ES2954151T3 - Compuesto para uso en métodos para el tratamiento de la poliquistosis renal - Google Patents

Compuesto para uso en métodos para el tratamiento de la poliquistosis renal Download PDF

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B Nelson Chau
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Abstract

En el presente documento se proporcionan métodos para el tratamiento de la poliquistosis renal, incluida la poliquistosis renal autosómica dominante, utilizando oligonucleótidos modificados dirigidos a miR-17. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto para uso en métodos para el tratamiento de la poliquistosis renal.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
[0001] En el presente documento se proporcionan compuestos para uso en un método de tratamiento de la poliquistosis renal.
ANTECEDENTES
[0002] La enfermedad renal poliquística es un trastorno genético en el que se desarrollan múltiples quistes llenos de líquido en los riñones y en otras partes del cuerpo. La enfermedad renal poliquística se puede heredar como autosómica recesiva (ARPKD) o autosómica dominante (ADPKD). La poliquistosis renal autosómica dominante es causada por mutaciones en el gen PKD1 o PKD2. La ADPKD es una enfermedad progresiva en la que la formación de quistes y el agrandamiento renal conducen a una insuficiencia renal y, finalmente, a una enfermedad renal terminal en el 50 % de los pacientes a los 60 años. Los pacientes con ADPKD pueden necesitar diálisis de por vida y/o un trasplante de riñón. Actualmente no existe un agente terapéutico aprobado para el tratamiento de la ADPKD.
[0003] L. Noureddine et al. (Drug Discovery Today: Disease Models, vol. 10, n.° 3, p. e137-e143, 2013) se relaciona con "microARN y poliquistosis renal" (título). V. Patel et al. (PNAS, vol. 110, n.° 26, p. 10765-10770, 2013) analiza que el "grupo de miARN miR-17-92 promueve el crecimiento de quistes renales en la enfermedad renal poliquística" (título). H. Sun et al. (Mol Biol Rep., vol. 37, n.° 6, p. 2951-2958, 2010) discute que "MicroRNA-17 post-transcriptionally regulates polycystic kidney disease-2 gene and promotes cell proliferation" (título). U. Tran et al. (Development, vol. 137, n.° 7, p.
1107-1116, 2010) discute que "The RNA-binding protein bicaudal C regulates polycystin 2 in the kidney by antagonizing miR-17 activity" (título). H. Matsubara et al. (Oncogene, vol. 26, p. 6099-6105, 2007) se relaciona con "Apoptosis induction by antisense oligonucleotides against miR-17-5p and miR-20a in lung cancers overexpressing miR-17-92" (título). El documento WO 2015/123449 A2 (Univ Jefferson) se refiere a "compositions and methods of using microRNA inhibitors" (título). El documento WO 2008/131191 A2 (Amgen Inc., et al.) se refiere a "ácidos nucleicos hibridables con precursores de microARN de los mismos" (título).
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
[0004] En este documento, se proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consta de 8 a 25 nucleósidos unidos, en los que la secuencia de bases nitrogenadas del oligonucleótido modificado es complementaria a miR-17, para usar en un método de tratamiento de la poliquistosis renal. En ciertas formas de realización, el sujeto tiene poliquistosis renal. En ciertas formas de realización, se sospecha que el sujeto tiene poliquistosis renal.
[0005] En ciertas formas de realización, al sujeto se le ha diagnosticado enfermedad renal poliquística antes de administrar el compuesto que comprende el oligonucleótido modificado. En algunas formas de realización, se determinó que el sujeto, antes de la administración del compuesto que comprende el oligonucleótido modificado, tenía un nivel aumentado de miR-17 en el riñón, la orina o la sangre del sujeto.
[0006] En ciertas formas de realización, la enfermedad renal poliquística es enfermedad renal poliquística autosómica dominante (ADPKD). En algunas formas de realización, la enfermedad renal poliquística es enfermedad renal poliquística autosómica recesiva (ARPKD). En algunas formas de realización, el sujeto tiene una mutación en el gen PKD1. En algunas formas de realización, el sujeto tiene una mutación en el gen PKD2.
[0007] En ciertas formas de realización, el sujeto tiene un volumen renal total aumentado. En algunas formas de realización, el sujeto tiene hipertensión. En algunas formas de realización, el sujeto tiene una función renal alterada. En algunas formas de realización, el sujeto necesita una función renal mejorada.
[0008] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, la administración del compuesto que comprende un oligonucleótido modificado complementario a miR-17, a un sujeto que tiene poliquistosis renal, puede mejorar la función renal en el sujeto; retrasar el empeoramiento de la función renal en el sujeto; reducir el volumen renal total en el sujeto; ralentizar el aumento del volumen renal total en el sujeto; inhibir el crecimiento de quistes en el sujeto; ralentizar el aumento del crecimiento de quistes en el sujeto; reducir el dolor de riñón en el sujeto; ralentizar el aumento del dolor renal en el sujeto; retrasar la aparición de dolor renal en el sujeto; reducir la hipertensión en el sujeto; retardar el empeoramiento de la hipertensión en el sujeto; retrasar la aparición de hipertensión en el sujeto; reducir la fibrosis en el riñón del sujeto; retrasar el empeoramiento de la fibrosis en el riñón del sujeto; retrasar la aparición de la enfermedad renal en etapa terminal en el sujeto; tiempo de retraso para la diálisis del sujeto; tiempo de retraso para el trasplante renal para el sujeto; y/o mejorar la esperanza de vida del sujeto.
[0009] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, la administración del compuesto que comprende un oligonucleótido modificado complementario a miR-17, a un sujeto que tiene poliquistosis renal, puede reducir la albuminuria en el sujeto; retrasar el empeoramiento de la albuminuria en el sujeto; retrasar la aparición de albuminuria en el sujeto; reducir la hematuria en el sujeto; retrasar el empeoramiento de la hematuria en el sujeto; retrasar la aparición de hematuria en el sujeto; reduce el nitrógeno ureico en sangre en el sujeto; reducir la creatinina en la sangre del sujeto; mejorar el aclaramiento de creatinina en el sujeto; reducir la relación albúmina:creatinina en el sujeto; mejorar la tasa de filtración glomerular en el sujeto; retarda el empeoramiento de la tasa de filtración glomerular en el sujeto; reducir la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto; y/o reducir la proteína de la molécula 1 de daño renal (KIM-1) en la orina del sujeto.
[0010] Cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento puede comprender medir el volumen renal total en el sujeto; medir la hipertensión en el sujeto; medir el dolor renal en el sujeto; medir la fibrosis en el riñón del sujeto; medir el nitrógeno ureico en sangre en la sangre del sujeto; medir la creatinina en la sangre del sujeto; medir el aclaramiento de creatinina en el sujeto; medir la albuminuria en el sujeto; medir la relación albúmina:creatinina en el sujeto; medir la tasa de filtración glomerular en el sujeto; medir la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto; y/o medir la proteína de la molécula 1 de daño renal (KIM-1) en la orina del sujeto.
[0011] En ciertas formas de realización, el volumen renal total es el volumen renal ajustado por la altura.
[0012] En ciertas formas de realización, un quiste está presente en el riñón de un sujeto. En algunas formas de realización, un quiste está presente en el riñón y el hígado de un sujeto.
[0013] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, la secuencia de nucleobases del oligonucleótido modificado es al menos 90 % complementaria, es al menos 95 % complementaria o es 100 % complementaria a la secuencia de nucleobases de miR-17 (SEQ ID NO: 1).
[0014] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, la secuencia de nucleobases del oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5-GCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 3), en la que cada T en la secuencia de nucleobases se selecciona independientemente de una T y una U.
[0015] El compuesto para uso de la invención comprende un oligonucleótido modificado que consta de 8 a 25 nucleósidos enlazados. En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado consta de 8 a 12, 12 a 25, 15 a 25 o 17 a 23 nucleósidos unidos. En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado consta de 8, 9, 10, 11 o 12 nucleósidos enlazados. En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado consta de 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 nucleósidos enlazados. En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado consta de 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 nucleósidos enlazados. En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado consta de 17, 18, 19, 20, 21, 22 o 23 nucleósidos enlazados.
[0016] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el oligonucleótido modificado comprende al menos un nucleósido modificado. El nucleósido modificado se puede seleccionar de un nucleósido S-cEt, un nucleósido 2'-O-metoxietilo y un nucleósido LNA. El oligonucleótido modificado puede comprender al menos un enlace internucleósido modificado. Cada enlace internucleósido del oligonucleótido modificado puede ser un enlace internucleósido modificado. En ciertas formas de realización, el enlace internucleósido modificado es un enlace internucleósido de fosforotioato.
[0017] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, el compuesto consiste en el oligonucleótido modificado.
[0018] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, se administra al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que comprende un oligonucleótido modificado complementario a miR-17.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
[0019]
Figura 1A-B. (A) Organización genómica del miR-17-92 y sus grupos parálogos miR-106a-363 y miR-106b~25; (B) familias de microARN miR-17, miR-18, miR-19 y miR-92.
Figura 2A-B. El tratamiento de ratones Pcy con anti-miR-17 conduce a (A) una reducción en la relación entre el peso del riñón y el peso corporal y (B) el índice quístico.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0020] A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende un experto en la materia a la que pertenece la invención. A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con la química analítica, la química orgánica sintética y la química farmacéutica y médica descrita en este documento, y los procedimientos y técnicas de las mismas, son bien conocidas y comúnmente utilizadas en la técnica. En el caso de que exista una pluralidad de definiciones de términos en el presente, prevalecerán las de esta sección. Pueden usarse técnicas estándar para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación y suministro, y tratamiento de sujetos. Ciertas técnicas y procedimientos de este tipo se pueden encontrar, por ejemplo, en "Carbohydrate Modifications in Antisense Research", editado por Sangvi y Cook, American Chemical Society, Washington DC, 1994; y "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18.a edición, 1990. Cuando se hace referencia a una URL u otro identificador o dirección, se entiende que dichos identificadores pueden cambiar y la información particular en Internet puede cambiar, pero se puede encontrar información equivalente buscando en Internet. La referencia al mismo evidencia la disponibilidad y difusión pública de dicha información.
[0021] Antes de divulgar y describir la presente invención, debe entenderse que la terminología utilizada en este documento tiene el propósito de describir formas de realización particulares únicamente y no pretende ser limitativa. Cabe señalar que, tal como se utiliza en la especificación y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una", “el” y "ella" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente dicta lo contrario.
Definiciones
[0022] La "enfermedad renal poliquística" o "PKD" es una forma hereditaria de enfermedad renal en la que se forman múltiples quistes en al menos un riñón, lo que provoca el agrandamiento de los riñones afectados y la pérdida progresiva de la función renal.
[0023] La "enfermedad renal poliquística autosómica dominante" o "ADPKD" generalmente es causada por una o más mutaciones genéticas en el gen PKD1 y/o PKD2. El 85 % de la ADPKD es causada por mutaciones en PKD1, que se encuentra en el cromosoma 16, y la mayoría de los casos restantes de ADPKD son causados por mutaciones en PKD2, que se encuentra en el cromosoma 4.
[0024] La "enfermedad renal poliquística autosómica recesiva" o "ARPKD" generalmente es causada por una o más mutaciones genéticas en el gen PKHD1, que se encuentra en el cromosoma 6. Hasta el 50% de los recién nacidos con ARPKD mueren por complicaciones de la enfermedad renal intrauterina, y aproximadamente un tercio de los que sobreviven desarrollan enfermedad renal en etapa terminal (ESRD) dentro de los 10 años.
[0025] El "volumen renal total" o "TKV" es una medida del volumen renal total que puede determinarse mediante imágenes por resonancia magnética (IRM), tomografía computarizada (TC) o imágenes por ultrasonido (US), y el volumen se calcula mediante una metodología estándar., como una ecuación de volumen elipsoide (para ultrasonido), o por estereología cuantitativa o rastreo de límites (para CT/MRI). TKV generalmente aumenta de manera constante en pacientes con ADPKD, y los aumentos se correlacionan con una disminución de la función renal.
[0026] El "volumen renal total ajustado a la altura" o "HtTKV" es una medida del volumen renal total por unidad de altura. Se prevé que los pacientes con un valor de HtTKV > 600 ml/m desarrollen enfermedad renal crónica en estadio 3 en un plazo de 8 años.
[0027] "Dolor de riñón" significa dolor de riñón clínicamente significativo que requiere licencia médica, tratamiento farmacológico (narcóticos o agentes analgésicos de último recurso) o intervención invasiva.
[0028] "Empeoramiento de la hipertensión" significa un cambio en la presión arterial que requiere un aumento en el tratamiento antihipertensivo.
[0029] "Fibrosis" significa la formación o desarrollo de un exceso de tejido conjuntivo fibroso en un órgano o tejido. En determinadas formas de realización, la fibrosis se produce como un proceso reparador o reactivo. En determinadas formas de realización, la fibrosis se produce en respuesta a un daño o lesión. El término "fibrosis" debe entenderse como la formación o el desarrollo de un exceso de tejido conjuntivo fibroso en un órgano o tejido como proceso reparador o reactivo, en contraposición a la formación de tejido fibroso como constituyente normal de un órgano o tejido.
[0030] "Hematuria" significa la presencia de glóbulos rojos en la orina.
[0031] "Albuminuria" significa la presencia de exceso de albúmina en la orina, e incluye, sin limitación, albuminuria normal, albuminuria normal alta, microalbuminuria y macroalbuminuria. Normalmente, la barrera de permeabilidad de filtración glomerular, que está compuesta por podocitos, membrana basal glomerular y células endoteliales, evita que la proteína sérica se filtre a la orina. La albuminuria puede reflejar lesión de la barrera de permeabilidad de filtración glomerular. La albuminuria se puede calcular a partir de una muestra de orina de 24 horas, una muestra de orina durante la noche o una muestra de orina puntual.
