ES2965656T3

ES2965656T3 - Método de producción de injertos tridimensionales de grasa autólogos utilizando tejido adiposo humano derivado de lipoaspirado con células madre multipotentes y nanofibrillas de celulosa biocompatibles

Info

Publication number: ES2965656T3
Application number: ES19808635T
Authority: ES
Inventors: Paul Gatenholm
Original assignee: Ocean Tunicell AS
Current assignee: Ocean Tunicell AS
Priority date: 2018-08-17
Filing date: 2019-08-16
Publication date: 2024-04-16
Anticipated expiration: 2039-08-16
Also published as: WO2020035734A1; CA3110904C; EP3836979A1; DK3836979T3; JP7402221B2; US20240390555A1; JP2021533882A; EP3836979B1; CA3110904A1

Abstract

Injerto autólogo de grasa 3D y modificación de lipoaspirado de tejido adiposo rico en células madre con nanofibrillas de celulosa biocompatibles (CNF) o nanofibrillas de colágeno para lograr una dispersión/emulsión procesable que se puede formar en formas 3D con la porosidad deseada. La construcción 3D formada se reticula adicionalmente in situ en el sitio de implantación o antes de la implantación. Los injertos se pueden realizar en humanos o animales para corregir deformidades del contorno de los tejidos blandos en cirugía reconstructiva y estética, que incluyen, entre otros, inyección, moldeo o bioimpresión 3D. Las nanofibrillas de celulosa o colágeno biocompatibles actúan como dispersantes/emulsionantes del lipoaspirado desintegrado y proporcionan propiedades adelgazantes que permiten procesar la dispersión en forma 3D y al mismo tiempo proporcionan porosidad para la difusión de nutrientes y la neovascularización. La invención comprende además uno o más reticulantes para proporcionar estabilidad mecánica a la construcción y capacidad para trasplantarse como una estructura más grande. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método de producción de injertos tridimensionales de grasa autólogos utilizando tejido adiposo humano derivado de lipoaspirado con células madre multipotentes y nanofibrillas de celulosa biocompatibles

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud se basa en las descripciones de y reivindica la prioridad y el beneficio de la fecha de presentación de la solicitud provisional US-62/719.162, presentada el 17 de agosto de 2018.

Antecedentes de la invención

Campo de la invención

La presente invención se refiere generalmente al injerto de grasa autólogo y, más particularmente, se refiere a un método para producir injerto de grasa autólogo tridimensional utilizando tejido adiposo derivado de lipoaspirado humano, incluyendo células madre multipotentes y nanofibrillas de celulosa biocompatibles derivadas de tunicados.

Descripción de la técnica relacionada

El injerto de grasa autólogo es un procedimiento quirúrgico reconstructivo y estético establecido debido a la abundancia de tejido graso y a la relativa sencillez del procedimiento. Las aplicaciones de los injertos de grasa incluyen el rejuvenecimiento facial, el rejuvenecimiento de manos, la reconstrucción mamaria y el aumento de volumen, el tratamiento del fotoenvejecimiento cutáneo, la corrección de deformidades del contorno y la mejora de la atrofia de la almohadilla grasa plantar senil y diabética. El proceso consiste de forma típica en tres etapas: cosechar tejido adiposo de un sitio donador adecuado; procesamiento del lipoaspirado; y reinyección del tejido adiposo purificado. Sin embargo, el resultado es pobre e impredecible. El principal problema después del trasplante de tejido adiposo autólogo es su tasa de absorción a lo largo del tiempo, lo que da como resultado una reducción promedio del 25 % al 70 % del volumen implantado total (véase Simonacci, F., Bertozzi, N., Grieco, M. P., Grignaffini, E. and Raposio, E., Procedure, applications, and outcomes of autologous fat grafting. Annals of Medicine and Surgery 20, 49-60 (2017)). Las células adiposas mueren y se reabsorben y el espacio vacío permite la infiltración de macrófagos y células polinucleadas para la fagocitosis. Los adipocitos injertados pasan a través de una fase isquémica. Se ha observado la vascularización cuando los fragmentos de grasa son muy pequeños.

