ES2928202T3

ES2928202T3 - Compuestos químicos

Info

Publication number: ES2928202T3
Application number: ES21180706T
Authority: ES
Inventors: Christopher Mcguigan
Original assignee: Nucana PLC
Current assignee: Nucana PLC
Priority date: 2003-07-21
Filing date: 2004-07-20
Publication date: 2022-11-16
Anticipated expiration: 2024-07-20
Also published as: WO2005012327A2; CY1121218T1; NO20053993D0; PT2955190T; DK3904365T3; EP3486251A1; PL1646639T3; EP3040340A1; FIC20230013I1; NO20053993L; NZ541974A; EP1646639A2; FR23C1014I2; HUE030374T2; EP3904365A1; HUE042282T2; CY2023008I1; JP2006528162A; HUE059970T2; EP2955190B1

Abstract

Se describen derivados de fosforamidato de nucleótidos y su uso en el tratamiento del cáncer. Los restos básicos de, por ejemplo, cada uno de desoxiuridina, citarabina, gemcitabina y citidina pueden estar sustituidos en la posición 5. El resto de fosforamidato tiene unido al átomo de P un resto de arilo-O y un resto de α-aminoácido. El resto de α-aminoácido puede corresponder o derivar de un aminoácido natural o no natural. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos químicos

La presente invención se relaciona con derivados de nucleótidos adecuados para su uso en el tratamiento de cáncer.

Los análogos de nucleósidos tales como fluorodesoxiuridina (1), citarabina (2) y gemcitabina (3) están bien constituidos como agentes contra el cáncer. Funcionan como inhibidores de síntesis de ADN después de activación con su forma de 5'-fosfato.

Las formas de fosfatos bioactivos libres no representan en general, fármacos útiles debido a su pobre permeación de membrana. En un esfuerzo para evitar esto se ha reportado una serie de métodos de profármaco de fosfato [Rosowsky et al, J. Med. Chem., 1982, 25, 171-8; Hong et al, J. Med. Chem., 1985, 28, 171-8; Kodama et al, Jpn. J. Cancer Res., 1989, 80, 679-85; Hong et al, 1979, 22, 1428-32; Ji et al, J. Med. Chem., 1990, 33, 2264-70; Jones et al, Nucleic Acids Res., 1989, 17, 7195-7201; Houston et al, J. Med. Chem., 1984, 27, 440-4; Lorey et al, Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 1307-10; Farquhar et al, J. Med. Chem., 1983, 26, 1153-8; Shuto et al, Nucleosides Nucleotides, 1992, 11, 437-46; Le Bec et al, Tet. Letts., 1991, 32, 6553-6; Phelps et al, J. Med. Chem., 1980, 23, 1229-32].

El documento US 2003/109697 A1 divulga compuestos de 5'-fosforamidatilo, pirimidina 1,5-sustituida, derivados, análogos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso en métodos para tratar el cáncer, enfermedades infecciosas, un trastorno autoinmune o una afección inflamatoria. El documento WO 01/07454 A también divulga un método para tratar a un sujeto administrándole un profármaco.

En general, los profármacos de fosfato tienen propiedades biológicas y actividades terapéuticas que son similares a, o algo menores que, el análogo de nucleósido progenitor.

Se ha llevado a cabo un extenso trabajo en esta área desde una perspectiva antiviral, en gran medida sobre nucleósidos didesoxi, y han informado de un método de fosforamidato que se ha adoptado ampliamente para el suministro de fosfatos bio-activos de nucleósidos antivirales.

Un ejemplo es el fosforamidato (4) derivado de anti-VIH d4T (5).

Se observó el efecto de variaciones en regiones de éster [McGuigan et al, AVCC, 1998, 9, 473-9], aminoácido [McGuigan et al, Antiviral Res, 1997, 35, 195-204.; AVCC, 2000, 11, 111-6], y arilo [Siddiqui et al, J. Med. Chem., 1999, 42, 393-9] del fosforamidato, así como el efecto de la estereoquímica de aminoácidos [McGuigan et al, AVCC, 1996, 7, 184-8], estereoquímica de fosfato [Allender et al, Analytica Chim . Acta, 2001, 435, 107-13] y nucleósido [Balzarini et al, BBRC, 1996, 225, 363-9; McGuigan et al, Bioorg. Med, Chem. Lett, 1996, 6, 2369-62.; McGuigan et al, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 645-7].

Este trabajo ha dado lugar a la descripción óptima de fosforamidato de fenil metoxialaninilo como la pro-unidad estructural prototipo para el suministro intracelular de nucleótidos bioactivos [Balzarini et al, PNAS, 1996, 93, 7295-9; McGuigan et al, J. Med. Chem., 1996, 39, 1748-1753].

Lackey et al [Biochem Pharmacol., 2001,61, 179-89] han reportado la aplicación de nuestro método de profármaco de fosforamidato para nucleósidos antivirales para el agente anti-herpético bromovinil-2’- desoxiuridina (BVDU) (6). En particular, han encontrado que el fosforamidato de fenil metoxialaninilo (7) tiene una actividad significativa contra el cáncer. Esto está en marcado contraste con el nucleósido (antiviral) progenitor (6).

Limited SAR ha sido presentada por este grupo, aunque en sus solicitudes de patentes [WO0239952, EP1200455, CA2317505, US6339151, EP116797, AU2451601] reivindican una serie de variaciones generales en la base, y las regiones de fosfato. Sin embargo, en base a nuestra técnica anterior, el fosforamidato fenil metoxialaninilo (7) se anticiparía que sea entre las más óptimas de las estructuras.

Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que otros derivados de análogos de nucleósidos de fosforamidato oxiamino ácido son significativamente más potentes en el tratamiento de cáncer que el fosforamidato de fenil metoxialaninilo (7).

