ES2948919T3

ES2948919T3 - Forma cristalina de derivado de aminopirano sustituido

Info

Publication number: ES2948919T3
Application number: ES16877602T
Authority: ES
Inventors: Chen Zhang; Jianmin Wang
Original assignee: Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-12-25
Filing date: 2016-12-12
Publication date: 2023-09-21
Anticipated expiration: 2036-12-12
Also published as: EP3395819A1; US20180370980A1; CN107849051A; JP2019500371A; EP3395819B1; CN106916157A; TWI695004B; CN107849051B; TW201722960A; WO2017107791A1; US10221185B2; JP7014719B2; EP3395819A4; PT3395819T

Abstract

La presente invención se refiere a una forma cristalina de un compuesto de aminopirano sustituido y a una composición farmacéutica, un método de preparación y un uso del mismo en la preparación de un fármaco para el tratamiento de la diabetes tipo II. En particular, la presente invención se refiere a una forma cristalina IV de un compuesto como se muestra en la fórmula (I) y una composición farmacéutica, un método de preparación y un uso del mismo en la preparación de un fármaco para tratar la diabetes tipo II. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

d e s c r ip c ió n

Forma cristalina de derivado de aminopirano sustituido

Campo técnico

La presente invención se refiere a una forma cristalina de un derivado de aminopirano sustituido, a un método para la preparación del mismo, a una composición farmacéutica que comprende el mismo, y al uso del mismo en la fabricación de un inhibidor de la di-peptidil peptidasa IV (DPP-IV).

Antecedentes de la técnica

La di-peptidil peptidasa IV (DPP-IV, EC3.4.14.5) es una serina proteasa que escinde hidrolíticamente un dipéptido N-terminal del extremo N-terminal de un polipéptido que contiene L-prolina o L-alanina. Los inhibidores de la DPP-IV ejercen sus funciones potenciando la actividad de las incretinas, y son fármacos terapéuticos no insulínicos. Los inhibidores de DPP-IV no causan efectos adversos tales como aumento de peso corporal y edema.

La solicitud de patente PCT/CN2015/078923 describe un nuevo derivado de pirano (2R,3S,5R,6S)-2-(2,5-difluorofenil)-5-(2-(metilsulfonil)-pirrolo[3,4]pirazol-5(2H,4H,6H)-il)-6-(trifluorometil)tetrahidro-2H-piran-3-amina como se representa mediante la fórmula estructural (I) a continuación, denominado Compuesto A aquí. Esta estructura muestra una buena inhibición de la DPP-IV, y tiene potencial para prevenir y/o tratar la diabetes tipo II.

Sumario de la invención

Una realización de la presente invención proporciona la Forma cristalina IV del Compuesto A (2R,3S,5R,6S)-2-(2,5-difluorofenil)-5-(2-(metilsulfonil)-pirrolo[3,4]pirazol-5(2H,4H,6H)-il)-6-(trifluorometil)tetrahidro-2H-piran-3-amina, en la que el Compuesto A está representado por la fórmula estructural (I) siguiente:

en la que el patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma cristalina IV, medido usando radiación Cu-Ka, contiene picos de difracción característicos presentes en posiciones 20 de 9,2°±0,2°, 12,8°±0,2°, 16,2°±0,2°, 18,4°±0,2°, 20,5°±0,2° y 26,5°±0,2°.

La Forma cristalina IV según la presente invención tiene ventajas tales como fácil procesamiento y cristalización, fácil manipulación, buena estabilidad, alta biodisponibilidad, buena estabilidad a la presión, y fácil administración, haciéndola particularmente adecuada para la fabricación de diversas formas de dosificación.

La Forma cristalina IV según la presente invención exhibe ventajas farmacéuticas con respecto a la base libre amorfa del Compuesto A. En particular, la forma cristalina mejora la estabilidad química y física, y es más adecuada para la fabricación de formas de dosificación sólidas que comprenden el ingrediente farmacológicamente activo.

La forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 5% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 10% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 15% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 20% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 25% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 30% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 35% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 40% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 45% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 50% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 55% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 60% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 65% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 70% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 75% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 80% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 85% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 90% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 95% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 98% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, la forma cristalina según la presente invención está presente en una cantidad de alrededor de 99% a alrededor de 100% en peso del ingrediente farmacéutico activo. En ciertas realizaciones, casi todo el ingrediente farmacéutico activo es la forma cristalina según la presente invención, es decir, el ingrediente farmacéutico activo es sustancialmente cristal de fase pura.

