ES2944134T3 - Pimiento con sabor novedoso - Google Patents

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Jacob Pieter Willem Haanstra
Evert Willem Gutteling
Arnaud Guillaume Bovy
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Abstract

La presente invención se refiere a una planta de pimiento (Capsicum annuum L.) que comprende un QTL que lleva a la planta a producir frutos que tienen un sabor novedoso, cuyo QTL se puede obtener a partir de una planta de pimiento que comprende dicho QTL, cuya semilla representativa se depositó con el NCIMB con el número de acceso NCIMB 42137. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Pimiento con sabor novedoso
La invención se refiere a plantas de pimiento que producen frutos con un sabor novedoso. Además, la invención se refiere a las semillas y el material de propagación de la planta de pimiento. Además, la invención se refiere a métodos para la producción de una planta de pimiento que produce frutos con un sabor novedoso.
Las plantas del pimiento y guindilla pertenecen al género Capsicum, que forma parte de la familia de las solanáceas (Solanaceae). Las especies Capsicum son naturales de América del Sur, América Central y una parte de América del Norte, donde se han cultivado durante miles de años y ahora se cultivan en todo el mundo. Varios de los miembros del género Capsicum se usan como especias, hortalizas y/o medicinas.
La especie Capsicum annuum L. es la más común y ampliamente cultivada de las cinco especies Capsicum cultivadas (Capsicum annuum, Capsicum baccatum, Capsicum pubescens, Capsicum chinense, Capsicum frutescens). Comprende varios grupos de cultivariedad entre los que el pimiento (también denominado pimentón o pimiento dulce) es la más comúnmente cultivada en el norte de Europa y Estados Unidos. Los frutos del pimiento se comen crudos, cocinados, inmaduros y maduros y pueden procesarse en polvos, salsas y cremas. Los frutos son principalmente verdes en la etapa inmadura, pero durante la maduración se vuelve rojos, amarillos, naranjas, púrpuras o pardos. Se pueden cultivar plantas de pimiento en campo abierto, invernadero, túnel o casetas de sombra en una amplia gama de condiciones climáticas, pero funcionan mejor en condiciones cálidas y secas.
El sabor es un parámetro de calidad importante para los frutos y las hortalizas. Las cualidades externas tales como el color, la textura y la forma son relativamente fáciles de evaluar tanto por los productores como por los consumidores. La evaluación de los atributos de sabor, sin embargo, es más compleja. El sabor es la impresión sensitiva de una sustancia. El sabor de los alimentos, que se percibe durante el consumo, puede definirse como la sensación general proporcionada por la interacción del gusto, el olor (que también puede indicarse como esencia, fragancia o aroma), la sensación en la boca, la vista y el sonido. La sensación en la boca, la vista y el sonido son sentidos físicos o indirectos, que influyen en el sabor y el olor y, por lo tanto, influyen en la aceptación de los alimentos. Las sensaciones restantes son respuestas de los sentidos químicos y pueden dividirse globalmente en dos grupos, es decir, compuestos responsables del sabor y compuestos responsables del olor. Los compuestos que pertenecen al primer grupo son principalmente no volátiles a temperatura ambiente e interactúan con los receptores del sabor en la cavidad bucal y especialmente en la lengua. Los compuestos que pertenecen al otro grupo son volátiles y se perciben por los receptores del olor en las células olfativas en la cavidad nasal. El olor de los alimentos puede olerse cuando están fuera y dentro de la boca. Cuando tenemos alimento en nuestra boca, las moléculas de olor pueden viajar fácilmente desde la boca hasta los receptores del olor en la cavidad nasal a través de la conexión entre la garganta y la cavidad nasal. Este tipo de percepción de sabores se denomina sentido de retronasal del olfato.
Aunque el sabor de algunos cultivos frutales, como el tomate, la fresa, el melocotón o el melón, se ha investigado ampliamente, solo se ha realizado una cantidad limitada de investigación sobre el sabor de frutos de especies Capsicum. La investigación sobre el sabor de los frutos de pimiento se ha centrado principalmente en la caracterización de la variación de componentes volátiles y no volátiles en especies cultivadas y/o silvestres. Sin embargo, generalmente faltan correlaciones entre los componentes del sabor y evaluaciones sensitivas mediante paneles de sabor u olor.
Los frutos de pimiento se usan comúnmente en la dieta debido a sus colores típicos, su nota picante, su sabor y/o su aroma distintivo. Los frutos de pimiento se comen frescos o procesados, como frutos no maduros (verdes o blancos) o maduros (por ejemplo, rojos, amarillos y naranjas). En el fitomejoramiento del pimiento, los factores de producción y calidad (por ejemplo, vida útil, firmeza y resistencia a enfermedades) son de interés principal. Sin embargo, dado que los consumidores han llegado a ser más críticos, la atención en el pimiento, como en el tomate, se desplaza hacia el sabor como un parámetro de calidad importante.
Por lo tanto, el objeto de la presente invención es proporcionar plantas de pimiento novedosas que produzcan frutos con un sabor nuevo y diferente.
En la investigación que conduce a la invención se desarrolló una planta de pimiento nueva que se descubrió que produce frutos con un sabor nuevo sorprendente. Se descubrió que el sabor sorprendentemente diferente se correlacionaba con la presencia en el genoma de Capsicum annuum de una introgresión de Capsicum baccatum, identificada en la presente memoria como un locus de rasgo cuantitativo (QTL, del inglés Quantitative Trait Locus). El QTL que provoca el sabor nuevo es como se presenta en el genoma de las plantas cultivadas a partir de semillas que se depositaron en el NCIMB con el número de acceso NCIMB 42137. El QTL está ubicado en el grupo de ligamiento 3 (LG3) y en el genoma de las plantas cultivadas a partir de semillas del depósito NCIMB 42137 está ligado a al menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 (tabla 1).
El desarrollo de las plantas iniciales con el sabor novedoso se describe en el ejemplo 1. En resumen, Capsicum baccatum var. pendulum se usó como progenitor donador para retrocruzamiento (BC, del inglés backcrossing) con dos líneas cultivadas de fitomejoramiento de C. annuum Blocky (SM y GNM). Además de esto, se desarrollaron líneas BC2S1 de cruce iniciales y líneas casi isogénicas (NIL, del inglés near-isogenic lines) que se sometieron a prueba adicionalmente para el sabor y en algunas de estas líneas se identificaron plantas con un sabor nuevo sorprendente.
Se descubrió que las plantas de pimiento de la invención comprenden una pequeña introgresión en LG3 de Capsicum baccatum, el QTL de la invención. La nomenclatura de los grupos de ligamiento se refiere a los números de cromosoma de consenso como en Wu y col. (Theor. Appl. Genet. (2009) 118, 1279-1293). El efecto de sabor de esta pequeña introgresión en LG3 es evidente y un enriquecimiento de la variación de sabor dentro de Capsicum annuum. El tamaño del fragmento de introgresión, 0,5 cM, se basa en el mapa genético (figura 2) desarrollado dentro de la investigación que conduce a esta invención. Dicho tamaño de introgresión relativamente pequeño, en combinación con la disponibilidad de marcadores de fragmento y ausencia de arrastre de ligamiento, facilita su uso en el fitomejoramiento.
Se descubrió que en el genoma de plantas cultivadas a partir de semillas del depósito, cada uno de los marcadores SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 (datos de secuencia completa proporcionados en tabla 1) está ligado al QTL que provoca el sabor nuevo de la invención (figura 1). Aunque cualquiera de estos marcadores o cualquier combinación de estos marcadores puede usarse para identificar el QTL que provoca el rasgo inventado del sabor novedoso, el marcador SEQ ID NO: 3 se prefiere porque tenía la puntuación de LOD (del inglés limit o f quantitation, límite de cuantificación) más alta en las pruebas estadísticas.
Por tanto, el QTL está presente en el genoma del material depositado y este material, por tanto, es una fuente del QTL que puede usarse para introducir el rasgo de sabor novedoso en otras plantas de pimiento de la especie Capsicum annuum. Dichas plantas pueden usarse como punto de partida para desarrollar variedades adicionales con el sabor novedoso. Otra fuente posible del QTL de la invención, el fragmento de introgresión en LG3, es Capsicum baccatum. Capsicum baccatum, en particular Capsicum baccatum var. pendulum, puede usarse como una fuente del fragmento genómico, el QTL de la invención, para introducir el rasgo de sabor novedoso en plantas de pimiento. Esto se facilita por la disponibilidad de marcadores de fragmento. Cualquier planta de pimiento Capsicum annuum que comprenda el QTL de la invención, independientemente de la fuente de este QTL, es una planta de la invención. Una planta de pimiento Capsicum annuum que comprenda el QTL de la invención, en donde este QTL se introdujo en esta planta de pimiento desde una planta de pimiento de la invención, por ejemplo, desde una planta cultivada a partir de semillas del depósito NCIMB 42137, por lo tanto, es igual o equivalente a una planta de pimiento Capsicum annuum que comprenda el QTL de la invención, en donde este QTL se introdujo en esta planta de pimiento desde una planta Capsicum baccatum, en particular, una planta Capsicum baccatum var. pendulum.
