ES2954072T3 - Usos de inhibidores de la dopamina beta-hidroxilasa (DBH) para el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

Las terapias contra el cáncer que implican inhibidores de la dopamina beta-hidroxilasa (DBH) no citotóxicos, como nepicastat, etamicastat y sus análogos y sales farmacéuticamente aceptables, y antagonistas de los receptores de serotonina no citotóxicos, como amperozida y sus análogos y sales farmacéuticamente aceptables, son proporcionó. Los inhibidores de DBH no citotóxicos y los antagonistas de los receptores de serotonina se pueden administrar solos o en combinación con uno o más agentes anticancerígenos o terapias anticancerígenas adicionales. También se proporcionan composiciones y combinaciones farmacéuticas que contienen inhibidores de DBH no citotóxicos y antagonistas del receptor de serotonina y uno o más agentes anticancerígenos adicionales, y métodos para tratar el cáncer usando las composiciones y combinaciones farmacéuticas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Usos de inhibidores de la dopamina beta-hidroxilasa (DBH) para el tratamiento del cáncer

Referencia cruzada a la solicitud relacionada

Esta solicitud tiene derecho a prioridad de acuerdo con el título 35 del U.S.C. § 119(e) de la solicitud de patente provisional de EE. UU. No. 62/367.728, presentada del 28 de julio de 2016.

Campo de la invención

La invención se refiere al uso de inhibidores de la dopamina beta-hidroxilasa (DBH) para el tratamiento del cáncer.

Antecedentes de la invención

Dopamina beta-hidroxilasa (DBH)

La dopamina beta-hidroxilasa (DBH), también conocida como dopamina beta-monooxigenasa, es una enzima (EC 1.14.17.1) que en humanos está codificada por el gen DBH. La dopamina beta-hidroxilasa cataliza la reacción química mediante la cual el oxígeno oxida la dopamina a norepinefrina, como se muestra en el Esquema 1:

Esquema 1: Oxidación de dopamina a norepinefrina catalizada por DBH

La DBH es una oxigenasa que contiene cobre de 290 kDa que consiste en cuatro subunidades idénticas, y su actividad requiere ascorbato como cofactor [1].

La DBH es la única enzima involucrada en la síntesis de neurotransmisores unidos a la membrana de molécula pequeña, lo que hace que la norepinefrina sea el único transmisor sintetizado dentro de las vesículas. La noradrenalina se expresa en las terminaciones nerviosas noradrenérgicas de los sistemas nerviosos central y periférico, así como en las células cromafines de la médula suprarrenal.

La DBH contribuye principalmente a la biosíntesis de aminas traza y catecolaminas, incluida la epinefrina (adrenalina), la norepinefrina (noradrenalina) y la dopamina. También participa en el metabolismo de los xenobióticos relacionados con estas sustancias. Por ejemplo, la enzima DBH humana cataliza la beta-hidroxilación de anfetamina y parahidroxianfetamina, produciendo norefedrina y para-hidroxinorefedrina, respectivamente [2-4].

La DBH ha sido implicada como un factor de correlación en afecciones asociadas con la toma de decisiones y las drogas adictivas, por ejemplo, el alcoholismo [5] y el tabaquismo [6], el trastorno por déficit de atención con hiperactividad [7], la esquizofrenia [8] y la enfermedad de Alzheimer [9]. La DBH inadecuada se denomina deficiencia de dopamina beta hidroxilasa.

La DBH es inhibida por disulfiram [10], tropolona [11] y, más selectivamente, por nepicastat [12] y etamicastat [13]. El disulfiram es un fármaco que se descubrió en la década de 1920 y se usa para apoyar el tratamiento del alcoholismo crónico al inhibir la enzima acetaldehído deshidrogenasa y producir una sensibilidad aguda al etanol (alcohol), lo que significa que muchos de los efectos de una "resaca" se sienten de inmediato después de consumir alcohol. Como inhibidor de DBH, el disulfiram también se está estudiando como tratamiento para la dependencia de la cocaína, ya que previene la descomposición de la dopamina, un neurotransmisor cuya liberación es estimulada por la cocaína. El exceso de dopamina da como resultado un aumento de la ansiedad, presión arterial más alta, inquietud y otros síntomas desagradables. El disulfiram también es un inhibidor del proteasoma [14] que funciona mediante la creación de complejos con metales (p. ej., complejos de ditiocarbamato) y representa un nuevo enfoque para la inhibición del proteasoma [15].

A pesar de los prometedores resultados preclínicos con disulfiram en la inhibición del crecimiento del cáncer, varios estudios clínicos mostraron resultados mixtos y sugirieron que el disulfiram tiene un uso limitado en el tratamiento de pacientes con cáncer. Por ejemplo, en un estudio de fase I en el que se administró disulfiram solo en hombres con cáncer de próstata recurrente no metastásico [16], los investigadores concluyeron que no se debe continuar con el desarrollo de disulfiram en esta población debido a la toxicidad y la falta de cualquier beneficio clínico. En otro estudio de fase I para tratar el glioblastoma recién diagnosticado después de la quimiorradioterapia con una combinación de disulfiram y temozolomida [17], la mediana de supervivencia libre de progresión (SLP) con 500 mg de disulfiram fue de 5,4 meses, que es más corta en comparación con los 8,1 meses de la quimiorradioterapia previa. La falta de una mejoría significativa de la SLP puede explicarse por la inhibición limitada del proteasoma en los pacientes, que se cree que es el mecanismo de acción del disulfiram.

La adición de disulfiram a la quimioterapia tal como el cisplatino y la vinorelbina pareció prolongar la supervivencia en pacientes con cáncer de pulmón no microcítico recién diagnosticado en un ensayo de fase II de 40 pacientes [18]. Sin embargo, en otro estudio de fase II de 53 pacientes que comparó los efectos de disulfiram más cisplatino con los efectos del cisplatino solo [19], no hubo diferencias estadísticamente significativas en la tasa de respuesta, el tiempo hasta la progresión o la mediana de supervivencia entre los dos grupos. Contrariamente a los informes publicados anteriormente, el disulfiram no brinda una nefroprotección significativa frente al cisplatino y, de hecho, potencia la toxicidad gastrointestinal y la ototoxicidad. Hay otros inhibidores citotóxicos de DBH, tales como la tropolona [20] con actividades anticancerosas reseñadas, pero su mecanismo de acción para inhibir directamente el crecimiento del cáncer parece no estar relacionado con su acción sobre la DBH. Por ejemplo, la tropolona y sus derivados exhibieron niveles notables de selectividad por la histona desacetilasa 2 (HDAC2) e inhibieron potentemente el crecimiento de las estirpes celulares de linfocitos de células T [21].

Receptor de serotonina 2A (receptor 5-HT2a) - no forma parte de la invención

El receptor 5-HT2A de mamífero es un subtipo de los tres receptores 5-HT2, A, B y C, que pertenece a la familia de receptores de serotonina y es un receptor acoplado a proteína G (GPCR) [22]. Este es el principal subtipo de receptor excitatorio entre los GPCR para la serotonina (5-HT), aunque 5-HT2A también puede tener un efecto inhibidor [23] en ciertas áreas, tales como la corteza visual y la corteza orbitofrontal [24]. Este receptor se destacó por primera vez por su importancia como diana de las drogas psicodélicas serotoninérgicas, tales como la dietilamida del ácido lisérgico (LSD). Posteriormente, volvió a cobrar protagonismo porque también se descubrió que mediaba, al menos en parte, la acción de muchos fármacos antipsicóticos, especialmente los atípicos.

El 5-HT2A se expresa ampliamente en todo el sistema nervioso central (SNC). Se expresa cerca de la mayoría de las áreas ricas en terminales serotoninérgicas, incluida la neocorteza (principalmente la corteza prefrontal, parietal y somatosensorial) y el tubérculo olfativo. Las concentraciones especialmente altas de este receptor en las dendritas apicales de las células piramidales en la capa V de la corteza pueden modular los procesos cognitivos, la memoria de trabajo y la atención [24-26] al potenciar la liberación de glutamato seguida de un intervalo complejo de interacciones con 5-HT1A [27], receptores de GABAA [28], adenosina A1 [29], AMPA [30], mGluR2/3 [31], mGlu5 [32] y OX2 [33, 34]. En la periferia, se expresa en gran medida en plaquetas y muchos tipos de células del sistema cardiovascular, en fibroblastos y en neuronas del sistema nervioso periférico. Adicionalmente, se ha observado expresión de ARNm de 5-HT2A en monocitos humanos [35].

