ES2972475T3 - Genes R en fase de acoplamiento - Google Patents

Genes R en fase de acoplamiento Download PDF

Info

Publication number
ES2972475T3
ES2972475T3 ES13704964T ES13704964T ES2972475T3 ES 2972475 T3 ES2972475 T3 ES 2972475T3 ES 13704964 T ES13704964 T ES 13704964T ES 13704964 T ES13704964 T ES 13704964T ES 2972475 T3 ES2972475 T3 ES 2972475T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
marker
genes
sec
plant
lettuce
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES13704964T
Other languages
English (en)
Inventor
Arnaud Paul Pierre Thabuis
Johannes Wilhelmus Schut
Arie Vogelaar
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV
Original Assignee
Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV filed Critical Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV
Application granted granted Critical
Publication of ES2972475T3 publication Critical patent/ES2972475T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/04—Processes of selection involving genotypic or phenotypic markers; Methods of using phenotypic markers for selection
    • A01H1/045—Processes of selection involving genotypic or phenotypic markers; Methods of using phenotypic markers for selection using molecular markers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/12—Leaves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/14—Asteraceae or Compositae, e.g. safflower, sunflower, artichoke or lettuce
    • A01H6/1472—Lactuca sativa [lettuce]

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere a una planta de lechuga resistente a Bremia lactucae razas B1:1, B1:4, B1:5, B1:6, B1:7, B1:10, B1:12, B1:13, B1:14, B1. :15, B1:16, B1:17, B1:18, B1:21, B1:22, B1:23, B1:24, B1 :25 y B1:28, cuya planta comprende un determinante genético que provoca la resistencia y cuyo determinante genético se puede obtener mediante introgresión a partir de una planta cultivada a partir de semillas de las cuales se depositó una muestra representativa con el número de acceso NCIMB 41761, y en el que dicho determinante genético en las semillas del número de depósito de semillas NCIMB 41761 está al menos vinculado al marcador SCM05 con SEQ ID NO: 4, marcador LR0029 con SEQ ID NO: 5, y marcador LK0036 con SEQ ID NO: 6, y opcionalmente también a uno o más de los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con SEQ ID NO: 1, marcador CL922 con SEQ ID NO:2, marcador SCV12 con SEQ ID NO:3, marcador LR0096 con SEQ ID NO:7 y marcador SCI11 con SEQ ID NO:8. Preferiblemente, el determinante genético comprende los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Genes R en fase de acoplamiento
La invención se refiere a plantas y partes de plantas, en particular plantas de lechuga (Lactuca sativaL.), que son resistentes aBremia lactucae.La invención se refiere también a las semillas de estas plantas capaces de producir plantas resistentes aBremia lactucae.La invención se refiere también al uso de marcadores para identificar dichas plantas y a un proceso para identificar dichas plantas.
El mildiu velloso es una plaga grave en todo el mundo, en la producción de plantas de lechuga(Lactuca sativaL.) tanto en invernadero como en campo abierto. El mildiu velloso de la lechuga está producido por el hongoBremia lactucae,perteneciente a una clase de hongos relativamente primitivos conocidos como Oomicetos. El hongo es un parásito obligado capaz de infectar una planta de lechuga en cualquier etapa de crecimiento desde la plántula hasta la planta madura.
La coevolución de la planta y el patógeno ha dado lugar a una carrera armamentística en la que la resistencia de la planta puede quebrarse como consecuencia de la capacidad del patógeno para interactuar y modificar dianas alternativas en el hospedador o bien las mismas dianas de una forma diferente.
Una técnica de reproducción para ralentizar el rápido aumento de virulencia de la población deBremiaes asociar diferentes genes de resistencia aBremia(también llamado piramidación o apilamiento). Un límite de esta estrategia es que los diferentes genes de resistencia aBremia(genes R) están agrupados en un número limitado de ubicaciones. Dichas ubicaciones se denominan grupos de genes de resistencia. En la lechuga, se conocen al menos 4 grupos de genes de resistencia principales que se encuentran en el cromosoma 1, cromosoma 2, cromosoma 4 y cromosoma 8, respectivamente. Los genes R del mismo grupo pueden segregarse como alelos o genes estrechamente vinculados. Por lo tanto, a menudo es imposible apilar genes R del mismo grupo, porque los genes en el mismo grupo están en fase de repulsión entre sí, y se heredan como alelos alternativos del mismo locus. Durante la reproducción de la lechuga, que es un cultivo diploide, la oportunidad de piramidar genes dominantes de Bremia en el mismo grupo de genes de resistencia está por tanto limitado a un máximo de dos genes por grupo. Este máximo solo puede alcanzarse en plantas heterocigóticas con una única copia para cada gen. Sin embargo, proporcionar plantas de lechuga heterocigóticas a los productores implica el uso de variedades híbridas. Desafortunadamente, la producción de semillas híbridas de lechuga se considera demasiado cara, con demasiado riesgo y demasiado complicada. Por lo tanto, en la práctica, casi todas las variedades de lechuga son líneas endogámicas. En una línea endogámica, el número de genes por grupo se limita a uno, que a continuación está presente en un estado homocigótico con dos copias del gen.
Como se ha mencionado anteriormente, existe una carrera armamentística continua entre la planta y el patógeno y, durante esta carrera, los genes R se rompen constantemente y los fitogenetistas necesitan fuentes de resistencia alternativas para seguir produciendo variedades resistentes. Cada nueva combinación de genes R es, por lo tanto, un valioso activo para el fitogenetista.
Dadas las ventajas significativas de apilar genes R, es el objeto de la presente invención proporcionar plantas de lechuga con una nueva combinación de genes R en fase de acoplamiento, que previamente se habían descubierto solamente en la fase de repulsión, heredados como alelos alternativos y, por lo tanto, no apilables. En la investigación que condujo a la presente invención se desarrollaron nuevas plantas de lechuga que tenían en su genoma los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento. Estos tres genes R están en el grupo de resistencia del cromosoma 2 deLactuca sativaL. Juntos, estos genes transmiten resistencia a las razas Bl:1, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae.
