeOH: metanol; THF: tetrahidrofurano;
e.e.: exceso enantiomérico; Rt: tiempo de retención.
Preparación de materiales de partida:
Todos los materiales de partida de piperidina-diona se prepararon usando el procedimiento descrito en el documento WO 2015/140133, o versiones modificadas apropiadas del mismo.
A. Preparación de la 6-(6-bromopiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona:
Figure imgf000027_0001
Etapa A: se agregaron clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (14.6 g, 0.15 mol), HATU (57.0 g, 0.15 mol) y diisopropiletilamina (47.8 g, 0.37 mol) a una lechada de ácido 6 -bromopicolínico (25.3 g, 0.125 mol) en DCM (370 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se lavó con HCl acuoso 1 M (2 x 200 mL) y se filtró para eliminar cualquier sólido de color blanco. Después de concentrar a presión reducida, el producto en bruto se purificó por destilación Kugelrohr y cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo: 10 a 25 %) para dar la 6 -bromo-N-metoxi-N-metilpicolinamida con un rendimiento del 74 %.
Etapa B: se agregó lentamente n-butillitio (48 mL, 0.12 mol) a una solución de 3-bromotiofeno (19.6 g, 0.12 mol) en éter diisopropílico (280 mL) a -78 °C. Después de agitar a -78 °C, durante 30 min, se agregó lentamente 6 -bromo-N-metoxi-N-metilpicolinamida (22.5 g, 92 mmol) en éter diisopropílico (30 mL) y la mezcla se agitó a -78 °C, durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó con NH4Cl acuoso saturado (85 mL), luego se calentó a temperatura ambiente. La solución se diluyó con acetato de etilo (110 mL), se lavó con agua (3 x 100 mL) y salmuera (50 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida para dar la (6-bromopiridin-2-il)(tiofen- 3-il)metanona con un rendimiento del 56 %.
Etapa C: se agregaron (6-bromopiridin-2-il)(tiofen-3-il)metanona (13.8 g, 51.5 mmol) y etóxido de titanio (31.4 mL, 150 mmol) a una solución de 2-metilpropano- 2-sulfinamida (12.2 g, 100 mmol) en THF (200 mL). La mezcla se agitó a reflujo, durante 20 horas. La solución se dejó enfriar a temperatura ambiente y se vertió en agua con hielo, se filtró y se lavó con acetato de etilo (5 x 100 mL). El filtrado se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2 , hexanos/acetato de etilo: 10 a 25 %) para dar la N-((6-bromopiridin-2-il)(tiofen-3-il)metilen)-2-metilpropano-2 -sulfinamida con un rendimiento del 88 %.
Etapa D: Se agregó 3-oxobutanoato de metilo (10.5 g, 90 mmol) en THF (20 mL) a una suspensión de NaH (3.6 g, 90 mmol) en THF (200 mL) a 0 °C. Se agregó lentamente a la mezcla n-butillitio (36 mL, 90 mmol) y la reacción se agitó a 0 °C, durante 30 min. Se agregó a la mezcla N-((6-bromopiridin-2-il)(tiofen-3-il)metilen)-2-metilpropano-2-sulfinamida (16.4 g, 45 mmol) en THF (50 mL) y se agitó a 0 °C, durante otras 2 h. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente, durante la noche y se enfrió a 0 °C. La reacción se inactivó con NH4Cl saturado (100 mL) y se diluyó con acetato de etilo (85 mL). La fase orgánica se lavó con agua (2 x 100 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar el 5-(6-bromopiridin-2-il)-5-((tert-butilsulfinil)amino)-3- oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo.
Etapa E: se agregó lentamente TMSCI (19.1 g, 0.18 mol) a metanol (100 mL) y la mezcla se agregó a una solución de 5-(6-bromopiridin-2-il)-5-((tert-butilsulfinil)amino)-3-oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo (45 mmol) en MeOH (200 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, luego se enfrió a 0 °C y se ajustó lentamente a pH 7 usando NaOH acuoso 2 M (80 mL). El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron para dar el 5-amino-5-(6-bromopiridin-2 -il)-3-oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo.
Etapa F: Se agregó carbonato de potasio (20.7 g, 150 mmol) a una solución de 5-amino-5-(6-bromopiridin-2-il)-3-oxo-5-(tiofen-3-ilo)pentanoato de metilo (45 mmol) en MeOH (150 mL). La mezcla se agitó a reflujo, durante 2 horas y durante la noche a temperatura ambiente. Se eliminó el metanol a presión reducida, el producto en bruto se disolvió en agua (100 mL) y se lavó con acetato de etilo (2 x 40 mL). La capa acuosa se acidificó a pH 4 usando HCl acuoso 3N (95 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (5 x 40 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y concentraron para dar la 6-(6-bromo-2-piridinil)-6-(3-tienil)piperidina-2,4-diona con un rendimiento del 41 % en 3 etapas.
B. Preparación de disulfuros:
Método A: el sulfuro de fenilo (6.2 mmol, 1 eq) se disolvió en DCM (1 mL). Se agregó CF3CH2OH (3 mL) y solución de H2O2 (0.66 mL, 6.8 mmol, 1.1 eq). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche con agitación vigorosa. El precipitado de color blanco se filtró y se secó a presión reducida para proporcionar el disulfuro deseado.
Método B: el sulfuro de fenilo (10 mmol, 1 eq.) se disolvió en CHCb (50 mL) y se agregó 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoína (1.43 g, 5 mmol, 0.5 eq.). Después de 1 h a temperatura ambiente, se agregó una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (10 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (heptano/acetato de etilo: 95/5) para proporcionar el disulfuro deseado.
Preparación del 1,2-bis(2-clorofenil)disulfano:
Figure imgf000028_0001
Método A: Rendimiento = 91 %. 1H RMN (400 MHz): 8 = 7.57 (dd, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.37 (dd, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.22 (td, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.16 (td, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H).
Preparación del 1,2-bis(2,5-diclorofenil)disulfano:
Figure imgf000028_0002
Método B: Rendimiento = 72 %. 1H RMN: 8 = 7.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H).
Preparación del 1,2-bis(2-cloro-4-fluorofenil)disulfano:
Figure imgf000029_0001
Método A: Rendimiento = 70 %. 1H RMN: 8 = 7.53 (dd, J= 11.6, 7.6 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 10.8, 7.6 Hz, 1H), 6.97 (ddd, J = 11.6, 10.8, 3.6 Hz, 1H).
Preparación del 1,2-bis(2,4-didorofenil)disulfano:
Figure imgf000029_0002
Método A: Rendimiento = 92 %. 1H RMN: 8 = 7.46 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 11.2, 2.8 Hz, 1H).
Preparación de 1,2-bis(2,3-diclorofenil)disulfano:
Figure imgf000029_0003
Método B: Rendimiento = 73 %. 1H RMN (300 MHz): 8 = 7.42 (dd, J = 10.8, 2.0 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 10.8, 2.0 Hz, 1H), 7.16 (t, J= 10.8 Hz, 1H).
C. Preparación de la 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000029_0004
Se preparó (4-bromofenil)(tiofen-3-il)metanona según el procedimiento descrito en el documento WO 2015/140133.
Etapa A: una solución de (4-bromofenil)(tiofen-3-il)metanona (3.00 g, 11.2 mmol, 1 eq), morfolina (1.60 mL, 18.0 mmol, 1.5 eq), xantfos (393 mg, 0.68 mmol, 0.06 eq), Pd2(dba)3 (311 mg, 0.34 mmol, 0.03 eq) y K3PO4 (4.30 g, 20.0 mmol, 1.8 eq) en tolueno (110 mL) se agitó a reflujo, durante 18 h. La mezcla se enfrió, se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SO 2 , heptano/acetato de etilo: 8/2 a 2/1 a 1/1) para dar la [4-(morfolin-4-il)fenil](tiofen-3-il) metanona (2.90 g, 10.6 mmol) con un rendimiento del 95 %.
Etapa B: Una solución de [4-(morfolin-4-il)fenil](tiofen-3-il)metanona (5.43 g, 19.9 mmol, 1 eq), t-butilsulfinamida (7.26 g, 60.0 mmol, 3 eq) y Ti(OEt)4 (20.9 mL, 100 mmol, 5 eq) en THF (80 mL) se agitó a reflujo, durante 6 6 h. La mezcla se vertió sobre hielo y se lavó con acetato de etilo (2 x 20 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SiO2 , heptano/acetato de etilo: 8/2 a 7/3 a 1/1) para dar la 2-metil-N-[-[4-(morfolin-4-il)fenilo ](tiofen-3-il)metiliden]propano-2-sulfinamida (4.74 g, 12.6 mmol) con un rendimiento del 63 %.
Etapa C: a una suspensión de NaH (1.01 g, 25.2 mmol, 2 eq) en THF (50 mL) a 0 °C se le agregó acetoacetato de metilo (2.92 g, 25.2 mmol, 2 eq). Después de 5 min a 0 °C, se agregó n-butillitio (10.1 mL, 25.2 mmol, 2 eq.) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a 0 °C. Se agregó 2-metil-N-[[4-(morfolin-4-il)fenil](tiofen-3-il)metiliden]propano-2-sulfinamida (4.74 g, 12.6 mmol, 1 eq) en THF (13 mL) y se continuó agitando durante 1.5 horas a 0 °C. La TLC mostró material de partida restante. Por lo tanto, se preparó otra porción de reactivo con acetoacetato de metilo (1.3 mL), NaH (500 mg) y n-butillitio (5.0 mL) y se agregó a la mezcla de reacción. Después de 1.5 h a 0 °C, la reacción se detuvo mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado (20 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 mL), NaHCO3 acuoso saturado (40 mL) y HCl 1 M (40 mL), se secaron sobre Na2SO4, filtrado y concentrado a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SO 2 , heptano/acetato de etilo: 3/1 a 2/1 a 1/1 a 1/3 a acetato de etilo) para dar el 5-((tert-butilsulfinil)amino)- 5-(4-morfolinofenil)-3-oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo (3.40 g, 6.90 mmol) con un rendimiento del 55 %.
