ES2947618T3 - Derivados de 1-imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a derivados de 1-imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona, procesos para prepararlos, composiciones farmacéuticas que los contienen y su uso como productos farmacéuticos. (l) (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 1 -imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona

Introducción

La presente invención se refiere a derivados de 1 -imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona, procedimientos para prepararlos, composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso como productos farmacéuticos.

Se sabe por la bibliografía (Kaminski et al. en Neuropharmacology, 54, (2008) 715) que existe una correlación funcional entre la afinidad de unión a SV2A y la potencia anticonvulsiva y que la proteína SV2A parece ejercer un papel en la fisiopatología de la epilepsia (Loscher et al. en CNS drugs, octubre de 2016).

Se han descrito varios ligandos de SV2A en el estado de la técnica, incluidos los que se describen a continuación en las solicitudes de patente en tramitación junto con la presente de los presentes inventores.

El documento WO2011/047860 describe compuestos derivados de 2-oxo-1 -pirrolidinil imidazotiadiazol de la siguiente fórmula A:

En donde:

R¹ es un alquilo C_1-4 que contiene al menos un sustituyente halógeno;

R² es un halógeno o un alquilo C_1-4 que contiene al menos un sustituyente halógeno;

R³ es un alquilo C_1-4 que contiene al menos un sustituyente hidroxi o alcoxi.

En el documento WO 2008/132139 se describen compuestos antiepilépticos de fórmula (B):

En donde

Y es O ó S;

R¹ es hidrógeno o alquilo C_1-6;

R² es hidrógeno;

R³ es-CONR⁵ R⁶ ,-COR⁷ , un imidazolilo, un imidazopiridinilo, un imidazopiridazinilo;

R⁵ , R⁶ son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de hidrógeno y alquilo C_1-6;

R⁷ es alquilo C_1-6;

Z es un resto heterocíclico monocíclico o bicíclico seleccionado del grupo que consiste en imidazolidin-1-ilo, 1,3-oxazolidin-3-ilo, 2,5-dihidro-1 H-pirrol-1 -ilo, 1,3-tiazol-3(2H)-ilo, 1,3-tiazolidin-3-ilo, piperidin-1-ilo, azepan-1-ilo, 5,6-dihidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-ilo, hexahidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-ilo, 2,3-dihidro-1 H-tieno[3,4-b]pirrol-1 -ilo, 1,3-benzotiazol-3(2H)-ilo, 1,3-benzoxazol-3(2H)-ilo, pirazolo[1,5-a]piridin-1 (2H)-ilo, 3,4-dihidroisoquinolin-2(1 H)ilo, 3,4-dihidroquinolin-1 (2H)-ilo, 1,3,4,5-tetrahidro-2H-2-benzazepin-2-ilo, 1,2,4,5-tetrahidro-3H-3-benzazepin-3-ilo.

En una realización específica del documento WO 2008/132139 el resto Z=Y en la fórmula (B) podría ser:

Los compuestos descritos en este documento anteriormente se han descrito para su uso como medicamentos, en el tratamiento de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular para los ataques refractarios.

A pesar de la disponibilidad de fármacos antiepilépticos, todavía existe un problema persistente en el control de las convulsiones que surge con aquellos pacientes que no responden en absoluto o sólo de forma insuficiente a los tratamientos actualmente disponibles.

Esos pacientes son vistos como refractarios al tratamiento y representan un desafío considerable para la comunidad médica. Se estima que aproximadamente el 30% de los pacientes con epilepsia se clasifican como refractarios. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar nuevos medicamentos que se dirijan específicamente a esta población de pacientes.

Además, un problema al que se puede enfrentar cuando se desarrollan compuestos para uso en terapia es la capacidad de ciertos compuestos para inducir enzimas CYP450. La inducción de tales enzimas puede afectar la exposición de tales compuestos o de otros compuestos que podrían administrarse junto con ellos a un paciente, alterando así potencialmente su respectiva seguridad o eficacia. Por lo tanto, es deseable desarrollar compuestos que también minimicen dicho potencial de inducción.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona derivados de 1-imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona que tienen la fórmula (I), sus isómeros geométricos, enantiómeros, diastereoisómeros, isótopos y mezclas, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otros aspectos de la invención resultarán evidentes a partir de la descripción detallada.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a derivados de 1-imidazotiadiazolo-2H-pirrol-5-ona según la fórmula (I),

En donde

R¹ es un alquilo C_1-4 o un cicloalquilo C_3-5, cualquiera de cuyos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes halógeno;

R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente hidroxi o alcoxi;

R³ es un halógeno; o un alquilo C_1-4 o un cicloalquilo C_3-4, cualquiera de cuyos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno.

También están comprendidos dentro del alcance de la presente invención tautómeros, isómeros geométricos, enantiómeros, diastereómeros, isótopos y mezclas, o una sal farmacéuticamente aceptable de compuestos de fórmula (I) así como cualquier variante deuterada.

Los compuestos según la fórmula (I) son, por lo tanto, distintos de los compuestos descritos en el estado de la técnica. En una realización, R¹ es un alquilo C_1-4 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes halógeno. En un primer aspecto de esta realización, R¹ es un alquilo C_1-4 no sustituido. En un segundo aspecto de esta realización, R¹ es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más halógenos. Adecuadamente, en este aspecto particular, el sustituyente halógeno es un sustituyente cloro o flúor.

En otra realización, R¹ es un cicloalquilo C_3-5 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes halógeno. En un primer aspecto de esta realización, R¹ es un cicloalquilo C_3-5 no sustituido. En un segundo aspecto de esta realización, R¹ es un cicloalquilo C_3-5 sustituido por uno o más halógenos. Adecuadamente, en este aspecto particular, el sustituyente halógeno es un sustituyente flúor.

En una realización específica, R¹ es un alquilo C ^1-4 sustituido por uno o más sustituyentes halógeno. En un aspecto particular de esta realización específica, R¹ es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más sustituyentes fluoro.

Ejemplos adecuados de grupos R¹ incluyen n-propilo, 2,2-difluoropropilo, 2-cloro-2,2-difluoroetilo, 2,2-difluoroetilo, 2.2.2- trifluoroetilo, 3,3,3-trifluoropropilo, 2-fluoroetilo y 2 ,2-difluororociclopropilo.

Ejemplos particulares de grupos R¹ incluyen n-propilo, 2-cloro-2,2-difluoroetilo, 2,2-difluoropropilo, 3,3,3-trifluoropropilo, 2,2,2-trifluoroetilo y 2,2-difluorociclopropilo. En una realización preferida, R¹ es 3,3,3-trifluoropropilo o 2.2- difluorociclopropilo.

En una realización, R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un hidroxi. En otra realización, R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi. En un aspecto particular de esta realización, R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente metoxi.

En una realización específica, R² es un hidroximetilo o un metoximetilo

En una realización preferida, R² es metoximetilo.

En una primera realización, R³ es un alquilo C_1-4 opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno. En un primer aspecto de esta realización, R³ es un alquilo C_1-4 no sustituido^. En un segundo aspecto de esta realización, R³ es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más átomos de halógeno. Adecuadamente en este aspecto particular, R³ es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más átomos de flúor.

En una segunda realización, R³ es un cicloalquilo C_3-4 opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno. En un primer aspecto de esta realización, R³ es un cicloalquilo C_3-4 no sustituido. En un segundo aspecto de esta realización, R³ es un cicloalquilo C_3-4 sustituido por uno o más átomos de halógeno. Adecuadamente en este aspecto particular, R³ es un cicloalquilo C_3-4 sustituido por uno o más átomos de flúor.

En una tercera realización, R³ es un halógeno. En un aspecto particular de esta realización, R³ es cloro.

Ejemplos adecuados de R³ incluyen metilo, difluorometilo, cloro, trifluorometilo y 1-fluorociclopropilo.

En una realización preferida, R³ es metilo o difluorometilo.

Todas las combinaciones de las realizaciones y ejemplos anteriores de los grupos R¹, R² y R³ están incluidos dentro del alcance de la presente invención.

En una realización específica adicional, los compuestos de fórmula (I) son aquellos en los que:

• R¹ es alquilo C_1-4 o cicloalquilo C_3-5, cualquiera de cuyos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes halógeno;

• R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi; y

• R³ es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más átomos de halógeno.

Los compuestos específicos según la presente invención son aquellos seleccionados del grupo que consiste en:

1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropilo)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona;

1 -[[6-(1 -fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona;

3-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropilo)-2H-pirrol-5-ona;

3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2-difluoropropil)-2H-pirrol-5-ona;

3R-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

3S-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3R-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3S-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3R-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3S-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona; 1-[[2-(hidroximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; y

1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona.

Los siguientes párrafos proporcionan definiciones de los diversos restos químicos que forman los compuestos según la invención y se pretende que se apliquen uniformemente a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones a menos que una definición establecida expresamente de otra forma proporcione una definición más amplia.

"Alquilo C_1-4" se refiere a grupos alquilo que tienen de 1 a 4 átomos de carbono. Este término se ejemplifica con grupos como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo. Los grupos “alquilo C_1-4" pueden estar sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, hidroxi o alcoxi.

La expresión "cicloalquilo C_3-5" como se usa en este documento se refiere a grupos monovalentes de 3 a 5 átomos de carbono derivados de un hidrocarburo monocíclico saturado. Grupos cicloalquilo C_3-5 ilustrativos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo y ciclopentilo. Ejemplos de grupos cicloalquilo C_3-5 son cicloalquilo C_3-4 que se refieren a grupos que tienen de 3 a 4 átomos de carbono. Grupos cicloalquilo C_3-4 ilustrativos son ciclopropilo y ciclobutilo.

Cualquier resto "H" en la fórmula (I) puede ser el isótopo hidrógeno, deuterio o tritio.

"Hidroxi" representa un grupo de fórmula -OH.

"Alcoxi" se refiere al grupo -O-R donde R incluye "alquilo C_1-4".

"Halógeno" se refiere a átomos de flúor, cloro, bromo y yodo, preferiblemente flúor y cloro.

Las “sales farmacéuticamente aceptables” según la invención incluyen formas de sales de ácido o base no tóxicas y terapéuticamente activas que los compuestos de fórmula (I) son capaces de formar.

La forma de sal de adición de ácido de un compuesto de fórmula (I) que se presenta en su forma libre como base se puede obtener tratando la base libre con un ácido apropiado, tal como un ácido inorgánico, por ejemplo, un ácido halohídrico tal como ácido clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o un ácido orgánico, tal como, por ejemplo, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido hidroxiacético, ácido propanoico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido ciclámico, ácido salicílico, ácido p-aminosalicílico, ácido pamoico y similares.

Los compuestos de fórmula (I) que contienen protones ácidos pueden convertirse en sus formas de sal de adición de base no tóxicas y terapéuticamente activas, p. ej., sales metálicas o amínicas, por tratamiento con bases orgánicas e inorgánicas apropiadas. Las formas de sal de base apropiadas incluyen, por ejemplo, sales de amonio, sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, p. ej., sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases orgánicas, p. ej., N-metil-D-glucamina, sales de hidrabamina y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.

Por el contrario, dichas formas de sal se pueden convertir en formas libres mediante tratamiento con una base o ácido apropiado.

Los compuestos de fórmula (I) y sus sales pueden estar en forma de solvatos, que se incluye dentro del alcance de la presente invención. Dichos solvatos incluyen, por ejemplo, hidratos, alcoholatos y similares.

Los compuestos de fórmula (I) y/o sus intermedios pueden tener al menos un centro estereogénico en su estructura. Este centro estereogénico puede estar presente en una configuración R o S, dicha notación R y S se utiliza en correspondencia con las reglas descritas en Pure Appl. Chem., 45 (1976) 11 -30. Por lo tanto, la invención también se refiere a todas las formas estereoisómeras tales como formas enantiómeras y diastereoisómeras de los compuestos de fórmula (I) o mezclas de las mismas (incluyendo todas las posibles mezclas de estereoisómeros). Con respecto a la presente invención, la referencia a un compuesto o compuestos pretende abarcar ese compuesto en cada una de sus posibles formas isómeras y mezclas de las mismas, a menos que se haga referencia específica a la forma isómera particular. La expresión "enantiómeramente puro" como se usa en el presente documento se refiere a compuestos que tienen un exceso enantiómero (ee) mayor que 95%.

