ES2928859T3 - Un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor tras el tratamiento térmico - Google Patents

Un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor tras el tratamiento térmico Download PDF

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Abstract

Se describe un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor en una solución acuosa que contiene dicho sacárido reductor tras el tratamiento térmico de dicha solución acuosa de sacárido acidificando la solución acuosa de sacárido antes de su tratamiento térmico, y el uso de la solución acuosa tratada térmicamente que contiene dicho sacárido reductor para producir un producto biológico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor tras el tratamiento térmico
La presente invención se refiere a métodos que implican un tratamiento térmico de una solución acuosa que contiene al menos un sacárido reductor. Más específicamente, la invención se refiere a métodos para prevenir la isomerización del sacárido reductor en una solución acuosa tras un tratamiento térmico de la solución acuosa que contiene el sacárido reductor.
Antecedentes
Mantener un entorno estéril suele ser un requisito previo para el cultivo de células en los procesos de producción biotecnológica. Sin embargo, estos procesos a menudo son propensos al crecimiento extraño por bacterias, hongos o virus adventicios. Estar contaminado con microorganismos adventicios tiene un impacto severo en el proceso de fabricación ya que perjudica la productividad (disminuye la capacidad de producción debido a una degradación o modificación de las materias primas, el producto deseado o la biomasa deseada, y períodos extendidos de parada del biorreactor para la eliminación del contaminante), la calidad del producto y la seguridad del producto (a través de contaminaciones del producto final debido al propio crecimiento extraño y/o debido a metabolitos producidos por los microorganismos no deseados).
Prevenir el crecimiento extraño en un producto biológico, así como también en el proceso de su producción, es un desafío debido a la naturaleza omnipresente de los microorganismos y los múltiples puntos de entrada microbiana en el proceso de producción. Se han desarrollado varios métodos para esterilizar equipos (por ejemplo, el interior de un fermentador), medios de crecimiento, así como también cualquier complemento de los medios de crecimiento que deba ser usado en un proceso de producción biotecnológico.
Se conocen varios métodos para esterilizar compuestos o composiciones y se emplean para eliminar los microorganismos adventicios de los insumos que serán usados en los procesos de producción biotecnológicos. Dichos métodos incluyen la esterilización por gas (por ejemplo, con ozono u óxido de etileno), la esterilización por radiación (por ejemplo, radiación ultravioleta o radiación gamma), la esterilización con luz brillante/luz pulsada, así como también la filtración estéril de líquidos y soluciones, en particular de líquidos y soluciones que son sensibles al calor o contienen al menos un compuesto sensible al calor.
Se sabe que el tratamiento térmico de cualquier suministro tolerante al calor es el método de esterilización más confiable y efectivo, y el calor húmedo es el más usado para lograr la esterilización térmica. La esterilización por calor húmedo (vapor) significa exponer los componentes a esterilizar a vapor presurizado durante algún tiempo. Típicamente los protocolos de esterilización por calor húmedo que se usan para esterilizar equipos y suministros los someten a vapor saturado de alta presión de 115 °C a 140 °C durante alrededor de 60 a 3 minutos. Estos protocolos de esterilización pueden variar en dependencia de la carga biológica y la naturaleza de la materia prima, la solución o la superficie a esterilizar.
Fundamentalmente, dañar un componente con un método de esterilización inapropiado puede afectar la calidad, la seguridad o la productividad de un proceso de producción biotecnológico, por lo que debe evitarse. Especialmente los fluidos pueden sufrir diversas reacciones químicas debido a métodos de esterilización que usan calor, irradiación o productos químicos.
La complejidad de tales reacciones químicas se ejemplifica mediante el tratamiento térmico de la leche que se emplea típicamente para reducir la carga microbiana o para inactivar enzimas en la leche y, por lo tanto, extender la vida útil de la leche. Se sabe que ocurren reacciones de Maillard que afectan el color y el sabor de la leche tras su esterilización convencional a 121,1 °C durante 20 minutos. Además, se sabe que se produce la desnaturalización o inactivación de proteínas o vitaminas así como también reacciones de aldo azúcares con aminoácidos o sustancias que contienen grupos amino debido al tratamiento térmico de la leche. Además, también es bien sabido que la lactosa (4-O-p-D-galactopiranosil-D-glucopiranosa, Número CAS: 63-42-3), un constituyente sustancial de la leche, se isomeriza a lactulosa (4-O-p-D-galactopiranosil-D-fructofuranosa, Número CAS: 4618-18-2) debido al tratamiento térmico y se degrada aún más a glucosa y galactosa, así como también a productos de degradación adicionales como los ácidos. Este tipo de isomerización se ve favorecida por el pH básico y también se conoce como transformación de Lobry de Bruyn-Alberda van Ekenstein.
En un intento de limitar los efectos no deseados del calor a la calidad y composición de la leche, se usan métodos alternativos de esterilización como el "tratamiento a temperatura ultraelevada", en donde la leche se expone a 140 °C durante un par de segundos o unos pocos minutos, o "pasteurización a baja temperatura" en la que la leche se calienta a una temperatura de hasta 74 °C. Sin embargo, las reacciones mediadas por calor no deseadas también ocurren durante estos métodos de esterilización alternativos, aunque en menor medida.
Esto podría mejorarse aún más ajustando los valores de pH de la leche cruda descremada, que tiene un pH inicial de 6,70, a valores de entre 6,59 y 6,72 antes de su esterilización a 120 °C durante 10 minutos. Esto condujo a una formación de lactulosa reducida en un 28 % a pH 6,59 y a una formación de lactulosa aumentada en un 9 % a pH 6,72 en comparación con la formación de lactulosa en la leche original.
El documento WO 2015/150328 A1 describe un método para la fermentación total de oligosacáridos. Además, el aviso GRAS (GRN) No. 571 (Jennewein Biotechnologie GmbH, marzo de 2015) divulga material y métodos para producir 2'-fucosil lactosa.
En la producción biotecnológica de oligosacáridos de la leche humana como 2'-fucosil lactosa, 3-fucosil lactosa, lacto-N-tetraosa, lacto-N-neotetraosa, 3'-sialil lactosa o 6'-sialil lactosa, la lactosa es usada típicamente como molécula aceptora inicial para etapas futuras de glicosilación que conducen a la producción del HMO deseado. Para evitar el crecimiento extraño en el caldo de fermentación, la lactosa que se suministra debe esterilizarse. Sin embargo, debe evitarse la presencia de lactulosa dentro del caldo de fermentación, ya que es un laxante conocido que no debe estar presente en la fórmula infantil ni en ningún otro producto nutricional que se complemente con dichos HMO. Además, la lactulosa podría ser usada por las bacterias productoras de HMO como una molécula aceptora alternativa, conduciendo así a oligosacáridos que no están presentes en la naturaleza.