Aunque se puede obtener un perfil de resistencia similar al combinar otros genes R, la ventaja de tener estos tres genes en fase de acoplamiento es el hecho de que las posibilidades de un grupo de genes de resistencia se usan más ampliamente y que el fitogenetista tiene a disposición nuevas posibilidades de apilamiento, ralentizando la virulencia del patógeno.
La invención se refiere por lo tanto a una planta de lechuga resistente a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl: 15, Bl:16, Bl: 17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, BI:24, BI:25. y BI:28 deBremia lactucae,planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento y que transmiten resistencia a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey que no transmiten resistencia a las razas Bl:20 y Bl:26 y Bl:27 deBremia lactucae, y cuyos genes R se pueden obtener mediante introgresión de una planta cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, y en donde los dichos genes R en las semillas de la semilla con número de depósito NCIMB 41761 están al menos vinculados al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y al marcador LK0036 con la Id. de sec. n.° 6, y opcionalmente también a uno o más de los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y el marcador SCI11 con Id. de sec. n.° 8.
La invención comprende además una planta de lechuga resistente a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae,en donde dicha resistencia se transmite por uno de los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmite resistencia a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae,y en donde dichos genes R en plantas cultivadas a partir de semillas depositadas con el número de registro NCIMB 41761 se pueden identificar por la presencia del marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, del marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y del marcador LK0036 con la Id. de sec. n.° 6, y opcionalmente también a los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con la Id de sec. n.° 1, el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y el marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
En una realización concreta, el determinante genético comprende los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento. Por lo tanto, la presente invención proporciona una combinación nueva y única de genes R, lo que proporciona a los fitogenetistas una nueva alternativa para desarrollar variedades de lechuga resistentes aBremia lactucae.
Por lo tanto, la presente invención proporciona plantas de lechuga que son resistentes a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae,en donde dicha resistencia se transmite mediante los genes R Dm3, Dm6 y R18, que están presentes en fase de acoplamiento en un determinante genético, que es como se encuentra en las plantas cultivadas a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa en el depósito del NCIMB con el número de registro NCIMB 41761 el 29 de septiembre de 2010.
La combinación de estos genes R procedentes del mismo grupo, de manera que están en fase de acoplamiento en lugar de en fase de repulsión, ofrece muchas ventajas. Los genes R en fase de acoplamiento pueden considerarse como un nuevo supergen R que transmite resistencia frente a más razas deBremia lactucae. Además, la herencia de los genes R en la fase de acoplamiento es similar a la de un único gen y, por lo tanto, aumenta la eficacia de la reproducción.
Por lo tanto, la invención se refiere a una planta de lechuga que tiene los tres genes R Dm3, Dm6 y R18, presentes en su genoma en fase de acoplamiento, de manera que los tres genes R se heredan juntos de manera dominante como un alelo único.
En una realización, la planta de lechuga de la invención lleva los genes R Dm3, Dm6 y R18 como un alelo único como está presente en el genoma de las semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, cuyo alelo produce resistencia contra al menos las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae.
Según un aspecto adicional de la misma, la invención proporciona los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que, por lo tanto, se comportan como un alelo de un único gen dominante. Las resistencias frente a las razas deBremiacubiertas por los genes R Dm3, Dm6 y R18 separados y esos genes R en fase de acoplamiento se especifican en la Tabla 1. Las resistencias frente a las seis razas deBremiase transmiten mediante más de un gen R, las resistencias frente a las restantes razas deBremiase transmiten mediante un único gen R. Las resistencias específicas de Dm3 son frente a las razas deBremiaBl: 18, Bl:22, Bl:24, Bl:25 y Bl:28. La única resistencia específica de Dm6 es frente a Bl: 17. Las resistencias transmitidas específicamente por R18 son frente a las razas deBremiaBl:2, Bl:7, Bl:10, Bl: 14, Bl:21 y Bl:23 (Véase la Tabla 1).
Tabla 1 *
Una planta de lechuga resistente a las razas Bl:1, B1:2, Bl:4, Bl:2, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl: 17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaepuede comprender una introgresión que comprende Dm3, Dm6 y R18, en donde dicha introgresión se puede obtener de una planta de lechuga cuya semilla representativa se deposita en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761 y en donde la dicha introgresión en las semillas de la semilla con número de depósito NCIMB 41761 está vinculada al marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y al marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y al marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, y al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también al marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8. Una planta de lechuga resistente a las razas B1:1, B1:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, Bl:6, Bl:7, B1:10, Bl:12, Bl:13, B:14, Bl:15, Bl: 16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaepuede comprender una introgresión que puede obtenerse a partir de una planta de lechuga cuyas semillas representativas se depositaron en el nC im B con el número de registro NCIMB 41761, cuya introgresión comprende los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento vinculados al marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1 y al marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y al marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, y al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también al marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
Una introgresión en este sentido se refiere a una parte del cromosoma 2 que comprende los genes de resistencia Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento.
Los marcadores SCM05, LR0029 y LK0036 juntos proporcionan un patrón de haplotipo que es único para los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, como se encuentra en las semillas del depósito, que se depositaron en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761. El dicho haplotipo es, por lo tanto, predictivo para los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento tal como se encuentran en las semillas del dicho depósito. El haplotipo puede extenderse con uno o más de los marcadores SCW09, CL922, SCV12, LR0096 y SCI11. Otros haplotipos más extendidos consisten así, por ejemplo en los marcadores SCW09, CL922, SCV12, SCM05, LR0029 y LK0036 o los marcadores SCW09, CL922, SCV12, SCM05, LR0029, LK0036, LR0096 y SCI11 u otras combinaciones que siempre comprenden al menos SCM05, LR0029 y LK0036 y uno o más de los marcadores SCW09, C<l>922, SCV12, LR0O96 y SCI11. Los haplotipos extendidos son también predictivos para los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como se encuentra en las semillas del depósito que se depositaron en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761 y pueden conducir a una mejor identificación de la presencia de los genes R.