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención se proporciona un compuesto de la fórmula I;

en el que:

R se selecciona del grupo metilo (-CH³), etilo (-C²H⁵), n- e i-propilo (-C³H⁷), n- e i-butilo (-C⁴H⁹) y bencilo (-CH²C⁶H⁵); uno de R’ y R" es H y uno de R’ y R" es metilo;

Q es -O-;

X se selecciona independientemente del grupo F, Br y metilo (-CH³);

Y es F;

Ar se selecciona del grupo -C⁶H⁵, PCF³C⁶H⁴-, PFC⁶H⁴-, PNO²C⁶H⁴-, pClC⁶H⁴- and oClC⁶H⁴-;

Z se selecciona del grupo H, alquilo C^1_6acíclico y halógeno; y

n es 0 o 1,

en el que cuando n es 0, Z’ es -NH²y existe un doble enlace entre la posición 3 y la posición 4, y

cuando n es 1, Z’ es =O;

o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I

La referencia en la presente especificación a un grupo alquilo significa un radical hidrocarbilo ramificado o no saturado, cíclico.

Los grupos alquilo pueden estar sustituidos o no sustituidos. Donde se sustituye, habrá

generalmente de uno a tres sustituyentes presentes, preferiblemente un sustituyente. Los sustituyentes pueden incluir átomos de halógeno, es decir, átomos de F, Cl, Br e I, y grupos halometilo tales como CF³y CCh; grupos que contienen oxígeno tales como oxo, hidroxi, carboxi, carhoxialquilo C¹-¹⁶, alcoxi, alcoílo, alcoiloxi, ariloxi, ariloílo y ariloxi; grupos que contienen nitrógeno tales como amino, alquilamino C¹-⁶, dialquilamino C¹-⁶, ciano, azida y nitro; grupos que contienen azufre tales como tiol, alquiltiol C¹-⁶, sulfonilo y sulfóxido; grupos heterocíclicos que pueden estar ellos mismos sustituidos; grupos alquilo como se definen anteriormente, que pueden estar ellos mismos sustituidos; y grupos arilo como se definen anteriormente, que pueden estar sustituidos, tales como fenilo y fenilo sustituido. Los sustituyentes en dichos grupos heterocíclicos, alquilo y arilo son como se definen inmediatamente más arriba.

Preferiblemente, R no está sustituido. Lo más preferiblemente, R es bencilo, especialmente cuando Ar es fenilo no sustituido, n es 0 y cada uno de X e Y es F.

Cuando R' y R" son diferentes, el átomo de C al que están unidos es quiral. Los presentes compuestos pueden ser L o D o una mezcla de estereoisómeros. Preferiblemente son L.

Cuando Z es H, n es 0 y X y Y son cada uno F, la unidad estructural base del compuesto de la fórmula I corresponde a aquel de Gemcitabina es decir el compuesto (3) anterior.

Se prefieren los compuestos de la fórmula I en los que n es 0 y X y Y son F. Particularmente se prefieren los compuestos de la fórmula I en los que n es 0, X y Y son F, y Z es H, que corresponden a gemcitabina.

En una realización preferida alternativa, X se selecciona independientemente de F y metilo.

Por lo tanto, los compuestos que incorporan la presente invención y que tienen variaciones en una o más de la región de éster (R), aminoácido (R', R") y arilo (Ar) de la estructura de fosforamidato en comparación con fosforamidato de fenil metoxialaninilo pueden dar aumentos de potencia sorprendentes y sustanciales de pro-tides derivados de BVDU contra una variedad de tipos de células cancerosas.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene la fórmula I de la presente invención en combinación con un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La presente invención es particularmente aplicable para el tratamiento de un paciente que tiene cáncer de mama, cáncer de colon o cáncer de próstata. Ejemplos de dichos cánceres incluyen mama MDA MB231, colon HT115 y próstata PC-3.

El compuesto que tiene la fórmula I o composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se puede administrar a un paciente, que puede ser humano o animal, mediante cualquier medio adecuado.

Los medicamentos empleados en la presente invención se pueden administrar por ruta oral o parenteral, que incluyen intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, transdérmica, vías respiratorias (aerosol), rectal, vaginal y tópica (que incluyen bucal y sublingual).

Para la administración oral, los compuestos de la invención generalmente se proporcionarán en forma de comprimidos o cápsulas, como un polvo o gránulos, o como una solución o suspensión acuosa.

Los comprimidos para uso oral pueden incluir el ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como diluyentes inertes, agentes disgregantes, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y conservantes. Los diluyentes inertes adecuados incluyen carbonato de sodio y calcio, fosfato de sodio y calcio, y lactosa, mientras que el almidón de maíz y ácido algínico son agentes disgregantes adecuados. Los agentes aglutinantes pueden incluir almidón y gelatina, mientras que el agente lubricante, si está presente, será generalmente estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Si se desea, los comprimidos se pueden recubrir con un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, para retardar la absorción en el tracto gastrointestinal.

Las cápsulas para uso oral incluyen cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido, y cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un aceite tal como aceite de maní, parafina líquida o aceite de oliva.

Las formulaciones para administración rectal pueden estar presentes como un supositorio con una base adecuada que comprende por ejemplo manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverización que contienen además del ingrediente activo dichos portadores que se conocen en la técnica por ser apropiados.

Para uso intramuscular, intraperitoneal, subcutáneo e intravenoso, los compuestos de la invención generalmente se proporcionarán en soluciones o suspensiones acuosas estériles, reguladas a un pH e isotonicidad apropiados. Los vehículos acuosos adecuados incluyen solución de Ringer y cloruro de sodio isotónico. Las suspensiones acuosas de acuerdo con la invención pueden incluir agentes de suspensión tales como derivados de celulosa, alginato de sodio, povidona y goma de tragacanto, y un agente humectante tal como lecitina. Los conservantes adecuados para suspensiones acuosas incluyen p-hidroxibenzoato de etilo y n-propilo.

Los compuestos de la invención también se pueden presentar como formulaciones de liposomas.

En general, una dosis adecuada estará en el intervalo de 0.1 a 300 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día. Una dosis inferior preferido es de 0.5 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, una dosis inferior más preferida es de 6 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, una dosis baja aún más preferida es de 10 mg por kilogramo de peso corporal por receptor por día. Una dosis adecuada está preferiblemente en el rango de 6 a 150 mg por kilogramo de peso corporal por día, y más preferiblemente en el rango de 15 a 100 mg por kilogramo de peso corporal por día. La dosis deseada se presenta preferiblemente como dos, tres, cuatro, cinco o seis o más subdosis administradas en intervalos apropiados durante todo el día. Estas subdosis se pueden administrar en formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contiene de 10 a 1500 mg, preferiblemente de 20 a 1000 mg, y aún más preferiblemente de 50 a 700 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.

