ES2942463T3 - Sal cristalina 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol del ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico - Google Patents

Abstract

La invención proporciona la sal tris de 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridina ácido -2-il)benzoico como un anhidro cristalino o trihidrato; así como polimorfos, composiciones farmacéuticas, formas de dosificación, y el uso de los mismos en el tratamiento de enfermedades, condiciones o trastornos modulados por la inhibición de una(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa (ACC) en un animal. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Sal cristalina 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol del ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico

Campo de la invención

La invención proporciona la sal tris del ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidropiro[indazol-5,4-piperidina]-1-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico; así como formas cristalinas, polimorfos, composiciones farmacéuticas, formas de dosificación, y el uso de los mismos en el tratamiento de enfermedades, afecciones o trastornos modulados por la inhibición de una(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa (ACC) en un animal.

Antecedentes de la invención

El ácido 4-(4-(1-Isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico (denominado en el presente documento Compuesto 1) es un inhibidor selectivo de ACC y se preparó como el ácido libre en el Ejemplo 9 del documento US 8,859,577que es la fase nacional estadounidense de la solicitud internacional No. PCT/IB2011/054119, todos los cuales se incorporan en la presente memoria por referencia en su totalidad a todos los efectos. El Compuesto 1, como ácido libre, tiene características fisicoquímicas inadecuadas.

La formación de sales proporciona un medio para alterar las características fisicoquímicas y biológicas resultantes de un fármaco sin modificar su estructura química. La forma de una sal puede influir drásticamente en las propiedades del fármaco. La selección de una forma de sal adecuada implica la evaluación de muchos factores, entre ellos si se puede formar alguna sal. Otros factores incluidos en esta selección son la higroscopicidad, la estabilidad, la solubilidad y el perfil de proceso de cualquier forma de sal que se pueda descubrir.

La enfermedad del hígado graso no alcohólico (HGNA) es la manifestación hepática del síndrome metabólico y es un espectro de afecciones hepáticas que abarca la esteatosis, la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), la fibrosis, la cirrosis y, en última instancia, el carcinoma hepatocelular. La HGNA y la EHNA se consideran las principales enfermedades del hígado graso, dado que representan la mayor proporción de individuos con lípidos hepáticos elevados. La gravedad de la NAFLD/NASh se basa en la presencia de lípidos, el infiltrado de células inflamatorias, el abombamiento de los hepatocitos y el grado de fibrosis. Aunque no todos los individuos con esteatosis evolucionan a EHNA, una porción importante lo hace.

Cada vez está más claro que la acumulación hepática de lípidos causa resistencia hepática a la insulina y contribuye a la patogénesis de la diabetes de tipo 2 (T2D). Savage, et al., demostraron que tanto ACC1 como ACC2 intervienen en la regulación de la oxidación de grasas en los hepatocitos, mientras que ACC1, la isoforma dominante en el hígado de rata, es el único regulador de la síntesis de ácidos grasos. Además, en su modelo, la reducción combinada de ambas isoformas es necesaria para reducir significativamente los niveles hepáticos de malonil-CoA, aumentar la oxidación de grasas en estado de alimentación, reducir la acumulación de lípidos y mejorar la acción de la insulina in vivo. De este modo, los inhibidores hepáticos de ACC1 y ACC2 pueden ser útiles en el tratamiento de la NAFLD y la resistencia hepática a la insulina. Véase el documento, Savage, D. B., et al., "Reversal of diet-induced hepatic steatosis and hepatic insulin resistance by antisense oligonucleotide inhibitors of acetyl-CoA carboxylases 1 and 2" J. Clin. Invest. 2006; 116 (3):817 24. Véase también el documento, Oh, W., et al., "Glucose and fat metabolism in adipose tissue of acetyl-CoA carboxylase 2 knockout mice" PNAS, 102(5) 1384-1389 (2005).

En consecuencia, se necesitan medicamentos orales que contengan inhibidores de ACC1 y/o ACC2 para tratar enfermedades tales como NAFLD, NASH y T2D.

Sumario de la invención

La invención proporciona polimorfos cristalinos de la sal tris del ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico, denominado en el presente documento Compuesto 1, en el que la sal cristalina puede ser anhidra o un hidrato, más específicamente, un trihidrato; así como polimorfos, composiciones farmacéuticas, formas de dosificación, y el uso de los mismos en el tratamiento de enfermedades, afecciones o trastornos modulados por la inhibición de una(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa (ACC) en un animal. Las nuevas formas cristalinas de la presente invención tienen propiedades que son particularmente adecuadas para su uso como fármaco, incluyendo una mejor solubilidad y biodisponibilidad.

Las formas sólidas cristalinas del Compuesto 1, en las que cada forma se puede identificar de forma exclusiva por medio de varios parámetros analíticos diferentes, solos o en combinación, tales como, pero sin limitación, picos de patrón de difracción de rayos X en polvo o combinaciones de dos o más picos; desplazamientos químicos de 13C y/o 15N de RMN en estado sólido o combinaciones de dos o más desplazamientos químicos; picos de desplazamiento de Raman o combinaciones de dos o más picos de desplazamiento de Raman; o combinaciones de los mismos.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 muestra un patrón ilustrativo de PXRD de la Forma 1 llevado a cabo en un difractómetro Bruker AXS D4 Endeavor equipado con una fuente de radiación de Cu.

La FIG. 2 muestra un patrón ilustrativo de los espectros Raman de la Forma 1 que se recogieron mediante el uso de un accesorio Nicolet NXR FT-Raman conectado al banco FT-IR.

La FIG. 3 muestra un patrón ilustrativo de 13CssRMN que se llevó a cabo en una sonda Bruker-BioSpin CPMAS colocada en un espectrómetro de RMN Bruker-BioSpin Avance III de 500 MHz (frecuencia 1H).

La FIG. 4 muestra un patrón ilustrativo de PXRD de la Forma 2 llevado a cabo en un difractómetro Bruker AXS D4 Endeavor equipado con una fuente de radiación de Cu.

La FIG. 5 muestra un patrón ilustrativo de los espectros Raman de la Forma 2 que se recogieron mediante el uso de un accesorio Nicolet NXR FT-Raman conectado al banco FT-IR.

La FIG. 6 muestra un patrón ilustrativo de 13CssRMN que se llevó a cabo en una sonda Bruker-BioSpin CPMAS colocada en un espectrómetro de RMN Bruker-BioSpin Avance III de 500 MHz (frecuencia 2H).

La FIG. 7 muestra una estructura monocristalina ilustrativa de la Forma 2.

Descripción detallada de la invención

El Compuesto 1 contiene dos sitios ionizables: el nitrógeno del anillo de piridina y el ácido carboxílico. La invención proporciona una sal tris cristalina del compuesto 1 (ácido 4-(4-(1-lsopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico). La invención se refiere a la sal mono-tris del Compuesto 1. Existen dos formas cristalinas de la sal mono-tris: La forma 1 es un sólido cristalino anhidro y la forma 2 es un sólido cristalino trihidratado. La forma 3 es una forma amorfa.

Definiciones

El término "tris" significa 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol, también conocido como THAM y trometamina. La sal tris del Compuesto 1 significa una sal del Compuesto 1 hecha mediante el uso de 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol. Tris se asocia con la fracción de ácido carboxílico del compuesto 1. A menos que se indique lo contrario, cuando se hace referencia a la sal tris del Compuesto 1, el contraión y el Compuesto 1 están en una relación estequiométrica de aproximadamente 1:1.

El término "Forma 1" significa la sal cristalina anhidra 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (tris) del Compuesto 1 como la sal mono-tris. Se pretende que la Forma 1 no contenga agua, pero podría haber disolvente residual, incluida agua, si el material no se seca completamente.

El término "Forma 2" significa la sal cristalina trihidratada 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (tris) del Compuesto 1 como sal mono-tris.

El término "trihidrato" utilizado en la presente memoria se refiere a la inclusión de unas tres moléculas de agua. El término "aproximadamente" significa en un 10%, preferentemente comprendido en un 5%, y más preferentemente comprendido en un 1 % de un valor o intervalo dado. Alternativamente, el término "aproximadamente" significa dentro de un error estándar aceptable de la media, cuando es considerado por un experto en la materia.

G o g significa gramo, y mg significa miligramo.

H o h significa hora.

IPA significa alcohol isopropílico.

L es litro. mL es mililitro.

MCC significa celulosa microcristalina.

HR significa humedad relativa.

RT o rt significa temperatura ambiente, que es la misma que la temperatura ambiente (entre 20 y 25°C).

Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) H1 fueron en todos los casos consistentes con las estructuras propuestas. Los desplazamientos químicos característicos (8) se indican en partes por millón en relación con la señal de protones residuales en el disolvente deuterado (CHCh a 7,27 ppm; CD2HOD a 3,31) y se indican mediante el uso de las abreviaturas convencionales para designar los picos principales: por ejemplo, s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; br, amplio.

ssRMN significa estado sólido de RMN.

PXRD significa difracción de rayos X en polvo.

HR significa humedad relativa.

