ES2970530T3 - Derivados del isocromeno como inhibidores de fosfoinosítido 3-cinasas - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a compuestos de fórmula (I) que inhiben las fosfoinositida 3-quinasas (PI3K), a composiciones farmacéuticas que los comprenden y a su uso terapéutico en el tratamiento de trastornos asociados con las enzimas PI3K. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados del isocromeno como inhibidores de fosfoinosítido 3-cinasas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos inhibidores de fosfoinosítido 3-cinasas (en adelante PI3K); en concreto, la invención se refiere a compuestos que son derivados de isocromeno, a procedimientos de preparación de dichos compuestos, a composiciones farmacéuticas que los contienen y al uso terapéutico de los mismos.

Más en concreto, los compuestos de la invención son inhibidores de la actividad o función de la clase I de PI3K y, más específicamente, son inhibidores de la actividad o función de las isoformas PI3Ka, PI3Kp, PI3K8 y/o PI3Ky de la clase I de PI3K.

Por lo tanto, los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de muchos trastornos asociados con los mecanismos de las enzimas PI3K, tales como enfermedades respiratorias, incluidas el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y la tos.

Antecedentes de la invención

En bioquímica, una cinasa es un tipo de enzima que transfiere grupos fosfato de moléculas donantes de alta energía, tales como el ATP, a sustratos específicos, un proceso denominado fosforilación. En concreto, las enzimas PI3K son enzimas cinasas lipídicas que pueden fosforilar los fosfoinosítidos ("phosphoinositides", PI) en el grupo 3'-hidroxilo del anillo de inositol (Panayotouet al.,Trends Cell Biol., 2:358-360 (1992)). Es bien sabido que los PI, ubicados en las membranas plasmáticas, pueden actuar como segundos mensajeros en cascadas de transducción de señales acoplando proteínas que contienen dominios de homología a pleckstrina ("pleckstrin-homology", PH), FYVE, PX y otros dominios de unión a fosfolípidos (Vanhaesebroeck B.et al.,Annu. Rev. Biochem., 70, 535-602, 2001; Katso R.et al.,Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 17, 615-675, 2001).

Por lo tanto, los PI pueden actuar como segundos mensajeros en muchos procesos celulares, incluidos la transducción de señales, la regulación del tráfico y transporte de membrana, la organización del citoesqueleto, la supervivencia y muerte celular y muchas otras funciones.

Los PI pueden unirse a la bicapa lipídica de la membrana celular a través de dos ácidos grasos que se unen al anillo de inositol citosólico a través de un conector de glicerol fosfato. El anillo de inositol de los PI puede ser fosforilado por las enzimas PI3K, lo que conduce a la regulación del crecimiento, la supervivencia y la proliferación celular. Por este motivo, la fosforilación de PI por las enzimas PI3K es uno de los acontecimientos de transducción de señales más importantes asociados a la activación de receptores de la superficie celular de mamíferos (Cantley L.C., Science, 296, 1655-1657, 2002; Vanhaesebroeck B.et al.,Annu. Rev. Biochem., 70, 535-602, 2001).

Las enzimas PI3K se han dividido en tres clases: PI3K de clase I, PI3K de clase II y PI3K de clase III, en función de la homología de secuencia, la estructura, los compañeros de unión, el modo de activación y la preferencia de sustrato (Vanhaesebroeck B.et al.,Exp. Cell Res., 253(1), 239-254, 1999; y Leslie N.R.,et al.,Chem. Rev., 101(8), 2365-2380, 2001).

Las PI3K de clase I convierten el fosfoinosítido-(4,5)-difosfato (PI(4,5)P2) en fosfoinosítido-(3,4,5)-trifosfato (PI(3,4,5)P3), que actúa como segundo mensajero. La cascada de transducción de señales activada por el aumento de los niveles intracelulares de PI(3,4,5)P3 es regulada negativamente mediante la acción de fosfatasas 5'-específicas y 3'-específicas (Vanhaesebroeck B.et al.,Trends Biochem. Sci., 22(7), 267-272, 1997; Katso R.et al.,Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 17, 615-675, 2001; y Toker A., Cell. Mol. Life Sci., 59(5), 761-779, 2002).

Las enzimas PI3K de clase II son la clase de PI3K identificada más recientemente y su función exacta aún no está clara.

Las enzimas PI3K de clase III consisten en un único miembro de la familia que está estructuralmente relacionado con las enzimas PI3K de clase I y parece ser importante en la endocitosis y el tráfico vesicular. Sin embargo, hay algunas pruebas que demuestran que las PI3K de clase III pueden ser importantes en procesos de las células inmunitarias, tales como la fagocitosis y la transducción de señales del receptor de tipo Toll ("Toll-like receptor", TLR).

Las enzimas PI3K de clase I pueden dividirse a su vez en clase IA y clase IB en función de sus mecanismos de activación.

Más detalladamente, las enzimas PI3K de clase IA comprenden tres isoformas estrechamente relacionadas: PI3Ka, PI3Kp y PI3K8, mientras que la clase IB comprende únicamente la isoforma PI3K<y>. Estas enzimas son heterodímeros compuestos por una subunidad catalítica denominada p110, con cuatro tipos: isoformas alfa (a), beta (p), delta (8) y gamma (<y>), asociadas constitutivamente a una subunidad reguladora. Las dos primeras isoformas de p110 (a y p) se expresan de forma ubicua y participan en la diferenciación y la proliferación celular. En consecuencia, las enzimas PI3Ka y PI3Kp se han estudiado ampliamente como dianas para el desarrollo de nuevos agentes quimioterapéuticos.

Por otra parte, las isoformas p1105 y p110<y>se expresan principalmente en los leucocitos y son importantes en la activación de la respuesta inmunitaria, tal como la migración de los leucocitos, la activación de los linfocitos B y T y la desgranulación de los mastocitos. Por lo tanto, las isoformas PI3K5 y PI3Ky son muy importantes en las enfermedades respiratorias inflamatorias.

En la actualidad, los inhibidores derivados de las enzimas PI3K conocidos en la técnica podrían inhibir en general dichas isoformas (isoformas alfa a, beta p, delta 5 y gamma y) y podrían actuar sobre los papeles individuales desempeñados en diversas enfermedades por dichas isoformas específicas.

Por lo tanto, se han desarrollado ampliamente ensayos de actividad específicos de inhibidores de clase IA para una isoforma específica de PI3Ka, PI3Kp, PI3K5 y PI3Ky frente a las demás, con el fin de discernir el perfil adecuado para el tratamiento de trastornos asociados con los mecanismos de enzimas PI3K. Dichos trastornos pueden incluir, por ejemplo, enfermedades respiratorias seleccionadas entre tos crónica idiopática, asma con variante de tos, tos asociada a tumor torácico o cáncer de pulmón, tos vírica o postvírica, síndrome de tos de las vías respiratorias altas (STVRA) o tos por goteo postnasal, o tos asociada a enfermedad por reflujo gastroesofágico tanto ácido como no ácido, asma, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar idiopática (FPI).

Teniendo en cuenta el número de respuestas patológicas que están mediadas por las enzimas PI3K, existe una necesidad continua de inhibidores de las enzimas PI3K que puedan ser útiles en el tratamiento de muchos trastornos y, en concreto, de las enfermedades respiratorias. Así, la presente invención se refiere a compuestos novedosos que son inhibidores de las isoformas PI3Ka, PI3Kp, PI3K5 y PI3K<y>de las enzimas PI3K de clase I que, por las razones anteriores, a menudo pueden tener características terapéuticamente deseables.

Con referencia al tratamiento de enfermedades respiratorias, existen algunos compuestos conocidos en la técnica anterior que son activos como inhibidores de PI3K. Por ejemplo, los documentos WO 2015/193263, WO 2016/038140, WO 2016/166239 y WO 2017/134053 divulgan derivados de indolizina, piridazinona, cromeno y pirazol como inhibidores de fosfoinosítido 3-cinasas. El documento WO 2015/091685 es una solicitud en tramitación junto con la presente del mismo solicitante que divulga derivados de compuestos de isocumarina e isocromeno.

Aunque los compuestos de la técnica anterior presentan actividad en la inhibición de la PI3K, los compuestos de la presente invención son potentes inhibidores de PI3K, son activos en el ensayo enzimáticoin vitroen el intervalo subnanomolar y además presentan actividad elevada también en el modelo celular de THP-1 de inhibición de PI3K delta.

Además, los compuestos según la invención muestran una actividad persistentein vivo(duración de la acción) en la prueba de OVA.

Resumen de la invención

El alcance de la invención se define en las reivindicaciones. Cualquier referencia en la descripción a procedimientos de tratamiento se refiere a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I):

en la que R, Ri, R2, R3, R4, R5, R<6>son como se indica a continuación en la descripción detallada de la invención, que actúan como inhibidores de fosfoinosítido 3-cinasas, a procesos para la preparación de los mismos, a composiciones farmacéuticas que los comprenden solos o combinados con uno o más principios activos, mezclados con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de la invención para su uso como medicamento.

En un aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de la invención para la fabricación de un medicamento.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención para la preparación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de cualquier enfermedad caracterizada por la hiperactividad de la enzima fosfoinosítido 3-cinasa (PI3K) y/o en el que es deseable una inhibición de la actividad PI3K y, en concreto, mediante la inhibición selectiva de la isoforma delta o de las isoformas delta y gamma de la enzima frente a las isoformas alfa y beta.

Además, la presente invención proporciona un procedimiento para la prevención y/o el tratamiento de cualquier enfermedad, preferentemente respiratoria, en el que es deseable una inhibición de la enzima PI3K, comprendiendo dicho procedimiento administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención.

En concreto, los compuestos de la invención son preferentemente para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad del tracto respiratorio caracterizada por la obstrucción inflamatoria de las vías respiratorias tal como, por ejemplo, tos, asma, EPOC y FPI.

Otro aspecto de la invención proporciona un dispositivo de inhalación adecuado, que comprende una composición farmacéutica de un compuesto de la invención, que puede seleccionarse respectivamente entre un inhalador de polvo seco (IPS) monodosis o multidosis, un nebulizador y, en concreto, un nebulizador de niebla fina.

Otro aspecto de la invención proporciona un kit que comprende las composiciones farmacéuticas de un compuesto de la invención solo o combinado con uno o más principios activos y un dispositivo que puede ser un inhalador de polvo seco monodosis o multidosis o un nebulizador.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a derivados de compuestos de fórmula (I) en los que el compuesto de origen se modifica de modo adecuado convirtiendo cualquiera de los grupos ácidos o básicos libres, si están presentes, en la sal de adición correspondiente con cualquier base o ácido convencionalmente considerado como farmacéuticamente aceptable.

Algunos ejemplos adecuados de dichas sales pueden incluir sales de adición de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos, tales como grupos amino, así como sales de adición básicas minerales u orgánicas de residuos ácidos, tales como grupos carboxílicos.

Los cationes de bases inorgánicas que pueden utilizarse de modo adecuado para preparar sales dentro de la invención comprenden iones de metales alcalinos o alcalinotérreos, tales como potasio, sodio, calcio o magnesio.

Las que se obtienen haciendo reaccionar el compuesto principal, que actúa como base, con un ácido inorgánico u orgánico para formar una sal comprenden, por ejemplo, sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido alcanforsulfónico, ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido succínico y ácido cítrico.

La expresión "átomos de halógeno", tal como se utiliza en el presente documento, incluye flúor, cloro, bromo y yodo, preferentemente cloro o flúor.

La expresión "alquilo (C1-Cx)", en el que x es un número entero mayor que 1, se refiere a grupos alquilo de cadena lineal o ramificada en los que el número de átomos de carbono constituyentes se encuentra en el intervalo de 1 a x. Los grupos alquilo especialmente preferidos son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y terc-butilo.

La expresión "haloalquilo (C1-Cx)" se refieren a los grupos "alquilo (C1-Cx)" definidos anteriormente en los que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen por uno o más átomos de halógeno, que pueden ser iguales o diferentes entre sí.

Algunos ejemplos de dichos grupos haloalquilo (C1-Cx) pueden incluir grupos alquilo halogenados, polihalogenados y totalmente halogenados, por ejemplo, grupos trifluorometilo o difluorometilo.

Por analogía, las expresiones "hidroxialquilo (Ci-Cx)" o "aminoalquilo (Ci-Cx)" se refieren a los grupos "alquilo (Ci-Cx)" definidos anteriormente en los que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen por uno o más grupos hidroxi (OH) o amino, respectivamente.

En la presente descripción, a menos que se indique lo contrario, la definición de aminoalquilo abarca grupos alquilo sustituidos con uno o más (NR1R2).

Con respecto a los sustituyentes R<1>y R<2>tal como se han definido anteriormente, se explica además que, cuando R<1>y R<2>se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un radical heterocíclico de 5 a 6 miembros, al menos otro átomo de carbono del anillo en dicho radical heterocíclico puede sustituirse por al menos un heteroátomo (por ejemplo, N, NH, S u O) o puede portar al menos un grupo sustituyente -oxo (=O). Dicho radical heterocíclico puede estar además opcionalmente sustituido en los puntos disponibles del anillo, es decir, en un átomo de carbono o en un heteroátomo disponible para la sustitución. Así, algunos ejemplos de dichos radicales heterociclo son 1-pirrolidinilo, 1 -piperidinilo, 1-piperazinilo, 4-morfolinilo, piperazin-4-il-2-ona, 4-metilpiperazin-1-ilo.