Ahora se describirán las realizaciones de la presente invención, solo por vía de ejemplo, con referencia a los siguientes ejemplos, procedimientos experimentales y datos experimentales.

Los datos se presentan para un rango de estructuras contra tipos de células tumorales que representan un rango de cánceres comunes en el hombre con la necesidad clínica no satisfecha: MDA MB231 de mama, HT115 de colon, PC-3 de próstata. Los datos de estos ensayos se presentan como la Tabla I.

Procedimiento experimental

Métodos generales

Los siguientes solventes anhidros y reactivos se compraron de Aldrich con tapón seguro: diclorometano (DCM), éter de dietilo (Et²O), tetranhidrofurano THF), N-metilimidazol (NMI), metanol (MeOH), dimetilformamida (DMF), 1,4-dioxano, trietilamina se seca sobre tamices moleculares de 4 Angstrom.

Cromatografía de Capa Delgada

La cromatografía de Capa Delgada (TLC) se realiza sobre placas Kieselgel 60 F²⁵⁴comercialmente disponibles de Merck y se visualizan los componentes separados utilizando luz ultravioleta (254 nm y 366 nm).

Cromatografía de columna

Se realiza cromatografía de columna utilizando (Kieselgel 60, 35-70 pm, Fluka) como la fase estacionaria. Las muestras se aplican como una solución concentrada en el mismo eluyente, o se adsorbe previamente sobre gel de sílice.

Espectroscopia de RMN

Se registran RMN 1H, 13C y 31P sobre un espectrómetro Bruker Avance DPX300 con frecuencias de operación de 300 MHz, 75 MHz y 121 MHz respectivamente. Los espectros de RMN de 31P se indican en unidades de 8 relacionadas con ácido fosfórico al 85% como estándar externo, los cambios positivos son campo abajo. Se utilizan las siguientes abreviaturas en la asignación de señales de RMN: s (singulete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), m (multiplete), bs (señal amplia), dd (doblete de doblete), dt (doblete de triplete). Las señales de estrella se dividen debido a mezclas estereoisoméricas.

Procedimientos estándar

Para propósitos prácticos, se proporcionan procedimientos estándar cuando sea aplicable.

Procedimiento estándar 1: Síntesis de Sales de clorhidrato de ésteres de amino.

A una solución de agitación de alcohol anhidro (10 mol eq.) se agrega cloruro de tionilo (2 mol eq.) a 0° C, y la solución resultante agitada durante 1 hr. Después de calentar a temperatura ambiente, se agrega el aminoácido apropiado (1 mol eq) y la reacción se calienta a reflujo durante 6-16 hrs. La eliminación de solvente y recristalización a partir de metanol/éter proporcionan las sales de clorhidrato de ésteres de amino.

Procedimiento estándar 2: Síntesis de Sales de clorhidrato de éster de amino bencilo.

El aminoácido apropiado (1.0 mol eq.), ácido p-tolueno sulfónico (1.0 mol eq.) y alcohol bencílico anhidro (4.1 mol eq.) se calientan a reflujo en tolueno (10 mol eq.) con trampa Dean-Stark durante 24 hrs. En enfriamiento a temperatura ambiente, se agrega Et²O y la mezcla se deja en baño de hielo durante 1hr luego se filtra y se lava con Et²O. El sólido se disuelve en DCM y se lava con 10% de K²CO³y agua. La capa orgánica se seca sobre MgSO⁴, se filtra y el solvente se elimina bajo presión reducida para dar un aceite. Este se solubiliza en acetona y se neutraliza con HCl 1 M. Et²O se agrega y el sólido se filtra y se lava con Et²O para dar un sólido blanco.

Procedimiento estándar 3: Síntesis de Especies de fosforodiclorurato.

Oxicloruro de fósforo (1.0 mol eq.) y el fenol sustituido apropiado (1.0 mol) se agitan con dietiléter anhidro (31 mol eq.). A este se agrega trietilamina anhidra (1.0 mol eq) a -80° C y se deja elevar a temperatura ambiente durante 16 hrs. la sal de clorhidrato de trietilamina se filtra, y el filtrado se reduce hasta secado para dar el producto crudo como un líquido transparente.

Procedimiento estándar 4: Síntesis de Especie de fosforodicloridato.

Fosfodiclorurato (1.0 mol eq.) y la sal de clorhidrato de éster de amino apropiado (1.0 mol eq.) se suspenden en DCM anhidro. Se agrega en forma de gotas trietilamina anhidra a -80° C y después de 1 hr la reacción se deja elevar a temperatura ambiente. La formación de fosfoclorurato se monitoriza por RMN 31P. Después de 2-5 hrs el solvente se elimina bajo presión reducida y el sólido obtenido se lava con éter anhidro (2x20 ml), se filtra, y el filtrado se reduce hasta secado para dar los productos como aceite crudo. Estos aceites usualmente se utilizan sin purificación adicional.

Procedimiento estándar 5: Síntesis de Derivados de fosforoamidato.

A una solución de agitación de (E)-5-(2-bromovinil)-2'-desoxiuridina (1.0 mol eq.) y el fosfoclorurato apropiado (2.0 3.0 mol eq) en THF anhidro a -80° C se agrega en forma de gotas durante 1 min NMI (5.0 mol eq.). Después de 15 mins la reacción se deja elevar a temperatura ambiente y se agita a temperatura ambiente durante 2-19 hrs. El solvente se elimina bajo presión reducida y el aceite amarillo obtenido se disuelve en DCM, se lava con HCl 0.5 M, y agua. La capa orgánica se seca sobre MgSO⁴, se filtra, se reduce hasta secado y se purifica mediante cromatografía flash (Cloroformo/Metanol 97/3, Diclorometano/Metanol 97/3).

