ES2927355T3

ES2927355T3 - Compuestos inhibidores de OGA

Info

Publication number: ES2927355T3
Application number: ES19732991T
Authority: ES
Inventors: José Manuel Bartolome-Nebreda; Andrés Trabanco-Suarez; Joseph Leenaerts; Daniel Oehlrich; Petrus Jacobus Johannes Antonius Buijnsters; Lamenca Carolina Martinez; Adriana Velter; Roosbroeck Yves Van
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2018-06-21
Filing date: 2019-06-20
Publication date: 2022-11-04
Anticipated expiration: 2039-06-20
Also published as: CA3103048A1; AU2019291099A1; US20210130352A1; WO2019243533A1; EP3810608B1; JP2021527687A; MA52939A; CN112313231B; EP3810608A1; CN112313231A

Abstract

La presente invención se refiere a inhibidores de O-GIcNAc hidrolasa (OGA). La invención también está dirigida a composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos, a procesos para preparar tales compuestos y composiciones, y al uso de tales compuestos y composiciones para la prevención y tratamiento de trastornos en los que la inhibición de OGA es beneficiosa, como tauopatías, en particular enfermedad de Alzheimer o parálisis supranuclear progresiva; y enfermedades neurodegenerativas acompañadas de una patología tau, en particular esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones C90RF72. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos inhibidores de OGA

Campo de la invención

La presente invención se refiere a inhibidores de O-GlcNAc hidrolasa (OGA), que tienen la estructura que se muestra en la Fórmula (I)

en donde los radicales son como se definen en la memoria descriptiva. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, a procesos para preparar dichos compuestos y composiciones, y a dichos compuestos y composiciones para su uso en la prevención y tratamiento de trastornos en los que la inhibición de OGA es ventajosa, tales como tauopatías, en particular, la enfermedad de Alzheimer o parálisis supranuclear progresiva; y enfermedades neurodegenerativas acompañadas de una taupatía, en particular, esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72.

Antecedentes de la invención

La O-GlcNAcilación es una modificación reversible de proteínas donde los restos de N-acetil-D-glucosamina se transfieren a los grupos hidroxilo de los restos de serina y treonina que producen proteínas O-GlcNAciladas. Se han identificado más de 1000 de dichas proteínas diana tanto en el citosol como en el núcleo de los eucariotas. Se cree que la modificación regula un gran espectro de procesos celulares, incluida la transcripción, procesos citoesqueléticos, el ciclo celular, la degradación proteasómica y la señalización de receptores.

La O-GlcNAc transferasa (OGT) y la O-GlcNAc hidrolasa (OGA) son las dos únicas proteínas descritas que añaden (OGT) o eliminan (OGA) O-GlcNAc de las proteínas diana. La OGA se purificó inicialmente en 1994 a partir de una preparación de bazo, y en 1998 se identificó como antígeno expresado por los meningiomas y se denominó MGEA5, consiste en 916 grupos amino (102915 Dalton) en forma de un monómero en el compartimento citosólico de las células. Debe distinguirse de los procesos de glicosilación relacionados con el RE y el complejo de Golgi que son importantes para el tráfico y la secreción de proteínas y diferentes a OGA tienen un pH ácido óptimo, mientras que la OGA muestran la mayor actividad a pH neutro.

El dominio catalítico OGA con su centro catalítico de doble aspartato reside en la parte terminal de la enzima que está flanqueada por dos dominios flexibles. La parte C-terminal consiste en un dominio HAT (dominio de histona acetil transferasa) precedido por un dominio de tallo. Todavía no se ha demostrado que el dominio HAT sea catalíticamente activo.

Las proteínas O-GlcNAciladas así como las propias OGT y OGA son particularmente abundantes en el cerebro y las neuronas, lo que sugiere que esta modificación desempeña un papel importante en el sistema nervioso central. De hecho, los estudios confirmaron que la O-GlcNAcilación representa un mecanismo regulador clave que contribuye a la comunicación neuronal, la formación de memoria y la enfermedad neurodegenerativa. Además, se ha demostrado que la OGT es esencial para la embriogénesis en varios modelos animales y los ratones ogt nulos son letales embrionarios. La OGA también es indispensable para el desarrollo de los mamíferos. Dos estudios independientes han demostrado que los ratones homocigotos OGA nulos no sobreviven más de 24-48 horas después del nacimiento. La deleción de Oga ha producido defectos en la movilización de glucógeno en cachorros y causó la detención del ciclo celular vinculada a la inestabilidad genómica en MEF derivados de embriones homocigotos inactivados. Los animales heterocigotos sobrevivieron hasta la edad adulta, sin bien presentaron alteraciones tanto en la transcripción como en el metabolismo.

Se sabe que las perturbaciones en el ciclo de O-GlcNAc influyen en las enfermedades metabólicas crónicas como la diabetes, así como el cáncer. La heterocigosis de Oga suprimió la oncogénesis intestinal en un modelo de cáncer de ratón Apc-/+ y el gen Oga (MGEA5) es un locus de susceptibilidad a la diabetes humana documentado.

Además, se han identificado modificaciones de O-GlcNAc en varias proteínas que participan en el desarrollo y el avance de enfermedades neurodegenerativas, y se ha sugerido una correlación entre las variaciones de los niveles de O-GlcNAc en la formación de proteína de ovillos neurofibrilares (NFT) por ^ten la enfermedad de Alzheimer. Además, se ha descrito la O-GlcNAcilación de a-sinucleína en la enfermedad de Parkinson.

En el sistema nervioso central se han descrito seis variantes de corte y empalme de ^t. ^tse codifica en el cromosoma 17 y consiste en su variante de corte y empalme más larga expresada en el sistema nervioso central de 441 aminoácidos. Estas isoformas difieren por dos inserciones de extremo N (exón 2 y 3) y exón 10 que se encuentran dentro del dominio de unión a microtúbulos. El exón 10 es de considerable interés en las tauopatías, ya que alberga múltiples mutaciones que hacen que la ^tsea propensa a la agregación como se describe a continuación. La proteína ^tse une y estabiliza el citoesqueleto del microtúbulo neuronal, que es importante para la regulación del transporte intracelular de los orgánulos a lo largo de los compartimentos axonales. Por lo tanto, t desempeña un papel importante en la formación de axones y el mantenimiento de su integridad. Además, también se ha sugerido un papel en la fisiología de las espinas dendríticas.

La agregación de t es una de las causas subyacentes de una variedad de las llamadas tauopatías como PSP (parálisis supranuclear progresiva), síndrome de Down (SD), DLFT (demencia del lóbulo frontotemporal), FTDP-17 (demencia frontotemporal con parkinsonismo-17), enfermedad de Pick (EP), DCB (degeneración corticobasal), enfermedad argirofílica granulosa (EAG) y EA (enfermedad de Alzheimer). Además, la taupatía acompaña a enfermedades neurodegenerativas adicionales como la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) o la DLFT causada por mutaciones de C9ORF72. En estas enfermedades, la ^tes modificada después de la traducción por una fosforilación excesiva que se cree que separa la t de los microtúbulos y la hace propensa a la agregación. La O-GlcNAcilación de t regula el grado de fosforilación, ya que los restos de serina o treonina que transportan restos de O-GlcNAc no son susceptibles a la fosforilación. Esto hace que la ^tsea menos propensa a desprenderse de los microtúbulos, y reduce la agregación en ovillos neurotóxicos que, en última instancia, conducen a la neurotoxicidad y la muerte celular neuronal. Este mecanismo también puede reducir la diseminación de célula a célula de los agregados de t liberados por las neuronas a través de circuitos interconectados en el cerebro que, según se ha descrito recientemente, aceleran la patología en las demencias relacionadas con ^t. De hecho, la ^thiperfosforilada aislada de cerebros de pacientes con EA mostró niveles de O-GlcNAcilación significativamente reducidos.

Un inhibidor de OGA administrado a ratones transgénicos JNPL3 t redujo con éxito la formación de NFT y la pérdida neuronal sin efectos adversos aparentes. Esta observación se ha confirmado en otro modelo de tauopatía de roedores donde se puede inducir la expresión de ^tmutante encontrada en FTD (tg4510). La dosificación de un inhibidor de molécula pequeña de OGA fue eficaz para reducir la formación de agregación de t y atenuó la atrofia cortical y el agrandamiento ventricular.

Además, la O-GlcNAcilación de la proteína precursora amiloidea (APP) favorece el procesamiento a través de la ruta no amiloidogénica para producir fragmento de APP soluble y evitar la escisión que resulta en la formación de p-amiloide (Ap) asociada a EA.

Mantener la O-GlcNAcilación de t mediante la inhibición de OGA representa un enfoque potencial para disminuir la fosforilación de ^ty la agregación de ^ten las enfermedades neurodegenerativas mencionadas anteriormente, atenuando o deteniendo así el avance de las tauopatías neurodegenerativas.

Algunos compuestos son conocidos en la técnica y se ha descrito que tienen actividad inhibidora de OGA: En el documento WO2012/117219 (Summit Corp. plc., publicado el 7 de septiembre de 2012), se describen derivados de N-[[5-(hidroximetil)pirrolidin-2-il]metil]alquilamida y N-alquil-2-[5-(hidroximetil)pirrolidin-2-il]acetamida; En el documento WO2014/159234 (Merck Patent GMBH, publicado el 2 de octubre de 2014), se describen principalmente compuestos de 4-fenil o bencil-piperidina y piperazina sustituidos en la posición 1 con un sustituyente acetamido-tiazolilmetilo o acetamidoxazolilmetilo; En los documentos WO2016/0300443 (Asceneuron S.A., publicado el 3 de marzo de 2016), WO2017/144633 y WO2017/0114639 (Asceneuron S.A., publicada el 31 de agosto de 2017), se describen piperidinas o piperazinas 1,4-disustituidas; En el documento WO2017/144637 (Asceneuron S.A, publicado el 31 de agosto de 2017), se describen derivados 4-sustituidos más determinados de 1-[1-(1,3-benzodioxol-5-il)etil]-piperazina; 1 -[1 -(2,3-dihidrobenzofuran-5-il)etil]-; 1-[1-(2,3-dihidrobenzofuran-6-il)etil]-; y derivados de 1-[1-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)etil]-piperazina; En el documento WO2017/106254 (Merck Sharp & Dohme Corp.), se describen compuestos de N-[5-[(4-metilen-1-piperidil)metil]tiazol-2-il]acetamida sustituidos; y en el documento WO2018/055316 (Centre Nat Rech Scient; Univ Orleans; Univ Francois Rabelai), se describen compuestos de (hetero)ariletinilpirrolopiridina.

Siguen siendo necesarios compuestos inhibidores de OGA con un equilibrio ventajoso de propiedades, por ejemplo, con potencia mejorada, biodisponibilidad, farmacocinética y penetración cerebral buenas, y/o mejor perfil de toxicidad. Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proporcionar compuestos que resuelvan al menos algunos de estos problemas.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I)

y los tautómeros y las formas estereoisoméricas de los mismos, en donde

• R1 es -alquil C¹-⁶-C(O)-NRxRy, en donde

• Rx y Ry se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C ¹-³; o Rx y Ry junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

• R2, R3 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo y alquilo C¹-³;

• R4 es un radical monovalente seleccionado del grupo que consiste en (a), (b), (c), (d), (e) y (f):

en donde

• R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquiloxi C^1-3, polihaloalquiloxi C^1-3y cicloalquilo C^3-6; • R3a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -C(O)-Oalquilo C ^1-3, -C(O)-NR'R", -N(Rm)-C(O)-alquilo C ^1-3;

• R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C ^1-3, monohaloalquilo C ^1-3, polihaloalquilo C ^1-3, alquiloxi C ^1-3, monohaloalquiloxi C ^1-3, polihaloalquiloxi C^1-3,

• -C(O)-Oalquilo C^1-3, -C(O)-NR'R", -N(Rm)-C(O)-alquilo C^1-3y Het; con la condición de que R3a y R4a no sean simultáneamente -C(O)-Oalquilo C^1-3, -C(O)-NR'R" o -N(Rm)-C(O)-alquilo C^1-3;

• R' y R" se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C¹-³; o R' y R" junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

• R'" se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C¹-³;

• Het es pirazolilo o imidazolilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes de alquilo C ^1-3seleccionados independientemente;

• X ¹y X²se seleccionan cada uno independientemente de N y CH, con la condición de que al menos uno de X ¹o X²sea N;

R1c, R2c, R1d, R1e, R2e y R2f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3y cicloalquilo C^3-6;

• X3 representa CH o N;

• X4 representa C o N;

• y cada uno de los anillos representados por

forma

o (i) un heterociclo insaturado de 5 o 6 miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo C^1-3y oxo; o

o (ii) un heterociclo aromático de 5 o 6 miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, -CN, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3y polihaloalquilo C^1-3;

• y las sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos de los mismos.

Un ejemplo de la invención es una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y cualquiera de los compuestos descritos anteriormente. Una ilustración de la invención es una composición farmacéutica preparada mezclando cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un portador farmacéuticamente aceptable. La ilustración de la invención es un proceso para elaborar una composición farmacéutica que comprende mezclar cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un portador farmacéuticamente aceptable.

Otro ejemplo de la invención es cualquiera de los compuestos descritos anteriormente para su uso como un medicamento, en particular, en la prevención o el tratamiento de una tauopatía, más en particular una tauopatía seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, parálisis supranuclear progresiva, síndrome de Down, demencia del lóbulo frontotemporal, demencia frontotemporal con parkinsonismo-17, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal y enfermedad argirofílica granulosa; o una enfermedad neurodegenerativa acompañada de una taupatía, en particular, una enfermedad neurodegenerativa seleccionada de esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72, en un sujeto que lo necesite.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), según se ha definido anteriormente en la presente memoria, y sales de adición y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos de Fórmula (I) son inhibidores de la O-GIcNAc hidrolasa (OGA), y pueden ser útiles en la prevención o el tratamiento de tauopatías, en particular, una tauopatía seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, parálisis supranuclear progresiva, síndrome de Down, demencia del lóbulo frontotemporal, demencia frontotemporal con parkinsonismo-17, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal y enfermedad argirofílica granulosa; o pueden ser útiles en la prevención o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas acompañadas de una taupatía, en particular, una enfermedad neurodegenerativa seleccionada de esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72.