En la Tabla 4 se mencionan las secuencias de los marcadores y en la Tabla 5 se mencionan los cebadores correspondientes que se pueden usar para amplificar los marcadores.
Los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento se pueden identificar en plantas cultivadas a partir de semillas depositadas con el número de registro NCIMB 41761 por un haplotipo único que comprende al menos el marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, el marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y el marcador LK0036 con la Id. de sec. n.° 6, y opcionalmente también los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y el marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
En una realización, la invención se refiere a una planta de lechuga, que es resistente a las razas Bl: 1, Bl:2 Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20 y Bl:26 y Bl:27 deBremia lactucae,y donde dicha planta se puede obtener cruzando una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761, y seleccionando en la progenie F2 del cruce que se obtiene tras cruzar F1 consigo mismo o con otra planta para obtener plantas que muestran resistencia a las razas Bl:1, Bl:2 Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae.
En una planta de lechuga resistente a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl: 14, Bl: 15, Bl:16, Bl: 17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae,dicha resistencia se transmite por los genes de resistencia Dm3, Dm6 y R18, genes que están presentes en forma homocigótica, en donde dichos genes se pueden obtener mediante introgresión de dichos genes de una planta cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de registro NCIM<b>41761, y en donde dichos genes de resistencia están presentes en la semilla del número de registro NCIMB 41761 y están vinculados al marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y al marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y al marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4 y al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5 y preferiblemente también al marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
Cuando los genes R no están en fase de acoplamiento sino en fase de repulsión, se puede encontrar un patrón de resistencia similar solo en una planta que comprende los genes R en estado heterocigótico. Este es, por ejemplo, el caso en que una planta que comprende el gen de resistencia Dm3 en estado homocigótico se cruza con una planta que comprende Dm6 y R18 en estado homocigótico. Se obtiene una F1 completamente heterocigótica que comprende todos los genes R, pero en los diferentes cromosomas homólogos. Cuando las plantas de dicha F1 se autofecundan (Fig. 2), se obtiene una F2 que consta de 500 de plantas completamente resistentes a todas las razas deBremia lactucaecubiertas por los genes R Dm3, Dm6 y R18; 250 de las plantas de la F2 solo cubren las resistencias frente a laBremia lactucaecubierta por Dm3 (véase la Tabla 1); y las 250 plantas restantes son solo resistentes a aquellas razas cubiertas por los genes R Dm6 y R18 (véase la Tabla 1). Si la F2 se somete a ensayo con una mezcla de las tres razas deBremia lactucaeúnicas para cada gen R (por ejemplo, Bl:16, Bl:17 y Bl: 18), 500 plantas se consideran resistentes, mientras que el resto mostraría síntomas de infección.
Una planta de la invención que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento mostraría un resultado diferente. Cuando una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento en estado homocigótico se cruza con una planta completamente susceptible, todas las plantas F1 serían heterocigóticas y completamente resistentes a las razas deBremia lactucaecubiertas por los tres genes R. La autofecundación de F1 producirá una población F2 que consiste en 750 plantas resistentes y 250 plantas completamente susceptibles (Fig. 1), a diferencia de una F2 que comprende los genes R en fase de repulsión como se ha descrito anteriormente y en la Fig. 2. Los genes R Dm3, Dm6 y R18, cuando están en fase de acoplamiento, se comportan por tanto como un único gen dominante.
La distinción de una planta que comprende los genes R en fase de acoplamiento de forma heterocigótica procedentes de una planta que comprende los genes R en la fase de acoplamiento en forma homocigótica puede realizarse por autofecundación de la planta, lo que da como resultado una descendencia endogámica, por ejemplo, la autofecundación de la planta F2 que se muestra en Fig. 1 en una población F3, y la selección de aquellas plantas a partir de F2 de las cuales la descendencia endogámica completa no es susceptible a ninguna de las razas deBremiacubiertas por los genes R Dm3, Dm6 y R18 como se representa en Tabla 1, o la selección de cualquier planta de dicha descendencia endogámica de la que todas las plantas son resistentes frente a las razas deBremiacubiertas por los genes R Dm3, Dm6 y R18 como se representa en Tabla 1.
En una planta de lechuga resistente a las razas B1:1, B1:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae,dicha resistencia se transmite por los genes de resistencia Dm3, Dm6 y R18, genes que están presentes en forma homocigótica, en donde dichos genes se pueden obtener mediante
a) cruzamiento de una planta susceptible con una planta cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761.
b) autofecundación de las plantas de la progenie F1 para obtener plantas de la progenie F2;
c) selección de las plantas F2 que son resistentes a dichas razas deBremialactucae;
d) autofecundación de cada una de las plantas F2 seleccionadas para obtener una población de la progenie F3; e) selección de aquellas plantas en la F2 de las cuales todas las plantas de la progenie F3 son resistentes a dichas razas deBremia lactucaecomo plantas que tienen la dicha resistencia en forma homocigótica, o selección de una planta de una población F3 no segregada para la dicha resistencia;
Otro aspecto se refiere a una planta de lechuga resistente a las razas Bl: 1, B1:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, B1:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae,en donde dicha resistencia es transmitida por los genes de resistencia Dm3, Dm6 y R18 que están presentes en fase de acoplamiento y dichos genes están presentes en forma heterocigótica, en donde dicha planta de lechuga se puede obtener a partir de un cruce entre una planta de lechuga susceptible con una planta cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761.