[0032] "Albuminuria normal alta" significa albuminuria elevada caracterizada por (i) la excreción de 15 a <30 mg de albúmina en la orina cada 24 horas y/o (ii) una relación albúmina/creatinina de 1,25 a <2,5 mg/mmol (o 10 a <20 mg/g) en hombres o 1,75 a <3,5 mg/mmol (o 15 a <30 mg/g) en mujeres.
[0033] "Microalbuminuria" significa albuminuria elevada caracterizada por (i) la excreción de 30 a 300 mg de albúmina en la orina cada 24 horas y/o (ii) una relación albúmina/creatinina de 2,5 a <25 mg/mmol (o 20 a < 200 mg/g) en hombres o 3,5 a <35 mg/mmol (o 30 a <300 mg/g) en mujeres.
[0034] "Macroalbuminuria" significa albuminuria elevada caracterizada por la excreción de más de 300 mg de albúmina en la orina cada 24 horas y/o (ii) una relación albúmina/creatinina de >25 mg/mmol (o >200 mg/g) en hombres o >35 mg/mmol (o >300 mg/g) en mujeres.
[0035] “Proporción albúmina/creatinina” significa la proporción de albúmina en orina (mg/dl) por creatinina en orina (g/dl) y se expresa como mg/g. En ciertas formas de realización, la proporción de albúmina/creatinina se puede calcular a partir de una muestra de orina puntual y se puede usar como una estimación de la excreción de albúmina durante un período de 24 horas.
[0036] "Tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) o "tasa de filtración glomerular (GFR)" significa una medida de qué tan bien los riñones están filtrando la creatinina, y se usa como una estimación de cuánta sangre pasa a través de los glomérulos por minuto. Los resultados normales pueden variar de 90-120 mL/min/1,73 m2. Los niveles por debajo de 60 mL/min/1,73 m2 durante 3 o más meses pueden ser un indicador de enfermedad renal crónica. Los niveles por debajo de 15 mL/min/1,73 m2 pueden ser un indicador de insuficiencia renal.
[0037] "Proteinuria" significa la presencia de un exceso de proteínas séricas en la orina. La proteinuria se puede caracterizar por la excreción de > 250 mg de proteína en la orina cada 24 horas y/o una proporción de proteína en orina a creatinina de > 0,20 mg/mg. Las proteínas séricas elevadas en asociación con la proteinuria incluyen, entre otras, la albúmina.
[0038] "Nitrógeno de urea en sangre" o "BUN" significa una medida de la cantidad de nitrógeno en la sangre en forma de urea. El hígado produce urea en el ciclo de la urea como producto de desecho de la digestión de proteínas, y los riñones eliminan la urea de la sangre. La sangre humana adulta normal puede contener entre 7 y 21 mg de nitrógeno ureico por 100 ml (7-21 mg/dL) de sangre. La medición del nitrógeno ureico en sangre se utiliza como indicador de la salud renal. Si los riñones no pueden eliminar normalmente la urea de la sangre, el BUN de un sujeto aumenta.
[0039] "Enfermedad renal en etapa terminal (ESRD)" significa la falla completa o casi completa de la función renal.
[0040] "Función renal alterada" significa función renal reducida, en relación con la función renal normal.
[0041] "Retardar el empeoramiento de" y "retardar el empeoramiento" significan reducir la velocidad a la que una afección médica avanza hacia un estado avanzado.
[0042] "Tiempo de retraso para la diálisis" significa mantener una función renal suficiente de modo que se retrase la necesidad del tratamiento de diálisis.
[0043] “Tiempo de demora para el trasplante renal” significa mantener una función renal suficiente de modo que se retrase la necesidad de un trasplante renal.
[0044] Mejorar la esperanza de vida significa alargar la vida de un sujeto tratando uno o más síntomas de una enfermedad en el sujeto.
[0045] "Sujeto" significa un animal humano o no humano seleccionado para tratamiento o terapia.
[0046] "Sujeto que lo necesita" significa un sujeto que se identifica como que necesita una terapia o tratamiento.
[0047] "Sujeto sospechoso de tener" significa un sujeto que presenta uno o más indicadores clínicos de una enfermedad.
[0048] "Administrar" significa proporcionar un agente o composición farmacéutica a un sujeto e incluye, pero no se limita a la administración por parte de un profesional médico y la autoadministración.
[0049] "Administración parenteral" significa administración mediante inyección o infusión. La administración parenteral incluye, pero no se limita a administración subcutánea, administración intravenosa y administración intramuscular.
[0050] “Administración subcutánea” significa administración justo debajo de la piel.
[0051] “Administración intravenosa” significa administración en una vena.
[0052] "Administrado de forma concomitante" se refiere a la coadministración de dos o más agentes de cualquier manera en la que los efectos farmacológicos de ambos se manifiesten en el paciente al mismo tiempo. La administración concomitante no requiere que ambos agentes se administren en una sola composición farmacéutica, en la misma forma de dosificación o por la misma vía de administración. No es necesario que los efectos de ambos agentes se manifiesten al mismo tiempo. Los efectos solo necesitan superponerse durante un período de tiempo y no necesitan ser coextensivos.
[0053] "Duración" significa el período de tiempo durante el cual continúa una actividad o evento. En ciertas formas de realización, la duración del tratamiento es el período de tiempo durante el cual se administran las dosis de un agente farmacéutico o una composición farmacéutica.
[0054] "Terapia" significa un método de tratamiento de una enfermedad. En ciertas formas de realización, la terapia incluye, pero no se limita a la administración de uno o más agentes farmacéuticos a un sujeto que padece una enfermedad.
[0055] "Tratar" significa aplicar uno o más procedimientos específicos utilizados para curar una enfermedad o mejorar al menos un indicador de una enfermedad. En ciertas formas de realización, el procedimiento específico es la administración de uno o más agentes farmacéuticos. En determinadas formas de realización, el tratamiento de la PKD incluye, entre otros, la reducción del volumen renal total, la mejora de la función renal, la reducción de la hipertensión y/o la reducción del dolor renal.
[0056] "Mejorar" significa disminuir la gravedad de al menos un indicador de una afección o enfermedad. En ciertas formas de realización, la mejora incluye un retraso o ralentización en la progresión de uno o más indicadores de una condición o enfermedad. La gravedad de los indicadores puede determinarse mediante medidas subjetivas u objetivas conocidas por los expertos en la materia.
[0057] "En riesgo de desarrollar" significa el estado en el que un sujeto está predispuesto a desarrollar una condición o enfermedad. En determinadas formas de realización, un sujeto en riesgo de desarrollar una afección o enfermedad presenta uno o más síntomas de la afección o enfermedad, pero no muestra un número suficiente de síntomas para que se le diagnostique la afección o enfermedad. En ciertas formas de realización, un sujeto en riesgo de desarrollar una afección o enfermedad presenta uno o más síntomas de la afección o enfermedad, pero en menor medida se requiere que se le diagnostique la afección o enfermedad.
[0058] "Prevenir la aparición de" significa prevenir el desarrollo de una condición o enfermedad en un sujeto que está en riesgo de desarrollar la enfermedad o condición. En ciertas formas de realización, un sujeto en riesgo de desarrollar la enfermedad o condición recibe un tratamiento similar al tratamiento recibido por un sujeto que ya tiene la enfermedad o condición.
[0059] "Retrasar el inicio de" significa retrasar el desarrollo de una condición o enfermedad en un sujeto que está en riesgo de desarrollar la enfermedad o condición. En ciertas formas de realización, un sujeto en riesgo de desarrollar la enfermedad o condición recibe un tratamiento similar al tratamiento recibido por un sujeto que ya tiene la enfermedad o condición.
[0060] "Agente terapéutico" significa un agente farmacéutico utilizado para curar, mejorar o prevenir una enfermedad.
[0061] "Dosis" significa una cantidad específica de un agente farmacéutico proporcionado en una sola administración. En ciertas formas de realización, una dosis puede administrarse en dos o más bolos, comprimidos o inyecciones. Por ejemplo, en ciertas formas de realización, donde se desea la administración subcutánea, la dosis deseada requiere un volumen que no se puede acomodar fácilmente con una sola inyección. En tales formas de realización, se pueden usar dos o más inyecciones para lograr la dosis deseada. En ciertas formas de realización, una dosis puede administrarse en dos o más inyecciones para minimizar la reacción en el lugar de la inyección en un individuo. En ciertas formas de realización, una dosis se administra como una infusión lenta.
[0062] "Unidad de dosificación" significa una forma en la que se proporciona un agente farmacéutico. En determinadas formas de realización, una unidad de dosificación es un vial que contiene un oligonucleótido liofilizado. En ciertas formas de realización, una unidad de dosificación es un vial que contiene oligonucleótidos reconstituidos.
[0063] "Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un animal.
[0064] "Composición farmacéutica" significa una mezcla de sustancias adecuadas para administrar a un individuo que incluye un agente farmacéutico. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender una solución acuosa estéril.
[0065] "Agente farmacéutico" significa una sustancia que proporciona un efecto terapéutico cuando se administra a un sujeto.
[0066] "Ingrediente farmacéutico activo" significa la sustancia en una composición farmacéutica que proporciona un efecto deseado.
[0067] “Sal farmacéuticamente aceptable” significa una sal fisiológica y farmacéuticamente aceptable de un compuesto proporcionado en el presente documento, es decir, una sal que retiene la actividad biológica deseada del compuesto y no tiene efectos toxicológicos no deseados cuando se administra a un sujeto. Las sales farmacéuticamente aceptables a modo de ejemplo no limitantes de los compuestos proporcionados en el presente documento incluyen formas de sal de sodio y potasio. El término "compuesto" como se usa en el presente documento incluye sus sales farmacéuticamente aceptables a menos que se indique específicamente lo contrario.
[0068] "Mejora de la función de los órganos" significa un cambio en la función de los órganos hacia los límites normales. En determinadas formas de realización, la función del órgano se evalúa midiendo las moléculas que se encuentran en la sangre o la orina de un sujeto. Por ejemplo, en determinadas formas de realización, la función renal mejorada se mide mediante una reducción del nitrógeno ureico en sangre, una reducción de la proteinuria, una reducción de la albuminuria, etc.
[0069] "Perfil de seguridad aceptable" significa un patrón de efectos secundarios que está dentro de los límites clínicamente aceptables.
[0070] "Efecto secundario" significa una respuesta fisiológica atribuible a un tratamiento distinta de los efectos deseados. En ciertas formas de realización, los efectos secundarios incluyen, sin limitación, reacciones en el lugar de la inyección, anomalías en las pruebas de función hepática, anomalías en la función renal, toxicidad hepática, toxicidad renal, anomalías en el sistema nervioso central y miopatías. Dichos efectos secundarios pueden detectarse directa o indirectamente. Por ejemplo, el aumento de los niveles de aminotransferasa en suero puede indicar toxicidad hepática o anomalías en la función hepática. Por ejemplo, el aumento de la bilirrubina puede indicar toxicidad hepática o anomalías en la función hepática.
[0071] "Cumplimiento del sujeto" significa adherencia a una terapia recomendada o prescrita por un sujeto.
[0072] "Cumplir" significa la adherencia a una terapia recomendada por parte de un sujeto.
[0073] "Terapia recomendada" significa un tratamiento recomendado por un profesional médico para el tratamiento, la mejora o la prevención de una enfermedad.
[0074] El término "sangre", como se usa en el presente documento, abarca sangre entera y fracciones de sangre, como suero y plasma.
[0075] "Anti-miR" significa un oligonucleótido que tiene una secuencia de nucleobases complementaria a un microARN. En ciertas formas de realización, un anti-miR es un oligonucleótido modificado.
[0076] "Anti-miR-X", donde "miR-X" designa un microARN particular, significa un oligonucleótido que tiene una secuencia de nucleobases complementaria a miR-X. En ciertas formas de realización, un anti-miR-X es totalmente complementario (es decir, 100 % complementario) a miR-X. En determinadas formas de realización, un anti-miR-X es al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 % o al menos un 95 % complementario de miR-X. En ciertas formas de realización, un anti-miR-X es un oligonucleótido modificado.
[0077] "miR-17" significa el miARN maduro que tiene la secuencia de nucleobase CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG (SEQ ID NO: 1).
[0078] "secuencia de bucle de tallo de miR-17" significa la secuencia de bucle de tallo que tiene la secuencia de nucleobase
GUCAGAAUAAUGUCAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAGUGAUAUGUGCAUCUACUGCAGUG
AAGGCACUUGUAGCAUUAUGGUGAC (SEQ ID NO: 2).
[0079] "Secuencia semilla miR-172-7" significa la secuencia de nucleobase de las posiciones 2 a 7 de SEQ ID NO: 1, AAAGUG.
[0080] "Elemento de la familia miR-17" significa un miARN maduro que tiene una secuencia de nucleobases que comprende la secuencia semilla de miR-172-7.
[0081] "Familia de miR-17" significa un grupo de miARN, cada uno de los cuales tiene una secuencia de nucleobase que comprende la secuencia semilla de miR-172-7.
[0082] "Ácido nucleico diana" significa un ácido nucleico con el que se diseña un compuesto oligomérico para hibridar.
[0083] “Dirección” significa el proceso de diseño y selección de la secuencia de nucleobase que se hibridará con un ácido nucleico diana.
[0084] "Dirigido a" significa que tiene una secuencia de nucleobases que permitirá la hibridación con un ácido nucleico diana.
[0085] "Modulación" significa una perturbación de función, cantidad o actividad. En determinadas formas de realización, la modulación significa un aumento de la función, la cantidad o la actividad. En determinadas formas de realización, la modulación significa una disminución de la función, la cantidad o la actividad.
[0086] "Expresión" significa cualquier función y paso mediante el cual la información codificada de un gen se convierte en estructuras presentes y operativas en una célula.