En una realización particular, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) según se ha definido anteriormente en la presente memoria, y los tautómeros y las formas estereoisoméricas de los mismos, en donde R1 es -C^1-3alquil-C(O)-NRxRy, en donde

• Rx y Ry se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C ^1-3; o Rx y Ry junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

• R4 es un radical monovalente seleccionado del grupo que consiste en (a), (b), (d) y (f), en donde

• R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquiloxi C^1-3, polihaloalquiloxi C^1-3y cicloalquilo C^3-6;

• R3a es hidrógeno;

• R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C ^1-3, monohaloalquilo C ^1-3, polihaloalquilo C ^1-3, alquiloxi C ^1-3, monohaloalquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C^1-3;

• X1 y X2 se seleccionan cada uno independientemente de N y CH, con la condición de que al menos uno de X1 o X2 sea N;

• R1d y R2f se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C^1-3;

• X3 representa CH;

• y cada uno de los anillos representados por

forma

o (i) un heterociclo insaturado de 5 o 6 miembros que tiene uno o dos heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo y alquilo C¹-³; o

o (ii) un heterociclo aromático de 5 o 6 miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de alquilo C¹-³; y las sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos de los mismos. En una realización particular, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) a los que se hace referencia en la presente memoria, y los tautómeros y las formas estereoisoméricas de los mismos, en donde

• R1 es -alquil C¹-³-C(O)-NRxRy, en donde

• R2, R3 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo y alquilo C¹-3;

• R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C¹-³, polihaloalquilo C¹-³, alquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C¹-³;

• R3a es hidrógeno;

• R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C¹-³, polihaloalquilo C¹-³, alquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C¹-³;

• R1d y R2f se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C¹-³;

• X3 representa CH;

• y cada uno de los anillos representados por

forma

o (i) un heterociclo insaturado de 5 o ⁶miembros que tiene uno o dos átomos de nitrógeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo y alquilo C¹-³; o

o (ii) un heterociclo aromático de 5 o ⁶miembros que tiene uno o dos átomos de nitrógeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de alquilo C ¹-³;

• y las sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos de los mismos.

En una realización particular, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R1 es -alquil C ^1-3-C(O)-NRxRy, en donde -NRxRy se selecciona del grupo que consiste en -NH², -NHCH³, -NH(CH³)², -N(CH³)(CH²CH³), azetidin-¹-ilo y pirrolidin-¹-ilo.

En una realización adicional, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R2, R3 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y metilo. En una realización adicional, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R1a, R 2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en flúor, cloro, metilo, isopropilo, CF³, -OCH³y -OCF³.

En otra realización, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, flúor, -CN, CF³y -OCF³. En otra realización, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde X1 es N y X2 es CH, o X1 es CH y X2 es N, o X1 y X2 son ambos N.

En una realización adicional, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R1d y R2f son cada uno independientemente metilo o isopropilo.

En una realización adicional, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), tal como se hace referencia en la presente memoria, en donde R4 se selecciona del grupo que consiste en

Definiciones

“ Halo” significa flúor, cloro y bromo; “oxo” significa =O, es decir, un átomo de oxígeno doblemente unido a un átomo de carbono; “alquilo C^1-3” significa un grupo alquilo saturado lineal o ramificado que tiene 1, 2 o 3 átomos de carbono, respectivamente, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo; “alquilo C^1-6” significa un grupo alquilo saturado lineal o ramificado que tiene 1, 2, 3 o 4 átomos de carbono, respectivamente, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, butilo, 1 -metil-propilo, 2-metil-1 -propilo, 1,1 -dimetiletilo y similares; “alquiloxi C^1-3” significa un radical éter en donde el alquilo C^1-3es como se ha definido anteriormente; “ monohaloalquilo y polihaloalquilo C^1-3” , como se utiliza en la presente memoria, por sí solo o como parte de otro grupo, se refiere a alquilo C^1-3como se ha definido anteriormente, sustituido con 1, 2, 3 o, cuando sea posible, con más átomos de halo como se ha definido anteriormente; “ monohaloalcoxi y polihaloalcoxi C^1-3” , como se utiliza en la presente memoria, por sí solo o como parte de otro grupo, se refiere a alquiloxi C^1-3tal como se ha definido anteriormente, sustituido con 1, 2, 3 o, cuando sea posible, con más átomos de halo tal como se ha definido anteriormente; “cicloalquilo C^3-6” significa ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; ''heterociclo insaturado de 5 o 6 miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, incluidos, de forma no limitativa, azetidina, pirrolidina, piperidina, piperidina, piperazina, morfolina, oxetano, tetrahidrofurano, tetrahidropirano, dioxolano y similares, cuando se sustituye con oxo, la expresión incluye, por ejemplo, lactamas (por ejemplo, pirrolidinona, piperidinona); “ heterociclo aromático de 5 o 6 miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre” incluye, de forma no limitativa, pirrol, furano, pirazol, imidazol, piridina, pirimidina, piridazina, pirazina y similares.

En general, siempre que se utilice el término “ sustituido” en la presente invención, se pretende, salvo que se indique lo contrario o sea claro a partir del contexto, indicar que uno o más hidrógenos, en particular 1 a 3 hidrógenos, preferiblemente 1 o 2 hidrógenos, más preferiblemente 1 hidrógeno, en el átomo o radical indicado en la expresión en la que se utiliza “ sustituido” se reemplaza(n) con una selección de sustituyentes del grupo indicado, siempre que no se exceda la valencia normal, y que la sustitución dé como resultado un compuesto químicamente estable, es decir, un compuesto que sea lo suficientemente robusto como para sobrevivir al aislamiento a un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y la formulación en un agente terapéutico.

El término “sujeto” , como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un ser humano, que es o ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento. Como se utiliza en la presente memoria, el término “ sujeto” , por lo tanto, abarca pacientes, así como individuos asintomáticos o presintomáticos con riesgo de desarrollar una enfermedad o afección tal como se define en la presente memoria.

La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” , como se utiliza en la presente memoria, significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema tisular, animal o humano buscada por un investigador, veterinario, médico u otro médico, incluido el alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que se está tratando. La expresión “cantidad profilácticamente eficaz” , como se utiliza en la presente memoria, significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que reduce sustancialmente el potencial de aparición de la enfermedad o trastorno que se previene.

Como se utiliza en la presente memoria, se pretende que el término “composición” abarque un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

En adelante, la expresión “compuesto de Fórmula (I)” se entenderá como incluyente de las sales de adición, los solvatos y los estereoisómeros de los mismos.

El término “estereoisómeros” o la expresión “formas estereoquímicamente isoméricas” indicados anteriormente o en lo sucesivo se utilizan indistintamente.

La invención incluye todos los estereoisómeros del compuesto de Fórmula (I), ya sea como un estereoisómero puro, o como una mezcla de dos o más estereoisómeros.

Los enantiómeros son estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es un racemato o mezcla racémica. Los diastereómeros (o diastereoisómeros) son estereoisómeros que no son enantiómeros, es decir, no están relacionados como imágenes especulares. Si un compuesto contiene un enlace doble, los sustituyentes pueden estar en la configuración E o Z. Si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuración cis o trans. Por lo tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereómeros, racematos, isómeros E, isómeros Z, isómeros cis, isómeros trans y mezclas de los mismos.

La configuración absoluta se especifica según el sistema Cahn-Ingold-Prelog. La configuración en un átomo asimétrico se especifica por R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta no se conoce pueden designarse por (+) o (-), dependiendo de la dirección en la que giran la luz polarizada plana.

Cuando se identifica un estereoisómero específico, esto significa que dicho estereoisómero está sustancialmente libre, es decir, asociado con menos del 50 %, preferiblemente menos del 20 %, más preferiblemente menos del 10 %, incluso más preferiblemente menos del 5 %, en particular menos del 2 % y, más preferiblemente, menos del 1 % de los otros isómeros. Por lo tanto, cuando se especifica que un compuesto de fórmula (I) es, por ejemplo, (R), significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero (S); cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como E, significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero Z; cuando un compuesto de fórmula (l) se especifica, por ejemplo, como cis, significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero trans.

Para su uso en medicina, las sales de adición de los compuestos de la presente invención se refieren a “sales de adición farmacéuticamente aceptables” no tóxicas. Otras sales pueden, sin embargo, ser útiles en la preparación de compuestos según la presente invención o de sus sales de adición farmacéuticamente aceptables. Las sales de adición farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos incluyen sales de adición de ácido que pueden, por ejemplo, formarse mezclando una solución del compuesto con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, cuando los compuestos de la invención llevan un resto ácido, las sales de adición farmacéuticamente aceptables adecuadas de los mismos pueden incluir sales de metales alcalinos, por ejemplo, sales de sodio o potasio; sales de metales alcalinotérreos, por ejemplo, sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados, por ejemplo, sales de amonio cuaternario.

Los ácidos representativos que se pueden utilizar en la preparación de sales de adición farmacéuticamente aceptables incluyen, de forma no limitativa, los siguientes: ácido acético, ácido 2,2-dicloroáctico, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)-alcanfórico, ácido canforsulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxi-etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido D-glucónico, ácido D-glucorónico, ácido L-glutámico, ácido p-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido (+)-L-láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malónico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido naftaleno-1,5-disulfónio, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutámico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tánico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico, ácido trifluorometilsulfónico y ácido undecilénico. Las bases representativas que se pueden utilizar en la preparación de sales de adición farmacéuticamente aceptables incluyen, de forma no limitativa, los siguientes: amoníaco, L-arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de calcio, colina, dimetiletanolamina, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilen-diamina, N -metil-glucamina, hidrabamina, 1H -imidazol, L-lisina, hidróxido de magnesio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potasio, 1 -(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaria, hidróxido de sodio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de zinc.

Los nombres de los compuestos se generaron según las reglas de nomenclatura acordadas por el Chemical Abstracts Service (CAS) o según las reglas de nomenclatura acordadas por la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC).

Preparación de los compuestos finales

Los compuestos según la invención generalmente se pueden preparar mediante una sucesión de etapas, cada una de las cuales es conocida por el experto en la técnica. En particular, los compuestos se pueden preparar según los siguientes métodos de síntesis.

Los compuestos de Fórmula (I) se pueden sintetizar en forma de mezclas racémicas de enantiómeros que se pueden separar entre sí siguiendo procedimientos de resolución conocidos en la técnica. Los compuestos racémicos de Fórmula (I) se pueden convertir en las formas de sal diastereomérica correspondientes mediante reacción con un ácido quiral adecuado. Dichas formas de sal diastereomérica se separan posteriormente, por ejemplo, mediante cristalización selectiva o fraccionada y los enantiómeros se liberan de esta mediante el uso de álcali. Una manera alternativa de separar las formas enantioméricas de los compuestos de Fórmula (I) pasa por el uso de cromatografía líquida usando una fase estacionaria quiral. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también pueden derivar de las formas estereoquímicamente isoméricas puras correspondientes de los materiales de partida adecuados, siempre que la reacción se produzca estereoespecíficamente.

Procedimiento experimental 1

Los compuestos finales de Fórmula (I), en donde R1 es -alquil Ci-6-C(O)-NRxRy se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (II-a) con un compuesto de Fórmula (III) según el esquema de reacción 1. La reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, tBuOH, en presencia de una base, tal como Cs²CO³, en presencia de un catalizador, tal como Pd(OAc)², y un ligando de fósforo adecuado, tal como XantPhos, bajo condiciones térmicas, tal como por ejemplo a 130 °C durante un periodo de tiempo adecuado para hacer que la reacción se lleve a término. En el esquema de reacción 1, todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y halo representa un halógeno, en particular, bromo o cloro.

Procedimiento experimental 2

Alternativamente, los compuestos finales de Fórmula (I) se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (II-b) con un compuesto de Fórmula (IV) según el esquema de reacción 2. La reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte de reacción adecuado, tal como, por ejemplo, DMF, en presencia de una base, tal como NaH, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, a una temperatura de 0 °C a temperatura ambiente durante un periodo de tiempo adecuado para llevar la reacción a término. En el esquema de reacción 2, todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y halo representa un halógeno, en particular, bromo o cloro.

Procedimiento experimental 3

Alternativamente, los compuestos finales de Fórmula (I) se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Fórmula (II-c) con una amina adecuada de Fórmula (V) según el esquema de reacción 3. Se pueden utilizar varias condiciones para formar la amida: (a) un agente de acoplamiento tal como HOBt y una carbodiimida, por ejemplo EDCI, en presencia de una base adecuada tal como DIPEA, en un disolvente de reacción inerte tal como DCM y/o DMF en condiciones térmicas, por ejemplo, llevando a cabo la reacción a temperatura ambiente; (b) un reactivo de acoplamiento tal como T3P® en presencia de una base adecuada, tal como trietilamina, en un disolvente de reacción inerte tal como THF en condiciones adecuadas, tal como, por ejemplo, condiciones térmicas, tal como de temperatura ambiente a 50 °C; (c) un reactivo de acoplamiento tal como HBTU en presencia de una base, tal como DIPEA, en un disolvente de reacción inerte, tal como DMF, a una temperatura adecuada, por ejemplo, a temperatura ambiente. En el esquema de reacción 3, todas las variables se definen como en la Fórmula (I).

Procedimiento experimental 4

Los compuestos intermedios de Fórmula (II-a) se pueden preparar según el esquema de reacción 4, etapa (i). Un compuesto intermedio de Fórmula (VI) se puede hacer reaccionar con un compuesto de Fórmula (IV) en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, NaH en un disolvente inerte de reacción, tal como, por ejemplo, DMF, a una temperatura adecuada, tal como una temperatura de 0 °C a temperatura ambiente.