El término "sustancialmente iguales" cuando se utiliza para describir patrones de difracción de polvo de rayos X se entiende que incluye patrones en los que los picos están dentro de una desviación estándar de /- 0,2° 2©.

Como se usa en la presente memoria, la expresión "sustancialmente puro" con respecto a una forma cristalina particular significa que la forma cristalina incluye menos del 10 %, preferentemente menos del 5 %, preferentemente menos del 3 %, preferentemente menos del 1 % en peso de cualquier otra forma física del compuesto.

Se evaluaron muy pocos contraiones para formar una sal en el nitrógeno del Compuesto 1 debido al bajo pKa y a los pobres resultados, por ejemplo, se obtuvo un sólido muy higroscópico mediante el uso de ácido sulfúrico como contraión.

Muchos contraiones investigados no dieron una forma de sal, sino el ácido libre al aislarse: histidina, lisina (con Na y Ca), L-ornitina (con Na). Los intentos de utilizar arginina (con Na) dieron como resultado el ácido libre por disociación al secarse. Los resultados de la evaluación de muchos contraiones se muestran en la Tabla 1. Las sales se obtuvieron al añadir la solución madre del Compuesto 1 a la fuente de contraión, en una proporción aproximada de 1:1 con el Compuesto 1. La cantidad calculada de contraión para dar una relación molar 1:1 con el Compuesto 1 (como ácido libre) se indica entre paréntesis en la columna que identifica el contraión. La cantidad real de contraión añadida se indica entre paréntesis cuando se facilitan los resultados para cada contraión en los distintos disolventes. Se preparó una solución madre del Compuesto 1 (como ácido libre) en un disolvente dado y se añadió al contraión en el disolvente dado y, a continuación, se añadió disolvente adicional para obtener un volumen total indicado entre paréntesis debajo del disolvente en la Tabla 1. Cada muestra se observó durante una semana, durante la cual la muestra se calentó a unos 50 °C durante unas 3 h y se dejó enfriar a temperatura ambiente con agitación. Para los experimentos en los que se utilizó metanol (MeOH), etanol (EtOH) y acetato de isopropilo/acetato de etilo (IPAC/EtOAc), la muestra se observó durante un total de tres semanas. El cuadro 1 recoge lo observado durante este tiempo. Para algunas muestras, se añadieron 2 mL de heptanos después de la primera semana, y esto se identifica con un * en la Tabla 1. Para el metanol y el acetonitrilo (ACN), la solución madre era de 15 mg/mL. Para el etanol, la solución madre era de 30 mg/mL. Para IPAC/EtOAc, la solución madre fue de 13,6 mg/mL en 50 mL de IPAC/5 mL de EtOAc incluyendo unas gotas de agua. El volumen total (vol.) se indica entre paréntesis debajo de cada disolvente examinado.

Tabla 1 - Evaluación de la sal

Determinar si se formaría un sólido era sólo uno de los factores de esta evaluación. Aunque se formaron sólidos cristalinos al fabricar sales mediante el uso de calcio, potasio y sodio, los sólidos cristalinos eran demasiado higroscópicos para continuar la evaluación. No se obtuvieron datos de higroscopicidad para muchas de estas sales porque se observó principalmente a través de la visualización. Por ejemplo, al recoger las formas de sal de calcio y potasio en papel de filtro, el material sólido se convirtió en una goma. Se aisló el compuesto 1 como sal de colina; se observó una higroscopicidad superior al 20% de cambio de peso a una humedad relativa del 30%. Además, aunque se obtuvo un sólido para las sales de dietanolamina, dietilamina y piperazina, no se prosiguió con estas sales. Véase, por ejemplo el documento C. Saal, A. Becker, Euro. J. of Pharm Sci 49 (2013) 614-623; G. Steffen Paulekuhn, et al, J. Med. Chem., 2007, 50(26), 6665-6672.

Además, aunque se obtuvo un sólido, se utilizó una evaluación adicional, como 1HRMN para determinar si realmente se formó una sal. En algunos casos, el sólido obtenido era el Compuesto 1 (como ácido libre) y no asociado al contraión.

A temperatura ambiente con HR superior al 20%, la Forma 2 es la forma más estable entre la Forma 1 y la Forma 2. Las condiciones del disolvente afectan a la obtención de la Forma 1 o la Forma 2. Se determinó que una actividad crítica del agua de 0,2 en IPA/agua proporciona la Forma 2 cristalina. Los siguientes disolventes, cuando se utilizan en presencia de agua, proporcionan la Forma 2: 5% a 15% de agua/acetona, 4% de agua/96% de acetonitrilo, 1% de agua/99% de acetato de butilo, 1% de agua/99% de acetato de isopropilo, 1% de agua/99% de acetato de etilo, 2% de agua/ 98% de dicloroetileno, 2% de agua/98% de metiletilcetona, 3 a 6,0% de agua/97 a 94% de 2-metiltetrahidrofurano y 4% de agua/96% de n-propanol.

El compuesto 1 también se enfrentó a problemas de solubilidad. La Tabla 2 muestra la solubilidad del Compuesto 1 (como ácido libre) y de diversas sales. El compuesto 1 (como ácido libre) resultó ser una forma inaceptable para elaborar una forma de dosificación para administración oral rutinaria. Aunque el Compuesto 1 (como ácido libre) era cristalino, la solubilidad termodinámica no era consistente. La sal de calcio tenía una solubilidad extremadamente baja a pH bajo.

Tabla 2 - Solubilidad termodinámica del compuesto 1 y formas salinas

Se buscó una forma salina porque el Compuesto 1 (como ácido libre) no proporcionó un resultado consistente; sin limitación, se pensó que el ácido libre podría existir como múltiples hidratos/solvatos no estequiométricos. Como se observa en la Tabla 2, la solubilidad del ácido libre varió entre los tres lotes a cada pH.

Se llevaron a cabo trabajos adicionales comparando el ácido libre y las sales de tris en estudios farmacocinéticos como se indica en la Tabla 3. La sal mono-tris del Compuesto 1, tanto si se trataba de la Forma 1 como de la Forma 2, presentaba una farmacocinética similar. La sal mono-tris del Compuesto 1 tuvo una farmacocinética mucho mejor que el Compuesto 1 (como ácido libre). Aunque la suspensión se preparó con la Forma 1 anhidra, es probable que la Forma 2 trihidratada también estuviera presente dado el medio acuoso. No se identificó la forma presente en la suspensión.

Tabla 3 - Farmacocinética de formas seleccionadas del compuesto 1

La forma 1 es anhidra y es termodinámicamente estable por debajo de una actividad de agua de aproximadamente 0,2 (20% HR) a temperatura ambiente. La forma 1 tiene un patrón PXRD sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 1. Picos de PXRD característicos de la forma 1, expresados como 2© ± 0.2° 2© se encuentran en 9,6, 10,7 y 11,3. Localización de los picos e intensidades del patrón PXRD de la FIG. 1 figuran en la Tabla 4.

Tabla 4 - Picos de PXRD e intensidades relativas de la Forma 1

La forma 1 tiene un espectro Raman sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 2. La forma 1 presenta desplazamientos de pico Raman característicos, expresados en cm-1, a 568, 698, 989, 1218, 1511, 1561 y 1615, ± 2 cm-1. Posiciones de los picos (± 2 cm-1) e intensidad normalizada (W = débil, M = media, S = fuerte) de la Forma 1 de la FIG. 2 figuran en la Tabla 5.

Tabla 5 - Picos Raman e Intensidad Normalizada de la Forma 1

La forma 1 tiene un espectro 13C ssRMN sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 3. La forma 1 presenta desplazamientos químicos 13C ssRMN característicos, expresados en ppm, a 22,9, 146,2, 157,9, 161,9 y 172,9, ± 0,2 ppm. desplazamientos químicos 13C (± 0,2 ppm) de la Forma 1, como se muestra en la FIG. 3 figuran en la Tabla 6.

Tabla 6 - Desplazamientos químicos 13C e Intensidad de la Forma 1

La forma 2 es un trihidrato y es termodinámicamente estable por encima de una actividad de agua de aproximadamente 0,2 a temperatura ambiente y 20% HR. La forma 2 tiene un patrón PXRD sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 4. Picos de PXRD característicos de la forma 2, expresados como 2© ± 0.2° 2© se encuentran en 8,4, 9,0, 10,5, 15,0 y 24,7. Localización de los picos e intensidades del patrón PXRD de la FIG. 4 figuran en la Tabla 7.

Tabla 7 - Picos de PXRD e intensidades relativas de la Forma 2

La forma 2 tiene un espectro Raman sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 5. La forma 2 presenta un desplazamiento de pico Raman característico, expresado en cm-1, a 562, 692, 984, 1225, 1507, 1557 y 1610 ± 2 cm-1. Posiciones de los picos (± 2 cm-1) e intensidad normalizada (W = débil, M = media, S = fuerte) de la Forma 2 de la FIG. 5 figuran en la Tabla 8.