[0087] "Secuencia de nucleobases" significa el orden de las nucleobases contiguas en un compuesto oligomérico o ácido nucleico, típicamente enumerado en una orientación de 5' a 3', independiente de cualquier azúcar, enlace y/o modificación de nucleobase.
[0088] Bases nitrogenadas contiguas significa bases nitrogenadas inmediatamente adyacentes entre sí en un ácido nucleico.
[0089] Complementariedad de nucleobases significa la capacidad de dos nucleobases para emparejarse de forma no covalente a través de enlaces de hidrógeno.
[0090] "Complementario" significa que un ácido nucleico es capaz de hibridarse con otro ácido nucleico u oligonucleótido. En determinadas formas de realización, complementario se refiere a un oligonucleótido capaz de hibridar con un ácido nucleico diana.
[0091] Completamente complementario significa que cada nucleobase de un oligonucleótido es capaz de emparejarse con una nucleobase en cada posición correspondiente en un ácido nucleico diana. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido es completamente complementario a un microARN, es decir, cada base nitrogenada del oligonucleótido es complementaria a una base nitrogenada en una posición correspondiente en el microARN. Un oligonucleótido modificado puede ser completamente complementario a un microARN y tener un número de nucleósidos enlazados menor que la longitud del microARN. Por ejemplo, un oligonucleótido con 16 nucleósidos enlazados, en el que cada nucleobase del oligonucleótido es complementaria a una nucleobase en una posición correspondiente en un microARN, es completamente complementaria al microARN. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido en el que cada nucleobase tiene complementariedad con una nucleobase dentro de una región de una secuencia de bucle de tallo de microARN es completamente complementario a la secuencia de bucle de tallo de microARN.
[0092] "Porcentaje de complementariedad" significa el porcentaje de nucleobases de un oligonucleótido que son complementarias a una porción de igual longitud de un ácido nucleico diana. El porcentaje de complementariedad se calcula dividiendo el número de nucleobases del oligonucleótido que son complementarias a las nucleobases en las posiciones correspondientes en el ácido nucleico diana por el número total de nucleobases en el oligonucleótido.
[0093] "Porcentaje de identidad" significa el número de nucleobases en un primer ácido nucleico que son idénticas a las nucleobases en posiciones correspondientes en un segundo ácido nucleico, dividido por el número total de nucleobases en el primer ácido nucleico. En ciertas formas de realización, el primer ácido nucleico es un microARN y el segundo ácido nucleico es un microARN. En ciertas formas de realización, el primer ácido nucleico es un oligonucleótido y el segundo ácido nucleico es un oligonucleótido.
[0094] Hibridar significa la hibridación de ácidos nucleicos complementarios que se produce a través de la complementariedad de bases nitrogenadas.
[0095] "Desapareamiento" significa una nucleobase de un primer ácido nucleico que no es capaz de emparejarse mediante Watson-Crick con una nucleobase en una posición correspondiente de un segundo ácido nucleico.
[0096] "Idéntico" en el contexto de las secuencias de nucleobases, significa que tiene la misma secuencia de nucleobases, independientemente del azúcar, del enlace y/o de las modificaciones de nucleobases e independiente del estado metilo de cualquier pirimidina presente.
[0097] "MicroARN" significa un ARN no codificante endógeno de entre 18 y 25 nucleobases de longitud, que es el producto de la escisión de un pre-microARN por la enzima Dicer. Se encuentran ejemplos de microARN maduros en la base de datos de microARN conocida como miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/). En determinadas formas de realización, el microARN se abrevia como "microARN" o "miR".
[0098] "Pre-microARN" o "pre-miR" significa un ARN no codificante que tiene una estructura de horquilla, que es el producto de la escisión de un pri-miR por la ribonucleasa específica de ARN de doble cadena conocida como Drosha.
[0099] "Secuencia de bucle de tallo" significa un ARN que tiene una estructura de horquilla y que contiene una secuencia de microARN madura. Las secuencias de pre-microARN y las secuencias de bucle de tallo pueden superponerse. En la base de datos de microARN conocida como miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/) se encuentran ejemplos de secuencias de bucle de tallo.
[0100] "Pri-microARN" o "pri-miR" significa un ARN no codificante que tiene una estructura de horquilla que es un sustrato para la ribonucleasa Drosha específica de ARN de doble cadena.
[0101] Precursor de microARN significa un transcrito que se origina a partir de un ADN genómico y que comprende un ARN estructurado no codificante que comprende una o más secuencias de microARN. Por ejemplo, en ciertas formas de realización, un precursor de microARN es un pre-microARN. En ciertas formas de realización, un precursor de microARN es un pri-microARN.
[0102] Transcrito regulado por microARN significa un transcrito que está regulado por un microARN.
[0103] "Secuencia semilla" significa una secuencia de nucleobases que comprende de 6 a 8 nucleobases contiguas de las nucleobases 1 a 9 del extremo 5' de una secuencia de microARN madura.
[0104] Secuencia coincidente semilla significa una secuencia de nucleobases que es complementaria a una secuencia semilla, y tiene la misma longitud que la secuencia semilla.
[0105] "Compuesto oligomérico" significa un compuesto que comprende una pluralidad de subunidades monoméricas unidas. Los compuestos oligoméricos incluyen oligonucleótidos.
[0106] "Oligonucleótido" significa un compuesto que comprende una pluralidad de nucleósidos enlazados, cada uno de los cuales puede estar modificado o sin modificar, independientemente uno del otro.
[0107] Enlace internucleósido de origen natural significa un enlace fosfodiéster de 3' a 5' entre nucleósidos.
[0108] "Azúcar natural" significa un azúcar que se encuentra en el ADN (2'-H) o en el ARN (2'-OH).
[0109] “Enlace internucleósido” significa un enlace covalente entre nucleósidos adyacentes.
[0110] "Nucleósidos enlazados" significa nucleósidos unidos mediante un enlace covalente.
[0111] "Nucleobase" significa un resto heterocíclico capaz de emparejarse de forma no covalente con otra nucleobase.
[0112] "Nucleósido" significa una nucleobase unida a un resto de azúcar.
[0113] "Nucleótido" significa un nucleósido que tiene un grupo fosfato unido covalentemente a la porción de azúcar de un nucleósido.
[0114] "Compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consta de" varios nucleósidos enlazados significa un compuesto que incluye un oligonucleótido modificado que tiene el número especificado de nucleósidos enlazados. Por tanto, el compuesto puede incluir sustituyentes o conjugados adicionales. A menos que se indique lo contrario, el compuesto no incluye ningún nucleósido adicional además de los del oligonucleótido modificado. Por ejemplo, a menos que se indique lo contrario, un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado no incluye una cadena complementaria hibridada con el oligonucleótido modificado (es decir, el oligonucleótido modificado es un oligonucleótido modificado monocatenario).
[0115] "Oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido que tiene una o más modificaciones con respecto a un extremo natural, azúcar, nucleobase y/o enlace internucleósido. Un oligonucleótido modificado puede comprender nucleósidos no modificados.
[0116] "Oligonucleótido modificado monocatenario" significa un oligonucleótido modificado que no está hibridado con una cadena complementaria.
[0117] Nucleósido modificado significa un nucleósido que tiene cualquier cambio con respecto a un nucleósido de origen natural. Un nucleósido modificado puede tener un azúcar modificado y una nucleobase no modificada. Un nucleósido modificado puede tener un azúcar modificado y una nucleobase modificada. Un nucleósido modificado puede tener un azúcar natural y una nucleobase modificada. En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado es un nucleósido bicíclico. En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado es un nucleósido no bicíclico.
[0118] Enlace internucleósido modificado significa cualquier cambio de un enlace internucleósido de origen natural.
[0119] “Enlace internucleósido de fosforotioato” significa un enlace entre nucleósidos en el que uno de los átomos que no forman puente es un átomo de azufre.
[0120] de azúcar modificado significa sustitución y/o cualquier cambio de un azúcar natural.
[0121] "Base nitrogenada no modificada" significa las bases heterocíclicas naturales de ARN o ADN: las bases de purina adenina (A) y guanina (G), y las bases de pirimidina timina (T), citosina (C) (incluida la 5-metilcitosina) y uracilo (U).
[0122] "5-metilcitosina" significa una citosina que comprende un grupo metilo unido a la posición 5.
[0123] Citosina no metilada significa una citosina que no tiene un grupo metilo unido a la posición 5.
[0124] Base nitrogenada modificada significa cualquier base nitrogenada que no sea una base nitrogenada no modificada.
[0125] Resto de azúcar significa un furanosilo de origen natural o un resto de azúcar modificado.
[0126] Resto de azúcar modificado significa un resto de azúcar sustituido o un sustituto de azúcar.
[0127] "Azúcar 2'-O-metilo" o "azúcar 2'-OMe" significa un azúcar que tiene una modificación O-metilo en la posición 2'.
[0128] "Azúcar 2'-O-metoxietilo" o "azúcar 2'-MOE" significa un azúcar que tiene una modificación O-metoxietilo en la posición 2'.
[0129] "2'-fluoro" o "2'-F" significa un azúcar que tiene una modificación fluoro de la posición 2'.
[0130] "Porción de azúcar bicíclica" se refiere a una porción de azúcar modificada que comprende un anillo de 4 a 7 miembros (incluido, entre otros, un furanosilo) que comprende un puente que conecta dos átomos del anillo de 4 a 7 miembros para formar un segundo anillo, lo que da como resultado una estructura bicíclica. En ciertas formas de realización, el anillo de 4 a 7 miembros es un anillo de azúcar. En ciertas formas de realización, el anillo de 4 a 7 miembros es un furanosilo. En ciertas formas de realización de este tipo, el puente conecta el carbono 2' y el carbono 4' del furanosilo. Los restos de azúcar bicíclicos ejemplares no limitantes incluyen LNA, ENA, cEt, S-cEt y R-cEt.
[0131] Resto de azúcar de ácido nucleico bloqueado (LNA) significa un resto de azúcar sustituido que comprende un puente (CHz)-O entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'.
[0132] Resto de azúcar ENA significa un resto de azúcar sustituido que comprende un puente (CH2)2-O entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'.
[0133] Resto de azúcar de etilo (cEt) restringido significa un resto de azúcar sustituido que comprende un puente Ch (CHs) -O entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'. En ciertas formas de realización, el puente CH(CH3) -O está restringido en la orientación S. En ciertas formas de realización, el (CH2)2-O está limitado en la orientación R.
[0134] Resto de azúcar S-cEt significa un resto de azúcar sustituido que comprende un puente CH(CH3)-O restringido por S entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'.
[0135] Resto de azúcar R-cEt significa un resto de azúcar sustituido que comprende un puente CH(CH3)-O restringido por R entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'.
[0136] Nucleósido 2'-O-metilo significa un nucleósido modificado en 2' que tiene una modificación de azúcar 2'-O-metilo.
[0137] Nucleósido de 2'-O-metoxietilo significa un nucleósido modificado en 2' que tiene una modificación de azúcar de 2'-O-metoxietilo. Un nucleósido de 2'-O-metoxietilo puede comprender una nucleobase modificada o no modificada.
[0138] Nucleósido 2'-fluoro significa un nucleósido modificado en 2' que tiene una modificación de azúcar 2'-fluoro. Un nucleósido 2'-fluoro puede comprender una nucleobase modificada o no modificada.
[0139] Nucleósido bicíclico significa un nucleósido modificado en 2' que tiene un resto de azúcar bicíclico. Un nucleósido bicíclico puede tener una nucleobase modificada o no modificada.
[0140] "Nucleósido cEt" significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar cEt. Un nucleósido cEt puede comprender una nucleobase modificada o no modificada.
[0141] Nucleósido S-cEt significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar S-cEt.
[0142] Nucleósido R-cEt significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar R-cEt.
[0143] p-D-desoxirribonucleósido significa un nucleósido de ADN de origen natural.
[0144] p-D-ribonucleósido significa un nucleósido de ARN de origen natural.
[0145] Nucleósido LNA significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar LNA.
[0146] Nucleósido ENA significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar ENA.
Descripción general
[0147] La enfermedad renal poliquística (PKD) es una forma hereditaria de enfermedad renal en la que se desarrollan quistes llenos de líquido en los riñones, lo que provoca agrandamiento de los riñones, insuficiencia renal y, a menudo, enfermedad renal en etapa terminal. La proliferación excesiva de quistes es una característica patológica distintiva de la PKD. En el manejo de la poliquistosis renal, el objetivo principal del tratamiento es mantener la función renal y prevenir la aparición de enfermedad renal terminal (ESRD), que a su vez mejora la esperanza de vida de los sujetos con poliquistosis renal.
[0148] Múltiples miembros del grupo de microARN miR-17-92 están regulados al alza en modelos de PKD en ratones. La eliminación genética del grupo miR-17-92 en un modelo de ratón de PKD reduce el crecimiento de quistes renales, mejora la función renal y prolonga la supervivencia (Patel et al., PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770). El grupo miR-17-92 contiene 6 microARN diferentes, cada uno con secuencias distintas: miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-19-b-1 y miR-92a-1. Por lo tanto, la eliminación genética de todo el grupo elimina seis genes de microARN diferentes. Lo que este experimento de eliminación genética no demuestra es si la inhibición de un subconjunto de microARN en el grupo produciría las mismas mejoras en los marcadores clínicos de PKD.
[0149] Se demuestra aquí que un oligonucleótido modificado dirigido a miR-17 mejora la función renal y reduce el peso del riñón en un modelo experimental de PKD. Además, la inhibición de miR-17 también suprimió la proliferación y el crecimiento de quistes de cultivos primarios derivados de quistes de donantes humanos. Estos datos demuestran que los oligonucleótidos modificados dirigidos a miR-17 son útiles para el tratamiento de la PKD.
Ciertos usos de la invención
[0150] En el presente documento se proporcionan compuestos para su uso en métodos para el tratamiento de la poliquistosis renal (PKD) como se indica en las reivindicaciones.