Los compuestos según la presente invención pueden existir en diferentes formas polimórficas. Aunque no se indica explícitamente en la fórmula anterior, se pretende que tales formas se incluyan dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de fórmula (I) según la invención se pueden preparar de forma análoga a los métodos convencionales como entiende un experto en la técnica de la química orgánica sintética.

Según una realización, los compuestos que tienen la fórmula general (I), en la que R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi, se pueden preparar por aminación reductora de una hidroxilactona de fórmula (III) con una amina de fórmula (II) según la ecuación:

donde R¹ y R³ tienen las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar según los procedimientos descritos en las solicitudes de patente WO 01/62726, WO 2006/128792 y WO 2008/132139.

Los compuestos de fórmula (III) se pueden preparar según los métodos descritos en las solicitudes de patente WO 01/62726 o WO 2006/128792 o según cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (II) en donde R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi se pueden preparar por reducción de un compuesto de fórmula (IV) según la ecuación:

donde R³ tiene las mismas definiciones que las definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar utilizando un agente reductor tal como trifenilfosfina en una mezcla de THF/agua a temperatura ambiente o según cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (IV), en donde R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi, pueden prepararse mediante la transformación de un compuesto de fórmula (V) según la ecuación:

donde R³ tiene las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula I.

Esta reacción se puede realizar en una secuencia de dos etapas mediante el tratamiento de compuestos (V) con un cloruro de sulfonilo tal como cloruro de metanosulfonilo en presencia de una base tal como N,N-diisopropiletilamina en diclorometano a 0 °C, o según cualquier otro método conocido por un experto en la técnica, seguido del tratamiento del intermedio con un derivado de azida tal como la azida sódica en DMF a 0 °C.

Alternativamente, los compuestos (II) se pueden preparar en una secuencia de tres etapas mediante el tratamiento de los compuestos (V) con un cloruro de sulfonilo tal como cloruro de metanosulfonilo en presencia de una base tal como N,N-diisopropiletilamina o un agente de cloración tal como cloruro de tionilo, en diclorometano a 0 °C, o según cualquier otro método conocido por un experto en la técnica, seguido de tratamiento del intermedio con hexametilentetramina y posterior hidrólisis ácida de la sal de amonio cuaternario intermedia.

Los compuestos de fórmula (V) en la que R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi puede prepararse mediante hidroximetilación de un compuesto de fórmula (VI) según la ecuación:

donde R3 tiene la misma definición que la definida anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar utilizando un agente de formilación tal como el paraformaldehído en condiciones ácidas en un disolvente polar tal como dioxano a 100 °C, o según cualquier otro método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (VI) en donde R2 es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi pueden sintetizarse mediante la reacción de un compuesto de fórmula (VII) con un derivado de bromo de fórmula (VIII) según la ecuación:

donde R3 tiene la misma definición que la descrita anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar utilizando procedimientos descritos en la bibliografía o conocidos por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (VII) y de fórmula (VIII) están disponibles comercialmente o pueden sintetizarse según cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Según otra realización, los compuestos de fórmula (I) en los que R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi puede sintetizarse mediante la reacción de un compuesto de fórmula (V) con una pirrolona de fórmula (IX) según la ecuación:

donde R1 y R3 tienen las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar utilizando un ácido, tal como el ácido p-toluenosulfónico, en un disolvente aprótico, tal como el sulfolano, a alta temperatura.

Los compuestos de fórmula (IX) pueden prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula (X) según la ecuación:

donde R1 tiene la misma definición definida anteriormente para los compuestos de fórmula (I) y P es un grupo protector tal como un grupo bencilo opcionalmente sustituido.

Esta reacción se puede realizar según cualquier método de desprotección estándar conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (X) se pueden preparar por aminación reductora de una hidroxilactona de fórmula (III) con una amina de fórmula (XI)

donde R1 tiene la misma definición definida anteriormente para los compuestos de fórmula (I) y P es un grupo protector tal como un grupo bencilo opcionalmente sustituido.

Esta reacción se puede realizar según los procedimientos descritos en las solicitudes de patente WO 01 /62726, WO2006/128792 y WO2008/132139.

Según otra realización, los compuestos de fórmula (I), en la que R2 es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi, pueden sintetizarse mediante una reacción tipo Friedel-Crafts de un compuesto de fórmula (VI) con una pirrolona de fórmula (XII) según la ecuación:

donde R¹ y R³ tienen las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I).

Esta reacción se puede realizar con pirrolonas de fórmula (XII) que tienen un grupo saliente (Y), tal como un átomo de cloro o un grupo p-toluenosulfonilo, en presencia de un ácido de Lewis, tal como cloruro de zinc o cloruro férrico, en un disolvente polar, tal como como sulfolano o dioxano, a temperaturas que varían entre 100-120 °C, o según cualquier procedimiento descrito en la bibliografía o conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (XII) se pueden preparar a partir de las correspondientes pirrolonas de fórmula (IX) según los métodos descritos en la solicitud de patente PCT WO2006/128693 o según cualquier otro método conocido por un experto en la técnica.

Como alternativa, los compuestos de fórmula (I) en los que R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi se pueden sintetizar por oxidación de un compuesto de fórmula (XIII) según la ecuación:

donde R1 y R3 tienen las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I). Esta reacción se puede realizar utilizando un agente oxidante, tal como peryodato de sodio, en un disolvente polar, tal como metanol, a temperatura ambiente o por cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (XIII), en la que R2 es un alquilo Ci-4 sustituido por un sustituyente alcoxi, pueden prepararse por reacción de un compuesto de fórmula (V) con una pirrolidona de fórmula (XIV) según la ecuación:

Esta reacción se puede realizar utilizando un ácido como el ácido p-toluenosulfónico en un disolvente aprótico, tal como el sulfolano, a alta temperatura.

Las pirrolidonas de fórmula (XIV), en la que R1 tiene las mismas definiciones definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I), pueden sintetizarse en una secuencia de tres etapas por desprotección de una pirrolidona de fórmula (XV) obtenida por selenilación de una pirrolidona protegida (XVI) según la ecuación:

Las etapas de protección-desprotección pueden realizarse por cualquier método conocido por un experto en la técnica. La reacción de selenilación se puede realizar por desprotonación usando una base fuerte, tal como bis(trimetilsilil)amida de litio o diisopropilamida de litio, en un solvente polar, tal como tetrahidrofurano, a baja temperatura, tal como -78°C, seguido de captura del enolato por un agente selenilante, tal como cloruro o bromuro de fenilselenenilo.

Las pirrolidonas (XVII) o (XVI) pueden prepararse según los métodos descritos en las solicitudes de patente WO2006/128792 o WO2011/047860 o según cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de fórmula (I), en la que R² es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente hidroxi se pueden preparar por desalquilación de compuestos de fórmula (I) en la que R² es un alquilo C ^1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi. Esta reacción se puede realizar utilizando un reactivo de desalquilación, tal como el tribromuro o tricloruro de boro, en un disolvente no polar, tal como diclorometano, a temperatura ambiente o según cualquier método conocido por un experto en la técnica.

Los compuestos de la presente invención son beneficiosos para el tratamiento de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular, de las convulsiones refractarias.

Por lo tanto, en otra realización, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para usar como medicamento.

En un aspecto de esa realización, la presente invención también proporciona un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento y/o prevención de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular, de las convulsiones refractarias.

En otra realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular, para el tratamiento de las convulsiones refractarias. Las convulsiones pueden clasificarse como refractarias cuando un paciente no consigue estar libre de convulsiones durante 12 meses o más con un tratamiento de última generación con dos o más fármacos antiepilépticos a las dosis máximas toleradas. La Liga Internacional contra la Epilepsia (ILAE, por sus siglas en inglés) ha definido la epilepsia resistente a los medicamentos como "el fracaso de los ensayos adecuados de dos esquemas de AED tolerados, elegidos apropiadamente y utilizados (ya sea como monoterapias o en combinación) para lograr una ausencia sostenida de crisis".

Los métodos de la invención comprenden la administración a un mamífero (preferiblemente un ser humano) que padece las afecciones o trastornos mencionados anteriormente, de un compuesto según la invención en una cantidad suficiente para aliviar o prevenir el trastorno o la afección.

El compuesto se administra convenientemente en cualquier forma de dosificación unitaria adecuada, que incluye, pero no se limita a, una que contiene de 1 a 2000 mg, preferiblemente de 1 a 1000 mg, más preferiblemente de 1 a 500 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.

El término "tratamiento" como se usa en el presente documento incluye tratamiento curativo y tratamiento profiláctico. Por "curativo" se entiende la eficacia en el tratamiento de un episodio sintomático actual de un trastorno o afección. Por "profiláctico" se entiende la prevención de la aparición o recurrencia de un trastorno o afección.

El término "epilepsia", como se usa en el presente documento, se refiere a una afección neurológica crónica caracterizada por ataques epilépticos recurrentes no provocados. Un ataque epiléptico es la manifestación de una descarga sincronizada anormal y excesiva de un conjunto de neuronas cerebrales; sus manifestaciones clínicas son repentinas y transitorias. El término "epilepsia", como se usa en el presente documento, también puede referirse a un trastorno de la función cerebral caracterizado por la aparición periódica de convulsiones. Las convulsiones pueden ser "no epilépticas" cuando se desencadenan en un cerebro normal por condiciones tales como fiebre alta o exposición a toxinas o "epilépticos" cuando se desencadenan sin provocación evidente.

El término "ataque" como se usa en este documento se refiere a una alteración transitoria del comportamiento debido al disparo desordenado, sincrónico y rítmico de poblaciones de neuronas cerebrales.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) en combinación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Por supuesto, la actividad en cualquiera de las indicaciones antes mencionadas puede determinarse realizando ensayos clínicos adecuados de una manera conocida por un experto en la técnica relevante para la indicación particular y/o en el diseño de ensayos clínicos en general.

Para tratar enfermedades, los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden emplearse en una dosificación diaria eficaz y administrarse en forma de una composición farmacéutica.

Por lo tanto, otra realización de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Para preparar una composición farmacéutica según la invención, uno o más de los compuestos de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables se mezclan íntimamente con un diluyente o vehículo farmacéutico según técnicas de mezclado convencionales farmacéuticas conocidas por un experto en la técnica.

Los diluyentes y vehículos adecuados pueden adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la vía de administración deseada, por ej., oral, rectal, parenteral o intranasal.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos según la invención pueden, por ejemplo, administrarse por vía oral, parenteral, es decir, por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea, intratecal, transdérmica (parche), por inhalación o por vía intranasal.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral pueden ser sólidas o líquidas y, por ejemplo, pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas de gelatina, soluciones, jarabes, chicles y similares.

Con este fin, el ingrediente activo puede mezclarse con un diluyente inerte o un vehículo no tóxico farmacéuticamente aceptable, tal como almidón o lactosa. Opcionalmente, estas composiciones farmacéuticas también pueden contener un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina, un disgregante tal como ácido algínico, un lubricante tal como estearato de magnesio, un deslizante tal como el dióxido de silicio coloidal, un edulcorante tal como sacarosa o sacarina, o agentes colorantes o un agente aromatizante tal como menta o salicilato de metilo. La invención también contempla composiciones que pueden liberar la sustancia activa de manera controlada.

Las composiciones farmacéuticas que se pueden usar para la administración parenteral están en forma convencional, tal como soluciones o suspensiones acuosas u oleosas, generalmente contenidas en ampollas, jeringas desechables, viales de vidrio o plástico o recipientes para infusión.

Además del ingrediente activo, estas soluciones o suspensiones también pueden contener opcionalmente un diluyente estéril tal como agua para inyección, una solución salina fisiológica, aceites, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos, agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico, antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico, agentes quelantes tales como el ácido etilendiaminotetraacético, tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes de ajuste de la osmolaridad tales como cloruro sódico o dextrosa.

Estas formas farmacéuticas se preparan utilizando métodos que los farmacéuticos utilizan habitualmente.

