ES2954596T3 - Profármacos unidos a lípidos - Google Patents

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Marco Ciufolini
Pieter Cullis
Yuen Tam
Joshua Zaifman
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University of British Columbia
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University of British Columbia
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Abstract

Esta invención proporciona profármacos unidos a lípidos que tienen estructuras como se establece en el presente documento. También se proporcionan usos de tales compuestos de profármacos unidos a lípidos para el tratamiento de diversas indicaciones, y métodos para preparar y usar profármacos unidos a lípidos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Profármacos unidos a lípidos
Campo técnico
La presente invención se refiere a un conjugado de un compuesto terapéutico y un resto lipídico, a composiciones de este y a métodos para su uso en la administración de compuestos terapéuticos. En particular, la invención se refiere a profármacos unidos a lípidos, en donde el ligador unido covalentemente al profármaco es biodegradable. También se proporcionan métodos para fabricar y utilizar los conjugados.
Antecedentes
La selectividad del fármaco para un tejido diana es una consideración importante durante el diseño de fármacos. La administración selectiva de un fármaco a su diana puede permitir dosis más bajas y efectos secundarios reducidos. La selectividad para un tejido diana determinado puede ser particularmente importante cuando los agentes terapéuticos administrados son quimioterapéuticos para el tratamiento del cáncer. En particular, las terapias con fármacos citotóxicos se dirigen a células que se dividen rápidamente, pero a menudo pueden verse limitadas por los efectos secundarios tóxicos del quimioterapéutico en las células sanas. Además, otros restos terapéuticos pueden beneficiarse de una orientación selectiva y unas características farmacocinéticas mejoradas (es decir, estabilidad in vivo, captación celular (por ejemplo, lipofilia), etc.).
Los ácidos grasos se han utilizado para mejorar la selectividad de los fármacos para sus tejidos diana (por ejemplo, US 7.235.583; US 8.552.054; US 6.090.800; US 2012/0264810; US 2013/0330401). Con anterioridad se han conjugado ácidos grasos con fármacos para ayudar a los fármacos como conjugados a atravesar la barrera hematoencefálica (por ejemplo, US 4.933.324).
Las moléculas lipídicas, incluidos los ácidos grasos o las aminas grasas, también se han conjugado con fármacos para que los conjugados sean más lipofílicos que los fármacos no conjugados. Las aminas grasas son moléculas lipídicas que terminan en un grupo amino (a diferencia de los ácidos grasos, que terminan en un grupo ácido carboxílico). Los ácidos grasos se producen de forma natural, mientras que las aminas grasas no son un componente tisular común en los animales.
Sumario
La presente invención se basa en parte en el descubrimiento fortuito de que los conjugados de los compuestos terapéuticos y los restos lipídicos descritos en la presente, muestran una administración selectiva mejorada. Además, algunos de los conjugados de compuestos terapéuticos y restos lipídicos muestran una carga mejorada, una toxicidad reducida, una orientación mejorada, una potencia in vivo mejorada o una estabilidad in vivo mejorada. El alcance de la presente invención se define por el alcance de las reivindicaciones adjuntas.
En un aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto, en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000002_0001
en donde:
A-Z es dexametasona, en donde Z es un átomo electronegativo seleccionado de N u O, de tal manera que la dexametasona se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Z-H cuando Z ha perdido un H para unirse covalentemente a Y;
Y es CH2 , C(=O) o PO32-;
T5 son 0-6 átomos de carbono; y
L4 es una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, que tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH o tiene la Fórmula V
Figure imgf000002_0002
en donde:
T2 son 1-4 átomos de carbono;
T3 son 0-4 átomos de carbono
T4 son 0-4 átomos de carbono;
J1 es -O-C(=O)-L1;
J2 es -COOH, -OH, -NH3+, -NH2, -SH, -NMe2 o -NHMe; y
L1 es una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, que opcionalmente tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH.
En una forma de realización de la invención, el compuesto tiene la estructura de la Fórmula II:
Figure imgf000003_0001
en donde:
Y es CH2 , C(=O), o PO32-;
T1 son 0-4 átomos de carbono
T2 son 1-3 átomos de carbono; y
J2 es -COOH, -OH, -NH3+, -NH2,-NMe2 , o -NHMe.
En otra forma de realización de la invención, el compuesto tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000003_0002
en donde:
Y es CH2 , C(=O) o PO32-; y
T5 son 0-4 átomos de carbono.
En formas de realización preferidas, Y es CH2 o C(=O); y T5 o T1 son 0-2 átomos de carbono.
Preferentemente, el compuesto de acuerdo con la presente invención se selecciona de uno o más de los siguientes:
Figure imgf000003_0003
y
Figure imgf000003_0004
Aún más preferentemente, el compuesto de acuerdo con la presente invención es
Figure imgf000004_0001
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica, la composición farmacéutica comprende un compuesto de acuerdo con la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de acuerdo con la presente invención para su uso en el tratamiento del cáncer, enfermedad autoinmune o infección.
Se proporciona para la comparación en la presente un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula I:
Figure imgf000004_0002
en donde:
R1 puede ser H, un alquilo C1-C20 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
R2 puede ser H, una amina primaria C1-C6, una amina secundaria C1-C6 o una amina terciaria C1-C6 , un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O­ alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
X1 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
G1 puede ser
Figure imgf000004_0003
en donde:
A-Zg1 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg1 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg1-H cuando Zg1 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg1;
Yg1 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11, en donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6 , y en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
Mg1 puede ser 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6, O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ;
alternativamente, G1 puede ser H, R13 o R13-C(=O)-, en donde R13 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH;
alternativamente, G1 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe;
n1 puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
R3 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
R4 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
n2 puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
R5 puede ser H, amina primaria C1-C6, amina secundaria C1-C6 o amina terciaria C1-C6 , un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
X2 puede ser O, S o NR14, en donde R14 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
G2 es
Figure imgf000005_0001
en donde:
A-Zg2 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg2 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg2-H cuando Zg2 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg2;
YG2 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH; Mg2 puede ser 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6, O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ;
alternativamente, G2 puede ser H o R16-C(=O)-, en donde R16 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH;
alternativamente, G2 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser un alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe;
n3 puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
R6 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
R7 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
n4 puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
R8 puede ser H, amina primaria C1-C6, amina secundaria C1-C6 o amina terciaria C1-C6, alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6 , en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
X3 puede ser O, S o NR17, en donde R17 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
G3 puede ser
Figure imgf000006_0001
en donde:
A-Zg3 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg3 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg3-H cuando Zg3 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg3 í
YG3 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32", o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, que opcionalmente tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u 11O-acilo C1-C6, y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F,C l, '/ B vr, I u OH; Mg3 puede ser de 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, un OH, =O, O-alquilo C1-C6, O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ;
alternativamente, G3 puede ser H, R19 o R19-C(=O)-, en donde R19 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH;
alternativamente, G3 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+, -SH; -NMe2; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser un alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+, -SH; -NMe2 ; -NHMe;
R9 puede ser H, una amina primaria C1-C6, una amina secundaria C1-C6 o una amina terciaria C1-C6 , un alquilo lineal, ramificado o cíclico C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br, I, un OH, un O-alquilo C1-C6, o un O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con un F, Cl, Br, I u OH;
alternativamente, en donde n1, n2, n3, n4 puede ser 0 y R1 puede ser H, entonces R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C7-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituido con OH; y
siempre que al menos uno de G1, G2 o G3 pueda ser un resto de fármaco, en donde el resto de fármaco se selecciona de
Figure imgf000006_0002
o
Figure imgf000006_0003
respectivamente.
También se proporciona para comparación en la presente, un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula I:
Figure imgf000007_0001
Fórmula I
en donde:
R1 puede ser H o un alquilo lineal, ramificado C1-C20, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br o I;
R2 puede ser H o un alquilo lineal, ramificado C1-C20, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br, o I;
X1 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH;
G1 puede ser
Figure imgf000007_0002
en donde:
A-Zg1 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg1 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg1-H cuando Zg1 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg1;
Yg1 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH; Mg1 puede ser 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, a =O, O-alquilo C1-C6 , O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ;
alternativamente, G1 puede ser H, R13 o R13-C(=O)-, en donde R13 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, con al menos un doble enlace C=C cis o trans y opcionalmente sustituido con OH; alternativamente, G1 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2 ; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser un alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH, -NH+; -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe;
n1 puede ser 0 , 1 o 2 ;
R3 puede ser H, OH, o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I;
R4 puede ser H, OH, o un alquilo lineal o ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I;
n2 puede ser 0 , 1 o 2 ;
R5 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, o I;
X2 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH;
G2 puede ser
Figure imgf000007_0003
en donde:
A-Zg2 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg2 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg2-H cuando Zg2 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg2 í
Yg2 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH; Mg2 puede ser 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6, O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ;
alternativamente, G2 puede ser H o R16-C(=O)-, en donde R16 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos un doble enlace C=C cis o trans y opcionalmente sustituido con OH;
alternativamente, G2 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser un alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe;
n3 puede ser 0, 1o 2;
R6 puede ser H, OH, o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, o I;
R7 puede ser H, OH, o un alquilo lineal o ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I;
n4 puede ser 0, 1o 2;
R8 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, o I;
X3 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH;
G3 puede ser
Figure imgf000008_0001
en donde:
A-Zg3 puede ser un resto de fármaco, en donde Zg3 puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N y O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Zg3-H cuando Zg3 ha perdido un H para unirse covalentemente a Yg3;
YG3 puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, que opcionalmente tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6, y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH; Mg3 puede ser de 0-12 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos C tienen opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y donde los átomos C pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6, O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6 ; alternativamente, G3 puede ser H, R19 o R19-C(=O)-, en donde R19 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos un doble enlace C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH;
alternativamente, G3 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; -NHMe; y R18, en donde R18 puede ser un alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con uno o más de COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe;
R9 puede ser H, amina primaria C1-C6 , amina secundaria C1-C6 o amina terciaria C1-C6 , alquilo lineal, ramificado o cíclico C1-C10, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6, en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH;
alternativamente en donde n1, n2, n3, n4 puede ser 0 y R1 puede ser H, entonces R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C7-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituido con OH; y
siempre que al menos uno de G1, G2 o G3 pueda ser un resto de fármaco, en donde el resto de fármaco se selecciona de:
Figure imgf000009_0001
respectivamente.
Para la comparación, también se proporciona un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000009_0004
en donde:
A-Z puede ser un resto de fármaco, en donde Z puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N u O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Z-H cuando Z ha perdido un H para unirse covalentemente a Y;
Y puede ser CH2 , C(=O), PO32 o NH;
T5 puede ser de 0-6 átomos de carbono; y 11
L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH o tiene la Fórmula V:
Figure imgf000009_0003
en donde
T2 pueden ser 1-4 átomos de carbono;
T3 pueden ser 0-4 átomos de carbono;
T4 pueden ser 0-4 átomos de carbono;
J1 puede ser -O-C(=O)-L1;
J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe, o
Figure imgf000009_0002
J3 puede ser NMe2 , -CH2NHMe o H;
J4 puede ser -O-C(=O)-L3;
L1 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH;
L2 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH; y
L3 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH;
alternativamente, Z, Y y T5 pueden estar ausentes y A puede ser un resto de fármaco, con un átomo electronegativo O precedido por un C(=O), que ha perdido un H para unirse covalentemente a L4.
Y puede ser CH2 , C(=O) o PO32'. Y puede ser CH2 o C(=O). Y puede ser PO32'. Y puede ser CH2. Y puede ser C(=O);
siempre que cuando A-Z sea un fármaco esteroide entonces R20 sea un C7-C29 tenga uno o más, cis o trans C=C enlaces dobles;
y siempre que el compuesto no sea
Figure imgf000010_0001
Para la comparación también se proporciona un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula II:
Figure imgf000010_0003
en donde:
A-Z puede ser un resto de fármaco, en donde Z puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N u O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Z-H cuando Z ha perdido un H para unirse covalentemente a Y;
Y puede ser CH2 , C(=O), PO32-, o NH;
T1 pueden ser de 0-6 átomos de carbono;
T2 pueden ser de 1-4 átomos de carbono;
T3 pueden ser de 0-4 átomos de carbono;
T4 pueden ser 0-4 átomos de carbono;
J1 puede ser -O-C(=O)-L1;
J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe, o
Figure imgf000010_0002
J3 puede ser NMe2 , -CH2NHMe o H;
J4 puede ser -O-C(=O)-L3
L1 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH;
L2 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH; y
L3 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH;
siempre que cuando A-Z sea un fármaco esteroide entonces R20 sea un C7-C29 tenga uno o más, cis o trans C=C enlaces dobles;
y siempre que el compuesto no sea
Figure imgf000011_0001
Para la comparación se proporciona un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000011_0003
en donde:
A-Z puede ser un resto de fármaco, en donde Z puede ser un átomo electronegativo seleccionado de N u O, de tal manera que el resto de fármaco se derivó de un fármaco que tiene la Fórmula A-Z-H cuando Z ha perdido un H para unirse covalentemente a Y;
Y puede ser CH2 , C(=O), PO32-, o NH;
T5 puede ser de 0-6 átomos de carbono; y
L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH.
Para la comparación también se proporciona un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula IV:
Figure imgf000011_0004
en donde:
A puede ser un resto de fármaco, con un átomo electronegativo O precedido por un C(=O), y que ha perdido un H para unirse covalentemente a L5; y
L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y puede estar opcionalmente sustituida con OH.
T5 puede ser de 0 a 5 átomos de carbono. T5 puede ser de 0-4 átomos de carbono. T5 puede ser de 0-3 átomos de carbono. T5 puede ser de 0-2 átomos de carbono. T5 puede ser de 0-1 átomos de carbono. T5 puede ser de 0 átomos de carbono. T5 puede ser de 1-6 átomos de carbono. T5 puede ser de 1-5 átomos de carbono. T5 puede ser de 1-4 átomos de carbono. T5 puede ser de 1-3 átomos de carbono. T5 puede ser de 1-2 átomos de carbono. T5 puede ser de 2 átomos de carbono. T5 puede ser de 1 átomo de carbono. T5 puede ser de 3 átomos de carbono.
L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C25, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C22, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C20, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C18, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L4 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C16, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH.
L4 puede tener la Fórmula V:
Figure imgf000011_0002
T2 puede ser de 1-4 átomos de carbono. T2 puede ser de 1-3 átomos de carbono. T2 puede ser de 1-2 átomos de carbono. T2 puede ser de 2-4 átomos de carbono. T2 puede ser de 3-4 átomos de carbono. T2 puede ser de 1 átomo de carbono. T2 puede ser de 2 átomos de carbono. T2 puede ser de 3 átomos de carbono. T3 puede ser de 0-4 átomos de carbono. T3 puede ser de 0-3 átomos de carbono. T3 puede ser de 0-2 átomos de carbono. T3 puede ser de 0-1 átomos de carbono. T3 puede ser de 1-4 átomos de carbono. T3 puede tener 1-3 átomos de carbono. T3 puede ser de 1-2 átomos de carbono. T3 puede ser de 2 átomos de carbono. T3 puede ser de 3 átomos de carbono. T3 puede ser de 4 átomos de carbono. T4 puede ser de 0-4 átomos de carbono. T4 puede ser de 0-3 átomos de carbono. T4 puede ser de 0-2 átomos de carbono. T4 puede ser de 0-1 átomos de carbono. T4 puede ser de 1-4 átomos de carbono. T4 puede ser de 1-3 átomos de carbono. T4 puede ser de 1-2 átomos de carbono. T4 puede ser de 2 átomos de carbono. T4 puede ser de 3 átomos de carbono. T4 puede ser de 4 átomos de carbono. J1 puede ser -O-C(=O)-L1. J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , -NHMe, o
Figure imgf000012_0001
J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, -NMe2 , o -NHMe. J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+, -NH2+, -SH, o -NMe2. J2 puede ser
Figure imgf000012_0002
J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, -OH, -NH3+ o -NH2+. J2 puede ser -O-C(=O)-L2. J2 puede ser -O-C(=O)-L2, -COOH, -NH+, o -OH. J2 puede ser -COOH, -NH+ o -OH. J3 puede ser NMe2 , -CH2NHMe o H. J3 puede ser -CH2NHMe. J3 puede ser H. J3 puede ser NMe2. J4 puede ser -O-C(=O)-L3.
L1 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans.
L2 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans.
L3 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans.
T1 puede ser de 0-5 átomos de carbono. T1 puede ser 0-4 átomos de carbono. T1 puede ser de 0-3 átomos de carbono. T1 puede ser de 0-2 átomos de carbono. T1 puede ser de 0-1 átomos de carbono. T1 puede ser de 0 átomos de carbono. T1 puede ser de 1-6 átomos de carbono. T1 puede ser de 1-5 átomos de carbono. T1 puede ser de 1-4 átomos de carbono. T1 puede ser de 1-3 átomos de carbono. T1 puede ser de 1-2 átomos de carbono. T1 puede ser de 2 átomos de carbono. T1 puede ser de 1 átomo de carbono. T1 puede ser de 3 átomos de carbono. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C25, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C22, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C20, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C18, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. L5 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C16, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH.
Alternativamente, Z, Y y T5 pueden estar ausentes y A puede ser un resto de fármaco, con un átomo electronegativo O precedido por un C(=O), que ha perdido un H para unirse covalentemente a L4.
A puede seleccionarse de uno o más de Tacrolimus, Dexametasona, SN-38, Docetaxel, Metotrexato, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Sirolimus, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Prednisona, Prednisolona, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazid, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-Mercaptopurina, 1-Tiroxina, Gliburida, MCC95 0 , Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib y Tofacitinib. Alternativamente, A puede seleccionarse de uno o más de Docetaxel, Metotrexato, SN-38, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazida, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-mercaptopurina, 1-tiroxina, gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib, Tofacitinib, Ciclosporina, Tacrolimus, Everolimus, Sirolimus, Azatioprina, Leflunomida, Micofenolato, Dexametasona, Budesonida, Prednisona, Prednisolona, Metilprednisolona, Hidrocortisona, Cortisona, Fludrocortisona, Betametasona, Triamcinolona, Acetonuro de Triamcinolona, Flunisolida, Beclametasona, Fluticasona, Mometasona, Flumetasona, Isoflupredona, Corticosterona, Acetato de desoxicortona, Enantato de desoxicortona, 11-Desoxicorticosterona, 11-Desoxicortisol y Aldosterona.