[0151] En ciertas formas de realización, se ha diagnosticado que el sujeto tiene PKD antes de la administración del compuesto que comprende el oligonucleótido modificado. El diagnóstico de PKD se puede lograr a través de la evaluación de parámetros que incluyen, entre otros, los antecedentes familiares de un sujeto, características clínicas (que incluyen, entre otros, hipertensión, albuminuria, hematuria y GFR alterado) y estudios de imágenes renales (que incluyen, entre otros, MRI, ultrasonido y tomografía computarizada). El diagnóstico de PKD también puede incluir la detección de mutaciones en uno o más de los genes PKD1, PKD2 o PKHD1.
[0152] El sujeto que tiene o se sospecha que tiene ADPKD puede tener una mutación en el gen PKD1 o una mutación en el gen PKD2. El sujeto que tiene o se sospecha que tiene ARPKD puede tener una mutación en el gen PKHD 1.
[0153] En determinadas formas de realización, el sujeto tiene un volumen renal total aumentado. En ciertas formas de realización, el volumen renal total es el volumen renal total ajustado a la altura (HtTKV). En ciertas formas de realización, el sujeto tiene hipertensión. En determinadas formas de realización, el sujeto tiene una función renal alterada. En ciertas formas de realización, el sujeto necesita una función renal mejorada. En ciertas formas de realización, se identifica que el sujeto tiene función renal alterada.
[0154] En ciertas formas de realización, los niveles de miR-17 aumentan en el riñón de un sujeto que tiene PKD. En ciertas formas de realización, antes de la administración, se determina que un sujeto tiene un nivel elevado de miR-17 en el riñón. Los niveles de miR-17 pueden medirse a partir de material de biopsia renal. En determinadas formas de realización, antes de la administración, se determina que un sujeto tiene un nivel elevado de miR-17 en la orina o la sangre del sujeto.
[0155] En ciertas formas de realización, la administración del compuesto que comprende un oligonucleótido modificado complementario a miR-17 da como resultado uno o más resultados clínicamente beneficiosos. En ciertas formas de realización, la administración mejora la función renal en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa el empeoramiento de la función renal en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración reduce el volumen renal total en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración ralentiza el aumento del volumen renal total en el sujeto. En ciertas formas de realización, la administración reduce el volumen renal total ajustado por altura (HtTKV). En ciertas formas de realización, la administración retarda el aumento de HtTKV.
[0156] En determinadas formas de realización, la administración inhibe el crecimiento de quistes en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración ralentiza el aumento del crecimiento de quistes en el sujeto. En algunas formas de realización, un quiste está presente en el riñón de un sujeto. En algunas formas de realización, un quiste está presente tanto en el hígado como en el riñón del sujeto.
[0157] En determinadas formas de realización, la administración reduce el dolor renal en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retarda el aumento del dolor renal en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa la aparición del dolor renal en el sujeto.
[0158] En determinadas formas de realización, la administración reduce la hipertensión en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retarda el empeoramiento de la hipertensión en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa la aparición de hipertensión en el sujeto.
[0159] En determinadas formas de realización, la administración reduce la fibrosis en el riñón del sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retarda la fibrosis en el riñón del sujeto.
[0160] En ciertas formas de realización, la administración retrasa el inicio de la enfermedad renal en etapa terminal en el sujeto. En ciertas formas de realización, la administración retrasa el tiempo de diálisis para el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa el tiempo hasta el trasplante renal para el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración mejora la esperanza de vida del sujeto.
[0161] En determinadas formas de realización, la administración reduce la albuminuria en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retarda el empeoramiento de la albuminuria en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa la aparición de albuminuria en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración reduce la hematuria en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retarda el empeoramiento de la hematuria en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración retrasa la aparición de hematuria en el sujeto. En ciertas formas de realización, la administración reduce el nitrógeno ureico en sangre en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración reduce la creatinina en la sangre del sujeto. En determinadas formas de realización, la administración mejora el aclaramiento de creatinina en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración reduce la proporción de albúmina:creatinina en el sujeto. En determinadas formas de realización, la administración mejora la tasa de filtración glomerular en el sujeto. En ciertas formas de realización, la administración retarda el empeoramiento de la tasa de filtración glomerular en el sujeto. En algunas formas de realización, el empeoramiento de la tasa de filtración glomerular se evalúa calculando la tasa de disminución de la tasa de filtración glomerular. En determinadas formas de realización, la administración reduce la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto. En determinadas formas de realización, la administración reduce la proteína de la molécula 1 de daño renal (KIM-1) en la orina del sujeto.
[0162] En cualquiera de las formas de realización proporcionadas en el presente documento, un sujeto puede someterse a ciertas pruebas para evaluar la extensión de la enfermedad en el sujeto. Tales pruebas incluyen, sin limitación, la medición del volumen renal total en el sujeto; medición de la hipertensión en el sujeto; medición del dolor renal en el sujeto; medición de fibrosis en el riñón del sujeto; medición de nitrógeno ureico en sangre en el sujeto; medir la creatinina en la sangre del sujeto; medir el aclaramiento de creatinina en la sangre del sujeto; medir la albuminuria en el sujeto; medir la relación albúmina:creatinina en el sujeto; medir la tasa de filtración glomerular en el sujeto; medición de la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto; y/o medición de la proteína de la molécula de lesión renal 1 (KIM-1) en la orina del sujeto.
Ciertas secuencias de nucleobase de microARN
[0163] Los oligonucleótidos modificados para el uso de la invención tienen una secuencia de nucleobases que es complementaria a miR-17 (SEQ ID NO: 1), o un precursor del mismo (SEQ ID NO: 2). En ciertas formas de realización, cada nucleobase del oligonucleótido modificado es capaz de experimentar un apareamiento de bases con una nucleobase en cada posición correspondiente en la secuencia de nucleobase de miR-17, o un precursor del mismo. En determinadas formas de realización, la secuencia de nucleobases de un oligonucleótido modificado puede tener uno o más pares de bases no coincidentes con respecto a la secuencia de nucleobases de miR-17 o la secuencia precursora, y sigue siendo capaz de hibridar con su secuencia diana.
[0164] Como la secuencia de miR-17 está contenida dentro de la secuencia precursora de miR-17, un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobases complementaria a miR-17 también es complementario a una región del precursor de miR-17.
[0165] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de un número de nucleósidos enlazados que es igual a la longitud de miR-17.
[0166] En ciertas formas de realización, el número de nucleósidos enlazados de un oligonucleótido modificado es menor que la longitud de miR-17. Un oligonucleótido modificado que tiene un número de nucleósidos unidos menor que la longitud de miR-17, en el que cada base nitrogenada del oligonucleótido modificado es complementaria a cada base nitrogenada en una posición correspondiente de miR-17, se considera un oligonucleótido modificado que tiene una secuencia de nucleobase que es completamente complementaria a una región de la secuencia miR-17. Por ejemplo, un oligonucleótido modificado que consta de 19 nucleósidos enlazados, donde cada nucleobase es complementaria a una posición correspondiente de miR-17 que tiene 22 nucleobases de longitud, es completamente complementario a una región de 19 nucleobases de miR-17. Dicho oligonucleótido modificado tiene un 100 % de complementariedad con (o es completamente complementario con) un segmento de 19 nucleobases de miR-17, y se considera que es 100 % complementario con (o completamente complementario con) miR-17.
[0167] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende una secuencia de bases nitrogenadas que es complementaria a una secuencia semilla, es decir, un oligonucleótido modificado comprende una secuencia coincidente de semilla. En ciertas formas de realización, una secuencia semilla es una secuencia semilla hexámera. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla son las nucleobases 1-6 de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla son las nucleobases 2-7 de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla son las nucleobases 3-8 de miR-17. En ciertas formas de realización, una secuencia semilla es una secuencia semilla heptámera. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla heptámera son las nucleobases 1-7 de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla heptámera son las nucleobases 2-8 de miR-17. En ciertas formas de realización, la secuencia semilla es una secuencia de semilla octámera. En ciertas formas de realización de este tipo, una secuencia semilla de octámero son las nucleobases 1-8 de miR-17. En ciertas formas de realización, una secuencia semilla de octámero son las nucleobases 2-9 de miR-17.
[0168] miR-17 es miembro de una familia de microARN conocida como la familia miR-17. La familia miR-17 incluye miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, miR-106a y miR-106b. Cada miembro de la familia miR-17 tiene una secuencia de nucleobases que comprende la secuencia de nucleobases 5'-AAAGUG-3' o la región semilla de miR-17, que es la secuencia de nucleobases en las posiciones 2 a 7 de SEQ ID NO: 1. Además, cada miembro de la familia miR-17 comparte alguna identidad de secuencia de nucleobase fuera de la región semilla. En consecuencia, un oligonucleótido modificado complementario a miR-17 puede dirigirse a los microARN de la familia miR-17, además de miR-17. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado se dirige a dos o más microARN de la familia miR-17. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado se dirige a tres o más microARN de la familia miR-17. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado se dirige a cuatro o más microARN de la familia miR-17. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado se dirige a cinco o más microARN de la familia miR-17. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado se dirige a seis de los microARN de la familia miR-17.
[0169] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-GCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 3). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-AGCACTTT-3' (SEQ ID NO: 4). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-AGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 5). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-AAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 6). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobase 5'-TAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 7). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-GTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 8). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-TGTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 9). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-CTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 10). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobase 5'-ACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 11). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-CACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 12). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-GCACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 13). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-TGCACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 14). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobase 5'-CTGCACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 15). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobase 5'-CCTGCACTGTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 16). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-ACCTGCACTGTTAAGCACTTTG3' (SEQ ID NO: 17). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-CACCTGCACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 18). En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende la secuencia de nucleobases 5'-CTACCTGCACTGTTAAGCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 19). En cualquiera de estas formas de realización, el oligonucleótido modificado consta de una secuencia de nucleobase seleccionada de cualquiera de las SEQ ID NOs 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 y 18. En cada secuencia de nucleobase, T se selecciona independientemente de una T y una U.
[0170] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado tiene una secuencia de nucleobases que tiene un desajuste con respecto a la secuencia de nucleobases de miR-17, o un precursor del mismo. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado tiene una secuencia de nucleobases que tiene dos desajustes con respecto a la secuencia de nucleobases de miR-17, o un precursor del mismo. En ciertas formas de realización de este tipo, un oligonucleótido modificado tiene una secuencia de nucleobases que no tiene más de dos desajustes con respecto a la secuencia de nucleobases de miR-17, o un precursor del mismo. En ciertas formas de realización de este tipo, las nucleobases desapareadas son contiguas. En ciertas formas de realización de este tipo, las nucleobases desapareadas no son contiguas.
[0171] En ciertas formas de realización, el número de nucleósidos enlazados de un oligonucleótido modificado es mayor que la longitud de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, la nucleobase de un nucleósido adicional es complementaria a una nucleobase de la secuencia de tallo-bucle de miR-17. En ciertas formas de realización, el número de nucleósidos enlazados de un oligonucleótido modificado es mayor que la longitud de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, el nucleósido adicional está en el extremo 5' de un oligonucleótido. En ciertas formas de realización de este tipo, el nucleósido adicional está en el extremo 3' de un oligonucleótido. En determinadas formas de realización, el número de nucleósidos enlazados de un oligonucleótido modificado es dos veces mayor que la longitud de miR-17. En ciertas formas de realización de este tipo, los dos nucleósidos adicionales están en el extremo 5' de un oligonucleótido. En ciertas formas de realización de este tipo, los dos nucleósidos adicionales están en el extremo 3' de un oligonucleótido. En ciertas formas de realización de este tipo, un nucleósido adicional está ubicado en el extremo 5' y un nucleósido adicional está ubicado en el extremo 3' de un oligonucleótido. En ciertas formas de realización, una región del oligonucleótido puede ser completamente complementaria a la secuencia de bases nitrogenadas de miR-17, pero el oligonucleótido modificado completo no es completamente complementario a miR-17. Por ejemplo, un oligonucleótido modificado que consta de 24 nucleósidos enlazados, donde las nucleobases de los nucleósidos 1 a 22 son cada una complementaria a una posición correspondiente de miR-17 que tiene 22 nucleobases de longitud, tiene una porción de 22 nucleósidos que es completamente complementaria a la nucleobase secuencia de miR-17 y aproximadamente un 92 % de complementariedad general con la secuencia de nucleobases de miR-17.
Ciertos oligonucleótidos modificados
[0172] El oligonucleótido modificado para uso de la invención consta de 8 a 25 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 8 a 12 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 12 a 25 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 15 a 25 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 15 a 19 nucleósidos enlazados. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 15 a 16 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 17 a 23 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 19 a 23 nucleósidos enlazados.
[0173] En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 8 nucleósidos enlazados. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 9 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 10 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 11 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 12 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 13 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 14 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 15 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 16 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 17 nucleósidos enlazados. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 18 nucleósidos enlazados. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 19 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 20 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 21 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 22 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 23 nucleósidos enlazados. En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 24 nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido modificado consta de 25 nucleósidos enlazados.
[0174] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende una o más 5-metilcitosinas. En ciertas formas de realización, cada citosina de un oligonucleótido modificado comprende una 5-metilcitosina.
Ciertas modificaciones
[0175] Un oligonucleótido puede comprender una o más modificaciones a una nucleobase, azúcar y/o enlace intemucleósido, y como tal es un oligonucleótido modificado. Se puede seleccionar un enlace de nucleobase, azúcar y/o intemucleósido modificado en lugar de una forma no modificada debido a propiedades deseables tales como, por ejemplo, captación celular mejorada, afinidad mejorada por otros oligonucleótidos o dianas de ácido nucleico y estabilidad incrementada en presencia de nucleasas. El compuesto para uso en la invención, como se indica en las reivindicaciones, comprende un oligonucleótido modificado.