Etapa D: A una solución de 5-((tert-butilsulfinil)amino)-5-(4-morfolinofenil)-3-oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo (3.40 g, 6.90 mmol, 1 eq) en metanol (69 mL) se le agregó TMSCl (2.62 mL, 20.7 mmol, 3 eq). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La reacción se detuvo mediante la adición de NaOH acuoso 2 M (11 mL) y el metanol se eliminó a presión reducida. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto (2.65 g), que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa E: Una solución de 5-amino-5-(4-morfolinofenil)-3-oxo-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo (2.65 g, 6.82 mmol, 1 eq) y K2CO3 (2.83 g, 20.5 mmol, 3 eq) en metanol (34 mL) se agitó a reflujo, durante 2 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó en HCl acuoso 1 M (30 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SO 2 , heptano/acetato de etilo: 4/1 a 2/1 a 1/1 a 1/3 a acetato de etilo al 2 % de MeOH) para dar la 6-(4-morfolinofenil)- 6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (726 mg, 1.87 mmol) con un rendimiento del 30 % en 2 etapas.
Preparación de los compuestos finales:
Ejemplo 1 - Preparación de la 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,4-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000031_0001
Etapa A: A una solución de 6-(6-bromopiridin-2-M)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (500 mg, 1.4 mmol, 1 eq) en MeOH (14 mL) se agregó 1,2-bis(2,4-didorofenil)disulfano (303 mg, 0.85 mmol, 0.6 eq) y carbonato de potasio (593 mg, 4.3 mmol, 3 eq). La reacción se agitó durante 2 horas a reflujo y se concentró a presión reducida. Se agregaron agua (10 mL) y HCl 1 M (7 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 70/30 a 30/70) para dar la 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,4-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (487 mg, 0.92 mmol) con un rendimiento del 65 %.
Etapa B: a una suspensión de NaH (76 mg, 1.9 mmol, 5 eq) en THF (4 mL) a 0 °C se le agregó ciclopentanometanol (204 |iL, 1.9 mmol, 5 eq). La reacción se agitó a 0 °C, durante 30 min y se agregó 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,4-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (200 mg, 0.38 mmol, 1 eq). La reacción se agitó durante la noche a reflujo y se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y HCl 1 M (5 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 75/25) para dar la 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,4-diclorofenil) sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (115 mg, 0.21 mmol) con un rendimiento del 55 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 9.2, 3.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 6.8, 1.2 Hz), 7.19-7.17 (m, 2H), 6.80-6.76 (m, 2H), 5.94 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.29-4.21 (m, 2H), 3.91 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 3.47 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.68-1.54 (m, 4H), 1.41-1.31 (m, 2H).
Ejemplo 2 - Preparación de 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000032_0001
A una solución de 6-(6-bromopiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (500 mg, 1.4 mmol, 1 eq) en MeOH (14 mL) se le agregó 1,2-bis(2-doro-4-fluorofenil)disulfano (550 mg, 1.7 mmol, 1.2 eq) y carbonato de potasio (593 mg, 4.3 mmol, 3 eq). La reacción se agitó durante 2 h a reflujo y se concentró a presión reducida. Se agregaron agua (10 mL) y HCl 1 M (7 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 70/30 a 30/70) para dar la 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (466 mg, 0.91 mmol) con un rendimiento del 64 %.
1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): 8 = 11.79 (br s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.88 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J= 8.8, 8.0 Hz, 2H), 7.56 (dd, J= 5.2, 3.2 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 2.8, 1.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 6.72 (td, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 5.95 (dd, J = 8.8, 6.0 Hz, 1H), 3.82 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 16.4 Hz, 1H).
13C RMN (DMSO-d6, 100 MHz): 8 = 166.1, 164.4, 158.9 (d, J = 242 Hz), 144.4, 140.7, 140.1, 133.2 (d, J = 4 Hz), 129.3 (d, J = 10 Hz), 127.0, 127.0, 126.4, 125.8 (d, J= 7.7 Hz), 122.2, 120.6, 116.5 (d, J = 25 Hz), 114.2 (J = 21 Hz), 60.5.
Ejemplo 3 Preparación de la 3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4- diona
Figure imgf000032_0002
Se agregó ciclopentanometanol (263 |iL, 2.5 mmol, 5 eq) a una suspensión de NaH (98 mg, 2.5 mmol, 5 eq) en THF (5 mL) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C, durante 30 min y se agregó 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (250 mg, 0.49 mmol, 1 eq). Después, la reacción se agitó durante la noche a reflujo y se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y HCl 1 M (5 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 75/25) para dar la 3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (192 mg, 0.36 mmol) con un rendimiento del 74 %.1
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.71 (dd, J = 8.0, 7.6 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 8.8, 7.2 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 2.8, 1.2 Hz, 1H), 7.15-7.11 (m, 2H), 7.09 (dd, J = 4.8, 2.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.54 (td, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 5.99 (dd, J = 8.8, 6.0 Hz, 1H), 4.27-4.18 (m, 2H), 3.87 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.36-2.28 (m,1H), 1.83-1.74(m, 2H), 1.66-1.53 (m, 4H), 1.39-1.29 (m, 2H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 166.9, 161.6, 158.6 (d, J = 245 Hz), 157.2, 143.5, 138.2, 130.7 (d, J= 4 Hz), 124.8 (d, J = 8.5 Hz), 124.7, 124.5, 120.1, 114.7 (d, J = 25 Hz), 112.3 (d, J = 21 Hz), 111.8, 108.0, 100.0, 68.3, 59.3, 39.1, 37.3, 27.5, 23.4.
Ejemplo 4 - Preparación de la 3-((2-cloro-4-fluorofenM)tio)-6-(6-etoxipiridi n-2-M)-6-(tiofen-3-M)pi peridina-2,4-diona
Figure imgf000033_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 90 % según el procedimiento del ejemplo 3 usando etanol y 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona.
1H RMN (MeOD-d4, 300 MHz): 8 = 7.71 (dd, J = 8.1, 7.5 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 3.0, 1.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 8.1, 0.6 Hz, 1H), 6.55 (td, J = 8.1, 2.7 Hz, 1H), 6.00 (dd, J = 9.0, 5.7 Hz, 1H), 4.40 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 1.34 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
Ejemplo 5 Preparación de la 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,5-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000033_0002
Etapa A: se agregaron 1,2-bis(2,5-diclorofenil)disulfano (480 mg, 1.4 mmol, 0.6 eq) y carbonato de potasio (930 mg, 6.8 mmol, 3 eq) a una solución de 6-(6-bromopiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (790 mg, 2.3 mmol, 1 eq) en MeOH (23 mL). La reacción se agitó durante 2 h a reflujo, luego se concentró a presión reducida. Se agregaron agua (10 mL) y HCl 1 M (7 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 70/30 a 30/70) para dar la 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,5-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (179 mg, 0.34 mmol) con un rendimiento del 15 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.75 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.61-7.56 (m, 2H), 7.45 (br s, 1H), 7.24-7.22 (m, 2H), 7.11 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 6.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 3.98 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 3.46 (d, J= 16.4 Hz, 1H).
Etapa B: se agregó ciclopentanometanol (172 |iL, 1.6 mmol, 5 eq) a una suspensión de NaH (64 mg, 1.6 mmol, 5 eq) en THF (3.5 mL) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C, durante 30 min y se agregó 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,5-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (170 mg, 0.32 mmol, 1 eq). Después, la reacción se agitó durante la noche a reflujo y se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y HCl 1 M (5 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 75/25) para dar la 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,5-diclorofenil) sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (104 mg, 0.19 mmol) con un rendimiento del 59 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.69 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 4.8, 3.2 Hz, 1H), 7.24-7.21 (m, 2H), 7.12-7.09 (m, 2H), 6.96 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.28-4.18 (m, 2H), 9.25 (d, J =16.4 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.36-2.28 (m, 1H), 1.83-1.74 (m, 2H), 1.65-1.52 (m, 4H), 1.40-1.29 (m, 2H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 166.5, 161.6, 158.0, 143.7, 138.3, 137.5, 131.1, 128.5, 127.0, 124.7, 124.3, 123.5, 123.0, 119.9, 111.5, 68.2, 59.1, 39.1, 37.4, 27.6, 23.5.
Ejemplo 6 - Preparación de la 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000034_0001
Se agregaron 1,2-bis(2,3-diclorofenil)disulfano (463 mg, 1.3 mmol, 1.2 eq) y carbonato de potasio (456 mg, 3.3 mmol, 3 eq) a una solución de 6-(6- bromopiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (400 mg, 1.1 mmol, 1 eq) en MeOH (11 mL). La reacción se agitó durante 2 horas a reflujo y se concentró a presión reducida. Se agregaron agua (10 mL) y HCl 1 M (7 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo:
70/30 a 30/70) para dar la 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (447 mg, 0.85 mmol) con un rendimiento del 77 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 5.2, 3.2 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 2.8, 1.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 2.8, 1.2 Hz, 1H), 6.79 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 8.0, 1H), 3.89 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 16.4 Hz, 1H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 176.6, 169.4, 164.9, 145.7, 142.1, 141.3, 141.0, 134.0, 129.2, 128.6, 128.4, 128.0, 127.3, 127.0, 124.6, 123.5, 121.6, 95.5, 62.1, 41.9, 14.5.
Ejemplo 7 - Preparación de 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000035_0001
Se agregó ciclopentanometanol (151 |iL, 1.4 mmol, 5 eq) a una suspensión de NaH (56 mg, 1.4 mmol, 5 eq) en THF (3.5 mL) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C, durante 30 min y se agregó 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-M)piperidina-2,4-diona (150 mg, 0.28 mmol, 1 eq). Después, la reacción se agitó durante la noche a reflujo y se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y HCl 1 M (5 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 75/25 a 50/50) para dar la 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2, 3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (73 mg, 0.13 mmol) con un rendimiento del 48 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.71 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.43 (m, 1H), 7.28-7.27 (m, 1H), 7.15-7.11 (m, 3H), 6.76-6.69 (m, 2H), 5.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.27-4.18 (m, 1H), 3.88 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.35­ 2.27 (m, 2H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.63-1.52 (m, 4H), 1.37-1.30 (m, 2H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 169.8, 164.5, 161.1, 146.4, 141.2, 133.9, 129.1, 128.4, 127.6, 127.4, 126.9, 124.6, 123.0, 114.8, 110.9, 71.2, 62.2, 42.1, 40.2, 30.5, 26.3.