En las semillas depositadas, el determinante genético está ligado con cada uno de los marcadores moleculares SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11. Estos marcadores también pueden estar ligados al QTL que está comprendido en alguna o ambas plantas de pimiento que se usan como progenitores en un cruce para transferir el rasgo de sabor novedoso a otras plantas, pero la presencia de al menos uno de los marcadores mencionados no es esencial, siempre que esté presente el QTL que provoca el rasgo. Además, una planta de la invención que tenga el rasgo de sabor novedoso como se describe en la presente memoria sigue siendo una planta de la invención cuando el QTL subyacente al fenotipo está presente, pero los marcadores ya no lo están.
Por tanto, la presente invención proporciona así una planta de pimiento (Capsicum annuum L.) que produce frutos con un sabor, en donde la planta de pimiento comprende un QTL que, cuando está presente da lugar al sabor, en donde el sabor se define como los frutos de pimiento producidos por dicha planta que tienen puntuaciones más altas para uno o más atributos de sabor seleccionados del grupo que consiste en aroma, floral, especias no acres, a apio y a cebollino, y/o una puntuación más baja para el atributo de sabor a hierba, y opcionalmente una mayor intensidad del olor, en comparación con los frutos de pimiento de una etapa de maduración similar de plantas de pimiento isogénicas que no portan dicho QTL, y en donde el QTL está ubicado en LG3 y dicho QTL es igual a un QTL que se encuentra en el genoma de plantas cultivadas a partir de semillas del depósito NCIMB 42137, y que está ligado en el mismo a al menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11, y en donde el QTL está presente preferiblemente de forma homocigótica.
El QTL está presente en el genoma de, o se puede obtener a partir de, Capsicum baccatum o plantas de pimiento cultivadas a partir de semillas que se depositaron en el NCIMB con el número de acceso NCIMB 42137.
Como se usa en la presente memoria, las plantas de pimiento son plantas Capsicum annuum. Se entiende que una planta de Capsicum annuum (pimiento) es fenotípicamente identificable como tal, aunque dicha planta puede contener introgresiones de otra especie Capsicum en su genoma. El obtentor o agricultor experto de pimiento sabe cómo distinguir plantas Capsicum annuum y sus frutos de plantas y frutos que pertenecen a otras especies Capsicum.
El sorprendente sabor nuevo se estableció por un panel de sabor profesional e independiente. El análisis descriptivo de los frutos de pimiento que muestra el sabor nuevo tuvo lugar en un laboratorio sensitivo en el invernadero de horticultura Wageningen UR en Bleiswijk, Países Bajos. Trece panelistas, que formaban parte de un panel instruido con una amplia experiencia en evaluaciones sensitivas de productos alimenticios, incluyendo pimiento, tomaron parte en el experimento.
Se realizaron dos diferentes pruebas sensitivas, una con 34 líneas BC2S1 y uno con 20 NIL, derivadas de tres de estas líneas BC2S1. Debido a su intensa nota picante, el progenitor C. baccatum var. pendulum del cruce inicial no se incluyó en las evaluaciones sensitivas. No se proporcionó información al panel sobre los genotipos.
Durante las sesiones de formación usando los frutos de variedades de pimiento disponibles públicamente, algunas semanas antes de la prueba de BC2S1, los panelistas estuvieron de acuerdo en catorce atributos para describir la sensación de sabor en la boca, que fueron los atributos de textura crujiente, pegajosidad de la piel, dureza y jugosidad, los atributos de sabor básicos dulzor y acidez y los atributos de sabor retronasal intensidad del aroma, a hierba, a judía verde, a zanahoria, a fruta/manzana, perfume, petroquímico y mohoso.
Durante la evaluación sensitiva de los frutos del experimento de BC2S1, quedó claro que el vocabulario (es decir, los atributos predefinidos) del panel instruido no era suficiente para cubrir toda la variación de sabor. Por lo tanto, en las sesiones de formación algunas semanas antes de la prueba sensitiva para las NIL, el panel de prueba se formó con frutos de variedades de pimiento disponibles públicamente y también con frutos de NIL preseleccionadas que tienen sabores más divergentes. Esto dio como resultado la adición de los atributos de sabor floral, especias no acres, a apio y a cebollino, mientras que el atributo perfume ya no se usó en la prueba sensitiva de NIL.
Los frutos producidos por plantas que tienen dicho QTL de la invención en LG3, muestran una puntuación significativamente más alta para los atributos de sabor aroma, floral, a especia, a apio y a cebollino, y una puntuación más baja para el atributo a hierba. Dichos efectos son más fuertes cuando se determinan en los frutos de plantas que tienen el QTL en LG3 en un estado homocigótico. En los frutos de plantas que tienen el QTL en LG3 en un estado heterocigótico, las puntuaciones para dichos atributos de sabor son intermedias entre los frutos de pimiento de plantas sin dicho QTL de la invención y frutos de plantas en donde el QTL está presente en un estado homocigótico.
Para las líneas BC2S1, se evaluó el atributo sensitivo intensidad del olor (olido a través de la nariz, es decir, ortonasal) y todas las líneas BC2S1 se puntuaron en una escala de intensidad del olor que variaba de 0 para ningún olor a 7 para una intensidad del olor similar a la encontrada en frutos de la línea progenitora C. baccatum var. pendulum, por tres personas no instruidas.
Los frutos de plantas de pimiento de la invención se puntúan más alto en una escala de intensidad del olor en que los valores más altos representan un olor más intenso, en comparación con frutos en una etapa de maduración similar de plantas de pimiento isogénicas que no portan el QTL de la invención.
El sabor de frutos de plantas de la invención también se puede describir como un “ sabor tropical” y/o “ sabor a cebollino” y/o “ similar a papaya” .
El sabor de los frutos de la línea progenitora C. baccatum se sometió a prueba por separado por un grupo de personas no instruidas que estaban acostumbradas a comer alimentos acres. Este grupo describió el sabor de frutos de la línea progenitora C. baccatum var. pendulum como afrutada, no muy aromática y ácida. Esto contrasta claramente con la variación mucho mayor en los sabores encontrados en las plantas de la invención, y hace que el efecto que la introgresión de C. baccatum tiene en las plantas de la invención sea muy inesperado.
Preferiblemente, los frutos de pimiento que tienen el sabor novedoso de la invención tienen puntuaciones más altas para los atributos de sabor aroma, a apio y a cebollino, opcionalmente tienen puntuaciones más altas para uno o más de los atributos de sabor seleccionados del grupo que consiste en floral y especias no acres, opcionalmente tienen una puntuación más baja para el atributo de sabor a hierba, y opcionalmente una mayor intensidad de olor, en comparación con los frutos de pimiento en una etapa de maduración similar de plantas de pimiento isogénicas que no portan dicho QTL.
Preferiblemente, los frutos de pimiento que tienen el sabor novedoso de la invención tienen puntuaciones más altas para los atributos de sabor seleccionados del grupo que consiste en aroma, floral, especias no acres, a apio y a cebollino, y tienen una puntuación más baja para el atributo de sabor a hierba, y opcionalmente una mayor intensidad de olor, en comparación con los frutos de pimiento en una etapa de maduración similar de plantas de pimiento isogénicas que no portan dicho QTL.
Está claro que un panel de sabor instruido que analiza el sabor de los frutos de pimiento de plantas de la invención usando dichos atributos de sabor es capaz de reconocer e identificar el sabor novedoso de los frutos de pimiento de la invención.
Como la etapa de maduración afecta a las características de sabor y bioquímicas de los frutos de pimiento, se entiende que las comparaciones entre plantas de pimiento que portan el QTL de la invención con plantas de pimiento que no portan este QTL deben hacerse entre plantas de una etapa de maduración de los frutos similar, por ejemplo, en una etapa completamente desarrollada y madura en que los frutos de pimiento tienen un 95-100 % de color, como se menciona en el ejemplo 2.