Los compuestos de productos intermedios de Fórmula (II-c) se pueden preparar según el esquema de reacción 4, etapas (ii)-(iii). Por lo tanto, un compuesto de Fórmula (VI) se puede hacer reaccionar con un compuesto de Fórmula (VII) en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, NaH en un disolvente inerte de reacción, tal como, por ejemplo, DMF, a una temperatura adecuada, tal como una temperatura de 0 °C a temperatura ambiente. El compuesto resultante de Fórmula (VIII) se puede hidrolizar posteriormente en condiciones ácidas adecuadas (por ejemplo, TFA en DCM) o básicas (por ejemplo, LiOH en THF y/o agua).

En el esquema de reacción 4, todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y halo representa un halógeno, en particular, bromo o cloro

Procedimiento experimental 5

Los compuestos intermedios de Fórmula (II-b) se pueden preparar según el esquema de reacción 5. Por lo tanto, un compuesto de Fórmula (IX), en donde PG representa un grupo protector (por ejemplo, fenilsulfonilo), se puede oxidar en condiciones adecuadas, por ejemplo, mediante mCPBA en dCm proporcionando un producto intermedio de Fórmula (X). La reacción con un agente halogenante adecuado (por ejemplo, POBr³en ACN y dioxano a una temperatura adecuada, por ejemplo 70 °C) proporciona un producto intermedio de Fórmula (XI), que a continuación se puede hacer reaccionar con un producto intermedio de Fórmula (III), en las condiciones descritas en el procedimiento experimental 1 proporcionando un producto intermedio de Fórmula (XII). El grupo protector en (XII) se puede escindir en condiciones adecuadas (por ejemplo, cuando PG es fenilsulfonilo, mediante tratamiento con NaOH en MeOH).

En el esquema de reacción 5, todas las variables se definen como en la Fórmula (I) y halo representa un halógeno, en particular, bromo o cloro.

Los compuestos intermedios de las Fórmulas (VI) y (IX) están disponibles comercialmente o se pueden sintetizar mediante procedimientos de reacción conocidos por el experto en la técnica.

Farmacología

Los compuestos de la presente invención y las composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos inhiben la O-GlcNAc hidrolasa (OGA) y, por lo tanto, pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de enfermedades que implican taupatía, también conocidas como tauopatías, y enfermedades con inclusiones de ^t. Dichas enfermedades incluyen, de forma no limitativa, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica y complejo de parkinsonismodemencia, enfermedad argirofílica granulosa, encefalopatía traumática crónica, degeneración corticobasal, ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, síndrome de Down, demencia familiar británica, demencia familiar danesa, demencia frontotemporal y parkinsonismo ligados al cromosoma 17 (causados por mutaciones MAPT), degeneración lobular frontotemporal (algunos casos causados por mutaciones C9ORF72), enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker, parkinsonismo de Guadelupe, miotrofia miotónica, neurodegeneración con acumulación de hierro, enfermedad de Niemann-Pick, tipo C, enfermedad de la motoneurona no Guamaniana con ovillos neurofibrilares, enfermedad de Pick, parkinsonismo postencefálico, angiopatía amiloide cerebral causada por proteínas de prión, gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva, retraso mental relacionado con SLC9A6, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia solo de ovillos, y tauopatía de materia blanca con inclusiones gliales globulares.

Como se utiliza en la presente memoria, el término “tratamiento” se refiere a todos los procesos en donde puede haber una ralentización, interrupción, paro o detención de la evolución de una enfermedad o un alivio de los síntomas, pero no indica necesariamente una eliminación total de todos los síntomas. Como se utiliza en la presente memoria, el término “ prevención” se refiere a todos los procesos en donde puede haber una ralentización, interrupción, detención o detención de la aparición de una enfermedad.

La invención también se refiere a un compuesto según la Fórmula general (I), una forma estereoisomérica del mismo, o un ácido farmacéuticamente aceptable o una sal de adición de base del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades o afecciones seleccionadas del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica y complejo parkinsonismo-demencia, enfermedad argirofílica granulosa, encefalopatía traumática crónica, degeneración corticobasal, ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, síndrome de Down, demencia familiar británica, demencia familiar danesa, demencia frontotemporal y parkinsonismo ligados al cromosoma 17 (causados por mutaciones MAPT), degeneración lobular frontotemporal (algunos casos causados por mutaciones C9ORF72), enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker, parkinsonismo de Guadelupe, miotrofia miotónica, neurodegeneración con acumulación de hierro, enfermedad de Niemann-Pick, tipo C, enfermedad de la motoneurona no Guamaniana con ovillos neurofibrilares, enfermedad de Pick, parkinsonismo postencefálico, angiopatía amiloide cerebral causada por proteínas de prión, gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva, retraso mental relacionado con SLC9A6, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia solo de ovillos, y tauopatía de materia blanca con inclusiones gliales globulares.

La invención también se refiere a un compuesto según la Fórmula general (I), una forma estereoisomérica del mismo, o una sal de adición de base o de ácido farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento, la prevención, la mejora, el control o la reducción del riesgo de enfermedades o afecciones seleccionadas del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica y complejo de parkinsonismo-demencia, enfermedad argirofílica granulosa, encefalopatía traumática crónica, degeneración corticobasal, ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, síndrome de Down, demencia familiar británica, demencia familiar danesa, demencia frontotemporal y parkinsonismo vinculados al cromosoma 17 (causados por mutaciones MAPT), degeneración lobular frontotemporal (algunos casos causados por mutaciones C9ORF72), enfermedad de Gerstmann-Strussler-Sinker, parkinsonismo de Guadelupe, miotrofia miotónica, neurodegeneración con acumulación de hierro, enfermedad de Niemann-Pick, tipo C, enfermedad de la motoneurona no Guamaniana con ovillos neurofibrilares, enfermedad de Pick, parkinsonismo postencefálico, angiopatía amiloide cerebral causada por proteínas de prión, gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva, retraso mental relacionado con SLC9A6, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia solo de ovillos, y tauopatía de materia blanca con inclusiones gliales globulares.

En particular, las enfermedades o afecciones pueden seleccionarse en particular de una tauopatía, más particularmente una tauopatía seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, parálisis supranuclear progresiva, síndrome de Down, demencia del lóbulo frontotemporal, demencia frontotemporal con parkinsonismo-17, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal y enfermedad argirofílica granulosa; o las enfermedades o afecciones pueden ser, en particular, enfermedades neurodegenerativas acompañadas de una taupatía, más en particular una enfermedad neurodegenerativa seleccionada de esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72.

Estados preclínicos en las enfermedades de Alzheimer y tauopatía:

• En los últimos años, el Instituto Nacional para el Envejecimiento de los Estados Unidos (EE. UU.) y el Grupo de Trabajo Internacional han propuesto pautas para definir mejor las etapas preclínicas (asintomáticas) de la EA (Dubois B, y col. Lancet Neurol. 2014;13:614-629;

• Sperling, R. A., y col. Alzheimers Dement. 2011;7:280-292). Los modelos hipotéticos postulan que la acumulación de Ap y la agregación de t comienza muchos años antes del inicio del deterioro clínico manifiesto. Los factores de riesgo clave para la acumulación elevada de amiloide, la agregación de ^ty el desarrollo de EA son la edad (es decir, 65 años o más), el genotipo APOE y los antecedentes familiares. Aproximadamente un tercio de las personas mayores, clínicamente normales, mayores de 75 años demuestran evidencia de acumulación de Ap o ^ten estudios de amiloide PET y de imágenes de ^t, siendo este último menos avanzado en la actualidad. Además, se observan niveles reducidos de A-p en las mediciones del LCR, mientras que los niveles de ^tno modificada y fosforilada son elevados en el LCR. Se observan hallazgos similares en grandes estudios de autopsia y se ha demostrado que los agregados de t se detectan en el cerebro a partir de los 20 años de edad. Los individuos clínicamente normales amiloides positivos (Ap+) demuestran consistentemente evidencia de un “endofenotipo similar a EA” en otros biomarcadores, incluyendo actividad de red funcional interrumpida tanto en imágenes de resonancia magnética funcional (IRM) como en conectividad en estado de reposo, hipometabolismo de fluorodesoxiglucosa 18F (FDG), adelgazamiento cortical y tasas aceleradas de atrofia. La acumulación de datos longitudinales también sugiere fuertemente que los individuos clínicamente normales con Ap+ tienen un mayor riesgo de deterioro cognitivo y progresión a deterioro cognitivo leve (MCI) y demencia de EA. La comunidad científica entorno al Alzheimer está de acuerdo en que estos individuos Ap+ clínicamente normales representan una etapa temprana en el continuo de la patología de la EA. Por lo tanto, se ha estipulado que la intervención con un agente terapéutico que disminuye la producción de Ap o la agregación de ^tes probablemente más eficaz si se inicia en una etapa de la enfermedad antes de que se haya producido la neurodegeneración generalizada. Varias compañías farmacéuticas están probando actualmente la inhibición de BACE en la EA prodrómica.

Gracias a la investigación de biomarcadores en evolución, ahora es posible identificar la enfermedad de Alzheimer en una etapa preclínica antes de la aparición de los primeros síntomas. Todas las diferentes cuestiones relacionadas con la enfermedad de Alzheimer preclínica, como las definiciones y el léxico, los límites, la historia natural, los marcadores de progresión y las consecuencias éticas de detectar la enfermedad en la etapa asintomática, se han analizado en Alzheimer & Dementia 12 (2016) 292-323.

Se pueden reconocer dos categorías de individuos en la enfermedad de Alzheimer preclínica o en las tauopatías. Los individuos cognitivamente normales con agregación amiloide p o ^tevidente en las exploraciones por PET, o cambios en A-p de LCR, ^ty fosfo-T se definen como en un “estado asintomático de riesgo para la enfermedad de Alzheimer (RA-EA)” o en un “estado asintomático de tauopatía” . Se dice que las personas con una mutación autosómica dominante completamente penetrante para la enfermedad de Alzheimer familiar tienen “enfermedad de Alzheimer presintomática” . También se han descrito mutaciones autosómicas dominantes dentro de la proteína t para múltiples formas de tauopatías.

Por lo tanto, en una realización, la invención también se refiere a un compuesto según la Fórmula general (I), una forma estereoisomérica del mismo, o una sal de adición de ácido o base farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el control o la reducción del riesgo de enfermedad de Alzheimer preclínica, enfermedad de Alzheimer prodrómica o neurodegeneración relacionada con ^t, tal como se observa en diferentes formas de tauopatías.

Como ya se ha mencionado anteriormente en la presente memoria, el término “tratamiento” no indica necesariamente una eliminación total de todos los síntomas, sino que también puede referirse al tratamiento sintomático en cualquiera de los trastornos mencionados anteriormente. En vista de la utilidad del compuesto de Fórmula (I), se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar sujetos tales como animales de sangre caliente, incluidos seres humanos, que padecen, o un método para evitar que sujetos tales como animales de sangre caliente, incluidos seres humanos, padezcan cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en la presente memoria.

Dichos métodos comprenden la administración, es decir, la administración sistémica o tópica, preferiblemente la administración oral, de una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), una forma estereoisomérica del mismo, una sal de adición farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, a un sujeto tal como un animal de sangre caliente, incluido un ser humano.

Por lo tanto, la invención también se refiere a un compuesto para su uso en un método para la prevención y/o el tratamiento de cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en la presente memoria que comprende administrar una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de un compuesto según la invención a un sujeto que lo necesite.

Un método de tratamiento también puede incluir la administración del ingrediente activo en una pauta posológica de entre una y cuatro tomas al día. En estos métodos de tratamiento, los compuestos según la invención se formulan preferiblemente antes de la administración. Tal como se describe más adelante en la presente memoria, las formulaciones farmacéuticas adecuadas se preparan mediante procedimientos conocidos utilizando ingredientes conocidos y fácilmente disponibles. Los compuestos de la presente invención, que pueden ser adecuados para tratar o prevenir cualquiera de los trastornos mencionados anteriormente o los síntomas de los mismos, pueden administrarse solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. La terapia de combinación incluye la administración de una única formulación de dosificación farmacéutica que contiene un compuesto de Fórmula (I) y uno o más agentes terapéuticos adicionales, así como la administración del compuesto de Fórmula (I) y cada agente terapéutico adicional en su propia formulación de dosificación farmacéutica separada. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I) y un agente terapéutico se pueden administrar al paciente juntos en una única composición de dosificación oral tal como un comprimido o una cápsula, o cada agente se puede administrar en formulaciones de dosificación oral separadas.

Un experto en la técnica estará familiarizado con nomenclaturas, nosologías y sistemas de clasificación alternativos para las enfermedades o afecciones a las que se hace referencia en la presente memoria. Por ejemplo, la quinta edición del Manual Diagnóstico y Estadístico de los Trastornos Mentales (DSM-5™) de la Asociación Americana de Psiquiatría utiliza términos tales como trastornos neurocognitivos (TNC) (tanto mayores como leves), en particular, trastornos neurocognitivos debido a la enfermedad de Alzheimer. Dichos términos se pueden utilizar como nomenclatura alternativa para algunas de las enfermedades o afecciones mencionadas en la presente memoria por el experto en la técnica.

Composiciones farmacéuticas

La presente invención también proporciona composiciones para prevenir o tratar enfermedades en las que la inhibición de la O-GlcNAc hidrolasa (OGA) es ventajosa, tal como enfermedad de Alzheimer, parálisis supranuclear progresiva, síndrome de Down, demencia del lóbulo frontotemporal, demencia frontotemporal con parkinsonismo-17, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal, enfermedad argirofílica granulosa, esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72, dichas composiciones comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según la fórmula (I) y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Si bien es posible administrar el ingrediente activo solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica. Por consiguiente, la presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la presente invención, junto con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. El portador o diluyente debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición y no perjudicial para los receptores de la misma.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden prepararse mediante cualquier método bien conocido en la técnica de la farmacia. Una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto particular, en forma de base o forma de sal de adición, a medida que el ingrediente activo se combina en una mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, que puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas están convenientemente en forma de dosificación unitaria adecuada, preferiblemente, para administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral; o administración tópica tal como a través de inhalación, un aerosol nasal, gotas para los ojos o a través de una crema, gel, champú o similares. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad en la administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el portador generalmente comprenderá agua estéril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para facilitar la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar soluciones inyectables en las que el portador comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear portadores líquidos, agentes de suspensión y similares adecuados. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el portador comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectable adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, cuyos aditivos no causan ningún efecto perjudicial significativo en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser útiles para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar de diversas maneras, por ejemplo, como un parche transdérmico, como spot-on (producto para aplicación local) o como pomada.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de dosis unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. La forma de dosis unitaria tal como se utiliza en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones de la presente memoria se refiere a unidades físicamente diferenciadas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Los ejemplos de dichas formas de dosis unitaria son comprimidos (que incluyen comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, paquetes de polvo, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y múltiplos segregados de los mismos.

