ES2944947T3 - Variantes de triterpeno-saponina, métodos de síntesis y uso de las mismas - Google Patents

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William E Walkowicz
Alberto Fernandez-Tejada
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Abstract

Se describen varias variantes de saponina triterpénica con diferentes modificaciones en su enlace éster de glicosilo central. También se describen métodos de preparación y métodos de uso de dichas variantes de saponina triterpénica. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Variantes de triterpeno-saponina, métodos de síntesis y uso de las mismas
Campo
La presente invención se refiere de manera general a adyuvantes derivados de triterpeno-glicósido-saponina. Más específicamente, la invención se refiere a variantes de saponina con modificaciones de enlace glicosídico central que muestran conformaciones y actividades de adyuvante distintas.
Antecedentes
La mayoría de los adyuvantes inmunológicos son emulsiones que estimulan una respuesta inmunitaria, que han mostrado potenciales valiosos en el desarrollo de vacunas contra toxinas y virus tales como difteria-tétanostosferina, hepatitis B, hepatitis A, virus del papiloma humano y virus de la gripe. Sin embargo, tienen funciones muy limitadas en el desarrollo de vacunas terapéuticas y profilácticas para otras enfermedades, tales como cáncer, infección por VIH, malaria, herpes, tuberculosis debido a la escasa inmunogenicidad antigénica y a las insuficientes respuestas inmunitarias de tipo Th1 mediadas por células. Por otro lado, determinados adyuvantes inmunológicos, tales como el producto natural de saponina QS-21, se aíslan a partir de la corteza del árbol Quillaja saponaria Molina, para estimular las respuestas inmunitarias tanto Th1 como Th2 contra antígenos exógenos, lo que hace que sean ideales para su uso en el desarrollo de vacunas contra enfermedades infecciosas, trastornos neurodegenerativos y cáncer. Como extracto vegetal purificado que contiene compuestos de triterpeno-glucósido solubles en agua, QS-21 se encuentra actualmente en evaluación clínica como adyuvante para diversas vacunas de ensayo, incluyendo aquellas para el VIH, la malaria y el cáncer.
No obstante, QS-21 presenta varias desventajas incluyendo la inestabilidad química a temperatura ambiente, que dificulta la implementación de vacunas en los países en desarrollo, toxicidad limitante de la dosis que implica eritema local e inflamación, así como síntomas sistemáticos similares a la gripe, y purificación de bajo rendimiento (0,001%) a partir de la fuente natural. Con el fin de abordar los problemas anteriormente mencionados, un enfoque clave sería realizar diversas modificaciones en diversas subestructuras o dominios de QS-21 y otros compuestos de saponina, así como en los enlaces entre estos dominios para investigar las estructuras específicas que desempeñan papeles críticos en sus estabilidades, purificación, funciones o aplicaciones, y proporcionar posibles variantes candidatas que puedan mostrar características ventajosas en algunos de los aspectos anteriores de los mismos.
En la estructura de QS-21 y otros compuestos relacionados, el posible papel que desempeña el enlace glicosil éster central en sus estabilidades, funciones y aplicaciones sigue siendo desconocido, y aún no se han estudiado las modificaciones en el enlace glicosil éster central. En la presente invención, se han desarrollado o investigado el diseño, la síntesis, la evaluación inmunológica y el análisis de dinámica molecular de una serie de novedosas variantes de QS-21 con longitudes de grupo de unión, estereoquímica y flexibilidad diferentes para explorar sus conformaciones y actividades de adyuvante in vivo específicas.
E. K. Chea et al., J. Am. Chem. Soc. 134(32):13448-13457 (2012); y A. Fernández-Tejada et al., Bioorg. Med. Chem. 22(21):5917-5923 (2014), y Nature Chemistry 6(7):635-645 (2014), describen variantes de QS-21 y su uso como adyuvantes de vacuna.
Sumario
La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado del grupo que consiste en
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Tal compuesto puede formar parte de una composición farmacéutica. La composición farmacéutica comprende el compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, una cantidad inmunológicamente eficaz de un antígeno y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Un compuesto de la presente invención puede usarse en un método para inmunizar un sujeto. El método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de la composición farmacéutica tal como se definió anteriormente.
Un compuesto de la presente invención puede usarse en un método para tratar un trastorno en un sujeto. El método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de la composición farmacéutica tal como se definió anteriormente, en el que el trastorno es cáncer, una enfermedad infecciosa o una enfermedad neurodegenerativa.
Breve descripción de los dibujos
Lo siguiente son descripciones breves de los dibujos en el presente documento.
La figura 1 muestra las estructuras de producto natural QS-21 y análogos de saponina QS semisintéticos. Panel a: estructura del inmunoadyuvante producto natural de saponina QS-21 (mezcla =2:1 de 1a/1b). Panel b: estructuras de un compuesto inicial semisintético simplificado 2 y variantes de enlace glicosídico correspondientes 3-9 diseñadas para investigar los efectos de la longitud, la estereoquímica y la flexibilidad conformacional de los grupos de unión sobre la actividad de adyuvante. Los códigos de SQS (QS sintético) de cuatro números designan las variantes estructurales en cada uno de los cuatro dominios estructurales correspondientes de QS-21, de izquierda a derecha, asignándose 0 a la estructura de producto natural.
La figura 2 representa el esquema 1: síntesis de aceptores de glicosilo a partir de prosapogenina protegida (PPS) 10. Reactivos y condiciones: (a) (Ph0)2P(0)N3, EfeN, PhH, 80°C, 79%; (b) S0Ch, pir., CH2Ch, 0°C, 99%; (c) H0(CH2)2NH2, CH2Cl2, 0°C, 88%; (d) NHa, CH2Ch, 0°C, 92%; (e) Bu4NBH4, CH2Cl2, 0°C, 87%; (f) Tf20, pir., CH2Cl2, 0°C; AcSK, 18-corona-6, 1:1 THF/DMF, 0°C, 92%; (g) H2NNH2, DTT, THF/DMF 1:1, 90%. DTT = ditiotreitol; PPS = prosapogenina protegida.
La figura 3 representa el esquema 2: síntesis de variantes de enlace glicosídico mediante glicosilaciones tradicionales usando el donante de glicosilo como electrófilo. Reactivos y condiciones: (a) Ph2S0, Tf20, TBP, CH2Cl2, -45°C, luego añadir 13, 87% (p sólo); (b) Ph2S0, Tf20, TBP, CH2Cl2, -45°C, luego añadir 14, 60-78% de rendimiento combinado de anómeros separables (2 equiv. de 14 ^ p/a-19 de 2:1 a 4:1; 2 equiv. de 17 - p/a-19 1:6); (c) (C0Br)2, DMF, TBP, CH2Cl2, 0°C, 74%; (d) X = 0: 15, Ag0Tf, TBP, CH2Cl2, -40°C, 69% de rendimiento aislado de anómero p (razón p/a >20:1 en producto en bruto); (e) X = S: 16, NaH, THF/DMF 2,5:1, 0°C, 69%. TBP = 2,4,6-tri-terc-butilpiridina.
La figura 4 representa el esquema 3: síntesis de variantes de enlace glicosídico usando el donante de glicosilo como nucleófilo. Reactivos y condiciones: (a) NaH, luego añadir 11, THF, 79% de rendimiento combinado de anómeros separables (p/a 2:1: 53% de p-23, 26% de a-23); (b) NaH, luego añadir 12, THF/DMF 1:1, -20°C, 70% (a/p 6:1: 60% de a-24, 10% de p-24); (c) (C0Br)2, DMF, TBP, CH2Cl2, 0°C, 80%; (d) Cs2CO3, AcSH, THF/DMF 1:1, 87% (p sólo); (e) H2NNH2, DTT, Me0H/THF 1:1, 94%; (f) 12, NaH, THF, 0°C, 87% (p sólo). DTT = ditiotreitol.
La figura 5 representa el esquema 4: instalación de cadenas de acilo y desprotección global de variantes de enlace de saponina QS. Reactivos y condiciones (a) H2S, pir., Et3N, 78-94%; (b) éster monobencílico de ácido dodecanodioico, i-Bu0C0Cl, EtaN, THF, 0°C, 4 h, luego añadir amina apropiada de la etapa a, 57-93%; (c) H2, Pd/C, THF/Et0H 1:1, 4-16 h; (d) TFNH203:1, 0°C, 1 h, 33-82% de rendimiento (dos etapas).
La figura 6 muestra conjuntos obtenidos a partir de simulaciones de dinámica molecular de 200 ns no controladas de QS-21-Api (1a) y variantes de saponina 2, 3 y 5-9. Se muestran el rmsd (A) para átomos pesados en relación con la estructura promedio, restricciones de distancia clave (A) y gráficos tridimensionales de las distribuciones de ángulo de torsión (C17-C28, y, ^, escala arbitraria) alrededor del grupo de unión glicosídico central. Los dominios estructurales de saponina Qs están codificados por color: trisacárido ramificado (magenta), triterpeno (verde), trisacárido lineal (naranja), cadena de acilo (gris), azúcares terminales (QS-21 sólo: cian, rojo). En los gráficos tridimensionales, las distribuciones de ángulo de torsión se muestran en azul y las proyecciones sobre cada plano se muestran en gris. Los adyuvantes activos muestran distribuciones de ángulo de torsión distintivas y estrechamente agrupadas alrededor del enlace glicosídico central y distancias comparativamente más cortas entre el centroide de anillo B de triterpeno y el centroide de monosacárido en puente (A, azul), así como entre el centroide de anillo B de triterpeno y la posición e de cadena de acilo (B, rojo).
La figura 7 muestra la actividad de adyuvante de variantes de enlace de saponina QS en un modelo preclínico de vacunación de ratón. Paneles a-c: títulos de anticuerpos anti-KLH (IgG) (panel a), anti-0VA (IgG) (panel b) y anti-MUC1 (IgG) (panel c) a la dosis de 5 |ig de cada variante de saponina. Paneles d-f: títulos de anticuerpos anti-KLH (IgG) (panel d), anti-0VA (IgG) (panel e) y anti-MUC1 (IgG) (panel f) a la dosis de 20 |ig de cada variante de saponina. Los a/p-glicosil-carbamatos a/p-4 fueron inactivos a ambas dosis (no mostrado). Valores de la mediana del título representados como barras horizontales. Significación estadística en comparación con el control negativo sin adyuvante evaluada usando la prueba de la t de Student para datos independientes con IC = 95%: *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001.
Descripción detallada
Definiciones
Tal como se usan en el presente documento, se aplicarán las siguientes definiciones a la presente descripción a menos que se indique lo contrario.
Tal como se usa a lo largo de esta descripción, la palabra “puede” se usa en un sentido permisivo (es decir, significado de tener el potencial para), en lugar de sentido mandatorio (es decir, significado de deber). Los términos “un” y “uno/una” en el presente documento no indican una limitación de cantidad, sino que indican la presencia de al menos uno de los elementos a los que se hace referencia.
Los intervalos pueden expresarse en el presente documento como desde “aproximadamente” un valor particular y/o hasta “aproximadamente” otro valor particular. Cuando se expresa un intervalo de este tipo, este incluye el intervalo de desde el un valor particular y/o hasta el otro valor particular. De manera similar, cuando se expresan valores como aproximaciones mediante el uso del antecedente “aproximadamente”, se entenderá que se incluye el valor particular.
El término “alquilo inferior” se refiere a un grupo alquilo C1-4 lineal o ramificado. Grupos alquilo inferior a modo de ejemplo son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y terc-butilo.
El término “acilo”, usado solo o como parte de un resto más grande, se refiere a grupos formados eliminando un grupo hidroxilo a partir de un ácido carboxílico.
El término “halógeno” significa F, Cl, Br o I.
El término “arilo”, usado solo o como parte de un resto más grande como en “aralquilo”, “aralcoxilo” o “ariloxialquilo”, se refiere a sistemas de anillos monocíclicos o bicíclicos que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en los que al menos un anillo en el sistema es aromático y en los que cada anillo en el sistema contiene de 3 a 7 miembros de anillo. El término “arilo” puede usarse de manera intercambiable con el término “anillo de arilo”. En determinados casos, “arilo” se refiere a un sistema de anillos aromáticos que incluye, pero sin limitarse a, fenilo, bifenilo, naftilo, antracilo, que pueden portar uno o más sustituyentes. También se incluye dentro del alcance del término “arilo”, tal como se usa en el presente documento, un grupo en el que un anillo aromático se condensa con uno o más anillos no aromáticos, tales como indanilo, ftalimidilo, naftimidilo, fenantridinilo o tetra hidron afti l o.
Las expresiones “administración parenteral” y “administrado por vía parenteral”, tal como se usan en el presente documento, significan modos de administración distintos de administración enteral y tópica, habitualmente mediante inyección, e incluyen, sin limitación, infusión e inyección intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal.
Las expresiones “administración sistémica”, “administrado por vía sistémica”, “administración periférica” y “administrado por vía periférica”, tal como se usan en el presente documento, significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material distinto de directamente al sistema nervioso central, de manera que entre en el sistema del paciente y, por tanto, está sujeto al metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, administración subcutánea.
El término “puro” se refiere a compuestos que están sustancialmente libres de compuestos de estructura no objetivo relacionados o precursores químicos (cuando se sintetizan químicamente). Esta cualidad puede medirse o expresarse como “pureza”. En algunos casos, un compuesto objetivo tiene menos de aproximadamente el 30%, el 20%, el 10%, el 5%, el 2%, el 1%, el 0,5% y el 0,1% de estructuras no objetivo o precursores químicos. El término “hidrato de carbono” se refiere a un azúcar o a un polímero de azúcares. Los términos “sacárido”, “polisacárido”, “hidrato de carbono” y “oligosacárido” pueden usarse de manera intercambiable. La mayoría de los hidratos de carbono son aldehídos o cetonas con muchos grupos hidroxilo, habitualmente uno en cada átomo de carbono de la molécula. De manera general, los hidratos de carbono tienen la fórmula molecular CnH2n0n. Un hidrato de carbono puede ser un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un oligosacárido o un polisacárido. El hidrato de carbono de estructura más básica es un monosacárido, tal como glucosa, sacarosa, galactosa, manosa, ribosa, arabinosa, xilosa y fructosa. Los disacáridos son dos monosacáridos unidos. Los disacáridos a modo de ejemplo incluyen sacarosa, maltosa, celobiosa y lactosa. Normalmente, un oligosacárido incluye entre tres y seis unidades de monosacárido (por ejemplo, rafinosa, estaquiosa) y los polisacáridos incluyen seis o más unidades de monosacárido. Los polisacáridos a modo de ejemplo incluyen almidón, glicógeno y celulosa. Los hidratos de carbono pueden contener unidades de sacárido modificadas tales como 2'-desoxirribosa en la que se elimina un grupo hidroxilo, 2'-fluororribosa en la que se reemplaza un grupo hidroxilo por un flúor, o N-acetilglucosamina, una forma que contiene nitrógeno de glucosa (por ejemplo, 2'-fluororribosa, desoxirribosa y hexosa). Los hidratos de carbono pueden existir en muchas formas diferentes, por ejemplo, confórmeros, formas cíclicas, formas acíclicas, estereoisómeros, tautómeros, anómeros e isómeros.
El término “farmacéuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problema o complicación excesivos, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.
El término “portador farmacéuticamente aceptable” significa un material, una composición o un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga líquida o sólida, un diluyente, un excipiente o un material encapsulante de disolvente, implicado en llevar o transportar el compuesto objeto desde un órgano o una porción del cuerpo a otro órgano u otra porción del cuerpo. Cada portador debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros componentes de la formulación y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de semilla de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; disoluciones con pH tamponado; poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas.
El término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a aquellas sales que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares indebidas, y son acordes con una relación beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al., describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formado con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico, o usando otros métodos usados en la técnica tales como intercambio iónico. 0tras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato.
El término “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a las sales de adición de bases inorgánicas y orgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Del mismo modo, estas sales pueden prepararse in situ en el vehículo de administración o en el procedimiento de fabricación de la forma de dosificación, o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable, con amoniaco, o con una amina primaria, secundaria, terciaria o cuaternaria orgánica farmacéuticamente aceptable. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N+(alquilo C-m )4. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio. Sales farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea apropiado, cationes de amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos formados usando contraiones tales como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, (alquil inferior)sulfonato y arilsulfonato. Las aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina.
A menos que se indique lo contrario, también se pretende que las estructuras representadas en el presente documento incluyan todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada estereocentro, isómeros de doble enlace Z y E, e isómeros conformacionales Z y E. Por tanto, los isómeros estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) de los presentes compuestos se encuentran dentro del alcance. A menos que se indique lo contrario, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención se encuentran dentro del alcance.
Adicionalmente, a menos que se indique lo contrario, también se pretende que las estructuras representadas en el presente documento incluyan compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, compuestos que tienen las presentes estructuras, incluyendo el reemplazo de hidrógeno por deuterio o tritio o el reemplazo de un carbono por un carbono enriquecido en 13C o 14C. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas, como sondas en ensayos biológicos o como agentes terapéuticos.
Un experto habitual en la técnica apreciará que los métodos de síntesis, tal como se describen en el presente documento, utilizan una variedad de grupos protectores.
El término “grupo protector” se refiere a un grupo funcional que enmascara o bloquea un resto funcional particular (por ejemplo, 0, S o N), permitiendo de ese modo, si se desea, que se lleve a cabo una reacción de manera selectiva en otro sitio reactivo en un compuesto multifuncional. En casos preferidos, un grupo protector reacciona de manera selectiva con buen rendimiento para dar un sustrato protegido que es estable frente a las reacciones previstas; preferiblemente, el grupo protector puede eliminarse de manera selectiva mediante reactivos preferiblemente no tóxicos y fácilmente disponibles que no atacan a los demás grupos funcionales; el grupo protector forma un derivado separable (más preferiblemente sin la generación de nuevos centros estereogénicos); y el grupo protector tendrá preferiblemente un mínimo de funcionalidad adicional para evitar sitios de reacción adicionales. Tal como se detalla en el presente documento, pueden utilizarse grupos protectores de oxígeno, azufre, nitrógeno y carbono.
A modo de ejemplo, los grupos protectores de oxígeno (que incluyen grupos protectores de hidroxilo y grupos protectores de carboxilo) incluyen metilo, metoximetilo (M0M), metiltiometilo (MTM), t-butiltiometilo, (fenildimetilsilil)metoximetilo (SM0M), benciloximetilo (b0m ), p-metoxibenciloximetilo (PMBM), (4-metoxifenoxi)metilo (p-A0M), guaiacolmetilo (GUM), t-butoximetilo, 4-penteniloximetilo (P0M), siloximetilo, 2-metoxietoximetilo (MEM), 2,2,2-tricloroetoximetilo, bis(2-cloroetoxi)metilo, 2-(trimetilsilil)etoximetilo (SEM0R), tetrahidropiranilo (THP), 3-bromotetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, 1-metoxiciclohexilo, 4-metoxitetrahidropiranilo (MTHP), 4-metoxitetrahidrotiopiranilo, S,S-dióxido de 4-metoxitetrahidrotiopiranilo, 1-[(2-cloro-4-metil)fenil]-4-metoxipiperidin-4-ilo (CTMP), 1,4-dioxan-2-ilo, tetrahidrofuranαlo, tetrahid roti ofu ranilo, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahidro-7,8,8-trimetil-4,7-metanobenzofuran-2-ilo, 1-etoxietilo, 1-(2-cloroetoxi)etilo, 1 -metil-1-metoxietilo, 1 -metil-1-benciloxietilo, 1-metil-1-benciloxi-2-fluoroetilo, 2,2,2-tricloroetilo, 2-trimetilsililetilo, 2-(fenilselenil)etilo, t-butilo, alilo, p-clorofenilo, p-metoxifenilo, 2,4-dinitrofenilo, bencilo, p-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, o-nitrobencilo, p-nitrobencilo, p-halobencilo, 2,6-diclorobencilo, p-cianobencilo, p-fenilbencilo, 2-picolilo, 4-picolilo, N-óxido de 3-metil-2-picolilo, difenilmetilo, p,p'-dinitrobenzohidrilo, 5-dibenzosuberilo, trifenilmetilo, a-naftildifenilmetilo, p-metoxifenildifenilmetilo, di(p-metoxifenil)fenilmetilo, tri(p-metoxifenil)metilo, 4-(4'-bromofenaciloxifenil)difenilmetilo, 4,4',4”-tris(4,5-dicloroftalimidofenil)metilo, 4,4',4”-tris(levulinoiloxifenil)metilo, 4,4',4”-tris(benzoiloxifenil)metilo, 3-(imidazol-1-il)bis(4',4”-dimetoxifenil)metilo, 1,1-bis(4-metoxifenil)-1'-pirenilmetilo, 9-antrilo, 9-(9-fenil)xantenilo, 9-(9-fenil-10-oxo)antrilo, 1,3-benzoditiolan-2-ilo, S,S-dióxido de bencisotiazolilo, trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES), triisopropilsililo (TIPS), dimetilisopropilsililo (IPDMS), dietilisopropilsililo (DEIPS), dimetilthexilsililo, t-butildimetilsililo (TBDMS), t-butildifenilsililo (t Bd Ps ), tribencilsililo, tri-p-xililsililo, trifenilsililo, difenilmetilsililo (DPMS), t-butilmetoxifenilsililo (TBMPS), formiato, benzoilformiato, acetato, cloroacetato, dicloroacetato, tricloroacetato, trifluoroacetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, fenoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato (levulinato), 4,4-(etilenditio)pentanoato (levulinoilditioacetal), pivaloato, adamantoato, crotonato, 4-metoxicrotonato, benzoato, p-fenilbenzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato (mesitoato), alquilmetilcarbonato, 9-fluorenilmetilcarbonato (Fmoc), alquiletilcarbonato, alquil-2,2,2-tricloroetilcarbonato (Troc), 2-(trimetilsilil)etilcarbonato (TMSEC), 2-(fenilsulfonil)etilcarbonato (Psec), 2-(trifenilfosfonio)etilcarbonato (Peoc), alquilisobutilcarbonato, alquilvinilcarbonato, alquilalilcarbonato, alquil-pnitrofenilcarbonato, alquilbencilcarbonato, alquil-p-metoxibencilcarbonato, alquil-3,4-dimetoxibencilcarbonato, alquil-o-nitrobencilcarbonato, alquil-p-nitrobencilcarbonato, alquil-S-benciltiocarbonato, 4-etoxi-1-naftilcarbonato, metilditiocarbonato, 2-yodobenzoato, 4-azidobutirato, 4-nitro-4-metilpentanoato, o-(dibromometil)benzoato, 2-formilbencenosulfonato, 2-(metiltiometoxi)etilo, 4-(metiltiometoxi)butirato, 2-(metiltiometoximetil)benzoato, 2,6-dicloro-4-metilfenoxiacetato, 2,6-dicloro-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenoxiacetato, 2,4-bis(1,1-dimetilpropil)fenoxiacetato, clorodifenilacetato, isobutirato, monosuccinoato, (E)-2-metil-2-butenoato, o-(metoxicarbonil)benzoato, a-naftoato, nitrato, alquil-N,N,N',N'-tetrametilfosforodiamidato, alquil-N-fenilcarbamato, borato, dimetilfosfinotiαlo, alquil-2,4-dinitrofenilsulfenato, sulfato, metanosulfonato (mesilato), bencilsulfonato y tosilato (Ts).
Para proteger 1,2-dioles o 1,3-dioles, los grupos protectores incluyen metilenacetal, etilidenacetal, 1-tbutiletilidenocetal, 1 -feniletilidenocetal, (4-metoxifenil)etilidenacetal, 2,2,2-tricloroetilidenacetal, acetónido, ciclopentilidenocetal, ciclohexilidenocetal, cicloheptilidenocetal, bencilidenacetal, p-metoxibencilidenacetal, 2,4-dimetoxibencilidenocetal, 3,4-dimetoxibencilidenacetal, 2-nitrobencilidenacetal, metoximetilenacetal, etoximetilenacetal, orto-éster de dimetoximetileno, orto-éster de 1-metoxietilideno, orto-éster de 1-etoxietilidino, orto-éster de 1,2-dimetoxietilideno, orto-éster de a-metoxibencilideno, derivado de 1-(N,N-dimetilamino)etilideno, derivado de a-(N,N'-dimetilamino)bencilideno, orto-éster de 2-oxaciclopentilideno, grupo di-t-butilsilileno (DTBS), derivado de 1,3-(1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilideno) (TIPDS), derivado de tetra-t-butoxidisiloxano-1,3-diilideno (TBDS), carbonatos cíclicos, boronatos cíclicos, etilboronato y fenilboronato.