La invención se refiere a una clase de compuestos que actúan como inhibidores de las fosfoinosítido 3-cinasas (PI3K). Dicha clase de compuestos inhiben la actividad o la función de la clase I de PI3K y, más específicamente, son derivados inhibidores de la actividad o la función de las isoformas PI3Ka, PI3KP, PI3Ky y/o PI3K5 de la clase I de PI3K.

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I):

en la que:

cada R, cuando está presente, se selecciona independientemente del grupo que consiste en: OR7, halógeno, alquilo (C1-C6);

R<1>y R<2>, iguales o diferentes, son en cada caso independientemente alquilo (C<1>-C<6>),

R3y R<4>, iguales o diferentes, son en cada caso independientemente H o alquilo (C1-C<6>); o

R1y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un radical heterocíclico de 5 o 6 miembros, en el que al menos otro átomo de carbono del anillo de dicho radical heterocíclico está opcionalmente sustituido por al menos un heteroátomo (por ejemplo, N, NH, S u O) y opcionalmente porta al menos un grupo sustituyente -oxo (=O); dicho radical heterocíclico está además opcionalmente sustituido con un grupo alquilo (C<1>-C<6>), y R<3>y R<4>son H;

o

R3y R2, tomados conjuntamente, forman un radical heterocíclico de 5 o 6 miembros que comprende el átomo N; dicho radical heterocíclico está además opcionalmente sustituido con un grupo alquilo (C1-C6), R1es un grupo alquilo (C1-C6) y R4es H;

R5 es OR7;

R6 se selecciona del grupo que consiste en: H, OR7, alquilo (Ci-C6), haloalquilo (Ci-C6), hidroxialquilo (Ci-C®);

R7 se selecciona del grupo que consiste en: H, alquilo (Ci-C®);

p es cero o un número entero comprendido entre i y 4, preferentemente es cero o i, aún más preferentemente cuando p es 1, R es halógeno;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Será evidente para los expertos en la materia que los compuestos de fórmula (I) contienen al menos un centro estereogénico, representado en la fórmula (la) por el átomo de carbono marcado con un asterisco (*), y, por lo tanto, existen como estereoisómeros ópticos.

Los compuestos según la invención que tienen dicho al menos un centro estereogénico pueden existir, por consiguiente, como enantiómeros. Cuando los compuestos según la invención poseen dos o más centros estereogénicos, pueden existir además como diastereoisómeros. Debe entenderse que todos estos enantiómeros individuales, diastereoisómeros y mezclas de los mismos en cualquier proporción (en lo sucesivo también denominados racemato o compuesto racémico) están incluidos en el alcance de la presente invención. Se determina y se asigna la configuración absoluta (R) o (S) para el carbono (*), que es un centro estereogénico, basándose en las reglas de nomenclatura Cahn-Ingold-Prelog según las prioridades de los grupos.

La expresión "(R) y/o (S)" en el nombre químico de un compuesto pretende incluir en el alcance uno u otro enantiómero o una mezcla en cualquier proporción de los enantiómeros (R) y (S) en el carbono quiral (*).

El término enantiómero o diastereoisómero "individual" sin nombrar la configuración absoluta en el nombre químico de un compuesto se utiliza para indicar que, mediante un procedimiento de separación (por ejemplo, cromatografía) o síntesis estereocontrolada, se obtuvo un enriquecimiento enantiomérico (por ejemplo, en porcentaje) superior al 95 %, por lo que el enantiómero individual se obtuvo aislado incluso si no se asignó la configuración absoluta. Cuando se utilizó un procedimiento cromatográfico quiral, los isómeros puros (enantiómeros o diastereoisómeros) se indican en el nombre del compuesto como "primer enantiómero eluido" o "primer diastereoisómero eluido", "segundo enantiómero eluido" o "segundo diastereoisómero eluido", y se proporciona el procedimiento y el tiempo de retención del pico cromatográfico y el % de e.e. correspondiente al enantiómero o diastereoisómero individualizado.

En una realización preferida, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (la) tal como se han definido anteriormente, en los que el compuesto está en forma de uno u otro enantiómero, cada uno obtenido mediante un procedimiento de separación (por ejemplo, cromatografía) o síntesis estereocontrolada en forma pura, es decir, con un enriquecimiento enantiomérico de al menos el 95 %, preferentemente superior al 99 %.

Así, en una realización preferida, para un compuesto de fórmula (I), la configuración absoluta es (R) o (S) con referencia al centro estereogénico representado en la fórmula (la) por el átomo de carbono marcado con un asterisco (*).

En otra realización preferida, los compuestos de fórmula (I) descritos en la presente invención están presentes como mezclas de enantiómeros o diastereoisómeros.

Un primer grupo preferido de compuestos tiene la fórmula (Ib):

en la que, con respecto a la fórmula (I):

Ri y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un grupo 4-metilpiperazin-1-ilo;

R3 y R4 son H; y

R, R5, R6 y p son los definidos anteriormente;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En este grupo de compuestos, se prefieren especialmente al menos uno de los compuestos seleccionados entre:

Otro grupo preferido de compuestos tiene la fórmula (Ic):

en la que, con respecto a la fórmula (I):

R3 y R2, tomados conjuntamente, forman un radical heterocíclico de 5 miembros que comprende el átomo N; dicho radical heterocíclico está además sustituido con un grupo alquilo (C1-C6) que es metilo; R1 es un grupo alquilo (C1-C6) que es metilo y R4 es H; y

R, R5, R6 y p son los definidos anteriormente;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En este grupo de compuestos, se prefiere especialmente al menos:

Otro grupo preferido de compuestos tienen la fórmula (I), en la que:

R1 y R2 son alquilo (C1-C6) que es metilo,

R3 y R4 son independientemente H o alquilo (C1-C6) que es metilo; y

R, R5, R6 y p son los definidos anteriormente;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En este grupo de compuestos se prefieren especialmente al menos uno de los compuestos seleccionados entre los enumerados en la siguiente tabla:

Otro grupo preferido de compuestos tienen la fórmula (I), en la que:

R es -H;

R5es -OH;

R<6>es H;

R1, R2, R3y R4son los definidos anteriormente;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Según realizaciones preferidas, la presente invención se refiere al menos a uno de los compuestos seleccionados de los enumerados en la siguiente tabla:

y mezclas de enantiómeros o diastereoisómeros en cualquier proporción o enantiómeros individuales o diastereoisómeros individuales y las sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.

Las sales preferidas según la invención se seleccionan entre:

Bromhidrato de (R) y/o (S)-3-(1 -(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Clorhidrato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Hemi-1,5-naftalenodisulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Hemisulfato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Tosilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Mesilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

2-Naftalenosulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Isetionato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Maleato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Esilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Hemipamoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Xinafoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Salicilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Benzoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona.

Otras sales preferidas según la invención se seleccionan entre:

Bromhidrato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Clorhidrato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Mesilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

2-Naftalenosulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Maleato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona;

Esilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona.

En una realización, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar trastornos respiratorios, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un paciente que lo necesite.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) para su uso como medicamento. En un aspecto la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención para la fabricación de un medicamento.

Los compuestos de fórmula (I), incluidos todos los compuestos enumerados anteriormente, pueden prepararse por lo general según el procedimiento descrito en detalle en los esquemas que se muestran a continuación, utilizando procedimientos que suelen ser conocidos.

Esquema 1

Reacción de

acoplamiento Aminacion

cruzado reductora

en la queR3,R4 = H

Desproteccion

en las que:

R = H

R3, R<4>= H

R<5>= OR<7>siendo R<7>= H

Ra= H

El esquema 1 proporciona una vía de síntesis para la preparación de los ejemplos 1 y 2. Los compuestos intermedios de fórmula (VII) pueden convertirse en compuestos intermedios (VIII) mediante reacciones de acoplamiento cruzado, tales como un acoplamiento cruzado de Suzuki. Los intermedios (VIII), en los que R' es un grupo formilo, pueden convertirse en las aminas correspondientes mediante aminación reductora con aminas adecuadas, tales como 1-metilpiperazina o dimetilamina, en presencia de agentes reductores tales como, por ejemplo, triacetoxiborohidruro de sodio. Los intermedios (IV), en los que X es un grupo saliente (Lg) adecuado, tal como un átomo de haluro, pueden prepararse a partir de los intermedios (III) mediante sustitución del grupo hidroxilo favorecida por agentes halogenantes adecuados, tales como, por ejemplo, PBr3. Los intermedios (VI) pueden prepararse por reacción de los intermedios (IV) con un nucleófilo adecuado, tal como un nucleófilo basado en nitrógeno de fórmula (V), en la que R" es una hidroxipiridina protegida, por ejemplo, metoxipiridina. Los compuestos (VI) pueden desprotegerse en condiciones ácidas para obtener el compuesto de fórmula (I), en la que R3, R4son H, R<6>es H, R5es -OH y R es H. Los compuestos de estructura general (Ia) pueden prepararse a partir del correspondiente compuesto racémico de fórmula (I) mediante separación quiral.

Los ejemplos 3 a 7 y 4a pueden sintetizarse como se describe en el esquema 2, utilizando una metodología similar a la descrita en el esquema 1. Los intermedios de fórmula general (IIa), en la que (R)p es al menos un sustituyente adecuado según se ha definido anteriormente, pueden prepararse a partir del intermedio (VII) y ácidos o ésteres borónicos (por ejemplo, ésteres de pinacol) de fórmula (IX) sintetizados de modo adecuado, en la que R” es un grupo formilo o un grupo formilo protegido. Los intermedios (IIa) pueden convertirse en los intermedios (X), en los que X representa un Lg adecuado, tal como un átomo de haluro, por reacción con PBr3, y posteriormente se hacen reaccionar con 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina disponible en el mercado para obtener los intermedios (XI). Los intermedios (XII), en los que (R)p es un sustituyente adecuado como se ha indicado anteriormente y R4 = R3= H, pueden prepararse a partir de los intermedios (XI) desprotegiendo la función aldehídica mediante procedimientos bien conocidos, seguido de una aminación reductora con aminas adecuadas tales como, por ejemplo, 1-metilpiperazina o dimetilamina, en presencia de un agente reductor tal como, por ejemplo, triacetoxiborohidruro de sodio (esquema 2, etapa 4a,b). En otra realización de la presente invención, los intermedios (XII), en los que Ri = R2 = R4 = H y R3 es un sustituyente alquilo (C1-C6) adecuado, pueden prepararse a partir del intermedio (VII) mediante un acoplamiento de Suzuki con un ácido borónico adecuado disponible en el mercado o ésteres de boronato sintetizados, seguido de la conversión del OH en un Lg, tal como un átomo de haluro, por reacción con PBr3 y, por último, una sustitución nucleófila con 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4-amina disponible en el mercado, según el esquema 2, etapa 5a-c. Algunos compuestos obtenidos tras la etapa 5 pueden contener un grupo amino protegido que puede desprotegerse según procedimientos bien conocidos y metilarse mediante aminación reductora para obtener los intermedios (XII) (esquema 2, etapa 6a,b). Los intermedios (XII) pueden convertirse en compuestos de fórmula general (I), en la que R6 es H, R5 es OH, mediante un acoplamiento de Suzuki con 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-3-ol disponible en el mercado. Los compuestos de estructura general (Ia) pueden prepararse a partir del correspondiente compuesto de fórmula (I) racémico mediante separación quiral. Por ejemplo, el ejemplo 4a enantioméricamente puro se preparó a partir de la mezcla diastereomérica correspondiente mediante separación cromatográfica.

También se divulgan, pero no forman parte de la invención, compuestos de fórmula (II):

en la que:

cuando R= H, R3y R4 =H, K= R" = metoxipiridina; p, Ri y R2 son como se han definido anteriormente (correspondientes al compuesto (VI) en el esquema 1).

También se divulga, pero no forma parte de la invención, el uso de compuestos de fórmula (II):

en la que:

cuando R = H, R<3>y R<4>= H, K= R" = metoxipiridina; p, R<1>y R<2>son los definidos anteriormente (correspondientes al compuesto (VI) del esquema 1)

o

cuando K = I; p, R, R1, R2, R3, R4son los definidos anteriormente, (correspondientes al compuesto (XII) del esquema 2)

como intermedio en la preparación de compuestos de fórmula (I) como se ha descrito anteriormente.

El uso de compuestos de fórmula (II) como intermedios en la preparación de compuestos de fórmula (I) es especialmente útil en un proceso en el que los compuestos de fórmula (II) se someten a etapas posteriores de desprotección o acoplamiento, seguidas de una etapa final de separación quiral.