La dosificación exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular de Fórmula (I) utilizado, la afección particular que se está tratando, la gravedad de la afección que se está tratando, la edad, el peso, el sexo, la extensión del trastorno y la condición física general del paciente particular, así como otros medicamentos que el individuo puede estar tomando, como es bien conocido por los expertos en la técnica. Además, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede reducirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la presente invención.

Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá del 0,05 al 99 % en peso, preferiblemente del 0,1 al 70 % en peso, más preferiblemente del 0,1 al 50 % en peso del ingrediente activo, y, del 1 al 99,95 % en peso, preferiblemente del 30 al 99,9 % en peso, más preferiblemente del 50 al 99,9 % en peso de un portador farmacéuticamente aceptable, basados todos los porcentajes en el peso total de la composición.

Los presentes compuestos se pueden utilizar para la administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral; o administración tópica tal como a través de inhalación, un aerosol nasal, gotas para los ojos o a través de una crema, gel, champú o similares. Los compuestos se administran preferiblemente por vía oral. La dosificación exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular según la Fórmula (I) utilizado, la afección particular que se está tratando, la gravedad de la afección que se está tratando, la edad, el peso, el sexo, la extensión del trastorno y la condición física general del paciente en cuestión, así como otros medicamentos que el individuo puede estar tomando, como es bien conocido por los expertos en la técnica. Además, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede reducirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la presente invención. La cantidad de un compuesto de Fórmula (I) que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única variará dependiendo de la enfermedad tratada, la especie de mamífero y el modo particular de administración. Sin embargo, como guía general, las dosis unitarias adecuadas para los compuestos de la presente invención pueden, por ejemplo, contener preferiblemente entre 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg del compuesto activo. Una dosis unitaria preferida es de entre 1 mg y aproximadamente 500 mg. Una dosis unitaria más preferida es de entre 1 mg y aproximadamente 300 mg. Una dosis unitaria aún más preferida es de entre 1 mg y aproximadamente 100 mg. Dichas dosis unitarias se pueden administrar más de una vez al día, por ejemplo, 2, 3, 4, 5 o 6 veces al día, pero preferiblemente 1 o 2 veces al día, de modo que la dosificación total para un adulto de 70 kg se encuentra en el intervalo de 0,001 a aproximadamente 15 mg por kg de peso del sujeto por administración. Una dosificación preferida es de 0,01 a aproximadamente 1,5 mg por kg de peso del sujeto por administración, y dicha terapia puede extenderse varias semanas o meses, y en algunos casos, años. Sin embargo, se entenderá que el nivel de dosis específico para cualquier paciente dado dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta de la persona tratada; el tiempo y la vía de administración; la tasa de excreción; otros fármacos que se hayan administrado previamente; y la gravedad de la enfermedad particular sometida a terapia, como bien lo entienden los expertos en la materia.

Una dosificación típica puede ser un comprimido de 1 mg a aproximadamente 100 mg o de 1 mg a aproximadamente 300 mg tomados una vez al día, o múltiples veces al día, o una cápsula o comprimido de liberación prolongada tomados una vez al día y que contiene un contenido proporcionalmente mayor de ingrediente activo. El efecto de liberación temporal se puede obtener mediante materiales de cápsulas que se disuelven a diferentes valores de pH, mediante cápsulas que se liberan lentamente mediante presión osmótica o mediante cualquier otro medio conocido de liberación controlada.

Puede ser necesario utilizar dosificaciones fuera de estos intervalos en algunos casos como será evidente para los expertos en la técnica. Además, se observa que el médico o el médico tratante sabrá cómo y cuándo comenzar, interrumpir, ajustar o finalizar la terapia junto con la respuesta individual del paciente.

La invención también proporciona un kit que comprende un compuesto según la invención, información de prescripción, también conocida como “prospecto” , un envase o frasco de blíster y un recipiente. Además, la invención proporciona un kit que comprende una composición farmacéutica según la invención, información de prescripción, también conocida como “prospecto” , un envase o frasco de blíster y un recipiente. La información de prescripción preferiblemente incluye consejos o instrucciones para un paciente con respecto a la administración del compuesto o la composición farmacéutica según la invención. En particular, la información de prescripción incluye asesoramiento o instrucción a un paciente con respecto a la administración de dicho compuesto o composición farmacéutica según la invención, sobre cómo se debe utilizar el compuesto o la composición farmacéutica según la invención, para la prevención y/o tratamiento de una tauopatía en un sujeto que lo necesite. Por lo tanto, en una realización, la invención proporciona un kit de partes que comprenden un compuesto de Fórmula (I) o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo, o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto, e instrucciones para prevenir o tratar una tauopatía. El kit al que se hace referencia en la presente memoria puede ser, en particular, un paquete farmacéutico adecuado para la venta comercial.

Para las composiciones, métodos y kits proporcionados anteriormente, un experto en la técnica comprenderá que los compuestos preferidos para su uso en cada uno son los compuestos señalados como preferidos anteriormente en la presente memoria. Otros compuestos preferidos para las composiciones, métodos y kits son los compuestos proporcionados en los siguientes ejemplos no limitativos.

Parte experimental

En lo sucesivo, el término “ p.f.” significa punto de fusión, “ min” significa minutos, “AcOH” significa ácido acético, “ac.” significa acuoso, “ DIBAL” significa hidruro de diisobutilaluminio, “ m.r.” significa mezcla de reacción, “t.a.” o “ta” significa temperatura ambiente, “ rac” o “ RS” significa racémico, “ sat.” significa saturado, “CFS” significa cromatografía de fluidos supercrítica, “ CFS-MS” significa cromatografía de fluidos supercrítica/espectrometría de masas, “ LC-MS” significa cromatografía de líquidos/espectrometría de masas, “ HOBt” significa 1-hidroxibenzotriazol, “ HPLC” significa cromatografía líquida de alto rendimiento, “ NP” significa fase normal, “ RP” significa fase inversa, “Tr” significa tiempo de retención (en minutos), “ [M+H]+” significa la masa protonada de la base libre del compuesto, “ p” significa peso, “THF” significa tetrahidrofurano, “ EtOAc” significa acetato de etilo, “ DCE” significa dicloroetano, “ DCM” significa diclorometano, “ DME” significa 1,2-dimetoxietano, “ DMF” significa dimetilformamida, “ DIPEA” significa N,N-diisopropiletilamina, “ EDC” significa etilcarbodiimida, “ Et²O” significa éter dietílico, “ MeOH” significa metanol, “ MeCN” significa acetonitrilo, “ MW” significa microondas, “org.” significa orgánico, “ sol.” significa solución, “ Boc” significa ferc-butoxicarbonilo, “ CCF” significa cromatografía en capa fina, “ Pd/C” significa paladio sobre carbono, “ EtOH” significa etanol, “ DIPE” significa éter diisopropílico, “T3P” significa solución de anhídrido propilfosfónico, “ Pd(OAc)²” significa acetato de paladio(II), “ Pd²dba³” significa tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0), “ PdCl²(dppf)” significa 1,1'-[bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II), “ Pd(PPh³)⁴” significa tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0), “XantPhos” significa 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno, “ HBTU” significa hexafluorofosfato de W,W,W',W'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uranio, “ /-PrOH” significa alcohol isopropílico.

Las reacciones asistidas por microondas se realizaron en un reactor monomodo: reactor de microondas Initiator™ Sixty EXP (Biotage AB) o en un reactor multimodo: MicroSYNTH Labstation (Milestone, Inc.).

La cromatografía en capa fina (CCF) se llevó a cabo en placas de gel de sílice 60 F254 (Merck) usando disolventes de grado reactivo. La cromatografía en columna abierta se realizó en gel de sílice, tamaño de partícula 60 Á, malla = 230-400 (Merck) utilizando técnicas estándar. La cromatografía ultrarrápida en columna automatizada se realizó utilizando cartuchos listos para conectar, en gel de sílice irregular, tamaño de partícula 15-40 pm (columnas ultrarrápidas desechables de fase normal) en diferentes sistemas de columna ultrarrápida: ya sea un sistema SPOT o LAFLASH de Armen Instrument, o sistemas PuriFlash® 430evo de Interchim, o sistemas 971-FP de Agilent, o sistemas Isolera 1SV de Biotage.

Preparación de productos intermedios

Preparación del producto intermedio 1

A una solución de 4-cloro-1H-pirrolo[3,2-c]piridina ([60290-21-3], 4,74 g, 31,07 mmol) en DMF (72,16 ml) a 0 °C, se agregó NaH (60 % de dispersión en aceite mineral, 1,74 g, 43,49 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta ta y se agitó durante 30 min. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C y se agregó 2-cloro-N,N-dimetilacetamida ([2675-89-0], 3,83 ml, 37,28 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta ta durante 2 h. Se agregó sol. sat. de NaHCO³y la capa orgánica se extrajo con EtOAc, a continuación, se lavó con agua y salmuera, a continuación se desecó sobre MgSO⁴y se retiró el disolvente. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (Heptano/EtOAc de 80/20 a 0/100), obteniéndose 1-1 (6,34 g, rendimiento 68 %) como un sólido blanco.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a partir de 4-bromo-1H-pirrolo[3,2-c]piridina ([1000342-68-6]) o 4-cloro-1 H-pirrolo[3,2-c]piridina ([60290-21 -3]) y el reactivo indicado.

Preparación del producto intermedio 7

A una mezcla de 1-metil-1H-indol-4-amina ([85696-95-3], 481 mg, 3,29 mmol) en DCM seco (9,62 ml), se agregó N-clorosuccinimida (461,32 mg, 3,45 mmol) en partes a 0 0C, y la mezcla de reacción se agitó a 0 0C durante 30 min y, a continuación, a temperatura ambiente durante 30 min. A continuación se evaporó el disolvente y se purificó el compuesto mediante cromatografía ultrarrápida en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/heptano (de 30/70 a 80/20). Las fracciones deseadas se concentraron, produciendo 1-7 (240 mg, 40 %).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-7 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-53

Se agregó N-clorosuccinimida (400 mg, 3,00 mmol) a una solución de 2-(difluorometoxi)-6-metilanilina [139909 66-3] (520 mg, 2,85 mmol) en DMF (9,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 66 0C durante 1 h y se vertió en agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se evaporaron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente del 0 al 35 %), proporcionando I-53 (476 mg, 80 %).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-53 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio 8

N.B. Utilizar material de vidrio seco y realizar la reacción en atmósfera de nitrógeno.

Se agitó una mezcla de I-7 (221 mg, 1,22 mmol), cloruro de metilzinc ([5158-46-3], 1,22 ml, 2 M, 2,45 mmol) y bis(triferc-butilfosfina)paladio(0) ([53199-31-8], 93,79 mg, 0,18 mmol) en THF seco (10 ml) a temperatura ambiente durante 2 h, a continuación, se agitó a 60 0C durante 48 h. A continuación, la reacción se inactivó con sol. sat. de NH⁴Cl y se evaporó hasta obtenerse una capa acuosa que se extrajo con DCM, se desecó sobre MgSO⁴y se concentró. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/MeOH de 100/0 a 90/10). Las fracciones deseadas se concentraron, produciendo 1-8 (42 mg, 21 %) como un sólido blanco.

Preparación del producto intermedio 9

Una mezcla de 3,5-dicloropmdazin-4-amma ([53180-76-0], 100 mg, 0,61 mmol), trimetilboroxina ([823-96-1], 30,62 mg, 0,24 mmol) y sol. sat. de K²CO³(12,5 ml) en DME (2,5 ml) se desgasificaron con nitrógeno. Se agregó Pd(PPh³)⁴(42,28 mg, 0,037 mmol) y se desgasificó nuevamente la mezcla de reacción. A continuación, la mezcla de reacción se agitó y se calentó en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h a 160 0C en un tubo de presión. El disolvente se evaporó, el residuo se absorbió en agua/DCM y la fase orgánica se separó, se desecó en MgSO⁴y se evaporó nuevamente. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/MeOH (100/0 a 92/8). Las fracciones deseadas se evaporaron, produciendo 1-9 (33 mg, rendimiento 37,69 %) como un sólido blanco.

Preparación del producto intermedio 10

A una suspensión de 2-metil-4-(trifluorometil)anilina ([67169-22-6], 5 g, 28,55 mmol), KBr (1,02 g, 8,55 mmol) y molibdato de hexaamonio ([12027-67-7], 83,06 mg, 0,071 mmol) en HOAc (25,72 ml, 449,66 mmol) a temperatura ambiente (en Easymax™), se agregó perborato de sodio tetrahidratado ([7632-04-4], 1,21 g, 7,84 mmol). Se agregaron KBr adicional (1,02 g, 8,55 mmol), molibdato de hexaamonio (83,06 mg, 0,071 mmol) y tetrahidrato de perborato de sodio (1,21 g, 7,84 mmol) en partes cada 10 min (x3), y después de 1 h, la reacción se trató con una parte final de KBr (1,02 g, 8,55 mmol), molibdato de hexaamonio (83,06 mg, 0,071 mmol) y perborato de sodio tetrahidratado (1,21 g, 7,84 mmol). Después de 1 h, la mezcla se vertió en agua, se neutralizó con bicarbonato de sodio sólido, se extrajo con éter dietílico, se lavó con agua, a continuación salmuera, se desecó sobre sulfato de magnesio y se concentró proporcionando 1-10 (7,1 g, 98 %) como un aceite marrón.