Además, el tejido graso está altamente vascularizado y contiene varios tipos de células además de adipocitos. Existe una población de pericitos cerca de una red vascular, células progenitoras endoteliales y células madre adiposas que son células madre mesenquimales. El aislamiento de la fracción vascular estromal (SVF) del lipoaspirado es posible a través de la digestión de una matriz extracelular junto con varias enzimas de las cuales la colagenasa es típicamente la más importante. La SVF puede aislarse mediante un procedimiento manual o mediante un procedimiento automatizado que utiliza equipos de automatización disponibles comercialmente que digieren enzimáticamente la matriz extracelular, y se lava y se separa (los ejemplos incluyen: Cytori Celution 800/CRS System, Medi-Khan's Lipokit and Icellator de Tissue Genesis). Las células madre derivadas de tejido adiposo (ASC) se pueden sembrar a partir de la fracción de SVF y además expandirse. Se ha reconocido SVF como una potente fracción celular con la acción de curar y promover la vascularización. Sin embargo, el aislamiento de SVF también está asociado con el uso de enzimas digestivas que podrían tener efectos adversos para los pacientes y, en el momento de esta solicitud, la aprobación regulatoria aún está en trámite. Otros procedimientos de desintegración de la grasa sin el uso de enzimas incluyen el tratamiento mecánico, que se aplica, por ejemplo, en un dispositivo de Lipogems, Italia (véase Bianchi, F. y col., A new nonenzymatic method and device to obtain a fat tissue derivative highly enriched in pericyte-like elements by mild mechanical forces from human lipoaspirates. Cell Transplant. 22, 2063-2077 (2013); Tremolada, C., Colombo, V. & Ventura, C., Adipose tissue and mesenchymal stem cells: state of the art and Lipogems® technology development. Current stem cell reports 2, 304-312 (2016)).

Un reto al que se enfrenta la invención actual es mejorar la supervivencia de un injerto de grasa, lo que, si puede lograrse, da lugar al injerto de grasa autólogo, que puede utilizarse eficazmente para la cicatrización de heridas y la cirugía reconstructiva y estética.

Según la invención en la presente memoria, una forma posible de mejorar la supervivencia de un injerto de grasa sería encapsularla en una matriz de biopolímero en tal patrón para crear porosidad que proporcione la capacidad de difusión de nutrientes y oxígeno, así como facilitar la vascularización. Se han utilizado varios biopolímeros como armazones y biotintas para la ingeniería general de tejidos (véase, p. ej., Domingues, R. M. A., y col., Development of Injectable Hyaluronic Acid/Cellulose Nanocrystals Bionanocomposite Hydrogels for Tissue Engineering Applications, Bioconjugate Chem., 2015, 26 (8), pp. 1571-1581; Gatenholm, P., Cellulose nanofibrillar bioink for 3d bioprinting for cell culturing, tissue engineering and regenerative medicine, solicitud de patente WO2016100856A1) en donde los biomateriales se combinan con células individuales. Las soluciones poliméricas se diluyen por fluidificación por cizalla, lo que significa que la viscosidad disminuye al aumentar la velocidad de cizallamiento. Se ha propuesto el polvo de celulosa compuesto de nanocristales de celulosa para su utilización en la ingeniería de tejidos como se describe en la solicitud de patente WO2007066222 A1, pero dicho material no proporciona suficiente arquitectura nanofibrilar.