La cantidad de ingrediente activo en las composiciones farmacéuticas puede caer dentro de un amplio rango de concentraciones y depende de una variedad de factores tales como el sexo, la edad, el peso y la condición médica del paciente, así como del método de administración. Así, la cantidad de compuesto de fórmula (I) en las composiciones para administración oral es al menos del 0,5% en peso y puede llegar hasta el 80% en peso con respecto al peso total de la composición.

Según la invención también se ha encontrado que los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden administrarse solos o en combinación con otros ingredientes farmacéuticamente activos. Los ejemplos no limitantes de tales compuestos adicionales que se pueden citar para su uso en combinación con los compuestos según la invención son antivirales, antiespásticos (p. ej., baclofeno), antieméticos, agentes estabilizadores del estado de ánimo antimaníacos, analgésicos (p. ej., aspirina, ibuprofeno, paracetamol), narcóticos analgésicos, anestésicos tópicos, analgésicos opioides, sales de litio, antidepresivos (p. ej., mianserina, fluoxetina, trazodona), antidepresivos tricíclicos (p. ej., imipramina, desipramina), anticonvulsivos (p. ej., ácido valproico, carbamazepina, fenitoína), antipsicóticos (p. ej., risperidona, haloperidol), neurolépticos, benzodiazepinas (p. ej., diazepam, clonazepam), fenotiazinas (p. ej., clorpromazina), bloqueantes de los canales de calcio, anfetamina, clonidina, lidocaína, mexiletina, capsaicina, cafeína, quetiapina, antagonistas de la serotonina, p-bloqueantes, antiarrítmicos, triptanos, derivados del cornezuelo del centeno y amantadina.

Para composiciones orales, la dosificación diaria está en el rango de 1 mg a 2000 mg de compuestos de fórmula (I). Preferiblemente en el rango de 1 mg a 1000 mg de compuestos de fórmula (I), lo más preferiblemente de 1 mg a 500 mg.

En las composiciones para administración parenteral, la cantidad de compuesto de fórmula (I) presente es de al menos el 0,5% en peso y puede llegar hasta el 33% en peso con respecto al peso total de la composición. Para las composiciones parenterales preferidas, la unidad de dosificación está en el rango de 1 mg a 2000 mg de compuestos de fórmula (I).

La dosis diaria puede caer dentro de un amplio rango de unidades de dosificación del compuesto de fórmula (I) y generalmente está en el rango de 1 a 2000 mg, preferiblemente de 1 a 1000 mg. Sin embargo, debe entenderse que las dosis específicas pueden adaptarse a casos particulares dependiendo de los requerimientos individuales, a criterio del médico.

Los compuestos de unión a proteínas SV2 proporcionados por esta invención y los derivados marcados de los mismos pueden ser útiles como patrones y reactivos para determinar la capacidad de los compuestos ensayados (p. ej., un producto farmacéutico potencial) para unirse a las proteínas SV2.

Los derivados marcados de ligandos de proteínas SV2 proporcionados por esta invención también pueden ser útiles como radiotrazadores para formación de imágenes de tomografía por emisión de positrones (PET) o para tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT).

Por lo tanto, la presente invención proporciona además ligandos marcados como herramientas para explorar bibliotecas de compuestos químicos para el descubrimiento de posibles agentes farmacéuticos, en particular para el tratamiento y la prevención de las afecciones establecidas en este documento, sobre la base de una unión más potente a las proteínas SV2, para localizar las proteínas SV2 en tejidos, y para caracterizar proteínas SV2 purificadas. Las proteínas SV2 incluyen SV2A, SV2B y SV2C, en las que SV2A es el sitio de unión del fármaco anticonvulsivo levetiracetam y sus análogos. Las isoformas SV2A, SV2B o SV2C de SV2 se pueden derivar de tejidos, especialmente del cerebro, de cualquier especie de mamífero, incluidos seres humanos, ratas o ratones. Alternativamente, las isoformas pueden ser versiones clonadas de cualquier especie de mamífero, incluidos seres humanos, ratas y ratones, expresadas heterólogamente y utilizadas para ensayos. El método de exploración comprende exponer membranas cerebrales, tales como membranas cerebrales de seres humanos o de mamíferos, o líneas celulares que expresan proteínas SV2 o fragmentos de las mismas, especialmente SV2A y SV2C, pero que incluyen SV2B, a un agente putativo e incubar las membranas o proteínas o fragmentos y el agente con compuesto marcado de fórmula (I). El método comprende además determinar si el agente putativo inhibe la unión del compuesto de fórmula (I) a la proteína, identificando de ese modo a los compañeros de unión de la proteína. Por lo tanto, los ensayos de exploración permiten la identificación de nuevos fármacos o compuestos que interactúan con las proteínas SV2. La presente invención también proporciona ligandos fotoactivables de proteínas SV2.

Los ligandos marcados también se pueden utilizar como herramientas para evaluar el estado de conformación de las proteínas SV2 después de la solubilización, purificación y cromatografía. Los ligandos marcados pueden estar marcados directa o indirectamente. Los ejemplos de marcadores adecuados incluyen una radiomarca, tal como 3H, un marcador fluorescente, una enzima, europio, biotina y otros marcadores convencionales para ensayos de este tipo.

Los compuestos marcados de fórmula (I) son útiles en los métodos como sondas en ensayos para explorar nuevos compuestos o agentes que se unen a las proteínas SV2 (SV2A, SV2B y SV2C). En dichas realizaciones de ensayo, los ligandos se pueden usar sin modificación o se pueden modificar de varias maneras; por ejemplo, mediante el marcaje, tal como la unión covalente o no covalente de un resto que directa o indirectamente proporciona una señal detectable. En cualquiera de estos ensayos, los materiales pueden marcarse directa o indirectamente. Las posibilidades de marcado directo incluyen grupos de marcadores tales como: radiomarcadores que incluyen, pero no se limitan a, [3H], [14C], [32P], [35S] o [125I], enzimas como la peroxidasa y la fosfatasa alcalina, y marcadores fluorescentes capaces de controlar el cambio en la intensidad de la fluorescencia, el cambio de longitud de onda o la polarización de la fluorescencia, incluidas, pero sin limitarse a, la fluoresceína o la rodamina. Las posibilidades de marcado indirecto incluyen la biotinilación de un constituyente seguido de la unión a avidina acoplada a uno de los grupos de marcadores anteriores o el uso de anticuerpos anti-ligando. Los compuestos también pueden incluir espaciadores o enlazadores en los casos en que los compuestos se vayan a unir a un soporte sólido. Para identificar agentes o compuestos que compitan o interactúen con ligandos marcados según la invención para unirse a las proteínas SV2 (especialmente SV2A y SV2C), se pueden usar células, fragmentos celulares o de membranas que contengan SV2A o SV2C o la proteína SV2 entera o uno de sus fragmentos. El agente o compuesto puede incubarse con las células, membranas, proteína o fragmento SV2 antes, al mismo tiempo o después de la incubación con levetiracetam marcado o un análogo o derivado del mismo. Los ensayos se pueden modificar o preparar en cualquier formato disponible, incluidos los ensayos de exploración de alto rendimiento (HTS) que monitorizan la unión de levetiracetam o la unión de sus derivados o análogos a las proteínas SV2 o fragmentos de las mismas. En muchos programas de exploración de fármacos que analizan bibliotecas de compuestos, son deseables ensayos de alto rendimiento para maximizar el número de compuestos examinados en un período de tiempo determinado. Dichos ensayos de exploración pueden utilizar células intactas, fragmentos celulares o de membranas que contengan SV2, así como sistemas sin células o sin membranas, como los que pueden derivarse de proteínas purificadas o semipurificadas. La ventaja del ensayo con un fragmento de membrana que contiene SV2 o proteínas y péptidos de SV2 purificados es que los efectos de la toxicidad celular y/o la biodisponibilidad del compuesto de ensayo pueden ignorarse por lo general, centrándose el ensayo principalmente en el efecto del fármaco sobre el blanco molecular como puede manifestarse en una inhibición de, por ejemplo, la unión entre dos moléculas. El ensayo se puede formular para detectar la capacidad de un agente o compuesto de ensayo para inhibir la unión del ligando marcado según la invención a SV2 o un fragmento de SV2 o de levetiracetam marcado, o derivados o análogos del mismo, a SV2 o a un fragmento de la proteína SV2. La inhibición de la formación de complejos puede detectarse mediante una variedad de técnicas tales como ensayos de filtración, Flashplates (Perkin Elmer), ensayos de proximidad de centelleo (SPA, GE). Para las exploraciones de alto rendimiento (HTS), el ensayo de proximidad de centelleo que utiliza microesferas recubiertas con membranas biológicas o flashplates recubiertos con membranas biológicas son métodos potentes que no requieren etapas de separación o lavado.

Un problema que puede ser encarado al desarrollar compuestos para su uso en terapia es la capacidad de ciertos compuestos (fármacos perpetradores), que podrían administrarse junto con los compuestos de la presente invención (fármacos víctimas), para inducir las enzimas CYP450, en particular CYP3A4/5. La inducción de tales enzimas por parte de los fármacos perpetradores puede afectar la exposición del fármaco víctima, cuando es principalmente metabolizado por las enzimas CYP450 y CYP3A4/5 en particular, alterando así potencialmente su perfil de eficacia. Por tanto, es deseable desarrollar compuestos con un potencial limitado de metabolización por las enzimas CYP3A4/5.

La contribución de CYP3A4/5 al metabolismo total de los compuestos según la presente invención se ha evaluado calculando la relación entre los aclaramientos de hepatocitos de ser humano en ausencia y presencia de un inhibidor selectivo de CYP3A4/5 tal como la azamulina.

Cuando se ensayan en este ensayo según el protocolo descrito en la presente solicitud de patente, los compuestos según los ejemplos adjuntos exhiben una fracción metabolizada por CYP3A4/5 (Fm,CYP3A4/5) normalmente inferior al 45%, lo que minimiza el riesgo de interacciones fármaco-fármaco cuando se administra junto con inductores de CYP450.

Además, puede ser beneficioso que los compuestos según la presente invención muestren aclaramientos intrínsecos bajos.

Sección experimental

Abreviaturas/reactivos recurrentes

Ac: acetilo

ACN: acetonitrilo

Salmuera: solución acuosa saturada de cloruro de sodio

nBu: n-butilo

tBu: terc-butilo

Bz: benzoilo

CV: volúmenes de columna

DCM: diclorometano

DMF: N,N-dimetilformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

Et: etilo

EtOH: etanol

Et²O: éter dietílico

EtOAc: acetato de etilo

h: hora

HPLC: cromatografía de líquidos de alta resolución

LC: cromatografía de líquidos

LCMS: cromatografía de líquidos con detección por espectrometría de masas

MeOH: metanol

min: minutos

MTBE: metil terc-butil éter

RMN: resonancia magnética nuclear

iPrOH: isopropanol

PTSA: ácido p-toluenosulfónico

RT: temperatura ambiente

SFC: cromatografía de fluidos supercríticos

THF: tetrahidrofurano

TLC: cromatografía de capa fina

Métodos analíticos

Todas las reacciones en las que intervinieron aire o reactivos sensibles a la humedad se realizaron en atmósfera de nitrógeno o argón utilizando disolventes secos y material de vidrio. Los experimentos que requieren irradiación de microondas se realizaron en un horno de microondas Biotage Initiator Sixty actualizado con la versión 2.0 del software operativo. Se realizaron experimentos para alcanzar la temperatura requerida lo más rápido posible (potencia máxima de irradiación: 400 W, sin refrigeración externa). Los disolventes y reactivos comerciales generalmente se usaron sin purificación adicional, incluidos los disolventes anhidros cuando fue apropiado (generalmente Sure-Seal™ productos de Aldrich Chemical Company o AcroSeal™ de ACROS Organics). En general, las reacciones fueron seguidas por análisis de cromatografía de capa fina, HPLC o espectrometría de masas.