Preparación del producto intermedio I-57

Se disolvió N-bromosuccinimida (3,26 g, 18,3 mmol) en DMF (10 ml) y se agregó gota a gota a una solución de 4,5-difluoro-2-metilanilina [875664-57-6] (2,50 g, 17,5 mmol) en d Mf anhidro (21,3 ml) a 00C. La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se vertió en agua, se extrajo con Et²O, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 70:30), proporcionando I-57 (1,8 g, 46 %) como un sólido marrón.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-57 a partir de los materiales de partida indicados.

Preparación del producto intermedio I-60

Se agregó sulfinato de zinc (1,0 g, 3,00 mmol) a una solución de 3-bromo-4-metilpiridina (300 mg, 1,74 mmol) en una mezcla de CHCl³(9,8 ml) y H²O (3 ml) a 0 °C, y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente. Se agregó hidroperóxido de ferc-butilo (70 % de pureza, 0,72 ml, 5,23 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a 50 0C durante 48 h. Se agregó una cantidad adicional de sulfinato de zinc (1,00 g, 3,00 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante otras 24 h. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se agregó una solución saturada de NaHCO³/EDTA hasta pH = 7. La solución se diluyó con DCM y se lavó con solución de sal disódica EDTA/NaHCO³. La capa acuosa se extrajo con DCM y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM), proporcionando I-60 (165 mg, 34 %, 88 % de pureza) como un sólido blanco.

Preparación del producto intermedio 11

Una mezcla de I-10 (4 g, 15,74 mmol), pinacolester de acido isopreno borónico ([126726-62-3], 2910,43 mg, 17,32 mmol) y Pd(PPh³⁾⁴(1091,67 mg, 0,94 mmol) en sol. sat. de K²CO³(0,5 ml) y DME (64,55 ml) se agitó y calentó bajo atmósfera de nitrógeno durante 90 min a 120 °C en un tubo de presión. A continuación, el disolvente se evaporó, el residuo se absorbió en agua/DCM y la fase organica se separó, se desecó en MgSO⁴y se evaporó nuevamente. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: heptano/EtOAc, gradiente de 100/0 a 50/50). Las fracciones puras se evaporaron, produciendo 1-11 (2,19 g, 65 %) como un aceite marrón.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-11 a partir de los materiales de partida y reactivos indicados.

Preparación del producto intermedio 12

Se hidrogenó una mezcla de I-11 (2,19 g, 10,18 mmol), Pd/C (10 %, 1082,9 mg, 1,02 mmol) en MeOH (266,37 ml) con hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 h. El catalizador se filtró y el filtrado se evaporó, produciendo 1 12 (2,2 g, rendimiento 99,52 %) como un aceite marrón.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-12 a partir de los materiales de partida y reactivos indicados.

Preparación del producto intermedio 13

Una solución de 2,3-piridindiamina (112 g, 1,03 mmol) y 3-bromo-2-butanona (190 g, 1,26 mmol) en EtOH (1,85 l) se sometió a reflujo bajo N²durante 22 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió hasta ta, el sólido se filtró y se lavó con EtOH (200 ml aprox.), se recristalizó a partir de Et²O y se desecó al vacío proporcionando 1-13 (92,3 g, 37 %).

Preparación del producto intermedio 14

A una solución de I-13 (36,3 g, 0,15 mmol) y NaOAc anhidro (5,56 g, 0,07 mmol) en AcOH (100 ml) a 50 0C se agregó Br²(24,21 g, 0,15 mmol) en AcOH (120 ml) durante 1,5 h y la mezcla se agitó durante la noche a 50 0C. A continuación, la mezcla se enfrió hasta ta y se agregó Et²O (1,5 l), el sólido resultante se filtró y se lavó con Et²O. El sólido se agregó a NaOH (3 N, 1,3 l) y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, a continuación la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se dirigieron sobre MgSO⁴, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en columna (sílice; eluyente DCM/MeOH(NH3) 100 a 98/2). El sólido resultante se trituró con DCM proporcionando 1-14 (20 g, 56 %)

Preparación del producto intermedio 15

A una solución de I-14 (1000 mg, 4,165 mmol) en dioxano (10 ml) y solución acuosa de NaHCO³(10 ml), se agregó 4,4,5,5-tetrametil-2-(1-metiletenil)-1,3,2-dioxaborolano ([126726-62-3], 839,86 mg, 4,998 mmol) y Pd(PPh³⁾⁴(481,288 mg, 0,416 mmol), y la reacción se calentó a continuación usando MW a 150 0C durante 10 min. La mezcla de reacción se diluyó usando EtOAc y se lavó con salmuera, la fracción orgánica se desecó sobre MgSO⁴y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM/(NH³en MeOH), gradiente de 100/0 a 97/3), proporcionando 1 -15 (750 mg, rendimiento 89,47 %).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para 1-15 a partir de los materiales de partida y reactivos indicados.

Preparación del producto intermedio 20

A una solución de I-15 (750 mg, 3,726 mmol) en EtOH (20 ml), se agregó Pd/C (10 %, 3965,545 mg, 3,73 mmol), la mezcla de reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró al vacío. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, DCM/(NH³en MeOH), gradiente de 100/0 a 97/3), proporcionando 1-20 (680 mg, 90 %).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para 1-20 a partir de los materiales de partida y reactivos indicados.

Preparación del producto intermedio I-67

Se agitó una mezcla de 3-bromo-5-metilpiridin-4-amina (5,00 g, 27 mmol), éster de pinacol de ácido isopropenilborónico (6,70 g, 40 mmol), Pd(PPh³)⁴(3,20 g, 2,70 mmol), 1,4-dioxano (50 ml) y NaHCO³(acuoso saturado, 50 ml) bajo reflujo durante 16 h. A continuación, la suspensión se enfrió y se diluyó con agua y DCM hasta obtenerse una clara separación de fases. La fase acuosa se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, gradiente de fase móvil: 0-3 % 7 N NH³/MeOH en DCM). El residuo se combinó con otra fracción (1,5 g) y se disolvió en i-PrOH (20 ml). La mezcla se trató con HCl (6 M en i-PrOH, 9 ml, 54 mmol) y se agitó durante el fin de semana. La mezcla se enfrió con hielo y el producto se recogió mediante filtración proporcionando I-67 (4,5 g, 76 %) como un sólido blanco.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-67 a partir del material de partida y el reactivo indicados.

Se enfrió I-67 (1,5 g, 8,12 mmol) a 100C y se agregó H²SO⁴(3,42 ml, 50 % en agua) gota a gota con agitación durante 10 min. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante el fin de semana. Se agregó la mezcla de reacción a una solución helada de NaOH (100 ml) y se agregó K²CO³. La fase acuosa se extrajo con CHG³. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se agitó con Et²O. El sólido resultante se filtró y se desecó a... °C proporcionando I-69 (449 mg, 33 %).

Preparación del producto intermedio I-70

Se cargó un tubo sellado con 5-amino-4,6-dicloropirimidina [5413-85-4] (1,50 g, 9,15 mmol), éster de pinacol del ácido isopropenilborónico (1,72 ml, 9,15 mmol), Pd(PPh³)⁴(1,09 g, 9,24 mmol), 1,4-dioxano (22 ml) y NaHCO³(sat., ac., 22 ml). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 16 h, se enfrió a temperatura ambiente, y se diluyó con agua y DCM hasta obtenerse una clara separación de fases. La fase acuosa se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida proporcionando I-70, que se utilizó como tal en la siguiente etapa.

Preparación del producto intermedio I-71

A una suspensión de I-70 en 1,4-dioxano (16,3 ml), se agregó trimetilboroxina (3,7 ml, 26,5 mmol). Se agregaron Pd(dppf)Cl²(324 mg, 442 gmol) y K²CO³(3,67 g, 26,5 mmol) y la mezcla de reacción se purgó con N². La mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante HPLC de preparación (fase estacionaria: RP Vydac Denali C18-10 |um, 200 g, D.I. 5 cm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³al 0,25 % en agua, MeOH), proporcionando I-71 (612 mg, 49 % en 2 etapas).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-71 a partir de los materiales de partida indicados.

Preparación del producto intermedio I-74

Se disolvió 2,4-dibromo-6-(trifluorometil) piridin-3-amina [1214365-67-9] (900 mg, 2,81 mmol) en una mezcla de 1,4-dioxano (7,2 ml) y agua(0,9 ml). Se agregaron trimetilboroxina (1,13 ml, 8,07 mmol), Pd(ddpf)C^DCM (206 mg, 0,25 mmol) y K²CO³(1,17 g, 8,47 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a 140 °C durante 1 h en un microondas. La mezcla se combinó con otra fracción (0,31 mmol) y se diluyó con agua y EtOAc. Se extrajo la capa acuosa. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se evaporaron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM), proporcionando I-74 (424 mg, 72 %)

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-74 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-76

Se agitó una mezcla de 2,6-dibromo-4-(trifluorometoxi)anilina [88149-49-9] (1,00 g, 2,99 mmol), trimetilboroxina (0,93 ml, 6,55 mmol), Pd(PPh³)⁴(207 mg, 0,18 mmol) y K²CO³(1,24 g, 8,96 mmol) en 1,4-dioxano (1,56 ml) a 130 0C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y DCM. Las capas se separaron y la fase orgánica se desecó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 70:30), proporcionando I-76 (220 mg, 36 %).

Preparación del producto intermedio I-77

Se cargó un tubo sellado con 2-bromo-6-cloro-4-(trifluoromet¡l)an¡l¡na [109919-26-8] (1,00 g, 3,64 mmol), trimetilboroxina (0,61 ml, 4,37 mmol), Pd(PPh³)⁴(0,43 g, 368 pmol), 1,4-dioxano (8,6 ml), K²CO³(1,00 g, 7,29 mmol) y agua (1,32 ml). La mezcla de reacción se agitó a 90 0C durante la noche y a 120 0C durante otras 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, y se diluyó con agua y DCM hasta obtenerse una clara separación de fases. La fase acuosa se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-77 (376 mg, 49 %).

Preparación del producto intermedio I-78

A una solución de I-71 (612 mg, 4,10 mmol) en MeOH (25 ml) se agregó Pd/C (5 %, 175 mg, 0,08 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en una atmósfera de H². La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida proporcionando I-78 (634 mg, 85 %).

Preparación del producto intermedio I-79

Se agregó Pd(dppf)C^CH ²Cl²(85,7 mg, 0,11 mmol) a una mezcla agitada de ácido metilborónico [13061-96-6] (151 mg, 2,52 mmol), I-58 (529 mg, 2,10 mmol) y Na²CO³(667 mg, 6,30 mmol) en 1,4-dioxano (12 ml) y agua (3 ml) en un tubo sellado y bajo atmósfera de N². La mezcla de reacción se agitó a 90 0C durante 16 h y se diluyó con agua. La mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se desecó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-79 como un aceite incoloro.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-79 a partir del material de partida y el reactivo indicados.

Se purgó una mezcla de 4-bromo-2-isopropil-6-metilanilina [773887-07-3] (871 mg, 3,82 mmol), ácido 1 -metil-1 H-pirazol-4-borónico [847818-55-7] (744 mg, 4,58 mmol) y Na²CO³(1,21 g, 11,4 mmol) en 1,4-dioxano (16,3 ml) y agua (68,9 pl) con N²durante 5 min. Se agregó PdCl²(dppf) (156 mg, 0,19 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 100 0C durante 6 h. La mezcla se diluyó con agua y EtOAc.

Se extrajo la fase acuosa. Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 50:50), proporcionando I-81 (855 mg, 97 %).

Preparación del producto intermedio I-82

A una suspensión de 2-bromo-4-fluoro-6-(trifluorometil)anilina [875664-27-0] (1,00 g, 3,88 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se agregaron ácido etilborónico [4433-63-0] (573 mg, 7,75 mmol), Pd(dppf)Cl²(142 mg, 0,19 mmol) y K²CO³(1,61 g, 11,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 120 0C durante 3 h en una atmósfera de N²en un tubo sellado. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 70:30), proporcionando I-82 (0,51 g, 63 %).

Preparación del producto intermedio I-83

Se desgasificó una mezcla de I-57 (650 mg, 2,93 mmol) en THF anhidro (14,6 ml) durante 10 min con N². Se agregó Pd(í-Bu³P⁾²(43,9 mg, 85,9 pmol) seguido de cloruro de metilzinc (2 M en THF, 2,20 ml, 4,40 mmol) con una jeringa mientras que la temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y se diluyó con agua. La mezcla se filtró a través de dicalita y el filtrado se evaporó a presión reducida (quedó agua). Se agregó agua (20 ml) y el residuo se extrajo con DCM. La fase orgánica se desecó (MgSO⁴), se filtró y las sustancias volátiles se evaporaron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 70:30), proporcionando I-83 (430 mg, 93 %).

Síntesis del producto intermedio I-84

Se agregó NaH (60 % de dispersión en aceite mineral, 649 mg, 16,2 mmol) a una suspensión de 2-hidroxi-4-metil-3-nitropiridina [21901-18-8] (1,00 g, 6,49 mmol) en MeCN (70 ml) a 0 0C y en atmósfera de N². La mezcla de reacción se agitó durante 45 min a temperatura ambiente y se agregó ácido 2,2-difluoro-(fluorosulfonil)acético [1717-59-5] (0,89 ml, 8,37 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante la noche. Se agregó NH⁴Cl (sat., ac.) y la mezcla se extrajo con EtOAc (dos veces). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a sequedad. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 50:50), proporcionando I-84 (670 mg, 51 %).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-84 a partir del material de partida indicado.

