ES2960199T3 - Tratamiento del cáncer usando campos electromagnéticos en combinación con otros regímenes de tratamiento - Google Patents

Abstract

Un fármaco anticancerígeno para usar en un método para matar o inhibir el crecimiento de células cancerosas en una región objetivo, comprendiendo el método las etapas simultáneas de tratar las células cancerosas con el fármaco anticancerígeno y aplicar un campo eléctrico a la región objetivo. durante un período de tiempo mientras las células cancerosas están siendo tratadas con el fármaco anticancerígeno, en donde el campo eléctrico está configurado para dañar las células cancerosas o inhibir el crecimiento de las células cancerosas pero dejando las células normales en la región objetivo sustancialmente ilesas, en donde las campo eléctrico es un campo eléctrico de CA que tiene una frecuencia entre 100 kHz y 500 kHz y una intensidad de campo en la región objetivo de al menos 1 V/cm. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Tratamiento del cáncer usando campos electromagnéticos en combinación con otros regímenes de tratamiento

Descripción

Como se describe en las Patentes de Estados Unidos N° 6.868.289 y 7.016.725, y en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642 y 2007/0225766, los campos eléctricos alternos de frecuencia intermedia (100-300 kHz) (denominados en la presente "campos TTF") dañan e inhiben el crecimiento de numerosos tipos de células cancerosas in vitro, así como una serie de enfermedades malignasin vivo.La eficacia del tratamiento se ve reforzada por la aplicación secuencial de campos de direcciones variables y por el uso de electrodos aislados especiales.

Los campos TTF actúan mediante dos mecanismos de acción: En primer lugar, alteran el proceso normal de polimerización-depolimerización de los microtúbulos del huso durante la mitosis. En segundo lugar, provocan una alteración física de las células hacia el final de la citocinesis al producir una fuerza unidireccional sobre todos los constituyentes intracelulares de cargas, polares y polarizables, empujándolos hacia el cuello estrecho entre las dos células hijas. Consultar Kirson, B.D., et al., Disruption of cancer cell replication by alternating electric fields, Cancer Res. 64(9): p. 3288-95.

Los fármacos y la radioterapia son enfoques más convencionales para tratar el cáncer. Un ejemplo es el cisplatino o cis-diammincdicloroplatino(II) (CDDP), que es un fármaco de quimioterapia a base de platino usado para tratar varios tipos de cáncer, incluyendo sarcomas, algunos carcinomas (por ejemplo, cáncer de pulmón de células pequeñas y cáncer de ovario), linfomas y tumores de células germinales. Fue el primer miembro de su clase, que ahora también incluye el carboplatino y el oxaliplatino. Otro ejemplo es el Paclitaxel, más conocido por el nombre comercial Taxol®, que pertenece a una familia más amplia de compuestos conocidos como taxanos. En la actualidad, el Paclitaxel se usa en el tratamiento del cáncer de mama, de ovario, de determinados cánceres de pulmón no microcíticos y del sarcoma de Kaposi.

La US-A-2004/0158288 divulga un método para tratar el tejido tumoral de un individuo aplicando a las células del tejido tumoral pulsos de campo eléctrico con una intensidad, una frecuencia de repetición y una anchura de pulso seleccionadas capaces de inducir la muerte celular mediada por endocitosis, tratando de este modo el tejido tumoral.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

El tratamiento quimioterapéutico de ciertos tipos de cáncer se combina con campos eléctricos alternos de baja intensidad y frecuencia intermedia que se sintonizan con un tipo particular de célula objetivo para inhibir el crecimiento de las células cancerosas. En muchos casos, la inhibición de la proliferación celular resultante es significativamente mayor que la inhibición obtenida mediante regímenes de tratamiento basados únicamente en fármacos.

La presente invención proporciona un fármaco anticancerígeno para su uso en la eliminación o inhibición del crecimiento de células cancerosas en una región objetivo de acuerdo con la reivindicación 1.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 representa una disposición de electrodos para aplicar campos TTF a un espécimenin vitro.

Las FIGS. 2A y 2B representan los resultados de los experimentos de calibración de citotoxicidad para Cisplatino y Taxol, respectivamente, en células MDA-231.

Las FIGS. 3A y 3B muestran los resultados de los experimentos de calibración de citotoxicidad para Cisplatino y Taxol, respectivamente, en células B16F10.

La FIG. 4 representa la proliferación celular medida en un experimento con células de cáncer de mama humano (MDA-231).

La FIG. 5 representa la proliferación celular medida en un experimento con células de melanoma de ratón (B16F10).

La FIG. 6 representa la recuperación de la tasa de proliferación celular 24 horas después de detener el tratamiento. La FIG. 7 representa los resultados experimentales que representan la dependencia de la frecuencia de la eficacia antiproliferativa de los campos TTF para las células de cáncer de mama humano (MDA-231).

La FIG. 8A representa la relación medida entre la intensidad de campos TTF y la tasa de proliferación celular para diferentes intensidades de campo para células MDA-231.

La FIG. 8B representa la curva de respuesta a la dosis de la línea celular MDA-231 sometida a concentraciones crecientes de Paclitaxel, solo y en combinación con campos TTF de diferentes intensidades.

La FIG. 8C representa la curva de respuesta a la dosis de la línea celular MDA-231 sometida a concentraciones crecientes de Doxorrubicina, sola y en combinación con campos TTF de diferentes intensidades.

La FIG. 8D representa la curva de respuesta a la dosis para la línea celular MDA-231 sometida a concentraciones crecientes de Ciclofosfamida, sola y en combinación con campos TTF de diferentes intensidades.

Las FIG. 9A, 9B y 9C representan los resultados de experimentos con células MDA-231 ER-negativas expuestas a campos TTF y a tres agentes quimioterapéuticos diferentes durante diferentes duraciones.

La FIG. 9D ilustra el impacto de la duración de la aplicación de los campos TTF cuando los campos TTF se usan solos y en combinación con ciclofosfamida.

La FIG. 10A representa la relación entre la intensidad de los campos TTF de 200 kHz (aplicados solos) y la tasa de proliferación celular del carcinoma pulmonar de células no pequeñas.

La FIG. 10B representa la curva de respuesta a la dosis para la línea celular H1299, sometida a concentraciones crecientes de Paclitaxel, y en combinación con campos TTF.

FIG. 11A es un gráfico isobolográfico para Paclitaxel a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células MDA-231.

La FIG. 11B es un gráfico isobolográfico para Paclitaxel a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células H1299.

La FIG. 11C es un gráfico isobolográfico para Doxorubicina a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células MDA-231.

FIG. 11D es un gráfico isobolográfico para Ciclofosfamida a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células MDA-231.

La FIG. 12 es un diagrama de bloques esquemático de un aparato para aplicar una electricidad de acuerdo con una realización ejemplar para destruir células selectivamente.

La FIG. 13 es un diagrama esquemático simplificado de un circuito eléctrico equivalente de electrodos aislados del aparato de la FIG. 12.

La FIG. 14 es una ilustración en sección transversal de un parche cutáneo que incorpora el aparato de la FIG. 5 y para su colocación en una superficie cutánea para el tratamiento de un tumor o similar.

La FIG. 15 es una ilustración en sección transversal de los electrodos aislados implantados dentro del cuerpo para tratar un tumor o similar.

FIGS. 16A-16D son ilustraciones en sección transversal de varias construcciones de los electrodos aislados del aparato de FIG. 12.

La FIG. 17 es una vista en alzado frontal en sección transversal parcial de dos electrodos aislados dispuestos alrededor de un torso humano para el tratamiento de un contenedor tumoral dentro del cuerpo, por ejemplo, un tumor asociado con el cáncer de pulmón.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS

Cuando se usaron como única modalidad de tratamiento, se observó que la eficacia terapéutica de los campos TTF era elevada y el índice terapéutico extremadamente alto (pocos o ningún efecto secundario); sin embargo, la duración del tratamiento era relativamente larga y las intensidades de campo requeridas eran relativamente altas. Para mejorar la eficacia del tratamiento, se probaron los efectos de combinar campos TTF con otras modalidades de tratamiento. Se planteó la hipótesis de que dicha combinación sería beneficiosa independientemente de si el mecanismo de acción de las dos (o más) modalidades era similar o diferente, y se realizaron experimentos para probar esta hipótesis. Los resultados de esos experimentos se describen a continuación. En cada uno de los experimentos se seleccionó un protocolo de tratamiento con campo TTF cuya eficacia se había demostrado anteriormente, y se comparó la eficacia de los campos TTF y de cada agente solo con la eficacia del tratamiento combinado con campos TTF y cada uno de los agentes.

PRIMER CONJUNTO DE EXPERIMENTOS

En un primer conjunto de experimentos, se aplicaron campos TTF (con la dirección del campo alternando entre dos direcciones) a células de cáncer de mama humano (MDA231) y melanoma de ratón (B16F10) en cultivo, con y sin un agente quimioterapéutico. Se seleccionaron como agentes el Taxol y el Cisplatino porque tienen mecanismos de acción diferentes.

Las células de MDA-231 y de B16F10 se obtuvieron de ATCC (USA). Ambos tipos de células se cultivaron en medio DMEM 10% de FCS (Biological Industries Ltd., Israel) en incubadora de CO2 (5% de CO2) a 37° C. La reanimación celular se realizó usando una solución de tripsina/EDTA (0,25%/0,02%, Biological Industries Ltd., Israel). Los experimentos se realizaron en placas de Petri de 35 mm (NUNC, USA). El cisplatino y el Taxol se obtuvieron de Sigma (USA). Se obtuvo un kit de ensayo de proliferación celular de Biological Industries Ltd., Israel.