Se sabe que el receptor 5-HT2A se acopla principalmente a la vía de transducción de señales Gaq. Tras la estimulación del receptor con el agonista, las subunidades Gaq y p-Y se disocian para iniciar rutas efectoras más adelante. Gaq estimula la actividad de la fosfolipasa C (PLC), que posteriormente promueve la liberación de diacilglicerol (DAG) y trifosfato de inositol (IP3), que a su vez estimulan la actividad de la proteína quinasa C (PKC) y la liberación de Ca2+ [36]. Hay muchos componentes adicionales de la cascada de señales que incluyen la formación de ácido araquidónico a través de la actividad de PLA2, la activación de la fosfolipasa D, la Rho/Rho quinasa y la activación de la ruta de ERK iniciada por la estimulación del receptor por parte del agonista.

Los procesos fisiológicos mediados por el receptor 5-HT2A incluyen:

- SNC: excitación neuronal, efectos conductuales, aprendizaje, ansiedad;

- Músculo liso: contracción (en tracto gastrointestinal y bronquios);

- Vasoconstricción/vasodilatación;

- Plaquetas: agregación

- Memoria [26, 37, 38]

La activación del receptor 5-HT2A con 1-(2,5-dimetoxi-4-yodofenil)-2-aminopropano (DOI) produce potentes efectos antiinflamatorios en varios tejidos, incluidos los tejidos cardiovasculares e intestinales. Otros agonistas de 5-HT2A, tales como el LSD, también tienen potentes efectos antiinflamatorios contra la inflamación inducida por TNF-a [39, 40]. La activación del receptor 5-HT2A en el hipotálamo provoca aumentos en los niveles hormonales de oxitocina, prolactina, ACTH, corticosterona y renina [41,42].

Nepicastat y etamicastat son inhibidores de DBH altamente selectivos. El nepicastat, también conocido como SYN117 y RS-25560-197, se ha estudiado como un posible tratamiento para la insuficiencia cardíaca congestiva y parece ser bien tolerado como tal [43]. El nepicastat y sus análogos, tales como el etamicastat, comparten un uso potencial común en el tratamiento de la hipertensión. También se han completado ensayos clínicos para evaluar el nepicastat como tratamiento para el trastorno de estrés postraumático (TEPT) y la dependencia de la cocaína. El nepicastat es seguro cuando se administra junto con cocaína y puede suprimir sus efectos subjetivos positivos, lo que sugiere que es una farmacoterapia para el tratamiento del trastorno por consumo de cocaína [44]. Con un menor nivel de penetración en la barrera hematoencefálica, el etamicastat (BIA 5-453) es un inhibidor de la dopamina-p-hidroxilasa que disminuye los niveles de norepinefrina en los tejidos periféricos inervados simpáticamente, sin tener efectos en los tejidos cerebrales de ratas espontáneamente hipertensas [45] . En un estudio clínico de fase II, se observó que etamicastat disminuía la presión arterial sistólica y diastólica de forma dependiente de la dosis después de 10 días de tratamiento [46].

La amperozida es un antipsicótico atípico de la clase de difenilbutilpiperazina que actúa como antagonista del receptor 5-HT^2A [47]. No bloquea los receptores de dopamina como ocurre con la mayoría de los fármacos antipsicóticos [48], pero inhibe la liberación de dopamina [49, 50] y altera el patrón de activación de las neuronas dopaminérgicas [51]. Se investigó para el tratamiento de la esquizofrenia en humanos [52] pero nunca se adoptó clínicamente. En cambio, su uso principal es en medicina veterinaria, principalmente en cerdos de granja intensiva, para disminuir la agresión y el estrés y, por lo tanto, aumentar la alimentación y la productividad [53-56].

Según el leal saber y entender de los inventores, las actividades anticancerosas de nepicastat, emicastat y amperozida, ya sea in vitro o en vivo, no han sido reseñadas.

Breve resumen de la invención

Hay una necesidad en la técnica de métodos mejorados para tratar el cáncer que logren un tratamiento eficaz pero que tengan efectos secundarios citotóxicos u otros reducidos. La invención se basa en el hallazgo sorprendente de que los inhibidores de la dopamina p-hidroxilasa (DBH) no citotóxicos, particularmente el nepicastat y el emicastat y sus análogos y sales farmacéuticamente aceptables tienen actividad anticancerosa y pueden usarse para tratar el cáncer, solos o en combinación con una o más terapias anticancerosas y/o agentes anticancerosos adicionales, tales como un agente quimioterapéutico, un agente de terapia dirigida o un agente de inmunoterapia.

En un aspecto general, la invención se relaciona con el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor no citotóxico de la dopamina p-hidroxilasa (DBH) y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una realización, el tratamiento comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de DBH no citotóxico, tal como nepicastat o etamicastat, o un análogo del mismo o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En ciertas realizaciones de la invención, la composición farmacéutica que comprende el inhibidor de DBH no citotóxico se administra en combinación con al menos un agente anticanceroso adicional, por ejemplo, un agente quimioterapéutico, un agente de terapia dirigida y un agente de inmunoterapia.

En algunas realizaciones de la invención, el cáncer a tratar es cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de hígado, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de cuello uterino, carcinoma de células renales, cáncer de vejiga o cáncer gástrico.

En otro aspecto general, la invención se refiere a una combinación farmacéutica que comprende:

a) una primera composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en nepicastat y etamicastat, o un análogo de los mismos, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

b) una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un agente anticanceroso adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterapéutico, un agente de terapia dirigida y un agente de inmunoterapia,

en la que la cantidad terapéuticamente eficaz del al menos un agente anticanceroso adicional está presente en la primera composición o en una segunda composición para administrarse en combinación con la primera composición.

Otros aspectos de la invención se refieren a métodos de fabricación de composiciones y combinaciones farmacéuticas de la invención, y al tratamiento del cáncer con las composiciones farmacéuticas y combinaciones de la invención.

Otros aspectos, características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción, que incluye la descripción detallada de la invención y sus realizaciones preferidas y las reivindicaciones adjuntas.

Breve descripción de las figuras

La FIG. 1 muestra los datos de CI⁵⁰ de amperozida y nepicastat en células de hepatocarcinoma murino H22 determinados por el ensayo de proliferación celular como se describe en el Ejemplo 3;

las FIG. 2A y 2B muestran los efectos del tratamiento con amperozida en comparación con el tratamiento con paclitaxel en el crecimiento tumoral in vivo en un modelo de xenoinjerto de cáncer hepático murino H22 como se describe en el Ejemplo 4; la FIG. 2A muestra los cambios en el volumen del tumor; la FIG. 2B muestra los cambios en el peso corporal;

las FIG. 3A y 3B muestran los efectos del tratamiento con nepicastat en comparación con el tratamiento con paclitaxel en el crecimiento tumoral in vivo en un modelo de xenoinjerto de cáncer hepático murino H22 como se describe en el Ejemplo 4; la FIG. 3A muestra los cambios en el volumen del tumor; la FIG. 3B muestra los cambios en el peso corporal;

las FIG. 4A y 4B muestran los efectos del tratamiento con nepicastat y etamicastat en comparación con el tratamiento con mAb anti-PD-1 (administración intraperitoneal) en el crecimiento tumoral in vivo en un modelo de xenoinjerto de cáncer hepático H22 como se describe en el Ejemplo 5; la FIG. 4A muestra los cambios en el volumen del tumor y el peso corporal del tratamiento con nepicastat; la FIG.4B muestra los cambios en el volumen del tumor y el peso corporal del tratamiento con etamicastat; y

las FIG. 5A y 5B muestran los efectos del tratamiento con nepicastat en el crecimiento tumoral in vivo y el peso corporal en modelos de xenoinjerto de cáncer de colon murino CT-26 y de cáncer de mama murino EMT-6 como se describe en el Ejemplo 6; la FIG. 5A muestra los efectos del tratamiento con nepicastat sobre el volumen tumoral y el peso corporal en un modelo de xenoinjerto de cáncer de colon murino CT-26; la FIG. 5B muestra los efectos del tratamiento con nepicastat sobre el volumen tumoral y el peso corporal en un modelo de xenoinjerto de cáncer de mama murino EMT-6.