Además de observar los aspectos genéticos de la variación de sabor observada, se identificaron los compuestos bioquímicos responsables. Este perfil bioquímico reveló que podían identificarse cinco compuestos volátiles y cartografiarse en la región del QTL LG3 que provocaba el sabor novedoso. Tres metabolitos de estos cinco pudieron confirmarse en las NIL. El pico que representa la cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal mostró un fuerte aumento en la intensidad en presencia del QTL, mientras que los compuestos éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2isobutil-3-metoxipirazina se redujeron en las NIL que tenían el QTL. El pico que representa la cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal que se confirmó que estaba específicamente regulado por aumento en las plantas NIL y BC2S1 que contenían el QTL lG3, al mismo tiempo muestra una fuerte correlación con el olor. Dicho pico representa la cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal, y preferiblemente representa el compuesto cetona de artemisia.
Al observar más de cerca las seis NIL que contienen el QTL LG3, resultó que la intensidad de los dos compuestos regulados por disminución, éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina, disminuía solamente en las NIL homocigóticas y no en las NIL heterocigóticas (véase la tabla 2 ). No se descubrió un efecto de 2-isobutil-3-metoxipirazina sola sobre el aroma, ya que las NIL con una intensidad significativamente disminuida o aumentada no se vieron afectadas en la intensidad del aroma.
Un experimento de seguimiento en que las subNIL que tienen el QTL LG3 se compararon con las subNIL sin el QTL, dio como resultado la confirmación del efecto del sabor del QTL LG3. Las muestras con el QTL de sabor LG3 de nuevo estaban reducidas en 2-isobutil-3-metoxipirazina, enriquecidas en el compuesto que es cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal, y enriquecidas en algunos compuestos volátiles derivados de lípidos: (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal.
Según la invención, los frutos de la planta de pimiento de la invención tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia y/o una cantidad más alta de 6-metil-4-oxo-5-heptenal y/o una cantidad más alta de (E)-2-hexenal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-hexen-1-ol y/o una cantidad más alta de 1-penten-3-ol y/o una cantidad más alta de hexanal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-penten-1-ol y/o una cantidad más alta de (E)-2-pentenal y/o una cantidad más baja de éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y/o una cantidad más baja de 2-isobutil-3-metoxipirazina en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
Preferiblemente, los frutos de la planta de pimiento de la invención tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptanal, y opcionalmente una cantidad más baja de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina y/u opcionalmente una cantidad más alta de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
Preferiblemente, los frutos de la planta de pimiento de la invención que porta el QTL de la invención tienen de forma homocigótica una cantidad más alta de cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptanal, y una cantidad más baja de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina y opcionalmente una cantidad más alta de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho q Tl .
Preferiblemente, los frutos de la planta de pimiento de la invención que porta el QTL de la invención de forma homocigótica tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptanal, y una cantidad más baja de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina y una cantidad más alta de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
También se describen en la presente memoria frutos de la planta de pimiento de la invención que porta el QTL de la invención de forma homocigótica y que tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptanal y una cantidad más baja de éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina, y una cantidad más alta de los compuestos (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
También se describen en la presente memoria frutos de la planta de pimiento de la invención que tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptanal, y una cantidad más alta de los compuestos (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
Una cantidad más alta se define en la presente memoria como la abundancia de compuestos volátiles, también denominada intensidad, para un compuesto volátil específico medido en una muestra de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención, o la abundancia promedio de compuestos volátiles para un compuesto volátil específico medido en muestras de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención, siendo, en orden de preferencia aumentada, al menos 1,2 veces mayor, 1,5 veces mayor, 2,0 veces mayor, 5 veces mayor, 10 veces mayor, 15 veces mayor, que la abundancia de compuestos volátiles para frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL incluido en el mismo experimento.
Adecuadamente, la abundancia de compuestos volátiles para un compuesto volátil específico medido en una muestra de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención es como máximo 500 veces mayor que la abundancia de compuestos volátiles para frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL incluido en el mismo experimento de CG-EM. Esto corresponde a un aumento de, en orden de preferencia aumentada, al menos 0,26 veces, al menos 0,58 veces, al menos 1,0 veces, al menos 1,32 veces, al menos 2,32 veces, al menos 3,32 veces, al menos 3,91 veces y como máximo 8,97 veces cuando se dan los valores de intensidad de pico como valores de intensidad de pico transformados a log2.
Una cantidad más baja se define en la presente memoria como la abundancia de compuestos volátiles, también denominada intensidad, para un compuesto volátil específico medido en una muestra de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención, o la abundancia promedio de compuestos volátiles para un compuesto volátil específico medido en muestras de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención, siendo, en orden de preferencia aumentada, al menos 1,2 menor, 1,5 veces menor, 2,0 veces menor, 3,0 veces menor, 5 veces menor, 7,5 veces menor, 15 veces menor, que la intensidad promedio de pico para frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL incluido en el mismo experimento. Adecuadamente, la abundancia de compuestos volátiles para un compuesto volátil específico medido en una muestra de frutos de plantas de la invención que portan el QTL de la invención es como máximo 500 veces menor que la abundancia de compuestos volátiles para frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL incluido en el mismo experimento de CG-EM. Esto corresponde a una disminución de, en orden de preferencia aumentada, al menos 0,26 veces, al menos 0,58 veces, al menos 1,0 veces, al menos 1,32 veces, al menos 1,58 veces, al menos 2,32 veces, al menos 2,91 veces, al menos 3,91 veces y como máximo 8,97 veces cuando se dan los valores de intensidad de pico como valores de intensidad de pico transformados a log2.
Además, en la presente memoria se describe una planta de pimiento que produce frutos con un sabor novedoso, provocado por un QTL en LG3, y en donde el QTL puede estar presente de forma tanto homocigótica como heterocigótica. Como se ha señalado anteriormente, el QTL en LG3 tiene un efecto intermedio sobre las puntuaciones de los atributos de sabor aroma, floral, especias no acres, a apio, a cebollino y a hierba para frutos de pimiento en que el QTL está presente de forma heterocigótica, en comparación con frutos de pimiento sin el QTL y frutos de pimiento con el QTL en un estado homocigótico. Con respecto al efecto del QTL de la invención sobre los compuestos mencionados, el efecto intermedio del estado heterocigótico del QTL no es obvio, ya que se descubrió que plantas con dicho QTL en estado heterocigótico tenían una cantidad aumentada de cetona de artemisia y/o 6-metil-4-oxo-5-heptenal y/o (E)-2-hexenal y/o (Z)-2-hexen-1-ol y/o 1-penten-3-ol y/o hexanal y/o (Z)-2-penten-1-ol y/o (E)-2-pentenal y solo pequeñas disminuciones en la cantidad de éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina, en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho q Tl .
La invención se refiere también a semillas de plantas de pimiento de la invención que comprenden el QTL de la invención, que es un QTL que está preferiblemente presente de forma homocigótica.
Además, también se describen en la presente memoria otras partes de la planta que son adecuadas para reproducción sexual. Dichas partes de la planta pueden seleccionarse del grupo que consiste en microsporas, polen, ovarios, óvulos, sacos embrionarios y ovocitos.
De forma adicional, en la presente memoria se describen partes de las plantas de pimiento de la invención que son adecuadas para reproducción vegetativa, por ejemplo, histocultivo, esquejes, raíces, tallos, células y protoplastos. El histocultivo puede cultivarse a partir de hojas, polen, embriones, cotiledones, hipocótilos, células meristemáticas, raíces, anteras, flores, semillas y tallos.
Además, en la presente memoria se describe una semilla de una planta de pimiento que produce frutos con un sabor novedoso, en donde el genoma de la semilla de pimiento comprende un QTL, que en los frutos de la planta que puede cultivarse a partir de la semilla provoca el rasgo del sabor novedoso. En dicha semilla, el QTL puede estar presente de forma homocigótica o heterocigótica, pero preferiblemente está presente de forma homocigótica.
La invención también se refiere a semillas que pueden producir una planta de pimiento de la invención, en donde el genoma de la semilla de pimiento comprende un QTL, que en los frutos de la planta que puede cultivarse a partir de la semilla provoca el rasgo del sabor novedoso. En dicha semilla, el QTL puede estar presente de forma homocigótica o heterocigótica, pero preferiblemente está presente de forma homocigótica.
En la presente memoria también se describe una semilla híbrida y un método para producir semillas híbridas, que comprende cruzar una primera planta progenitora con una segunda planta progenitora y recolectar la semilla híbrida resultante. Dicha semilla híbrida puede comprender el QTL de la invención de forma heterocigótica u homocigótica. Para que toda la semilla híbrida porte el rasgo de la invención de forma homocigótica, ambos progenitores deben ser homocigóticos para el QTL que provoca el rasgo de sabor novedoso. Ambos progenitores, por tanto, portan el QTL de la invención. No tienen que ser necesariamente uniformes para otros rasgos.