Síntesis de Gemcitabina-[fenil-(benzoxi-L-alaninil)]-fosfato. C²⁵⁵H²⁷F²N⁴O⁸P, PM =580.47 (CPF 31).

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 5, utilizando Gemcitabina (131 mg, 0.5 mmol), Fenil-(benzoxi- L-alaninil)-fosforoclorurato (529 mg, 1.5 mmol), NMI (4.42 mmol, 300 pL) en THF/piridina (4/2 mL) durante 2 hrs. El producto crudo se purifica mediante cromatografía de columna, se eluye con CH²Ch/Metanol 95:5 para dar el producto puro como un sólido espumoso blanco (46 mg, rendimiento 16%).

RMN 31P (MeOD, 121 MHz): ⁸5.05, 4.94.

RMN 1H (MeOD, 300 MHz): ⁸7.6-7.5 (1H, 2d, ³J=7Hz H-⁶), 7.4-7.2 (10H. m, OPh+CH²Ph), 6.25 (1H, m, H-1'), 5.95 (1H, 2d, ³J=7Hz, H-5), 5.19 (1H, 2s, CH²Ph), 4.55-4.1(3H, m, H-3', H-4', CHala), 4.05 (2H, m, H-5'), 1.20 (3H, 2t, ³J^{= 6}Hz, CH³ala). RMN 13C (MeOD, 75 MHz): ⁸20.8, 20.7 (CH³ala), 52.2, 52.0 (CHala), 66.1 (C-5'), 68.4 (CH²Ph), 71.9, 71.3 (C-3'), 80.6 (C-4'), 85.9 (C-1'), 97.1 (C-5), 121.8, 121.6 ('o', OPh), 123 (C-2'), 126.2 ('p', OPh), 131.8, 130.0, 129.7 ('m' OPh, Bn), 137.9('ipso', CH²Ph), 142.7, 142.6 (C-⁶), 152.5, 152.4 ('ipso', OPh), 158.2 (C-2), 168.0 (C-4), 175.3, 174.9 (COOBn).

Síntesis de Gemcitabina-[para-clorofenil-(benzoxi-L-alaninil)]-fosfato. C²⁵H²⁶C F ²N⁴O⁸P, PM =614.92 (CPF 40).

Esta se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 5, utilizando gemcitabina (131 mg, 0.5 mmol), paraclorofenil-(benzoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato (582 mg, 1.5 mmol), NMI (4.42 mmol, 300 j L) en THF/piridina (4/2 mL) durante 2 hrs. El producto crudo se purifica mediante cromatografía de columna, se eluye con CH²Ch/Metanol 95:5 para dar el producto puro como un sólido espumoso blanco (76 mg, rendimiento 25%).

RMN 31P (MeOD, 121 MHz): 85.08.

RMN 1H (MeOD, 300 MHz): 87.65 (1H, 2d, 3J=7Hz H-6), 7.5-7.2 (9H. m, OPh+CH²Ph), 6.2 (1H, m, H-1'), 5.9 (1H, 2d, 3J=7Hz, H-5), 5.12 (1H, 2s, CH²Ph), 4.6-4.1 (3H, m, H-3', H-4', CHala), 4.05 (2H, m, H-5'), 1.45-1.35 (3H, 2t, 3J=6 Hz, CHaala).

RMN 13C (MeOD, 75 MHz): 820.9, 20.7 (CHaala), 52.2, 52.0 (CHala), 66.4, 66.2 (C-5'), 68.5 (CH²Ph), 71.5 (C-3'), 80.7 (C-4'), 86.4 (C-1'), 97.2 (C-5), 123.5 ('o', OPh), 126.9 (C-2'), 131.2, 130.6, 130.3 ('m' OPh, Bn), 131.9 ('p', OPh) 137.5 ('ipso', CH²Ph), 142.8, 142.7 (C-6), 151.4, 151.0 ('ipso', OPh), 158.2 (C-2), 166.9 (C-4), 175.1, 174.9 (COOBn). Síntesis de Fenil-(metoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹oH¹aClNO⁴P, PM =277.64.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de metil L-alanina (2 g, 14.3 mmol), fenildiclorofosfato (3.02 g, 2.14 ml, 14.3 mmol), y TEA (2.9 g, 4.0 ml, 28.7 mmol) en DCM (60 mL), para proporcionar 3.91 g (98%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 89.28, 8.97.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 87.39-7.34 (2H, m,'o' OPh), 7.29-7.20 (2H, m,'m+p' OPh), 4.98 (1H, bs, NH), 4.27-4.09 (1H, m, CHala), 3.78 (3H, s, O C ^), 1.52-1.49 (3H, 2xd, 3J=7Hz, C ^ala).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 820.9 (C ^a la), 51.0 (CHala), 53.6 (O C ^), 120.9 ('o' OPh), 126.4 ('p', OPh), 130.2 ('m', OPh), 150.1 ('ipso', OPh), 173.6(COOCH3).

Síntesis de Fenil-(etoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. CnH ¹⁵ClNO⁴P, PM =291.67.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de etil L-alanina (770 mg, 5.01 mmol), fenildiclorofosfato (1.12g, 5.01 mmol, 749 j L), y TEA (1.4 mL, 10.02 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 7:3) proporcionando 1.02 (69%) de aceite.

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 89.49, 9.07.

RMN 1H (CDCl³; 300 MHz): 8 7.39-7.34 (2H, m,'o' OPh), 7.29-7.20 (2H, m, 'm+p' OPh), 4.95 (1H, bs, NH), 4.3-4.1 (3H, m, OCH²CH³, CHala), 1.50 (3H, 2xd, 3J=7Hz, CHaala), 1.30 (3H, t, 3J=7.1 Hz, OCH²CH³).

RMN 13C (CDCla; 75 MHz): 814.5 (CH³CH²), 20.9 (CHaala), 51.0 (CHala), 62.6 CH³CH²), 120.9 ('o' OPh), 126.5 ('p', OPh), 130.1 ('m', OPh), 150.1 ('ipso', OPh), 175.1 (COOCH²CH³).