Descripción detallada de la invención

Diversas publicaciones, artículos y patentes se citan o describen en los antecedentes ya lo largo de la memoria descriptiva; la discusión de documentos, actas, materiales, dispositivos, artículos o similares que se han incluido en la presente memoria descriptiva tiene el propósito de proporcionar un contexto para la presente invención. Tal discusión no es una admisión de que alguno o todos estos asuntos formen parte del estado de la técnica con respecto a las invenciones divulgadas o reivindicadas.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el este documento tienen el mismo significado que comúnmente entienden los expertos en la materia a la que se refiere esta invención. Por lo contrario, ciertos términos usados en el presente documento tienen los significados establecidos en la memoria descriptiva. Debe señalarse que tal como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen una referencia plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

A menos que se indique lo contrario, cualquier valor numérico, tal como una concentración o un intervalo de concentración descrito en el presente documento, debe entenderse modificado en todos los casos por el término "aproximadamente". Por tanto, un valor numérico normalmente incluye ± 10 % del valor mencionado. Por ejemplo, una concentración de 1 mg/ml incluye de 0,9 mg/ml a 1,1 mg/ml. Asimismo, un intervalo de concentración del 1 % al 10 % (p/v) incluye del 0,9 % (p/v) al 11 % (p/v). Como se usa en el presente documento, el uso de un intervalo numérico incluye expresamente todos los subintervalos posibles, todos los valores numéricos individuales dentro de ese intervalo, incluidos los enteros dentro de dichos intervalos y fracciones de los valores, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Como se usa en el presente documento, los términos "tratar", "tratando" y "tratamiento" tienen la intención de referirse a una mejora o reversión de al menos un parámetro físico medible relacionado con un cáncer, que no es necesariamente perceptible en el sujeto, pero puede ser discernible en el sujeto. Los términos "tratar", "tratando" y "tratamiento" también pueden referirse a provocar la regresión, prevenir la progresión o al menos ralentizar la progresión del cáncer. En una realización particular, "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a un alivio, prevención del desarrollo o inicio, o reducción de la duración de uno o más síntomas asociados con el cáncer. En una realización particular, "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a la prevención de la recurrencia del cáncer. En una realización particular, "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a un aumento en la supervivencia de un sujeto que tiene cáncer. En una realización particular, "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a la eliminación del cáncer en el sujeto.

Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a un animal, y preferiblemente a un mamífero. Según realizaciones particulares, el sujeto es un mamífero que incluye un no primate (por ejemplo, un camello, burro, cebra, vaca, cerdo, caballo, cabra, oveja, gato, perro, rata, conejo, conejillo de Indias o ratón) o un primate (por ejemplo, un mono, un chimpancé o un ser humano). En realizaciones particulares, el sujeto es un ser humano.

Como se usa en el presente documento, el término "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un ingrediente o componente activo que desencadena la respuesta biológica o medicinal deseada en un sujeto. En realizaciones particulares, la cantidad eficaz es la cantidad de un ingrediente o compuesto activo que es eficaz para lograr un efecto sinérgico con otro ingrediente o compuesto activo. Una cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente y de manera rutinaria, en relación con el propósito establecido. Por ejemplo, opcionalmente, se pueden emplear ensayos in vitro para ayudar a identificar intervalos de dosificación óptimos. Los expertos en la materia pueden determinar la selección de una dosis eficaz particular (p. ej., a través de ensayos clínicos) basándose en la consideración de varios factores, incluida la enfermedad a tratar o prevenir, los síntomas involucrados, la masa corporal del paciente, el estado inmunitario del paciente y otros factores conocidos por el experto en la materia. La dosis precisa a emplear en la formulación también dependerá de la vía de administración y de la gravedad de la enfermedad, y debe decidirse según el juicio del médico y las circunstancias de cada paciente. Las dosis eficaces pueden extrapolarse a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba in vitro o de modelos animales.

La frase "sal farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, significa aquellas sales de un compuesto de interés que son seguras y eficaces para uso farmacéutico en mamíferos y que poseen la actividad biológica deseada. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de bases, que son sales de grupos básicos presentes en los compuestos específicos, y sales de adición de ácidos, que son sales de grupos ácidos presentes en los compuestos específicos. Los grupos ácidos o básicos pueden ser orgánicos o inorgánicos. Para una revisión de las sales farmacéuticamente aceptables véase Berge y col., 66 J. Pharm. Sci. 1-19 (1977), que se incorpora en el presente documento como referencia.

Como se usa en el presente documento, las frases "agente anticanceroso", "medicamento anticanceroso" y "terapia anticancerosa" se refieren a cualquier sustancia o tratamiento que pueda usarse para causar regresión, prevenir o retrasar la progresión, eliminar o prevenir la recurrencia de un cáncer, o aumentar la tasa de supervivencia de un sujeto que tiene el cáncer. Normalmente, los términos "agente" y "fármaco" se usan con referencia a una sustancia (p. ej., compuesto de molécula pequeña, anticuerpo, etc.), mientras que el término "terapia" se usa con referencia a un método de tratamiento. Los agentes anticancerosos pueden ejercer sus efectos mediante una variedad de mecanismos que incluyen, pero sin limitación, la estimulación de una respuesta inmunitaria, la inhibición de la supresión inmunitaria y/o la inhibición de la proliferación celular. Los ejemplos de agentes o fármacos anticancerosos incluyen, pero sin limitación, agentes quimioterapéuticos, agentes de inmunoterapia y agentes de terapia dirigida. Los ejemplos de terapias anticancerosas incluyen, pero sin limitación, cirugía, terapia génica, radioterapia y crioterapia.

Como se usan en el presente documento, los términos "agente quimioterapéutico" y "agente de terapia dirigida" se refieren a cualquier sustancia química que sea un fármaco anticanceroso o un agente anticanceroso. En general, los agentes quimioterapéuticos y de terapia dirigida son sustancias que bloquean el crecimiento y la proliferación de células cancerosas. Los agentes quimioterapéuticos a menudo son citotóxicos, lo que significa que destruyen las células tumorales, pero también pueden destruir las células sanas normales porque normalmente funcionan en todo el cuerpo. A diferencia de los agentes de quimioterapia, los agentes de terapia dirigida aprovechan las diferencias entre las células normales y las células cancerosas, y bloquean el crecimiento o la proliferación de células cancerosas al interactuar con moléculas específicas de las células cancerosas que generalmente están involucradas en el crecimiento, la progresión y la propagación del cáncer.

Como se usa en el presente documento, el término "agente de inmunoterapia" o "modulador de inmunoterapia" se refiere a cualquier agente que sea capaz de estimular una respuesta inmunitaria y/o inhibir la supresión inmunitaria. La inmunoterapia contra el cáncer intenta estimular el sistema inmunitario para que rechace y destruya los tumores.

Como se usan en el presente documento, las frases "en combinación" y "en combinación con" en el contexto de la administración de dos o más terapias a un sujeto, se refieren al uso de más de una terapia. El uso de las frases "en combinación" y "en combinación con" no restringe el orden en el que se administran las terapias a un sujeto. Por ejemplo, se puede administrar una primera terapia (p. ej., una cantidad eficaz de un inhibidor de DBH o un antagonista del receptor de serotonina 2A) antes de (p. ej., 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas antes), concomitantemente con o después de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas después de) la administración de una segunda terapia (p. ej., una cantidad eficaz de un agente de inmunoterapia, un agente quimioterapéutico o un agente terapéutico) a un sujeto.

Usos y Composiciones

La invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo necesite, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de inhibidores de DBH no citotóxicos, tales como nepicastat, etamicastat y análogos de los mismos, solos o en combinación con uno o más agentes anticancerosos y/o terapias anticancerosas.