Las células, cultivadas en matraces de cultivo celular de 25 cm<2>, se extrajeron usando una solución de tripsina/EDTA (0,25%/0,02%), se diluyeron con medio completo hasta alcanzar una concentración final de 75 x 10<3>células por ml. Se colocaron 200 pl de suspensión diluida en forma de gota en el centro de una placa Petri de 35 mm y se incubaron durante 24 horas. El número inicial de células se midió como la absorción de luz por el formazán producido por las células durante 2 horas usando el método XTT y se expresó como OD0. (XTT es 3'-[1-(fenil-aminocarbonil)-3,4-tetrazolio]-bis (4-mrtoxi-6-nitro)-benceno hidrato de ácido solfónico de sodio. El XTT es escindido a formazán (absorbe a 450-500 nm) por el sistema "succinato-tetrazolio reductasa" de la cadena respiratoria de la mitocondria y sólo es activo en células viables. Por lo tanto, la cantidad de colorante formazán (A450nm) formado se correlaciona directamente con el número de células metabólicamente activas en cultivo. El ensayo XTT se usa ampliamente para medir la proliferación celular en respuesta a factores de crecimiento, citoquinas, mitógenos, nutrientes, fármacos anticancerígenos y mediadores fisiológicos).

El medio de la placa Petri se sustituyó por medio fresco (3 ml con o sin Taxol o Cisplatino), se colocaron termoacopladores en el centro y la tapa de la placa se sustituyó por una con electrodos acoplados. Las muestras de células sin tratamiento con campo TTF se colocaron en la incubadora de CO2 a 37° C durante 24 horas, mientras que las muestras tratadas con campo TTF se colocaron en la incubadora de CO2 a 25° C, también durante 24 horas. La temperatura final de incubación de las muestras tratadas con campo TTF fue de 37 ± 0,7° C debido al calentamiento inducido por los campos TTF (medido por los termoacopladores insertados). Al final del tratamiento de 24 horas, el número final de células se midió como absorción por el formazán producido por las células durante 2 horas usando el método XTT y se expresó como DO1.

La tasa de proliferación celular se calculó como la relación entre el número final de células y el número inicial de células (OD1/OD0). Una relación OD1/OD0 de 1 significa que no hay aumento del número de células, es decir, que se ha producido una detención completa de la proliferación celular. El cambio en la tasa de proliferación del número de células se calculó como (OD1/OD<o>-1)<ex p er im en to>/(OD1/OD<o>-1)<co n tro l>.

Para evaluar la capacidad de recuperación de las células tratadas, las células se incubaron en medio normal tras la retirada del tratamiento durante 24 horas adicionales, y el número de células se midió como absorción por el formazán producido por las células durante 2 horas mediante el método XTT y se expresó como OD2. La tasa de proliferación celular OD2/OD1 se calculó como la relación entre el número final de células (tras el periodo de incubación adicional) OD2 por el número inicial de células (antes del periodo de incubación adicional) OD1.

Para las muestras que se sometieron a campos TTF, se generaron campos TTF sinusoidales bidireccionales de 200 kHz mediante un generador de forma de onda apropiado y un amplificador. La salida del amplificador se conmutó entre dos pares de salidas cada 250 mSeg, con las salidas conectadas a dos pares de electrodos, aislados por una cerámica de alta constante dieléctrica (por ejemplo, PMN-PT, EDO Corporation, Utah), colocados en la placa de Petri como se representa en la FIG. 1. Se midió que la intensidad del campo en el medio que rodea a las células era de aproximadamente 7 V/cm. Por tanto, cada par de electrodos paralelos se activó a un ciclo de trabajo del 50% (250 mSec ENCENDIDO - 250 mSec APAGADO) de tal manera que cuando un par estaba ENCENDIDO, el otro par estaba APAGADO.

Antes de realizar los experimentos principales, se llevaron a cabo experimentos de calibración para determinar las dosis de Cisplatino y Taxol que deberían usarse en los experimentos principales para los dos cultivos celulares representativos estudiados. El objetivo de estos experimentos de calibración era encontrar la dosificación del fármaco respectivo que, tomada sola (es decir, sin campos TTF), proporcionara una citotoxicidad tal que aproximadamente el 50% de las células murieran en el periodo de estudio de 24 horas. Las FIGS. 2A y 2B representan los resultados de estos experimentos de calibración para Cisplatino y Taxol, respectivamente, en células MDA-231; y las FIGS. 3A y 3B representan los resultados de estos experimentos de calibración para Cisplatino y Taxol, respectivamente, en células B16F10. Sobre la base del experimento de calibración, se eligió una concentración de fármaco de 15 jM para el experimento principal con Cisplatino y, y se eligió una concentración de fármaco de 0,05 |jM para el experimento principal con Taxol.

Una vez seleccionadas las concentraciones de fármacos (basándose en los experimentos de calibración), se realizaron los experimentos principales para determinar los efectos de (a) cada fármaco tomado solo; (b) campos TTF bidireccionales tomados solos; y (c) tanto fármacos como campos TTF bidireccionales.

La FIG. 4 representa los resultados del experimento principal sobre la proliferación de células de cáncer de mama humano (MDA-231), medida mediante el ensayo XTT. Puede observarse que el Taxol (0,05 jM ) y el Cisplatino (15 jM ) solos redujeron la proliferación celular en un 70% y un 63%, respectivamente, en comparación con el control. Los campos TTF solos (marcados como "exp.") redujeron la proliferación celular en un 89%. La combinación de campos TTF con Taxol (marcado "exp. con Taxol") o Cisplatino (marcado "exp. con Cisplatino") provocó un aumento de la detención de la proliferación. En el caso del Cisplatino se produjo una detención completa de la proliferación celular OD1 “ OD<o>, y cuando se usó Taxol en combinación con campos TTF se produjo una reducción absoluta del número de células, lo que indica que además de la detención completa de la proliferación (aproximadamente el 40% de las células murieron bajo la influencia del tratamiento combinado).

La FIG. 5 muestra los resultados del experimento principal sobre la proliferación de células de melanoma de ratón (B16F10), medida mediante el ensayo XTT. Puede observarse que el Taxol (0,05 jM ) (marcado como "control con Taxol") y el Cisplatino (15 jM ) (marcado como "control con Cisplatino") redujeron por sí solos la proliferación celular en menor medida que el efecto combinado de cualquiera de los dos fármacos en combinación con los campos TTF (marcados como "exp. con Taxol" y "exp. con Cisplatino", respectivamente).

La FIG. 6 representa la recuperación de la tasa de proliferación celular observada 24 horas después de la retirada del tratamiento, que puede servir como índice adicional de la potencia del tratamiento. La FIG. 6 contiene cuatro pares de barras. Dentro de cada par, la barra izquierda representa OD1/OD0, y la barra derecha representa OD2/OD1. Los resultados demuestran que hay una recuperación completa de la proliferación tras la eliminación del Taxol (ver la barra grande OD2/OD1 marcada como "control con Taxol"). En marcado contraste, no hay recuperación celular tras el tratamiento con campos TTF solo otras el tratamiento combinado con Taxol y campo TTF (ver las barras pequeñas de OD2/OD1 marcadas como "experimento sin Taxol" y "experimento con Taxol").

SEGUNDO CONJUNTO DE EXPERIMENTOS

En una segundo conjunto de experimentos, se aplicaron campos TTF (con la dirección del campo alternando entre dos direcciones) a células humanas de cáncer de mama (MDA-MB-231) y de carcinoma pulmonar de células no pequeñas (H1299) en cultivo, con y sin cada uno de los tres agentes quimioterapéuticos (Paclitaxel, Doxorrubicina y Ciclofosfamida) en varias concentraciones.

Las células de cáncer de mama humano (MDA-MB-231) y de cáncer de pulmón humano de células no pequeñas (H1299) se obtuvieron de ATCC (USA). Las células se cultivaron en medio DMEM 10% de FCS (Biological Industries Ltd., Israel) en una incubadora con 5% de CO2 a 37° C. Los agentes quimioterapéuticos: Taxol (Paclitaxel), adriamicina (Doxorrubicina) y ciclofosfamida se obtuvieron de Sigma, USA. La solución madre de Paclitaxel se preparó en DMSO (Sigma USA) a una concentración de 5 mM. Las soluciones madre de Doxorrubicina y Ciclofosfamida se prepararon en solución salina tamponada con fosfato a concentraciones de 8,5 mM y 3,0 M respectivamente. Todas las soluciones madre se almacenaron a -20° C y se diluyeron en medio poco antes de introducirlas en las células cultivadas.

En la disposición experimental, las células cultivadas en frascos de cultivo celular de 25 cm<2>se extrajeron usando una solución de tripsina/EDTA (0,25%/0,02%) (Biological Industries Ltd., Israel), diluida con los medios descritos anteriormente, hasta una concentración final de 100 x 10<3>células por ml. Se colocaron 200 pl de suspensión diluida en forma de gota en el centro de placas Petri de 35 mm (NUNC, USA). Después de incubar las placas durante 2 horas a 37° C, para permitir la fijación de las células, se añadieron 1,5 ml de medio completo y se incubaron las células durante 22 horas adicionales (preincubación).

Tras la preincubación, se estimó el número inicial de células usando el método XTT estándar (Kit de ensayo de proliferación celular, Biological Industries Ltd., Israel) midiendo la absorción de luz por el formazán, producido por las células durante un periodo de 2 horas, y expresado como OD0. A continuación, se sustituyó el medio de las placas Petri por medio fresco (3 ml), con o sin agente quimioterapéutico. La temperatura se midió continuamente mediante un termopar (Omega, Reino Unido) colocado en el centro de la placa. Como se ilustra en la FIG. 1, se colocaron en todas las placas de Petri 130 (incluyendo los controles) dos pares de electrodos 110, 120, aislados por una cerámica de alta constante dieléctrica (PMN-PT, EDO Corporation, Utah), conectados a un generador de forma de onda sinusoidal - generador de campo TTF (NovoCure Ltd., Haifa, Israel), para generar alternativamente campos eléctricos en dos direcciones diferentes alrededor de las células cultivadas 140.