Los análisis de HPLC se realizaron utilizando un sistema HPLC Agilent serie 1100 montado con una columna Waters XBridge MS C18, 5 Mm, 150 x 4,6 mm. El gradiente fue desde el disolvente A al 100% (agua/ACN/solución de formiato de amonio 85/5/10 (v/v/v)) hasta el disolvente B al 100% (agua/ACN/solución de formiato de amonio 5/85/10 (v/v)) en 6 min con una retención al 100% B de 5 minutos. El caudal se establece en 8 mL/min durante 6 min y luego se aumenta a 3 mL/min durante 2 min con una retención a 3 mL/min durante 3 minutos. Se usó una división de 1/25 justo antes de la fuente API. La cromatografía se llevó a cabo a 45 °C. La solución de formiato de amonio (pH ~ 8,5) se preparó mediante la disolución de formiato de amonio (630 mg) en agua (1 L) y adición de hidróxido de amonio al 30% (500 ML).

Será evidente para los expertos en la técnica que si se utilizan diferentes condiciones analíticas se pueden obtener diferentes tiempos de retención para los datos de LC.

Las mediciones de espectrometría de masas en modo LCMS se realizaron de la siguiente manera:

- Para la elución básica, los análisis se realizaron utilizando:

Un espectrómetro de masas de cuadrupolo simple QDA Waters para el análisis LCMS. Este espectrómetro está equipado con una fuente ESI y un sistema UPLC Acquity Hclass con detector de matriz de diodos (200 a 400 nm). Los datos se adquirieron en un escaneo MS completo de m/z 70 a 800 en modo positivo con una elución básica. La separación de fase inversa se llevó a cabo a 45 °C en una columna Waters Acquity UPLC BEHCl8 de 1,7 μm (2,1 x 50 mm) para elución básica. La elución en gradiente se realizó con agua/ACN/formiato de amonio (95/5/63 mg/L) (disolvente A) y ACN/agua/formiato de amonio (95/5/63 mg/L) (disolvente B). Volumen de inyección: 1 μL. Flujo completo en MS.

Programa básico "4 min"

Programa básico "10 min"

- Para la elución ácida, los análisis se realizaron utilizando:

Un espectrómetro de masas de cuadrupolo simple QDA Waters para el análisis por LCMS. Este espectrómetro está equipado con una fuente ESI y un sistema UPLC Acquity Hclass con detector de matriz de diodos (200 a 400 nm). Los datos se adquirieron en una exploración MS completa de m/z 70 a 800 en modo positivo con una elución ácida. La separación de fase inversa se llevó a cabo a 45 °C en una columna Waters Acquity UPLC HSS T3 de 1,8 μm (2,1 x 50 mm) para elución ácida. La elución en gradiente se realizó con agua/ACN/TFA (95/5/0,5 ml/L) (disolvente A) y ACN (disolvente B). Volumen de inyección: 1 μL. Flujo completo en MS.

Programa ácido "4 min"

Programa ácido "10 min"

Los materiales brutos pudieron purificarse mediante cromatografía de fase normal, cromatografía de fase inversa (ácida o básica), separación quiral o recristalización.

La cromatografía de fase inversa normal se realizó utilizando columnas de gel de sílice (gel de sílice de malla 100:200 o columnas Puriflash®-50 SIHC-JP de Interchim).

La cromatografía de fase inversa preparativa se realizó de la siguiente manera:

- Para la purificación por LCMS se utilizó la purificación por LCMS (modo básico, LCMS preparativa) utilizando un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo SQD o QM Waters. Este espectrómetro está equipado con una fuente ESI y una bomba cuaternaria Waters con controlador Prep LC con detector de matriz de diodos (210 a 400 nm). Parámetros de MS: ESI voltaje capilar 3 kV. Voltaje de cono y extractor 10. Temperatura del bloque fuente 120°C. Temperatura de desolvatación 300°C. Flujo de gas cónico 30 L/h (nitrógeno), flujo de gas de desolvatación 650 L/h. Los datos se adquirieron en un escaneo MS completo de m/z 100 a 700 en modo positivo con una elución ácida o básica.

Parámetros de LC: La separación en fase inversa se llevó a cabo a temperatura ambiente en una columna XBridge prep OBD C18 (5 μm, 30 x 50 mm) (elución básica). La elución en gradiente se hizo con agua (disolvente A), ACN (disolvente B), bicarbonato de amonio en agua 8 g/L 500 μL/L NH⁴OH al 30% (disolvente C) (pH~8,5). Caudal en HPLC: de 35 mL/min a 60 mL/min, volumen de inyección: 1 mL. La relación de división se estableció en /- 1/6000 a MS.

Por lo general, los productos se secaban al vacío antes de los análisis finales y se sometían a ensayos biológicos. Los espectros de RMN se registraron en un espectrómetro de RMN BRUKER AVANCE III Ultrashield Nanobay de 400 MHz equipado con una estación de trabajo Windows 7 que ejecutó el software Bruker Topspin 3.2 y un cabezal de sonda Bb I S1 de 5 mm con gradiente Z. Algunos espectros de RMN se registraron en un espectrómetro de RMN BRUKER AVANCE III HD Ascend de 500 MHz equipado con una estación de trabajo Windows 7 que ejecutó el software Bruker Topspin 3.2 μl2 y una criosonda Prodigy BBO 500 S1 de 5 mm. Los compuestos se estudiaron en solución de d³-cloroformo o d₆-DMSO a una temperatura de sonda de 300K. El instrumento está bloqueado en la señal de deuterio del disolvente utilizado. Los desplazamientos químicos se dan en ppm campo abajo de TMS (tetrametilsilano) tomado como patrón interno.

Los nombres de los compuestos son generados por Accelrys Draw 4.0 o Biovia Draw 16.1

Los siguientes ejemplos ilustran cómo se pueden sintetizar los compuestos cubiertos por la fórmula (I). Se proporcionan únicamente con fines ilustrativos y no pretenden, ni de ninguna manera deben interpretarse, como una limitación de la invención. Los expertos en la técnica apreciarán que se pueden realizar variaciones y modificaciones rutinarias de los siguientes ejemplos sin exceder el espíritu o el alcance de la invención.

Intermedios

A. Síntesis de 2-hidroxi-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-furan-5-ona II

A.1. Síntesis de 4,4,4-trifluoro-1-hidroxi-butano-1-sulfonato de sodio I

Se añadió a 4,4,4-trifluorobutiraldehído (CAS: 406-87-1, 1,0 eq., 12,75 g, 101 mmoles) bisulfito de sodio (1,0 eq., 10,50 g, 101 mmoles) en agua (25 mL) a 0 °C y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. El precipitado se filtró y se lavó con metanol frío (500 mL) a 0°C. El sólido obtenido se secó a alto vacío a 40 °C durante 16 h para dar 4,4,4-trifluoro-1-hidroxi-butano-1-sulfonato de sodio I (15,4 g, 66,9 mmoles) como un sólido blanco que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Rendimiento: 66%

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 55,60 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 3,92 (ddd, J = 9,2, 5,7, 4,2 Hz, 1 H), 2,35 (dddd, J = 23,2, 11,6, 5,8, 3,4 Hz, 2H), 2,05 - 1,89 (m, 1H), 1,73 (dddd, J = 13,9, 10,7, 8,6, 5,6 Hz, 1H).

A.2. Síntesis de 2-hidroxi-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-furan-5-ona II

A una mezcla de ácido glioxílico monohidrato (1,5 eq., 1,8 g, 19,5 mmoles) e hidrocloruro de morfolina (1,5 eq., 2,4 g, 19,5 mmoles) en una mezcla de agua (6 mL) y 1,4-dioxano (6 mL) a temperatura ambiente, se añadió 4,4,4-trifluoro-1-hidroxi-butano-1-sulfonato de sodio I (1,0 eq., 3,0 g, 13,0 mmoles) y ácido clorhídrico (2,0 eq., 2,2 mL, 26 mmoles).

La mezcla se agitó durante 20 h a 110 °C y luego se enfrió a RT. Se añadió agua a la mezcla y la capa acuosa se extrajo con MTBE (3 veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO₄, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad para dar 2-hidroxi-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-furan-5-ona II (900 mg, 4,5 mmoles, pureza estimada 90%) que se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Rendimiento: 34%

LC/MS: [M-H]+ = 180,9

1H-RMN (400 MHz, CDCta) 56,18 (s, 1H), 6,12 (s, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,44 - 3,30 (m, 1H), 3,30 - 3,14 (m, 1H).

Se preparó 3-(2,2-difluoropropil)-2-hidroxi-2H-furan-5-ona II-A según el mismo procedimiento de dos etapas a partir de 4,4-difluoropentanal (CAS: 1546331-97-8).

Rendimiento: 40%

Se preparó 2-hidroxi-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-furan-5-ona III según el mismo procedimiento de dos etapas a partir de 5,5,5-trifluoropentanal (CAS: 250253-47-5).

Rendimiento: 55% (18 etapa) y 73% (28 etapa).

La 2-hidroxi-3-propil-2H-furano-5-ona III-A está disponible comercialmente (CAS: 78920-10-2) o se puede preparar según el mismo procedimiento a partir de butiraldehído.

Se preparó 3-(2,2-difluorociclopropil)-2-hidroxi-2H-furan-5-ona III-B a partir de 2-(2,2-difluorociclopropil)acetaldehído según un procedimiento ligeramente modificado:

A una mezcla de morfolina (1,1 eq., 1,07 g, 676,0 mmoles) en heptano (55 mL) a 0 °C se añadió ácido glioxílico (0,95 eq., 965 mg, 614,5 mmoles) y la mezcla se agitó a 40 °C durante 2 h. Luego, la mezcla se enfrió a RT y se añadió 2-(2,2-difluorociclopropil)acetaldehído (CAS: 1823961-57-4, 1,1 eq., 1,07 g, 676,0 mmoles) y la mezcla se agitó a 40 °C durante 16 h. A la mezcla enfriada a 0 °C se añadió ácido clorhídrico (1,75 eq., 1075,5 mmoles, 12,2 mL, 36,5% en masa) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Luego se evaporó el diclorometano al vacío a 25°C y se añadió agua a la mezcla obtenida. La capa acuosa se lavó con heptano (3 veces) y una solución acuosa saturada de Na2CO₃ se añadió hasta pH=6-7. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (tres veces) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO₄, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad para dar 3-(2,2-difluorociclopropil)-2-hidroxi-2H-furan-5-ona III-B (1,5 g, 7,7 mmoles, 90% en masa, pureza estimada basada en 19F-RMN) como un aceite marrón que se usó como tal en la siguiente etapa.

Rendimiento: 69%

LC/MS: [M-H]+ = 175,00

1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,00 (q, J = 2,9 Hz, 1H), 6,13 - 6,04 (m, 2H), 2,65 (dtd, J = 43,0, 11,4, 7,8 Hz, 1H), 2,26 - 2,01 (m, 1H).

B. Síntesis de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V

B.1 Síntesis de 2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol IV

A una solución de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (CAS: 15884-86-3, documento WO2011/047860, 1,0 eq., 7,0 g, 48,2 mmoles) en DMF (95 mL), a 100 °C, se añadió gota a gota una solución de bromoacetona (1,0 eq., 4,2 mL, 46,2 mmoles, pureza 97%) en DMF (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente (RT) y el disolvente se evaporó hasta sequedad bajo alto vacío para dar un aceite marrón. El crudo se purificó por cromatografía ultrarrápida Biotage Isolera Four (columna con 100 g de gel de sílice KP-SNAP en un gradiente de 0% a 10% de metanol en diclorometano durante 14 CV) y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para dar 2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol IV (5,0 g, 25,11 mmoles) como un sólido amarillo/naranja.

Rendimiento: 52%

LC/MS: [M+H]⁺ = 184,0

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 58,53 (m, 1 H), 4,76 (s, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,25 (d, J = 1,0 Hz, 3H).

B. 2 Síntesis de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V

Se mezclaron en 1,4-dioxano (12,5 mL) en un tubo sellado 2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol IV (1,0 eq., 5,0 g, 25,1 mmoles), paraformaldehído (6,0 eq., 4,50 g, 150 mmoles) y una solución acuosa de ácido clorhídrico (4N) (2 equiv., 12,55 mL, 50,2 mmoles). La mezcla se agitó a 100 °C durante 18 h, luego la mezcla bruta se calentó a RT y se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO³ hasta pH=6-7. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se evaporaron a sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida Biotage Isolera Four (columna KP-SNAP con 100 g de gel de sílice en un gradiente de 0% a 5% de metanol en diclorometano durante 12 Cv). ^{Las fracciones más puras se evaporaron a sequedad para dar [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-}b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V (4,0 g, 18,57 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 74%

LC/MS: [M+H]⁺ = 214,0

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d^e): 55,10 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,63 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,26 (s, 3H).