Las semillas depositadas con el NCIMB 41761 comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, que están vinculados en las semillas del depósito de semillas al marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y al marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y al marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4 y al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también al marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
En ausencia de marcadores moleculares, o en el caso de que la recombinación entre los marcadores moleculares y los genes R tenga lugar y por tanto ya no sea predictiva, aún puede determinarse la equivalencia de los genes R mediante una prueba de alelismo. Para realizar una prueba de alelismo, el material que es homocigótico para el determinante conocido, una planta de prueba, se cruza con material que es homocigótico para los genes R que se van a someter a prueba. Esta última planta se denomina planta donante. La planta donante que se va a someter a prueba debe ser o debe hacerse homocigótica para los genes R que se van a someter a prueba. La persona experta sabe cómo obtener una planta que sea homocigótica para los genes R que se va a someter a prueba. Cuando en la F2 del cruce entre una planta donante y una planta de prueba no se observa segregación para el fenotipo relacionado con los genes R, los genes R de la planta donante y la planta de prueba se consideran equivalentes.
Se proporciona una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento y, por tanto, cuando se cruza con una planta de prueba que comprende los dichos genes en fase de acoplamiento, cuya semilla representativa se depositó en el NCIMB con los números de registro NCIMB 41761, o una planta progenie de la misma que comprende los genes R en fase de acoplamiento comprendidos en semillas de plantas de lechuga representativas que se depositaron con el número de registro NCIMB 41761 o una planta derivada de la misma y que comprende los dichos genes R en fase de acoplamiento, las plantas de la progenie de primera generación (F1) de dicho cruce no muestran segregación para la resistencia frente a las razas Bl: 1, B1:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, B1:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae.
Tanto en la planta de prueba como en la planta de la invención, los genes R que comprenden los tres genes R en fase de acoplamiento están presentes en una condición homocigótica. Las plantas de la segunda generación y generaciones posteriores, si se obtienen mediante autofecundación, tampoco muestran segregación para el dicho patrón de resistencia. La planta de prueba puede ser una planta cuya semilla representativa se depositó en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761. Cuando los genes R responsables de la resistencia frente a las razas Bl:1, Bl:2 Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, B1:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucaecomo están comprendidas en el depósito están presentes en una planta, la planta es una planta de la invención.
A diferencia del resto de razas deBremia lactucaecontra las que los genes R Dm3, Dm6 y R18 transmiten resistencia, la raza Bl:2 puede mostrar una cantidad muy limitada de esporulación en la prueba de plántulas. Sin embargo, en la práctica, las plantas de la invención también son resistentes frente a BI:2 a pesar del hecho de que puede producirse una cantidad limitada de esporulación en la prueba de las plántulas.
Además de las resistencias frente a las razas Bl: 1, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:13, Bl: 15 y Bl: 17 de Bremia (véase laTabla 1), el gen Ra, estrechamente vinculado al gen R Dm6, también transmite resistencia contra el pulgón de la raíz(Pemphigus bursarius).
Por lo tanto, la invención se refiere también a plantas de lechuga resistentes a las razas Bl:1, Bl:2 Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, B:26, y Bl:27 deBremia lactucaey resistentes al pulgón de la raíz(Pemphigus bursarius)resistencias que se transmiten mediante los genes R Dm3, Dm6, Ra y R18 presentes en la fase de acoplamiento en el cromosoma 2 en la planta de la invención.
En un aspecto adicional, se proporcionan plantas de lechuga que son resistentes a las razas Bl:1, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:23, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey resistentes a la raza Bl:2 deBremia lactucaey al pulgón de la raíz(Pemphigus bursarius),resistencias que se transmiten mediante los genes R Dm3, Dm6, Ra y R18 presentes en la fase de acoplamiento en el cromosoma 2 en la planta de la invención.
Según un aspecto adicional de la misma, la invención se refiere al material de propagación capaz de crecer en una planta de la invención.
En una realización, dicho material de propagación está formado por la semilla de una planta de lechuga de la invención, en donde la planta que puede crecer a partir de la semilla es resistente a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae.
En otra realización, el material de propagación capaz de crecer en una planta de la invención se selecciona del grupo que consiste en microsporas, polen, ovarios, óvulos, embriones, sacos embrionarios, óvulos, esquejes, raíces, puntas de raíces, hipocotilos, cotiledones, tallos, hojas, flores, anteras, semillas, células meristemáticas, protoplastos y células.
En una realización adicional, la invención se refiere a un cultivo tisular de material de propagación capaz de crecer en una planta de la invención.
De manera adecuada, la planta producida a partir del material de propagación muestra la resistencia a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, B1:26, y Bl:27 deBremia lactucae,en particular la resistencia que se encuentra enLactuca sativa10G.913566, cuyas semillas representativas se depositaron en el NCIMB con el número de registro NCIMB 41761.
La invención también se refiere a la descendencia de las plantas, células, tejidos y semillas de la invención. Tal descendencia puede ser en sí misma plantas, células, tejidos o semillas. Como se utiliza en la presente memoria, la palabra “ progenie” pretende indicar los primeros y todos los demás descendientes de un cruce con una planta de la invención que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento. La “ progenie” también abarca plantas que llevan el rasgo de la invención y obtenidas de otras plantas o progenie de las plantas de la invención por propagación o multiplicación vegetativa.
En una realización, la invención se refiere a la progenie de una planta de lechuga de la invención, en donde la planta de progenie es resistente a las razas Bl: 1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl: 18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 deBremia lactucae.
Se describe también en la presente memoria la cabeza de una planta de lechuga de la invención.