Las placas de células de control que no recibieron tratamiento con campos TTF se colocaron en una incubadora de CO2 a 37° C durante 24 horas, mientras que las placas tratadas con campos TTF se colocaron en una incubadora de CO2 en la que la temperatura se controló de tal manera que la temperatura final de incubación de las placas tratadas fuera de 37±0,5° C. Al final de las 24 horas de tratamiento, el número de células se estimó de nuevo usando el método XTT y se expresó como OD1 (la absorción de luz por el formazán producido por las células durante un periodo de 2 horas). La tasa de proliferación celular se expresó como la relación OD1/OD0. La relación OD1/OD0 para las células no tratadas estaba en el intervalo de 2 ,0±0,2 para las dos líneas celulares estudiadas, es decir, el número de células se duplicó durante las 24 horas de incubación. La eficacia del tratamiento se expresa como el cambio en la tasa de proliferación celular, presentado como % del control, calculado para cada experimento mediante la siguiente ecuación:

(ODi/ODo)experimento * 100%/(ODi/ODo)control.

Para optimizar el efecto de campo, se generaron secuencialmente dos campos de dirección perpendicular en un patrón alterno conmutando la salida del amplificador entre los dos pares de electrodos cada 250 ms. La intensidad del campo eléctrico en el medio de cultivo se midió usando una sonda formada por dos alambres aislados de 0,25 mm de diámetro con puntas expuestas separadas 1 mm, que se sumergió en el medio de cultivo en el centro de la placa de Petri. Un amplificador diferencial de impedancia de alta entrada tradujo la amplitud de la diferencia de potencial alterna en una voltaje CC correspondiente que se registró. Observar que las intensidades de campo usadas a lo largo de esta memoria descriptiva se expresan en diferencia de amplitud de voltaje pico por centímetro de distancia (V/cm).

Se realizaron cuatro series diferentes junto con cada agente quimioterapéutico: control sin tratar, tratamiento con cualquiera de los campos TTF solos, tratamiento con uno de los agentes quimioterapéuticos solo y tratamiento combinado de campo TTF y quimioterapia.

Se usó el método de Chou y Talley para evaluar el efecto combinado de múltiples fármacos para las combinaciones de fármacos y campos TTF. La intensidad de campo TTF sustituyó a la variable clásica de concentración en los análisis. Se generaron curvas de respuesta a la dosis para campos TTF y cada fármaco por separado para determinar los gráficos de efecto mediano. Se usaron relaciones variables de concentraciones de fármacos - intensidades de campos TTF para determinar los índices de combinación (Cist):

CI = (C<a ,x>/Ix<x,a>) (B<b ,x>/IC<x,b>)

Donde: C<a>,<x>y C<b>,<x>son las concentraciones (intensidades) del tratamiento A y del tratamiento B usados en combinación para lograr un efecto de % de x predeterminado. IC<x>,<a>y IC<x>,<b>son las concentraciones (intensidades) correspondientes de cualquier agente individual para lograr el mismo efecto. En todos los casos, A representa campos TTF y B representa el fármaco quimioterapéutico.

Este análisis permite evaluar fármacos con diferentes mecanismos de acción. Un CI<1 denota sinergia (más que aditivo), un CI de 1 refleja suma (aditivo), y un CI >1 indica antagonismo (menos que aditivo).

Los análisis de isobologramas, para evaluar la naturaleza de la interacción de dos agentes, se realizaron de la siguiente manera: Las concentraciones (intensidades) de los agentes A y B requeridas para producir un efecto definido de un único agente de, por ejemplo, IC50, IC<x>,<a>e IC<x>,<b>, se representan en los ejes x eyen un gráfico de dos coordenadas, correspondientes a (C<a>, 0) y (0, C<b>), respectivamente. La línea que une estos dos puntos es la línea de aditividad. Las concentraciones (intensidades) de los dos agentes usados en combinación para proporcionar el mismo nivel seleccionado de efecto denotado como punto (C<a>, C<b>), se introducen en el mismo gráfico. La sinergia, la aditividad o el antagonismo se indican cuando el punto (C<a>, C<b>) se sitúa por debajo, sobre o por encima de la línea, respectivamente.

RESULTADOS PARA EL CÁNCER DE MAMA HUMANO (MDA-MB-231)

Como la sensibilidad de los diferentes tipos de células a la frecuencia de los campos TTF es diferente, se realizó una ronda inicial de experimentos para determinar qué frecuencia es más eficaz para cada tipo de célula objetivo. La FIG. 7 representa los resultados de esos experimentos iniciales, y muestra la dependencia de la frecuencia de la eficacia antiproliferativa de los campos TTF para células humanas de cáncer de mama (MDA-MD-231). Los datos indican un pico de eficacia a 150 kHz. Tener en cuenta que en los experimentos iniciales, la intensidad del campo TTF se mantuvo constante a 1,75 V/cm en todas las frecuencias. Cada punto representa valores medios ± SEM de 18-36 muestras, y todos los efectos fueron estadísticamente significativos. En la FIG. 7,* indica una pruebatde Student, P<0,01 en relación con el control, y ** indica una pruebatde Student, P<0,01 en relación con los experimentos a 100 y 200 kHz.

Luego se realizó una segunda ronda de experimentos para determinar la tasa de proliferación de las células MDA-MB-231 ER-negativas (como % del control) tras 24 horas de exposición a Paclitaxel, Doxorrubicina y Ciclofosfamida solos y en combinación con campos TTF a diferentes intensidades. Las FIGS. 8A-8D muestran los resultados de estos experimentos.

La FIG. 8A representa la relación medida entre la intensidad de campos TTF, y la tasa de proliferación celular a intensidades de campo de: 0,63, 1,25, 1,75 y 2,95 V/cm, cuando el campo se aplicó solo (es decir, sin ningún fármaco) a la frecuencia preseleccionada de 150 kHz. Con la intensidad de campo más baja de 0,63 V/cm no se produjo ningún cambio significativo en la tasa de proliferación (1,0±3,0%). A intensidades de campos TTF de 1,25, 1,75 y 2,95 V/cm se produjo una disminución significativa de la tasa de proliferación celular: 10±3%, 26±4% y 75±5%, respectivamente. La intensidad de campos TTF necesaria para la detención completa de la proliferación, es decir, una disminución del 50% en la tasa de proliferación, se calculó a partir de la pendiente de la curva para ser de 2,35 V/cm. En la FIG. 8A, los símbolos representan valores medios de 18 muestras obtenidas a partir de tres experimentos, y las barras representan valores medios ± SEM.

Tener en cuenta que en las FIGS. 8B - 8D, los puntos de datos con un círculo abierto "o" representan el fármaco solo; los cuadrados "■" representan el fármaco en combinación con campos TTF de 0,625 V/cm; los triángulos "A " representan el fármaco en combinación con campos TTF de 1,25 V/cm; y los círculos cerrados "•" representan el fármaco en combinación con campos TTF de 1,75 V/cm. Cada punto representa valores medios ± SEM de 18 a 36 mediciones replicadas.

La FIG. 8B representa la curva de respuesta a la dosis de la línea celular MDA-MB-231 sometida a concentraciones crecientes de Paclitaxel, en el intervalo de 0,01-500 nM, tanto solo como en combinación con campos TTF de diferentes intensidades. Cuando la concentración de Paclitaxel aumenta de 1,0 a 100 nM, se observa una disminución pronunciada de la tasa de proliferación celular en el tratamiento con sólo el fármaco. A concentraciones por encima de 100 nM, la tasa de proliferación se estabiliza en torno al nivel del 50% (es decir, detención completa de la proliferación celular sin inducción de muerte celular en este momento). La línea horizontal discontinua representa una tasa de proliferación celular del 60%. (Observar la relación inversa entre la tasa de proliferación celular y el efecto inhibidor del tratamiento, es decir, una tasa de proliferación celular del 40% equivale a una inhibición del 60%).

Puede observarse que los campos TTF de baja intensidad (0,625 V/cm), en combinación con Paclitaxel, tienen el mismo efecto sobre la tasa de proliferación celular que Paclitaxel solo en todas las concentraciones de Paclitaxel. Por el contrario, la combinación de Paclitaxel y campos TTF de intensidades más altas (1,25 y 1,75 V/cm) lleva a una disminución adicional estadísticamente significativa (ANOVA, P<0,05) de la tasa de proliferación celular. El aumento de la inhibición del crecimiento celular por Paclitaxel, con y sin campos TTF, se nivela a altas concentraciones de Paclitaxel.

La FIG. 8C representa la curva de respuesta a la dosis de la línea celular MDA-MB-231 sometida a concentraciones crecientes de Doxorrubicina, tanto sola como en combinación con campos TTF de diferentes intensidades. Para el tratamiento sólo con el fármaco, es evidente que la tasa de proliferación celular disminuye con el aumento de la concentración de Doxorrubicina hasta que se obtiene una detención completa (inhibición del 50%) a una concentración de aproximadamente 1 pM. La línea discontinua representa una disminución del 50% en la tasa de proliferación celular (es decir, una inhibición del 50%).