Ejemplo 8 - Preparación de 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000035_0002
Este compuesto se preparó según el ejemplo 2, usando 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y 1,2-bis(2-cloro-4-fluorofenil)disulfano, con un rendimiento del 55 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.56 (dd, J = 5.2, 2.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.32-7.31 (m, 1H), 7.21-7.16 (m, 2H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.60 (td, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.96 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 4.8, 4.8 Hz, 4H), 3.28 (s, 2H), 3.20 (dd, J = 5.2, 4.4 Hz, 4H).
Ejemplo 9 - Preparación de la 3-((2,3-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000036_0001
Este compuesto se preparó según el ejemplo 2, usando 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y 1,2-bis(2,3-didorofenil) disulfano, con un rendimiento del 55 %. En este ejemplo, la etapa B en la preparación del material de partida se llevó a cabo usando (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida en lugar del racemato. 1H RMN (MeODd4, 300 MHz): 8 = 7.51 (dd, J= 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.28-7.27 (m, 1H), 7.17 (dd, J= 5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.00 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 6.73 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 5.92 (dd, J= 8.1, 1.5 Hz, 1H), 3.87-3.84 (m, 4H), 3.46 (s, 2H), 3.21-3.17 (m, 4H).
Ejemplo 10 - Preparación de 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000036_0002
Este compuesto se preparó según el ejemplo 2, usando 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y 1,2-bis(2,5-diclorofenil) disulfano, con un rendimiento del 55 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.50 (dd, J= 5.2, 3.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 2.8, 1.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 4.8, 1.2 Hz, 1H), 7.03-7.01 (m, 1H), 7.00 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.30 (d, J = 2.8 Hz), 3.84-3.82 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 3.20-3.17 (m, 4H).
El ejemplo 10 se probó en los ensayos como racemato y, adicionalmente, como enantiómeros individuales. Fue posible adquirir los enantiómeros individuales mediante HPLC preparativa quiral de los productos finales usando un sistema disolvente de etanol/acetonitrilo/dietilamina (90/10/0.1). El análisis de los enantiómeros por HPLC en una columna ChiralPak IC que usó el mismo sistema de disolventes reveló que los enantiómeros se habían aislado en un 100.0 % (Enantiómero 1: Rt = 5.0 min) y un 99.4 % (Enantiómero 2: Rt = 7.0 min), e.e..
Figure imgf000037_0002
Ejemplo 11 - Preparación del carbonato de 5-[(2-doro-4-fluorofenN)sulfanN]-2-[6-(ddopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo
Figure imgf000037_0001
A una solución de 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (80 mg, 0.15 mmol, 1 eq) en DCM (1.5 mL) a 0 °C se le agregó diisoprilaminoetilamina (40 |iL, 0.23 mmol, 1.5 eq). Después de 5 min a 0 °C, se agregó cloroformiato de etilo (17 |iL, 0.18 mmol, 1.2 eq) y la reacción se agitó a 0 °C, durante 1.5 h. La reacción se inactivó mediante la adición de una solución acuosa saturada de NH4Cl (2 mL) y agua (5 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 80/20 a 50/50) para dar el carbonato de 5-[(2-doro-4-fluorofenil)sulfanN]-2-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo (55 mg, 91 |imol) con un rendimiento del 61 %.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.70 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45-7.42 (m , 1H), 7.26-7.25 (m, 1H), 7.14-7.11 (m, 2H), 7.06 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (td, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 6.32 (dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 1H), 4.26­ 4.21 (m, 3H), 4.17-4.12 (m, 1H), 3.94 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.58 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.36-2.29 (m, 1H), 1.83-1.75 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 4H), 1.38-1.27 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 166.1, 164.5 (d, J = 221 Hz), 164.4, 160.6, 151.8, 145.7, 141.1, 134.5 (d, J = 10.6 Hz), 131.5 (d, J = 8.6 Hz), 131.2 (d, J = 3.6 Hz), 127.7, 127.4, 123.5, 117.8 (d, J = 25.5 Hz), 116.1, 115.5 (d, J = 21.7 Hz), 115.1, 111.1, 71.3, 67.0, 62.8, 41.3, 40.2, 30.49, 30.43, 26.36, 26.32, 14.3
Ejemplo 12 - Preparación del carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,3-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[ 2,2'-bipiridin]-4-il metilo
Figure imgf000038_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 51 % según el ejemplo 11 usando cloroformiato de metilo y 6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-3-((2,3-diclorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47-7.44 (m, 1H), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.80-6.76 (m, 2H), 6.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.26-4.14 (m, 2H), 3.98 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.64 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.36-2.28 (m, 1H), 1.82-1.74 (m, 2H), 1.67-1.52 (m, 4H), 1.39-1.30 (m, 2H).
13C RMN (MeOD-d4, 101 MHz): 8 = 167.0, 165.9, 164.5, 160.6, 152.4, 149.7, 145.7, 141.1, 138.9, 134.2, 130.4, 128.6, 128.2, 127.7, 127.5, 127.0, 123.6, 115.4, 115.2, 111.2, 71.3, 62.9, 56.8, 40.2, 30.46, 30.44, 26.3.
Ejemplo 13 - Preparación del 5-((2-doro-4-fluorofenil)tio)-6'-(cidopentilmetoxi)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro -[2,2'-bipiridin]-4-ilo acetato de
Figure imgf000038_0002
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 42 % según el ejemplo 11 usando cloruro de acetilo y 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-6 -(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona.1
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 = 7.66 (br s, 1H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 5.2, 3.2 Hz, 1H), 7.24-7.23 (m, 1H), 7.16 (dd, J = 5.2, 1.2 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 6.62-6.57 (m, 2H), 6.48 (d, J = 7.2 Hz), 6.09 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.15-4.05 (m, 4H), 3.25 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.33 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 1.85-1.78 (m, 2H), 1.67-1.56 (m, 4H), 1.40-1.32 (m, 2H).
Ejemplo 14 - Preparación del carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6- tetrahidropiridin-4-il propilo
Figure imgf000039_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 68 % según el ejemplo 11 usando 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina- 2,4-diona y cloroformiato de n-propilo.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.52 (dd, J = 5.2, 2.8 Hz, 1H), 7.35-7.33 (m, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.16­ 7.13 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.64 (td, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 6.20 (dd, J = 8.8, 6.0 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.87-3.85 (m, 4H), 3.60 (br s, 2H), 3.21-3.18 (m, 4H), 1.71 (sext, J = 7.2 Hz, 2H), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
Ejemplo 15 - Preparación de carbonato de 5-((2,3-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolmofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin- 4-il etilo
Figure imgf000039_0002
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 60 % según el ejemplo 11 usando 3-((2,3-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2, 4-diona y cloroformiato de etilo.1
1H RMN (MeOD-d4, 300 MHz): 8 = 7.51 (dd, J = 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 6.0, 1.5 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.20 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 6.6, 1.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.78 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.00 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.24 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.86-3.81 (m, 4H), 3.62 (s, 2H), 3.19-3.16 (m, 4H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 4H).
Ejemplo 16 - Preparación del carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[ 2,2'-bipiridin]-4-il decilo
Figure imgf000040_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 50 % según el ejemplo 11 usando 6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(tiofen-3 -il)piperidina-2,4-diona y carbonocloruro de decilo.
1H RMN (MeOD-d4, 400 MHz): 8 = 7.80 (dd, J = 8.0, 7.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 4.8, 2.8 Hz, 1H), 7.40-7.38 (m, 2H), 7.20-7.16 (m, 3H), 6.80 (dd, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 6.44 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.26-4.19 (m, 4H), 4.09 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 3.62 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 2.38 (q, J= 7.6 Hz, 1H), 1.86-1.79 (m, 2H), 1.70-1.56 (m, 6 H), 1.42-1.32 (m, 16H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
13C RMN (MeOD-d4, 100 MHz): 8 = 166.5, 164.5, 164.1, 160.7, 151.6, 146.0, 141.6, 138.1, 133.9, 131.9, 130.7, 128.13, 127.98, 127.96, 127.6, 123.4, 115.0, 114.6, 111.4, 101.2, 71.11, 71.09, 62.6, 32.9, 30.52, 30.49, 30.48, 30.32, 30.15, 29.4, 26.6, 26.37, 26.33, 23.7, 14.8.
Ejemplo 17 - Preparación del carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin- 4-il (2-metoxietilo)
Figure imgf000040_0002
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 60 % según el ejemplo 11 usando cloroformiato de 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2, 4-diona y 2-(metoxi)etilo.
1H RMN (MeOD-d4, 300 MHz): 8 = 7.46 (dd, J= 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.31-7.28 (m, 2H), 7.28-7.25 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.10 (dd, J= 5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.42 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.34-4.31 (m, 2H), 3.84-3.81 (m, 4H), 3.63-3.59 (m, 4H), 3.34 (s, 3H), 3.18-3.15 (m, 4H).
El compuesto del ejemplo 17 se probó en los ensayos como racemato y, adicionalmente, como enantiómeros individuales. Fue posible adquirir los enantiómeros individuales mediante HPLC preparativa quiral del material de partida usando un sistema disolvente de etanol/acetonitrilo/dietilamina (90/10/0.1). El análisis de los enantiómeros mediante HPLC analítica en una columna ChiralPak IC que uso el mismo sistema de disolventes reveló que los enantiómeros se habían aislado en un 100 % (Enantiómero 1: Rt = 5,0 min) y un 99.4 % (Enantiómero 2: Rt = 7.0 min), e.e.. El método del ejemplo 11 podría entonces realizarse en cada enantiómero individualmente.
Figure imgf000041_0002
e ra cronnc n- - -me oxe o e ra ropncm- - -me oxe o
Ejemplo 18 - Preparación de la 6-(6-bromo-2-piridil)-3-(2-dorofenil)sulfanil-6-(3-tienil)tetrahidropiran-2,4-diona
Figure imgf000041_0001
Etapa A: se agregó 1,1'-carbonildiimidazol (21.1 g, 130 mmol) a una solución de acido 5-bromopicolinico (20.2 g, 100 mmol) en DCM a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C, durante 2 h y se agregó trimetilamina (42 mL, 300 mmol). Se continuó agitando durante 45 min a 0 °C y se agregó clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (12.7 g, 130 mmol). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche y se diluyó con DCM (300 mL). La fase orgánica se lavó con NH4Cl acuoso saturado (dos veces), agua y NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida para dar la 5-bromo-N-metoxi-N-metilpicolinamida con un rendimiento del 58 %.