[0176] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende uno o más nucleósidos modificados. En ciertas formas de realización de este tipo, un nucleósido modificado es un nucleósido estabilizador. Un ejemplo de un nucleósido estabilizador es un nucleósido modificado con azúcar.
[0177] En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado es un nucleósido modificado con azúcar. En ciertas formas de realización de este tipo, los nucleósidos modificados con azúcar pueden comprender además un resto base heterocíclico natural o modificado y/o un enlace internucleósido natural o modificado y pueden incluir modificaciones adicionales independientes de la modificación del azúcar. En determinadas formas de realización, un nucleósido modificado con azúcar es un nucleósido modificado en 2', en el que el anillo de azúcar está modificado en el carbono 2' a partir de ribosa natural o 2'-desoxirribosa.
[0178] En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado en 2' tiene un resto de azúcar bicíclico. En ciertas de tales formas de realización, el resto de azúcar bicíclico es un azúcar D en la configuración alfa. En ciertas de tales formas de realización, el resto de azúcar bicíclico es un azúcar D en la configuración beta. En ciertas de tales formas de realización, el resto de azúcar bicíclico es un azúcar L en la configuración alfa. En ciertas de tales formas de realización, el resto de azúcar bicíclico es un azúcar L en la configuración beta.
[0179] Los nucleósidos que comprenden dichos restos de azúcar bicíclicos se denominan nucleósidos bicíclicos o BNA. En determinadas formas de realización, los nucleósidos bicíclicos incluyen, entre otros, (A) a-L-metilenoxi (4'-CH2-O-2') BNA; (B) p-D-Metilenoxi (4'-CH2-O-2') BNA; (C) Etilenoxi (4'-(CH2)2-O-2') BNA; (D) Aminooxi (4'-CH2-ON(R)-2') BNA; (E) oxiamino (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA; (F) Metil(metilenoxi) (4'-CH(cHa)-O-2') BNA (también denominado etilo restringido o cEt); (G) metileno-tio (4'-CH2-S-2') BNA; (H) metilen-amino (4'-CH2-N(R)-2') BNA; (I) metil carbocíclico (4'-CH2-CH(CHa)-2') b Na ; (J) c-MOE (4'-CH(CH2-OMe)-O-2') BNA y (K) propileno carbocíclico (4'-(Ch 2)3-2') BNA como se representa a continuación.
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en la que Bx es un resto de nucleobase y R es, independientemente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
[0180] En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado en 2' comprende un grupo sustituyente en 2' seleccionado de F, OCF3, OCH3, OCH2CH2OCH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-ON(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N-(CH3)2, y OCH2-C(=O)-N(H)CH3.
[0181] En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado en 2' comprende un grupo sustituyente en 2' seleccionado de F, O-CH3 y OCH2CH2OCH3.
[0182] En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado con azúcar es un nucleósido modificado con 4'-tio. En ciertas formas de realización, un nucleósido modificado con azúcar es un nucleósido modificado con 4'-tio-2'. Un nucleósido modificado con 4'-tio tiene un p-D-ribonucleósido donde el 4'-O se reemplazó con 4'-S. Un nucleósido modificado con 4'-tio-2' es un nucleósido modificado con 4'-tio que tiene el 2'-OH reemplazado con un grupo sustituyente en 2'. Los grupos sustituyentes en 2' adecuados incluyen 2 -OCH3, 2'-O-(CH2)2-OCH3 y 2'-F.
[0183] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende una o más modificaciones de internucleósido. En determinadas formas de realización de este tipo, cada enlace internucleósido de un oligonucleótido modificado es un enlace internucleósido modificado. En ciertas formas de realización, un enlace internucleósido modificado comprende un átomo de fósforo.
[0184] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende al menos un enlace internucleósido de fosforotioato. En ciertas formas de realización, cada enlace internucleósido de un oligonucleótido modificado es un enlace internucleósido de fosforotioato.
[0185] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado comprende una o más bases nitrogenadas modificadas. En ciertas formas de realización, una nucleobase modificada se selecciona de 5-hidroximetilcitosina, 7-deazaguanina y 7-deazaadenina. En ciertas formas de realización, una nucleobase modificada se selecciona de 7-desazaadenina, 7-desazaguanosina, 2-aminopiridina y 2-piridona. En ciertas formas de realización, una nucleobase modificada se selecciona de pirimidinas sustituidas en 5, 6-azapirimidinas y purinas sustituidas en N-2, N-6 y O-6, que incluyen 2 aminopropiladenina, 5-propiniluracilo y 5-propinilcitosina.
[0186] En ciertas formas de realización, una base nitrogenada modificada comprende un heterociclo policíclico. En ciertas formas de realización, una nucleobase modificada comprende un heterociclo tricíclico. En ciertas formas de realización, una nucleobase modificada comprende un derivado de fenoxazina. En ciertas formas de realización, la fenoxazina se puede modificar adicionalmente para formar una nucleobase conocida en la técnica como abrazadera G.
[0187] En ciertas formas de realización, un oligonucleótido modificado se conjuga con uno o más restos que mejoran la actividad, la distribución celular o la captación celular de los oligonucleótidos antisentido resultantes. En ciertas de tales formas de realización, el resto es un resto de colesterol. En ciertas formas de realización, el resto es un resto lipídico. Los restos adicionales para la conjugación incluyen carbohidratos, fosfolípidos, biotina, fenazina, ácido fólico, fenantridina, antraquinona, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y colorantes. En ciertas formas de realización, el resto carbohidrato es N-acetil-D-galactosamina (GalNac). En ciertas formas de realización, un grupo conjugado se une directamente a un oligonucleótido. En determinadas formas de realización, un grupo conjugado se une a un oligonucleótido modificado mediante un resto de unión seleccionado entre amino, hidroxilo, ácido carboxílico, tiol, insaturaciones (p. ej., enlaces dobles o triples), ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (ADO), 4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC), ácido 6-aminohexanoico (AHEX o AHA), alquilo C1-C10 sustituido, alquenilo C2-C10 sustituido o no sustituido y C2-C10 sustituido o no sustituido alquinilo. En ciertas formas de realización de este tipo, un grupo sustituyente se selecciona de hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro, tiol, tioalcoxi, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo.
[0188] En ciertas formas de realización de este tipo, el compuesto para uso de la invención comprende un oligonucleótido modificado que tiene uno o más grupos estabilizadores que están unidos a uno o ambos extremos de un oligonucleótido modificado para mejorar propiedades tales como, por ejemplo, la estabilidad de la nucleasa. Incluidos en los grupos estabilizadores están las estructuras de tapa. Estas modificaciones terminales protegen un oligonucleótido modificado de la degradación por exonucleasa y pueden ayudar en la entrega y/o localización dentro de una célula. La tapa puede estar presente en el extremo 5' (tapa 5'), o en el extremo 3' (tapa 3'), o puede estar presente en ambos extremos. Las estructuras de tapa incluyen, por ejemplo, tapas desoxiabásicas invertidas.
Ciertas composiciones farmacéuticas
[0189] En el presente documento se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto para uso de la invención, para uso en un método para tratar la enfermedad renal poliquística. En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende un compuesto que consiste en un oligonucleótido modificado que consta de 8 a 12 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobases complementaria a miR-17. En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consta de 15 a 25 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase complementaria a miR-17. En determinadas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consta de 17 a 23 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase complementaria a miR-17.
[0190] Las vías de administración adecuadas incluyen, entre otras, oral, rectal, transmucosa, intestinal, enteral, tópica, en supositorios, por inhalación, intratecal, intracardíaca, intraventricular, intraperitoneal, intranasal, intraocular, intratumoral y parenteral (p. ej., intravenosa, intramuscular, intramedular y subcutánea). En determinadas formas de realización, se administran fármacos intratecales para lograr exposiciones locales en lugar de sistémicas. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas se pueden inyectar directamente en el área del efecto deseado (p. ej., en el riñón).
[0191] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica se administra en forma de unidad de dosificación (por ejemplo, tableta, cápsula, bolo, etc.). En algunas formas de realización, una composición farmacéutica comprende un oligonucleótido modificado en una dosis dentro de un rango seleccionado de 25 mg a 800 mg, 25 mg a 700 mg, 25 mg a 600 mg, 25 mg a 500 mg, 25 mg a 400 mg, 25 mg a 300 mg, 25 mg a 200 mg, 25 mg a 100 mg, 100 mg a 800 mg, 200 mg a 800 mg, 300 mg a 800 mg, 400 mg a 800 mg, 500 mg a 800 mg, 600 mg a 800 mg, 100 mg a 700 mg, 150 mg a 650 mg, 200 mg a 600 mg, 250 mg a 550 mg, 300 mg a 500 mg, 300 mg a 400 mg y 400 mg a 600 mg. En ciertas formas de realización, tales composiciones farmacéuticas comprenden un oligonucleótido modificado en una dosis seleccionada de 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg, 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg, 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 245 mg, 250 mg, 255 mg, 260 mg, 265 mg, 270 mg, 270 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg, 300 mg, 305 315 mg, 320 mg, 325 mg, 330 mg, 335 mg, 340 mg, 345 mg, 350 mg, 355 mg, 360 mg, 365 mg, 370 mg, 375 385 mg, 390 mg, 395 mg, 400 mg, 405 mg, 410 mg, 415 mg, 420 mg, 425 mg, 430 mg, 435 mg, 440 mg, 445 455 mg, 460 mg, 465 mg, 470 mg, 475 mg, 480 mg, 485 mg, 490 mg, 495 mg, 500 mg, 505 mg, 510 mg, 515 525 mg, 530 mg, 535 mg, 540 mg, 545 mg, 550 mg, 555 mg, 560 mg, 565 mg, 570 mg, 575 mg, 580 mg, 585 595 mg, 600 mg, 605 mg, 610 mg, 615 mg, 620 mg, 625 mg, 630 mg, 635 mg, 640 mg, 645 mg, 650 mg, 655 665 mg, 670 mg, 675 mg, 680 mg, 685 mg, 690 mg, 695 mg, 700 mg, 705 mg, 710 mg, 715 mg, 720 mg, 725 735 mg, 740 mg, 745 mg, 750 mg, 755 mg, 760 mg, 765 mg, 770 mg, 775 mg, 780 mg, 785 mg, 790 mg, 795 mg y 800 mg. En ciertas formas de realización de este tipo, una composición farmacéutica de comprende una dosis de oligonucleótido modificado seleccionado de 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg y 800 mg.
[0192] En ciertas formas de realización, un agente farmacéutico es un oligonucleótido modificado liofilizado estéril que se reconstituye con un diluyente adecuado, por ejemplo, agua estéril para inyección o solución salina estéril para inyección. El producto reconstituido es administrado como inyección subcutánea o como infusión intravenosa después de la dilución en solución salina. El producto farmacéutico liofilizado consiste en el oligonucleótido modificado que se ha preparado en agua para inyección o en solución salina para inyección, ajustado a pH 7,0-9,0 con ácido o base durante la preparación y luego liofilizado. El oligonucleótido modificado liofilizado puede ser de 25 a 800 mg del oligonucleótido. Se entiende que esto abarca 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775 y 800 mg de oligonucleótido liofilizado modificado. Además, en algunas formas de realización, el oligonucleótido modificado liofilizado es una cantidad del oligonucleótido dentro de un rango seleccionado de 25 mg a 800 mg, 25 mg a 700 mg, 25 mg a 600 mg, 25 mg a 500 mg, 25 mg a 400 mg, 25 mg a 300 mg, 25 mg a 200 mg, 25 mg a 100 mg, 100 mg a 800 mg, 200 mg a 800 mg, 300 mg a 800 mg, 400 mg a 800 mg, 500 mg a 800 mg, 600 mg a 800 mg, 100 mg a 700 mg, 150 mg a 650 mg, 200 mg a 600 mg, 250 mg a 550 mg, 300 mg a 500 mg, 300 mg a 400 mg y 400 mg a 600 mg. El medicamento liofilizado se puede envasar en un vial de vidrio transparente tipo I de 2 ml (tratado con sulfato de amonio), tapado con un cierre de goma de bromobutilo y sellado con un sobresello de aluminio FLIP-OFF®.
[0193] En ciertas formas de realización, las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento pueden contener adicionalmente otros componentes adjuntos que se encuentran convencionalmente en las composiciones farmacéuticas, en sus niveles de uso establecidos en la técnica. Así, por ejemplo, las composiciones pueden contener materiales farmacéuticamente activos adicionales, compatibles, tales como, por ejemplo, agentes antipruriginosos, astringentes, anestésicos locales o antiinflamatorios, o pueden contener materiales adicionales útiles para formular físicamente diversas formas de dosificación de las composiciones. de la presente invención, tales como colorantes, aromatizantes, conservantes, antioxidantes, opacificantes, espesantes y estabilizantes. Sin embargo, dichos materiales, cuando se añaden, no deberían interferir indebidamente con las actividades biológicas de los componentes de las composiciones de la presente invención. Las formulaciones pueden esterilizarse y, si se desea, mezclarse con agentes auxiliares, por ejemplo, lubricantes, conservantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones, colorantes, saborizantes y/o sustancias aromáticas y similares que no interactúan perjudicialmente con los oligonucleótidos de la formulación.
[0194] Los restos lipídicos se han utilizado en terapias con ácidos nucleicos en una variedad de métodos. En un método, el ácido nucleico se introduce en liposomas o lipoplejos preformados hechos de mezclas de lípidos catiónicos y lípidos neutros. En otro método, los complejos de ADN con lípidos mono o policatiónicos se forman sin la presencia de un lípido neutro. En ciertas formas de realización, se selecciona un resto lipídi
farmacéutico a una célula o tejido particular. En determinadas formas de realización, se selecciona un resto lipídi aumentar la distribución de un agente farmacéutico al tejido adiposo. En determinadas formas de realización, se selecciona un resto lipídi
[0195] En ciertas formas de realización, INTRALIPID se usa para preparar una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido. Intralipid es una emulsión grasa preparada para administración intravenosa. Está compuesto por un 10 % de aceite de soja, un 1,2 % de fosfolípidos de yema de huevo, un 2,25 % de glicerina y agua para inyección. Además, se ha agregado hidróxido de sodio para ajustar el pH de modo que el rango de pH del producto final sea de 6 a 8,9.