Los grupos protectores de amino incluyen carbamato de metilo, carbamato de etilo, carbamato de 9-fluorenilmetilo (Fmoc), carbamato de 9-(2-sulfo)fluorenilmetilo, carbamato de 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetilo, carbamato de 2,7-di-t-butil-[9-(10,10-dioxo-10,10,10,10-tetrahidrotioxantil)]metilo (DBD-Tmoc), carbamato de 4-metoxifenacilo (Fenoc), carbamato de 2,2,2-tricloroetilo (Troc), carbamato de 2-trimetilsililetilo (Teoc), carbamato de 2-feniletilo (hZ), carbamato de 1-(1-adamantil)-1-metiletilo (Adpoc), carbamato de 1, 1 -dimetil-2-haloetilo, carbamato de 1,1-dimetil-2,2-dibromoetilo (DB-t-B0C), carbamato de 1, 1 -dimetil-2,2,2-tricloroetilo (TCB0C), carbamato de 1-metil-1-(4-bifenilil)etilo (Bpoc), carbamato de 1 -(3,5-di-t-butilfenil)-1 -metiletilo (t-Bumeoc), carbamato de 2-(2'- y 4'-piridil)etilo (Pyoc), carbamato de 2-(N,N-diciclohexilcarboxamido)etilo, carbamato de tbutilo (B0C), carbamato de 1-adamantilo (Adoc), carbamato de vinilo (Voc), carbamato de alilo (Alloc), carbamato de 1 -isopropilalilo (Ipaoc), carbamato de cinamilo (Coc), carbamato de 4-nitrocinamilo (Noc), carbamato de 8-quinolilo, carbamato de N-hidroxipiperidinilo, alquilditiocarbamato, carbamato de bencilo (Cbz), carbamato de p-metoxibencilo (Moz), carbamato de p-nitrobencilo, carbamato de p-bromobencilo, carbamato de p-clorobencilo, carbamato de 2,4-diclorobencilo, carbamato de 4-metilsulfinilbencilo (Msz), carbamato de 9-antrilmetilo, carbamato de difenilmetilo, carbamato de 2-metiltioetilo, carbamato de 2-metilsulfoniletilo, carbamato de 2-(p-toluenosulfonil)etilo, carbamato de [2-(1,3-ditianil)]metilo (Dmoc), carbamato de 4-metiltiofenilo (Mtpc), carbamato de 2,4-dimetiltiofenilo (Bmpc), carbamato de 2-fosfonioetilo (Peoc), carbamato de 2-trifenilfosfonioisopropilo (Ppoc), carbamato de 1, 1 -dimetil-2-cianoetilo, carbamato de m-cloro-p-aciloxibencilo, carbamato de p-(dihidroxiboril)bencilo, carbamato de 5-bencisoxazolilmetilo, carbamato de 2-(trifluorometil)-6-cromonilmetilo (Tcroc), carbamato de m-nitrofenilo, carbamato de 3,5-dimetoxibencilo, carbamato de onitrobencilo, carbamato de 3,4-dimetoxi-6-nitrobencilo, carbamato de fenil(o-nitrofenil)metilo, carbamato de fenotiazinil-(10)-carbonilo, derivado de N'-p-toluenosulfonilaminocarbonilo, derivado de N'-fenilaminotiocarbonilo, carbamato de t-amilo, tiocarbamato de S-bencilo, carbamato de p-cianobencilo, carbamato de ciclobutilo, carbamato de ciclohexilo, carbamato de ciclopentilo, carbamato de ciclopropilmetilo, carbamato de pdeciloxibencilo, carbamato de 2,2-dimetoxicarbonilvinilo, carbamato de o-(N,N-dimetilcarboxamido)bencilo, carbamato de 1,1-dimetil-3-(N,N-dimetilcarboxamido)propilo, carbamato de 1, 1 -dimetilpropinilo, carbamato de di(2-piridil)metilo, carbamato de 2-furanilmetilo, carbamato de 2-yodoetilo, carbamato de isobornilo, carbamato de isobutilo, carbamato de isonicotinilo, carbamato de p-(p'-metoxifenilazo)bencilo, carbamato de 1 -metilciclobutilo, carbamato de 1-metilciclohexilo, carbamato de 1-metil-1-ciclopropilmetilo, carbamato de 1 -metil-1 -(3,5-dimetoxifenil)etilo, carbamato de 1-metil-1-(p-fenilazofenil)etilo, carbamato de 1 -metil-1-feniletilo, carbamato de 1-metil-1-(4-piridil)etilo, carbamato de fenilo, carbamato de p-(fenilazo)bencilo, carbamato de 2,4,6-tri-t-butilfenilo, carbamato de 4-(trimetilamonio)bencilo, carbamato de 2,4,6-trimetilbencilo, formamida, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, fenilacetamida, 3-fenilpropanamida, picolinamida, 3-piridilcarboxamida, derivado de N-benzoilfenilalanilo, benzamida, p-fenilbenzamida, o-nitofenilacetamida, onitrofenoxiacetamida, acetoacetamida, (N'-ditiobenciloxicarbonilamino)acetamida, 3-(p-hidroxifenil)propanamida, 3- (o-nitrofenil)propanamida, 2-metil-2-(o-nitrofenoxi)propanamida, 2-metil-2-(o-fenilazofenoxi)propanamida, 4-clorobutanamida, 3-metil-3-nitrobutanamida, o-nitrocinamida, derivado de N-acetilmetionina, o-nitrobenzamida, o-(benzoiloximetil)benzamida, 4,5-difenil-3-oxazolin-2-ona, N-ftalimida, N-ditiasuccinimida (Dts), N-2,3-difenilmaleimida, N-2,5-dimetilpirrol, aducto de N-1,1,4,4-tetrametildisililazaciclopentano (STABASE), 1,3-dimetil-1.3.5- triazaciclohexan-2-ona sustituida en 5, 1,3-dibencil-1,3,5-triazaciclohexan-2-ona sustituida en 5, 3,5-dinitro-4- piridona sustituida en 1, N-metilamina, N-alilamina, N-[2-(trimetilsilil)etoxi]metilamina (SEM), N-3-acetoxipropilamina, N-(1-isopropil-4-nitro-2-oxo-3-pirrolin-3-il)-amina, sales de amonio cuaternario, N-bencilamina, N-di(4-metoxifenil)metilamina, N-5-dibenzosuberilamina, N-trifenilmetilamina (Tr), N-[(4-metoxifenil)difenilmetil]amina (MMTr), N-9-fenilfluorenilamina (PhF), N-2,7-dicloro-9-fluorenilmetilenamina, N-ferrocenilmetilamino (Fcm), N'-óxido de N-2-picolilamino, N-1,1-dimetiltiometilenamina, N-bencilidenamina, N-pmetoxibencilidenamina, N-difenilmetilenamina, N-[(2-piridil)mesitil]metilenamina, N-(N',N'-dimetilaminometilen)amina, N',N'-isopropilidenodiamina, N-p-nitrobencilidenamina, N-salicilidenamina, N-5-clorosalicilidenamina, N-(5-cloro-2-hidroxifenil)fenilmetilenamina, N-ciclohexilidenamina, N-(5,5-dimetil-3-oxo-1-ciclohexenil)amina, derivado de N-borano, derivado de ácido N-difenilborónico, N-[fenil(pentacarbonilcromo o tungsteno)carbonil]amina, quelato de N-cobre, quelato de N-zinc, N-nitroamina, N-nitrosoamina, N-óxido de amina, difenilfosfinamida (Dpp), dimetiltiofosfinamida (Mpt), difeniltiofosfinamida (Ppt), fosforamidatos de dialquilo, fosforamidato de dibencilo, fosforamidato de difenilo, bencenosulfenamida, o-nitrobencenosulfenamida (Nps), 2,4-dinitrobencenosulfenamida, pentaclorobencenosulfenamida, 2-nitro-4-metoxibencenosulfenamida, trifenilmetilsulfenamida, 3-nitropiridinasulfenamida (Npys), p-toluenosulfonamida (Ts), bencenosulfonamida, 2.3.6- trimetil-4-metoxibencenosulfonamida (Mtr), 2,4,6-trimetoxibencenosulfonamida (Mtb), 2,6-dimetil-4-metoxibencenosulfonamida (Pme), 2,3,5,6-tetrametil-4-metoxibencenosulfonamida (Mte), 4-metoxibencenosulfonamida (Mbs), 2,4,6-trimetilbencenosulfonamida (Mts), 2,6-dimetoxi-4-metilbencenosulfonamida (iMds), 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonamida (Pmc), metanosulfonamida (Ms), ptrimetilsililetanosulfonamida (SES), 9-antracenosulfonamida, 4-(4',8'-dimetoxinaftilmetil)bencenosulfonamida (DNMBS), bencilsulfonamida, trifluorometilsulfonamida y fenacilsulfonamida.
Variantes de triterpeno-saponina
La estructura de compuestos de saponina, por ejemplo QS-21 (compuesto 1; que no forma parte de la invención reivindicada), contiene cuatro dominios diversos: un trisacárido ramificado, un triterpeno de ácido quillaico, un oligosacárido lineal en puente y una cadena de acilo pseudodimérica (véase la figura 1, panel a). Los constituyentes primarios de los extractos de QS-21 naturales son una mezcla =2:1 de isómeros de xilosa (1a) y apiosa (1b) en el extremo terminal del dominio de oligosacárido lineal. En la presente invención, se han obtenido varias variantes de saponina modificando el enlace glicosil éster central que conecta los dominios de triterpeno y de oligosacárido lineal. El enlace glicosil éster central es una característica estructural única de las saponinas de Quillaja saponaria (QS) que nunca se ha explorado previamente.
El compuesto según la presente invención se selecciona del grupo que consiste en
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Composiciones farmacéuticas
La presente descripción proporciona composiciones “farmacéuticamente aceptables”, que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos según la presente invención, una cantidad eficaz de un antígeno y uno o más portadores (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Tal como se describe en detalle, las composiciones farmacéuticas pueden formularse especialmente para administración en forma sólida o líquida, incluyendo aquellas adaptadas para lo siguiente: administración oral, por ejemplo, soluciones orales (“drenches") (disoluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), comprimidos, por ejemplo, los destinados para absorción bucal, sublingual y sistémica, bolos, polvos, gránulos, pastas para aplicación a la lengua; administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural tales como, por ejemplo, una disolución o suspensión estéril, o formulación de liberación sostenida; aplicación tópica, por ejemplo, como crema, pomada, o un parche de liberación controlada o pulverización aplicada a la piel, a los pulmones o a la cavidad oral; por vía intravaginal o intrarrectal, por ejemplo, como óvulo vaginal, crema o espuma; por vía sublingual; por vía ocular; por vía transdérmica; o por vía nasal, por vía pulmonar y a otras superficies mucosa.
Método de uso
Las variantes de triterpeno-saponina de la presente invención pueden usarse como adyuvantes o para potenciar la captación celular de toxinas. Los compuestos según la presente invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o la prevención de neoplasias u otras enfermedades proliferativas in vivo. Sin embargo, los compuestos según la presente invención también pueden usarse in vitro con propósitos de investigación o clínicos.
Adyuvantes
La mayoría de los antígenos proteicos y glicoproteicos son escasamente inmunogénicos o no inmunogénicos cuando se administran solos. Fuertes respuestas inmunitarias adaptativas a tales antígenos a menudo requieren el uso de adyuvantes. Los inmunoadyuvantes son sustancias que, cuando se administran a un sujeto, aumentan la respuesta inmunitaria a un antígeno o potencian determinadas actividades de células del sistema inmunitario. Un adyuvante también puede permitir el uso de una dosis más baja de antígeno para lograr una respuesta inmunitaria útil en un sujeto.
Los adyuvantes habituales incluyen alumbre, adyuvante de Freund (una emulsión de aceite en agua con micobacterias muertas), adyuvante de Freund con MDP (una emulsión de aceite en agua con muramildipéptido, MDP, un constituyente de micobacterias), alumbre más Bordetella pertussis (gel de hidróxido de aluminio con B. pertussis inactivadas). Se piensa que tales adyuvantes actúan retrasando la liberación de antígenos y potenciando la captación por macrófagos. Los complejos inmunoestimuladores (ISC0M) tales como Quil-A (un extracto de saponina de Quillaja) son complejos similares a una jaula abierta normalmente con un diámetro de aproximadamente 40 nm que están constituidos por colesterol, lípido, inmunógeno y saponina. Los ISC0M suministran antígeno al citosol, y se ha demostrado que fomentan la respuesta de anticuerpo y la inducción de respuestas de células T cooperadoras así como de linfocitos T citotóxicos en una variedad de modelos animales experimentales.
Captación potenciada de toxinas
Se ha demostrado que las triterpeno-saponinas presentan propiedades de permeabilización de membranas celulares, y se han investigado por su potencial terapéutico. En algunos casos, las saponinas prácticamente no tienen ningún efecto solas, pero cuando se usan en combinación con otro fármaco, amplificarán significativamente los efectos del otro fármaco. Las variantes de triterpeno-saponina de la presente invención pueden usarse para potenciar la captación de otros agentes citotóxicos.
Vacunas
Las composiciones que comprenden los compuestos de la presente invención son útiles como vacunas para inducir inmunidad activa hacia antígenos en sujetos. Cualquier animal que puede experimentar los efectos beneficiosos de las composiciones que comprenden los compuestos de la presente invención se encuentra dentro del alcance de los sujetos que pueden tratarse. En algunos casos, los sujetos son mamíferos. En algunos casos, los sujetos son seres humanos.
Las vacunas pueden usarse para conferir resistencia a la infección o al cáncer mediante inmunización o bien pasiva o bien activa. Cuando las vacunas se usan para conferir resistencia a través de inmunización activa, se administra una vacuna a un animal para provocar una respuesta inmunitaria protectora que o bien previene o bien atenúa una enfermedad proliferativa o infecciosa. Cuando las vacunas se usan para conferir resistencia a la infección a través de inmunización pasiva, la vacuna se proporciona a un animal huésped (por ejemplo, ser humano, perro o ratón), y se recuperan los antisueros provocados por esta vacuna y se proporcionan directamente a un receptor que se sospecha que padece una infección o enfermedad o que está expuesto a un organismo causante.
Por tanto, la presente descripción se refiere a, y proporciona, medios para prevenir o atenuar una enfermedad proliferativa resultante de organismos o células tumorales que tienen antígenos que se reconocen y unen por antisueros producidos en respuesta a los polipéptidos inmunogénicos incluidos en vacunas que comprenden los compuestos de la presente invención. Tal como se usa en el presente documento, se dice que una vacuna previene o atenúa una enfermedad si su administración a un animal da como resultado o bien una atenuación (es decir, supresión) total o parcial de un síntoma o estado de la enfermedad, o bien una inmunidad total o parcial del animal frente a la enfermedad.
La administración de la vacuna (o los antisueros que provoca) puede tener propósitos o bien “profilácticos” o bien “terapéuticos”. Cuando se proporciona de manera profiláctica, la(s) vacuna(s) se proporciona(n) antes de cualquiera de los síntomas de la enfermedad proliferativa. La administración profiláctica de la(s) vacuna(s) sirve para prevenir o atenuar cualquier presentación posterior de la enfermedad. Cuando se proporciona de manera terapéutica, la(s) vacuna(s) se proporciona(n) al o después de detectarse los síntomas que indican que un animal puede estar infectado con un patógeno o padecer un determinado cáncer. La administración terapéutica de la(s) vacuna(s) sirve para atenuar cualquier presentación real de la enfermedad. Por tanto, las vacunas pueden proporcionarse o bien antes de la aparición de una proliferación de enfermedad (para prevenir o atenuar una infección o un cáncer anticipado) o bien después del inicio de una proliferación real.
Por tanto, en un caso, la presente descripción proporciona vacunas que comprenden uno o más antígenos bacterianos, virales, protozoarios o relacionados con tumores en combinación con uno o más compuestos según la presente invención. En algunos casos, la vacuna comprende un único antígeno bacteriano, viral, protozoario o relacionado con tumores en combinación con un compuesto según la presente invención. En algunos casos, la vacuna comprende dos o más antígenos bacterianos, virales, protozoarios o relacionados con tumores en combinación con un único compuesto según la presente invención. En algunos casos, la vacuna comprende dos o más antígenos bacterianos, virales, protozoarios o relacionados con tumores en combinación con dos o más compuestos según la presente invención. En algunos casos, la vacuna comprende un único antígeno bacteriano, viral, protozoario o relacionado con tumores en combinación con dos o más compuestos según la presente invención.
En algunos casos, uno o más antígenos de las vacunas proporcionadas son antígenos bacterianos.
En determinados casos, uno o más antígenos de las vacunas proporcionadas son antígenos asociadas a virus. En determinados casos, uno o más antígenos de las vacunas proporcionadas son antígenos asociados a tumores.
En determinados casos, un antígeno está unido de manera covalente a un compuesto de la invención. En algunos casos, un antígeno no está unido de manera covalente a un compuesto de la invención.
Un experto habitual en la técnica apreciará que las vacunas pueden incluir opcionalmente un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Por tanto, según otro aspecto, las vacunas proporcionadas comprenden uno o más antígenos que están opcionalmente conjugados con un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. En algunos casos, dichos uno o más antígenos están conjugados de manera covalente con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En otros casos, dichos uno o más antígenos están asociados de manera no covalente con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Tal como se describió anteriormente, los adyuvantes pueden usarse para aumentar la respuesta inmunitaria a un antígeno. Las vacunas pueden usarse para provocar una respuesta inmunitaria cuando se administran a un sujeto. En determinados casos, una respuesta inmunitaria a un antígeno puede potenciarse administrar a un sujeto una vacuna proporcionada en una cantidad eficaz para potenciar la respuesta inmunitaria de dicho sujeto a dicho antígeno.
Tal como se describió anteriormente, los compuestos de la presente invención pueden usarse en vacunas contra el cáncer como adyuvantes en combinación con antígenos asociados a tumores. En determinados casos, dichas vacunas pueden usarse en el tratamiento o la prevención de neoplasias. En determinados casos, la neoplasia es una neoplasia benigna. En otros casos, la neoplasia es una neoplasia maligna. Puede tratarse cualquier cáncer usando los compuestos de la invención con un antígeno.
En determinados casos, la neoplasia maligna es una neoplasia maligna hemática.
También pueden tratarse otros cánceres además de las neoplasias malignas hemáticas usando los compuestos de la presente invención. En determinados casos, el cáncer es un tumor sólido.
En determinados casos, los compuestos de la presente invención y las composiciones farmacéuticas tal como se describen en el presente documento pueden emplearse en terapias de combinación, es decir, los compuestos y las composiciones farmacéuticas pueden administrarse simultáneamente con, antes de, o después de, uno o más de otros productos terapéuticos o procedimientos médicos deseados. La combinación particular de terapias (productos terapéuticos o procedimientos) a emplear en un régimen de combinación tendrá en cuenta la compatibilidad de los productos terapéuticos y/o procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado que va a lograrse. También se apreciará que las terapias empleadas pueden lograr un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, un compuesto según la presente invención puede administrarse simultáneamente con otro agente antiproliferativo), o pueden lograrse efectos diferentes (por ejemplo, control de cualquier efecto adverso).
Por ejemplo, otras terapias o agentes antineoplásicos que pueden usarse en combinación con los compuestos según la presente invención incluyen cirugía, radioterapia (radiación y, radioterapia con haces de neutrones, radioterapia con haces de electrones, terapia con protones, braquiterapia e isotopos radiactivos sistémicos, por nombrar algunos ejemplos), terapia endocrina, modificadores de respuesta biológica (interferones, interleucinas y factor de necrosis tumoral (TNF), por nombrar algunos ejemplos), hipertermia y crioterapia, agentes para atenuar cualquier efecto adverso (por ejemplo, antieméticos) y otros fármacos quimioterápicos aprobados, incluyendo, pero sin limitarse a, fármacos alquilantes (mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, melfalán, ifosfamida), antimetabolitos (metotrexato), antagonistas de purina y antagonistas de pirimidina (6-mercaptopurina, 5-fluorouracilo, citarabina, gemcitabina), venenos de husillos (vinblastina, vincristina, vinorelbina, paclitaxel), podofilotoxinas (etopósido, irinotecán, topotecán), antibióticos (doxorrubicina, bleomicina, mitomicina), nitrosoureas (carmustina, lomustina), iones inorgánicos (cisplatino, carboplatino), enzimas (asparaginasa) y hormonas (tamoxifeno, leuprolida, flutamida y megestrol), por nombrar algunos ejemplos. Adicionalmente, también se contemplan determinados agentes citotóxicos o antineoplásicos actualmente en ensayos clínicos, que en última instancia pueden ser aprobados por la FDA (incluyendo epotilonas y análogos de las mismas y geldanamicinas y análogos de las mismas). Para una discusión más exhaustiva de terapias contra el cáncer actualizadas, véase www.nci.nih.gov, una lista de los fármacos oncológicos aprobados por la FDA en www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm, y The Merck Manual, decimoséptima ed. 1999.
La presente descripción también proporciona un método de tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. En algunos casos, la infección es bacteriana. En algunos casos, la infección es viral. En algunos casos, la infección es protozoaria. En algunos casos, el sujeto es un ser humano.
La presente descripción también proporciona un método de tratamiento de trastornos neurodegenerativos en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. En algunos casos, este puede usarse en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
Formulaciones
Las variantes de triterpeno-saponina de la presente invención pueden combinarse con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica. En determinados casos, la composición farmacéutica incluye una cantidad farmacéuticamente aceptable de un compuesto según la presente invención. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material portador para producir una forma de dosificación individual variará dependiendo del huésped que esté tratándose y del modo particular de administración. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material portador para producir una forma de dosificación individual será generalmente aquella cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. De manera general, esta cantidad oscilará entre aproximadamente el 1% y aproximadamente el 99% de principio activo, preferiblemente entre aproximadamente el 5% y aproximadamente el 70%, lo más preferiblemente entre aproximadamente el 10% y aproximadamente el 30%. En las composiciones también pueden estar presentes agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como laurilsulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes.
Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico.
Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden presentarse de manera conveniente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquier método bien conocido en la técnica de farmacia. En determinados casos, una formulación comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en ciclodextrinas, liposomas, agentes formadores de micelas, por ejemplo, ácidos biliares, y portadores poliméricos, por ejemplo, poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente invención. En determinados casos, una formulación anteriormente mencionada hace que un compuesto de la presente invención esté oralmente biodisponible.
Los métodos de preparación de estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de poner en asociación un compuesto de la presente invención con el portador y, opcionalmente, uno o más componentes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación de manera uniforme e íntima un compuesto de la presente invención con portadores líquidos, o portadores sólidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, conformando el producto.
Las formulaciones adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, obleas, píldoras, comprimidos, pastillas para chupar (usando una base aromatizada, habitualmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto), polvos, gránulos, o como una disolución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga) y/o como enjuagues bucales, conteniendo, cada uno, una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como principio activo. Un compuesto de la presente invención también puede administrarse como bolo, electuario o pasta.
En las formas de dosificación sólidas para administración oral (cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos, gránulos), el principio activo se mezcla con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato de dicalcio, y/o cualquiera de los siguientes: cargas o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato de sodio; agentes retardadores de disolución, tales como parafina; aceleradores de absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico, monoestearato de glicerol y tensioactivos no iónicos; absorbentes, tales como caolín y arcilla bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio, y mezclas de los mismos; y agentes colorantes. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes tamponantes. También pueden emplearse composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina con cubierta blanda y dura usando excipientes tales como lactosa o azúcares de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular.
Un comprimido puede fabricarse mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más componentes auxiliares. Los comprimidos fabricados mediante compresión pueden prepararse usando aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, disgregante (por ejemplo, glicolato sódico de almidón o carboximetilcelulosa de sodio reticulada), tensioactivo o agente dispersante. Los comprimidos fabricados mediante moldeo pueden prepararse en una máquina adecuada en la que se humedece una mezcla del compuesto en polvo con un diluyente líquido inerte.
Los comprimidos, y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden ranurarse o prepararse opcionalmente con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. También pueden formularse para proporcionar liberación lenta o controlada del principio activo en los mismos usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Pueden formularse para liberación rápida, por ejemplo, liofilizarse. Pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias, o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua estéril, o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden tener una composición que liberan el/los principio(s) activo(s) únicamente, o de manera preferencial, en una determinada parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de incrustación que pueden usarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. El principio activo también puede estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o más de los excipientes anteriormente descritos.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral de los compuestos de la presente invención incluyen emulsiones, microemulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del principio activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes habitualmente usados en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitano, y mezclas de los mismos.
Además de diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.
Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilen-sorbitol y ésteres de sorbitano, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.
Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas para administración rectal o vaginal pueden presentarse como supositorio, que puede prepararse mezclando uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o portadores no irritantes adecuados que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera para supositorio o un salicilato, y que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a la temperatura corporal y, por tanto, se fundirá en la cavidad rectal o vaginal y liberará el compuesto activo.
Las formulaciones que son adecuadas para administración vaginal también incluyen óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverización que contienen portadores que se conoce en la técnica que son apropiados.
Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, pulverizaciones, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, disoluciones, parches e inhaladores. El compuesto activo puede mezclarse en condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable, y con cualquier conservante, tampón o propelente que pueda requerirse.
Las pomadas, las pastas, las cremas y los geles pueden contener, además de un compuesto activo de la presente invención, excipientes tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de zinc, o mezclas de los mismos.
Los polvos y las pulverizaciones pueden contener, además de un compuesto de la presente solicitud, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Las pulverizaciones pueden contener adicionalmente propelentes habituales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos no sustituidos volátiles, tales como butano y propano.
Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar una administración controlada de un compuesto de la presente invención al cuerpo. Tales formas de dosificación pueden prepararse disolviendo o dispersando el compuesto en el medio apropiado. También pueden usarse potenciadores de absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad de tal flujo puede controlarse o bien proporcionando una membrana de control de velocidad o bien dispersando el compuesto en un gel o una matriz polimérica.
También se contemplan formulaciones oftálmicas, pomadas para los ojos, polvos, disoluciones.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración parenteral comprenden uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que pueden reconstituirse para dar las disoluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, que pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto o agentes de suspensión o espesantes.
Los ejemplos de portadores acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Puede mantenerse una fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos.
Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevención de la acción de microorganismos sobre los compuestos objeto puede garantizarse mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenol-sórbico. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio, en las composiciones. Además, puede lograrse una absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del fármaco a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede lograrse mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene una escasa solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución, que a su vez, puede depender del tamaño de cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, se logra una absorción retardada de una forma de fármaco administrada por vía parenteral disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleaginoso. Las formas de depósito inyectables se preparan formando matrices microencapsuladas de los compuestos objeto en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la razón de fármaco con respecto a polímero, y de la naturaleza del polímero particular empleado, puede controlarse la velocidad de liberación de fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectables también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones, que son compatibles con el tejido corporal.
En determinados casos, un compuesto o una preparación farmacéutica se administra por vía oral. En otros casos, el compuesto o la preparación farmacéutica se administra por vía intravenosa. Las vías alternativas de administración incluyen administraciones sublingual, intramuscular y transdérmica.
Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos a seres humanos y animales, pueden administrarse por sí solos o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, del 0,1% al 99,5% (más preferiblemente, del 0,5% al 90%) de principio activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.
Las preparaciones pueden administrarse por vía oral, parenteral, tópica o rectal. Evidentemente, se administran en formas adecuadas para cada vía de administración. Por ejemplo, se administran en forma de comprimidos o cápsula, mediante inyección, inhalación, loción para los ojos, pomada, supositorio, administración mediante inyección, infusión o inhalación; tópica mediante loción o pomada; y rectal mediante supositorios. Se prefieren las administraciones orales.
Estos compuestos pueden administrarse a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía adecuada de administración, incluyendo por vía oral, nasal, tal como, por ejemplo, mediante una pulverización, por vía rectal, intravaginal, parenteral, intracisternal y tópica, tal como mediante polvos, pomadas o gotas, incluyendo por vía bucal y sublingual.
Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la técnica.
Los niveles de dosificación reales de los principios activos en las composiciones farmacéuticas pueden variarse para obtener una cantidad del principio activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, una composición y un modo de administración particulares, sin ser tóxica para el paciente.
El nivel de dosificación seleccionado dependerá de varios factores incluyendo la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o el éster, la sal o la amida del mismo, la vía de administración, el momento de administración, la velocidad de excreción o el metabolismo del compuesto particular que esté empleándose, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, el estado, la salud general y el historial médico previo del paciente que esté tratándose, y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.
Un médico o veterinario con experiencia habitual en la técnica puede determinar y recetar fácilmente la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario puede comenzar con dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles menores que los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y luego aumentar gradualmente la dosificación hasta lograr el efecto deseado.
En algunos casos, se proporciona un compuesto de la presente invención o una composición farmacéutica tal como se describen en el presente documento a un sujeto de manera crónica. Los tratamientos crónicos incluyen cualquier forma de administración repetida durante un periodo de tiempo prolongado, tal como administraciones repetidas durante uno o más meses, entre un mes y un año, uno o más años, o durante más tiempo. En muchos casos, un tratamiento crónico implica administrar un compuesto o una composición farmacéutica de manera repetida durante la vida del sujeto. Los tratamientos crónicos preferidos implican administraciones regulares, por ejemplo, una o más veces al día, una o más veces a la semana o una o más veces al mes. En general, una dosis adecuada tal como una dosis diaria de un compuesto de la presente invención será aquella cantidad del compuesto que es la dosis más baja eficaz para producir un efecto terapéutico. De manera general, una dosis eficaz de este tipo dependerá de los factores descritos anteriormente. De manera general, las dosis de los compuestos de la presente invención para un paciente, cuando se usan para los efectos indicados, oscilarán entre aproximadamente 0,0001 y aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal al día. Preferiblemente, la dosificación diaria oscilará entre 0,001 y 50 mg de compuesto por kg de peso corporal, e incluso más preferiblemente entre 0,01 y 10 mg de compuesto por kg de peso corporal. Sin embargo, pueden usarse dosis más bajas o más altas. En algunos casos, la dosis administrada a un sujeto puede modificarse a medida que cambia la fisiología del sujeto debido a la edad, la progresión de la enfermedad, el peso u otros factores.
En algunos casos, los compuestos adyuvantes se administran como composiciones farmacéuticas o vacunas. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 1-2000 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 1-1000 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 1-500 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 1-250 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 100-1000 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 100-500 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 100-200 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 250-500 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 10-1000 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 500-1000 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 50-250 |ig. En determinados casos, la cantidad de compuesto adyuvante administrada es de 50-500 |ig.
Si se desea, la dosis diaria eficaz del compuesto activo puede administrarse como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente, en formas de dosificación unitarias.
Aunque es posible que un compuesto de la presente invención se administre solo, en determinados casos el compuesto se administra como formulación (composición) farmacéutica tal como se describió anteriormente.
Los compuestos según la presente invención pueden formularse para administración de cualquier manera conveniente para su uso en medicina humana o veterinaria, por analogía con otros productos farmacéuticos.
Ejemplos
EJEMPL0 1: VARIANTES DE TRITERPEN0-SAP0NINA C0N ENLACE GLIC0SÍDIC0 CENTRAL M0DIFICAD0
Tal como se muestra en la figura 1, panel b, se crean varias variantes de triterpeno-saponina con enlace glicosídico central modificado (estructuras 3-9) basándose en una estructura inicial 2 (SQS-0-0-5-5) de saponina. Específicamente, el enlace glicosídico central en la estructura 2 se modificó en las estructuras 3-9 para modular la distancia y la orientación de los dos dominios del triterpeno y del oligosacárido lineal. La construcción de estas variantes en el contexto de la compleja estructura de saponina resultó desafiante, requiriendo la formación de enlaces glicosídicos estéricamente impedidos sin la ayuda de participación de grupos vecinos. Como resultado, se formaron varios de los enlaces usando promotores de glicosilación no convencionales. Además, simulaciones de dinámica molecular de estas variantes sintéticas y del principal isómero de producto natural QS-21-Api (figura 1, panel a) revelaron preferencias conformacionales distintivas que se correlacionan con las actividades de adyuvante observadas. Además, en un modelo preclínico de vacunación de ratón, estas variantes de enlace mostraron una notable gama de actividades de adyuvante y toxicidades, lo que proporciona nueva información sobre los requisitos estructurales para la actividad de adyuvante en la clase de saponina QS.
Tal como se describe en más detalle a continuación, se han sintetizado 8 variantes de triterpeno-saponina diferentes con modificaciones de enlace glicosídico central. Cada una de las variantes de triterpeno-saponina recién sintetizadas tiene una estructura química única. Cabe destacar que cada una de las 8 variantes de triterpeno-saponina no es un compuesto químico único, sino que cada una de ellas representa un grupo de compuestos de saponina de Quillaja que comparten el enlace glicosil éster central o la modificación del enlace glicosil éster central identicos o similares. A este respecto, los ejemplos proporcionan no sólo 8 compuestos de variante de triterpeno-saponina únicos, sino también 8 grupos de compuestos de variante de triterpeno-saponina, cubriendo cada grupo una amplia variedad de compuestos diferentes que comparten determinada(s) característica(s) estructural(es).
Estas variantes de triterpeno-saponina se diseñan específicamente para tener distancias, estereoquímicas y conformaciones diversas que pueden influir en sus actividades de adyuvante, debido a las modificaciones diferentes en su enlace glicosil éster central. Estos 8 compuestos de variante de triterpeno-saponina, basándose en sus enlaces glicosil éster centrales modificados específicos, son p-glicosil etanolamida 3, p-glicosil carbamato P-4 y p-glicosil tioéster 5, a-glicosil éster 6, a-glicosil amida 7 y a-glicosil carbamato a-4, p-glicosil éter 8 y pglicosil tioéter 9 (véase la figura 1, panel b). Entre ellos, la p-glicosil etanolamida 3, el p-glicosil carbamato p-4 y el p-glicosil tioéster 5 se diseñaron para aumentar la distancia entre los dominios de triterpeno y de trisacárido. Mientras tanto, el a-glicosil éster 6, la a-glicosil amida 7 y el a-glicosil carbamato a-4 se diseñaron para investigar la importancia de la estereoquímica en este enlace glicosídico. Finalmente, el p-glicosil éter 8 y el p-glicosil tioéter 9 se diseñaron para investigar el efecto de aumentar la flexibilidad conformacional entre los dos dominios.
De manera notable, sería necesario ensamblar estos enlaces en el contexto del complejo armazón de saponina, que presenta funcionalidades de ácido carboxílico y aldehído estéricamente impedidas, así como numerosos grupos protectores previamente establecidos que son incompatibles con condiciones fuertemente ácidas o básicas, limitando la gama de posibles manipulaciones de grupos funcionales y condiciones de glicosilación que podrían usarse.
EJEMPL02: MÉT0D0 DE SÍNTESIS
Procedimientos generales de síntesis
Las reacciones se realizaron en tubos sellados secados a la llama o matraces Schlenk (forma Kjeldahl) modificadas dotados de un tapón de vidrio bajo una presión positiva de argón, a menos que se indique lo contrario. Los líquidos y las disoluciones sensibles al aire y a la humedad se transfirieron mediante una jeringa. Los reactivos de hidrato de carbono y de sulfóxido apropiados se secaron mediante la eliminación azeotrópica de agua con tolueno. Los tamices moleculares se activaron a 350°C y se trituraron inmediatamente antes de su uso, luego se secaron a la llama a vacío. Las disoluciones orgánicas se concentraron mediante evaporación rotatoria por debajo de 30°C. La cromatografía ultrarrápida en columna se realizó empleando gel de sílice de 230-400 de malla. La cromatografía en capa fina se realizó usando placas de vidrio recubiertas previamente hasta una profundidad de 0,25 mm con gel de sílice de 230-400 de malla impregnado con un indicador fluorescente (254 nm).
Materiales
El diclorometano, el tetrahidrofurano, el dietil éter y el tolueno se purificaron mediante pase a través de dos columnas empaquetadas de alúmina neutra bajo una atmósfera de argón. El metanol se destiló a partir de magnesio a 101325 Pa (760 Torr). El anhídrido trifluorometanosulfónico se destiló a partir de pentóxido de fósforo a 101325 Pa (760 Torr). El dietil eterato de trifluoruro de boro se destiló a partir de hidruro de calcio a 101325 Pa (760 Torr).
Todos los demás productos químicos se obtuvieron a partir de vendedores comerciales y se usaron sin purificación adicional, a menos que se indique lo contrario.
Instrumentación
Los espectros de infrarrojos (IR) se obtuvieron usando un espectrofotómetro Spectrum BX de Perkin Elmer o un dispositivo Tensor 27 de Bruker. Los datos se presentan como frecuencia de absorción (cm-1). Los espectros de resonancia magnética nuclear de protón y de carbono-13 (1H-RMN y 13C-RMN) se registraron en un instrumento Avance III de Bruker; los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (escala 8) hacia campo bajo a partir de tetrametilsilano y se referencian con respecto al protón residual en el disolvente de RMN (dcloroformo: 87,26 para 1H-RMN, 877,16 para 13C-RMN; d6-benceno: 87,16 para 1H-RMN, 8128,06 para 13C-RMN; d4-metanol: 83,31 para 1H-RMN, 849,00 para 13C-RMN; d3-acetonitrilo: 81,94 para 1H-RMN, 81,32 para 13C-RMN; óxido de deuterio: 84,79 para 1H-RMN).
Los datos se presentan de la siguiente manera: desplazamiento químico, multiplicidad (s = singlete, s a = singlete ancho, d = doblete, t = triplete, q = cuartete, m = multiplete y/o múltiples resonancias), constante de acoplamiento en Hertz (Hz), integración, asignación. La purificación y los análisis por RP-HPLC se llevaron a cabo en un sistema de HPLC de gradiente binario 2545 de Waters equipado con un detector de matriz de fotodiodos 2996 de Waters, y las absorbancias se monitorizaron a las longitudes de onda de 210-600 nm.
Brevemente, las síntesis de estas variantes comenzaron con la funcionalización de la prosapogenina protegida 10, abreviada en el presente documento como PPS, para proporcionar los aceptores de glicosilo correspondientes. A continuación se describen las etapas clave generales para la síntesis de estos compuestos de variante, mientras que los detalles específicos para sintetizar cada uno de los compuestos de variante ya se describieron anteriormente.
(1) Síntesis de aceptores de glicosilo a partir del ácido carboxílico C28 de una prosapogenina protegida En referencia al esquema 1 (véase la figura 2), se trató el ácido carboxílico C28 con difenilfosforilazida para dar un producto intermedio de acilazida que, al continuar el calentamiento, experimentó una transposición de Curtius para dar el isocianato 11. Alternativamente, la activación del ácido carboxílico C28 en 10 con cloruro de tionilo avanzó con rendimiento cuantitativo para proporcionar el cloruro de acilo 12 estable en mesa de laboratorio, que se funcionalizó fácilmente con una variedad de nucleófilos, incluyendo etanolamina para formar la etanolamida 13 y amoniaco para proporcionar la amida primaria 14. Aunque la adición de nucleófilos tales como NaSH y 9-fluorenilmetiltiol proporcionó los productos de tioácido y tioéster correspondientes con bajos rendimientos, estos demostraron ser recalcitrantes en la purificación y no avanzaron adicionalmente. El acceso al alcohol neopentílico 15 requirió una cuidadosa reducción quimioselectiva del cloruro de acilo 12 con borohidruro de tetrabutilamonio. Tiempos de reacción prolongados y otros reductores de hidruro (DIBAL-H, Red-Al, NaBH4, superhidruro) condujeron a subproductos reducidos en exceso y desililados.
La conversión de este alcohol 15 estéricamente impedido para dar el tiol 16 correspondiente también resultó desafiante. La tosilación o la mesilación fue lenta y los derivados de sulfonato resultantes no reaccionaron en absoluto con los nucleófilos de tiol. Por último, se ha recurrido a la conversión del alcohol 15 para dar el triflato correspondiente, que demostró ser un electrófilo competente para la sustitución con tioacetato de potasio en presencia de 18-corona-6 éter. El tratamiento del tioacetato resultante con hidrazina en condiciones reductoras (DTT) proporcionó el tiol de prosapogenina 16 deseado con excelente rendimiento (83% a lo largo de dos etapas).
(2) Construcción de enlaces glicosídicos usando el donante de glicosilo de trisacárido lineal como electrófilo
En referencia al esquema 2 (figura 3), aunque las reacciones de glicosilación para formar todos los quimiotipos de enlace seleccionados como objetivo en el presente documento están bien documentadas en la bibliografía, la síntesis de enlaces glicosilo con este nivel de complejidad y en entornos estéricamente exigentes está limitada en muchos casos (amida 23, tioéter 24), y aparentemente sin precedentes en otro (tioéster). Los esfuerzos iniciales de los presentes inventores comenzaron con el hemiacetal de trisacárido 17, 21 previamente descrito que experimentó con éxito una glicosilación por deshidratación (Ph2S0/Tf20) con etanolamida de prosapogenina 13 para dar el producto intermedio unido a etanolamida 18 con excelente rendimiento (87%) y con selectividad p completa.
En cambio, la glicosilación de amida primaria de prosapogenina 14 requirió una extensa optimización de las condiciones de reacción para lograr selectividad anomérica. Por último, se ha hallado que el uso de un exceso de dos veces del aceptor de glicósido 14 favoreció la formación de p-19 (p/a de 2:1 a 4:1, 60-78% de rendimiento combinado de anómeros separables). De manera notable, la preferencia anomérica pudo revertirse para favorecer a a-19 cuando se usó un exceso de dos veces del donante 17 (a/p 6:1, 71% de rendimiento combinado). Desafortunadamente, aunque estos anómeros eran separables, el enlace p-glicosil amida en p-19 demostró ser sorprendentemente sensible al ácido, y se escindió en condiciones incluso levemente ácidas (por ejemplo, Si02, HF, pir., Ac0H). A pesar de considerables esfuerzos, la desprotección global no pudo lograrse debido a la escisión competitiva del enlace C-N glicosídico en las condiciones de reacción (TFNH203:1) para volver a formar la amida primaria 14 y el hemiacetal 17. En cambio, un sistema de modelo de p-glicosil pivalamida 25 correspondiente fue significativamente más estable (Si02), destacando las complejidades de trabajar con el armazón completo de saponina. A diferencia de su anómero p, la glicosil amida axialmente dispuesta en a-19 no mostró labilidad por ácido observable, ilustrando los cambios significativos en la reactividad que pueden surgir a partir de perturbaciones estructurales mínimas del enlace glicosídico central.
A continuación, se buscó preparar el enlace glicosil éter en 21. Sorprendentemente, intentos repetidos en la glicosilación de alcohol neopentílico de prosapogenina 15 con el mismo donante de hemiacetal de trisacárido 17 en condiciones de deshidratación o de Schmidt no proporcionaron productos de glicosilación aislables. Sin embargo, se ha hallado que la glicosilación podía efectuarse sin problemas con donante de bromuro de trisacárido 20 (preparado a partir del hemiacetal 17 con bromuro de oxalilo, DMF) bajo la reacción de Koenigs-Knorr fomentada por triflato de plata a baja temperatura para dar el producto intermedio unido a éter 21 con una selectividad p/a > 20:1.
La tiofilia de la plata impidió la reacción análoga con neopentiltiol 16. Sin embargo, se ha hallado que el tiolato (NaH) correspondiente desplazó rápidamente el bromuro en el donante de trisacárido 20 para dar glicosil tioéter 22 con una selectividad p completa.
(3) Construcción de enlaces glicosídicos usando el donante de glicosilo de trisacárido lineal como nucleófilo
En referencia al esquema 3 (figura 4), al enlace p-glicosil éster natural en el compuesto inicial 2 (SQS-0-0-5-5) puede accederse mediante glicosilación de Schmidt del ácido carboxílico C28 en PPS 10 con el donante de tricloroacetimidato de trisacárido correspondiente, sin embargo 21 esfuerzos análogos para sintetizar enlaces tioéster y a-éster usando una variedad de métodos de glicosilación tradicionales (desplazamiento catalizado por ácido de Lewis de donantes de glicosilo, glicosilaciones por deshidratación, desplazamiento de bromuros de glicosilo en condiciones de transferencia de fases) condujeron a mezclas complejas de anómeros y otras impurezas no identificadas. Por tanto, para acceder a estos análogos de QS-21, así como a los carbamatos correspondientes, se usó la inversa de polaridad conceptual, actuando el glicósido como nucleófilo. En primer lugar, el tratamiento del donante de hemiacetal de trisacárido 17 con NaH seguido de la adición de isocianato de prosapogenina 11 proporcionó los productos intermedios unidos a carbamato p-23 y a-23 como mezcla de anómeros fácilmente separables (p/a 2:1, 79% de rendimiento combinado). En cambio, la acilación del donante de hemiacetal 17 con cloruro de ácido de prosapogenina 12 pudo lograrse con formación preferencial del producto intermedio a-glicosil éster 24 (a/p 6:1, 70% de rendimiento combinado de anómeros separables). A la inversa, la adición de NaH a una disolución de cloruro de ácido de prosapogenina 12 y tiohemiacetal de trisacárido 25 (generado mediante desplazamiento de bromuro en 20 con tioacetato, seguido de desacetilación) proporcionó el producto intermedio (3-glicosil tioéster 26 con un 87% de rendimiento con selectividad anomérica completa. Aunque estos tres enlaces se formaron en condiciones de reacción similares (NaH; acilación), las diversas selectividades anoméricas pueden atribuirse a la razón anomérica de los sustratos de hemi(tio)acetal correspondientes y a los efectos del disolvente.
(4) Instalación de cadenas de acilo y desprotección global de variantes de enlace de saponina QS
En referencia al esquema 4 (figura 5) con la totalidad de los productos intermedios glicosilados deseados (18, 19, 21-24, 26) en mano, se avanzó con cada uno de ellos a la variante de enlace central de saponina QS correspondiente (3-9) en una secuencia de tres etapas que implica: (1) reducción de azida (H2S, Et3N), (2) acilación de la amina resultante con éster monobencílico de ácido dodecanodioico y (3) desprotección global mediante hidrogenólisis (H2, Pd/C) e hidrólisis ácida (TFNH20), seguido de purificación por HPLC.
En la etapa final descrita anteriormente, los enlaces glicosil éster centrales modificados (incluyendo las ocho muestras diferentes descritas anteriormente) se han incorporado en los compuestos de variante de triterpenosaponina finalmente obtenidos. La figura 6 muestra conjuntos obtenidos a partir de simulaciones de dinámica molecular de 200 ns no controladas de QS-21-Api (1a) y las variantes de saponina 2, 3 y 5-9.
EJEMPL03: SÍNTESIS DE VARIANTE DE p-ETAN0LAMIDA 3 (SQS-0-4-5-5) (no forma parte de la invención reivindicada)
Figure imgf000019_0001
Producción de cloruro de ácido de prosapogenina protegida 12
Se añadió cloruro de tionilo (31 |al, 0,425 mmol, 2 equiv.), gota a gota, a una disolución helada de prosapogenina protegida 10 y piridina (170 |al, 2,13 mmol, 10 equiv.) en diclorometano (6 ml). Después de dos horas, se eliminaron la mayor parte de los compuestos volátiles bajo una corriente de nitrógeno, luego alto vacío. Se suspendieron los sólidos residuales en benceno anhidro y se filtraron a través de Celite. La eliminación de disolvente a vacío proporcionó 12 (441 mg, 99% de rendimiento) como una espuma de color blanco.
CCF Rf 0,36 (hexanos/acetato de etilo 20:1); FTIR (NaCl, película): 2953, 2911, 2877, 1792 (0-CClst), 1756, 1725, 14,58, 1414, 1378, 1240, 1171, 1102, 1007, 739 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, C6D6) 89,75 (s, 1H), 7,20 - 7,17 (m, 2H), 7,10 - 6,97 (m, 3H), 5,42 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,99 (dd, J = 22,3, 9,9 Hz, 2H), 4,79 - 4,71 (m, 2H), 4,59 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,47 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 4,37 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 4,25 - 4,18 (m, 2H), 4.15 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,13 - 4,08 (m, 1H), 4,05 (dd, J = 11,2, 5,0 Hz, 1H), 4,00 (dd, J = 9,3, 7,4 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 3,84 - 3,76 (m, 2H), 3,73 - 3,66 (m, 3H), 3,65 - 3,61 (m, 1H), 3,49 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 14,1,4,1 Hz, 1H), 2,39 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 1,97 - 1,67 (m, 8H), 1,58 (dd, J = 10,2, 7,4 Hz, 1H), 1,46 (m, 139H), 0,81 - 0,70 (m, 18H), 0,62 (dd, J = 8,0, 3,0 Hz, 7H). 13C-RMN (151 MHz, C6D6) 8209,67, 177,78, 168,61, 141,76, 135,75, 128,54, 128,38, 128,24, 128,19, 123,96, 102,72, 101,57, 101,40, 83,84, 79,58, 79,26, 77,85, 77,00, 76,78, 76,32, 75,76, 75,32, 73,16, 73,01, 72,28, 71,69, 66,90, 65,97, 61,41, 59,13, 54,48, 49,01, 46,61, 46,53, 42,64, 41,61, 39,92, 37,92, 35,97, 35,25, 34,90, 32,58, 32,34, 30,61, 30,40, 26,59, 25,40, 24,13, 23,46, 20,43, 16,88, 15,66, 11,87, 7,82, 7,64, 7,51, 7,48, 7,45, 7,38, 7,37, 7,35, 7,27, 7,19, 7,07, 7,06, 6,29, 6,15, 6,08, 6,00, 5,95, 5,86, 5,81, 5,76, 5,68, 5,62, 5,48, 5,42, 5,33, 5,14, 4,96, 4,94, 4,77, 4,57; EMAR m/z (ESI): para derivado de éster metílico, calc. para C102H210025NaSig [M+Na]+ 2110,2982, hallado 2110,2986.
Figure imgf000020_0001
Etanolamida de prosapogenina protegida 13
Se añadió etanolamina (29 |l, 0,478 mmol, 10 equiv.) a una disolución helada de cloruro de acilo 12 (100 mg, 0,0478 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2 ml). Después de 10 minutos, se calentó la reacción hasta temperatura ambiente, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 4:1 a 2:1) para dar etanolamida 13 (89 mg, 88% de rendimiento).
CCF Rf 0,32 (hexanos/acetato de etilo 2:1); FTIR (NaCl, película) 3407 (a), 2953, 2911,2877, 1754, 1725, 1656, 1632, 1518, 1459, 1414, 1378, 1239, 1171, 1103, 1005, 971, 899, 864, 825, 799, 738, 695, 668 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,72 (s, 1H), 7,40 - 7,29 (m, 5H), 6,54 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 5,51 - 5,46 (m, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,53 - 4,50 (m, 1H), 4,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,95-3,89 (m, 2H), 3,88 - 3,77 (m, 4H), 3,75 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 3,70 - 3,65 (m, 2H), 3,62 - 3,53 (m, 3H), 3,50 - 3,32 (m, 5H), 3,27 - 3,18 (m, 2H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 3,03 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 2,56 (dd, J = 13,5, 4,1 Hz, 1H), 2,37 (t, J = 13,0 Hz, 1H), 2,11 - 2,03 (m, 1H), 1,92 (dd, J = 8,9, 3,6 Hz, 2H), 1,88 - 1,76 (m, 2H), 1,74 - 1,66 (m, 2H), 1,66 - 1,49 (m, 5H), 1,46 - 1,36 (m, 6H), 1,31 (s, 3H), 1,29 - 1,24 (m, 2H), 1,17 - 1,07 (m, 5H), 1,07 - 0,88 (m, 97H), 0,81 - 0,54 (m, 61H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,72, 179,86, 168,37, 144,93, 135,26, 128,45, 128,25, 128,12, 122,65, 103,68, 101,39, 100,83, 86,42, 78,79, 78,71, 76,44, 75,93, 75,89, 75,82, 75,80, 75,07, 72,60, 72,52, 71,37, 71,09, 66,84, 65,33, 62,93, 60,23, 53,79, 49,33, 49,08, 47,30, 45,95, 43,01, 41,88, 41,84, 39,65, 37,93, 36,02, 35,38, 34,07, 32,53, 31,81, 31,40, 30,53, 26,31, 25,36, 24,25, 23,42, 20,16, 16,72, 15,84, 12,26, 7,56, 7,47, 7,25, 7,16, 7,15, 7,13, 6,98, 6,85, 6,78, 5,92, 5,65, 5,44, 5,37, 5,34, 5,26, 5,23, 5,01,4,42; EMAR (ESI) m/z: calc. para C110H209N020NaSig (M+Na)+ 2139,3189, hallado 2139,3206.