En la presente memoria también se describe, además de la semilla de una planta de pimiento, la descendencia derivada de una planta de pimiento que produce frutos con un sabor novedoso. Dicha descendencia puede producirse por la reproducción sexual y vegetativa de una planta de la invención o una planta de la descendencia de la misma. La descendencia porta el QTL en LG3 que se encuentra en la planta de la invención y que está presente en plantas cultivadas a partir de la semilla que se depositó en el NCIMB con número NCIMB 42137. Dicho QTL puede estar presente en la descendencia de forma homocigótica o heterocigótica, preferiblemente la primera opción. Además de esto, la planta puede modificarse en una o más características. Dichas modificaciones adicionales se logran, por ejemplo, por cruce y selección, mutagénesis o mediante transformación con un transgén.
Como se usa en la presente memoria, la palabra “ descendencia” pretende indicar los descendientes o el primero y todos los demás descendientes de un cruce con una planta de la invención que muestra el rasgo de la invención y porta el QTL de la invención subyacente al rasgo de sabor. La descendencia de la invención comprende descendientes de cualquier cruce con una planta de la invención que porta el QTL que provoca el rasgo de sabor de la invención. Dicha descendencia se puede obtener, por ejemplo, cruzando una primera planta de pimiento con una segunda planta de pimiento, en donde una de las plantas se cultivó a partir de semillas, de las que se depositó una muestra representativa con el número de acceso NCIMB 42137, pero también puede ser la descendencia de cualquier otra planta de pimiento que porte el QTL de la invención presente en NCIMb 42137.
Además, la presente invención también cubre la descendencia de una planta de pimiento de la presente invención o la descendencia de plantas de pimiento cultivadas a partir de semillas derivadas de plantas de la presente invención, en donde la descendencia de la planta comprende el QTL y en donde el QTL está presente preferiblemente en un estado homocigótico, aunque el QTL puede estar presente en estado heterocigótico. Por tanto, el rasgo de sabor novedoso tiene una base genética en el genoma de una planta Capsicum annuum y, por ejemplo, usando el análisis sensitivo descrito en el ejemplo 3 y/o el análisis bioquímico que se describe en el ejemplo 4, pueden identificarse plantas Capsicum annuum como plantas de la invención.
Una planta de pimiento de la invención, que produce frutos con un sabor novedoso que está provocado por un QTL en LG3, se puede obtener cruzando una primera planta de pimiento que no tiene el QTL, con una segunda planta de pimiento que tiene el QTL, o por introgresión del QTL en la primera planta de pimiento desde la segunda planta de pimiento, y seleccionando las plantas que producen frutos que tienen dicho QTL y/o el sabor novedoso y/o una cantidad más alta de los compuestos cetona de artemisia y/o una cantidad más alta de 6-metil-4-oxo-5-heptenal y/o una cantidad más alta de (E)-2-hexenal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-hexen-1-ol y/o una cantidad más alta de 1-penten-3-ol y/o una cantidad más alta de hexanal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-penten-1-ol y/o una cantidad más alta de (E)-2-pentenal y/o una cantidad más baja de éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y/o una cantidad más baja de 2-isobutil-3-metoxipirazina en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
El material de propagación derivado de una planta de pimiento de la invención o de semillas de pimiento de una planta de pimiento de la invención, también se incluye en la presente invención, en donde el material de propagación comprende el QTL que provoca el sabor novedoso, y el QTL está presente preferiblemente en un estado homocigótico.
La invención también se refiere al material de propagación que puede producir una planta de pimiento de la invención, en donde el material de propagación comprende el QTL que provoca el sabor novedoso, y el QTL está presente preferiblemente en un estado homocigótico.
Dicho material de propagación, derivado de la planta de pimiento de la invención, así como el material de propagación que puede producir una planta de la invención se selecciona, por ejemplo, del grupo que consiste en callos, microsporas, polen, ovarios, óvulos, embriones, sacos embrionarios, ovocitos, esquejes, raíces, tallos, células, protoplastos, hojas, cotiledones, hipocótilos, células meristemáticas, raíces, ápices radiculares, microsporas, anteras, flores, semillas y tallos o partes o histocultivo de los mismos.
Además, en la presente memoria se describe una célula de una planta de pimiento de la invención, que es una célula que comprende el QTL que confiere el rasgo de sabor novedoso, en donde dicho QTL está presente en el genoma de una planta de pimienta cultivada a partir de semillas, de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de acceso NCIMB 42137. Dicha planta de pimiento se puede obtener cruzando una planta de pimiento con una segunda planta de pimiento, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla depositada con el número de acceso NCIMB 42137, y seleccionando una planta de pimiento que tenga el rasgo de sabor de la invención. Por tanto, dicha célula comprende la información genética que es sustancialmente idéntica, preferiblemente completamente idéntica a la información genética que codifica dicho rasgo de sabor novedoso de la planta de pimiento cultivada a partir de semillas, de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de acceso NCIMB 42137, más en particular el QTL descrito en la presente memoria. Preferiblemente, la célula de una planta de pimiento de la invención forma parte de una planta o de una parte de la planta, pero la célula también puede estar en forma aislada.
De forma adicional, en la presente memoria se describe el uso de semillas con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, para transferir el QTL de la invención, que confiere el rasgo de sabor de la invención, en otra planta de pimiento.
En la presente memoria también se describe el uso de una planta de pimiento, que es una planta que porta el QTL de la invención, que confiere el rasgo de sabor de la invención, presente en y que se puede obtener a partir de una planta Capsicum baccatum o de pimiento que porta el QTL de la invención, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, como un cultivo.
En la presente memoria se describe además el uso de una planta de pimiento, que porta el QTL de la invención, que confiere el rasgo de sabor de la invención, presente en y que se puede obtener a partir de una planta Capsicum baccatum o de pimiento, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, como fuente de semillas.
Además, en la presente memoria se describe el uso de una planta de pimiento, que porta el QTL, que confiere el rasgo de sabor de la invención, presente en y que se puede obtener a partir de una planta Capsicum baccatum o de pimiento, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, como una fuente de material de propagación.
En la presente memoria se describe además el uso de una planta de pimiento, que porta el QTL que confiere el rasgo de sabor de la invención, presente en y que se puede obtener a partir de una planta Capsicum baccatum o de pimiento, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, para su consumo.
En la presente memoria también se describe el uso de una planta de pimiento o una planta Capsicum baccatum, que porta el QTL que confiere el rasgo de sabor de la invención, presente en semillas con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB, para conferir el QTL que da lugar al rasgo de la invención a una planta de pimiento.
Además, en la presente memoria se describe el uso de una planta de pimiento, como destinataria del QTL, presente en y que se puede obtener a partir de una planta Capsicum baccatum o de pimiento que porta el QTL de la invención, en particular una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB.
La presente invención también se refiere a un fruto de pimiento, o partes del mismo, recolectado de una planta de pimiento de la invención, que produce frutos con un sabor novedoso y que comprende el QTL como se define en la presente memoria, en donde el QTL está presente preferiblemente de forma homocigótica. Naturalmente, esto también se refiere a cualquier producto alimenticio o producto alimenticio procesado hecho de dicho fruto de pimiento.
Una planta de pimiento de la invención también podría usarse como germoplasma en un programa de fitomejoramiento para el desarrollo de otras plantas de pimiento que comprendan el QTL que provoca el sabor novedoso.
Además, en la presente memoria se describe un ácido nucleico o una parte del mismo, opcionalmente en forma aislada, que provoca un sabor novedoso en frutos de pimiento, que es un ácido nucleico que se origina de LG3 y está ligado en el mismo a al menos un marcador molecular seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 y/o está presente en semillas con el número de acceso NCIMB 42137 del NCIMB. Un experto en la técnica sería capaz de aislar el ácido nucleico que provoca el rasgo de sabor de la invención o una parte del mismo del genoma de una planta de pimiento de la invención, y usarlo para crear nuevos marcadores moleculares que estén ligados al QTL y con el rasgo de la invención.
La presente invención también se refiere a un marcador molecular seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11
La presente invención también se refiere al uso de un marcador molecular, en donde el marcador se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 para identificar el QTL ubicado en LG3 en una planta de pimiento con un sabor novedoso, o para desarrollar una planta de pimiento con un sabor novedoso.
En la presente memoria también se describe el uso de dicho marcador molecular para identificar o desarrollar otros marcadores ligados al QTL en LG3 que provoca el sabor novedoso.
Para establecer la presencia del QTL de la invención en el genoma de una semilla o planta, es necesario al menos un marcador molecular, pero puede usarse cualquier combinación de los marcadores moleculares según SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11. El genotipado de una población o colección de plantas que no es uniforme para el rasgo de sabor de la invención puede realizarse usando al menos un conjunto de marcadores moleculares seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1 más SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 más SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 más SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 más SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 más SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 11 más SEQ ID NO: 12. La presencia del rasgo de sabor de la invención también puede determinarse fenotípicamente en cualquier generación de un proceso de introgresión.