Síntesis de Fenil-(benzoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁶H¹⁷ClNO⁴P, PM = 353.74.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de bencil L-alanina (1.0 g, 4.64 mmol), fenil-diclorofosfato (980 mg, 0.69 ml, 4.64 mmol), y TEA (0.94 g, 1290 ^jL, 9.27 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 6:4) proporcionando 1.61 (98%) de aceite.

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 89.41, 9.23.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 87.41-7.21 (10H, m, OPh+CH²Ph), 5.24 (2H, s, CH²Ph), 4.95-4.88 (1H, bs, NH), 4.36 4.15 (1H, m, CHala), 1.52-1.49 (3H, 2xd, J=7Hz, CH³ala). RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 820.8 (CH³ala), 51.1 (CHala), 68.0 (CH²Ph), 121.0 ('o' OPh), 126.4 ('p', OPh), 130.3, 129,0, 128.7 ('m' OPh, CH²Ph), 135.5 ('ipso', CH²Ph), 150.2 ('ipso', OPh), 172.9 (COOCH²Ph).

Síntesis de p-nitrofenil-(metoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁰H¹²CIN²O⁶P, PM =322.64.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de metil L-alanina (0.70 g, 5.01 mmol), p-nitrofenildiclorofosfato (1.362 g, 5.01 mmol), y TEA (1.4 ml, 10 mmol) en DCM (40 mL), para proporcionar 1.60 g (99%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 89.13, 9.03.

RMN 1H (CDCI³; 300 MHz): 58.1 (2H, 2d, 3J=8Hz, OPh), 7.3 (2H, 2d, 3J=8Hz, OPh), 5.0 (1H, bs, NH), 4.1 (1H, m, CHala), 3.75 (3H, s, OCH³), 1.5-1.45 (3H, m, CH³ala). RMN 13C (CDCI³; 75 MHz): 520.8, 20.7 (CH³ala), 51.1, 50.9 (CHala), 53.2, 53.2 (OCH³), 121.8, 121.6 ('o' OPh), 126.5 ('m', OPh), 145.7 (‘ipso’, OPh), 154.7, 154.6 ('p', OPh), 173.4, 173.2 (COOCH³).

Síntesis de p-nitrofenil-(etoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹¹H¹⁴CIN²O⁶P, PM =336.67.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de etil L-alanina (770 mg, 5.01 mmol), p-nitrofenildiclorofosfato (1.362g, 5.01 mmol), y TEA (1.4 mL, 10.02 mmol) en DCM (40 mL), para proporcionar 1.64 g (98%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCla, 121 MHz): 59.06, 8.81.

RMN 1H (CDCla; 300 MHz): 58.1 (2H, m, OPh), 7.4 (2H, m, OPh), 4.9-4.7 (1H, bs, NH), 4.3-4.1 (3H, m, OCH²CH³, CHala), 1.55-1.45 (3H, 2xd, 3J=7Hz, CH³ala), 1.40 (3H, t, 3J=7Hz, OCH²CH³).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 5 14.5 (CH³CH²), 21.1, 20.9 (CH³ala), 51.2, 51.0 (CHala), 62.6_CH3CH2), 121.7, 121.3 (‘o' OPh), 126.2, 126.0 (‘m', OPh), 145.7 (‘ipso', OPh), 154.5 (‘p', OPh), 173.4, 173.3 (COOCH²CH³).

Síntesis de p-nitrofenil-(benzoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁶H¹⁶ClN²O⁶P, PM = 398.04.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de bencil L-alanina (1.08 g, 5.01 mmol), para-nitrofenil-dicloro fosfato (1.362 g, 5.01 mmol), y TEA (1.4 mL, 1.4 mmol) en DCM (40 mL), para proporcionar 1.85 g (93%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCl³, 121 MHz): 59.15, 9.06.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 58.15 (2H, m, OPh), 7.45 (2H,m,OPh), 7.35-7.25 (5H, m, CH²Ph), 5.2 (2H, 2s, CH²Ph), 5.00 (1H, bs, NH), 4.2 (1H, m, CHala), 1.64 (3H, 2xd, 3J=7Hz, CH³ala).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 5 20.8 (CH³ala), 51.1 (CHala), 68.0 (CH²Ph), 121.4 (‘o' OPh), 126.1 (‘m'OPh), 130.3, 129.0 (CH²Ph), 145.7 (‘ipso', CH²Ph), 150.2 (‘ipso', OPh), 154.6 (‘p', OPh), 172.9 (COOCH²Ph).

Síntesis de p-fluorofenil-(metoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹qH¹²CIFNO⁴P, PM =295.63.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de metil L-alanina (0.70 g, 5.01 mmol), p-fluorofenildiclorofosfato (1.210 g, 5.01 mmol), y TEA (1.4 ml, 10 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 7:3) proporcionando 1.11 g (75%) de aceite. RMN 31P (CDCla, 121 MHz): 89.98, 9.96.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 87.1 (2H, m, OPh), 6.95 (2H, m, OPh), 5.0 (1H, bs, NH), 4.25-4.1 (1H, m, CHala), 3.78 (3H, 2s, OCH³), 1.55 (3H, m, CH³ala).

RMN 13C (CDCla; 75 MHz): 820.8 (CH3ala), 51.1, 50.9 (CHala), 53.3 (OCH³), 117.1, 117.0 ('o' OPh), 122.6, 122.5 ('m', OPh), 146.0 ('ipso', OPh), 159.1, 159.0 ('p', OPh), 173.4, 173.2 (COOCH³).

Síntesis de p-fluorofenil-(etoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹¹H¹⁴CFNO⁴P, PM =309.66.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de etil L-alanina (770 mg, 5.01 mmol), p-fluorofenildiclorofosfato (1.210g, 5.01 mmol), y TEA (1.4 mL, 10.02 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 7:3) proporcionando 1.07 (69%) de aceite.

RMN 31P (CDCls, 121 MHz): 810.04, 9.95.

RMN 1H (CDCls; 300 MHz): 8 7.1 (2H, m, OPh), 6.95 (2H, m, OPh), 5.0 (1H, bs, NH), 4.25-4.1 (3H, m, OCH²CH³, CHala), 1.55 (3H, m, CH3ala), 1.40 (3H, t, 3J=7Hz, OCH²CH³).