Como se usa en el presente documento, un "inhibidor de DBH" es cualquier compuesto que inhibe la enzima dopamina p-hidroxilasa (DBH). La DBH cataliza la oxidación de dopamina a norepinefrina. Los inhibidores de DBH incluyen compuestos que reducen o previenen la oxidación de dopamina a norepinefrina catalizada por DBH. En particular, "un inhibidor de DBH no citotóxico" es cualquier compuesto que inhibe la enzima DBH e inhibe o reduce el crecimiento tumoral in vivo, pero tiene efectos citotóxicos reducidos (p. ej., destrucción de células cancerosas) in vitro. Los ejemplos de inhibidores de DBH incluyen, pero sin limitación, nepicastat, etamicastat, disulfiram y tropolona. El etamicastat también se considera un análogo de nepicastat. Los ejemplos de inhibidores de DBH no citotóxicos incluyen, pero sin limitación, nepicastat y etamicastat, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En realizaciones preferidas de la invención, el inhibidor de DBH se selecciona de nepicastat y etamicastat, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Como se usa en el presente documento, un "antagonista de 5-HT" es cualquier compuesto que amortigua o bloquea una respuesta biológica mediada por el receptor de 5-HT. En particular, "antagonista de 5-HT2^A" es cualquier compuesto que amortigua o bloquea una respuesta biológica mediada por el receptor 5-HT^2A. El receptor 5-HT^2A es un receptor acoplado a proteína G (GPCR) que forma parte de la familia de receptores de serotonina. Como se usa en el presente documento, "un antagonista de 5-HT no citotóxico" es cualquier compuesto que inhibe o reduce el crecimiento tumoral in vivo amortiguando o bloqueando una respuesta biológica mediada por el receptor de 5-HT, pero tiene efectos citotóxicos reducidos (p. ej., destrucción de células cancerosas) in vitro. Los ejemplos de antagonistas de 5-HT, particularmente antagonistas de 5-HT^2A, incluyen, pero sin limitación, amperozida.

Como se usa en el presente documento, "nepicastat", "etamicastat", se refieren a compuestos que tienen las siguientes estructuras químicas:

En otra realización de la invención, una composición farmacéutica para usar en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo necesite, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de nepicastat o un análogo del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otra realización más de la invención, una composición farmacéutica para usar en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo necesite, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de etamicastat, o un análogo del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

El cáncer es una proliferación no regulada de células debido a la pérdida de los controles normales, lo que da como resultado un crecimiento anormal, falta de diferenciación, invasión de tejido local y, a menudo, metástasis. El tumor es un crecimiento anormal de células o tejidos que puede ser benigno o maligno. Cualquier cáncer o tumor puede tratarse según los métodos de la invención como se describe en el presente documento, incluidos, entre otros, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de hígado, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de cuello uterino, carcinoma de células renales, cáncer de vejiga o cáncer gástrico.

En algunas realizaciones, el cáncer es cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de hígado o melanoma. En otras realizaciones, el cáncer es un cáncer resistente a la quimioterapia, resistente a la inmunoterapia o radiorresistente, tal como un cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de colon o melanoma resistente a la quimioterapia, resistente a la inmunoterapia o radiorresistente.

Los compuestos, agentes o composiciones farmacéuticas descritos en el presente documento pueden administrarse por cualquier vía aceptable. Por ejemplo, los compuestos, agentes o composiciones farmacéuticas descritos en el presente documento se pueden administrar por vía oral, intraadiposal, intraarterial, intraarticular, intracraneal, intradérmica, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intrapericárdica, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrarrectal, intratecal, intratraqueal, intratumoral, intraumbilical, intravaginal, intravenosa, intravesicular, intravítrea, liposomal, local, por mucosa, parenteral, rectal, subconjuntival, subcutánea, sublingual, tópica, transbucal, transdérmica, vaginal, en cremas, en composiciones lipídicas, a través de un catéter, a través de un lavado, a través de infusión continua, a través de infusión, a través de inhalación, a través de inyección, a través de suministro local, a través de perfusión localizada, mediante baño de las células diana directamente, o cualquier combinación de los mismos.

Las composiciones farmacéuticas según la invención se pueden formular para cualquier forma de administración, incluidas la administración inyectable (intravenosa), mucosa, oral (preparaciones sólidas y líquidas), por inhalación, ocular, rectal, tópica o parenteral (por infusión, inyección, implantación, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular). Los ejemplos de preparaciones sólidas para administración oral incluyen, pero sin limitación, polvos, cápsulas, comprimidos oblongos, cápsulas de gel y comprimidos; los ejemplos de preparaciones líquidas para administración oral o mucosa incluyen, pero sin limitación, suspensiones, emulsiones, elixires y soluciones; y los ejemplos de formulaciones tópicas incluyen, pero sin limitación, emulsiones, geles, ungüentos, cremas, parches, pastas, espumas, lociones, gotas o sueros. Los ejemplos de preparaciones para administración parenteral incluyen, pero sin limitación, soluciones inyectables, productos secos que pueden disolverse o suspenderse en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones inyectables y emulsiones inyectables. Los ejemplos de otras composiciones adecuadas incluyen gotas para los ojos y otras preparaciones oftálmicas; aerosoles, tales como aerosoles nasales o inhaladores; formas de dosificación líquidas adecuadas para administración parenteral; supositorios; y pastillas.

En realizaciones preferidas, las composiciones farmacéuticas que comprenden los inhibidores de DBH se formulan para administración oral, incluidas las preparaciones sólidas, tales como polvos, cápsulas, comprimidos oblongos, cápsulas de gel y comprimidos; y preparaciones líquidas, tales como suspensiones, emulsiones, elixires y soluciones.

Las composiciones farmacéuticas según la invención comprenden además un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como los ampliamente empleados en la técnica de fabricación de fármacos. Como se usa en el presente documento, el término "vehículo" se refiere a cualquier excipiente, diluyente, carga, sal, tampón, estabilizador, solubilizante, aceite, lípido, vesícula que contiene lípidos, microesfera, encapsulación liposomal u otro material bien conocido en la técnica para su uso en formulaciones farmacéuticas. Los vehículos farmacéuticamente aceptables en particular no son tóxicos y pueden incluir uno o más agentes aglutinantes, tales como hidroxipropilmetilcelulosa; agentes solubilizantes, tales como povidona y cloruro de cetilpiridinio; agentes acidificantes, tales como ácido algínico; agentes formadores de poros, tales como sacarosa; lubricantes, tales como fumarato de estearilo; deslizantes, tales como dióxido de silicio coloidal; aglutinantes, agentes de suspensión, agentes emulsionantes, diluyentes, cargas, agentes de granulación, adhesivos, disgregantes, antiadherentes, agentes humectantes, agentes gelificantes, tampones, agentes quelantes, conservantes, colorantes, aromatizantes y edulcorantes y similares. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración, y la cantidad y el tipo variarán según la necesidad. Un experto en la materia común podrá determinar fácilmente los vehículos apropiados que se añadirán a una composición farmacéutica de la invención en vista de la presente divulgación. Ejemplos no limitantes de vehículos incluyen solución salina y agua.

La dosificación de inhibidores de DBH se selecciona, por ejemplo, en base a la dosis requerida, volúmenes de fluido, viscosidades, etc., según el modo particular de administración seleccionado. En algunas realizaciones, se administra un inhibidor de DBH, preferiblemente por vía oral, a una dosificación de aproximadamente 1 mg/día a 4 g/día, tal como 1 mg/día, 10 mg/día, 50 mg/día, 100 mg/día, 200 mg/día, 300 mg/día, 400 mg/día, 500 mg/día, 600 mg/día, 700 mg/día, 800 mg/día, 900 mg/día, 1 g/día, 2 g/día, 3 g/día o 4 g/día. Por ejemplo, se puede administrar nepicastat o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, a un sujeto humano, a una dosificación de aproximadamente 20 mg/día a 2,5 g/día, preferiblemente de 40 mg/día a 1,0 g/día, y más preferiblemente de 80 mg/día a 500 mg/día); y se puede administrar etamicastat, por ejemplo, a un sujeto humano, a una dosificación de aproximadamente 40 mg/día a 4,0 g/día, preferiblemente de 80 mg/día a 2,0 g/día, y más preferiblemente de 160 mg/día a 1,0 g/día.

En algunas realizaciones, los inhibidores de DBH o sus composiciones se administran una vez al día. En otras realizaciones, los inhibidores de DBH o sus composiciones se administran dos veces al día. En otras realizaciones, los inhibidores de DBH o sus composiciones se administran varias veces al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez cada cuatro días, una vez cada cinco días, una vez cada seis días, una vez cada siete días, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses, una vez cada cinco meses, una vez cada seis meses o una vez al año. Los inhibidores de DBH o sus composiciones se pueden administrar durante un día, dos días, tres días, cuatro días, cinco días, seis días, siete días, dos semanas, tres semanas, cuatro semanas, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses, un año, dos años, tres años, cuatro años, cinco años, diez años o quince años, etc.