Los compuestos de la invención son inhibidores de la actividad cinasa, en concreto de la actividad PI3-cinasa. En general, los compuestos que son inhibidores de PI3K pueden ser útiles en el tratamiento de muchos trastornos. En una realización, los trastornos que pueden tratarse con los compuestos de la presente invención son enfermedades respiratorias seleccionadas de tos, tal como tos crónica idiopática, asma con variante de tos, tos asociada con tumor torácico o cáncer de pulmón, tos vírica o postvírica, síndrome de tos de las vías respiratorias altas (STVRA), tos por goteo postnasal, enfermedad por reflujo gastroesofágico asociada a la tos (tanto reflujo ácido como no ácido), asma, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfermedad pulmonar intersticial (tal como la fibrosis pulmonar idiopática (FPI)).

En otra realización, el trastorno se selecciona entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

En otra realización, el trastorno se selecciona entre fibrosis pulmonar idiopática (FPI), tos y tos crónica.

Los procedimientos de tratamiento de la invención comprenden administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente que lo necesite. Tal como se utiliza en el presente documento, una "cantidad eficaz", en referencia a un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo u otro agente farmacéuticamente activo, significa una cantidad del compuesto suficiente para tratar la afección del paciente, pero lo suficientemente baja para evitar efectos secundarios graves y que, no obstante, puede ser determinada de la forma habitual por las personas expertas. Los compuestos de fórmula (I), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden administrarse una sola vez o según una pauta posológica en la que se administran varias dosis en intervalos variables durante un periodo de tiempo determinado. Las dosis diarias típicas pueden variar en función de la vía de administración elegida.

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas de compuestos de fórmula (I) mezclados con uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, los descritos en Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII ed., Mack Pub., N.Y, EE. UU.

La administración de los compuestos de la presente invención y sus composiciones farmacéuticas puede realizarse según las necesidades del paciente, por ejemplo, por vía oral, nasal, parenteral (subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal y por infusión), por inhalación, rectal, vaginal, tópica, local, transdérmica y por administración ocular.

Pueden utilizarse diversas formas farmacéuticas orales sólidas para administrar compuestos de la invención, incluidas formas sólidas, tales como comprimidos, cápsulas de gel, cápsulas, comprimidos oblongos, gránulos, pastillas y polvos a granel. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse solos o combinados con diversos vehículos farmacéuticamente aceptables, diluyentes (tales como sacarosa, manitol, lactosa, almidones) y excipientes conocidos, incluidos agentes de suspensión, solubilizantes, agentes tamponantes, aglutinantes, disgregantes, conservantes, colorantes, aromatizantes, lubricantes y similares. Las cápsulas, comprimidos y geles de liberación prolongada también son ventajosos para administrar los compuestos de la presente invención.

También pueden utilizarse diversas formas farmacéuticas orales líquidas para administrar compuestos de la invención, incluidas soluciones acuosas y no acuosas, emulsiones, suspensiones, jarabes y elixires. Dichas formas farmacéuticas también pueden contener diluyentes inertes adecuados conocidos, tales como agua, y excipientes adecuados conocidos, tales como conservantes, agentes humectantes, edulcorantes, aromatizantes, así como agentes para emulsionar y/o suspender los compuestos de la invención. Los compuestos de la presente invención pueden inyectarse, por ejemplo, por vía intravenosa, en forma de solución estéril isotónica. También son posibles otros preparados.

Para el tratamiento de las enfermedades de las vías respiratorias, los compuestos según la invención se administran preferentemente por inhalación.

Las preparaciones inhalables incluyen polvos inhalables, aerosoles dosificadores que contienen propelente o formulaciones inhalables sin propelente y pueden administrarse a través de un dispositivo de inhalación adecuado que puede seleccionarse, respectivamente, entre un inhalador de polvo seco, un inhalador dosificador presurizado o un nebulizador.

Para la administración en forma de polvo seco, pueden utilizarse inhaladores monodosis o multidosis conocidos en la técnica anterior. En ese caso, el polvo puede envasarse en cápsulas de gelatina, de plástico o de otro tipo, en cartuchos o blísteres o en un depósito. A los compuestos en polvo de la invención puede añadirse un diluyente o vehículo, por ejemplo, lactosa, o cualquier otro aditivo adecuado para mejorar la fracción respirable.

Los aerosoles de inhalación que contienen un gas propelente, tales como los hidrofluoroalcanos, pueden contener los compuestos de la invención en forma de solución o en forma dispersa. Las formulaciones con propelente también pueden contener otros ingredientes, tales como codisolventes, estabilizantes y opcionalmente otros excipientes.

Las formulaciones inhalables sin propelente que comprenden los compuestos de la invención pueden estar en forma de soluciones o suspensiones en un medio acuoso, alcohólico o hidroalcohólico y pueden administrarse mediante nebulizadores de chorro o ultrasónicos conocidos en la técnica anterior o mediante nebulizadores de niebla fina, tal como Respimat®, una marca registrada de Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals (Wachtel, H., Kattenbeck, S., Dunne, S.et al.,Pulm. Ther. (2017), 3: 19. https://doi.org/10.1007/s41030-017-004Q-8).

Según una realización especialmente preferida, las composiciones de la invención están en forma de una formulación de polvo seco, en la que está presente un vehículo que comprende partículas finas y/o gruesas de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y, además, está presente opcionalmente un aditivo con propiedades lubricantes o antiadherentes.

Preferentemente, las partículas gruesas del vehículo tienen un diámetro másico comprendido entre 30 y 500 micrómetros.

El vehículo suele ser un azúcar cristalino seleccionado del grupo que consiste en glucosa, arabinosa, maltosa, sacarosa, dextrosa y lactosa o un polialcohol seleccionado del grupo que consiste en manitol, maltitol, lactitol y sorbitol; y los materiales aditivos se seleccionan del grupo que consiste en aminoácidos, agentes tensioactivos solubles en agua, lubricantes y deslizantes.

Preferentemente las partículas de vehículo son partículas de alfa-lactosa o beta-lactosa, incluso más preferentemente son partículas de alfa-lactosa monohidratada.

Otra realización preferida de la invención es un dispositivo inhalador de polvo seco cargado con una formulación farmacéutica en forma de polvo seco como se ha definido anteriormente.

Otra realización preferida es un kit que comprende una formulación farmacéutica como se definió anteriormente y un dispositivo inhalador de polvo seco.

La formulación en polvo seco según la invención puede prepararse según procedimientos conocidos, tales como los descritos en los documentos WO0053157A1 y w O 96/23485

Según una realización preferida alternativa, la composición de la invención se presenta en forma de una formulación farmacéutica sin propelente para su administración al pulmón mediante nebulización, en la que dicho compuesto o sal del mismo se disuelve o suspende en un vehículo acuoso, que comprende opcionalmente otros excipientes farmacéuticamente aceptables.

Así, otra realización preferida es un kit que comprende una formulación farmacéutica, que es una solución o una suspensión de los compuestos de la invención como se ha indicado anteriormente, y un nebulizador.

Los compuestos de la invención pueden administrarse como único principio activo o combinados con otros principios activos farmacéuticos, incluidos los utilizados en la actualidad en el tratamiento de trastornos respiratorios y conocidos por la persona experta.

Las dosis de los compuestos de la invención dependen de una diversidad de factores que incluyen la enfermedad concreta a tratar, la gravedad de los síntomas, la vía de administración, la frecuencia del intervalo de administración, el compuesto concreto utilizado, la eficacia, el perfil toxicológico y el perfil farmacocinético del compuesto.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención.

Preparaciones de productos intermedios y ejemplos

Los nombres químicos de los compuestos se generaron con el software Structure To Name Enterprise 10.0 Cambridge.

Abreviaturas

Et2O = éter dietílico; Et3N = trietilamina; DCE = 1,2-dicloroetano; TEA = trietilamina; DCC = N,N'-ciclohexilcarbodiimida; HOBt = hidroxibenzotriazol; HATU = hexafluorofosfato de (dimetilamino)-N,N-dimetil(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metaniminio; HBTU = hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronio, hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio; EDC = clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; DMAP = 4-dimetilaminopiridina; DMF = dimetilformamida; EtOAc = acetato de etilo; TA = temperatura ambiente; THF = tetrahidrofurano;<d>C<m>= diclorometano; MeOH = alcohol metílico; EtOH = alcohol etílico; LHMDS = bis(trimetilsilil)amida de litio; m-CPBA = ácido meta-cloroperoxibenzoico; TFA = ácido trifluoroacético; LC-MS = cromatografía líquida/espectrometría de masas; HPLC = cromatografía líquida de alta presión; MPLC = cromatografía líquida de presión intermedia; SFC = cromatografía de fluidos supercríticos; dppf = 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno; X-Phos-Pd-G2 = cloro-(2-diclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio(N); S-Phos-Pd-G2 = cloro-(2-diclohexilfosfino-2',6'-dimetoxi-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio(II); D<i>EA o DIPEA = N,N-diisopropiletilamina; MeCN = acetonitrilo; MTBE = terc-butil metil éter; Ac2O = anhídrido acético; AcCl = cloruro de acetilo; HBTU = hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronio, hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio; TBDMSCl = terc-butil(cloro)dimetilsilano; DMSO = dimetilsulfóxido; BoC2O = dicarbonato de di-terc-butilo; UPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento.

Detalles experimentales generales

Los espectros de RMN de 1H se realizaron en un espectrómetro Varian MR-400 que funcionaba a 400 MHZ (frecuencia de protones), equipado con: una bobina de gradiente Z autoprotegida de 5 mm 1H/nX cabezal de sonda de banda ancha para detección inversa, unidad de canal de bloqueo digital de deuterio, unidad de detección digital en cuadratura con desplazamiento de frecuencia del transmisor, o en espectrómetros AgilentVNMRS-500 o en un Bruker Avance 400. Los desplazamientos químicos se expresan como valores 5 en ppm en relación con el trimetilsilano (TMS) como patrón interno. Las constantes de acoplamiento (valoresJ) se expresan en hercios (Hz) y las multiplicidades se indican con las siguientes abreviaturas (s = singulete, d = doblete, t = triplete, q = cuadruplete, m = multiplete, s a = ancho, nd = no determinado).

Procedimientos analíticos de LC/UV/MS

Se calcula que los tiempos de retención de LC/MS estarán afectados por un error experimental de 0,5 min. La LCMS puede registrarse en las siguientes condiciones: las trazas cromatográficas DAD de matriz de diodos, los cromatogramas de masas y los espectros de masas pueden adquirirse en el sistema UPLC/PDA/MS Acquity™ acoplado con el espectrómetro de masas de cuadrupolo único Micromass ZQ™ o Waters SQD que funciona en modo de ionización ES por electronebulización positiva y/o negativa y/o el sistema Fractionlynx utilizado en modo analítico acoplado con el cuadrupolo único ZQ™ que funciona en modo de ionización ES positiva y/o negativa. Los procedimientos de control de calidad utilizados funcionaban en condiciones de pH bajo o de pH alto.

Procedimiento 1. Aquity UPLC - Espectrómetro de masas QDa con una columna de fase inversa C18 (50 * 2,1 mm Acquity CSH con tamaño de partícula de 1,7 pm) mantenida a 40 °C, elución con A: agua/acetonitrilo 95/5 ácido fórmico al 0,05 %; B: acetonitrilo/agua 95/5 ácido fórmico al 0,05 %.

Gradiente:

Detección-MS, UV PDA

Procedimiento de ionización MS-electronebulización (iones positivos/negativos).

Procedimiento 2, condiciones de pH bajo. Columna: Acquity UPLC BEH C18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm, la temperatura de la columna fue de 40 °C; el disolvente de la fase móvil A fue agua miliQ HCOOH al 0,1 %, el disolvente de la fase móvil B MeCN HCOOH al 0,1 %. El caudal fue de 1 ml/min. La tabla de gradientes fue t = 0 min A al 97 %-B al 3 %, t = 1,5 min A al 0,1 %-B al 99,9 %, t = 1,9 min A al 0,1 %-B al 99,9 % y t = 2 min A al 97 %-B al 3 %. El intervalo de detección UV fue 210-350 nm y el intervalo ES+/ES- fue 100=1000 amu.

Procedimiento 3, condiciones de pH bajo. Columna: Acquity CSH C18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm, la temperatura de la columna fue de 40 °C; el disolvente de la fase móvil A fue agua miliQ HCOOH al 0,1 %, el disolvente de la fase móvil B MeCN HCOOH al 0,1 %. El caudal fue de 1 ml/min. La tabla de gradientes fue t = 0 min A al 97 %-B al 3 %, t = 1,5 min A al 0,1 %-B al 99,9 %, t = 1,9 min A al 0,1 %-B al 99,9 % y t = 2 min A al 97 %-B al 3 %. El intervalo de detección UV fue 210-350 nm y el intervalo ES+/ES- fue 100=1000 amu.

Procedimiento 4. Aquity UPLC - Espectrómetro de masas QDa con una columna de fase inversa C18 (50 * 2,1 mm Acquity CSH con tamaño de partícula de 1,7 pm) mantenida a 40 °C, elución con A: agua/acetonitrilo 95/5 ácido fórmico al 0,05 %; B: acetonitrilo/agua 95/5 ácido fórmico al 0,05 %.

Gradiente:

Detección-MS, UV PDA

Procedimiento de ionización MS-electronebulización (iones positivos/negativos).