RMN 13C (CDCls; 75 MHz): 8 14.5 (CH³CH²), 21.1, 21.0 (CH3ala), 51.2, 51.1 (CHala), 62.6_CH3CH2), 117.3 ('o' OPh), 122.2, 122.0 ('m', OPh), 145.9, 145.8 ('ipso', OPh), 159.0 ('p', OPh), 173.6, 173.5 (COOCH²CH³).

Síntesis de p-fluorofenil-(benzoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁶H¹⁶CFNO⁴P, PM = 371.73.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de bencil L-alanina (1.08 g, 5.01 mmol), para-fluorofenil-dicloro fosfato (1.210 mg, 5.01 mmol), y TEA (1.4 mL, 1.4 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 7:3) proporcionando 1.599 (86%) de aceite.

RMN 31P (CDCls, 121 MHz): 89.15, 9.06.

RMN 1H (CDCls; 300 MHz): 87.35-7.25 (5H, m, CH²Ph), 7.1 (2H, m, OPh), 6.95 (2H,m, OPh), 5.2 (2H, 2s, CH²Ph), 5.00 (1H, bs, NH), 4.25-4.1 (1H, m, CHala), 1.55 (3H, m, CH3ala).

RMN 13C (CDCls; 75 MHz): 8 20.8 (CH3ala), 51.1, 51.0 (CHala), 68.1 (CH²Ph), 117.0, 116.9 ('o' OPh), 122.6 ('m'OPh), 130.3, 129.0 (CH²Ph), 135.7 ('ipso', CH²Ph), 146.1, 146.0('ipso', OPh), 158.9 ('p', OPh), 173.1 (COOCH2Ph).

Síntesis de 4-(trifluorometil)-fenil-(metoxi-L-alaninil)-fosforocloridato. C¹¹H¹²ClF³NO⁴P, PM =345.64.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de metil L-alanina (1.0 g, 7.16 mmol), 4-(trifluorometil)-fenil-fosfodidorurato (1.998 g, 7.16 mmol), y TEA (1.449 g, 14.32 mmol, 1916 |jl ) en DCM (30 mL), para proporcionar 2.202 g (89.0%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCla, 121 MHz): ⁸9.36, 9.22.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): ⁸7.66 (2H, d, 3J=8.1 Hz, OPh), 7.44-7.33 (2H, m, OPh), 5.10 (1H, bs, NH), 3.81-3.78 (3H, 2s, CH³O), 3.77-3.68 (1H, m, CH³CH), 1.56-1.52 (3H, m, CHCH³).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): ⁸20.6, 20.7 (CH³CH), 50.9, 51.1 (CHCH³), 53.2 (CH³O), 121.4 ('o', OPh), 124.1 (CF³, J=270 Hz), 128.0 ('m', OPh), 128.6 ('p', J=34 Hz), 152.4, 152.6 ('ipso', OPh), 173.4, 173.5 (COOCH³).

Síntesis de 4-(trifluorometil)-fenil-(etoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹²H¹⁴ClF³NO⁴, PM =359.67.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de etil L-alanina (1.0 g, 6.50 mmol), 4-(trifluorometil)-fenil-fosfodiclorurato (1.813 g, 6.50 mmol), y TEA (1.316 g, 13.00 mmol, 1740 j L) en DCM (30 mL), para proporcionar 2.150 g (92.2%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCl³, 121 MHz): ⁸9.33, 9.28.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): ⁸7.70 (2H, d, ³J=8.2 Hz, OPh), 7.46-7.39 (2H, m, OPh), 4.78 (1H, bs, NH), 4.33-4.17 (3H, m, CH³CH²O CHCH³), 1.59-1.55 (1H, m, CHCH³), 1.56-1.52 (3H, m, CH²CH³).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): ⁸14.5 (CH³CH²O), 20.8, 20.9 (CH³CH), 50.3, 50.9 (CHCH³), 62.3, 62.5 (CH³CH²O), 121.4 ('o', OPh), 124.1 (CF³, J=270 Hz), 127.7 ('m', OPh), 128.7 ('p', J=33 Hz), 152.4 ('ipso', OPh), 172.9 (COOCH²CH³).

Síntesis de p-trifluorofenil-(benzoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁷H¹⁶C F ³NO⁴P, PM = 421.73.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de bencil L-alanina (1.08 g, 5.01 mmol), para-trifluorofenil-dicloro fosfato (1.490 mg, 5.01 mmol), y TEA (1.4 mL, 1.4 mmol) en DCM (40 mL). El crudo se purifica mediante cromatografía flash (acetato de etilo/éter de petróleo 6:4) proporcionando 1.80 (85%) de aceite.

RMN 31P (CDCl³, 121 MHz): 89.11, 8.84.

RMN 1H (CDCl³; 300 MHz): 87.65 (2H, m, OPh), 7.4-7.2 (7H, m, CH²Ph 2H OPh), 5.25 (2H, 2s, CH²Ph), 4.75-4.55 (1H, bs, NH), 4.25-4.1 (1H, m, CHala), 1.60-1.55 (3H, 2d, 3J=7Hz, CH³ala).

RMN 13C (CDCla; 75 MHz): 520.9 (CHsala), 51.3, 51.0 (CHala), 68.2, 68.1 (CH²Ph), 121.4, 120.9 ('o', OPh), 125.2 (d, J=270Hz, CF³), 126.6 ('m', OPh), 129.1, 128.8, 127.8 (Bn), 130.0 ('p', q, J=32Hz, OPh), 135.4 ('ipso', CH²Ph), 153.0 ('ipso', OPh), 172.8 (COOCH²Ph).

Síntesis de 4-clorofenil-(metoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹⁰H¹²CI²NO⁴P, PM =312.09.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de metil L-alanina (1.0 g, 7.16 mmol), 4-clorofenilfosforodiclorurato (1.757 g, 7.16 mmol), y TEA (1.449 g, 14.32 mmol, 1995 j L) en DCM (30 mL), para proporcionar 1.621 g (72.5%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCl³, 121 MHz): 59.36, 9.07.