Alternativamente, A puede seleccionarse de uno o más de Docetaxel, Metotrexato, SN-38, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazid, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-Mercaptopurina, 1-Tiroxina, Gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib, Tofacitinib, Ciclosporina, Tacrolimus, Everolimus, Sirolimus, Azatioprina, Leflunomida y Micofenolato.
Alternativamente, A puede seleccionarse de uno o más de Docetaxel, Metotrexato, SN-38, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazid, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-Mercaptopurina, 1-Tiroxina, Gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib y Tofacitinib.
Alternativamente, A puede seleccionarse de uno o más de Docetaxel, Metotrexato, SN-38, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazid, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-Mercaptopurina, 1-Tiroxina, Gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib, Tofacitinib, Dexametasona, Budesonida, Prednisona, Prednisolona, Metilprednisolona, Hidrocortisona, Cortisona, Fludrocortisona, Betametasona, Triamcinolona, Acetonuro de triamcinolona, Flunisolida, Beclametasona, Fluticasona, Mometasona, Flumetasona, Isoflupredona, Corticosterona, Acetato de desoxicortona, Enantato de desoxicortona, 11-Desoxicorticosterona, 11-Desoxicortisol y Aldosterona. Alternativamente, A puede seleccionarse de uno o más de Ciclosporina, Tacrolimus, Everolimus, Sirolimus, Azatioprina, Leflunomida, Micofenolato, Dexametasona, Budesonida, Prednisona, Prednisolona, Metilprednisolona, Hidrocortisona, Cortisona, Fludrocortisona, Betametasona, Triamcinolona, Acetonuro de triamcinolona, Flunisolida, Beclametasona, Fluticasona, Mometasona, Flumetasona, Isoflupredona, Corticosterona, Acetato de desoxicortona, Enantato de desoxicortona, 11-Desoxicorticosterona, 11-Desoxicortisol y Aldosterona.
Pueden incorporarse fármacos alternativos basados en los métodos expuestos en la presente.
Yg1, Yg2 o YG3 pueden seleccionarse independientemente entre CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C8 lineal, ramificado o cíclico, puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C8 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O­ alquilo C1-C6, u O-acilo C1-C6 , y donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH. Y puede ser CH2 , O, S, C(=O), PO32', o NR11 en donde R11 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH. Yg1, Yg2 o Yg3 pueden seleccionarse, de modo independiente, de CH2 , O, S, C(=O), PO32' o NH. Yg1, Yg2 o Yg3 pueden seleccionarse, de modo independiente, de CH2 , O, S, C(=O) o NH. Yg1, Yg2 o Yg3 pueden seleccionarse, de modo independiente, de CH2 , C(=O) o PO32-.
M puede ser 0-10 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C pueden tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y donde los átomos de C o N pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6 , O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6. M puede ser 0-8 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C pueden tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z y en donde los átomos de C o N pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I, OH, =O, O-alquilo C1-C6 , O-acilo C1-C6 o S-alquilo C1-C6. M puede ser 0-8 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos C opcionalmente pueden tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde los átomos C o N opcionalmente pueden estar sustituidos con F, Cl, Br, o I. M pueden ser 0-6 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos C opcionalmente tienen uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde los átomos C o N opcionalmente pueden estar sustituidos con F, Cl, Br, o I. M pueden ser 0 a 5 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde dos o más átomos de C pueden tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde los átomos de C o N pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br o I. M puede ser 0-5 átomos seleccionados de C, N, O o S, en donde los átomos de C o N pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br o I.
G1 puede ser H, R13 o R13-C(=O)-, en donde R13 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, puede tener al menos un doble enlace C=C cis o trans. G1 puede ser H, R13 o R13-C(=O)-. G1 puede ser H o R13 G1 puede ser H o R13-C(=O)-. G1 puede ser H. G1 puede ser R13-C(=O)-. G1 puede ser R13. G1 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COo H; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; y -NHMe. R13 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, puede tener al menos un doble enlace C=C cis o trans.
G2 puede ser H o R16-C(=O)-, en donde R16 es una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos un doble enlace C=C cis o trans. G2 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2; y -NHMe.
G3 puede ser H, R19 o R19-C(=O)-, en donde R19 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos un doble enlace C=C cis o trans. G3 puede ser H, R19 o R19-C(=O)-. G3 puede ser H o R19. G3 puede ser H o R19-C(=O)-. G3 puede ser H. G3 puede ser R19 o R19-C(=O)-. G3 puede ser R19. G3 puede ser R19-C(=O)-. R19 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con al menos un doble enlace C=C cis o trans. G3 puede ser un resto ionizable seleccionado de: -COOH; -NH+; -OH; -NH3+; -NH2+; -SH; -NMe2 ; y-NHMe.
R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal y ramificado C1-C8, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C8 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br o I. R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C8, en donde el alquilo C1-C8 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br o I. R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C8, puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. Alternativamente, R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C10, opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br, o I. Alternativamente, R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C10, opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. Alternativamente, R1 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C5, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con un F, Cl, Br, o I. R2 puede ser OH.
X1 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, y opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. X1 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH. X1 puede ser O o S. n1 puede ser 1o 2. n1 puede ser 0.
R3 puede ser H, OH, o un alquilo lineal, ramificado C1-C10, opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R3 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R3 puede ser H u OH.
R4 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R4 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, y opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R4 puede ser H u OH.
n2 puede ser 1 o 2. n2 puede ser 0.
R5 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, y puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R5 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R5 puede ser H u OH.
X2 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, lineal, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH. X2 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. X2 puede ser O o S.
n3 puede ser 1 o 2. n3 puede ser 0.
R6 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R6 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, y opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R6 puede ser H u OH.
R7 puede ser H, OH, o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R7 puede ser H, OH, o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, y puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R7 puede ser H u OH.
n4 puede ser 1 o 2. n4 puede ser 0.
R8 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br o I. R8 puede ser H, OH o un alquilo lineal y ramificado C1-C10, y opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. R8 puede ser H u OH.
X3 puede ser O, S o NR10, en donde R10 puede ser H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, en donde el alquilo C1-C6 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I u OH. X3 puede ser O, S o NR10, en donde R10 es H, un alquilo C1-C6 lineal, ramificado o cíclico, y opcionalmente puede tener uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z. X3 puede ser O o S.
R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C8-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C7-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C6-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. R9 puede ser R20-C(=O)-, en donde R20 puede ser una cadena de carbono lineal o ramificada C5-C29, opcionalmente con uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH. R9 puede ser H, amina primaria C1-C6 , amina secundaria C1-C6 o amina terciaria C1-C6 , alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6 , en donde el O­ alquilo C1-C6 o el O-acilo C1-C6 pueden estar opcionalmente sustituidos con F, Cl, Br, I u OH. R9 puede ser H, amina primaria C1-C6, amina secundaria C1-C6 o amina terciaria C1-C6 , alquilo C1-C10 lineal, ramificado o cíclico, y puede tener opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C cis o trans de geometría E o Z, en donde el alquilo C1-C10 puede estar opcionalmente sustituido con F, Cl, Br, I, OH, O-alquilo C1-C6 u O-acilo C1-C6 , en donde el O-alquilo C1-C6 o el O-acil C1-C6. R9 puede ser H.
El compuesto puede seleccionarse de uno o más de los siguientes, sin embargo, de los siguientes compuestos, solo los dos primeros son compuestos de la presente invención, los otros se proporcionan solo para comparación:
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Alternativamente, el compuesto puede ser
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De acuerdo con otra forma de realización, se proporciona una composición farmacéutica, la composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en la presente y un portador farmacéuticamente aceptable. De acuerdo con otra forma de realización, se proporciona un compuesto descrito en la presente para el tratamiento del cáncer, enfermedad autoinmune o infección.
De acuerdo con otra forma de realización, se proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer, enfermedad autoinmune o infección, que comprende el compuesto descrito en la presente y un portador farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con otra forma de realización, se proporciona un envase comercial que comprende (a) un compuesto descrito en la presente; y (b) instrucciones de uso.
De acuerdo con otra forma de realización, se proporciona un envase comercial que comprende (a) una composición farmacéutica descrita en la presente; y (b) instrucciones de uso.
Alternativamente, el compuesto o composición puede utilizarse para tratar cualquier indicación para la que el fármaco del resto de fármaco A-Z pueda utilizarse para tratar.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra la ultraestructura de las formulaciones de profármacos unidos a lípidos, en las que las imágenes crioTEM mostraron estructuras vesiculares bicapa para las LNP que contenían LD02-DEX y LD03-DEX.
La figura 2 muestra la biodegradabilidad de la LNP LD03-DEX, en donde la escisión progresiva del profármaco LD03-DEX del profármaco ligado a lípidos está mediada por esterasas plasmáticas y aisladas a lo largo de 1 y 4 h y los datos se normalizan con respecto a la cantidad del profármaco respectivo en la mezcla de preincubación, con niveles por debajo de 1 que indican degradación (las barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
La figura 3 muestra la biodegradabilidad de los profármacos LD-DEX, en donde la escisión relativa del profármaco LD01, LD02, LD03 y LD07-DEX del profármaco ligado a lípidos tras 1 h de incubación en plasma o PBS con/sin enzima y los datos se normalizan con respecto a la cantidad del respectivo profármaco en la mezcla de preincubación, con niveles inferiores a 1 que indican degradación (las barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
La figura 4 muestra la biodegradabilidad de profármacos de LD-DEX en LNP, en donde los profármacos LD03, LD13, LD14, LD17, LD21 y LD24 - DEX se formularon en LNP y se incubaron durante 1h en PBS o plasma de ratón y la cantidad de cada profármaco se determinó mediante análisis de UPLC, y en donde los datos se normalizaron con respecto a la cantidad del profármaco respectivo en la mezcla de preincubación, con niveles inferiores a 1 que indican degradación (las barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
La figura 5 muestra la biodegradabilidad de profármacos de LD-DTX en LNP, en donde los profármacos LD10, LD18, LD22 y LD23 - DTX se formularon en (B) PC-Chol, (C) PC-TO o (A) LNP ionizable y se sometieron a 1 h de incubación en plasma de ratón y la cantidad de cada profármaco se determinó mediante análisis UPLC, y los datos se normalizaron con respecto a la cantidad del respectivo profármaco en la mezcla de preincubación (las barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
La figura 6 muestra la biodegradación de LD02 en LNP a lo largo del tiempo, en donde (A) muestra el profármaco LD02 formulado en LNP y luego sometido a incubación en plasma de ratón o esterasa porcina purificada a lo largo del tiempo y la cantidad de profármaco LD02 residual se analizó por UPLC a los tiempos 0, 2, 4 y 24 h; y en (B) se muestra un cromatograma UPLC de LD02 sin incubación con plasma o esterasa, LD02 incubada con esterasa durante 24 h, o LD02 incubada con plasma de ratón durante 24 h (Las flechas indican LD02 intacta o dexametasona (DEX)).
La figura 7 muestra la biodegradación de LD03 en LNP a lo largo del tiempo, en donde (A) muestra el profármaco LD03 formulado en LNP y luego sometido a incubación en plasma de ratón o esterasa porcina purificada a lo largo del tiempo y la cantidad de profármaco LD03 residual se analizó por UPLC a los tiempos 0, 2, 4 y 24 h; y en (B) se muestra un cromatograma UPLC de LD03 sin incubación con plasma o esterasa, LD03 incubada con esterasa durante 24 h, o LD03 incubada con plasma de ratón durante 24 h (las flechas indican LD02 intacta o dexametasona (DEX)).
La figura 8 muestra la biodegradación de LD18 en LNP a lo largo del tiempo, en donde (A) muestra el profármaco LD18 formulado en LNP y luego sometido a incubación en plasma de ratón o esterasa porcina purificada a lo largo del tiempo y la cantidad de profármaco LD18 residual se analizó por UPLC a los tiempos 0, 2, 4 y 24 h; y en (B) se muestra un cromatograma UPLC de LD18 sin incubación con plasma o esterasa, LD18 incubado con esterasa durante 24 h, o LD18 incubado con plasma de ratón durante 24 h (las flechas indican LD18 intacto o docetaxel (DTX)).
La figura 9 muestra la biodegradación de LD22 en LNP a lo largo del tiempo, en donde (A) se muestra el profármaco LD22 formulado en LNP y luego sometido a incubación en plasma de ratón o esterasa porcina purificada a lo largo del tiempo. La cantidad de profármaco LD22 residual se analizó por UPLC a los tiempos 0, 2, 4 y 24 h; y en (B) se muestra un cromatograma UPLC de LD22 sin incubación con plasma o esterasa, LD22 incubado con esterasa durante 24 h, o LD22 incubado con plasma de ratón durante 24 h (las flechas indican LD22 intacto o docetaxel (DTX)).
La figura 10 muestra que la disociación del profármaco LD-DEX de la LNP se correlaciona con la hidrofobicidad prevista LD02 y LD03 - los profármacos DEX se formularon en (A) PC-Chol LNP o (B) LNP ionizable, y luego se sometieron a incubación en plasma humano durante 24 h, y la LNP se aisló mediante cromatografía en columna antes de determinar la cantidad residual de cada profármaco en los tiempos 0, 3, 5 y 24 h mediante análisis UPLC - LD02 se disocia de la LNP a un ritmo más lento que el de LD03.
La figura 11 muestra que la disociación del profármaco LD-DTX de la LNP se correlaciona con la hidrofobicidad prevista LD18 y LD22 - los profármacos DTX se formularon en (A) PC-Chol LNP o (B) LNP ionizable, y después se sometieron a incubación en plasma humano durante 24 h, y la LNP se aisló mediante cromatografía en columna antes de determinar la cantidad residual de cada profármaco a los tiempos 0, 3, 5 y 24 h mediante análisis UPLC - LD18 se disocia de la LNP más rápidamente que LD22. La figura 12 muestra que los profármacos LD-DEX suprimen los efectos inmunoestimulantes de LNP-CpG en ratones, cuando se formuló LD01, LD02, LD03 o LD07 en LNP que contenían oligonucleótidos CpG inmunoestimulantes, se inyectó a los ratones con PBS o LNP-CpG con o sin profármacos LD-DEX a 10 mg/kg de CpG, se recogió sangre 2 h después de la inyección y se midieron los niveles de TNFα y KC/GRO; los datos se normalizaron con respecto a los niveles de citoquinas de los ratones tratados con LNP-CpG de control sin LD-DEX y los niveles inferiores a 1 indican supresión inmunitaria (las barras de error representan la desviación estándar derivada de al menos 3 animales).
La figura 13 muestra que los profármacos LD-DEX suprimen los efectos inmunoestimulantes de LNP-CpG en ratones, en donde LD03, LD13, LD14, LD17, lD21 o LD24 se formularon en LNP que contenían oligonucleótidos de ADN CpG inmunoestimulantes, se inyectó a los ratones con PBS o LNP-CpG con o sin profármacos LD-DEX a 10 mg/kg de CpG y se recogió sangre 2 h después de la inyección antes de medir los niveles de TNFα, IL6 e IL10; los datos se normalizaron con respecto a los niveles de citoquinas de los ratones tratados con LNP-CpG de control sin LD-DEX y los niveles inferiores a 1 indican supresión inmunitaria (las barras de error representan la desviación estándar derivada de al menos 3 animales). La figura 14 muestra que la LD03 suprime los efectos inmunoestimuladores del LNP-ARNm en ratones, en donde la formulación con o sin LD03 se inyectó en ratones a 3 mg/kg de ARNm, se recogió sangre 2 h después de la inyección y se determinaron los niveles de diversas citoquinas, en donde los datos se normalizaron con respecto a los niveles de citoquinas de ratones tratados con ARNm-LNP de control sin LD03 y los niveles inferiores a 1 indican supresión inmunitaria (las barras de error representan la desviación estándar derivada de al menos 3 animales).
La figura 15 muestra que LD03 suprime los efectos inmunoestimuladores de la LNP-ADNp en ratones, en donde se administró LNP-ADN plasmídico (LNP-ADNp) con o sin LD03 por vía intravenosa en ratones a 1 mg/kg de ADNp, se recogió sangre a las 2 h después de la inyección y se midieron los niveles de diversas citoquinas, los datos se normalizaron con respecto a los niveles de citoquinas de los ratones tratados con LNP-ADNp de control sin LD03 y los niveles inferiores a 1 indican supresión inmunitaria (las barras de error representan la desviación estándar derivada de al menos 4 animales).
La figura 16 muestra que los profármacos LD-DEX suprimen las respuestas inmunoestimuladoras en células Raw264.7 tratadas con lipopolisacárido (LPS), en donde las células se incubaron en medio que contenía 2 ng/mL de LPS y formulación de LNP que no contenía profármaco (control), LD03, LD07, LD13, LD14, LD17, LD21 y LD24 durante 4 h. A continuación, se cosecharon las células para aislar el ARN y se determinaron los niveles de IL1p mediante qRT-PCR, y los datos se normalizaron con respecto a las células tratadas con LNP de control sin profármaco (las barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
La figura 17 muestra que los profármacos LD-DTX inhiben el crecimiento de células de cáncer de ovario, en comparación con LD10, LD1 8 , LD22 o LD23, que se formuló en (D) PC-Chol, (C) PC-TO, (B) LNP ionizable o (A) profármaco libre de lípido, luego las células Ovcar3 se incubaron con PBS, docetaxel libre, libre LD-DTX profármacos, o LNP con o sin LD-DTX profármacos en 0 a 15 μM de docetaxel y la viabilidad celular se determinó después de 48 h y se informó como valor relativo normalizado a la viabilidad de las células tratadas con PBS (barras de error representan la desviación estándar de al menos tres experimentos).