De forma adicional, en la presente memoria se describe un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, que comprende
a) cruzar una planta que comprende un QTL que da lugar al rasgo con otra planta;
b) seleccionar plantas que tengan el rasgo en la siguiente generación;
c) opcionalmente realizar una o más rondas adicionales de autopolinización o cruce, y posteriormente seleccionar una planta que comprenda/muestre el rasgo de la invención. Seleccionar plantas que tienen el rasgo de sabor novedoso pueden realizarse molecularmente usando marcadores moleculares ligados al rasgo como se describe en la presente memoria y/o fenotípicamente en la F1 o F2 o cualquier otra generación.
La palabra “ rasgo” , en el contexto de esta solicitud, se refiere al fenotipo de la planta. En particular, la palabra “ rasgo” se refiere al rasgo de la invención, más en particular al rasgo de frutos de pimiento con sabor novedoso. La expresión “ QTL” (es decir, “ locus de rasgo cuantitativo” ) se usa para la información genética en el genoma de la planta que provoca el rasgo de sabor de la invención. Cuando una planta muestra el rasgo de sabor de la invención, su genoma comprende el QTL que provoca el rasgo de la invención. Por tanto, la planta tiene el QTL de la invención. En la presente memoria se describe que el QTL es una introgresión del grupo de ligamiento 3 (LG3) de C. baccatum. Está claro que el progenitor que proporciona el rasgo de la invención no es necesariamente una planta cultivada directamente a partir de las semillas depositadas. El progenitor también puede ser una planta de la descendencia de la semilla depositada, obtenida, por ejemplo, por autopolinización o cruce, o una planta de la descendencia de semillas identificadas por tener el rasgo de la invención por otro medio.
En la presente memoria se describe además un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, que comprende
a) cruzar una planta que comprende el QTL que da lugar al rasgo con otra planta;
b) retrocruzar opcionalmente la F1 resultante con el progenitor preferido;
c) seleccionar plantas que tengan el rasgo en la siguiente generación;
d) opcionalmente realizar una o más rondas adicionales de autopolinización o cruce, y posteriormente seleccionar una planta que comprenda el rasgo.
En la presente memoria también se describe un método para introducir otro rasgo deseado en una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, que comprende:
a) cruzar una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, cuyas semillas representativas se depositaron con el número de depósito NCIMB 42137, con una planta de pimiento que comprende un rasgo deseado para producir descendencia F1;
b) seleccionar en la descendencia F1, plantas que comprendan dicho rasgo de sabor novedoso y el rasgo deseado; c) cruzar las plantas de la descendencia F1 seleccionadas con cualquier progenitor, para producir descendencia retrocruzada;
d) seleccionar plantas de la descendencia retrocruzada que comprendan el rasgo deseado y el rasgo del sabor novedoso; y
e) opcionalmente repetir las etapas c) y d) una o más veces en sucesión para producir una cuarta descendencia seleccionada o descendencia de retrocruzamiento superior que comprenda el rasgo deseado y el rasgo de sabor novedoso. En la presente memoria se describe una planta de pimiento producida mediante este método.
En una realización, la selección de plantas que tienen el rasgo de sabor novedoso se realiza en la generación F1 o cualquier otra generación usando cualquiera o cualquier combinación de los marcadores según SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11. En otro aspecto, la selección del rasgo de la invención se inicia en la F2 de un cruce o, de forma alternativa, de un retrocruzamiento. La selección de plantas en la F2 puede hacerse fenotípicamente, así como usando dicho marcador o marcadores que detectan directa o indirectamente el QTL subyacente al rasgo. La selección fenotípica puede realizarse adecuadamente saboreando y/o determinando el perfil bioquímico de los frutos de pimiento.
En una realización, la selección de plantas que tengan el rasgo de sabor novedoso se inicia en la F3 o una generación posterior.
En una realización, la planta que comprende el QTL es una planta de una línea endogámica, un híbrido, un haploide doble o de una población segregante.
La invención proporciona además un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso usando una técnica de generación de haploides dobles para generar una línea haploide doble que comprenda dicho rasgo.
En la presente memoria también se describe una semilla híbrida que puede crecer en una planta que tiene el rasgo de sabor novedoso y un método para producir dicha semilla híbrida, que comprende cruzar una primera planta progenitora con una segunda planta progenitora y recolectar la semilla híbrida resultante, en donde dicha primera planta progenitora y/o dicha segunda planta progenitora es la planta que se reivindica.
Además, en la presente memoria se describe un método para producir una planta de pimienta híbrida que tiene el rasgo de sabor novedoso, que comprende cruzar una primera planta de pimiento progenitora con una segunda planta de pimiento progenitora y recolectar la semilla híbrida resultante, de la que la primera planta progenitora y/o la segunda planta progenitora tienen el rasgo de sabor novedoso, y cultivar dichas semillas híbridas en plantas híbridas que tienen el rasgo de sabor novedoso.
La invención también se refiere a un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso usando una semilla que comprende un QTL en su genoma que da lugar al rasgo de sabor novedoso para cultivar dicha planta de pimiento. Las semillas son adecuadamente semillas, de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 42137.
Además, en la presente memoria se describe un método para la producción de semillas que comprende cultivar plantas de pimiento a partir de semillas, de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 42137, permitiendo que las plantas produzcan semillas y recolectando esas semillas. La producción de las semillas se realiza adecuadamente mediante cruce o autopolinización.
En una realización, la invención se refiere a un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso usando histocultivo.
La invención se refiere además a un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso usando reproducción vegetativa.
En la presente memoria también se describe un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso usando un método para modificación genética para producir la introgresión del QTL que provoca dicho rasgo en la planta de pimiento. La modificación genética comprende modificación transgénica o transgénesis, usando un gen de una especie que no se puede cruzar o un gen sintético, y modificación cisgénica o cisgénesis, usando un gen natural, que codifica un rasgo (agrícola), de la propia planta de cultivo o de una planta donadora de sexualmente compatible.
En una realización, la fuente de la que se adquiere la información genética, en particular el QTL, está formada por una planta cultivada a partir de las semillas depositadas, o por descendientes sexuales o vegetativos de las misma.
En otra realización, la fuente de la que se adquiere la información genética, en particular el QTL, está formada por una planta Capsicum baccatum.
De forma adicional, en la presente memoria se describe un método de fitomejoramiento para el desarrollo de plantas de pimiento que tengan el rasgo de sabor novedoso, en donde se usa germoplasma que comprende el QTL que provoca dicho rasgo. El germoplasma está constituido por todas las características hereditarias de un organismo y abarca al menos el rasgo de sabor novedoso de la invención. La semilla representativa de dicha planta que comprende el QTL y que es representativa del germoplasma se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 42137.
En la presente memoria se describe además un método para la producción de una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, en donde la descendencia o el material de propagación de una planta que comprende el QTL que confiere dicho rasgo se usa como fuente para producir la introgresión de dicho rasgo en otra planta de pimiento. La semilla representativa de dicha planta que comprende el QTL se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 42137.
La introgresión, como se usa en esta solicitud, pretende indicar la introducción de un rasgo en una planta que no porta el rasgo, por medio de cruce y selección.
Además, en la presente memoria se describe una planta de pimiento que tiene el rasgo de sabor novedoso, que es una planta que puede obtenerse mediante cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria y/o son conocidos para el experto.
En ausencia de marcadores moleculares, o en el caso de que la recombinación entre el QTL y el marcador haya tenido lugar de modo que el marcador ya no sea predictivo, puede determinarse por una prueba de alelismo si el rasgo está provocado por el mismo QTL. Para realizar una prueba de alelismo, una planta de comprobación, que es homocigótica para el QTL conocido de la invención, se cruza con el material a someter a prueba, que también es homocigótico para la información genética subyacente al rasgo de sabor. Cuando no hay segregación para que el rasgo a observar en la F2 del cruce, se ha demostrado que los QTL son equivalentes o iguales.
Cuando más de un gen puede ser responsable de un determinado rasgo, y se realiza una prueba de alelismo para determinar la equivalencia, el experto que hace la prueba tiene que asegurarse de que todos los genes relevantes estén presentes de forma homocigótica para que la prueba funcione correctamente.
Depósitos
Las semillas de la línea de Capsicum annuum L. 12R.6869-00 que comprende el QTL de la invención que da lugar a la planta de pimiento que produce frutos que tienen un sabor nuevo sorprendente, se depositaron en NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, Reino Unido, el 12 de abril de 2013 con el número de acceso de depósito NCIMB 42137. Las semillas de este depósito comprenden el QTL en un estado homocigótico. Las semillas depositadas no cumplen los criterios DUS que son necesarios para obtener la protección de variedad de planta y, por lo tanto, no pueden considerarse variedades de plantas.