RMN 1H (CDCla; 300 MHz): 57.35-7.15 (4H, m, OPh), 4.48-4.36 (1H, bs, NH), 4.22-4.04 (1H, m, CHCH³), 3.76-3.74 (3H, 2s, CH³O), 1.49-1.46 (3H, m, CHCH³).

RMN 13C (CDCls; 75 MHz): 521.0 (CH³CH), 50.8, 51.1 (CHCH³), 53.4 (CHsO),121.9, 122.1, 122.3, 122.4 ('o', OPh), 130.6, 130.4, 130.2 ('m', OPh), 132.0 ('p', OPh), 148.6 ('ipso', OPh), 173.5 (COOCH³).

Síntesis de 4-clorofenil-(etoxi-L-alaninil)-fosforoclorurato. C¹¹H-^mCI²NO⁴P, PM =326.11.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de etil L-alanina (1.000 g, 6.50 mmol), 4-clorofenilfosforodicloruro (1.595 g, 6.50 mmol), y TEA (1.315 g, 13.00 mmol, 1810 j L) en DCM (20 mL), para proporcionar 1.794 mg (rendimiento 84.7%) del producto.

RMN 31P (CDCls, 121 MHz): 59.54, 9.25.

RMN 1H (CDCls; 300 MHz): 5 7.44-7.21 (4H, m, OPh), 4.59 (1H, bs, NH), 4.33-4.13 (3H, m, OCH²CH³+ CHCH³), 1.57-1.56 (3H, m, CH³CH), 1.43-1.21 (3H, m, OCH²CH³).

RMN 13C (CDCls; 75 MHz): 514.5, 14.6 (OCH²CH³), 21.0, 21.5 (CH³CH), 50.9, 51.2 (CHCH³), 62.4, 62.5 (OCH²CH³), 122.04, 122.3, 122.4 ('o', OPh), 130.4 ('m', OPh), 131.9 ('p', OPh), 148.5, 148.6 ('ipso', OPh), 173.0,173.1 (COOCH²CH³).

Síntesis de 4-nitrofenil-(bencil-2-amino-2-metilpropanoato)-fosforoclorurato. C¹⁶H¹⁶Cl²NO⁴P, PM =388.18.

Este se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 4, utilizando clorhidrato de éster de bencil L-alanina (1.000 g, 4.63 mmol), 4-clorofenilfosfodicloruro (1.136 g, 4.63 mmol), y TEA (937.0 mg, 9.26 mmol, 1290 ^jL) en DCM (40 mL), para proporcionar 1534 mg (rendimiento 86.5%) del producto crudo utilizado sin purificación adicional.

RMN 31P (CDCI3, 121 MHz): 59.43, 9.16.

RMN 1H (CDCI³; 300 MHz): 57.42-7.08 (9H, m, OPh+ CH²Ph), 5.19 (2H, s, O-hPh), 4.61-4.54 (1H, bs, NH), 4.26 4.10 (1H, m, CHCH³), 1.42-1.38 (3H, m, CH³CH).

RMN 13C (CDCI³; 75 MHz): 520.9, 21.0 (CH³CH), 51.0, 51.2 (CHCH³), 68.1, 68.2 (OCH²Ph), 122.3, 122.4 (‘o', OPh), 128.8, 129.1, 130.4 (‘o', ‘m', ‘p', CH²Ph+OPh), 131.9 (‘ipso', CH²Ph), 135.3 (‘p', OPh), 148.5 (‘ipso', OPh), 172.7, 112.8 (COOCH2Ph).

Síntesis de 4-cIorofeniI—fosfodicloridato. C⁶H⁴CI³O²P, PM=245.43.

Esta se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 3, utilizando fósforo-oxicloruro (1533 mg, 10.00 mmol, 932 ^L), 4-clorofenol (1.285 g, 10.00 mmol) y TEA (1.011 g, 10.00 mmol, 1394 ^L) en etiléter (100 mL) para dar un aceite (1.897 g, 77.3% de rendimiento).

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 55.18.

RMN 1H (CDCl³; 300 MHz): 57.45 (2H, d, 3J=9.0 Hz, OPh), 7.30 (2H, d, 3J=9.0 Hz, OPh).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 5122.5 (‘o', OPh), 130.6 (‘m', OPh), 133.2 (‘p', OPh), 148.5 (‘ipso', OPh).

Síntesis de 4-(trifluorometil)-fenil-fosfodidorurato. C7H4ClF3O3P, PM =278.98.

Esta se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 3, utilizando fósforo-oxicloruro (1.570 mg, 10.24 mmol, 954.5 ^L), 4-trifluorometilfenol (1660 g, 10.24 mmol) y TEA (1.036 g, 10.24 mmol, 1427 ^L) en etiléter (100 mL) para dar un aceite (2.521 g, 88.2% de rendimiento).

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 54.75.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 57.77 (2H, d, 3J=8.4 Hz, OPh), 7.49 (2H, d, 3J=8.4 Hz, OPh).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 5 121.6 (‘o', OPh), 123.6 (CF³, J=271 Hz, OPh), 128.2 (‘m', OPh), 129.7 (‘p', J=33 Hz), 152.7 (‘ipso', OPh).

Síntesis de 4-fluorofenil-fosfodiclorurato. C⁶H⁴ChFO²P, PM =228.97.

Esta se sintetiza de acuerdo con el procedimiento estándar 3, utilizando fósforo-oxicloruro (1.395 mL, 15.00 mmol), 4-clorofenol (1.68 g, 15.00 mmol) y T^{e a}(2.1 mL, 15.00 mmol) en etiléter (140 mL) para dar un aceite (3.96 g, 96 % de rendimiento).

RMN 31P (CDCh, 121 MHz): 55.52.

RMN 1H (CDCh; 300 MHz): 57.15 (2H, d, 3J=8.0 Hz, OPh), 7.05 (2H, d, 3J=8.0 Hz, OPh).

RMN 13C (CDCh; 75 MHz): 5116.8 (‘o', OPh), 122.1 (‘m' OPh), 146.7 (‘p', OPh), 158.7 (‘ipso', OPh).