Descripción detallada
Los expertos en la técnica apreciarán que el punto de unión covalente del resto a los compuestos como se describe en la presente, puede, por ejemplo y sin limitación, escindirse en condiciones específicas. Las condiciones especificadas pueden incluir, por ejemplo, y sin limitación, medios enzimáticos o no enzimáticos in vivo. La escisión del resto puede ocurrir, por ejemplo, y sin limitación, espontáneamente, o puede ser catalizada, inducida por otro agente, o un cambio en un parámetro físico o ambiental, por ejemplo, una enzima, luz, ácido, temperatura o pH. El resto puede ser, por ejemplo, y sin limitación, un grupo protector que actúa para enmascarar un grupo funcional, un grupo que actúa como sustrato para uno o más mecanismos de transporte activo o pasivo, o un grupo que actúa para impartir o mejorar una propiedad del compuesto, por ejemplo, solubilidad, biodisponibilidad o localización. En algunas formas de realización, los compuestos de la tabla 1 (excepto LD07-DEX) y los compuestos descritos en las reivindicaciones se divulgan para su uso en el tratamiento sistémico o el tratamiento localizado de al menos una indicación para la que el profármaco se considera adecuado. En algunas formas de realización, los compuestos de la tabla 1 (excepto LD07-DEX) y los compuestos descritos en las reivindicaciones pueden utilizarse en la preparación de un medicamento o una composición para el tratamiento sistémico o el tratamiento localizado de una indicación descrita en la presente.
Tabla 1: Compuestos de ejemplo
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Los fármacos contemplados en la presente pueden describirse con la estructura general A-Z que se muestra a continuación, en donde Z puede representar un OH, o un NH, o un NH2, o un grupo COOH unido al marco molecular principal del fármaco representado por A. El fármaco también puede incorporar múltiples grupos Z, que pueden ser, independientemente, un OH, o un NH, o un NH2, o un COOH, como se ha indicado con anterioridad. Los profármacos unidos a lípidos preparados como se describe en la presente pueden administrarse a pacientes humanos con el fin de tratar una enfermedad, dolencia u otra condición fisiológica indeseable, que sea tratable o curable con el fármaco. Sin embargo, la presente invención se limita a compuestos como los definidos en las reivindicaciones, en donde la parte de fármaco de la estructura se limita a dexametasona.
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Algunos ejemplos de fármacos incluyen, pero sin limitación a, Docetaxel, Metotrexato, SN-38, NPC1I, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazida, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-mercaptopurina, 1-tiroxina, gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido Tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib, Tofacitinib, Ciclosporina, Tacrolimus, Everolimus, Sirolimus, Azatioprina, Leflunomida, Micofenolato, Dexametasona, Budesonida, Prednisona, Prednisolona, Metilprednisolona, Hidrocortisona, Cortisona, Fludrocortisona, Betametasona, Triamcinolona, Acetonuro de triamcinolona, Flunisolida, Beclametasona, Fluticasona, Mometasona, Flumetasona, Isoflupredona, Corticosterona, Acetato de desoxicortona, Enantato de desoxicortona, 11-Desoxicorticosterona, 11-Desoxicortisol y Aldosterona.
Alternativamente, ejemplos de fármacos incluyen, pero sin limitación a, Tacrolimus, SN-38, Metotrexato, Docetaxel, NPC1l, Amprenavir, Anfotericina B, Bexaroteno, Calcitrol, Ciclosporina A, Digoxina, Doxercalciferol, Dronabinol, Etopósido, Fulvestrant, Paricalcitol, Tenipósido, Isotretinoína, Sirolimus, Tretinoína, Ácido valproico, Paclitaxel, Valrubicina, Propofol, Ácido micofenólico, Lovastatina, Lamivudina, Zidovudina, Abacavir, Emitricitabina, Atazanavir, Cobicistat, Elvitegravir, Isonazid, Albendazol, Lisinapril, Amlodipino, Isotretinoína, Baclofeno, Benznidazol, Nifurtimox, Mefloquina, Sulfadoxina, Pirimetamina, Clorproguanil, 6-Mercaptopurina, 1-Tiroxina, Gliburida, MCCg50, Partenolida, Ácido tauroursodesoxicólico, Ruxolitinib y Tofacitinib.
Las formulaciones de profármacos unidos a lípidos descritas en la presente se basan en sustancias que se obtienen aprovechando el grupo o grupos Z para unir covalentemente el fármaco a un lípido apropiado. Generalmente, un conjugado lípido-fármaco apropiado como el descrito en la presente tiene un logP igual o superior a 5 (Viswanadhan, V. N.; Ghose, A. K.; Revankar, G. R.; Robins, R. K., J. Chem. Inf. Comput. Sci., 1989, 29, 163-172, o utilizando un programa como Marvin (ChemAxon)); y es, por lo tanto, poco soluble o insoluble en agua, pero soluble en solventes orgánicos comunes como etanol, cloroformo, acetato de etilo, diclorometano, isopropanol, etc.
La estructura molecular de dicho lípido puede incorporar grupos funcionales que permitan la unión covalente del fármaco al lípido. Ejemplos de tales grupos funcionales pueden ser OH, SH, NH, NH2, COOH.
En algunas formas de realización, el profármaco sería al menos débilmente hidrófobo. Además, en algunas formas de realización, el fármaco estaría unido a la fracción lipídica a través de un ligador biodegradable, como un enlace éster. Sin embargo, se contemplan otros ligadores biodegradables (por ejemplo, fosfato).
Un “resto de fármaco”, como se utiliza en la presente, es cualquier agente farmacéutico capaz de unirse covalentemente al lípido, tal como se describe en la presente. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir los esteroides, los compuestos que contienen quinoleína o los restos de unión a Na+/K+ ATPasa. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir los esteroides. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir los compuestos que contienen quinoleína. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir las moléculas de unión a Na+/K+ ATPasa. En algunas formas de realización, las moléculas de unión a Na+/K+ ATPasa pueden ser glucósidos cardíacos. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir los glucósidos cardíacos. En algunas formas de realización, un resto de fármaco puede excluir los glucósidos cardíacos y los compuestos que contienen quinolona. El compuesto que contiene quinolona puede ser 4-aminoquinolina, 8-aminoquinolina o 4-metanolquinolina. Los glucósidos cardíacos pueden seleccionarse de uno o más de los siguientes: acetildigitoxinas; acetildigoxinas; cimarina; digitoxina; digitoxigenina; digoxigenina; digoxina; medigoxina; neoconvallósido; ouabaína; dihidroouabaína; estrofantinas; estrofantidina; bufenólidos; bufanólido; daigremontianina; cardenólido; helveticósido; k-estofantidina; latanósido C; procillardina A; arenobufagina; bufotalina; cinobufagina; marinobufagina; escillirósido; acetildigitoxina; acetildigoxina; deslanósido; medigoxina; gitoformato; digremontianina; peruvósido. En algunas formas de realización, si el resto de fármaco es un esteroide, el resto de fármaco esteroide (A-Z) puede unirse -Y-M-C(=O)- o -Y-M- a través del anillo de 5 miembros del esteroide.
Como se utiliza en la presente, un grupo acilo graso [R'-C(=O)], puede ser un R' con una cadena de carbono lineal o ramificada Cg-C29, que incorpore facultativamente enlaces dobles C=C de geometría E o Z y/o sustituyentes tales como grupos OH. Ejemplos de tales grupos acilo grasos (ácido parental) son - pero no se limitan a: Caprilo (ácido cáprico), Lauroilo (ácido láurico), Miristilo (ácido mirístico), Miristoleilo (ácido miristoleico), Palmitoilo (ácido palmítico), Isopalmitoilo (ácido isopalmítico), Palmitoleilo (ácido palmitoleico), Sapienoilo (ácido sapiénico), Estearoilo (ácido esteárico), Isoestearoilo (ácido isosteárico), Oleilo (ácido oleico), Elaidoilo (ácido elaídico), Vaccenoilo (ácido vaccénico), Linoleilo (ácido linoleico), Linoelaidoilo (ácido linoelaídico), Linolenilo (ácido linolénico), Ricinoleilo (ácido ricinoleico), Pristroilo (ácido pristánico), Araquidoilo (ácido araquídico), Araquidonoilo (ácido araquidónico), Eicosapentaenoilo (ácido eicosapentaenoico), Fitanoilo (ácido fitánico), Behenoilo (ácido behénico), Erucoilo (ácido erúcico), Docosahexaenoilo (ácido docosahexaenoico), Lignocerilo (ácido lignocérico), Cerotoilo (ácido ceroico), Montanoilo (ácido montanico), Melissoilo (ácido melísico). Alternativamente, un grupo acilo graso, según se describe en la presente, puede tener originalmente un grupo OH (por ejemplo: ricinoleilo), en donde el grupo OH se ha modificado covalentemente mediante la unión a un ligador o a un profármaco y ligador como se describe en la presente.
La hidrofobicidad relativa del fármaco y de las moléculas lipídicas, la presencia de grupos cargados/ionizables, el tipo de ligador biodegradable, etc., pueden adaptarse al profármaco concreto y/o a la diana concreta de los profármacos (o nanopartículas lipídicas (LNP)) unidos a lípidos descritos en la presente. Las propiedades hidrófobas del profármaco (compuesto por el fármaco y las partes lipídicas) deberían permitir que estos profármacos se incorporen fácilmente mediante la simple adición del fármaco a la mezcla de formulación lipídica sin necesidad de modificar el proceso de formulación. Además, la hidrofobicidad también puede permitir la retención estable en formulaciones de profármacos unidos a lípidos, dotando al profármaco de un perfil de toxicidad mejorado en comparación. Algunas formulaciones de LNP presentan ocasionalmente liberación de fármaco tras la administración sistémica, lo que da lugar a propiedades farmacocinéticas indeseables [Charrois y Allen (2004); Cui et al. (2007); y Johnston et al. (2006)]. Por el contrario, la mayoría de los profármacos unidos a lípidos descritos en la presente deberían presentar una fuga mínima tras la administración sistémica hasta que sean absorbidos por las células diana. Por último, aunque la hidrofobicidad del profármaco debe ser suficiente para lograr una encapsulación/retención eficaz, es preferible que no dé lugar a que el profármaco quede blindado en el resto lipídico y, por lo tanto, no se libere cuando se encuentre en el entorno adecuado. En los casos en que el profármaco unido a lípidos tenga características hidrófobas, la distribución del profármaco en el lípido permite el acceso al ligador biodegradable. La liberación del fármaco activo puede producirse tras la absorción a través de la actividad de las enzimas intracelulares apropiadas para escindir el ligador biodegradable.
Estos profármacos unidos a lípidos no requieren carga activa (es decir, gradiente de pH) [Nichols y Deamer (1976); y Mayer et al. (1986)] para lograr una incorporación eficaz en el lípido. Dado que los profármacos no necesitan ser bases débiles, este enfoque permite la incorporación de fármacos en nanopartículas lipídicas (LNP), donde el fármaco no se encapsularía utilizando enfoques convencionales. Las ventajas de la administración de fármacos mediada por LNP se han descrito con detalle, como la mejora de la administración en los focos de la enfermedad y la facilitación de la absorción en las células diana, lo que se traduce en un aumento de la potencia y una reducción de la toxicidad (frente al fármaco libre) debido a los menores niveles de fármaco en los tejidos no diana [Allen y Cullis (2013)].
Como se usa en la presente, un resto ionizable puede ser cualquier átomo o molécula que adquiere una carga negativa o positiva al perder o ganar protones para formar iones. Ejemplos de restos ionizables son -NH, -NHMe, -NMe2 , -COOH, -OH, -NH+, -NH3+, -NH2+, -SH, etc. La presencia de un resto ionizable en un profármaco lipídico puede influir en el índice de hidrofobicidad del profármaco (por ejemplo, véase la tabla 2).
Los compuestos descritos en la presente pueden estar en forma libre o en forma de una sal de estos. En algunas formas de realización, los compuestos descritos en la presente pueden estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, que es conocida en la técnica (Berge S. M. et al., J. Pharm. Sci. (1977) 66(1):1 -19). La sal farmacéuticamente aceptable, como se utiliza en la presente, incluye, por ejemplo, sales que tienen la actividad farmacológica deseada del compuesto original (sales que conservan la eficacia biológica y/o las propiedades del compuesto original y que no son indeseables desde el punto de vista biológico y/o de otro tipo). Los compuestos como se describen en la presente que tienen uno o más grupos funcionales capaces de formar una sal pueden, por ejemplo, formarse como una sal farmacéuticamente aceptable. Los compuestos que contienen uno o más grupos funcionales básicos pueden ser capaces de formar una sal farmacéuticamente aceptable con, por ejemplo, un ácido orgánico o inorgánico farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden derivarse de, por ejemplo, y sin limitación, ácido acético, ácido adípico, ácido algínico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido bencenosulfónico, ácido butírico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido canforico, ácido canforosulfónico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido dietilacético, ácido diglucónico, ácido dodecilsulfónico, ácido etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido glucoheptanoico, ácido glucónico, ácido glicerofosfórico, ácido glicólico, ácido hemisulfónico, ácido heptanoico, ácido hexanoico, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido isonicotínico, ácido láctico, ácido málico, ácido maleico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido naftalendisulfónico, ácido ptoluenosulfónico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oxálico, ácido pamóico, ácido pectínico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido fosfórico, ácido pícrico, ácido pimélico, ácido piválico, ácido propiónico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido tartárico, ácido tiociánico o ácido undecanoico. Los compuestos que contienen uno o más grupos funcionales ácidos pueden ser capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con una base farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, y sin limitación, bases inorgánicas basadas en metales alcalinos o metales alcalinotérreos o bases orgánicas tales como compuestos de amina primaria, compuestos de amina secundaria, compuestos de amina terciaria, compuestos de amina cuaternaria, aminas sustituidas, aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas o resinas básicas de intercambio iónico. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden derivarse de, por ejemplo, y sin limitación, un hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable como amonio, sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso o aluminio, amoníaco, benzatina, meglumina, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, isopropilamina, tripropilamina, tributilamina, etanolamina, dietanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, glucamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, procaína, N-etilpiperidina, teobromina, compuestos de tetrametilamonio, compuestos de tetraetilamonio, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, morfolina, N-metilmorfolina, N-etilmorfolina, diciclohexilamina, dibencilamina, N,N-dibencilfenetilamina, 1-fenamina, N,N'-dibenciltilendiamina o resinas de poliamina. En algunas formas de realización, los compuestos descritos en la presente pueden contener tanto grupos ácidos como básicos y pueden estar en forma de sales internas o zwitteriones, por ejemplo, y sin limitación, betaínas. Las sales descritas en la presente pueden prepararse mediante procesos convencionales conocidos por un experto en la técnica, por ejemplo, y sin limitación, haciendo reaccionar la forma libre con un ácido orgánico o un ácido o base inorgánicos, o mediante intercambio aniónico o catiónico a partir de otras sales. Los expertos en la técnica apreciarán que la preparación de sales puede tener lugar in situ durante el aislamiento y purificación de los compuestos o la preparación de sales puede tener lugar haciendo reaccionar por separado un compuesto aislado y purificado.
En algunas formas de realización, los compuestos y todas las diferentes formas de estos (por ejemplo, formas libres, sales, polimorfos, formas isoméricas) tal como se describen en la presente pueden estar en forma de adición de solvente, por ejemplo, solvatos. Los solvatos contienen cantidades estequiométricas o no estequiométricas de un solvente en asociación física con el compuesto o su sal. El solvente puede ser, por ejemplo, y sin limitación, un solvente farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, se forman hidratos cuando el solvente es agua o alcoholatos cuando el solvente es un alcohol.
En algunas formas de realización, los compuestos y todas sus diferentes formas (por ejemplo, formas libres, sales, solvatos, formas isoméricas) tal como se describen en la presente pueden incluir formas cristalinas y amorfas, por ejemplo, polimorfos, pseudopolimorfos, polimorfos conformacionales, formas amorfas, o una combinación de estos. Los polimorfos incluyen diferentes disposiciones de empaquetamiento cristalino de la misma composición elemental de un compuesto. Los polimorfos suelen tener diferentes patrones de difracción de rayos X, espectros infrarrojos, puntos de fusión, densidad, dureza, forma cristalina, propiedades ópticas y eléctricas, estabilidad y/o solubilidad. Los expertos en la técnica apreciarán que diversos factores, como el solvente de recristalización, la velocidad de cristalización y la temperatura de almacenamiento, pueden hacer que predomine una única forma cristalina.
En algunas formas de realización, los compuestos y todas sus diferentes formas (por ejemplo, formas libres, sales, solvatos, polimorfos) descritos en la presente incluyen isómeros tales como isómeros geométricos, isómeros ópticos basados en carbono asimétrico, estereoisómeros, tautómeros, enantiómeros individuales, diastereómeros individuales, racematos, mezclas diastereoméricas y combinaciones de estos, y no están limitados por la descripción de la Fórmula ilustrada por conveniencia.
En otras formas de realización, los compuestos pueden incluir compuestos dentro de una estructura genérica o Markush, según se determine a partir de las relaciones estructura-actividad identificadas a partir de los datos presentados en la tabla 2 y en los ejemplos siguientes.