Según las realizaciones de la invención, los inhibidores de DBH se pueden usar solos o en combinación con terapias contra el cáncer y/o agentes contra el cáncer adicionales. En algunas realizaciones, la terapia contra el cáncer o el agente contra el cáncer adicional comprende cirugía, radioterapia, quimioterapia o un agente quimioterapéutico, terapia con toxinas, inmunoterapia o un agente de inmunoterapia, un agente de terapia dirigida, crioterapia o terapia génica. Cuando se usa un agente anticanceroso, el inhibidor de DBH puede administrarse junto con la misma composición que el agente anticanceroso adicional. Como alternativa, el inhibidor de DBH y el agente anticanceroso adicional se pueden administrar en composiciones separadas. Cuando se administra como composiciones separadas, el inhibidor de DBH se puede administrar mediante la misma forma de administración (p. ej., ambos por vía oral) o mediante una vía de administración diferente a la usada para el agente anticanceroso adicional (p. ej., administración oral para el inhibidor de DBH e inyección para el agente anticanceroso adicional).

Otros aspectos de la invención se refieren a composiciones y combinaciones farmacéuticas que comprenden inhibidores de DBH; al menos un agente anticanceroso adicional y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Puede usarse cualquier inhibidor de DBH en las composiciones de la invención en vista de la presente divulgación incluidos, pero sin limitación, nepicastat, etamicastat, análogos de los mismos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar mediante cualquier método conocido en la materia a la vista de la presente divulgación, y un experto común en la materia estará familiarizado con dichas técnicas usadas para preparar composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, se puede preparar una composición farmacéutica de la invención combinando el inhibidor de DBH (p. ej., nepicastat, etamicastat, etc.), al menos un agente anticanceroso adicional y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las realizaciones de la invención también se relacionan con el tratamiento del cáncer con las composiciones y combinaciones farmacéuticas descritas en el presente documento. Según realizaciones de la invención, el tratamiento comprende administrar la composición o combinación farmacéutica a un sujeto que lo necesite. Puede usarse para tratar cualquier cáncer en vista de la presente divulgación, y puede administrarse a un sujeto que necesite el tratamiento por cualquier vía adecuada en vista de la presente divulgación.

Los siguientes ejemplos de la invención son para ilustrar adicionalmente la naturaleza de la invención. Debe entenderse que los siguientes ejemplos no limitan la invención y que el alcance de la invención está determinado por las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplos

Ejemplo 1: Procedimiento experimental para el ensayo in vitro de proliferación celular en la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22

Materiales y métodos:

Materiales:

Reactivos:

1. Compuestos: amperozida, nepicastat

2. Compuesto de control positivo: paclitaxel

3. Kit de ensayo CTG: (Promega) - N.° de cat. G7572

4. Medio RPMI-1640 (Invitrogen) - N.° de cat. 11875093

5. PBS (Hyclone) - N.2 de cat. SH30256-01B

6. Tripsina/EDTA (Invitrogen) - 25200-056

7. FBS (Biowest) - N.2 de cat. S1580-500

8. Líquido de penicilina-estreptomicina (Invitrogen) - N.° de cat. 15140-122

9. Placa blanca de 96 pocillos (Costar) - N.° de cat. 3917

Instrumentos: Lector de etiquetas múltiples EnVision 2104

Métodos:

1) Las células se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con 10 % de FBS, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina a 37 °C y atmósfera de 5 % de CO₂. En el ensayo se usaron células que tenían una confluencia del 80 %.

2) Las células se centrifugaron a 1000 rpm durante 4 minutos, se resuspendieron en medio fresco suplementado con FBS al 10 % y luego se ajustó la densidad celular y las células se sembraron en una placa blanca de 96 pocillos, 3000 células/pocillo/90 μl de células H22, 3 pocillos/grupo.3456789

3) Después de 24 horas, se preparó una solución de compuesto 10 x y se transfirieron 10 μl de la solución de compuesto 10 x a cada pocillo para obtener las concentraciones finales de 1 μM y 0,1 μM (control de disolvente: DMSO al 0,1 %; control de blanco: sin células, para cero automático del instrumento).

4) Las células se incubaron con el compuesto durante 72 horas a 37 °C y atmósfera de 5 % de CO₂.

5) La placa y su contenido se equilibraron a temperatura ambiente durante 30 minutos.

6) Luego, se añadieron 100 μl de reactivo CellTiter-Glo® a cada pocillo de la placa blanca de 96 pocillos.

7) Los contenidos se mezclaron durante 2 minutos en un agitador orbital para inducir la lisis celular.

8) La placa se dejó incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos para estabilizar la señal luminiscente. 9) La luminiscencia se registró usando un lector de etiquetas múltiples EnVision 2104.

Ejemplo 2: Procedimientos experimentales para probar el crecimiento tumoral in vivo en modelos de xenoinjerto murino H22, CT-26 y EMT-6

Los experimentos que usan los modelos de xenoinjerto murino H22, CT-26 y EMT-6 se realizaron como se describe a continuación.

Estirpes celulares y animales:

Artículos de prueba:

Cultivo de células:

Las células se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con FBS al 10 % a 37 °C en una atmósfera con un 5 % de CO₂ en aire. Las células tumorales se subcultivaron rutinariamente tres veces por semana. Las células que crecieron en una fase de crecimiento exponencial se recolectaron y contaron para la inoculación del tumor.

Inoculación de tumores:

Se inocularon ratones (hembra, de 6 a 8 semanas de edad) por vía subcutánea en el flanco derecho con las células tumorales (H22, EMT-6 o CT-26) en 0,1 ml de PBS para el desarrollo del tumor. Cuando el volumen del tumor alcanzó aproximadamente 60-80 mm3, los ratones se agruparon aleatoriamente según el peso corporal del animal y el volumen del tumor. Cada grupo tenía 5-8 ratones portadores de tumores.

Observaciones

En el momento de monitorización rutinaria, se controló a los animales para detectar cualquier efecto del crecimiento del tumor y el tratamiento sobre el comportamiento normal, tal como la movilidad, el consumo de alimentos y agua (solo mediante observación) y la ganancia/pérdida de peso corporal (los pesos corporales se midieron tres veces por semana), los ojos legañosos/pelo apelmazado y cualquier otro efecto anormal. La muerte y los signos clínicos observados se registraron sobre la base del número de animales dentro de cada subconjunto.

Mediciones tumorales y criterios de valoración

El criterio de valoración principal era determinar si el crecimiento del tumor podía retrasarse o si los ratones podían curarse. El volumen del tumor se midió tres veces por semana en dos dimensiones usando un calibre, y el volumen se expresó en mm3 usando la fórmula: V = 0,5 a x b2, donde a y b son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente. El valor T/C (en porcentaje) era una indicación de la eficacia antitumoral, donde T y C eran el volumen medio de los grupos tratados y de control, respectivamente, en un día determinado. El valor T-C se calculó según el VT. El T-C se calculó con T como la mediana del tiempo (en días) requerido para que los tumores del grupo de tratamiento alcanzaran un tamaño predeterminado (p. ej., un VT como 1000 mm3), y C como la mediana de tiempo (en días) para que los tumores del grupo de control alcancen el mismo tamaño. Los pesos corporales se midieron y registraron al mismo tiempo para observar la toxicidad de los compuestos. Los animales fueron sacrificados al final del estudio.

Análisis estadístico

Se proporcionan estadísticas de resumen, incluida la media y el error estándar de la media (SEM), para el volumen del tumor de cada grupo en cada punto temporal. Se realizó un análisis de varianza (ANOVA) de dos vías para comparar el peso corporal, el volumen del tumor y el cambio de volumen del tumor. Se realizó un ANOVA de una vía para comparar el peso del tumor. Todos los datos se analizaron usando GraphPad Prism 5. Se consideró que una p < 0,05 era estadísticamente significativa.

Ejemplo 3: Ensayo de proliferación celular de amperozida como ejemplo comparativo y nepicastat en la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22

La actividad antiproliferativa de amperozida, nepicastat y paclitaxel se probó en la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22 según el procedimiento experimental descrito en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en la Tabla 1.