A menos que se especifique particularmente, el Compuesto A en el contexto de la presente invención se refiere a la forma amorfa del Compuesto A.

En una realización, el patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma cristalina IV contiene picos de difracción característicos adicionales presentes en posiciones 20 de 11,92±0,22, 12,32±0,22, 15,22±0,22, 16,62±0,22, 18,72±0,22 y 24,92±0,22.

En otra realización, el patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma cristalina IV contiene picos de difracción característicos adicionales presentes en posiciones 20 de 20,12±0,22, 20,72±0,22, 21,42±0,22, 22,32±0,22, 23,22±0,22 y 24,62±0,22.

En aún otra realización, el patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma cristalina IV contiene picos de difracción característicos adicionales presentes en posiciones 20 de 3,62±0,22, 9,92±0,22, 21,72±0,22, 24,12±0,22, 26,02±0,22, 28,32±0,22, 30,72±0,22 y 34,12±0,22.

En una realización adicional, el patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma cristalina IV es como se muestra en la Figura 10.

En una realización, la curva del calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina IV según la presente invención muestra una curva endotérmica en la que T ^inicial=155,82°C, T^pico=158,572C, y AH=64,44 J/g.

En una realización, la curva del calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina IV según la presente invención es como se muestra en la Figura 11, o la curva de análisis termogravimétrico de la Forma cristalina IV según la presente invención es como se muestra en la Figura 12.

En una realización, la curva de análisis termogravimétrico (TGA) de la Forma cristalina IV según la presente invención muestra una pérdida de masa del 1,0% antes de 150°C, y una temperatura de descomposición de 222,1°C.

Debe entenderse que, como bien se sabe en el campo del calorímetro diferencial de barrido (DSC), la altura del pico de fusión en una curva de DSC depende de muchos factores relacionados con la preparación de la muestra y la forma geométrica del aparato, mientras que la posición del pico es relativamente insensible a los detalles experimentales. Por lo tanto, en algunas realizaciones, la curva de DSC del compuesto cristalino según la presente invención que muestra posiciones de pico características tiene esencialmente la misma naturaleza que la curva de DSC proporcionada en las figuras de esta descripción, con un margen de error de ± 3°C. Una realización de la presente invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, y uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Una realización de la presente invención se refiere además a la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, o a la composición farmacéutica según la presente invención para uso en un método para tratar una enfermedad metabólica, que comprende administrar la forma cristalina según la presente invención o la composición farmacéutica según la presente invención; en el que la enfermedad metabólica es preferiblemente diabetes, retinopatía diabética, neuropatía diabética, o nefropatía diabética, más preferiblemente diabetes tipo II.

Una realización de la presente invención proporciona un método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I), que comprende someter la forma cristalina I del compuesto de fórmula (I) como se muestra en la Figura 1 a recristalización o suspensión, en el que el disolvente para la recristalización o suspensión se selecciona de uno de, o un disolvente mixto de dos o más de, disolventes de éster, disolventes de éter, disolventes de alcano, disolventes de alcohol, y agua, preferiblemente una mezcla de un disolvente de éster y un disolvente de alcano.

En una realización del método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, el disolvente para la recristalización o suspensión se selecciona de uno de, o un disolvente mixto de dos o más de, acetato de etilo, éter isopropílico, metil t-butil éter, n-heptano, metanol, etanol, y agua.

En una realización del método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, la temperatura para la recristalización o suspensión es 10°C a 80°C, preferiblemente 10°C a 50°C, más preferiblemente 20°C a 40°C. En una realización del método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, el disolvente para la recristalización o suspensión es un disolvente mixto de acetato de etilo y n-heptano, preferiblemente en una relación en volumen de 1:1 a 1:3, más preferiblemente 1:2.

En una realización del método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I) según la presente invención, para la cristalización, se pueden añadir opcionalmente semillas de la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I), seguido de un postratamiento convencional (por ejemplo, agitación, filtración, etc.), para obtener la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I).

A menos que se indique lo contrario, los términos usados a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los siguientes significados.

Una "cantidad eficaz" significa una cantidad de compuesto que provoca una respuesta fisiológica o médica en un tejido, sistema o sujeto, y es una cantidad deseable, incluyendo la cantidad de compuesto que, después de administrarse a un sujeto a tratar, es suficiente para prevenir la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad o trastorno a tratar, o para reducir el o los síntomas hasta cierto punto.