Las nanofibrillas de celulosa (CNF), que pueden aislarse de tunicados, producirse por bacterias o aislarse de paredes celulares primarias o secundarias de plantas, tienen un diámetro de 8-30 nm y pueden llegar a medir hasta un micrómetro. Tienen una superficie hidrófila y, por lo tanto, se unen al agua en sus superficies formando hidrogeles ya con un contenido inferior de sólidos (1-2 %). Los CNF se diluyen por fluidificación por cizalla y tienen una viscosidad de cizallamiento cero elevada. La naturaleza hidrófila de las superficies de los CNF cubiertas de agua les impide la adsorción de proteínas y los hace bioinertes. Las células no reconocen las superficies de CNF que son una ventaja, como se enseña en la presente memoria, cuando llega a biocompatibilidad ya que hay poca o ninguna reacción de cuerpo extraño. Entre las diversas nanofibrillas de celulosa, las derivadas del tunicado presentan una alta cristalinidad y una gruesa dimensión de fibrillas, con longitudes que pueden superar 1 micrómetro. Según la invención en la presente memoria, esto desempeña un papel en la potencia de dispersión y las propiedades viscoelásticas. Se ha demostrado que las fibrillas de nanocelulosa combinadas con alginato o hialuronato reticulado actúan como una estructura base adecuada para la diferenciación de células progenitoras adiposas (véase, p. ej., Henriksson, I., P. Gatenholm, and D.A. Hagg, Increased lipid accumulation and adipogenic gene expression of adipocytes in 3D bioprinted nanocellulose scaffolds. Biofabrication, 2017, Feb 21;9(1); Krontiras, P., P. Gatenholm, and D.A. Hagg, Adipogenic differentiation of stem cells in three-dimensional porous bacterial nanocellulose scaffolds. Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials, 2015. 103(1): p. 195 203) pero no en combinación con células adiposas. La solicitud de patente US-2018/0055971 A1 describe un producto de aumento de tejidos blandos que comprende un lipoaspirado mezclado con ácido hialurónico e hidrogeles de fibroína de seda.

Resumen de la invención

La invención se define por las reivindicaciones. Cualquier tema que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona solo con fines informativos. Cualquier referencia en la descripción a los métodos de tratamiento se refiere a los productos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

La invención en la presente memoria supera los desafíos anteriores mediante la introducción de un método para producir un injerto de grasa autólogo tridimensional utilizando tejido adiposo derivado de lipoaspirado humano con células madre multipotenciales y nanofibrillas de celulosa biocompatibles derivadas de tunicados. En una realización preferida, el injerto de grasa autólogo tridimensional que usa tejido adiposo derivado de lipoaspirado humano es rico en o comprende una alta cantidad o contenido de células madre multipotentes y nanofibrillas de celulosa biocompatibles derivadas de tunicados.

Una realización de la presente memoria proporciona un método para producir injertos de grasa autólogos tridimensional con porosidad, que sobrevive la implantación sin contracción volumétrica y se desvasculariza para utilizarse en cirugía estética y reconstructiva en la que el lipoaspirado, preferiblemente rico en células madre, se mezcla con uno o más excipientes y/o material(s) biocompatible(s), comprendiendo celulosa nanofibrilar derivada de tunicados y reticulados.

Otra realización proporciona un método para producir injerto(s) de grasa autólogo(s) tridimensional con porosidad, que sobrevive la implantación sin contracción volumétrica y se desvasculariza para utilizarse en cirugía estética y reconstructiva en la que el lipoaspirado, preferiblemente rico en células madre, se mezcla con uno o más materiales biocompatibles que comprenden celulosa nanofibrilar derivada de tunicados y reticulados.

En otra realización, la invención comprende un método para producir un injerto de grasa autólogo tridimensional con porosidad, que sobrevive la implantación sin contracción volumétrica y se desvasculariza, para utilizarse en cirugía estética y reconstructiva, en la que lipoaspirado, preferiblemente rico en células madre, se mezcla con uno o más excipientes y/o uno o más materiales biocompatibles que comprenden celulosa nanofibrilar derivada de tunicados, que se reticula. En algunos aspectos, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados está en forma de dispersión con fibrillas de un diámetro por encima de 15 nm y una longitud entre 0,5 micrómetros y 5 micrómetros. En otra realización, la celulosa nanofibrilar se deriva de tunicados en forma de dispersión con un contenido en sólidos superior al 1,5 % e inferior al 4 % en peso. La celulosa nanofibrilar derivada de tunicados, en algunos aspectos, no tiene hemicelulosas detectables que afectan la inmunorrespuesta y poco o nada de aglomerados detectables. En una realización, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados está en forma de dispersión sin ningún tipo de lipopolisacáridos derivados de bacterias detectables conocidos en casos como endotoxinas.