Además, en la presente memoria se describe un producto alimenticio, que comprende la cabeza de la lechuga o partes de la misma, opcionalmente en forma procesada. En particular, el producto alimenticio comprende hojas de la planta de lechuga o partes de la misma. El producto alimenticio es, por ejemplo, una ensalada o una mezcla de ensaladas que comprende hojas de la planta de lechuga de la invención.
Los marcadores vinculados a los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento se desarrollaron en una población de plantas F2 que segregan el rasgo de la invención, usando marcadores públicamente disponibles que abarcan una gran parte del grupo de resistencia aBremiaen el cromosoma 2. Los marcadores enumerados en laTabla 4formaron un haplotipo único que predice la presencia de genes R Dm3, Dm6 y R18 en la fase de acoplamiento. LaTabla 4enumera las secuencias de los marcadores y laTabla 5los cebadores correspondientes utilizados para amplificarlos.
Además, en la presente memoria se describe una molécula de ácido nucleico causante de la resistencia frente las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucaey no a las razas Bl:20, B1:26, y Bl:27 deBremia lactucae,que comprende una secuencia de ADN que comprende los tres genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, secuencia de ADN que se sitúa en el cromosoma 2 y está vinculada al marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y al marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y al marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4 y al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también al marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
La invención se refiere además al uso del marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y el marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, y el marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7, y el marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8 para la identificación de plantas que comprenden los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia aBremia lactucae.
La invención también se refiere al uso de dichos marcadores para desarrollar otros marcadores vinculados a los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia aBremia lactucae.
En un aspecto, la invención se refiere a un proceso para identificar plantas de lechuga que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que comprende la etapa de seleccionar dichas plantas de lechuga entre una población de plantas de lechuga segregadas para estos genes en fase de acoplamiento usando el marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, y el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, y el marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4 y el marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y preferiblemente también el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y el marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8. Las plantas de lechuga portadoras de los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento pueden haber adquirido dicho determinante por introducción de la información genética responsable del rasgo procedente de una fuente adecuada, ya sea por mejora convencional, o por modificación genética, en particular por cisgénesis o transgénesis. La cisgénesis es la modificación genética de plantas con un gen natural, que codifica un rasgo (agrícola), de la propia planta de cultivo o de una planta donante compatible sexualmente. La transgénesis es la modificación genética de una planta con un gen de una especie no cruzable o un gen sintético.
El germoplasma de las plantas de la invención está constituido por todas las características heredadas de un organismo y según la invención abarca al menos los genes R de la invención. El germoplasma se puede usar en un programa de reproducción para el desarrollo de plantas de lechuga resistentes aBremia lactucae.
Además, en la presente memoria se describe un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento, que comprende
a) cruzar una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento con otra planta;
b) autofecundar la F1 resultante para obtener plantas F2;
c) seleccionar plantas que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en la F2; d) realizar opcionalmente una o más rondas adicionales de autofecundación o cruce, y posteriormente selección, de una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento. Está claro que el progenitor que proporciona el rasgo de la invención no es necesariamente una planta cultivada directamente a partir de las semillas depositadas. El progenitor también puede ser una planta descendiente de la semilla o una planta descendiente de semillas que se identifica que tienen el rasgo de la invención por otros medios.
En la presente memoria se describe un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento, que comprende
a) cruzar una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento con otra planta;
b) retrocruzar opcionalmente la F1 resultante con el progenitor preferido;
c) seleccionar plantas que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en la F2 o BC1;
d) realizar opcionalmente una o más rondas adicionales de autofecundación o cruce o retrocruzamiento, y posteriormente selección, de una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento.
Además, en la presente memoria se describe un método para introducir un rasgo deseado en una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento, que comprende: a) cruzar una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento, cuya semilla representativa se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 41761, con una segunda planta de lechuga que comprende un rasgo deseado para producir la progenie F1;
b) seleccionar una progenie F1 que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento y el rasgo deseado;
c) cruzar la descendencia F1 seleccionada con cualquier progenitor, para producir descendencia de retrocruce; d) seleccionar la descendencia de retrocruce que comprende el rasgo deseado y/o los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento; y
e) repetir opcionalmente las etapas c) y d) una o más veces sucesivas para producir una cuarta descendencia de retrocruce o superior que comprenda el rasgo deseado y los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento. La invención incluye una planta de lechuga producida por este método.
De manera adecuada, la selección de plantas que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento se realiza en la progenie F1 o en la descendencia de retrocruce. Según otro aspecto, la selección del rasgo de la invención se inicia en la F2 de un cruce o, de forma alternativa, de un retrocruzamiento. La selección de plantas que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento puede iniciarse en la F3 o una generación posterior.
La planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento puede ser una planta de una línea endogámica, un híbrido, un haploide doble o de una población segregante.
Además, en la presente memoria se describe un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento mediante el uso de una técnica de generación haploide duplicada para generar una línea haploide doble que comprende los dichos genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento.
Un método para producir semillas híbridas puede comprender cruzar una primera planta precursora con una segunda planta precursora y recolectar la semilla híbrida resultante, en donde dicha primera planta precursora y/o dicha segunda planta precursora es la planta reivindicada.
Un método para producir una planta de lechuga híbrida puede comprender cruzar una primera planta de lechuga precursora con una segunda planta de lechuga precursora y recolectar la semilla de lechuga híbrida resultante, en donde la primera planta de lechuga precursora y/o la segunda planta de lechuga precursora comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento.
Un método para producir una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento puede comprender el uso de una semilla que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento para cultivar la dicha planta de lechuga. Las semillas son, adecuadamente, semillas cuya muestra representativa se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 41761.
Un método de producción de semillas puede comprender cultivar plantas de lechuga a partir de semillas, de las que se depositó una muestra representativa en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 41761, permitiendo que las plantas produzcan semillas y cosechando esas semillas. La producción de las semillas se realiza adecuadamente mediante cruce o autopolinización.