Como alternativa al tratamiento térmico, es posible esterilizar una solución de lactosa por filtración. Típicamente, las soluciones que contienen entre 1 mM y 1 M de lactosa se esterilizan por filtración. Sin embargo, esterilizar grandes cantidades de una solución por filtración según sea necesario para la producción a escala industrial es costoso, consume mucho tiempo y es menos fiable en comparación con la esterilización por calor. Por lo tanto, se necesita una forma fiable y más conveniente de esterilizar la lactosa sin convertir o con sólo convertir cantidades diminutas de lactosa en lactulosa.
El objeto se ha conseguido mediante un método como se reivindicó en las reivindicaciones adjuntas, en donde el pH ácido de una solución de lactosa se ajusta antes y/o durante el curso de la exposición de la solución de lactosa al calor, a pesar de que el principio de acidificación de una solución de azúcar antes de su tratamiento térmico también se puede aplicar a otros sacáridos además de la lactosa.
Resumen
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor en una solución acuosa que contiene dicho sacárido reductor tras el tratamiento térmico de dicha solución acuosa acidificando la solución acuosa antes y/o en el curso de su tratamiento térmico, como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de una solución acuosa tratada térmicamente que contiene al menos un sacárido reductor en una producción biotecnológica de un producto biológico como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra cromatogramas de una solución acuosa que contiene lactosa (A) antes de la esterilización por calor y (B) después de la esterilización por calor. La solución acuosa no se acidificó antes de su esterilización por calor. La Figura 1C muestra un cromatograma de varios sacáridos específicos usados como estándares. La Figura 2 muestra cromatogramas de una solución acuosa que contiene lactosa (A) antes de la esterilización por calor y (B) después de la esterilización por calor. La solución acuosa se acidificó antes de su esterilización por calor añadiendo ácido sulfúrico a la solución acuosa que contiene lactosa. La Figura 2C muestra un cromatograma de varios sacáridos específicos usados como estándares.
Descripción detallada
De acuerdo con el primer aspecto, se proporciona un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor en una solución acuosa que contiene dicho sacárido reductor (solución acuosa de sacárido) tras el tratamiento térmico de dicha solución acuosa de sacárido, comprendiendo el método la etapa de acidificar la solución acuosa de sacárido antes y/o en el curso de su tratamiento térmico como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
El término "sacárido reductor", como se usa en la presente descripción, se refiere a cualquier azúcar o sacárido que sea capaz de actuar como agente reductor porque tiene un grupo aldehído libre. El sacárido reductor comprende monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos. Todos los monosacáridos son azúcares reductores, se pueden clasificar en aldosas, que tienen un grupo aldehído, y cetosas, que tienen un grupo cetona. Las cetosas primero deben tautomerizarse a aldosas antes de que puedan actuar como azúcares reductores. Los disacáridos se forman a partir de dos residuos de monosacáridos y los oligosacáridos se forman a partir de tres a siete residuos de monosacáridos. Los disacáridos y oligosacáridos se pueden clasificar como reductores o no reductores. Los disacáridos reductores como la lactosa y la maltosa tienen solo uno de sus dos carbonos anoméricos involucrados en el enlace glucosídico, lo que significa que pueden convertirse en una forma de cadena abierta con un grupo aldehido.
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el sacárido reductor se selecciona del grupo que consiste en aldosas, disacáridos y oligosacáridos.
El término "aldosa", como se usa en la presente descripción, se refiere a monosacáridos que contienen solo un grupo aldehído por molécula. Ejemplos de aldosas son D-(+)-gliceraldehído, D-(-)-eritrosa, D-(-)-treosa, D-(-)-ribosa, D-(-)-arabinosa, D-(+)- xilosa, D-(-)-lixosa, D-(+)-alosa, D-(+)-altrosa, D-(+)-glucosa, D-(+)-manosa, D-(-)-gulosa, D-(-)-idosa, D-(+)-galactosa y D-(+)-talosa.
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el disacárido se selecciona del grupo que consiste en lactosa, maltosa, trehalosa, celobiosa, quitobiosa, kojibiosa, nigerosa, isomaltosa, soforosa, laminaribiosa, gentibiosa, turanosa, matulosa, palatinosa, gentibiosa, manobiosa, melibiosa, melibulosa, rutinosa, rutinulosa y xilobiosa.
El término "oligosacárido", como se usa en la presente descripción, se refiere a sacáridos que consisten de 3, 4, 5, 6 o 7 residuos de monosacárido y, por lo tanto, comprende trisacáridos, tetrasacáridos, pentasacáridos, hexasacáridos y heptasacáridos.
Para obtener la solución acuosa de sacárido, se disuelve una cantidad del sacárido reductor en un suministro de agua. En una modalidad preferida, el agua es agua destilada, agua bidestilada o agua desionizada. La disolución del sacárido reductor en el agua se puede facilitar agitando el agua mientras se añadido el sacárido reductor o mezclando o agitando el agua después de haber añadido el sacárido reductor al suministro de agua.
En una modalidad del método, la solución acuosa de sacáridos se acidifica a un pH que tiene valores de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6, preferentemente a un pH que tiene valores de entre aproximadamente 2 a aproximadamente 5, y con mayor preferencia a un pH que tiene valores de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4. Se encontró que un pH de la solución acuosa de sacárido con valores entre 3 a aproximadamente 5 era particularmente ventajoso, porque la isomerización del sacárido reductor se inhibe o incluso previene mientras que la formación de productos de degradación de dicho sacárido reductor es insignificante.
De acuerdo con la invención, la solución acuosa de sacárido se acidifica añadiendo al menos un ácido a la solución acuosa de sacárido. El ácido puede ser cualquier ácido que no conduzca a una reacción química no deseada con el sacárido reductor. Un ejemplo de tal reacción química no deseada es la formación de ácido múcico si se añade ácido nítrico a una solución acuosa de lactosa.
El ácido puede seleccionarse del grupo de ácidos orgánicos y ácidos inorgánicos, con la condición de que el ácido inorgánico no sea ácido nítrico (o ácido nitroso) si el sacárido reductor es galactosa o un sacárido que contiene galactosa, como ácido nítrico la oxidación de galactosa o compuestos que contienen galactosa como la lactosa conducen al ácido múcico.
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el al menos un ácido para acidificar la solución acuosa de sacárido es un ácido inorgánico o un ácido mineral. El ácido inorgánico es un ácido inorgánico adecuado que, en la cantidad que se añade a las soluciones acuosas de sacárido, no reacciona inadvertidamente con el sacárido. Por ejemplo, agregar ácido nítrico a una solución acuosa de lactosa puede producir ácido múcico. El ácido inorgánico se selecciona preferentemente del grupo que consiste en ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfuroso, ácido fosfórico, ácido bórico, ácido fluorhídrico, ácido bromhídrico, ácido perclórico, ácido yodhídrico y ácido carbónico. En la modalidad, en donde el ácido inorgánico es ácido carbónico, la solución acuosa de sacárido se puede acidificar porque la solución acuosa de sacárido se gasifica con dióxido de carbono en un contenedor presurizado. En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el al menos un ácido para acidificar la solución acuosa de sacárido es un ácido orgánico. El ácido orgánico se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos monocarboxílicos, ácidos dicarboxílicos y ácidos tricarboxílicos.