Tabla 8 - Picos Raman e Intensidad Normalizada de la Forma 2

La forma 2 tiene un espectro 13C ssRMN sustancialmente igual al mostrado en la FIG. 6. La forma 2 presenta desplazamientos químicos 13C ssRMN característicos, expresados en ppm, a 19,2, 149,5, 155,6, 163,8 y 188,3, ± 0,2 ppm. desplazamientos químicos 13C (± 0,2 ppm) de la Forma 2, como se muestra en la FIG. 6 figuran en la Tabla 9.

Tabla 9 - Desplazamientos químicos 13C e Intensidad de la Forma 2

En base a la divulgación proporcionada en el presente documento, un experto en la técnica apreciaría que cada Forma 1 y Forma 2 puede ser identificada de forma única por varios picos o patrones espectrales diferentes en combinaciones variables. A continuación se describen combinaciones ejemplares de valores de pico característicos que se pueden utilizar para identificar por separado la Forma 1 y la Forma 2, pero en ningún caso se deben considerar estas combinaciones ejemplares como limitativas de otras combinaciones de valores de pico divulgadas en el presente documento.

Un aspecto de la presente invención proporciona una sal cristalina 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol de ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico (Compuesto 1).

Otro aspecto de la presente invención proporciona la sal cristalina del Compuesto 1, en la que la proporción de ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico (Compuesto 1) y la sal es 1:1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la sal cristalina como una sal cristalina anhidra del Compuesto 1 (Forma 1).

Otro aspecto de la presente invención proporciona la sal cristalina como sal cristalina trihidratada del Compuesto 1 (Forma 2).

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 9,6, 10,7 y 11,32©, ± 0.2° 2©.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un patrón PXRD que comprende picos, expresados como 2©sustancialmente el mismo que se muestra en la FIG. 1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1511, 1561 y 1615 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 989, 1218, 1511, 1561, y 1615 cm-1, ± 2 cm -1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 568, 698, 989, 1218, 1511, 1561, y 1615 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico, expresados en cm-1, sustancialmente iguales a los mostrados en la FIG. 2. Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro 13C ssRNM que comprende desplazamientos químicos a 22,9, 146,2 y 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro 13C ssRNM que comprende desplazamientos químicos a 22,9, 146,2, 157,9, 161,9, y 172,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un espectro de 13CssRMN que comprende desplazamientos químicos, expresados en ppm, sustancialmente iguales a los mostrados en la FIG.

3.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1561 y 1615 cm-1, ± 2 cm-1, y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2, o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1511 y 1615 cm-1, ± 2 cm-1, y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2, o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamiento de pico a 1615 cm-1, ± 2 cm-1, y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2, o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamiento de pico a 1561 cm-1, ± 2 cm-1, y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2, o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos a 22,9 y 161,9 ppm, ± 0,2 ppm, y un espectro Raman que comprende al menos un desplazamiento de pico a 1511, 1561, o 1615 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos a 146,2 y 161,9 ppm, ± 0,2 ppm, y un espectro Raman que comprende al menos un desplazamiento de pico a 1511, 1561, o 1615 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 9,6 y 10,72©, ± 0.2° 2©, y un espectro Raman que comprenda al menos un desplazamiento de pico a 1511, 1561 o 1615 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 1, en la que la Forma 1 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 9,6 y 10,7 2©, ± 0.2° 2©, y un espectro de 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2 o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4, 9,0, 10,52©, ± 0.2° 2©.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4, 9,0, 10,5, 15,0 y 24,72©, ± 0.2° 2©.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un patrón PXRD que comprende picos, expresados como 2©sustancialmente el mismo que se muestra en la FIG. 4.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1507, 1557 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 984, 1225, 1507, 1557 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 562, 692, 984, 1225, 1507, 1557 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico, expresados en cm-1, sustancialmente iguales a los mostrados en la FIG. 5. Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro 13C ssRNM que comprende desplazamientos químicos a 19,2, 149,5 y 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un espectro 13C ssRNM que comprende desplazamientos químicos a 19,2, 149,5, 155,6, 163,8, y 188,3 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que dicha Forma 2 tiene un espectro 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos, expresados en ppm, sustancialmente iguales a los mostrados en la FIG. 6.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en

un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,02©, ± 0.2° 2©;

un espectro Raman que comprenda desplazamientos de pico en 1557 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1; y

un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5 o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en

un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 10,52©, ± 0.2° 2©;

un espectro Raman que comprenda desplazamientos de pico en 1507 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1; y

un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5 o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende un desplazamiento de pico a 1557 cm-1, ± 2 cm-1; y un espectro 13CssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5, o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamiento de pico a 1610 cm-1, ± 2cm-1; y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5, o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos a 19,2 y 149,5 ppm, ± 0,2 ppm; y un espectro Raman que comprende al menos un desplazamiento de pico a 1507, 1557 o 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos a 149,5 y 163,8 ppm, ± 0,2 ppm; y un espectro Raman que comprende al menos un desplazamiento de pico a 1507, 1557 o 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,0 2©, ± 0.2° 2©; y un espectro Raman que comprende al menos un desplazamiento de pico a 1507, 1557 o 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

Otro aspecto de la presente invención proporciona la Forma 2, en la que la Forma 2 tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,0 2©, ± 0.2° 2©; y un espectro de 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5 o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

La invención también incluye:

una sal cristalina del Compuesto 1, incluyendo la Forma 1 y/o Forma 2, como se describe en el presente documento, para su uso como medicamento; la sal cristalina del Compuesto 1, incluyendo la Forma 1 y/o Forma 2, para su uso en el tratamiento de enfermedades incluyendo NAFLD, NASH, y T2D; y

uso de una sal cristalina del Compuesto 1, incluyendo la Forma 1 y/o la Forma 2, como se describe en el presente documento, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que incluyen NAFLD, NASH y T2D.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de las Formas 1 o 2 como se describen en la presente memoria En un aspecto adicional, la invención proporciona una forma de dosificación oral que comprende cualquiera de las Formas 1 o 2 o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria. Por ejemplo, en una realización, la forma de dosificación oral es una tableta, un comprimido o una cápsula. Por ejemplo, en una realización, la forma de dosificación oral es un comprimido o una cápsula.

El régimen de dosificación para los compuestos de la invención y/o las composiciones que contienen dichos compuestos se basa en una variedad de factores, que incluyen el tipo, la edad, el peso, el sexo y la condición médica del paciente; la gravedad de la afección; la vía de administración; y la actividad del compuesto particular empleado. De este modo, el régimen de dosificación puede variar mucho. Para un humano adulto normal con un peso corporal de unos 100 kg, una cantidad de dosificación diaria típica está en el intervalo de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal es típicamente suficiente, preferentemente de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 5,0 mg/kg, más preferentemente de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg. Sin embargo, puede ser necesaria cierta variabilidad en el intervalo de dosificación general en función de la edad y el peso del sujeto tratado, la vía de administración prevista, el compuesto concreto administrado y otros factores similares. La determinación de los intervalos de dosificación y las dosis óptimas para un paciente en particular está dentro de la capacidad de un experto en la técnica que tenga el beneficio de la presente divulgación. También se señala que los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en formulaciones de liberación sostenida, liberación controlada y liberación retardada, cuyas formas también son bien conocidas por un experto en la técnica.

En otro aspecto, la invención comprende composiciones farmacéuticas. Tales composiciones farmacéuticas comprenden una Forma 1 o una Forma 2 con un portador aceptable para uso farmacéutico. También pueden estar presentes otras sustancias farmacológicamente activas. Como se utiliza en la presente memoria, el "portador aceptable para uso farmacéutico" incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares que sean fisiológicamente compatibles. Los ejemplos de portadores aceptables para uso farmacéutico incluyen uno o más de agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos, y pueden incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio o polialcoholes tales como manitol o sorbitol en la composición. Sustancias aceptables para uso farmacéutico, tales como agentes humectantes o pequeñas cantidades de sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes o tampones, que mejoran la vida útil o la eficacia del anticuerpo o de la porción de anticuerpo.

La administración oral de una forma de dosis sólida puede ser, por ejemplo, presentada en unidades discretas, tales como cápsulas duras o blandas, píldoras, cachets, pastillas o tabletas, cada una de las cuales contiene una cantidad predeterminada de al menos un compuesto de la invención. En otra realización, la administración oral puede ser en forma de polvo o gránulos. En otra realización, la forma de la dosis oral es sub-lingual, tal como, por ejemplo, una pastilla. En dichas formas farmacéuticas sólidas, los compuestos de la Fórmula I se combinan normalmente con uno o más adyuvantes. Dichas cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada. En el caso de las cápsulas, los comprimidos y las píldoras, las formas farmacéuticas también pueden comprender agentes amortiguadores o se pueden preparar con revestimientos entéricos.

Ejemplos

En la preparación del Compuesto 1, se observa que algunos de los procedimientos de preparación descritos en la presente memoria pueden requerir la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria, carboxilo en los precursores de la Fórmula I). La necesidad de dicha protección variará de acuerdo con la naturaleza de la funcionalidad a distancia y las condiciones de los procedimientos de preparación. La necesidad de dicha protección es fácilmente determinable por los expertos en la técnica. El uso de tales procedimientos de protección/desprotección también está dentro de la habilidad en la técnica. Para una descripción general de los grupos de protección y su uso, véase T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991. Además, esta invención no se limita a procedimientos sintéticos específicos proporcionados en el presente documento que pueden variar.