"IC⁵⁰" significa la mitad de la concentración inhibidora máxima, la concentración que logra la mitad del efecto inhibidor máximo.

La estructura de la forma cristalina según la presente invención puede analizarse mediante diversas técnicas analíticas conocidas por el experto en la técnica, incluyendo, entre otras, la difracción de rayos X en polvo (XRD), el calorímetro diferencial de barrido (DSC), y/o el análisis termogravimétrico (TGA) (también llamado termogravimetría (TG)).

El instrumento de difracción de rayos X en polvo (XRD) usado para la presente invención fue el difractómetro Bruker D8 Advance, equipado con una diana de Cu para la radiación Ka (40 Kv, 40 mA) a una longitud de onda de 1,54 nm, un goniómetro 0-20, un monocromador de Mo, y un detector Lynxeye, usando ALO³como sustancia de calibración, Diffrac Plus XRD Commander como software de recogida de datos, y MDI Jade 6 como software de análisis; parámetros del proceso: especificación de la placa de muestra sin reflejos: 24,6 mm de diámetro x 1,0 mm de espesor, fabricada por la corporación MTI; estación de calentamiento multitemperatura, fabricada por Shanghai Weitu Instrument Technology Ltd., usando una placa de cobre como placa de muestras; ángulo de detección: 3° a 40° 20; longitud de paso: 0,02° 20.

El calorímetro de barrido diferencial (DSC) usado para la presente invención fue TA Instruments Q200 DSC, operado bajo protección de N²con un caudal de gas de 40 ml/min.

El instrumento de análisis termogravimétrico (TGA) usado para la presente invención fue TA Instruments Q500 TGA, operado bajo protección de N²con un caudal de gas de 40 ml/min.

Debe entenderse que todos los valores numéricos descritos y reivindicados según la presente invención son todos valores aproximados, y las variaciones en los valores pueden deberse a la calibración del instrumento, errores del instrumento, pureza del cristal, tamaño del cristal, tamaño de muestra, etc.

La forma cristalina según la presente invención se puede preparar mediante los siguientes métodos convencionales para la preparación de formas cristalinas:

1) el método de volatilización, en el que una disolución transparente de una muestra se deja abierta a la atmósfera y se volatiliza para secar el disolvente a diversas temperaturas;

2) el método de suspensión de cristales, en el que una disolución sobresaturada de una muestra (que contiene un sólido no disuelto) se agita a una cierta temperatura en un sistema de disolvente diferente;

3) el método antidisolvente, en el que una muestra se disuelve en un buen disolvente y después se añade un antidisolvente para precipitar el sólido, seguido de una agitación breve y una filtración inmediata;

4) cristalización por enfriamiento, en la que una cierta cantidad de muestra se disuelve en un disolvente correspondiente a alta temperatura, seguido directamente de agitación a temperatura ambiente o a baja temperatura para precipitar el cristal;

5) el método de plantilla de polímero, en el que se añaden diferentes tipos de materiales poliméricos a una disolución transparente de una muestra, que se deja abierta a temperatura ambiente y se volatiliza para secar el disolvente;

6) el método térmico, en el que una muestra se trata en condiciones de cristalización térmica y se enfría hasta temperatura ambiente;

7) difusión de vapor de agua, en la que una muestra se coloca a temperatura ambiente en un ambiente con cierta humedad.

Después de estudiar las realizaciones de la presente invención en la memoria descriptiva y los ejemplos, será evidente para un experto en la técnica realizar diversas modificaciones y mejoras a la presente invención sin apartarse del alcance de la presente invención.

Descripción de dibujos

la Figura 1 es un patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina I del Compuesto A, obtenido usando radiación de Cu-Ka;

la Figura 2 es una curva de calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina I del Compuesto A;

la Figura 3 es una curva de análisis termogravimétrico (TGA) de la Forma cristalina I del Compuesto A; la Figura 4 es un patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina II del Compuesto A, obtenido usando radiación de Cu-Ka;

la Figura 5 es una curva de calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina II del Compuesto A;

la Figura 6 es una curva de análisis termogravimétrico (TGA) de la Forma cristalina II del Compuesto A; la Figura 7 es un patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina III del Compuesto A, obtenido usando radiación de Cu-Ka;

la Figura 8 es una curva de calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina III del Compuesto A;

la Figura 9 es una curva de análisis termogravimétrico (TGA) de la Forma cristalina III del Compuesto A; la Figura 10 es un patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina IV del Compuesto A, obtenido usando radiación de Cu-Ka;

la Figura 11 es una curva de calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina IV del Compuesto A;

la Figura 12 es una curva de análisis termogravimétrico (TGA) de la Forma cristalina IV del Compuesto A; y la Figura 13 muestra los resultados de un experimento enzimático de la Forma cristalina IV del Compuesto A sobre DPP-IV de plasma sanguíneo de perro.