A una solución de 2-bromo-4-metil-3-nitropiridina [23056-45-3] (4,00 g, 18,4 mmol) en tolueno (200 ml), se agregaron tributil(1-etoxivinil)estaño (10,2 ml, 30,2 mmol) y Pd(PPh³⁾⁴(2,34 g, 2,03 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h a 100 0C. Se agregó una cantidad adicional de tributil(1 -etoxivinil)estaño (3,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante otras 4 h. Se agregó HCl (37 % en H²O, 38,5 ml, 461 mmol) a 0 0C, y la mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se inactivó con KF (ac., 100 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se desecaron (Na²SO⁴), se filtraron y se evaporaron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 70:30), proporcionando I-86 (2,64 g, 72 %)

Preparación del producto intermedio I-87

A una solución de I-86 (1,45 g, 8,05 mmol) en THF (19,2 ml) a 00C, se agregó bromuro de metilmagnesio gota a gota (solución 1,4 M, 7,67 ml, 10,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se agregó una cantidad adicional de bromuro de metilmagnesio (0,5 eq) y la mezcla de reacción se agitó durante otra hora. La reacción se inactivó con NH⁴Cl (sat., ac.) y se extrajo con EtOAc (3 veces). Los extractos orgánicos combinados se desecaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM/MeOH, gradiente de 100:0 a 99:1), proporcionando I-87 (977 mg, 41 %).

Preparación del producto intermedio I-88

A una solución de 4-fluoro-2-nitrotolueno [446-10-6] (1,00 g, 6,45 mmol) en THF (10 ml) a -78 0C, se agregó N-clorosuccinimida (2,58 g, 19,3 mmol) y bis(trimetilsilil)amida de sodio (solución 1 M, 12,9 ml, 12,9 mmol) mientras se mantenía la temperatura interna de la mezcla de reacción por debajo de -75 0C. La mezcla de reacción se agitó a -78 0C durante 30 min y se dividió entre HCl (5 %) y EtOAc. Las capas se separaron y la fase orgánica se desecó (MgSO⁴), se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc), proporcionando I-88 (3,62 g, 59 %).

Preparación del producto intermedio I-89

Se disolvió I-84 (0,81 g, 3,97 mmol) en EtOH (22 ml), THF (7,4 ml) y agua (7,4 ml). Se agregaron hierro (1,77 g, 31,7 mmol) y NH⁴Cl (2,55 g, 47,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó en un tubo sellado a 600C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó en EtOH y se filtró a través de Celite®. El lecho corto de Celite® se lavó con EtOH y el filtrado se concentró a presión reducida a ~2 ml. La solución se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO³(sat., ac.), se desecó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó a presión reducida proporcionando I-89 (685 mg, 79 % de rendimiento, 80 % de pureza).

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-89 a partir de los materiales de partida indicados.

Preparación del producto intermedio I-94

A una solución de 4-bromo-2-cloro-6-metilanilina [30273-42-8] (650 mg, 2,95 mmol) en DMF (20 ml), se agregaron bis(pinacolato)diboro (1,05 g, 4,13 mmol), KOAc (0,87 g, 8,84 mmol) y PdC^(dppf) (216 mg, 0,295 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 100 0C durante 1 h. La mezcla de reacción se vertió en agua y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (dos veces). Las capas orgánicas combinadas se pasaron a través de un tapón de Celite®. El filtrado se lavó con salmuera, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se concentró a presión reducida proporcionando I-94 (780 mg) que se utilizó como tal en la siguiente etapa.

Preparación del producto intermedio I-95

Se agregaron XantPhos (123 mg, 0,21 mmol) y Pd²dba³(66,7 mg, 72,9 pmol) a una mezcla de I-94 y CF³CH²I (0,58 ml, 5,83 mmol) en 1,4-dioxano (32,8 ml) en atmósfera de N². Se agregaron agua (1,45 ml) y Cs²CO³(3,80 g, 11,7 mmol) sucesivamente y la mezcla de reacción se agitó a 80 0C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con 1,4-dioxano y se filtró a través de un lecho corto de Celite®. El filtrado se lavó con agua y salmuera, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOac, gradiente de 100:0 a 0:100), proporcionando I-95 (147 mg, 15 % en 2 etapas).

Preparación del producto intermedio I-96

Se agitó una mezcla de 2-amino-5-fluoro-3-metilbenzoato de metilo [952479-98-0] (3,21 g, 17,5 mmol) y 2,5-hexanodiona [110-13-4] (4,11 ml, 35,0 mmol) en acetona (30 ml) a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en agua fría. La mezcla se diluyó con DCM. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-96 (1,77 g, 39 %).

Preparación del producto intermedio I-97

A una solución de I-96 (1,77 g, 6,77 mmol) en THF (24,4 ml) a 0 0C se agregó bromuro de metilmagnesio gota a gota (solución 1,4 M, 29,0 ml, 40,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se inactivó con NH⁴Cl (sat., ac.) y se extrajo con EtOAc (3 veces). Las capas orgánicas combinadas se desecaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-97.

Preparación del producto intermedio I-98

Se trató una solución de I-97 en EtOH (61,7 ml) y agua (33 ml) con clorhidrato de hidroxilamina (15,6 g, 225 mmol) y KOH (7,104 g, 126,6 mmol) y se calentó a 100 °C durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el residuo se extrajo con EtOAc (dos veces). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se desecaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 50:50), proporcionando I-98 (220 mg, 17 % en 2 etapas).

Preparación del producto intermedio I-99

A una solución de I-92 (233 mg, 1,40 mmol) en THF (17 ml) se agregó platino (5,46 mg, 0,03 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en una atmósfera de H². La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se combinó con otra fracción (1,40 mmol) y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM/MeOH, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-99 (224 mg, 48 %).

Preparación del producto intermedio I-100

Se agitó una mezcla de 1-yodo-2,4-dimetil-3-nitrobenceno [56404-21-8] (1,50 g, 5,41 mmol), 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetato de metilo [680-15-9] (6,24 g, 32,5 mmol), Cul (1,24 g, 6,50 mmol) y DIPEA (0,70 g, 5,41 mmol) en DMF anhidro (13,9 ml) a 80 °C durante 2 h. La mezcla se vertió en agua y la fase acuosa se extrajo con Et²O. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, pentano/Et²O, gradiente de 100:0 a 90:10), proporcionando I-100 (840 mg, 71 %) como un aceite amarillo.

Preparación del producto intermedio I-101

A una solución de I-100 (1,12 g, 5,11 mmol) en MeOH (49,1 ml), se agregó Pd/C (10 %, 5,44 mg, 5,1 gmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h en una atmósfera de H². El catalizador se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 80:20), proporcionando I-101 (810 mg, 84 %) como un aceite incoloro.

Preparación del producto intermedio I-102

1-102

Se agregó pentóxido de fósforo (2,35 g, 16,5 mmol) al ácido metanosulfónico (19,5 ml, 301 mmol) en una atmósfera de N²y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. Se agregaron N-metil-2-(3-nitrofenil)acetamida [19281-10 8] (2,60 g, 13,4 mmol) y paraformaldehído (508 mg, 16,1 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 48 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua. El residuo se disolvió en EtOAc y el pH se ajustó a 8 con NaOH (5 M, ac.). La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 0:100), proporcionando I-102 (302 mg, 11 %) como un sólido blanco.

Preparación del producto intermedio I-103

Se agregó Pd/C (10 % de pureza, 71,7 mg, 67,3 pmol) a una solución de 1,5-dimetil-6-nitro-1H-indazol [78416-45 2] (515 mg, 2,69 mmol) en EtOH (10 ml). La mezcla se purgó con H²y la mezcla de reacción se agitó a 50 0C en una atmósfera de H²durante 16 h. La mezcla se filtró sobre Celite® y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100: 0 a 50:50), proporcionando I-103 (315 mg, 72 %) como un sólido naranja.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-103 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-105

I-103 (310 mg, 1,92 mmol) se disolvió en DCM (15 ml). Se agregó gota a gota una solución de bromo (0,10 ml, 2,02 mmol) en DCM (4 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se diluyó con DCM. La mezcla se lavó con agua, se desecó (MgSO⁴), se filtró y las sustancias volátiles se retiraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 80:20), proporcionando 1 -105 (362 mg, 78 %) como un sólido naranja claro.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para I-105 a partir de los materiales de partida indicados.

Preparación del producto intermedio I-108

1-108

Se agregaron I-105 (362 mg, 1,51 mmol) y ácido metilborónico [13061-96-6] (230 mg, 3,77 mmol) a una solución agitada de Na²CO³(479 mg, 4,52 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y H²O (1 ml). Se agregó Pd(dppf)C^DCM (61,6 mg, 75,4 pmol) y la mezcla de reacción se agitó a 105 0C durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y EtOAc. La capa orgánica se separó, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se concentró a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 80:20), proporcionando I-108 (162 mg, 61 %) como un sólido amarillo claro.

Los siguientes productos intermedios se prepararon de manera análoga a la descrita para el intermedio I-108 a partir de los materiales de partida indicados.

Preparación del producto intermedio 25

Se cargó un reactor EasyMax de 400 ml con una solución de 1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[3,2-c]piridina ([109113-39-5], 12 g, 46,458 mmol) en DCM (315 ml). Se agregó una solución de mCPBA (12,026 g, 69,686 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 min y se inactivó con solución acuosa de sulfito de sodio. La capa acuosa se separó y la capa orgánica se lavó con solución acuosa de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica se aisló, se desecó (MgSO⁴) y se concentró al vacío, proporcionando un sólido de color crema. Este sólido se cristalizó en ACN proporcionando 1-25 (8,3 g, 65 %). El filtrado se concentró, proporcionando un segundo lote de I-25 (3,5 g), que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/7N NH³en MeOH 100/0 a 95/5), proporcionando 1,8 g del compuesto, que se cristalizó en ACN, proporcionando un lote adicional de I-25 (1,39 g, ¹¹%).

Preparación del producto intermedio 26

En un reactor EasyMax, se disolvió 1-25 (9,7 g, 35,363 mmol) en ACN seco (138 ml) y dioxano seco (138 ml) en atm. de N². A esta solución, se agregó oxibromuro de fósforo por partes (32,394 g, 112,995 mmol). La mezcla resultante se agitó a 70 0C durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción, y se agregaron DCM y agua a la mezcla. La capa orgánica se lavó con salmuera, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se concentró al vacío, proporcionando un producto en bruto (36 g) que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: heptano/EtOAc 100/0 a 0/100), proporcionando 1-26 (^{8 , 6}g, 72 %) como un sólido blanco.

Preparación del producto intermedio 27

Se desgasificó una mezcla de I-26 (1 g, 2,966 mmol), 3-amino-2,4-dimetilpiridina (398,5 mg, 3,262 mmol) y CS²CO³(2,126 g, 6,524 mmol) en tBuOH (12 ml) con nitrógeno. Se agregaron Pd(OAc)²(^{6 6 , 6}mg, 0,297 mmol) y Xantphos (171,6 mg, 0,297 mmol), y la mezcla se calentó 1 h a 120 °C. El disolvente se retiró al vacío, y el producto en bruto se diluyó con agua y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron, proporcionando un producto en bruto (1,3 g) que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/7N NH³en MeOH 100/0 a 95/5). El residuo (1 g) se purificó adicionalmente mediante HPLC de preparación (fase estacionaria: XBridge Prep C18 3,5 pm, 4,6 x 100 mm; fase móvil: solución de NH⁴HCO³al ^{0 , 2}% en agua, MeOH), proporcionando 1-27 ^{( 5 6 0}mg, rendimiento del 50 %).

Preparación del producto intermedio 28

Se agitaron 1-27 (1,2 g, 3,171 mmol) y NaOH (1M en H²O, 9,5 ml, 9,512 mmol) en MeOH (19 ml). La mezcla de reacción se agitó a 40 ⁰C. Después de 1 h, la reacción se inactivó con la adición de algunas gotas de HCl 1 M. La mezcla de reacción se evaporó al vacío y se agregó agua al residuo. Se recogió el sólido suspendido, se agregó EtOAc y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (x3). Las capas orgánicas se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron proporcionando un producto en bruto (^{1 , 2}g) que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/7N NH³en MeOH 100/0 a 95/5), proporcionando 1 -28 (245 mg, 32).

Preparación del producto intermedio 29

Se agregó hidruro de sodio (0,071 g, 1,78 mmol) a una solución agitada de 4-bromo-1 H-pirrolo[3,2-c]piridina ([1000342 ^{6 8}-⁶], 350 mg, 1,776 mmol) en DMF (11 ml) durante 1 min. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en nitrógeno. Se agregó bromoacetato de ferc-butilo (0,262 ml, 1,776 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla se diluyó en agua y EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua (x2) y salmuera, a continuación, se separó, se desecó (MgSO⁴), se filtró y los disolventes se evaporaron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice; EtOAc en heptano 0/100 a 30/70). Las fracciones deseadas se recogieron y concentraron al vacío, proporcionando 1-29 (415 mg, 75 %) como un sólido blanco.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para 1-29 a partir del material de partida y el reactivo indicados.

Preparación de los productos intermedios 32A y 32B

Se agregaron Pd²dba³(25,64 mg, 0,028 mmol), XantPhos (40,50 mg, 0,07 mmol) y Cs²CO³(456,15 mg, 1,4 mmol) a una solución agitada de 3,5-dimetilpiridin-4-amina (111,17 mg, 0,91 mmol) y 1-31 (208,00 mg, 0,7 mmol) en DMF (7,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 105 °C durante 24 h, a continuación, se enfrió hasta ta, se filtró a través de tierra de diatomeas y se lavó con EtOAc. El filtrado se dividió entre NaHCO³y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc dos veces. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante fase inversa del 95 % de [NH⁴HCO³25 mM]-5 % de [MeCN: MeOH 1:1] a 0 % de [NH⁴HCO³25 mM]-100 % de [MeCN: MeOH 1:1]. Las fracciones deseadas se recogieron y concentraron al vacío proporcionando I-32a (41 mg, 19 %) e I-32b (17 mg, 7 %) como sólidos amarillos claros.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-32a/b a partir del material de partida y el reactivo indicados.