En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden comprender una sal de dicho compuesto, preferentemente una sal farmacéutica o fisiológicamente aceptable. Las preparaciones farmacéuticas comprenderán típicamente uno o más portadores, excipientes o diluyentes aceptables para el modo de administración de la preparación, ya sea por inyección, inhalación, administración tópica, lavado u otros modos adecuados para el tratamiento seleccionado. Los portadores, excipientes o diluyentes adecuados (utilizados indistintamente en la presente) son los conocidos en la técnica para su uso en dichos modos de administración. Las composiciones farmacéuticas adecuadas pueden formularse por medios conocidos en la técnica y su modo de administración y dosis pueden ser determinados por el experto en la técnica. Para la administración parenteral, un compuesto puede disolverse en agua estéril o solución salina o en un vehículo farmacéuticamente aceptable utilizado para la administración de compuestos no solubles en agua, como los utilizados para la vitamina K. Para la administración enteral, el compuesto puede administrarse en un comprimido, cápsula o disuelto en forma líquida. El comprimido o la cápsula pueden tener un recubrimiento entérico o una formulación de liberación sostenida. Se conocen muchas formulaciones adecuadas, como micropartículas poliméricas o proteicas que encapsulan un compuesto que se va a liberar, pomadas, pastas, geles, hidrogeles o soluciones que se pueden utilizar tópica o localmente para administrar un compuesto. Se puede emplear un parche o implante de liberación sostenida para proporcionar liberación durante un período de tiempo prolongado. En Remington: the Science & Practice of Pharmacy de Alfonso Gennaro, 20a ed., Lippencott Williams & Wilkins, (2000) se describen muchas técnicas conocidas por los expertos en la técnica. Las formulaciones para administración parenteral pueden contener, por ejemplo, excipientes, polialquilenglicoles como el polietilenglicol, aceites de origen vegetal o naftalenos hidrogenados. Para controlar la liberación de los compuestos pueden utilizarse polímeros de láctido biocompatibles y biodegradables, copolímeros de láctido/glicólido o copolímeros de polioxietileno polioxipropileno. Otros sistemas de administración parenteral potencialmente útiles para los compuestos moduladores son las partículas de copolímero de etilvinilacetato, las bombas osmóticas, los sistemas de infusión implantables y los liposomas. Las formulaciones para inhalación pueden contener excipientes, por ejemplo, lactosa, o pueden ser soluciones acuosas que contengan, por ejemplo, polioxietilen 9 lauril éter, glucocolato y desoxicolato, o pueden ser soluciones oleosas para administración en forma de gotas nasales, o como un gel.
Los compuestos o composiciones farmacéuticas descritos en la presente o para su uso descrito en la presente pueden administrarse mediante un dispositivo o aparato médico como un implante, injerto, prótesis, stent, etc. Asimismo, pueden idearse implantes destinados a contener y liberar dichos compuestos o composiciones. Un ejemplo sería un implante hecho de un material polimérico adaptado para liberar el compuesto durante un período de tiempo.
Una “cantidad eficaz” de una composición farmacéutica descrita en la presente incluye una cantidad terapéuticamente eficaz o una cantidad profilácticamente eficaz. Una “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad eficaz, a las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado, por ejemplo, la reducción del tamaño del tumor, el aumento de la duración de la vida o el aumento de la esperanza de vida. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto puede variar en función de factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del sujeto, y la capacidad del compuesto para provocar una respuesta deseada en el sujeto. Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Una cantidad terapéuticamente eficaz es también aquella en donde cualquier efecto tóxico o perjudicial del compuesto se ve compensado por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Una “cantidad profilácticamente eficaz” se refiere a una cantidad eficaz, a las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado, por ejemplo, tumores más pequeños, mayor duración de la vida, mayor esperanza de vida. Típicamente, una dosis profiláctica se utiliza en sujetos antes o en una fase más temprana de la enfermedad, de modo que una cantidad profilácticamente eficaz puede ser menor que una cantidad terapéuticamente eficaz.
Cabe señalar que los valores de dosificación pueden variar con la gravedad de la afección que se desea aliviar. Para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos pueden ajustarse con el tiempo según la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones. Los intervalos de dosificación establecidos en la presente son solo ejemplares y no limitan los intervalos de dosificación que pueden seleccionar los médicos. La cantidad de compuesto(s) activo(s) en la composición puede variar en función de factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del sujeto. Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar una respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, puede administrarse un único bolo, pueden administrarse varias dosis divididas a lo largo del tiempo o la dosis puede reducirse o aumentarse proporcionalmente según indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Puede ser ventajoso formular las composiciones parenterales en forma de unidades de dosificación para facilitar la administración y uniformizar la dosificación.
En general, los compuestos descritos en la presente deben utilizarse sin causar toxicidad sustancial. La toxicidad de los compuestos descritos en la presente puede determinarse mediante técnicas estándar, por ejemplo, realizando pruebas en cultivos celulares o animales de experimentación y determinando el índice terapéutico, es decir, la relación entre la LD50 (la dosis letal para el 50 % de la población) y la LD100 (la dosis letal para el 100 % de la población). Sin embargo, en algunas circunstancias, como en el caso de enfermedades graves, puede ser apropiado administrar excesos sustanciales de las composiciones. Algunos compuestos descritos en la presente pueden ser tóxicos a determinadas concentraciones. Pueden utilizarse estudios de titulación para determinar las concentraciones tóxicas y no tóxicas.
Los compuestos descritos en la presente pueden administrarse a un sujeto. Tal como se utiliza en la presente, un “sujeto” puede ser un ser humano, un primate no humano, una rata, un ratón, una vaca, un caballo, un cerdo, una oveja, una cabra, un perro, un gato, etc. El sujeto puede ser sospechoso de tener o estar en riesgo de tener una indicación para la que un resto terapéutico puede proporcionar un beneficio.
Materiales y métodos
En los siguientes ejemplos, los compuestos LO01-DEX, LD03-DEX, LD13-DEX y LD14-DEX son compuestos de la presente invención, mientras que otros compuestos se proporcionan únicamente a efectos de comparación.
Química
Todos los reactivos y solventes se adquirieron a proveedores comerciales y se utilizaron sin más purificación, a menos que se indique lo contrario, excepto el THF (recién destilado de Na/benzofenona bajo Ar), y Et3N y CH2Cl2 (recién destilados de CaH2 bajo Ar). RMN Los desplazamientos químicos se indican en partes por millón (ppm) en la escala 8 y las constantes de acoplamiento, J, en hercios (Hz). Las multiplicidades se expresan como “s” (singlete), “d” (doblete), “dd” (doblete de dobletes), “dt” (doblete de tripletes), “ddd” (doblete de dobletes de dobletes), “t” (triplete), “td” (triplete de dobletes), “q” (cuartete), “quin” (quintete), “sex” (sextete), “m” (multiplete), y calificados además como “app” (aparente) y “br” (amplio).
Procedimientos de síntesis de lípidos
ESQUEMA 1: Esquema para la síntesis del lípido 3, 2-linoleoil-3-dimetilamino-1,2-propanodiol.
Figure imgf000030_0001
Se añadió TBSCI sólido (1,36 g, 9,00 mmol, 1,00 equiv.) a una solución de 3-dimetilaminopropano-1,2-diol (1,07 g, 9,00 mmol) e imidazol (613 mg, 9,00 mmol, 1,00 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch y se lavó con agua destilada (1*25 mL). La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (1*15 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1*15 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para obtener un aceite claro e incoloro como éter silílico 1 (1,83 g, 87 % de rendimiento), que se utilizó sin purificación adicional.
Rf = 0,09 (SiO2, 50:50 EtOAc/hexanos);
1H RMN (300 MHz, CDCls): 83,80-3,68 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 2,39 (dd, J = 12,3, 9,0 Hz, 1H), 2,34-2,24 (m, 1H), 2,29 (s, 6H), 0,90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).
COMPUESTO 2: 1-(íer-butildimetilsilil)-2-linoleoil-3-dimetilaminopropano-1,2-diol:
El cloruro de linoleílo se preparó añadiendo cloruro de oxalilo (0,30 mL, 3,60 mmol, 1,80 equiv.) a una solución de benceno (5 mL) de ácido linoleico (673 mg, 2,40 mmol, 1,20 equiv. respecto al alcohol) y DMF (18 μL, 0,24 mmol, 0,12 equiv.) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 3 h, los volátiles se eliminaron en un evaporador rotativo y el residuo se azeotrópico con benceno (2*5 mL), después se secó a alto vacío durante 3 h y se utilizó inmediatamente sin purificación adicional.
Se añadió una solución de CH2Cl2 (4 mL) de alcohol 1 (467 mg, 2,00 mmol, 1,00 equiv.) y Et3N (0,69 mL, 5,00 mmol, 2,50 equiv.) a una solución de CH2Cl2 (4 mL) helada y en agitación del cloruro de linoleoilo preparado con anterioridad en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de DMAP sólido (293 mg, 2,40 mmol, 1,20 equiv.). La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h, después se diluyó con CH2Cl2 , se lavó con NaHCO3 al 5 % acuoso (2*10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un semisólido marrón. El crudo se purificó por cromatografía en columna flash (130 mL SiO2, 79:20:1^-69:30:1 hexanos/EtOAc/Et3N) para obtener un aceite amarillo claro como el éster deseado 2 (828 mg, 84 % de rendimiento).
Rf = 0,39 (SO2, 50:50 EtOAc/hexanos);
1H RMN (300 MHz, CDCla): 85,37-5,25 (m, 4H), 5,09-4,95 (m, 1H), 3,76-3,63 (m, 2H), 2,77 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,56-2,44 (m, 2H), 2,40-20 (m, 2H), 2,27 (s, 6H), 2,04 (q, J = 6,4 Hz, 4H), 1,62 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,45­ 1,20 (m, 16H), 0,88 (app s, 12H), 0,04 (s, 6H).
COMPUESTO 3: 2-linoleoil-3-dimetilaminopropano-1,2-diol:
Se añadió una solución pura de HF-piridina (68 μL de HF al 70 % en piridina, 0,54 mmol, 3,00 equiv.) a una solución de piridina (44 μL, 0,54 mmol, 3,00 equiv.) y éter silílico 2 (90 mg, 0,18 mmol) en THF helado (1,2 mL) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se apagó con NaHCO3 al 5 % ac. La mezcla se extrajo con EtOAc (3*5 mL), después los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el alcohol primario 3 (68 mg, rendimiento teórico de 69 mg) como un aceite claro e incoloro que se usó inmediatamente y sin purificación adicional. Cabe señalar que la transesterificación completa al alcohol primario se observó (TLC, 1H RMN) en ≤24 h cuando se almacenó puro a -20 °C.
ESQUEMA 2: Esquema para la síntesis del lipido 4, hemisuccinato de 2,3-dilinoleoil glicerol.
Figure imgf000030_0002
COMPUESTO 4: hemisuccinato de 2,3-dilinoleoil glicerol:
Se añadieron anhídrido succínico sólido (67 mg, 0,66 mmol, 2,0 equiv.) y DMAP (102 mg, 0,83 mmol, 2,5 equiv.) a una solución agitada de CH2Cl2 (3,5 mL) a temperatura ambiente de 1,2-dilinoleoil glicerol [Abe et al. (2011)] (205 mg, 0,33 mmol, 1,0 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 12 horas, la reacción se apagó con HCl 1 M acuoso, se extrajo con CH2Cl2 (2*15 mL), los extractos orgánicos combinados se lavaron con HCl 1 M acuoso (1*15 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el hemisuccinato 4 (rendimiento cuantitativo) como un aceite amarillo pálido que se utilizó sin purificación adicional. ESQUEMA 3: Esquema para la síntesis del lípido 5, hemisuccinato de alcohol linoleílico.
Figure imgf000031_0001
Se añadieron anhídrido succínico sólido (500 mg, 5,00 mmol, 2,00 equiv.) y DMAP (764 mg, 6,25 mmol, 2,50 equiv.) a una solución de alcohol linoleílico (666 mg, 2,50 mmol) agitada en C ^C h (10 mL) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch, se lavó con HCl 1 M acuoso (2*10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el hemisuccinato 5 (915 mg, rendimiento cuantitativo) como un semisólido blanco que se utilizó sin purificación adicional.
ESQUEMA 4: Esquema para la síntesis del lípido 10, 2,3-dilinoleoil-4-dimetilamino-1,2,3-propanotriol.
Figure imgf000031_0002
Se añadió una solución de Me2NH/THF (22,5 mL de 2,0 M en THF, 45,0 mmol, 3,00 equiv.) durante 5 min a una solución de (3R,4R)-bis(benzoiloxi)anhídrido succínico [Ohwada et al. (1990)] (4,68 g, 15,0 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 16 h, la mezcla de reacción se diluyó con Et2O y se apagó con NH4Cl acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con Et2O (1*25 mL), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el amidoácido intermedio como un aceite viscoso de color amarillo (5,36 g de rendimiento teórico).
Se añadió cloruro de tionilo (1,14 mL, 15,7 mmol, 1,05 equiv.) a una solución de MeOH (25 mL) helada y en agitación del amidoácido en un matraz de base redonda bajo argón y se dejó calentar la mezcla. Después de 14 h, se eliminaron los volátiles en un evaporador rotativo y se añadió NaHCO3 acuoso saturado. La mezcla se extrajo con Et2O (2*75 mL), los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (1*100 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite amarillo. El crudo se purificó mediante cromatografía flash en columna (220 mL SiO2, 60:40 EtOAc/hexanos) para obtener un aceite amarillo pálido como amidoéster 6 (4,44 g, 80 % de rendimiento).1
1H RMN (300 MHz, CDCh): 8 7,43-7,19 (m, 10H), 4,84 (d, J = 11,6, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,02 (s, 3H, rotámeros), 2,91 (s, 3H, rotámeros);
13C RMN (300 MHz, CDCI3): 5170,1, 168,5, 137,1, 136,7, 128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 80,1, 78,9, 73,5, 72,4, 52,1, 36,9, 36,4.
COMPUESTO 7: (2S,3S)-2,3-bis(benciloxi)-4-(dimetilamino)butan-1-ol:
Una solución de THF (15 mL) del amidoéster 6 (2,26 g, 6,08 mmol) se añadió durante 1 h desde un embudo de adición a una suspensión de THF (20 mL) a reflujo de LiAlH4 (1,15 g, 30,4 mmol, 5,00 equiv.) en un matraz de base redonda de dos cuellos con condensador y bajo argón. Después de 5 min adicionales, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, se diluyó con Et2O, se apagó por el método de Fieser [Fieser y Fieser (1967)] (1,2 mL de agua, 1,2 mL de NaOH 1 M acuoso, 3,6 ml de agua), se sacó del baño de hielo y se agitó a temperatura ambiente hasta que los precipitados se volvieron blancos (~1 h). La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró en un evaporador rotativo para obtener un aceite claro e incoloro como el aminoalcohol 7 deseado (1,99 g, 99 % de rendimiento), que se utilizó sin más purificación.
1H RMN (300 MHz, CDCls): 57,41-7,24 (m, 10H), 6,04 (br s, 1H), 4,73 (d, J = 11,7, 1H), 4,64 (d, J = 11,7, 1H), 4,64 (s, 2H), 3,74 (br d, J = 3,6, 2H), 3,70 (dt, J = 6,9, 3,3, 1H), 3,62-3,55 (m, 1H), 2,61 (dd, J = 13,2, 6,9, 1H), 2,51 (dd, J = 13,3, 3,3, 1H), 2,30 (s, 6 H); 13C RMN (300 MHz, CDCla): 5 138,5, 138,2, 128,33, 128,29, 127,81, 127,76, 127,6, 127,5, 81,7, 79,2, 72,6, 72,2, 60,1, 59,0, 46,0.
COMPUESTO 8: (2S,3S)-1-(ter-butil)dimetilsilil-4-dimetilaminobutano-1,2,3-triol:
Se añadió TBSCl sólido (497 mg, 3,30 mmol, 1,10 equiv.) a una solución de alcohol primario 7 (1,00 g, 3,00 mmol) e imidazol (449 mg, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) en DMF ( 6 mL) a temperatura ambiente y en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 14 h, la mezcla de reacción se apagó con NaHCO3 al 5 % acuoso (25 mL) y se extrajo con Et2O (3x20 mL).
Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3x20 mL), salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite claro e incoloro. El crudo se purificó por cromatografía en columna flash (100 mL SO2, 70:30:0^-55:40:5 hexanos/EtOAc/MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como el intermedio silil éter (1,17 g, 87 % de rendimiento).
Se añadió Pd(OH)2/C sólido (177 mg de 10 % en peso, 0,12 mmol, 0,10 equiv.) a una solución agitada a temperatura ambiente 7:3 THF/HOAc (8,5 mL) del triol bisbencilado O-TBS anterior (558 mg, 1,26 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón. El globo de argón se sustituyó por un globo de hidrógeno y se burbujeó gas hidrógeno a través de la mezcla durante 5 min, antes de dejar que se agitara con hidrógeno a presión de globo durante 18 h. La mezcla se diluyó con EtOAc y se filtró a través de Celite. El pH del filtrado se elevó a pH 8-10 mediante la adición de Na2CO3 acuoso saturado, se extrajo con EtOAc (2 x10 mL), después los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para obtener un aceite claro e incoloro como el diol 8 deseado (230 mg, 331 mg de rendimiento teórico), que se utilizó sin purificación adicional.
1H RMN (300 MHz, CDCh): 53,85-3,76 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 5,9, 2,7, 2H), 3,55 (dt, J = 5,7, 2,5, 1H), 3,31 (br s, 2H), 2,60 (dd, J = 12,4, 8 ,8 , 1H), 2,37-2,28 (m,1H), 2,29 (s, 6 H), 0,89 (s, 9H), 0,08 (s,6 H); 13C RMN (300 MHz, CDCl3): 572,3, 67,4, 64,9, 62,0, 45,8, 25,8, 18,2, -5,46.