[0196] En determinadas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende un compuesto de poliamina o un resto lipídico complejado con un ácido nucleico. En ciertas formas de realización, dichas preparaciones comprenden uno o más compuestos que tienen cada uno individualmente una estructura definida por la fórmula (Z) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,
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donde cada Xa y Xb, para cada aparición, es independientemente alquileno C-i-a; n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5; cada R es independientemente H, en el que al menos n 2 de los restos R en al menos aproximadamente el 80% de las moléculas del compuesto de fórmula (Z) en la preparación no son H; m es 1, 2, 3 o 4; Y es O, NR2 o S; R1 es alquilo, alquenilo o alquinilo; cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes; y R2 es H, alquilo, alquenilo o alquinilo; cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes; siempre que, si n = 0, al menos n 3 de los restos R no sean H. Tales preparaciones se describen en la publicación PCT w O/2008/042973. Ciertas preparaciones adicionales se describen en Akinc et al., Nature Biotechnology 26, 561 - 569 (1 de mayo de 2008).
[0197] En ciertas formas de realización, las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento comprenden uno o más oligonucleótidos modificados y uno o más excipientes. En ciertas formas de realización de este tipo, los excipientes se seleccionan de agua, soluciones salinas, alcohol, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilasa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa y polivinilpirrolidona.
[0198] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en este documento se prepara utilizando técnicas conocidas, que incluyen, entre otros, procesos de mezcla, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o formación de tabletas.
[0199] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en este documento es un líquido (p. ej., una suspensión, elixir y/o solución). En algunas de dichas formas de realización, se prepara una composición farmacéutica líquida utilizando ingredientes conocidos en la técnica, incluidos, entre otros, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes y agentes colorantes.
[0200] En determinadas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento es un sólido (p. ej., un polvo, una tableta y/o una cápsula). En algunas de dichas formas de realización, se prepara una composición farmacéutica sólida que comprende uno o más oligonucleótidos utilizando ingredientes conocidos en la técnica, incluidos, entre otros, almidones, azúcares, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes desintegrantes.
[0201] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento se formula como una preparación de depósito. Algunas de estas preparaciones de depósito suelen tener una acción más prolongada que las preparaciones que no son de depósito. En ciertas formas de realización, dichas preparaciones se administran por implantación (por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. En ciertas formas de realización, las preparaciones de depósito se preparan utilizando materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble.
[0202] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en este documento comprende un sistema de administración. Los ejemplos de sistemas de administración incluyen, pero no se limitan a liposomas y emulsiones. Ciertos sistemas de administración son útiles para preparar ciertas composiciones farmacéuticas, incluidas las que comprenden compuestos hidrofóbicos. En ciertas formas de realización, se usan ciertos solventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido.
[0203] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende una o más moléculas de administración específicas de tejido diseñadas para administrar uno o más agentes farmacéuticos de la presente invención a tejidos o tipos de células específicos. Por ejemplo, en ciertas formas de realización, las composiciones farmacéuticas incluyen liposomas recubiertos con un anticuerpo específico de tejido.
[0204] En ciertas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en este documento comprende un sistema de liberación sostenida. Un ejemplo no limitativo de tal sistema de liberación sostenida es una matriz semipermeable de polímeros hidrofóbicos sólidos. En ciertas formas de realización, los sistemas de liberación sostenida pueden, según su naturaleza química, liberar agentes farmacéuticos durante un período de horas, días, semanas o meses.
[0205] En determinadas formas de realización, se prepara una composición farmacéutica para su administración mediante inyección (p. ej., intravenosa, subcutánea, intramuscular, etc.). En algunas de dichas formas de realización, una composición farmacéutica comprende un vehículo y se formula en una solución acuosa, como agua o tampones fisiológicamente compatibles, como la solución de Hanks, la solución de Ringer o el tampón de solución salina fisiológica. En ciertas formas de realización, se incluyen otros ingredientes (p. ej., ingredientes que ayudan en la solubilidad o sirven como conservantes). En ciertas formas de realización, las suspensiones inyectables se preparan utilizando vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. Ciertas composiciones farmacéuticas para inyección se presentan en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis. Ciertas composiciones farmacéuticas para inyección son suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Ciertos disolventes adecuados para su uso en composiciones farmacéuticas para inyección incluyen, entre otros, disolventes lipófilos y aceites grasos, como aceite de sésamo, ésteres de ácidos grasos sintéticos, como oleato de etilo o triglicéridos, y liposomas. Las suspensiones inyectables acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, tales suspensiones también pueden contener estabilizadores o agentes adecuados que aumentan la solubilidad de los agentes farmacéuticos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas.
[0206] En determinadas formas de realización, una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento comprende un oligonucleótido modificado en una cantidad terapéuticamente eficaz. En determinadas formas de realización, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de una enfermedad o para prolongar la supervivencia del sujeto que se está tratando. La determinación de una cantidad terapéuticamente eficaz está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica.
[0207] En ciertas formas de realización, uno o más oligonucleótidos modificados en el presente documento se formulan como un profármaco. En determinadas formas de realización, tras la administración in vivo, un profármaco se convierte químicamente en la forma biológica, farmacéutica o terapéuticamente más activa del oligonucleótido. En ciertas formas de realización, los profármacos son útiles porque son más fáciles de administrar que la forma activa correspondiente. Por ejemplo, en determinados casos, un profármaco puede estar más biodisponible (p. ej., a través de la administración oral) que la forma activa correspondiente. En ciertos casos, un profármaco puede tener una solubilidad mejorada en comparación con la forma activa correspondiente. En ciertas formas de realización, los profármacos son menos solubles en agua que la forma activa correspondiente. En ciertos casos, dichos profármacos poseen una transmisión superior a través de las membranas celulares, donde la solubilidad en agua es perjudicial para la movilidad. En ciertas formas de realización, un profármaco es un éster. En ciertas de tales formas de realización, el éster se hidroliza metabólicamente a ácido carboxílico tras la administración. En ciertos casos, el compuesto que contiene ácido carboxílico es la forma activa correspondiente. En determinadas formas de realización, un profármaco comprende un péptido corto (poliaminoácido) unido a un grupo ácido. En algunas de dichas formas de realización, el péptido se escinde tras la administración para formar la forma activa correspondiente.
[0208] En determinadas formas de realización, se produce un profármaco modificando un compuesto farmacéuticamente activo de manera que el compuesto activo se regenere tras la administración in vivo. El profármaco se puede diseñar para alterar la estabilidad metabólica o las características de transporte de un fármaco, para enmascarar los efectos secundarios o la toxicidad, para mejorar el sabor de un fármaco o para alterar otras características o propiedades de un fármaco. En virtud del conocimiento de los procesos farmacodinámicos y el metabolismo de fármacos in vivo, los expertos en esta técnica, una vez que se conoce un compuesto farmacéuticamente activo, pueden diseñar profármacos del compuesto (véase, por ejemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, Nueva York, páginas 388-392).
Ciertos modelos experimentales
[0209] En este documento se describen métodos para usar y/o probar oligonucleótidos modificados de la presente invención en un modelo experimental. Los expertos en la materia pueden seleccionar y modificar los protocolos de dichos modelos experimentales para evaluar un agente farmacéutico de la invención.
[0210] Generalmente, los oligonucleótidos modificados se prueban primero en células cultivadas. Los tipos de células adecuados incluyen aquellos que están relacionados con el tipo de células a las que se desea la administración in vivo de un oligonucleótido modificado. Por ejemplo, los tipos de células adecuados para el estudio de los métodos descritos en este documento incluyen células primarias o cultivadas.
[0211] La medida en que un oligonucleótido modificado interfiere con la actividad de miR-17 se puede evaluar en células cultivadas. La inhibición de la actividad del microARN puede evaluarse midiendo los niveles del microARN. Alternativamente, se puede medir el nivel de un transcrito regulado por microARN predicho o validado. Una inhibición de la actividad del microARN puede resultar en el aumento de la transcripción regulada por miR-17 y/o la proteína codificada por la transcripción regulada por miR-17. Además, se pueden medir ciertos resultados fenotípicos.
[0212] Varios modelos animales están disponibles para el experto en la materia para el estudio de miR-17 en modelos de enfermedades humanas. Los modelos de poliquistosis renal incluyen, pero no se limitan a modelos con mutaciones y/o deleciones en Pkdl y/o Pkd2; y modelos que comprenden mutaciones en otros genes. Los modelos ejemplares no limitantes de PKD que comprenden mutaciones y/o deleciones en Pkdl y/o Pkd2 incluyen modelos hipomórficos, tales como modelos que comprenden mutaciones sin sentido en Pkdl y modelos con expresión reducida o inestable de Pkd2; modelos knockout condicionales inducibles; y modelos de eliminación condicional. Los modelos de PKD ejemplares no limitativos que comprenden mutaciones en genes distintos de Pkdl y Pkd2 incluyen modelos con mutaciones en Pkhdl, Nek8, Kif3a y/o Nphp3. Los modelos PKD se revisan, por ejemplo, en Shibazaki et al., Human Mol. Genet., 2008; 17(11): 1505-1516; Happe y Peters, Nat Rev Nephrol., 2014; 10(10): 587-601; y Patel et al., PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770.
Ciertos ensayos de cuantificación
[0213] Los niveles de microARN se pueden cuantificar en células o tejidos in vitro o in vivo. Los cambios en los niveles de microARN se pueden medir mediante análisis de micromatrices. Los cambios en los niveles de microARN se pueden medir mediante uno de varios ensayos de PCR disponibles en el mercado, como el ensayo de microARN TaqMan® (Applied Biosystems).
[0214] La modulación de la actividad del microARN con un imitador de microARN o anti-miR puede evaluarse mediante el perfilado de micromatrices de ARNm. Las secuencias de los ARNm que son moduladas (aumentadas o disminuidas) por el mimético anti-miR o microARN se buscan en busca de secuencias semilla de microARN, para comparar la modulación de los ARNm que son objetivos del microARN con la modulación de los ARNm que no son objetivos del microARN. microARN. De esta manera, se puede evaluar la interacción del anti-miR con miR-17, o imitación de miR-17 con sus dianas. En el caso de un anti-miR, los ARNm cuyos niveles de expresión aumentan se seleccionan para las secuencias de ARNm que comprenden una semilla coincidente con el microARN al que el anti-miR es complementario.
[0215] La modulación de la actividad del microARN con un compuesto anti-miR-17 puede evaluarse midiendo el nivel de un objetivo de ARNm de miR-17, ya sea midiendo el nivel del propio ARNm o la proteína transcrita a partir del mismo. La inhibición antisentido de un microARN generalmente da como resultado el aumento en el nivel de ARNm y/o proteína del ARNm diana del microARN.
EJEMPLOS
[0216] Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar más completamente algunas formas de realización de la invención. Sin embargo, de ninguna manera deben interpretarse como limitantes del amplio alcance de la invención.
Ejemplo 1: Anti-miR-17 en un modelo de poliquistosis renal
[0217] Pkhd1/cre; ratones Phd2HF desarrollaron enfermedad renal poliquística espontáneamente y se usaron como modelo de ADPKD. Véase Patel et al., PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770.
[0218] Se probó un oligonucleótido modificado complementario a miR-17 (compuesto anti-miR-17) en el Pkhd1/cre; Modelo de ratón Pkd2HF de ADPKD. Se usaron ratones de tipo salvaje como ratones de control. Se usó un oligonucleótido complementario a un miARN no relacionado con miR-17 como control de tratamiento para la especificidad (control antimiR). El compuesto anti-miR-17 era un oligonucleótido completamente fosforotioado de 19 nucleósidos unidos de longitud (5'-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3'; SEQ ID NO: 15), con restos de azúcar de ADN, 2'-MOE y S-cEt.
[0219] Desde los 10 a los 12 días de edad, los compañeros de camada de ratones del mismo sexo fueron tratados con anti-miR-17 (20 mg/kg) o PBS, para un total de tres dosis diarias. A los 19 días de edad, los ratones fueron tratados con una cuarta dosis de anti-miR-17 (20 mg/kg) o PBS. Se administró anti-miR-17 por vía subcutánea. (1) Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF, administración de PBS, n = 8; (2) Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF, administración de control anti-miR, n = 8; (3) Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF, administración de anti-miR-17, n = 8. Los ratones se sacrificaron a los 28 días y se midieron el peso del riñón, el índice de quistes, la función renal y los marcadores renales. La significación estadística se calculó mediante la prueba t de Welch.
[0220] La relación media entre el peso de los riñones y el peso corporal en Pkhd1/cre; los ratones Pkd2HF tratados con anti-miR-17 fueron un 17 % más bajos que la relación media entre el peso del riñón y el peso corporal en Pkhd1/cre; A los ratones Pkd2HF se les administró control anti-miR o PBS solamente (p = 0,017). Pkhd1/cre; los ratones Pkd2HF tratados con anti-miR-17 mostraron una reducción media del 6 % en el índice de quistes en comparación con Pkhd1/cre; A los ratones Pkd2HF se les administró control anti-miR o PBS, aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa (p = 0,072). El índice de quiste es una medida histológica del área quística en relación con el área renal total. Niveles medios de creatinina sérica en Pkhd1/cre; Los ratones Pkd2HF tratados con anti-miR-17 fueron un 25 % más bajos que en Pkhd1/cre; a los ratones Pkd2HF se les administró control anti-miR o PBS, aunque el resultado no fue estadísticamente significativo (p = 0,069). La expresión de Kim1 se redujo en un 33 % en Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF tratados con anti-miR-17 versus control anti-miR o PBS (p = 0,024), y la expresión de Ngal se redujo en un 36 % en Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF tratados con anti-miR-17 versus control anti-miR o p Bs (p = 0,028). Finalmente, los niveles de nitrógeno ureico en sangre (BUN) se redujeron en un 20 % en Pkhd1/cre; ratones Pkd2FIF tratados con anti-miR-17 versus control anti-miR o PBS (p = 0,006). BUN es un marcador sanguíneo de la función renal. Un BUN más alto se correlaciona con una función renal más deficiente. Una reducción en BUN es un indicador de lesión y daño renal reducido y función mejorada.