De nuevo, los campos TTF de baja intensidad (0,625 V/cm) no tuvieron un efecto significativo sobre la proliferación celular cuando se aplicaron tanto solos como en combinación con todas las concentraciones de Doxorrubicina. La combinación de campos TTF de mayor intensidad (1,25 y 1,75 V/cm) con Doxorrubicina da lugar a un efecto antiproliferación estadísticamente significativo (ANOVA, P<0,05) que se suma al obtenido por el fármaco solo. Esta inhibición aumentada se observa en todo el intervalo de concentraciones de Doxorrubicina usado en los experimentos. Las concentraciones de Doxorrubicina necesarias para alcanzar la detención completa de la proliferación celular (inhibición del 50%) durante el tratamiento combinado son 0,41pM y 0,22 pM para campos TTF de 1,25 V/cm y 1,75 V/cm respectivamente.

La FIG. 8D representa la curva de respuesta a la dosis de la línea celular humana MDA-MB-231 sometida a concentraciones crecientes de Ciclofosfamida, sola y en combinación con campos TTF de diferentes intensidades. En ausencia de campos TTF, las concentraciones de ciclofosfamida de hasta 10 mM no producen cambios significativos en la tasa de proliferación. Las concentraciones superiores provocan una caída precipitada de la curva de respuesta a la dosis, y la detención completa de la proliferación celular (inhibición del 50%) se observa a 30,0 mM de Ciclofosfamida. (La línea discontinua representa una inhibición del 50%.) Concentraciones más elevadas dan como resultado una reducción adicional del número de células.

El efecto combinado de Ciclofosfamida y campos TTF tiene un efecto antiproliferación adicional que se hace evidente incluso a las concentraciones más bajas usadas (estadísticamente significativo, ANOVA, P<0,05). Las concentraciones de Ciclofosfamida requeridas para alcanzar la detención completa de la proliferación celular (inhibición del 50%), durante el tratamiento combinado son: 15,2 mM, 10,0 mM y 6,2 mM para intensidades de campos TTF de 0,63 V/cm, 1,25 V/cm y 1,75 V/cm, respectivamente. Estos valores se comparan con los 30 mM para la detención completa de la proliferación celular con el fármaco solo.

Los resultados representados en las FIGS. 8A-D corresponden a la tasa de proliferación celular al cabo de 24 horas de tratamiento. Sin embargo, la inducción del daño celular puede tardar 3-4 días debido a la acumulación de las estructuras o moléculas dañadas y la inducción de la vía suicida celular - apoptosis, y necrosis. Por lo tanto, se realizó otro conjunto de experimentos para comparar el número de células viables en cultivo a lo largo de un periodo de 72 horas, cuando un conjunto de células se trató de manera continua durante todo el periodo de 72 horas con campos TTF solos, fármacos solos o fármacos en combinación con campos TTF, mientras que el otro se trató sólo durante 24 horas y después se incubó en condiciones normales durante 48 horas.

Las FIG. 9A, 9B y 9C muestran los resultados de estos experimentos de 72 horas con células MDA-MB-231 ER-negativas expuestas a campos TTF y a tres agentes quimioterapéuticos diferentes durante diferentes duraciones. En estas tres figuras, la línea discontinua representa el control no tratado, los símbolos abiertos representan el tratamiento de 24 horas y los símbolos rellenos representan el tratamiento de 72 horas, como se resume a continuación en la Tabla 1. Cada punto representa los valores medios ± SEM de 24 mediciones replicadas obtenidas a partir de 4 experimentos.

TABLA 1

La FIG. 9A representa los datos para Paclitaxel 12,5 nM y campos TTF 1,75 V/cm, tanto individualmente como combinados, para regímenes de tratamiento de 24 y 72 horas. Es evidente que cuando las células se tratan durante 24 horas con los campos TTF solos (o) o con Paclitaxel solo (□) se obtiene una reducción similar de la tasa de proliferación y del número de células correspondiente al final del tratamiento (aprox. 27±3 %, inferior al control).

Posteriormente, se observa una recuperación completa de la tasa de proliferación celular; el número de células duplicándose aproximadamente cada 24 horas de incubación. (A) 24-72 horas de tratamiento con campos TTF y Paclitaxel. Cuando se continúa el tratamiento durante un período adicional de 48 horas, en el caso de campos TTF solo (•) el número de células aumenta a un ritmo bajo (1,29 veces por 24h), mientras que en el caso de Paclitaxel solo (■) la proliferación se detiene completamente durante el segundo día de tratamiento y el número de células se reduce durante el tercer día. El tratamiento combinado con campos TTF y Paclitaxel durante 24 horas (A) y 72 horas (A ) lleva a la inducción de la muerte celular ya durante las primeras 24 horas, y el número de células sigue disminuyendo a lo largo del período de 72 horas, incluso en el caso (A) en que el tratamiento deja de aplicarse durante las últimas 48 horas.

La FIG. 9B representa los datos correspondientes a Doxorrubicina 0,1 pM y campos TTF 1,75 V/cm, tanto individualmente como combinados, para regímenes de tratamiento de 24 y 72 horas. Es evidente que el tratamiento durante 24 horas con la Doxorrubicina sola (□) lleva al final del tratamiento a una reducción del número de células del 26±4 % en comparación con el control. Durante las 48 horas siguientes, se observa un lento aumento del número de células. El tratamiento durante 72 horas sólo con campos TTF (•) muestra casi exactamente el mismo perfil de recuento celular. Por el contrario, durante un tratamiento de 72 horas de duración con Doxorrubicina (■) se produce una detención completa de la división celular al final del segundo día y una pequeña reducción del número de células después de 24 horas adicionales de tratamiento. El tratamiento combinado de células con campos TTF y Doxorrubicina (A) lleva a la detención completa de la división celular después de las primeras 24 horas. La inducción de la muerte celular se observa ya en este momento y continúa durante las 48 horas siguientes (incluso después de que el tratamiento no se esté aplicando). Un tratamiento de 72 horas de duración (A ) tiene un efecto similar al tratamiento de 24 horas (A).

La FIG. 9C representa los datos para Ciclofosfamida 20 mM y campos TTF 1,75 V/cm, tanto individualmente como combinados, para regímenes de tratamiento de 24 y 72 horas. Esta figura muestra que cuando las células se tratan con Ciclofosfamida sola durante 24 horas (□) se obtiene una reducción en el número de células (aprox. 27±2 %). La interrupción del tratamiento en este punto (después de 24 horas) lleva a una recuperación casi completa de la proliferación celular, de forma que su número se duplica aproximadamente cada 24 horas. El tratamiento sólo con Ciclofosfamida (■) o sólo con campos TTF (•) durante un período de 72 horas da como resultado un aumento lineal relativamente lento del número de células. El tratamiento combinado con tanto campos TTF como Ciclofosfamida durante 24 horas (A) o 72 horas (A ) lleva a una marcada inducción de la muerte celular. Después de 24 horas, el recuento de células es un 40±3% inferior en comparación con su número antes del inicio del tratamiento. Al final de las 72 horas se produce una pérdida casi completa de células.

La FIG. 9D ilustra el impacto de la duración de la aplicación de los campos TTF cuando se usan campos TTF de 1,75 V/cm solos (columnas abiertas) y cuando se usan campos TTF de 1,75 V/cm en combinación con Ciclofosfamida 30 mM (columnas sólidas). Los datos indican que cuando los campos TTF se usan solos, el tratamiento de corta duración de 12 horas o menos es ineficaz, pero el tratamiento de larga duración de 24 horas es eficaz (al igual que los tratamientos de mayor duración, como demuestran los círculos rellenos "•" en las FIG. 9A, 9B y 9C). Por el contrario, cuando los campos TTF se combinan con Ciclofosfamida (columnas rellenas), el tratamiento no es eficaz cuando los campos TTF se aplican durante 1 hora, pero se vuelve totalmente eficaz cuando los campos TTF se aplican durante 6 horas o más. Este comportamiento puede indicar una interacción específica entre los dos agentes (ver el análisis más adelante). Observar que en la FIG. 9D, cada columna representa valores medios ± SEM de 18 mediciones replicadas obtenidas de 3 experimentos. * P<0,01, pruebatde Student con respecto al control. ** P<0,01, pruebatde Student con respecto a la ciclofosfamida sola.

RESULTADOS PARA EL CARCINOMA PULMONAR DE CÉLULAS NO PEQUEÑAS (H1299)

Para el cáncer de pulmón humano de células no pequeñas (H1299). Las pruebas iniciales indicaron que los campos TTF son más eficaces a una frecuencia de 200 kHz. Como resultado, se seleccionaron 200 kHz para usarlos en experimentos posteriores para medir los efectos de la exposición durante 24 horas a Paclitaxel, Doxorrubicina y Ciclofosfamida solos y en combinación con campos TTF a diferentes intensidades.

La FIG. 10A representa la relación entre la intensidad de los campos TTF de 200 kHz (aplicados solos) y la tasa de proliferación de células de carcinoma pulmonar de células no pequeñas. Se observa que la proliferación celular disminuye a medida que aumenta la intensidad de los campos TTF. La intensidad de campos TTF requerida para la detención completa de la proliferación (una disminución del 50% en la tasa de proliferación celular), calculada a partir de la pendiente de la curva, es de 2,0 V/cm. En la FIG. 10A, los símbolos representan valores medios de 18 muestras obtenidas de tres experimentos y las barras representan ± SEM.