Como se muestra en la Tabla 1, el paclitaxel mostró un fuerte efecto inhibidor sobre la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22 a concentraciones de 1 μM y 0,1 μM. Amperozida y nepicastat no mostraron ningún efecto antiproliferativo significativo sobre la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22 a estas mismas concentraciones, lo que indica que estos dos compuestos no son citotóxicos.

Tabla 1: Ensayo de antiproliferación in vitro de paclitaxel, amperozida y nepicastat en la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22

Los datos se muestran en la FIG. 1, de donde la CI⁵⁰ de amperozida y nepicastat en la proliferación de células de hepatocarcinoma murino H22 se calculó que era de 38,84 μM y 52,59 μM, respectivamente. Se ha reseñado que la concentración plasmática máxima (C^máx) con dosificación clínica de amperozida (10 mg/día) [57] y nepicastat (160 mg/día) [58] es de aproximadamente 0,1 μM y 0,2 μM, respectivamente. Los valores de C^máx de amperozida y nepicastat a dosificación clínica son mucho menores que sus valores de CI⁵⁰ de proliferación de células de hepatocarcinoma murino H22, lo que sugiere que tanto la amperozida como el nepicastat no son citotóxicos a concentraciones eficaces para inhibir el crecimiento tumoral.

Los resultados anteriores demuestran que la amperozida y el nepicastat no son citotóxicos en la estirpe celular de hepatocarcinoma murino H22.

Ejemplo 4: Actividad anticancerosa in vivo de amperozida como ejemplo comparativo y nepicastat en el modelo murino de cáncer hepático

La actividad anticancerosa de amperozida y nepicastat se evaluó en un modelo de xenoinjerto de cáncer hepático murino H22 según el procedimiento experimental descrito en el Ejemplo 2. La actividad anticancerosa se evaluó midiendo los cambios en el volumen del tumor.

Los resultados de los cambios en el volumen del tumor en todos los grupos de tratamiento en diferentes puntos temporales después de la inoculación del tumor se muestran en la Tabla 2. Los datos que representan el crecimiento del tumor y los cambios en el peso corporal para la amperozida se muestran en las FIG. 2A y 2B, respectivamente; y los de nepicastat se muestran en las FIG. 3A y 3B, respectivamente. La Tabla 3 resume las actividades de amperozida y nepicastat en la inhibición del crecimiento in vivo del tumor H22. El día 19, el volumen tumoral medio del grupo de vehículo alcanzó los 3027 mm³. El paclitaxel de control positivo mostró un efecto antitumoral en el estudio, con un volumen tumoral promedio de 1982 mm³ (T/C= 65,5 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 34,5 %, p<0,001), lo que indica un establecimiento exitoso del modelo tumoral. Los volúmenes tumorales promedio en los grupos de amperozida (2 mg/kg) y nepicastat (48 mg/kg) fueron de 1948 mm³ (T/C=64,4 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 35,6 %, p<0,001) y 1992 mm³ (T/C= 66%, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 34,2%, p<0,001), respectivamente.

Tabla 2: Cambios en el volumen tumoral de xenoinjertos de cáncer hepático murino H22 tratados con amperozida y nepicastat.

Tabla 3: Actividad antitumoral de amperozida y nepicastat en el tratamiento de xenoinjertos de cáncer hepático murino H22

Los resultados anteriores indican que la amperozida y el nepicastat tenían actividades de inhibición tumoral similares a las del paclitaxel. Sin embargo, la amperozida y el nepicastat no tenían los mismos efectos citotóxicos que el paclitaxel, como lo demuestran los resultados del ensayo antiproliferación in vitro descrito en el Ejemplo 3 anterior.

Ejemplo 5: Actividad anticancerosa in vivo de nepicastat y etamicastat en comparación con el anticuerpo monoclonal anti-PD-1 en un modelo murino de cáncer hepático

La actividad anticancerosa de nepicastat, etamicastat y anticuerpo monoclonal (mAb) anti-PD-1 se evaluó en un modelo de xenoinjerto de cáncer hepático murino H22 según el procedimiento experimental descrito en el Ejemplo 2.

Los resultados de los cambios en el volumen del tumor en todos los grupos de tratamiento en diferentes puntos temporales después de la inoculación del tumor se muestran en la Tabla 4. Los datos que representan el crecimiento del tumor y los cambios en el peso corporal por tratamiento con nepicastat y etamicastat se muestran en las FIG. 4A y 4B, respectivamente. La Tabla 5 resume la actividad inhibitoria de nepicastat, etamicastat y mAb anti-PD-1 sobre el crecimiento in vivo de tumores hepáticos H22. El día 22, el volumen tumoral promedio del grupo de vehículo alcanzó los 1718,9 mm3. El control positivo mAb anti-PD-1 (10 mg/kg, dos veces por semana (BIW) x 6 dosis, administración intraperitoneal (i.p.)) mostró una sólida eficacia antitumoral en el estudio, con un volumen tumoral promedio de 165,65 mm3 (T/C= 9,64 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 90,36 %, p< 0,001), lo que indica un establecimiento exitoso del modelo tumoral. Los volúmenes tumorales promedio de los grupos de tratamiento de 50 mg/kg y 100 mg/kg de nepicastat (una vez al día (QD) x 20 días, administrado por vía oral (p.o.)) eran 880,28 mm3 (T/C=51,21 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 48,79 %, p < 0,001) y 1275,47 mm3 (T/C= 74,20 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 25,80 %, p< 0,001), respectivamente. Los volúmenes tumorales promedio de los grupos de tratamiento de 80 mg/kg y 160 mg/kg de etamicastat (una vez al día (QD) x 20 días, administrado por vía oral (p.o.)) eran 1.210,52 mm3 (T/C=70,42 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 29,58 %, p< 0,05) y 1.309,12 mm3 (T/C= 76,16 %, tasa de inhibición del crecimiento tumoral= 23,84 %, p> 0,05), respectivamente.

Tabla 4: Cambios en el volumen tumoral de xenoinjertos de cáncer hepático murino H22 tratados con nepicastat, etamicastat y mAb anti-PD-1.

Tabla 5: Actividad antitumoral de nepicastat, etamicastat y mAb anti-PD-1 en el tratamiento de xenoinjertos de cáncer hepático murino H22

Los resultados anteriores confirman la actividad inhibidora antitumoral de nepicastat y etamicastat en un modelo in vivo de cáncer hepático H22.

Ejemplo 6: Actividad anticancerosa in vivo de nepicastat en modelos de xenoinjerto de cáncer de colon murino CT-26 y de cáncer de mama murino EMT-6

El nepicastat también se probó para la inhibición in vivo del crecimiento tumoral en modelos de xenoinjerto de cáncer de colon murino CT-26 y cáncer de mama murino EMT-6. El nepicastat se administró por vía oral.

Los resultados de la administración oral de nepicastat sobre la inhibición del crecimiento tumoral y los cambios de peso corporal en el modelo de xenoinjerto de cáncer de colon murino CT-26 se muestran en la FIG. 5A. Los resultados de la administración oral de nepicastat sobre la inhibición del crecimiento tumoral y los cambios de peso corporal en el modelo de xenoinjerto de cáncer de mama murino EMT-6 se muestran en la FIG. 5B. Los datos que muestran los cambios en el volumen del tumor para cada grupo de tratamiento indicado en diferentes puntos temporales después de la inoculación del tumor se muestran en la Tabla 6 (5 ratones/grupo). La Tabla 7 resume la eficacia inhibidora antitumoral de nepicastat en modelos tumorales murinos CT-26 y EMT-6. El grupo al que se administró por vía oral 50 mg/kg de nepicastat (una vez al día (QD)) mostró una tasa de inhibición tumoral del 34,30 % (p<0,001) y del 23,09 % (p<0,001) en los modelos CT2-6 y EMT-6, respectivamente.

Tabla 6: Cambios en el volumen tumoral de los xenoinjertos CT-26 y EMT-6 tratados con nepicastat.

Tabla 7: Actividad antitumoral del tratamiento con nepicastat en xenoinjertos CT-26 y EMT-6

Los resultados anteriores indican que el nepicastat también tiene efectos inhibidores antitumorales contra el cáncer de colon y el cáncer de mama.

Referencias

1. Rush RA y Geffen LB. Dopamine beta-hydroxylase in health and disease. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 1980, 12 (3): 241-77.