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el ácido monocarboxílico es seleccionado, pero no se limita, del grupo que consiste de ácido carbónico, ácido fórmico (ácido metanoico), ácido acético (ácido etanoico), ácido propiónico (ácido propanoico), ácido butírico (ácido butanoico) y ácido valérico (ácido pentanoico).
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el ácido dicarboxílico se selecciona del grupo que consiste en ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido maleico, ácido málico, ácido fumárico, ácido glutacónico, ácido mucónico y ácido citracónico.
En una realización adicional y/o modalidad alternativa, el ácido tricarboxílico se selecciona del grupo que consiste en ácido cítrico, ácido isocítrico y ácido aconítico.
Ajustar el pH de la solución de sacárido a un valor ácido permite un tratamiento térmico del sacárido reductor en la solución acuosa sin o al menos con una isomerización reducida del sacárido reductor.
El tratamiento térmico de la solución acuosa de sacárido comprende calentar la solución acuosa de sacárido después de la acidificación y/o durante la acidificación como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.
Calentar y/o mantener una solución acuosa que contiene un sacárido reductor a temperaturas tan elevadas sin isomerización o con una isomerización significativamente reducida del sacárido reductor proporciona múltiples ventajas como, por ejemplo, la opción de disolver una cantidad mayor del sacárido en una cantidad determinada. de agua de esta manera aumentando la concentración de sacárido en la solución acuosa y reduciendo el volumen de una solución acuosa de sacárido que se va a suministrar a un lote para obtener una concentración de sacárido final deseada. Adicionalmente y/o alternativamente, la viscosidad de la solución acuosa de sacárido puede disminuirse calentando/manteniendo la solución acuosa de sacárido a una temperatura elevada, de esta manera facilitando el manejo y/o bombeo de la solución acuosa de sacárido, por ejemplo, a través de un filtro de membrana.
De acuerdo con la invención, el "tratamiento térmico" comprende calentar la solución acuosa de sacárido a una temperatura en el intervalo de 115 °C a 150 °C y mantener la temperatura a aproximadamente 60 minutos, esterilizando en autoclave la solución acuosa de sacárido a 121,1 °C durante 15 a 30 minutos; calentar la solución acuosa a una temperatura de 130 °C a 150 °C y mantener la temperatura hasta 5 minutos; o sometiendo la solución acuosa a una temperatura de entre 71,5 °C a 74 °C, durante 15 a 30 segundos.
La autoclave es uno de los métodos más importantes de destrucción de gérmenes en donde se utiliza vapor saturado sobrecalentado. La condensación de vapor sobre el objeto a esterilizar libera energía que provoca daños irreversibles a los microorganismos. Para ello, el interior de la autoclave se ventila durante el tiempo de subida inicial. Al hacerlo, el aire atmosférico es desplazado del interior y reemplazado por vapor saturado sobrecalentado. La ventilación se realiza mediante el uso de un proceso de flujo o mediante ventilación fraccionada; una vez que se completa la ventilación, la válvula de ventilación se cierra. Esto marca el inicio del tiempo de compensación. Después de este período, todos los puntos de la pieza a esterilizar alcanzan la temperatura requerida por efecto del vapor saturado. Después de esto, comienza la fase de esterilización propiamente dicha. La duración de la esterilización es dependiente tanto de la carga de gérmenes como de la temperatura de esterilización. La esterilización en autoclave a 121,1 °C (250 °F) durante 15 a 30 minutos se considera estándar.
En un tratamiento térmico alternativo para esterilizar la solución acuosa de sacárido de acuerdo con la invención, la solución acuosa de sacárido se esteriliza mediante un proceso denominado "tratamiento a temperatura ultra elevada", un método de esterilización continua, que comprende calentar el acuoso a una temperatura de 130 °C -150 °C con 140 °C como punto principal. El tiempo de mantenimiento correspondiente puede variar de 8 a 40 segundos, ocasionalmente hasta 5 minutos, en dependencia de las propiedades de la solución a esterilizar.
En un tratamiento térmico alternativo para esterilizar la solución acuosa de sacárido de acuerdo con la invención, la solución acuosa de sacárido se somete a una pasteurización a alta temperatura/corto tiempo (HTST), en la que la solución se calienta a una temperatura de entre 71,5 °C y 74 °C, preferentemente a 72 °C durante alrededor de 15 segundos a aproximadamente 30 segundos, y se mueve en un flujo continuo controlado mientras se somete a dicho tratamiento térmico.
En otra modalidad más del tratamiento térmico para esterilizar la solución acuosa de sacáridos, la solución acuosa de sacáridos se somete a "pasteurización instantánea", en donde la solución acuosa de sacáridos se somete a 71,7 °C durante 15 segundos.
Acidificar una solución acuosa de un sacárido reductor antes de someter la solución acuosa de sacárido a cualquiera de estos tratamientos térmicos y/o en el curso de su tratamiento térmico para esterilizar la solución acuosa de sacárido inhibe o incluso previene la isomerización del sacárido reductor en la solución acuosa tras su tratamiento térmico.
Con el método de inhibición de la isomerización como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas, se puede proporcionar una solución acuosa tratada térmicamente que contiene al menos un sacárido reductor.
La solución acuosa tratada térmicamente contiene al menos un sacárido reductor y se obtiene por acidificación de la solución acuosa de sacárido antes y/o en el curso de su tratamiento térmico como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas y no contiene o al menos en menores cantidades de productos indeseables de isomerización de dicho al menos un sacárido reductor en comparación con una solución acuosa similar del mismo sacárido reductor que no se acidificó antes de un tratamiento térmico idéntico.
De acuerdo con la invención, la solución acuosa que contiene un sacárido reductor es una solución acuosa estéril. La solución acuosa estéril que contiene un sacárido reductor se obtiene mediante el método de inhibición de la isomerización de dicho sacárido reductor como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas, incluido el tratamiento térmico de dicha solución acuosa de sacárido para esterilizar dicha solución acuosa de sacárido. Así, la solución acuosa ha sido esterilizada por el tratamiento térmico.
La solución acuosa obtenida por el método de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas y que contiene un sacárido reductor puede tener una temperatura elevada, es decir una temperatura de alrededor de 30 °C, alrededor de 40 °C, alrededor de 50 °C, alrededor de 60 °C, alrededor de 70 °C o incluso aproximadamente 80 °C y contiene el sacárido reductor en una cantidad superior a la cantidad de dicho sacárido reductor que puede disolverse en agua a temperatura ambiente. Con el método de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, una solución acuosa que contiene lactosa en una concentración de > 10 mM, preferentemente en una concentración de > 100 mM, con mayor preferencia en una concentración de > 0,66 M, con la máxima preferencia en una concentración de > 1 M, se puede proporcionar si la temperatura de la solución de lactosa acuosa acidificada se mantiene entre aproximadamente 40 °C a aproximadamente 60 °C.