Descripción detallada de la invención

A continuación, las soluciones técnicas de la presente invención se describirán en detalle junto con los dibujos y ejemplos. Sin embargo, el alcance de la presente invención no se limita a ello.

En los Ejemplos, a menos que se especifique lo contrario, las disoluciones se refieren a disoluciones acuosas. A menos que se especifique particularmente, la cristalización en los experimentos generalmente se lleva a cabo a temperatura ambiente (20°C a 30°C, 30% a 70%HR), y la relación entre disolventes se refiere a una relación en volumen.

Ejemplo 1 - Preparación del Compuesto A

Para las Etapas 1 a 3, véanse los procedimientos de preparación en el documento WO2015/192701.

Etapa 4:

(2R,3S,5R,6S)-2-(2,5-difluorofenil)-5-(2-(metilsulfonil)pirrolo[3,4-c]pirazol-5(2H,4H,6H)-il)-6-(trifluorometil)tetrahidro-2H-piran-3-amina (Compuesto A)

Bajo una atmósfera de N2 a 0°C, el Compuesto 1c (57,5 g, 101,6 mmol) se disolvió en diclorometano (345 ml) y ácido trifluoroacético (86 ml), seguido de agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se concentró a presión reducida y a una temperatura por debajo de 20°C hasta que se volvió viscosa. Se añadieron agua (600 ml) y diclorometano (80 ml) a la disolución de reacción, que se agitó y se dejó que se repartiera. Se añadió diclorometano (300 ml) a la fase acuosa, que se ajustó a un pH de 9-10 con amoníaco acuoso con agitación para que se repartiera. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (300 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (300 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentraron. El concentrado se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/metanol (v/v) = 50:1), y se secó por evaporación rotatoria, para obtener Compuesto A como un sólido pulverulento blanco (37,8 g, rendimiento del 80%). Los análisis de XRD, DSC y TGA mostraron que era la Forma cristalina I del Compuesto A, como se muestra en las Figuras 1-3.

Ejemplo 2 - Preparación de la Forma cristalina II del Compuesto A (que no forma parte de la presente invención) Método 1: A 50°C, la Forma cristalina I del Compuesto A (50 mg) se disolvió en agua (5,0 ml) y acetona (2,8 ml), seguido de filtración en caliente. El filtrado se agitó durante 2 días a 3°C, y se filtró. La torta del filtro se secó a vacío a temperatura ambiente para obtener la Forma cristalina II del Compuesto A, que se caracterizó mediante XRD, DSC y TGA como se muestra en las Figuras 4-6.

Ejemplo 3 - Preparación de la Forma cristalina III del Compuesto A (que no forma parte de la presente invención)

Método 1: A temperatura ambiente, la Forma cristalina I del Compuesto A (50 mg) se disolvió en tetrahidrofurano (5,0 ml), seguido de filtración. Se añadió gota a gota metilciclohexano (5,0 ml) con agitación, para precipitar una gran cantidad de sólido blanco, seguido de agitación adicional durante 10 min y filtración. La torta del filtro se secó a vacío a temperatura ambiente para obtener la Forma cristalina III del Compuesto A, que se caracterizó mediante XRD, DSC y TGA como se muestra en las Figuras 7-9.

Ejemplo 4 - Preparación de la Forma cristalina IV del Compuesto A

Método 1: A una temperatura no mayor que 50°C, se disolvieron 60 g de Forma cristalina I del Compuesto A en acetato de etilo (480 ml), y se añadió gota a gota n-heptano (960 ml) con agitación. Después, la temperatura se redujo hasta la temperatura ambiente, seguido de agitación adicional durante 2 horas y filtración, para obtener un sólido blanco, que se caracterizó mediante XRD, DSC y TGA como la Forma cristalina IV del Compuesto A, como se muestra en las Figuras 10-12. Método 2 (Método de referencia): La Forma cristalina I del Compuesto A (50 mg) se colocó en un horno de secado al aire y se calentó hasta 140°C durante 5 minutos, para obtener la Forma cristalina IV del Compuesto A, que tenía el mismo patrón o curvas como las Figuras 10-12.