Intermedio 1: 1-Isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperldin]-7(1H)-ona, sal clorhidrato.

Etapa 1. 9-oxo-3-azaspiro[5.5]undec-7-ene-3-carboxilato de terc-butilo.

Se cargó un reactor seco con 4-formilpiperidina-1-carboxilato de terc-butilo (108 Kg), ciclohexano (1080 L) y pirrolidina (64,8 Kg) a 25-30 °C. La mezcla se agitó 5-10 min y después se calentó a reflujo durante 12-16h, mientras se recogía agua mediante el uso de una trampa Dean-Stark. La mezcla se agitó 5-10 min, y después se calentó a reflujo durante 12-16h, mientras se recogía el agua mediante el uso de una trampa Dean-Stark. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 50-60 °C, temperatura a la que se aplicó vacío para destilar el exceso de pirrolidina y ciclohexano. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 25-30 °C y se cargó ciclohexano (648 L), seguido de metilvinilcetona (49,63 Kg). La mezcla se agitó durante 12-16 h, después se filtró y el filtrado se cargó en un reactor limpio y seco. La solución se enfrió a 10-15 °C y, a continuación, se añadió lentamente una solución de ácido acético (54,75 Kg) en agua (54 L), manteniendo la temperatura por debajo de 15 °C. Al final de la adición, la mezcla se calentó hasta 25-30 °C y se agitó durante 12-16 h. Las capas se separaron y la acuosa se extrajo con acetato de etilo (324 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución de bicarbonato sódico (32,34 Kg) en agua (324 L), y después se secaron sobre sulfato sódico. Los sólidos se lavaron con acetato de etilo (54 L) y los filtrados combinados se concentraron a presión reducida por debajo de 40 °C. Se cargó n-heptano (216 L) en el reactor y se continuó la destilación a presión reducida y por debajo de 40 °C hasta sequedad. La mezcla se enfrió a 25-30 °C y se cargó n-heptano (216 L) en el reactor. La mezcla se agitó durante 1-2 h tras la formación de sólidos. A continuación, los sólidos se filtraron, se lavaron con n-heptano (54 L) y se secaron a 40-50 °C durante 10-12 h para generar el material deseado (90,1 Kg, 67% de rendimiento).

Etapa 2. 10-((dimetilamino)metilen)-9-oxo-3-azaspiro[5.5]undec-7-ene-3-carboxilato de (E)-terc-butilo.

Se cargó un reactor limpio y seco con 9-oxo-3-azaspiro[5.5]undec-7-ene-3-carboxilato de terc-butilo (50 Kg), N,N-dimetilformamida (500 L) y N,N-dimetilformamida dimetil acetal (135 Kg) a 25-30 °C bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó de 5 a 10 minutos y después se calentó a 120-130 °C durante 20 h. A continuación, la mezcla se enfrió a 50-60 °C y el disolvente se destiló a alto vacío por debajo de 60 °C. Se cargó Mix-xylenes (200 L) a menos de 45 °C y el disolvente se destiló a alto vacío a menos de 60 °C. Esta operación se repitió con otro lote de mix-xilenos (200 L). A continuación, se cargó tolueno (200 L) en el reactor y el disolvente se destiló a alto vacío a menos de 60°C. Esta operación se repitió con un segundo lote de tolueno (200 L). A continuación, se cargó metilterc-butil-éter (100 L) a menos de 30 °C y el disolvente se destiló a alto vacío a menos de 40 °C. La mezcla se enfrió a 15-20 °C y se cargó metil-terc-butil-éter (100 L) a menos de 20 °C. La mezcla se enfrió a 15-20 °C y se cargó metil tert-butil éter (100 L) a menos de 20°C. La mezcla se agitó durante 20-30 minutos y los sólidos se filtraron. La mezcla se agitó durante 20-30 min y los sólidos se filtraron, se lavaron con metil tert-butil éter (50 L) y se secaron sin vacío a 50-55 °C durante 10 h para proporcionar el compuesto deseado (52,1 Kg, 87% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 7,48 (s, 1H), 6,57 (d, J=9,97 Hz, 1H), 5,99 (d, J=10,16 Hz, 1H), 3,32-3,51 (m, 4H), 3,06 (s, 6H), 2,72 (s, 2H), 1,57-1,66 (m, 2H), 1,41-1,53 (m, 11H).

Etapa 3. 1-isopropil-1,4-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carboxilato de terc-butilo.

Se cargó un reactor limpio y seco con (E)-tert-butil 10-((dimetilamino)metileno)-9-oxo-3-azaspiro[5.5]undec-7-ene-3-carboxilato (80 Kg), tolueno (704 L) y trimetilamina (16 L) a 25-30 °C. La mezcla de reacción se calentó hasta 70-80 °C, y se añadió una solución de sal de hidrocloruro de isopropil hidracina en metanol (1,25 equiv., 141 Kg en total) a lo largo de 4-5 h. La mezcla de reacción se agitó entonces durante 8-10 h a 70-80 °C, antes de enfriarse hasta 15-25 °C. A continuación, se añadió lentamente una solución de ácido cítrico (48 Kg) en agua (480 L), manteniendo la temperatura interna por debajo de 25 °C. Se añadió acetato de etilo (208 L) y la mezcla se agitó durante 10 min. Se separaron las capas y la capa orgánica se lavó sucesivamente con una solución de ácido cítrico (48 Kg) en agua (480 L), y después sólo con agua (320 L). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de etilo (320 L). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico (8 Kg) y los disolventes se evaporaron a sequedad a presión reducida y a menos de 40 °C. Se cargó diclorometano (240 L) en el reactor y la mezcla se agitó a 25-30 °C hasta que quedó clara. Se introdujo diclorometano (240 L) en el reactor y la mezcla se agitó a 25-30 °C hasta que se aclaró. El carbón activado (1,84 Kg), el silicato de magnesio (1,84 Kg) y el gel de sílice (32 Kg, malla 100-200) se cargaron sucesivamente a 25-30 °C y la mezcla heterogénea se agitó durante 1 h. A continuación, la suspensión se filtró en un lecho Hyflow, preparado mezclando Hyflow supercell (8 Kg) y diclorometano (40 L). La torta se lavó con diclorometano (tres veces 120 L). Los filtrados combinados se volvieron a cargar en el reactor y el disolvente se evaporó a presión reducida por debajo de 40 °C. A continuación, se cargó n-heptano (160 L) y se destiló a presión reducida por debajo de 40 °C. Se cargó n-heptano (200 L) en el reactor y la mezcla se enfrió a 0-5 °C. Tras agitar durante 12-15 h, los sólidos se filtraron a 0 °C, se lavaron con n-heptano (160 L) y se secaron al vacío a 40-50 °C para proporcionar el compuesto del título. Después de agitar durante 12-15 h, los sólidos se filtraron a 0 °C, se lavaron con n-heptano enfriado (0-5 °C) (160 L) y se secaron al vacío a 40-50 °C para proporcionar el compuesto del título (82,4 Kg, 75%). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 7,25 (s, 1H), 6,42 (dd, J=10,05, 0,49 Hz, 1H) 5,84 (d, J=9,95 Hz, 1H), 4,42-4,52 (m, 1H), 3,36-3,53 (m, 4H), 2,62 (s, 2H) 1,56-1,68 (m, 2H) 1,45-1,55 (m, 17H).

Etapa 4. 1-Isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1H)-ona, sal clorhidrato.