La solución acuosa de sacárido que contiene al menos un sacárido reductor, como, por ejemplo, lactosa, en una cantidad superior a la cantidad del sacárido que se puede disolver en agua a temperatura ambiente puede ser una solución acuosa estéril de lactosa que ha sido obtenida por el método como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas y se deja enfriar hasta la temperatura elevada deseada a la que se mantiene la solución acuosa estéril de sacárido.
La invención también se refiere al uso de una solución acuosa estéril que contiene al menos un sacárido reductor obtenido por un método como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas en una producción biotecnológica de un oligosacárido de leche humana.
De acuerdo con la invención, el uso de la solución acuosa tratada térmicamente que contiene un sacárido reductor obtenido por un método como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas comprende el uso en un proceso de producción fermentativo. El término "proceso de producción fermentativo", como se usa en la presente descripción, se refiere a un proceso en donde se cultivan microorganismos en un medio o caldo con el objetivo de producir un producto biológico o un producto especial que es sintetizado por los microorganismos.
Ventajosamente mediante el uso de una solución acuosa tratada térmicamente que contiene al menos un sacárido reductor, en donde la solución acuosa de sacárido se ha acidificado como se describe en la presente descripción anteriormente y/o en el curso del tratamiento térmico de la solución acuosa de sacárido como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas, entre otros, porque no están presentes o hay menos productos de isomerización no deseados del sacárido reductor en la solución acuosa de sacárido, y porque no se suministran o hay menos productos de isomerización no deseados al proceso de producción biotecnológica en comparación con una solución de sacárido acuoso similar que no fue acidificado previo a su tratamiento térmico. Por lo tanto, no hay necesidad de eliminar los productos de isomerización no deseados de la solución acuosa de sacárido tratada térmicamente antes de que pueda usarse en un proceso de producción biotecnológico.
"Fermentación" o "fermentativo" se refiere al crecimiento masivo de microorganismos sobre o en un medio de crecimiento (caldo de fermentación) con el objetivo de producir un producto químico específico, el "producto biológico", actualmente: un oligosacárido de leche humana. Con este fin, las células de una o un número limitado de cepas de microorganismos se cultivan en un biorreactor (fermentador) en condiciones óptimas para que los microorganismos realicen la producción deseada con una producción limitada de impurezas no deseadas. Las condiciones ambientales dentro del biorreactor, como la temperatura, las concentraciones de nutrientes, el pH y los gases disueltos (especialmente oxígeno para fermentaciones aeróbicas) afectan el crecimiento y la productividad de los organismos y, por lo tanto, se monitorean, controlan y ajustan si es necesario.
Así, de acuerdo con la invención el método de producción fermentativa de un oligosacárido de leche humana, en el que se usa la solución acuosa estéril de sacárido obtenida por el método de la invención, comprende las etapas de:
• proporcionar una célula que sea capaz de producir el oligosacárido de la leche humana;
• cultivar al menos una célula en un caldo de fermentación que contiene y/o se complementa con la solución acuosa estéril que contiene al menos un sacárido reductor, en donde el sacárido reductor está presente en la solución estéril en una concentración de > 0,66 M, para al menos al menos una célula para producir el producto biológico; y
• purificar opcionalmente el producto biológico a partir del caldo de fermentación,
en donde el oligosacárido de la leche humana se produce en una cantidad de > 100 g/L en el caldo de fermentación, en una cantidad de > 150 g/L en el caldo de fermentación y en una cantidad de > 200 g/L en el caldo de fermentación al final del proceso de fermentación.
En una modalidad del uso de acuerdo con la invención, dicha célula viva es una célula procariota o una célula eucariota. Las células apropiadas incluyen levaduras, bacterias, arqueobacterias, hongos, células de insectos, células vegetales y células animales, incluidas células de mamíferos (tales como células y líneas células humanas). En una realización adicional y/o modalidad alternativa, la célula procariota es una célula bacteriana, preferentemente seleccionada del género seleccionado del grupo que consiste en Bacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Bifidobacterium, Sporolactobacillus spp., Micromomospora spp., Micrococcus spp., Rhodococcus spp., y Pseudomonas. Las especies bacterianas adecuadas son Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus coagulans, Bacillus thermophilus, Bacillus laterosporus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacillus pumilus, Bacillus lentus, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium bifidum, Citrobacter freundii, Clostridium cellulolyticum, Clostridium Ijungdahlii, Clostridium autoethanogenum, Clostridium acetobutylicum, Corynebacterium glutamicum, Enterococcus faecium, Enterococcus thermophiles, Escherichia coli, Erwinia herbicola (Pantoea agglomerans), Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus casei, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus jensenii, Lactococcus lactis, Pantoea citrea, Pectobacterium carotovorum, Proprionibacterium freudenreichii, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aerungina, Streptococcus termófilos y Xanthomonas campestris.
En una modalidad adicional y/o modalidad alternativa, la célula eucariota es una célula de levadura, una célula de insecto, una célula vegetal o una célula de mamífero. La célula de levadura se selecciona preferentemente del grupo que consiste en Saccharomyces sp., En particular Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycopsis sp., Pichia sp., En particular Pichia pastoris, Hansenula sp., Kluyveromyces sp., Yarrowia sp., Rhodotorula sp., y Schizosaccharomyces sp.
En una modalidad del uso de acuerdo con la invención, dicho oligosacárido de la leche humana puede seleccionarse del grupo que consiste en 2'-fucosil lactosa, 3-fucosil lactosa, 2',3-difucosil lactosa, lacto-A/-triosa II, lacto-A/-tetraosa, lacto-A/-neotetraosa, lacto-W-fucopentaosa I, lacto-W-neofucopentaosa I, lacto-W-fucopentaosa II, lacto-W-fucopentaosa III, lacto-W-fucopentaosa V, lacto-W-neofucopentaosa V, lacto-W-difucohexaosa I, lacto-W-difucosilhexaosa II, para-Lacto-W-fucosilhexaosa, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa b, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa c, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa c, disialil-lacto-W-fucopentaosa, 3-fucosil-3'-sialil lactosa, 3-fucosil-6'-sialil lactosa, lacto-W-neodifucohexaosa I, 3'-sialil lactosa, 6'-sialil lactosa, sialil lacto-W-tetraosas LST-a, LST-b, LST-c y disialil lacto-ntetraosa.