COMPUESTO 9: (2S,3S)-1-(ter-butil)dimetilsilil-2,3-dilinoleoil-4-dimetilaminobutano-1,2,3-triol:
Una porción del diol 8 se utilizó en la acilación posterior. El cloruro de linoleilo se preparó añadiendo cloruro de oxalilo (0,19 mL, 2,25 mmol) a una solución de ácido linoleico (422 mg, 1,50 mmol, 2,20 equiv. en relación con el diol) y DMF (12 μL, 0,15 mmol) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 4 h, los volátiles se eliminaron en un evaporador rotativo y el residuo se azeotrópico con benceno (2x5 mL), después se secó a alto vacío durante 3 h y se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. Se añadió una solución de CH2Cl2 (1,5 mL) del diol anterior (180 mg, 0,68 mmol, 1,00 equiv.) y Et3N (0,47 mL, 3,42 mmol, 5,00 equiv.) a una solución agitada y helada de CH2Cl2 (2 mL) del cloruro de linoleilo en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de DMAP sólido (184 mg, 1,50 mmol, 2,20 equiv.). La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h, se diluyó con CH2Cl2, se lavó con NaHCO3 al 5 % acuoso (2x10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un semisólido amarillo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (50 mL SO2 , 90:10 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el diéster 9 deseado (319 mg, 59 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCh): 55,46-5,22 (m, 9H), 5,18-5,09 (m, 1H), 3,66 (dd, J = 5,6, 1,3, 2H), 2,77 (t, J = 5,8, 4H), 2,49-2,26 (m, 6 H), 2,22 (s, 6 H), 2,05 (app q, J = 13,0, 6 ,6 , 8 H), 1,70-1,47 (m, 6 H), 1,44-1,19 (m, 27H), 0,94-0,84 (m, 6 H), 0,87 (s, 9H), 0,03 (s, 6 H);
13C RMN (300 MHz, CDCh): 5173,0, 172,9, 130,2, 130,0, 128,0, 127,8, 72,9, 69,0, 61,3, 59,3, 45,9, 34,33,
34,28, 31,5, 29,6, 29,3, 29,21,29,19, 29,12, 29,07, 27,2, 25,7, 25,6, 25,0, 22,5, 18,1, 14,0, -5,6.
COMPUESTO 10: (2S,3S)-2,3-dilinoleoil-4-dimetilaminobutano-1,2,3-triol:
Se añadió una solución pura de HF-piridina (87 |jl de HF al 70 % en piridina, 0,70 mmol, 3,00 equiv.) a una solución agitada de THF a -10 °C (1,2 mL) que contenía piridina (57 jl, 0,70 mmol, 3,00 equiv.) y éter silílico 9 (185 mg, 0,23 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 20 min, la mezcla de reacción se transfirió a un baño de hielo, se agitó durante 2 h más y se apagó con NaHCO3 al 5 % ac. La mezcla se extrajo con EtOAc (3*5 mL), después los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener un aceite amarillo pálido como alcohol primario deseado 10 (rendimiento cuantitativo) que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. Cabe señalar que se observó la transesterificación completa al alcohol primario (1H RMN, TLC) en ≤24 h cuando se almacenó puro a -20 °C.
ESQUEMA 5: Esquema para la síntesis del lípido 13, 4-linoleoiloxibutano-1-tiol.
Figure imgf000033_0001
Se añadió una solución de 1,4-butanodiol en DMF (1 mL) (135 mg, 1,50 mmol, 1,20 equiv.) a una suspensión de NaH (80 mg, 2,50 mmol, 1,50 equiv.; previamente lavada con hexanos, 2 x 3 mL) en un matraz de base redonda bajo argón. A continuación se retiró el baño frío y la mezcla se agitó durante 30 min. Después se enfrió de nuevo en un baño de hielo y se añadió una solución de DMF (1 mL) de metanosulfonato de linoleilo (345 mg, 1,00 mmol), dejando que la mezcla se calentara durante 15 h. La mezcla de reacción se apagó añadiendo agua (10 mL), se extrajo con Et2O (3*5 mL), después los extractos combinados se lavaron con agua (3*5 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite amarillo pálido. La RMN de 1H puso de manifiesto que se había producido cierta isomerización de olefinas (~25 %) durante la reacción y los intentos de mitigarla o eliminarla no tuvieron éxito. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (50 mL SiO2, 80:20 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como éter deseado 11 (276 mg, 82 % de rendimiento, mezcla ~3:1 de deseado/isomerizado).
1H RMN (300 MHz, CDCls): 8 5,49-5,22 (m, 4H), 3,65 (t, J = 5,7, 2H), 3,5-3,38 (m, 4H), 2,79 (t, J = 5,9, 2H), 2,06 (q, J = 6,4, 4H), 1,76-1,62 (m, 4H), 1,65-1,51 (m, 2H), 1,46-1,18 (m, 17H), 0,90 (t, J = 6,5, 3H);
13C RMN (300 MHz, CDCla): 8 130,15, 130,10, 127,93, 127,90, 71,2, 70,8, 62,7, 31,5, 30,4, 29,62, 29,59, 29,43, 29,41,29,3, 29,23, 29,18, 27,19, 27,16, 27,0, 26,1,25,6, 22,5, 14,0.
COMPUESTO 12: S-(4-linoleiloxibutil)tioacetato
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo puro (0,59 mL, 3,00 mmol, 2,00 equiv.) a una solución agitada y helada de THF ( 6 mL) de Ph3P (787 mg, 3,00 mmol, 2,00 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, lo que dio lugar a la formación de un precipitado blanquecino, y el resultante se agitó durante 1 h. A continuación, se añadió una solución de THF (2 mL) de ácido tioacético (0,21 mL, 3,00 mmol, 2,00 equiv.) y alcohol S10 (508 mg, 1,50 mmol) a la mezcla helada anterior, que se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Tras 16 h, se eliminaron los volátiles en un evaporador rotativo. El residuo se resuspendió en 80:20 hexanos/EtOAc, se agitó durante 15 min, momento en donde los sólidos blancos se eliminaron por filtración a través de Celite y el filtrado se concentró en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite amarillo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (80 mL SiO2, 99:1^-95:5 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el tioacetato 12 deseado (549 mg, 92 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCls): 8 5,47-5,24 (m, 4H), 3,49-3,12 (m, 4H), 2,98-2,86 (m, 2H), 2,78 (t, J = 6,1, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,06 (q, J = 6,3, 4H), 1,75-1,61 (m, 4H), 1,63-1,48 (m, 2H), 1,46-1,18 (m, 17H), 0,90 (t, J = 6,5, 3H).
COMPUESTO 13: 4-(linoleiloxi)butano-1-tiol
Se añadió gota a gota una solución de THF (1 mL) de tioacetato 12 (119 mg, 0,30 mmol) a una suspensión agitada y helada de THF (2 mL) de LiAlH4 (46 mg, 1,20 mmol, 4,00 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, que se dejó calentar con el tiempo. Después de 4,5 h, la reacción se enfrió en un baño de hielo, se diluyó con Et2O y se apagó con HCl 1 M acuoso (3 mL). La capa acuosa se extrajo con Et2O (2*5 mL), después los extractos combinados se lavaron con salmuera (1 x 5 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener un aceite claro y coloreado como el tiol 13 deseado (101 mg, 95 % de rendimiento) que se utilizó inmediatamente y sin purificación adicional.
ESQUEMA 6: Esquema para la síntesis del lípido 16, hemisuccinato de oleilo.
Figure imgf000034_0001
Se añadieron anhídrido succínico sólido (200 mg, 2,00 mmol, 2,00 equiv.) y DMAP (305 mg, 2,50 mmol, 2,50 equiv.) a una solución de alcohol palmítico (268 mg, 1,00 mmol) agitada en CH2Cl2 (5 mL) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch, se lavó con HCl 1 M acuoso (2*10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el hemisuccinato 16 (385 mg, rendimiento cuantitativo) como un semisólido blanco que se utilizó sin purificación adicional. Rf 0,22 (SiO2, 70:30 hexanos/EtOAc).
ESQUEMA 7: Esquema para la síntesis del lípido 17, hemisuccinato de palmitilo.
Figure imgf000034_0002
Se añadieron anhídrido succínico sólido (200 mg, 2,00 mmol, 2,00 equiv.) y DMAP (305 mg, 2,50 mmol, 2,50 equiv.) a una solución de alcohol palmítico (242 mg, 1,00 mmol) agitada en CH2Cl2 (5 mL) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch, se lavó con HCl 1 M acuoso (2*10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el hemisuccinato 17 (355 mg, rendimiento cuantitativo) como un semisólido blanco que se utilizó sin purificación adicional. Rf 0,15 (SO2, 70:30 hexanos/EtOAc).
ESQUEMA 8: Esquema para la síntesis del lípido 19, hemisuccinato de 2,3-dimiristoilglicerol.
Figure imgf000034_0003
Se añadió DCC (1,36 g, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) a una suspensión helada de CH2Cl2 (15 mL) de 1 -(terbutil)dimetilsililglicerol (619 mg, 3,00 mmol) y ácido mirístico (1,51 g, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de DMAP (806 mg, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) y se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo. 60 mmol, 2,20 equiv.) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se suspendió en 80:20 hexanos/EtOAc y se filtró a través de SO2 (40 mL) para obtener un aceite claro e incoloro como diéster 18 (1,91 g, rendimiento cuantitativo).
Rf 0,79 (SiO2 , 80:20 hexanos/EtOAc); 1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 5,13-5,04 (m, 1H), 4,36 (dd, J = 11,8, 3,8 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 11,9, 6,2 Hz, 1H), 3,73 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,32 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 1,69-1,56 (m, 4H), 1,27 (br s, 40H), 0,90 (br s, 15H), 0,07 (s, 6 H).
COMPUESTO 19: hemisuccinato de 2,3-dimiristoilglicerol
Se añadió una solución pura de HF-piridina (1,13 mL de HF al 70 % en piridina, 9,14 mmol, 3,00 equiv.) a una solución de THF (12 mL) enfriada con hielo y en agitación que contenía piridina (0,74 mL, 9,14 mmol, 3,00 equiv.) y silil éter 18 (1,91 g, 3,04 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón, y se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Después de 5 h, la mezcla de reacción se neutralizó con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con Et2O (3 x 25 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H2O (1 x 25 mL), salmuera (1 x 25 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo. El crudo se purificó por cromatografía flash en columna (100 mL SiO2 , 80:20 hexanos/EtOAc) para obtener un sólido blanco como alcohol intermedio (1,31 g, 84 % de rendimiento).
Rf = 0,26 (SiO2, 80:20 hexanos/EtOAc);
1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 5,10 (quin, J = 5,0 Hz, 1H), 4,34 (dd, J = 11,9, 4,6 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,35 (q, J = 7,3 Hz, 4H), 2,10 (br s, 1H), 1,63 (br s, 4H), 1,27 (br s, 40H), 0,90 (br t, J = 6,3 Hz, 6 H).
Una porción del alcohol anterior (513 mg, 1,00 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (3 mL) en un matraz de base redonda bajo argón y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron secuencialmente anhídrido succínico (200 mg, 2,00 mmol, 2,00 equiv.) y DMAP (305 mg, 2,50 mmol, 2,50 equiv.) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2, se lavó con HCl 1 M acuoso 1 M (3 □ 10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener un sólido blanco como hemisuccinato 19 (608 mg, rendimiento cuantitativo) que se utilizó sin purificación adicional.
Rf = 0,18 (SiO2, 50:50 hexanos/EtOAc).
ESQUEMA 9: Esquema para la síntesis del lípido 21, hemisuccinato de 2,3-dioleoil glicerol.
Figure imgf000035_0001
COMPUESTO 20: 1-(ter-butM)dimetilsiMl-2,3-dioleoM glicerol
Se añadió DCC (1,36 g, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) a una solución helada de CH2Cl2 (10 mL) de 1-(terbutil)dimetilsililglicerol (619 mg, 3,00 mmol) y ácido oleico (1,86 g, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de DMAP (806 mg, 6,60 mmol, 2,20 equiv.) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con Et2O, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo. 60 mmol, 2 , 2 0 equiv.) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con Et2O, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se suspendió en 95:5 hexanos/EtOAc y se filtró a través de SiO2 (40 mL) para obtener un aceite claro e incoloro como diéster 20 (2,04 g, 93 % de rendimiento).
Rf 0,84 (SiO2, 80:20 hexanos/EtOAc); 1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 5,44-5,28 (m, 4H), 5,14-5,03 (m, 1H), 4,36 (dd, J = 11,9, 3,8 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 11,9, 6,3 Hz, 1H), 3,73 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,32 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 2,11-1,93 (m, 8 H), 1,71-1,56 (m, 4H), 1,42-1,22 (m, 40H), 0,90 (br s, 15H), 0,07 (s, 6 H).
COMPUESTO 21: hemisuccinato de 2,3-dioleoil glicerol
Se añadió una solución pura de HF-piridina (0,72 mL de HF al 70 % en piridina, 5,05 mmol, 3,00 equiv.) a una solución de THF ( 8 mL) helada y en agitación que contenía piridina (0,41 mL, 5,05 mmol, 3,00 equiv.) y éter silílico 20 (1,24 g, 1,68 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón, y se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 4 h, la mezcla de reacción se neutralizó con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con Et2O (3*10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H2O (1*25 mL), salmuera (1*25 mL), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener un aceite claro e incoloro como alcohol intermedio (1,08 g, rendimiento cuantitativo).
Rf = 0,39 (SiO2, 80:20 hexanos/EtOAc);
1H RMN (300 MHz, CDCh): 8 5,47-5,27 (m, 4H), 5,10 (quin, J = 5,0 Hz, 1H), 4,34 (dd, J = 12,0, 4,7 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 3,75 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,35 (q, J = 7,4 Hz, 4H), 2,12-1,93 (m, 8 H), 1,73­ 1,52 (m, 4H), 1,43-1,19 (m, 40H), 0,90 (br t, J = 7,1 Hz, 6 H).
Una porción del alcohol anterior (714 mg, 1,15 mmol) se disolvió en CH2Cl2 ( 6 mL) en un matraz de base redonda bajo argón y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron secuencialmente anhídrido succínico (230 mg, 2,30 mmol, 2,00 equiv.) y DMAP (351 mg, 2,87 mmol, 2,50 equiv.) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2O2, se lavó con HCl 1 M acuoso 1 M (3 x 10 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo para obtener un aceite claro e incoloro como hemisuccinato 21 (696 mg, 84 % de rendimiento) que se utilizó sin purificación adicional.
Rf = 0,22 (SiO2, 50:50 hexanos/EtOAc).
Procedimientos para la síntesis de conjugados de fármacos
ESQUEMA 10: Esquema para la síntesis de LD01-DEX, dexametasona-21-[4-(3-(dimetilamino)-2-((linoleoiloxi)propoxi)-4-oxobutanoato.
Figure imgf000036_0001
LD01-DEX: Dexametasona 21-[4-(3-(dimetilamino)-2-((linoleoiloxi)propoxi)-4-oxobutanoato]:
Se añadió dexametasona 21-hemisuccinatoi sólida (45 mg, 0,18 mmol, 0,50 equiv.) a una solución de DMF (1 mL) a temperatura ambiente de alcohol primario 3 (68 mg, 0,18 mmol, 2. 00 equiv.) y Et 3 N (38 j L, 0,27 mmol, 1,50 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de yoduro de 2-cloro-1-metilpiridinio (28 mg, 0,11 mmol, 0,60 equiv.). Después de 14 h, la mezcla se apagó con NaHCO 3 al 5 %. La mezcla se extrajo con EtOAc (2*3 mL), después los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO 3 al 5 % acuoso (1*3 mL), salmuera, se secaron sobre Na 2 SO 4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite amarillo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SiO 2 , 97:3 CHCl 3 /MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD01-DEX (72 mg, 94 % de rendimiento).
Rf = 0,48 (SiO 2 , 90:10 CHCls/MeOH);
1 H RMN (300 MHz, CDCl 3 ): 87,20 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 6,31 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,48-5,25 (m, 4H), 5,24-5,12 (m, 1H), 4,96 (dd, J = 12,0, 6,6 Hz, 1H), 4,83 (dd, J = 12,0, 6,6 Hz, 1H), 4,48-4,24 (m, 2H), 4,22-3,97 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 2,85-2,70 (m, 4H), 2,75-2,40 (m, 6H), 2,44-2,18 (m, 12H), 2,20-1,93 (m, 6H), 1,90-1,45 (m, 7H), 1,53 (s, 3H), 1,43-1,24 (m, 18H), 1,02 (s, 3H), 0,93-0,80 (m, 6H).
ESQUEMA 11: esquema para la síntesis de LD02-DEX, 2,3-dilinoleoiloxipropil (2-((8S,9R,10S,11 S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato.
Figure imgf000036_0002
LD02-DEX: 2,3-dilinoleoiloxipropil (2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato:
Se añadió DCC sólido (28 mg, 0,13 mmol, 1,10 equiv.) a una solución agitada a temperatura ambiente de CH2Cl2 (1,5 mL) del hemisuccinato 4 (105 mg, 0,15 mmol, 1,10 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron dexametasona sólida (52 mg, 0,13 mmol) y DMAP (24 mg, 0,20 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH2O2, se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite amarillo pálido. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SÍO2, 80:20^70:30^-50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD02-DEX (67 mg, 46 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCh): 87,22 (dd, J = 10,2, 3,9, 1H), 6,32 (dd, J = 10,2, 1,7, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,44-5,17 (m, 9H), 5,00-4,81 (m, 2H), 4,43-4,22 (m, 4H), 4,21-4,06 (m, 2H), 3,16-3,01 (m, 1H), 2,84-2,51 (m, 11H), 2,50-2,23 (m, 9H), 2,21-1,48 (m, 25H), 1,45-1,15 (m, 34H), 1,14-1,00 (m, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,95-0,81 (m, 10H).
ESQUEMA 12: esquema para la síntesis de LD03-DEX, linoleil 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato.
Figure imgf000037_0001
LD03-DEX: linoleil 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato:
Se añadió DCC sólido (37 mg, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) a una solución agitada a temperatura ambiente de CH2Cl2 (1,6 mL) de hemisuccinato 5 (65 mg, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron dexametasona sólida (63 mg, 0,16 mmol) y DMAP (30 mg, 0,24 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH2O2, se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite claro e incoloro. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO2, 70:30^60:40 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD03-DEX (76 mg, 64 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCla): 87,25 (d, J = 10,2, 1H), 6,33 (d, J = 10,1, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,45-5,25 (m, 4H), 4,93 (s, 2H), 4,45-4,27 (m, 1H), 4,08 (t, J = 6,7, 2H), 3,17-3,01 (m, 1H), 2,92 (s, 1H), 2,77 (t, J = 6,5, 4H), 2,72-2,52 (m, 4H), 2,50-2,24 (m, 4H), 2,23-2,07 (m, 1H), 2,05 (q, J = 6,6, 4H), 1,97-1,45 (m, 10H), 1,44-1,01 (m, 20H), 1,02 (s, 3H), 0,97-0,80 (m, 6H).