Se cargó un reactor limpio y seco con 1-isopropil-1,4-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tercbutilo (60 Kg) y metanol (600 L) a 25-30 °C. Se añadió N-bromosuccinimida (32,4 Kg) en 5 porciones a lo largo de 30-40 min a 25-30 °C y se agitó durante 30-60 min. Se añadió N-bromosuccinimida (32,4 Kg) en 5 porciones a lo largo de 30-40 min a 25-30 °C y se continuó agitando durante 30-60 min. Se añadió lentamente una solución de tiosulfato sódico pentahidratado (5,4 Kg) en agua (102 L), manteniendo la temperatura interna por debajo de 30 °C. La mezcla se agitó durante 20-30 min y después se evaporó el disolvente a presión reducida a menos de 45°C. El residuo se enfrió a 25-30 °C y se cargó 2-metiltetrahidrofurano (420 L) en el reactor, junto con agua (90 L). La mezcla se agitó durante 15-20 min, después se separaron las capas, la capa acuosa se extrajo de nuevo con 2-metiltetrahidrofurano (120 L). Los extractos orgánicos combinados se trataron durante 15-20 min a 25-30 °C con una solución de hidróxido de sodio (4,8 Kg) en agua (120 L). Se separaron las capas y la capa orgánica se lavó con agua (120 L), seguida de una solución de cloruro sódico (12 Kg) en agua (120 L) y después se secó sobre sulfato sódico (6 Kg). Tras la filtración, la torta se lavó con 2-metiltetrahidrofurano (30 L) y el filtrado combinado se cargó de nuevo en el reactor. El disolvente se destiló completamente a menos de 45°C a presión reducida y el residuo se solubilizó en tetrahidrofurano (201 L). En otro reactor limpio y seco se cargó terc-butóxido potásico (60,6 Kg) y tetrahidrofurano (360 L) a 25-30°C. A esa mezcla se añadió lentamente la solución del residuo en tetrahidrofurano manteniendo una temperatura inferior a 30°C. A continuación, la mezcla de reacción se calentó hasta 60-65 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 1-2 h. Una vez completada, la mezcla se enfrió hasta 0-10 °C, y se apagó lentamente con una solución de ácido clorhídrico (1 N, 196 L), manteniendo la temperatura interna por debajo de 10 °C. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta 25-30 °C, y se cargó con acetato de etilo (798 L). Tras agitar durante 15-20 min, se separaron las capas y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (160 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (160 L), se secaron sobre sulfato sódico (8 Kg), se filtraron y la torta se lavó con acetato de etilo (300 L). Los disolventes se destilaron en su totalidad a presión reducida a menos de 45 °C, y se cargó acetato de etilo (540 L) en el reactor a 25-30 °C, seguido de metanol (156 L). La mezcla se enfrió hasta 0-5 °C, momento en el que se añadió lentamente cloruro de acetilo (79,8 Kg), manteniendo la temperatura en el intervalo especificado. A continuación, la mezcla se dejó calentar hasta 20-25 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 4-5 h con agitación. La suspensión resultante se filtró y los sólidos se lavaron con acetato de etilo (120 L), después se secaron a 40-45 °C durante 8-10 h para obtener el producto bruto deseado (33,5 Kg, 65%).

Se llevó a cabo una etapa final de purificación solubilizando este sólido crudo (56,8 Kg) en metanol (454,4 L) en un reactor limpio y seco a 25-30 °C. La solución se agitó durante 30-45 min, después se pasó a través de un filtro de cartucho de 0,2 micras a un reactor limpio y seco a 25-30 °C. El metanol se destiló a presión reducida por debajo de 50 °C hasta que quedó ~1 vol de disolvente. La mezcla de reacción se enfrió a 25-30 °C y se cargó acetonitrilo fresco (113,6 L) a través de un filtro de cartucho de 0,2 micras. Los disolventes se destilaron a presión reducida a menos de 50 °C hasta que quedó ~1 vol de disolvente. La mezcla de reacción se enfrió a 25-30 °C y se cargó acetonitrilo fresco (190 L) en el reactor a través de un filtro de cartucho de 0,2 micras. La mezcla se calentó hasta 65-70 °C y se agitó durante 45 min, después se enfrió hasta 25-30 °C y se agitó durante 1 h. La suspensión resultante se filtró y la torta se lavó con acetonitrilo enfriado (15 °C) (56,8 L). Los sólidos se secaron a presión reducida a 40-50 °C durante 8 h para obtener el Intermedio 1 (36,4 Kg, 64%). RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 7,43 (s, 1H), 5,32-5,42 (m, 1H), 3,15-3,25 (m, 4H), 2,89 (s, 2H), 2,64 (s, 2H), 1,69-1,90 (m, 4H), 1,37-1,45 (m, 6H); ESI [M+H]+ =248

Intermedio 2: ácido 2-(4-(tert-Butoxicarbonil)fenil)-6-metoxiisonicotínico.

Se cargó un reactor limpio y seco con ácido 2,6-dicloroisonicotínico (30 Kg) y metanol (120 L) a 20-25 °C. La mezcla se agitó durante 5 min y luego se calentó hasta 65 °C (reflujo). A continuación, se cargó lentamente una solución de metóxido sódico en metanol (30%, 87,2 Kg) durante al menos 4 h a través de un embudo de adición. El embudo se enjuagó con metanol (15 L) y se siguió agitando a 65 °C durante al menos 15 h. A continuación, la mezcla se enfrió a 45 °C y se destiló a presión reducida hasta un volumen residual de ~90 L. A continuación, se cargó en el reactor a 40-45 °C una solución de bicarbonato potásico (28,2 Kg) y carbonato potásico (21,6 Kg) en agua (180 L). El reactor que contenía la solución acuosa se enjuagó con agua (21 L) y el lavado se cargó en la mezcla de reacción. La mezcla se destiló a presión reducida por debajo de 80 °C hasta un volumen residual de -240 L, y a continuación se enfrió a 20-25 °C.

Se cargó otro reactor limpio y seco con 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxoborolan-2-il) benzoato de terc-butilo (52,3 Kg) y dioxano (340 Kg), y se agitó a 2-25 °C hasta disolución completa. A continuación, el contenido del reactor anterior se calentó a 40 °C para garantizar una solubilidad completa y se transfirió a este nuevo reactor. La mezcla de reacción se enfrió a 20-25 °C y se llevó a cabo una etapa de desoxigenación por medio de ciclos de vacío/nitrógeno. La mezcla se enfrió de nuevo hasta 0-10 °C y se cargó acetato de paladio (0,65 Kg) en el reactor seguido de trifenilfosfina (2,46 Kg) bajo flujo de nitrógeno. La mezcla se calentó hasta 20-25 °C y se llevó a cabo otra etapa de desoxigenación por medio de ciclos de vacío/nitrógeno. A continuación, la mezcla se calentó hasta 80 °C y se mantuvo a esta temperatura durante al menos 18 h. La mezcla se enfrió hasta 20-25 °C y, a continuación, se cargaron sucesivamente en el reactor metil terc-butil éter (133,2 Kg) y agua (30 L). Las capas se separaron, y la acuosa se diluyó con agua (110 L), extrayéndose a continuación con metil terc-butil éter (110 L). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución de ácido cítrico (52 Kg) en agua (84 L), y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo de nuevo con metil tert-butil éter (88,8 Kg) y las capas orgánicas se combinaron, lavándose a continuación tres veces con un tercio de una solución de cloruro sódico (43 Kg) en agua (80 L). Tras la separación final de capas, la capa orgánica se filtró a través de un filtro pall que contenía un cartucho de carbón, y la torta se lavó con metil tert-butil éter (11,2 Kg). El filtrado se destiló a presión reducida a menos de 50 °C hasta -90 L, y después se codestiló sucesivamente con heptano (120 L), a menos de 50 °C y hasta -120 L. A continuación, la mezcla se enfrió hasta 20-25 °C durante 1 h, y después se agitó a esta temperatura durante otra 1 h. La suspensión se filtró y la torta se lavó tres veces con heptano (3x18 L), y después tres veces con acetonitrilo (3x18 L). El sólido húmedo resultante se secó al vacío y con flujo de nitrógeno a menos de 45 °C durante al menos 15 h para obtener el Intermedio 2 (44,6 Kg, 87% de rendimiento). 1HRMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 8,13 (s, 2H), 8,09 (s, 2H), 7,97 (d, J=1,17 Hz, 1H), 7,34 (d, J=0,98 Hz, 1H), 4,08 (s, 3H), 1,61 (s, 9H); ESI [M+H]+ =330.

Intermedio 3 :4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoato de terc-butilo.

Se cargó un matraz de fondo redondo con ácido 2-(4-(terc-butoxicarbonil)fenil)-6-metoxiisonicotmico (Intermedio 2, 15,2 g, 46,2 mmol) y acetato de etilo (140 mL). se añadió 1,1'-carbonildiimidazol (8,98 g, 55,4 mmol) en una porción y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. se añadió clorhidrato de 1-isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperldin]-7(1H)-ona (Intermedio 1, 14,8 g, 52,2 mmol) seguido de N,N-diisopropiletilamina (9,1 mL, 52,2 mL) y la reacción se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. Se añadió HCl 2 M acuoso (40 mL), seguido de hidrogensulfato potásico 1 M (40 mL) y 50 mL de heptano. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se transfirió a un embudo de separación. La fase orgánica se separó, se lavó sucesivamente con agua (20 mL), bicarbonato sódico saturado (30 mL), agua (20 mL), salmuera (20 mL), se secó sobre 20 g de sulfato de magnesio y 10 g de gel de sílice, se filtró y se concentró al vacío. Los sólidos empezaron a formarse hacia el final de la concentración. El residuo se agitó en 40 mL de acetato de etilo a 80 °C y se añadió heptano (120 mL) lentamente gota a gota. La mezcla se agitó a 80 °C durante 1 h, después se enfrió lentamente a temperatura ambiente con agitación durante 1 h y se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua y acetato de etiloheptano (1:3) y se secó al vacío a 50 °C durante 18 h para obtener el intermedio 3 (19,64 g, 76% de rendimiento).