En una modalidad adicional y/o modalidad alternativa del uso y/o del método de acuerdo con la invención, dicho sacárido reductor es la lactosa. Esta modalidad es particularmente ventajosa en donde tiene que suministrarse lactosa al caldo de fermentación para las células vivas para producir el oligosacárido de leche humana deseado. Ser capaz de reducir o evitar la formación de lactulosa tras la esterilización por calor de una solución acuosa de lactosa por el método de acuerdo con el primer aspecto, elimina la necesidad de retirar la lactulosa de la preparación de HMO cuando la preparación de HMO debe ser usada para fabricar una fórmula nutricional, especialmente una fórmula infantil, un alimento medicinal o un suplemento dietético.
Mediante el uso de una solución acuosa de sacárido tratada térmicamente que contiene al menos un sacárido reductor, en donde la solución acuosa de sacárido ha sido acidificada como se describió en la presente descripción anteriormente antes y/o en el curso de su tratamiento térmico de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas en un proceso de producción fermentativa proporciona ventajas adicionales. En primer lugar, la presente invención permite la esterilización de una solución acuosa que contiene un sacárido reductor mediante métodos de esterilización por calor sin o con isomerización reducida del sacárido reductor. Por lo tanto, las soluciones acuosas que contienen un sacárido reductor no tienen que esterilizarse mediante filtración estéril, que es menos fiable que la esterilización por calor (por ejemplo, con respecto a la eliminación de bacteriófagos), en particular si se utilizan grandes volúmenes de una solución acuosa de sacárido, como varios metros cúbicos, necesitan ser esterilizados. Adicionalmente, la esterilización por calor de grandes volúmenes es más económica que la filtración estéril. En segundo lugar, la presente invención permite proporcionar soluciones acuosas de sacáridos que contienen al menos un sacárido reductor, en donde las concentraciones de al menos un sacárido reductor son mayores que la concentración de saturación de al menos un sacárido reductor a temperatura ambiente, ya que la solución acuosa de sacáridos puede calentarse y mantenerse a una temperatura elevada, es decir, una temperatura por encima de la temperatura ambiente. Además, mantener una solución acuosa de sacáridos a una temperatura elevada reduce la viscosidad de la solución acuosa de sacáridos que a su vez facilita el manejo de la solución acuosa de sacáridos, por ejemplo cuando se bombea la solución acuosa de sacáridos a través de una tubería o manguera. En tercer lugar, ser capaz de proporcionar una solución acuosa de sacárido que tenga un aumento de concentración de sacárido permite obtener mayores rendimientos de producto en un proceso de producción fermentativo. Esto se debe a que el volumen de un fermentador es limitado y el volumen del caldo de fermentación en un fermentador aumenta durante un proceso de fermentación debido al suministro de, entre otros, una solución acuosa de sacáridos al caldo de fermentación, cuya solución acuosa de sacáridos se requiere para la producción del producto biológico deseado por las células que se cultivan. Cuanto mayor sea la concentración del sacárido en la solución acuosa de sacárido, menor será el volumen de la solución acuosa de sacárido que debe añadirse a un caldo de fermentación para obtener y/o mantener una concentración predeterminada de al menos un sacárido reductor en el caldo de fermentación. Por lo tanto, mediante el uso de una solución acuosa de sacárido de acuerdo con la invención que tiene una concentración de sacárido aumentada, se puede lograr una concentración de sacárido más alta en el caldo de fermentación en un fermentador dado o se puede mantener una concentración de sacárido predeterminada durante un período de tiempo más largo a medida que aumenta el volumen en el fermentador que está disponible para suministros se agota más lentamente. Esto, a su vez, proporciona más sacárido reductor a las células para producir el producto biológico deseado y, por lo tanto, aumenta el rendimiento del producto biológico deseado que se puede obtener en una fermentación de un solo lote. Por lo tanto, el oligosacárido de leche humana deseado se puede producir, al final del proceso de fermentación, en una cantidad de > 100 g/L en el caldo de fermentación, preferentemente en una cantidad de > 150 g/L en el caldo de fermentación, con mayor preferencia en una cantidad de > 200 g/L en el caldo de fermentación. Por ejemplo, se obtuvieron cantidades de 2'-fucosil lactosa de más de 100 g/L, específicamente, de aproximadamente 150 g/L cuando se usó una solución acuosa de lactosa 0,66 M acidificada que se esterilizó por calor, y se pueden obtener rendimientos aún mayores si la lactosa la concentración en la solución acuosa que se alimenta al caldo de fermentación se incrementa aún más.
En una modalidad, el oligosacárido de la leche humana se selecciona del grupo que consiste en
2'-fucosil lactosa, 3-fucosil lactosa, 2',3-difucosil lactosa, lacto-N-triosa II, lacto-A/-tetraosa, lacto-N-neotetraosa, lacto-N-fucopentaosa I, lacto-N-neofucopentaosa I, lacto-N-fucopentaosa II, lacto-N-fucopentaosa III, lacto-N-fucopentaosa V, lacto-N-neofucopentaosa V, lacto-N-difucohexaosa I, lacto-N-difucosilhexaosa II, para-Lacto-N-fucosilhexaosa, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa b, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa c, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa c, disialil-lacto-N-fucopentaosa, 3-fucosil-3'-sialil lactosa, 3-fucosil-6'-sialil lactosa, lacto-N-neodifucohexaosa I, 3'-sialil lactosa, 6'-sialil lactosa, sialil lacto-N-tetraosas LST-a, LST-b, LST-c y disialil lacto-N-tetraosa.
En una modalidad alternativa, el oligosacárido de leche humana se selecciona del grupo que consiste en lactosacarosa y ácido lactobiónico o derivados de los oligosacáridos de leche humana mencionados anteriormente. El oligosacárido de la leche humana producido en el uso de la invención se selecciona preferentemente del grupo que consiste en 2'-fucosil lactosa, 3-fucosil lactosa, 2',3-difucosil lactosa, lacto-N-triosa II, lacto-N-tetraosa, lacto-N-neotetraosa, lacto-N-fucopentaosa I, lacto-N-neofucopentaosa I, lacto-N-fucopentaosa II, lacto-N-fucopentaosa III, lacto-N-fucopentaosa V, lacto-N-neofucopentaosa V, lacto-N-difucohexaosa I, lacto-N-difucosilhexaosa II, para-Lacto-N-fucosilhexaosa, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa b, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa c, fucosil-lacto-N-sialilpentaosa c, disialil-lacto-N-fucopentaosa, 3-fucosil-3'-sialil lactosa, 3-fucosil-6'-sialil lactosa, lacto-N-neodifucohexaosa I, 3'-sialil lactosa, 6'-sialil lactosa, sialil lacto-N-tetraosas LST-a, LST-b, LST-c y disialil lacto-N-tetraosa, y puede usarse en formulaciones nutricionales, como fórmula infantil, alimentos medicinales y suplementos dietéticos.