Etapa B: A una solución de 3-bromotiofeno (6.5 mL, 69 mmol) en diisopropiléter (175 mL) a -78 °C se le agregó una solución de n-butillitio (27.6 mL, 69 mmol) en hexanos lentamente durante 15 min. La mezcla se agitó durante 30 min a -78 °C y se agregó 5-bromo-N-metoxi-N-metilpicolinamida (14.1 g, 57.6 mmol) en diisopropiléter (10 mL). La mezcla se agitó durante 2 h entre -78 y -70 °C. Se agregó NH4Cl acuoso saturado (75 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 20 % a 30 a 50) para dar (5-bromopiridin-2-il)(tiofen-3-il)metanona con un rendimiento del 66 %.
Etapa C: A una solución de diisopropilamina (309 |iL, 2.2 mmol) en THF (4 mL) a -78 °C se le agregó una solución de n-butillitio (0.84 mL, 2.1 mmol) en hexanos. Después de 10 min a -78 °C, se agregó 2-((2-clorofenil)tio)-3-oxobutanoato de metilo (259 mg, 1.0 mmol) en THF (2 mL). La mezcla se agitó durante 30 min a 0 °C y se agregó (5-bromopiridin 2-il)(tiofen-3-il)metanona (161 mg, 0.6 mmol) en THF (2 mL). Después de 1.5 horas a 0 °C, la reacción se inactivó con NH4CI acuoso saturado y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 10 % a 20) para dar el pentanoato de 5-(5-bromopiridin-2-il)-2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-3-oxo-5-(tiofen-3-il) metilo con un rendimiento del 83 %.
Etapa D: Una solución de pentanoato de 5-(5-bromopiridin-2-il)-2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-3-oxo-5-(tiofen-3-il) metilo (255 mg, 0.48 mmol) y K2CO3 (200 mg, 1.44 mmol) en metanol (2.4 mL) se agitó a 60 °C, durante 6 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con agua y HCl acuoso. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 20 %) para dar la 6-(6-bromo-2-piridil)-3-(2-clorofenil)sulfanil-6-(3-tienil)tetrahidropiran-2,4-diona con un rendimiento del 61 %. 1H RMN (300 MHz): 8 = 8.61 (dd, J= 2.1, 0.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.75 (br s, 1H), 7.61 (dd, J= 8.4, 0.6 Hz, 1H), 7.38 (dd, J= 3.0, 1.5 Hz, 1H), 7.33-7.26 (m, 2H), 7.12 (dd, J= 5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.06 (td, J= 7.8, 1.5 Hz, 1H), 6.90-6.84 (m, 1H), 6.21 (dd, J= 7.8, 1.2 Hz, 1H), 4.04 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 3.55 (d, J = 17.4 Hz, 1H).
Ejemplo 19 - Preparación de la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(pirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona
Figure imgf000042_0001
Etapa A: A una solución de pirimidina-5-carbaldehído (1.0 g, 6.3 mmol) en THF (63 mL) a -78 °C se le agregó tetrametiletilendiamina (1.4 mL, 9.5 mmol) y n-butillitio (2.8 mL, 6.9 mmol) en hexanos. Después de 30 min a -78 °C, se agregó tiofeno-3-carbaldehído (830 |iL, 9.5 mmol) y la mezcla se dejó calentar hasta -40 °C, durante un período de 1.5 h y se agitó durante otros 30 min a -40 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 30 % a 50 a 70) para dar el pirimidin-5-il(tiofen-3-il)metanol con un rendimiento del 41 %.
Etapa B: A una solución de pirimidin-5-il(tiofen-3-il)metanol (480 mg, 2.5 mmol) en diclorometano a 0 °C se le agregaron TEMPO (3.9 mg, 25 |imol), KBr (20 mg, 0.25 mmol), tetrabutilamoniohidrogenosulfato (41 mg, 0.12 mmol) y una solución de NaOCl en agua (2.4 mL, 3.2 mmol). La mezcla se agitó vigorosamente a 0 °C, durante 1.5 horas y se diluyó con agua. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (dos veces) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 20 % a 30 a 50) para dar la pirimidin-5-il(tiofen-3-il)metanona con un rendimiento del 60 %.
Etapa C: Se preparó 2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-3-oxo-5-(pirimidin-5-il)-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo con un rendimiento del 56 % según la etapa C, Ejemplo 18, usando pirimidin-5-il(tiofen-3-il)metanona.
Etapa D: Una solución de 2-((2-dorofenil)tio)-5-hidroxi-3-oxo-5-(pirimidin-5-il)-5-(tiofen-3-il)pentanoato de metilo (250 mg, 0.78 mmol) y K2CO3 (323 mg, 2.34 mmol) en metanol se agitó a reflujo, durante 7 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con agua y HCl acuoso. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: DCM/MeOH = 0 % a 1 a 2 %) para dar la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(pirimidin-5-il)- 6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona con un rendimiento del 30 %.
1H RMN (300 MHz): 8 =9.11 (s, 1H), 8.81 (s, 2H), 7.48-7.47 (m, 2H), 7.21-7.13 (m, 2H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.80-6.75 (m, 1H), 5.90 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.63 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 3.48 (d, J= 17.4 Hz, 1H).
Ejemplo 20 - Preparación de 3-((2-clorofenil)tio)-6-(piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona
Figure imgf000043_0001
Etapa A: A una solución de ácido 2-picolínico (5.0 g, 41 mmol) en DCM a 0 °C se le agregó 1,1'-carbonildiimidazol (8.6 g, 53 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C, durante 1.5 h y se agregaron trimetilamina (17 mL, 120 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (5.2 g, 53 mmol). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche y se diluyó con DCM (300 mL). La fase orgánica se lavó con HCl acuoso 1 M y NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo = 30 % a 50 a 70 %) para dar la N-metoxi-N-metilpicolinamida con un rendimiento del 81 %.
Etapa B: Se preparó la piridin-2-il(tiofen-3-il)metanona con un rendimiento del 91 %, según el ejemplo 18, etapa B usando N-metoxi-N-metilpicolinamida.
Etapa C: Se preparó el pentanoato de 2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-3-oxo-5-(piridin-2-il)-5-(tiofen-3-il) metilo con un rendimiento de 79 %, según el ejemplo 18, etapa C, usando piridin-2-il(tiofen-3-il)metanona.
Etapa D: Se preparó la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona con un rendimiento del 61 %, según el ejemplo 18, etapa D. 1H RMN (300 MHz): 8 = 8.40-8.38 (m, 1H), 7.65-7.57 (m, 2H), 7.22-7.13 (m, 3H), 7.09-6.95 (m, 2H), 6.71 (td, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 6.56 (td, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 17.4 Hz, 1H).
Ejemplo 21 - Preparación del carbonato de 2-(5-bromopiridin-2-il)-5-((2-clorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-pirano- 4-il metilo
Figure imgf000044_0001
A una solución de 6-(5-bromopiridin-2-il)-3-((2-dorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona en DCM a 0 °C se agregó diisopropilaminoetilamina. Después de 5 min a 0 °C, se agregó cloroformiato de metilo y la reacción se agitó a 0 °C, durante 1.5 h. La reacción se inactivó mediante la adición de agua (2 mL) y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de etilo: 90/10 a 70/30) para dar el carbonato de 2-(5-bromopiridin-2-il)-5-((2-clorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il metilo con un rendimiento del 24 %.
1H RMN (300 MHz): 8 = 8.62 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.80 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.37-7.35 (m, 1H), 7.33-7.30 (m, 1H), 7.27-7.24 (m, 1H), 7.12-7.03 (m, 2H), 6.91-6.85 (m, 1H), 6.34 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.79 (d, J= 18.0 Hz, 1H).
Ejemplo 22 - Preparación del carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,4-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[ 2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo)
Figure imgf000044_0002
Este compuesto se preparó según el ejemplo 21 con un rendimiento del 58 %, usando 6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-3-((2,4-diclorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y cloroformiato de 2-metoxietilo.
1H RMN (300 MHz): 8 = 7.59 (dd, J= 8.4, 7.2 Hz, 1H), 7.32 (dd, J= 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.22-7.20 (m, 2H), 7.04 (dd, J = 5.1, 1.5 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 7.2, 0.6 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.70 (dd, J = 8.4, 0.6 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.35-4.32 (m, 2H), 4.17-4.15 (m, 2H), 3.60 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 3.64-3.61 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.34 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 2.36-2.27 (m, 1H), 1.86-1.76 (m, 2H), 1.67-1.53 (m, 4H), 1.39-1.30 (m, 2H).
Ejemplo 23 - Preparación de la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona
Figure imgf000045_0001
Etapa A: A una solución de morfolina (1.44 g, 16.5 mmol) en MeCN (70 mL) a temperatura ambiente se le agregó K2CO3 (2.28 g, 16.5 mmol). Después de 1 hora a temperatura ambiente, se agregó 5-bromo-2-doropirimidina (2.90 g, 15 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a reflujo. La reacción se detuvo mediante la adición de agua (50 mL) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar la 4-(5-bromopirimidin-2-il)morfolina con rendimiento cuantitativo.
Etapa B: A una solución de 4-(5-bromopirimidin-2-il)morfolina (3.6 g, 14.9 mmol) en THF (150 mL) a -78 °C se le agregó TMEDA (3.33 mL, 22.4 mmol) y n-butillitio (6.6 mL, 16.4 mmol) en hexanos. Después de 30 min a -78 °C, se agregó tiofeno-3-carbaldehído (1.96 mL, 22.4 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 h entre -78 °C y -70 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo: 15 a 20 a 30 a 50 a 70 %) para dar el (2-morfolinopirimidin-5-il)(tiofen-3-il)metanol con un rendimiento del 76 %.