Figure imgf000021_0001
Producción de azida de trisacárido de etanolamida de prosapogenina protegida 18
Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (5,2 |al, 0,041, 1,5 equiv.) a una disolución de trisacárido 17 (20 mg, 0,021 mmol, 1,00 equiv.), fenilsulfóxido (12,5 mg, 0,061 mmol, 3,0 equiv.) y 2,4,6-tri-terc-butilpiridina (18 mg, 0,074 mmol, 3,6 equiv.) en diclorometano (1 ml) a -78°C. Se agitó la reacción en un baño frío a -78°C durante 5 min y luego se transfirió a un baño de entre -40°C durante 60 min. Se añadió una disolución de etanolamida 13 (84 mg, 0,040 mmol, 1,95 equiv.) en diclorometano (1,0 ml) mediante una jeringa. Después de 30 min, se transfirió el matraz a un baño de hielo y se agitó durante 15 min. Se añadió trietilamina, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 10:1 a 2:1) proporcionando (3-glicósido 18 (55 mg, 87% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,67 (benceno/acetato de etilo 5:1); FTIR (NaCl, película) 3430, 2953, 2911, 2877, 2105, 1751, 1724, 1653, 1497, 1457, 1414, 1379, 1240, 1172, 1098, 1006, 910, 864, 826, 799, 737, 697, 666 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,71 (s, 1H), 7,39 - 7,22 (m, 30H), 6,36 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 5,43 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,27 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 - 4,87 (m, 2H), 4,87 - 4,80 (m, 2H), 4,76 - 4,69 (m, 2H), 4,68 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,58 - 4,52 (m, 4H), 4,51 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 4,15 (dd, J = 7,4, 5,5 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,96 - 3,91 (m, 3H), 3,89 - 3,79 (m, 6H), 3,77 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,69 (ddd, J = 10,8, 6,8, 4,7 Hz, 1H), 3,65 - 3,53 (m, 11H), 3,49 (ddd, J = 10,4, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,40 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,38 - 3,17 (m, 7H), 3,14 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 13,7, 4,5 Hz, 1H), 2,34 (t, J = 13,0 Hz, 1H), 2,02 - 1,51 (m, 12H), 1,42 -1,38 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 1,31 (s, 3H), 1,22 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,13 - 1,03 (m, 4H), 1,03 - 0,90 (m, 82H), 0,89 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,81 - 0,56 (m, 56H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,60, 177,85, 168,36, 144,49, 138,81, 138,73, 138,23, 137,41, 136,89, 135,20, 128,58, 128,55, 128,47, 128,41, 128,32, 128,26, 128,24, 128,21, 128,18, 128,16, 128,07, 127,95, 127,88, 127,82, 127,77, 127,48, 122,56, 109,12, 103,64, 102,86, 102,06, 101.38, 100,82, 98,24, 86,43, 83,87, 81,87, 81,39, 78,81, 78,71, 78,25, 78,12, 77,95, 76,45, 75,99, 75,97, 75,92, 75,81, 75,49, 75,07, 74,87, 74,62, 73,71, 73,21, 72,61, 72,51, 71,83, 71,38, 71,09, 68,76, 68,44, 66,87, 65,33, 64,56, 63,81, 60,24, 58,36, 53,82, 49,25, 49,12, 47,22, 46,06, 41,85, 41,73, 39,94, 39,57, 37,97, 36,06, 35,95, 35,39, 34,66, 34,53, 34,07, 32,59, 31,98, 31,59, 31,42, 30,48, 29,06, 27,80, 26,91, 26,49, 26,30, 25,35, 25,27, 24.38, 23,35, 22,66, 20,70, 20,21, 18,77, 17,62, 16,94, 15,75, 14,14, 12,23, 11,45, 7,56, 7,46, 7,25, 7,17, 7,16, 13, 7,09, 6,99, 6,89, 6,85, 6,78, 5,92, 5,64, 5,44, 5,37, 5,34, 5,26, 5,23, 5,20, 5,18, 5,14, 5,06, 5,01, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C165H270N4032NaSig (M+Na)+ 3094,7445, hallado 3094,7344.
Figure imgf000022_0001
Producción de amina de trisacárido de etanolamida de prosapogenina protegida S1
Se burbujeó un exceso de sulfuro de hidrógeno a través de una disolución helada de azida 18 (35 mg, 0,011, 1 equiv.) en piridina y trietilamina (3:1, 2 ml) durante dos min mediante una aguja de acero, luego se retiró la aguja del septo. Después de agitar durante 2 min, se retiró el baño helado y se calentó hasta temperatura ambiental. Después de 4,5 h, se purgó la disolución de color verde oscuro de sulfuro de hidrógeno en exceso, luego se eliminaron los compuestos volátiles con una corriente de nitrógeno. Se purificó el sólido de color naranja claro resultante mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 8:1 a 1:1) para dar amina S1 (27 mg, 78% de rendimiento). CCF Rf 0,44 (metanol al 3%/diclorometano); FTIR (película de NaCl) 3422, 3031, 2953, 2910, 2876, 1751, 1734, 1719, 1653, 1648, 1507, 1496, 1465, 1457, 1454, 1419, 1413, 1379, 1240, 1097, 1008, 908, 863, 825, 734, 697, 668 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,70 (s, 1H), 7,39 - 7,22 (m, 30H), 6,31 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 5,42 - 5,36 (m, 2H), 5,27 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 - 4,87 (m, 2H), 4,83 (q, J = 11,1 Hz, 2H), 4,73 - 4,64 (m, 3H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,58 - 4,54 (m, 3H), 4,54 - 4,51 (m, 1H), 4,49 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,20 - 4,14 (m, 2H), 4,07 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,96 - 3,90 (m, 3H), 3,88 - 3,78 (m, 5H), 3,78 - 3,67 (m, 4H), 3,67 - 3,63 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (m, 8H), 3,51 - 3,43 (m, 2H), 3,43 - 3,29 (m, 6H), 3,28 - 3,23 (m, 2H), 3,22 - 3,17 (m, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 13,3, 2,9 Hz, 1H), 2,33 (t, J = 13,0 Hz, 1H), 2,02 - 1,94 (m, 1H), 1,89 - 1,76 (m, 4H), 1,72 - 1,54 (m, 3H), 1,48 - 1,38 (m, 2H), 1,38 - 1,32 (m, 8H), 1,29 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,10 - 1,02 (m, 4H), 1,02 - 0,90 (m, 83H), 0,89 - 0,86 (m, 9H), 0,81 - 0,55 (m, 58H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,57, 177,70, 168,37, 144,75, 138,81, 138,70, 138,23, 137,78, 137,34, 135,20, 131,04, 129,31, 128,53, 128,48, 128,46, 128,41, 128,34, 128,30, 128,26, 128,25, 128,18, 128,15, 128,13, 128,05, 128,03, 128,00, 127,97, 127,94, 127,88, 127,86, 127,84, 127,81, 127,76, 127,70, 127,51, 127,48, 124,77, 122,23, 109,10, 103,65, 103,09, 102,06, 101,37, 100,82, 98,07, 86,39, 83,86, 82,07, 81,86, 78,78, 78,70, 78,25, 78,07, 77,96, 76,44, 76,06, 75,93, 75,88, 75,82, 75,80, 75,49, 75,06, 74,65, 74,58, 73,59, 73,35, 73,21, 72,60, 72,51, 71,36, 71,10, 71,01, 69,35, 68,65, 66,88, 65,32, 64,51, 63,80, 60,23, 53,79, 49,27, 49,00, 48,74, 47,18, 45,97, 39,89, 39,56, 37,94, 35,95, 35,35, 34,03, 32,58, 31,91, 31,49, 30,49, 27,82, 26,50, 26,29, 25,34, 24,34, 23,44, 20,18, 17,53, 16,81, 15,92, 12,23, 7,55, 7,46, 7,25, 7,17, 7,16, 7,13, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,37, 5,33, 5,25, 5,22, 5,01,4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C165H273N2032Sig (M+H) 3046,7720, hallado 3046,7788.
Figure imgf000023_0001
Producción de variante de etanolamida protegida S3
Se añadió cloroformiato de isobutilo (6,1 ^l, 0,047 mmol, 3,0 equiv.) a una disolución helada de ácido 12-(benciloxi)-12-oxododecanoico S2 (30 mg, 0,094 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (22 |al, 0,156 mmol, 10 equiv.) en tetrahidrofurano (3,0 ml) y se agitó durante 4 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S1 (42 mg, 0,013 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (2,0 ml). Después de 24 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 * 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar análogo de etanolamida completamente protegido S2 (44 mg, 84% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,37 (hexanos/acetato de etilo 3:1); FTIR (película de NaCl) 3582, 3417, 3090, 3063, 3030, 2952, 2911, 2876, 1738, 1727, 1657, 1547, 1512, 1498, 1454, 1413, 1379, 1240, 1166, 1094, 1069, 1007, 910, 863, 823, 799, 731, 696 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,70 (s, 1H), 7,39 - 7,24 (m, 35H), 6,16 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,45 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,31 (t, J = 3,7 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,14 - 5,07 (m, 3H), 4,91 - 4,79 (m, 5H), 4,74 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,54 - 4,46 (m, 3H), 4,45 - 4,39 (m, 2H), 4,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,20 - 4,14 (m, 2H), 4,07 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,95 - 3,89 (m, 3H), 3,88 - 3,78 (m, 5H), 3,75 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 3,72 - 3,44 (m, 15H), 3,43 - 3,28 (m, 5H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,23 - 3,16 (m, 2H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,49 (dd, J = 13,1, 4,6 Hz, 1H), 2,37 - 2,29 (m, 3H), 2,17 (tt, J = 11,2, 5,7 Hz, 2H), 1,95 (dt, J = 14,5, 3,5 Hz, 1H), 1,85 - 1,75 (m, 4H), 1,69 - 1,52 (m, 8H), 1,48 - 1,42 (m, 3H), 1,38 - 1,30 (m, 8H), 1,29 (s, 3H), 1,28 - 1,23 (m, 6H), 1,21 (d, J = 6,2 Hz, 7H), 1,19 - 1,15 (m, 2H), 1,10 - 1,01 (m, 4H), 1,01 - 0,89 (m, 85H), 0,89 - 0,84 (m, 9H), 0,81 - 0,54 (m, 60H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,60, 177,74, 173,67, 173,33, 168,38, 144,94, 138,80, 138,65, 138,21, 137,58, 137,40, 136,12, 135,19, 128,52, 128,48, 128,43, 128,41, 128,31, 128,27, 128,25, 128,15, 128,13, 128,10, 128,03, 127,87, 127,84, 127,81, 127,77, 127,76, 127,73, 127,56, 127,48, 122,05, 109,09, 103,63, 102,64, 102,07, 101,37, 100,82, 98,08, 86,37, 83,85, 81,85, 79,51, 78,78, 78,70, 78,17, 78,04, 77,97, 76,43, 75,94, 75,92, 75,85, 75,80, 75,50, 75,06, 74,83, 74,67, 73,66, 73,21, 72,97, 72,59, 72,50, 71,36, 71,12, 70,85, 68,98, 68,15, 66,88, 66,04, 65,32, 64,56, 63,82, 60,22, 53,76, 49,25, 48,93, 47,13, 46,13, 45,94, 41,83, 41,76, 39,53, 39,49, 37,91, 36,96, 36,62, 35,96, 35,26, 34,33, 34,04, 32,56, 31,83, 31,49, 30,49, 29,44, 29,40, 29,36, 29,23, 29,14, 27,79, 26,48, 26,31,25,92, 25,32, 24,96, 24,68, 24,41, 23,39, 23,35, 20,15, 17,42, 16,75, 15,85, 12,22, 7,56, 7,46, 7,24, 7,16, 7,16, 7,13, 6,98, 6,85, 6,79, 5,91, 5,63, 5,43, 5,37, 5,33, 5,25, 5,22, 5,01, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C184H298N2035Si9Na [M+23] 3379,9421, hallado 3370,9590.
Figure imgf000024_0001
Producción de variante de etanolamida 3 (S0S-0-4-5-5)
Se cargó una disolución de análogo de p-etanolamida completamente protegido (S2) (25,0 mg, 0,008 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (5 ml) y etanol (5 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (17 mg, 0,016 mmol, 2,2 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (5,0 ml, TFNH20 3:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0°C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 5:1) y se purificó mediante RP-Hp Lc en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 iam, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 10^-49% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) en agua (TFA al 0,05%) durante 18 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 16,42 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar SQS-0-4-5-5 (3) (5,5 mg, 45% de rendimiento) como un sólido de color blanco. 1H-RMN (600 MHz, D20/CD3CN) 89,30 (s, 1H), 6,98 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,80 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 5,41 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,26 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,86 - 3,67 (m, 10H), 3,65 (dd, J = 11,1, 7,8 Hz, 2H), 3,61 - 3,50 (m, 4H), 3,50 - 3,37 (m, 8H), 3,34 - 3,18 (m, 5H), 3,18 - 3,07 (m, 5H), 2,69 (dd, J = 13,1, 2,6 Hz, 1H), 2,29 - 2,12 (m, 5H), 1,86 - 1,74 (m, 4H), 1,72 - 1,56 (m, 4H), 1,53 - 1,35 (m, 9H), 1,24 (s, 4H), 1,12 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,80 (s, 3H), 0,65 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C7sH126N2035SigNa [M+23] 1673,8039, hallado 1673,8019.
EJEMPL0 4: SÍNTESIS DE VARIANTES DE a/p-CARBAMAT0 a/p-4 (no forma parte de la invención reivindicada)
Figure imgf000025_0001
Producción de isocianato de prosapogenina protegida 11
Se añadió difenilfosforilazida (24 ^l, 0,116 mmol, 1,5 eq.) a una disolución de 10 (161 mg, 0,0776 mmol, 1 equiv.) y trietilamina (19 |al, 0,136 mmol, 1,75 eq.) en benceno (8 ml) en un recipiente equipado con un condensador enfriado con agua, luego se sumergió en un baño de aceite a 90°C. Después de 30 min, se añadieron secuencialmente porciones adicionales de trietilamina (86 |al, 0,62 mmol, 8 equiv.) y difenilfosforilazida (80 |al, 0,387 mmol, 5 equiv.). Después de 20 min, se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo, de 40:1 a 10:1) para dar isocianato 11 (127 mg, 79% de rendimiento).
CCF Rf 0,41 (hexanos/acetato de etilo 20:1); FTIR (NaCl, película) 2953, 2912, 2876, 2248 (NC0 st), 1754, 1724, 1458, 1413, 1377, 1239, 1171, 1101, 1006, 971,908, 864, 825, 801,736, 695 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCls) 8 9,71 (s, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 5H), 5,37 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,96 - 3,72 (m, 8H), 3,63 - 3,54 (m, 3H), 3,51 -3,45 (m, 1H), 3,42 - 3,31 (m, 3H), 3,28 - 3,22 (m, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,51 - 2,43 (m, 1H), 2,22 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 2,07 (m, 1H), 1,99 - 1,55 (m, 9H), 1,53 (s, 2H), 1,52 - 1,35 (m, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,32 (s, 3H), 1,23 (m, 6H), 0,93 (m, 103H), 0,81 - 0,54 (m, 60H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,92, 168,33, 142,29, 135.26, 128,52, 128,49, 128,46, 128,34, 128,28, 128,25, 128,23, 128,21, 128,19, 128,19, 128,13, 123,76, 122,06, 103,68, 101,40, 100,83, 86,53, 78,81,78,71,77,45, 76,44, 75,91, 75,81,75,08, 72,61,72,52, 71,38, 71,08, 66,87, 66,84, 65,33, 62,11, 62,08, 60,22, 53,84, 49,44, 48,29, 47,09, 46,16, 41,34, 41,32, 39,77, 39,63, 37,91, 37,18, 37,14, 36,38, 36,11, 33,70, 32,45, 32,40, 32,38, 32,36, 30,63, 30,61, 26,51, 26,44, 25,37, 24,30, 24,27, 23,42, 20.26, 17,04, 17,01, 15,78, 12,30, 7,57, 7,47, 7,38, 7,28, 7,25, 7,23, 7,22, 7,16, 7,14, 7,11, 7,08, 7,05, 7,04, 7,03, 6,99, 6,95, 6,94, 6,91,6,85, 6,83, 6,81, 6,79, 6,77, 5,93, 5,65, 5,48, 5,44, 5,41, 5,37, 5,35, 5,30, 5,28, 5,26, 5,23, 5,19, 4,94, 4,88, 4,86, 4,42, 4,38; EMAR (ESI) m/z: calc. para C10sH203N019NaSi9 (M+Na)+ 2093,2771, hallado 2093,2708.
Figure imgf000026_0001
Producción de azidas de carbamato de prosapogenina protegida a/B-23
Se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral, 4,3 mg, 0,108 mmol, 3 equiv.) a una disolución
de hemiacetal (35 mg, 0,036 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (0,5 ml). Después de 80 min, se añadió
isocianato en 0,5 ml de tetrahidrofurano. Después de tres horas, se diluyó la suspensión con cloruro de amonio concentrado, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con
salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio, se decantaron, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo, de 20:1 a 4:1) para dar glicosil carbamatos fácilmente separables (57 mg de p-23 y 29 mg de a-23, 79% de rendimiento total).
p-23: CCF Rf 0,42 (hexanos/acetato de etilo 4:1); FTIR (NaCl, película) 3422, 2953, 2877, 2107, 1745, 1497,
1456, 1378, 1240, 1096, 1007, 909, 863, 825, 730, 697, 666 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCls) 89,70 (s, 1H), 7,40
- 7,27 (m, 30H), 5,35 (s, 1H), 5,34 - 5,32 (m, 1H), 5,29 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,10 (d,
J = 12,4 Hz, 1H), 4,90 - 4,81 (m, 4H), 4,77 - 4,69 (m, 3H), 4,65 - 4,60 (m, 3H), 4,57 - 4,48 (m, 4H), 4,42 (d,
J = 7,2 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,11 - 4,06 (m, 2H), 4,04 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,96 - 3,72 (m, 9H), 3,71 -3,52 (m, 11H), 3,52 - 3,43 (m, 1H), 3,42 - 3,31 (m, 3H), 3,26 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 3,22 - 3,16 (m, 1H), 3,13 (t,
J = 11,0 Hz, 1H), 2,52 - 2,45 (m, 1H), 2,33 (t, J = 13,7 Hz, 1H), 2,02 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 1,93 - 1,73 (m, 4H), 1,74
- 1,65 (m, 2H), 1,64 - 1,56 (m, 1H), 1,52 - 1,51 (m, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,47 - 1,33 (m, 3H), 1,31 (d, J = 2,5 Hz, 6H),
1,28 - 1,23 (m, 4H), 1,10 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 1,05 - 0,87 (m, 89H), 0,85 (s, 3H), 0,79 (s, 3H), 0,76 - 0,52 (m,
53H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,76, 168,32, 151,95, 141,94, 138,80, 138,58, 138,23, 137,62, 136,81,
135,24, 128,55, 128,49, 128,45, 128,42, 128,29, 128,26, 128,19, 128,13, 127,98, 127,96, 127,93, 127,91, 127,77,
127,74, 127,53, 127,49, 124,99, 109,02, 103,65, 102,34, 101,39, 100,82, 98,50, 93,20, 86,46, 83,96, 82,45,
81,63, 78,80, 78,71, 78,14, 78,12, 78,00, 76,43, 75,99, 75,90, 75,80, 75,63, 75,06, 74,93, 74,09, 73,72, 7 72,60, 72,50, 72,05, 71,92, 71,89, 71,37, 71,07, 68,10, 66,83, 65,32, 64,44, 63,83, 60,21, 58,27, 55,96, 5 49,33, 47,32, 46,59, 46,06, 41,20, 39,63, 37,91, 36,12, 36,01, 33,17, 32,48, 32,24, 32,08, 30,54, 29,70, 2 26,45, 26,41,25,34, 24,56, 23,50, 20,20, 17,97, 16,90, 15,80, 12,26, 7,56, 7,46, 7,24, 7,16, 7,13, 7,06, 6,98, 6,85,
6,79, 5,92, 5,64, 5,43, 5,36, 5,33, 5,25, 5,22, 4,92, 4,87, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H266N4032NaSig
[M+Na] 3066,7132, hallado 3066,7073.
a-23: CCF Rf 0,60 (hexanos/acetato de etilo 4:1); FTIR (NaCl, película) 2953, 2877, 2108, 1745, 1456, 1379,
1240, 1096, 1008, 733, 665 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCh) 8 9,69 (s, 1H), 7,41 - 7,26 (m, 31H), 5,97 (d,
J = 3,8 Hz, 1H), 5,37 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,31 - 5,26 (m, 2H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,88 (d, J = 11,0 Hz, 1H),
4,85 - 4,76 (m, 3H), 4,74 - 4,67 (m, 2H), 4,66 - 4,58 (m, 3H), 4,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,28 - 4,24 (m,
1H), 4,21 - 4,15 (m, 2H), 4,15 - 4,09 (m, 2H), 4,07 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,99 - 3,89 (m, 4H), 3,89 - 3,73 (m, 6H),
3,65 - 3,51 (m, 9H), 3,50 - 3,44 (m, 1H), 3,40 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,38 - 3,33 (m, 2H), 3,30 (t, J = 7,9 Hz,
1H), 3,25 (dd, J = 8,6, 7,4 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 11,7, 8,9 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,53 (dd, J = 14,4,
4,4 Hz, 1H), 2,28 (t, J = 13,4 Hz, 1H), 2,21 - 2,14 (m, 1H), 1,94 - 1,48 (m, 13H), 1,39 - 1,19 (m, 15H), 1,15 - 0,82
(m, 101H), 0,82 - 0,51 (m, 61H); 13C-RMN (151 MHz, CDCh) 8212,17, 168,37, 151,39, 142,42, 138,80, 138,46,
138,23, 137,57, 137,47, 135,23, 128,48, 128,45, 128,42, 128,40, 128,35, 128,29, 128,26, 128,25, 128,23, 128,19,
128,15, 128,12, 128,09, 128,01, 128,00, 127,91, 127,89, 127,86, 127,74, 127,61, 127,59, 127,53, 127,49, 127,46,
124,22, 109,09, 103,52, 102,47, 101,36, 100,82, 99,01, 91,59, 86,14, 83,76, 81,63, 78,77, 78,71, 78,33, 78,22,
77,92, 77,61, 76,44, 76,33, 75,91, 75,82, 75,79, 75,48, 75,05, 74,52, 73,92, 73,83, 73,10, 72,59, 72,48, 72,18, 71,39, 71,10, 68,85, 68,29, 66,85, 65,62, 65,33, 63,63, 60,28, 60,14, 56,04, 53,74, 49,08, 46,67, 45,96, 44,57, 41,06, 39,67, 37,76, 36,31, 35,94, 33,26, 32,49, 32,14, 31,93, 31,92, 30,65, 29,70, 27,66, 26,56, 26,15, 25,28, 24,40, 23,38, 20,16, 17,45, 16,76, 15,72, 12,04, 7,56, 7,46, 7,25, 7,19, 7,16, 7,13, 7,10, 7,07, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,42, 5,36, 5,33, 5,30, 5,28, 5,25, 5,22, 4,88, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H266N4032NaSÍ9 [M+Na] 3066,7132, hallado 3066,6929.
Figure imgf000027_0001
Producción de amina de B-carbamato de prosapogenina protegida B-84
Se burbujeó un exceso de sulfuro de hidrógeno a través de una disolución helada de azida B-23 (17 mg, 0,006 mmol, 1 eq.) en piridina y trietilamina (3,5:1,4,5 ml) durante dos min mediante una aguja de acero, luego se retiró la aguja del septo. Después de agitar durante 2 min, se retiró el baño de hielo y se calentó hasta temperatura ambiental. Después de 7 h, se purgó la disolución de color verde oscuro de sulfuro de hidrógeno en exceso, luego se eliminaron los compuestos volátiles con una corriente de nitrógeno. Se purificó el sólido de color naranja claro resultante mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 8:1 a 1:1) para dar amina B-S4 (14 mg, 83% de rendimiento).