En otra realización, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula mediante la adición de iones de alginato y calcio, bario y/o estroncio. En otra realización, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula mediante la adición de alginato y polilisina. En otra realización, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula mediante la adición de una solución fibrinógeno y/o trombina.

En una realización, la celulosa nanofibrilar derivada de los tunicados se reticula mediante la adición de plasma rico en plaquetas (PRP) seguido de o precedido por la adición de iones de calcio. En otra realización, la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula mediante la adición de 5'-fosfato de riboflavina seguido de o precedido por exposición a luz UV (ultravioleta).

Otra realización comprende un tejido implantable preparado para su uso en cirugía estética y reconstructiva de un ser humano. En una realización, se prepara un tejido implantable para su uso en cirugía estética y reconstructiva de animales, incluyendo seres humanos u otros animales. En otra realización, se prepara un tejido implantable para la cicatrización de heridas.

Breve descripción de los dibujos

Las figuras adjuntas ilustran ciertos aspectos de las realizaciones de la presente invención y no deben utilizarse para limitar la invención. Junto con la descripción escrita, las figuras explican ciertos principios de la invención.

Las Figuras 1A-C muestran varias etapas de las técnicas de recolección y procesamiento de lipoaspirado.

La Figura 2 muestra las propiedades reológicas de lipoaspirado disgregante (L), mezcladas con alginato (LA), mezcladas con alginato y nanocelulosa a partir de tunicados (LT).

La Figura 3 muestra las mediciones de la cinética de reticulación.

Las Figuras 4A-B muestran los resultados de los experimentos de conformación 3D.

Las Figuras 5A-D muestran los resultados de los experimentos in vivo.

Descripción detallada de diversas realizaciones

Ahora se hará referencia en detalle a varias realizaciones ilustrativas de la invención. Debe entenderse que la siguiente discusión de las realizaciones ilustrativas no pretende ser una limitación de la invención. Más bien, se proporciona la siguiente discusión para dar al lector una comprensión más detallada de ciertos aspectos y características de la invención.

Las realizaciones de la presente memoria y las diversas características y detalles ventajosos de la misma se explican totalmente con referencia a las realizaciones no limitativas que se ilustran en las figuras adjuntas y se detallan en la siguiente descripción. Se omiten descripciones de componentes y técnicas de procesamiento bien conocidos para no oscurecer innecesariamente las realizaciones en la presente memoria. Los ejemplos utilizados en la presente memoria están destinados simplemente a facilitar una comprensión de formas en las que se pueden poner en práctica las realizaciones en la presente memoria y para permitir que los expertos en la técnica practiquen las realizaciones de la presente memoria. Por tanto, los ejemplos no deben interpretarse como limitantes del alcance de las realizaciones de la presente memoria.