Preparación alternativa del Intermedio 3:

Se cargó un reactor limpio y seco con acetonitrilo (219 Kg) y ácido 2-(4-(terc-butoxicarbonil)fenil)-6-metoxiisonicotínico (Intermedio 2, 34,8 Kg) a 20-25 °C. Se agitó la mezcla durante 5 min. La mezcla se agitó durante 5 min, después se cargó 1,1-carbodiimidazol (18,9 Kg) en tres porciones sucesivas. La suspensión se agitó de nuevo a 20-25 °C durante al menos 1 h y, a continuación, se introdujo en el reactor la sal de clorhidrato de 1-isopropil-4,6-dihidroesp iro[indazol-5,4'-piperldin]-7(1H)-ona (Intermedio 1, 33,0 Kg), seguida de N,N-diisopropiletilamina (20,5 Kg) mediante una bomba. La bomba de reactivo, así como las paredes del reactor, se lavaron con acetonitrilo (13,7 Kg), y se siguió agitando a 20-25 °C durante al menos 2 h. Una vez completada, la mezcla se sembró con 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoato de terc-butilo (Intermedio 3, 209 g) y se agitó durante al menos 30 min. Tras confirmar el inicio de la cristalización, se cargó una solución de ácido cítrico monohidratado (58,5 Kg) en agua (257 L) durante 1 h. La suspensión resultante se agitó de nuevo a 20-25 °C durante al menos 2 h, después se filtró y la torta se lavó con una mezcla de acetonitrilo (68,4 Kg) y agua (87 L). Este lavado se utilizó también para enjuagar el reactor. Los sólidos se secaron a presión reducida por debajo de 55 °C, obteniéndose el Intermedio 3 (43,44 Kg, 73% de rendimiento).

Compuesto 1 (como ácido libre): ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico.

Se cargó un matraz de fondo redondo con 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoato de terc-butilo (3,7 g, 6,6 mmol) y tolueno (25 mL). se añadió ácido fosfórico al 85% (3,0 mL) gota a gota con agitación y la reacción se calentó a 60 °C durante 4 horas. Se formó una goma espesa incolora. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua. Se observaron sólidos blancos. La capa orgánica de tolueno se desechó, reservando la capa acuosa y los sólidos. Se añadió acetato de etilo (60 mL) y solución de NaOH 4N para ajustar el pH a ~7. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50mL). Las capas orgánicas combinadas de acetato de etilo se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener sólidos blancos. Se disolvieron en acetato de etilo (80 mL) a 50 °C y se añadió lentamente heptano (90 mL). Se retiró el calor y la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. Los sólidos resultantes se recogieron por filtración, se lavaron con el licor madre y se secaron para proporcionar el compuesto del título (forma libre del Compuesto 1, 2,15 g, 65% de rendimiento) como sólido blanco.

Preparación alternativa del compuesto 1 (como ácido libre):

Se cargó un reactor limpio y seco con acetonitrilo (130,4 Kg) y 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoato de terc-butilo (Intermedio 3, 20,72 Kg) a 20-25 °C. Se agitó la mezcla durante 5 min. La mezcla se agitó durante 5 min, después se cargó ácido ptoluenosulfónico (8,5 Kg) bajo un suave barrido de nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó hasta 70 °C y se mantuvo a esta temperatura durante al menos 6,5 h. Una vez completada, la mezcla se enfrió hasta 40 °C, se sembró con el Compuesto 1 (104 g) y se cargó lentamente con agua (83 L) durante al menos 1 h. La mezcla se agitó de nuevo a 40 °C durante un mínimo de 4 h, y después se enfrió hasta 20-25 °C durante 2 h. Tras agitar de nuevo durante al menos 2 h, se filtró, y la torta se lavó con una solución de acetonitrilo (33 Kg) y agua (41 L). Este lavado se utilizó también para enjuagar el reactor. Los sólidos resultantes se secaron a presión reducida por debajo de 55 °C para obtener el Compuesto 1 (16,5 Kg, 89% de rendimiento).

Preparación de la Forma 1 - Mono-tris anhidro del Compuesto 1:

Se cargó un vial con ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico (151 mg, 0,300 mmol) y 3 mL de etanol. La mezcla se calentó a 80 °C durante 5 minutos para disolver el sólido y después se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió Tris (hidroximetilo) aminometano (39mg, 0,32 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió heptano (2,25 mL) gota a gota para producir una suspensión que se calentó a 50 °C para producir una solución clara. Esta mezcla se enfrió a temperatura ambiente con agitación. Se observaron sólidos blancos y la mezcla se agitó durante 3 días más. El material se filtró y se secó en estufa de vacío a 50 °C durante la noche para producir la Forma 1 (151 mg, 0,242 mmol, 81% de rendimiento).

Preparación alternativa del formulario 1: Mono-tris anhidro del Compuesto 1:

A un reactor limpio y seco se cargó etanol (83 L), seguido de la adición del Compuesto 1 (9,43 Kg) y tris (2,55 kg) mientras la mezcla se mantenía a una temperatura de 20-25 °C. Las paredes del tanque se enjuagaron con etanol (2 L), y la mezcla resultante se calentó a 65-70 °C, se mantuvo a esta temperatura durante al menos 30 min hasta que se disolvieron todos los sólidos, y después se enfrió a 45-50 °C. Se llevó a cabo una filtración en caliente a través de un filtro de polipropileno en línea de 10 pm, y tanto el reactor como el filtro se lavaron con etanol (9 L). se cargó nheptano (24 L) en la solución templada a través del mismo filtro en línea, y la mezcla se sembró con ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidropiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico sal tris anhidra (100 g) en etanol (0,5 L) a 45-50 °C. La temperatura se mantuvo durante al menos 2 h antes de enfriar a 20-25 °C durante al menos 2 h. Se siguió agitando durante al menos 5 días. A continuación, se filtró la suspensión y la torta se lavó con una mezcla de etanol (13 L) y n-heptano (6 L). Los sólidos se secaron a presión reducida por debajo de 45 °C durante al menos 12 h, obteniéndose el ejemplo 1 (11,7 Kg, 77%).

Preparación de la Forma 2 -Trihidrato de la sal mono-tris del Compuesto 1:

La Forma 2 se obtuvo por conversión a partir de la Forma 1. En un reactor EasyMax de 50 mL se añadió la Forma 1 (1,7214 g, 2,760 mmol), Isopropanol (16,50 mL, 215,8 mmol) y Agua (688 pL, 38,190 mmol). La mezcla se agitó (300 rpm) durante unas 72 horas a una temperatura de 25 °C en la camisa del reactor. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante 15 min y se mantuvo a 40 °C durante unas 24 horas, enfriando una vez a 20 °C para extraer una muestra para el ensayo. Se observó una mezcla de formas por PXRD; por tanto, se añadió agua adicional Agua (688 pL, 38,190 mmol). Se aumentó la velocidad de agitación a 400 rpm y se dejó agitar la suspensión durante 6 horas, enfriándose a continuación a 15°C. Se aislaron los sólidos en un filtro de 60 mL/40 M y se lavaron con isopropanol 96/4/agua. Los sólidos se aislaron en un filtro de 60 mL/40 M y se lavaron con 96/4 isopropanol/agua. El material resultante fue consistente con la Forma 2 por PXRD.

Preparación alternativa de la Forma 2 -Trihidrato de la sal mono-tris del Compuesto 1:

Se cargó un reactor limpio y seco con isopropanol (60,4 Kg), y se añadieron el Compuesto 1 (16,68 Kg) y tris (4,42 Kg) mientras la mezcla se mantenía a una temperatura de 20-25 °C. La mezcla se agitó durante 5 min, después se cargó agua (6,7 Kg) y la suspensión se calentó hasta 55 °C. La solución, ahora clara, se filtró en un reactor limpio y seco precalentado (50-55 °C) a través de un filtro de polipropileno de 10 pm en línea. A continuación, la solución se sembró con la sal mono-tris del Compuesto 1 como trihidrato (167 g). Tras comprobar que la semilla persistía, la mezcla se enfrió a 15 °C durante al menos 2 h y luego se mantuvo a 15 °C durante un mínimo de 16 h. La suspensión se filtró y la torta se lavó con isopropanol enfriado (13,1 Kg). A continuación, los sólidos se secaron a presión reducida por debajo de 25 °C para obtener únicamente la Forma 2 (22,1 Kg, 98% de rendimiento).

A fin de confirmar la presencia de tres moléculas de agua en la Forma 2, se recogieron datos mediante el uso de un difractómetro Bruker D8 Venture a temperatura ambiente. Véase la FIG. 7. La estructura se resolvió por desfase intrínseco mediante el uso de la suite de software SHELX en el grupo espacial de clase monoclínica P2-i/c (Versión 5.1, Bruker AXS, 1997). Posteriormente, la estructura se refinó por medio del procedimiento de mínimos cuadrados de matriz completa. Todos los átomos que no son de hidrógeno se encontraron y refinaron mediante el uso de parámetros de desplazamiento anisotrópicos.

Los átomos de hidrógeno situados en el nitrógeno y el oxígeno se encontraron a partir del mapa de diferencias de Fourier y se refinaron con distancias restringidas. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió cabalgar sobre sus átomos portadores.

El índice R final fue de 7,2%. Una última diferencia de Fourier reveló que no había densidad de electrones ausentes o mal colocados.