ESQUEMA 13: esquema para la síntesis de LD06-DEX, (2S,3S)-4-(dimetilamino)-2,3-bis(linoleoiloxi)butil (2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato.
Figure imgf000037_0002
LD06-DEX: (2S,3S)-4-(dimetilamino)-2,3-bis(linoleoiloxi)butil (2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato:
Se añadió dexametasona-21-hemisuccinato sólido [Mao et al. (2012)] (88 mg, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) a una solución de DCC (37 mg, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) en THF (0,8 mL) a temperatura ambiente en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 10 min, la mezcla se enfrió en un baño de hielo, se añadió una solución de THF (0,8 mL) de alcohol 10 (109 mg, 0,16 mmol), DMAP (22 mg, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) y EtaN (25 uL, 0,18 mmol, 1,10 equiv.) y la mezcla se dejó calentar durante la noche. Después de 20 h, la mezcla de reacción se diluyó con THF, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un semisólido amarillo pálido. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (50 mL SÍO 2 , 36:60:4 Et 2 O/hexanos/MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD06-DEX (103 mg, 55 % de rendimiento).
1 H RMN (300 MHz, CDCl 3 ): 87,24 (d, J = 10,1, 1H), 6,34 (d, J = 10,1, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,47-5,26 (m, 10H), 5,26­ 5,15 (m, 1H), 5,01 (d, J = 17,5, 1H), 4,86 (d, J = 17,5, 1H), 4,43-4,27 (m, 2H), 4,20-4,08 (m, 1H), 3,20-3,02 (m, 1H), 2,78 (app t, J = 5,6, 7H), 2,70-2,60 (m, 2H), 2,60-2,5 (m, 18H), 2,24 (s, 6H), 2,18-2,03 (m, 3H), 2,06 (app q, J = 13,1, 6,7, 8H), 1,90-1,49 (m, 13H), 1,47-1,16 (m, 39H), 1,05 (s, 3H), 0,90 (app t, J = 6,7, 11H).
ESQUEMA 14: esquema para la síntesis de LD07-DEX, (8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-17-(2-((4-(linoleiloxi)butil)tio)acetil)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona.
Figure imgf000038_0001
LD07-DEX: (8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-17-(2-((4-(linoleiloxi)butil)tio)acetil)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona:
Se añadió una solución de THF (0,6 mL) de tiol 13 (66 mg, 0,19 mmol, 1,90 equiv.) a una solución de dexametasona-21-bromuro [López y Simons (1991)] (48 mg, 0,10 mmol) en THF (0,4 mL) agitada y enfriada con hielo en un matraz de base redonda bajo argón. Después de 8 h, la mezcla de reacción se diluyó con THF, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo para obtener el crudo como un aceite amarillo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO2, 80:20^-65:35 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el sulfuro deseado LD07-DEX (48 mg, 62 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCl3): 87,18 (d, J = 10,2, 1H), 6,32 (dd, J = 10,1, 1,7, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,47-5,23 (m, 4H), 4,34 (br d, J = 10,0, 1H), 3,52 (d, J = 13,4, 1H), 3,48-3,29 (m, 5H), 3,18 (d, J = 13,2, 1H), 3,14-2,99 (m, 1H), 2,77 (t, J = 6,0, 2H), 2,65 (s, 1H), 2,69-2,19 (m, 8H), 2,04 (q, J = 6,5, 4H), 1,90-1,46 (m, 17H), 1,46-1,15 (m, 23H), 1,05 (s, 3H), 0,95-0,82 (m, 7H).
ESQUEMA 15: esquema para la síntesis de LD13-DEX, 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato de oleilo.
Figure imgf000038_0002
LD13-DEX: 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato de oleilo:
Se añadió DCC sólido (25 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) a una solución agitada de CH 2 Cl 2 (1 mL) a temperatura ambiente de hemisuccinato 16 (44 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron dexametasona sólida (39 mg, 0,10 mmol) y DMAP (18 mg, 0,15 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH 2 Cl 2 , se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite claro e incoloro. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO 2 , 60:40^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD13-DEX (50 mg, 67 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCI3): 57,22 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,40-5,25 (m, 2H), 4,99-4,83 (m, 2H), 4,41-4,27 (m, 1H), 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,16-2,99 (m, 1H), 2,82 (br s, 1H), 2,79-2,69 (m, 2H), 2,68-2,58 (m, 3H), 2,49-2,24 (m, 4H), 2,22-2,06 (m, 1H), 2,06-1,92 (m, 4H), 1,94-1,46 (m, 10H), 1,40-1,08 (m, 22H), 1,01 (s, 3H), 0,95-0,78 (m, 6H).
ESQUEMA 16: esquema para la síntesis de LD14-DEX, 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato de palmitilo.
Figure imgf000039_0001
LD14-DEX: 2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil succinato de palmitilo:
Se añadió DCC sólido (25 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) a una solución agitada de CH 2 Cl 2 (1 mL) a temperatura ambiente de hemisuccinato 16 (41 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron dexametasona sólida (39 mg, 0,10 mmol) y DMAP (18 mg, 0,15 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH 2 Cl 2 , se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite claro e incoloro. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO 2 , 60:40^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD14-DEX (43 mg, 60 % de rendimiento).
1 H RMN (300 MHz, CDCla): 57,22 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,00-4,83 (m, 2H), 4,38-4,26 (m, 1H), 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,16-3,00 (m, 1H), 2,84 (br s, 1H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,69-2,53 (m, 3H), 2,48 (br s, 1H), 2,42-2,24 (m, 3H), 2,22-2,06 (m, 1H), 1,95-1,42 (m, 10H), 1,39-1,17 (m, 26H), 1,16-1,02 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,95-0,80 (m, 6H).
ESQUEMA 17: esquema para la síntesis de LD17-DEX, (2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato de 2,3-dimiri stoilpropilo.
Figure imgf000039_0002
LD17-DEX: (2-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihidroxi-10,13,16-trimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato de 2,3-dimiristroilpropilo:
Se añadió Et 3 N (53 pL, 0,20 mmol, 2,50 equiv.), seguido del reactivo de Mukaiyama (51 mg, 0,20 mmol, 1,30 equiv.), a una solución helada de CH 2 Cl 2 (0,7 mL) de dexametasona (76 mg, 0,15 mmol) y hemisuccinato 19 (92 mg, 0,18 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda seco bajo argón. La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h, después se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO 3 al 5 % acuoso (1*5 mL), H 2 O (2*5 mL), salmuera (1*5 mL), se secó sobre Na 2 SO 4 y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO 2 , 80:20^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD17-DEX (72 mg, 47 % de rendimiento).
Rf = 0,45 (SO 2 , 50:50 hexanos/EtOAc);
1H RMN (300 MHz, CDCI3): 57,23 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,33 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,30­ 5,17 (m, 1H), 5,07-4,83 (m, 2H), 4,45-4,08 (m, 5H), 3,19-3,03 (m, 1H), 2,85-2,49 (m, 7H), 2,47-2,25 (m, 7H), 2,23-2,07 (m, 1H), 1,96-1,54 (m, 8H), 1,38-1,15 (m, 43H), 1,04 (s, 3H), 0,98-0,79 (m, 9H).
ESQUEMA 18: Esquema para la síntesis de LD19-PDN, (2-((8S,9S,10R,13S,14S,17R)-17-hidroxi-10,13-dimetil-3,11-dioxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-cidopenta[a]fenantren-17-N)-2-oxoetil)succinato de oleilo.
Figure imgf000040_0001
LD19-PDN: (2-((8S,9S,10R,13S,14S,17R)-17-h¡droxi-10,13-d¡met¡l-3,11-d¡oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-3H-cidopenta[a]fenantren-17-il)-2-oxoetil)succinato de oleilo:
Se añadió DCC sólido (52 mg, 0,25 mmol, 1,20 equiv.) a una solución agitada de CH 2 Cl 2 (1 mL) a temperatura ambiente de hemisuccinato 16 (92 mg, 0,25 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron prednisona sólida (75 mg, 0,21 mmol) y DMAP (38 mg, 0,31 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH 2 O 2 , se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite amarillo pálido. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO 2 , 70:30^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD19-PDN (103 mg, 71 % de rendimiento).
Rf = 0,52 (SO 2 , 75:25 EtOAc/hexanos);
1 H RMN (300 MHz, CDCls): 57,69 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 6,19 (dd, J = 10,3, 1,8 Hz, 1H), 6,07 (s, 1H), 5,42­ 5,25 (m, 2H), 5,07 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 4,07 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,88 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,83-2,69 (m, 3H), 2,69-2,59 (m, 2H), 2,51 (dt, J = 13,1, 4,3 Hz, 1H), 2,44-2,26 (m, 3H), 2,14-1,83 (m, 7H), 1,76-1,55 (m, 4H), 1,43 (s, 3H),1,38-1,16 (m, 25H), 1,16-0,98 (m, 1H), 0,87 (br t, J = 6,6 Hz, 3H), 0,67 (s, 3H).
ESQUEMA 19: Esquema para la síntesis de LD20-PDL, 2-((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)-11,17-dihidroxi-10,13-d¡met¡l-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecah¡dro-3H-c¡dopenta[a]fenantren-17-¡l)-2-oxoet¡l succinato de oleilo.
Figure imgf000040_0002
LD20-PDL: 2-((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)-11,17-d¡h¡drox¡-10,13-d¡met¡l-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro^H-ciclopenta^fenantren-^-il^-oxoetil succinato de oleilo:
Se añadió DCC sólido (74 mg, 0,36 mmol, 1,20 equiv.) a una solución agitada de CH 2 Cl 2 (2 mL) a temperatura ambiente de hemisuccinato 16 (133 mg, 0,36 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. Después de agitar durante 5 min, se añadieron prednisolona sólida (75 mg, 0,30 mmol) y DMAP (55 mg, 0,45 mmol, 1,50 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 14 h, se diluyó con CH 2 Cl 2 , se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para obtener el crudo como un aceite amarillo pálido. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (30 mL SO 2 , 70:30^-50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD20-PDL (142 mg, 68 % de rendimiento).
Rf = 0,45 (SO 2 , 75:25 EtOAc/hexanos);
1 H RMN (CDCla, 300 MHz): 57,26 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 6,01 (s, 1H), 5,42­ 5,28 (m, 2H), 5,02 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 17,3 Hz, 1H), 4,54-4,45 (m, 1H), 4,08 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,76 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 2,73-2,60 (m, 3H), 2,61-2,49 (m, 1H), 2,36-2,27 (m, 1H), 2,20-1,91 (m, 7H), 1,71­ 1,45 (m, 4H), 1,45 (s, 3H), 1,40-1,19 (m, 25H), 1,19-1,04 (m, 1H), 0,97 (s, 3H), 0,88 (br t, J = 6,6 Hz, 3H).
ESQUEMA 20: Esquema para la síntesis de LD10-DTX, (2R,3S)-1- 2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12bacetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanocidodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoiloxi)propil)succinato.
Figure imgf000041_0001
LD10-DTX: (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12b-acetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoiloxi)propil)succinato:
Se añadió EDC-HCl (15 mg, 8,10*10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) a una solución de CH 2 Cl 2 (1 mL) a temperatura ambiente de hemisuccinato 4 (58 mg, 8,10*10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) e i-P^NEt (19 pL, 0,11 mmol, 1,50 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón. La mezcla se agitó durante 5 min, se enfrió a -10 °C, momento en donde se añadieron docetaxel (59 mg, 7,36 x 10 ' 2 mmol) y HOBt (11 mg, 8,10 x 10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) y se dejó calentar la mezcla durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 0,5 M acuoso (2*5 mL), H 2 O (1*5 mL), salmuera (1*5 mL), se secó sobre Na 2 SO 4 y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó por cromatografía en columna flash (25 mL SO 2 , 80:20^-50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD10-DTX (89 mg, 81 % de rendimiento).
Rf = 0,34 (SO 2 , 50:50 hexanos/EtOAc);
1 H RMN (300 MHz, CDCla): 88,13 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,67-7,58 (m, 1H), 7,57-7,47 (m, 2H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,36-7,26 (m, 3H), 6,30-6,14 (m, 1H), 5,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,50-5,16 (m, 12H), 4,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,38-4,0 (m, 8H), 3,94 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,83-2,52 (m, 9H), 2,43 (s, 3H), 2,32 (t, J = 7,4 Hz, 6H), 2,15­ 1,98 (m, 6H), 1,94 (s, 3H), 1,47-1,18 (m, 50H), 1,14 (s, 3H), 0,89 (br t, J = 6,6 Hz, 6H).
ESQUEMA 21: Esquema para la síntesis de LD18-DTX, (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12bacetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (Z)-octadec-9-en-1-il succinato.
Figure imgf000041_0002
LD18-DTX: (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12b-acetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (Z)-octadec-9-en-1-il succinato:
Se añadió Et3N (35 pL, 0,25 mmol, 2,50 equiv.), seguido del reactivo de Mukaiyama (33 mg, 0,13 mmol, 1,30 equiv.), a una solución helada de CH2Cl2 (1 mL) de docetaxel (81 mg, 0,10 mmol) y hemisuccinato 16 (44 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda seco bajo argón. La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h y después se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO2, 80:20^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD18-DTX (95 mg, 82 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCI3): 58,13 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,67-7,58 (m, 1H), 7,57-7,47 (m, 2H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,36­ 7,26 (m, 3H), 6,34-6,17 (m, 1H), 5,70 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 5,49 (br s, 2H), 5,43-5,29 (m, 4H), 5,23 (s, 1H), 4,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,38-4,07 (m, 6H), 4,05 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,94 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 2,77-2,52 (m, 6H), 2,44 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,08-1,98 (m, 4H), 1,68-1,52 (m, 3H), 1,43-1,19 (m, 43H), 1,13 (s, 3H), 0,89 (br t, J = 6,5 Hz, 3H).
ESQUEMA 22: Esquema para la síntesis de LD22-DTX, (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12bacetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis(tetradecanoiloxi)propil)succinato.
Figure imgf000042_0001
LD22-DTX: (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12b-acetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis(tetradecanoiloxi)propil)succinato:
Se añadió Et3N (35 pL, 0,25 mmol, 2,50 equiv.), seguido del reactivo de Mukaiyama (33 mg, 0,13 mmol, 1,30 equiv.), a una solución helada de CH2CI2 (1 mL) de docetaxel (81 mg, 0,10 mmol) y hemisuccinato 19 (74 mg, 0,12 mmol, 1,20 equiv.) en un matraz de base redonda seco bajo argón. La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h y después se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO2, 80:20^50:50 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD22-DTX (63 mg, 45 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCh): 58,13 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,67-7,58 (m, 1H), 7,57-7,47 (m, 2H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,36­ 7,26 (m, 3H), 6,30-6,14 (m, 1H), 5,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,60-5,41 (m, 2H), 5,36 (br s, 1H), 4,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,40-4,07 (m, 9H), 3,94 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,80-2,51 (m, 6H), 2,43 (s, 3H), 2,32 (t, J = 7,4 Hz, 6H), 1,95-1,81 (m, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,69-1,53 (m, 5H), 1,14 (s, 3H), 1,41-1,18 (m, 54H), 1,14 (s, 3H), 0,89 (brt, J = 6,6 Hz, 6H).
ESQUEMA 23: Esquema para la síntesis de LD23-DTX, (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12bacetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis(oleoiloxi)propil)succinato.
Figure imgf000042_0002
LD23-DTX: (2R,3S)-1-(((2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12b-acetoxi-12-(benzoiloxi)-4,6,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-1H-7,11-metanociclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-9-il)oxi)-3-((ter-butoxicarbonil)amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il (2,3-bis(oleoiloxi)propil)succinato:
Se añadió Et3N (26 pL, 0,18 mmol, 3,00 equiv.), seguido del reactivo de Mukaiyama (25 mg, 9,90*10'2 mmol, 1,60 equiv.), a una solución helada de CH2Cl2 (0,6 mL) de docetaxel (50 mg, 6,19*10'2 mmol) y hemisuccinato 21 (67 mg, 9,28*10'2 mmol, 1,50 equiv.) en un matraz de base redonda seco bajo argón. La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h y después se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (25 mL SO2, 60:40 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD23-DTX (59 mg, 63 % de rendimiento).
1H RMN (300 MHz, CDCI3): 58,13 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,67-7,58 (m, 1H), 7,57-7,47 (m, 2H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,36­ 7,26 (m, 3H), 6,30-6,14 (m, 1H), 5,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,57-5,42 (m, 2H), 5,42-5,19 (m, 8H), 4,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,38-4,07 (m, 8H), 3,94 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,83-2,50 (m, 6H), 2,43 (s, 3H), 2,32 (t, J = 7,4 Hz, 6H), 2,11-1,81 (m, 8H), 1,94 (s, 3H), 1,69-1,53 (m, 5H), 1,45-1,17 (m, 56H), 1,13 (s, 3H), 0,89 (br t, J = 6,6 Hz, 6H).
ESQUEMA 24: Esquema para la síntesis de LD12-ABN, (3S,8R,9S,10R,13S,14S)-10,13-dimetil-17-(piridin-3-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15-dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il linoleil succinato.