Procedimiento 5, condiciones de pH elevado. Columna: Acquity UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1 x 50 mm, la temperatura de la columna fue de 40 °C; la fase móvil disolvente A fue solución acuosa 10 mM de NH4HCO3ajustada a pH = 10 con amoníaco, la fase móvil disolvente B MeCN. El caudal fue de 1 ml/min. La tabla de gradientes fue t = 0 min A al 97 %-B al 3 %, t = 1,5 min A al 0,1 %-B al 99,9 %, t = 1,9 min A al 0,1 %-B al 99,9 % y t = 2 min A al 97 %-B al 3 %. El intervalo de detección UV fue 210-350 nm y el intervalo ES+/ES- fue 100=1000 amu.

Analítica quiral para compuestos quirales

El exceso enantiomérico de los compuestos quirales se determinó mediante análisis de HPLC quiral en un HPLC Agilent 1100 equipado con válvula de conmutación de 6 posiciones y detectores DAD y CD. Se utilizaron los siguientes procedimientos:

Procedimiento A1, Columna: Chiralpak IC (25 x 0,46 cm), 5 μm; Fase móvil: n-hexano/(etanol/diclorometano 90/10 % v/v isopropilamina al 0,1 %) 80/10 % v/v; Caudal: 1,0 ml/min; DAD: 220 nm.

Procedimiento A2, Columna: Whelk 0-1 (R,R) (25 x 0,46 cm), 10 μm; Fase móvil: n-hexano/(2-propanol/metanol 1/1 isopropilamina al 0,1 %) 30/70 % v/v; Caudal: 1,0 ml/min;<d>A<d>: 220 nm.

Procedimiento A3, Columna: Chiralpak AD-H (25 * 0,46 cm), 5 μm; Fase móvil: n-hexano/(etanol isopropilamina al 0,1 %) 75/25 % v/v; Caudal: 1,0 ml/min; DAD: 220 nm.

Procedimiento A4, Columna: Chiralpak AD-H (25 * 0,46 cm), 5 μm; Fase móvil: (2-propanol isopropilamina al 0,1 %) 32 %; Caudal: 2,5 ml/min; DAD: 220 nm.

La cromatografía en columna rápida se realiza con un sistema Isolera MPLC (fabricado por Biotage) utilizando cartuchos de gel de sílice o de fase inversa precargados (suministrados por Biotage). Muchos de los compuestos descritos en los siguientes ejemplos se han preparado a partir de materiales de partida estereoquímicamente puros, por ejemplo, un 95 % e.e. La estereoquímica de los compuestos de los ejemplos, cuando se indica, se ha asignado suponiendo que la configuración absoluta en los centros estereogénicos resueltos de los materiales de partida se mantiene en todas las condiciones de reacción posteriores. En los procedimientos que siguen, después de cada material de partida, a veces se hace referencia a un número de compuesto. Esto se facilita únicamente como ayuda para el químico experto. El material de partida puede no haber sido preparado necesariamente a partir del lote al que se hace referencia. Cuando se hace referencia al uso de un procedimiento "similar" o "análogo", como apreciarán los expertos en la materia, dicho procedimiento puede implicar pequeñas variaciones, por ejemplo, en la temperatura de reacción, la cantidad de reactivo/disolvente, el tiempo de reacción, las condiciones de procesamiento o las condiciones de purificación cromatográfica.

Preparación de productos intermedios:

Intermedio A1: 3-(3-(1-Hidroxietil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il)benzaldehído

En un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 500 ml, se cargaron ácido (3-formilfenil)borónico (1 g, 6,67 mmol), 4 bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona(intermedio A2 en el documento WO 2015091685) (2,15 g, 8,00 mmol) y de fosfato de potasio hidratado (4,61 g, 20,01 mmol) y después se añadieron THF (50 ml) y agua (50 ml). Se burbujeó argón durante 10 min y después se añadió XPhos-Pd-G2 (0,367 g, 0,467 mmol). Se continuó burbujeando durante otros 10 min y después se agitó la mezcla turbia marrón en una atmósfera de argón durante toda la noche. La mezcla se vertió en 300 ml de agua y luego se extrajo dos veces con 200 ml de EtOAc. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía (SNAP 340 g) eluyendo con mezclas de hexano\EtOAc para obtener 3-(3-(1-hidroxietil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il)benzaldehído en forma de un sólido gomoso (0,110 g, 0,374 mmol, 6 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,45 min, 295.1.06 [M+H]+, procedimiento 4.

Intermedio A2: 4-[4-Cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

Etapa 1.2-Cloro-5-(tetrametiM,3,2-dioxaborolan-2-il)benzaldehído (intermedio A2.1)

Una mezcla de 5-bromo-2-clorobenzaldehído (1,50 g, 6,83 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,08 g, 8,20 mmol), acetato de potasio (1,34 g, 13,66 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (0,150 g, 0,205 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (22,5 ml) se calentó a 100 °C en una atmósfera de N2 durante la noche. Tras enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con AcOEt, se filtró a través de un lecho corto de Celite y el disolvente se eliminó al vacío. El residuo, 2-cloro-5-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzaldehído (6,83 mmol teóricos), no se purificó más, sino que se utilizó tal cual en la etapa siguiente.

UPLC-MS: 0,86 min, 267,06 [M+H]+, procedimiento 2.

Etapa 2 .2-[4-Cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A2.2)

Se disolvió una mezcla de 2-cloro-5-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzaldehído (intermedio A2.1) (bruto, 6,83 mmol teóricos) y pinacol (3,23 g, 27,32 mmol) en 25,0 ml de tolueno. Después se añadió ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0,065 g, 0,342 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C durante 5 h. A continuación, se añadió ácido ptoluenosulfónico monohidratado (0,100 g, 0,526 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C durante toda la noche. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se solubilizó en 20 ml de isopropanol. A continuación, se añadieron lentamente 30 ml de agua. Tras la adición precipitó un sólido que se recogió por filtración para obtener 2-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano en forma de un residuo sólido marrón (2,24 g, 6,11 mmol, 89 %).

UPLC-MS: 1,53 min, 367,11 [M+H]+, procedimiento 2.

Etapa 3. 4-[4-Cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

El compuesto del título se preparó de manera similar a la del intermedio A1 usando 4-bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio a 2 en el documento WO 2015091685) (1 g, 3,72 mmol), 2-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A2.2) (1,24 g, 3,38 mmol), K3PO4 (2,153 g, 10,14 mmol) y XPhos-Pd-G2 (0,133 g, 0,169 mmol). Tras el tratamiento, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna rápida en una columna Biotage S<n>A<p>de gel de sílice de 100 g (eluyente: gradiente de AcOEt en ciclohexano del 5 al 50 %). La evaporación de las fracciones oportunas proporcionó 4-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona en forma de un sólido blanquecino (0,458 g, 1,067 mmol, 32 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,19 min, 429,3 [M+H]+, procedimiento 3.

Intermedio A3: (2R)-2-{3-[3-(1-Hidroxietil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il]fenil}pirrolidin-1-carboxilato

Etapa 1. (2R)-2-(3-Bromofeml)pirrolid¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (intermedio A3.1)

A una solución agitada de clorhidrato de ^S^-^-bromofeniOpirrolidina (1,00 g, 3,81 mmol) en DCM (12 ml) a 0 °C y en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió TEA (0,58 ml, 4,19 mmol), seguido de una solución de Boc2Ü (1,08 g, 4,95 mmol) en DCM (4 ml) por porciones. A continuación, se retiró el baño de hielo y la mezcla de reacción resultante se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCÜ3, se secó sobre Na2SÜ4y se concentró a presión reducida. El material bruto se purificó por FC sobre sílice (Snap 25, eluyendo con Cy/AE de 100/0 a 90/10) para obtener (2R)-2-(3-bromofen¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de terc-butilo (1,15 g, 3,53 mmol, 92 %).

UPLC-MS: 1,32 min, 327,1 [M+H]+, procedimiento 3.

Etapa 2. (2R)-2-[3-(Tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)fen¡l]p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (intermedio A3.2)

Una mezcla de (2R)-2-(3-bromofen¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (intermedio A3.1) (1,15 g, 3,53 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,34 g, 5,28 mmol), acetato de potasio (0,70 g, 7,10 mmol) y Pd(dppf)Cl<2>(0,080 g, 0,11 mmol) en 1,4-dioxano hidratado (13 ml) se agitó en un vial tapado a 100 °C durante 6 h. Se añadió más cantidad de bis(pinacolato)diboro (0,32 g, 1,26 mmol), AcÜK (0,21 g, 2,14 mmol) y Pd(dppf)Cl2(0,024 g, 0,033 mmol) y la mezcla se agitó a 100 °C durante 5 h más. La mezcla de reacción se diluyó con EtÜAc, se filtró y el disolvente se eliminó a presión reducida. El material bruto se purificó por FC sobre sílice (Snap 50, eluyendo con Cy/AE de 100/0 a 90/10) obteniéndose (2R)-2-[3-(tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)fen¡l]p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de terc-butilo en forma de un sólido ceroso blanquecino (1,23 g, 3,29 mmol, 93 %).

UPLC-MS: 1,41 min, 374,3 [M+H]+, procedimiento 3.

Etapa 3. (2R)-2-{3-[3-(1-H¡drox¡et¡l)-1-oxo-1H-¡socromen-4-¡l]fen¡l}p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de 4-tere-butilo

El compuesto del título se preparó de manera similar a la del intermedio A1 usando 4-bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio a 2 en el documento WÜ 2015091685) (1,33 g, 4,94 mmol), (2R)-2-[3-(tetrametil-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)fen¡l]p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato (intermedio A3.2) (1,23 g, 3,29 mmol), KbPÜ4 (2,10 g, 9,87 mmol) y X-Phos-Pd(crotilo)Cl (0,11 g, 0,16 mmol). Tras el tratamiento, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna rápida en una columna de sílice-NH Biotage SNAP de 55 g (eluyente: gradiente de AcOEt en ciclohexano del 0 al 35%). La evaporación de las fracciones oportunas proporcionó (2R)-2-{3-[3-(1-h¡drox¡et¡l)-1-oxo-1H-¡socromen-4-ilfeni^pirrolidin-1-carboxilato de 4-tere-butilo en forma de un aceite oscuro (0,89 g, 2,04 mmol, 62 %).

UPLC-MS: 1,19 min, 436,3 [M+H]+, procedimiento 3.

Intermedio A4: 4-[4-Fluoro-3-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3-d¡oxolan-2-¡l)fen¡l]-3-(1-h¡drox¡et¡l)-1H-¡socromen-1-ona

Etapa 1.2-[4-Fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A4.1)

Se disolvió una mezcla de ácido 4-fluoro-3-formilfenilborónico (1,5 g, 8,93 mmol) y pinacol (4,22 g, 35,73 mmol) en 30 ml de tolueno. A continuación, se añadió ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0,085 g, 0,45 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C durante 4 h. La mezcla se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. El sólido formado se retiró por filtración y los licores madre se concentraron al vacío para dejar un residuo aceitoso que cristalizó al reposar. Este sólido se suspendió en 30 ml de 'PrOH y se calentó a 70 °C para favorecer la disolución. Tras enfriar, se añadieron gota a gota 12 ml de agua para cristalizar el compuesto. Tras la adición, la suspensión espesa se filtró en un embudo Buchner. La torta se lavó con agua y se secó a presión reducida. De los licores madre precipitó un segundo sólido que se recuperó por filtración en un embudo Buchner y la torta se lavó con agua. Ambos sólidos se secaron juntos a presión reducida para obtener 2-[4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano en forma de un sólido blanquecino (3,07 g, 8,76 mmol, 98 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,44 min, 351,2 [M+H]+, procedimiento 3.

Etapa 2. 4-[4-Fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

El compuesto del título se preparó de manera similar a la del intermedio A1 usando 4-bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio A2 en el documento WO 2015091685) (2,83 g, 10,51 mmol), 2-[4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A4.1) (3,07 g, 8,76 mmol), K3PO4 (5,58 g, 26,28 mmol) y XPhos-Pd-G2 (0,345 g, 0,438 mmol). Tras el tratamiento, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna rápida en una columna Biotage SNAP de gel de sílice de 100 g (eluyente: gradiente de AcOEt en ciclohexano del 0 al 35 %). La evaporación de las fracciones oportunas proporcionó 4-[4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona en forma de un sólido amarillo claro (1,79 g, 4,34 mmol, 50 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,23 min, 413,2 [M+H]+, procedimiento 3.

Intermedio A5: 4-(3-Fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil)-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

Etapa 1.2-[3-Fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A5.1)

Se disolvió una mezcla de ácido 3-fluoro-5-formilfenilborónico (1 g, 5,95 mmol) y pinacol 76-09-5 (2,8 g, 23,8 mmol) en tolueno (20 ml). A continuación, se añadió ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0,057 g, 0,3 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C durante 4 h. La mezcla se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. Se concentró al vacío para obtener 2-[3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano en forma de un aceite amarillo claro (material bruto). Se utilizó como tal en la siguiente etapa.