La Tabla 10 proporciona los datos recogidos con respecto a la Forma 2:

Tabla 10

Fórmula empírica C28H30N4O5 ■ C4H11NO3 ■ 3H2O

Peso de la fórmula 677,74

Temperatura TA

Longitud de onda 1,54178 A

Sistema de cristales Monoclínico

Grupo espacial P2-i/c

Dimensiones de la celda unitaria a = 17.6927(9) A a= 90°.

b = 13,2753(7) A p= 92.451 (3)°

c = 14,6480(8) A ^y =90°.

Volumen 3437.3(3) A3

Z 4

Densidad (calculada) 1,310 Mg/m3

Bondad de ajuste en F2 1,053

Índices R finales [I>2sigma(I)] R1 = 0,0723, wR2 = 0,1835

Índices R (todos los datos) R1 = 0,1244, wR2 = 0,2110

Estudios farmacocinéticos:

Se llevaron a cabo estudios farmacocinéticos en monos cynomolgus machos (en ayunas) (n=2 para cada formulación). Se preparó una píldora oral para comparar la Forma 1 y la Forma 2. Por separado, para comparar la sal tris del compuesto 1 y el ácido libre del compuesto 1, se preparó una suspensión. La dosis se administró en forma de dosis oral de 2, 5 o 10 mg/kg, respectivamente. Se recogieron muestras de sangre seriadas en los puntos temporales 0, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 7 y 24 horas a través de la vena femoral mediante jeringa y se transfirieron a vacutainers de K3EDTA. A continuación, se centrifugaron las muestras de sangre, se recogió el plasma y se almacenó a - 20 °C o - 80 °C hasta su análisis.

Comprimido sólido para administración oral:

Los comprimidos orales se prepararon mezclando la Forma 1 o la Forma 2 con una mezcla estándar de excipientes que contenía: 64% en peso de celulosa microcristalina (Avicel PH102), 32% en peso de lactosa monohidratada (Fast Flo 316), 3% en peso de almidón glicolato sódico (Explotab®) y 1% en peso de estearato de magnesio. La cantidad adecuada de la Forma 1 o de la Forma 2 se transfirió a un mortero. A continuación, se añadió geométricamente al mortero la cantidad correspondiente de la mezcla de excipientes y se mezcló a fondo con la respectiva Forma 1 o Forma 2 mediante el uso de un mortero. La mezcla se transfirió a un recipiente y se mezcló en un mezclador de Turbula durante 5 minutos para obtener una mezcla que contuviera la respectiva Forma 1 o Forma 2 mezclada con los excipientes. Para la Forma 1, la mezcla contenía un 19% en peso de la Forma 1 y un 81% en peso de la mezcla de excipientes. Para la Forma 2, la mezcla contenía un 21% en peso de la Forma 2 y un 79% en peso de la mezcla de excipientes.

Para preparar los comprimidos, cada mezcla se transfirió a una prensa Korsch XP-1 de una sola estación equipada con utillaje cóncavo redondo estándar de 0,2362". Los comprimidos se comprimieron hasta alcanzar un peso de 100 mg, con una dureza objetivo de entre 4 y 9 kp a una velocidad de prensado de 15 comprimidos por minuto.

Suspensión para administración oral:

Para preparar un tamaño de lote representativo de 1 L de solución de metilcelulosa al 0,5% (p/v) (Methocel® A4M), se calentaron aproximadamente 0,4 L de agua desionizada a 80-90°C, tras lo cual se añadieron 5 gramos de metilcelulosa (Methocel® A4M) y se mezclaron a fondo hasta que las partículas se humedecieron completamente. A continuación, la mezcla se retiró del fuego. A continuación, se añadió agua fría (0,6 L), mientras se agitaba continuamente en el baño de hielo, hasta que se disolvieron todas las partículas de metilcelulosa.

Una suspensión de 10 mg/mL del compuesto 1 preparada a partir del ácido libre: El ácido libre del Compuesto 1 (220 mg) se transfirió a un mortero. El polvo sólido se trituró (rompiendo los grumos) con un mortero. Se añadieron dos mL de metilcelulosa al 0,5% p/v (Methocel® A4M) al polvo gota a gota. El vehículo y el ácido libre se mezclaron bien hasta formar una pasta suave. El resto del vehículo se añadió en pequeñas alícuotas mientras se mezclaba hasta obtener una suspensión uniforme. La suspensión se transfirió a un frasco de vidrio de 30 mL mediante el uso de un cuentagotas y se completó el volumen de 22 mL para alcanzar la concentración de 10 mg/mL del ácido libre del Compuesto 1. El pH se midió a 6,04. Se añadieron a la suspensión 22 microlitros de Polisorbato 80 (Tween® 80). Se obtuvo la formulación de 10 mg/mL del ácido libre del Compuesto 1 en 0,5% p/v de metilcelulosa (Methocel® A4M), 0,1% v/v de Polisorbato 80 (Tween® 80)....

Una suspensión de 2,5 mg/mL del compuesto 1, preparada a partir de la sal de Tris del compuesto 1: La forma 1 (157 mg) se transfirió a un mortero. El polvo sólido se trituró (rompiendo los grumos) con un mortero. Se añadió al polvo una pequeña cantidad de metilcelulosa al 0,5% p/v (Methocel® A4M) para formar una pasta suave. El resto del vehículo se añadió en pequeñas alícuotas mientras se mezclaba hasta obtener una suspensión uniforme. La suspensión se transfirió a un recipiente y se enrasó a un volumen final de 50 mL. Se observaron algunos grumos, pero se obtuvo una suspensión ligera tras agitar durante aproximadamente 1 hora.

Datos analíticos:

Higroscopicidad:

La higroscopicidad se midió mediante el uso de un instrumento dinámico de sorción de vapor fabricado por TA Instruments o Surface Measurement Systems. Se expuso una muestra de cada forma a niveles incrementales de HR hasta que se alcanzó un equilibrio de peso (visto como una meseta) de <0,001% de cambio de peso en 5 minutos, o un tiempo máximo de 120 minutos en cada nivel de HR. Una vez alcanzado el equilibrio ponderal del 0,001% en 5 minutos o 120 minutos, la muestra se expuso al siguiente nivel de HR. Hubo un período inicial de secado en el que se pudo haber perdido peso con la Forma 1, no se utilizó secado para la Forma 2. El proceso comienza con una Hr del 10%, con un aumento de la HR hasta el 20% y, a continuación, un aumento de la HR del 10% después de cada intervalo (<0,001% en 5 minutos de equilibrio o 120 min, lo que ocurra primero). Al 90% de HR, la HR se invirtió de nuevo al 10% de HR mediante el uso de los mismos criterios de equilibrio. La higroscopicidad se mide en función del porcentaje de aumento de peso medido a 90%RH. La Forma 1 tiene una higroscopicidad de aproximadamente el 1% a 90%^r H/25°C. La Forma 2 también tiene una higroscopicidad de alrededor del 1% a 90%R^h/25°C.

Solubilidad termodinámica Proporcionada en la Tabla 2:

El compuesto 1 como ácido libre o la sal identificada en la Tabla 2 se recibió como polvo seco y se pesó previamente en dispositivos de filtración sin jeringa Whatman Mini-Uniprep con membranas de politetrafluoroetileno (PTFE) de 0,45 |jm. Se añadieron 450 microlitros (450 jl) del medio deseado al filtro y se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. Transcurridas 24 horas, la muestra se filtró y los filtrados se inyectaron en un detector de nitrógeno para su cuantificación.

Preparación del tampón:

• pH 1,2: Pesar 1,0 g de NaCI y transferirlo a un vaso de precipitados. Añadir unos 450 mL de agua de grado HPLC para disolver el NaCl. Valorar la solución a pH 1,2 con HCl al 36,6%. Transferir la solución a un matraz aforado de 500 mL y llevar a 500 mL con agua de grado HPLC.

• pH 6,5: Valorar unos 250 mL de NaPO4 dibásico 50 mM con unos 500 mL de NaPO4 monobásico 50 mM hasta pH 6,5. El volumen total final es el volumen en el punto en que la solución tiene un pH 6,5 se alcanza al añadir 50 mM NaPO4 monobásico a los 50 mM NaPO4 dibásico.

• pH 7,4: Valorar unos 200 mL de NaPO4 dibásico 50 mM con unos 50 mL de NaPO4 monbásico 50 mM a pH 7,4. El volumen total final es el volumen en el punto en que la solución tiene un pH 7,4 se alcanza al añadir 50 mM NaPO4 monobásico a los 50 mM NaPO4 dibásico.