También se describe en la presente memoria un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento utilizando el cultivo de tejidos y un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento utilizando la reproducción vegetativa.
Además, en la presente memoria se describe un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento utilizando un método de modificación genética para introgresar los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en la planta de lechuga. La modificación genética comprende modificación transgénica o transgénesis, usando un gen de una especie que no se puede cruzar o un gen sintético, y modificación cisgénica o cisgénesis, usando un gen natural, que codifica un rasgo (agrícola), de la propia planta de cultivo o de una planta donadora de sexualmente compatible.
Además, en la presente memoria se describe un método de reproducción para el desarrollo de plantas de lechuga que comprenden los genes Rm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en donde se utiliza el germoplasma que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento. La semilla representativa de dicha planta que comprende los genes R y que es representativa del germoplasma se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 41761.
También se describe en la presente memoria un método para la producción de una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en donde la progenie o el material de propagación de una planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento se utilizan como fuente para introgresar los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento en otra planta de lechuga. La semilla representativa de dicha planta que comprende los genes R se depositó en el NCIMB con el número de depósito NCIMB 41761.
Además, en la presente memoria se describe una planta de lechuga que muestra los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento, planta que se puede obtener mediante cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria.
Además, en la presente memoria se describe una célula de una planta de lechuga(Lactuca sativa)donde dicha planta de lechuga comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de la que se depositó una muestra representativa en el NCIMB el 29 de septiembre de 2010 y con el número de registro 41761.
También se describe en la presente memoria una célula de una planta de lechuga(Lactuca sativa)donde dicha planta de lechuga comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, planta de lechuga que se puede obtener cruzando una planta de lechuga con una planta de lechuga cultivada a partir de una semilla de la que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, y seleccionando una planta de lechuga que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, y que por lo tanto muestra resistencia a las razas Bl:1, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 deBremia lactucae.
Además, en la presente memoria se describe el uso de semillas, una muestra representativa de las cuales tiene el número de registro NCIMB 41761, para transferir un gen R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento a otra planta de lechuga(Lactuca sativa).
Además, en la presente memoria se describe el uso de una planta de lechuga(Lactuca sativa)donde dicha planta de lechuga comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, como un cultivo.
La planta de lechuga(Lactuca sativa)que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, puede usarse como fuente de semillas.
Además, en la presente memoria se describe el uso de una planta de lechuga(Lactuca sativa)que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, como fuente de material de propagación.
También se describe en la presente memoria una planta de lechuga(Lactuca sativa)que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, para el consumo.
Se describe además en la presente memoria el uso de los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, que están presentes en semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, para conferir dichos genes R a una planta de lechuga(Lactuca sativa)que no tiene los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento.
Además, en la presente memoria se describe el uso de una planta de lechuga(Lactuca sativa)como donante de los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento como están presentes en semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761.
Material depositado
Las semillas que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento se depositaron con número de registro en el depósito del NCIMB, NCIMB 41761, el 29 de septiembre de 2010 en NCIMB Ltd., Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, 15 Aberdeen, AB21 9YA Escocia, Reino Unido.
Información de marcadores
LaTabla 4enumera las secuencias de los marcadores vinculados a los genes R Dm3, Dm6 y R18. LaTabla 5enumera las secuencias de los cebadores que se usaron para amplificar los marcadores correspondientes de laTabla 4.
La presente invención se explicará con más detalle en los ejemplos siguientes. Estos ejemplos tienen solamente fines ilustrativos, y no deben interpretarse como limitantes de ninguna manera de esta invención.
Ejemplos
Ejemplo 1
Ensayo de siembra
Las semillas del lote de semillas 10G.913566 y las semillas de una planta de lechuga perteneciente a la variedad de lechuga arrepollada “ Cobham Green” susceptible a las razas Bl: 1 a Bl:28 deBremia lactucaese hicieron germinar sobre papel de filtro humedecido en un recipiente cerrado para establecer un entorno de humedad relativamente alta. Después de que se establecieran plántulas, es decir, aparición de los cotiledones pero primera hoja aún no visible, se pulverizaron con una suspensión de esporas de las razas Bl:16, Bl:17 y Bl: 18 deBremia lactucae. Estas razas se eligieron, debido a que la resistencia frente a cada una de estas razas está cubierta por solo uno de los genes R en fase de acoplamiento (véase laTabla 1).
Las plántulas inoculadas se incubaron en condiciones controladas que eran de 15 °C con 16 horas de luz y 8 horas en régimen de oscuridad. Esta prueba de plántulas sigue más o menos el protocolo descrito por Bonnier y col. (New sources of major gene resistance in Lactuca to Bremia lactucae. Euphytica 61:3, 203-211 (1992)). Tras 8 días, se estableció claramente la infección en las plántulas susceptibles de las plantas “ Cobham Green” , mientras que las plántulas cultivadas a partir del lote de semillas 10G.913566 no mostraron incidencias de esporulación en absoluto.
Ejemplo 2
A. Transferencia de genes R en fase de acoplamiento e identificación fenotípica mediante la prueba de plántulas Una planta cultivada a partir de semillas del lote de semillas 10G.913566 (depositada con el número de registro NCIMB 41761), que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 deBremiaen fase de acoplamiento pero no otros genes R se cruzó con una planta de la variedad de lechuga arrepollada “ Cobham Green” susceptible a las razas BI:1 a Bl:28 deBremialactucae y, por lo tanto, no contiene genes R. Se hicieron germinar las semillas F1 y las plantas F1 resultantes se autofecundaron para obtener semillas F2.