CCF Rf 0,42 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (NaCl, película) 3425, 3066, 3033, 2955, 2913, 2878, 1741, 1498, 1458, 1415, 1382, 1314, 1242, 1098, 904, 865, 827, 735, 699, 667 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCb) 89,70 (s, 1H), 7,41 - 7,27 (m, 30H), 5,39 - 5,30 (m, 3H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,92 - 4,80 (m, 4H), 4,77 (s, 1H), 4,72 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,68 - 4,59 (m, 5H), 4,59 - 4,46 (m, 4H), 4,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,13 - 4,06 (m, 2H), 3,97 - 3,87 (m, 4H), 3,87 - 3,45 (m, 20H), 3,42 - 3,31 (m, 4H), 3,26 (dt, J = 11,1,8,0 Hz, 2H), 3,22 - 3,16 (m, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,54 - 2,46 (m, 1H), 2,33 (dd, J = 15,2, 11,4 Hz, 1H), 2,02 (dd, J = 13,6, 2,4 Hz, 1H), 1,94 - 1,75 (m, 4H), 1,75 - 1,53 (m, 5H), 1,48 - 1,34 (m, 6H), 1,28 - 1,24 (m, 4H), 1,12 - 0,86 (m, 104H), 0,85 (s, 4H), 0,79 (s, 4H), 0,78 - 0,53 (m, 60H); 13C-RMN (151 MHz, CDCb) 8212,78, 168,32, 152,02, 142,07, 138,80, 138,55, 138,24, 138,01, 137,35, 135,24, 128,49, 128,45, 128,42, 128,41, 128,30, 128,27, 128,12, 128,02, 127,98, 127,94, 127,93, 127,82, 127,76, 127,74, 127,53, 127,50, 124,90, 109,00, 103,66, 102,31, 101,38, 100,81,98,37, 93,52, 86,48, 83,96, 82,45, 82,37, 78,80, 78,70, 78,11, 77,99, 76,43, 76,07, 75,89, 75,79, 75,63, 75,06, 74,95, 74,15, 73,99, 73,69, 73,21, 72,59, 72,50, 72.02, 71,37, 71,07, 71,03, 68,82, 66,83, 65,31, 64,37, 63,83, 60,21, 55,86, 53,81, 49,33, 48,50, 47,33, 46,58, 46.03, 41,19, 39,81, 39,62, 37,89, 36,11, 36,00, 33,16, 32,66, 32,48, 32,27, 32,02, 31,93, 30,90, 30,55, 29,70, 29,37, 27,82, 26,64, 26,46, 26,41, 25,34, 24,54, 24,45, 23,50, 22,70, 20,18, 17,97, 17,01, 16,88, 15,78, 14,14, 12,25, 7,56, 7,46, 7,24, 7,16, 7,13, 7,05, 6,98, 6,85, 6,79, 5,91,5,63, 5,43, 5,36, 5,33, 5,25, 5,22, 4,95, 4,86, 4,40; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H26gN2O32Sig [M+H]+ 3018,7407, hallado 3018,7476.
Figure imgf000028_0001
Producción de amina de a-carbamato de prosapogenina protegida a-S6
Se burbujeó un exceso de sulfuro de hidrógeno a través de una disolución helada de azida a-23 (29 mg, 0,010 mmol, 1 eq.) en piridina y trietilamina (3,5:1,4,5 ml) durante dos min mediante una aguja de acero, luego se retiró la aguja del septo. Después de agitar durante 2 min, se retiró el baño de hielo y se calentó hasta temperatura ambiental. Después de 6 h, se purgó la disolución de color verde oscuro de sulfuro de hidrógeno en exceso, luego se eliminaron los compuestos volátiles con una corriente de nitrógeno. Se purificó el sólido de color naranja claro resultante mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 8:1 a 1:1) para dar amina (a-S6) (22,5 mg, 78% de rendimiento).
CCF Rf 0,11 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (NaCl, película) 3426, 3066, 3033, 2955, 2913, 2878, 1741, 1498, 1458, 1415, 1382, 1314, 1242, 1098, 1009, 904, 865, 827, 735, 699, 667 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,68 (s, 1H), 7,40 - 7,27 (m, 33H), 6,00 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 5,33 - 5,25 (m, 2H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,85 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,82 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,68 - 4,49 (m, 7H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,19 - 4,07 (m, 4H), 4,02 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 3,95 - 3,89 (m, 3H), 3,88 - 3,77 (m, 4H), 3,75 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 10,0, 3,6 Hz, 1H), 3,67 - 3,51 (m, 9H), 3,50 - 3,44 (m, 2H), 3,42 - 3,38 (m, 1H), 3,35 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 3,31 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 3,27 - 3,23 (m, 1H), 3,19 (dd, J = 11,5, 9,1 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 13,4, 2,7 Hz, 0H), 2,32 - 2,20 (m, 2H), 1,94 - 1,76 (m, 5H), 1,75 - 1,67 (m, 1H), 1,68 - 1,57 (m, 2H), 1,53 -1,47 (m, 3H), 1,35 - 1,32 (m, 2H), 1,31 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,22 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,13 - 1,07 (m, 2H), 1,03 - 0,88 (m, 105H), 0,86 (s, 4H), 0,85 (s, 4H), 0,80 (s, 3H), 0,79 - 0,53 (m, 66H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,18, 168,37, 151,64, 142,45, 138,81, 138,46, 138,24, 138,00, 137,81, 135,24, 128,45, 128,44, 128,39, 128,26, 128,25, 128,18, 128,12, 127,90, 127,88, 127,83, 127,74, 127,58, 127,46, 127,36, 124,25, 109,02, 103.49, 102,43, 101,35, 100,82, 98,69, 91,74, 83,75, 81,55, 78,71, 78,21, 77,91, 76,44, 75,81, 75,47, 75,05, 74.49, 73,77, 73,70, 73,10, 72,59, 72,48, 71,39, 71,20, 71,10, 70,42, 68,82, 66,85, 65,40, 65,32, 63,61, 60,29, 55,89, 53,75, 49,28, 49,10, 46,71, 45,98, 44,92, 41,08, 39,67, 37,77, 36,31, 35,94, 33,27, 32,51, 32,16, 31,99, 30,65, 29,70, 27,70, 26,57, 26,22, 25,28, 24,42, 23,40, 20,17, 17,45, 16,74, 15,70, 12,04, 7,56, 7,46, 7,25, 7,18, 7,13, 7,12, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,36, 5,33, 5,25, 5,22, 4,89, 4,41.
Figure imgf000029_0001
Producción de variante de a-carbamato protegida a-S7
Se añadió cloroformiato de isobutilo (4,5 ^l, 0,037 mmol, 5 equiv.) a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (14 mg, 0,045 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (8,3 |al, 0,060 mmol, 8 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y se agitó durante 3 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina a-S6 (22,5 mg, 0,008 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (0,6 ml). Después de 2,5 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar amida a-S7 (23 mg, 93% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,73 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (NaCl, película) 3421, 3089, 3064, 3031, 2953, 2913, 2876, 1740, 1678, 1655, 1607, 1587, 1456, 1413, 1380, 1312, 1240, 1165, 1097, 1008, 908, 863, 825, 735, 697, 666 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 89,69 (s, 1H), 7,38 - 7,27 (m, 35H), 5,99 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 14,9 Hz, 3H), 4,91 -4,87 (m, 2H), 4,86 - 4,77 (m, 4H), 4,70 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,46 - 4,40 (m, 4H), 4,33 (s, 1H), 4,18 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,15 - 4,09 (m, 3H), 3,95 - 3,89 (m, 3H), 3,88 - 3,73 (m, 7H), 3,65 - 3,52 (m, 8H), 3,51 - 3,45 (m, 3H), 3,40 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,37 - 3,33 (m, 2H), 3,30 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 13,6, 6,8 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,47 (dd, J = 13,6, 2,4 Hz, 1H), 2,34 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,30 - 2,15 (m, 4H), 1,90 -1.57 (m, 13H), 1,52 - 1,47 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,33 (s, 4H), 1,30 - 1,20 (m, 24H), 1,13 - 1,02 (m, 6H), 1,02 -0,90 (m, 95H), 0,89 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 6H), 0,80 - 0,51 (m, 66H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,23, 173,69, 173,41, 168,36, 151,40, 142,24, 138,78, 138,40, 138,24, 138,05, 137,56, 136,11, 135,24, 128,52, 128,45, 128,42, 128,39, 128,25, 128,19, 128,15, 128,14, 128,12, 128,00, 127,90, 127,80, 127,73, 127,63, 127,47, 124,43, 109,00, 103,51, 102,53, 101,36, 100,82, 98,90, 91,22, 86,13, 83,77, 81,49, 78,78, 78,71, 78,14, 77,90, 76,44, 76,26, 76,10, 75,92, 75,82, 75,50, 75,06, 74,48, 73,83, 73,75, 73,09, 72,59, 72,48, 71,68, 71,40, 71,10, 70,85, 69,88, 68,76, 66,84, 66,05, 65,40, 65,32, 63,62, 60,29, 56,00, 53,76, 49,12, 46,88, 46,68, 45,97, 44,85, 41,05, 39,64, 37,78, 36,96, 36,28, 35,93, 34,33, 33,25, 32,49, 32,14, 31,97, 30,63, 29,70, 29,40, 29,37, 29,31, 29,19, 29,12, 27,69, 26,57, 26,20, 25,87, 25,29, 24,94, 24,40, 23,38, 22,70, 20,15, 17,48, 16,63, 15,74, 14,14, 12,05, 7,56, 7,46, 7,25, 7,19, 7,13, 7,11, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,36, 5,33, 5,25, 5,22, 4,89, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C1S2H294N2035NaSig [M+Na] 3342,9108, hallado 3342,9001.
Figure imgf000030_0001
Producción de variante de a-carbamato a-4 (S0S-0-5-8-5)
Se cargó una disolución de análogo de p-carbamato completamente protegido (a-S7) (5 mg, 0,0015 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml) y etanol (1 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (4 mg, 0,004 mmol, 4 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (1,0 ml, TFNH20 3:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0°C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 5:1) y se purificó mediante RP-Hp Lc en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 iam, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 15—>51 % de acetonitrilo (TFA al 0,05%) a lo largo de 18 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 17,2 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar SQS-0-5-8-5 (a-4) (2,0 mg, 82% de rendimiento) como un sólido de color blanco esponjoso.
1H-RMN (600 MHz, D20/CD3CN) 89,90 (s, 1H), 6,45 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,19 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,47 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,46 - 4,36 (m, 3H), 4,35 - 4,20 (m, 5H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 4,11 - 3,95 (m, 5H), 3,93 -3,82 (m, 4H), 3,77 - 3,66 (m, 3H), 2,98 (dd, J = 13,5, 1,7 Hz, 1H), 2,77 - 2,72 (m, 1H), 2,46 - 2,35 (m, 3H), 2,31 -2,14 (m, 4H), 2,01 - 1,98 (m, 1H), 1,82 (s, 3H), 1,72 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,63 (s, 2H), 1,60 - 1,53 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,36 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H122N20s5Na [M+Na]+ 1645,7726, hallado 1645,7754.
EJEMPL05: SÍNTESIS DE VARIANTE DE p-TI0ÉSTER 5 (SQS-0-13-5-5)
Figure imgf000030_0002
Producción de bromuro de glicosilo de trisacárido 20
Se añadió bromuro de oxalilo a una disolución helada de hemiacetal 17 (125 mg, 0,128 mmol, 1,0 equiv.), 2,4,6-tri-terc-butilpiridina (127 mg, 0,513 mmol, 4,0 equiv.) y dimetilformamida (150 |al, 1,925 mmol, 15 equiv.) en diclorometano (2 ml) con evolución inmediata de C0 y C02. Después de cinco min, se retiró el baño de hielo y se calentó hasta temperatura ambiental. Después de tres horas, se eliminó el disolvente con una corriente de nitrógeno y se purificó la mezcla en bruto directamente mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 10:1 a 4:1) para dar bromuro de glicosilo como una película incolora, delgada y escamosa 20 (98 mg, 74% de rendimiento).
CCF Rf 0,43 (hexanos:acetato de etilo, 4:1); FTIR (película de NaCl) 3583, 3063, 3030, 2983, 2932, 2109, 1496, 1453, 1370, 1242, 1219, 1100, 1027, 992, 862, 792, 735, 697, 666 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, C6D6-d6) 87,49 -7,06 (m, 25H), 6,62 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,34 (s, 1H), 5,16 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,77 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,40 - 4,32 (m, 3H), 4,33 - 4,25 (m, 3H), 4,24 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,12 (dq, J = 9,9, 6,2 Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 9,6, 3,8 Hz, 1H), 3,97 (dd, J = 9,9, 7,4 Hz, 1H), 3,92 (dd, J = 9,7, 3,6 Hz, 1H), 3,86 (dd, J = 3,6, 1,6 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 11,5, 5,3 Hz, 1H), 3,65 - 3,46 (m, 5H), 3,18 (dd, J = 11,6, 9,8 Hz, 1H), 1,45 - 1,40 (m, 6H), 1,20 (s, 3H); 13C-RMN (151 MHz, C6D6-d6) 8139,63, 139,44, 139,01, 138,08, 137,99, 128,63, 128,44, 128,39, 128,34, 128.32, 128,23, 127,68, 127,67, 127,65, 127,55, 127,43, 109,18, 102,71, 100,72, 93,84, 84,15, 82,33, 78,60, 78.32, 78,10, 77,92, 76,85, 76,45, 75,43, 74,81, 73,55, 72,84, 72,76, 72,36, 67,98, 67,71, 66,32, 63,97, 60,24, 27,74, 26,18, 25,69, 17,73; EMAR (ESI) m/z: calc. para C55H62Ns012NaBr [M+Na] 1058,3415, hallado 1058,3418.
Figure imgf000031_0001
Producción de tioacetato de glicosilo de trisacárido S8
Se añadió carbonato de cesio (77 mg, 0,237 mmol, 5 equiv.) a una disolución helada de ácido tioacético (67 |al, 0,946 mmol, 20 equiv.) y bromuro 20 (49 mg, 0,047 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano/dimetilformamida (2 ml, 1:1). Después de una hora, se diluyó la reacción con acetato de etilo, se lavó con bicarbonato de sodio saturado y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo, de 10:1 a 2:1) para dar tioacetato como un aceite incoloro S8 (42 mg, 87% de rendimiento).
CCF Rf0,55 (hexanos:acetato de etilo, 2:1); FTIR (película de NaCl) 3088, 3063, 3030, 2983, 2904, 2872, 2162, 2109, 1706, 1704, 1700, 1496, 1453, 1419, 1381, 1363, 1310, 1274, 1241, 1221, 1091, 1021, 989, 952, 912, 864, 862, 814, 790, 736, 697, 668, 625 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 87,36 - 7,20 (m, 25H), 5,44 (s, 1H), 4,98 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,85 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,84 - 4,75 (m, 3H), 4,70 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,55 - 4,45 (m, 3H), 4,11 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 7,4, 5,7 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,98 (t, J = 9,5 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,76 - 3,66 (m, 3H), 3,60 - 3,48 (m, 5H), 3,26 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,19 - 3,11 (m, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,23 (d, J = 6,2 Hz, 3H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8192,87, 138,78, 138,59, 138,23, 137,47, 136,58, 128,62, 128,56, 128,53, 128,45, 128,39, 128,36, 128,31, 128,29, 128,26, 128,11, 128,08, 128,04, 127,96, 127,94, 127,81, 127,78, 127,62, 127,56, 109,04, 101,99, 98,83, 83,86, 83,16, 81,94, 81,47, 78,09, 77,94, 77,72, 76,17, 75,70, 75,58, 74,70, 73,70, 73,21, 73,05, 71,80, 67,89, 65,32, 63,81, 58,58, 30,77, 27,75, 26,42, 17,17; EMAR (ESI) m/z: calc. para C57H65Ns013SNa [M+Na]+ 1054,4136, hallado 1054,4182.
Figure imgf000031_0002
Producción de tiohemiacetal de trisacárido 25
Se añadió hidrazina (6,1 |al, 0,194 mmol, 5,0 equiv.) a una disolución de tioacetato S8 (40 mg, 0,039 mmol, 1 equiv.) y ditiotreitol (18 mg, 0,116 mmol, 3 equiv.) en tetrahidrofurano/metanol (2 ml, 1:1). Después de 1 h, se diluyó el contenido de reacción con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para dar tiohemiacetal como un aceite transparente 25 (36 mg, 94%).
CCF Rf 0,51 (hexanos:acetato de etilo, 2:1; FTIR (película de NaCl) 3583, 3063, 3031, 2983, 2870, 2106, 1496, 1453, 1369, 1274, 1241, 1220, 1091, 1021, 990, 912, 862, 793, 736, 697, 665 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCls) 8 7,40 - 7,26 (m, 25H), 5,52 (s, 1H), 4,93 - 4,80 (m, 4H), 4,71 (q, J = 11,2, 10,7 Hz, 3H), 4,62 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,59 - 4,51 (m, 3H), 4,35 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 7,5, 5,7 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,04 (dd, J = 9,9, 6,6 Hz, 1H), 3,94 (dd, J = 11,9, 4,1 Hz, 1H), 3,86 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,66 - 3,57 (m, 7H), 3,31 (dd, J = 9,5, 8,7 Hz, 1H), 3,24 - 3,14 (m, 1H), 2,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,31 (s, 3H), 1,23 (d, J = 6,2 Hz, 3H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8138,75, 138,71, 138,20, 137,39, 136,55, 128,57, 128,51, 128,40, 128,32, 128,27, 128,25, 128,22, 128,06, 128,05, 128,04, 127,91, 127,76, 127,75, 127,50, 127,48, 108,97, 101,96, 98,80, 83,86, 82,88, 81,90, 79,70, 78,14, 77,92, 77,69, 77,60, 76,27, 75,71, 75,53, 74,71, 73,73, 73,17, 71,66, 68,25, 65,38, 63,76, 58,53, 27,74, 26,42, 17,24; EMAR (ESI) m/z: calc. para C55H63N3012SNa [M+Na]+ 1012,4030, hallado 1012,4025.
Figure imgf000032_0001
Producción de azida de B-tioéster de prosapogenina protegida 26
Se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral, 4,7 mg, 0,115 mmol, 3 equiv.) a una disolución helada de tiohemiacetal 25 (38 mg, 0,038 mmol, 1,0 equiv.) y cloruro de acilo 12 (88 mg, 0,042 mmol, 1,1 equiv.) en tetrahidrofurano (5 ml). Después de dos horas, se añadió cloruro de amonio saturado (1 ml) y se diluyó la mezcla con diclorometano y se lavó con agua y salmuera, luego se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo, de 20:1 a 4:1) para dar glicosil tioéster 26 (102 mg, 87% de rendimiento) como una película de color blanco escamosa. Desplazamiento químico característico de protón anomérico de tioéster recién formado a 4,84 ppm, J = 10,0 Hz, y de carbono a 81,6 ppm.
CCF Rf 0,80 (hexanos:acetato de etilo, 2:1) FTIR (película de NaCl) 2953, 2876, 2109, 1751, 1685, 1456, 1380, 1240, 1096, 1006, 900, 808, 733, 696, 665; 1H-RMN (500 MHz, CDCh-cf) 89,68 (s, 1H), 7,39 - 7,27 (m, 30H), 5,55 (s, 1H), 5,32 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,86 - 4,80 (m, 3H), 4,76 - 4,70 (m, 2H), 4,63 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,58 - 4,51 (m, 4H), 4,49 (s, 1H), 4,42 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 3,4, 1,4 Hz, 1H), 4,13 - 4,04 (m, 3H), 3,99 - 3,66 (m, 13H), 3,65 - 3,53 (m, 7H), 3,51 - 3,32 (m, 7H), 3,30 - 3,23 (m, 2H), 3,19 (dd, J = 11,5, 9,2 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,84 (dd, J = 13,3, 3,3 Hz, 1H), 2,22 (t, J = 13,3 Hz, 1H), 1,95 - 1,75 (m, 4H), 1,74 - 1,57 (m, 5H), 1,53 - 1,46 (m, 5H), 1,45 - 1,23 (m, 17H), 1,19 - 1,05 (m, 2H), 1,03 - 0,85 (m, 114H), 0,84 - 0,52 (m, 77H); 13C-RMN (151 MHz, CDCb) 8212,51, 204,16, 168,32, 142,00, 138,68, 138,48, 138,21, 137,60, 136,58, 135,23, 128,55, 128,46, 128,43, 128,42, 128,34, 128,32, 128,29, 128,24, 128,21, 128,14, 128,12, 128,11, 128,03, 128,01, 128,00, 127,88, 127,85, 127,79, 127,75, 127,60, 127,59, 123,87, 108,91, 103,51, 102,28, 101,37, 100,82, 98,50, 86,26, 83,92, 83,61, 82,46, 81,62, 78,78, 78,70, 78,23, 78,01, 77,80, 76,43, 76,16, 75,94, 75,80, 75,76, 75,57, 75,53, 75,05, 75,03, 73,60, 73,20, 72,59, 72,50, 71,64, 71,60, 71,38, 71,05, 67,93, 66,84, 65,38, 65,32, 63,84, 60,25, 58,80, 56,19, 53,84, 53,43, 49,30, 46,67, 46,09, 41,81, 41,21, 39,84, 37,85, 36,04, 35,01, 33,94, 32,56, 32,20, 32,04, 30,32, 27,74, 26,46, 26,39, 25,31, 24,64, 23,40, 20,21, 17,57, 17,10, 15,75, 12,22, 7,55,
7,46, 7,25, 7,16, 7,13, 7,09, 6,98, 6,85, 6,78, 5,91, 5,63, 5,43, 5,36, 5,33, 5,31, 5,25, 5,22, 4,88, 4,40; EMAR
(ESI) m/z: calc. para C163H265Ns031NaSÍ9S [M+Na]+ 3067,6794, hallado 3067,6711.
Figure imgf000033_0001
Producción de amina de B-tioéster de prosapogenina protegida S9
Se burbujeó un exceso de sulfuro de hidrógeno mediante una cánula a través de una disolución helada de azida
26 (80 mg, 0,026 mmol, 1,0 equiv.) en piridina/trietilamina (3,5:1,4,5 ml) durante dos min. Se retiraron la cánula y
la aguja de ventilación, y se selló el septo con cinta de Teflon y Parafilm, luego se calentó hasta temperatura ambiental y se agitó durante la noche. Se eliminó el sulfuro de hidrógeno con una corriente de nitrógeno, luego
se concentró la disolución de color naranja resultante y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1%], de 5:1 a 2:1) proporcionando amina S9 (71 mg, 90% de rendimiento).
CCF Rf 0,50 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (película de NaCl) 3583, 2951, 2876,
1751, 1724, 1685, 1496, 1457, 1380, 1240, 1097, 1006, 900, 807, 731 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCh-d) 89,69
(s, 1H), 7,37 - 7,26 (m, 30H), 5,57 (s, 1H), 5,32 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz,
1H), 4,92 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 - 4,81 (m, 4H), 4,74 - 4,68 (m, 2H), 4,64 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 7,4 Hz,
1H), 4,58 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,53 - 4,49 (m, 3H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,18 (d,
J = 7,4 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 7,4, 5,6 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,00 (dd, J = 10,3, 8,5 Hz, 1H), 3,97 - 3,90
(m, 4H), 3,87 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,85 - 3,72 (m, 6H), 3,68 - 3,53 (m, 10H), 3,48 (ddd, J = 10,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H),
3,39 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,37 - 3,32 (m, 2H), 3,28 (dd, J = 8,7, 7,5 Hz, 1H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,20 (dd,
J = 11,7, 9,3 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,84 (dd, J = 13,4, 4,6 Hz, 1H), 2,22 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 1,95 -1,74 (m, 5H), 1,73 - 1,53 (m, 7H), 1,51 (s, 4H), 1,45 - 1,38 (m, 2H), 1,34 (s, 4H), 1,33 - 1,26 (m, 11H), 1,16 - 0,89
(m, 97H), 0,88 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 0,80 - 0,51 (m, 61H); 13C-RMN (151 MHz, CDCb) 8212,59, 204,03, 168,36,
142,34, 138,70, 138,50, 138,24, 137,93, 136,88, 135,26, 128,55, 128,52, 128,49, 128,46, 128,44, 128,38, 128,35,
128,33, 128,31, 128,24, 128,18, 128,16, 128,15, 128,07, 128,05, 127,82, 127,78, 127,72, 127,65, 127,63, 123,70,
108,96, 103,55, 102,32, 101,39, 100,85, 98,36, 86,28, 83,95, 82,49, 81,76, 78,81, 78,73, 78,22, 78,03, 77,85,
76,45, 76,24, 75,97, 75,83, 75,79, 75,68, 75,09, 75,07, 73,59, 73,23, 72,62, 72,53, 71,41, 71,08, 70,80, 69,05,
66,86, 65,35, 63,87, 60,28, 56,29, 53,86, 49,36, 49,04, 46,84, 46,10, 41,68, 41,28, 39,86, 37,88, 36,08, 35,0 33,95, 32,58, 32,19, 32,10, 30,35, 29,73, 27,81, 26,46, 26,44, 25,34, 24,66, 23,46, 20,24, 17,62, 17,21, 15,80,
12,24, 7,58, 7,49, 7,27, 7,19, 7,16, 7,12, 7,01, 6,88, 6,81, 5,94, 5,66, 5,46, 5,39, 5,36, 5,28, 5,25, 4,92, 4,43;
EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H26sN031SigS [M+H]+ 3019,7070, hallado 3019,7112.