C. Síntesis de [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII

C.1. Síntesis de 6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VI

A una solución de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (CAS: 15884-86-3, 1,0 eq., 6,5 g, 45 mmoles) en DMF (100 mL), a 100 °C, se añadió gota a gota una solución de 3-bromo-1,1-difluoro-propan-2-ona (CAS: 883233-85-0, 1,05 eq., 8,1 g, 47 mmoles) en DMF (5 mL). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h y se comprobó la finalización mediante LC/MS. Se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO₃ y la capa orgánica se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (cinco veces), se secaron sobre MgSO₄, se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar un sólido marrón (7,6 g). El crudo se purificó por cromatografía ultrarrápida Biotage Isolera Four (columna KP-SNAP con 100 g de gel de sílice en un gradiente de 0% a 5% de metanol en diclorometano durante 12 CV) y las fracciones puras se combinaron y evaporaron a alto vacío para dar 6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VI (3,95 g, 17,8 mmoles) como un sólido naranja.

Rendimiento: 40%

LC/MS: [M+H]+ = 220,2

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,53 (t, J = 2,2 Hz, 1 H), 7,01 (t, J = 54,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 2H), 3,43 (s, 3H).

C. 2. Síntesis de [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII

Se mezclaron en un tubo sellado 6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VI (1,0 eq., 3,95 g, 18,0 mmoles), paraformaldehído (6,0 eq., 3,24 g, 108 mmoles) y una solución acuosa de ácido clorhídrico (2N) (0,9 equiv., 8,1 mL, 16,2 mmoles) en 1,4-dioxano (8 mL). La mezcla se agitó a 100 °C durante 3,5 h y la reacción se examinó mediante LC/MS. La mezcla bruta se calentó a RT y se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO₃ hasta pH=6-7. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (tres veces) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO₄, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El crudo se purificó por cromatografía ultrarrápida Biotage Isolera Four (columna KP-SNAP con 100 g de gel de sílice en un gradiente de 0% a 10% de metanol en diclorometano durante 15 CV) para dar un aceite amarillo (3 g) que se purificó por segunda vez por HPLC de fase inversa (KROMASIL-Eternity XT C¹⁸10 μm / gradiente de ACN/H²O/NH⁴OH de 20/80/0,1 a 50/50/0,1). Las fracciones más puras se evaporaron a sequedad para dar [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII (2 g, 8,02 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 45%

LC/MS: [M+H]+ = 250,2

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 57,11 (t, J = 53,6 Hz, 1 H), 5,47 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,84 (s, 2H), 4,79 (d, J = 5,5, Hz, 2H), 3,44 (d, J = 0,9 Hz, 3H).

D. [6-(1 -fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1 -b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII-A

D.1. Síntesis de 6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VI-A

A una solución de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (1 eq., 2,0 g, 13,7 mmoles) en DMF (30 mL) a 10 °C se añadió gota a gota una solución de 2-cloro-1-(1-fluorociclopropil)etanona (CAS: 151697-21-1, 1,05 eq., 1,97 g, 14,4 mmoles) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h, luego se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO³ y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (5 veces), se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar un aceite marrón. El crudo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa Gilson (YMC Triart C18 80x204 - 10 μm - 500 g -gradiente ACN/H²O 40/60 a 95/05) para dar 6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VI-A (1,16 g, 5,10 mmoles) como un sólido beige.

Rendimiento: 37%

LC/MS: [M+H]⁺ = 228,00

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d^e) 58,24 (d, J = 0,9 Hz, 1 H), 4,79 (s, 2H), 3,41 (s, 3H), 1,50 - 1,31 (m, 2H), 1,13 (dt, J = 8,4, 1,8 Hz, 2H) .

D.2. Síntesis de [6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII-A

A una solución de 6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol (VI-A, 1 eq., 395 mg, 1,74 mmoles) y paraformaldehído (6 eq., 312,8 mg, 10,43 mmoles) en 1,4-dioxano (1,7 mL) se añadió ácido clorhídrico (4 eq., 1,82 g, 6,95 mmoles, 4 mol/L) y la mezcla se agitó a 100 °C durante 1 h. Se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO³ y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar un aceite marrón que se purificó por SFC (PREP 600, Columna P4VP 50x174 - 5 μm - 200 g con MeOH al 5% como codisolvente) para dar [6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil )imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII-A (250 mg, 0,92 mmoles) como un sólido beige.

Rendimiento: 53%

LC/MS: [M+H]+ = 258,02.

Ejemplos

Síntesis de 1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 1

1.1 Síntesis de 2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VIII.

Se añade 3-bromo-1,1,1-trifluoroacetona (CAS: 431-35-6, 478 g, 2,5 moles, 1,05 eq) sobre una suspensión de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (CAS: 15884-86-33, 46 g, 2,4 moles, 1 eq) en 1,2-dimetoxietano (6 L) a 20 °C. La mezcla de reacción se calienta a 80 °C hasta conversión máxima (<24 h). Se añade agua (4 L) a la mezcla de reacción a 32 °C y el compuesto esperado cristaliza fuera de la mezcla de reacción. La suspensión cristalina se enfría a 10 °C para completar el procedimiento de cristalización, se filtra y el precipitado cristalino se lava con agua (1,5 L) para proporcionar 266 g de 2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2],1-b][1,3,4]tiadiazol VIII puro.

Rendimiento: 47%.

LC-MS (MH⁺): 238.

1.2 Síntesis de [2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol IX.

Se diluyen 2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol VIII (10 g, 42,16 mmoles, 1 eq), formaldehído (16 g, 421,6 mmoles, 10 eq) y ácido clorhídrico (37%, 8,2 mL, 2 eq) en sulfolano (250 mL). La mezcla de reacción se calienta a 110 °C durante la noche. Se añade agua (500 mL) y la mezcla se calienta a 50 °C durante 2 h. A continuación, el disolvente se elimina a presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente; eluyente: CH²Cl²/MeOH/NH⁴ÜH de 100/0/0 a 99/1/0,1) para dar 6,5 g de [2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol IX como un sólido amarillo.

Rendimiento: 58%.

LC-MS (MH⁺): 268.

1.3 Síntesis de 5-(azidometil)-2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol X.

Se añaden sucesiva y lentamente a 0 °C N,N-diisopropiletilamina (3,22 g, 24,88 mmoles, 5 eq) y cloruro de metanosulfonilo (0,855 g, 7,47 mmoles, 1,5 eq) a una solución de [2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol IX (1,33 g, 4,98 mmoles, 1 eq) en diclorometano (30 mL). Se añade azida de sodio (0,485 g, 7,47 mmoles, 1,5 eq) en suspensión en DMF (5 mL) a 0 °C, luego se calienta a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agita durante la noche. Después de la hidrólisis (H²O) y extracción con éter dietílico, las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgSÜ⁴ , se filtran y se evaporan a presión reducida para dar 1,45 g de 5-(azidometil)-2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol X.

Rendimiento: 100%.

LC-MS (MH⁺): 293.

Se prepara 5-(azidometil)-2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XI según el mismo procedimiento a partir de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V.

Rendimiento: 62%

LC-MS (MH⁺): 239.

1.4 Síntesis de 1 -[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XII.

Se añade trifenilfosfina (1,31 g, 4,98 mmoles, 1 eq) a temperatura ambiente a una suspensión de 5-(azidometil)-2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4] tiadiazol X (1,45 g, 4,98 mmoles, 1 eq) en THF/H²O (18mL/2mL). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 60 h. El disolvente se evapora a presión reducida, se agrega agua al residuo, la solución se acidifica a pH 2 con HCl acuoso 5N, luego se extrae con Et²O (1 x 50mL). La capa acuosa se basifica (pH 8) mediante la adición de una solución acuosa de Na²CO³ y se extrae con diclorometano (2 x 50 mL), las capas orgánicas acumuladas se secan sobre MgSO⁴ , se filtran y se evaporan a presión reducida para dar 1,16 g de 1 -[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XII.

Rendimiento: 88%.

LC-MS (MH⁺): 267.

Se prepara [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XIII según el mismo procedimiento a partir de 5-(azidometil)-2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XI. La purificación de la mezcla bruta se realizó mediante HPLC preparativa de fase inversa (KROMASIL-Eternity XT C¹⁸ 10 ^m / gradiente de ACN/H²O/NH⁴OH de 20/80/0,1 a 95/5/0,1).

Rendimiento: 74%.

LC-MS (MH⁺): 213

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 54,79 (s, 2H), 3,88 (s, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,24 (s, 3H).

1.5 Síntesis de 1 -[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 1

Se disuelven en metanol seco (3 mL) 2-hidroxi-3-propil-2H-furano-5-ona III-A (CAS: 78920-10-2, 160,8 mg, 1,127 mmoles, 1 eq.) y 1-[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XII (300 mg, 1,127 mmoles, 1 eq.) y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3 h30, luego se enfría a 0 °C. Se añade borohidruro de sodio (42,8 mg, 1,127 mmoles, 1 eq.) y la reacción se agita a 0 °C durante 1 h. Se añaden 0,5 mL de ácido acético y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se evapora el disolvente a presión reducida, se añaden al residuo agua y diclorometano y se extrae la mezcla tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgSO⁴ , se filtran y se evaporan a presión reducida. El residuo (327 mg) se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (CH²Cl²/MeOH/NH⁴OH 99/1/0,1) y se recristalizó adicionalmente en heptano/éter dietílico (80/20) para producir 127,6 mg de 1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 1 pura.

Rendimiento: 30%.

LC-MS (MH⁺): 375

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 55,71 (s, 1 H), 4,82 (s, 2 H), 4,75 (s, 2 H), 3,80 (s, 2 H), 3,35 (s, 3 H ), 2,19 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 1,40 (m, 2 H), 0,79 (t, J = 7,3 Hz, 3 H).

Se prepara 1 -[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona 2 según el mismo procedimiento a partir de 2-hidroxi-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-furan-5-ona II.

Rendimiento: 30%

LC-MS (MH⁺): 415

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 56,09 (s, 1 H), 4,95 (s, 2 H), 4,82 (s, 2 H), 4,00 (s, 2 H), 3,55 (q, 2 H), 3,43 (s, 3 H).

Se prepara 1 -[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropilo)-2H-pirrol-5-ona 3 según el mismo procedimiento a partir de 2-hidroxi-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-furan-5-ona III.

Rendimiento: 34%

LC-MS (MH⁺): 429

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d^s ): 55,95 (s, 1H), 4,92 (s, 2H), 4,82 (s, 2H), 3,94 (s, 2H), 3,45 (s, 3H), 2,45 (m, 4H).

Se prepara 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 4 según el mismo procedimiento a partir de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XIII y 2-hidroxi-3-propil-2H-furan-5-ona III-A (CAS: 78920-10-2).

Rendimiento: 30%

LC/MS: [M+H]⁺ = 321

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 55,78 (s, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,72 (s, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,27 (d, J = 4,1 Hz, 5H), 1,48 (h, J = 7,4 Hz, 2H), 0,87 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

Síntesis de 1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 5

2.1 Síntesis de [5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-il]carbamato de terc-butilo XIV.

A una suspensión de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (CAS: 15884-86-33, 100 g, 0,69 moles, 1 eq) en diclorometano (1 L) a temperatura ambiente se añaden, sucesivamente y cada uno en una porción, dicarbonato de diterc-butilo (132 g, 0,76 moles, 1,1 eq) y N,N-dimetilaminopiridina (8,35 g, 0,069 moles, 0,1 eq). Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se lava con HCl 1N (pH 5) para eliminar la N,N-dimetilaminopiridina. El disolvente se elimina a presión reducida y el residuo se recristaliza en éter diisopropílico para proporcionar 148,9 g de [5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-il]carbamato de terc-butilo XIV puro.

Rendimiento: 88%.

LC-MS (MH⁺): 246.