La FIG. 10B representa la curva de respuesta a la dosis para la línea celular H1299, sometida a concentraciones crecientes de Paclitaxel solo (o), y en combinación con campos TTF (•,▲), como % del control. Para el Paclitaxel solo, se observa una disminución pronunciada de la tasa de proliferación celular cuando las concentraciones de Paclitaxel aumentan de 1,0 a 200 nM. A concentraciones por encima de 200 nM, la tasa de proliferación alcanza el 55%, es decir, una detención casi completa de la proliferación celular. El efecto combinado de Paclitaxel y campos TTF de intensidades de 1,25 V/cm (A ) y 1,75 V/cm (•) lleva a una disminución adicional significativa de la tasa de proliferación celular a todas las concentraciones estudiadas. En las concentraciones más altas de Paclitaxel, cuando se combina con campos TTF, se induce la muerte celular. Este efecto no se observa cuando se usa Paclitaxel solo a concentraciones de hasta 500 nM. En esta figura, cada punto representa los valores medios ± SEM de 24 a 32 mediciones replicadas, y la línea discontinua representa el 60% de la tasa de proliferación celular (es decir, una inhibición del 40%).

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Los resultados experimentales demuestran que, en general, los campos TTF tienen efectos aditivos o sinérgicos con Paclitaxel, Doxorrubicina y Ciclofosfamida para el tratamiento del carcinoma de mama y el carcinoma pulmonar de células no pequeñas. Como se sabe que estos tres fármacos tienen diferentes mecanismos farmacológicos de acción, no es sorprendente que difieran los detalles de la naturaleza de su eficacia combinada con los campos TTF.

El Paclitaxel es uno de los agentes disruptores de microtúbulos más comúnmente usados para el tratamiento del cáncer de mama humano en fase avanzada. Mecánicamente, ejerce su acción anticancerígena principalmente alterando el desensamblaje de los microtúbulos, lo que como consecuencia da como resultado la detención mitótica y la muerte celular. Este mecanismo es similar al descrito para los campos TTF. Los resultados observados muestran que los campos TTF potencian el efecto antiproliferativo del Paclitaxel tanto en células de cáncer de mama humano como en células de cáncer de pulmón de células no pequeñas, como se ha explicado anteriormente en relación con las FIGS. 8 y 10.

En la Tabla 2 se resumen los índices de combinación (CI) obtenidos para células de cáncer de mama humano (MDA-MB-231) y de carcinoma pulmonar humano de células no pequeñas (H1299) tratadas con diferentes fármacos en combinación con campos TTF de diversas intensidades. Se observa que los efectos combinados de Paclitaxel, al igual que los demás agentes, varían desde la aditividad hasta el efecto sinérgico, como puede deducirse del hecho de que los valores de todos los Índices de Combinación calculados en la Tabla 2 son menores que 1.

TABLA 2

Observar que para el Paclitaxel se usaron los índices de combinación para una tasa de proliferación del 60% equivalente a un nivel de inhibición del 40% (CI40) en lugar del CI50, usado más comúnmente, porque los efectos se aproximan a la saturación por encima de este nivel.

Los efectos combinados de la combinación de campos TTF de diferentes intensidades con agentes quimioterapéuticos de diferentes concentraciones también pueden evaluarse mediante análisis isobolográfico. La FIG.

11A es un gráfico isobolográfico para Paclitaxel a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en el carcinoma de mama MDA-MB-231; y la FIG. 11B es un gráfico isobolográfico para Paclitaxel a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células de carcinoma pulmonar no pequeño H1299. El efecto sinérgico en las concentraciones bajas se demuestra por el hecho de que los puntos de datos caen por debajo de la línea isobolo. En las FIGS. 11Ay 11B, los dos puntos de los ejes representan los niveles de respuesta del 40% para Paclitaxel solo y campos TTF solo.

La FIG. 11C es un gráfico isobolográfico para Doxorrubicina a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células MDA-MB-231; y la FIG. 11D es un gráfico isobolográfico para Ciclofosfamida a diferentes concentraciones y campos TTF a diferentes intensidades en células MDA-MB-231. En las FIGS. 11C y 11D, los dos puntos de los ejes representan los niveles de respuesta del 50% para los fármacos solos y campos TTF solos respectivos. Observar que en los cuatro gráficos isobolográficos (FIGS. 11A-D), la línea continua es la isobola lineal, y los símbolos rellenos representan respuestas obtenidas con combinaciones.

A altas concentraciones de Paclitaxel e intensidades de campos TTF, la interacción en el cáncer de mama se aproxima a la aditividad. Pueden interpretarse estos resultados como una indicación de que los dos agentes afectan a la tubulina e interrumpen las funciones normales de los microtúbulos durante la mitosis de manera similar, pero en dos sitios o receptores diferentes. Esta conclusión es compatible con el hecho de que la inhibición de la proliferación por ambas concentraciones altas de Paclitaxel (FIG. 8B), y la aplicación combinada se aproximan asintóticamente a la detención completa de la proliferación. Se observó un modo similar de interacción y efecto sinérgico para Paclitaxel con el agente antitubulina, 2-Metoxiestradiol (2-MeO-E<2>) en células MDA-MB-231. El tratamiento combinado con campos TTF y Paclitaxel también muestra un modo sinérgico de interacción para las células de carcinoma pulmonar no pequeñas (H1299), pero a diferentes proporciones campos TTF/Paclitaxel en comparación con las células MDA-MB-231. Las células pulmonares muestran menor sensibilidad al Paclitaxel y mayor sensibilidad a los campos TTF cuando se aplican por separado. En combinaciones, se requieren campos TTF de menor intensidad con Paclitaxel de concentraciones más altas para conseguir efecto sinérgico entre estas dos modalidades de tratamiento.

La Doxorrubicina (Adriamicina) es un antibiótico que tiene un amplio espectro de actividad tanto en modelos tumorales experimentales como en enfermedades malignas humanas. La Tabla 2 indica que el efecto combinado de Doxorrubicina y campos TTF sobre las células MDA-MB-231 es aditivo (CI50 =1). Este resultado es compatible con el análisis isobolográfico de la combinación proporcionada en la FIG. 11C.

El efecto sinérgico más pronunciado se encontró para la combinación campos TTF - Ciclofosfamida en el amplio intervalo de concentraciones. El efecto sinérgico de la combinación Ciclofosfamida - campos TTF en la inhibición de la proliferación de las células MDA-MB-231 es evidente tanto en la Tabla 2 como en la FIG. 8D. Como se observa en la FIG. 11D, el efecto sinérgico aumenta con la concentración de Ciclofosfamida, una tendencia opuesta cuando se compara con la dependencia de la concentración de la combinación campos TTF - Paclitaxel para estas células.

Los resultados observados pueden atribuirse al mecanismo de acción de los campos TTF. De especial importancia es el hecho de que la exposición a campos TTF durante 12 horas o menos no tiene ningún efecto sobre la proliferación celular, mientras que una exposición similar, en combinación con Ciclofosfamida, acorta significativamente la duración mínima de exposición necesaria para lograr efectos significativos. El periodo de latencia observado antes de que se lleve a cabo la proliferación, puede deberse a una serie de mecanismos potenciales. La explicación más sencilla sería la acumulación con el tiempo de algún elemento o elementos activos. En tal caso, cabría esperar que el efecto aumentara con el tiempo con una cinética lineal o exponencial. Sin embargo, la cinética parece tener forma de S, es decir, al principio (durante 12 horas) el efecto es nulo o muy escaso, para luego cobrar impulso y alcanzar un estado estacionario a las 24 horas aproximadamente. El segmento inicial de este comportamiento es típico de los procesos cooperativos o multiobjetivo. No es probable que un retraso de 12 horas seguido de una cinética constante en un periodo adicional de 12 horas sea provocado por procesos de difusión. Sin embargo, tal comportamiento puede ser producto de un vínculo con el ciclo de división típico de 24 horas de las líneas celulares implicadas. Por tanto, si el efecto de campos TTF sobre la proliferación requiere la interrupción de dos procesos ("dos impactos") que se producen en dos momentos diferentes separados por 12 horas en el ciclo de división, se produciría el comportamiento observado. Dentro de este marco, el retraso de aproximadamente 12 horas es el resultado de la diferencia de tiempo entre los dos "puntos de impacto" en el ciclo. Como la división de las numerosas células implicadas no es sincrónica, se necesitaría un periodo adicional de 12 horas para afectar a todas las células en división.

Es posible que el efecto combinado único de los campos TTF con la Ciclofosfamida sea el resultado de que el agente químico, que está presente durante todo el periodo estudiado, altera uno de los dos "puntos de impacto" u objetivos, lo que hace que el efecto de los campos TTF sea un efecto regular de "impacto único". Lo anterior es consistente, por ejemplo, con que uno de los objetivos forme parte de G1 mientras que el otro forme parte de G2. Sin embargo, hay indicios de que los campos TTF afectan a la fase de polimerización-depolimerización de los microtúbulos del huso y la ciclofosfamida a la fase S. Por lo tanto, es razonable suponer que uno de los objetivos de campos TTF se encuentra en G2 mientras que el otro forma parte de la fase S, donde la Ciclofosfamida puede sustituir su acción.

Los resultados de los experimentos informados anteriormente apoyan la idea de que los campos TTF pueden usarse como complemento eficaz para potenciar los efectos de los agentes quimioterapéuticos usados actualmente. Esto puede proporcionar una combinación ideal que tenga una eficacia aditiva a sinérgica y potencialmente sin un aumento de la toxicidad. Además, como se observa en la FIG. 8 para la Ciclofosfamida, la combinación con campos TTF produce el mismo efecto terapéutico usando concentraciones de 1 mM, en comparación con 30 mM usando el fármaco solo. Lo más probable es que esta reducción de la dosis se traduzca en una disminución significativa de los efectos secundarios del fármaco. Un beneficio potencial adicional es el resultado del hecho de que los campos TTF son agentes físicos cuya acción no depende de receptores celulares específicos, por lo que pueden ser eficaces en una amplia variedad de enfermedades malignas. Esta amplia variedad de eficacia es similar a la de la irradiación, pero sin los graves efectos secundarios asociados con la radiación. Los beneficios potenciales previstos se basan en el hecho de que, en ensayos clínicos piloto, el tratamiento a largo plazo con campos TTF no se asoció a ningún efecto secundario adverso significativo.'