Siempre y cuando el sacárido reductor sea lactosa, el método de inhibición de la isomerización de acuerdo con la invención puede proporcionar una solución de lactosa esterilizada por calor sin o con cantidades reducidas de lactulosa para la producción fermentativa de un oligosacárido de leche humana. Dicho oligosacárido de la leche humana puede entonces emplearse en la fabricación de una formulación nutricional, preferentemente una fórmula infantil, que no contenga o contenga en menor cantidad epilactosa, lactulosa y/o un derivado de la lactulosa como la fucosil lactulosa (sin necesidad de retirar la lactulosa o su derivado de la preparación HMO).
La presente invención se describirá con respecto a modalidades particulares y con referencia a dibujos, pero la invención no está limitada a estos sino solo por las reivindicaciones. Además, los términos primero, segundo, tercero y similares en la descripción y en las reivindicaciones, se usan para distinguir entre elementos similares y no necesariamente para describir una secuencia, ya sea temporalmente, espacialmente, en orden o de cualquier otra manera. Debe entenderse que los términos así usados son intercambiables bajo circunstancias apropiadas y que las modalidades de la invención descritas en la presente descripción son capaces de operar en otras secuencias que las descritas o ilustradas en la presente descripción.
Es de notar que el término "que comprende", usado en las reivindicaciones, no debe interpretarse como restringido a los medios que figuran a partir de entonces; no excluye otros elementos o etapas. Por lo tanto, debe interpretarse como que especifica la presencia de las características, números enteros, etapas o componentes indicados a que se refiere, pero no excluye la presencia o adición de una o más de otras características, números enteros, etapas o componentes, o grupos de estos. Por lo tanto, el alcance de la expresión "un dispositivo que comprende los medios A y B" no debe limitarse a dispositivos que consistan únicamente de los componentes A y B. Significa que, con respecto a la presente invención, los únicos componentes relevantes del dispositivo son A y B.
La referencia a lo largo de esta descripción a "en una modalidad" o "una modalidad" significa que un rasgo, estructura o característica particular que se describe en relación con la modalidad se incluye en al menos una modalidad de la presente invención. Así, la aparición a lo largo de esta descripción de la frase "en una modalidad" o "una modalidad" en diversos lugares a lo largo de esta descripción no son necesariamente todo lo referente a la misma modalidad, pero puede. Además, las características particulares, estructuras o características pueden combinarse de cualquier manera adecuada, como sería evidente para un experto en la técnica a partir de esta descripción, en una o más modalidades.
De manera similar se apreciará que la descripción de modalidades ilustrativas de la invención, diversas características de la invención a veces se agrupan juntas en una sola modalidad, Figura o descripción de esta con el propósito de racionalizar la descripción y ayudar en la comprensión de uno o más de los diversos aspectos inventivos. Este método de descripción, sin embargo, no debe interpretarse como el reflejo de una intención que la invención reivindicada requiere más características que son expresamente enumeradas en cada reivindicación. Más bien, como reflejan las siguientes reivindicaciones, los aspectos inventivos descansan en menos de todas las características de una sola modalidad descrita con anterioridad. Por lo tanto, las reivindicaciones a continuación de la descripción detallada se incorporan expresamente de este modo en esta descripción detallada, con cada reivindicación que se soporta por sí misma como una modalidad separada de esta invención.
En la descripción y dibujos proporcionadas en la presente descripción, se exponen numerosos detalles específicos. Sin embargo, se entiende que las modalidades de la invención pueden ponerse en práctica sin estos detalles específicos. En otros casos, métodos, estructuras y técnicas bien conocidos no se han mostrado en detalle para no ensombrecer una comprensión de esta descripción.
La invención se describirá ahora mediante una descripción detallada de varias modalidades de la invención, que está limitada por las reivindicaciones adjuntas.
Ejemplo 1 - Acidificación de la lactosa con ácidos orgánicos antes de la esterilización por calor
Se preparó una solución de lactosa 0,66 M disolviendo 226 g de lactosa en agua. El volumen final de la solución fue de 1 litro. A una temperatura de 30 °C a 35 °C, el pH se ajustó mediante el uso de citrato al 50 % (p/v) o ácido acético al 99 % (v/v). Posteriormente, la solución se esterilizó en autoclave vertical (Systec VX-65, Linden, Alemania) a 121 °C durante 20 minutos. Se tomaron muestras antes y después de la esterilización por calor y se mantuvieron congeladas antes del análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La HPLC se llevó a cabo mediante el uso de un detector de índice de refracción RID-10A (Shimadzu, Alemania) y una columna de amida Waters XBridge de 3,5 pm (250 x 4,6 mm) (Eschborn, Alemania) conectada a un sistema Shimadzu HPLC. La elución isocrática se llevó a cabo con un 30 % de solvente A (50 % (v/v) de acetonitrilo en agua bidestilada, 0,1 % (v/v) de NH4OH) y un 70 % de solvente B (80 % (v/v) de acetonitrilo en agua bidestilada, NH4OH al 0,1 % (v/v)) a 35 ° C y a una tasa de flujo de 1,4 mL min-1. Las muestras se aclararon mediante extracción en fase sólida en una matriz de intercambio iónico (Strata ABW, Phenomenex). Se aplicaron a la columna diez microlitros de la muestra (dilución de 1:5). Finalmente, se determinó la cantidad relativa de azúcares detectados. Como se representa en las tablas 1 y 2, la isomerización de lactosa inducida por esterilización térmica disminuyó con valores de pH decrecientes de las soluciones antes del tratamiento térmico. No se pudo observar formación de lactulosa a pH 4,0 a 3,0 o pH 3,0 cuando la acidificación se llevó a cabo con citrato o ácido acético, respectivamente. La degradación catalizada por ácido de la lactosa en sus monosacáridos aumentó con valores de pH más bajos, pero no fue detectable a pH 4,5.
Tabla 1: Cantidad relativa de azúcares detectada en soluciones de lactosa 0,66 M con pH ajustado antes y después de la esterilización por calor. El ajuste de pH se realizó mediante el uso de citrato al 50 % (p/v). Se representa la cantidad porcentual de azúcares (área bajo la curva; AUC) detectada por HPLC.
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Tabla 2: Cantidad relativa de azúcares detectada en soluciones de lactosa 0,66 M con pH ajustado antes y después de la esterilización por calor. El ajuste de pH se realizó mediante el uso de ácido acético al 80 % (v/v). Se representa la cantidad porcentual de azúcares (área bajo la curva; AUC) detectada por HPLC.