Difracción de rayos X en polvo:

El análisis de difracción de rayos X en polvo se llevó a cabo mediante el uso de un difractómetro Bruker AXS D4 ADVANCE equipado con una fuente de radiación de Cu. La rendija de divergencia se fijó en 0,6 mm, mientras que la óptica secundaria utilizó rendijas variables. La radiación difractada se detectó por medio de un detector PSD-Lynx Eye. La tensión del tubo de rayos X y el amperaje se fijaron a 40 kV y 40 mA, respectivamente. Los datos se recogieron en el goniómetro Theta-2Theta a la longitud de onda de Cu (k-alfa promedio) de 3,0 a 40,0 grados 2-Theta mediante el uso de un tamaño de paso de 0,037 grados y un tiempo de paso de 10 segundos. Las muestras se prepararon colocándolas en un portamuestras de fondo bajo de silicona y se rotaron durante la recolección. Los datos se recogieron mediante el uso del software Bruker DIFFRAC Plus y el análisis fue llevado a cabo por medio del software EVAdiffract plus. El archivo de datos PXRD no se procesó antes de la búsqueda de los picos. Mediante el uso del algoritmo de búsqueda de picos en el software EVA, los picos seleccionados con un valor umbral de 1 se usaron para llevar a cabo asignaciones de pico preliminares. A fin de garantizar la validez, los ajustes se llevaron a cabo manualmente; la salida de las asignaciones automatizadas se comprobó visualmente y las posiciones de los picos se ajustaron al pico máximo. Generalmente se eligieron los picos con intensidad relativa de > 3 %. No se seleccionaron los picos que no se resolvieron o fueron consistentes con el ruido. Un error típico asociado con el pico de la posición máxima de PXRD establecido en USP hasta /- 0,2 °2-Theta (USP-941).

FT-Raman:

Los espectros Raman se recogieron mediante el uso de un accesorio Nicolet NXR FT-Raman conectado al banco FT-IR. El espectrómetro está equipado con un láser de Nd:YVO4 de 1064 nm y un detector de germanio enfriado con nitrógeno líquido. Antes de la adquisición de datos, el rendimiento del instrumento y las verificaciones de calibración se realizaron con poliestireno. Las muestras de la Forma 1 o de la Forma 2 se analizaron en tubos de vidrio de RMN que se mantuvieron estáticos durante la recolección de los espectros. Las muestras de comprimidos se recogieron en un portamuestras de comprimidos que analizaba un punto de un comprimido intacto. Se recogieron los espectros usando un 0,5 W de potencia de láser y 512 exploraciones co-añadidas. El intervalo de recogida fue 3700-100 cm-1. Estos espectros se registraron mediante el uso de una resolución de 2 cirr1 y apodización de Happ-Genzel. Mediante el uso del procedimiento Raman anterior, la variabilidad posible asociada con una medición espectral es /- 2 cirr1. Las muestras (tanto el API puro como el producto farmacológico) se recogieron en condiciones ambientales (~23°C y entre 30%-60%HR). La Forma 1 se debe almacenar con desecante, mientras que la Forma 2 se puede almacenar en condiciones ambientales (15-30°C y humedades ambientales).

La escala de intensidad se normalizó a 1 antes del pico de recogida. Los picos se identificaron manualmente mediante el uso del software Thermo Nicolet Omnic 7.3. La posición del pico se seleccionó en el pico máximo y los picos solo se identificaron como tales, si había una pendiente a cada lado; los hombros en los picos no se incluyeron. Para la Forma 1 o la Forma 2, se utilizó un umbral absoluto de 0,004 a 0,017 con una sensibilidad de 80 durante el pico de recolección. La posición del pico se ha redondeado al número entero más cercano utilizando la práctica estándar (0,5 vueltas hacia arriba, 0,4 vueltas hacia abajo). Los picos con intensidad de pico normalizada entre (1-0,75), (0,74-0,30), (0,29-0) fueron marcados como fuertes, medios y débiles, respectivamente.

RMN en estado sólido:

El análisis de RMN en estado sólido (ssRMN) se llevó a cabo en una sonda Bruker-BioSpin CPMAS colocada en un espectrómetro de RMN Bruker-BioSpin Avance III de 500 MHz (frecuencia 1H). El material de la Forma 1 se introdujo en un rotor de 4 mm sellado con una tapa de accionamiento estándar, y su espectro se recogió a temperatura ambiente. El material de la Forma 2 se introdujo en un rotor de 4 mm sellado con una tapa de accionamiento que contenía una junta tórica para evitar la deshidratación. El espectro de la Forma 2 se recogió a 25°C (calibrado por el desplazamiento químico del PbNOa). El rotor empaquetado se orientó en el ángulo mágico y giró a 15,0 kHz. El espectro de carbono de ssRMN C13se recolectó mediante el uso de un experimento de rotación de ángulo mágico de polarización cruzada de protones desacoplados (CPMAS). Se aplicó un campo de desacoplamiento de protones modulado en fase de 80-90 kHz durante la adquisición espectral. El tiempo de contacto de polarización cruzada se ajustó a 2 ms y el retraso de reciclaje a 10 segundos. El número de barridos se ajustó para obtener una proporción señal-ruido adecuada. SSe hizo referencia a la escala de cambio químico del carbono mediante el uso de un experimento 13C CPMAS en un estándar externo de adamantano cristalino, estableciendo su resonancia de campo superior en 29,5 ppm (según lo determinado a partir de TMS puro).

La selección automática de picos se llevó a cabo con el software Bruker-BioSpin TopSpin versión 3.5. Generalmente, se usó un valor umbral de 5 % de intensidad relativa para seleccionar picos preliminares. El resultado de la selección automática de picos se verificó visualmente para garantizar la validez y los ajustes se hicieron manualmente si fuera necesario. Aunque en el presente documento se notifican valores máximos específicos de RMN en estado sólido de 13C, existe un intervalo para estos valores máximos debido a diferencias en los instrumentos, muestras y preparación de muestras. Esta es una práctica común en la técnica de la RMN en estado sólido debido a la variación inherente en los valores máximos. Una variabilidad típica para un valor del eje x del cambio químico de 13C es del orden de más o menos 0,2 ppm para un sólido cristalino. Las alturas de los picos de RMN en estado sólido indicadas en el presente documento son intensidades relativas. Las intensidades de RMN de estado sólido pueden variar según la configuración real de los parámetros experimentales de CPMAS y el historial térmico de la muestra.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Una sal cristalina 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol del ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico.

2. La sal cristalina de la reivindicación 1, en la que la proporción de ácido 4-(4-(1-isopropil-7-oxo-1,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidina]-1'-carbonil)-6-metoxipiridin-2-il)benzoico y la sal es 1:1.

3. La sal cristalina de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en la que la sal cristalina es una sal cristalina anhidra.

4. La sal cristalina anhidra de la reivindicación 3, en la que dicha sal cristalina anhidra tiene un patrón PXRD (medido usando radiación media k-alfa de cobre) que comprende picos en ángulos de difracción de 9,6, 10,7 y 11,32©, ± 0.2° 2©.

5. La sal cristalina anhidra de la reivindicación 3 o de la reivindicación 4, en la que dicha sal cristalina anhidra tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1511, 1561 y 1615 cm-1, ± 2cm'1.

6. La sal cristalina anhidra de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en la que dicha sal cristalina anhidra tiene un espectro de 13CssRMN que comprende desplazamientos químicos a 22,9, 146,2 y 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

7. La sal cristalina anhidra de la reivindicación 3, en la que dicha sal cristalina anhidra tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1511 y 1615 cm-1, ± 2 cm-1, y un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 22,9, 146,2, o 161,9 ppm, ± 0,2 ppm.

8. La sal cristalina de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en la que la sal cristalina es una sal cristalina trihidratada.

9. La sal cristalina trihidratada de la reivindicación 8, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un patrón PXRD (medido mediante el uso de radiación media k-alfa de cobre) que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4, 9,0 y 10,52©, 0.2° 2©.

10. La sal cristalina trihidratada de la reivindicación 8 o de la reivindicación 9, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un espectro Raman que comprende desplazamientos de pico a 1507, 1557 y 1610 cm-1, ± 2 cm-1.

11. La sal cristalina trihidratada de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un espectro de 13C ssRMN que comprende desplazamientos químicos a 19,2, 149,5 y 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

12. La sal cristalina trihidratada de la reivindicación 8, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en

un patrón PXRD (medido utilizando radiación media k-alfa de cobre) que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,02©, 0.2° 2©,

un espectro Raman con desplazamientos de los picos a 1557 y 1610 cm-1, ± 2cm-1, y

un espectro 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5 o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

13. La sal cristalina trihidratada de la reivindicación 8, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD (medido mediante el uso de radiación media kalfa de cobre) que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,0 2©, ± 0.2° 2©, y un espectro Raman que comprende al menos un pico desplazado a 1507, 1557 o 1610 cm-1, 2 cm-1.

14. La sal cristalina trihidratada de la reivindicación 8, en la que dicha sal cristalina trihidratada tiene un parámetro analítico seleccionado del grupo que consiste en un patrón PXRD (medido mediante el uso de radiación media kalfa de cobre) que comprende picos en ángulos de difracción de 8,4 y 9,0 2©, ± 0.2° 2©, y un espectro de 13C ssRMN que comprende al menos un desplazamiento químico a 19,2, 149,5 o 163,8 ppm, ± 0,2 ppm.

15. Una composición farmacéutica que comprende la sal cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en una cantidad terapéuticamente eficaz con un portador farmacéuticamente aceptable.

16. La sal cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad seleccionada entre NAFLD, NASH y T2D en un mamífero.