UPLC-MS: 1,48 min, 351,3 [M+H]+, procedimiento 3.

Etapa 2. 4-(3-Fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil)-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

El compuesto del título se preparó de manera similar a la del intermedio A1 usando 4-bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio A2 en el documento WO 2015091685) (1,9 g, 7,14 mmol), 2-[3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (intermedio A5.1) (5,95 mmol teóricos), K3PO4(3,8 g, 17,85 mmol) y XPhos-Pd-G2 (0,236 g, 0,3 mmol). Tras el tratamiento, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna rápida con un cartucho SNAP de sílice-NH de 110 g (eluyente de Cy a EtOAc al 30 %). Se purificó de nuevo mediante un cartucho SNAP de gel de sílice de 25 g (eluyente de Cy a EtOAc al 30 %) para proporcionar 4-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil)-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona en forma de una espuma blanca (0,250 g, 0,61 mmol, 9 %).

UPLC-MS: 1,22 min, 413,3 [M+H]+, procedimiento 3.

Intermedio A6: 4-(3-(1-(Dimetilamino)etil)fenil)-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona

El compuesto del título se preparó de manera similar a la del intermedio A1 usando 4-bromo-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio A2 en el documento WO 2015091685) (1,62 g, 6,03 mmol), ácido (3-(1-(dimetilamino)etil)fenil)borónico (970 mg, 5,02 mmol), Kí PO4 (3,47 g, 15,1 mmol) y XPhos-Pd-G2 (0,277 g, 0,35 mmol). Después del tratamiento, el residuo se purificó por cromatografía con H2O\MeCN\HCOOH 95:5:0,1 % y MeCN\H2O\HCOOH 95:5:0,1 % para obtener 4-(3-(1-(dimetilamino)etil)fenil)-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona (0,356 g, material bruto).

UPLC-MS: 0,45 min, 338,2 [M+H]+, procedimiento 1.

Intermedio B1: 3-(1-Hidroxietil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona

En un matraz de fondo redondo de 250 ml se disolvió 3-(3-(1-hidroxietil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il)benzaldehído (intermedio A1) (0,500 g, 1,699 mmol) en DCM (20 ml), se añadió 1-metilpiperazina (0,582 ml, 5,10 mmol), seguida de ácido acético (0,292 ml, 5,10 mmol). A continuación, se añadió triacetoxihidroborato de sodio (1,800 g, 8,49 mmol) en porciones. La mezcla se vertió en una mezcla de DCM y solución acuosa saturada de NaHCÜ3 (100 ml/100 ml) y se observó efervescencia. La fase orgánica se concentró al vacío y el material bruto resultante se purificó mediante cromatografía RP (Biotage Isolera, cartucho C18 de 60 g, elución en gradiente de B del 0 al 50 % en A en 10 CV; A: agua/acetonitrilo 95:5 HCÜÜH al 0,1 %, B: agua/acetonitrilo 5:95 HCÜÜH al 0,1 %; flujo 30 ml/min) para obtener 3-(1-hidroxietil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona (0,482 g, 1,274 mmol, 75% de rendimiento).

UPLC-MS: 0,73 min, 379,1 [M+H]+, procedimiento 1.

Los intermedios B2 que se encuentran en la tabla siguiente pueden prepararse a partir de los reactivos adecuados que se indican a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto B1.

Intermedio C1: 3-(1-Bromoetil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona

Se disolvió 3-(1-hidroxietil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio B1) (0,482 g, 1,274 mmol) en DCM seco (20 ml) y luego se añadió lentamente tribromofosfina 1 M en DCM (2,55 ml, 2,55 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente. La reacción se inactivó añadiendo 60 ml de una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 (evolución gaseosa) y se extrajo con 60 ml de DCM, la fase orgánica se concentró al vacío para obtener 3-(1-bromoetil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona en forma de un aceite rojo (material bruto). UPLC-MS: 1,07 min, 441,0 [M]+ y 442,9 [M+2]+, procedimiento 4.

Los intermedios C2-C7 que se encuentran en la tabla siguiente pueden prepararse a partir del intermedio adecuado (Int.) que se indica a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto C1.

Intermedio DI: 3-(1-(4-Am¡no-3-(5-metox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-cf]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona

En un matraz de fondo redondo de 250 ml se suspend¡eron 3-(5-metox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (0,463 g, 1,912 mmol) y carbonato de potas¡o (0,528 g, 3,82 mmol) en DMF seca (15 ml) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 15 m¡n antes de añad¡r 3-(1-bromoet¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona (¡ntermed¡o C1) d¡suelta en 5 ml de DMF seca. Tras dos horas, se añad¡eron 0,200 g de 3-(5-metox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na y una cant¡dad extra de K2CO3y se cont¡nuó calentando a 40 °C durante 3 h. La reacc¡ón se ¡nact¡vó con una soluc¡ón acuosa saturada de NaHCO3y se extrajo con 40 ml de DCM, después se concentró para dejar un ace¡te marrón que se purificó por cromatografía RP (B¡otage Isolera, cartucho C18 de 60 g, eluc¡ón en grad¡ente de B del 0 al 50 % en A en 10 CV; A: agua/aceton¡tr¡lo 95:5 HCOOH al 0,1 %, B: agua/aceton¡tr¡lo 5:95 HCOOH al 0,1 %) para dejar 3-(1-(4-am¡no-3-(5-metox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d|p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona en forma de un ace¡te amarillo (0,342 g, 0,567 mmol, 45% de rend¡m¡ento).

UPLC-MS: 0,60 m¡n, 603,2 [M+H]+, proced¡m¡ento 1.

Los ¡ntermed¡os D2 que se encuentran en la tabla s¡gu¡ente pueden prepararse a partir del ¡ntermed¡o adecuado (Int.) que se ¡nd¡ca a cont¡nuac¡ón s¡gu¡endo proced¡m¡entos s¡m¡lares a los del compuesto D1.

Intermed¡o Ela: 3-(1-{4-Am¡no-3-yodo-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l}et¡l)-4-[4-doro-3-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3-d¡oxolan-2-¡l)fen¡l]-1 H-¡socromen-1-ona

Se suspendieron 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,311 g, 1,19 mmol) y K2CO3 (0,47 g, 3,4 mmol) en DMF (10 ml) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 30 min. Después se añadió lentamente 3-(1-bromoetil)-4-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-1H-isocromen-1-ona (intermedio C3) (0,557 g, 1,13 mmol) disuelta en DMF (5 ml) y la mezcla se mantuvo a 60 °C durante 90 min. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y después se añadieron AcOEt y agua. Las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna rápida en un cartucho Biotage SNAP KP-Sil de 100 g, eluyendo con un gradiente de AcOEt en ciclohexano del 50 al 100 %, para obtener el compuesto del título 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etil)-4-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-1H-isocromen-1-ona (0,379 g, 0,564 mmol, 50 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,3 min, 671,2 [M+H]+, procedimiento 3.

Los intermedios E2a-E5a que se encuentran en la tabla siguiente pueden prepararse a partir del intermedio adecuado (Int.) que se indica a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto E1a.

Intermedio Elb: 5-[3-(1-{4-Amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il]-2-clorobenzaldehído

Se disolvió 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-4-[4-cloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)fenil]-1H-isocromen-1-ona (0,379 g, 0,565 mmol) en CH3CN (5 ml) y luego se añadió HCl 1 N acuoso (5 ml). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El sólido en suspensión se recuperó por filtración en un embudo Buchner. La torta resultante se lavó varias veces con éter dietílico hasta que el pH resultó neutro y se secó a alto vacío. El compuesto 5-[3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il]-2-clorobenzaldehído (0,32 g, 0,56 mmol, 99 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido blanco y se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

UPLC-MS: 1,06 min, 572,1 [M+H]+, procedimiento 3.

Los intermedios E3b-E4b que se encuentran en la tabla siguiente pueden prepararse a partir del intermedio adecuado (Int.) que se indica a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto E1b.

Intermedio E1c: 3-(1-{4-Amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]p¡rim¡d¡n-1-¡l}et¡l)-4-{4-doro-3-[(d¡met¡lam¡no)met¡l]feml}-1H-isocromen-1-ona

A una suspens¡ón ag¡tada de 5-[3-(1-{4-am¡no-3-yodo-1H-p¡razolo[3,4-cf]p¡rim¡d¡n-1-¡l}et¡l)-1-oxo-1H-¡socromen-4-¡l]-2-clorobenzaldehído (¡ntermed¡o F1) (0,150 g, 0,26 mmol) en DCM/d¡oxano/CH3CN (10 ml/2 ml/2 ml) se le añad¡ó d¡met¡lam¡na 2 M en THF (0,212 ml, 0,39 mmol). Esta suspens¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡n. A cont¡nuac¡ón, se añad¡ó Na(OAc)3BH (0,110 g, 0,52 mmol) y la mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante toda la noche. Se añad¡ó 1,5 eq. más de d¡met¡lam¡na 2 M en<t>HF (0,212 ml, 0,39 mmol), segu¡dos de 2 eq. de Na(OAc)3BH (0,110 g, 0,52 mmol). La mezcla se dejó reacc¡onar a temperatura amb¡ente durante 2 h. La mezcla se ¡nact¡vó con una soluc¡ón acuosa saturada de NaHCo3, el producto se extrajo con DCM (3x) y se lavó con agua (1x). Las capas orgán¡cas reun¡das se h¡c¡eron pasar a través de un separador de fases y el d¡solvente se el¡m¡nó al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna en una columna de gel de sílice B¡otage de 25 g, ut¡l¡zando como eluyente un grad¡ente de MeOH en DCM del 0 al 10 %. El compuesto deseado, 3-(1-{4-am¡no-3-yodo-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l}et¡l)-4-{4-cloro-3-[(d¡met¡lam¡no)met¡l]fen¡l}-1H-¡socromen-1-ona (0,105,2 g, 0,175 mmol, 67% de rend¡m¡ento), se obtuvo en forma de un sól¡do blanco.

UPLC-MS: 0,48-0,53 m¡n, 568,3 [M+H]+, proced¡m¡ento 3.

Los ¡ntermed¡os E3c-E4c que se encuentran en la tabla s¡gu¡ente pueden prepararse a partir de react¡vos adecuados que se ¡nd¡can a cont¡nuac¡ón s¡gu¡endo proced¡m¡entos s¡m¡lares a los del compuesto E1c.

Intermedio E7: Clorhidrato de 3-(1 -{4-amino-3-yodo-1 ^-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-M}etil)-4-{3-[(2R)-pirrolidin-2-il]fenil}-1H-isocromen-1-ona

Se disolvió (2R)-2-{3-[3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etil)-1-oxo-1H-isocromen-4-il]fenil}pirrolidina-1-carboxilato de tere-butilo (intermedio E2a) (0,224 g, 0,330 mmol) en HCl 1,25 M en MeOH (5 ml) y la mezcla se agitó a 38 °C durante 4 h. El disolvente se eliminó a presión reducida para proporcionar clorhidrato de 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etil)-4-{3-[(2R)-pirrolidin-2-il]fenil}-1H-isocromen-1-ona en forma de un sólido blanco (0,212 g, bruto). El material se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

UPLC-MS: 1,03 min, 579,2 [M+H]+, procedimiento 5.

Intermedio E8: 3-(1-{4-Amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etilo)-4-{3-[(2R)-1-metilpirrolidin-2-il]fenil}-1H-isocromen-1-ona

A una suspensión agitada de clorhidrato de 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etilo)-4-{3-[(2R)-pirrolidin-2-il]fenil}-7H-isocromen-1-ona (intermedio E6) (0,212 g, bruto) en DCM (4 ml) se le añadió una solución acuosa de formaldehído al 37 % en peso (61 pl, 0,825 mmol), seguido de DIPEA (63 pl, 0,363 mmol) y ácido acético (1 gota). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A continuación se añadió Na(OAc)3BH (0,084 g, 0,396 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se inactivó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se extrajo con DCM. Las fases orgánicas se filtraron a través de un separador de fases hidrófobo y el disolvente se eliminó a presión reducida. El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna rápida (Biotage SP1, columna KP-Sil de 25 g, DCM/MeOH de 100:0 a 90:10 como eluyente). La evaporación de las fracciones oportunas proporcionó 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}etilo)-4-{3-[(2R)-1-metilpirrolidin-2-il]fenil}-1H-isocromen-1-ona en forma de un sólido blanquecino (0,142 g, 0,24 mmol, 73 % de rendimiento).

UPLC-MS: 1,16 min, 593,3 [M+H]+, procedimiento 5.

Preparación de compuestos

Ejemplo comparativo 1: 3-(1-(4-Amino-3-(3-fluoro-5-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona, segundo enantiómero eluido.

Se disolvió el racemato de 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona (ejemplo 142 en el documento WO 2015091685) (0,110 g, 0,16 mmol) en MeOH/DCM 1/1 (10 ml) y se sometió a resolución quiral mediante cromatografía quiral preparativa. Condiciones: Columna: Chiralpak iC (25 * 2,0 cm), 5 pm; Fase móvil: n-hexano/(etanol/diclorometano 9/1 isopropilamina al 0,1 %) 82/18% v/v; Caudal 18 ml/min; Detección DAD: 220 nm; Bucle: 500 pl; Inyección: 6,5 mg/inyección. Las fracciones que contenían el segundo enantiómero eluido se evaporaron hasta la sequedad para obtener 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona del título (0,031 g, 0,056 mmol).