Las realizaciones de la presente memoria comprenden un método con base en la mezcla de lipoaspirado disgregado mecánicamente, enriquecido con células madre, con biopolímeros para lograr una dispersión parcial o completamente homogénea, y luego procesar la mezcla/utilizar la mezcla para crear una arquitectura tridimensional con porosidad. Los materiales de biopolímero, en aspectos, se utilizan como dispersante/emulsionante. La porosidad según la presente invención permite la difusión de nutrientes y/u oxígeno y contribuye a la supervivencia de las células adiposas, pero también permite la diferenciación de las células progenitoras y la neovascularización. El injerto según la presente invención puede implementarse mediante técnicas, que incluyen, aunque no de forma limitativa, moldeado, bioimpresión 3D o inyección en un cuerpo humano o animal. Los biopolímeros descritos en la presente memoria tienen, en algunos aspectos, dos funciones; primero, proporcionar una dispersión homogénea con propiedades de fluidificación por cizalla (pseudoplástico) y la segunda reticulación. La dispersión/emulsión homogénea se logra agregando nanofibrillas de celulosa biocompatibles derivadas de tunicados y otro(s) excipiente(s), y la reticulación se logra, por ejemplo, mediante el uso de fibrinógeno y trombina o alginato y calcio, la adición de plasma rico en plaquetas (PRP) seguido de la adición de iones de calcio y/o la adición de 5'-fosfato de riboflavina seguido de exposición a luz UV. Las nanofibrillas de celulosa aisladas de los tunicados se utilizan como agente(s) dispersante(s) y emulsionante(s), pero también pueden proporcionar propiedades de fluidificación por cizalla, viscosidad elevada a tensiones inferiores de cizallamiento y estabilidad mecánica del injerto de grasa 3D. También pueden permitir una porosidad mejorada, lo que puede resultar en neovascularización o neovascularización mejorada. Tal injerto de grasa autólogo 3D descrito, en una realización preferida, sobrevive a la implantación y no se contrae volumétricamente hasta un grado médico significativo. También se vasculariza en una realización preferida. La invención de esta manera proporciona una forma innovadora de curar heridas y permitir correcciones y reparación de tejido blando en cirugía reconstructiva y estética.

Ejemplo 1 (recolección y procesamiento de lipoaspirado)

El aspirado de liposucción se recogió del tejido subcutáneo abdominal de una donante femenina sana con la aprobación del Comité de Ética Regional de Gotenburg (Dnr 624-16) y después de firmar el consentimiento informado. El lipoaspirado se procesó con un dispositivo de Lipogems, Italia, según el protocolo del fabricante mediante fuerza mecánica y sin ningún tratamiento enzimático. Brevemente, el lipoaspirado se lavó con una solución de electrolito fisiológico (acetato de Ringer, Braun), se emulsionó agitándolo con perlas de metal 5 x 20 s, y se enjuagó en un sistema cerrado. Se utilizó un total de 160 ml de lipoaspirado del donante. El tejido adiposo procesado derivado de lipoaspirado descrito anteriormente se mezcló con una solución al 3 % en peso de alginato SLG100 (Novamatrix, Noruega) en una solución de manitol al 4,5 % en una proporción volumétrica de 90:10. La mezcla adiposa se mezcló además con nanocelulosa/alginato (80:20) en una relación 1:1. La Figura 1A muestra el lipoaspirado aislado y la Figura 1B muestra la forma procesada con el dispositivo de Lipogems lipoaspirado (amarillo) y la dispersión de las nanofibrillas de celulosa de los tunicados con alginato añadido y colorante azul (azul). La Figura 1C muestra una dispersión homogénea verde con consistencia similar a una pasta cuando se mezcló lipoaspirado procesado con la dispersión de nanofibrilla de celulosa.

Ejemplo 2 (reología)

Las propiedades reológicas y la cinética de reticulación del tejido disgregante derivado de lipoaspirado preparado por el sistema de Lipogems (L) y el tejido adiposo procesado mezclado con alginato (LA) y alginato y nanocelulosa de los tunicados (LT), se analizaron utilizando un reómetro Discovery HR-2 (TA Instruments, Reino Unido) equipado con una placa peltier. Todas las mediciones se realizaron a 25 °C. La viscosidad de cizallamiento se midió a velocidades de cizallamiento de 0,01-1500 s-1 con una geometría de placa-placa (20 mm, distancia = 500 pm). El tejido adiposo derivado de lipoaspirado procesado mecánicamente (L) no era homogéneo y consistió en grupos de tejido adiposo y líquido de flujo libre. La curva de viscosidad para L era no lineal debido a la falta de homogeneidad del material (véase la Figura 2, curva superior). La adición de alginato proporcionó una dispersión más homogénea con propiedades de fluidificación por cizalla (véase la curva inferior de la Figura 2). Sin embargo, la viscosidad fue demasiado inferior para una conformación 3D óptima. La adición de nanofibrillas de celulosa derivadas del tunicado dio como resultado propiedades de adelgazamiento por cizallamiento y viscosidad que permiten la conformación 3D (véase la curva LT en la Figura 2).