Etapa C: A una solución de (2-morfolinopirimidin-5-il)(tiofen-3-il)metanol (310 mg, 1.12 mmol), hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (19.0 mg, 0.06 mmol), KBr (13.3 mg, 0.11 mmol) y TEMPO (1.8 mg, 0.01 mmol) en DCM (2 mL) a 0 °C, se le agregó NaOCl (1.08 g, 1.45 mmol) en agua. La mezcla de reacción se agitó durante 1.5 horas a 0 °C y se detuvo mediante la adición de Na2S2O3 acuoso saturado (5 mL) y NaHCO3 acuoso saturado (5 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SiO2 , heptano/EA: 20 a 30 a 50 %) para dar la (2-morfolinopirimidin-5-il)(tiofen-3-il)metanona con un rendimiento del 78 %. Una mezcla de acetoacetato de metilo (1.3 mL, 12.1 mmol), disulfuro de 2-cloro-fenilo (3.8 g, 13.3 mmol) y K2CO3 (5.0 g, 36 mmol) en DMF (36 mL) se agitó a 95 °C, durante 4 h. La mezcla se diluyó con metil tert-butil éter (100 mL) y HCl acuoso 1 M (50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (3 x 100 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo: 1 % a 2 a 3 a 5 %) para dar el 2-((2-clorofenil)tio)-3-oxobutanoato de metilo con un rendimiento del 39 %.
Etapa D: A una solución de diisopropilamina (0.34 mL, 2.4 mmol) en THF (5 mL) a -78 °C se le agregó lentamente nbutillitio (0.88 mL, 2.2 mol) en hexanos. Después de 10 min a -78 °C, se agregó 2-((2-clorofenil)tio)-3-oxobutanoato de metilo (285 mg, 1.1 mmol) en THF (2 mL) y se continuó agitando durante 30 min a 0 °C.
Se agregó (2-morfolinopirimidin-5-il)(tiofen-3-il)metanona (230 mg, 0.84 mmol) en THF (2 mL) y la mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado (5 mL), la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: DCM al 1 % de MeOH al 2 al 4 %) para dar el pentanoato de 2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-5-(2-morfolinopirimidina-5-il)-3-oxo-5-(tiofen-3-il) metilo con un rendimiento del 98 %.
Etapa E: una solución de 2-((2-clorofenil)tio)-5-hidroxi-5-(2-morfolinopirimidin-5-il)-3-oxo-5-(tiofen-3-ilo) pentanoato de metilo (439 mg, 0.82 mmol) y K2CO3 (340 mg, 2.5 mmol) en metanol (4 mL) se agitó a reflujo, durante 5 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó en agua (5 mL) y HCl acuoso 1 M (5 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: DCM al 1 % de MeOH al 2 al 4 %) para dar la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(2-morfolinopirimidin-5-il) -6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona con un rendimiento del 43 %.
1H RMN (300 MHz): 8 = 8.31 (s, 2H), 7.43-7.40 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 2.7, 1.5 Hz, 1H), 7.29-7.26 (m, 1H), 7.11 (dd, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 7.05 (td, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 6.88 (td, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 6.21 (dd, J = 7.9, 1.4 Hz, 1H), 3.98-3.94 (m, 1H), 3.83-3.73 (m, 8H), 3.47 (s, 2H).
Ejemplo 24 - Preparación de 3-((2-clorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (Ejemplo 44 en el documento WO 2015/142903)
Figure imgf000046_0001
Una solución de 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (50 mg, 0.14 mmol), 1,2-bis(2-clorofenil)disulfano (48 mg, 0.17 mmol) y K2CO3 (58 mg, 0.42 mmol) en metanol (1.5 mL) se agitó a reflujo, durante 2 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó en agua (3 mL) y HCl acuoso 1 M (1 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (SiO2 , heptano/acetato de etilo: 2/1 a 1/1 a 1/3) para dar la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona con un rendimiento del 61 %. Los datos analíticos fueron idénticos a la literatura (ACS Med. Chem. Lett. 7: 896-901, 2016).
El compuesto del ejemplo 24 se probó en los ensayos como racemato y, adicionalmente, como enantiómeros individuales. Fue posible adquirir los enantiómeros individuales mediante HpLC preparativa quiral del producto final usando un sistema disolvente de etanol/acetonitrilo/dietilamina (90/10/0.1). El análisis de los enantiómeros mediante HPLC analítica en una columna ChiralPak IC que usó el mismo sistema de disolventes reveló que los enantiómeros se habían aislado en un 100 % (Enantiómero 1: Rt = 5.5 min) y un 97 % (Enantiómero 2: Rt = 7.5 min), e.e..
Figure imgf000047_0002
Ejemplo 25 - Preparación de la 3-((2-clorofenil)tio)-6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-M)-6-(tiofen-3-M)piperidina-2,4-diona (Ejemplo 194 en el documento WO 2015/142903)
Figure imgf000047_0001
Se agregó CpMeOH (0.16 mL, 1.5 mmol) a una suspensión de NaH (61 mg, 1.5 mmol) en THF (3 mL) a 0 °C. Después de 30 min a 0 °C, se agregó 6-(6-bromopiridin-2-il)-3-((2-dorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona (150 mg, 0.30 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 18 h a reflujo. La reacción se detuvo mediante la adición de agua (10 mL) y Hcl 1 M (3 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyente: heptano/acetato de etilo: 8/2 a 7/3 a 1/1) para dar la 3­ ((2-clorofenil)tio)-6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona con un rendimiento del 62 %.
1H RMN (400 MHz, MeOH-d4): 8 = 7.70 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.43 (dd, J = 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.28 (br s, 1H), 7.22 (d, J = 7.9 HZ, 1H), 7.15-7.12 (m, 2H), 6.94 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.77-6.73 (m, 2H), 5.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.22 (m, 2H9, 3.91 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 3.45 (s, 1H), 2.35-2.28 (m, 1H), 1.82-1.73 (m, 2H), 1.64-1.51 (m, 4H), 1.38-1.30 (m, 2H).
Ejemplo 26 - Preparación del carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin- 4-il isobutilo
Figure imgf000048_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 60 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina -2,4-diona y cloroformiato de iso-butilo.
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 = 7.37 (dd, J = 5.1, 3.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.19-7.17 (m, 1H), 7.18 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.97 (dd, J = 2.7, 1.5 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.53 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.39 (br s, 1H), 4.96 (d, J = Hz, 2H), 3.87-3.84 (m, 4H), 3.55 (s, 2H), 3.19-3.16 (m, 4H), 1.97 (heptato J = 6.8 Hz, 1H), 1.26 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 0.92 (d, J= 6.8 Hz, 6H).
Ejemplo 27 - Preparación del acetato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridi n-4-ilo
Figure imgf000048_0002
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 42 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y cloruro de acetilo.
1H RMN (300 MHz, CDCl3): 8 = 7.37 (dd, J= 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.17 (dd, J = 3.0, 1.4 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.99-6.97 (m, 1H), 6.97-6.95 (m, 1H), 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.45 (br s, 1H), 3.87-3.84 (m, 4H), 3.51 (s, 2H), 3.19-3.16 (m, 4H), 2.16 (s, 3H).
Ejemplo 28 - Preparación del pivalato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridi n-4-ilo
Figure imgf000049_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 48 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina -2,4-diona y cloruro de pivaloilo.
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 = 7.37 (dd, J = 5.1, 3.1 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.19 (dd, J= 3.0, 1.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.99-6.93 (m, 2H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.45 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.40 (br s, 1H), 3.87-3.83 (m, 4H), 3.52 (s, 2H), 3.19-3.16 (m, 4H), 1.17 (s, 9H)..
Ejemplo 29 - Preparación de la 3-((2,4-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona
Figure imgf000049_0002
Este compuesto se preparó según el método del ejemplo 2, usando 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y 1,2-bis(2,4 -diclorofenil)disulfano, con un rendimiento del 50 %.1
1H RMN (MeOD-d4, 300 MHz): 8 = 7.49 (dd, J= 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.26-7.22 (m, 2H), 7.14 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 6.72 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 8.7 Hz), 3.86-3.83 (m, 4H), 3.43 (s, 2H), 3.20-3.17 (m, 4H).
Ejemplo 30 - Preparación del carbonato de 5-((2,4-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin- 4-il (2-metoxietilo)
Figure imgf000050_0001
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 47 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2,4-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina -2,4-diona y cloroformiato de 2-(metoxi)etilo.
1H RMN (300 MHz, CDCl3): 8 = 7.39 (dd, J= 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 3.0, 1.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 5.0, 1.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.47 (br s, 1H), 6.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.35-4.31 (m, 2H), 3.89-3.86 (m, 4H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.52 (br s, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.20-3.17 (m, 4H).
Ejemplo 31 - Preparación de isonicotinato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridi n-4-ilo
Figure imgf000050_0002
Este compuesto se preparó con un rendimiento del 42 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y clorhidrato de cloruro de isonicotinoilo.
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 = 8.79 (br s, 2H), 7.73 (d, J= 5.0 Hz, 2H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.22 (br s, 1H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.01-6.94 (m, 4H), 6.64 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.90-3.87 (m, 4H), 3.67 (s, 2H), 3.22-3.19 (m, 4H).
Ejemplo 32 - Preparación del carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6- tetrahidropiridin-4-il /so-butilo
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Este compuesto se preparó con un rendimiento del 76 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-ilo)piperidina-2,4-diona y cloroformiato de /so-butilo. En este caso, se preparó 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona según un método modificado en cuya Etapa B en la síntesis de 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona usada la (S)-t-butilsulfinimida en lugar del racemato. A continuación, la etapa C prosiguió con un grado de diastereocontrol, con el análisis de los diastereoisómeros por 1H RMN que reveló una proporción de diastereoisómeros de 85:15. Esta proporción estará representada en la proporción enantiomérica del producto final.