HPLC quiral (procedimiento A1), tR 13,8 min (segundo enantiómero eluido), e.e. > 99 %.

UPLC-MS: 0,63-0,66, 606,4 [M+H]+, procedimiento 3.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 10,15-10,24 (m, 1H), 8,19-8,28 (m, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,73-7,80 (m, 1H), 7,58 7,67 (m, 1H), 7,25-7,50 (m, 3H), 6,85-7,00 (m, 3H), 6,78-6,84 (m, 1H), 6,63-6,70 (m, 1H), 5,66-5,81 (m, 1H), 3,23-3,60 (m, 2H), 1,99-2,48 (m, 11H), 1,74-1,89 (m, 3H).

Datos analíticos del primer enantiómero eluido

HPLC quiral (procedimiento A1),

tR 12,0 min (primer enantiómero eluido), e.e. > 99 %.

Los análisis de UPLC y RMN de 1H de los enantiómeros puros se solaparon en todos los aspectos.

Ejemplo 1: Clorhidrato de 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona

En un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con un agitador magnético se suspendió 3-(1-(4-amino-3-(5-metoxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona (intermedio D1) (0,342 g, 0,567 mmol) en DCM (10 ml) y después se añadió BBr31 M en DCM (5 ml, 5,00 mmol). La mezcla se dejó en agitación 24 h, después se añadió MeOH (20 ml) y una pequeña cantidad de HCl 2 M. A continuación, la solución se concentró al vacío y se purificó mediante cromatografía Rp (Biotage Isolera, cartucho C18 de 60 g, elución en gradiente de B del 0 al 50 % en A en 10 CV; A: agua/acetonitrilo 95:5 HCOOH al 0,1 %, B: agua/acetonitrilo 5:95 HCOOH al 0,1 %, flujo 20 ml/min) para obtener el producto deseado, clorhidrato de 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4}-3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona (0,093 g, 0,149 mmol, 26 % de rendimiento).

UPLC-MS: 0,52 min, 589,0 [M+H]+, procedimiento 1.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 11,39 (s a, 1H), 9,87-10,49 (m, 1H), 8,05-8,32 (m, 5H), 7,72-7,81 (m, 1H), 7,59-7,67 (m, 1H), 6,67-7,53 (m, 8H), 5,66-5,84 (m, 1H), 3,34-3,63 (m, 2H), 2,24-2,92 (s, 11H), 1,75-1,92 (m, 3H).

Ejemplo 3: 3-{1-[4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{4-cloro-3-[(dimetilamino)metil]fenil}-1 H-isocromen-1-ona

Una mezcla de 3-(1-{4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il}etil)-4-{4-cloro-3-[(dimetilamino)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona (intermedio E1c) (0,105 g, 0,175 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-3-ol (0,077 g, 0,35 mmol) y KíPO4 (0,113 g, 0,53 mmol) en THF/agua 3:1 (volumen: 8 ml) se desoxigenó mediante burbujeo de N2 durante 5 min, después se añadió SPhos-Pd-G2 (0,025 g, 0,035 mmol) y la mezcla se calentó a 85 °C durante 3 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se repartió entre agua y DCM. La fase acuosa se extrajo con DCM (3x), las capas orgánicas reunidas se lavaron con agua (1x), se hicieron pasar a través de un separador de fases y el disolvente se eliminó a presión reducida. El material bruto obtenido se purificó mediante cromatografía en columna rápida en una columna Biotage de sílice-NH de 11 g utilizando como eluyente un gradiente de MeOH en DCM del 0 al 25%. El producto deseado, 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{4-cloro-3-[(dimetilamino)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona, se obtuvo en forma de un sólido amarillento (0,068 g, 0,12 mmol, 68 % de rendimiento).

UPLC-MS: 0,61 min, 601,2 [M+H]+, procedimiento 3.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,18-8,25 (m, 3H), 8,05-8,10 (m, 1H), 7,73-7,79 (m, 1H), 7,58-7,66 (m, 1H), 7,30-7,58 (m, 3H), 6,85-7,03 (m, 2H), 5,71-5,79 (m, 1H), 3,13-3,22 (m, 2H), 2,01-2,25 (m, 6H), 1,80-1,87 (m, 3H).

El ejemplo 2 que se encuentra en la tabla siguiente se preparó a partir del intermedio adecuado (Int.) que se indica a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto 1. Los ejemplos 4 a 7 de la tabla siguiente se prepararon a partir del intermedio adecuado (Int.) descrito a continuación siguiendo procedimientos similares a los del compuesto 3.

H),

H),

Ejemplo 1a: 3-{1-[4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona, primer enantiómero eluido.

Se diluyó el racemato de clorhidrato de 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona (ejemplo 1) (0,122 g, 0,195 mmol) con MeOH y se hizo pasar por un cartucho de resina PL-HCO3 MP (5 g) para obtener la base libre (0,080 g), que se disolvió en MeOH (5 ml) y se sometió a resolución quiral por cromatografía quiral preparativa. Condiciones: Columna: Whelk 01 (R,R) (25 x 2,1 cm), 10 pm; Fase móvil: n-hexano/(2-propanol/metanol 1/1 isopropilamina al 0,1 %) 30/70 % v/v; Caudal 17 ml/min; Detección DAD: 220 nm; Bucle: 300 pl; Inyección: 4,8 mg/inyección. Las fracciones que contenían el primer enantiómero eluido se evaporaron hasta la sequedad para obtener el compuesto 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona (0,021 g, 0,036 mmol).

HPLC quiral (procedimiento A2),

tR 8,7 min (primer enantiómero eluido), e.e. > 99 %

UPLC-MS: 0,48-0,54, 589,4 [M+H]+, procedimiento 3.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 9,84-10,55 (m, 1H), 8,02-8,36 (m, 4H), 7,72-7,81 (m, 1H), 7,57-7,67 (m, 1H), 7,25-7,52 (m, 4H), 6,87-7,01 (m, 2H), 6,53-7,88 (m, 2H), 5,64-5,83 (m, 1H), 3,13-3,62 (m, 2H), 2,00-2,47 (m, 11H), I , 76-1,88 (m, 3H).

Datos analíticos del segundo enantiómero eluido

HPLC quiral (procedimiento A2),

tR 10,0 min (segundo enantiómero eluido), e.e. = 97,4 %

Los análisis de UPLC y RMN de 1H de los enantiómeros puros se solaparon en todos los aspectos.

Se llevó a cabo un análisis por difracción de rayos X de monocristal (D. de Sanctis, A. Beteva, H. Caserotto, F. Dobias, J. Gabadinho, T Giraud, A. Gobbo, M. Guijarro, M. Lentini, B. Lavault, T. Mairs, S. McSweeney, S. Petitdemange, V. Rey-Bakaikoa, J. Surr, P Theveneau, G.A. Leonard, C. Mueller-Dieckmann, J. Sync. Rad., 2012, 19, 455-461) en la línea de cristalografía ID29 de la European Synchrotron Radiation Facility (ESRF) siguiendo el procedimiento y las condiciones especificadas a continuación: El monocristal se obtuvo con experimentos de difusión de vapor en EtOH/H2O al 6 % (disolvente interno) y EtOAc (disolvente externo). Los datos de difracción se registraron con un detector de píxeles Pilatus 6M-F de lectura rápida (Dectris LTD). La recogida de datos se realizó a 100 K utilizando un criosistema Oxford que aplica el procedimiento de cristal giratorio, con radiación monocromática a una longitud de onda de 1,000 Á. La estructura se resolvió mediante el algoritmo de espacio dual incluido en el programa ShelxT y se refinó con el programa SHELXL-2016/6. El parámetro Flack (S. Parsons, H.D. Flack, T Wagner, Acta Cryst., 2013, B69, 249-259) se obtuvo a partir de los datos recogidos a 1 Á comoFlackx= 0,07(18); y al primer enantiómero eluido del ejemplo 1a se le asignó la configuración absoluta S. La determinación se utilizó para confirmar la configuración absoluta de la estructura tal como se indica a continuación:

(S)-3-{1-[4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona, primer enantiómero eluido (el compuesto del título del ejemplo 1a). (R)-3-{1-[4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona, segundo enantiómero eluido.

Ejemplo 2a: 3-(1-(4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona, primer enantiómero eluido.

Se diluyó el racemato de clorhidrato de 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(dimetilamino)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona (ejemplo 2) (0,228 g, 0,400 mmol) con MeOH y se hizo pasar a través de un cartucho de resina PL-HCO3 MP (5 g) para obtener la base libre (0,110 g), que se disolvió en etanol/metanol/nhexano 1/1/1 (10 ml) y se sometió a resolución quiral por cromatografía quiral preparativa. Condiciones: Columna: Chiralpak AD-H (25 x 2,0 cm), 5 pm; Fase móvil: n-hexano/(etanol isopropilamina al 0,1 %) 75/25 % v/v; Caudal 20 ml/min; Detección DAD: 220 nm; Bucle: 2500 pl; Inyección: 27 mg/inyección. Las fracciones que contenían el primer enantiómero eluido se evaporaron hasta la sequedad para obtener el compuesto del título 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona (0,040 g, 0,075 mmol).

HPLC quiral (procedimiento A3),

tR 6,4 min (primer enantiómero eluido), e.e. > 99 %.

UPLC-MS: 0,46-0,50, 534,3 [M+H]+, procedimiento 3.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 10,16 (s a, 1H), 8,18-8,30 (m, 3H), 8,04-8,12 (m, 1H), 7,72-7,81 (m, 1H), 7,57-7,68 (m, 1H), 7,43-7,53 (m, 1H), 7,25-7,40 (m, 4H), 6,82-7,04 (m, 3H), 5,67-5,83 (m, 1H), 3,16-3,49 (m, 2H), 1,97 2,25 (m, 6H), 1,78-1,87 (m, 3H).

Datos analíticos del segundo enantiómero eluido

HPLC quiral (procedimiento A3),

tR 14,6 min (segundo enantiómero eluido), e.e. > 99 %

Los análisis de UPLC y RMN de 1H de los enantiómeros puros se solaparon en todos los aspectos.

Ejemplo 4a: 3-(1-(4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-M)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((R)-1 -metilpirrolidin-2-il)fenil)-1H-isocromen-1-ona, primer diastereómero eluido.

Se disolvió 3-{1-[4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(2R)-1-metilpirrolidin-2-il]fenil}-1H-isocromen-1-ona (ejemplo 4) (0,050 g, 0,089 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoro-2-propanol (2,5 ml) y se sometió a resolución quiral por cromatografía preparativa quiral. Condiciones: Columna: Chiralpak AD-H (25 x 2,0 cm), 5 pm; Fase móvil: (etanol isopropilamina al 0,1 %) 15 %; Caudal 46 ml/min; Detección DAD: 220 nm; Bucle: 600 pl; Inyección: 12 mg/inyección. Las fracciones que contenían el primer diastereómero eluido se evaporaron hasta la sequedad para obtener el compuesto 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((R)-1-metilpirrolidin-2-il)fenil)-1H-isocromen-1-ona (0,017 g, 0,03 mmol).

HPLC quiral (procedimiento A4),

tR 3,3 min (primer diastereómero eluido), d.e. = 98,5 %, UPLC-MS: 0,70 min, 560,5 [M+H]+, procedimiento 5.

RMN de 1H (400 MHz, MeOD) 5 ppm 8,29-8,35 (m, 1H), 8,22-8,28 (m, 1H), 8,15-8,21 (m, 1H), 8,03-8,12 (m, 1H), 7,65 7,74 (m, 1H), 7,56-7,63 (m, 1H), 7,18-7,55 (m, 4H), 6,76-6,99 (m, 2H), 5,88-6,00 (m, 1H), 2,85-3,28 (m, 2H), 1,54-2,46 (m, 11H).

Datos analíticos del segundo diastereómero eluido

HPLC quiral (procedimiento A4), tR 7,0 min (segundo diastereómero eluido), d.e. = 96,2 %.

UPLC-MS: 0,70 min, 560,5 [M+H]+, procedimiento 5.

RMN de 1H (400 MHz, MeOD) 5 ppm 8,30-8,35 (m, 1H), 8,24-8,29 (m, 1H), 8,17-8,21 (m, 1H), 8,04-8,13 (m, 1H), 7,66 7,75 (m, 1H), 7,56-7,64 (m, 1H), 7,17-7,55 (m, 4H), 6,74-7,06 (m, 2H), 5,83-6,03 (m, 1H), 2,94-3,29 (m, 2H), 1,70-2,45 (m, 11H).

Ejemplos de selección de sales

Las sales especialmente preferidas de la invención se preparan siguiendo procedimientos conocidos de formación de sales descritos, por ejemplo, en Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, 2011 (P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (eds.).