Ejemplo 3 (reticulación)

Los experimentos de reticulación se realizaron para evaluar diferentes reticuladores y también la cinética de reticulación. La Figura 3 muestra los resultados de los experimentos cuando se utilizó alginato y se realizó la reticulación con la adición de una solución de CaCh 0,1 M. Las mediciones de la frecuencia de oscilación se realizaron a tensiones dentro de la región LVR medida y en un rango de frecuencia de 0,1-100 rad/s. Las mediciones del tiempo de oscilación se realizaron a un 1,5 % de tensión y una frecuencia de 1 Hz durante 10 minutos. 20 segundos después de iniciar la medición, se dispensó 1 ml de CaCl2 0,1 M alrededor de las dispersiones de lipoaspirado medidas mientras se recogían los datos sobre el módulo de almacenamiento. La curva inferior en la Figura 3 fue lipoaspirado (L) y no se reticuló mediante la adición de la solución de CaCh. Por el contrario, tanto lipoaspirado con alginato (LA) como con alginato y las nanofibrillas de celulosa aisladas de tunicados se reticularon dentro de 60-100 segundos, como se ve por el rápido aumento en módulos tras la adición de CaCh a t = 40 s. Puede verse en la Figura 3 que el módulo de almacenamiento del lipoaspirado reticulado es mayor cuando las nanofibrillas de celulosa de los tunicados se añaden en comparación solo con alginatos. Se realizaron experimentos de reticulación adicionales, en donde en lugar de un alginato y una solución de CaCh, se añadió una solución de fibrinógeno y trombina. La dispersión se reticuló rápidamente después de la adición de trombina. La adición de plasma rico en plaquetas (pRP) seguido de la adición de iones de calcio también proporcionó reticulación. También se realizó la adición de 5'-fosfato de riboflavina seguido de exposición a UV y dio como resultado la reticulación.

Ejemplo 4 (conformación 3D: moldeado y bioimpresión 3D)

La capacidad de moldeado 3D del tejido adiposo derivado del lipoaspirado procesado mediante el sistema Lipogems solamente (L), o mezclado con alginato (LA), y alginato y nanocelulosa (LT), respectivamente, se evaluó mediante moldeado e impresión con la bioimpresora 3D con base en extrusión neumática “ Inkredible” (Cellink AB, Suecia). Los diseños de rejilla se imprimieron con una boquilla cónica (diámetro de 800 micrómetros). Se evaluó la capacidad de dispensar el material continuamente a través de la boquilla y obtener estructuras impresas con una fidelidad de impresión para la cual el diseño de la rejilla era visible. Ni el lipoaspirado solo (L) ni con alginato (LA) pudieron moldearse de manera óptima en estructuras 3D. Solo el lipoaspirado con la adición de nanofibrillas de celulosa derivadas de los tunicados se procesó/formó de manera óptima en estructuras 3D, como se puede ver en la Figura 4. La Figura 4A muestra el resultado de la arquitectura de la rejilla antes de la reticulación, y la Figura 4B muestra los resultados después de la reticulación. La estructura 3D puede levantarse e implantarse en una realización preferida.

Ejemplo 5 (implantación de injertos 3D)

Para los experimentos in vivo, las semiesferas (diámetro de 10 mm, altura de 3 mm) se sometieron a bioimpresión 3D, se reticularon con CaCh durante 5 minutos y después de eso se implantaron inmediatamente por vía subcutánea en ratones BALB/c desnudos. La Figura 5A muestra semiesferas bioimpresas en 3D ya que eran biofabricadas y reticuladas en 3D. La Figura 5B muestra construcciones 3D en ratones después de 3 días; la forma 3D de la semiesfera implantada no ha cambiado en su mayoría. La Figura 5C muestra construcciones 3D después de 7 días de implantación; en su mayoría no existe ningún cambio en el volumen de la construcción y aparece como si se hubiera vuelto más elástico. Se observó cierta vascularización en la superficie del explante. La Figura 5D muestra construcciones 3D después de 30 días de implantación; hay poca o ninguna contracción del volumen. Por el contrario, la construcción parece aumentar ligeramente de volumen, se vuelve elástica, cambia de color a más amarillo y se vasculariza parcial o totalmente.