Producto intermedio 39

Se agregó TFA (0,408 ml, 5,334 mmol) a una solución agitada de I-33 (47 mg, 0,133 mmol) en DCM (1,533 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se concentró al vacío y se desecó a alto vacío proporcionando 1-39 (38,52 mg) como un aceite marrón que se utilizó en la etapa posterior sin purificación adicional.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para 1-39 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio 42

Se agregó LÍOH.H²O (23,43 mg, 0,558 mmol) a una solución de I-34 (200 mg, 0,465 mmol) en THF (3,80 ml) y H²O (0,95 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a ta. La mezcla se concentró al vacío y se desecó a alto vacío proporcionando 1-42 (159,2 mg, 98 %) como un sólido blanco que se utilizó en la etapa de reacción posterior sin purificación adicional.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-42 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-115

Se agregaron acetamida (120 mg, 2,03 mmol) e intermedio I-1 (438 mg, 1,84 mmol) a una mezcla agitada de Pd(OAC⁾²(16,5 mg, 73,7 pmol), XantPhos (95,9 mg, 0,17 mmol) y CS²CO³(^{1 , 2 0}g, 3,69 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (10 ml) en atmósfera de N². La mezcla de reacción se agitó a 90 0C durante 18 h. El residuo se disolvió en EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con agua, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se concentró a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, heptano/EtOAc, gradiente de 100:0 a 0:100), proporcionando I-115 (166 mg, 35 %) como un sólido amarillo.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-115 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-117

Se agregó HCl (1,25 M en MeOH, 2,55 ml) a una solución de I-115 (166 mg, 0,64 mmol) en MeOH (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 72 h a 80 ⁰C. Los disolventes se evaporaron a presión reducida. Se agregó NaHCO³y se extrajo la fase acuosa con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se evaporaron a presión reducida proporcionando I-117.

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-117 a partir del material de partida indicado.

Preparación del producto intermedio I-119

Se agitó una mezcla de I-114 como una sal de TFA (2,00 g, 5,42 mmol), clorhidrato de etilamina (442 mg, 5,42 mmol), HBTU (2,06 g, 5,42 mmol) y DIPEA (5,60 ml, 32,5 mmol) en DCM (80 ml) a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregó NaOH (IN, ac., 5 ml) y la mezcla se agitó durante 5 min. La capa orgánica se separó, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, DCM/MeOH, gradiente de 100:0 a 98:2), proporcionando I-119 (0,74 g, 48 %).

El siguiente producto intermedio se preparó de manera análoga a la descrita para I-119 a partir del material de partida y el reactivo indicados.

Preparación de compuestos finales

Preparación del comp. N .° ¹

Se desgasificó una mezcla de I-1 (2,2 g, 9,26 mmol), 4-metil-2-(1 -metiletil) -3-piridinamina ([1698293-93-4], 1,53 g, 10,18 mmol) y Cs²CO³(6,64 g, 20,37 mmol) en tBuOH (40 ml, 426,32 mmol) con nitrógeno. Se agregaron Pd(OAc)²(207,87 mg, 0,93 mmol) y Xantphos (535,75 mg, 0,93 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 130 °C durante 90 min. El disolvente se evaporó y el residuo se tomó en agua/DCM 5 g de NaHCO³, a continuación, se filtró. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo dos veces con DCM. Las capas orgánicas combinadas se desecaron sobre MgSO⁴y se evaporaron, a continuación, el producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna (sílice de fase normal; eluyente: (MeOH/NH³en MeOH, 7 N) en DCM, de 0/100 a 95/5.

Las fracciones puras se recristalizaron a partir de ACN caliente, proporcionando el Comp. n.° 1 (1098 mg, rendimiento 33,74 %) como un sólido blanco.

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la síntesis del Comp. n .° 1 mediante reacción de los productos intermedios correspondientes y los reactivos indicados.

Preparación del compuesto N.° 85

1-64

Comp. n.° 85

Se desgasificó una mezcla de I-2 (200 mg, 0,71 mmol), I-69 (100 mg, 0,60 mmol) y Cs²CO³(396 mg, 1,21 mmol) en DMF anhidro (1,43 ml) con N². Se agregaron xantphos (46,6 mg, 80,6 pmol) y Pd(OAc)²(36,6 mg, 0,163 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 120 0C durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con DCM y H²O. La fase acuosa se extrajo con DCM, se desecó (MgSO⁴), se filtró y se coevaporó con MIK. La mezcla en bruto se purificó mediante HPLC de preparación (fase estacionaria: RP Vydac Denali C18-10 pm, ^{2 0 0}g, D.I. 5 cm, fase móvil: 0,25 % NH⁴HCO³solución en agua, MeCN), proporcionando el compuesto 85 (37 mg, 17 %).

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la descrita para el compuesto 85 a partir de los productos intermedios y reactivos indicados.

Preparación del compuesto 30

Se disolvió 1-28 (50 mg, 0,21 mmol) en DMF (2 ml). Se agregó NaH (60 % de dispersión en aceite mineral, 9,2 mg, 0,231 mmol) a 0 0C y se agitó a continuación a ta. Cuando se detuvo la evolución del gas, se agregó 2-bromoacetamida (35 mg, 0,252 mmol) a 0 0C. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, y se inactivó con agua y se agregó EtOAc. La capa acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron proporcionando un producto en bruto (65 mg) que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; eluyente: DCM/⁷NNH³MeOH 100/0 a 95/5), proporcionando el Comp. n.° 30 (6,4 mg, 10 %).

El siguiente compuesto se preparó de manera análoga a la descrita para el compuesto 30 a partir del material de partida y los reactivos indicados.

Preparación del compuesto 31

Se agregó clorhidrato de dimetilamina (12,93 mg, 0,16 mmol) a una solución en agitación de I-32a (41 mg, 0,13 mmol), hidrato de HOBt (21,42 mg, 0,16 mmol), dIPEA (0,069 ml, 0,40 mmol), y EDC.HCl (30,39 mg, 0,16 mmol) en DCM (2,04 ml) y DMF (0,5 ml) a ta y la mezcla de reacción se agitó a ta durante 16 h. Se agregaron solución salina saturada de NaHCO³y EtOAc, y se agregó la fase acuosa con EtOAc dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice; MeOH en DCM 0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron proporcionando el Comp. n.° 31 (13 mg, 29 %) como un sólido blanco.

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la síntesis del Comp. n.° 31 mediante la reacción de los productos intermedios correspondientes y los reactivos indicados.

Preparación del compuesto 34

Se agregó solución de dimetilamina (2 M en THF, 0,15 ml, 0,3 mmol) a una solución agitada de I-44 (31,04 mg, 0,1 mmol), T3P® ([68957-94-8], 0,149 ml, 0,25 mmol) y Et³N (0,035 ml, 0,25 mmol) en THF (1 ml) a ta. La mezcla de reacción se agitó a 50 0C durante 3 h. La mezcla se diluyó con sol. sat. de NH⁴Cl y se extrajo con EtOAc.

La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x2). Las capas orgánicas combinadas se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice; MeOH en CH²Cl²0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y concentraron al vacío proporcionando el Comp. n.° 34 (10 mg, 30 %) como un sólido blanco.

Preparación del compuesto 35

Se agregó HBTU (88,74 mg, 0,23 mmol) a una solución agitada de I-42 (63,04 mg, 0,18 mmol) y DIPEA (0,094 ml, 0,54 mmol) en DMF (5,57 ml) a ta. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A continuación, se agregó solución de dimetilamina (2 M en THF, 0,099 ml, 0,198 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El disolvente se evaporó al vacío y el producto en bruto se purificó mediante fase inversa de 72 % de [NH⁴HCO³25 mM]-28 % de [MeCN: MeOH 1:1] a 36 % de [NH⁴HCO³25 mM]-64 % de [MeCN: MeOH 1:1]. Las fracciones deseadas se recogieron y concentraron al vacío y se repurificaron mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice; MeOH en CH²Cl²0/20 a 1/20). Las fracciones deseadas se recogieron y concentraron al vacío proporcionando el Comp. n. ° 35 (13 mg, 19 %) como un sólido blanco.

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la síntesis del Comp. n.° 35 mediante reacción de los productos intermedios correspondientes y los reactivos indicados.

El compuesto 32 también se preparó según este procedimiento a partir de 1-39 y NH2Me ()

Preparación del compuesto 91

Se disolvieron Pd²dba³(8,25 mg, 9,01 pmol), XantPhos (13,0 mg, 22,5 pmol) y Cs²CO³(110 mg, 0,34 mmol) en DMF (2,25 ml) en un tubo sellado mientras burbujeaba N². Se agregaron I-49 (42,0 mg, 0,25 mmol) e I-1 (53,5 mg, 0,23 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 110 0C durante 20 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró a través de Celite® y se lavó con EtOAc. El disolvente se retiró a presión reducida y la mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía en columna de fase inversa (fase móvil: HCOOH (0,1 %) /(MeCN:MeOH, 1:1), gradiente de 95:5 a 63:37), proporcionando el compuesto 91 (42 mg, 50 %) como un sólido blanco.

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la descrita para el Comp. n.° 91 a partir de los productos intermedios y reactivos indicados.

Preparación del compuesto 110

Se agregó Pd²dba³(27,7 mg, 30,2 pmol) a una mezcla de XantPhos (35,0 mg, 60,5 pmol) y CS²CO³(296 mg, 0,91 mmol) en DMF (10 ml) y 1,4-dioxano (10 ml) mientras burbujeaba N². La mezcla se agitó a 40 0C durante 5 min y se agregó 3-bromo-4-metil-2- (trifluorometil)piridina [1448776-80-4] (165 mg, 0,61 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y se agregó I-117 (132 mg, 0,61 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 95 0C durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Los extractos orgánicos combinados se desecaron (MgSO⁴), se filtraron en Celite® y el filtrado se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (fase móvil: NH⁴CO³(25 mM en H²O)/(MeCN/MeOH, 1:1), gradiente de 90:10 a 54:46). El residuo se trituró con Et²O, proporcionando el compuesto 110 (23,3 mg, 10 %) como un sólido blanco.

Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga a la descrita para el compuesto 110 a partir de los materiales de partida y reactivos indicados.

Preparación del compuesto 113

Se agregaron Pd(OAc⁾²(3,78 mg, 16,8 gmol), XantPhos (21,9 mg, 37,9 gmol) y Cs²CO³(274 mg, 0,84 mmol) a una solución agitada de 4-fluoro-2,6-dimetilanilina [392-70-1] (64,4 mg, 0,46 mmol) e I-1 (100 mg, 0,42 mmol) en 1,4-dioxano (1,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 90 0C durante ^{1 2}h en un tubo sellado, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite®. El residuo se lavó con EtOAc. El filtrado se evaporó a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (fase móvil: [NH⁴OAc (65 mM en H²O)/MeCN (90:10)]/[MeCN/MeoH (1:1)], gradiente de 90:10 a 54:46, proporcionando el compuesto 113 (56 mg, 39 %) como un sólido blanco.

Preparación del compuesto 114

A una mezcla del compuesto 85 (203 mg, 0,46 mmol) en DCM (2 ml), se agregó DAST (0,18 ml, 1,38 mmol) a 0 ⁰C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La mezcla se diluyó con NaHCO³y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se desecaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (sílice, fase móvil: DCM/(MeOH/NH³), gradiente de ^{10 0 : 0}a 98:2). Se realizó una segunda purificación a través de CFS de preparación (fase estacionaria: Chiralpak Daicel IC 20 x 250 mm, fase móvil: CO², EtOH /-PrNH al 0,4 %), proporcionando el compuesto 114 (18 mg, 11 %).

Parte analítica

Puntos de fusión

Los valores son valores pico o rangos de fusión, y se obtienen con las incertidumbres experimentales que se asocian comúnmente con este método analítico.

DSC823e o DSC1 STAR (indicado como DSC) y Mettler Toledo MP50:

Para una cantidad de compuestos, se determinaron los puntos de fusión con un sistema STAR DSC1 o DSC823e (Mettler-Toledo). Los puntos de fusión se midieron con un gradiente de temperatura de 10 0C/minuto. La temperatura máxima fue de 300 0C.

Para una cantidad de compuestos, los puntos de fusión se determinaron con un MP50 (Mettler-Toledo). Los puntos de fusión se midieron con un gradiente de temperatura de 10 0C/minuto.

LCMS

Procedimiento general

La medición de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se realizó utilizando una bomba de LC, una matriz de diodos (DAD) o un detector UV y una columna como se especifica en los métodos respectivos. Cuando fue necesario, se incluyeron detectores adicionales (consultar la tabla de métodos a continuación).

El flujo de la columna se llevó al espectrómetro de masas (MS) que se configuró con una fuente de iones de presión atmosférica. Forma parte del conocimiento del experto establecer los parámetros de ajuste (por ejemplo, rango de barrido, tiempo de permanencia...) para obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado. Los compuestos se describen por sus tiempos de retención experimentales (Tr) e iones. Si no se especifica de manera diferente en la tabla de datos, el ion molecular informado corresponde a la [M+H]+ (molécula protonada) y/o [M-H]-(molécula desprotonada). En caso de que el compuesto no fuera directamente ionizable, se especifica el tipo de aducto (es decir, [M+NH⁴E [M+HCOO]-, etc.). Para moléculas con múltiples patrones isotópicos (Br, Cl), el valor indicado es el obtenido para la masa isotópica más baja. Todos los resultados se obtuvieron con las incertidumbres experimentales que se asocian comúnmente con el método utilizado. En lo sucesivo, “SQD” significa detector cuádruple simple, “ MSD” detector selectivo de masas, “Ta” temperatura ambiente, “ BEH” híbrido de etilsiloxano/sílice unido por puente, “ DAD” detector de matriz de diodos, “ HSS” sílice de alta resistencia.

Códigos del método LCMS (flujo expresado en ml/min; temperatura de la columna (T) en 0C; Tiempo de ejecución en minutos)

Tabla 1. Métodos LC-MS (flujo expresado en ml/min; temperatura de la columna (T) en 0C; Tiempo de ejecución en min).