Información de marcadores
Tabla 1: Marcadores SNP moleculares
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Las secuencias SNP de los marcadores SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 están en el genoma de semillas del depósito NCIMB 42137 ligadas al QTL de la invención, que confiere el sabor novedoso a frutos de plantas de pimiento. Estas secuencias SNP pueden usarse como marcadores moleculares para un sabor novedoso de frutos de plantas cultivadas a partir de semillas de dicho depósito.
Las secuencias de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 12 representan los alelos de C. annuum natural para los marcadores SNP moleculares SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11, respectivamente.
Los nucleótidos que difieren entre el marcador y la forma natural están subrayados.
Figuras
La presente invención se ilustrará adicionalmente en los ejemplos que siguen y que no pretenden ser limitantes del alcance de la misma. En los ejemplos se hace referencia a las siguientes figuras:
Figura 1: Representación gráfica del QTL de la invención en LG3. Solo se indican regiones con fragmentos de C. baccatum. Las introgresiones de C. baccatum se indican con sus marcadores como B (homocigóticas, en negrita) o H (heterocigóticas, es decir, segregante en la NIL), mientras que el fondo genómico de C.annuum se indica con A.
Figura 2: Mapa genético del grupo de ligamiento 3 (LG3) de la población C. annuum x C. baccatum BC2.
Ejemplos
Ejemplo 1
Desarrollo de una planta de pimiento con un sabor nuevo
El acceso PEN45 de Capsicum baccatum var. pendulum se usó como progenitor donador para retrocruzamiento (BC) con tres líneas cultivadas de fitomejoramiento de Capsicum annuum Blocky (MT, SM y GNM). Debido a las dificultades en el cruce interespecífico, se generó una población BC2 de múltiples progenitores, que consiste en tres subpoblaciones, para el desarrollo del mapa de ligamiento. La subpoblación PEN45 BC2 más grande de las tres, con los progenitores Blocky SM y GNM en su árbol genealógico, se eligió para estudiar las características de los frutos con más detalle. En esta población, 34 del total de 54 plantas BC2, dieron suficientes semillas endogámicas para cultivar líneas BC2S1. En 2009, las 34 líneas BC2S1 se cultivaron en parcelas de 5-9 plantas con, si es posible, 2 repeticiones (posible para 23 líneas BC2S1) en un diseño de bloque aleatorio. Las plantas se cultivaron en tierra en un invernadero en De Lier, Países Bajos, con 2 tallos por planta y con 2,5 plantas/m2.
Debido a la generación (BC2S1) del material y la presencia de dos líneas de fitomejoramiento diferentes (SM y GNM) en su árbol genealógico, las líneas todavía eran segregantes para varios rasgos. Para hacer crecer las líneas BC2S1 de manera lo más uniforme posible, las plantas se preseleccionaron con un marcador basado en el locus Pun1 para plantas no acres y con un marcador basado en el gen CCS (capsantina-capsorrubina sintasa) para plantas no rojas (es decir, amarillas o naranjas). Para compensar la selección frente a fragmentos de PEN45 ligados a Pun1 o CCS con características potencialmente interesantes, se usaron dos y cinco líneas BC2S1 (de las 34 líneas) para seleccionar plantas con frutos naranjas acres homocigóticos y frutos rojos no acres homocigóticos, respectivamente. Estas plantas también se cultivaron en 2 repeticiones con parcelas de 5 plantas. Los genotipos SM, GNM y PEN45 se cultivaron como controles en cuatro repeticiones.
En el momento de la maduración de los primeros frutos, las parcelas de BC2S1 se hicieron fenotípicamente más uniformes eliminando las plantas más aberrantes, principalmente estériles, de las parcelas. En total, 25 de las líneas BC2S1 fueron uniformes para color naranja, las otras 9 líneas se segregaron en plantas con frutos naranjas o amarillos. Al final, 250 plantas BC2S1 permanecieron en 69 parcelas (1-6 plantas) y se usaron para cartografiar el QTL, de las que 160 plantas dieron frutos naranjas, 61 amarillos y 29 rojos.
Se usaron tres plantas BC2S1 diferentes, derivadas de tres plantas BC2 diferentes para desarrollar líneas casi isogénicas (NIL) mediante una generación de retrocruzamiento con GNM, seguida de dos etapas de autopolinización. Una población de NIL consiste en líneas genéticamente homogéneas, que solo difieren entre sí por la presencia de un solo fragmento (diferente) o solo un número limitado de fragmentos de introgresión de un progenitor donador. En este caso, el progenitor donador es el acceso PEN45, el progenitor C. baccatum.
Cada generación (es decir, resultante de las etapas de retrocruzamiento y autopolinización) se genotipó con SNP que flanquean las introgresiones BC2S1 originales para obtener líneas con un número limitado de introgresiones en un fondo genético GNM. En 2011, se cultivaron 23 NIL y el progenitor recurrente (GNM) en tres repeticiones con 5 plantas por parcela en una configuración completamente aleatoria. Las plantas se cultivaron en condiciones similares a las de las líneas BC2S1 en un invernadero, esta vez en otoño y en lana de roca.
Ejemplo 2
Muestreo de frutos de pimiento para análisis sensitivo y bioquímico
Se usaron frutos de pimiento maduros (95-100 % de color) del segundo conjunto de frutos para mediciones bioquímicas y evaluación sensitiva. Los frutos se almacenaron después de la recolección en un recinto aclimatado a 20 °C con un 80 % de humedad relativa durante 3-4 días para optimizar la maduración. Este es un procedimiento para imitar el sistema comercial holandés. Durante el día de las evaluaciones sensitivas, los frutos se lavaron con agua del grifo fría, se secaron con una toalla limpia, se cortaron (se descartaron la parte superior e inferior) en trozos de 1-2 cm, estos trozos se mezclaron y se retiraron las semillas. La mitad de los trozos de fruto de cada muestra se congeló inmediatamente en nitrógeno líquido, se molió en un molino eléctrico y se almacenó a -80 °C para análisis bioquímico posterior, mientras que la otra mitad se usó para la evaluación del sabor.
Se recolectaron frutos de las plantas BC2S1 por parcela y en el caso de parcelas segregantes para plantas con frutos de naranjas o amarillos, los dos colores se combinaron por separado. Las 56 parcelas de BC2S1 (37 naranjas, 15 amarillas y 4 rojas) proporcionaron suficientes frutos para hacer muestras de frutos representativas de 5-8 frutos para la evaluación sensitiva. Además, 32 muestras estaban compuestas por parcelas y/o plantas individuales que no proporcionaron suficientes frutos para la evaluación sensitiva o que eran acres.
En el experimento de NIL, 20 NIL y GNM proporcionaron suficientes frutos y se evaluaron como combinaciones por parcela.
Ejemplo 3
Análisis sensitivo
El análisis descriptivo del rasgo de la invención tuvo lugar en un laboratorio sensitivo en el invernadero de horticultura Wageningen UR (WUR-GH, Bleiswijk, Países Bajos). Trece panelistas independientes, que forman parte de un panel instruido con una amplia experiencia en evaluaciones sensitivas de productos alimenticios, incluyendo pimiento, tomaron parte en el experimento.
Se realizaron dos experimentos diferentes. En 2009, las 34 líneas BC2S1 se sometieron a prueba y en 2011 las NIL, derivadas de estas líneas BC2S1 se sometieron a prueba.
En ambos experimentos, cada panelista recibió 5 trozos de fruto por muestra en una copa cerámica y se le pidió que marcara la intensidad de los atributos en una escala lineal estructurada de 100 mm horizontal en papel, dando como resultado una puntuación entre 0 y 100. Los panelistas tragaron los trozos de fruto de pimiento. Entre las muestras, los panelistas aclararon su boca con agua mineral sin sabor para neutralizar su paladar y también se les permitió comer un pequeño aperitivo sin sal antes de enjuagar su boca. No se proporcionó información al panel sobre los genotipos.
En el experimento de BC2S1, en las semanas antes de las sesiones de prueba, los panelistas participaron en sesiones de formación con genotipos de pimiento disponibles comercialmente. Durante las sesiones de formación, los panelistas estuvieron de acuerdo en catorce atributos para describir la sensación de sabor en la boca, que fueron los atributos de textura crujiente, pegajosidad de la piel, dureza y jugosidad, los atributos de sabor básicos dulzor y acidez y los atributos de sabor retronasal intensidad del aroma, a hierba, a judía verde, a zanahoria, a fruta/manzana, perfume, petroquímico y mohoso. En ninguno de los experimentos, el panel evaluó por separado el olor (nasal) de los frutos. Durante las sesiones de prueba del experimento de BC2S1, cada panelista evaluó 21-22 genotipos en un orden aleatorio, dividido durante 2 días posteriores. En ambos días, se evaluaron 2 sesiones con 5-6 genotipos por panelista. En esta configuración, cada muestra se evaluó por 4-5 panelistas.