Las sales indicadas en la tabla siguiente se prepararon a partir del compuesto enantiómero (S) del ejemplo 1a, y las sales del enantiómero (R) se obtienen igualmente utilizando dichos procedimientos de salificación generalmente conocidos.

Como ejemplo, la sal de maleato se obtuvo disolviendo 300 mg de base libre en acetona (9 ml) y agitando a aproximadamente 20 °C durante aproximadamente 2 h y luego a 50 °C durante aproximadamente 30 min para obtener la disolución completa de la base libre. A continuación, se añadió ácido maleico (1,02 eq.) a 20 °C. La mezcla se dejó en agitación a 650rpm a aproximadamente 20 °C durante la noche. La muestra se filtró con un filtro de jeringa (porosidad 20 pl, frita de PTFE) y se secó al vacío a temperatura ambiente hasta alcanzar un peso constante (3 h) (rendimiento = 86 %).

En la tabla siguiente se indican otras sales preferidas preparadas a partir del compuesto enantiómero (S) del ejemplo 2a, y las sales del enantiómero (R) se obtienen igualmente utilizando los procedimientos de formación de sales generalmente conocidos.

Las sales enumeradas anteriormente se obtienen en forma sólida, la mayoría de ellas en estado sólido sustancialmente amorfo; algunas especialmente preferidas mostraban un estado sólido cristalino.

Actividad farmacológica de los compuestos de la invención.

Determinación in vitro de la actividad inhibidora de la enzima PI3K en el ensayo sin células

Las proteínas recombinantes humanas PI3Ka, PI3Kp, PI3K<y>y PI3K8 se adquirieron de Millipore Ltd (Billerica, MA). Los compuestos se disolvieron a 0,5 mM en DMSO y se comprobó su actividad frente a PI3Ks en diferentes concentraciones mediante el ensayo de cinasas ADP-Glo™ (Promega, Madison WI) siguiendo las instrucciones del fabricante.

Brevemente, las reacciones de cinasa se realizaron en placas blancas de 384 pocillos (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen). Cada pocillo se cargó con 0,1 pl de compuestos de ensayo y 2,5 pl de 2* tampón de reacción (Tris 40 mM, pH 7,5, EGTA 0,5 mM, Na3VO40,5 mM, p-glicerofosfato 5 mM, BsA 0,1 mg/ml, DTT 1 mM), que contiene sustratos PI y PS 50 pM (sal de sodio de L-a-fosfatidilinositol y L-a-fosfatidil-L-serina, Sigma-Aldrich, St. Louis MO) y las proteínas recombinantes PI3K (PI3Ky 0,25 ng/pl, PI3K8 1 ng/pl, PI3Ka 0,125 ng/pl, PI3Kp 1 ng/pl).

Las reacciones se iniciaron añadiendo 2,5 pl de 2x solución de ATP a cada pocillo (concentraciones finales: PI3K<y>ATP 30 pM; PI3K8 ATP 80 pM; PI3Ka ATP 50 pM; PI3Kp ATP 100 pM) y se incubaron durante 60 min a temperatura ambiente. Posteriormente, cada reacción de cinasa se incubó durante 40 min con 5 pl de reactivo de ADP-Glo™, lo que permitió agotar el ATP no consumido. A continuación, se añadió el reactivo de detección de cinasas (10 pl) en cada pocillo para convertir el ADP en ATP y permitir medir el ATP recién sintetizado mediante una reacción de luciferasa/luciferina. Tras 60 minutos de incubación, se midió la señal de luminiscencia con un lector de múltiples marcadores Wallac EnVision® (PerkinElmer, Waltham MA).

El ajuste de la curva y el cálculo de la CI50 se llevaron a cabo utilizando un modelo logístico de cuatro parámetros en XLfit (IDBS, Guilford, Reino Unido) para Microsoft Excel (Microsoft, Redmont, WA).

Los resultados se presentan a continuación

Tabla 1a: Resultados de la determinaciónin vitrode la actividad inhibidora de la enzima PI3K en el ensayo sin células para ejemplos comparativos; reproducido a partir del documento WO2015091685.

en los que los compuestos se clasificaron según la potencia con respecto a su actividad inhibidora sobre PI3K alfa, beta, gamma y delta de acuerdo con lo siguiente:

Los compuestos de la presente invención son potentes inhibidores de delta que tienen CI50 < 2 nM para delta en el ensayo enzimático como se indica en la siguiente tabla 1b.

Determinación in vitro de la actividad inhibidora de la enzima PI3K5 en el ensayo de THP-1

La actividad inhibidora de los compuestos sobre la PI3 cinasa en células vivas se determinó evaluando la inhibición de la vía PI3K8-AKT expresada endógenamente en células THP-1. Una suspensión de células THP-1 del matraz T75 (0,4-1,0 x 106/ml) se centrifugó y el sedimento celular se resuspendió en medio de inanición a 1,5 * 106 células/ml. La placa de células se preparó dispensando 3 * 105 células/pocillo y se incubó durante 24 horas a 37 °C antes del ensayo. Los compuestos de ensayo se diluyeron en serie 1:3 en DMSO y se volvieron a diluir 1:100 en medio de compuesto. Las células THP-1 privadas de alimento se preincubaron a 37 °C durante 60 minutos con soluciones de compuestos de ensayo o vehículo. A continuación, las células se estimularon durante 10 minutos con factor estimulante de colonias de macrófagos ("Macrophage Colony-Stimulating Factor", M-CSF) 2,5 ng/ml o medio de estímulo (control de los niveles basales de pAKT). A continuación, se lisaron las células y se midió la cantidad de AKT fosforilada utilizando un kit de ensayo de HTRF de AKT Cisbio p-Ser473. La estimulación finalizó con la adición de tampón de lisis suplementado. La placa de células se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente para completar la lisis celular, seguido de la adición de los conjugados de HTRF y se incubó durante 4 horas más a temperatura ambiente. Los conjugados reaccionan con pAKT provocando un aumento de la señal de HTRF que se mide con el lector de placas Envision con un protocolo de lectura de HRTF. Los datos de proporción se ajustaron mediante una ecuación logística de cuatro parámetros para determinar la CI50. El compuesto IPI-145 se utilizó como patrón farmacológico.

Los compuestos de la invención mostraron unos valores de CI50 celular (CI50 nM de THP-1) inferiores a 4 nM con respecto a la subunidad PI3K-delta como se indica en la siguiente tabla 1b.

Protocolo del modelo de eosinofilia pulmonar inducida por ovoalbúmina (OVA) en ratas

Administración en húmedo - solución salina

Animales

Se adquirieron ratas macho Brown Norway (6 semanas de edad a su llegada) en Charles River Laboratories Italia (Calco, Lecco). Antes de su utilización, los animales se aclimataron durante al menos 5 días a las condiciones locales del animalario (temperatura ambiente: 20-24 °C; humedad relativa: 40-70 %), con libre acceso a pienso convencional para ratas y agua del grifo. Todos los protocolos con animales descritos en el presente documento se llevaron a cabo con la aprobación del comité intramural de bienestar animal para la experimentación animal de Chiesi Farmaceutici y el Ministerio de Salud y cumplen con la Directiva Europea 2010/63 UE y el D Lgs 26/2014 italiano (número de autorización 198-PR).

Sensibilización y exposición a alérgenos

Ratas Brown-Norway macho se sensibilizaron mediante inyección intraperitoneal de una suspensión que contenía OVA (1 mg/rata) y Al(OH)3(100 mg/rata) en 1 ml de solución salina durante 3 días consecutivos; dos semanas después, se indujo la inflamación de las vías respiratorias mediante la administración en aerosol del alérgeno. Concretamente, los animales fueron expuestos a un aerosol de solución de OVA (al 1 % en solución salina) que indujo una afluencia masiva de células inflamatorias en las vías respiratorias, representadas principalmente por eosinófilos y neutrófilos. Brevemente, se sujetó a las ratas en tubos de plexiglás, se las introdujo en la cámara de inhalación y se las expuso a la solución en aerosol mediante inhalación sólo por la nariz durante 30 min. La cámara de inhalación se conectó a un nebulizador Medel Pro que generó una solución nebulizada en la cámara con un caudal de aproximadamente 3,3 l/min. Los animales de control fueron expuestos a solución salina en aerosol.

Tratamiento con compuestos de ensayo

Para la evaluación de la duración de la acción antiinflamatoria (DdA), se administraron compuestos de ensayo por vía intratraqueal (i.t.) a diferentes dosis en el intervalo de 0,03 jmol/kg-1 jmol/kg en 2 o 12 horas antes de la exposición a OVA. La DE80 para cada compuesto ensayado se determinó a partir del estudio de dosis-respuesta anterior. La DE80 es la dosis a la que se alcanza el 80 % de inhibición.

Para la administración intratraqueal de los compuestos de ensayo o del vehículo, se anestesió a los animales con isoflurano o sevoflurano (al 4 % en oxígeno) y se hizo avanzar un laringoscopio hasta la boca para visualizar la tráquea y guiar la inserción de una cánula PE100 directamente en la tráquea y situada de 1 a 2 mm por encima de la bifurcación. Los compuestos se resuspendieron en solución salina (agua destilada NaCl al 0,5 %) con Tween 80 al 0,2 % y se instilaron localmente en la tráquea en un volumen de 0,5 ml/kg.

Lavado broncoalveolar y recuento de células

A las 24 horas de la exposición al OVA o al aerosol de solución salina, los animales fueron anestesiados con isoflurano 0 sevoflurano como se ha descrito previamente y sacrificados por sangrado desde la aorta abdominal. El líquido de lavado broncoalveolar ("bronchoalveolar lavage fluid", BALF) se obtuvo lavando con suavidad los pulmones con 3 partes alícuotas (4 ml cada una) de solución A [solución salina equilibrada de Hank ("Hank's balanced salt solution", HBSS) x 10, 100 ml; ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 100 mM, 100 ml; ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico (HEPES) 1 mM, 10 ml; agua destilada, 790 ml]. La recuperación ordinaria de BALF no difirió significativamente entre animales, recuperándose aproximadamente un 80 % del volumen instilado (9,5-10,5 ml).

El BALF resultante se centrifugó a 800 xgdurante 10 min a 4 °C. Los sedimentos se resuspendieron en un volumen de 1,5 ml y se realizaron recuentos celulares totales y diferenciales en un plazo de 2 horas utilizando un contador de células automatizado (Dasit, Sysmex). El recuento de células por animal se calculó a partir del número de células por 1 |jl de BALF multiplicado por el volumen utilizado para la resuspensión del sedimento celular.

Análisis de datos

Los compuestos de la presente invención administrados 12 horas antes de la exposición a OVA en la dosis de 0,1 jmol/kg correspondiente a DE80 presentaron una eficacia duradera en la inhibición del reclutamiento de eosinófilos en BALF, superior al 45 %. El porcentaje de inhibición se calcula mediante la fórmula siguiente:

% de inhibición = 100 x ((valor individual de expuesto a OVA y tratado con compuesto - valor medio de expuesto a OVA y tratado con vehículo) - (valor medio de expuesto a OVA y tratado con vehículo - valor medio de expuesto a solución salina y tratado con vehículo))/(valor medio de expuesto a OVA y tratado con vehícu lo-valor medio de expuesto a solución salina y tratado con vehículo).

El valor medio se calcula a partir de 8 a 10 ratas para cada grupo de tratamiento.

Los compuestos correspondientes en el documento WO2015091685, cuando se compararon con los compuestos de la presente invención, resultaron, de hecho, resultaron, no duraderos o menos duraderos.

Tabla 1c: Resultados de la prueba de OVA.

Protocolo del modelo de rata de eosinofilia pulmonar inducida por ovoalbúmina (OVA) en ratas (administración en forma de polvo seco)

Materiales y métodos

Animales

Las ratas macho Brown Norway (6 semanas de edad a la llegada) fueron adquiridas en Charles River Laboratories Italia (Calco, Lecco). Antes de su utilización, los animales se aclimataron durante al menos 5 días a las condiciones locales del animalario (temperatura ambiente: 20-24 °C; humedad relativa: 40-70 %), con libre acceso a pienso convencional para ratas y agua del grifo. Todos los protocolos con animales descritos en el presente documento fueron llevados a cabo con la aprobación del comité de bienestar animal intramural para la experimentación animal de Chiesi Farmaceutici y el Ministerio de Sanidad y cumplen con la Directiva Europea 2010/63 UE y el D.Lgs 26/2014 italiano.

Sensibilización y exposición a alérgenos

Ratas macho Brown-Norway fueron sensibilizadas por inyección intraperitoneal de una suspensión que contenía OVA (1 mg/rata) y Al(OH)3(100 mg/rata) en 1 ml de solución salina durante 3 días consecutivos. Dos semanas después, se indujo la inflamación de las vías respiratorias mediante un antígeno inhalado. Los animales fueron expuestos a un aerosol de solución de OVA (al 1 % en solución salina) que indujo una afluencia masiva de células inflamatorias, principalmente eosinófilos y neutrófilos, en las vías respiratorias. Brevemente, se sujetó a las ratas en tubos de plexiglás y se las expuso al contenido de la cámara de inhalación mediante inhalación sólo por la nariz durante 30 min. La cámara de inhalación estaba conectada a un nebulizador Medel Pro que generaba ovoalbúmina en aerosol que circulaba por la cámara con un caudal de aproximadamente 3,3 l/min. Los animales tratados con vehículo de control fueron expuestos a solución salina en aerosol.