Además de los cinco fármacos particulares analizados anteriormente, los campos TTF pueden usarse junto con otros tratamientos anticancerígenos. Los ejemplos de otros tratamientos anticancerígenos que pueden combinarse con campos TTF incluyen, entre otros, cinco categorías generales:

La primera categoría es la cirugía, que incluye, entre otras, la cirugía abierta, la cirugía laparoscópica, la cirugía de resección mínima, la cirugía de citorreducción, la cirugía de resección completa, etc. La segunda categoría son las técnicas de ablación local, que incluyen, entre otras, la radiocirugía, la ablación por RF y los ultrasonidos focalizados. Para estas dos primeras categorías, los campos TTF pueden aplicarse antes de la cirugía o ablación para reducir el tamaño del tumor, y/o después de la cirugía o ablación para tratar cualquier resto del mismo. La tercera categoría es la radiación ionizante que usa varios regímenes de dosificación y focalización incluyendo, entre otros, la radiación de todo el órgano (por ejemplo, el cerebro), la radiación regional (por ejemplo, con forma de Y), la radiación focal, la radiación de dosis única, la radiación de dosis fraccionada y la radiación de dosis hiperfraccionada.

La cuarta categoría es la quimioterapia, que incluye pero no se limita a {a} Agentes alquilantes que actúan principalmente formando enlaces covalentes entre las bases del ADN, incluyendo pero no limitadas a Mostazas Nitrogenadas (por ejemplo, Ciclofosfamida), Aziridinas y Epóxidos (por ejemplo, Tiopeta), Sulfonatos de Alquilo (por ejemplo, Busulfano), Nitrosuro (por ejemplo, BCNU y CCNU), derivados de hidracina y triazina (por ejemplo, procarbazina y temozolomida); {b} Cisplatino y sus análogos que actúan formando aductos de ADN que llevan a la formación de filamentos de ADN, incluyendo pero no limitado a Carboplatino, Cisplatino y Oxaliplatino; {c} Antimetabolitos incluyendo pero no limitados a inhibidores del metabolismo del folato (por ejemplo, metotrexato, trimetrexato, Tomudex), 5-fluoropirimidinas (por ejemplo, 5-FU), Fluoropiramidinas orales (por ejemplo, Tegafur, Uracil, Capecitabina), análogos de la Necleosida (por ejemplo, Citarabina), Gemcitabina y 6-tiopurinas (por ejemplo, 6-MP y 6-TG); {d} Agentes interactivos de la topoisomerasa que afectan a los estados topológicos del ADN interfiriendo o modulando la escisión del ADN, el paso de cadenas y la religación incluyendo, entre otros, las epipodofilotoxinas (por ejemplo, Etopósido y Tenipósido), los análogos de la camptotequina, las antraciclinas (por ejemplo, Doxorrubicina, Daunorrubicina, Epirrubicina, Idarrubicina), Mitoxantrona y Losoxantrona, y Dactinomicina; {e} agentes antimicrotúbulos, que interfieren con la correcta polimerización/despolimerización de los microtúbulos incluyendo, entre otros, los alcaloides de Vinca (por ejemplo, Vincristina, Vinorelbina y Vinblastina), Taxanos (por ejemplo, Paclitaxel, Docetaxel) y Fosfato de Estramustina; y {f} existen numerosos agentes misceláneos que no pueden clasificarse en ninguno de los grupos anteriores incluyendo, entre otros, Suramina, Bleomicina, L-Asparaginasa y Amifostina.

La quinta categoría son las terapias biológicas, que incluyen pero no se limitan a {a} Inteferones; {b} Interleucina-2; {c} Terapias hormonales que incluyen pero no se limitan a Tamoxifeno, Toremifeno, Raloxifeno, Medroxiprogesterona y Megestrol, inhibidores de la Aromatasa, análogos de GNRH, Antiandrógenos, Dietilestilbesterol y Estradiol, y Octreotida; {d} agentes de diferenciación que catalizan la diferenciación de las células cancerosas a sus formas maduras (diferenciadas) y luego a la muerte celular programada incluyendo, entre otros, los retinoides (por ejemplo, el ácido transretinoico total), el trióxido de arsénico, los inhibidores de la histona desacetilasa, la vitamina D y las citoquinas; {e} anticuerpos monoclonales terapéuticos; y {f} agentes antiangiogénicos (por ejemplo, inhibidores de VEGF).

Además de los datosin vitroanalizados anteriormente, los experimentos preliminares en animales vivos con tumores VX2 tratados con una combinación de Doxil y campos TTF muestran una reducción significativa de la tasa de crecimiento tumoral de la terapia combinación en comparación con el tratamiento con Doxil solo o campos TTF solos. Como los campos TTF no muestran toxicidades sistémicas, parece que pueden aplicarse a los pacientes antes, durante y/o después de cualquier otro tratamiento anticancerígeno para combatir el cáncer usando dos modalidades diferentes. Las dosificaciones, la potencia y el calendario de los varios tratamientos pueden modificarse para optimizar los resultados deseados. Tener en cuenta que el régimen de combinación más beneficioso puede diferir considerablemente dependiendo del tipo de cáncer tratado, el estadio exacto de la enfermedad y el tipo de tratamiento anticancerígeno usado; debería ser relativamente sencillo determinar experimentalmente el mejor régimen de combinación. Los campos TTF también pueden aplicarse junto con más de uno de los otros enfoques anticancerígenos.

La FIG. 12 es un ejemplo de un aparato que es adecuado para su uso en el tratamiento de pacientes vivos con campos TTF y terapia farmacéutica combinados, y puede usarse en combinación con cualquier mecanismo convencional de administración de fármacos (no mostrado) para implementar el campo TTF y la terapia farmacéutica combinados. La FIG. 12 es un diagrama esquemático simple del aparato electrónico 200 que ilustra los principales componentes del mismo. El aparato electrónico 200 genera las formas de onda eléctrica deseadas. El aparato 200 incluye un generador 210 y un par de cables conductores 220 que están conectados en un extremo de los mismos al generador 210. Los extremos opuestos de los cables 220 están conectados a conductores aislados 230 que son activados por las señales eléctricas (por ejemplo, formas de onda). Los conductores aislados 230 también se denominan en lo sucesivo aislantes 230. Opcionalmente y de acuerdo con otra realización ejemplar, el aparato 200 incluye un sensor de temperatura 240 y una caja de control 250 que se añaden para controlar la amplitud del campo eléctrico generado para no generar un calentamiento excesivo en la zona tratada.

El generador 210 genera una forma de onda de voltaje alterno a frecuencias comprendidas en el intervalo de aproximadamente 50 KHz a aproximadamente 500 KHz (preferiblemente de aproximadamente 100 KHz a aproximadamente 300 KHz). Los voltajes requeridos son tales que la intensidad del campo eléctrico en el tejido a tratar está en el intervalo de aproximadamente 0,1 V/cm a aproximadamente 10 V/cm, y preferiblemente entre aproximadamente 1 V/cm y aproximadamente 5 V/Cm. Para lograr este campo, la diferencia de potencial real entre los dos conductores en los aislantes 230 se determina por las impedancias relativas de los componentes del sistema, como se describe a continuación.

Cuando se incluye la caja de control 250, ésta controla la salida del generador 210 para que permanezca constante al valor predeterminado por el usuario o la caja de control 250 establece la salida en el valor máximo que no provoca un calentamiento excesivo, o la caja de control 250 emite una advertencia o similar cuando la temperatura (detectada por el sensor de temperatura 240) supera un límite preestablecido.

Los conductores 220 son conductores aislados estándar con una pantalla metálica flexible, preferiblemente conectada a tierra para evitar la propagación del campo eléctrico generado por los conductores 220. Los aislantes 230 tienen formas y posiciones específicas para generar un campo eléctrico de la configuración, dirección e intensidad deseadas en el volumen objetivo y sólo ahí para focalizar el tratamiento.

Las especificaciones del aparato 200 en su conjunto y de sus componentes individuales se ven influidas en gran medida por el hecho de que, a la frecuencia de los campos TTF (50 KHz-500 KHz), los sistemas vivos se comportan de acuerdo con sus propiedades "óhmicas", más que con sus propiedades dieléctricas. Los únicos elementos del aparato 200 que se comportan de manera diferente son los aislantes de los aislantes 230 (ver las FIGS.

14-15). Los aislantes 200 consisten en un conductor en contacto con un dieléctrico que está en contacto con el tejido conductor, formando por tanto un condensador.

Los detalles de la construcción de los aislantes 230 se basan en su comportamiento eléctrico que puede entenderse a partir de su circuito eléctrico simplificado cuando están en contacto con el tejido, como se ilustra de manera general en la FIG. 13. En la disposición ilustrada, la caída de potencial o la distribución del campo eléctrico entre los diferentes componentes viene determinada por su impedancia eléctrica relativa, es decir, la fracción del campo en cada componente viene dada por el valor de su impedancia dividido por la impedancia total del circuito. Por ejemplo, la caída de potencial sobre el elemento A Va =A/(A+B+C+D+E). Así, para CC o CA de baja frecuencia, prácticamente toda la caída de potencial está en el condensador (que actúa como aislante). Para frecuencias relativamente muy altas, el condensador es prácticamente un cortocircuito y, por tanto, prácticamente todo el campo se distribuye en los tejidos. En las frecuencias de los campos TTF (por ejemplo, de 50 KHz a 500 KHz), que son frecuencias intermedias, la impedancia de la capacitancia de los condensadores es dominante y determina la distribución del campo. Por lo tanto, para aumentar la caída de voltaje efectiva a través de los tejidos (intensidad de campo), hay que disminuir la impedancia de los condensadores (es decir, aumentar su capacitancia). Esto puede lograrse aumentando el área efectiva de las "placas" del condensador, disminuyendo el grosor del dieléctrico o usando un dieléctrico con una constante dieléctrica elevada.