1H RMN (400 MHz, CDCis): 8 = 7.36 (dd, J = 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.18-7.16 (m, 1H), 6.99 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 5.0, 1.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.62-6.55 (m, 2H), 6.42 (dd, J = 8.8, 5.8 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 3.88-3.85 (m, 4H), 3.49 (br s, 2H), 3.19-3.16 (m, 4H), 1.96 (heptato, J = 6.7 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 0.93 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
Ejemplo 33 - Preparación del carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6- tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo)
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Este compuesto se preparó con un rendimiento del 40 % según el método del ejemplo 11 usando 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y cloroformiato de 2-metoxietilo. En este caso, se preparó 3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona según un método modificado en cuya etapa B en la síntesis de 6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona usada la (S)-t-butilsulfinimida en lugar del racemato. A continuación, la etapa C prosiguió con un grado de diastereocontrol, con el análisis de los diastereoisómeros por 1H RMN que reveló una proporción de diastereoisómeros de 85:15. Esta proporción estará representada en la proporción enantiomérica del producto final.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 = 7.38-7.36 (m, 1H), 7.20 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.17 (m, 1H), 7.00 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.92-6.88 (m, 2H), 6.58 (td, J = 8.4, 2.6 Hz, 1H), 6.39 (dd, J = 8.7, 5.8 Hz, 1H), 4.34-.432 (m, 2H), 3.89 (m, 4H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.50 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.20-3.18 (m, 4H).
Ejemplo 34 - Preparación del carbonato de 6'-(ddopentilmetoxi)-5-((2,5-didorofenN)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-N)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo)
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Este compuesto se preparó con un rendimiento del 63 % según el método del ejemplo 11 usando 6-(6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il)-3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona y cloroformiato de 2-(metoxi)etilo.
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 = 7.60 (dd, J= 8.2, 7.5 Hz, 1H), 7.30 (dd, J= 5.0, 3.0 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 3.0, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.01 (dd, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 6.98 (dd, J= 8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.35-4.32 (m, 2H), 4.16 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 3.64­ 3.58 (m, 3H), 3.37 (s, 3H), 2.35-2.26 (m, 1H), 1.86-1.74 (m, 2H), 1.65-1.56 (m, 4H), 1.41-1.31 (m, 2H).
Ejemplo 35 - Preparación del carbonato 5-((2-clorofenil)tio)-2-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il (2-metoxietilo)
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Este compuesto se preparó con un rendimiento del 38 % según el ejemplo 11 usando 3-((2-clorofenil)tio)-6-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro- 2H-piran-2,4(3H)-diona y cloroformiato de 2-(metoxi)etilo.1
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 = 8.29 (s, 2H), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.28-7.22 (m, 1H), 7.09 (dd, J= 4.43, 2.17 Hz, 1H), 7.04 (td, J= 7.66, 1.54 Hz, 1H), 6.87 (td, J = 7.63, 1.44 Hz, 1H), 6.29 (dd, J= 7.93, 1.52 Hz, 1H), 4.39-4.33 (m, 2H), 3.90-3.71 (m, 10H), 3.66-3.59 (m, 5H).
Ejemplo 36 - Ensayo de diaforasa acoplada
Las propiedades inhibidoras de los compuestos se investigaron usando un ensayo de enzima acoplada que vincula la reacción de lactato deshidrogenasa (LDH) con la producción de resorufina fluorescente por diaforasa.
Las lactato deshidrogenasas (LDH) humanas catalizan la interconversión reversible entre piruvato y lactato. La LDH es capaz de catalizar tanto la reacción directa (piruvato a lactato) como la inversa (lactato a piruvato), usando ya sea NADH o NAD+ como cofactor. La reacción avanza en cualquier dirección dependiendo de diversos factores, tales como la disponibilidad del sustrato, la presencia de los cofactores necesarios, la temperatura y el pH. Diferentes isoformas (LDH A, B y C) de la enzima favorecen diferentes direcciones de reacción: LDHA prefiere la conversión de piruvato a lactato, mientras que LDHB oxida preferiblemente el lactato a piruvato.
El ensayo acoplado se basa en la oxidación de NAD+ a NADH durante la conversión de lactato a piruvato por LDH (isoformas A, B y C). La NADH producida sirve como cofactor en la reacción de la diaforasa, que reduce la resazurina no fluorescente a resorufina fluorescente. Por lo tanto, el ensayo controla indirectamente la tasa de producción de piruvato. Aunque el consumo de NADH se puede controlar directamente debido a la fluorescencia intrínseca de la molécula (excitación: 340 nm, emisión: 460 nm), existen problemas relacionados con el método de lectura directa. Se ha demostrado que muchos compuestos en las bibliotecas químicas interfieren con el ensayo debido a las propiedades fluorescentes similares al NADH. Cambiar el ensayo a longitudes de onda más largas mediante el acoplamiento de la reacción de LDH a la conversión de resazurina en resorufina fluorescente por diaforasa reduce la interferencia de este compuesto. De este modo, se eligió la dirección del ensayo para proporcionar un ensayo sólido y fiable.
La aplicación de la reacción de LDHA en la dirección preferida para la conversión de piruvato en lactato bajo la oxidación de NADH a NAD+ requeriría llevar a cabo la reacción de LDHA hasta completar aproximadamente el 80 % y agregar los reactivos de ensayo de diaforasa después para evitar la competencia enzimática por NADH. Como resultado, se esperaría que dicho método sea más propenso a errores, ya que las tasas de conversión demasiado altas conducirán a la atenuación de los valores IC50 obtenidos (Davis et al., ASSAY and Drug Dev. Tech. 14 (3): 175­ 179, 2016). Cuando no se ejecuta el ensayo en la dirección preferida para LDHA, se esperaría obtener valores IC50 más conservadores en comparación con los resultados publicados anteriormente para otros compuestos inhibidores de LDHA. Por lo tanto, se podría esperar de este modo que los valores IC50 reales fueran más bajos.
Para la determinación de los valores de IC50 se adoptó un ensayo de diaforasa acoplada de Bembenek et al. (A Fluorescence-Based Coupling Reaction for Monitoring the Activity of Recombinant Human NAD Synthetase. ASSAY and Drug Development Technologies, 2005. 3(5): 533-541). Los compuestos se probaron por duplicado usando diluciones en serie de 2, 3 o 4 veces, incluidas 11 concentraciones individuales, comenzando desde 5000 |iM hasta 30 |iM. Se agregaron un control sin sustrato que representaba el 100 % de inhibición o controles con inhibición de oxamato (concentración final de oxamato 28.7 mM en el ensayo) y un control que contenía la solución de sustrato completa así como DMSO que representaba la reacción completamente desinhibida. El oxamato es un inhibidor de LDH bien caracterizado que inhibe la actividad de la enzima LDH en el intervalo de mM in vitro con alta especificidad (Papacostantinou et al., J. Biol. Chem. 236: 278-284, 1961). Los controles permitieron el cálculo del porcentaje de inhibición para cada punto de datos. La solución reguladora de ensayo consistía en HEPES 50 mM pH 7.4, MgCb 5 mM y ácido plurónico F-127 al 0.05 %.
La solución enzimática que conduce a concentraciones finales de LDHA 4-7 nM o LDHB 6 nM, así como 0.2 U/mL de diaforasa en el pocillo de reacción, se dispensó en placas de 384 pocillos (Greiner bio-one) usando una Pipeta robótica CyBi®-SELMA. Las diluciones del compuesto y la enzima se incubaron durante al menos 20 min a temperatura ambiente. En lo sucesivo, se agregó la solución de sustrato (concentraciones finales: lactato 500 |iM, NAD+ 150 |iM, resazurina 3 |iM) y se dejó que la reacción progresara durante 10 min. La reacción se inactivó mediante la adición de una solución de parada (concentraciones finales: EDTA 20 mM, NaCl 400 mM, piruvato 40 mM). La fluorescencia se leyó después de 5 min de incubación a una longitud de onda de excitación de 560 nm y una longitud de onda de emisión de 590 nm en un lector de placas Perkin Elmer Victor X.
Se empleó un cribado inverso para eliminar los falsos positivos que solo inhibían la reacción de la diaforasa. Por lo tanto, se incubó una solución enzimática que solo contenía diaforasa con la serie de dilución del compuesto. Se agregó una solución de sustrato que condujo a concentraciones finales de NADH 15 |iM y resazurina 3 |iM y se realizó el ensayo como se describe anteriormente. Se usó una solución de sustrato que contenía solo resazurina como control de inhibición al 100 %.
Los datos de fluorescencia se normalizaron a DMSO y controles de inhibición dando como resultado un porcentaje de inhibición para cada concentración de compuesto. Las curvas de respuesta a la dosis se ajustaron en KaleidaGraph (www.synergy.com) o en el paquete de software Dotmatics (www.dotmatics.com) usando un ajuste estándar de 4 parámetros (procedimiento de ajuste de Levenberg-Marquardt), lo que dio como resultado valores IC50 para los compuestos de prueba. Los resultados se presentan en la tabla 1.
Tabla 1
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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Ejemplo 37 - Calorimetría de titulación isotérmica (ITC)
Los experimentos ITC se realizaron usando un instrumento MicorCal PEAQ ITC. Antes de los experimentos, se dializó LDHA frente a solución reguladora de fosfato de potasio 50 mM, pH 7.4, NaCl 150 mM, ácido plurónico F-127 al 0.002 %, a 4 °C, durante la noche usando mini kits de diálisis de GE Healthcare. Los compuestos probados se disolvieron a 100 mM en DMSO. Después de la diálisis, la proteína se centrifugó a 14,000 rpm a 4 °C, durante 30 min. La solución reguladora y el agua MilliQ para la celda de referencia se desgasificaron antes de su uso. La concentración de proteína se determinó mediante mediciones A280 nm usando un Nanodrop. Todos los experimentos de ITC se realizaron a 25 °C con agitación a 750 rpm. En un experimento típico, el compuesto de interés se cargó en la celda de muestra a 20 pM y se tituló LDHA (200 pM en jeringa) a la solución del compuesto en inyecciones consecutivas.
Las concentraciones de NADH (1 mM) y DMSO (2 %) se igualaron en todas las soluciones. Los datos fueron analizados usando el software de análisis MicroCal PEAQ-ITC y se ajustó a un modelo de enlace de sitio único, lo que resultó en la constante de enlace Kd, la entalpia AH, la entropía AS y la estequiometría N.
Los resultados de unión para los compuestos de los ejemplos 3, 5 y 10 se presentan en la tabla 2. Estos muestran que los compuestos son específicos y se unen a LDHA.