2. Glennon RA. Phenylisopropylamine stimulants: amphetamine-related agents en Lemke TL, Williams DA, Roche VF, Zito W. Foye's Principies of MedicinalChemistry (7.a ed.). Filadelfia, EE. UU.: Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins. 2013; pág. 646-648. ISBN 9781609133450.

3. Taylor κΒ. Dopamine-beta-hydroxylase. Stereochemical course of the reaction. J. Biol. Chem. 1974; 249 (2): 454­ 458.

4. Horwitz D, Alexander RW, Lovenberg W y Keizer HR. Human serum dopamine-p-hydroxylase. Relationship with hypertension and sympathetic activity. Ciro. Res. 1973; 32 (5): 594-599.

5. Mutschler J, Abbruzzese E, Witt SH, Dirican G, Nieratschker V, Frank J, et al. Functional polymorphism of the dopamine p-hydroxylase is associated with increased risk of disulfiram-induced adverse effects in alcohol-dependent patients. Journal of Clinioal Psyohopharmaoology 2012; 32 (4): 578-80.

6. Ella E, Sato N, Nishizawa D, Kageyama S, Yamada H, et al. Association between dopamine beta hydroxylase rs5320 polymorphism and smoking behavior in elderly Japanese. Journal of Human Genetios 2012; 57 (6): 385-90

7. Bhaduri N, Sinha S, Chattopadhyay A, Gangopadhyay PK, Singh M y Mukhopadhyay KK. Analysis of polymorphisms in the dopamine beta hydroxylase gene: association with attention deficit hyperactivity disorder in Indian children. Indian Pediatrios 2005; 42 (2): 123-9.

8. Cubells JF, Sun X, Li W, Bonsall RW, McGrath JA, Avramopoulos D, Elston RC. Linkage analysis of plasma dopamine p-hydroxylase activity in families of patients with schizophrenia. Human Genetios 2011; 130 (5): 635-43.

9. Combarros O, Warden DR, Hammond N, Cortina-Borja M, Belbin O, Lehmann MG et al. The dopamine phydroxylase -1021C/T polymorphisms is associated with the risk of Alzheimer’s disease in the Epistasis Project. BMC Medioal Genetios 2010; 11 (161): 162.

10. Goldstein M, Anagnoste B, Lauber E y Mckeregham MR. Inhibition of dopamine-beta-hydroxylase by disulfiram. Life Soienoes 1964; 3 (7): 763-7.

11. Goldstein M, Lauber E y Mckereghan MR. The inhibition of dopamine-beta-hydroxylase by tropolone and other chelating agents. Bioohemioal Pharmaoology 1964; 13 (7): 1103-6.

12. Stanley WC, Li B, Bonhaus DW, Johnson LG, Lee K, Porter S, et al. Catecholamine modulatory effects of nepicastat (RS-25560-197), a novel, potent and selective inhibitor of dopamine-beta-hydroxylase. British Journal of Pharmaoology 1997; 121 (8): 1803-9.

13. Beliaev A, Learmonth DA y Soares-da-Silva P. Synthesis and biological evaluation of novel, peripherally selective chromanylimidazolethione-based inhibitors of dopamine beta-hydroxylase. J Med Chem. 2006; 49(3):1191 -7.

14. Cvek B. y Dvorak Z. Targeting of Nuclear Factor-xB and Proteasome by Dithiocarbamate Complexes with Metals. Current Pharmaoeutioal Design 2007; 13 (30): 3155-67.

15. Wickstrom M, Danielsson K, Rickardson L, Gullbo J, Nygren P, Isaksson A, et al. Pharmacological profiling of disulfiram using human tumor cell lines and human tumor cells from patients. Bioohemioal Pharmaoology 2007; 73 (1): 25-33.

16. Schweizer MT1, Lin J, Blackford A, Bardia A, King S, Armstrong AJ, et al. Pharmacodynamic study of disulfiram in men with non-metastatic recurrent prostatic cancer. Prostate Canoer Prostatio Dis. 2013;16(4): 357-61.

17. Huang J, Campian JL, Gujar AD, Tran DD, Lockhart AC, et al. A phase I study to repurpose disulfiram in combination with temozolomide to treat newly diagnosed glioblastoma after chemoradiotherapy. J Neuroonool. 2016; 128(2):259-66.

18. Nechushtan H, Hamamreh Y, Nidal S, Gotfried M, Baron A, Shalev YI, et al. A phase IIb trial assessing the addition of disulfiram to chemotherapy for the treatment of metastatic non-small cell lung cancer. Onoologist. 2015; 20(4): 366­ 7.

19. Verma S, Stewart DJ, Maroun JA, Nair RC. A randomized phase II study of cisplatin alone versus cisplatin plus disulfiram. Am. J. Clin. Onool. 1990; 13(2):119-24.

20. Kontoghiorghes GJ, Piga A y Hoffbrand AV. Cytotoxic and DNA-inhibitory effects of iron chelators on human leukaemic cell lines. Hematol. Onool. 1986; 4(3):195-204.

21. Ononye SN, VanHeyst MD, Oblak EZ, Zhou W, Ammar M, Anderson AC y Wright DL. Tropolones as lead-like natural products: the development of potent and selective histone deacetylase inhibitors. ACS Med Chem Lett. 2013; 4(8):757-61.

22. Cook EH, Fletcher KE, Wainwright M, Marks N, Yan SY y Leventhal BL. Primary structure of the human platelet serotonin 5-HT2A receptor: identify with frontal cortex serotonin 5-HT2A receptor. Journal of Neuroohemistry 1994; 63(2): 465-9.

23. Martin P, Waters N, Schmidt CJ, Carlsson A y Carlsson ML. Rodents data and general hypothesis: antipsychotic action exerted through 5-HT2A receptor antagonism dependent on increased serotonergic tone. Journal of Neural Transmission 1998; 105(4-5): 365-96.

24. Aghajanian GK, Marek GJ. Serotonin, via 5-HT2A receptors, increases EPSCs in layer V pyramidal cells of prefrontal cortex by an asynchronous mode of glutamate release. Brain Research 1999; 825(1-2): 161-71.

25. Marek GJ, Wright RA, Gewirtz JC y Schoepp DD (2001). A major role for thalamocortical afferents in serotonergic hallucinogen receptor function in the rat neurocortex. Neuroscience 2001; 105(2): 379-92.

26. Bortolozzi A, Díaz-Mataix L, Scorza MC, Celada P y Artigas F. The activation of 5-HT receptors in prefrontal cortex enhances dopaminergic activity. Journal of Neurochemistry 2005; 95(6): 1597-607.

27. Amargós-Bosch M, Bortolozzi A, Puig MV, Serrats J, Adell A, Celada P, Toth M, Mengod G, Artigas F (marzo de 2004). "Co-expression and in vivo interaction of serotonin 1A and serotonin 2A receptors in pyramidal neurons of prefrontal cortex". Cerebral cortex 14 (3): 281-99. doi:10.1093/cercar/bhg128. PMID 14754868.

28. Feng J, Cai X, Zhao J y Yan Z. Serotonin receptors modulate GABA(A) receptor channels through activation of anchored protein kinase C in prefrontal cortical neurons. The Journal of Neuroscience 2001; 21 (17): 6502-11.

29. Marek GJ. Activation of adenosine(1) (A(1)) receptors suppresses head shakes induced by a serotonergic hallucinogen in rats. Neuropharmacology 2009; 56(8): 1082-7.

30. Zhang C y Marek GJ. (enero de 2008). AMPA receptor involvement in 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated pre-frontal cortical excitatory synaptic currents and DOI-induced head shakes. Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry 2008; 32(1): 62-71.

31. Gewirtz JC y Marek GJ. (noviembre de 2000). Behavioral evidence for interactions between a hallucinogenic drug and group II metabotropic glutamate receptors. Neuropsychopharmacology 2000; 23(5): 569-76.

32. Marek GJ y Zhang C. Activation of metabotropic glutamate 5 (mGlu5) receptors induces spontaneous excitatory synaptic currents in layer V pyramidal cells of the rat prefrontal cortex. Neuroscience Letters 2008; 442(3): 239-43. 33. Lambe EK, Liu RJ y Aghajanian GK. Schizophrenia, hypocretin (orexin) and the thalamocortical activating system. Schizophrenia Bulletin 2007; 33(6): 1284-90.