Se realizaron pruebas de siembra como se describe en elEjemplo 1en doce plántulas F2 resultantes de cada una de las cuatro plantas F1 autofecundadas (por ejemplo, 48 plántulas F2 en total), así como en cuatro plántulas de cada progenitor del cruce inicial. En las cuatro plántulas precursoras susceptibles de “ Cobham Green” , y en aproximadamente 250 (4/12, 3/12, 4/12, 2/12) de las plántulas F2, se observó la esporulación del micelio de oomicetos en la superficie del cotiledón. Las 35 plantas F2 restantes (aproximadamente el 75 %) y todas las plantas precursoras resistentes del lote de semillas 10G.913566 no mostraron ninguna esporulación de la biomasa de oomicetos y se consideraron resistentes frente a Bl:16, Bl:17 y Bl:18, y por lo tanto comprendían en su genoma los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento.
Esto demuestra además que los genes R cuando están en fase de acoplamiento, se heredan de manera monogénica dominante, ya que un análisis de la Chi cuadrado de la segregación observada muestra que no hay desviación en la F2 con respecto a la relación de segregación 3:1 esperada (Véase también laFigura 1).
B. Transferencia de genes R en fase de acoplamiento e identificación fenotípica mediante la prueba del disco de hoja
Se realizó otro cruce entre una planta de la variedad “ Cobham Green” y una planta de la invención (número de registro al depósito NCIMB 41761). Se autofecundaron cuatro plantas F1 y de cada planta F1, se hicieron germinar doce semillas F2. Para confirmar la presencia de los genes R en fase de acoplamiento, se tomaron discos de hoja de las plantas F2 individuales en la etapa de 10 hojas. Se incubaron dos discos de hoja, por cepa y planta, en papel de filtro humedecido en un recipiente cerrado para establecer un entorno de alta humedad relativa. Estos discos de hoja se inocularon con suspensiones de esporas de las razas Bl:16, Bl:17 o Bl:18 deBremia lactucae.Los discos de hoja inoculados se incubaron en condiciones controladas de 15 °C con 16 horas de luz y 8 horas en régimen de oscuridad. Esta prueba del disco de hoja se basa en el protocolo descrito en Bonnier y col. (Euphytica, 61(3):203-211, 1992).
Después de 8, 11 y 14 días de incubación, el índice de enfermedad se calificó mediante inspección manual. El índice de enfermedad es una medida del nivel de infección, y discrimina entre las categorías R (resistencia) que significa sin infección evidente, RS (susceptible reducida), que significa una reducción significativa de la infección en comparación con un control susceptible, y S (susceptible) que significa una biomasa de oomicetos muy infectada y fuertemente esporulante.
Para cada fisio, se descubrió que 34 plantas (71 %) resultaron resistentes, mientras que 14 plantas de cada prueba resultaron susceptibles para las tres razas deBremia(Tabla 2).
Además, los resultados del ensayo del disco de hoja mostraron que las 34 plantas resistentes eran resistentes para las tres razas Bl: 16, Bl:17 y Bl: 18 de Bremia(Tabla 2).Por lo tanto, se puede concluir a partir de los resultados que los genes R del depósito y la descendencia resistente están presentes en la fase de acoplamiento (véase laFig. 1).
Tabla 2
Ejemplo 3
Identificación genotípica de los genes R en fase de acoplamiento.
Se extrajo el ADN y se purificó a partir de las 48 plantas F2 utilizadas en el ensayo del disco de hoja, usando protocolos estandarizados disponibles.
Los marcadores SCW09, CL922, SCV12, SCM05, LR0029, LK0036, LR0096, y SCI11 basados en la PCR(Tabla 4)se amplificaron usando los cebadores correspondientes mencionados en laTabla 5.Para los marcadores SCW09, SCV12, SCM05 y SCI11, se llevaron a cabo las amplificaciones utilizando una enzima ADN polimerasa Tag estándar. Para los marcadores LR0029, LR0096, LK0036 y CL922 se utilizó durante la amplificación una Tag de arranque en caliente con actividad adicional de lectura de pruebas (por ejemplo, polimerasa Tag Plantinum®, Invitrogen). Se secuenciaron los productos de la PCR resultantes.
Los resultados de la secuencia se corresponden exactamente con los resultados de la prueba del disco de hoja.
34 plantas presentaron el haplotipo vinculado a Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, lo que significa que para cada una de las plantas resistentes secuenciadas se encontraron los fragmentos correspondientes desde la Id. de sec. n.° 1 hasta la Id de sec. n.° 8 (Véase laTabla 3). Las 14 plantas susceptibles no mostraron este haplotipo.
Tabla 3
Tabla 4
Tabla 5

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Una planta de lechuga resistente a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, Bl:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, BI:24, BI:25 y BI:28 de Bremia lactucae, planta que comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, B1:12, B1:13, Bl:14, Bl:15, B1:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 de Bremia lactucae y no a las razas Bl:20, Bl:26, y Bl:27 de Bremia lactucae, y cuyos genes R se pueden obtener por introgresión de una planta cultivada a partir de semillas de las que una muestra representativa se depositó con el número de registro NCIMB 41761, y en donde los dichos genes R en las semillas de la semilla con número de registro NCIMB 41761 están al menos vinculados al marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, al marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5 y al marcador LK0036 con la Id. de sec. n.° 6, y opcionalmente también a uno o más de los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1, el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3, el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7, y el marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
  2. 2. Una planta de lechuga según la reivindicación 1, planta que se puede obtener cruzando una planta de lechuga cultivada a partir de semillas de las que se depositó una muestra representativa con el número de registro NCIMB 41761, y seleccionando en la progenie F2 del cruce que se obtiene tras cruzar F1 consigo misma o con otra planta para obtener plantas que muestran resistencia frente a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, B1:12, B1:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 de Bremia lactucae.
  3. 3. Una planta de lechuga según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que es también resistente al pulgón de la raíz (Pemphigus bursarius).
  4. 4. Progenie de una planta de lechuga según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la planta de progenie comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, Bl:10, Bl:12, B1:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 de Bremia lactucae.