2.2 Síntesis de ácido {2-[(terc-butoxicarbonil)imino]-5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-3(2H)-il}acético XV.

Se añade ácido yodoacético (409,3 g, 2,2 moles, 1,5 eq) en una porción a una solución de [5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-il]carbamato de terc-butilo XIV (360 g, 1,47 moles, 1 eq) en tetrahidrofurano (3 L) a temperatura ambiente. Luego se agrega hidruro de sodio (52,8 g, 2,2 moles, 1,5 eq) en porciones, en 30 minutos, a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calienta a 60 °C durante la noche y el disolvente se evapora a presión reducida. Se agrega agua al residuo, la solución se acidifica a pH=2 con HCl acuoso 6N, luego se extrae con CH²G ². La capa orgánica se lava con tiosulfato de sodio acuoso al 10% y se evapora a sequedad para proporcionar 455,7 g de {2-[(tercbutoxicarbonil)imino]-5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-3(2H)-il}ácido acético XV que se utiliza directamente en la siguiente etapa sin más purificación.

Rendimiento: 90%.

LC-MS (MH⁺): 304.

2.3 Síntesis de 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XVI.

A ácido {2-[(terc-butoxicarbonil)imino]-5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-3(2H)-il}acético XV (418 g, 1,38 moles, 1 eq) en acetonitrilo (2,5 l) se añaden a temperatura ambiente sucesiva y lentamente trietilamina (278,9 g, 2,76 moles, 2 eq), luego oxicloruro de fósforo (633,9 g, 4,13 moles, 3 eq). La mezcla de reacción se calienta a 80 °C durante una hora. Una vez completada la reacción, se añade lenta y cuidadosamente agua (2,2 L) a 50 °C. La mezcla de reacción se extrae con diclorometano (2 x 1,2 L), las capas orgánicas combinadas se lavan con una solución acuosa de NaOH/NaCl (1,4 L de solución saturada de NaCl 400 mL de NaOH 2N), se secan sobre MgSO⁴ , se filtran y condensan a presión reducida. El residuo se recristaliza en acetonitrilo/agua (1/1) para dar 99,8 g de 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XVI puro.

Rendimiento: 36%.

LC-MS (MH⁺): 204/206.

2.4 Síntesis de 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-carbaldehído XVII.

Se añade muy lentamente oxicloruro de fósforo (2,75 mL, 3 eq) a dimetilformamida (5 mL) enfriada a 0 °C. La temperatura sube a 50 °C. La mezcla de reacción se calienta a 60 °C, luego se añade en porciones 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XVI (2 g, 9,82 mmoles, 1 eq) durante 2,5 h. La mezcla de reacción se vierte sobre una mezcla de hielo/agua. El precipitado se filtra y se lava con agua. El residuo se seca durante la noche a 40 °C bajo presión reducida para producir 1,8 g de 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-carbaldehído XVII como un sólido.

Rendimiento: 79%.

LC-MS (MH+): 232/234.

2.5 Síntesis de [6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]-metanol XVIII.

Se disuelve 6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-carbaldehído XVII (2,97 g, 12,94 mmoles, 1 eq) en etanol (80 mL), se enfría a 0°C y se añade en porciones borohidruro de sodio (578 mg, 15,53 mmoles, 1,2 eq) a 0 °C. La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente, luego se enfría a 0 °C y se añade una solución acuosa saturada de NH4Cl (100 mL). El disolvente orgánico se evapora a presión reducida y el precipitado se filtra, se seca al vacío a 20° C para dar 1,99 g de [6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4 ]tiadiazol-5-il]metanol XVIII.

Rendimiento: 66%.

LC-MS (MH+): 234/236.

2.6 Síntesis de 5-(azidometil)-6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XIX.

Se añaden N,N-diisopropiletilamina (10,7 mmoles, 5 eq) y cloruro de metanosulfonilo (0,368 g, 3,21 mmoles, 1,5 eq) sucesiva y lentamente a 0 °C a una solución de [6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol XVIII (0,5 g, 2,14 mmoles, 1 eq) en diclorometano (12,5 mL). Se añade azida de sodio (0,209 g, 3,21 mmoles, 1,5 eq) en suspensión en DMF (5 mL) a 0 °C, luego se calienta a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agita durante la noche. Después de la hidrólisis (H²O) y extracción con éter dietílico, las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgSO₄, se filtran y se evaporan a presión reducida para dar 434 mg de 5-(azidometil)-6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XIX que se utiliza en la siguiente etapa sin más purificación.

Rendimiento: 78%

LC-MS (MH+): 259/261.

2.7 Síntesis de [6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XX

Se añade trifenilfosfina (0,438 g, 1,68 mmoles, 1 eq) a temperatura ambiente a una suspensión de 5-(azidometil)-6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol XIX (0,434 g, 1,68 mmoles, 1 eq) en THF/H²O (7,5 mL/0,75 mL). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 15 h. El disolvente se evapora a presión reducida, se agrega agua al residuo, la solución se acidifica a pH 2 con HCl acuoso 5N, luego se extrae con Et²O (1 x 50mL). La capa acuosa se basifica (pH 8) mediante la adición de una solución acuosa Na2CO3 y se extrae con diclorometano (2 x 50 mL), las capas orgánicas acumuladas se secan sobre MgSO₄, se filtran y se evaporan a presión reducida para dar 0,34 g de 1-[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XX.

Rendimiento: 87%.

LC-MS (MH+): 233/235.

2.8 Síntesis de 1 -[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona 5

Se disuelven 2-hidroxi-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-furan-5-ona (340 mg, 1,87 mmoles, 1 eq.) y 1-[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XX (434 mg, 1,87 mmoles, 1 eq.) en metanol seco (10 mL) y la mezcla se agita durante la noche a temperatura ambiente, luego se enfría a 0 °C. Se añade borohidruro de sodio (77 mg, 2,03 mmoles, 1,08 eq.) y la reacción se agita a 0 °C durante 1 h. Se añade 1 mL de ácido acético y se agita la mezcla 1 h a temperatura ambiente. Se evapora el disolvente a presión reducida, se añaden al residuo agua y diclorometano y se extrae la mezcla tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgSO₄, se filtran y se evaporan a presión reducida. El residuo (800 mg) se purifica por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (CH²Cl²/MeOH 98/2) y se recristalizó adicionalmente en acetonitrilo para producir 119 mg de 1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 5 pura.

Rendimiento: 16%.

LC-MS (MH⁺): 381/383

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 56,08 (s, 1H), 4,80 (s, 4H), 4,02 (s, 2H), 3,55 (q, 2H), 3,40 (s, 3H).

Se prepara 1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 6 según el mismo procedimiento a partir de 2-hidroxi-3-propil-2H-furan-5-ona III-A (CAS: 78920-10-2).

Rendimiento: 50%

LC-MS (MH⁺): 341/343

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 55,78 (s, 1 H), 4,83 (s, 2H), 4,77 (s, 2H), 3,91 (s, 2H), 3,43 (s, 3H), 2,28 (dd, 2H), 1,48 (m, 2H ), 0,87 (t, 3H).

Se prepara 1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 7 según el mismo procedimiento a partir de 2-hidroxi-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-furan-5-ona III.

Rendimiento: 24%.

LC-MS (MH⁺): 395/397

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 55,94 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 4,75 (s, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,43 (q, 2H), 3,56 (s, 3H). Síntesis de 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 8

3.1. Síntesis de sal de hexametilentetramina XXI

Se añadió cloruro de tionilo (1,2 eq., 287 mg, 2,4 mmoles) a una mezcla de [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol VII (1,0 eq., 500 mg, 2,0 mmoles) en diclorometano (10 mL) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 10 min y luego a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla bruta se evaporó a sequedad y la cola obtenida se solubilizó en diclorometano (10 mL) antes de la adición de hexametilentetramina (3,0 eq., 852 mg, 6,0 mmoles). Luego, la reacción se agitó a 35 °C durante 2 h, se enfrió hasta 0 °C, se filtró y se lavó con diclorometano enfriado, para dar XXI (900 mg, 1,87 mmoles, pureza estimada 85%) como un sólido beige que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Rendimiento: 93%

LC/MS: [M+H]+ = 372.

Se prepara sal de hexametilentetramina XXIII según el mismo procedimiento a partir de [2-(metoximetil)-6-metilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V .

Rendimiento: cuantitativo.

LC-MS (MH+): 336.

3.2. Síntesis de hidrocloruro de [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XXIII A una mezcla de sal de hexametilentetramina XXI (1,0 eq., 818 mg, 1,70 mmoles, pureza estimada 85%) en metanol (5 mL) se añadió ácido clorhídrico (4,5 eq., 914 mg, 9,0 mmoles) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a 45 °C durante 1 hora y la mezcla se filtró. El filtrado obtenido se evaporó luego a sequedad para dar hidrocloruro de [6­ (difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XXIII (900 mg, 1,74 mmoles, pureza estimada 55%) como un sólido beige impuro que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Rendimiento: cuantitativo

LC/MS: [M+H]+ = 249.

Se prepara hidrocloruro de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XXIV según el mismo procedimiento a partir de la sal de hexametilentetramina XXII.

Rendimiento: 55%

LC/MS: [M+H]⁺ = 213.

3.3. Síntesis de 1 -[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 8 Una mezcla de hidrocloruro de [6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XXIII (1 eq., 210 mg, 0,48 mmoles, pureza estimada 65%), 2-hidroxi-3-propil-2H-furan-5-ona III-A (3,0 eq, 241 mg, 1,44 mmoles, pureza 85% por ¹H-RMN) e hidróxido de sodio (2,0 eq., 39 mg, 0,96 mmoles) en metanol (2 mL) se agitó a RT durante 2 h. A la solución enfriada a 0 °C se añadió borohidruro de sodio (2 eq., 36 mg, 0,96 mmoles) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Luego se añadió ácido acético (5,0 eq., 144 mg, 2,4 mmoles) y la mezcla se agitó a RT durante 3 h. La mezcla bruta se evaporó a sequedad para dar una cola naranja que se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (KROMASIL-Eternity XT C¹⁸10 ^ / gradiente de ACN/H²O/NH⁴OH de 30/70/0,1 a 60/40/0,1), para dar 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona 8 (42 mg, 0,12 mmoles) como un sólido beige.

Rendimiento: 24%

LC/MS: [M+H]⁺ = 357

¹H-RMN (400 MHz, CDCta) 56,88 (t, J = 54,5 Hz, 1H), 5,85 (p, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,00 (s, 2H), 4,74 (s, 2H), 3,80 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 3,50 (d, J = 1,0 Hz, 3H), 2,28 (td, J = 7,6, 1,4 Hz, 2H), 1,67-1,44 (m, 4H), 0,94 (dd, J = 7,8, 6,8 Hz, 3H). Síntesis de 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 9

4.1. Síntesis de (4S)-2-oxo-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo XXV

A una mezcla de (4S)-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona (WO2011/047860, CAS1444464-14-5, 1 eq., 30 g, 179 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (1,5 eq., 33 g, 267 mmoles) en acetonitrilo (900 mL), a 0 °C, se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (1,2 eq., 48 g, 213 mmoles). A continuación, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 4 h. El disolvente se evaporó al vacío y se añadió agua a la mezcla obtenida. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 veces) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se evaporaron hasta sequedad para dar un aceite amarillo.

La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase normal Biotage Isolera Four (SNAP SiO²100 g en un gradiente de 0% a 5% de metanol en DCM durante 12 CV). Las fracciones más puras se evaporaron hasta sequedad para dar (4S)-2-oxo-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo XXV (24,5 g, 91,5 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 51%

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d^e) 53,83 (dd, J = 10,4, 7,7 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 10,4, 8,3 Hz, 1H), 2,67-2,52 (m, 2H), 2,49-2,31 (m, 3H), 1,44 (s, 9H).