Para optimizar la distribución del campo, los aislantes 230 se configuran de forma diferente dependiendo de la aplicación en la que se vayan a usar los aislantes 230. Hay dos modos principales de aplicar los campos TTF. En primer lugar, los campos TTF pueden aplicarse mediante aislantes externos y, en segundo lugar, los campos TTF pueden aplicarse mediante aislantes internos.

Los campos TTF que se aplican mediante aislantes externos pueden ser de tipo local o de amplia distribución. El primer tipo incluye, por ejemplo, el tratamiento de tumores cutáneos y el tratamiento de lesiones cercanas a la superficie de la piel. La FIG. 14 ilustra una realización ejemplar en la que los aislantes 230 están incorporados en un parche cutáneo 300. El parche cutáneo 300 puede ser un parche flexible autoadhesivo con uno o más pares de aislantes 230. El parche 300 incluye el aislante interno 310 (formado de un material dieléctrico) y el aislante externo 260 y se aplica a la superficie de la piel 301 que contiene un tumor 303 ya sea en la superficie de la piel 301 o ligeramente por debajo de la superficie de la piel 301. El tejido se indica generalmente en 305. Para evitar que la caída de potencial a través del aislamiento interno 310 domine el sistema, el aislamiento interno 310 debe tener una capacidad relativamente alta. Esto puede lograrse mediante una gran superficie; sin embargo, esto puede no ser deseado ya que resultará en la propagación del campo sobre un área grande (por ejemplo, un área mayor que la requerida para tratar el tumor). Alternativamente, el aislamiento interno 310 puede hacerse muy fino y/o el aislamiento interno 310 puede ser de una constante dieléctrica alta. Como la resistencia de la piel entre los electrodos (marcados como A y E en la FIG. 13) es normalmente significativamente mayor que la del tejido (marcado como C en la FIG. 13) debajo de ella (1-10 KQ frente a 0,1-1 KQ), la mayor parte de la caída de potencial más allá de los aislantes se produce ahí. Para acomodar estas impedancias (Z), las características del aislamiento interno 310 (marcadas como B y D en la FIG. 13) deben ser tales que tengan impedancia preferiblemente por debajo de 100 KQ a las frecuencias de los campos TTF (por ejemplo, 50 KHz a 500 KHz). Por ejemplo, si se desea que la impedancia sea de aproximadamente10 K Ohmios o menos, de manera que más del 1% del voltaje aplicado caiga sobre los tejidos, para aislantes con un área superficial de 10 mm2, a frecuencias de 200 KHz, la capacidad debería ser del orden de 10-10 F., lo que significa que usando aislamientos estándar con una constante dieléctrica de 2-3, el espesor de la capa aislante 310 debería ser de aproximadamente 50-100 micras. Un campo interno 10 veces más fuerte se obtendría con aislamientos con una constante dieléctrica de aproximadamente 20-50.

El uso de un material aislante con una constante dieléctrica alta aumenta la capacitancia de los electrodos, lo que da como resultado una reducción de la impedancia de los electrodos a la señal de CA que es aplicada por el generador 1 (mostrado en la FIG. 12). Como los electrodos A, E están conectados en serie con el tejido objetivo C, como se muestra en la FIG. 13, esta reducción de la impedancia reduce la caída de voltaje en los electrodos, de tal manera que una mayor parte del voltaje de CA aplicado aparece a través del tejido C. Como una mayor parte del voltaje aparece a través del tejido, el voltaje aplicado por el generador 1 puede reducirse ventajosamente para una intensidad de campo dada en el tejido.

La intensidad de campo deseada en el tejido tratado se sitúa preferiblemente entre aproximadamente 0,1 V/cm y aproximadamente 10 V/cm, y más preferiblemente entre 2 V/cm y 3 V/cm aproximadamente o entre aproximadamente 1 V/cm y aproximadamente 5 V/cm. Si la constante dieléctrica usada en el electrodo es suficientemente alta, la impedancia de los electrodos A, E desciende al mismo orden de magnitud que la combinación en serie de la piel y el tejido B, C, D. Un ejemplo de material adecuado con una constante dieléctrica extremadamente alta es CaCu3Ti4O12, que tiene una constante dieléctrica de aproximadamente 11.000 (medida a 100 kHz). Cuando la constante dieléctrica es tan alta, pueden obtenerse campos útiles usando un voltaje de generador del orden de unas pocas decenas de voltios.

Como la capa aislante delgada puede ser muy vulnerable, etc., el aislamiento puede sustituirse por materiales aislantes de muy alta constante dieléctrica, como el dióxido de titanio (por ejemplo, rutilo), cuya constante dieléctrica puede alcanzar valores de aproximadamente 200. Hay una serie de materiales diferentes que son adecuados para su uso en la aplicación prevista y tienen constantes dieléctricas altas. Por ejemplo, algunos materiales incluyen: niobato de litio (LiNbO3), que es un cristal ferroeléctrico y tiene una serie de aplicaciones en dispositivos ópticos, piroeléctricos y piezoeléctricos; el granate de hierro itrio (YIG) es un cristal ferromagnético y dispositivos magneto-ópticos, por ejemplo, pueden realizarse aisladores ópticos a partir de este material; el titanato de bario (BaTiO3) es un cristal ferromagnético con un gran efecto electroóptico; el tantalato de potasio (KTaO3) que es un cristal dieléctrico (ferroeléctrico a baja temperatura) y tiene muy bajas pérdidas por microondas y sintonizabilidad de la constante dieléctrica a baja temperatura; y el tantalato de litio (LiTaO3), que es un cristal ferroeléctrico con propiedades similares a las del niobato de litio y tiene utilidad en dispositivos electroópticos, piroeléctricos y piezoeléctricos. También pueden utilizarse cerámicas aislantes con constantes dieléctricas elevadas, como una cerámica hecha de una combinación de niobato de plomo y magnesio y titanato de plomo. Se entenderá que los materiales ejemplares mencionados anteriormente pueden usarse en combinación con el presente dispositivo cuando se desee usar un material que tenga una constante dieléctrica elevada.

También hay que tener en cuenta otro factor que afecta a la capacidad efectiva de los aislantes 230, concretamente la presencia de aire entre los aislantes 230 y la piel. Dicha presencia, que no es fácil de evitar, introduce una capa de un aislante con una constante dieléctrica de 1 ,0, factor que disminuye significativamente la capacidad efectiva de los aislantes 230 y neutraliza las ventajas del dióxido de titanio (rutilo), etc. Para superar este problema, los aislantes 230 pueden conformarse de manera que se ajusten a la estructura del cuerpo y/o (2) puede añadirse a la estructura un relleno intermedio 270 (como se ilustra en la FIG. 16C), como un gel, que tenga una alta conductancia y una alta constante dieléctrica efectiva. La conformación puede ser preestructurada (ver FIG. 16A) o el sistema puede ser lo suficientemente flexible para que la conformación de los aislantes 230 pueda lograrse fácilmente. El gel puede ser contenido en su lugar teniendo un borde elevado como se representa en las FIGS. 16C y 16C'. El gel puede estar hecho de hidrogeles, gelatinas, agar, etc., y puede tener sales disueltas en él para aumentar su conductividad. Las FIGS. 16A-16C' ilustran varias configuraciones ejemplares para los aislantes 230. El grosor exacto del gel no es importante, siempre y cuando tenga el grosor suficiente para que la capa de gel no se seque durante el tratamiento. En una realización ejemplar, el espesor del gel es de aproximadamente 0,5 mm a aproximadamente 2 mm. Preferiblemente, el gel tiene una alta conductividad, es pegajoso y biocompatible durante largos periodos de tiempo. Un gel adecuado es el hidrogel AG603, disponible de AmGel Technologies, 1667 S. Mission Road, Fallbrook, CA 92028-4115, Estados Unidos.

Para lograr las características deseables de los aislantes 230, el recubrimiento dieléctrico de cada uno de ellos debe ser muy delgado, por ejemplo de entre 1-50 micras. Como el recubrimiento es tan delgado, los aislantes 230 pueden dañarse mecánicamente con facilidad o sufrir una ruptura dieléctrica. Este problema puede superarse añadiendo una característica protectora a la estructura del aislante para proporcionar la protección deseada contra tales daños. En la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642 se describen algunos ejemplos de características protectoras adecuadas.

Sin embargo, la capacidad no es el único factor a tener en cuenta. Los dos factores siguientes también influyen en la construcción de los aislantes 230. La rigidez dieléctrica de la capa aislante interna 310 y las pérdidas dieléctricas que se producen cuando se somete a los campos TTF, es decir, la cantidad de calor generado. La rigidez dieléctrica del aislamiento interno 310 determina a qué intensidad de campo el aislamiento se "cortocircuitará" y dejará de actuar como aislamiento intacto. Típicamente, los aislamientos, como los plásticos, tienen valores de resistencia dieléctrica de aproximadamente 100V por micra o más. Como una constante dieléctrica alta reduce el campo dentro del aislante interno 310, una combinación de una constante dieléctrica alta y una resistencia dieléctrica alta proporciona una ventaja significativa. Esto puede lograrse usando un solo material que tenga las propiedades deseadas o puede lograrse mediante una doble capa con los parámetros y el grosor correctos. Además, para disminuir aún más la posibilidad de que la capa aislante 310 falle, todos los bordes afilados de la capa aislante 310 deben ser eliminados como redondeando las esquinas, etc., como se ilustra en la FIG. 16D usando técnicas convencionales.