34. Liu RJ y Aghajanian GK. Stress blunts serotonin- and hypocretin-evoked EPSCs in prefrontal cortex: role of corticosterone-mediated apical dendritic atrophy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2008; 105(1): 359-64.

35. Dürk T, Panther E, Müller T, Sorichter S, Ferrari D, Pizzirani C, et al. 5-hydroxytryptamine modulates cytokine and chemokine production in LPS-primed human monocytes via stimulation of different 5-HTR subtypes. International Immunology 2005; 17(5): 599-606.

36. Urban JD, Clarke WP, von Zastrow M, Nichols DE, Kobilka B, Weinstein H, et al. Functional selectivity and classical concepts of quantitative pharmacology. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2007; 320(1): 1­ 13.

37. Harvey JA. Role of serotonin 5-HT(2A) receptor in learning. Learning and Memory 2003; 10(5): 355-62.

38. Williams GV, Rao SG y Goldman-Rakic PS. The physiological role of 5-HT2A receptors in working memory. The Journal of Neuroscience 2002; 22(7): 2843-54.

39. Yu B, Becnel J, Zerfaoui M, Rohatgi R, Boulares AH y Nichols CD. Serotonin 5-hydroxytryptamine (2A) receptor activation suppresses tumor necrosis factor-alpha-induced inflammation with extraordinary potency. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2008; 327 (2): 316-23.

40. Nau F, Yu B, Martin D, Nichols CD. Serotonin 5-HT2A receptor activation blocks TNF-a mediated inflammation in vivo. PloS One 2013; 8 (10): e75426.

41. Van de Kar LD, Javed A, Zhang Y, Serres F, Raap DK y Gray TS. 5-HT2A receptors stimulate ACTH, corticosterone, oxytocin, renin and prolactin release and activate hypothalamic CRF and oxytocin-expressing cells. The Journal of Neuroscience 2001; 21 (10): 3572-9.

42. Zhang Y, Damjanoska KJ, Carrasco GA, Dudas B, D'Souza DN, Tetzlaff J, et al. Evidence that 5-HT2A receptors in the hypothalamic paraventricular nucleus mediate neuroendocrine responses to (-) DOI. The Journal of Neuroscience 2002; 22 (21): 9635-42.

43. Hegde SS y Friday KF. Dopamine-beta-hydroxylase inhibition: a novel sympatho-modulatoy approach for the treatment of congestive heart failure. Current Pharmaceutical Design 1998; 4 (6): 469-79.

44. De La Garza, R 2nd, Bubar MJ, Carbone CL, Moeller FG, Newton TF, et al. Evaluation of the dopamine phydroxylase (DpH) inhibitor nepicastat in participants who meet criteria for cocaine use disorder. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 2015; 59:40-8.

45. Nunes T, Rocha JF, Vaz-da-Silva M, Igreja B, Wright LC, et al. Safety, tolerability and pharmacokinetics of etamicastat, a novel dopamine-p-hydroxylase inhibitor, in a rising multiple-dose study in young healthy subjects. Drug in R&D 2010; 10(4):225-242.

46. Almeida L, Nunes T, Costa R, Rocha JF, Vaz-da-Silva M y Soares-da-Silva P. Etamicastat, a novel dopamine phydroxylase inhibitor: tolerability, pharmacokinetic and pharmacodynamics in patients with hypertension. ClinTher.

2013; 35(12):1983-96.

47. Svartengren J y Simonsson P. Receptor binding properties of amperozide. Pharmacology and Toxicology. 1990; 66 Suplemento 1:8-11.

48. Meltzer HY, Zhang Y, Stockmeier CA. Effect of amperozide on rat cortical 5-HT2 and striatal and limbic dopamine D2 receptor occupancy: implications for antipsychotic action. European Journal of Pharmacology. 1992; 216(1) :67-71.

49. Eriksson E. Amperozide, a putative antipsychotic: uptake inhibition and release of dopamine in vitro in the rat brain. Life Sciences. 1990; 47(23):2111 -7.

50. Yamamoto BK y Meltzer HY. The effect of the atypical antipsychotic drug, amperozide, on carrier-mediated striatal dopamine release measured in vivo. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 1992; 263(1):180-5.

51. Grenhoff J, Tung CS, Ugedo L y Svensson TH. Effects of amperozide, a putative antipsychotic drug, on rat midbrain dopamine neurons recorded in vivo. Pharmacology and Toxicology. 1990; 66 Suplemento 1:29-33.

52. Axelsson R, Nilsson A, Christensson E y Bjork A. Effects of amperozide in schizophrenia. An open study of a potent 5-HT2 receptor antagonist. Psycopharmacology (Berlin). 1991; 104(3):287-92.

53. Kyriakis SC, Martinsson K, Olsson NG y Bjork A. Thin sow syndrome (TSS): the effect of amperozide. British Veterinary Journal. 1990; 146(5):463-7.

54. Kyriakis SC, Olsson NG, Martinsson K y Bjork AK. Observations on the action of amperozide: are there social influences on sow-litter productivity? Research in Veterinary Sciences. 1991; 51 (2):169-73.

55. Papp I, Waller C y Biro O. Practical experiences in the therapy of postweaning edema disease in piglets. Berliner und Munchener Tierarztliche Wochenschrift. (alemán) 1996;109(10): 385-7.

56. Yan H, Zhang B, Li S, Zhao Q. A formal mode for analyzing drug combination effects and its application in TNF-alpha-induced NFkappaB pathway. BMC Syst Biol. 2010; 4:50.

57. Axelsson R et al. Effects of amperozide in schizophrenia. An open study of a potent 5-HT2 receptor antagonist. Psychopharmacology, 1991, 104: 287-292.

58. De La Garza II R et al. Evaluation of the dopamine p-hydroxylase (DpH) inhibitor nepicastat in participants who meet criteria for cocaine use disorder. Progress in Neuropsychopharmacology and Biological Psychiatry, 2015, 59: 40­ 48.

59. Nunes T et al. Safety, tolerability and pharmacokinetics of etamicastat, a novel dopamine-b-hydroxylase inhibitor, in a rising multiple-dose study in young healthy subjects. Drugs R D. 2010, 10 (4): 225-242.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para usar en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo necesite, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la dopamina beta-hidroxilasa (DBH) seleccionado del grupo que consiste en nepicastat y etamicastat, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que el inhibidor de DBH es nepicastat, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que el inhibidor de DBH es etamicastat, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 2 o la reivindicación 3, que comprende además al menos un agente anticanceroso adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterapéutico, un agente de terapia dirigida y un agente de inmunoterapia.

5. La composición farmacéutica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en combinación con al menos una terapia contra el cáncer adicional seleccionada del grupo que consiste en cirugía, terapia génica, radioterapia y crioterapia.

6. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de hígado, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de cuello uterino, carcinoma de células renales, cáncer de vejiga y cáncer gástrico.

7. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 6, en la que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de colon o melanoma.

8. Una combinación farmacéutica que comprende:

(a) una primera composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en nepicastat y etamicastat, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(b) una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un agente anticanceroso adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterapéutico, un agente de terapia dirigida y un agente de inmunoterapia,

en la que la cantidad terapéuticamente eficaz del al menos un agente anticanceroso adicional está presente en la primera composición o en una segunda composición para administrarse en combinación con la primera composición.

9. Una combinación farmacéutica según la reivindicación 8 para uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesite.

10. La combinación farmacéutica para su uso según la reivindicación 9, en la que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de hígado, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de cuello uterino, carcinoma de células renales, cáncer de vejiga y cáncer gástrico.

11. La combinación farmacéutica para su uso según la reivindicación 10, en la que el cáncer es cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de colon o melanoma.

12. La composición o combinación farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y 9-11, en la que el sujeto es un sujeto humano.

13. La composición o combinación farmacéutica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, 4-5, 6-7 y 9-12, para uso a una dosis de nepicastat o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de aproximadamente 20 mg/día a 2,5 g/día, preferiblemente de 40 mg/día a 1,0 g/día, y más preferiblemente de 80 mg/día a 500 mg/día.

14. La composición o combinación farmacéutica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1,3-5, 6­ 7 y 9-12, para uso a una dosis de etamicastat o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de aproximadamente 40 mg/día a 4,0 g/día, preferiblemente de 80 mg/día a 2,0 g/día, y más preferiblemente de 160 mg/día a 1,0 g/día.