Los siguientes compuestos se prepararon según el mismo procedimiento:

4.2. Síntesis de (4S)-2-oxo-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo XXVI

A una solución de (4S)-2-oxo-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo XXV (1 eq., 10 g, 37,4 mmoles) en tetrahidrofurano (250 mL), a -78 °C, se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (2 eq., 52 mL, 75,4 mmoles, 1,45 mol/L) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. Luego, se añadió cloruro de fenilselenenilo (1,1 eq., 8,0 g, 41,7 mmoles) en tetrahidrofurano (85 mL) a -78 °C y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. Luego, se agregó agua a la solución agitada y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 veces), se secó sobre MgSÜ4, se filtró y se evaporó hasta sequedad para dar un aceite marrón (15 g) que se purificó por cromatografía ultrarrápida de fase normal Biotage Isolera Four (SNAP Siܲ340 g en un gradiente de 10% a 20% de acetato de etilo en heptano durante 12 CV). Las fracciones más puras se evaporaron hasta sequedad para dar (4S)-2-oxo-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo XXVI (6,2 g, 14 mmoles) como un aceite amarillo claro.

Rendimiento: 38%

LC/MS: [M+H]+ = 446,02.

Los siguientes compuestos se prepararon según el mismo procedimiento:

4.3. Síntesis de (4S)-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVII

A una mezcla de (4S)-2-oxo-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo XXVI (1 eq., 6,2 g, 15 mmoles) en diclorometano (150 mL), a 0 °C, se añadió ácido trifluoroacético (14 eq., 15 mL, 200 mmoles) y la mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. La mezcla se evaporó hasta sequedad, se diluyó con agua y se neutralizó con NaHCÜ3 sólido hasta pH=6-7. La capa orgánica se extrajo con acetato de etilo (3 veces), se secó sobre MgSÜ4, se filtró y se evaporó hasta sequedad para dar (4S)-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVII (4,5 g, 14 mmoles) como un sólido blanco. El producto se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación.

Rendimiento: 95%

LC/MS: [M+H]+ = 324,0.

Los siguientes compuestos se prepararon según el mismo procedimiento:

4.4. Síntesis de (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVIII

Una mezcla de ácido p-toluenosulfónico monohidrato (0,7 eq., 1,3 g, 6,8 mmoles), [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanol V (1 eq., 2 g, 9,37 mmoles) y 3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVII (1 eq., 3 g, 9,31 mmoles) en sulfolano (95 mL) se agitó a 130 °C durante 16 h. La mezcla se vertió en agua, se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO₃ hasta pH=6-7. La capa orgánica se extrajo con MTBE (2 veces). La capa orgánica combinada se lavó con agua (3 veces), se secó sobre MgSO₄, se filtró y se evaporó hasta sequedad para dar un aceite marrón. El aceite marrón se purificó mediante LC preparativa YMC Triart C18 (80x204 - 10 gm - 500 g en un gradiente de 60% a 90% de ACN en agua) para dar (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVIII (450 mg, 0,82 mmoles) como un aceite marrón.

Rendimiento: 9%

LC/MS: [M+H]+ = 519,02.

Los siguientes compuestos se prepararon según el mismo procedimiento:

4.5. Síntesis de 1 -[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 9

A una solución de (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-fenilselanil-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona XXVIII (1 eq., 430 mg, 0,8311 mmoles) en una mezcla de metanol (5,5 mL) y agua (1,1 mL), se añadió, a temperatura ambiente, peryodato de sodio (9 eq., 1,6 mg, 7,48 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A continuación, se añadió a la mezcla una solución acuosa saturada de NH⁴Cl y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). La capa orgánica combinada se secó con MgSO⁴ , se filtró y se evaporó hasta sequedad para dar un aceite amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en condiciones neutras (columna C18 SNAP con 30 g de gel en un gradiente de 5% a 95% de ACN en agua durante 12 CV). Las fracciones más puras se liofilizaron directamente para dar 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 9 (71 mg, 0,1970 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 23%

LC/MS: [M+H]+ = 361,1

1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 56,08 (s, 1H), 4,77 (s, 4H), 3,99 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 3,60-3,47 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Los siguientes compuestos se han preparado según el mismo procedimiento:

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 10 se ha preparado a partir de XXVIII-A.

Rendimiento: 45%

LC/MS: [M+H]⁺ = 397,06

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,19 (t, J = 53,4 Hz, 1H), 6,10 (s, 1H), 4,93 (s, 2H), 4,81 (s, 2H), 4,03 (d, J = 1,7 Hz, 2H), 3,55 (qd, J = 12,2, 11,3, 1,9 Hz, 2H), 3,42 (s, 3H).

1-[[6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona 11 se ha preparado a partir de XXVIII-B.

Rendimiento: 9%

LC/MS: [M+H]⁺ = 405,05

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,08 (s, 1H), 4,94 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 4,78 (s, 2H), 3,99 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 3,62-3,47 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 1,47-1,33 (m, 2H), 1,18 (td, J = 8,4, 6,0 Hz, 2H).

3-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 12 se ha preparado a partir de XXVIII-C.

Rendimiento: 9%

LC/MS: [M+H]⁺ = 431,0

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,12 (s, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,81 (s, 2H), 4,05-3,98 (m, 2H), 3,71 (td, J = 13,9, 1,2 Hz, 2H), 3,42 (s, 3H).

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 13 se ha preparado a partir de XXVIII-D.

Rendimiento: 53%

LC/MS: [M+H]⁺ = 375,0

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 5,91 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,72 (s, 2H), 3,92 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,53 (d, J = 5,6 Hz, 4H), 2,27 (s, 3H).

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropilo)-2H-pirrol-5-ona 14 se ha preparado a partir de XXVIII-E.

Rendimiento: 52%

LC/MS: [M+H]⁺ = 411,07

¹H-RMN (500 MHz, DMSO-d₆) δ 7,17 (t, J = 53,4 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H), 4,89 (s, 2H), 4,82 (s, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,45 (s, 3H), 2,54 (d, J = 5,4 Hz, 4H).

3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 15 se ha preparado a partir de ^x X^v III-F.

Rendimiento: 41%

LC/MS: [M+H]⁺ = 410,9

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,00 (s, 1H), 4,94 (s, 2H), 4,82 (s, 2H), 3,97 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 3,43 (s, 3H), 3,06 (t, J = 16,8 Hz, 2H), 1,62 (t, J = 18,9 Hz, 3H).

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2-difluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 16 se ha preparado a partir de XXVIII-G.

Rendimiento: 14%

LC/MS: [M+H]⁺ = 396,0

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,17 (t, J = 53,4 Hz, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,94 (s, 2H), 4,82 (s, 2H), 3,97 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 3,43 (s , 3H), 3,06 (t, J = 16,8 Hz, 2H), 1,62 (t, J = 18,9 Hz, 3H).

Síntesis de 3-[(1 R)-2,2-difluorociclopropil]-1 -[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 17A y 3-[(1 S)-2,2-difluorociclopropil]-1 -[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1 -b ][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 17B

5.1. Síntesis de 3-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 17

A una solución de [2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metanamina XII (1 eq., 700 mg, 2.44 mmoles, 93% en masa) en 2-propanol (12 mL), a temperatura ambiente, se añadió 3-(2,2-difluorociclopropil)-2-hidroxi-2H-furan-5-ona III-B (1 eq., 500 mg, 2,44 mmoles, 80% en masa) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se añadió a la mezcla a temperatura ambiente una solución de borohidruro de sodio (1 eq., 92 mg, 2,44 mmoles) en agua (3,5 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se añadió a la mezcla una cantidad adicional de borohidruro de sodio (1 eq., 92 mg, 2,44 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. Se añadió una tercera cantidad de borohidruro de sodio (1 eq., 92 mg, 2.44 mmoles) seguida de ácido acético (35 eq., 5 mL, 87,08 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO₃ a la mezcla enfriada a 0 °C y la capa acuosa se extrajo con MTBE (2 veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO₄, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad (máximo 25 °C) para dar un aceite marrón. El aceite marrón se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en modo neutro (columna SNAP C18 de 60 g con un gradiente del 5% al 95% de ACN durante 10 CV) y las fracciones más puras se liofilizaron para dar 3-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 17 (570 mg, 1,35 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 55%

LC/MS: [M+H]+ = 409,1

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 56,02 (s, 1H), 5,03-4,86 (m, 2H), 4,83 (s, 2H), 3,97 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 3,43 (s, 3H), 2,77 (td, J = 12,0, 8,0 Hz, 1H), 2,09-1,82 (m, 2H).

La mezcla de enantiómeros (105 mg) se separó mediante SFC quiral (AS 50x265 - 5 μm - 300 g * EtOH al 10%, 360 mL/min., 35 °C) para dar 3-[2,2-difluorociclopropil]-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 17-A, eluido primero, 27 mg, 0,066 mmoles) y 3-[2,2-difluorociclopropil]-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 17-B, segundo eluido, 27 mg, 0,066 mmoles).

SFC quiral analítica (columna AS, 3 mL/min., 30 °C, MeOH al 20%, 100 bares): enantiómero 17-A: 1,19 min, enantiómero 17-B: 1,63 min.

Tras la separación, ambos enantiómeros se volvieron a purificar mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en modo neutro (columna SNAP C18 12 g con un gradiente de 5% a 95% de ACN en agua durante 10 CV) y se liofilizaron directamente.

Los siguientes compuestos se han preparado según el mismo procedimiento:

La 3-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 18 se ha preparado a partir de XIII y III-B.

Rendimiento: 50%

LC/MS: [M+H]⁺ = 355,04

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 56,00 (s, 1H), 4,76 (d, J = 13,0 Hz, 4H), 3,96 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,76 (td, J = 12,1,8,1 Hz, 1 H), 2,28 (s, 3H), 2,08 - 1,81 (m, 2H).

La mezcla de enantiómeros (110 mg) se separó mediante SFC quiral (AS 50x265 - 5 μm - 300 g * MeOH al 10%, 360 mL/min, 35 °C) para dar 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 18-A, eluido primero, 15 mg, 0,042 mmoles) y 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 18-B, segundo eluido, 19 mg, 0,053 mmoles).

SFC quiral analítica (columna AS, 3 mL/min, 30 °C, MeOH al 20%, 100 bares): enantiómero 18-A: 1,04 min, enantiómero 18-B: 1,31 min.

Tras la separación, ambos enantiómeros se purificaron mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en modo neutro (columna SNAP C18 12g con un gradiente de 5% a 95% de ACN en agua durante 10 CV) y se liofilizaron directamente.

La 3-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 19 se ha preparado a partir de XXIII (como base libre) y III-B.

Rendimiento: 11%

LC/MS: [M+H]+= 391,06

1H-RMN (400 MHz, CDCta) 56,87 (t, J = 54,6 Hz, 1 H), 5,99 (s, 1 H), 5,01 (s, 2H), 4,74 (s, 2H), 4,01-3,78 (m, 2H), 3,51 (s, 3H) , 2,42 (td, J = 11,7, 7,8 Hz, 1 H), 1,87 (tdd, J = 11,7, 8,0, 5,3 Hz, 1H), 1,51 (dp, J = 12,5, 4,4, 4,0 Hz, 1 H). La mezcla de enantiómeros (138 mg) se separó mediante SFC quiral (AS 50x265 - 5 μm - 300 g * EtOH al 15%, 360 mL/min, 35 °C) para dar 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 19-A, eluido primero, 15 mg, 0,038 mmoles) y 3-[2,2-difluorociclopropil]-1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona (enantiómero 19-B, segundo eluido, 19 mg, 0,048 mmoles).

SFC quiral analítico (columna AS, 3 mL/min, 30 °C, EtOH al 20%, 100 bares): enantiómero 19-A: 1,39 min, enantiómero 19-B: 1,87 min.

Tras la separación, ambos enantiómeros se purificaron mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en modo neutro (columna SNAP C18 12 g con un gradiente de 5% a 95% de ACN en agua durante 10 CV) y se liofilizaron directamente.

La 3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona 20 se ha preparado según el mismo método a partir de XIII y II-A

Rendimiento: 16%

LC/MS: [M+H]+ = 357,12

1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 55,99 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 5,6 Hz, 3H), 3,99 - 3,93 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 3,06 (t, J = 16,9 Hz) , 2H), 2,28 (s, 3H), 1,62 (t, J = 18,9 Hz, 3H).