Figure imgf000034_0001
Producción de variante de B-tioéster protegida S10
Se añadió cloroformiato de isobutilo (3,5 ^l, 0,0264 mmol, 4 equiv.) a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (11 mg, 0,033 mmol, 5 equiv.) y trietilamina (9 |al, 0,066 mmol, 10 equiv.) en tetrahidrofurano (3 ml) y se agitó durante 2 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S9 (20 mg, 0,007 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml). Después de 2 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar análogo de tioéster completamente protegido S10 (19 mg, 87% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,57 (hexanos:diclorometano:acetato de etilo, 4:2:1) FTIR (película de NaCl) 3583, 3381, 2954, 2876, 1751, 1738, 1682, 1497, 1455, 1414, 1380, 1240, 1099, 1005, 901, 863, 806, 732, 696, 665 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,70 (s, 1H), 7,39 - 7,25 (m, 35H), 5,89 (s, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,31 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,93 - 4,87 (m, 2H), 4,89 - 4,74 (m, 6 H), 4,72 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 4,47 - 4,40 (m, 3H), 4,17 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 7,4, 5,6 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,97 -3,72 (m, 12H), 3,65 - 3,51 (m, 8 H), 3,48 (ddd, J = 10,4, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,44 - 3,31 (m, 6 H), 3,28 (dd, J = 8,7, 7,4 Hz, 1H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 11,6, 9,1 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,83 (dd, J = 13,6, 4,5 Hz, 1H), 2,34 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,25 - 2,14 (m, 3H), 1,92 - 1,81 (m, 2H), 1,83 - 1,74 (m, 1H), 1,41 (ddd, J = 13,5, 9,3, 3,8 Hz, 1H), 1,71 - 1,53 (m, 12H) 1,50 (s, 3H) 1,35 (s, 3H), 1,33 - 1,03 (m, 31H), 1,03 - 0,87 (m, 99H), 0,87 (s, 3H), 0,83 (s, 4H), 0,81 - 0,50 (m, 70H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,56, 203,39, 173,67, 173,31, 168,34, 142,85, 138,68, 138,49, 138,22, 137,85, 137,19, 136,12, 135,24, 128,72, 128,52, 128,44, 128,43, 128,39, 128,32, 128,31, 128,26, 128,25, 128,21, 128,15, 128,13, 128,08, 128,05, 128,02, 127,90, 127,79, 127,74, 127,63, 127,61, 127,59, 127,53, 122,89, 108,98, 103,57, 102,26, 101,37, 100,82, 98,39, 86,32, 83,91, 82,38, 81,95, 81,74, 78,79, 78,70, 78,06, 77,98, 77,92, 76,43, 76,12, 75,92, 75,84, 75,80, 75,74, 75,06, 74,99, 73,53, 73,20, 72,59, 72,50, 71,38, 71,07, 70,75, 68,76, 66,84, 66,03, 65,32, 65,26, 63,84, 60,25, 56,54, 53,80, 49,29, 46,86, 46,19, 45,99, 41,33, 41,28, 39,81, 37,83, 36,93, 36,03, 35,10, 34,33, 33,90, 32,53, 32,11, 32,08, 30,30, 29,70, 29,45, 29,40, 29,38, 29,24, 29,22, 29,14, 27,79, 26,42, 26,41, 25,87, 25,32, 24,97, 24,51, 23,40, 20,18, 17,67, 17,07, 15,79, 12,24, 7,55, 7,46, 7,24, 7,15, 7,13, 7,09, 6,98, 6,85, 6,78, 5,91, 5,63, 5,44, 5,36, 5,33, 5,25, 5,22, 4,90, 4,40; EMAR (ESI) m/z: calc. para C1S2H293N034NaSigS [M+Na]+ 3343,8771, hallado 3343,8735.
Figure imgf000035_0001
Producción de variante de B-tioéster 5 (S0S-0-13-5-5)
Se cargó una disolución de variante de B-tioéster completamente protegida S10 (18 mg, mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (4 ml) y etanol (2 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (13 mg, 0,011 mmol, 4 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante 11 h, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Debe tenerse cuidado para evitar la reducción cuantitativa del tioéster para dar el aldehído correspondiente, que se producirá si se permite que la hidrogenación de la reacción avance durante la noche. Al tiempo de reacción indicado, una RMN sin procesar en metanol-d4 mostró 2,5 protones aromáticos (con respecto al aldehído C27, integrado como 1,0). La hidrogenación adicional da como resultado rendimientos disminuidos. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (2,0 ml, TFNH203:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0°C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 4:1) y se purificó mediante RP-HPLC en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 ^m, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 20^-66% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) a lo largo de 16 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 13,2 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar variante de B-tioéster 5 (SQS-0-13-5-5) (3,1 mg, 33% de rendimiento) como un sólido de color blanco esponjoso.1
1H-RMN (600 MHz, D20/CD3CN, 1:1) 8 9,91 (s, 1H), 5,87 (t, J = 4,1 Hz, 1H), 5,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,00 - 4,95 (m, 2H), 4,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,46 - 4,36 (m, 5H), 4,35 - 4,25 (m, 4H), 4,24 - 4,12 (m, 6 H), 4,09 - 3,95 (m, 6 H), 3,93 - 3,84 (m, 4H), 3,82 (dd, J = 11,5, 6,3 Hz, 1H), 3,78 - 3,70 (m, 3H), 3,67 (dd, J = 9,3, 7,7 Hz, 1H), 3,45 (dd, J = 13,6, 2,9 Hz, 1H), 2,81 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 2,79 - 2,67 (m, 3H), 2,47 - 2,32 (m, 5H), 2,32 - 2,14 (m, 6 H), 2,07 (q, J = 6,9 Hz, 6 H), 1,97 (t, J = 9,7 Hz, 2H), 1,89 (d, J = 15,4 Hz, 2H), 1,85 (s, 3H), 1,76 - 1,69 (m, 2H), 1,64 (s, 3H), 1,63 - 1,58 (m, 2H), 1,48 (s, 3H), 1,44 (s, 4H), 1,40 (s, 3H), 1,38 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 1,19 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H121N034NaS [M+Na]+ 1646,7388, hallado 1646,7373.
EJEMPL06 : SÍNTESIS DE VARIANTE DE a-GLIC0SIL ÉSTER 6 (SQS-0-0-8-5) (no forma parte de la invención reivindicada
Figure imgf000036_0001
Producción de azida de a-éster de prosapogenina protegida 24
Se añadió hidruro de sodio a una disolución de hemiacetal 17 (28 mg, 0,029 mmol, 1,5 equiv.) en tetrahidrofurano/dimetilformamida (2,0 ml, 1:1) a -20°C. Después de 5 min, se añadió una disolución cloruro de acilo 12 (40 mg, 0,019 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (1,5 ml) a lo largo de 1 min. Después de 10 min, se añadió cloruro de amonio acuoso concentrado (0,5 ml). Se diluyó la suspensión con agua y se extrajo con benceno (3 * 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos/acetato de etilo, de 20 :1 a 4:1) proporcionando ésteres separables (35 mg de a-éster (a-24), 6 mg de p-éster (P-24), 70% de rendimiento total).
CCF Rf 0,55 (benceno:acetato de etilo, 20:1); FTIR (película de NaCl) 2953, 2876, 2106, 1752, 1736, 1455, 1380, 1240, 1098, 1005, 825, 732, 696 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,74 (s, 1H), 7,47 - 7,26 (m, 30H), 6,12 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,35 - 5,28 (m, 2H), 5,27 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,89 - 4,80 (m, 2H), 4,77 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 11,7, 4,1 Hz, 2H), 4,59 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,57 - 4,49 (m, 3H), 4,46 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 9,9, 3,8 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 3,5, 1,6 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 7,1, 5,6 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,99 - 3,79 (m, 10H), 3,78 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,68 - 3,54 (m, 9H), 3,55 -3,45 (m, 2H), 3,42 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,41 - 3,33 (m, 2H), 3,35 - 3,29 (m, 1H), 3,28 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,26 - 3,19 (m, 1H), 3,16 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,94 (dd, J = 14,4, 4,4 Hz, 1H), 2,15 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 1,86 - 1,75 (m, 4H), 1,77 - 1,55 (m, 7H), 1,52 - 1,47 (m, 2H), 1,38 (s, 4H), 1,33 (s, 6 H), 1,24 (d, J = 5,6 Hz, 3H), 1,14 - 0,86 (m, 101H), 0,87 - 0,56 (m, 78H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,86, 174,19, 168,33, 142,70, 138,80, 138,41, 138,25, 137,45, 137,28, 135,26, 128,56, 128,52, 128,50, 128,48, 128,44, 128,40, 128,31, 128,28, 128,26, 128,23, 128,16, 128,13, 128,00, 127,96, 127,94, 127,90, 127,81, 127,78, 127,58, 127,50, 122,32, 109,19, 103,63, 102,83, 101,41, 100,85, 99,33, 91,33, 86,48, 83,78, 81,31, 78,83, 78,73, 78,32, 78,21, 77,98, 77,68, 76,65, 76,46, 76,09, 75,93, 75,82, 75,56, 75,08, 74,95, 74,51, 73,62, 73,15, 72,92, 72,62, 72,54, 72,41, 71,40, 71,09, 70,05, 68,30, 66,87, 65,35, 65,08, 63,70, 60,24, 59,95, 53,85, 49,60, 49,37, 46,37, 46,05, 41,50, 40,22, 39,53, 37,86, 36,09, 35,08, 34,69, 34,59, 34,55, 32,48, 32,40, 31,41, 30,36, 29,09, 27,83, 26,37, 26,32, 25,34, 25,30, 24,22, 23,21, 20,73, 20,27, 17,37, 17,13, 15,78, 12,27, 11,48, 7,59, 7,49, 7,27, 7,24, 7,22, 7,16, 7,01, 6 ,88 , 6,81, 5,94, 5,66, 5,46, 5,39, 5,36, 5,33, 5,28, 5,25, 5,21, 5,04, 4,43; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H265Ns032NaSi9 3051,7023 [M+Na], hallado 3051,7041.
Figure imgf000037_0001
Producción de amina de a-éster de prosapogenina protegida S11
Se burbujeó sulfuro de hidrógeno mediante una cánula a través de una disolución helada de azida 24 (44 mg, 0,015 mmol, 1,0 equiv.) en piridina/trietilamina (3,5:1,4,5 ml) durante dos min. Se retiraron la cánula y la aguja de ventilación, y se selló el septo con cinta de Teflon y Parafilm, luego se calentó hasta temperatura ambiental y se agitó durante la noche. Se eliminó el sulfuro de hidrógeno con una corriente de nitrógeno, luego se concentró la disolución de color naranja resultante y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1%], de 5:1 a 2:1) proporcionando amina S11 (36 mg, 83% de rendimiento) como un aceite incoloro.
CCF Rf 0,33 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%; FTIR (película de NaCl) 2951,2876, 1753, 1726 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,70 (s, 1H), 7,42 - 7,25 (m, 33H), 6,15 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,30 - 5,26 (m, 2H), 5,24 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,87 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,85 -4,77 (m, 2H), 4,72 - 4,65 (m, 3H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,58 - 4,52 (m, 4H), 4,47 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,19 - 4,13 (m, 2H), 4,11 (dd, J = 7,6, 5,5 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,98 - 3,89 (m, 4H), 3,88 - 3,71 (m, 6 H), 3,67 - 3,51 (m, 10H), 3,51 - 3,45 (m, 2H), 3,41 - 3,28 (m, 5H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,20 (ddd, J = 11,4, 7,6, 3,5 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,92 (dd, J = 14,4, 4,4 Hz, 1H), 2,12 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 1,87 - 1,73 (m, 4H), 1,73 - 1,53 (m, 6 H), 1,52 (s, 3H), 1,50 - 1,43 (m, 4H), 1,36 (s, 3H), 1,35 - 1,24 (m, 10H), 1,21 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,08 - 0,89 (m, 92H), 0,88 (s, 3H), 0,80 (s, 3H), 0,78 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 0,76 (s, 3H), 0,75 -0,56 (m, 60H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,88, 174,27, 168,33, 142,87, 138,82, 138,40, 138,26, 137,75, 137,70, 135,26, 128,48, 128,47, 128,43, 128,39, 128,38, 128,36, 128,31, 128,27, 128,25, 128,18, 128,15, 127,95, 127,93, 127,81, 127,78, 127,77, 127,72, 127,68, 127,64, 127,59, 127,56, 127,49, 122,20, 109,15, 103,63, 102,88, 101,40, 100,85, 99,05, 91,41, 86,48, 83,76, 81,20, 78,83, 78,73, 78,33, 78,29, 78,13, 77,99, 76,46, 76,19, 75,94, 75,82, 75,54, 75,08, 74,99, 74,47, 73,41, 73,14, 72,62, 72,53, 71,97, 71,58, 71,46, 71,39, 71,09, 6 8 ,8 6 , 6 6 ,8 6 , 65,34, 64,96, 63,68, 60,23, 53,85, 49,59, 49,58, 49,43, 46,43, 46,07, 42,86, 41,48, 40,17, 39,99, 39,54, 37,86, 36,09, 35,12, 34,56, 32,41, 31,46, 30,37, 29,73, 27,87, 26,40, 26,37, 26,34, 25,35, 24,25, 23,21, 21,48, 20,28, 17,78, 17,77, 17,39, 17,06, 15,77, 14,20, 13,13, 12,28, 12,17, 7,59, 7,49, 7,27, 7,25, 7,16, 7,14, 7,01, 6 ,8 8 , 6,81, 5,94, 5,66, 5,46, 5,39, 5,32, 5,28, 5,25, 5,04, 4,43; EMAR (ESI) m/z: calc. para C^^gsN0saSigNa [M+Na]+ 3327,8999, hallado 3327,9016.
Figure imgf000038_0001
Producción de variante de a-éster protegida S12
Se añadió cloroformiato de isobutilo (6,3 ^l, 0,048 mmol, 4 equiv.) a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (23 mg, 0,072 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (17 |al, 0,122 mmol, 10 equiv.) en tetrahidrofurano (3 ml) y se agitó durante 3 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S11 (36 mg, 0,012 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml). Después de 16 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar análogo de a-éster completamente protegido S12 (30 mg, 76% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,60 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%; 1H-RMN (600 MHz, CDCta-cf) 8 9,69 (s, 1H), 7,40 - 7,21 (m, 35H), 6,15 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,30 - 5,26 (m, 2H), 5,19 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,89 - 4,85 (m, 2H), 4,84 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,77 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,61 (d, 1H), 4,55 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,44 - 4,39 (m, 3H), 4,16 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 7,6, 5,5 Hz, 1H), 4,08 - 4,04 (m, 2H), 3,94 - 3,89 (m, 3H), 3,87 - 3,76 (m, 6 H), 3,74 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,67 - 3,62 (m, 1H), 3,62 - 3,51 (m, 6 H), 3,50 - 3,43 (m, 2H), 3,43 - 3,28 (m, 5H), 3,25 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,22 - 3,17 (m, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,89 (dd, J = 14,4, 4,4 Hz, 1H), 2,35 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,18 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,11 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 1,81 - 1,71 (m, 4H), 1,71 - 1,53 (m, 10H), 1,51 (s, 4H), 1,49 - 1,41 (m, 2H), 1,38 (s, 3H), 1,34 - 1,16 (m, 25H), 1,03 - 0,88 (m, 8 6 H), 0,87 (s, 3H), 0,79 - 0,78 (m, 3H), 0,75 (s, 3H), 0,74 - 0,55 (m, 55H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,77, 174,17, 173,72, 173,57, 168,34, 142,80, 138,80, 138,34, 138,26, 137,68, 137,58, 136,13, 135,25, 128,55, 128,50, 128,48, 128,43, 128,38, 128,35, 128,30, 128,27, 128,25, 128,25, 128,21, 128,18, 128,17, 128,15, 128,02, 127,93, 127,77, 127,72, 127,70, 127,57, 127,50, 122,23, 109,16, 103,62, 102,88, 101,39, 100,84, 99,01, 90,84, 86,44, 83,75, 81,03, 78,81, 78,72, 78,23, 78,18, 77,97, 76,45, 76,04, 75,93, 75,85, 75,82, 75,55, 75,07, 74,92, 74,40, 73,35, 73,15, 72,62, 72,53, 72,12, 71,39, 71,27, 71,08, 70,92, 68,93, 6 6 ,8 6 , 66,08, 65,34, 65,03, 63,69, 60,23, 53,83, 49,62, 49,40, 47,03, 46,38, 46,04, 41,47, 40,18, 39,52, 37,85, 36,99, 36,08, 35,09, 34,54, 34,35, 32,37, 32,32, 31,45, 30,33, 29,42, 29,38, 29,31, 29,27, 29,21, 29,18, 29,14, 27,85, 26,38, 26,33, 25,90, 25,33, 24,97, 24,21, 23,17, 20,24, 17,44, 17,00, 15,77, 12,27, 7,58, 7,48, 7,27, 7,22, 7,15, 7,14, 7,01, 6,87, 6,81, 5,94, 5,66, 5,46, 5,39, 5,32, 5,28, 5,24, 5,01, 4,43; EMAR (ESI) m/z: calc. para C^^gsN0saSigNa [M+Na]+ 3327,8999, hallado 3327,9016.
Figure imgf000039_0001
Producción de variante de a-éster 6 (SQS-0-0-8-5)
Se cargó una disolución de variante de a-éster completamente protegida S12 (9 mg, 0,003 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y etanol (2 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (13 mg, 0,011 mmol, 4 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (2,0 ml, TFNH203:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0 °C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 5:1) y se purificó mediante RP-HPLC en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 ^m, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 20^-75% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) a lo largo de 19 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 10,10 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar variante de a-éster 6 (SQS-0-0-8-5) (3,3 mg, 77% de rendimiento) como un sólido de color blanco esponjoso.1
1H-RMN (600 MHz, D20, CD3CN, 1:1) 89,29 (s, 1H), 5,97 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,26 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 4,72 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,39 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,97 (dd, J = 10,5, 4,6 Hz, 1H), 3,88 - 3,78 (m, 5H), 3,78 - 3,59 (m, 8 H), 3,59 - 3,51 (m, 2H), 3,50 - 3,33 (m, 9H), 3,33 - 3,21 (m, 6 H), 3,20 - 3,04 (m, 5H), 2,77 (dd, J = 14,1, 4,5 Hz, 1H), 2,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 2,18 - 2,00 (m, 4H), 1,88 - 1,76 (m, 4H), 1,71 - 1,57 (m, 5H), 1,55 - 1,41 (m, 8 H), 1,41 - 1,30 (m, 4H), 1,23 (s, 3H), 1,12 (d, J = 5,6 Hz, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 0,80 (s, 3H), 0,78 - 0,73 (m, 1H), 0,62 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H121N0s5Na [M+Na]+ 1630,7617, hallado 1630,7596.
EJEMPL07: SÍNTESIS DE VARIANTE DE a-AMIDA 7 (SQS-0-6-8-5)
Figure imgf000040_0001
Producción de amida primaria de prosapogenina protegida 14
Se añadió un gran exceso de amoniaco recién condensado (~1 ml, ~900 equiv.) en diclorometano (2 ml) a una disolución helada de 12 (110 mg, 0,525 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (5 ml). Después de 20 min, se calentó la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente permitiendo que se evaporara el amoniaco en exceso. Se diluyó la mezcla con agua y se separaron las fases. Después de la extracción con diclorometano (2 x 10 ml), se combinaron las fracciones orgánicas y se lavaron con salmuera, luego se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron y purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:Et0Ac trietilamina al 0,5% de 10:1 a 2:1) para proporcionar 14 (100 mg, 92% de rendimiento) como una espuma de color blanco.
CCF Rf 0,26 (hexanos/acetato de etilo 4:1); FTIR (NaCl, película) 3454, 2953, 2911, 2877, 1753, 1725, 1674, 1602, 1456, 1414, 1377, 1239, 1104, 1005, 913, 864, 826, 740 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,72 (s, 1H), 7,39 - 7,29 (m, 5H), 6,06 (s, 1H), 5,46 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,49 (s, 1H), 4,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,95 -3,90 (m, 2H), 3,88 - 3,82 (m, 2H), 3,82 - 3,77 (m, 2H), 3,75 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,62 - 3,53 (m, 3H), 3,48 (ddd, J = 10,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,39 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,35 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 3,25 (dd, J = 8,7, 7,4 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, J = 13,7, 4,2 Hz, 1H), 2,36 (t, J = 13,1 Hz, 1H), 2,03 (dt, J = 14,6, 4,0 Hz, 1H), 1,92 (dd, J = 8,9, 3,6 Hz, 2H), 1,90 - 1,42 (m, 12H), 1,32 (s, 3H), 1,30 - 1,25 (m, 2H), 1,19 - 0,84 (m, 96H), 0,79 (s, 3H), 0,78 - 0,55 (m, 53H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,78, 180,71, 168,38, 145,17, 135,29, 128,47, 128,27, 128,14, 122,50, 103,71, 101,41, 100,85, 86,45, 78,81, 78,73, 76,46, 75,95, 75,91, 75,83, 75,09, 72,62, 72,53, 71,38, 71,11, 66,85, 65,34, 60,25, 53,81, 49,39, 49,19, 47,24, 45,99, 42,27, 41,95, 39,56, 37,95, 36,05, 35,39, 34,67, 34,54, 34,19, 32,57, 31,98, 31,61, 31,27, 30,54, 29,07, 26,32, 25,38, 25,29, 24,22, 23,40, 22,68, 20,71, 20,21, 16,90, 15,86, 14,14, 12,26, 11,45, 7,57, 7,47, 7,25, 7,16, 7,15, 7,14, 6,99, 6,85, 6,79, 5,93, 5,65, 5,45, 5,38, 5,34, 5,27, 5,23, 5,18, 5,01,4,42; EMAR m/z (ESI): calc. para C10sH205N019SigNa [M+Na] 2095,2927, hallado 2095,3020.
Figure imgf000041_0001
Protección de azida de a-amida de prosapogenina protegida 19
Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (22 ^l, 0,13 mmol, 3,0 equiv.) a una disolución de trisacárido 17 (85 mg, 0,087 mmol, 2,00 equiv.), fenilsulfóxido (53 mg, 0,260 mmol, 6,0 equiv.) y 2,4,6-tri-terc-butilpiridina (65 mg, 0,261 mmol, 6,0 equiv.) en diclorometano (5 ml) a -78°C. Se agitó la reacción en un baño frío a -78°C durante 8 min y luego se transfirió a un baño de entre -55 y -50°C durante 65 min. Se añadió una disolución de amida 14 (90 mg, 0,043 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2 ml) mediante una jeringa. Se aumentó la temperatura del baño hasta -45°C durante 45 min, luego hasta 0°C durante 15 min. Se añadió trietilamina, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1 %], de 10:1 a 2:1) proporcionando disacáridos fácilmente separables a-19 (80 mg) y p-19 (13 mg) como una película de color blanco escamosa (6,1:1, a:p, 71% en total).
CCF Rf 0,64 (hexanos/acetato de etilo 2:1); FTIR (NaCl, película) 3420, 2953, 2911, 2876, 2105, 1751, 1675, 1496, 1457, 1413, 1375, 1240, 1160, 1098, 1005, 898, 865, 825, 732, 697 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,71 (s, 1H), 7,98 - 7,92 (m, 1H), 7,59 - 7,54 (m, 1H), 7,53 - 7,48 (m, 1H), 7,42 - 7,26 (m, 27H), 6,64 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,43 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,89 - 4,81 (m, 4H), 4,73 (dd, J = 11,5, 3,0 Hz, 2H), 4,68 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 11,5, 5,3 Hz, 2H), 4,56 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,48 (s, 1H), 4,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,21 - 4,15 (m, 2H), 4,09 (dd, J = 7,1, 4,7 Hz, 1H), 4,00 (dd, J = 3,0, 1,5 Hz, 1H), 3,96 - 3,90 (m, 3H), 3,88 - 3,70 (m, 8 H), 3,67 - 3,51 (m, 8 H), 3,51 - 3,45 (m, 2H), 3,39 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,38 - 3,29 (m, 3H), 3,25 (dd, J = 8 ,6 , 7,4 Hz, 1H), 3,22 - 3,16 (m, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,62 (dd, J = 13,4, 4,2 Hz, 1H), 2,33 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 1,98 - 1,63 (m, 7H), 1,62 - 1,45 (m, 5H), 1,44 (s, 3H), 1,43 - 1,30 (m, 10H), 1,29 (s, 3H), 1,28 - 1,17 (m, 3H), 1,12-1,03 (m, 4H), 0,89 (s, 81H), 0,84 (s, 3H), 0,81 - 0,56 (m, 51H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,68, 178,34, 168,32, 144,58, 141,57, 138,70, 138,57, 138,19, 137,70, 137,13, 135,25, 133,16, 129,26, 128,52, 128,49, 128,46, 128,44, 128,38, 128,35, 128,31, 128,29, 128,27, 128,22, 128,14, 128,08, 128,05, 128,04, 127,99, 127,97, 127,95, 127,94, 127,91, 127,88, 127,86, 127,85, 127,81, 127,76, 127,65, 127,57, 122,60, 110,03, 103,64, 102,61, 101,39, 100,82, 97,64, 86,47, 83,82, 82,01, 81,63, 79,21, 78,99, 78,79, 78,71, 78,32, 77,92, 76,76, 76,64, 76,44, 76,15, 75,90, 75,80, 75,65, 75,06, 74,75, 73,97, 73,53, 73,25, 72,76, 72,60, 72,50, 72,06, 71,38, 71,08, 69,00, 67,78, 66,83, 65,32, 63,77, 60,24, 59,21, 53,84, 49,36, 49,20, 47,17, 46,06, 41,87, 41,25, 39,70, 37,98, 36,02, 35,39, 34.66, 34,52, 34,09, 32,56, 32,21, 31,59, 31,46, 30,52, 29,06, 27,32, 26,25, 25,39, 25,31, 25,27, 24,16, 23,39, 22.66, 20,70, 20,26, 18,77, 17,91, 17,22, 15,95, 14,14, 12,27, 11,45, 7,56, 7,46, 7,25, 7,17, 7,14, 7,13, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,37, 5,33, 5,25, 5,22, 4,95, 4,41; EMAR m/z (ESI): calc. para C163H266N4031NaSig 3050,7182, hallado 3050,7034.