Tabla 2. Datos analíticos - punto de fusión (p.f.) y LCMS: [M+H]+ significa la masa protonada de la base libre del compuesto, [M-H]- significa la masa desprotonada de la base libre del compuesto o el tipo de aducto especificado [M+CH³COO]'). Tr significa tiempo de retención (en min). Para algunos compuestos se determinó la masa exacta

Ejemplos farmacológicos

1) OGA - Ensayo bioquímico

El ensayo se basa en la inhibición de la hidrólisis de fluoresceína mono-p-D-N-acetilglucosamina (FM-GlcNAc) (Mariappa y col. 2015, Biochem J 470:255) por el antígeno 5 expresado por meningioma humano recombinante (MGEA5), también denominado O-GlcNAcasa (OGA). La hidrólisis de FM-GlcNAc (Marker Gene technologies, n .° cat. M1485) da como resultado la formación de p-D-N-glucosaminaacetato y fluoresceína. La fluorescencia de este último se puede medir a una longitud de onda de excitación de 485 nm y una longitud de onda de emisión de 538 nm. Un aumento en la actividad enzimática da lugar a un aumento en la señal de fluorescencia. La enzima OGA de longitud completa se compró de OriGene (n.° cat. TP322411). La enzima se almacenó en Tris.HCl 25 mM, pH 7,3, glicina 100 mM, glicerol al 10 % a -20 0C. Thiamet G y GlcNAcStatin se evaluaron como compuestos de referencia (Yuzwa y col. 2008 Nature Chemical Biology 4:483; Yuzwa y col. 2012 Nature Chemical Biology 8:393). El ensayo se realizó en 200 mM de tampón de citrato/fosfato complementado con 0,005 % de Tween-20. Se disolvieron 35,6 g de Na ² HPO ⁴ ²H ² O (Sigma, n.° C0759) en 1 l de agua, obteniéndose una solución 200 mM. Se disolvieron 19,2 g de ácido cítrico (Merck, n.° 1,06580) en 1 l de agua, obteniéndose una solución 100 mM. El pH de la solución de fosfato de sodio se ajustó con la solución de ácido cítrico a 7,2. El tampón para detener la reacción consiste en un tampón de carbonato 500 mM, pH 11,0. Se disolvieron 734 mg de FM-GlcNAc en 5,48 ml de DMSO, obteniéndose una solución 250 mM y se almacenó a -20 0C. Se utilizó OGA a una concentración de 2 nM y FM-GlcNAc a una concentración final de 100 pM. Las diluciones se prepararon en tampón de ensayo.

Se dispensaron 50 nl de un compuesto disuelto en DMSO en placas de ensayo Black Proxiplate TM 384 Plus (Perkin Elmer, n.° 6008269) y se agregaron posteriormente 3 pl de la mezcla de enzimas fl-OGA. Las placas se preincubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente y, a continuación, se agregaron 2 pl de mezcla de sustrato FM-GlcNAc. Las concentraciones finales de DMSO no excedieron el 1 %.

Las placas se centrifugaron brevemente durante 1 min a 1000 rpm y se incubaron a temperatura ambiente durante 6 h. Para detener la reacción, se agregaron 5 pl de tampón de finalización y las placas se centrifugaron nuevamente 1 min a 1000 rpm. La fluorescencia se cuantificó en Thermo Scientific Fluoroskan Ascent o PerkinElmer EnVision con longitud de onda de excitación 485 nm y longitud de onda de emisión 538 nm.

Para el análisis, se ajusta una curva de mejor ajuste mediante un método de suma mínima de cuadrados. A partir de esto se obtuvo un valor de CI ⁵⁰ y un coeficiente de Hill. Se utilizaron un control alto (sin inhibidor) y un control bajo (concentraciones de saturación del inhibidor estándar) para definir los valores mínimos y máximos.2

2) OGA - Ensayo celular

Se establecieron células HEK293 inducibles para t humana muíante P301L (isoforma 2N4R) en Janssen. Se utilizó Thiamet-G para la validación de la placa (control alto) y como compuesto de referencia (validación del ensayo CE ⁵⁰ de referencia). La inhibición de OGA se evalúa a través de la detección inmunocitoquímica (ICC) de proteínas O-GlcNAciladas mediante el uso de un anticuerpo monoclonal (CTD110.6; Cell Signaling, n.° 9875) detectando restos O-GlcNAcilados como se ha descrito anteriormente (Dorfmueller y col. 2010 Chemistry & biology, 17:1250). La inhibición de OGA dará como resultado un aumento de los niveles de proteína O-GlcNAcilada dando lugar a un aumento de la señal en el experimento. Los núcleos celulares se tiñen con Hoechst, proporcionando un control de calidad del cultivo celular y una estimación aproximada de la toxicidad inmediata de los compuestos, si la hubiera. Las imágenes ICC se obtienen con un microscopio de placa Perkin Elmer Opera Phenix y se cuantifican con el software proporcionado Perkin Elmer Harmony 4.1. Las células se propagaron en DMEM de glucosa alta (Sigma, n.° D5796) siguiendo procedimientos estándar. 2 días antes de que las células de ensayo celular se dividan, se cuenten y se siembren en una placa recubierta con poli-D-lisina (PDL) de 96 pocillos (Greiner, n. ° 655946) a una densidad celular de 12.000 células por cm2 (4.000 células por pocillo) en 100 pl de medio de ensayo (se utiliza medio bajo en glucosa para reducir los niveles basales de GlcNAcilación) (Park y col. 2014 The Journal of biological chemistry 289:13519). En el día de la prueba del compuesto, se retiró el medio de prueba de las placas de ensayo y se rellenó con 90 pl de medio de ensayo nuevo. Se agregaron 10 pl de compuestos a una concentración final de 10 veces a los pocillos. Las placas se centrifugaron poco antes de la incubación en la incubadora celular durante 6 horas. La concentración de DMSO se estableció en 0,2 %. El medio se desecha aplicando vacío. Para la tinción de las células se retiró medio y las células se lavaron una vez con 100 pl de D-PBS (Sigma, n.° D8537). A partir de la siguiente etapa, salvo que se indique lo contrario, el volumen de ensayo indicado fue siempre de 50 pl y la incubación se realizó sin agitación y a temperatura ambiente. Las células se fijaron en 50 pl de una solución de PBS de paraformaldehído al 4 % (PFA, Alpha aesar, n.° 043368) durante 15 minutos a temperatura ambiente. A continuación, la solución de PBS de PFA se descartó y las células se lavaron una vez en tampón Tris 10 mM (LifeTechnologies, n.° 15567-027), NaCl 150 mM (LifeTechnologies, n.° 24740-0110, Triton X al 0,1 % (Alpha aesar, n.° A16046), pH 7,5 (tampón ICC) antes de permeabilizarse en el mismo tampón durante 10 minutos. Las muestras se bloquean posteriormente en ICC que contiene suero de cabra al 5 % (Sigma, n.° G9023) durante 45-60 minutos a temperatura ambiente. Las muestras a continuación se incubaron con anticuerpo primario (1/1000 del proveedor comercial, véase lo anterior) a 4 0C durante la noche y posteriormente se lavaron 3 veces durante 5 minutos en tampón ICC. Las muestras se incubaron con anticuerpo fluorescente secundario (dilución 1/500, Lifetechnologies, n.° A-21042) y los núcleos se tiñeron con Hoechst 33342 a una concentración final de 1 pg/ml en ICC (Lifetechnologies, n.° H3570) durante 1 hora. Antes del análisis, las muestras se lavaron 2 veces manualmente durante 5 minutos en tampón base ICC.

Las imágenes se realizan utilizando Perkin Elmer Phenix Opera utilizando un objetivo de agua x20 y registrando 9 campos por pocillo. La lectura de intensidad a 488 nm se utiliza como una medida del nivel de O-GlcNAcilación de las proteínas totales en los pocillos. Para evaluar la toxicidad potencial de los compuestos se contaron los núcleos utilizando la tinción de Hoechst. Los valores de CI ⁵⁰ se calculan utilizando el ajuste del modelo de regresión paramétrica no lineal. Como inhibición máxima, Thiamet G a una concentración de 200 pM está presente en cada placa. Además, se calcula una respuesta de concentración de Thiamet G en cada placa.

Tabla 3. Resultados en los ensayos bioquímicos y celulares.

Claims

REIVINDICACIONES

Un compuesto de Fórmula (I)

o un tautómero o una forma estereoisomérica del mismo, en donde

R1 es -¡alquil C¹-⁶-C(O)-NRxRy, en donde

Rx y Ry se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C¹-³; o Rx y Ry junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

R2, R³y R⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo y alquilo C¹-³;

R4 es un radical monovalente seleccionado del grupo que consiste en (a), (b), (c), (d), (e) y (f):

en donde

R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquiloxi C^1-3, polihaloalquiloxi C¹-³y cicloalquilo C^3-6;

R3a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -C(O)-alquilo OC^1-3, -C(O)-NR'R", -N(R''')-C(O)-alquilo C^1-3;

R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C¹-³, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquiloxi C^1-3, polihaloalquiloxi C^1-3,

-C(O)- alquilo OC^1-3, -C(O)-NR'R", -N(R'")-C(O)-alquilo C^1-3y Het;

con la condición de que R3a y R4a no sean simultáneamente -C(O)-alquilo OC^1-3,

-C(O)-NR'R", o -N(R"')-C(O)-alquilo C^1-3;

R' y R" se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^1-3; o R' y R" junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo,

piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

R'" se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^1-3;

Het es pirazolilo o imidazolilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes de alquilo C^1-3seleccionados independientemente;

X1 y X2 se seleccionan cada uno independientemente de N y CH, con la condición de que al menos uno ^{de X1} o ^{X2 sea N:}

R1c, R2c, R1d, R1e, R2e y R2f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3, monohaloalquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3y cicloalquilo C^3-6;

X3 representa CH o N;

X4 representa C o N;

y cada uno de los anillos representados por

forma

(i) un heterociclo insaturado de 5 o ⁶miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo C^1-3y oxo; o

(ii) un heterociclo aromático de 5 o ⁶miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, -CN, alquilo C¹-³, monohaloalquilo C^1-3y polihaloalquilo C¹-³;

o una sal de adición farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

El compuesto según la reivindicación ¹, en donde

R¹es alquilo -C¹-³-C(O)-NRxRy, en donde

Rx y Ry se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C¹-³; o Rx y Ry junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

R2, R³y R⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo y alquilo C¹-³;

R⁴es un radical monovalente seleccionado del grupo que consiste en (a), (b), (d) y (f), en donde R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C¹-³, monohaloalquilo C¹-³, polihaloalquilo C¹-³, alquiloxi C¹-³, monohaloalquiloxi C¹-³, polihaloalquiloxi C¹-³y cicloalquilo C³-⁶;

Raa es hidrógeno;

R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C¹-³, monohaloalquilo C¹-³, polihaloalquilo C¹-³, alquiloxi C¹-³, monohaloalquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C¹-³;

X¹y X²se seleccionan cada uno independientemente de N y CH, con la condición de que al menos uno de X¹o X²sea N;

R1d y R2f se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C¹-³;

X³representa CH;

y cada uno de los anillos representados por

forma

(i) un heterociclo insaturado de 5 o ⁶miembros que tiene uno o dos heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo y alquilo C^1-3; o

(ii) un heterociclo aromático de 5 o ⁶miembros que tiene uno, dos o tres heteroátomos, cada uno seleccionado independientemente de nitrógeno y oxígeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de alquilo C^1-3.

El compuesto según la reivindicación 1 o 2, en donde

R1 es -alquilo C^1-3-C(O)-NRxRy, en donde

Rx y Ry se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^1-3; o Rx y Ry junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterociclilo seleccionado del grupo que consiste en azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo;

R2, R3 y RS se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo y alquilo C^1-3;

R4 es un radical monovalente seleccionado del grupo que consiste en (a), (b), (d) y (f), en donde R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C^1-3;

R3a es hidrógeno;

R4a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, -CN, alquilo C^1-3, polihaloalquilo C^1-3, alquiloxi C^1-3y polihaloalquiloxi C^1-3;

X1 y X2 se seleccionan cada uno independientemente de N y CH, con la condición de que al menos uno de X1 o X2 sea N;

R1d y R2f se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C^1-3;

X3 representa CH;

y cada uno de los anillos representados por

forma

(i) un heterociclo insaturado de 5 o ⁶miembros que tiene uno o dos átomos de nitrógeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo y alquilo C¹-³; o

(ii) un heterociclo aromático de 5 o ⁶miembros que tiene uno o dos átomos de nitrógeno, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de alquilo C¹-³.

4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde

R¹es -alquil C¹-³-C(O)-NRxRy, en donde -NRxRy se selecciona del grupo que consiste en -NH², -NHCH³, -NH(CH³)², -N(CH³)(CH²CH³), azetidin-¹-ilo y pirrolidin-¹-ilo.

5. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde

R2, R³y R⁵se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y metilo.

6. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde

R1a, R2a, R1b y R2b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en flúor, cloro, metilo, isopropilo, CF³, -OCH³y -OCF³.

7. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a ⁶, en donde

X¹es N y X²es CH, o X¹es c H y X²es N, o X¹y X²son ambos N.

⁸. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R1d y R2f son cada uno independientemente metilo o isopropilo.

9. El compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto es





o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

10. El compuesto según la reivindicación 9, en donde el compuesto es

o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

^{1 1}. El compuesto según la reivindicación 9, en donde el compuesto es

o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

12. El compuesto según la reivindicación 9, en donde el compuesto es

13. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones ¹a ¹²y un portador farmacéuticamente aceptable. 14. Un proceso para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar un portador farmacéuticamente aceptable con una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones ¹a ¹².

15. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o la composición farmacéutica como se define en la reivindicación ^{1 3}, para usar como un medicamento.

16. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o la composición farmacéutica como se define en la reivindicación ^{1 3}, para usar en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer, parálisis supranuclear progresiva, síndrome de Down, demencia del lóbulo frontotemporal, demencia frontotemporal con parkinsonismo-17, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal, enfermedad argirofílica granulosa, esclerosis lateral amiotrófica o demencia del lóbulo frontotemporal causada por mutaciones de C9ORF72.