Tabla 2
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Ejemplo 38 - Pruebas in vitro en líneas celulares de cáncer MDA-MB-231, MDA-MB-468 y MIA PaCa-2
Cultivo de células:
Las líneas celulares de cáncer de mama humano MDA-MB-468, MDA-MB-23 y la línea celular de cáncer de páncreas MIA PaCa-2 (American Type Culture Collection (ATCC)) se cultivaron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM+F12) complementado con Suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor al 10 % y antibióticos (estreptomicina y penicilina) en una incubadora con CO2 al 5 % a 37 °C. Todos los reactivos de cultivo celular fueron fabricados por Sigma Aldrich.
Ensayo de viabilidad celular de cribado:
El efecto de los compuestos sobre la viabilidad celular se determinó usando el kit Anexina V/Apoptosis de células muertas Alexa Fluor® 488 (Thermo Fisher). La anexina V se une a la fosfatidilserina en la superficie de las células apoptóticas, mientras que el segundo colorante yoduro de propidio (PI) se une a los ácidos nucleicos. Este marcador no ingresa a las células intactas y, de este modo, tiñe selectivamente las células muertas. Las células se sembraron a razón de 10,000 células por pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en 200 |iL de medio de cultivo. Después de una incubación de 16 h, los compuestos se agregaron a las células de forma dependiente de la concentración, siendo la concentración más alta 100 |iM. La viabilidad celular se determinó después de 24, 72 y 120 h. Los sobrenadantes se recogieron para incluir células separadas. Las células adherentes se separaron con tripsina al 0.05 % y se combinaron con los sobrenadantes. Las muestras se lavaron con solución salina regulada con fosfato (PBS) y se incubaron con anexina V y PI en solución reguladora de unión a anexina durante 15 minutos. Las células se analizaron usando el citómetro de flujo LSRFortessa (o LSRII) inmediatamente después de la incubación. Los siguientes controles se incluyeron en la evaluación: células no tratadas, control con DMSO solo y 2-desoxi-glucosa (2-DOG). 2-DOG es un conocido inhibidor de la glucólisis (Wick et al., J. Biol Chem. 224, (2): 953-959, 1957) y en este caso se usó como control positivo para la muerte celular. Los datos se analizaron usando FlowJo (Treestar).
El ensayo de viabilidad de células de anexina basado en el flujo descrito anteriormente se usó como un ensayo de cribado con un bajo número de células en un formato de 96 pocillos para facilitar la prueba de muchos compuestos usando diferentes condiciones. Los efectos de ciertos compuestos en la ruta glucolítica de diferentes tipos de células cancerosas y sus propiedades apoptóticas se evaluaron usando ensayos de lactato y ensayos de caspasa, respectivamente.
Ensayo de lactato:
El efecto inhibidor de los compuestos sobre la ruta glucolítica se probó midiendo la producción de lactato de las células cancerosas. Las células se sembraron en una placa de cultivo de 96 pocillos a una densidad de 20,000 células por pocillo en 200 |iL de medio de cultivo completo. Al día siguiente, se retiró el medio y se agregó medio nuevo, así como diluciones en serie de dos veces que incluían 10 puntos de datos individuales con una concentración inicial de 90 |iM. Las células se incubaron adicionalmente durante 75 min a 37 °C. Se analizaron 50 |iL del total de 100 |iL de medio de cultivo celular de cada pocillo mezclándolos con 50 |iL de reactivo de "microdiálisis"-lactato (preparado según las instrucciones del fabricante). La formación de la quinoneimina de color rojo violeta se midió fotométricamente a 530 nm después de 15 min y es proporcional al lactato producido en las células. Paralelamente a cada experimento se preparó una curva estándar, usando una serie de diluciones de lactato (Abcam) que oscilaba entre 0 y 20 nmoles. Los datos se analizaron con KaleidaGraph (www.synergy.com) y los valores de IC50 se determinaron con un ajuste estándar de 4 parámetros (procedimiento de ajuste de Levenberg-Marquardt).
Ensayo de caspasa:
El efecto de un compuesto seleccionado sobre la viabilidad celular se determinó en detalle usando el reactivo de detección verde CellEvent™ Caspasa-3/7 (Thermo Fisher). Cuando se agrega al medio de cultivo de tejidos, este sustrato no fluorescente cruza la membrana celular donde es escindido por la caspasa-3/7 activada de las células apoptóticas, lo que da como resultado la liberación del tinte verde fluorescente y la tinción del ADN nuclear. La activación cinética de caspasa-3/7 se puede monitorear y cuantificar usando el analizador básico IncuCyte®.
Se sembraron células MDA-MB-468, que expresan de forma estable el tinte de fluorescencia rojo CytoLight (introducido por transducción lentiviral con Lenti, EF-1 alfa y seleccionadas con Puromicina) a razón de 2,000 células por pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en 100 |iL de medio de cultivo. Después de una incubación de 20 h, se retiró el medio y se agregaron medio fresco y compuestos a las células de una manera dependiente de la concentración, siendo la concentración más alta 100 |iM. La viabilidad celular se determinó tomando imágenes con filtros para señales fluorescentes verdes y rojas cada tres horas. La tasa de células apoptóticas (señal verde) sobre el número total de células (señales rojas) se analizó usando el programa de análisis IncuCyte (Essen biosciences) y el software KaleidaGraph.
Los resultados del ensayo de cribado para diversos compuestos de los ejemplos 1 a 23 (indicados como compuestos 1 a 23) se presentan en la figura 1 y la figura 2 para las líneas celulares de cáncer de células de mama MDA-MB-231 y MDA-MB-468, respectivamente.
Estos experimentos se repitieron con respecto a los compuestos conocidos de los ejemplos 24 y 25 para comparar los resultados con compuestos estructuralmente similares según la invención. Los resultados del compuesto del ejemplo 24 (Compuesto 44 en el documento WO 2015/142903) y los compuestos de los ejemplos 8 y 10 se muestran en La figura 3.
La figura 4 muestra los resultados del compuesto del ejemplo 25 (Compuesto 196 en el documento WO 2015/142903) y los compuestos de los ejemplos 1, 3 y 5.
En la figura 5 se muestra una comparación de los resultados para los compuestos de los ejemplos 10 y 17. El ejemplo 17 es un derivado del compuesto del ejemplo 10.
Los resultados de los compuestos de los ejemplos 1 a 23 (indicados como compuestos 1 a 23) se presentan en la figura 6 para la línea celular de cáncer de mama MDA-MB-468 y la línea celular de cáncer de páncreas MIA PaCa-2. La figura 7 muestra los resultados de los compuestos estructuralmente similares de los ejemplos 8, 9, 10 y 29 en comparación con el compuesto conocido del ejemplo 24 (Compuesto 44 en el documento WO 2015/142903).
La figura 8 muestra los resultados de los compuestos de los ejemplos 1, 3, 5 y 7 en comparación con el compuesto del ejemplo 25 (Compuesto 196 en el documento WO 2015/142903).
En la figura 9 se muestra una comparación de los resultados para los compuestos de los ejemplos 10 y 17 y 31. El compuesto del ejemplo 17 es un derivado del compuesto del ejemplo 10.
La figura 10 muestra los efectos de los compuestos de los ejemplos 14, 32 y 33 en comparación con el compuesto del ejemplo 8.
La figura 11 muestra una comparación del compuesto del ejemplo 10 usado como una mezcla racémica en comparación con un enantiómero enriquecido del compuesto del ejemplo 10 (enantiómero 1) en la línea celular MDA-MB-468 (figura de la izquierda). Esta figura también muestra los resultados para el enantiómero enriquecido del compuesto del ejemplo 10 en diversas otras líneas celulares indicadas también presentadas (figura de la derecha). La figura 12 muestra el efecto del compuesto del ejemplo 10 sobre la viabilidad celular de la línea celular MDA-MB-468 durante un transcurso de tiempo de 120 horas (figura de la izquierda) y células vivas por % de células MDA-MB-468 no tratadas después la incubación durante 96 horas con diferentes concentraciones del compuesto del ejemplo 10 (figura de la derecha).

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    Figure imgf000066_0001
    Ai es -O-, -CH2- o -S-;
    A2 es NR (en la que R es H o alquilo C1-3) u -O-;
    A3 es N o CR5 ;
    A4 es N o CR6;
    A5 es N o CR7 ;
    A6 es N o CR8;
    R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente de H y halógeno;
    R4 se selecciona de:
    - H;
    - halógeno;
    - un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
    - OR9 en el que R9 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
    - OR10 en el que R10 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
    R5 se selecciona de:
    - H;
    - hidroxi;
    - alquilo C1-6 ; y
    - alcoxi C1-6;
    R6 se selecciona de:
    - H;
    - halógeno;
    - alquilo Ci-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano y nitro;
    - alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , amino, ciano, nitro y cicloalquilo C3-8 ;
    - un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, --C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
    - OR11 en el que R11 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6, alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro; y
    - OR12 en el que R12 es un grupo cicloalquilo C3-8 ;
    R7 y R8 se seleccionan independientemente de:
    - H;
    - hidroxi;
    - alquilo C1-6 ; y
    - alcoxi C1-6 ;
    con las condiciones de que:
    A3 y A4 no sean ambos N al mismo tiempo;
    A5 y A6 no sean ambos N al mismo tiempo; y
    cuando A2 es NR, al menos uno de R1, R2 y R3 es halógeno.
  2. 2. Un compuesto que tiene la fórmula (Ia), un estereoisómero, un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000067_0001
    en la que A1 a A6 y R1 a R4 son como se definen en la reivindicación 1; y RP es ya sea H o un grupo que tiene la fórmula (II):
    Figure imgf000067_0002
    d i )
    en la que:
    * indica el punto de unión del grupo al resto de la molécula;
    Y es -O- o NRi donde Ri es H o alquilo C1-3 (por ejemplo, CH3);
    X se selecciona de:
    - H;
    - hidroxi;
    - NRjRk donde R1 y Rk se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6 (preferiblemente alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3);
    - -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos hidrofílicos;
    - -alquilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más grupos arilo o heteroarilo, cuyos grupos arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ; y
    - un grupo arilo o heteroarilo que puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ;
    p es 0 o 1;
    q es un número entero desde 0 a 6;
    r es 0 o 1; y
    s es 0 o 1.