Figure imgf000009_0002
(continuación)
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Ejemplo 2 - Acidificación de la lactosa con ácidos inorgánicos antes de la esterilización por calor
Se preparó una solución de lactosa 0,66 M disolviendo 226 g de lactosa en agua. El volumen final de la solución fue de 1 litro. A una temperatura de 30 °C a 35 °C se ajustó el pH mediante el uso de ácido clorhídrico al 37 % (v/v), ácido fosfórico al 50 % (v/v) o ácido sulfúrico al 96 % (v/v). Posteriormente, la solución se esterilizó en autoclave vertical (Systec VX-65, Linden, Alemania) a 121 °C durante 20 minutos. Se tomaron muestras antes y después de la esterilización por calor y se mantuvieron congeladas antes del análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La HPLC se llevó a cabo mediante el uso de un detector de índice de refracción RID-10A (Shimadzu, Alemania) y una columna de amida Waters XBridge de 3,5 pm (250 x 4,6 mm) (Eschborn, Alemania) conectada a un sistema Shimadzu HPLC. La elución isocrática se llevó a cabo con un 30 % de solvente A (50 % (v/v) de acetonitrilo en agua bidestilada, 0,1 % (v/v) de NH4OH) y un 70 % de solvente B (80 % (v/v) de acetonitrilo en agua bidestilada, NH4OH al 0,1 % (v/v)) a 35 °C y a una tasa de flujo de 1,4 mL min-1. Las muestras se aclararon mediante extracción en fase sólida en una matriz de intercambio iónico (Strata ABW, Phenomenex). Se aplicaron a la columna diez microlitros de la muestra (dilución de 1:5). Finalmente, se determinó la cantidad relativa de azúcares detectados. Como se representa en las tablas 3, 4 y 5, la isomerización de lactosa inducida por esterilización térmica disminuyó como consecuencia de una mayor acidificación de las soluciones antes del tratamiento térmico. No se pudo observar formación de lactulosa a un pH de 3,5 a 3,0. Por el contrario, la degradación catalizada por ácido de la lactosa en sus monosacáridos aumentó con valores de pH más bajos, pero estuvo ausente a valores de pH de 4,5 a 4,0 o pH de 5,0 a 4,0 cuando se usaron ácido fosfórico y ácido sulfúrico o ácido clorhídrico para la acidificación, respectivamente.
Tabla 3: Cantidad relativa de azúcares detectada en soluciones de lactosa 0,66 M con pH ajustado antes y después de la esterilización por calor. El ajuste de pH se realizó mediante el uso ácido clorhídrico al 37 % (v/v). Se representa la cantidad porcentual de azúcares (área bajo la curva; AUC) detectada por HPLC.
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Tabla 4: antidad relativa de az cares detectada en soluciones de lactosa 0,66 M con pH ajustado antes y despu s de la esterilización por calor. El ajuste de pH se realizó mediante el uso de ácido fosfórico al 50 % (v/v). Se representa la cantidad porcentual de azúcares (área bajo la curva; AUC) detectada por HPLC.
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Tabla 5: Cantidad relativa de azúcares detectada en soluciones de lactosa 0,66 M con pH ajustado antes y después de la esterilización por calor. El ajuste de pH se realizó mediante el uso de ácido sulfúrico al 96 % (v/v). Se representa la cantidad porcentual de azúcares (área bajo la curva; AUC) detectada por HPLC.
Figure imgf000011_0002
Ejemplo 3 - Proceso de producción mejorado de 2'-fucosil lactosa
Un ingeniero E. coli BL21 (DE3) AnagAb AwcaJ AfuclK ApfkA cepa se utilizó de acuerdo con la Solicitud de patente europea 16196486, sobreexpresando enzimas para de novo síntesis de GDP-Fucosa (ManB, ManC, Gmd, WcaG), la L-fucoquinasa bifuncional/L-fucosa fosfato de 1-guanililtransferasa Bacteroides fragilis, el gen 2-fucosiltransferasa wbgL de E. coli:O126, el gen de la lactosa permeasa de encaje, el transportador de eflujo de azúcar yberc0001_9420 de Yersinia bercovieri ATCC 43970, El bifosfato de fructosa-1,6- aldolasa (fbaB) y una bifosfato de fructosa-1,6- fosfatasa heteróloga (fbpasar) de Pisum sativum.
La cepa de E. coli se cultivó en un fermentador de 3 L a 33 °C en un medio de sales minerales que contiene 3 g/L KH2PO4, 12 g/L K2HPO4, 5 g/L (NH4)2SO4, 0,3 g/L ácido cítrico, 2 g/L MgSO4 x 7H2O, 0,1 g/l de NaCl y 0,015 g/l de CaCl2 x 6H2O con 1 mL/L de trazas de solución elemental de (54,4 g/L de citrato férrico de amonio, 9,8 g/L de MnCh x 4H2O, 1,6 g/L CoCl2 x 6H2O, 1 g/L CuCh x 2H2O, 1,9 g/L H3BO3, 9 g/L ZnSO4 x 7H2O, 1,1 g/l Na2MoO4 x 2H2O, 1,5 g/l Na2SeO3, 1,5 g/L NiSO4 x 6H2O), glicerol al 2 % (v/v) como única fuente de carbono y energía, así como también 60 mM de lactosa esterilizada por calor, que se acidificó a pH 3,0 con ácido sulfúrico al 96 % (v/v) antes de la esterilización. El pH se mantuvo en 7,0 valorando con amoníaco al 25 %. El fermentador se inoculó a una OD600 de 0,1 con un precultivo crecido en el medio descrito pero sin lactosa. Después de salir el lote de la fase discontinua, indicado por un aumento en el nivel de oxígeno disuelto, la alimentación de glicerol (60 % v/v) así como también la alimentación de lactosa 0,66 M (acidificada a pH 3,0 mediante el uso de ácido sulfúrico al 96 % (v/v) antes esterilización por calor). Se mantuvo una concentración de lactosa de 10-40 mM durante toda la fase de producción del proceso de fermentación, regulada de acuerdo con análisis HPLC. Se alimentó glicerol (60 % v/v) con tasas de flujo de 6-8 ml/L/h (referido al volumen inicial). La fermentación se detuvo cuando el volumen de llenado en el tanque alcanzó su máximo. En este punto, se determinó un título de 2'-fucosil lactosa de 146 g/L en el sobrenadante de cultivo del caldo.
En el transcurso de procesos de fermentación de 2'-fucosilacosa mediante el uso de lactosa filtrada estéril, en lugar de lactosa acidificada esterilizada por calor, se lograron títulos comparables de 2'-fucosil lactosa. Además, el tipo y las cantidades de subproductos detectados en el caldo de cultivo de las fermentaciones realizadas con lactosa esterilizada por filtración o por calor (acidificada) fueron comparables. Ninguno de los sub- productos del tipo lactulosa, epilactosa, fucosil lactulosa o fucosil lactosa, así como también ningún otro sub- producto que pueda originarse de la adición de lactosa esterilizada por calor, se detectó en el caldo cuando se proporcionó lactosa esterilizada por calor y acidificada para la fermentación.