[0221] Estos resultados demuestran que el tratamiento con anti-miR-17 conduce a un resultado positivo en Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF en el punto final del tratamiento primario, volumen renal. El tratamiento con anti-miR-17 también redujo significativamente el BUN y la expresión de biomarcadores de ARNm de lesión renal, Kim1 y Ngal, en Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF. Finalmente, el tratamiento anti-miR-17 resultó en una tendencia hacia la creatinina sérica reducida y el índice de quistes reducido en el Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF. Estos resultados no se observaron con el control anti-miR, lo que indica que se deben específicamente a la inhibición de miR-17.
Ejemplo 2: Distribución de anti-miR en el riñón de Pkhd1/cre; ratones Pkd2FIF
[0222] Se sabe que los oligonucleótidos, incluidos los compuestos anti-miR, se distribuyen a varios tipos de células dentro del riñón. Como informaron Chau et al., Sci Transl Med., 2012, 121ra18, luego de la administración de un anti-miR marcado con Cy3 a ratones normales o ratones sometidos a lesión renal (obstrucción ureteral unilateral, un modelo de fibrosis intersticial), la la mayor intensidad de fluorescencia en el riñón fue en el epitelio del túbulo proximal. El endotelio, los pericitos, los miofibroblastos y los macrófagos también contenían cantidades detectables de anti-miR marcado con Cy3. Sin embargo, el glomérulo, en particular los podocitos, no parecía absorber cantidades significativas de anti-miR de acuerdo con la distribución conocida de oligonucleótidos modificados químicamente (Masarjian et al., Oligonucleótidos, 2004, 14, 299-310).
[0223] Para investigar la distribución de anti-miR en un modelo de ratón con poliquistosis renal, se administró el compuesto anti-miR-17 a dos grupos diferentes de Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF, uno a partir de los 10 días de edad (n = 4; considerado prequístico) y otro a los 21 días de edad (n = 4; considerado quístico) y a un grupo de ratones de tipo salvaje a partir de los 21 días de edad (n = 4). En cada grupo, el compuesto se administró a 20 mg/kg diarios en tres dosis. Los ratones se sacrificaron tres días después de la última dosis y los riñones se recolectaron y procesaron para análisis histológico. El anti-miR-17 se detectó mediante un anticuerpo que reconoce los oligonucleótidos fosforotioados.
[0224] Las secciones de tejido renal se tiñeron con un anticuerpo que reconoce los oligonucleótidos fosforotioados como marcador del compuesto anti-miR-17, o la aglutinina dolichos biflorus (DBA) como marcador de los conductos colectores. En todos los grupos, la mayoría de la tinción se encontró fuera de los conductos colectores, posiblemente en el epitelio del túbulo proximal. Anti-miR-17 también se administró a los quistes del conducto colector incluso cuando se administró después de que ya se habían formado numerosos quistes en el riñón. La tinción en los conductos colectores pareció ser mayor en los quistes en comparación con los conductos colectores normales, lo que sugiere que la administración del compuesto puede aumentar con el estado de la enfermedad.
[0225] Para confirmar el suministro funcional, se utilizó RT-qPCR para medir los cambios en la expresión génica inducidos por el compuesto anti-let-7. Un panel de 36 genes diana let-7 mostró aumentos significativos en la expresión tanto en riñones prequísticos como quísticos de Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF así como de ratones de tipo salvaje a los que se administró anti-let-7.
[0226] Estos resultados demuestran que los compuestos anti-miR se pueden administrar con éxito a los riñones quísticos para inhibir los miARN.
Ejemplo 3: Inhibición de miembros de la familia miR-17
[0227] Varios microARN comparten identidad de secuencia semilla y, por lo tanto, son miembros de una familia de microARN. Como la región semilla de un microARN es un factor determinante para la especificidad del objetivo, los miembros de la familia de microARN a menudo regulan conjuntos de dianas similares de ARN mensajero. Fuera de la región semilla, los miembros de la familia de microARN comparten diversos grados de identidad de secuencia.
[0228] Una de esas familias es la familia miR-17, que incluye miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, miR-106a y miR-106b. Los microARN individuales de esta familia de microARN están ubicados en tres cromosomas diferentes, dentro de tres grupos de microARN diferentes. miR-17 y miR-20a residen dentro del grupo miR-17-92 en el cromosoma 13 humano; miR-20b y miR-106a residen dentro del grupo miR-106a~363 en el cromosoma X humano, y miR-93 y miR-106b residen dentro del grupo miR-106b-25 en el cromosoma humano 7 (Figura 1A). Cada uno de estos tres grupos contiene otros microARN que no son miembros de la familia miR-17 y, por lo tanto, no comprenden la secuencia semilla de miR-172-7. Sin embargo, estos microARN son miembros de otras familias de miR, como se muestra en la Figura 1B. Los miembros de la familia miR-17 se muestran en la Figura 1B, con la secuencia semilla miR-172-7 en negrita. La secuencia semilla de los miembros de la familia miR-18 (miR-18a y miR-18b) contiene una diferencia de una nucleobase en relación con la secuencia semilla miR-172-7, sin embargo, fuera de la región semilla, las secuencias son diferentes.
[0229] Debido a la identidad de secuencia entre los miembros de la familia de microARN, y debido a que un oligonucleótido modificado con menos del 100 % de complementariedad con una secuencia de microARN aún puede inhibir la actividad de ese microARN, un oligonucleótido modificado con una secuencia de nucleobase 100 % complementaria a la secuencia de nucleobase de un primer miembro de la familia, y que es menos del 100 % complementario a uno o más miembros de la familia, puede inhibir a esos uno o más miembros de la familia, además de inhibir la actividad del primer miembro de la familia de microARN. Por ejemplo, un oligonucleótido modificado con una secuencia de nucleobases que es 100 % complementaria a miR-17 (5'-Ct Gc ACTGTTAAGCACTTTG-3'; SEQ ID NO: 15), y menos de 100 % de complementariedad con otros miembros de la familia miR-17 (Tabla 1), se espera que inhiba a esos otros miembros de la familia miR-17.
Tabla 1: % de complementariedad de anti-miR-17 con miembros de la familia miR-17
Figure imgf000022_0001
[0230] Para probar la inhibición de los miembros de la familia miR-17, se utilizó el ensayo indicador de luciferasa. Se construyó un plásmido informador de luciferasa para cada uno de miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93 y miR-106b, con un sitio de unión de microARN completamente complementario en el 3'-UTR del gen de la luciferasa. Para cada microARN, las células HeLa se transfectaron con el imitador de microARN y su indicador de luciferasa afín, seguido de la transfección con anti-miR-17. Cada uno de miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93 y miR-106b fue inhibido por el compuesto anti-miR-17, lo que demuestra que el compuesto anti-miR-17 inhibe múltiples miembros del miR-17 familia, incluso cuando hay desajustes presentes entre las secuencias de antimiR-17 y microARN.
[0231] Un ensayo separado, el ensayo de cambio de polisomas de microARN (miPSA), confirmó que el compuesto antimiR-17 interactúa directamente con tres miembros de la familia miR-17, miR-17, miR-20b y miR-106a (Androsavich et al., Nucleic Acids Research, 2015, 44: e13). El miPSA se basa en el principio de que los miARN activos se unen a sus objetivos de ARNm en polisomas de alto peso molecular (HMW) traduccionalmente activos, mientras que los miARN inhibidos residen en los polisomas de bajo peso molecular (LMW). El tratamiento con anti-miR da como resultado un cambio del microARN de los polisomas HMW a los polisomas LMW. Por lo tanto, el miPSA proporciona una medición directa del compromiso del objetivo de microARN por un anti-miR complementario. Androsavich et al. confirmó además que los miARN de la familia que no son miR-17, por otro lado, no respondían en comparación, con una excepción: miR-18a mostró inesperadamente una fuerte reactividad cruzada en dosis más altas (lo que puede explicarse por las secuencias de semillas miR-17 y miR-18 que tienen solo una única diferencia de nucleótido A/G (Figura 1).
[0232] En consecuencia, el tratamiento con un compuesto anti-miR-17 inhibe a todos los miembros de la familia miR-17, incluso cuando existen desajustes entre las secuencias de anti-miR-17 y microARN.
Ejemplo 4: Inhibición de miR-17 en quistes de ADPKD humana
[0233] Los efectos de la inhibición de miR-17 se estudiaron en cultivos primarios derivados de quistes humanos de ADPKD. Células ADPKD primarias humanas congeladas fueron proporcionas por el PKD Research Biomaterials and Cellular Models Core en Kansas por el Centro Médico Universitario (KUMC). Se cultivaron células de ADPKD primarias humanas en medio DMEM:F12 (Gibco) suplementado con FBS al 5%, 5 ug/ml de insulina, 5 ug/ml de transferrina y 5 ng/ml de selenito de sodio (ITS) (Lonza), como se describió previamente (Yamaguchi et al., Am J Physiol Renal Physiol, 2010, 299: F944-951).
Ensayo de proliferación
[0234] Con una confluencia del 80%, las células ADPKD humanas se tripsinizaron usando una dilución 1:10 de tripsina en PBS libre de Ca+2 y Mg+2. Las células se transfectaron con RNAiMAX (Life Technologies) siguiendo el protocolo del fabricante a una densidad de 2500 células/pocillo en una placa de 96 pocillos. Los tratamientos fueron los siguientes:
• anti-miR-17 (a dosis de 3 nM, 10 nM o 30 nM; n=5 para cada tratamiento)
• oligonucleótido de control (a las dosis indicadas en la Tabla 3; n=5 para cada tratamiento). Para variar los tratamientos de control, se utilizaron dos grupos de control diferentes. Para cultivos derivados de donantes, se ensayaron 1-4, 3 o 5 oligonucleótidos de control, cada uno a una dosis única de 30 nM. Para las células derivadas del donante 5, se probó un solo oligonucleótido de control a tres dosis diferentes.
• transfección simulada con RNAiMAX (n=5)
• PBS (n=5)
[0235] La viabilidad celular se midió utilizando el ensayo MTT (Promega) el día tres siguiendo el protocolo del fabricante. Los resultados se muestran en la Tabla 2. La media de cada grupo de tratamiento con anti-miR-17 o grupo de tratamiento con oligonucleótidos de control se normaliza a la media del grupo de tratamiento simulado. Se muestra el error estándar de la media. El análisis estadístico se realizó utilizando la prueba t de Student para comparaciones por pares o análisis de varianza (ANOVA) seguido de la prueba post hoc de Tukey para comparaciones múltiples. Los valores de P son los siguientes: * indica P<0,05, **indica P<0,01, ***indica P<0,005 y ****indica P<0,001. Para el tratamiento anti-miR-17, el valor P indica la importancia en relación con el tratamiento simulado. Para el tratamiento con oligonucleótidos de control, se muestran dos valores P diferentes, uno que indica la importancia relativa al tratamiento simulado (valor P 1 en la Tabla 2) y el otro que indica la importancia relativa al tratamiento anti-miR-1730 nM (valor P 2 en Tabla 2). N.t. indica no probado.
[0236] El tratamiento con anti-miR-17 produjo una reducción dependiente de la dosis en la proliferación del epitelio del quiste, en relación con el tratamiento de transfección simulada. A diferencia del tratamiento con anti-miR-17, la mayoría de los tratamientos con oligonucleótidos de control no redujeron consistentemente la proliferación en una cantidad estadísticamente significativa.
[0237] Como ejemplo, el tratamiento de cultivos epiteliales de quistes del Donante 1 con anti-miR-17 30 nM redujo la proliferación celular en un 47 %, en relación con la transfección simulada (P < 0,0001), mientras que el tratamiento con oligonucleótidos de control no redujo la proliferación celular en una proporción estadísticamente significativa. cantidad considerable. Además, para cultivos epiteliales de quistes del mismo donante, una comparación del tratamiento anti-miR-17 30 nM con cada uno de los tres tratamientos de control también revela una reducción estadísticamente significativa en la proliferación celular por el tratamiento anti-miR-17 (P < 0,0001).
Tabla 2: Proliferación de epitelios quísticos
Figure imgf000024_0001
Formación de quistes in vitro
[0238] Células de ADPKD primarias humanas se cultivaron hasta una confluencia del 80% y se tripsinizaron usando una dilución 1:10 de tripsina en PBS libre de Ca+2 y Mg+2. El primer día, las células se transfectaron utilizando RNAiMAX en un formato de placa de seis pocillos. Los grupos de tratamiento fueron los siguientes:
• anti-miR-17 en dosis de 1 nM, 5 nM o 20 nM (n=3 para cada dosis)
• cinco oligonucleótidos de control, cada uno en una dosis de 20 nM (n=3 para cada oligonucleótido de control) • transfección simulada con RNAiMAX (n=3)
• PBS
24 horas después de la transfección, las células se tripsinizaron en una suspensión de células individuales, se contaron y se sembraron en una placa de 96 pocillos a una densidad de 4000 células/pocillo en 130 μl de medio más Matrigel en una proporción de 4:5. Tras la solidificación del matrigel, se añadió medio de cultivo completo al pocillo. El medio se repuso cada 72 horas hasta 8 días después de la siembra, cuando se midió el tamaño y el número de quistes.