En las semanas antes de las sesiones de prueba para el experimento de NIL, los panelistas participaron en sesiones de formación con frutos de NIL preseleccionados con sabores divergentes.
Para el experimento de NIL, se dividieron doce panelistas en tres grupos de cuatro personas. Cada grupo evaluó las 20 NIL de una única repetición en un orden aleatorio (diseño de bloque completo), dividido durante 2 días posteriores. En ambos días, se evaluaron 2 sesiones con 5 NIL y GNM como referencia por panelista.
Durante la evaluación sensitiva de los frutos en el experimento de BC2S1, se hizo evidente que el vocabulario (es decir, los atributos predefinidos) del panel instruido no era suficiente para cubrir toda la variación de sabor, lo que dio como resultado comentarios en las hojas de evaluación como “ presencia de sabor a fruta tropical” , “ sabor a cebollino” o “ similar a papaya” . Esto estuvo provocado por el hecho de que los panelistas participaron en las sesiones de formación con solo los genotipos disponibles comercialmente, que carecen de estos sabores novedosos e inesperados. Para el experimento de NIL, el panel de prueba también se formó con frutos de NIL preseleccionados que tenían sabores más extremos que los disponibles actualmente en el segmento de pimiento comercial holandés. Esto dio como resultado una expansión del vocabulario del panel con los atributos de sabor floral, especias no acres, a apio, a cebollino y amargo, mientras que el atributo perfume ya no se usó.
Los datos sensoriales se analizaron en Genstat versión 12 usando un análisis de REML (probabilidad máxima residual) de modelo mixto lineal. Para el experimento de BC2S1, se usó un modelo con genotipo, réplica y su interacción como términos fijos. Las sesiones (sesiones de sabor) dentro de las combinaciones de réplica/genotipo y los panelistas dentro de las sesiones se tomaron como términos aleatorios. En el análisis estadístico del experimento de NIL, se usó un modelo con genotipo como término fijo. El panelista, la interacción de panelista/genotipo y las repeticiones dentro de las combinaciones de panelista/genotipo se tomaron como términos aleatorios. En este experimento, la repetición y la sesión se confundieron completamente con el panelista y, por lo tanto, no se corrigieron como un factor combinado.
Para obtener una evaluación de la intensidad del olor (nasal), se recolectaron frutos maduros de las plantas BC2S1 y se combinaron por parcela (76 muestras excluyendo controles). Se cortaron cinco frutos representativos por muestra y se evaluaron para la intensidad del olor (nasal) (escala: 0 = sin olor - 7 = mucho olor, como C. baccatum acceso PEN45) por tres personas.
El análisis de QTL usando los datos sensoriales se realizó como se describe en el ejemplo 5.
Curiosamente, se encontró un QTL bastante fuerte (LOD 7,97, 38,7 % de varianza explicada) para la intensidad del olor en LG3 a 33,3 cM, proporcionando el alelo de C. baccatum un olor más intenso que el alelo de C. annuum (aumento de 3 puntos en la escala de 0-7). La nomenclatura de los grupos de ligamiento se refiere a los números de cromosoma de consenso como en Wu y col. (Theor. Appl. Genet. (2009) 118, 1279-1293).
El análisis de los datos sensoriales del experimento de NIL usando la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis, mostró que las NIL que tenían una introgresión de LG3 de C. baccatum heterocigótica (NIL40, NIL46 y NIL48) u homocigótica (NIL37, NIL38 y NIL39) de 32,9 a 33,4 cM (figura 2) tienen puntuaciones significativamente más altas para los atributos de sabor retronasal aroma, floral, especias no acres, a apio y a cebollino, y una puntuación significativamente más baja para el atributo de sabor retronasal a hierba (tabla 2). Esto confirmó que la pequeña introgresión de C. baccatum en LG3 de 32,9 a 33,4 cM tiene un efecto extraordinario sobre el sabor.
Dichos efectos fueron más fuertes en los frutos de plantas que tenían el QTL en LG3 en un estado homocigótico. En los frutos de plantas que tenían el QTL en LG3 en un estado heterocigótico, las puntuaciones para los atributos de sabor aroma, floral, especias no acres, a apio, a cebollino y a hierba fueron intermedias entre los frutos de pimiento de plantas sin el QTL de la invención y frutos de plantas que tenían el QTL de la invención en un estado homocigótico.
El sabor de los frutos de la línea progenitora C. baccatum var. pendulum se sometió a prueba por separado por un grupo de personas que estaban acostumbradas a comer alimentos acres. Este grupo describió el sabor de los frutos de la línea progenitora C. baccatum var. pendulum como afrutada, no muy aromática y ácida. Esto contrasta claramente con la variación mucho mayor en los sabores encontrados en las plantas de la invención, y hace que el efecto que la introgresión de C. baccatum tiene en las plantas de la invención sea muy inesperado.
Tabla 2. Puntuación de volátiles y sabor del QTL en LG3
Figure imgf000014_0001
butanoico
Figure imgf000015_0001
_____ _____
LG3 se refiere a la introgresión de C. baccatum de 32,9-33,4 cM del grupo de ligamiento 3. Se dan el porcentaje de varianza explicada (% de VE), estimada (p. Van Ooijen, MapQTL 6: programa informático para el cartografiado de locus de rasgo cuantitativo en poblaciones experimentales de especies diploides (2009) Kyazma BV, Wageningen) o medias directas (m), efecto aditivo estimado (ad.) y distribución de genotipo (A/H/B). A = homocigótico para el alelo de C. annuum de TS, H = heterocigótico, B = homocigótico para la introgresión de C. baccatum en LG3. Para el experimento de la población BC2S1, los valores promedio de metabolitos para frutos de GNM (progenitor C. annuum) y para frutos de OG (Orange Glory, una variedad de C. annuum de tipo Blocky naranja disponible comercialmente). Los valores de metabolitos representan valores de log2 de intensidades de pico. nc = no consta, nd = no detectado.
Ejemplo 4
Perfil metabólico
El perfil bioquímico de los experimentos de BC2S1 y NIL se realizó como se describe en Eggink y col. (Food Chemistry (2012) 132, 301-310). En el experimento de BC2S1 se analizaron 92 muestras de frutos de pimiento, entre ellas, las muestras de frutos de la línea progenitora de C. annuum GNM y las muestras de frutos de la línea de referencia híbrida Orange Glory de C. annuum Blocky naranja comercial.
En resumen, el perfil de metabolitos volátiles se realizó usando MEFS-CG-EM con cámara volátil. Los perfiles de CG-EM obtenidos se procesaron mediante el paquete de programa informático MetAlignTM (http://www.metign.nl) para la corrección a la referencia, la estimación del ruido y la alineación espectral de masa por iones. Se usó la estrategia de reconstrucción espectral de masas de múltiples variables (MMSR) (Tikunov y col., Metabolomics (2012) 8, 714-718) para reducir los datos a los espectros de masas de compuestos volátiles. Cada compuesto se representó mediante un único fragmento de ion selectivo en el siguiente análisis de datos de múltiples variables. Los compuestos (número de iones de fragmento en un espectro de masas >5) se sometieron entonces a una identificación tentativa usando la colección espectral de masas NIST (http://www.nist.gov). Se asignaron identidades fiables a compuestos con un factor de coincidencia de espectros de masas >600. La abundancia de compuestos volátiles (intensidad) se representa como la altura de un pico de masa selectivo de un compuesto detectado en los cromatogramas por el programa informático MetAlign. Las intensidades que estaban por debajo del límite de detección en determinados genotipos, obtuvieron un valor aleatorio entre 250 y 500.
En el experimento de BC2S1 se detectaron en total 222 supuestos compuestos volátiles, de los que 22 compuestos volátiles eran específicos para PEN45 (es decir, bajo el límite de detección en todas las plantas BC2S1 y progenitores C. annuum). Las supuestas identidades putativas podían asignarse a 178 de estos. En el experimento de NIL, se detectaron en total 137 supuestos compuestos volátiles. Se asignaron identidades a 96 de estos.
Después de la confirmación de que la pequeña introgresión de C. baccatum en LG3 tiene un efecto extraordinario sobre el sabor (véase a.o. el ejemplo 3), se comprobó que los QTL de metabolitos podían cartografiarse, como se describe en el ejemplo 5, en la región LG3 en la población BC2S1. Esto dio como resultado cinco compuestos volátiles (tabla 2). De estos cinco metabolitos, tres también se detectaron y confirmaron en las NIL. El pico que representa la cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal mostró un fuerte aumento en la intensidad en presencia del alelo de C. baccatum, mientras que el éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina se redujeron en NIL que tenían la introgresión (tabla 2 ).