Figure imgf000043_0001
LD12-ABN: (3S,8R,9S,10R,13S,14S)-10,13-dimetil-17-(piridin-3-N)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15-dodecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il linoleil succinato
Se añadió DCC (17 mg, 8,25*10'2 mmol, 1,10 equiv.) a una solución helada de CH2Cl2 (0,7 mL) de hemisuccinato 5 (30 mg, 8,25 x 10'2 mmol, 1,10 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, seguido de abiraterona (26 mg, 7,5*10'2 mmol) y DMAP (10 mg, 8,25*10'2 mmol, 1,10 equiv.). La mezcla de reacción se dejó calentar durante 14 h, se filtró a través de Celite y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO2, 70:30 hexanos/EtOAc) para obtener un aceite claro e incoloro como el conjugado deseado LD12-ABN (31 mg, 60 % de rendimiento). 1H RMN (300 MHz, CDCla): 58,61 (s, 1H), 8,45 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,63 (dt, J = 8,0, 1,9 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 7,9, 4,8 Hz, 1H), 6,01-5,94 (m, 1H), 5,45-5,25 (m, 5H), 4,71-4,55 (m, 1H), 4,07 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,60 (s, 4H), 2,39-2,31 (m, 2H), 2,32-2,19 (m, 1H), 2,12-1,97 (m, 7H), 1,92-1,42 (m, 12H), 1,41-1,23 (m, 17H), 1,21­ 1,07 (m, 2H), 1,07 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,87 (br t, J = 6,7 Hz, 3H).
ESQUEMA 25: Esquema para la síntesis de LD11-NPC-I, 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de linoleilo.
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LD11-NPCi: 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de linoleilo:
Se añadió DCC (18 mg, 8,65*10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) a una solución helada de CH 2 Cl 2 (0,8 mL) de NPC 1 I [Lee et al. (2013)] (44 mg, 7,86*10 ' 2 mmol) y Et 3 N (22 pL, 0,16 mmol, 2,00 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, después se sacó del baño frío y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se colocó de nuevo en el baño de hielo, después se añadieron alcohol linoleílico (23 mg, 8,65*10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) y DMAP (11 mg, 8,65*10 ' 2 mmol, 1,10 equiv.) y la mezcla se dejó calentar durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con Et 2 O, se lavó con NaHCO 3 al 5 % acuoso (1*5 mL), salmuera (1*5 mL), se secó sobre Na 2 SO 4 y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO 2 , 75:25:0^100:0:0^-98:0:2 EtOAc/hexanos/MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD11-NPC 1 (26 mg, 41 % de rendimiento).
Rf = 0,40 (SiO 2 , 65:30:5 EtOAc/hexanos/MeOH); 1 H RMN (300 MHz, CDCla): 58,06 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,52 (br s, 1H), 5,45-5,26 (m, 4H), 5,14 (s, 2H), 4,31 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 4,04 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 3,67 (br s, 4H), 3,41 (br t, J = 4,4 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,52 (br t, J = 4,7 Hz, 4H), 2,11-1,90 (m, 9H), 1,85-1,53 (m, 6H), 1,50-1,18 (m, 18H), 0,88 (br t, J = 6,8 Hz, 3H).
ESQUEMA 26: Esquema para la síntesis de LD25-NPC-I, 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de octilo.
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LD25-NPCi : 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de octilo:
Se añadió DCC (50 mg, 0,24 mmol, 1,20 equiv.) a una solución helada de CH2CI2 (1 mL) de NPC1 I (112 mg, 0,20 mmol) y Et3N (69 μL, 0,50 mmol, 2,50 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, después se sacó del baño frío y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se volvió a colocar en el baño de hielo, después se añadieron octanol (41 μL, 0,26 mmol, 1,30 equiv.) y DMAP (29 mg, 0,24 mmol, 1,20 equiv.) y la mezcla se dejó calentar durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con Et2O, se lavó con NaHCO3 al 5 % acuoso (1*5 mL), salmuera (1*5 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SO2 , 50:45:5 EtOAc/hexanos/MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD11-NPC1 (73 mg, 54 % de rendimiento). Rf = 0,47 (SiO2, 50:40:10 EtOAc/hexanos/MeOH);
1H RMN (300 MHz, CDCla): 88,06 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,52 (br s, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,33 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,05 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 3,66 (br s, 4H), 3,40 (br t, J = 4,2 Hz, 2H), 2,51 (br t, J = 4,3 Hz, 4H), 2,08-1,87 (m, 6H), 1,85-1,53 (m, 15H), 1,52-1,20 (m, 11H), 0,88 (br t, J = 6,8 Hz, 3H).
ESQUEMA 27: Esquema para la síntesis de LD2 6 -NPC1, 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de decilo.
Figure imgf000044_0002
LD25-NPCi : 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoato de decilo:
Se añadió DCC (50 mg, 0,24 mmol, 1,20 equiv.) a una solución helada de CH2Cl2 (1 mL) de NPC1 I (112 mg, 0,20 mmol) y Et3N (69 μL, 0,50 mmol, 2,50 equiv.) en un matraz de base redonda bajo argón, después se sacó del baño frío y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se volvió a colocar en el baño de hielo, después se añadieron decanol (50 μL, 0,26 mmol, 1,30 equiv.) y DMAP (29 mg, 0,24 mmol, 1,20 equiv.) y se dejó calentar la mezcla durante 14 h. La mezcla de reacción se diluyó con Et2O, se lavó con NaHCO3 al 5 % acuoso (1*5 mL), salmuera (1*5 mL), se secó sobre Na2SO4 y se concentró en un evaporador rotativo. El crudo se purificó mediante cromatografía en columna flash (20 mL SiO2 , 50:45:5 EtOAc/hexanos/MeOH) para obtener un aceite claro e incoloro como conjugado deseado LD11-NPC1 (68 mg, 49 % de rendimiento). Rf = 0,47 (SiO2, 50:40:10 EtOAc/hexanos/MeOH);
1H RMN (300 MHz, CDCl3): 88,06 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,52 (br s, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,33 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,05 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 3,66 (br s, 4H), 3,40 (br t, J = 4,2 Hz, 2H), 2,51 (br t, J = 4,3 Hz, 4H), 2,08-1,87 (m, 6H), 1,85-1,53 (m, 15H), 1,52-1,20 (m, 15H), 0,88 (br t, J = 6,8 Hz, 3H).
ESQUEMA 28. Esquema para la síntesis de NPC1 I, ácido 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoico.
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NPCi I: ácido 4-((2-((4-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-il)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)fenoxi)metil)benzoico:
Se añadió NaOH 1 M acuoso (6,1 mL, 6,13 mmol, 2,00 equiv.) a una solución de MeOH (9 mL) a temperatura ambiente de NPC1 ((Lee et al. 2013) 1,76 g, 3,06 mmol) en un matraz de base redonda bajo argón y se agitó. Después de 14 h, el pH de la mezcla se ajustó a ≤ 2 mediante la adición de HCl 1 M acuoso y, a continuación, se extrajo con CHCh (3*15 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en un evaporador rotativo para obtener una espuma blanca (1,60 g, 93 % de rendimiento), que se utilizó sin purificación adicional.
Rf = 0,28 (SiO2, 70:20:10 EtOAc/hexanos/MeOH); 1H RMN (300 MHz, CD3OD): 8 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,53-7,44 (m, 2H), 7,21 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,40 (s, 2H), 4,07­ 4,01 (m, 2H), 3,78 (br s, 4H), 2,02 (s, 2H), 2,00-1,90 (m, 5H), 1,79-1,61 (m, 16H).
ESQUEMA 29. Esquema para la síntesis de LD01-RXN y LD01-TFN
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ESQUEMAS DE EJEMPLO
Figure imgf000045_0003
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Formulación de DEX o DTX en nanopartículas de lípido
Las propiedades hidrófobas de los profármacos unidos a lípidos (compuestos por el fármaco y las moléculas lipídicas) permiten que los fármacos se incorporen fácilmente a las nanopartículas lipídicas simplemente añadiéndolos a la mezcla de formulación lipídica, sin necesidad de modificar más el proceso de formulación. Como resultado, las nanopartículas lipídicas que incorporan estos fármacos pueden fabricarse utilizando una amplia variedad de metodologías de formulación bien descritas, que incluyen, entre otras, la extrusión, la inyección de etanol y la mezcla en línea [Maclachlan y Cullis (2005); y Jeffs et al. (2005)].
Materiales: 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC) y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000] (PEG-DMPE), y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)-2000] (PEG-DSPE) se adquirieron a Avanti Polar Lipids™ (Alabaster, AL). El colesterol se obtuvo de Sigma™ (St Louis, MO). Los lípidos ionizables están disponibles comercialmente. Los profármacos LD-DEX o LD-DTX se sintetizaron como se ha descrito con anterioridad.
Preparación de los sistemas de LNP: Los sistemas PC-Chol LNP se prepararon mezclando rápidamente POPC, colesterol, profármaco ligado a lípidos y PEG-DMPE (en proporción molar de 49/39/10/2) disueltos en etanol con solución salina tamponada con fosfato utilizando un mezclador en T. Las formulaciones se dializaron con solución salina tamponada con fosfato para eliminar el etanol residual y elevar el pH a 7,4. Las formulaciones se dializaron contra solución salina tamponada con fosfato para eliminar el etanol residual y elevar el pH a 7,4. Los sistemas PC-TO y LNP ionizables se prepararon de la misma manera, excepto que las composiciones lipídicas para estos sistemas son: POPC, trioleína, profármaco ligado a lípidos y PEG-DSPE (en proporción molar de 19/70/10/1), y lípido ionizable, DSPC, colesterol, profármaco ligado a lípidos y PEG-DMPE (en proporción molar de 40/10/38,5/10/1,5), respectivamente.
Caracterización de las LNP: El tamaño de las partículas se determinó mediante dispersión dinámica de la luz utilizando un Malvern Zetasizer Nano ZS™ (Malvern, Reino Unido) tras el intercambio de tampones en solución salina tamponada con fosfato. Se utilizaron datos de tamaño y distribución ponderados por número. Las concentraciones de lípidos se determinaron midiendo el colesterol total mediante el kit de ensayo enzimático Cholesterol E de Wako Chemicals USA™ (Richmond, VA). La morfología de las formulaciones de LNP que contenían LD-DEX se analizó mediante microscopía electrónica de transmisión criogénica (cryoTEM) como se ha descrito previamente [Leung et al. (2012)].
Cuantificación de profármacos por HPLC: LD-DEX/DTX se cuantificaron mediante cromatografía líquida de ultra alta presión (UHPLC) utilizando un sistema Waters Acquity™ UPLC equipado con un detector de matriz de fotodiodos (PDA) y un detector de dispersión de luz evaporativa (ELS); se utilizó el software de adquisición de datos Empower™ versión 3.0 (Waters™, EE.UU.). Las separaciones se realizaron utilizando una columna Waters Acquity™ BEH C-is (1,7 |jm, 2,1*100 mm) a un caudal de 0,5 ml/min, con fases móviles A y B consistentes en metanol/10 mM de bicarbonato amónico (80/20 % v/v) y metanol/acetonitrilo (80/20 % v/v), respectivamente. Las fases móviles se administraron en un gradiente lineal programado (45 %- 80 % B en 1 min y luego a 99 % B en 2 min) a una temperatura de columna de 55°C. El analito se midió mediante PDA (a una longitud de onda de 239 nm) y detector ELS frente a curvas estándar de calibración. Para el análisis de la descomposición de LD-DEX/DTX en compuesto activo, se utilizaron gradientes lineales de 20/80 % a 100/0 % (acetonitrilo/agua, v/v) durante 7 min.
Cryo-TEM de LNP: Se aplicó una pequeña cantidad de formulaciones a ~20 mg/mL (concentración total de lípidos) a una rejilla de microscopía electrónica con una película de carbono perforada. La muestra se congeló rápidamente en etano líquido utilizando un sistema Vitrobot™ (FEI™, Hillsboro, OR). Se tomaron imágenes utilizando un TEM FEI G20 Lab6200 kV (FEI™, Hillsboro, OR) en condiciones criogénicas (88 K) a un aumento de 50.000* con una cámara CCD AMT HR. Se muestran imágenes representativas de LD02 y LD03 en LNP de PC-Chol fabricadas con 5 % en moles de PEG-DSPE.
Degradación in vitro de profármacos unidos a lípidos
Para determinar la biodegradabilidad de los profármacos de dexametasona o docetaxel (LD-DEX/DTX), se incubó 1 mg/mL de LNP en plasma de ratón (Cedarlane™, Burlington, Ontario) o PBS suplementado con 10U de esterasa purificada (Sigma-Aldrich™, St. Louis, MO) durante un máximo de 4 horas a 37 °C. Tras la incubación, se añadieron cuatro volúmenes de cloroformo/metanol (2:1) y la mezcla se mezcló en vórtex. Las muestras se centrifugaron a 13.000 g durante 5 minutos y se desechó la fase superior. La fase orgánica restante se secó al vacío y el extracto lipídico resultante se disolvió en metanol/acetonitrilo (1:1). La cantidad de compuesto LD-DEX/DTX parental se determinó mediante cromatografía líquida de ultra alta presión en un Waters Acquity™ H-Class UPLC System™ equipado con una columna BEH C18 y un detector de matriz de fotodiodos.
Disociación in vitro de profármacos unidos a lípidos
Las LNP se incubaron durante 0, 3, 5 y 24 ha 37 °C en 400 μL de plasma humano estéril (Cedarlane™, Burlington, Ontario) a una concentración final de lípidos de 1,2 mM. En los distintos puntos temporales, las muestras se cargaron en una columna Sepharose CL-4B de 1,5 * 27 cm (Sigma-Aldrich™, St. Louis, MO). Se recogieron fracciones de 30 * 2 mL. Se añadieron tres volúmenes de metanol/acetonitrilo (1:1) a cada fracción y se analizaron por UHPLC para determinar el LD-DEX/DTX residual como se ha descrito con anterioridad.
Supresión inmunitaria in vivo mediante profármacos unidos a lípidos (LD-DEX)
A ratones hembra Cs7Bl/6 de 6-8 semanas de edad (Charles River Laboratories™, Wilmington, MA) se les inyectaron por vía intravenosa nanopartículas lipídicas que contenían oligonucleótidos de ADN CpG (10 mg/kg), ARNm (3 mg/kg) o ADN plasmídico (ADNp) (1 mg/kg). Los animales fueron eutanasiados 2 horas después de la inyección y se les extrajo sangre por vía intracardiaca o safena. El plasma se separó de la sangre total por centrifugación y se analizó en busca de citoquinas proinflamatorias utilizando el kit Mesoscale Proinflammatory Multiplex™ (Rockville, MD) según las instrucciones del fabricante. Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad de British Columbia y se realizaron de acuerdo con las directrices establecidas por el Consejo Canadiense de Cuidado Animal (Canadian Council on Animal Care).
Supresión inmunitaria in vitro mediante profármacos unidos a lípidos (LD-DEX)
Se sembraron células de macrófagos de ratón RAW 264.7 a 250.000 células por mL en placas de 12 pocillos y se incubaron a 37 °C durante la noche. Se disolvió lipopolisacárido (LPS) en solución salina tamponada con fosfato a una concentración de 2 μg/ml. Las células se trataron con nanopartículas lipídicas que contenían profármacos LD-DEX y 2 ng/ml de LPS durante 4 horas. Esta concentración de LPS se eligió debido a su capacidad para aumentar la expresión de IL1p aproximadamente 1000 veces en comparación con las células no tratadas. Al final del período de incubación, se aspiró el medio de cultivo y se extrajo el ARN celular utilizando el kit de extracción Purelink RNA™ según el protocolo del fabricante (Life Technologies™, Burlington, ON). La concentración del ARN extraído se determinó utilizando un Nanodrop Lite™ (Thermo Fisher™). 1 μg de ARN se convirtió en ADNc utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (High Capacity cDNA Reverse Transcription kit) (Life Technologies™, Burlington, ON). Para validar la preparación de la muestra, se incluyeron un control sin molde y un control negativo de transcriptasa inversa. A continuación, el ADNc se cuantificó mediante qPCR comparativa en tiempo real, en donde los valores Ct (ciclo umbral) se convierten en cantidad relativa mediante el método 2-AACT. Los conjuntos de cebadores-sonda se diseñaron para unirse al ADNc de la interleucina-1p (IL1p). Se eligió la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HPRT) como gen normalizador endógeno, conocido por mantener niveles constantes con tratamientos variables.
Inhibición del crecimiento in vitro mediante profármacos unidos a lípidos (LD-DTX)
Las células OVCAR3 se obtuvieron de ATCC (Manassas, VA). Las células se sembraron a 12.000 células por pocillo en placas de 96 pocillos y se trataron con docetaxel libre, profármacos, formulaciones de nanopartículas lipídicas con o sin profármacos de 0 a 15 μM de docetaxel durante 48 h. La viabilidad celular se determinó mediante un ensayo colorimétrico, basado en la sal de tetrazolio MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-bromuro de difeniltetrazolio), como se ha descrito previamente [Mossman 1983].
EJEMPLOS
Ejemplo 1: Efecto de la Hidrofobicidad en la Incorporación del profármaco LNP a la preparación de profármacos DEX o DTX:
Los profármacos unidos a lípidos descritos en la presente pueden estar compuestos por un fármaco conjugado con una o más moléculas lipídicas a través de un ligador. Un profármaco representativo a base de dexametasona (-DEX) compuesto de DEX unido a una cadena de acilo de linoleilo mediante un enlace éster es LD01-DEX. Un profármaco representativo a base de Docetaxel (-DTX) que contiene DTX unido a dos cadenas de acil linoleilo mediante un enlace éster hidrolizable es el LD10-DTX.
Para definir las propiedades/características importantes de estos profármacos que influyen en su utilidad, se produjeron una serie de profármacos basados en DEX o DTX. Los profármacos lipídicos ejemplificados muestran variaciones en la fracción lipídica (por ejemplo, el número y la longitud de las cadenas acilo), así como en el ligador (por ejemplo, la presencia o ausencia de un grupo cargado/ionizable, degradabilidad) para variar la liberación del fármaco activo del profármaco lipídico tras la administración in vivo. Los ejemplos de las series DEX y DTX se muestran en la tabla 2 y la tabla 3, respectivamente, que especifica la designación, las características y propiedades del lípido y el ligador, la estructura química y el índice de hidrofobicidad (LogP). En la tabla 4 se enumeran ejemplos de otros profármacos unidos a lípidos, como la abiraterona (-ABN), el tacrolimus (-TAC), la prednisona (-PDN), la prednisolona (-PDL) y el inhibidor de NPC1 NP3.47 (-NPC1B).