[0239] Cada pocillo se inspeccionó en busca de proliferación de quistes utilizando un microscopio óptico Olympus D8. Las imágenes se grabaron con una cámara Olympus DP26 (Olympus Corporation) desde 28 planos focales, con una separación de 150 μm, hacia el interior del pozo (en el eje z) como veintiocho imágenes TIFF en color de 24 bits a 2448 x 1920 píxeles a 72 ppp. La imagen de cada plano focal de cada pocillo se procesó mediante un script R personalizado (R Core Team 2015 R: A language and environment for Statistical Computing. R Foundation for Statistical Computing, Viena, Austria, disponible en www.R-project.org) que utilizó el paquete EBImage Bioconductor 15. Este script detectó quistes de forma automática y reproducible y se aplicó a todos los ensayos de matrigel en todos los donantes. Brevemente, cada imagen se enmascaró en busca de artefactos, se filtró a través de un filtro laplaciano de paso alto y se segmentó con un umbral adaptativo. Los objetos detectados en las imágenes segmentadas se procesaron aún más mediante la dilatación de píxeles, el relleno de agujeros y la erosión de píxeles. Se recopilaron estadísticas de tamaño, radio y excentricidad de cada objeto segmentado. Los objetos se filtraron si tenían un radio medio inferior o igual a 15 píxeles, o si tenían un radio de objeto medio superior a 200 píxeles, o un coeficiente de variación del radio superior a 0,2, o si la excentricidad del objeto detectado objeto era mayor que 0,75. Debido a que los quistes a menudo eran más grandes que la distancia entre los planos focales, se evitó contar dichos quistes más de una vez. Si un objeto de quiste en una imagen se encontraba dentro de las mismas coordenadas x e y de una imagen vecina (p. ej., un plano focal arriba en el eje z), entonces se contaba como el mismo quiste. Todas las imágenes de cada pocillo se procesaron secuencialmente de esta manera en el eje z. Finalmente, el volumen de cada quiste se estimó multiplicando el radio medio del objeto más grande por 4/3nr3, asumiendo que cada quiste es una esfera.
[0240] Los resultados se muestran en la Tabla 3. La media de cada grupo de tratamiento con anti-miR-17 o grupo de tratamiento con oligonucleótidos de control se normaliza a la media del grupo de tratamiento simulado. Se muestra el error estándar de la media. El análisis estadístico se realizó utilizando la prueba t de Student para comparaciones por pares o análisis de varianza (ANOVA) seguido de la prueba post hoc de Tukey para comparaciones múltiples. Los valores de P son los siguientes: * indica P<0,05, ** indica P<0,01, *** indica P<0,005 y **** indica P<0,001. Para el tratamiento antimiR-17, el valor P indica la importancia en relación con el tratamiento simulado. Para el tratamiento con oligonucleótidos de control, se muestran dos valores P diferentes, uno que indica la importancia relativa al tratamiento simulado (valor P 1 en la Tabla 3) y el otro que indica la importancia relativa al tratamiento anti-miR-1730 nM (valor P 2 en Tabla 3).
[0241] El tratamiento con anti-miR-17 produjo una reducción dependiente de la dosis en el recuento de quistes, en relación con el tratamiento de transfección simulada. A diferencia del tratamiento con anti-miR-17, la mayoría de los tratamientos con oligonucleótidos de control no redujeron consistentemente el recuento de quistes en una cantidad estadísticamente significativa.
[0242] Como ejemplo, el tratamiento de cultivos epiteliales de quistes del Donante 3 con anti-miR-17 30 nM redujo la proliferación celular en un 63 %, en relación con la transfección simulada (P < 0,0001), mientras que el tratamiento con oligonucleótidos de control no redujo consistentemente el recuento de quistes en una cantidad estadísticamente significativa. Además, para el recuento de quistes del mismo donante, una comparación del tratamiento anti-miR-17 30 nM con cada uno de los tres tratamientos de control también revela una reducción estadísticamente significativa en la proliferación celular por el tratamiento anti-miR-17 (P < 0,0001).
Tabla 3: Recuento de quistes
Figure imgf000025_0001
[0243] Estos datos demuestran que el tratamiento con anti-miR-17 inhibe la proliferación de quistes derivados de pacientes humanos con ADPKD.
Ejemplo 5: Anti-miR-17 en el modelo Pcy de PKD
[0244] Los ratones Pcy que portan una mutación en Nphp3 desarrollan enfermedad renal poliquística espontáneamente, con una progresión más lenta de la enfermedad que la observada en Pkhd1/cre; ratones Pkd2HF. El modelo Pcy se utiliza como modelo de PKD humana, así como un modelo del complejo nefronoptisis/enfermedad renal quística medular (NPH/MCD). Se probó un oligonucleótido modificado complementario a miR-17 (compuesto anti-miR-17) en el modelo de ratón Pcy. Se usaron ratones de tipo salvaje como ratones de control. Se usó un oligonucleótido complementario a un miARN no relacionado con miR-17 como control de tratamiento para la especificidad (control anti-miR). El compuesto antimiR-17 era un oligonucleótido completamente fosforotioado con 19 nucleósidos unidos de longitud (5'-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3'; SEQ ID NO: 15), con restos de azúcar de ADN, 2'-MOE y S-cEt.
[0245] Los ratones Pcy (CD1-pcylusm) se obtuvieron de PreClinOmic. A partir de las cuatro semanas de edad, los ratones Pcy fueron tratados una vez por semana con anti-miR-17 (50 mg/kg vía inyección subcutánea) o PBS, para un total de 26 dosis. El grupo anti-miR-17 contenía 12 ratones y el grupo de control PBS contenía 11 ratones.
[0246] Un grupo de control adicional incluía ratones CD1 de la misma edad, obtenidos de Charles River Laboratories. A los ratones CD1 se les inyectó por vía subcutánea PBS una vez por semana, durante un total de 26 semanas.
[0247] Al final del período de tratamiento de 26 semanas, se sacrificaron los ratones y se extrajo y pesó un riñón y el otro se procesó para análisis histológico. Se midieron el nitrógeno ureico en sangre (BUN) y la creatinina sérica.
[0248] Para el análisis histológico, se perfundió un riñón con PBS frío y paraformaldehído al 4% (p/vol) y luego se recogió. Los riñones se fijaron con paraformaldehído al 4% durante 2 horas y luego se incluyeron en parafina para su seccionamiento. Las secciones sagitales de los riñones se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E). Todos los pasos del procesamiento de imágenes se automatizaron y se llevaron a cabo en un software de código abierto y disponible gratuitamente: un script R1 que utilizó funciones del paquete EBImage Bioconductor 2 y el conjunto de herramientas de procesamiento de imágenes ImageMagick3. Las imágenes de riñón H&E en formato Aperio SVS se convirtieron a imágenes TIFF y el primer cuadro se retuvo para el análisis de imágenes. En primer lugar, se calculó el área total de la sección del riñón utilizando la segmentación de imágenes. La segmentación de imágenes se usó de manera similar para encontrar todas las estructuras internas, incluido el quiste renal. Se aplicó un filtro para eliminar todos los objetos de menos de un radio medio de tres píxeles. El índice quístico es el área de la imagen asociada con los quistes dividida por las áreas renales totales. El índice quístico se calculó por separado para secciones renales longitudinales y transversales para cada animal individual. Se comparó el índice quístico combinado de animales individuales para cada grupo de tratamiento.
[0249] Los resultados de los ratones CD1 tratados con PBS se usaron para proporcionar un punto de referencia para cada parámetro (relación peso del riñón/peso corporal, índice quístico, nitrógeno ureico en sangre y creatinina sérica) en un modelo sin enfermedad. Como era de esperar, ratones tratados con CD1 no exhibieron ninguna patología asociada con PKD.
[0250] La relación media entre el peso de los riñones y el peso corporal en los ratones Pcy tratados con anti-miR-17 fue un 19 % más baja que la relación media entre el peso de los riñones y el peso corporal en los ratones Pcy a los que se les administró PBS solo (p = 0,0003) (Figura 2A). Los ratones Pcy tratados con anti-miR-17 mostraron una reducción media del 28 % en el índice de quistes en comparación con los ratones Pcy que recibieron solo PBS (p = 0,008) (Figura 2B). No se observaron cambios significativos en BUN o creatinina sérica. Se muestran los valores P del análisis ANOVA de 1 vía después de las correcciones de comparación múltiple de Dunnett.
[0251] Estos datos demuestran, en un modelo adicional de PKD, que el tratamiento con anti-miR-17 conduce a una reducción del peso del riñón y del índice de quistes.

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consta de 8 a 25 nucleósidos unidos, en el que la secuencia de bases del oligonucleótido modificado es complementaria a miR-17, para usar en un método de tratamiento de la poliquistosis renal.
2. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el sujeto:
a) tiene poliquistosis renal; o
b) se sospecha que tiene poliquistosis renal; o
c) se le ha diagnosticado enfermedad renal poliquística antes de administrar el oligonucleótido modificado.
3. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que:
a) la enfermedad renal poliquística es una enfermedad renal poliquística autosómica recesiva o una enfermedad renal poliquística autosómica dominante; y/o
b) la poliquistosis renal es una poliquistosis renal autosómica dominante; y/o
c) el sujeto tiene una mutación seleccionada de una mutación en el gen PKD1 o una mutación en el gen PKD2; y/o
d) el sujeto tiene:
i. aumento del volumen renal total; y/o
ii. hipertensión; y/o
iii. deterioro de la función renal.
4. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la administración del compuesto:
a) mejora la función renal en el sujeto;
b) retrasa el empeoramiento de la función renal en el sujeto;
c) reduce el volumen renal total en el sujeto;
d) retarda el aumento del volumen renal total en el sujeto;
e) inhibe el crecimiento de quistes en el sujeto;
f) retarda el aumento del crecimiento de quistes en el sujeto;
g) reduce el dolor renal en el sujeto;
h) retarda el aumento del dolor renal en el sujeto;
i) retrasa la aparición del dolor renal en el sujeto;
j) reduce la hipertensión en el sujeto;
k) retarda el empeoramiento de la hipertensión en el sujeto;
l) retrasa la aparición de hipertensión en el sujeto;
m) reduce la fibrosis en el riñón del sujeto;
n) retarda el empeoramiento de la fibrosis en el riñón del sujeto;
o) retrasa la aparición de la enfermedad renal en etapa terminal en el sujeto;
p) retrasa el tiempo de diálisis del sujeto;
q) retrasa el tiempo de trasplante renal para el sujeto; y/o
r) mejora la esperanza de vida del sujeto.
5. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la administración del compuesto:
a) reduce la albuminuria en el sujeto;
b) retrasa el empeoramiento de la albuminuria en el sujeto;
c) retrasa la aparición de albuminuria en el sujeto;
d) reduce la hematuria en el sujeto;
e) retarda el empeoramiento de la hematuria en el sujeto;
f) retrasa la aparición de hematuria en el sujeto;
g) reduce el nitrógeno ureico en sangre en el sujeto;
h) reduce la creatinina en la sangre del sujeto;
i) mejora el aclaramiento de creatinina en el sujeto;
j) reduce la relación albúmina:creatinina en el sujeto;
k) mejora la tasa de filtración glomerular en el sujeto;
l) retarda el empeoramiento de la tasa de filtración glomerular en el sujeto;
m) reduce la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto; y/o n) reduce la proteína de la molécula 1 de daño renal (KIM-1) en la orina del sujeto.
6. El compuesto para uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el uso comprende: a) medir el volumen renal total en el sujeto;
b) medir la hipertensión en el sujeto;
c) medir el dolor renal en el sujeto;
d) medir la fibrosis en el riñón del sujeto;
e) medir el nitrógeno ureico en sangre en la sangre del sujeto;
f) medir la creatinina en la sangre del sujeto;
g) medir el aclaramiento de creatinina en el sujeto;
h) medir la albuminuria en el sujeto;
i) medir la relación albúmina:creatinina en el sujeto;
j) medir la tasa de filtración glomerular en el sujeto;
k) medir la proteína lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL) en la orina del sujeto; y/o l) medir la proteína de la molécula de lesión renal 1 (KIM-1) en la orina del sujeto.
7. El compuesto para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3(d)(iii), 4 y 6, en el que el volumen renal total es el volumen renal ajustado a la altura.
8. El compuesto para uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la secuencia de bases nitrogenadas del oligonucleótido modificado:
a) es complementaria en al menos un 90 %, es complementaria en al menos un 95 % o es complementaria en un 100 % de la secuencia de bases nitrogenadas de miR-17 (SEQ ID NO: 1); y/o
b) comprende la secuencia de nucleobases 5-GCACTTTG-3' (SEQ ID NO: 3), donde cada T en la secuencia de nucleobases se selecciona independientemente de una T y una U.
9. El compuesto para usar según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que el oligonucleótido modificado consta de
a) 8, 9, 10, 11 o 12 nucleósidos enlazados; o
b) 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 nucleósidos enlazados; o
c) 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 o 22 nucleósidos enlazados; o
d) 17, 18, 19, 20, 21, 22 o 23 nucleósidos enlazados.
10. El compuesto para uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el oligonucleótido modificado comprende:
a) al menos un nucleósido modificado, opcionalmente donde el nucleósido modificado se selecciona de un nucleósido S-cEt, un 2'-O-metoxietilo nucleósido y un nucleósido LNA; y/o
b) al menos un enlace internucleósido modificado, opcionalmente en el que el enlace internucleósido modificado es un enlace internucleósido fosforotioato.
11. El compuesto para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que cada enlace internucleósido del oligonucleótido modificado es un enlace internucleósido modificado, opcionalmente en el que el enlace internucleósido modificado es un enlace internucleósido fosforotioato.
12. El compuesto para uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que:
a) el compuesto consiste en el oligonucleótido modificado; y/o
b) el uso comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto.
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