Figure imgf000042_0001
Producción de amina de a-amida de prosapogenina protegida S13
Se burbujeó sulfuro de hidrógeno mediante una cánula a través de una disolución helada de azida a-19 (45 mg, 0,0148 mmol, equiv.) en piridina/trietilamina (3,5:1, 4,5 ml) en un vial cónico de 50 ml. Después de dos min, se retiraron la cánula y la aguja de ventilación, y se selló el septo con cinta de Teflon y Parafilm, luego se calentó hasta TA y se agitó durante la noche. Se eliminó el sulfuro de hidrógeno con una corriente de nitrógeno, luego se concentró la disolución de color naranja resultante y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1%], de 5:1 a 2:1) proporcionando amina S13 (36 mg, 81% de rendimiento).
CCF Rf 0,35 (benceno:acetato de etilo 5:1); FTIR (película de NaCl) 3393, 3031,2953, 2911,2876, 1752, 1724, 1676, 1497, 1457, 1414, 1380, 1240, 1169, 1097, 1006, 909, 864, 826, 737, 697, 6 6 6 , 602 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCls) 8 9,70 (s, 1H), 7,31 (s, 30H), 6,60 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,49 - 5,44 (m, 0H), 5,44 - 5,39 (m, 1H), 5,33 - 5,25 (m, 2H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,94 - 4,79 (m, 4H), 4,75 - 4,59 (m, 5H), 4,60 - 4,51 (m, 4H), 4,48 (s, 1H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,18 (dt, J = 7,6, 3,7 Hz, 2H), 4,10 (dd, J = 6,7, 3,7 Hz, 1H), 3,96 - 3,70 (m, 10H), 3,71 - 3,51 (m, 11H), 3,48 (td, J = 9,8, 9,3, 5,0 Hz, 1H), 3,44 - 3,27 (m, 5H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,19 (t, J = 10,3 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,62 (dd, J = 14,5, 3,9 Hz, 1H), 2,32 (t, J = 13,1 Hz, 1H), 1,99 - 1,92 (m, 1H), 1,92 - 1,85 (m, 1H), 1,83 - 1,74 (m, 2H), 1,73 - 1,47 (m, 7H), 1,40 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 1,37 (s, 6 H), 1,35 (s, 2H), 1,30 (s, 6 H), 1,29 (s, 6 H), 1,28 - 1,15 (m, 2H), 1,13 - 1,02 (m, 3H), 1,03 - 0,85 (m, 98H), 0,84 (s, 3H), 0,83 - 0,52 (m, 61H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,70, 178,33, 168,33, 144,82, 138,70, 138,55, 138,20, 138,08, 137,47, 135,24, 128,46, 128,43, 128,38, 128,31, 128,28, 128,13, 128,02, 127,96, 127,93, 127,80, 127,75, 127,70, 127,67, 127,58, 122,45, 109,77, 103,64, 102,58, 101,38, 100,82, 97,47, 86,42, 83,83, 82,56, 82,04, 79,38, 78,97, 78,79, 78,71, 78,15, 77,94, 76,59, 76,44, 76,21, 75,87, 75,80, 75,65, 75,07, 74,78, 74,46, 73,98, 73,39, 73,23, 72,60, 72,51, 71,38, 71,20, 71,08, 68,24, 68,10, 66,83, 65,32, 63,76, 60,25, 53,81, 49,31, 49,17, 48,77, 47,35, 45,93, 45,74, 41,88, 41,22, 39,73, 37,93, 36,00, 35,41, 33,97, 32,57, 32,06, 31,43, 30,50, 29,70, 27,46, 26,25, 25,57, 25,37, 24,34, 23,42, 20,22, 18,18, 17,16, 15,94, 12,27, 7,56, 7,46, 7,25, 7,17, 7,14, 7,13, 6,98, 6,85, 6,79, 5,92, 5,63, 5,44, 5,37, 5,33, 5,25, 5,22, 4,95, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H269N2031Si9 3002,7458 [M+H], hallado 3002,7354.
Figure imgf000043_0001
Producción de variante de a-amida protegida S14
Se añadió cloroformiato de isobutilo a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (21 mg, 0,064 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (15 ^l, 0,107 mmol, 10 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y se agitó durante 4 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S13 (32 mg, 0,011 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml). Después de 5 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar amida S14 (26 mg, 74% de rendimiento).
CCF Rf 0,62 (hexanos:acetato de etilo 2:1); FTIR (película de NaCl) 3610, 3584, 3032, 2954, 2878, 1745, 1725, 1680, 1549, 1499, 1457, 1415, 1381, 1242, 1168, 1099, 1009, 911, 865, 825, 733 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,71 (s, 1H), 7,43 - 7,20 (m, 35H), 6,54 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,32 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,12 - 5,06 (m, 3H), 4,90 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,88 - 4,80 (m, 6 H), 4,72 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,46 - 4,39 (m, 4H), 4,20 - 4,13 (m, 2H), 4,08 (dd, J = 6,5, 3,3 Hz, 1H), 3,95 - 3,88 (m, 4H), 3,87 - 3,69 (m, 8 H), 3,65 (dd, J = 9,1, 4,1 Hz, 1H), 3,63 - 3,52 (m, 7H), 3,51 - 3,45 (m, 3H), 3,43 - 3,31 (m, 5H), 3,31 - 3,27 (m, 1H), 3,25 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,22 - 3,16 (m, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 13,6, 4,4 Hz, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 3H), 2,14 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,98 - 1,85 (m, 3H), 1,85 - 1,75 (m, 3H), 1,74 - 1,50 (m, 14H), 1,49 (s, 4H), 1,42 - 1,33 (m, 6 H), 1,12 - 1,04 (m, 4H), 1,04 - 0,81 (m, 110H), 0,81 - 0,54 (m, 69H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,49, 178,25, 173,61, 172,87, 168,34, 145,03, 138,68, 138,57, 138,20, 137,81, 137,44, 136,11, 135,23, 128,65, 128,55, 128,51, 128,48, 128,44, 128,43, 128,40, 128,37, 128,35, 128,31, 128,28, 128,27, 128,23, 128,16, 128,15, 128,13, 128,09, 127,97, 127,94, 127,89, 127,85, 127,82, 127,80, 127,76, 127,73, 127,67, 127,65, 127,60, 127,58, 122,15, 109,74, 103,60, 102,51, 101,38, 100,83, 97,51, 86,38, 83,84, 82,08, 80,58, 78,79, 78,71, 78,02, 77,92, 76,68, 76.46, 76,43, 76,34, 75,87, 75,82, 75,79, 75,67, 75,06, 74,79, 74,74, 73,80, 73,48, 73,23, 72,59, 72,50, 71,38, 71,10, 71,05, 68,20, 67,65, 66,85, 66,05, 66,03, 65,33, 63,78, 60,25, 53,75, 49,23, 49,10, 47,39, 46,27, 45,87, 41,94, 41,05, 39,99,
Figure imgf000043_0003
39,81, 37,89, 37,01,
Figure imgf000043_0002
36,98, 36,62, 35,97, 35,39, 34,33, 34,31, 33,92, 33,17, 32,54, 31,98, 31,30, 30,47, 29,70, 29,54, 29,52, 29,48,
Figure imgf000043_0004
29,46, 29,43, 29,39, 29,38, 29,34, 29,28, 29,25, 29,22, 29,20, 29,16, 29,14, 29,11, 28,40, 27,53, 27,49, 26,26, 25,86, 25,80, 25,75, 25,66, 25,50, 25,31, 24,97, 24,94, 24,68, 24,38, 23.46, 23,35, 20,57, 20,20, 18,17, 17,19, 15,93, 14,41, 13,13, 12,16, 7,56, 7,46, 7,42, 7,26, 7,25, 7,22, 7,16, 7,14, 7,13, 7,10, 7,08, 7,06, 7,05, 6,98, 6,94, 6,90, 6 ,8 8 , 6,85, 6,78, 5,92, 5,63, 5,43, 5,36, 5,32, 5,25, 5,23, 5,18, 5,17, 4,95, 4,92, 4,43, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C1S2H294N2034NaSig [M+Na]+ 3326,9159, hallado 3326,9211.
Figure imgf000044_0001
Producción de variante de a-amida 7 (SQS-0-6-8-5)
Se cargó una disolución de variante de amida completamente protegida S14 (10,2 mg, 0,003 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y etanol (2 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (8 mg, 0,0042 mmol, 2,5 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (3,0 ml, TFNH20 3:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0°C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 5:1) y se purificó mediante RP-HμLC en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 |am, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 15^-46% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) en agua (TFA al 0,05%) hasta 14 min seguido de otro gradiente lineal de desde el 46% hasta el 90% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) en agua (TFA al 0,05%) hasta 16 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 14,72 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar variante de a-amida 7 (SQS-0-6-8-5) (2,5 mg, 50% de rendimiento) como un sólido de color blanco.1
1H-RMN (600 MHz, Me0D) 8 9,35 (s, 1H), 7,47 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,73 - 4,68 (m, 2H), 4,54 - 4,50 (m, 1H), 4,48 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,34 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 4,23 - 4,20 (dd, J = 8,3, 3,8 Hz 1H), 4,19 - 4,15 (m, 1H), 3,85 (s, 1H), 3,83 - 3,60 (m, 11H), 3,60 - 3,53 (m, 2H), 3,51 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,45 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 3,43 - 3,35 (m, 5H), 3,33 (s, 3H), 3,27 (dd, J = 12,2, 7,3 Hz, 1H), 3,10 (d, J = 15,3 Hz, 7H), 2,92 (dd, J = 14,2, 3,0 Hz, 0H), 2,25 - 2,12 (m, 5H), 1,90 - 1,73 (m, 5H), 1,71 - 1,58 (m, 4H), 1,58 - 1,52 (m, 3H), 1,52 - 1,46 (m, 3H), 1,44 - 1,37 (m, 2H), 1,27 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 1,06 - 0,94 (m, 4H), 0,92 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,79 (s, 3H), 0,72 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H122N20s4Na (M+Na)+ 1629,7777, hallado 1629,7731.
EJEMPL08 : SÍNTESIS DE VARIANTE DE p-ÉTER 8 (SQS-0-12-5-5)
Figure imgf000045_0001
Producción de alcohol neopentílico de prosapogenina protegida 15
Se añadió borohidruro de tetrabutilamonio sólido (32 mg, 0,124 mmol, 2 equiv.) a una disolución helada de cloruro de acilo 12 (130 mg, 0,062 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml) durante 4 h, luego se diluyó con una disolución saturada de bicarbonato de sodio (50 ml). Se extrajo la mezcla acuosa con diclorometano (3 x 25 ml), se combinaron las fracciones orgánicas, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 30:1 a 10:1) para dar alcohol neopentílico 15 como una espuma de color blanco (99 mg, 77%).
CCF Rf 0,38 (hexanos/acetato de etilo 4:1); FTIR (película de NaCl) 3538 (0H st), 2952, 2877, 1754, 1722, 1459, 1413, 1377, 1239, 1171, 1103, 1005, 908, 863, 825, 774, 728, 695 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,60 (s, 1H), 7,31 - 7,17 (m, 5H), 5,17 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,14 (t, J = 3,7 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,96 (t, J = 3,3 Hz, 1H), 3,82 (s, 1H), 3,80 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 3,77 - 3,66 (m, 4H), 3,63 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,52 - 3,42 (m, 3H), 3,36 (ddd, J = 10,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,28 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,26 - 3,18 (m, 3H), 3,13 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,01 (dt, J = 10,9, 5,4 Hz, 2H), 2,08 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 1,87 (dd, J = 13,9, 4,3 Hz, 1H), 1,80 - 1,50 (m, 9H), 1,50 - 1,28 (m, 5H), 1,26 (s, 4H), 1,19 (s, 3H), 1,16 - 0,93 (m, 5H), 0,92 - 0,71 (m, 100H), 0,71 - 0,38 (m, 58H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,67, 168,37, 143,98, 135,27, 128,47, 128,45, 128,28, 128,14, 121,89, 103,62, 101,40, 100,84, 86,32, 78,81, 78,73, 76,45, 75,96, 75,82, 75,08, 74,40, 72,62, 72,53, 71,39, 71,31, 71,09, 66,84, 65,34, 60,26, 53,89, 49,42, 47,44, 46,13, 42,10, 41,58, 40,33, 39,90, 38,02, 36,03, 35,96, 33,34, 32,85, 32,19, 30,78, 29,60, 26,76, 25,39, 24,37, 23,39, 20,27, 16,83, 15,95, 12,24, 7,57, 7,50, 7,48, 7,26, 7,21, 7,17, 7,15, 7,08, 7,02, 7,00, 6,96, 6 ,86 , 6,80, 5,93, 5,66, 5,46, 5,42, 5,38, 5,35, 5,32, 5,30, 5,27, 5,24, 5,21, 5,07, 4,43; EMAR (ESI) m/z: calc. para C10sH206019NaSig [M+Na]+ 2082,2975, hallado 2082,2942.
Figure imgf000046_0001
Producción de azida de B-éter de prosapogenina protegida 21
A una suspensión de aceptor de alcohol primario 15 (58 mg, 0,0280mmol, 1,0 equiv.), donante de bromuro 20 (29 mg, 0,0280 mmol, 1,0 equiv.), 2,4,5-tri-terc-butilpiridina (20,8 mg, 0,084 mmol, 3,0 equiv.) y -25 mg de TM de 4 Á en 1 ml diclorometano, enfriada hasta -40°C, se le añadió Ag0Tf sólido (15 mg, 0,058 mmol, 2,1 equiv.). Después de 45 min, se calentó la reacción hasta 0°C, se agitó durante 15 min, luego se diluyó con 5 ml de diclorometano. Se sonicó la suspensión en bruto durante dos min, se filtró a través de un lecho de Celite, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 15:1 a 4:1) para dar B-glicósido 21 (58 mg, 0,0192 mmol, 69% de rendimiento).
CCF Rf 0,45 (hexanos:acetato de etilo, 5:1); FTIR (película de NaCl) 2953, 2911, 2876, 2106, 1753, 1725, 1456, 1413, 1379, 1240, 1170, 1097, 1006, 910, 863, 825, 800, 735 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,69 (s, 1H), 7,42 - 7,16 (m, 30H), 5,37 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,15 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,89 - 4,80 (m, 4H), 4,72 - 4,66 (m, 2H), 4,64 - 4,60 (m, 2H), 4,57 - 4,51 (m, 4H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,11 (m, 2H), 4,09 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,00 - 3,97 (m, 2H), 3,97 - 3,89 (m, 4H), 3,87 - 3,72 (m, 8 H), 3,64 - 3,53 (m, 10H), 3,52 - 3,45 (m, 2H), 3,39 (dd, J = 9,5, 2,5 Hz, 1H), 3,37 - 3,27 (m, 4H), 3,27 - 3,16 (m, 4H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,17 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 1,98 (dd, J = 14,1, 4,5 Hz, 1H), 1,85 - 1,75 (m, 3H), 1,75 - 1,60 (m, 6 H), 1,45 (s, 3H), 1,43 - 1,32 (m, 8 H), 1,30 (s, 4H), 1,28 (s, 3H), 1,26 - 1,24 (m, 1H), 1,22 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,19 - 1,03 (m, 4H), 1,02 - 0,88 (m, 102H), 0,88 - 0,81 (m, 11H), 0,81 - 0,52 (m, 6 6 H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,35, 168,38, 144,17, 138,79, 138,60, 138,22, 137,52, 137,08, 135,24, 128,53, 128,52, 128.49, 128,45, 128,44, 128,41, 128,37, 128,32, 128,30, 128,27, 128,26, 128,24, 128,21, 128,14, 128,12, 128,08, 128,04, 128,01, 128,00, 127,99, 127,91, 127,90, 127,86, 127,82, 127,80, 127,76, 127,75, 127,72, 127,65, 127,51, 127.49, 121,68, 109,17, 103,48, 102,78, 102,07, 101,37, 100,83, 97,66, 86,06, 83,81, 82,06, 80,79, 78,78, 78,71, 78,25, 78,11, 78,01, 77,47, 76,42, 76,00, 75,81, 75,53, 75,49, 75,06, 74,69, 74,61, 74,36, 73,72, 73,18, 72,59, 72,51, 72,09, 71,38, 71,28, 71,06, 68,26, 66,83, 65,72, 65,33, 63,75, 60,25, 58,96, 53,90, 49,29, 47,41, 46,05, 41,98, 41,37, 39,90, 39,50, 37,96, 37,67, 35,99, 33,03, 32,85, 32,06, 31,59, 30,86, 30,79, 30,77, 30,31, 30,27, 29,70, 29,05, 27,78, 27,73, 26,63, 26,52, 26,41, 26,33, 26,27, 25,32, 25,27, 24,48, 23,36, 22,66, 20,21, 18,16, 18,13, 17,45, 16,85, 15,94, 14,14, 12,17, 11,45, 7,56, 7,48, 7,46, 7,25, 7,22, 7,20, 7,17, 7,13, 7,07, 7,00, 6,98, 6,95, 6,94, 6,91, 6,85, 6,79, 6,78, 5,91, 5,64, 5,44, 5,40, 5,36, 5,34, 5,30, 5,29, 5,27, 5,25, 5,23, 4,90, 4,41, 4,40; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H267Ns031Si9Na [M+Na] 3037,7230, hallado 3037,7188.
Figure imgf000047_0001
Producción de amina de B-éter de prosapogenina protegida S15
Se burbujeó sulfuro de hidrógeno mediante una cánula a través de una disolución helada de azida 21 (45 mg, 0,015 mmol, 1 equiv.) en piridina/trietilamina (3,5:1, 4,5 ml) durante dos min. Se retiraron la cánula y la aguja de ventilación, se selló el septo con cinta de Teflon y Parafilm, luego se calentó hasta TA y se agitó durante la noche. Se eliminó el sulfuro de hidrógeno con una corriente de nitrógeno. Se concentró la disolución de color naranja resultante y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1%], de 5:1 a 2:1) proporcionando amina S15 (40 mg, 88 % de rendimiento).
CCF Rf 0,41 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (película de NaCl) 3608, 3583, 3028, 2954, 2910, 2876, 1753, 1725, 1631, 1497, 1454, 1413, 1380, 1240, 1168, 1095, 1006, 900, 862, 825, 799, 730, 695, 665 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls-d) 8 9,70 (s, 1H), 7,38 - 7,22 (m, 31H), 5,40 (s, 1H), 5,29 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,89 - 4,81 (m, 3H), 4,71 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,65 - 4,62 (m, 2H), 4,61 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,58 - 4,55 (m, 3H), 4,49 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,19 - 4,13 (m, 3H), 4,03 - 3,98 (m, 1H), 3,98 - 3,90 (m, 3H), 3,91 - 3,69 (m, 7H), 3,68 - 3,53 (m, 9H), 3,48 (ddd, J = 10,5, 8,5, 5,1 Hz, 1H), 3,42 - 3,19 (m, 10H), 3,14 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,19 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 2,02 (dd, J = 14,0, 4,2 Hz, 1H), 1,86 - 1,50 (m, 13H), 1,47 (s, 3H), 1,35 (s, 6 H), 1,31 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,23 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,20 - 1,12 (m, 3H), 1,11 - 1,05 (m, 2H), 1,04 - 0,90 (m, 89H), 0,89 - 0,82 (m, 10H), 0,81 - 0,55 (m, 56H).13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,40, 168,40, 144,16, 138.82, 138,60, 138,25, 138,00, 137,61, 135,27, 128,51, 128,49, 128,47, 128,44, 128,31, 128,29, 128,25, 128,15, 128,09, 127,92, 127,90, 127,81, 127,79, 127,77, 127,76, 127,55, 127,52, 121,77, 109,16, 103,50, 102,96, 102,10, 101,40, 100,86, 97,56, 86,07, 83,84, 82,12, 81,65, 78,82, 78,74, 78,27, 78,19, 78,04, 76,45, 76,04, 75,84, 75,67, 75,56, 75,09, 74,77, 74,53, 73,61, 73,28, 73,22, 72,62, 72,54, 71,42, 71,20, 71,09, 69,16, 6 6 ,8 6 , 65,56, 65,36, 63,79, 60,29, 53,94, 49,35, 48,97, 47,44, 46,09, 42,01, 41,42, 39,96, 39,59, 38,01, 36,08, 36,02, 33,08, 32,89, 32.11.30.82, 30,32, 27,80, 26,67, 26,36, 25,35, 24,53, 23,39, 20,24, 18,19, 16,96, 15,97, 12,19, 7,59, 7,49, 7,28, 7,26, 7,24, 7,20, 7,16, 7,03, 7,01, 6 ,8 8 , 6,82, 5,94, 5,67, 5,47, 5,39, 5,37, 5,31, 5,28, 5,26, 4,95, 4,45; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H27qN031SÍ9 [M+H]+ 2989,7505, hallado 2989,7542.
Figure imgf000048_0001
Producción de variante de B-éter protegida S16
Se añadió cloroformiato de isobutilo (7,0 ^l, 0,053 mmol, 4 equiv.) a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (26 mg, 0,081 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (37 |al, 0,268 mmol, 20 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y se agitó durante 2 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S15 (40 mg, 0,0134 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1,5 ml). Después de 4 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1:1) para dar análogo de glicosil éter completamente protegido S16 (25 mg, 57% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf 0,24 (hexanos:acetato de etilo, 4:1); 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,70 (s, 1H), 7,40 - 7,16 (m, 35H), 5,52 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,15 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,13 - 5,07 (m, 3H), 4,92 -4,78 (m, 5H), 4,76 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,63 (t, J = 10,9 Hz, 2H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,55 - 4,47 (m, 2H), 4,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,21 - 4,14 (m, 3H), 4,12 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 3,99 (s, 1H), 3,97 - 3,90 (m, 3H), 3,89 - 3,71 (m, 6 H), 3,65 - 3,42 (m, 13H), 3,40 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,38 - 3,17 (m, 7H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,35 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,24 - 2,14 (m, 3H), 2,02 (dd, J = 14,0, 4,3 Hz, 1H), 1,86 - 1,75 (m, 3H), 1,75 - 1,49 (m, 15H), 1,44 - 1,05 (m, 33H), 1,04 - 0,82 (m, 104H), 0,82 -0,50 (m, 60H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,46, 173,70, 173,26, 168,40, 144,02, 138,82, 138,57, 138,24, 137,73, 137,59, 136,13, 135,27, 128,55, 128,47, 128,43, 128,35, 128,31, 128,29, 128,28, 128,21, 128,18, 128,17, 128,14, 128,09, 127,91, 127,86, 127,83, 127,79, 127,77, 127,74, 127,69, 127,61, 127,52, 121,90, 109,20, 103,53, 103,16, 102,13, 101,40, 100,86, 97,60, 86,15, 83,84, 82,15, 79,25, 78,82, 78,73, 78,30, 78,15, 78,13, 78,03, 76,45, 76,01, 75,85, 75,83, 75,76, 75,57, 75,12, 75,09, 74,82, 74,51, 73,72, 73,23, 72,70, 72,62, 72,54, 71,41, 71,09, 71,00, 6 8 ,8 6 , 6 6 ,8 6 , 66,08, 65,74, 65,36, 63,80, 60,28, 53,90, 49,32, 47,35, 46,18, 46,06, 41,92, 41,41, 39,94, 39,66, 38,00, 36,98, 36,08, 36,00, 34,35, 33,08, 32,86, 32,09, 30,81, 30,36, 29,73, 29,46, 29,41, 29,38, 29,28, 29,25, 29,16, 27,73, 26,66, 26,23, 25,90, 25,34, 24,98, 24,47, 23,39, 20,23, 18,07, 17,00, 15,96, 12,20, 7,59, 7,51,7,49, 7,32, 7,28, 7,25, 7,23, 7,20, 7,16, 7,09, 7,05, 7,03, 7,01, 6,97, 6,92, 6 ,8 8 , 6,82, 5,94, 5,67, 5,59, 5,56, 5,46, 5,43, 5,39, 5,37, 5,33, 5,30, 5,28, 5,26, 5,19, 5,17, 5,14, 5,08, 4,99, 4,95, 4,44; EMAR (ESI) m/z: calc. para C1S2H295N3034SigNa [M+Na]+ 3133,9207, hallado 3133,9258.
Figure imgf000049_0001
Producción de variante de B-éter 8 (SQS-0-12-5-5)
Se cargó una disolución de variante de éter completamente protegida S16 (25 mg, 0,008 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y etanol (2 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (25 mg, 0,023 mmol, 3 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (3,0 ml, TFNH203:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0 °C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 4:1) y se purificó mediante RP-HPLC en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 ^m, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 20^-66% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) en agua (TFA al 0,05%) durante 16 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 12,55 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar variante de B-éter 8 (SQS-0-12-5-5) (7,5 mg, 6 2 % de rendimiento) como un sólido de color blanco.1
1H-RMN (600 MHz, D20/CD3CN, 1:1) 8 9,97 (s, 1H), 7,73 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 5,82 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,51 - 4,43 (m, 4H), 4,43 - 4,33 (m, 5H), 4,30 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 4,25 - 4,18 (m, 2H), 4,17 - 4,00 (m, 9H), 3,93 (p, J = 8,9, 8,5 Hz, 6 H), 3,86 - 3,77 (m, 4H), 3,78 - 3,72 (m, 1H), 2,90-2,77 (m, J = 7,5 Hz, 5H), 2,75 - 2,65 (m, 2H), 2,48 - 2,41 (m, 3H), 2,41 - 2,01 (m, 17H), 1,90 (s, 3H), 1,83 (d, J = 6,3 Hz, 5H), 1,74 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 1,69 (s, 3H), 1,64 (t, J = 12,9 Hz, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,46 (s, 3H), 2,83 -2,77 (m, 1H), 1,43 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H12sN0s4Na [M+Na]+ 1616,7824, hallado 1616,7848.