Síntesis de 1 -[[2-(hidroximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 21

A una mezcla de 1 -[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 13 (1 eq., 100 mg, 0,26 mmoles) en diclorometano (1,5 mL) se añadió a temperatura ambiente tribromuro de boro (5 eq., 1,3 mL, 1,3 mmoles) y luego la mezcla se agitó durante 1 h. Se añadió lentamente metanol a la mezcla (reacción exotérmica), luego se evaporaron los disolventes hasta sequedad para dar un aceite amarillo. El aceite amarillo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa Biotage Isolera Four en condiciones neutras (SNAP C18 30 g en un gradiente de 10% a 95% de ACN en agua). Las fracciones más puras se combinaron y liofilizaron para dar 1-[[2-(hidroximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona 21 (26 mg, 0,07 mmoles) como un sólido blanco.

Rendimiento: 27%

LC/MS: [M+H]⁺ = 361,08

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,34 (s, 1H), 5,92 (t, J = 1,4 Hz, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,71 (s, 2H), 3,91(d, J = 1,6 Hz, 2H), 2,59 - 2,52 (m, 4H), 2,27 (s, 3H).

La 1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropilo)-2H-pirrol-5-ona 22 se ha preparado según el mismo método a partir de 14.

Rendimiento: 6%

LC/MS: [M+H]⁺ = 396,99

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,16 (t, J = 53,4 Hz, 1 H), 6,47 (s, 1H), 5,94 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,82 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,95 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 2,54 (d, J = 5,7 Hz, 4H).

La 1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetilo)-2H-pirrol-5-ona 23 se ha preparado según el mismo método a partir de 10.

Rendimiento: 14%

LC/MS: [M+H]+ = 383,03

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,17 (t, J = 53,4 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,82 (s, 2H), 4,08 -3,92 (m, 2H) , 3,60 - 3,47 (m, 2H).

La tabla (I) indica el nombre IUPAC (o el nombre generado a partir de Accelerys Draw 4.0 o Biovia Draw 16.1) del compuesto, el pico de iones observado en espectroscopia de masas y la descripción de 1H-RMN.

Tabla I: Ejemplos

Ensayos in vitro e in vivo

1. Ensayos de unión a SV2A y SV2C

Las proteínas SV2A y SV2C de ser humano se expresaron en células de riñón embrionario de ser humano (HEK). Las preparaciones de membrana HEK SV2A y HEK SV2C se prepararon como se describe en Gillard et al (Eur. J. Pharmacol. 2006, 536, 102-108). Para medir la afinidad de los compuestos no marcados, se realizaron experimentos de competición de la siguiente manera: las membranas que expresan proteínas SV2 (de 5 a 15 μg de proteínas por ensayo) se incubaron durante 60 minutos a 37 °C con [3H]-2-[4-(3-azidofenil)-2-oxo-1-pirrolidinil]butanamida (5 nM) y/o [3H]-4R-(2-cloro-2,2-difluoroetil)-1 -{[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1 -b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil}pirrolidin-2-ona (25 nM) en 0,2 mL de tampón Tris-HCl 50 mM (pH 7,4) que contenía MgCl² 2 mM, dimetilsulfóxido al 0,1% y diez concentraciones crecientes de compuesto de ensayo no marcado (0,1 nM a 10 μM). Al final del período de incubación, el radioligando unido a la membrana se recuperó mediante filtración rápida a través de filtros de fibra de vidrio GHC empapados previamente en polietilenimina al 0,1%. Las membranas se lavaron con al menos 4 veces el volumen de ensayo de tampón Tris HCl 50 mM enfriado con hielo (pH 7,4). Se secaron los filtros y se determinó la radiactividad por centelleo líquido. La etapa de filtración completa no superó los 10 segundos. Los valores de afinidad μlC50 medidos se corrigieron a pKi según Cheng y Prusoff (Biochem. Pharmacol. 1973, 22(23), 3099-3108).

Los compuestos de fórmula (I) según la invención típicamente muestran valores de pKi de SV2A de al menos 6,5 y valores de pKi de SV2C de al menos 6,0.

Los ejemplos 18-B, 21, 22 y 23 muestran valores de pKi de SV2A superiores a 6,5 e inferiores o iguales a 7,5. Los ejemplos 2, 5, 11, 18-A y 20 muestran valores de pKi de SV2A superiores a 7,5 e inferiores o iguales a 8,0. Los ejemplos 1, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-A, 17-B, 19-A y 19-B muestran valores de pKi de SV2A mayores que o iguales a 8,0 y menores a 8,5.

2. Modelos de convulsiones

En todos los experimentos se utilizan ratones NMRI macho (Charles River, Alemania) que pesan 22-32 g. Los animales se mantienen en un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 h con luces encendidas a las 6:00 am y se alojan a una temperatura mantenida entre 20-21 °C y con una humedad de aproximadamente 40%. Los ratones se alojan en grupos de 10 por jaula (Tipo III). Todos los animales tienen libre acceso a alimento y agua estándar en pelets antes de la asignación aleatoria a grupos experimentales de 10 ratones cada uno. Todos los experimentos con animales se realizan según las Reglas Nacionales sobre Experimentos con Animales y se llevan a cabo según las pautas de la directiva del Consejo de la Comunidad Europea 2010/63/EU. Un comité de ética local aprobó los protocolos experimentales.

6.1 Modelo de convulsiones de 6 Hz

El modelo de 6 Hz se realiza según un protocolo previamente descrito (Kaminski et al., Epilepsia (2004), 45, 864-867). Brevemente, la estimulación corneal (44 mA, pulsos rectangulares monopolares de 0,2 ms de duración a 6 Hz durante 3 s) se administra mediante un dispositivo de corriente constante (ECT Unit 57800; Ugo Basile, Comerio, Italia). Se coloca una gota de hidrocloruro de oxibuprocaína al 0,4% (Unicaine, Thea, Francia) en los ojos antes de la estimulación eléctrica. Durante la estimulación, los ratones se restringen manualmente y se liberan en la jaula de observación (38 x 26 x 14 cm) inmediatamente después de la aplicación de corriente. Las convulsiones a menudo son precedidas por un breve período (~2-3 s) de intensa agitación locomotora (carrera y saltos salvajes). Luego, los animales exhiben una postura "aturdida" asociada con el encabritamiento, movimientos automáticos de las extremidades anteriores y clonus, espasmos de las vibrisas y rabo en punta. Al final de la convulsión, los animales reanudan su comportamiento exploratorio normal. El criterio de valoración experimental es la protección contra la convulsión. Se considera que el animal está protegido si reanuda su comportamiento exploratorio normal dentro de los 7 s desde la estimulación.

Las actividades in vivo determinadas para los compuestos de ensayo están normalmente comprendidas entre 0,05 mg/kg y 10 mg/kg después de una sola dosificación IP.

6.2 Modelo de convulsiones de pentilenotetrazol (PTZ)

El pentilenotetrazol se utiliza en la dosis CD₉₇ previamente establecida de 89 mg/kg; una dosis convulsiva que induce convulsiones clónicas de las cuatro extremidades en el 97% de los ratones (Klitgaard y col., Eur. J. Pharmacol. (1998), 353, 191-206). Inmediatamente después de la inyección de pentilenotetrazol, los ratones se colocan individualmente en jaulas Perspex y se observa la presencia de convulsiones clónicas en las cuatro extremidades y extensión tónica de las patas traseras durante un período de 60 min.

Cuando se ensayan, las actividades in vivo determinadas para los compuestos de los Ejemplos adjuntos típicamente están comprendidas entre 0,5 mg/kg y 30 mg/kg después de una sola dosificación IP.

3. Ensayo de azamulina

Hepatocitos de ser humano crioconservados (grupo de 20 donantes, lote de BSU de Celsis/IVT/Bioreclamation) se descongelaron según la información del proveedor. La viabilidad (exclusión con azul de tripano) fue superior al 75%. Se realizaron preincubaciones (250 μL de suspensión de hepatocitos a 2x106 hepatocitos/mL) con medio de William, que contenía 2 mM de glutamina y 15 mM de Hepes, en placas de 48 pocillos a 37 °C, en una incubadora (CO² al 5%), bajo agitación suave (agitador vibratorio, Titramax 100, aprox. 300 rpm) durante 30 min. Después de la preincubación, se inició la incubación añadiendo a los hepatocitos 250 μL de medio de cultivo (véase la composición anterior) que contenía compuesto UCB (1 μM) o midazolam (control positivo) con o sin azamulina (6 μM - inhibidor específico de CYP3A4/5). Las concentraciones finales de compuesto UCB y azamulina en los incubados son 0,5 μM y 3 μM, respectivamente. Las suspensiones celulares se volvieron a homogeneizar rápidamente mediante dos pipeteos de entrada y salida. Después de 0, 30, 60, 120, 180 y 240 minutos de incubación, las reacciones se detuvieron transfiriendo 50 μL de incubados al pocillo apropiado de una placa de 96 pocillos que contenía 50 μL de acetonitrilo enfriado con hielo con ketoconazol 1 μM como patrón interno. Antes de cada muestreo, las células incubadas se vuelven a homogeneizar mediante 2 pipeteos de entrada y salida.

Una vez finalizada la incubación, las placas de 96 pocillos se centrifugan a unos 3700 rpm, 4 °C, durante 15 minutos. Se transfieren 50 μL de sobrenadantes a los pocillos de otras placas de pocillos profundos a los que se añaden 150 μL de H²O Millipore. Estas muestras se analizaron mediante micro UPLC/HR-MS para determinar la desaparición de los padres y la monitorización de la formación de metabolitos.

Se calculó la contribución de CYP3A4/5 conocida como fracción metabolizada por CYP3A4/5 (fm,cYP³A^4/5) para cada compuesto a partir de la relación entre CLint (basado en la desaparición del fármaco padre original) en ausencia y en presencia de azamulina, usando la siguiente ecuación:

FmCYP3A4/5 = 1-(CLint con azamulina/CLint sin azamulina)

Cuando se ensayó, la fracción metabolizada por CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) de los compuestos de los Ejemplos adjuntos está típicamente comprendida entre 0 y 45%.

Los ejemplos 5, 9, 13 y 16 muestran una fracción metabolizada por CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) comprendida entre 0 y 10%. Los ejemplos 1,3, 6, 7, 8, 10, 15 y 20 muestran una fracción metabolizada por CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) superior al 10% e inferior o igual al 20%. Los ejemplos 2, 3, 11, 12, 14, 17-A y 17-B muestran una fracción metabolizada por CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) superior al 20% e inferior o igual al 45%.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto según la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

donde

R1 es un alquilo C_1-4 o un cicloalquilo C_3-5, cualquiera de cuyos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes halógenos;

R2 es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente hidroxi o alcoxi;

R3 es un halógeno; o un alquilo C_1-4 o cicloalquilo C_3-4, cualquiera de cuyos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R2 es un alquilo C_1-4 sustituido por un sustituyente alcoxi.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R3 es un alquilo C_1-4 sustituido por uno o más átomos de halógeno.

4. Un compuesto según la reivindicación 1 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R1 es npropilo, 2,2-difluoropropilo, 3,3,3-trifluoropropilo, 2-cloro-2,2-difluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo o 2,2-difluorociclopropilo.

5. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R1 es 3,3,3-trifluoropropilo o 2,2-difluorociclopropilo.

6. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R2 es un hidroximetilo o un metoximetilo.

7. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R2 es un metoximetilo.

8. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R3 es un grupo metilo, difluorometilo, cloro o trifluorometilo.

9. Un compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde R3 es metilo o difluorometilo.

10. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en:

1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-cloro-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-propil-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(1-fluorociclopropil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona;

3-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona;

3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2-difluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 3R-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

3S-(2,2-difluorociclopropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3R-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona; 1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3S-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3R-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[6-(difluorometil)-2-(metoximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3S-[2,2-difluorociclopropil]-2H-pirrol-5-ona;

3-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-2H-pirrol-5-ona;

1-[[2-(hidroximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; 1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-pirrol-5-ona; y

1-[[6-(difluorometil)-2-(hidroximetil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-3-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-pirrol-5-ona.

11. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso como medicamento.

12. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto según las reivindicaciones 1 a 10, en combinación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso en el tratamiento de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular para las convulsiones refractarias.

14. Uso de un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la epilepsia, la epileptogénesis, los trastornos convulsivos, las convulsiones, en particular, para el tratamiento de las convulsiones refractarias.