Los datos experimentales se dan en la Tabla I que ilustra la actividad de los compuestos que se incorporan en la presente invención, y de algunos compuestos comparativos, con respecto a estirpe celular de cáncer de mama humano MDA MB231, estirpe celular de cáncer de colon humana HT115 y estirpe celulade de cáncer de próstata humana PC-3. Los compuestos incluyen aquellos cuyas preparaciones se describieron anteriormente y los compuestos hechos por los métodos preparativos que corresponden a los métodos descritos anteriormente.

Los procedimientos experimentales utilizan estirpe celular de cáncer de colon humana (HT115), estirpe celular de cáncer de próstata humana (PC- 3), estirpe celular de cáncer de mama humana (MDA MB 231) y célula endotelial de vena umbilical humana normal (HuV e C). Los compuestos se diluyen sobre un rango de concentraciones y se agregan a células sobre 1 a 3 días. Se determina la citotoxicidad utilizando un ensayo MTT al final de cada experimento.

En la Tabla:

"Ar" corresponde al grupo "R" en los compuestos de fórmula I; J se refiere a la unidad estructural representada por, respectivamente, ROCOCR'R"NH-, con respecto a la fórmula I, o, con respecto a los Ejemplos 51, 52 y 53, HOCOCR'R"NH-, con respecto a la fórmula II, a continuación; y

B se refiere a la unidad estructural base con respecto a la fórmula I o la fórmula II.

BVU significa 2-bromovinil uridina.

5-(C=CC[O]O)MeU significa metil propenoato-2'-desoxiuridina.

GemCyt significa gemcitabina.

Los Ejemplos A, 1-30, 32-39, 41-95 y G son ejemplos comparativos.

El Ejemplo A es 5-(2-Bromovinil)-2’-desoxiuridina.

El Ejemplo 1 es el Ejemplo 1 anterior que corresponde al compuesto (7) anterior.

El Ejemplo 67 es propenato-2’-desoxiuridina.

El Ejemplo G is gemcitabina.

Los Ejemplos 51,52 y 53 son compuestos que incorporan la fórmula II anterior.

Los Ejemplos 31 y 40 son compuestos de acuerdo con la presente invención.

TABLA

La gemcitabina (Ejemplo G en la tabla) y el compuesto CPF31 (Ejemplo 31 en la tabla: gemcitabina-[fenil-(benzoxi-L-alaninil)]- fosfato) se compararon en un modelo de ratón con xenoinjertos de cáncer humano (colon HT115 y próstata Pc 3).

Los ratones se dosificaron diariamente en un rango de concentraciones (0.01-10 pM) y el volumen del tumor se evalúo versus control.

Las estadísticas de Kaplan-Meier se calcularon en relación con la supervivencia libre de incidentes.

En los dibujos adjuntos:

La figura 1 muestra para el xenoinjerto de ratón el volumen de tumor para los datos de próstata en día 13 utilizando Gemzar™; (gemcitabina disponible por ejemplo de Lilly).

La figura 2 muestra para el xenoinjerto de ratón el volumen del tumor para los datos de próstata en el día 13 utilizando CPF31;

La Figura 3 muestra las funciones de supervivencia libres de indicencia versus el día para cada uno de CPF31 y gemcitabina; y

La figura 4 muestra para el xenoinjerto de ratón el volumen del tumor para los datos de colon en el día 24 utilizando, respectivamente, compuesto Gemzar y CPF31.

Haciendo referencia a los dibujos, se puede ver que el CPF31 es significativamente menos tóxicos que la gemcitabina.

El CPF31 fue significativamente efectivo en reducir el volumen del tumor de próstata y colon con relación al control en la dosificación diaria de 5 y 10 pM (3 y 6 pg/ml). La gemcitabina no fue efectiva a la concentración más alta no tóxica.

El Gemzar que se ve en la Figura 1 es tóxico por encima de 1 pM. Por el contrario, se ve que el CPF31 en la Figura 2 tiene una toxicidad sustancialmente menor.

La Figura 3 muestra que el CPF31 tiene efectos secundarios significativamente inferiores sobre una base comparable: 3 animales muestran toxicidad grave (10% de pérdida de masa corporal) en GMZ y en CPF31 en el día 10, colectivamente con 4 en GMZ y 1 en CPF31 en el día 11 y 5 en GMZ y 1 en CPF en día 13. Utilizando el análisis de Chi cuadrado al combinar de grupos de 5 y 10 pM, la significación es p = 0.193, 0.078 y 0.0289 en el día 10, 11 y 13. Está claro que en el día 13, el CPF31 exhibe significativamente menos efectos secundarios y los efectos contra el cáncer siguen excediendo a aquel de Gemzar.

La Figura 3 muestra la curva de de supervivencia Kaplan-Meier, la supervivencia libre de incidencia: se basa en la pérdida de acuerdo con la pérdida de peso. Un análisis de proporción Cox muestra que el CPF31 es mucho menos tóxico que el GMZ con base en la pérdida calculada para bajar peso (p = 0.043).

Se encontró que el CPF31 era activo a 5 pM in vitro, mientras que se encontró que el Gemzar era activo a 600 pM, con respecto a la misma estirpe celular de colon. La Figura 4 muestra los resultados de las pruebas in vivo a 5 pM. La mayor actividad de CPF31 en la reducción de volumen del tumor se muestra en la Figura 4.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto químico que tiene la fórmula I:

en el que

R se selecciona del grupo metilo (-CH3), etilo (-C2H5), n- e i-propilo (-C3H7), n- e i-butilo (-C4H9) y bencilo (-CH2C6H5); uno de R' y R" es H y uno de R' y R" es metilo;

Q es -O-;

X se selecciona independientemente del grupo F, Br y metilo (-CH3);

Y es F;

Ar se selecciona del grupo -C⁶H⁵, PCF³C⁶H⁴-, PFC⁶H⁴-, PNO²C⁶H⁴-, pClC6H4- and

⁰GC⁶H⁴-;

Z se selecciona del grupo H, alquilo C i-6 acíclico y halógeno; y

n es 0 o 1,

en el que cuando n es 0, Z' es -NH2 y existe un doble enlace entre la posición 3 y la posición 4, y

cuando n es 1, Z' es =O;

o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I.

2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que X se selecciona independientemente de F y metilo.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.