La FIG. 15 ilustra un segundo tipo de tratamiento mediante los aislantes 230, concretamente la generación de campos eléctricos mediante aislantes internos 230. Un cuerpo en el que se implantan los aislantes 230 se indica generalmente en 311 e incluye una superficie cutánea 313 y un tumor 315. En esta realización, los aislantes 230 pueden tener la forma de placas, alambres u otras formas que pueden insertarse subcutáneamente o en una localización más profunda dentro del cuerpo 311 para generar un campo apropiado en la zona objetivo (tumor 315).

También se apreciará que el modo de aplicación de los aislantes no se limita a las descripciones anteriores. En el caso de tumores en órganos internos, por ejemplo, hígado, pulmón, etc., la distancia entre cada miembro del par de aislantes 230 puede ser grande. Los pares pueden incluso colocarse en lados opuestos del torso 410, como se ilustra en la FIG. 17. La disposición de los aislantes 230 en la FIG. 17 es particularmente útil para tratar un tumor 415 asociado con cáncer de pulmón o tumores gastrointestinales. En esta realización, los campos TTF se extienden en una amplia fracción del cuerpo. Tener en cuenta también que, además de las realizaciones de electrodos externos descritas anteriormente, el tratamiento combinado de campo TTF y fármaco puede implementarse usando las realizaciones de sonda interna descritas en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642.

Para evitar el sobrecalentamiento de los tejidos tratados, es necesaria una selección de los materiales y los parámetros de campo. El material de aislamiento aislante debe tener unas pérdidas dieléctricas mínimas en los intervalos de frecuencia que se van a usar durante el proceso de tratamiento. Este factor puede tenerse en cuenta al elegir las frecuencias particulares para el tratamiento. Lo más probable es que el calentamiento directo de los tejidos esté dominado por el calentamiento debido al flujo de corriente (dado por el producto I*R). Además, el aislante (electrodo aislado) 230 y sus alrededores deben estar hechos de materiales que faciliten las pérdidas de calor y su estructura general también debe facilitar las pérdidas de cabeza, es decir, estructuras mínimas que bloqueen la disipación de calor a los alrededores (aire), así como una alta conductividad térmica. El uso de electrodos más grandes también minimiza la sensación local de calentamiento, ya que esparce la energía que se transfiere al paciente sobre un área superficial mayor. Preferiblemente, el calentamiento se minimiza hasta el punto de que la temperatura de la piel del paciente nunca supere aproximadamente 39° C.

Otra manera de reducir el calentamiento consiste en aplicar el campo al tejido que se está tratando intermitentemente, aplicando un campo con un ciclo de trabajo de entre aproximadamente el 20% y aproximadamente el 50% aproximadamente, en lugar de usar un campo continuo. Por ejemplo, para lograr un ciclo de trabajo del 33%, el campo se encendería repetidamente durante un segundo y luego se apagaría durante dos segundos. Los experimentos preliminares han demostrado que la eficacia del tratamiento usando un campo con un ciclo de trabajo del 33% es aproximadamente la misma que la de un campo con un ciclo de trabajo del 100%. En realizaciones alternativas, el campo podría encenderse durante una hora y luego apagarse durante una hora para conseguir un ciclo de trabajo del 50%. Por supuesto, la conmutación a un ritmo de una vez por hora no ayudaría a minimizar el calentamiento a corto plazo. Por otro lado, podría proporcionar al paciente un bienvenido descanso del tratamiento.

También se apreciará que el presente aparato puede incluir además un dispositivo para rotar los campos TTF con respecto al tejido vivo. Por ejemplo y de acuerdo con una realización, el potencial eléctrico alterno que se aplica al tejido que se está tratando se hace rotar con respecto al tejido usando dispositivos convencionales, como un dispositivo mecánico que, al activarse, hace rotar varios componentes del presente sistema.

Los campos TTF pueden aplicarse a diferentes pares de electrodos aislados 230 de manera consecutiva para variar la dirección de los campos t Tf que recorren la región objetivo, como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642. El cambio de dirección del campo puede implementarse de manera escalonada o continua, también como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642.

Como se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2005/0209642, puede ser ventajoso aplicar una distribución de diferentes frecuencias a la población. Por ejemplo, los experimentos indican que usar dos frecuencias de 170 kHz y 250 kHz para destruir una población de células de glioma sería más eficaz que usar una única frecuencia de 200 kHz. Cuando se usa más de una frecuencia, las varias frecuencias pueden aplicarse secuencialmente en el tiempo. Por ejemplo, en el caso del glioma, pueden aplicarse frecuencias de campo de 100, 150, 170, 200, 250 y 300 kHz durante el primer, segundo, tercer, cuarto, quinto y sexto minutos de tratamiento, respectivamente. Ese ciclo de frecuencias se repetiría entonces durante cada uno de los seis minutos sucesivos de tratamiento. Alternativamente, la frecuencia del campo puede barrerse de forma continua de 100 a 300 kHz. Opcionalmente, este ciclo de frecuencias puede combinarse con los cambios direccionales descritos anteriormente.

En una realización alternativa, se aplica a los electrodos una señal que contiene dos o más componentes de frecuencia simultáneamente (por ejemplo, 170 kHz y 250 kHz) para tratar una población de células que tiene una distribución de tamaños. Las distintas señales se sumarán por superposición para crear un campo que incluya todos los componentes de frecuencia aplicados.

Como se usa en la presente, el término "tumor" se refiere a un tejido maligno que comprende células transformadas que crecen de manera incontrolada. Además, es posible controlar el crecimiento incontrolado asociado a afecciones no malignas o premalignas, y otros trastornos que implican un crecimiento celular o tisular inadecuado mediante la aplicación de un campo eléctrico al tejido que experimenta un crecimiento inadecuado.

Además, la proliferación indeseable de fibroblastos y células endoteliales asociada a la curación de heridas, que lleva a la formación de cicatrices y queloides tras una intervención quirúrgica o lesión, y la reestenosis tras una angioplastia o la colocación de endoprótesis coronarias pueden inhibirse mediante la aplicación de un campo eléctrico. Su naturaleza no invasiva lo hace especialmente deseable para este tipo de afecciones, sobre todo para prevenir el desarrollo de cicatrices y adherencias internas, o para inhibir la reestenosis de arterias coronarias, carótidas y otras arterias importantes.

Por tanto, se proporciona un método eficaz y simple para destruir selectivamente las células en división, por ejemplo, células tumorales y organismos parásitos, mientras que las células u organismos que no se dividen no se ven afectados por la aplicación del método en tejidos vivos que contienen ambos tipos de células u organismos. Por tanto, a diferencia de muchos de los métodos convencionales, las células u organismos normales no resultan dañados. Además, la discriminación no se basa en el tipo de célula (por ejemplo, células de distintos tamaños) y, por lo tanto, puede usarse para tratar cualquier tipo de tamaño con un amplio espectro de características, incluyendo dimensiones variables.

Mientras la invención ha sido mostrada y descrita particularmente con referencia a realizaciones preferidas de la misma, los expertos en la técnica entenderán que pueden realizarse varios cambios en la forma y los detalles sin apartarse del alcance de la invención que está definida por las siguientes reivindicaciones.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un fármaco anticancerígeno para su uso en un método para destruir o inhibir el crecimiento de células cancerígenas en una región objetivo, el método comprendiendo los pasos simultáneos de tratar las células cancerígenas con el fármaco anticancerígeno y aplicar un campo eléctrico a la región objetivo durante un periodo de tiempo mientras las células cancerígenas están siendo tratadas con el fármaco anticancerígeno, en donde el campo eléctrico está configurado para dañar las células cancerígenas o inhibir el crecimiento de las células cancerígenas, pero dejando las células normales en la región objetivo sustancialmente ilesas, en donde el campo eléctrico es un campo eléctrico de

CA con una frecuencia entre 100 kHz y 500 kHz y una intensidad de campo en la región objetivo de por lo menos 1 V/cm.

2. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el campo eléctrico de CA se aplica en por lo menos dos direcciones diferentes en una secuencia alterna aplicando el campo eléctrico de CA entre dos conjuntos diferentes de electrodos (110 , 120).

3. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende un fármaco quimioterapéutico, opcionalmente el fármaco comprende un fármaco quimioterapéutico basado en platino.

4. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende por lo menos uno de Paclitaxel, Doxorubicina Ciclofosfamida y Cisplatino.

5. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende Ciclofosfamida.

6. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende Paclitaxel.

7. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende Docetaxel.

8. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el fármaco comprende Gemcitabin

9. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde las células cancerosas son de carcinoma pulmonar de células no pequeñas, cáncer de hígado, carcinoma de mama, tumor gastrointestinal, glioma o melanoma de ratón.

10. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde las células cancerosas son de cáncer de ovario, y opcionalmente el fármaco comprende Cisplatino o Paclitaxel.

11. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el periodo de tiempo es de por lo menos 6 horas o por lo menos 24 horas.

12. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el campo eléctrico de CA tiene una intensidad de campo de entre 1 V/cm y 5 V/cm y el periodo de tiempo es de por lo menos 24 horas.

13. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde la dosificación del fármaco es inferior al 20% de una dosificación estándar del fármaco.

14. El fármaco anticancerígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde la frecuencia del campo eléctrico de CA es de entre 100 kHz y 300 kHz, opcionalmente de aproximadamente 150 kHz o de aproximadamente 200 kHz.