[0025]Cuando una realización se refiere a “ que comprende” ciertas características, debe entenderse que las realizaciones pueden “ consistir en” o “consisten esencialmente en” cualquiera o más de las características.

[0026]Se observa en particular que cuando se proporciona un rango de valores en esta memoria descriptiva, cada valor entre los límites superior e inferior de ese intervalo, hasta la décima parte de la unidad descrita, también se describe específicamente. Cualquier rango más pequeño dentro de los rangos descritos o que pueden derivarse de otros puntos finales descritos también se describen específicamente por sí mismos. Los límites superior e inferior de los rangos descritos también pueden incluirse o excluirse independientemente en el rango. Las formas singulares “ un” , “ una” y “ el” , “ la” incluyen referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para producir un injerto de grasa autólogo tridimensional utilizando tejido adiposo humano o animal derivado de lipoaspirado, en donde el lipoaspirado comprende células madre, en donde el lipoaspirado se mezcla con celulosa nanofibrilar derivada de tunicados, en donde la mezcla de lipoaspirado y celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula.

2. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados comprende una dispersión que comprende fibrillas con una longitud entre 0,1 micrómetros y 5 micrómetros; preferiblemente, una dispersión que comprende fibrillas que tienen una longitud entre 0,5 micrómetros y 5 micrómetros.

3. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados comprende una dispersión que tiene un contenido en sólidos superior a 1,5 % e inferior a 4 % en peso.

4. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados comprende una dispersión que tiene una cantidad de hemicelulosa que es inferior que una cantidad que afectará sustancialmente a un sistema de inmunorrespuesta de un ser humano.

5. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados comprende una dispersión que no tiene aglomerados detectables.

6. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados comprende una dispersión que no tiene lipopolisacáridos derivados de bacterias detectables.

7. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula añadiendo (a) alginato y (b) iones de calcio, bario y/o de estroncio.

8. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula añadiendo alginato y polilisina u otros policationes.

9. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula añadiendo una solución de fibrinógeno y trombina.

10. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se carboximetila u oxida y luego se reticula añadiendo iones de calcio, bario y/o de estroncio o polilisina u otros policationes.

11. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula agregando plasma rico en plaquetas (PRP), seguido de la adición de iones de calcio.

12. El método según la reivindicación 1, en donde la celulosa nanofibrilar derivada de tunicados se reticula añadiendo 5'-fosfato de riboflavina, seguido de exposición a luz ultravioleta.

13. Una composición implantable que comprende un injerto de grasa autólogo tridimensional que comprende tejido adiposo derivado de lipoaspirado humano o animal, en donde el lipoaspirado se mezcla con celulosa nanofibrilar derivada de tunicados y donde el lipoaspirado comprende células madre para su uso en cirugía estética y/o reconstructiva de un ser humano.

14. Una composición implantable que comprende un injerto de grasa autólogo tridimensional que comprende tejido adiposo derivado de lipoaspirado humano o animal, en donde el lipoaspirado se mezcla con celulosa nanofibrilar derivada de tunicados y donde el lipoaspirado comprende células madre para su uso en la cicatrización de heridas.

15. El método según la reivindicación 1, en donde el injerto de grasa autólogo tridimensional es poroso y sobrevive a la implantación sin un encogimiento volumétrico sustancial; y/o en donde el injerto de grasa autólogo tridimensional se vasculariza y se utiliza para cirugía estética y/o reconstructiva.