Tabla 2. Ejemplos de profármacos LD-DEX con ligadores y lípidos alternativos
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Tabla 3. Ejemplos de profármacos LD-DTX con ligadores y lípidos alternativos
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Tabla 4. Otros ejemplos de profármacos con ligadores y lípidos alternativos
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Ejemplo 2: Eficacia de carga del fármaco
Los análisis de los profármacos lipídicos formulados como se ha descrito con anterioridad, confirmaron que la inclusión de hasta un 10 % en moles de profármacos basados en DEX en la mezcla lipídica de la formulación inicial no tuvo ningún impacto significativo en las características fisicoquímicas o de formulación, como el tamaño y la polidispersidad. Las imágenes CryoTEM de profármacos unidos a lípidos (es decir, LD02- DEX o LD03-DEX), dos profármacos de diferentes anclajes lipídicos e hidrofobicidades, mostraron que estos profármacos unidos a lípidos son vesículas bicapa (ver figura 1). Según la hipótesis, los análisis lipídicos por UHPLC de las LNP finales indicaron que la incorporación de profármacos basados en DEX dependía de la hidrofobicidad del profármaco basado en DEX. Por lo tanto, LD01-DEX, que tiene una hidrofobicidad relativamente baja, solo incorporó el 65-72 % en moles de la cantidad de entrada en la preparación final de nanopartículas lipídicas (tabla 5). LD06-DEX, que tiene una hidrofobicidad más alta que LD01- DEX, se incorporó más en LNP que LD01-DEX. Por el contrario, l D02-, 03-, 07-, 13-, 14-, 17-, 21-, y 24-DEX que fueron diseñadas para ser más hidrofóbicas se incorporaron eficientemente (91-100 %) en profármacos unidos a lípidos como se esperaba. Sin embargo, aunque la hidrofobicidad relativa es un componente esencial, no representa el único factor que influye en la incorporación del profármaco a las nanopartículas lipídicas. La menor eficiencia de atrapamiento observada para LD01-DEX o LD06-DEX en comparación con LD03-DEX o LD02-DEX puede atribuirse, al menos en parte, a la presencia de un grupo ionizable dentro del ligador de LD01-DEX, que actúa alterando la incorporación y disposición de los profármacos en las nanopartículas lipídicas.
De forma similar, los análisis por UHPLC de los profármacos basados en DTX mostraron una incorporación casi completa a las nanopartículas lipídicas (tabla 6). Esto se debe probablemente a la hidrofobicidad relativamente alta de estos compuestos.
Tabla 5. Eficacia de la incorporación del profármaco LD-DEX en nanopartículas lipídicas en función de la hidrofobicidad. El tamaño de las partículas se indica en nm. El índice de polidispersidad (PDI) se indica entre paréntesis.
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Tabla 6. Eficacia de la incorporación del profármaco LD-DTX en nanopartículas lipídicas. El tamaño de las partículas in i n nm. El ín i li i r i PDI in i nr r n i .
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Ejemplo 3: Efecto de la hidrofobicidad en la liberación del fármaco activo a partir de profármacos unidos a lípidos
La hidrofobicidad también puede ser suficiente para promover una encapsulación/retención eficaz, y lo ideal sería que no diera lugar a que el profármaco quedara sustancialmente incrustado o protegido de otro modo en el profármaco lipídico. El fármaco también puede distribuirse en los profármacos lipídicos para permitir el acceso al ligador biodegradable, la escisión del profármaco por enzimas intracelulares apropiadas y, en última instancia, la liberación del fármaco activo de los profármacos lipídicos. Los análisis por UHPLC mostraron que una incubación de 1 o 4 horas de LD03-DEX en plasma o PBS con esterasas aisladas producía una escisión progresiva del profármaco (figura 2). Como era de esperar, la escisión del profármaco fue suprimida por el calor, probablemente debido a la inactivación de la enzima.
Para comparar las tasas relativas de escisión de varios profármacos de DEX, se incubaron nanopartículas lipídicas que contenían profármacos durante 1 h en plasma a 37 °C, se extrajo el lípido mediante un método Bligh-Dyer & Folsch modificado y se sometió a análisis por UHPLC. Como puede observarse en la figura 3, LD01-DEX y LD03-DEX mostraron una escisión significativa durante este período de tiempo, mientras que, por el contrario, LD02-DEX prácticamente no mostró degradación. Como era de esperar, LD07-DEX, que contiene un ligador no degradable, tampoco mostró degradación. En la figura 4 se muestran más ejemplos de escisión de profármacos LD-DEX. Como era de esperar, los profármacos de LD-DEX con hidrofobicidades relativamente altas (como LD17-, LD21- y LD24-DEX) no fueron susceptibles de degradación en el plasma de ratón. En cambio, los profármacos LD13- y LD14-DEX, que tienen menor hidrofobicidad que LD17-DEX y mayor que LD03-DEX, se degradaron parcialmente en plasma. En la figura 5, se muestra la biodegradación de profármacos LD-DTX en nanopartículas lipídicas. Se formularon LD-DTX en varias formulaciones de nanopartículas lipídicas y se sometieron a incubación en plasma de ratón durante 1 h a 37 °C. A continuación, se extrajeron los lípidos mediante un método Bligh-Dyer & Folsch modificado y se sometieron a análisis UHPLC para su cuantificación. Como en el caso de los profármacos LD-DEX relativamente hidrofóbicos, los profármacos LD-DTX (LD10-, LD18-, LD22- y LD23-DTX) no se degradaron en gran medida tras 1 h de incubación en plasma de ratón.
Para demostrar que el fármaco activo puede liberarse del profármaco ligado a lípidos tras la digestión en el ligador biodegradable, se formularon profármacos representativos de las series LD-DEX y LD-DTX en nanopartículas lipídicas y se sometieron a incubación con esterasa purificada o plasma de ratón durante 24 h (figura 6 a figura 9). Como se muestra en las figura S 6 y 7, tanto el LD02-DEX como el LD03-DEX se degradaron progresivamente a lo largo de 24 horas. Como se ha demostrado con anterioridad, el LD03-DEX, que es menos hidrófobo que el LD02-DEX, se degradó a un ritmo más rápido que el LD02-DEX. Además, mientras que el pico del profármaco LD02 o LD03 disminuye con el tiempo, un pico correspondiente a la dexametasona (DEX) activa apareció en los cromatogramas tras 24 h de incubación en esterasa purificada o en plasma de ratón, lo que indica que la DEX activa se libera (figura 6 y figura 7). Del mismo modo, se observó docetaxel (DTX) activo en los cromatogramas de LD18- y LD22-DTX tras 24 h de incubación en esterasa o plasma (figura 8 y figura 9).
La hidrofobicidad también puede afectar a la disociación eficiente de las formulaciones lipídicas. Para detectar y cuantificar la disociación de los profármacos de las nanopartículas lipídicas, se incubaron en plasma humano durante 24 horas formulaciones que contenían profármacos unidos a lípidos y, a continuación, se sometieron a cromatografía de exclusión por tamaño para recuperar fracciones de nanopartículas lipídicas. Los lípidos se extrajeron de estas fracciones utilizando el método Bligh-Dyer & Folsch modificado y luego se analizaron por UHPLC para determinar la cantidad residual de profármaco (figura 10 y figura 11). En estos experimentos de disociación lipídica se utilizó plasma humano para eliminar la contribución de la degradación por esterasas, ya que se sabe que el plasma humano contiene una actividad carboxilesterasa sustancialmente menor que el plasma de ratón. Como se muestra en la figura 10, LD02-DEX (con un índice de hidrofobicidad mayor que LD03-DEX) se disoció de las nanopartículas lipídicas a un ritmo más lento que LD03-DEX. En la serie LD-DTX se observó un fenómeno similar. LD18-DTX (menos hidrófobo que LD22-DTX) se disoció de las nanopartículas lipídicas a un ritmo más rápido que LD22-DTX (figura 11).
Ejemplo 4: Diseño y síntesis de profármacos alternativos unidos a lípidos
Pueden sintetizarse profármacos lipídicos adicionales utilizando los métodos descritos en la presente, incluyendo profármacos que contengan otros fármacos activos como metotrexato (LD01-METH), tacrolimus (LD15-TAC), tofacitinib (LD01-TFN), cabazitaxel (LD01-CTX) y ruxolitinib (LD01-RXN). De los profármacos que se han fabricado y diseñado para ajustarse a estas “reglas” de diseño, se ha comprobado que todos se incorporan y retienen eficientemente en la LNP según lo previsto.
Ejemplo 5: Efectos antiinflamatorios de profármacos unidos a lípidos en modelos de ratón y celulares de estimulación inmunitaria
Para demostrar la utilidad de los profármacos LD-DEX, se utilizaron modelos de estimulación inmunitaria tanto en ratones como en células. En particular, los modelos experimentales de estimulación inmunitaria mediados por ácidos nucleicos son fáciles y proporcionan mediciones fiables de las respuestas inmunitarias.
Las macromoléculas basadas en ácidos nucleicos, como los oligonucleótidos antisentido para el silenciamiento génico, los ARN para la regulación/expresión génica o el ADN plasmídico para la expresión/edición génica son terapias prometedoras. Sin embargo, son potentes inductores de la respuesta inmunitaria innata en vertebrados [Sakurai et al. (2008) y Barbalat et al. (2011)]. Las nanopartículas basadas en lípidos o polímeros se utilizan a menudo como sistemas de administración para proteger estas macromoléculas de la degradación en fluidos biológicos y transportarlas al lugar de la enfermedad y al sitio intracelular de acción. A pesar de sus evidentes ventajas, estos sistemas provocan síntomas similares a los de la gripe e hipotensión debido a la activación de los receptores tipo Toll y al aumento de los niveles séricos de citoquinas en animales y pacientes, incluso en el caso de cargas útiles diseñadas para minimizar el potencial inmunoestimulador [Barros et al. (2012); Kumar et al. (2014); y Abe et al. (2011)]. Por lo tanto, la administración sistémica de nanopartículas lipídicas que contienen macromoléculas basadas en ácidos nucleicos como antisentido, ARNm y ADN plasmídico puede ser un modelo valioso para demostrar los efectos antiinflamatorios de los profármacos LD-DEX in vivo.
Los profármacos LD-DEX se formularon en nanopartículas lipídicas que contenían un oligonucleótido de ADN que contenía CpG inmunoestimulador (figura 12, figura 13 y figura 15) o ARNm (figura 14) utilizando una técnica de mezcla rápida como se indica en Materiales y métodos. Mediante esta técnica, las macromoléculas de ácidos nucleicos se incrustan en el espacio acuoso interno de las nanopartículas lipídicas. Todas las formulaciones tenían diámetros de partícula de aproximadamente 50 nm con índices de polidispersidad (PdI) ≤ 0,1 indicando que la incorporación del LD-DEX en la LNP no afectaba significativamente al tamaño de partícula ni a la homogeneidad. Los ratones inyectados con nanopartículas lipídicas que contenían oligonucleótido de ADN CpG inmunoestimulador (LNP-CpG) mostraron niveles elevados de TNFoí y k C/GRO en plasma (figura 12) 2 h después de la administración. Por el contrario, la incorporación de LD01-, LD02- y LD03-DEX en nanopartículas lipídicas dio lugar a una marcada reducción de los niveles de citoquinas en comparación con el LNP-CpG de control. Como era de esperar, el LD07-DEX que contenía un ligador no hidrolizable no mostró ningún efecto inmunosupresor. La figura 13 muestra que otros profármacos LD-DEX que contienen un ligador hidrolizable (LD13-, LD14-, LD17-, LD21- y LD24-DEX) fueron capaces de suprimir los niveles plasmáticos de citoquinas (TNFα, IL- 6 e IL-10) en comparación con el LNP-CpG de control. Estos resultados demostraron que la dexametasona activa se liberaba de profármacos unidos a lípidos para reducir las respuestas inmunitarias causadas por oligonucleótidos de ADN CpG inmunoestimuladores que contenían nanopartículas lipídicas.
En la figura 14 se muestra un modelo de ratón de estimulación inmunitaria mediada por ARNm. LD03-DEX se formuló en nanopartículas lipídicas que contenían un ARNm no modificado de 1,7 kb que codificaba la luciferasa de luciérnaga. Se extrajo sangre 2 h después de la inyección y se determinaron los niveles plasmáticos de citoquinas. Los animales tratados con LD03-DEX mostraron niveles significativamente reducidos de una serie de citoquinas plasmáticas en comparación con el grupo de control inyectado con LNP-ARNm que no contenía el profármaco LD-DEX. Estos resultados indicaron que se liberó dexametasona activa a partir de profármacos unidos a lípidos para reducir las respuestas inmunitarias causadas por ARNm que contenían nanopartículas lipídicas.
Se sabe que el ADN plasmídico (ADNp) estimula la inmunidad innata mediante la estimulación de los receptores TLR. Para demostrar los efectos inmunosupresores del LD-DEX in vivo, se realizó un modelo de ratón de estimulación inmunitaria mediada por ADNp (figura 15). En este modelo, el ADNp que codifica la luciferasa de luciérnaga se formuló en nanopartículas lipídicas con o sin LD03-DEX, y las formulaciones resultantes se inyectaron en ratones. Los niveles plasmáticos de citoquinas se determinaron 2 h después de la inyección. Al igual que en los otros modelos de estimulación inmunitaria descritos con anterioridad, la LNP de control sin LD03-DEX fue capaz de estimular la expresión de varias citoquinas. En cambio, la LNP que contenía LD03-DEX suprimió eficazmente los niveles de citoquinas, lo que sugiere que la dexametasona activa se escindió del profármaco ligado a lípidos para reducir las respuestas inmunitarias mediadas por el ADNp.
En la figura 16 se muestra un modelo celular de estimulación inmunitaria mediada por lipopolisacárido (LPS). Se formuló un subconjunto de profármacos LD-DEX en nanopartículas lipídicas. Los macrófagos RAW264.7 incubados con LPS y la formulación de control (elaborada sin ningún profármaco) mostraron una expresión elevada de la citoquina IL1p. En cambio, los profármacos LD03-, LD13-, LD14-, lD17-, LD21- y LD24-DEX que contenían nanopartículas lipídicas fueron capaces de reducir la expresión de IL1p en comparación con la formulación de control sin ningún profármaco. Como era de esperar, LD07-DEX mostró una expresión de IL1p a un nivel similar al control.
EJEMPLO 6: Efectos antiproliferativos de profármacos unidos a lípidos en células cancerosas
Los efectos antiproliferativos de los profármacos de LD-DTX se demostraron en células de cáncer de ovario OVCAR3. Los profármacos de LD-dTx (LD10-, LD18-, LD22- o LD23-DTX) se formularon en varios tipos de nanopartículas lipídicas, tal como se describe en Materiales y métodos. Las células se trataron con diversas concentraciones de docetaxel libre, profármacos de LD-DTX libres o formulaciones con o sin LD-DTX durante 48 h y se analizó la viabilidad celular mediante el ensayo MTT. Como se muestra en la figura 17, todos los profármacos de LD-DTX fueron capaces de suprimir la proliferación de células cancerosas. Como era de esperar, la cantidad de docetaxel libre necesaria para suprimir el crecimiento celular fue muy inferior a la de todos los demás artículos de ensayo. Curiosamente, el LD18-DTX mostró la IC50 (concentración necesaria para inhibir el crecimiento en un 50 %) más bajo en comparación con otros profármacos. Esto se debe probablemente al hecho de que el LD18-DTX es el menos hidrófobo, lo que permite que se disocie y/o que las esterasas accedan a él más fácilmente que a los demás profármacos.
Tabla 7: Valores de IC50 para LD10, LD18, LD22 y LD23
Figure imgf000053_0001
Los compuestos descritos en la presente pueden sintetizarse como se describe en la presente, utilizando métodos modificados descritos en la presente o mediante métodos conocidos por un experto en la técnica.
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Claims (8)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto, en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000055_0003
en donde:
A-Z es dexametasona, en donde Z es un átomo electronegativo seleccionado de N u O, de modo tal que la dexametasona se derivó de un fármaco que tiene la fórmula A-Z-H cuando Z ha perdido un H para unirse covalentemente a Y;
Y es CH2 , C(=O) o PO32-;
T5 son 0-6 átomos de carbono; y
L4 es una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, que tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH o tiene la Fórmula V
Figure imgf000055_0001
en donde,
T2 son 1-4 átomos de carbono;
T3 son 0-4 átomos de carbono;
T4 son 0-4 átomos de carbono;
J1 son -O-C(=O)-L1;
J2 es -COOH, -OH, -NH3+, -NH2 , -SH, -NMe2 o -NHMe; y
L1 es una cadena de carbono lineal o ramificada C9-C29, que opcionalmente tiene uno o más enlaces dobles C=C cis o trans y opcionalmente sustituida con OH.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula II:
Figure imgf000055_0004
en donde:
Y es CH2 , C(=O), o PO32-;
T1 son 0-4 átomos de carbono;
T2 son 1-3 átomos de carbono; y
J2 es -COOH, -OH, -NH3+, -NH2 , -NMe2, o -NHMe.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula III:
Figure imgf000055_0002
en donde:
Y es CH2 , C(=O) o PO32-; y
T5 son 0-4 átomos de carbono.
4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde Y es CH2 o C(=O); y T5 o T1 son 0 - 2 átomos de carbono.
5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de uno o más de los siguientes:
Figure imgf000056_0002
y
Figure imgf000056_0003
6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es el compuesto:
Figure imgf000056_0001
7. Una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un portador farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso en el tratamiento del cáncer, enfermedad autoinmune o infección.
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