  3. 3. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que A1 es -S-; y/o en el que A2 es NH u -O-.
  4. 4. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, teniendo dicho compuesto la fórmula (III) o (IIIa), o un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000068_0001
    dicho compuesto que tiene la fórmula (IV) o (IVa), o un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000069_0001
    en las que A3 a A6, Ri a R4 y RP son como se definen en la reivindicación 1 o la reivindicación 2; o
    dicho compuesto que tiene la fórmula (V) o (Va), o un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000069_0002
    en las que A1, A2 , R1 a R3 , R6 y RP son como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, preferiblemente en las que R6 es distinto de H; o
    dicho compuesto que tiene la fórmula (VI) o (VIa), o un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000069_0003
    en las que A1, A2 , R1 a R4 y RP son como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
  5. 5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que A5 es CH; y/o
    A6 es CH; y/o
    A3 es N; y/o
    A 4 es CRa, preferiblemente en el que R6 es distinto de H; y/o
    R4 es H; y/o
    R6 es halógeno (por ejemplo, Br o Cl, preferiblemente Br), o un grupo alcoxi Ci-6 opcionalmente sustituido, preferiblemente un grupo alcoxi C1-6 sustituido con un grupo cicloalquilo C3-8 , por ejemplo, sustituido por ciclopentilo no sustituido.
  6. 6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que A3 es CR5 , preferiblemente en el que A3 es CH, o
    en el que A3 es CH y A es CR6, preferiblemente en el que R6 es H.
  7. 7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R4 se selecciona de:
    -H
    - halógeno; y
    - un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en grupos halógeno, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , hidroxialquilo C1-6 , -CO2H, -C(O)-O-alquilo C1-6 , -C(O)-alquilo C1-6 , amino, ciano y nitro,
    preferiblemente en el que R4 es H, Br o morfolinilo.
  8. 8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que al menos uno de R1, R2 y R3 es halógeno, preferiblemente en el que uno o dos de R1, R2 y R3 son halógeno, o en el que R1 es halógeno y R2 y R3 son H, o en el que R2 es halógeno y R1 y R3 son H, o en el que R3 es halógeno y R1 y R2 son H, y/o
    en el que R1 o R3 es -Cl, o R2 es -F.
  9. 9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en el que RP representa un grupo que tiene la fórmula (II):
    O o
    * - H oV ( ch2 )-E -W -cV x (II)
    en la que
    Y es -O- o NRi donde Ri es ya sea H o alquilo C1-3 (por ejemplo, CH3), preferiblemente -O- o NH, por ejemplo, -O-; X se selecciona de:
    - NRjRk donde Rj y Rk se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6 (preferiblemente alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3);
    - -alquilo C1-12 (preferiblemente alquilo C1-6) opcionalmente sustituido con uno o más grupos hidrofílicos seleccionados independientemente de: -OR' (en el que R' es H o alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3) y -NR"2 (en el que cada R" se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3); y
    - un grupo arilo o heteroarilo que puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en: grupos halo, hidroxi, alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6 e hidroxialquilo C1-6 ; y
    p, q, r y s son como se definen en la reivindicación 2,
    preferiblemente en el que X es alquilo C1-12 (preferiblemente alquilo C1-6) opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de: -OR' (en el que R' es ya sea H o alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3), y -NR"2 (en el que cada R" se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3 , por ejemplo, CH3).
  10. 10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 9, en el que RP es un grupo de fórmula (VII):
    *-CO-O-(CH2)q-X (VII)
    en la que * y q son como se definen en la reivindicación 2, preferiblemente en la que q es 0 o 1; y
    X es como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 9,
    preferiblemente en la que el grupo de fórmula (Vil) se selecciona de cualquiera de los siguientes:
    Figure imgf000071_0001
    o en las que RP es un grupo de fórmula (VIII):
    *-CO-(CH2)q-X (VIII)
    en la que * y q son como se definen en la reivindicación 2, preferiblemente en el que q es 0 o 1; y X es como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 9,
    Figure imgf000072_0001
    *-CO-O-(CH2)q-O-X (IX)
    en la que * y q son como se definen en la reivindicación 2, preferiblemente en la que q es 0 o 1; y
    X es como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 9, preferiblemente en el que el grupo de fórmula (IX) es:
    Figure imgf000072_0002
    o en la que RP es un grupo de fórmula (X):
    *-CO-(CH2)q-O-X (X)
    en la que * y q son como se definen en la reivindicación 2, preferiblemente en la que q es 0 o 1; y
    X es como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 9,
    preferiblemente en la que el grupo de fórmula (X) es:
    Figure imgf000073_0002
    o en las que RP es un grupo de fórmula (XI):
    *-CO-(CH2)4-O-CO-X (XI)
    en la que * y q son como se definen en la reivindicación 2, preferiblemente en la que q es 0 o 1; y
    X es como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 9,
    preferiblemente en la que el grupo de fórmula (XI) es:
    Figure imgf000073_0001
  11. 11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se selecciona de lo siguiente: 6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,4-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    3-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(6-etoxipiridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,5-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    6-(6-bromopiridin-2-il)-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    6-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-3-[(2,3-diclorofenil)sulfanil]-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    3-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    3-((2,3-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    3-((2,5-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    Carbonato de 5-[(2-cloro-4-fluorofenil)sulfanil]-2-[6-(ciclopentilmetoxi)piridin-2-il]-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo;
    Carbonato de 6'-(cidopentilmetoxi)-5-((2,3-didorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il metilo;
    Acetato de 5-((2-doro-4-fluorofenil)tio)-6'-(cidopentilmetoxi)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-ilo; Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il propilo; Carbonato de 5-((2,3-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il etilo;
    Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il decilo;
    Carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
    6-(5-bromopiridin-2-il)-3-((2-clorofenil)tio)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
    3-((2-clorofenil)tio)-6-(pirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
    3-((2-clorofenil)tio)-6-(piridin-2-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
    Carbonato de 2-(5-bromopiridin-2-il)-5-((2-clorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il metilo;
    Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,4-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo);
    3-((2-clorofenil)tio)-6-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-(tiofen-3-il)dihidro-2H-piran-2,4(3H)-diona;
    Carbonato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il isobutilo; Acetato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
    Pivalato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
    3-((2,4-diclorofenil)tio)-6-(4-morfolinofenil)-6-(tiofen-3-il)piperidina-2,4-diona;
    Carbonato de 5-((2,4-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
    Isonicotinato de 5-((2,5-diclorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo;
    Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il /so­ butilo;
    Carbonato de 5-((2-cloro-4-fluorofenil)tio)-2-(4-morfolinofenil)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il (2-metoxietilo);
    Carbonato de 6'-(ciclopentilmetoxi)-5-((2,5-diclorofenil)tio)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-[2,2'-bipiridin]-4-il (2-metoxietilo);
    Carbonato de 5-((2-clorofenil)tio)-2-(2-morfolinopirimidin-5-il)-6-oxo-2-(tiofen-3-il)-3,6-dihidro-2H-piran-4-il (2-metoxietilo);
    y sus estereoisómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  12. 12. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o (la), un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, junto con uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables
  13. 13. Un compuesto de fórmula (I) o (la), un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso en terapia o para su uso como medicamento.
  14. 14. Un compuesto de fórmula (I) o (la), un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso en la inhibición de LDHA, por ejemplo para su uso en el inhibición de LDHA sobre LDHB, o para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno que responde a la inhibición de LDHA, por ejemplo, una enfermedad o trastorno que está mediado por la activación de LDHA.
  15. 15. Un compuesto para su uso según la reivindicación 14 en el tratamiento o prevención de un crecimiento o tumor canceroso, o sus metástasis, preferiblemente para su uso en el tratamiento y/o prevención de una cualquiera de los siguientes cánceres: sarcomas, incluidos osteogénicos y sarcomas de tejidos blandos; carcinomas, por ejemplo, carcinomas de mama, pulmón, cerebro, vejiga, tiroides, próstata, colon, recto, páncreas, estómago, hígado, útero, hígado, renal, próstata, cuello uterino y ovario; linfomas, incluidos los linfomas de Hodgkin y no Hodgkin; neuroblastoma, melanoma, mieloma, tumor de Wilm; leucemias, incluyendo leucemia linfoblástica aguda y leucemia mieloblástica aguda; astrocitomas, gliomas y retinoblastomas, más preferiblemente para su uso en el tratamiento y/o prevención de cáncer de mama o cáncer de páncreas, o para su uso en el tratamiento o prevención de una afección asociada con hiperproliferación de células o una enfermedad metabólica, por ejemplo epilepsia, o para su uso en el tratamiento o prevención de un trastorno inflamatorio, por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple o una afección alérgica tal como asma.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3138822A1 (en) * 2019-05-02 2020-11-05 Universite Catholique De Louvain Lactate dehydrogenase inhibitor polypeptides for use in the treatment of cancer
US20230346862A1 (en) 2022-05-02 2023-11-02 Athanor Biosciences, Inc. Cancer eradicating - bio-nanoparticles (ce-bnp)
WO2025011479A1 (en) * 2023-07-13 2025-01-16 Meta Pharmaceuticals (Hk) Limited Pyrazole based inhibitors of LDH and their use in immune and inflammatory diseases

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI962021A7 (fi) 1993-11-19 1996-07-12 Parke Davis & Co 5,6-dihydropyronijohdannaiset proteaasi-inhibiittoreina ja antiviraali sina aineina
US5840751A (en) * 1993-11-19 1998-11-24 Warner-Lambert Company 5,6-dihydropyrone derivatives as protease inhibitors and antiviral agents
MA39749A (fr) * 2014-03-17 2017-01-25 Hoffmann La Roche Dérivés de pipéridine-dione
WO2015142903A2 (en) * 2014-03-17 2015-09-24 Genentech, Inc. Method of controlling lactate production with piperdine-dione derivatives
WO2017055396A1 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Selvita S.A. Pyrazolidine derivatives and related compounds
GB201707852D0 (en) * 2017-05-16 2017-06-28 Arctic Pharma As Compounds
GB201707846D0 (en) * 2017-05-16 2017-06-28 Spermatech As Use

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