EJEMPL09: SÍNTESIS DE VARIANTE DE p-TI0ÉTER 9 (SQS-0-14-5-5)
Figure imgf000050_0001
Producción de tioacetato de neopentilo de prosapogenina protegida S17
Se añadió anhídrido tríflico (12,6 |al, 0,075 mmol, 1,5 equiv.) a una disolución helada de alcohol neopentílico 15 (103 mg, 0,05 mmol, 1 equiv.) y piridina (80 |al, 1,0 mmol, 20 equiv.) y diclorometano (4 ml). Después de 15 min, se eliminó el diclorometano con una corriente de argón. Se eliminaron los compuestos volátiles residuales a presión reducida. Se llevó el aceite resultante a tetrahidrofurano (2 ml), se enfrió hasta 0°C, luego se trató con TM de 4 Á (~100 mg) y dimetilformamida (2 ml). Se trató la suspensión con tioacetato de potasio (57 mg, 0,5 mmol, 10 equiv.). Después de 2,5 h, se decantó la suspensión en una disolución saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3 * 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo, de 50:1 a 25:1) para dar tioacetato S17 (98 mg, 92%).
CCF Rf 0,60 (hexanos/acetato de etilo 10:1); FTIR (película de NaCl) 2953, 2911, 2876, 1754, 1723, 1700, 1696,
1653, 1635, 1576, 1560, 1539, 1457, 1414, 1375, 1239, 1171, 1103, 1005, 970, 898, 864, 826, 799, 736, 695,
6 6 8 , 628 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,65 (s, 1H), 7,31 - 7,22 (m, 5H), 5,25 - 5,19 (m, 2H), 5,02 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,88 - 3,81 (m, 3H), 3,81 - 3,70 (m, 4H), 3,68 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 3,56 - 3,47 (m, 3H), 3,41 (ddd, J = 10,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,32 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,30 - 3,24 (m, 2H), 3,18 (dd, J = 8,7, 7,4 Hz, 1H), 3,06 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,86 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 2,57 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,16 (dd, J = 13,9, 12,4 Hz, 1H), 2,07 (dd, J = 14,0, 4,0 Hz, 1H), 1,88 - 1,51 (m, 10H), 1,49 - 1,44 (m, 2H), 1,43 - 1,30 (m, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,16 - 1,10 (m, 2H), 1,07 - 0,99 (m, 2H), 0,97 - 0,81 (m, 93H), 0,79 (s, 3H), 0,75 - 0,47 (m, 56H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,83, 195,72, 168,36, 143,29, 135,26, 128,48, 128,46, 128,30, 128,15, 128,11, 122,68, 103,65, 101,42,
100,84, 86,43, 78,82, 78,73, 76,45, 76,30, 75,95, 75,83, 75,81, 75,09, 72,62, 72,53, 71,38, 71,08, 66,85, 65,34,
60,22, 53,89, 49,43, 47,57, 46,13, 45,72, 41,44, 41,02, 39,89, 38,86, 38,02, 36,34, 36,03, 33,41, 32,80, 32,13, 31,71, 30,83, 30,81, 26,82, 25,40, 24,29, 23,48, 20,24, 16,73, 15,94, 12,30, 7,58, 7,48, 7,27, 7,18, 7,17, 7,15, 7,00, 6,87, 6,81, 6,80, 5,93, 5,66, 5,46, 5,38, 5,36, 5,29, 5,27, 5,24, 5,01, 4,43; EMAR (ESI) m/z: calc. para C110H20s019SSigNa [M+Na]+ 2140,2883, hallado 2140,2852.
Figure imgf000051_0001
Producción de neopentiltiol de prosapogenina protegida 16
Se añadió hidrazina (10 |al, 0,323 mmol, 7 equiv.) a una disolución de tioacetato S17 (98 mg, 0,046 mmol, 1 equiv.) y ditiotreitol (21 mg, 0,139 mmol, 3 equiv.) en tetrahidrofurano/dimetilformamida (4 ml, 1:1) durante 6 h, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo) para dar tiol 16 como una película incolora (86 mg, 90%).
CCF Rf 0,71 (hexanos/acetato de etilo 10:1); FTIR (película de NaCl) 2953, 2911, 2877, 1756, 1726, 1653, 1458, 1414, 1375, 1240, 1172, 1104, 1006, 971, 899, 865, 827, 801, 739, 695, 679, 6 6 8 ; 1H-RMN (600 MHz, CDCls) 8 9,72 (s, 1H), 7,34 (m, 5H), 5,29 - 5,25 (m, 2H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,09 (m, 1H), 3,94 - 3,89 (m, 2H), 3,88 - 3,77 (m, 4H), 3,75 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 3,63 - 3,54 (m, 3H), 3,51 - 3,45 (m, 1H), 3,39 (dd, J = 9,3, 2,5 Hz, 1H), 3,37 - 3,32 (m, 2H), 3,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,38 - 2,31 (m, 1H), 2,31 - 2,22 (m, 2H), 2,15 (dd, J = 14,0, 4,1 Hz, 1H), 1,87 (dt, J = 11,1, 4,1 Hz, 2H), 1,82 - 1,73 (m, 2H), 1,72 - 1,38 (m, 10H), 1,37 (s, 3H), 1,31 (s, 2H), 1,25 (s, 1H), 1,23 - 1,15 (m, 2H), 1,16 - 1,05 (m, 3H), 1,04 - 0,89 (m, 92H), 0,87 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,81 - 0,55 (m, 57H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,71, 168,34, 143,60, 135,25, 128,50, 128,46, 128,44, 128,27, 128,15, 128,13, 128,09, 122,34, 103,63, 101,40, 100,83, 78,80, 78,72, 76,44, 75,94, 75,81, 75,71, 75,08, 72,61, 72,51, 71,38, 71,08, 66,83, 65,33, 60,23, 41,39, 39,82, 38,41, 37,99, 36,71, 36,43, 36,42, 36,01, 33,12, 32,84, 32,09, 30,96, 30,84, 26,76, 25,38, 24,23, 23,43, 20,23, 16,71, 15,92, 12,25, 7,57, 7,49, 7,47, 7,25, 7,19, 7,15, 7,14, 7,01,6,99, 6,85, 6,79, 6,78, 5,92, 5,65, 5,45, 5,41, 5,37, 5,35, 5,30, 5,28, 5,26, 5,23, 5,04, 4,42, 4,40; EMAR (ESI) m/z: calc. para C108H20601sNaSigS [M+Na]+ 2098,2746, hallado 2098,2778.
Figure imgf000051_0002
Producción de azida de B-tioéter de prosapogenina protegida 22
Se añadió gota a gota una disolución de bromuro 20 (32 mg, 0,031 mmol, 1,5 equiv.) en tetrahidrofurano (1,5 ml) a una suspensión de tiol 16 (43 mg, 0,021 mmol, 1,0 equiv.) e hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral, 2,5 mg, 0,062, 3,0 equiv.) en tetrahidrofurano/dimetilformamida (2 ml, 1:1) a lo largo de cuatro min. Después de 20 min, se añadió una disolución saturada de cloruro de amonio, se diluyó con agua y se extrajo con (3 x 25 ml). Se lavaron los extractos combinados con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron. Antes de la carga en una columna de sílice, se añadió triflato de plata (2 mg) a la disolución en bruto en DCM para eliminar el bromuro de glicosilo en exceso. Se purificó la mezcla mediante cromatografía en gel de sílice (benceno:acetato de etilo, de 1:0 a 30:1) para dar glicosil tioéter 22 como una película incolora (43 mg, 69% de rendimiento). Nota: tiempos de reacción prolongados proporcionar menores rendimientos debido a la formación del glical de trisacárido a través de la eliminación fomentada por base del tiolato.
CCF Rf 0,52 (benceno:acetato de etilo, 20:1); FTIR (película de NaCl) 3032, 2953, 2912, 2876, 2107, 1752, 1724, 1701, 1497, 1457, 1413, 1380, 1240, 1169, 1094, 1006, 899, 864, 826, 736, 697, 6 6 8 , 610 cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCb-d) 8 9,69 (s, 1H), 7,40 - 7,24 (m, 30H), 5,53 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,19 (t, J = 3,7 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,87 - 4,79 (m, 2H), 4,72 (t, J = 11,1 Hz, 2H), 4,64 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,57 - 4,52 (m, 4H), 4,42 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,20 - 4,16 (m, 2H), 4,14 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,08 - 4,01 (m, 2H), 4,00 -3,97 (m, 1H), 3,96 - 3,73 (m, 9H), 3,64 - 3,52 (m, 9H), 3,48 (ddd, J = 10,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 3,39 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,37 - 3,32 (m, 2H), 3,30 (dd, J = 8,9, 7,5 Hz, 1H), 3,25 (dd, J = 8,7, 7,4 Hz, 1H), 3,22 - 3,16 (m, 1H), 3,13 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,49 - 2,37 (m, 2H), 2,21 - 2,05 (m, 2H), 1,84 - 1,73 (m, 3H), 1,55 - 1,46 (m, 7H), 1,39 -1,22 (m, 16H), 1,11 - 0,83 (m, 99H), 0,83 - 0,50 (m, 63H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8 212,40, 168,35, 143,40, 138,78, 138,60, 138,23, 137,48, 137,46, 136,69, 135,23, 128,55, 128,51, 128,46, 128,44, 128,41, 128,32, 128,29, 128,27, 128,26, 128,24, 128,20, 128,18, 128,13, 128,12, 128,09, 128,02, 127,93, 127,91, 127,87, 127,76, 127,75, 127,54, 127,51, 127,49, 122,30, 108,91, 103,49, 102,27, 102,24, 101,37, 100,83, 98,65, 86,14, 84,66, 83,87, 83,20, 82,12, 78,78, 78,70, 78,25, 78,07, 77,99, 77,98, 76,42, 76,32, 76,10, 75,96, 75,80, 75,58, 75,43, 75,05, 74,81, 74,03, 73,75, 73,73, 73,19, 72,59, 72,51, 71,58, 71,38, 71,05, 68,23, 66,84, 65,44, 65,32, 63,80, 60,25, 58,59, 53,87, 49,24, 47,56, 46,05, 45,40, 45,35, 42,86, 41,53, 41,27, 41,20, 39,78, 39,54, 39,02, 39,01, 38,70, 37,94, 36,40, 36,38, 35,98, 35,95, 34,00, 33,03, 32,77, 32,04, 31,93, 31,65, 30,74, 30,73, 30,38, 29,73, 29,70, 28,91, 27,77, 26,76, 26,73, 26,61, 26,40, 25,31, 24,47, 24,35, 24,34, 23,76, 23,72, 23,35, 22,99, 22,97, 22,70, 20,22, 17,56, 17,54, 16,81, 16,09, 15,88, 14,14, 14,07, 14,06, 13,15, 12,19, 10,98, 10,96, 7,56, 7,46, 7,25, 7,19, 7,16, 7,13, 6,98, 6,85, 6,79, 6,78, 5,91, 5,64, 5,43, 5,36, 5,33, 5,27, 5,25, 5,22, 4,94, 4,41; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H267N3030NaSigS 3053,7001 [M+Na]+, hallado 3053,7014.
Figure imgf000052_0001
Producción de amina de B-tioéter de prosapogenina protegida S18
Se burbujeó sulfuro de hidrógeno mediante una cánula a través de una disolución helada de azida 22 (41 mg, 0,014 mmol, 1,0 equiv.) en piridina/trietilamina (3,5:1,4,5 ml) durante dos min. Se retiraron la cánula y la aguja de ventilación, y se selló el septo con cinta de Teflon y Parafilm, luego se calentó hasta TA y se agitó durante la noche. Se eliminó el sulfuro de hidrógeno con una corriente de nitrógeno, luego se concentró la disolución de color naranja resultante y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:[acetato de etilo trietilamina al 1%], de 5:1 a 2:1) proporcionando amina S18 (38 mg, 94% de rendimiento).
CCF Rf 0,47 (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (película de NaCl) 3608, 2953, 2911, 2876, 1754, 1725, 1692, 1530, 1497, 1454, 1413, 1380, 1240, 1094, 1005, 825, 734, 696 cm-1; 1H-RMN (500 MHz, CDCls) 89,68 (s, 1H), 7,42 - 7,27 (m, 32H), 5,55 (s, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,23 - 5,17 (m, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,94 - 4,89 (m, 2H), 4,88 - 4,79 (m, 2H), 4,71 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,68 - 4,52 (m, 7H), 4,49 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,23 - 4,16 (m, 3H), 4,12 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,11 - 4,04 (m, 1H), 4,02 - 3,98 (m, 1H), 3,98 - 3,91 (m, 3H), 3,90 - 3,73 (m, 6 H), 3,73 - 3,66 (m, 1H), 3,67 - 3,54 (m, 9H), 3,53 -3,44 (m, 2H), 3,42 - 3,29 (m, 5H), 3,26 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,22 - 3,18 (m, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,52 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 2,43 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,23 - 2,07 (m, 2H), 1,84 - 1,76 (m, 3H), 1,76 - 1,65 (m, 3H), 1,63 -1,53 (m, 4H), 1,39 - 1,24 (m, 17H), 1,17-1,07 (m, 2H), 1,08 - 0,88 (m, 100H), 0,87 (s, 4H), 0,81 (s, 4H), 0,80 (s, 3H), 0,77 - 0,52 (m, 61H); 13C-RMN (151 MHz, CDCls) 8212,39, 168,36, 143,46, 138,81, 138,78, 138,57, 138,24, 137,97, 137,18, 135,23, 128,49, 128,46, 128,44, 128,42, 128,41, 128,37, 128,33, 128,28, 128,25, 128,13, 128,09, 128,00, 127,96, 127,93, 127,91, 127,87, 127,85, 127,83, 127,78, 127,75, 127,70, 127,66, 127,57, 127,52, 127,50, 122,28, 108,89, 103,50, 102,32, 102,29, 101,36, 100,83, 98,44, 86,11, 84,76, 83,97, 83,89, 82,18, 78,78, 78,71, 78.25, 78,10, 78,00, 77,98, 77,92, 76,54, 76,43, 76,40, 76,24, 75,97, 75,80, 75,60, 75,05, 74,86, 73,93, 73,65, 73,63, 73,20, 73,17, 72,59, 72,51, 71,39, 71,06, 70,64, 69,42, 66,84, 66,81, 65,34, 65,32, 63,81, 60,27, 53,87, 49.26, 49,02, 47,52, 46,03, 45,36, 42,86, 41,71, 41,31, 41,29, 41,22, 39,80, 39,56, 39,09, 39,03, 37,95, 36,61, 36,40, 36,37, 35,98, 35,96, 35,95, 33,07, 32,78, 32,01, 31,93, 31,71, 30,78, 30,75, 29,70, 29,66, 29,37, 28,40, 27,81, 27,78, 26,73, 26,71, 26,61, 26,42, 26,35, 25,31, 24,68, 24,40, 24,37, 23,34, 22,70, 22,39, 20,20, 17,56, 17,07, 16,92, 16,91, 16,09, 15,90, 15,88, 14,14, 13,13, 12,16, 7,56, 7,48, 7,46, 7,25, 7,21,7,19, 7,17, 7,13, 7,00, 6,98, 6,95, 6,93, 6 ,88 , 6,85, 6,79, 6,78, 5,91, 5,75, 5,64, 5,44, 5,40, 5,36, 5,33, 5,28, 5,27, 5,25, 5,23, 4,96, 4,94, 4,41,4,40; EMAR (ESI) m/z: calc. para C163H270N030SigS 3005,7277 [M+H]+, hallado 3005,7317.
Figure imgf000053_0001
Producción de variante de B-tioéter protegida S19.
Se añadió cloroformiato de isobutilo (6,4 |al, 0,049 mmol, 4 equiv.) a una disolución helada de ácido carboxílico S2 (23,5 mg, 0,073 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (17 |al, 0,122 mmol, 10 equiv.) en tetrahidrofurano (3 ml) y se agitó durante 3 horas, luego se transfirió mediante una cánula a una disolución helada de amina S18 (37 mg, 0,012 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml). Después de 16 h, se diluyó la suspensión con bicarbonato de sodio saturado y luego se extrajo con acetato de etilo (3 * 25 ml). Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (hexanos:acetato de etilo trietilamina al 0,5%, de 10:1 a 1 :1 ) para dar glicosil tioéter S19 (27 mg, 67% de rendimiento) como una película incolora.
CCF Rf (hexanos:acetato de etilo, 2:1 trietilamina al 0,5%); FTIR (película de NaCl) 2952, 2876, 1752, 1741, 1732, 1886, 1681, 1497, 1455, 1380, 1240, 1100, 1006, 826, 734, 697cm-1; 1H-RMN (600 MHz, CDCb) 8 9,69 (s, 1H), 7,38 - 7,26 (m, 35H), 5,54 (s, 1H), 5,49 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,18 (s, 1H), 5,13 -5,06 (m, 3H), 4,94 - 4,80 (m, 5H), 4,76 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 13,9, 11,2 Hz, 2H), 4,56 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,52 - 4,47 (m, 2H), 4,44 - 4,39 (m, 2H), 4,23 (d, J = 8 ,6 Hz, 1H), 4,20 - 4,16 (m, 2H), 4,11 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,05 (dd, J = 10,1,6,1 Hz, 1H), 3,96 - 3,90 (m, 4H), 3,88 - 3,72 (m, 5H), 3,67 - 3,53 (m, 9H), 3,52 - 3,45 (m, 3H), 3,40 (dd, J = 9,4, 2,5 Hz, 1H), 3,31 (dd, J = 9,0, 7,5 Hz, 3H), 3,25 (dd, J = 8,7, 7,4 Hz, 1H), 3,20 (dd, J = 12,1, 10,2 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,56 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,39 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,35 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,15 (dtt, J = 18,0, 14,0, 8,5 Hz, 4H), 1,82 - 1,75 (m, 3H), 1,74 - 1,52 (m, 13H), 1,36 (s, 3H), 1,34 - 1,17 (m, 25H), 1,05 - 0,83 (m, 99H), 0,81 - 0,53 (m, 65H); 13C-RMN (151 MHz, CDCla) 8 212,41, 173,72, 173,38, 168,38, 143,46, 138,79, 138,58, 138,56, 138,26, 137,76, 137,19, 137,17, 136,14, 135,26, 128,74, 128,55, 128,53, 128,48, 128,46, 128,45, 128,43, 128,35, 128,32, 128,31, 128,29, 128,25, 128,18, 128,16, 128,15, 128,11, 127,96, 127,94, 127,83, 127,81, 127,79, 127,77, 127,74, 127,73, 127,70, 127,68, 127,63, 127,56, 127,53, 122,34, 108,90, 103,53, 102,44, 101,39, 100,86, 98,66, 86,14, 85,30, 83,91, 82,26, 81,10, 78,81, 78,73, 78,25, 78,18, 78,01, 77,46, 76,45, 76,30, 75,98, 75,84, 75,82, 75,63, 75,09, 74,91, 74,76, 73,73, 73,71, 73,22, 72,62, 72,54, 71,41, 71,09, 70,71, 69,10, 6 6 ,8 6 , 66,84, 66,07, 65,46, 65,35, 63,85, 60,29, 53,86, 49,25, 47,40, 46,47, 46,03, 45,22, 42,86, 42,37, 41,30, 41,22, 39,81, 39,58, 39,10, 37,96, 36,92, 36,40, 36,37, 36,09, 35,95, 34,68, 34,55, 34,36, 33,14, 32,78, 31,96, 31,83, 31,62, 30,78, 29,73, 29,51, 29,46, 29,42, 29,40, 29,37, 29,29, 29,24, 29,21, 29,16, 29,08, 27,83, 26,76, 26,64, 26,49, 26,45, 25,90, 25,34, 25,30, 24,99, 24,39, 23,37, 22,69, 20,73, 20,20, 18,79, 17,51, 17,48, 16,86, 16,12, 15,91, 14,17, 13,15, 12,20, 11,48, 7,59, 7,51, 7,49, 7,30, 7,28, 7,22, 7,20, 7,19, 7,16, 7,03, 7,01,6 ,88 , 6,82, 6,81, 5,94, 5,66, 5,46, 5,42, 5,39, 5,36, 5,34, 5,31, 5,30, 5,28, 5,25, 4,96, 4,44, 4,42; EMAR (ESI) m/z: calc. para C^^gaN0ssNaSigS 3329,8978 [M+Na]+, hallado 3329,9033.
Figure imgf000054_0001
Producción de variante de B-tioéter 9 (SQS-0-14-5-5)
Se cargó una disolución de análogo de tioéter completamente protegido (S19) (26 mg, 0,008 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml) y etanol (2 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml con paladio al 10% (base seca) sobre carbono, húmedo, Degussa tipo E101 NE/W (33 mg, 0,031 mmol, 4 equiv.). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (345 kPa (50 psi)) durante la noche, luego se filtró a través de un disco de filtro de poli(fluoruro de vinilideno) de 0,45 ^m, se lavó con metanol (5 ml) y se concentró. Al producto de hidrogenación se le añadió una disolución previamente enfriada (0°C) de ácido trifluoroacético (4,0 ml, TFNH20 3:1). Después de agitar vigorosamente durante 60 min, se concentró la disolución a vacío a 0°C para dar un residuo sólido de color blanco. Se disolvió parcialmente este producto en bruto en una disolución de acetonitrilo acuoso (agua:acetonitrilo 4:1) y se purificó mediante RP-HμLC en una columna XBridge Prep BEH300 C18 (5 |am, 10 x 250 mm) usando un gradiente lineal del 20^-75% de acetonitrilo (TFA al 0,05%) en agua (TFA al 0,05%) durante 19 min a una velocidad de flujo de 5 ml/min. Se recogió la fracción que contenía el pico principal (tR = 12,60 min) y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar variante de B-tioéter 9 (SQS-0-14-5-5) (5,8 mg, 46% de rendimiento) como un sólido de color blanco.1
1H-RMN (600 MHz, D20/CD3CN, 1:1) 8 9,99 (s, 1H), 7,64 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,89 (t, J = 3,7 Hz, 1H), 5,60 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,72 (dq, J = 9,7, 6,2 Hz, 1H), 4,58 - 4,54 (m, 1H), 4,52 - 4,50 (m, 1H), 4,50 - 4,45 (m, 1H), 4,42 - 4,29 (m, 7H), 4,25 - 4,21 (m, 2H), 4,16 - 4,05 (m, 8 H), 4,05 - 4,00 (m, 1H), 3,98 - 3,88 (m, 4H), 3,85 - 3,79 (m, 3H), 3,79 - 3,74 (m, 1H), 3,20 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 3,13 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 2,88 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,86 - 2,80 (m, 2H), 2,80 - 2,75 (m, 2H), 2,71 - 2,68 (m, 0H), 2,52 - 2,41 (m, 5H), 2,35 - 2,23 (m, 5H), 2,18 -2,06 (m, 7H), 1,94 (s, 3H), 1,84 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,77 - 1,73 (m, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,57 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,45 (s, 3H); EMAR (ESI) m/z: calc. para C76H123N03sNaS 1632,7596 [M+Na]+, hallado 1632,7648.
EJEMPL010: EVALUACIÓN DE VARIANTES DE TRITERPEN0-SAP0NINA
La figura 7 muestra la actividad de adyuvante de estas variantes de enlace en comparación con SQS-21 (QS-21 sintético, mezcla 2:1 de 1a/1b) y el compuesto inicial de p-glicosil éster parental 2 (SQS-0-0-5-5). En la actualidad no hay ningún método in vitro para medir la actividad de adyuvante, en parte debido a los mecanismos desconocidos y probablemente multivariantes de la acción de adyuvantes de saponina. Por tanto, se procedió directamente a someter a pruebas estas variantes de QS in vivo en un modelo de vacunación de ratón. Las cohortes de ratones se inmunizaron con la variante de saponina de interés (5 ó 20 |ig) y un cóctel de cuatro antígenos que comprende: (1) el péptido inmunogénico MUC1 (antígeno de cáncer de próstata y mama, repetición en tándem no glicosilada) conjugado con una proteína portadora altamente inmunogénica KLH (hemocianina de lapa ojo de cerradura; MUC1-KLH), (2) el gangliósido escasamente inmunogénico GD3 (antígeno de melanoma, neuroblastoma, sarcoma) conjugado con KLH (GD3-KLH) y (3) el antígeno proteico inmunogénico ovoalbúmina (0VA). Los títulos de anticuerpo provocados contra los cuatro antígenos se evaluaron mediante ELISA para comparar la actividad de adyuvante de cada análogo de QS.

Claims (5)

REIVINDICACI0NES
1. Compuesto seleccionado del grupo que consiste en
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000057_0001
2. Compuesto según la reivindicación 1, representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000057_0002
3. Compuesto según la reivindicación 1, representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000057_0003
4. Compuesto según la reivindicación 1, representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000058_0001
5. Compuesto según la reivindicación 1, representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000058_0002
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