Claims (9)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Un método para inhibir la isomerización de un sacárido reductor en una solución acuosa que contiene dicho sacárido reductor tras un tratamiento térmico para esterilizar dicha solución acuosa de sacárido, el método comprende la etapa de acidificar la solución acuosa de sacárido antes y/o en el transcurso del tratamiento térmico, en donde el tratamiento térmico comprende calentar la solución acuosa de sacárido a una temperatura en el intervalo de 115 °C a 150 °C y mantener la temperatura hasta 60 minutos; esterilizar en autoclave la solución acuosa de sacárido a 121,1 °C durante 15 a 30 minutos; calentar la solución acuosa a una temperatura de 130 °C a 150 °C y mantener la temperatura hasta 5 minutos; o someter la solución acuosa a una temperatura de entre 71,5 °C a 74 °C, durante 15 a 30 segundos, y en donde la solución acuosa de sacárido se acidifica mediante la adición de al menos un ácido a dicha solución acuosa de sacárido.
  2. 2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la solución acuosa de sacárido se acidifica a un pH que tiene un valor de entre 1 y 6.
  3. 3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el ácido es un ácido inorgánico seleccionado del grupo que consiste en ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfuroso, ácido fosfórico, ácido bórico, ácido fluorhídrico, ácido bromhídrico, ácido perclórico, ácido yodhídrico y ácido carbónico.
  4. 4. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el ácido es un ácido orgánico seleccionado del grupo que consiste en ácidos monocarboxílicos, ácidos dicarboxílicos y ácidos tricarboxílicos.
  5. 5. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el azúcar reductor se selecciona del grupo que consiste en aldosas, disacáridos y oligosacáridos, en donde el disacárido se selecciona del grupo que consiste en lactosa y maltosa.
  6. 6. Uso de una solución acuosa estéril de sacárido que contiene al menos un sacárido reductor obtenido mediante un método como se reivindicó en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en un método de producción biotecnológica de un oligosacárido de leche humana, dicho método comprende las etapas de: - proporcionar al menos una célula que sea capaz de producir el oligosacárido de la leche humana;
    - cultivar la al menos una célula en un caldo de fermentación que contiene y/o se complementa con la solución acuosa estéril de sacárido, en donde el sacárido reductor está presente en la solución estéril en una concentración de > 0,66 M, para que la al menos una célula produzca el oligosacárido de la leche humana; y
    - opcionalmente purificar el producto biológico del caldo de fermentación,
    en donde el oligosacárido de la leche humana se produce en una cantidad de > 100 g/L en el caldo de fermentación, en una cantidad de > 150 g/L en el caldo de fermentación y en una cantidad de > 200 g/L en el caldo de fermentación al final del proceso de fermentación.
  7. 7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el sacárido reductor está presente en la solución acuosa estéril de sacárido en una concentración de > 1 M.
  8. 8. El uso de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en donde la solución acuosa estéril es una solución acuosa esterilizada por calor húmedo que contiene lactosa.
  9. 9. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde el oligosacárido de la leche humana se selecciona del grupo que consiste en 2'-fucosil lactosa, 3-fucosil lactosa, 2',3-difucosil lactosa, lacto-A/-triosa II, lacto-A/-tetraosa, lacto-W-neotetraosa, lacto-W-fucopentaosa I, lacto-W-neofucopentaosa I, lacto-A/-fucopentaosa II, lacto-W-fucopentaosa III, lacto-W-fucopentaosa V, lacto-W-neofucopentaosa V, lacto-W-difucohexaosa I, lacto-W-difucosilhexaosa II, para-Lacto-W-fucosilhexaosa, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa b, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa c, fucosil-lacto-W-sialilpentaosa c, disialil-lacto-W-fucopentaosa, 3-fucosil-3'-sialil lactosa, 3-fucosil-6'-sialil lactosa, lacto-W-neodifucohexaosa I, 3'-sialil lactosa, 6'-sialil lactosa, sialil lacto-W-tetraosas LST-a, LST-b, LST-c y disialil lacto-W-tetraosa.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112021009478A2 (pt) * 2018-12-14 2021-08-10 Société des Produits Nestlé S.A. composição aquosa estável compreendendo oligossacarídeos
EP3911659A4 (en) * 2019-01-16 2022-09-28 Glycom A/S AMORPHOUS SIALYLATED OLIGOSACCHARIDES
DK181991B1 (en) * 2021-11-11 2025-05-15 Dsm Ip Assets Bv Combined fermentation process for producing one or more human milk oligosaccharide(s) (hmo(s)) in escherichia coli

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1052210A (en) * 1911-03-07 1913-02-04 Charles De Bock Sterilizing apparatus.
GB423063A (en) * 1933-12-06 1935-01-24 Ninni Maria Kronberg Improvements relating to the manufacture of milk powder
US2826502A (en) * 1955-04-28 1958-03-11 Nat Dairy Prod Corp Conversion of lactose to glucose and galactose with a minimum production of oligosaccharides
JPS52122663A (en) * 1976-04-08 1977-10-15 Karupisu Shiyokuhin Kougiyou K Method of producing strainght sour mild drink
EP0349712A1 (de) * 1988-04-11 1990-01-10 Biodyn AG Nahrungsmittel oder Getränk
US6171633B1 (en) * 1998-08-14 2001-01-09 Natura, Inc. Milk-based drink
WO2011032957A1 (de) * 2009-09-16 2011-03-24 Gea Mechanical Equipment Gmbh Verfahren zur herstellung von länger haltbarer frischmilch
AU2012217650B9 (en) * 2011-02-16 2017-09-14 Glycosyn LLC Biosynthesis of human milk oligosaccharides in engineered bacteria
US9029136B2 (en) * 2012-07-25 2015-05-12 Glycosyn LLC Alpha (1,2) fucosyltransferases suitable for use in the production of fucosylated oligosaccharides
WO2015032413A1 (en) * 2013-09-06 2015-03-12 Glycom A/S Fermentative production of oligosaccharides
US9902984B2 (en) 2013-09-06 2018-02-27 Glycom A/S Fermentative production of oligosaccharides
ES2875327T3 (es) 2013-09-10 2021-11-10 Chr Hansen Hmo Gmbh Producción de oligosacáridos
JP6443442B2 (ja) * 2014-03-13 2018-12-26 三菱ケミカル株式会社 糖液の処理方法、処理糖液の製造方法、有機化合物の製造方法、および微生物の培養方法
ES2715010T3 (es) * 2014-03-31 2019-05-31 Jennewein Biotechnologie Gmbh Fermentación total de oligosacáridos
CA2945661C (en) * 2014-05-15 2023-10-17 Glycosyn LLC Alpha (1,2) fucosyltransferase syngenes for use in the production of fucosylated oligosaccharides
CA2960835A1 (en) * 2014-09-09 2016-03-17 Glycosyn LLC Alpha (1,3) fucosyltransferases for use in the production of fucosylated oligosaccharides
EP3315610B1 (en) 2016-10-29 2020-12-16 Jennewein Biotechnologie GmbH Process for the production of fucosylated oligosaccharides

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