Tratamiento con compuestos de ensayo

Para la evaluación de la potencia inhibidora y la duración de la acción (DdA), se administraron compuestos de ensayo por vía intratraqueal 12 horas antes de la exposición a OVA.

Para la administración intratraqueal de los compuestos de ensayo o del vehículo, se anestesió a los animales con sevoflurano (al 4 % en oxígeno) y se hizo avanzar un laringoscopio hasta la boca para visualizar la tráquea y guiar la inserción de un dispositivo PennCentury para polvo seco directamente en la tráquea y situado de 1 a 2 mm por encima de la bifurcación. Los compuestos de ensayo administrados en forma de polvo seco se micronizaron y mezclaron con estearato de magnesio/Respitose SV003 al 0,2 % p/p en concentraciones del 0,233 %, 0,755 %, 7,75 % (correspondientes a dosis de 0,03-0,1-1,0 pmol/kg) con un peso de inyección de 10 mg/kg. Los animales de control recibieron 10 mg/kg de la mezcla de vehículo (estearato de magnesio/Respitose SV003 al 0,2 % p/p). La DE80 para cada compuesto ensayado se determinó a partir del estudio de dosis-respuesta anterior.

Los compuestos en polvo seco se insuflaron en las vías respiratorias durante la inspiración en fase espontánea en un volumen de aire de 4 ml.

Lavado broncoalveolar y recuento de células

A las 24 horas de la exposición al OVA o al aerosol de solución salina, los animales fueron anestesiados con isoflurano o sevoflurano como se ha descrito previamente y sacrificados por sangrado desde la aorta abdominal. El líquido de lavado broncoalveolar ("bronchoalveolar lavage fluid", BALF) se obtuvo lavando con suavidad los pulmones con 3 partes alícuotas (4 ml cada una) de solución A [solución salina equilibrada de Hank ("Hank's balanced salt solution", HBSS) x 10, 100 ml; ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 100 mM, 100 ml; ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico (HEPES) 1 mM, 10 ml; agua destilada, 790 ml]. La recuperación ordinaria de BALF no difirió significativamente entre animales, recuperándose aproximadamente un 80 % del volumen instilado (9,5-10,5 ml).

El BALF resultante se centrifugó a 800 xgdurante 10 min a 4 °C. Los sedimentos procedentes del mismo animal se reunieron y resuspendieron en un volumen de 1,5 ml y se realizaron recuentos de células totales y diferenciales en un plazo de 2 horas utilizando un contador celular automatizado (Dasit, Sysmex). El recuento de células por animal se calculó a partir del número de células por 1 pl de BALF multiplicado por el volumen utilizado para la resuspensión del sedimento celular.

Análisis de datos

Todos los datos se presentan como media ± media del e.e. Se realizó un análisis estadístico de los datos brutos mediante un análisis de varianza unidireccional (ANOVA), seguido de la pruebaa posterioride Dunnett para la comparación con el grupo sensibilizado a la OVA y expuesto a la OVA. Los valores individuales de inhibición del reclutamiento celular inducidos por el fármaco se calcularon comparando los animales tratados con el fármaco con los animales de control tratados con vehículo y expuestos a OVA, de acuerdo con la siguiente fórmula:

% de inhibición = {100 % x ((valor individual de expuesto a OVA y tratado con compuesto - valor medio de control expuesto a OVA y tratado con vehículo) - (valor medio de control expuesto a OVA y tratado con vehículo - valor medio de control expuesto a solución salina y tratado con vehículo))/(valor medio de control expuesto a OVA y tratado con vehículo - valor medio de control expuesto a solución salina y tratado con vehículo).

El valor medio se calculó a partir de 8 a 10 ratas para cada grupo de tratamiento.

Los valores de DE50 y los límites de confianza del 95% secalcularon mediante un análisis de regresión logarítmico lineal basado en los datos de inhibición individuales. El análisis estadístico se realizó con el programa GraphPad, versión 7.0, considerándosep< 0,05 como nivel de significación estadística.

Resultados

La duración de la acción antiinflamatoria de la sal maleato del compuesto del ejemplo 1a se ensayó para la administración i.t. con PennCentury 2 y 12 horas antes de la exposición a OVA. La dosis de 1 pmol/kg presentó una inhibición significativa (% de inhibición del reclutamiento celular total: 84,1 ±5,5,p <0,01; % de inhibición del reclutamiento de eosinófilos: 79,3 ± 8,4,p <0,01).

En conjunto, los datos confirman que un compuesto según la invención es eficaz como antiinflamatorio capaz de inhibir la acumulación pulmonar de células inflamatorias y dotado de una duración de acción prolongada.

Los compuestos de la invención en la dosis de 1 umol/kg demuestran una eficacia significativa y duradera en la inhibición del reclutamiento de eosinófilos en las vías respiratorias pulmonares de ratas cuando se administran, en forma de una formulación DPI (protocolo de polvo seco), 12 horas antes de la exposición a OVA y presentan un porcentaje de inhibición igual o superior al 50 % e incluso preferentemente superior o igual al 70 %.

Los compuestos de la presente invención son, por lo tanto, potentes inhibidores de PI3K, son activos en el ensayo enzimáticoin vitroen el intervalo subnanomolar (Ki de delta < 1 nM) y presentan alta actividad también en el modelo de células THP-1 de inhibición de PI3K delta (CI50 de THP-1 < 4 nM, preferentemente < 3 nM). En concreto, la actividad se mantiene en el ensayo celular, con una caída de la actividad del ensayo enzimático al celular inferior o igual a 10 veces, preferentemente inferior o igual a 3,5 veces; CI50 de THP-1 <10 * Ki de delta; preferentemente CI50 de THP-1 < 3,5 * Ki de delta.

Además, en un experimento de DdA antiinflamatoria, los compuestos según la invención administrados en forma de una suspensión 12 horas antes de la exposición a OVA en la dosis de 0,1 pmol/kg (DE80 para los compuestos ensayados de la invención) demuestran una eficacia antiinflamatoria persistente superior al 45 %. Siguiendo el mismo protocolo experimental, los compuestos según la invención administrados en forma de una formulación DPI 12 horas antes de la exposición a OVA en la dosis de 1 umol/kg (DE80) siguen manteniendo un efecto antiinflamatorio significativo y duradero sobre la inhibición del reclutamiento celular en las vías respiratorias pulmonares, mostrando una eficacia antiinflamatoria persistente con un porcentaje de inhibición superior o igual al 50 % e incluso preferentemente superior o igual al 70 % en el protocolo de polvo seco.

Claims (21)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I):
2. en la que: cada R, cuando está presente, se selecciona independientemente del grupo que consiste en: OR7, halógeno, alquilo (C1-C6); R1 y R2, iguales o diferentes, son en cada caso independientemente alquilo (C1-C6), R3 y R4, iguales o diferentes, son en cada caso independientemente H o alquilo (Ci-C6); o R1 y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un radical heterocíclico de 5 o 6 miembros, en el que al menos otro átomo de carbono del anillo de dicho radical heterocíclico está opcionalmente sustituido por al menos un heteroátomo seleccionado entre N, NH, S u O y opcionalmente porta al menos un grupo sustituyente -oxo (=O); dicho radical heterocíclico está opcionalmente sustituido con un grupo alquilo (C1-C6), y R3 y R4 son H; o R3 y R2, tomados conjuntamente, forman un radical heterocíclico de 5 o 6 miembros que comprende el átomo N; dicho radical heterocíclico está además opcionalmente sustituido con un grupo alquilo (C1-C6), Ri es un grupo alquilo (C1-C6) y R4 es H; R5 es OR7; R6 se selecciona del grupo que consiste en: H, OR7, alquilo (C1-C6), haloalquilo (C1-C6), hidroxialquilo (C1-C ); R7 se selecciona del grupo que consiste en: H, alquilo (C1-C6); p es cero o un número entero comprendido entre 1 y 4; y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que la configuración absoluta en el carbono (*) es (S) o (R) con referencia al centro estereogénico representado en la fórmula (Ia) por el átomo de carbono marcado con un asterisco (*):
3. 3. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que: Ri y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un grupo 4-metilpiperazin-1-ilo; R3 y R4 son H; R, R5, R6 y p son los definidos en la reivindicación 1; o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
4. 4. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que: R3 y R2, tomados conjuntamente, forman un radical heterocíclico de 5 miembros que incluye el átomo N; dicho radical heterocíclico está además sustituido con un grupo alquilo (Ci-C6) que es metilo; Ri es un grupo alquilo (C1-C6) que es metilo y R4 es H; y R, R5, R6 y p son los definidos anteriormente; o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
5. 5. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que: R1 y R2 son alquilo (C1-C6) alquilo que es metilo, R3 y R4 son independientemente H o alquilo (C1-C6) alquilo que es metilo; y R, R5, R6 y p son los definidos en la reivindicación 1; o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
6. 6. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que: R es -H; R5 es -OH; R6 es H; o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
7. 7. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 que se selecciona de la lista que consiste en: 3-{1-[4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-cf]pirimidin-1-il]etil}-4-{3-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-1H-isocromen-1-ona; 3-(1-(4-Amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona; 3-{1-[4-Am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡nd¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l]et¡l}-4-{4-cloro-3-[(d¡met¡lam¡no)met¡l]feml}-1H-¡socromen-1-ona; 3-{1-[4-Am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l]et¡l}-4-{3-[(2R)-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-2-¡l]fen¡l}-1H-¡socromen-1-ona; 3-{1-[4-Am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l]et¡l}-4-{4-fluoro-3-[(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l]fen¡l}-1H-¡socromen-1-ona; 3-(1-(4-Am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-fluoro-5-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; 3- (1-(4-Am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-(1-(d¡met¡lam¡no)et¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona o las sales farmacéut¡cas aceptables de los m¡smos.
8. 8. Un compuesto según la re¡v¡nd¡cac¡ón 1 que se selecc¡ona de la l¡sta que cons¡ste en: Bromh¡drato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Clorh¡drato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Hem¡-1,5-naftalenod¡sulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡nd¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Hem¡sulfato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Tos¡lato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Mes¡lato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; 2-Naftalenosulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡pmd¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡nm¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4- (3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Iset¡onato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Maleato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡rid¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Es¡lato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Hem¡pamoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡pmd¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡nm¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; X¡nafoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Sal¡c¡lato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Benzoato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona.
9. 9. Un compuesto según la re¡v¡nd¡cac¡ón 1 que se selecc¡ona de la l¡sta que cons¡ste en: Bromh¡drato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Clorh¡drato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-am¡no-3-(5-h¡drox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-1-¡l)et¡l)-4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)fen¡l)-1H-¡socromen-1-ona; Mesilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona; 2-Naftalenosulfonato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona; Maleato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona; Esilato de (R) y/o (S)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroxipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-isocromen-1-ona.
10. 10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en mezcla con uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables.
11. 11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, combinado con uno o más principios activos.
12. 12. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso como medicamento.
13. 13. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en el tratamiento de un trastorno respiratorio asociado con mecanismos de enzimas PI3K seleccionado de tos crónica idiopática, asma con variante de tos, tos asociada a tumor torácico o cáncer de pulmón, tos vírica o postvírica, síndrome de tos de las vías respiratorias altas (STVRA), tos por goteo postnasal, enfermedad por reflujo gastroesofágico asociada a la tos (tanto reflujo ácido como no ácido), asma, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfermedad pulmonar intersticial.
14. 14. Un compuesto para su uso según la reivindicación 13, en el que el trastorno asociado con mecanismos de enzimas PI3K es el asma o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica EPOC.
15. 15. Un compuesto para su uso según la reivindicación 13, en el que el trastorno asociado con mecanismos de enzimas PI3K es la fibrosis pulmonar idiopática (FPI), la tos y la tos crónica.
16. 16. Una formulación farmacéutica para inhalación según la reivindicación 10 en forma de polvo seco, en la que está presente un vehículo que comprende partículas gruesas de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, y además está presente opcionalmente un aditivo con propiedades lubricantes o antiadherentes.
17. 17. La formulación farmacéutica según la reivindicación 16, en la que las partículas gruesas tienen un diámetro másico comprendido entre 30 y 500 micrómetros.
18. 18. Un dispositivo inhalador de polvo seco cargado con una formulación farmacéutica como se define en la reivindicación 16 o 17.
19. 19. Un kit que comprende una formulación farmacéutica como se define en la reivindicación 16 o 17 y un dispositivo inhalador de polvo seco.
20. 20. Una formulación farmacéutica para inhalación según la reivindicación 10 en forma de una formulación farmacéutica sin propelente, en la que dicho compuesto o sal del mismo está disuelto o suspendido en un vehículo acuoso, que además comprende opcionalmente otros excipientes farmacéuticamente aceptables.
21. 21. Un kit que comprende una formulación farmacéutica como se define en la reivindicación 20 y un nebulizador.