  5. 5. Semilla de una planta de lechuga según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la planta que puede crecer a partir de la semilla comprende los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia a las razas Bl:1, Bl:2, Bl:4, Bl:5, Bl:6, Bl:7, B1:10, B1:12, B1:13, Bl:14, Bl:15, Bl:16, Bl:17, Bl:18, Bl:21, Bl:22, Bl:23, Bl:24, Bl:25 y Bl:28 de Bremia lactucae.
  6. 6. Material de propagación capaz de crecer hasta convertirse en una planta según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.
  7. 7. Material de propagación según la reivindicación 6, en donde el material de propagación se selecciona del grupo que consiste en microsporas, polen, ovarios, óvulos, embriones, sacos embrionarios, óvulos, esquejes, raíces, puntas de raíces, hipocótilos, cotiledones, tallos, hojas, flores, anteras, semillas, células meristemáticas, protoplastos y células.
  8. 8. Cultivo tisular de material de propagación según la reivindicación 6 o 7.
  9. 9. Uso de los marcadores que se definen en la reivindicación 1 para identificar plantas que contienen los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia a Bremia lactucae.
  10. 10. Uso de los marcadores según la reivindicación 1 para desarrollar otros marcadores vinculados a los genes Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento que transmiten resistencia a Bremia lactucae.
  11. 11. Un proceso para identificar plantas de lechuga que comprenden los genes R Dm3, Dm6 y R18 en fase de acoplamiento, que comprende la etapa de seleccionar dichas plantas de lechuga entre una población de plantas de lechuga segregadas para estos genes en fase de acoplamiento usando el marcador SCM05 con la Id. de sec. n.° 4, y el marcador LR0029 con la Id. de sec. n.° 5, y el marcador LK0036 con la Id. de sec. n.° 6, y opcionalmente también a uno o más de los marcadores seleccionados del grupo que consiste en el marcador SCW09 con la Id. de sec. n.° 1 y el marcador CL922 con la Id. de sec. n.° 2, y el marcador SCV12 con la Id. de sec. n.° 3 y el marcador LR0096 con la Id. de sec. n.° 7 y al marcador SCI11 con la Id. de sec. n.° 8.
ES13704964T 2012-02-20 2013-02-20 Genes R en fase de acoplamiento Active ES2972475T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12156259.9A EP2628387A1 (en) 2012-02-20 2012-02-20 Lettuce R-genes in coupling phase
PCT/EP2013/053367 WO2013124310A1 (en) 2012-02-20 2013-02-20 R-genes in coupling phase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2972475T3 true ES2972475T3 (es) 2024-06-12

Family

ID=47739273

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13704964T Active ES2972475T3 (es) 2012-02-20 2013-02-20 Genes R en fase de acoplamiento

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10273499B2 (es)
EP (2) EP2628387A1 (es)
AU (1) AU2013224205B2 (es)
ES (1) ES2972475T3 (es)
WO (1) WO2013124310A1 (es)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021303718B2 (en) * 2020-07-06 2026-04-02 Syngenta Crop Protection Ag Bremia lactucae resistance SG01
US20230193310A1 (en) 2021-12-10 2023-06-22 Seminis Vegetabe Seeds, Inc. Lettuce plants having resistance to downy mildew

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5684226A (en) * 1994-01-06 1997-11-04 Harris Moran Seed Company Multiple disease resistance in lettuce
US5973232A (en) * 1997-12-08 1999-10-26 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Lactuca sativa cultivar exhibiting resistance to downy mildew and corky root rot
US8772579B2 (en) * 2009-03-06 2014-07-08 Rijk Zwaan Zaadteelt En Zaadhandel B.V. Lettuce variety emerson

Also Published As

Publication number Publication date
US20130269066A1 (en) 2013-10-10
AU2013224205B2 (en) 2018-09-20
US10273499B2 (en) 2019-04-30
EP2816891A1 (en) 2014-12-31
EP2816891B1 (en) 2024-01-03
WO2013124310A1 (en) 2013-08-29
EP2628387A1 (en) 2013-08-21
AU2013224205A1 (en) 2014-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11751523B2 (en) Non R-gene mediated resistance
US10638688B2 (en) Peronospora resistance in spinacia oleracea
AU2014320398B2 (en) Spinach plants that are resistant to downy mildew
US10226014B2 (en) Peronospora resistance in spinacia sp
US10226015B2 (en) Peronospora resistance in Spinacia sp
US11690339B2 (en) Bremia lactucae resistant plants
ES3023034T3 (en) Peronospora resistance in spinacia oleracea
JP2022538791A (ja) トバモウイルスであるトマト褐色しわ果実ウイルスに対するトマトの植物体の抵抗力
ES2992026T3 (es) Resistencia no mediada por el gen R en espinacas
US20140059721A1 (en) Rice resistant/tolerant to hppd inhibiting herbicides
US11317574B2 (en) Angular leaf spot (Pseudomonas) resistance in cucumber
US20130254914A1 (en) Spinach hybrid variety callisto
US20200375134A1 (en) Lettuce variety 84-89 rz
AU2013224205B2 (en) R-genes in coupling phase
ES3043087T3 (en) Melon plants with whitefly resistance
US11277983B2 (en) Peronospora resistance in spinacia sp
US10709085B2 (en) Lettuce variety ‘80020-0911-007’
US10015949B2 (en) Hybrid swiss chard variety 69-104 RZ
US20260013455A1 (en) Lettuce variety 84-bb3150 rz
US9012725B2 (en) Hybrid carrot variety slendercut
US20130260011A1 (en) Hybrid carrot variety red 42
US10021851B2 (en) Hybrid Swiss chard variety 69-600 RZ
US9968064B2 (en) Spinach hybrid 51-521 RZ
US8952220B2 (en) Hybrid carrot variety rebel