Los compuestos regulados por aumento confirmados también se verificaron para determinar su relación directa con el olor en la población BC2S1, dando como resultado una correlación de 0,53 para el pico que representa la cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal. La intensidad de los dos compuestos regulados por disminución, éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y 2-isobutil-3-metoxipirazina, solo disminuyó en las NIL homocigóticas y no en las NIL heterocigóticas, mientras que las concentraciones del compuesto que pueden ser cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal son incluso ligeramente más altas en las NIL heterocigóticas frente a homocigóticas (tabla 2). No se descubrió un efecto de 2-isobutil-3-metoxipirazina sola sobre el aroma, ya que las NIL con una intensidad significativamente disminuida o aumentada no se vieron afectadas en la intensidad del aroma.
En un experimento de seguimiento, se seleccionaron subNIL homocigóticas que tenían el QTL LG3 y se compararon con las subNIL sin el QTL LG3. De cada línea de plantas, se cultivó una parcela con 5 plantas. Posteriormente, la presencia o ausencia del sabor de la invención la puntuaron 2 personas que saborearon los frutos y el perfil de metabolitos volátiles se realizó en muestras de frutos (en general 2 frutos por muestra) de plantas individuales por MEFS-CG-EM, como se describe anteriormente. Esto dio como resultado una confirmación del efecto del sabor de QTL LG3 (tabla 3). Las muestras con el QTL de sabor LG3 de nuevo estaban reducidas en 2-isobutil-3-metoxipirazina, enriquecidas en el compuesto que es cetona de artemisia o 6-metil-4-oxo-5-heptenal, y enriquecidas en algunos compuestos volátiles derivados de lípidos: (E)-2-hexenal, (Z)-2-hexen-1-ol, 1-penten-3-ol, hexanal, (Z)-2-penten-1-ol y (E)-2-pentenal.
Tabla 3
Sabores y efectos bioquímicos del QTL de la invención en LG3
Figure imgf000016_0001
Los genotipos de las subNIL, el progenitor C. annuum GNM y NILS18 se indican como sigue: A = homocigótico para el alelo de C. annuum natural, B = homocigótico para la introgresión de C. baccatum en LG3 de la invención. Los valores de metabolitos representan las intensidades promedio de pico en log2 de 5 plantas. 1 Ausencia de sabor de la invención (-), presencia de sabor de la invención (+).
Ejemplo 5
Análisis de QTL
Las 250 plantas BC2S1 de la subpoblación PEN45 BC2 que tiene los progenitores Blocky SM y GNM en su árbol genealógico, se genotiparon con 239 SNP que fueron polimórficos en PEN45 frente a SM y GNM. El cartografiado de intervalos, con sesiones separadas para atributos sensitivos (14 atributos, 56 parcelas), metabolitos (200 compuestos volátiles y 6 no volátiles, 88 parcelas/plantas) y varias características físicas de los frutos más el olor (en 250 plantas o 76 parcelas), permitió la identificación de QTL dentro de todas las clases de rasgo.
El método de cartografiado de intervalos dentro del programa MapQTL 6 (Van Ooijen, MapQTL 6: programa informático para el cartografiado de locus de rasgo cuantitativo en poblaciones experimentales de especies diploides (2009) Kyazma BV, Wageningen) se usó para la identificación de QTL en el experimento de BC2S1. Se aplicó una prueba de permutación a cada conjunto de datos (1000 permutaciones) para determinar los umbrales LOD (logaritmo de posibilidades). Se usó un umbral de LOD genómico (GW, del inglés genome wide) de 2,7 para la significación de QTL (p <0,05). Las ubicaciones cromosómicas con las puntuaciones de LOD más altas se consideraron las posiciones más probables de un QTL. Los gráficos se produjeron por el programa informático MapChart (Voorrips, Journal of Heredity (2002) 93, 77-78). El experimento de NIL se analizó usando la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis dentro de MapQTL 6 para identificar marcadores que mostraran asociaciones de rasgo significativas (p <0,05). Los análisis en ambos experimentos se realizaron con datos de metabolitos transformados a log2.

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Una planta de pimiento (Capsicum annuum L.) que produce frutos con un sabor, en donde la planta de pimiento comprende un QTL que, cuando está presente da lugar al sabor, en donde el sabor se define porque los frutos de pimiento producidos por dicha planta tienen puntuaciones más altas para uno o más atributos de sabor seleccionados del grupo que consiste en aroma, floral, especias no acres, apio y cebollino, y/o una puntuación más baja para el atributo de sabor a hierba, y opcionalmente una mayor intensidad de olor, en comparación con frutos de pimiento de una etapa de maduración similar de plantas de pimiento isogénicas que no portan dicho QTL, y
    en donde el QTL está ubicado en LG3 y en donde dicho QTL es igual que un QTL que está presente en el genoma de plantas cultivadas a partir de semillas del depósito NCIMB 42137 y está ligado en el mismo a los marcadores SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11, y en donde el QTL está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  2. 2. Una planta de pimiento, según la reivindicación 1, en donde los frutos de la planta de pimiento tienen una cantidad más alta de cetona de artemisia y/o una cantidad más alta de 6-metil-4-oxo-5-heptenal y/o una cantidad más alta de (E)-2-hexenal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-hexen-1-ol y/o una cantidad más alta de 1-penten-3-ol y/o una cantidad más alta de hexanal y/o una cantidad más alta de (Z)-2-penten-1-ol y/o una cantidad más alta de (E)-2-pentenal y/o una cantidad más baja de éster 3-hexenílico del ácido (Z)-butanoico y/o una cantidad más baja de 2-isobutil-3-metoxipirazina en comparación con frutos de una etapa de maduración similar de una planta de pimiento isogénica que no comprende dicho QTL.
  3. 3. Semilla de una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2, que comprende el QTL como se define en la reivindicación 1 o 2, que es un QTL que está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  4. 4. Semilla que puede producir una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2, que comprende el QTL como se define en la reivindicación 1 o 2, que es un QTL que está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  5. 5. Descendencia de una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2 o la descendencia de una planta de pimiento cultivada a partir de una semilla según la reivindicación 3 o 4, en donde la descendencia de la planta comprende el QTL como se define en la reivindicación 1 o 2, que es un QTL que está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  6. 6. Material de propagación derivado de una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2 o 5 o derivado de una semilla de pimiento según la reivindicación 3 o 4, en donde el material de propagación comprende el QTL como se define en la reivindicación 1, que es un QTL que está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  7. 7. Material de propagación que puede producir una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2, que comprende el QTL como se define en la reivindicación 1, que es un QTL que está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  8. 8. Material de propagación según la reivindicación 6 o 7, en donde el material de propagación se selecciona del grupo que consiste callos, microsporas, polen, ovarios, óvulos, embriones, sacos embrionarios, ovocitos, esquejes, raíces, tallos, células, protoplastos, hojas, cotiledones, hipocótilos, células meristemáticas, raíces, ápices radiculares, microsporas, anteras, flores, semillas y tallos o partes o histocultivo de los mismos.
  9. 9. Un fruto de pimiento, o partes del mismo, de una planta de pimiento según la reivindicación 1 o 2 o cultivada a partir de una semilla según la reivindicación 3 o 4, que comprende el QTL como se define en la reivindicación 1, en donde el QTL está presente preferiblemente de forma homocigótica.
  10. 10. Marcador molecular seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11.
  11. 11. Uso de un marcador molecular seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 11 para identificar o desarrollar plantas de pimiento que produzcan frutos con el sabor como se define en la reivindicación 1 o 2, y/o identificar el QTL ubicado en LG3 en una planta de pimiento como en la reivindicación 1, y/o para desarrollar otros marcadores ligados al QTL en LG3 como en la reivindicación 1.
  12. 12. Método para la producción de una planta de pimiento como se define en la reivindicación 1 o 2, usando una semilla que comprende un QTL en su genoma que da lugar al sabor como se define en la reivindicación 1 o 2 para cultivar dicha planta de pimiento.
  13. 13. Método según la reivindicación 12, en donde la semilla es la semilla de la que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 42137.
  14. 14. Método para la producción de una planta de pimiento como se define en la reivindicación 1 o 2, usando una técnica de generación de haploides dobles para generar una línea haploide doble que comprenda dicho rasgo.
  15. 15. Método para la producción de una planta de pimiento como se define en la reivindicación 1 o 2, usando histocultivo.
  16. 16. Método para la producción de una planta de pimiento como se define en la reivindicación 1 o 2, usando reproducción vegetativa.
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