Método 2: La Forma cristalina I del Compuesto A (10 mg) se añadió a etanol (0,5 ml), metil t-butil éter (0,5 ml), nheptano (0,5 ml), agua/etanol (1 ml/1 ml) o agua/n-heptano (0,3 ml/0,3 ml), para obtener una suspensión, que se dejó suspender a temperatura ambiente durante 3 días. Después, la suspensión lechosa resultante se centrifugó para obtener la Forma cristalina IV del Compuesto A, que tenía el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12.

Método 3: La Forma cristalina I del Compuesto A (10 mg) se añadió a agua/etanol (1,0 ml/0,5 ml) o etanol/n-heptano (0,5 ml/0,1 ml) para obtener una suspensión, que se dejó suspender a 40°C durante 3 días. La suspensión lechosa resultante se centrifugó para obtener la Forma cristalina IV del Compuesto A, que tenía el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12.

Método 4: A temperatura ambiente, la Forma cristalina I del Compuesto A (10 mg) se disolvió en metanol (0,4 ml), y se añadió agua (2,0) gota a gota con agitación hasta que precipitó un sólido, seguido de centrifugación para obtener la Forma cristalina IV del Compuesto A, que tenía el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12. Siguiendo este método, la Forma cristalina IV del Compuesto A también se puede obtener usando el buen sistema disolventeantidisolvente de metanol-éter isopropílico (0,4 ml/5,0 ml), y tiene el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12. Siguiendo este método, la Forma cristalina IV del Compuesto A también se puede obtener usando el buen sistema disolvente-antidisolvente de etanol-n-heptano (0,4 ml/4,0 ml) a 70°C, y tiene el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12.

Método 5: La Forma cristalina I del Compuesto A (10 mg) se colocó en una botella pequeña, y se añadió agua/etanol (1,0 ml/0,6 ml) a 70°C para obtener una disolución transparente, que se agitó directamente a temperatura ambiente para precipitar un sólido, para obtener la Forma cristalina IV del Compuesto A, que tenía el mismo patrón o curvas que las Figuras 10-12.

Ejemplo 5 - Estabilidad de las formas cristalinas

1. La estabilidad de las formas cristalinas del Compuesto A se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1. Estabilidad de las formas cristalinas del Compuesto A

Las Formas cristalinas II, III y IV del Compuesto A tienen buena estabilidad.

2. Experimento de competición a temperatura ambiente entre la Forma cristalina I y las Formas cristalinas II, III, IV del Compuesto A, que examina la estabilidad de las formas cristalinas en disolventes tales como agua, etanol, y agua:etanol (1:1) a temperatura ambiente, véase la Tabla 2 para más detalles.

T l 2. Ex rim n m i i n n n i n f rm ri lin l m A

A partir de los experimentos de competición de suspensión de cristales anteriores entre las formas de cristal del Compuesto A, se puede ver que la Forma cristalina IV es la forma de cristal más estable a temperatura ambiente.

Ejemplo 6 - Experimento de cribado enzimátieo de la Forma cristalina IV del Compuesto A en DPP-IV plasmática en perros

Se agruparon perros beagle machos con pesos corporales y edades similares (n=3). El día anterior al experimento, los perros beagle se mantuvieron en ayunas durante 8 horas, pero se les permitió el acceso al agua. Los pesos corporales de los animales se midieron el día del experimento. A los animales se les administró una cápsula de Forma cristalina IV del Compuesto A (preparada mediante llenado directo de la Forma cristalina IV del Compuesto A en la vaina de la cápsula) a una dosis de 10,0 mg/kg en base a su peso corporal. Se tomaron muestras de sangre justo antes de la administración (0 h), y 0,5, 1,2, 4, 8, 12, 24, 32, 48, 56, 72, 80, 96, 104, 120, 128, 144, 152, 168, 192, 216 y 240 h después de la administración. En cada punto de tiempo, se añadió 1 ml de sangre a un tubo de anticoagulación con EDTA y se centrifugó a baja temperatura a 2500 rpm durante 15 min, y después se extrajo el plasma y se dispensó en dos tubos EP de 1,5 ml y se almacenó a -80°C. Se proporcionó alimento para animales una hora después de la administración. Se tomaron 40 μl de plasma de cada muestra de ensayo, y se le añadieron 10 μl de sustrato H-Ala-Pro-AFC (0,2 mM), seguido de una reacción durante 5 min, en la que se usó como blanco un pocillo sin sustrato. La reacción se leyó con un lector de microplacas (longitud de onda de excitación = 405 nm, longitud de onda de emisión = 535 nM). La inhibición de la actividad enzimática se calculó según la siguiente ecuación:

Inhibición (%) = [1-(Respuesta del compuesto - Respuesta del blanco)/(Respuesta antes de la administración -Respuesta del blanco)] * 100%. Los resultados se trazaron gráficamente con Origin 7.5. Se calculó el período durante el cual la inhibición de la actividad enzimática de la DPP-IV en plasma fue 80% para la Forma cristalina IV del Compuesto A, y los resultados se muestran en la Tabla 3 y la Figura 13.

Preparación del sustrato H-Ala-Pro-AFC: se disolvió una cantidad adecuada del sustrato en DMSO, y se formuló en una disolución a una concentración de 10 mM.

T l . R l l x rim n ri nzim i r DPP-IV l m i n rr l .

Ejemplo 7 - Investigación de la estabilidad química de la Forma cristalina IV del Compuesto A

Condiciones experimentales

Se investigó una muestra bajo las condiciones y los puntos de tiempo de muestreo que se muestran en la Tabla 4 a continuación, para determinar los factores influyentes, y los resultados se muestran en la Tabla 5 a continuación.

Tabla 4. Condiciones experimentales factores influ entes

Resultados experimentales:

Tabla 5. Resultados ex erimentales bao altas tem eraturas ex osición a la luz alta humedad

Conclusión: A altas temperaturas, exposición a la luz o alta humedad, la pureza del Compuesto A permaneció sustancialmente sin cambios en el día 10 o el día 60, mostrando una excelente estabilidad química.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I):

en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina IV, medido usando radiación de Cu-Ka, contiene picos de difracción característicos presentes en posiciones 20 de 9,2°±0,2°, 12,8°±0,2°, 16,2°±0,2°, 18,4°±0,2°, 20,5°±0,2° y 26,5°±0,2°.

2. La forma cristalina según la reivindicación 1, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina IV, medido usando radiación de Cu-Ka, contiene picos de difracción característicos adicionales presentes en posiciones 20 de 11,9S±0,2S, 12,3°±0,2°, 15,2°±0,2°, 16,6°±0,2°, 18,7°±0,2° y 24,9°±0,2°.

3. La forma cristalina según la reivindicación 2, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina IV, medido usando radiación de Cu-Ka, contiene picos de difracción característicos adicionales presentes en posiciones 20 de 20,1°±0,2°, 20,7°±0,2°, 21,4° ±0,2°, 22,3°±0,2°, 23,2°±0,2° y 24,6°±0,2°.

4. La forma cristalina según la reivindicación 3, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina IV es como se muestra en la figura 10.

5. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la curva del calorímetro de barrido diferencial del cristal es como se muestra en la Figura 11, o la curva de análisis termogravimétrico del cristal es como se muestra en la Figura 12.

6. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. La forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o la composición farmacéutica según las reivindicaciones 6, para uso en un método para tratar una enfermedad metabólica, que comprende administrar la forma cristalina según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o la composición farmacéutica según la reivindicación 6; en el que la enfermedad metabólica es preferiblemente diabetes, retinopatía diabética, neuropatía diabética, o nefropatía diabética, más preferiblemente diabetes tipo II.

8. Un método para preparar la Forma cristalina IV del compuesto de fórmula (I), que comprende someter la forma cristalina I del compuesto de fórmula (I) como se muestra en la Figura 1 a recristalización o suspensión, en el que el disolvente para la recristalización o suspensión se selecciona de uno de, o un disolvente mixto de dos o más de, disolventes de éster, disolventes de éter, disolventes de alcanos, disolventes de alcohol, y agua.

9. El método según la reivindicación 8, en el que el disolvente para la recristalización o la suspensión se selecciona de uno de, o un disolvente mixto de dos o más de, acetato de etilo, éter isopropílico, metil t-butil éter, n-heptano, metanol, etanol, y agua.

10. El método según la reivindicación 8 o 9, en el que la temperatura para la recristalización o suspensión es 10°C a 80°C, preferiblemente 10°C a 50°C.

11. El método según la reivindicación 8 o 9, en el que el disolvente para la recristalización o suspensión es un disolvente mixto de acetato de etilo y n-heptano, preferiblemente en una relación en volumen de 1:1 a 1:3, más preferiblemente 1:2.